UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA

CENTRO DE CINCIAS FSICAS E MATEMTICAS

DEPARTAMENTO DE QUMICA

AVALIAO DA CONTAMINAO POR MICOTOXINAS

EM INGREDIENTES E RAES PARA SUNOS

JANANA NONES

Florianpolis
novembro/2010
 Janana Nones

AVALIAO DA CONTAMINAO POR MICOTOXINAS EM

INGREDIENTES E RAES PARA SUNOS

Relatrio apresentado ao Departamento de Qumica

da Universidade Federal de Santa Catarina,
como requisito parcial da disciplina de
Estgio Supervisionado II (QMC 5512)

Orientador: Santiago Francisco Yunes

Co-orientadora: Vildes Maria Scussel

Florianpolis
novembro/2010
 Janana Nones

AVALIAO DA CONTAMINAO POR MICOTOXINAS EM

INGREDIENTES E RAES PARA SUNOS

_______________________________________
Profa. Dra. Ins Maria Costa Brighente
Coordenadora de Estgios do Curso de Qumica-Bacharelado

Banca Examinadora:

__________________________________________
Prof. Santiago Francisco Yunes
Orientador

__________________________________________
Profa.Vildes Maria Scussel
Co-orientadora

____________________________________
Profa. Dilma Maria de Oliveira Marconi

__________________________________________
Prof. Fabio Peres Gonalves

Florianpolis
novembro/2010
 Agradecimentos

Agradeo a Deus por guiar-me pelos caminhos que me levaram at este

momento, to importante em minha vida.

Aos meus pais pelo carinho, pacincia, incentivo e por todo esforo para a
concretizao das minhas realizaes.

Prof Vildes M. Scussel, pelo reconhecimento, oportunidades e por ser

um exemplo de dedicao ao ensino e pesquisa.

Ao professor Santiago Francisco Yunes por compartilhar comigo seus

conhecimentos e sua amizade.

Meus irmos, Jader e Juliane, que fizeram parte desses momentos

sempre me ajudando e incentivando.

A meu namorado Alex pelo amor, fora e companheirismo.

Ao pessoal do LABMICO, que mais do que amigos so uma segunda

famlia.

Todos aqueles que tenham contribudo direta ou indiretamente para a

realizao deste trabalho.
 SUMRIO

1. NDICE DE FIGURAS ...........................................................................................07

2. NDICE DE TABELAS .........................................................................................08

3. LISTA DE ABREVIATURAS ................................................................................09

4. RESUMO...............................................................................................................10

5. INTRODUO E JUSTIFICATIVA ......................................................................11

6. REVISO DA LITERATURA ...............................................................................13

6.1. Micotoxinas versus Suinocultura ........................................................13

6.1.1. Fumonisinas ..............................................................................14
6.1.2. Zearalenona ...............................................................................16
6.1.3. Aflatoxina ....................................................................................16
6.1.4. Ocratoxina A ...............................................................................18
6.1.5.Esterigmatocistina.......................................................................19

6.2. Legislao sobre micotoxinas..............................................................19

6.3. Mtodos de deteco para micotoxinas..............................................21

6.3.1. Cromatografia lquida de alta eficincia ..................................23
6.4. Validao de mtodos analticos ........................................................24

7. OBJETIVOS .........................................................................................................25
7.1. Geral .......................................................................................................25
7.2. Especficos.............................................................................................25

8. METODOLOGIA ...................................................................................................26
8.1. Material ...................................................................................................26
8.1.1. Amostras .....................................................................................26
8.1.2. Padres .......................................................................................29
8.1.3. Reagentes ...................................................................................29
8.1.4. Equipamentos .............................................................................29

8.2. Mtodos..................................................................................................30
8.2.1. Anlise de micotoxinas..............................................................30
8.2.1.1. Anlise de aflatoxinas, ocratoxina A, zearalenona e
esterigmatocistina ..................................................................................................30
8.2.1.2. Anlise de fumonisinas B1 e B2 ..............................................31
8.2.2. Determinao da umidade .........................................................33
8.2.3. Avaliao da estrutura e organizao da propriedade............33

9. RESULTADOS E DISCUSSO ............................................................................34

9.1. Avaliao da contaminao por micotoxinas em ingredientes
para raes de sunos .................................................................................34
9.1.1. Fumonisinas ...............................................................................34
9.1.2.OTA, EST, ZON e AFLs ...............................................................35
 9.2. Contedo de umidade das amostras de ingredientes e raes
para sunos versus micotoxinas ...........................................................................36
9.3. Avaliao das condies higinico sanitrias da propriedade .........37
9.3.1. Armazenagem e processamento dos ingredientes e raes..37
9.3.2. Instalaes e manejo dos animais ............................................38
9.4. Controle de natalidade de sunos e sua relao com a
presena de micotoxinas nas raes ...................................................................39

10. CONCLUSES ...................................................................................................42

11. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ..................................................................43

1. NDICE DE FIGURAS

Figura 1 - Etapas onde pode ocorrer contaminao por micotoxinas.......................13

Figura 2 - Estrutura das fumonisinas........................................................................14
Figura 3 - Estrutura qumica da esfinganina e esfingosina.......................................15
Figura 4 - Reao de oftaldedo com aminas primrias na presena de
mercaptoetanol..........................................................................................................15
Figura 5 - Estrutura qumica da zearalenona............................................................16
Figura 6 - Estruturas qumicas das aflatoxinas B1, B2, G1 e G2 ................................17
Figura 7 - Mecanismo de ao da aflatoxina B1 .......................................................18
Figura 8 - Estrutura qumica da ocratoxina A ...........................................................19
Figura 9 - Estrutura qumica da esterigmatocistina ..................................................19
Figura 10 - Fundamento da tcnica de imunoensaio................................................23
Figura 11 - (a) Localizao geogrfica do municpio de Doutor Pedrinho no
estado de Santa Catarina (b) Foto da propriedade. ..................................................26
Figura 12 - Fluxograma de coleta de amostras de milho e soja ...............................27
Figura 13 - Fluxograma de amostragem de raes, casquinha de soja e farelo de
arroz ..........................................................................................................................27
Figura 14 - Fluxograma do mtodo de anlise de multitoxinas ................................31
Figura 15 - Fluxograma do mtodo de anlise de fumonisinas ................................32
Figura 16 - Fluxograma do mtodo de anlise de umidade .....................................33
Figura 17 - Contedo de umidade dos ingredientes utilizados para o preparo das
raes para sunos....................................................................................................37
Figura 18 - Contedo de umidade das raes administradas aos sunos no
perodo de agosto a setembro de 2010.....................................................................37
Figura 19 - Armazenamento dos gros em silos granel e/ou sacarias:: (a) soja;
(b) milho; (c) farelo de arroz e casquinha de soja .....................................................38
Figura 20 - Instalaes da propriedade onde foram realizados os estudos da
qualidade de ingrediente e raes para sunos.(a) amamentao; (b) bebedouro
para alimentao do suno; (b) leito; (c) sunos na fase de engorda.......................39
Figura 21 - Alteraes em leites observados durante o parto: (a) e (b)
natimortos. (c) mumificados. .....................................................................................39
Figura 22 - Total de sunos nascino entre 2007 e 2010 ...........................................40

7
2. NDICE DE TABELAS

Tabela 1 - Limites mximos de micotoxinas da Proposta de Resoluo em

Consulta Pblica da ANVISA ....................................................................................20
Tabela 2 - Nveis mximos permitidos para AFLs em alimentos para consumo
humano ....................................................................................................................21
Tabela 3 - Dados sobre a coleta das amostras de ingredientes e raes ................28
Tabela 4 - Anlises de fumonisinas em ingredientes para sunos avaliadas em
2006 ..........................................................................................................................34
Tabela 5 - Anlises de fumonisina em raes para sunos avaliadas em 2006........35
Tabela 6 - Contedos de umidade nas amostras de ingredientes e raes para
sunos avaliados em 2010.........................................................................................36
Tabela 7- Controle de natalidade 2007 a 2010 .........................................................41

