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MINISTRIO DA SADE

FUNDAO OSWALDO CRUZ - FIOCRUZ


VICE - PRESIDNCIA DE DESENVOLVIMENTO CIENTFICO E
TECNOLGICO
COMISSO DE TICA NO USO DE ANIMAIS DE EXPERIMENTAO - CEUA

MANUAL DE UTILIZAO DE ANIMAIS/FIOCRUZ

ELABORADO PELA CEUA - FIOCRUZ


RIO DE JANEIRO
2008
2

MANUAL DE UTILIZAO DE ANIMAIS/FIOCRUZ

PRIMEIRA EDIO

RIO DE JANEIRO
2008
3

MANUAL DE UTILIZAO DE ANIMAIS/FIOCRUZ


Edio de texto:
Ftima Conceio-Silva
Octavio Augusto Frana Presgrave
4

Ministrio da Sade
Ministro: Jos Gomes Temporo

FUNDAO OSWALDO CRUZ FIOCRUZ

Presidente
Paulo Marchiori Buss

Vice- Presidente de Pesquisa e Desenvolvimento Tecnolgico


Jos da Rocha Carvalheiro

Vice - Presidente de Desenvolvimento Institucional e Gesto do Trabalho


Paulo Gadelha

Vice - Presidente de Ensino, Informao e Comunicao.


Maria do Carmo Leal

Vice - Presidente de Servios de Referncia e Ambiente


Ary Carvalho de Miranda

Vice - Presidente de Produo e Inovao em Sade


Carlos Augusto Grabois Gadelha

Comisso de tica no Uso de Animais CEUA


Coordenador: Octavio Augusto Frana Presgrave
Vice - coordenador: Norma Labarthe
Ftima Conceio-Silva

Membros atuais: Membros anteriores da CEUA que


Belmira Ferreira dos Santos participaram da preparao deste manual
Bruno L. Diaz Hugo Caire de Castro Faria Neto
Carmen Penido Celina Bessa
Etlcia Moraes Molinaro Elizabeth Malagueo de Santana
Joseli de Oliveira Ferreira
Maria Ignez Elsas
Marcos Vincius Mota Pires
Tnia Maria Pacheco Schubach
Valber S. Frutuoso
Leonardo Jos Carvalho
Wildeberg Cal Moreira
Giuliana Schirato

Assistente administrativa: Lara Assuno


5

SUMRIO

CAPTULO TTULO AUTOR PGINA


Apresentao Octavio Augusto Frana 6
Presgrave
Prefcio Octavio Augusto Frana 7
Presgrave
1 Breve histrico Octavio Augusto Frana 9
Presgrave
2 Procedimentos para a Octavio Augusto Frana 10
apresentao de protocolo Presgrave
CEUA - Fiocruz
3 Notas importantes sobre o Ftima Conceio-Silva 12
preenchimento do formulrio
CEUA
4 Principais vias e formas de Joseli de Oliveira Ferreira 16
administrao / inoculao em
animais convencionais
5 Principais frmacos usados em Hugo Caire de Castro Faria 20
animais de laboratrio Neto e Belmira Ferreira
convencionais - anestsicos e dos Santos
analgsicos
6 Recomendaes para a preparao Elizabeth Malagueo de 28
de anticorpos poli e monoclonais Santana
7 Sangria Octavio Augusto Frana 33
Presgrave e Belmira
Ferreira dos Santos
8 Eutansia Ftima Conceio-Silva e 37
Celina Bessa
9 Pesquisa com animais silvestres Norma Labarthe e Etelcia 46
Moraes Molinaro
10 Endereos importantes 52
ANEXO Princpios ticos para o uso 53
de animais de laboratrio
(COBEA)
6

APRESENTAO

A idia principal que este Manual seja impresso e distribudo s Bibliotecas da


FIOCRUZ, bem como aos Laboratrios das Unidades da FIOCRUZ, para que seja usado
como ponto de partida para o uso de animais e sempre que houver dvida quanto a forma
de executar um determinado procedimento.

Esse Manual j deveria ter sido publicado desde julho de 2007, entretanto, diversos fatores
alheios vontade da CEUA e de seus membros fizeram com que isso no tivesse sido
possvel.

Preocupados com o respeito que temos para com todos os funcionrios que utilizam
animais de laboratrio em seus trabalhos e cientes da importncia deste em um tempo onde
as presses contrrias ao uso de animais se faz presente no dia-a-dia dos pesquisadores,
decidimos, antes de imprimi-lo em papel, disponibiliz-lo em nossa pgina. As crticas
construtivas sero muito bem recebidas. A base do Manual est agora lanada, e sua
construo ser continuada a partir das idias e necessidades dos usurios de animais.

Em breve, estaremos lanando a verso impressa, mas, a digital na pgina ser sempre
mantida, em funo do dinamismo com que evoluem a cincia de animais de laboratrio e a
biotica.

Rio de Janeiro, 02 de maio de 2008.


Octavio Augusto Frana Presgrave
Coordenador da CEUA
Fiocruz - MS
7

PREFCIO

A idia de escrever este Manual partiu no s da nossa observao quanto aos maiores
problemas encontrados durante a avaliao dos protocolos, como tambm pelos
questionamentos por parte dos proponentes que, nos perguntavam onde conseguir uma
tabela com os anestsicos ou qual a forma de eutansia que a CEUA/FIOCRUZ indicava.

Estamos vivendo em uma poca em que alternativas ao uso de animais na experimentao


cientfica so estudadas e onde a participao de ONGs e da sociedade cada mais intensa
na defesa dos direitos dos animais. Entretanto, temos pleno conhecimento que no
possvel, ainda, substituir o uso de animais em todas as reas. nosso dever orientar que
mtodos alternativos sejam usados onde estes j se encontram validados, impedindo que
animais sejam usados de forma equivocada. Entretanto, se faz mister que, nas reas onde
no existam alternativas de substituio, os preceitos de reduo e refinamento sejam
implementados.

Assim, sendo, sempre que for imprescindvel o uso de animais, entendemos que estes
devem ser tratados dentro da tica, de forma que sejam respeitados como seres vivos que
esto contribuindo para o progresso da cincia. Da mesma forma que seres humanos
tambm o fazem quando participam de um estudo clnico.

A escassez de material em portugus e a diversidade de informaes disponveis em fontes


internacionais ou na internet fizeram com que procurssemos reunir neste Manual os pontos
mais crticos que norteassem no s o preenchimento do formulrio da CEUA, mas,
tambm, os trabalhos na FIOCRUZ. Temos conscincia de que esses dados representam a
mdia e no um valor absoluto, pois muitos dos parmetros dependem da idade, estado
nutricional, interao de medicamentos e situaes experimentais da cada animal, entre
outros fatores. Dessa forma, importante que condies diferentes sejam claramente
justificadas.

Da mesma forma, estamos cientes de que esse processo dinmico e, sempre que
houver atualizaes, estas estaro disponveis na pgina da CEUA at que uma nova
reviso do Manual seja publicada. Portanto, quando for necessrio, deve-se verificar
as possveis atualizaes on line deste manual.

Agradeo a todos os profissionais que j foram membros da CEUA/FIOCRUZ ao longo de


sua existncia e que ajudaram a construir a forma com que trabalhamos hoje e que, sem
dvida, ainda est sendo estruturada, talvez muito longe ainda da perfeio.

