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PROTOCOLOS EXPERIMENTAIS
Denise Isoldi Seabra, Eduardo Pompeu, Maria Luiza Guzzo Valenti
INTRODUO
Todas as pessoas envolvidas em pesquisas que utilizam animais so responsveis pelos
mesmos, devendo mant-los em condies adequadas, a fim de garantir seu bem-estar e um
tratamento tico e humanitrio.
Para tanto, um dos fatores de fundamental importncia o suprimento adequado de
equipamentos, analgsicos e anestsicos durante todo o protocolo experimental, visando minimizar
processos potencialmente dolorosos ou estressantes.
Neste sentido, o pesquisador dever avaliar desde o uso de uma anestesia geral, at o uso
de analgsicos antes e/ou aps o procedimento. Deve-se levar em conta, ainda, os benefcios de um
treinamento prtico, garantindo a manipulao segura dos animais a medida que reduz a ocorrncia
de traumas, bem como minimiza o estresse e o medo a que os animais podero ser submetidos e
que podem acarretar em um aumento de intensidade do processo doloroso.
Para a conduo de estudos com potencial de causar mais do que uma dor leve ou
momentnea, ou mesmo estresse aos animais, devem ser descritas as providncias que sero
adotados no sentido de aliviar tais processos. Nos casos em que no ser possvel a utilizao de
frmacos o pesquisador dever apresentar uma justificativa com base cientfica a respeito de como
afetariam os protocolos experimentais e a interpretao de dados, deixando de us-los somente pelo
perodo de tempo estritamente necessrio.
Deve-se levar em conta que a administrao de anestsicos e/ou analgsicos, quando mal
executada, pode produzir efeitos adversos importantes sobre a qualidade dos resultados obtidos.
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O jejum no recomendado para pequenos roedores devido seu alto metabolismo associado
baixa reserva de glicognio que pode predispor a hipoglicemia. Ainda, essas espcies no
apresentam risco de regurgitao e vmito. O jejum pode ser interessante, desde que por um perodo
curto de tempo (entre 02 -04 horas) a medida que aumenta a velocidade de absoro do frmaco
permitindo, por vezes, reduzir sua dose.
A manuteno da temperatura outro fator crtico uma vez que pequenos roedores so muito
suscetveis a perda de calor. Neste sentido pode ser utilizado colcho trmico ou lmpada
infravermelha, com o cuidado de no provocar queimaduras no animal.
At que ocorra a recuperao anestsica total do animal ele deve ser mantido em
observao, com monitoramento constante, em uma caixa/gaiola limpa e isolado de outros para evitar
que se machuquem ou at mesmo sejam asfixiados.
Abaixo encontram-se descritos os valores fisiolgicos de algumas das espcies utilizadas. O
peso mencionado refere-se a mdia de um animal adulto, sendo os machos normalmente mais
pesados que as fmeas.
Valores fisiolgicos de camundongo, rato e coelho
Camundongo
Rato
Coelho
Hamster
25-40
300-500
2.000-6.000
60-100
37.5
38
38
36.2-38.8
Frequncia respiratria
(movimentos/min)
80-200
70-115
40-60
30-127
Frequncia cardaca
(batimentos/min)
350-600
250-350
135-325
250-500
VIAS DE ADMINISTRAO
A administrao de frmacos pode ser realizada por uma das seguintes vias:via oral (VO),
intraperitoneal (IP), subcutnea (SC), intramuscular (IM), intravenosa (IV) e inalatria (IN).
A via oral pode ser utilizada para a administrao de analgsicos aos animais. A substncia
pode ser colocada na gua de beber ou ser fornecida ao animal por gavagem com sonda de tamanho
apropriado a espcie. A administrao por gavagem oferece preciso na quantidade de analgsico
ingerido, porm, envolve manipulao do animal e pode ser considerada uma fonte de estresse
adicional.
A administrao intraperitoneal muito utilizada para pequenos roedores por ser de fcil
acesso e acomodar grandes volumes, e deve ser realizada no quadrante inferior direito do abdmen.
Alguns dos erros mais comuns relacionados a esta via so a puno intravisceral, subcutnea ou no
tecido adiposo. No indicada para coelhos.
As injees intramusculares so realizadas no quadrceps ou msculos posteriores da coxa e
devem ser evitadas em ratos e camundongos devido massa muscular reduzida.