8
3. LISTA DE ABREVIATURAS

AFB1 Aflatoxina B1
AFB2 Aflatoxina B2
AFG1 Aflatoxina G1
AFG2 Aflatoxina G2
AFLs Aflatoxinas
ANVISA Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria
APPCC Analise de Perigos e Pontos Crticos de Controle
BPF Boas Prticas de Fabricao
CCD Cromatografia em Camada Delgada
CLAE Cromatografia Lquida de Alta Eficincia
EST Esterigmatocistina
FBs Fumonisinas
HPLC High Performance Liquid Chromathography
INMETRO Instituto Nacional de Metrologia, Normalizao e Qualidade Industrial
LMT Limite Mximo Tolervel
LOD Limite de Deteco
LOQ Limite de Quantificao
OPA O-oftaldialdedo
OTA Ocratoxina A
ZON Zearalenona

9
4. RESUMO

O estgio foi realizado no Laboratrio de Micotoxinas e Contaminantes

Alimentares (LABMICO), localizado no Centro de Cincias Agrrias (CCA),
Departamento de Cincia e Tecnologia de Alimentos (CAL) da Universidade
Federal de Santa Catarina (UFSC). O objetivo deste trabalho foi avaliar a
qualidade dos diferentes ingredientes (milho, soja, farelo de arroz, casquinha de
soja), resduo da pr-limpeza do milho e tipos distintos de raes (gestao,
engorda e inicial), para sunos. As amostras foram obtidas de uma propriedade
rural de suinocultura localizada no Vale do Itaja em Santa Catarina. Coletadas
de forma representativa nos silos e galpes da propriedade obtendo um total de 1
kg de cada tipo de amostra. Os ingredientes para raes foram coletadas de silos
de 20 e 50 toneladas para soja e milho, respectivamente e as amostras de farelo
de arroz e casquinha de soja de sacas (60kg) 50 e 60 unidades, respectivamente.
O resduo da pr-limpeza do milho foi coletado atravs de uma peneira que
antecede o processo de moagem do milho. Quanto s amostras de rao, foram
coletados trs tipos distintos (rao de engorda, inicial e gestao) de sacas de
25 kg. Foram empregados mtodos cromatogrficos para detectar a presena de
aflatoxina (AFLs), zearalenona (ZON), ocratoxina A (OTA), esterigmatocistina
(EST) sendo que das 44 amostras nenhuma apresentou contaminao por estas
toxinas. J para fumonisinas (FBs) 20 amostras foram analisadas, sendo que
35% (7 amostras) apresentaram contaminao. Foi possvel observar que dos
ingredientes avaliados, duas amostras de milho apresentaram contaminao por
FB1 com 0,238 e 0,830 mg.kg-1 e FB2 com 0,104 e 0,340 mg.kg-1 = FBs total:
0,342 e 1,17 mg.kg-1. J, os outros ingredientes (soja, farelo de arroz e casquinha
de soja) avaliados, no apresentaram contaminao pelas toxinas de Fusarium
dentro dos limites de deteco e quantificao do mtodo utilizado. O nvel mdio
de FB1 nas raes de gestao e engorda (4 amostras) foi de 0.216 mg.kg-1
(0,124 min.; 0,325 mx.) e de FB2 0,075 mg.kg-1 (0,04 min; 0,110 mx.), sendo
que 2 amostras foram isentas de contaminao. Como esperado, o maior nvel
de contaminao por FBs totais foi registrado em amostras de resduos da pr-
limpeza do milho com 8,50 mg.kg-1. Foram tambm verificadas as condies de
armazenamento e processamento dos ingredientes e raes, como umidade, a
qual pode ocasionar o desenvolvimento fngico. Os dados de natalidade da
propriedade foram avaliados e correlacionados com possveis contaminaes por
micotoxinas na alimentao. O estgio realizado colaborou para o discernimento
e o aprimoramento de conhecimentos qumicos empregados em anlises de
micotoxinas. Sendo que as contaminaes encontradas por fungos do gnero
Fusarium, indicam que necessrio o estabelecimento de uma legislao para
todas as micotoxinas. Alm de ser necessrio um constante monitoramento da
presena de toxinas na alimentao para evitar eventuais danos na sade
animal.

Palavras- chave: micotoxinas, contaminao, ingredientes, sunos.

10
5. INTRODUO E JUSTIFICATIVA

O Brasil possui um grande potencial zootcnico, sendo que o estado de

Santa Catarina representa grande percentual da produo de carnes sunas do
pas. Mediante a este fato, tem se procurado cada vez mais tecnologias que
aprimorem a criao destes animais, visando menores custos de produo e
maiores lucros per capita.
Novas tecnologias tem melhorado a gentica e a qualidade dos galpes
para a criao e conseqentemente a qualidade das carnes. Porm existem
outros fatores que interferem na qualidade do produto final, que ser destinado
ao consumo humano. Alguns destes fatores so as contaminaes, que podem
ser tanto qumicas, microbiolgicas ou toxicolgicas.
A contaminao toxicolgica pode ocorrer durante todo o percurso do
desenvolvimento do suno, caso no haja um monitoramento da qualidade das
raes. Substncias txicas como micotoxinas, as quais so geradas por cepas
de fungos filamentosos, podem estar presentes nas raes ocasionando
problemas reprodutivos e de produo.
Os principais problemas ocasionados pela presena destas substncias
o aumento do nmero de leites mumificados, natimortos, problemas de
fertilidade das fmeas, como falso cio e abortos. Pode ainda ser observado
edema pulmonar, baixa na imunidade, reduo do ganho de peso, problemas
hepticos e renais.
Condies inadequadas no processamento e armazenamento das
raes podem ocasionar o desenvolvimento fngico aumentando as chances de
encontrar as micotoxinas. Altas temperaturas e umidade elevada so os
principais fatores para o aumento da presena destes microorganismos. Nem
sempre os fungos indicam que a rao ou matria prima (ingredientes) est
contaminada por micotoxinas, e a ausncia destes tambm no indica a
presena destas toxinas.
Os principais ingredientes presentes nas raes so: milho, soja,
casquinha de soja, farelo de arroz, sendo que estes so utilizados no
processamento de distintos tipos de raes conforme a faixa etria e a fase de
vida do animal. Gestao, inicial e engorda so algumas das raes utilizadas no
ciclo completo de um plantel de sunos considerando todas as etapas de
produo.
11
 Considerando a importncia da suinocultura na economia de nosso
estado e tambm na qualidade da alimentao humana, uma vez que a presena
da micotoxina pode entrar na cadeia alimentar humana atravs da carne suna,
de fundamental importncia o controle destas substncias nos criatrios de
sunos.
Portanto, tem se procurado tcnicas eficientes que consigam detectar e
monitorar a presena de micotoxinas na cadeia produtiva do suno. Anlises de
Perigos e Pontos Crticos de Controle (APPCC), Boa Prticas de Fabricao
(BPF) e avaliao das condies higinico sanitrias da propriedade devem ser
implementadas. Por este fato, necessrio a verificao da presena de
micotoxinas nas propriedades.
Para este estudo foi escolhida uma propriedade rural localizada no vale
do Itaja no estado de Santa Catarina, onde foram avaliadas as micotoxinas em
ingredientes e raes, atravs de tcnicas cromatogrficas. O controle de
umidade das raes e o levantamento dos dados reprodutivos da propriedade
tambm foram realizados com o intuito de melhorar a qualidade sanitria visando
uma maior renda e qualidade alimentar.