No posso deixar de agradecer, tambm, o esforo de todos os membros atuais que, direta
ou indiretamente, participaram deste Manual atravs da redao dos captulos, reviso dos
mesmos, ou da participao em reunies onde discutamos quais os assuntos a serem
abordados ou a melhor forma de faz-lo. Quero agradecer, em especial, a Dra. Ftima
Conceio-Silva que trouxe para si o trabalho de reunir estes textos e dar a forma final
deste Manual.
8

Cabe ressaltar que uma Comisso de tica no deve ser encarada como uma instncia
punitiva ou que deseja atrapalhar o andamento das pesquisas de uma Instituio e este
trabalho ratifica uma de suas misses: a de orientar os pesquisadores, acima de tudo.

Maio de 2008.

Octavio Augusto Frana Presgrave, M. Sc.


Coordenador da CEUA/FIOCRUZ
9

CAPTULO 1 Octavio Augusto Frana Presgrave

BREVE HISTRICO
A Comisso de tica no Uso de Animais da Fundao Oswaldo Cruz
(CEUA/FIOCRUZ) foi criada em 1999, atravs da Portaria da Presidncia n 099/99-PR, de
06/04/1999 com o objetivo de que toda e qualquer atividade que envolva o uso de animais
de laboratrio no mbito da FIOCRUZ deve ser previamente submetida anlise e
aprovao por esta Comisso.

A CEUA/FIOCRUZ foi criada a partir da iniciativa do Dr. Renato Srgio Balo


Cordeiro, na poca Vice-Presidente de Pesquisa, que convidou o Dr. Marco Aurlio
Martins, do Departamento de Fisiologia e Farmacodinmica (DFF) do Instituto Oswaldo
Cruz (IOC), para ser o primeiro Coordenador, tendo como Vice-Coordenadora a Dra. Clia
Cardoso, do Centro de Criao de Animais de Laboratrio (CECAL).

Nos primeiros 6 meses de existncia, a CEUA trabalhou de forma a elaborar o seu


Regulamento, que foi aprovado atravs da Portaria da Presidncia n 242/99-PR, de
19/11/1999, ocorrendo em seguida, a publicao do Regimento Interno. Alm disso,
tambm trabalhou em uma forma de apresentao dos projetos, primeiramente em um
formulrio escrito em MS-Word e logo em seguida, foi desenvolvido um programa
atravs do qual se faz o download do formulrio diretamente da home page.

A criao da CEUA/FIOCRUZ foi ao encontro da tendncia mundial de se


regulamentar o uso de animais de laboratrio e se antecipou obrigatoriedade de que toda
instituio de pesquisa brasileira tenha uma Comisso de tica, conforme preconizado no
Projeto de Lei n 1153/95, ainda em tramitao no Congresso Nacional. importante
ressaltar que a funo da Comisso de tica no punitiva, mas sim, educativa.

A CEUA/FIOCRUZ teve como seu segundo Coordenador o Dr. Hugo Caire de


Castro Faria Neto, tambm do DFF/IOC. Em seguida, assumiu a coordenao de Octavio
Augusto Frana Presgrave MSc, do Departamento de Farmacologia e Toxicologia (DFT)
do Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade (INCQS).

Atualmente, a CEUA/FIOCRUZ composta por 15 membros, de diferentes


formaes profissionais e de vrias reas de atuao.
10

CAPTULO 2 Octavio Augusto Frana Presgrave

PROCEDIMENTOS PARA APRESENTAO DE PROTOCOLO


CEUA/FIOCRUZ

Os primeiros protocolos apresentados necessitaram de uma aprendizagem, tanto por


parte dos proponentes para o preenchimento, quanto dos membros da CEUA para avaliar o
projeto. medida que se foi tendo prtica e, com o advento do segundo formulrio, os
trabalhos foram ficando mais facilitados.

Cabe ressaltar que o protocolo apresentado CEUA/FIOCRUZ constitui um


documento que, embora sigiloso, poder ser solicitado pelo Ministrio Pblico a qualquer
momento, em funo de denncias de maus tratos aos animais, como j ocorreu. Dessa
forma, h de se entender que o preenchimento completo e detalhado do mesmo representa
um instrumento de defesa da Instituio e do prprio pesquisador, este ltimo, responsvel
integral pelo que consta no protocolo e pela sua fiel execuo.

Diante do exposto, a CEUA/FIOCRUZ tem procurado seguir regras internacionais,


de modo a garantir que os aspectos ticos que envolvem cada experimento estejam
preservados. Esse fato, na realidade, proporcionou uma demora na liberao de licenas,
diante da necessidade de diversas anlises das exigncias feitas aos proponentes, at que o
protocolo estivesse preenchido a contento.

Essa demora acabou sendo alvo de crticas ao trabalho da CEUA/FIOCRUZ. Assim


sendo, a partir de janeiro de 2007 a Comisso resolveu alterar sua maneira de trabalhar,
visando agilizar o processo e evitar que as licenas demorem a ser expedidas.

Seguem os procedimentos, trmites e comentrios das fases de apresentao de um


protocolo:

1 - preencher o formulrio de apresentao e encaminhar Secretaria da CEUA/FIOCRUZ,


uma cpia impressa e o arquivo gerado pelo software, em disquete ao entregar o material,
a Secretaria da CEUA/FIOCRUZ emitir, imediatamente, o recibo de entrega ao
proponente. Mais adiante, sero feitos comentrios sobre os pontos crticos no
preenchimento do formulrio;

2 recebido o projeto, a Coordenao ir encaminh-lo para um membro, que atuar como


relator. Em alguns casos, poder haver 2 (dois) relatores. No caso do relator ou da prpria
CEUA/FIOCRUZ quando da discusso do projeto, sentir a necessidade da avaliao de um
especialista na rea, o projeto ser encaminhado para um consultor ad hoc, que emitir um
parecer para subsidiar a relatoria e/ou a deciso pelo Colegiado. Esse consultor poder ser
da prpria FIOCRUZ ou externo;

Observao: tanto os membros da CEUA/FIOCRUZ, quanto os consultores ad hoc


assinam um Termo de Compromisso e um Termo de Conflito de Interesses, de forma que,
ao no cumprirem o teor destes mesmos, estaro sujeitos s sanes previstas em Lei.
11

3 Na reunio o relator expe suas observaes e as do consultor ad hoc, se for o caso.


Todos os membros tm acesso ao protocolo e contribuem para o parecer do relator.

4 O protocolo pode ser enquadrado em uma das categorias abaixo:


a) inadequado para anlise quando faltam dados que permitam o perfeito
entendimento do projeto. Um exemplo pode ser a falta de detalhamento do Plano de
Trabalho, que no permite a compreenso das etapas do projeto;

b) com pendncia quando faltam dados que interferem no contedo tico, mas que
no impedem o entendimento do projeto como um todo. Exemplo: no consta o calibre da
agulha, no informada qual a via de sangria, no citada a condio de anestesia etc;

c) aprovado quando o contedo cumpre com os preceitos ticos internacionais;

d) reprovado quando no cumpre com os preceitos ticos, quer seja por relevncia
cientfica que caracterize a necessidade do uso de animais, ou por no cumprimento de
pendncias.