A veia lateral da cauda a mais utilizada para a realizao de infuso de fluidos e para as
injees intravenosas em ratos e camundongos. Nos coelhos a administrao de fludos pode ser
realizada pela veia ceflica ou marginal da orelha.
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Biotrio Central da Faculdade de Medicina da USP
Av. Dr. Arnaldo, 455 Cerqueira Csar So Paulo CEP 01246-903
Fone 11 55 3061-7412
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Administraes injetveis devem ser realizadas sempre com a agulha posicionada com o seu
bisel voltado para cima. Qualquer que seja a via escolhida, o animal deve estar apropriadamente
contido para evitar traumas a ele e ao operador.
A tabela que segue refere-se aos volumes mximos permitidos a serem administrados aos
animais na dependncia da via de eleio. So descritos, ainda, o local de administrao e o calibre
apropriado de agulhas.
Volumes e vias de administrao
Camundongo
Volume
(ml)
Via de
administrao
Local de administrao
Calibre da agulha
0,25 1,0
VO
----
1,25 mm de dimetro
2,0 - 3,0
SC
Inter-escapular
<20G
2,0 - 3,0
IP
<21G
0,05
IM
Quadrceps
<23G
0,2
IV
<25G
Volume
(ml)
Via de
administrao
Local de administrao
Calibre da agulha
3,0 15,0
VO
----
2,25mm de dimetro
5,0 10,0
SC
Inter-escapular
<20G
5,0 10,0
IP
<21G
0,3
IM
Quadrceps
<21G
0,5
IV
<23G
Volume
(ml)
Via de
administrao
Local de administrao
Calibre da agulha
0,5 1,0
VO
----
1,25 mm de dimetro
3,0 4,0
SC
Inter-escapular
<20G
3,0 4,0
IP
<21G
0,1
IM
Quadrceps
<21G
0,3
IV
<25G
Volume
(ml)
Via de
administrao
Local de administrao
Calibre da agulha
3,0 15,0
VO
----
<20G
5,0 10,0
SC
Inter-escapular
<21G
0,3
IM
Quadrceps
<21G
0,5
IV
<23G
Rato
Hamster
Coelho
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INDUO ANESTSICA
A utilizao de medicao pr-anestsica pode ser realizada uma vez que acalma o animal
antes do procedimento e torna sua recuperao anestsica mais tranquila. Ainda, seu uso pode
reduzir a dose anestsica necessria. Entretanto, deve-se levar em conta os potenciais benefcios e
seus efeitos adversos uma vez que sua administrao pode ser considerada um fator de estresse
adicional devido a necessidade de manipulao do animal.
As vias mais indicadas so a inalatria e a intravenosa o que muitas vezes dificulta o
procedimento j que necessrio pessoal treinado (intravenosa) e equipamento especfico
(inalatria). A via subcutnea no recomendada pois o tempo de induo anestsica se prolonga
consideravelmente.
ANESTESIA
A anestesia consiste em levar o animal a inconscincia sem perda de suas funes vitais e
deve promover conteno qumica apropriada, relaxamento no tnus muscular e analgesia suficiente
para impedir que o animal sinta dor durante o procedimento cirrgico.
Os anestsicos mais recomendados so os inalatrios por serem seguros e rapidamente
reversveis, entretanto, sua utilizao depende de equipamentos especficos e algumas vezes de
intubao endotraqueal o que as vezes os torna inviveis.
Frmacos anestsicos - Camundongos
Frmaco
Dose (mg/kg)
Via de administrao
0.081.5%
Inalatria
Quetamina/Diazepam
50-75 / 1-10
IP
Quetamina / Midazolam
50-75 / 1-10
IP
90-150 / 7.5-16
IP
IM
Pentobarbital sdico
30 90
IP
Tribromoetanol (TBE)
125300
IP
Isoflurano
Quetamina / Xilazina
Quetamina /Xilazina / Acepromazina
Dose (mg/kg)
Via de administrao
0.25 2.5%
Inalatria
Isoflurano/Morfina
2% / 5
Inalatria, IP
Quetamina/Diazepam
40 / 5
IP
60 / 0.4
IP
40 80 / 5-10
IP
40 / 8.0 / 4.0
IM
30 - 60
IP
150 / 0.5
IP
Isoflurano
Quetamina / Midazolam
Quetamina / Xilazina
Quetamina /Xilazina / Acepromazina
Pentobarbital sdico
Tribromoetanol / Medomidina
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Dose (mg/kg)
Via de administrao
Diazepam
5.0 10.0
IM
Acepromazina
0.75 1.0
IM
medetomidina
0.25
IM
Tiopental
15 30
IV
Pentobarbital
20 - 60
IV
Quetamina / Pentobarbital
10 / 30
IM / IV
Quetamina / Xilazina
50 10
IM
40 / 5 / 0.75 1.0
IM / IM / SC
40 / 5 / 0.04
IM
60 80 / 5 - 10
IM
75 / 5
IM
Dose (mg/kg)
Via de administrao
Quetamina/Diazepam
70 / 2
IP
Quetamina / Diazepam
70 / 2
IP
Quetamina / Xilazina
200 / 10
IP
Quetamina / Acepromazina
150 / 5
IM
Pentobarbital
50-90
IP
Tiletaminal /Zolacepam/Xilazina
30 / 10
IP
ANALGESIA
Frmacos analgsicos aliviam a dor sem perda da conscincia, reduzindo tambm o
desconforto e o estresse a que os animais esto submetidos.