12
6. REVISO DA LITERATURA

6.1. Micotoxinas versus Suinocultura

A importncia de avaliar a qualidade das carnes est no grande potencial

zootcnico que o Brasil possui atualmente. Por este motivo importante avaliar a
qualidade do plantel, controlar a nutrio, instalaes, sanidade, manejo e
gentica. Com relao nutrio, tem se procurado raes com composies
nutricionais adequadas e isentas de contaminao (qumica, microbiolgica ou
toxicolgica).
As micotoxinas so substncias txicas resultantes do metabolismo
secundrio de diversas cepas de fungos filamentosos (DIKIN, 2002). Sua
presena em alimentos pode causar danos sade pblica e animal e tambm
prejuzos econmicos na agricultura. So descritas cerca de 300 micotoxinas,
produzidas por aproximadamente 200 fungos diferentes. Entretanto, apenas
cerca de 20 dessas micotoxinas so encontradas em alimentos e raes, em
nveis que possam ser considerados de risco para a sade (ANKLAM et al.,
2002).
A contaminao por micotoxinas em raes para sunos desencadeia
vrios problemas relacionados com: baixa na imunidade, surgimento de doenas,
reduo do ganho de peso, prejuzos reprodutivos e de produo.

Figura 1: Etapas onde pode ocorrer contaminao por micotoxinas (RODRIGUES et al., 2009).

13
 A contaminao dos alimentos pode ocorrer no campo, antes e aps a
colheita, e durante o transporte e armazenamento do produto (Figura 1). O
princpio bsico para o desenvolvimento fngico o elevado teor de gua no
alimento e temperatura elevada. Muitas micotoxinas tambm tm alta
estabilidade qumica que as habilita a permanecer nos alimentos mesmo aps a
remoo dos fungos pelos processos de industrializao (BITTENCOURT et al.,
2003).
As micotoxinas mais comuns e que afetam a sade do suno so as
aflatoxinas (AFLs), fumonisinas (FBs), zerealenona (ZON), ocratoxina (OTA) e
Esterigmatocistina (Est).

6.1.1. Fumonisinas

Quimicamente, as fumonisinas (FBs) so aminopoliis de cadeia longa

(20 carbonos) esterificada no C14 e C15 com dois grupos de cido tricarboxlico
(CASADO et al., 2001). So toxinas produzidas por fungos de diversas espcies
do gnero Fusarium especialmente por F. verticillioides, sendo a FB1 e FB2
(Figura 2) as mais comuns, encontradas em alimentos e raes, de um grupo de
cerca de 16 FBs existentes.

Figura 2: Estrutura das fumonisinas (HUSSEIN et al., 2001).

Os sunos so sensveis intoxicao por FBs. As dietas contaminadas

por FBs provocam inapetncia e depresso, induzindo toxidade cardiovascular,
edema pulmonar e degenerao heptica, e, em concentraes elevadas, podem
provocar leses pancreticas, hepticas e renais (LOVATTO et al., 2007). O
mecanismo de ao das FBs baseia-se na semelhana de sua estrutura qumica
com a estrutura da esfingosina e esfinganina (Figura 3). Esta semelhana faz
com que a molcula de FB interfira na biossntese de esfingolipdios. A inibio
14
da biossntese de esfingolipdios pode ter um profundo efeito sobre a clula, uma
vez que estes componentes tm um importante papel na estrutura da membrana
celular, comunicao celular, na interao intracelular e na matriz celular e
regulao de fatores de crescimento.

Figura 3: Estrutura qumica da esfinganina e esfingosina (CELESTE et al., 2007).

Quanto ao mtodo analtico as FBs apresentam um comportamento
inico em soluo, assim as separaes em colunas de fase reversa so
baseadas no mecanismo de troca inica. Para se conseguir melhores resultados
a fase mvel deve ser acdica, o que se consegue atravs da adio de cido
actico ou frmico fase mvel ou pelo uso de um tampo voltil como o acetato
de amnio.
Em virtude de se tratar de molculas fortemente polares, as FBs so
solveis em gua e solventes polares e insolveis em solventes apolares.
O grupamento amino presente na estrutura da FB pode sofrer uma
protonao, atravs da adio de cido actico, frmico ou pelo uso de um
tampo voltil como o acetato de amnio, fazendo com que a molcula se torne
um on.
Como as FBs no absorvem a luz ultra-violeta ou luz visvel, e no so
substncias fluorescentes, elas requerem a sua derivao, atravs da adio de
o-ftaldedo e mercaptoetanol (Figura 4), para que possam ser identificadas e
analisadas. A FB1 e a FB2 apresentam uma fluorescncia verde amarelada aps
a sua derivao (DIAZ et al., 1994; SHEPARD et al., 1998).

Figura 4: Reao de oftaldedo com aminas primrias na presena de mercaptoetanol (CONCA

et al., 2001).
15
6.1.2. Zearalenona

A zearalenona (ZON) uma toxina produzida pela espcie Fusarium

graminearum, encontrada principalmente em gros de milho. Em casos de
intoxicaes de sunos podem causar: hiperestrogenismo, aborto, natimortos,
falso cio, prolapso retal e da vagina, infertilidade, efeminizao dos machos com
desenvolvimento de mamas. Esta toxina age como hormnio feminino
(SCUSSEL, 1998).
Quimicamente uma lactona macrocclica (Figura 5) que exibe
fluorescncia azul esverdeada em comprimentos de onda de luz ultravioleta (360
nm) e uma fluorescncia verde muito intensa quando excitada com comprimento
de onda curto de luz ultra violeta (260 nm). considerada como um composto
fitoestrognico o qual possui grande afinidade pelos receptores estrognicos.

Figura 5: Estrutura qumica da zearalenona (FARACO et al., 2008)

A ZON aparece em quase todos os produtos de origem agrcola como

gros (trigo e milho) e em alimentos processados como raes, cereais matinais,
cerveja e pes (HUSSEIN et al., 2001; GUTLEB et al., 2002; MORGAVI et al.,
2007). A toxina liga-se em receptores estrognicos, influenciando a transcrio
estrognio dependente no ncleo das clulas.
Estudos tm demonstrado o potencial da ZON em estimular o
crescimento de clulas tumorais de mama em humanos contendo receptores de
estrognio (DMELLO et al., 1999; CONKOV et al., 2003; VLATA et al., 2006;
BINDER, 2007).

6.1.3. Aflatoxina

16
 As aflatoxinas so produzidas por fungos do gnero Apergilus, A.flavus e
A. parasiticus, sendo as micotoxinas mais abundantes e mais txicas que se
conhecem (ALDRED et al., 2004; SANTOS et al.,1998; PITT & HORKING, 1999)
A estrutura qumica deste grupo caracterizada pela ligao de
dihidrofurano ou tetrahidrofurano a uma estrutura cumarnica (KAWASHIMA,
2004). As principais aflatoxinas conhecidas so denominadas de B1, B2, G1 e G2
(Figura 6), com base na fluorescncia delas sob luz ultravioleta (B=Blue,
G=Green) e na sua mobilidade durante a realizao de cromatografia de camada
delgada.

Figura 6: Estruturas qumicas das aflatoxinas B1, B2, G1 e G2 (SCUSSEL, 1998).

A toxicidade crnica destas micotoxinas pode levar a alteraes

hepticas, reduo do crescimento do animal e proteo imunolgica. Na
toxicidade aguda causa hemorragias subcutneas e intramusculares resultando
na morte do animal. Sunos e caninos so as espcies mais sensveis, sendo
normalmente animais jovens os mais afetados pela aflatoxicose (YU et al., 2005;
ZLOTOWSKI et al., 2004; MALLMANN et al. 1994).
O metablito mais importante a aflatoxina B1 (AFB1), devido sua
elevada hepatotoxicidade e maiores concentraes nos substratos. A forma
ativada da AFB1 o composto identificado como 8,9-epxido de AFB1, originado
atravs da epoxidao da dupla ligao do ter vinlico, presente na estrutura bi-
furanide da molcula de AFB1 (Figura 7).