5 No caso de existncia de pendncias, o protocolo retorna ao proponente que dever


responder PONTO-A-PONTO, alm de fazer as alteraes no corpo do protocolo. Cabe
ressaltar que no caso de discordncia, o proponente dever apontar os motivos e subsidiar a
CEUA com referncias, que sero anexadas ao processo e que serviro como justificativa
para sustentao do carter tico do projeto. O proponente dever enviar as respostas das
pendncias em at 30 dias, caso contrrio o projeto ser automaticamente arquivado, sendo
recebido novo nmero quando da sua apresentao e seguindo todos os trmites normais.

6- Caso um protocolo seja reprovado, este poder ser reapresentado, com as modificaes
sugeridas, passando por todo o trmite de um protocolo novo.
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CAPTULO 3 Ftima Conceio-Silva

NOTAS IMPORTANTES SOBRE O PREENCHIMENTO DO FORMULRIO


CEUA.

Com base nas dvidas mais freqentes ao preencher o protocolo, seguem algumas
indicaes de pontos que devem ser observados durante o preenchimento. preciso sempre
ter em mente que o protocolo um documento legal, e como tal, deve conter todas as
informaes relevantes para a compreenso dos detalhes de sua execuo.

Como no Brasil ainda no dispomos de licenciamento individual para os


pesquisadores, o protocolo CEUA-Fiocruz, alm de licenciar o projeto, habilita os membros
da equipe a executarem as atividades a eles atribudas e definidas no protocolo.

DVIDAS MAIS FREQUENTES:

1- Os animais para uso em experimentao so classificados em:


a- Animais convencionais- camundongos, ratos, coelhos, cobaias e hamsters
b- Animais no convencionais - qualquer animal que no pertena ao item (a)
como ces, gatos, aves, peixes, primatas no humanos, animais silvestres de
qualquer espcie etc.

2- Os animais no convencionais seguem regras especficas restritivas quanto ao


procedimento e quantidades permitidas para a experimentao;

3- Se o projeto solicitar o uso de animais no convencionais torna-se obrigatrio o


preenchimento do anexo utilizao de animais no convencionais existente no
final do formulrio CEUA, assim como a apresentao de qualquer licena,
documento etc., na dependncia do animal indicado;

4- Animais no convencionais silvestres requerem a licena do IBAMA, alm da


licena da CEUA para que sejam utilizados em experimentao; uma licena no
exclui a outra;

5- Para a utilizao de animais geneticamente modificados, mesmo que convencionais,


o pesquisador responsvel deve possuir a licena do tipo CQB. A CEUA no poder
licenciar projetos utilizando OGM sem a apresentao do CQB. A existncia de
uma das licenas no exclui a necessidade da outra;

6- Animais aprovados para um protocolo no podero ser usados em outro protocolo.


Tambm preciso lembrar que vedada a reutilizao de animais convencionais no
protocolo original ou em novo protocolo; casos particulares devem ser apresentados
CEUA para verificao das condies ticas da solicitao que sero verificadas
caso- a- caso; Animais no convencionais a principio tambm no podem ser
13

reutilizados. No entanto, isto poder ocorrer em condies especialssimas. As


solicitaes sero estudadas caso a caso;

7- Em todos os protocolos devem estar claros e indicados:


a- O tipo (espcie, sexo, idade etc.) e o nmero de animais solicitados no total,
especificando a necessidade de seu emprego;

b- No caso de animais convencionais esta solicitao ser dividida pelo tempo


de experimentao, cabendo ao solicitante especificar quantos, de que tipo e
o cronograma de utilizao temporal;

c- Solicitao de animais no convencionais s ser aceita com "nmero totais


de animais", no importando o tempo de experimentao, mantendo-se a
necessidade de especificao e indicao da necessidade;

8- No item membros da equipe devem ser fornecidos todos os detalhes que


permitam a verificao da capacitao pessoal para a manipulao dos animais, e
no apenas ttulos e diplomas;

9- No item base terica deve ser indicado todo o conhecimento prvio existente no
assunto a ser abordado que indiquem: o estado atual do conhecimento (teoria), a
propriedade da solicitao (justificativa) e os objetivos a serem alcanados; no item
plano de trabalho deve estar especificado de forma clara todas as etapas do
protocolo e da manipulao animal assim como o tempo de utilizao, e se for o
caso as formas de manuteno (condies de biotrio), captura, soltura e eutansia.
Devem tambm constar o nmero total de animais e a necessidade de repeties,
quando bem embasadas. Solicita-se ainda organizar um desenho esquemtico do
protocolo indicando quando e como os animais sero utilizados de forma a facilitar
a verificao da manipulao completa do animal durante a fase experimental.

10- A justificativa e o objetivo devem estar bem claros. Cabe ressaltar que a relevncia
cientfica do projeto est diretamente ligada aos aspectos ticos (uso desnecessrio
de animais), sendo, portanto avaliada durante o trmite do projeto. Por exemplo, a
repetio de experimento que seja consagrado na literatura sem justificativa
plausvel, fere a tica, uma vez que no acrescenta nenhuma contribuio ao
conhecimento cientfico;

11- O plano de trabalho deve retratar as etapas do experimento, quantos e quais


grupos recebem imunizaes tratamentos, desafios etc. (por exemplo: os animais
so divididos em 4 grupos de 10 animais sendo que o grupo 1 recebe soluo salina,
grupo 2 tratamento na concentrao de 1mg/Kg, grupo 3 tratamento na
concentrao de 2mg/Kg e grupo 4 recebe o veculo de diluio do frmaco. Os
grupos sero tratados por VO por 5 dias. No quinto dia ser coletado sangue de 5
animais de cada grupo etc.). O plano pode ser apresentado como texto, tabela,
organograma etc., desde que permita uma visualizao do protocolo como um todo
e do real nmero de animais usados;
14

12- Na descrio dos procedimentos, detalhar todos os pontos (mesmo que j tenham
sido mencionados no plano de trabalho). Informe dose, concentrao, via de
inculos, calibre de agulhas, volume de sangue a ser coletado, intervalo entre as
coletas, via, forma de imobilizao, tempo de imobilizao etc.;

13- A CEUA lembra que o importante o fluxo de manipulao (exemplo animal


anestesiado, inoculado, sangrado semanalmente, submetidos eutansia aps 2
meses de experimentao). Assim, mesmo que todos os procedimentos sejam
simples, a manipulao continuada e longa precisa ser avaliada, da a necessidade
do esquema de manipulao.

14- Os protocolos experimentais a serem realizados com o material biolgico precisam


ser indicados para a verificao da capacidade de obteno dos resultados
esperados. No entanto, no h necessidade de detalhamento (exemplo: informar a
realizao de resposta proliferativa e dosagem de citocinas por ELISA, mas sem dar
detalhes dos protocolos a serem utilizados);

15- A CEUA solicita que, sempre que possvel, as manipulaes dos animais sejam
organizadas em relao manipulao animal e no ao protocolo em si e que isto se
reflita no ndice e detalhamento dos procedimentos solicitado no formulrio
CEUA. Por exemplo, se determinado grupo de camundongos vai ser imunizado,
depois desafiado e observado por quatro semanas para verificao de resposta
imune (coleta de sangue e bao em grupos semanais), seguida de eutansia ao final,
este pode ser considerado um nico procedimento, j que o mesmo animal estar
sendo manipulado em todas estas fases. Evitar transformar este exemplo em 4
procedimentos (imunizao, desafio, coleta, eutansia). Se por questes prticas no
for possvel, indicar no local apropriado que os animais de um procedimento esto
sendo utilizados em outros procedimentos. Isto evita problemas na verificao do
nmero de animais necessrios para o protocolo;