Apesar de a analgesia ser definida como a ausncia completa de um processo doloroso, na
prtica, varia entre sua eliminao total (caso de procedimentos cirrgicos) at seu tratamento a
nveis em que permanea presente sem comprometer a qualidade de vida do animal.
A completa eliminao do processo doloroso em animais conscientes no desejvel uma
vez que a dor representa um fator de proteo, impedindo que o animal venha a sofrer maiores
traumas por movimentao excessiva ou automutilao.
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Recomenda-se, portanto, buscar atingir um equilbrio em que o animal seja mantido com o
mnimo de dor possvel sem comprometer sua segurana e mantendo sua qualidade de vida.
A utilizao de analgsicos antes e aps o procedimento experimental recomendvel
sempre que no interfira com o resultado das pesquisas. A escolha do protocolo deve ser adaptada
ao modelo animal e as condies de cada centro. As drogas mais comumente utilizadas so os
opiides e os anti-inflamatrios no esteroidais (AINEs) que garantem boa analgesia visceral e
somtica (pele e msculos).
A fim de aliviar a dor cirrgica recomendvel que seja administrado um analgsico injetvel
antes da recuperao anestsica e durante um perodo de pelo menos 12 24hs aps a recuperao
da conscincia.
Frmacos analgsicos Camundongos e Hamsters
Frmaco
Dose (mg/kg)
Via de
administrao
Intervalo de
administrao
110 - 305
IP, VO
12 hs
20
SC
04 hs
100 - 120
IP
SC
0.0020.055
IV
0.040.13
IP
SC
04hs
515
SC
24hs
Diclofenaco (Voltarem)
9.028
IP
12 hs
Flunixinmeglumine (Banamine)
4.0 11
IV
12 hs
2.5
SC
12 hs
40 - 80
VO
24 hs
Ketoprofen (Ketofen)
SC
24 hs
Morfina
10
SC
04hs
20 40
IP
12 hs
Acetaminofen (Tylenol)
Aspirina
Buprenorfina
Butorfanol
Carprofen (Rimadyl)
Ibuprofen (Advil)
Tramadol
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12 hs
Dose (mg/kg)
Via de
administrao
Intervalo de
administrao
110 - 305
IP, VO
12 hs
100
VO
12 hs
20
SC
100 - 120
IP
0.050.5
SC
0.4
VO
0.0020.055
IV
0.040.13
IP
02
SC
4hs
515
SC
24hs
Diclofenaco (Voltarem)
50600
SC, IP, IV
12 hs
Dipirona
50600
SC, IP, IV
08 hs
Flunixinmeglumine (Banamine)
2.5
SC
12 hs
Ibuprofen (Advil)
15
VO
24 hs
515
SC
24 hs
1020
IP
24 hs
2.010
SC
04 hs
Buprenorfina
Butorfanol
Carprofen(Rimadyl)
Ketoprofen (Ketofen)
Morfina
12 hs
Dose (mg/kg)
Via de
administrao
Intervalo de
administrao
0,01-0,05
SC, IV
12 hs
0,1- 0,5
IV
4hs
Carprofen (Rimadyl)
5,0
SC
24hs
Flunixinmeglumine (Banamine)
1,1
IM
12 hs
Morfina
2,5
SC
04 hs
Meloxican
0,3-0,6
SC
24 hs
Piroxican
0,2
VO
08 hs
5,0-10,0
SC
04 hs
5,0
SC, IM
04 hs
Buprenorfina
Butorfanol
Meperidina
Tramadol
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