17
 Figura 7: Mecanismo de ao da aflatoxina B1 (HAYASHI, 2007)

Este composto altamente eletroflico e capaz de reagir rapidamente,

atravs de ligaes covalentes, com stios nucleoflicos de macromolculas,
como cido desoxirribonuclico (DNA), cido ribonuclico (RNA) e protenas. A
ligao da AFB1-epxido com o DNA modifica a sua estrutura e,
conseqentemente, sua atividade biolgica, originando assim os mecanismos
bsicos dos efeitos mutagnicos e carcinognicos da AFB1.
No Brasil, as aflatoxinas so as nicas micotoxinas cujos nveis mximos
em alimentos esto previstos na legislao. O Ministrio da Sade estabelece o
limite de 20 g/kg AFB1+AFG1 em alimentos de consumo humano, e o Ministrio
da Agricultura e do Abastecimento estabelece o de 50 g/kg de aflatoxinas totais
para matrias-primas de alimentos e raes (CALDAS et.al., 2002)

6.1.4. Ocratoxina A

A ocratoxina A (OTA) (Figura 8) foi isolada e identificada no final do ano

de 1970 sendo relacionada a doenas renais de equinos e sunos (MORGAVI et
al., 2007). produzida por espcies de fungos dos gneros Aspergillus e
Penicillum podendo afetar seriamente o desempenho dos animais e seu bem-
estar e tambm ocasionar efeitos deletrios nos humanos, devido sua
propriedades nefrotxicas e carcinognicas (MULLER et al., 2004).
O mecanismo de ao txica da OTA experimentalmente atribudo
inibio competitiva de enzimas da cadeia respiratria celular como a ATPase e o

18
succinato desidrogenase, e da citocromo C oxidase (HUSSEIN et al, 2001).
Hussein e Brasel (2001) cita ainda que a ocratoxina tem como outro mecanismo
de ao a interrupo da sntese protica atravs da ao competitiva do
fenillalonil-tRNA sintetase.

Figura 8: Estrutura qumica da ocratoxina A (FREIRE et al. , 2007).

6.1.5.Esterigmatocistina

A esterigmatocistina um intermedirio na biossntese de AFLs e

muito semelhante a AFLs em sua estrutura qumica e atividade biolgica (Figura
9). Ela est quimicamente relacionada a AFLs por conter um grupo dihidrofurano
condensado ligado poro xantona (SCOTT, 1994). Em humanos pode
apresentar efeitos carcinognicos e hepatognicos, porm no to txica
quando comparada a AFB1.

Figura 9: Estrutura qumica da esterigmatocistina (FREIRE et al. , 2007).

6.2. Legislao sobre micotoxinas

Para evitar os efeitos nocivos das micotoxinas em alimentos e em raes

para animais de abate e de estimao vrias legislaes tm sido adotadas em
muitos pases. Segundo Van Egmond (2003), aproximadamente 99 pases
possuem legislao para a presena de aflatoxinas em alimentos e raes o que
representa 87% da populao mundial.

19
 No Brasil, as AFLs so as nicas micotoxinas cujos nveis mximos em
alimentos esto previstos na legislao. Apesar de no existir legislao vigente
para as demais micotoxinas vem sendo propostas consultorias pela Agncia
Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA) demonstrando a preocupao com a
sade nacional (Tabela 1).

Tabela 1: Limites mximos de micotoxinas da Proposta de Resoluo em Consulta Pblica da

ANVISA (Brasil, 2010)
Micotoxinas Alimento LMT (g/Kg)
Aflatoxina M1 Leite Fluido 0,5
Leite em p 5
Queijos 2,5
Outros produtos lcteos 0,5

Aflatoxinas B1 + Cereais e produtos de cereais, exceto milho e 5,0

B2 + G1+ G2 derivados, incluindo cevada malteada.
Feijo e outra leguminosas 5,0
Castanhas exceto Castanha-do-Brasil, incluindo nozes, 10,0
pistachios, avels e amndoas; frutas desidratadas e
secas, gros oleaginosos exceto amendoim e
derivados
Castanha-do-Brasil com casca 20,0
Castanha-do-Brasil sem casca para consumo direto 10,0
Castanha-do-Brasil sem casca para consumo posterior 15,0
Alimentos a base de cereais para alimentao infantil 1,0
Formulas infantis e criana de primeira infncia 1,0
Produtos de cacau e chocolate 5,0
Condimentos e especiarias 20,0
Amendoim e derivados 20,0
Milho e derivados 20,0

Ocratoxina A Cereais e produtos de cereais, incluindo cevada 10,0

malteada
Feijo e outras leguminosas 10,0
Caf torrado modo ou em gro 10,0
Caf solvel 10,0
Vinho e suco de uva 2,0
Condimentos e especiarias 10,0
Alimentos a base de cereais para alimentao infantil 2,0

Produtos de cacau e chocolate 5,0

Frutas secas e desidratadas 10,0

Desoxinivalenol Trigo integral, farinha de trigo integral, farelo de trigo, 2000

farelo de arroz, farinha de trigo, cereais e produtos de
cereais exceto trigo e incluindo cevada malteada.
Trigo para quibe 1250
Outros produtos derivados de trigo 1500
Arroz benefiado e derivados 750
Alimentos a base de cereais para alimentao infantil 750
200
Fumonisinas Milho no processado 5000
(B1 + B2) Milho pipoca, amido de milho 3000
Farinha de milho, fub, flocos, canjica, canjiquinha 2000
Outros produtos a base de milho 1000
Alimentos a base de milho para alimentao infantil 200

20
Zearalenona Farinha de trigo e derivados de trigo, cereais e 100
produtos a base de cereais inclusive cevada malteada,
arroz benefiado e derivados.
Arroz integral 800
Farelo de arroz 1000
Milho no processado 400
Milho de pipoca, canjiquinha, canjica, produtos e sub- 300
produtos a base de milho
Trigo integral, farinha de trigo integral, farelo de trigo 200
Alimentos a base de cereais para alimentao infantil 20

Estes limites so comparveis aos estabelecidos por outros pases e

recomendado pela Organizao Mundial da Sade e pela Organizao para
Alimentao e Agricultura (SCUSSEL et al., 2010). A Tabela 2 apresenta os
limites mximos permitidos em alimentos para consumo humano em diferentes
pases.

Tabela 2: Nveis mximos permitidos para AFLs em alimentos para consumo humano
Nvel mximo
Pas Alimento
g/kg
Unio Europia 2(B1); 4 (total) Cereais e produtos
processados
Austrlia 5 (total) Todos os alimentos
Brasil 20 (total) Amendoim e derivados de
milhos
ndia 30 (total) Todos os alimentos
Japo 10 (total) Todos os alimentos
Singapura 0 Todos os alimentos
frica do Sul 5 (B1); 10 (total) Todos os alimentos
Sucia 5 (total) Todos os alimentos
Estados Unidos 20 (total) Todos os alimentos
Alemanha 2(B1); 4 (total) Todos os alimentos
0,05 (total) Alimentos infantis

Fonte: CRUZ, 2010

O Ministrio da Agricultura (BRASIL, 1988) estabelece que para qualquer

matria prima a ser utilizada diretamente ou como ingrediente para raes
destinadas ao consumo animal o limite mximo de AFLs presente pode ser de
50 g/kg de AFB1 + AFB2 + AFG1 + AFG2. A Unio europia estabeleceu como
nvel mximo o valor de 20 g/kg para raes destinadas a sunos (FONSECA,
2010).