16- No caso de haver qualquer possibilidade de efeito adverso (exemplo: hematomas,


toxicidade, dor, alteraes de comportamento) eles devem ser indicados de forma
explicita, mesmo que raros ou improvveis. Deve-se ter em mente os efeitos
causados pelo procedimento ou pelo experimento em si;

17- Todo procedimento que envolver cirurgia ou quando forem utilizados animais no
convencionais deve ter um veterinrio responsvel inscrito no CRMV do local onde
os experimentos sero realizados (Rio de Janeiro; Minas Gerais; Bahia etc.);

18- Nenhuma das partes do protocolo deve ser deixada em branco. Quando no couber
resposta mencionar no se aplica;

19- Sempre mencionar, quando aplicvel, o desfecho (end-point) a ser utilizado para
evitar o sofrimento animal. Neste caso, descrever quais parmetros sero indicativos
de desfecho (exemplo: perda de peso superior a 20%, hiporresponsividade).
15

20- A CEUA-Fiocruz estimula os pesquisadores a manter um programa de


enriquecimento ambiental, tanto na criao quanto na experimentao animal.

21- preciso lembrar que as normas para o uso de animais em experimentao so


dinmicas e, sempre que houver atualizaes, estas estaro disponveis na pgina da
CEUA at que uma nova reviso do Manual seja publicada. Portanto, quando for
necessrio, deve-se verificar as possveis atualizaes on line deste manual.
16

CAPTULO 4 Joseli de Oliveira Ferreira

PRINCIPAIS VIAS E FORMAS DE ADMINISTRAO/INOCULAO EM


ANIMAIS CONVENCIONAIS

Neste captulo esto apresentadas de forma resumida em tabelas as principais vias


de administrao / inoculao usadas na administrao de frmacos, imungenos e tambm
na infeco de animais convencionais (ratos, camundongos, cobaias, hamster e coelhos).
Tambm poder ser encontrado o volume mximo a agulha apropriada para cada
manipulao.
Cada tabela est dividida de acordo com a via, a saber: subcutnea (SC),
intramuscular (IM), intraperitoneal (IP) e endovenosa (IV). As drogas administradas por via
oral (VO) devem ser adicionadas junto rao ou na gua. J a administrao orogstrica
(gavagem) exige a introduo da droga por tubo metlico ou cnula plstica (com protetor
nas bordas para evitar ferimentos no animal) ligado seringa. O tamanho da cnula, as
condies de pH, viscosidade e volume especficos de cada droga devem ser adequadas
para cada animal. Os procedimentos de gavagem sero analisados caso- a- caso. Para tal,
todos os detalhes da administrao (tipo, volume, freqncia, forma de conteno etc.),
devem ser informados no detalhamento do procedimento solicitado no formulrio CEUA.
Casos no contemplados neste manual devem ser verificados nos guidelines
internacionais cujos endereos se encontram no final deste manual.
Lembre-se que os volumes indicados so os mximos permitidos para o animal
adulto. A utilizao de animais jovens ou recm - natos requerer a adaptao de via / dose
em cada situao.

VIAS, VOLUMES E LOCAIS DE ADMINISTRAO DE DROGAS


INJETVEIS EM RATOS.

Subcutnea Intramuscular Intraperitoneal Intravenosa


(SC) (IM) (IP) (IV)
Local Regio nucal e Quadrceps face Quadrante lateral Dorsal do pnis,
dorsal posterior da coxa inferior direito lateral da cauda e
safena
Volume 4mL/Kg 1.25mL/Kg 5-10mL/Kg 1mL/Kg
mximo
Agulha 13x4.5 ou 25x5 20x5.5 ou 25x6 25x6 ou 20x5.5 25x5

Fonte: adaptado de Fantoni e Cortopassi, 1996; Waynforth e Flecknell, 1998; Harkness e


Wagner 1993; Rasmussen e Ritskes-Hoitinga, 1999.
17

VIAS, VOLUMES E LOCAIS DE ADMINISTRAO DE DROGAS INJETVEIS


EM CAMUNDONGOS.

Subcutnea Intramuscular Intraperitoneal Intravenosa


(SC) (IM) (IP) (IV)
Local Regio nucal, Quadrceps; face Quadrante lateral lateral da calda,
Dorsal e base da posterior da coxa inferior direito femural e
calda retrorbital*

Volume 0.5mL/animal 0.2mL/animal 1mL/animal 0.2mL/animal


mximo

Agulha 13x4.5 ou 25x5 13x4.5 ou 25x5 13x4.5 ou 25x5 20x5,5 ou 13X4,5

Fonte: adaptado de Fantoni e Cortopassi, 1996; Waynforth e Flecknell, 1998; Harkness e


Wagner 1993; Rasmussen e Ritskes-Hoitinga, 1999.
* Em casos especiais utilizando drogas anestsicas

VIAS, VOLUMES E LOCAIS DE ADMINISTRAO DE DROGAS INJETVEIS


EM COBAIAS

Subcutnea Intramuscular Intraperitoneal Intravenosa


(SC) (IM) (IP) (IV)
Local Regio nucal, Quadrceps; face Quadrante lateral Safena e
Dorsal e coxim posterior da coxa inferior direito Ceflica
plantar*

Volume 4mL/Kg 1.25mL/Kg 5-10mL/Kg 0.5mL


mximo

Agulha 25x5 ou 25x7 20x5.5 ou 25x 6 20x5.5 ou 25x 6 13x4 ou 25x 5

Fonte: adaptado de Fantoni e Cortopassi, 1996; Waynforth e Flecknell, 1998; Harkness e


Wagner 1993; Rasmussen e Ritskes-Hoitinga, 1999.
*Volume mximo de 0.1mL
18

VIAS, VOLUMES E LOCAIS DE ADMINISTRAO DE DROGAS INJETVEIS


EM HAMSTERS.

Subcutnea Intramuscular Intraperitoneal


(SC) (IM) (IP)
Local Regio nucal e Quadrceps; face Quadrante lateral
dorsal posterior da coxa inferior direito

Volume 1mL/animal 0.2mL/animal 4mL/animal


mximo

Agulha 25x5 25x5 25x5 ou 25x7


Fonte: adaptado de Fantoni e Cortopassi, 1996; Waynforth e Flecknell, 1998;
Harkness e Wagner 1993; Rasmussen e Ritskes-Hoitinga, 1999.

VIAS, VOLUMES E LOCAIS DE ADMINISTRAO DE DROGAS INJETVEIS


EM COELHOS.

Subcutnea Intramuscular Intraperitoneal Intravenosa


(SC) (IM) (IP) (IV)
Local Regio nucal e Quadrceps; face Quadrante lateral Marginal da
flanco/dorso posterior da coxa inferior direito orelha*

Volume 5mL/animal 2mL/animal 50mL/animal 10mL/Kg


mximo

Agulha 25x6 ou 25x7 25x6 ou 25x7 25x6 ou 25x7 25x7, 27x8 ou


dispositivo
intravenoso
24G

Fonte: adaptado de Fantoni e Cortopassi, 1996; Waynforth e Flecknell, 1998; Harkness e


Wagner 1993; Rasmussen e Ritskes-Hoitinga, 1999.
* esta via deve ser usada para pequenos volumes. Se volumes maiores forem necessrios
pode-se usar a veia femoral. No entanto, tanto uma quanto outra requerem pessoal treinado,
pois os acidentes so fceis de acontecer.
19

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

FANTONI, D. T; CORTOPASSI, S. R. G. Tcnicas anestsicas em animais de laboratrio.


in: Manual para tcnicos em bioterismo. 2. ed. So Paulo: EPM 1996.

HARKNESS, J. E.; WAGNER, J. E. Biologia e Clnica de coelhos e roedores. 3. ed. So


Paulo: ROCA, 1993.

RASMUSSEN, C; RITSKES-HOTINGA, M. 1999. An alternative method for rat fixation


when giving subcutaneous, intramuscular and intraperitoneal infection (Camillas method).
Scandinavian Journal of Laboratory Animal Science, 26 (3):156-159.

WAYNFORTH, H. B; FLECKNELL, P. A. Experimental and surgical technique in the rat.


2. ed. London: Academic Press, 1998.
20

CAPTULO 5 Hugo Caire de Castro Faria Neto &


Belmira Ferreira dos Santos

FRMACOS USADOS EM AMINAIS DE LABORATRIO


ANESTSICOS E ANALGSICOS

CONSIDERAES GERAIS:

Nestas ltimas dcadas, a anestesia veterinria evoluiu bastante, e com o


aumento da preocupao com o bem - estar dos animais, a necessidade do controle da dor
tambm aumentou. Um dos ltimos conceitos utilizados na anestesia veterinria
denominado anestesia balanceada, que se refere utilizao de diferentes frmacos
associados, com intuito de conseguirmos as propriedades da anestesia (inconscincia,
imobilizao, analgesia, abolio dos reflexos autonmicos e relaxamento muscular) com
mnimos efeitos colaterais, principalmente nos sistemas respiratrio e cardiovascular (Ex:
associar tiopental + opiide + relaxante muscular).
Com relao analgesia, o que temos de mais moderno a aplicao da tcnica de
analgesia multimodal, que a utilizao de diferentes frmacos analgsicos (Ex: AINEs +
opiides) e diferentes tcnicas (bloqueios regionais + anestesia geral) com a finalidade de
melhorarmos a analgesia do animal com mnimos efeitos colaterais e melhor conforto no
ps-operatrio.
Para utilizarmos as tcnicas de anestesia balanceada e analgesia multimodal
essencial conhecermos a farmacologia das drogas necessrias.
Em seguida esto expostas algumas propriedades dos principais frmacos utilizados
em ambas as tcnicas.

Diazepam e midazolam (benzodiazepnicos) so sedativos e associados a


anestsicos gerais (Ex: tiopental, propofol, etomidato e quetamina) aumentam o
tempo de anestesia. Vantagem: Possuem mnimos efeitos cardiovasculares e
respiratrios nas doses indicadas
21

Tiopental, propofol e etomidato (anestsicos gerais injetveis) so utilizados para


induzir e manter a anestesia geral. No possuem ao analgsica logo devem ser
utilizados associados com um analgsico (Ex: opiide, 2 agonista, etc). O propofol
indicado em animais com problema de metabolizao (Ex: hepatopatia) e o
etomidato indicado em animais com cardiopatias.
Halotano e isoflurano (anestsicos gerais inalatrios) so utilizados para induzir e
manter a anestesia geral. Estes frmacos podem ser administrados via mscara facial
ou via traqueotubo apropriados para a espcie. A grande vantagem destes
anestsicos gerais que permitem a adequao do plano cirrgico com rapidez,
porm a grande desvantagem nestas espcies que necessita de um profissional
atento para que no ocorra o aprofundamento drstico da anestesia. Em animais
idosos mais indicada a utilizao do isoflurano.
Quetamina e tiletamina (anestsicos dissociativos) so anestsicos gerais, porm
possuem ao analgsica somtica (pele e msculo). Possuem como grande
vantagem versatilidade de utilizarmos em diferentes vias de administrao.
Aspirina, piroxicam, flunixin, ibuprofeno, fenilbutazona (AINEs) e cetoprofeno so
antiinflamatrios no esterides que possuem como principal efeito a ao
analgsica. Importante no controle da dor ps-operatria e para evitar o fenmeno
conhecido como hipersensibilizao perifrica, que devido leso tecidual e
liberao de vrias substncias inclusive as prostaglandinas. Este fenmeno
promove a maior dificuldade no controle da dor.
Morfina, meperidina, metadona (opiides) e cloridrato de tramadol so potentes
analgsicos, sendo indicados em procedimentos mais dolorosos (Ex: Leso em uma
grande rea do corpo do animal, cirurgias ortopdicas, mastectomia radical etc.).
So bastante teis em evitar alteraes no sistema nervoso central (corno dorsal da
medula) que promovem a hiperalgesia, alodinia e hiperpatia.
Xilazina e medetomidina (2 agonistas) so potentes analgsicos que devem ser
usados em cirurgias mais dolorosas. Associados aos opiides conferem uma tima
analgesia para o animal.
22

Obs.: O tempo de ao destes frmacos vai depender grande parte da dose utilizada, logo
para elaborar um protocolo adequado para determinado experimento, essencial sabermos
o tempo de durao e o grau de dor do procedimento realizado em determinada espcie. As
doses fornecidas nas tabelas servem como referncia, mas no devem ser
simplesmente aumentadas visando um tempo maior de anestesia. Nestes casos
imprescindvel a presena de um veterinrio. Com estas informaes possvel montar
um protocolo anestsico e analgsico para determinado experimento, porm sendo de suma
importncia a execuo do estudo piloto para adequarmos estas doses, se necessrio. Para
avaliarmos o protocolo analgsico necessrio conhecermos a espcie que estamos
trabalhando e como podemos avaliar a dor nesta espcie, pois nestes ltimos anos houve
grande evoluo nos mtodos de avaliao de dor nos animais.

ANESTSICOS E TRANQUILIZANTES UTILIZADOS EM CAMUNDONGOS

Frmaco Dose Via de Durao de


administrao anestesia
Tiopental 25-50 mg.kg-1 IV 10 min
50 mg.kg-1 IP
Quetamina 80-100 mg.kg-1 IM
100 mg.kg-1 IP
50 mg.kg-1 IV
Quetamina + 200 mg.kg-1 IM
Diazepam 5 mg.kg-1 IP
Quetamina + 100-200 mg.kg-1 IM 60 100 min
Xilazina 5-16 mg.kg-1 IP
Tiletamina + 80-100 mg.kg-1 IP
Zolazepam (Zoletil) (conteno)

Etomidato 23.7-33.0 mg.kg-1 IP 20 min


11.2 mg.kg-1 IV 20 min
Propofol 12-26 mg.kg-1 IV 5.6-6.9 min
Halotano Sob consulta Sob consulta Sob consulta
Isoflurano Sob consulta Sob consulta Sob consulta
23

ANALGSICOS UTILIZADOS EM CAMUNDONGOS

Analgsico Dose, via e durao


Aspirina (AINEs) 20 mg.kg-1, SC,
Ibuprofeno (AINEs) 7.5 mg.kg-1, Oral,
Piroxicam (AINEs) 3.4-20 mg.kg-1, Oral
Fenilbutazona (AINEs) 31-250 mg.kg-1, IP
Buprenorfina (opiide) 2.5 mg.kg-1, IP, SC, 6-12 horas
Butorfanol (opiide) 0.05-5.4 mg.kg-1, SC, 2-4 horas
Meperidina (opiide) 3-12 mg.kg-1, IP, SC, 2-3 horas