6.3. Mtodos de deteco para micotoxinas

Numerosas tcnicas so necessrias para abranger todas as diferenas

existentes entre as micotoxinas tais como polaridade, capacidade de
21
fluorescncia, volatilidade e absoro de raios ultravioleta. Alm das diferenas
entre as micotoxinas, as matrizes analisadas para a presena das mesmas so
extremamente variadas e complexas exigindo etapas de limpeza e extrao
especficas (KATZ et al., 1998; ZLLNER et al., 2006).
Alguns mtodos de deteco de micotoxinas utilizam princpios
imunolgicos (imunoensaios); todavia, o emprego de princpios cromatogrficos
aparece na quase totalidade das situaes. De acordo com o objetivo da anlise,
os mtodos podem ser divididos basicamente em triagem e quantificao
(NOLLET, 2007).
Um dos mtodos de triagem clssicos na anlise de micotoxinas o
mtodo da minicoluna. Este mtodo serve apenas para a deteco de AFLs e
fundamenta-se na separao da micotoxina presente na amostra durante sua
migrao no interior de uma minicoluna aps a aplicao de um pequeno volume
do extrato da amostra seguida de um solvente de eluio. A toxina fica retida na
regio onde h o adsorvente Florisil. Uma fluorescncia observada na presena
de AFLs sob luz ultra-violeta em cmara escura.
Outro tipo de mtodo de triagem muito utilizado o imunoensaio. Estes
mtodos so ferramentas muito teis e tem como fundamento a produo de
anticorpos especficos contra determinadas micotoxinas que so imobilizados em
um suporte inerte e empacotados em minicolunas. O extrato proveniente do
alimento ento passado atravs da coluna. Enquanto que praticamente todos
os compostos do extrato so lavados e eluidos da coluna, as micotoxinas ficam
retidas nos anticorpos especficos. Devido ao fato de que as micotoxinas no
ficam ligadas covalentemente aos anticorpos, as mesmas podem ser retiradas
com o uso de solventes orgnicos como metanol ou acetonitrila. Este eluato
contm as micotoxinas em grande concentrao e pureza, podendo ser
detectadas por mtodos cromatogrficos. Na Figura 10 possvel observar o
esquema do mtodo de imunoafinidade (CAVALIERI et al., 2007).

22
 Figura 10: Fundamento da tcnica de imunoensaio (KATZ et al, 1998).

A quantificao tem por objetivo avaliar a concentrao das micotoxinas

em determinada matriz. Os principais mtodos para quantificao de micotoxinas
so a cromatografia em camada delgada (CCD), cromatografia lquida de alta
eficincia (CLAE) acoplada detectores de fluorescncia (FL), ultravioleta (UV) e
de massa (MS) e cromatografia gasosa (CG) acopladas a detectores de captura
de eltrons, ionizao por chama e de massa (ZLLNER et al., 2006).

6.3.1. Cromatografia lquida de alta eficincia

Entre os vrios mtodos de anlises, a cromatografia ocupa um lugar de

destaque devido sua facilidade em efetuar a separao, identificao e
quantificao de diferentes espcies (COLLINS et al., 1995).
A quantificao por cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE)
tambm conhecida por HPLC, do ingls High Performance Liquid
Chromathography. Este um tipo de cromatografia lquida que emprega colunas
e uma fase mvel que eluda sobre altas presses.
Os componentes que compem um CLAE so: reservatrio da fase
mvel, bomba de alta presso, vlvula de injeo, coluna, detector e registrador.
A fase mvel possui um alto grau de pureza estando relacionada ao
processo de separao dos analticos, proporcionando a migrao dos
compostos ao detector. Ao final do percurso a fase mvel armazenada em um
recipiente e descartada (NIESSEN, 2006; ARDREY, 2003).

23
 A bomba proporciona uma vazo constante para que no ocorram
problemas na deteco do sistema. As amostras so introduzidas no
equipamento atravs das vlvulas de injeo.
As colunas so constitudas de um cilindro metlico empacotadas com
material que serve de fase estacionria. As colunas aplicadas para anlise de
micotoxinas so geralmente compostas com slica tratada com polmeros de
carbono e dependendo do tamanho da cadeia carbnica ligada partcula de
slica podem ser: C4, C8 e C18 principalmente.
O detector mais utilizado para separaes por CLAE o detector de
ultravioleta, sendo tambm empregados detectores de fluorescncia, de ndice de
refrao, e eletroqumicos, entre outros. O registro de dados pode ser feito
atravs de um registrador, um integrador ou um microcomputador.

6.4. Validao de mtodos analticos

A necessidade de se mostrar a qualidade de medies qumicas, atravs

de sua comparabilidade, rastreabilidade e confiabilidade, est sendo cada vez
mais reconhecida e exigida. Para que o mtodo analtico seja aplicvel, com
caractersticas relevantes necessria sua validao.
A validao corresponde a estudos analticos que envolvem o
laboratrio, utilizando o mesmo mtodo para analisar a mesma ou diferentes
matrizes, durante um intervalo de tempo determinado. Estes estudos permitem a
avaliao do desempenho do mtodo com um numero considervel de
experimentos, utilizando diferentes concentraes e matrizes, em um curto
intervalo de tempo, facilmente adequado s diferentes situaes (VAN DER
VOET et al. 1999).
No Brasil, h duas agncias credenciadoras para verificar a competncia
de laboratrios de ensaios, a ANVISA e o INMETRO. Estes rgos disponibilizam
guias para o procedimento de validao de mtodos analticos, respectivamente,
a Resoluo ANVISA RE no 899, de 29/ 05/2003 e o documento INMETRO DOQ-
CGCRE-008, de junho/2007 (RIBANI et al., 2004).

24
7. OBJETIVOS

7.1. Geral

Avaliar a presena e os efeitos de micotoxinas em ingredientes e raes

visando segurana alimentar dos sunos.

7.2. Especficos

- Analisar o teor de fumonisinas, zearalenona, aflatoxina, ocratoxina e

esterigmatocistina nos ingredientes (milho, soja, casquinhas de soja, farelo de
arroz), resduo da pr-limpeza do milho e nas raes (gestao, engorda e inicial)
para sunos;
- comparar os nveis de contaminao das toxinas permitidos pela
legislao brasileira - se so seguros e/ou podem causar danos aos animais;
- avaliar a necessidade de uma legislao vigente para a fumonisina,
zearalenona, ocratoxina e esterigmatocistina;
- analisar os dados reprodutivos de propriedade e correlacionar com as
micotoxinas presentes na alimentao;
- verificar os possveis fatores que favorecem a proliferao de fungos e
a formao de micotoxinas (nas instalaes da propriedade, ingredientes e
raes);
- discernir e aprimorar os contedos qumicos empregados em anlises
de micotoxinas;
- melhorar a qualidade sanitria visando uma maior renda e qualidade
alimentar.

25
 8. METODOLOGIA

8.1. Material

8.1.1. Amostras
As amostras foram obtidas de uma propriedade rural de suinocultura
localizada no municpio de Doutor Pedrinho (Figura 11), no Vale do Itaja, Santa
Catarina.

Paran

Santa Catarina

Rio Grande do
Sul
(a) (b)

Figura 11: (a) Localizao geogrfica do municpio de Doutor Pedrinho no estado de Santa
Catarina. (b) Foto da propriedade.

Foram coletadas amostras de ingredientes (milho, soja, farelo de arroz e

casquinha de soja), resduo da pr-limpeza do milho e tipos distintos de raes
(gestao, engorda e inicial) em diferentes datas em 2006 e 2010. As amostras
foram coletadas de forma representativa nos silos e galpes da propriedade
obtendo um total de 1 kg de cada tipo de amostra.
As amostras de milho e soja foram coletadas de silos de 20 e 50
toneladas, respectivamente. Na Figura 12 pode ser visualizado o fluxograma de
coleta e preparo das amostras.

26
 Lotes da propriedade

Coleta de 200g em 5 pontos distintos do

lote

Homogeneizao 1kg

Identificao e anlise

Figura 12: Fluxograma de coleta de amostras de milho e soja.

As amostras de farelo de arroz e casquinha de soja foram coletadas de

sacas contendo 60 kg cada, em 50 e 60 unidades, respectivamente. Quanto s
amostras de rao, foram coletados trs tipos distintos (rao de engorda, inicial
e gestao) de sacas de 25 kg.
As amostras de raes, casquinha de soja e farelo de arroz foram
coletadas e preparadas segundo o fluxograma apresentado na Figura 13.
Os resduos de milho remanescentes da pr-limpeza dos gros, gerados
a partir da peneirao antes da moagem, foram tambm coletados para anlise.
Na Tabela 3, apresentamos dados sobre as coletas das amostras de
ingredientes, resduo da pr-limpeza do milho e raes.