ANESTSICOS E TRANQILIZANTES UTILIZADOS EM RATOS

Frmaco Dose Via de Durao de


administrao anestesia
Diazepam 5.0-15 mg.kg-1 SC Sedao
(sedao)
Tiopental 20-40 mg.kg-1 IV 5-10 min
40 mg.kg-1 IP
Quetamina 50-100 mg.kg-1 IM

Quetamina + 45-60 mg.kg-1 IP


Diazepam 5-10 mg.kg-1 ou IP
2,5 mg.kg-1 IM
Quetamina + 60-75 mg.kg-1 IP
Medetomidina 0.25-0.5 mg.kg-1 SC

Quetamina + 40-87 mg.kg-1 IP, IM


Xilazina 5-13 mg.kg-1 IP, IM

Tiletamina + 20 mg.kg-1 IM
Zolazepam (Zoletil)
Propofol 7.5-10.0 mg.kg-1 IV bolus 8-11 min
44-45 mg.kg.hora-1 IV Infuso contnua
Halotano Sob consulta Sob consulta Sob consulta
Isoflurano Sob consulta Sob consulta Sob consulta
24

ANALGSICOS UTILIZADOS EM RATOS

Analgsico Dose, via e durao


Aspirina (AINEs) 20 mg.kg-1, SC,
Buprenorfina (opiide) 0.25-1.6 mg.kg-1, IP, 6-12 horas
Butorfanol (opiide) 0.04-23.3 mg.kg-1, SC, 2-4 horas
Meperidina (opiide) 3-12 mg.kg-1, IP, SC, 2-3 horas
Xilazina (2 agonista) 5-12 mg.kg-1, SC, 2 horas

ANESTSICOS E TRANQUILIZANTES UTILIZADOS EM COBAIAS

Frmaco Dose Via de Durao de anestesia


administrao
Diazepam 2.5-5.0 mg.kg-1 IP Sedao

Xilazina 5-40 mg.kg-1 IP Sedao mdia

Quetamina 40-200 mg.kg-1 IM varivel

Quetamina + 60-100 mg.kg-1 IM varivel


Diazepam 5-8 mg.kg-1 IM
Quetamina + 40 mg.kg-1 IM ou IP varivel
Medetomidina 0.5 mg.kg-1 SC

Quetamina + 30-44 mg.kg-1 IM 77 min


Xilazina 0.1-5.0 mg.kg-1 IM

Tiletamina + 10-80 mg.kg-1 IM ou IP varivel


Zolazepam (Zoletil)
Halotano Sob consulta Sob consulta Sob consulta
Isoflurano Sob consulta Sob consulta Sob consulta
25

ANALGSICOS UTILIZADOS EM COBAIAS

Analgsico Dose, via e durao


Aspirina (AINEs) 20 mg.kg-1, SC,
Buprenorfina (opiide) 0.5-0,8 mg.kg-1, SC, 6-12 horas
Morfina (opiide) 5-12 mg.kg-1, SC, IM, 2-4 horas
Meperidina (opiide) 20 mg.kg-1, IM, SC, 2-3 horas
Metadona (opiide) 3.6 mg.kg-1, SC

ANESTSICOS E TRANQILIZANTES UTILIZADOS EM COELHOS

Frmaco Dose Via de administrao Durao de


anestesia
Diazepam 5.0-10.0 mg.kg-1 IM Sedao
1-2 mg.kg-1 IM, IV
Midazolam 2 mg.kg-1 IP, IV Sedao

Xilazina 3-9 mg.kg-1 IM, IV Sedao

Medetomidina 0.25 mg.kg-1 IM Sedao

Tiopental 15-30 mg.kg-1 IV varivel

Quetamina 20-60 mg.kg-1 IM varivel

Quetamina + 60-80 mg.kg-1 IM varivel


Diazepam 5-10 mg.kg-1 IM (administrado 30 min
antes da quetamina)
Quetamina + 25 mg.kg-1 IM varivel
Medetomidina 0.5 mg.kg-1 SC
Quetamina + 10 mg.kg-1 IV 77 min
Xilazina 3 mg.kg-1 IV
Quetamina + 22-50 mg.kg-1 IM varivel
Xilazina 2.5-10 mg.kg-1 IM
Tiletamina + 32-64 mg.kg-1 IM varivel
Zolazepam (Zoletil)
Propofol 7.5-15 mg.kg-1 IV varivel
Halotano Sob consulta Sob consulta Sob consulta
Isoflurano Sob consulta Sob consulta Sob consulta
26

ANALGSICOS UTILIZADOS EM COELHOS

Analgsico Dose, via e durao


Morfina (opiide) 2.5 mg.kg-1, SC, 2-4 horas
Meperidina (opiide) 5-10 mg.kg-1, SC, 2-3 horas
Butorfanol (opiide) 0.1-0.5 mg.kg-1 IV, 4 horas
Buprenorfina (opiide) 0.01-0.05 mg.kg-1, SC, 6-12 horas
Flunixin meglumine (AINEs) 1.1 mg.kg-1, IM, 12 horas
Piroxicam (AINEs) 0.2 mg.kg-1, Oral, 8 horas

ANESTESIA COMPOSTA PARA:


1- COELHOS

Acepromazina 1% - 0,1mL / Kg / IM
Xilazina 0,2mL / Kg / IM
Cloridrato de Ketamina 50% - 0,5mL / Kg / IM

Peso Animal (Kg) Acepran 1% (mL) Xilazina (mL) Ketamina (mL)


1 0,1 0,2 0,5
2 0,2 0,4 1,0
2,5 0,25 0,5 1,25
3,0 0,3 0,6 1,5
3,5 0,35 0,7 1,75
4,0 0,4 0,8 2,0
4,5 0,45 0,9 2,25
4,5 0,5 1,0 2,5

2- COBAIA Usar dobro da dose de coelho.

3- RATO E CAMUNDONGO

Tiopental 1g diluir 5% (20mL em 1g) 0,6mL / 100g para sangria (Para manter o animal
vivo usar 0,18mL / 100g)
CMDG 30g 0,2 mL intraperitoneal
Rato 400g 2,4 mL intraperitoneal
Ketamina 50% - Xilazina 2% (mistura em partes iguais) 0,1 a 0,2 mL / 100g, caso precise
prolongar, administrar metade da dose.

CMDG 30g 0,03 mL intramuscular (dose mnima)


Rato 400g 0,4 mL intramuscular (dose mnima)
27

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

FLECKNELL, P. A. The relief of pain in laboratory animals. Laboratory Animal, 18: 147,
1984.

FLECKNELL, P. A.; LILES,J. H. Assessment of analgesic action of opioid agonist-


antagonists in the rabbit. J. Assoc Veterinary Anaesthesia, 17: 24, 1990.

THURMON, J. C.; TRANQUILLI, W. J.; BENSON, J. G. Veterinary


Anesthesia: Anesthesia of wild, exotic, and laboratory animals, Baltimore,
Williams & Wilkins, 1996.686-735 p.
28

CAPTULO 6 Elizabeth Malagueo de Santana

RECOMENDAES PARA A PREPARAO DE ANTICORPOS


POLICLONAIS
As etapas crticas na produo de anticorpos so:
1-preparo de antgeno
2-seleo da espcie animal (idade inclusive)
3-seleo e preparo de adjuvante
4-protocolo de imunizao
5- seguimento ps-injeo
6- coleta dos anticorpos

ANTGENOS

-Deve ser o mais purificado possvel contendo apenas os eptopos desejados, para produzir
anticorpos de maior especificidade.
-Deve ser livre de toxicidade para o animal (lipopolissacrides e resduos qumicos)
-Possuir pH fisiolgico, estar estril.
-Estar nas concentraes adequadas para no induzir tolerncia ou outro tipo de modulao
no desejada. Segundo alguns autores, a dose usual para uma protena solvel administrada
com adjuvante de Freund completo, depende da espcie animal:assim no caso de coelhos:
50-1000 g; camundongos: 10- 200 g; cabras e ovelhas 250 a 5000 g

ESPCIE ANIMAL

Convm considerar o volume de anticorpo que se pretende produzir; a distncia


filogentica entre o animal imunizado e o antgeno, assim como a idade do animal (devem
ser adultos jovens) Vide tabela 1.

Tabela 1 - Idades mais adequadas dos animais para imunizao

Espcie animal idade


Camundongo 6 semanas
Ratos 6 semanas
Coelhos 3 meses
Cobaias 3 meses
Galinhas 18-20 semanas
Cabras 6-7 meses
Ovelhas 7-9 meses
29

ADJUVANTES

No inicio da imunizao, escolher o adjuvante adequado pode ser difcil. O


adjuvante completo de Freund (ACF), composto de uma emulso de gua em leo
adicionada de Mycobacterium sp, deve ser evitado. O imungeno deve ser preparado como
emulso que consiste de volumes iguais de adjuvante e antgeno (uma parte de ACF ou
menos, e uma parte de Antgeno). Caso seja necessrio, deve ser utilizado apenas na
primeira imunizao e o adjuvante incompleto de Freund (AIF)nas imunizaes
subseqentes. Pode ser utilizado somente quando pequenas quantidades de imungeno
solvel esto disponveis. Se houver disponibilidade de grande quantidade de imungeno
particulado ou altamente imunognico, outros adjuvantes como TiterMax, Ribi, Lipovant,
adjuvax, alhydrogel devem ser considerados.
Um aspecto importante nos procedimentos de imunizao a utilizao de uma
equipe tcnica competente, treinada e experiente na conteno das espcies animais sendo
usadas assim como na realizao das imunizaes. Devem conhecer e reconhecer sinais de
sofrimento nos animais injetados e estar capacitados para agir quando necessrio.
O Adjuvante de Freund completo pode ser utilizado para inoculaes por via
intramuscular, subcutnea ou intradrmica. Jamais deve ser inoculado endovenosamente
ou em doses repetidas. No pode ser utilizado em cavalos.
Este adjuvante produz reaes inflamatrias agudas e crnicas, abscessos estreis e
/ou necrose ulcerativa no ponto de inoculao. Para limitar a severidade da inflamao
aconselhvel:
a) limitar a concentrao de Mycobacterium para 0,05 a 0,1 mg`/ mL.
b) adicionar antgeno concentrado ao adjuvante e deste modo reduzir o volume
da emulso a ser inoculado.
c) Utilizar vrios pontos de inoculao afastados entre eles, com limite de
volume por ponto e o nmero de pontos no deve exceder a 10.
d) manter a esterilidade da soluo antignica.
O adjuvante de Freund incompleto, por no conter micobactrias, produz reao
inflamatria, porm de intensidade menor e de durao mais curta. Considera-se menos
potente, embora seja adequado para reinoculaes, estimulando a resposta humoral.
Vrios adjuvantes tm sido desenvolvidos visando provocar menos leses no animal
inoculado. Entre estes, os que so uma suspenso de leo em gua e utilizam leos
metabolizveis na sua composio alm de algum surfactante no inico que ativa o
sistema complemento, se ligando a seus componentes facilitando assim o contato do
antgeno com as clulas dendrticas foliculares (TiterMax) Outros, so misturas de leo
metabolizvel, detergente e imunoestimuladores Como imunoestimuladores, utilizam-se
produtos bacterianos modificados que minimizam a reao inflamatria (Adjuvante de
Ribi).
Os sais hidrxido e fosfato de alumnio so misturados ao antgeno formando uma mistura
aquosa. Os gis de hidrxido de alumnio alm de serem livres de pirgenos e estveis,
possuem alta capacidade de ligao com protenas a pH neutro. Alguns autores os
consideram como o adjuvante para antgenos fracos, mais eficientes que o ACF; porm
requer de reinoculaes mais freqentes. Nas vacinas humanas o adjuvante de escolha.
30

Tabela 1- IMUNIZAO: VIAS MAIS UTILIZADAS PARA INJEO PRIMRIA


E REINOCULAES (BOOST) Leenars 1999,Leenars et al,2005

Vias Observaes desvantagens

Subcutnea.
Recomendado para usar com
adjuvantes oleosos para aproveitar
o efeito depsito. Processos
inflamatrios podem ser Absorve lentamente
visualizados.Usar com e sem
adjuvante.Usar em primo
inoculao e "boosters"
Distribua em mximo 4 pontos

Intramuscular Absoro rpida, especialmente na Volumes grandes em espaos


atividade muscular. Pode ser restritos provocam dor.
administrado em volumes grandes Antgeno e adjuvante podem
segundo o animal. No pode usar infiltrar nos planos
com adjuvantes viscosos (ACF) interfasciais e danificar o
em roedores. Pode usar na primo e nervo citico
reinoculaes

Intraperitoneal Via eficiente para exposio de A inoculao de adjuvantes


antgenos. oleosos provoca peritonite.
No usar adjuvantes oleosos. No Risco de choque anafiltico no
recomendada em coelhos e animais "boost"
maiores

Endovenosa H rpida distribuio do Antgeno Risco de choque anafiltico no


e pode ser metabolizado "boost".
rapidamente Antgenos insolveis,
O antgeno enviado adjuvantes viscosos ou
primeiramente para o bao e oleosos no podem ser usados
depois para os linfonodos sob risco de embolia.

Intradrmica H processamento eficiente do Injeo em espao limitado da


antgeno devido abundncia de pele provoca dor. Adjuvantes
clulas de Langerhans oleosos provocam processos
Pequenas quantidades de antgeno ulcerativos.
so suficientes.
Recomendada s para animais
maiores (coelhos, cabras, cavalos).
31

REINOCULAES.
Estmulos antignicos repetidos permitem a estimulao dos linfcitos de memria
que produzem anticorpos de maior afinidade. Porm algumas precaues devem ser
observadas:

1. As reinoculaes devem ser feitas quando o teor de anticorpos circulantes tenha


atingido o declnio (2-3 semanas para antgenos solveis). Estmulos antignicos em
prazos curtos podem induzir tolerncia.

2. Quando utilizar adjuvantes que formam depsito, administrar os boost pelo


menos 4 semanas aps o primeiro inculo. Use o mximo de 2 ou 3 reinoculaes.

3. No utilizar adjuvante completo de Freund, pois podem provocar leses teciduais


severas.