Lotes da propriedade

Coleta de 200g de diferentes sacas

Homogeneizao 1Kg

Identificao e anlise

Figura 13: Fluxograma de amostragem de raes, casquinha de soja e farelo de arroz.

27
 Tabela 3: Dados sobre a coleta das amostras de ingredientes e raes
Ingredientes Resduo Raes
Total de Farelo Pr- limpeza
Milho Soja Casquinha Gestao Engorda Inicial Data da coleta
amostras1 de Arroz do milho
2 x NC NC NC x NC NC NC 17/10/06
6 x x x x NC x x NC 02/10/06
6 x x x x NC x x NC 23/11/06
6 x x x x NC x x NC 12/12/06
6 x x NC x x x NC x 01/08/10
6 x x NC x x x NC x 19/08/10
6 x x NC x x x NC x 06/09/10
6 x x NC x x x NC x 28/09/10
Total geral 44 8 7 3 7 5 7 3 4
1
Quantidade em gramas; NC: amostra no coletada; x: amostra coletada.

28
8.1.2. Padres

Os padres de aflatoxinas (AFB1, AFB2, AFG1 e AFG2), zearalenona,

esterigmatocistina e ocratoxina A foram obtidos comercialmente e so da marca
Sigma , fumonisinas (FB1, FB2) fornecidas pelo Programme on Mycotoxins and
Experimental Carcinogenesis (PROMEC) da frica do Sul. Solues estoques
individuais de FB1 e FB2 foram preparadas pesando-se 1 mg e dissolvendo em 10
mL de acetonitrila-gua (1+1), segundo Visconti et al. (1994), obtendo uma
concentrao de 100 g/mL. Solues de trabalho foram preparadas em
concentraes de 50 g/mL de FB1 e FB2, respectivamente. AFLs, AFB1, AFB2,
AFG1 e AFG2, 2,5 g/mL cada em benzeno. Ocratoxina A, concentrao de 10
e 1 g/mL em benzeno (Sigma ). A determinao exata das concentraes foi
realizada conforme descrito na AOAC (2005). Todas as solues padres foram
armazenadas em frascos mbar vedados a -18C.

8.1.3. Reagentes

Para as anlises foram utilizados: (a) reagentes: sulfato de sdio anidro,

carbonato de cobre II, cido frmico e cido actico, hidrxido de sdio, hidrxido
de potssio, cloreto de potssio, cloreto frrico, acido sulfrico, cloreto de
alumnio, sulfato de cobre; (b) solventes: acetona, gua destilada, clorofrmio,
benzeno, metanol, tolueno, acetato de etila; (c) empacotadores: celite e slica gel
G 60. Para a derivatizao foi utilizado: o-oftaldialdedo (OPA), metanol, soluo
de tetraborato de sdio e 2- mercaptoetanol. Todos os reagentes utilizados foram
grau P.A. obtidos comercialmente de vrias marcas.

8.1.4. Equipamentos

Neste trabalho foram usados os seguintes equipamentos: Balanas

semi-analtica e analtica, liquidificador com copo de metal (1L), heating block
(40C), cmara de luz-ultravioleta de comprimentos de onda curto (254 nm) e
longo (360 nm), agitador de tubos, cuba cromatogrfica, borrifador, bomba de
vcuo.

29
 Um cromatgrafo liquido de alta eficincia equipado com: vlvula de
injeo, loop 20L (Rheodyne ). Bomba isocrtica, detetor de fluorescncia
(Gilson ) com comprimento de onda de excitao de 335 nm e de emisso 440
nm. Coluna cromatogrfica de fase reversa C18, 250 mm x 4,6 mm, 5
(Phenomenex ).

8.2. Mtodos

8.2.1. Anlise de micotoxinas

8.2.1.1. Anlise de aflatoxinas, ocratoxina A, zearalenona e

esterigmatocistina

As determinaes das multitoxinas: AFB1, AFB2, AFG1 e AFG2, OTA,

ZON e EST foram realizadas conforme metodologia descrita por Soares e
Rodriguez-Amaya (1998). Sendo que o limite de deteco (LOD) para cada
multitoxina foi de 1 g/kg e o limite de quantificao (LOQ) foi de 2g/kg. Foram
utilizados 50 g de cada amostra, extradas com 270 mL de metanol e 30 mL de
cloreto de potssio 4 %. A amostra foi agitada neste meio por 5 min em
velocidade moderada, depois filtrada. Foi coletado 150 mL do filtrado e
adicionado 150 mL de sulfato de amnio 30 % e 50 mL de celite, agitado
moderadamente e filtrado; 150 mL deste novo filtrado foi transferido para funil de
separao e as toxinas foram extradas com 10 mL de clorofrmio por 3 vezes.
Os extratos clorofrmicos foram submetidos a evaporao do solvente em banho
de 60C at prximo a secura. Os extratos foram ressuspendidos em 200 L de
benzeno/acetonitrila (98 + 2, v/v) e imediatamente submetidos cromatografia
em camada delgada. A eluio foi feita em cuba saturada com o sistema de
solventes: tolueno - acetato de etila - cido frmico (60 + 40 + 0,5). Sob luz
ultravioleta de comprimento de onda longo ( = 366 m) e a determinao feita
atravs da comparao com os padres de AFB1, AFB2, AFG1, AFG2 e OTA,
preparados conforme Scott (1994). Na Figura 14, apresentamos o fluxograma do
mtodo de anlise de multitoxinas aqui descrito.

30
 50 g da amostra
270 mL Metanol
30 mL KCl 4%

Filtrar (A)

150 mL do filtrado (A)

150 mL Sulfato de Amnio 30%
Celite

Filtrar (B)

150 mL do filtrado (B)

Extrao com 10mL de
clorofrmio no funil de
separao

Secar o eluato em nitrognio

Aplicar na placa CCD junto ao padro

Eluio em cuba insaturada com

o sistema de solventes: tolueno -
acetato de etila - cido frmico.

Sob luz ultravioleta de comprimento de onda

longo ( = 366 m) a determinao foi feita
atravs da comparao com os padres

Figura 14: Fluxograma do mtodo de anlise de multitoxinas

8.2.1.2. Anlise de fumonisinas B1 e B2

Foi empregado o mtodo 995.15 da AOAC (2005). Sendo a LOD 0,05 e

0,04 g/kg para FB1 e FB2 repectivamente. A metodologia empregada, conforme
fluxograma Figura 15, utiliza metanol/gua (CH3OH-H2O/3:1) como solvente de
extrao. A limpeza do extrato foi realizada em colunas de extrao em fase
slida (SAX Stata ).
A derivatizao consiste em redisolver extrato purificado em 200 L de
metanol e filtrado em filtros com poros de 0,45 m de dimetro. Desta soluo
retirado 25 L e transferidos para frasquinho de vidro onde adicionado 225 L
de soluo de o-ftaldedo (OPA) e mantidos temperatura ambiente para reao
de derivatizao por 2 min. Em seguida 20 L da mistura injetada no

31
cromatgrafo lquido (CLAE), equipado com detector de fluorescncia ( =
excitao 335 nm e emisso 440 nm) .O clculo das FBs presente no extrato,
aps e posterior introduo no aparelho, baseado nas reas de picos
detectados como segue:
GxS
A( g ) =
H
A= FB injetada G= rea do pico do extrato da amostra H=rea do pico do
padro S=quantidade do padro injetado. O clculo da concentrao de
fumonisinas presente na amostra feito de acordo com a frmula abaixo:
AxTxD
C ( g ) =
IxW
T= volume total da amostra derivada (250L) D= fator de diluio,
I=volume de injeo (20L), W= massa da amostra derivada. Vrios aspectos
com relao tcnica analtica foram avaliados, incluindo a recuperao de cada
fumonisina individualmente, a linearidade da curva padro, o limite de deteco
do mtodo e a repetibilidade da tcnica.

50 g da amostra
80 mL Metanol
20 mL KCl 4%

Filtrar

Condicionar a coluna
5mL Metanol
5 mL Metanol: gua (80:20)

Extrato
10 mL filtrado da amostra

Lavar
5 mL Metanol:gua (80:20)
3 mL Metanol

Eluir
10 mL Metanol : gua -
utilizar bomba de vcuo

Concentrao
Secar o eluato em nitrognio
Anlise no CLAE

Figura 15: Fluxograma do mtodo de anlise de fumonisinas.

32
8.2.2. Determinao da umidade

Foi realizada conforme mtodo AOAC (2005), em triplicata, a qual

consiste em secagem da amostra em estufa (110C 5 C), baseado na remoo
da gua por aquecimento. As amostras foram colocadas em cadinhos de
alumnio, com massas previamente determinadas, ficando em estufa at a
secagem. Os cadinhos contendo as amostras foram, ento, resfriados
temperatura ambiente, em dessecador, tendo sua massa novamente
determinada. Logo aps, os cadinhos retornaram estufa e este procedimento foi
repetido at a obteno de massa constante. Foi calculada, ento, a
porcentagem de umidade nas amostras e o desvio padro considerando as
anlises em triplicata (Figura 16).

Secar em estufa (110 C 5C)

Resfriar temperatura ambiente, em

dessecador

Determinar a massa dos cadinhos de

alumnio

Repetir o procedimento com as

amostras at atingir massa
constante

Calcular porcentagem de umidade

nas amostras

Figura 16: Fluxograma do mtodo de anlise de umidade.

8.2.3. Avaliao da estrutura e organizao da propriedade

Atravs de levantamento de dados, visitas e questionrios foi possvel

verificar as condies estruturais da propriedade rural, com relao a dados de
natalidade, condies de armazenamento e processamento dos ingredientes e
manejo dos animais.

33
9. RESULTADOS E DISCUSSO

9.1. Avaliao da contaminao por micotoxinas em ingredientes e raes

para sunos

Dos ingredientes (milho, soja, casquinha de soja, farelo de arroz),

resduo da pr limpeza do milho e raes de vrios estgios de desenvolvimento
do suno (gestao, engorda, inicial) avaliadas, quanto presena de FBs, AFLs,
ZON, OTA e EST, somente as FBs foram detectadas.

9.1.1. Fumonisinas

Quanto contaminao por FBs do total de amostras analisadas (20),

sete amostras (35%), apresentaram contaminao por FBs (Tabela 4). Foi
possvel observar que dos ingredientes avaliados, duas amostras de milho
apresentaram contaminao por FB1 com 0,238 e 0,830 mg.kg-1 e FB2 com 0,104
e 0,340 mg.kg-1 = FBs total: 0,342 e 1,17 mg.kg-1. J, os outros ingredientes
(soja, farelo de arroz e casquinha de soja) avaliados, no apresentaram
contaminao pelas toxinas de Fusarium dentro da LOD e LOQ do mtodo
utilizado AOAC (2005).

Tabela 4: Anlises de fumonisinas em ingredientes para sunos avaliadas em 2006

Data coleta Ingrediente FB1 (g/kg) FB2(g/kg)

02/10 Milho 0,830 0,340
17/10 Milho 0,238 0,104
23/11 Milho ND ND
12/12 Milho ND ND
17/10 Soja ND ND
23/11 Soja ND ND
12/12 Soja ND ND
17/10 Casquinha de soja ND ND
23/11 Casquinha de soja ND ND
12/12 Casquinha de soja ND ND
17/10 Farelo de arroz ND ND
23/11 Farelo de arroz ND ND
12/12 Farelo de arroz ND ND
Mdia de concentrao de amostras contaminadas 0,534 0,222
Mximo de contaminao 0,830 0,340
Mnimo de contaminao 0,238 0,104
ND= no detectado

J o nvel mdio de FB1 nas raes de gestao e engorda (4 amostras)

foi de 0.216 mg.kg-1 (0,124 min.; 0,325 mx.) e de FB2 0,075 mg.kg-1 (0,04 min;

34
0,110 mx.). Como esperado, o maior nvel de contaminao por FBs totais foi
registrado em amostras de resduos da pr-limpeza do milho com 8,50 mg.kg-1
(Tabela 5).

Tabela 5: Anlises de fumonisina em raes para sunos avaliadas em 2006

Data coleta Rao FB1 (g/kg) FB2(g/kg)
02/10 Gestao 0,124 0,04
23/11 Gestao 0, 325 0,11
12/12 Gestao ND ND
02/10 Engorda 0,158 0,06
23/11 Engorda 0,258 0,09
12/12 Engorda ND ND
Mdia de concentrao de amostras contaminadas 0,216 0,075
Mximo de contaminao 0,325 0,110
Mnimo de contaminao 0,124 0,04
ND= No detectado

A contaminao encontrada em ingredientes e raes para sunos foi

baixa, com exceo dos resduos de limpeza, que no so utilizados no preparo
da rao que podem contaminar a mesma. Nveis baixos, porm constantes na
dieta podem interferir a longo prazo na sade e no desempenho reprodutivo dos
sunos gerando danos econmicos na cadeia produtiva destes animais.
Portanto, se faz necessrio o monitoramento das condies de cultivo
dos ingredientes, transporte e armazenamento, para que no ocorra proliferao
de fungos e micotoxinas, evitando assim problemas na criao de sunos.

9.1.2.OTA, EST, ZON e AFLs

Do total de amostras analisadas (44), no foi detectada a presena de

OTA, EST, ZON e AFLs, tanto de ingredientes quanto para raes. Atravs do
mtodo cromatogrfico empregado com LOD: 1 g/L e LOQ: 2 g/L, para cada
uma destas micotoxinas, foi possvel comprovar a segurana dos produtos
analisados em relao a estas toxinas. Importante salientar que o mtodo
cromatogrfico empregado tem capacidade de detectar nveis de contaminao
abaixo do limite mximo da AFB1 permitido pela legislao brasileira e europia,
que de 50 g/kg e 20 g/kg, respectivamente.
Portanto foi comprovada a qualidade das amostras quanto
contaminao por estas toxinas evitando assim problemas reprodutivos em
sunos (abortos, natitmortos, mumificados = ZON) e de produo (edema
pulmonar, problemas hepticos e renais= OTA, AFLs e EST).

35
9.2. Contedo de umidade das amostras de ingredientes e raes para
sunos versus micotoxinas

O controle da umidade dos ingredientes e raes de fundamental

importncia, uma vez que teores elevados aumentam as chances de proliferao
de fungos e tambm produo de micotoxinas (toxinas de armazenagem: OTA,
EST e AFls). A umidade do alimento influenciada diretamente pela temperatura
ambiente e condies de armazenamento do produto. Os resultados das
amostras avaliadas, coletadas no perodo de agosto a setembro de 2010, podem
ser observados na Tabela 6.

Tabela 6: Contedos de umidade nas amostras de ingredientes e raes para sunos avaliados
em 2010
Contedo de umidade (%)
Ingredientes Raes
Data coleta Soja Farelo de arroz Milho Resduo Gestao Inicial
01/08 12,48 9,14 12,07 12,22 11,90 11,99
19/08 14,15 9,76 13,12 12,93 12,54 11,97
06/09 13,34 9,79 12,31 12,55 12,24 12,87
28/09 11,94 9,26 12,34 10,39 11,24 11,94
Mdia 12,98 9,49 12,46 12,02 11,98 12,19
Max. 14,15 9,79 13,12 12,93 12,54 12,87
Min. 11,94 9,14 12,07 10,39 11,24 11,94
S 0,9743 0,3348 0,4553 1,1254 0,5586 0,4508
S= Desvio Padro; Todas as anlises foram feitas em triplicata.

Pode ser observado que ocorreu uma variao mensal do teor de

umidade das amostras avaliadas, principalmente das amostras de soja (12,98%)
e resduo (12,02%) com um desvio padro de 0,9743 e 1,1254, respectivamente.
Essa variao provavelmente foi influenciada pelas condies climticas, elevada
umidade relativa do ar e temperatura do ambiente.
Do total de 24 amostras analisadas (Figura, 17 e 18), apenas duas
amostras de soja apresentaram o valor de umidade (14,15 % e 13,34%) superior
ao limite descrito em literatura como sendo ideal para o desenvolvimento de
fungos que de 13% (PEREIRA et al. , 2002).

36
 Umidade dos Ingredientes

16,00
14,00
12,00
Data coleta: 01/08/2010
10,00
Data coleta: 19/08/2010
8,00
Data coleta: 06/09/2010
6,00
Data coleta: 28/09/2010
4,00
2,00
0,00
Soja Farelo de arroz Milho Resduo

Figura 17: Contedo de umidade dos ingredientes utilizados para o preparo das raes para
sunos.

Umidade das Raes

13,00

12,50

12,00 Data coleta 01/08/2010

Data coleta 19/08/2010
11,50
Data coleta 06/09/2010
11,00 Data coleta 28/09/2010

10,50

10,00
Gestao Inicial

Figura 18: Contedo de umidade das raes administradas aos sunos no perodo de agosto a
setembro de 2010.

9.3. Avaliao das condies higinico sanitrias da propriedade

9.3.1. Armazenagem e processamento dos ingredientes e das raes

A propriedade possui um galpo especfico onde so armazenados e

processados os ingredientes e as raes para sunos.
Neste galpo existem dois silos de 20 e 50 toneladas, para
armazenagem de soja e milho, respectivamente (Figura 19, (a) e (b)). realizado
um esvaziamento mensal dos silos, para limpeza, ajudando na preveno da
proliferao de fungos, insetos e roedores.

37
 (a) (b) (c)

Figura 19: Armazenamento dos gros em silos granel e/ou sacarias:: (a) soja; (b) milho; (c)
farelo de arroz e casquinha de soja.

A limpeza do milho realizada na propriedade atravs de uma peneira

que antecede o processo de moagem dos gros. Esse processo elimina gros
quebrados, poeira e materiais estranhos que possam interferir na qualidade da
alimentao do animal.
Os outros ingredientes, casquinha de soja e farelo de arroz so
armazenados em sacas de 60 kg em lotes de 50 e 60 unidades respectivamente
(Figura 19, (c)).
Aps processadas as raes so armazenadas em sacas de 25 kg em
lotes de 60 unidades ou conforme a necessidade e demanda do plantel.
O ambiente onde so armazenados e processados os ingredientes e
raes bem ventilado e possui limpeza peridica, porm o controle de
temperatura e umidade no so realizados. Sendo que estes so os principais
fatores para o desenvolvimento fngico.

9.3.2. Instalaes e manejo dos animais

A propriedade possui um plantel de 200 matrizes (ciclo completo) com

um total de 2000 sunos. As instalaes e sanitariedade (Figura 20) so bem
controlados, visando sempre proporcionar aos animais a qualidade no seu
desenvolvimento.
Para conseguir se adequar s necessidades do plantel e do mercado
consumidor necessrio um constante monitoramento da qualidade das raes,
gentica e manejo empregado a estes animais.

38
 (a) (b) (c) (d)

Figura 20: Instalaes da propriedade onde foram realizados os estudos da qualidade de

ingrediente e raes para sunos.(a) amamentao; (b) bebedouro para alimentao do suno; (b)
leito; (c) sunos na fase de engorda.

9.4. Controle de natalidade de sunos e sua relao com a presena de

micotoxinas nas raes

Foi avaliada quantitativamente a natalidade da propriedade rural no

periodo de junho de 2007 a agosto de 2010, correlacionando com possveis
contaminaes por micotoxinas na alimentao. A mdia de nascimento mensal
de 430 sunos (min 398,86, mx 484,25). A taxa de mortalidade anual representa
10,97% (min 9,76%, mx 12,22%). Neste percentual considerado o nmero
leites natimortos, os quais nasceram mortos mas com perfeito desenvolvimento
externo (Figura 21, (a) e (b)).

(a) (b) (c)

Figura 21: Alteraes em leites observados durante o parto: (a) e (b) natimortos. (c)
mumificados.

O nmero de leites mumificados (Figura 21, (c)) tambm bastante

elevado, sendo mensalmente observado cerca de 54 mumificados, o que
representou 2,06% do total de nascimentos (Figura 22).

39
 Total de sunos nascidos entre 2007 e 2010
Mumificados:
Mortos: 10,97% 2,06%

Vivos 86,97%

Figura 22: Total de sunos nascino entre 2007 e 2010.

No ms de junho de 2009 foi observado o maior percentual de

mumificados (3,49%). Embora sejam necessrias maiores anlises, a presena
micotoxinas na alimentao destes animais pode ser um forte indicativo dos
baixos ndices reprodutivos existentes na propriedade (Tabela 7).

40
 Tabela 7: Controle de natalidade 2007 a 2010
Vivos
Mortos Mumificados
Perodo Total**
o o o
N Total (%) Media* N Total (%) Mdia* N Total (%) Mdia*
Junho a dezembro - 2007 2792 87,66 398,86 311 9,76 44,43 82 2,57 11,71 3185
Janeiro a dezembro - 2008 5310 85,62 408,46 758 12,2 58,31 134 2,16 10,31 6202
Janeiro a dezembro - 2009 5636 86,73 433,54 726 11,17 55,85 136 2,09 10,46 6498
Janeiro a agosto - 2010 3874 88,75 484,25 426 9,76 53,25 65 1,49 8,13 4365
TOTAL 17612 86,97 430,00 2221 10,97 54,02 417 2,06 10,16 20250

* mdia mensal; ** inclui todos os nascidos (vivos, mortos, mumificados).

41
10. CONCLUSES

A qualidade da alimentao animal vem sendo aprimorada, na busca de

uma melhor nutrio, sade e desenvolvimento. Neste trabalho foram avaliados
ingredientes e raes para sunos quanto possvel contaminao por
micotoxinas.
Atravs de anlises, que forneceram dados positivos para FBs, foi
verificado que necessrio um constante monitoramento do processamento das
raes e do armazenamento do produto, bem como a compra adequada de
matria prima isenta de contaminao. Nenhuma amostra apresentou
contaminao por OTA, AFls, ZON e EST. Foram verificados na propriedade
dados elevados de abortos (2,06%) e natimortos (10,97%) o que eventualmente
pode ter sido ocasionado pela presena destes contaminantes alimentares.
necessrio que exista uma legislao vigente, para todas as
micotoxinas, e no apenas para as AFLs, para que o controle da qualidade seja
melhor implantado e fiscalizado pelas autoridades.
O ambiente em que se encontram os ingredientes e raes deve ser
monitorado, uma vez que fatores, como umidade e temperatura so influenciados
pelas instalaes, e em casos de condies inadequadas causam o
desenvolvimento fngico e proliferao de micotoxinas.
Alm disso, o estgio realizado e principalmente a participao no grupo
de pesquisa LABMICO, colaborou para o discernimento e o aprimoramento de
conhecimentos qumicos empregados em anlises de micotoxinas, atravs do
emprego de tcnicas de extrao e cromatogrficas.
Para trabalhos futuros necessrio um acompanhamento da qualidade
dos produtos, por um maior perodo de tempo, para que mais dados possam ser
obtidos atravs de analises laboratoriais com possibilidade de correlacionar
contaminao com o nascimento e desenvolvimento de animais na propriedade.
O intuito implementar o sistema de Anlise de Perigos e Pontos Crticos de
Controle (APPCC) na fbrica de rao da propriedade. Para tal implementao
ser necessrio a avaliao dos pontos crticos e estabelecimento de formas de
controle relacionando a desencadeamento de fungos e micotoxinas.

42
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