4. Injeo endovenosa em animal j imune pode provocar morte do animal por choque
(imunocomplexos circulantes).

ANTICORPOS MONOCLONAIS EM CAMUNDONGOS


Na produo de anticorpos monoclonais, devem ser observadas as seguintes
recomendaes:
Imunizao in vivo: seguir os procedimentos indicados para anticorpos policlonais.
Dependendo do antgeno, possvel fazer uso de imunizaes repetidas com intervalos
curtos, eliminando a necessidade de adjuvantes, porm deve ser considerado que pode
induzir a produo de anticorpos de baixa afinidade.
Produo de ascites:
"Priming": Utilizar mximo de 0,3 mL de adjuvante de Freund incompleto em uma s
injeo. Pristane no recomendado
Implantao de hibridomas: Injetar at 3x106 em 1 mL na cavidade intraperitoneal. A
partir daqui o animal deve ser monitorado para evidenciar sofrimento: dificuldade
respiratria, diminuio de atividade, pelo eriado, tamanho do abdmen. O acmulo de
lquido asctico alm de produzir aumento no peso total, no deve produzir dor ou
desconforto aos animais. De nenhum modo podem exceder mais que 20% do peso de
um animal normal.

Coleta de lquido asctico: Para realizar a paracentese, o animal deve estar
anestesiado. Podem ser realizadas no mximo duas coletas em condies asspticas
com agulha 25x8 ou 25x7. O volume que pode ser retirado na primeira paracentese
de 4-5 mL e deve ser realizado em condies asspticas.
32

Tabela 2
VOLUME MXIMO (mL) A SER INOCULADO EM ANIMAIS SEGUNDO O TIPO
DE ADJUVANTE UTILIZADO (adaptado de Leenaars, 2005).

Mistura antgeno+adjuvante oleoso Mistura antgeno+adjuvante aquoso


ou viscoso
animal s.c i.d s.c i.d i.m i.p i.v

Camundongo
Volume (mL) 0.1 XX 0.5 XX XX 1.0 0.2
Agulha 25x5 13x4,5 13x4,5 13x4,5
Ratos -
Volume (mL) - 0,2 XX 0.5-1.0 XX XX 5.0 0.5
Agulha - 25x5 13x4,5 25x5 13x4,5
Cobaias
Volume (mL) 0.2 XX 1.0 XX XX 5.0-10 0.5-1.0
Agulha 25x5 13x4,5 25x5 13x4,5
Coelhos
Volume (mL) 0,1- 0.025- 1.5 0.05 0.2- 10-20 1.5
Agulha 0,25 0.05 13x4,5 13x4,5 0.5 25x7 13x4,5
13x4,5 25x5 25x7
Ovelhas,
cabras 0.5 0.05 - 2.0 0.05 0.2.0 XX 30
Volume (mL) 13x4,5 0,25 13x4,5 13x4,5 25x8 40x12
Agulha 25x5
Bezerros
Volume (mL) 0.5 0.05 2.0 0.05 2.0 XX No
Agulha 13x4,5 25x5 13x4,5 13x4,5 25x8 testado
Aves
Volume (mL) 0.25 0.05 0.5 0.05 1.0 XX 0.5
Agulha 13x4,5 13x4,5 13x4,5 13x4,5 25x8 25x7
XX no
recomendado

Bibliografia principal
Canadian Council on Animal Care- Guidelines on: Antibody production
http://www.ccac.ca.(consultado em Maio de 2006)
Leenaars M. ;Henrdriksen CFM 2005- Critical steps in the production of polyclonal
and Monoclonal Antibodies: Evaluation and recommendations .ILAR Journal
46(3):269-279.
33

CAPTULO 7 Octavio Augusto Frana Presgrave &


Belmira Ferreira dos Santos

SANGRIA

INTRODUO

Diversos estudos necessitam que seja realizada a coleta de sangue para verificar
alteraes hematolgicas ou outros parmetros necessrios ao entendimento, avaliao e
concluso da pesquisa.

Todo pesquisador deve ter a conscincia de que essa coleta representa, em


diferentes graus, um estresse para o animal, seja pelo procedimento em si ou pelo uso de
anestsicos. Tambm altamente recomendvel que o operador seja treinado e tenha
conhecimento da anatomia do animal, de forma a localizar o vaso correto definido pelo
protocolo e de forma rpida e precisa.

importante que os mtodos sejam refinados de forma que necessitemos coletar


apenas pequenos volumes de sangue. Entretanto, existem situaes crticas onde o pequeno
tamanho dos animais influencie no volume ou freqncia da coleta. Neste caso, no se deve
colocar em risco o bem estar dos animais, nem usar um nmero maior dos mesmos.

A necessidade de coleta freqente de sangue deve levar em considerao a


possibilidade de uso de cnulas, que substituiria as punes repetidas. No caso de se
aquecer o animal, deve-se tomar cuidado para evitar hipertermia, que se manifesta com
sinais, tais como, aumento da freqncia respiratria e salivao. No se recomenda o uso
de dilatadores (p.ex. xilol), tendo em vista que causam irritao cutnea. Ressalta-se a
necessidade da assepsia do local onde ser procedida a coleta.

SANGRIA VENOSA

Volumes at 0,1 mL

Deve-se puncionar uma veia superficial. Em geral, no necessita anestesia, uma vez
que esta submeteria o animal a um estresse maior do que o causado pelo uso de uma
agulha, por exemplo.

Em geral, pequenos animais podem ser sangrados pela veia caudal (coccgea).
Camundongos, ao contrrio dos ratos, podem ter a extremidade da cauda amputada para
coleta de sangue, uma vez que no oferece risco de eliminao de vrtebra. Recomenda-se
34

o corte na cauda, no mximo, duas vezes. Como alternativa, pode-se retirar o tampo
cicatricial para nova coleta.

Pequenos animais sem cauda (cobaias e hamsters) podem ter o sangue coletado pela
veia jugular ou da orelha, sendo que esta ltima necessita de grande habilidade. Em animais
grandes podem-se usar veias superficiais.

Os locais recomendados para sangria se encontram na tabela 1.

Volumes acima de 0,1 mL

Normalmente se consegue coletar essas quantidades de sangue de animais maiores


sem o uso de anestesia, entretanto, em animais menores, uma anestesia de curta durao
pode ser necessria, sempre levando em considerao que seu uso poder afetar parmetros
hematolgicos ou bioqumicos.

Deve-se ter especial ateno ao calibre da agulha, pois, um calibre pequeno pode
provocar coagulao e um calibre maior pode danificar o vaso. Em alguns casos, a
dilatao do vaso por obstruo suave ou aquecimento poder facilitar a coleta.

Os locais recomendados para sangria se encontram na Tabela 1.

CONSIDERAES GERAIS

1) A coleta de sangue pelo plexo orbital no recomendada quando h a recuperao


do animal. Coletas repetidas por esta via somente justificvel quando no for
possvel o uso de outro mtodo. Este tipo de coleta dever ser realizado, sempre,
com o uso de anestsico local (colrio anestsico). Ao final deve-se aplicar pomada
oftlmica.

2) O volume mximo de coleta de sangue em uma s ocasio de 10% do volume


total. Acima desse percentual, surgiro complicaes que podero levar o animal a
alteraes significativas, choque e at morte. A coleta de 10% do volume de sangue
somente poder ser repetida depois de 3 a 4 semanas. Se houver necessidade de
coletas repetidas, em intervalos mais curtos, no mximo 1% do volume de sangue
poder ser retirado a cada 24 horas. O volume mdio de sangue circulante para cada
animal se encontra na Tabela 2.

3) A puno cardaca dever sempre ser realizada sob anestesia. Quando se aplica este
procedimento com fim terminal, dever se assegurar o bito ps-exsanginao pela
administrao de uma sobredose de anestsico. A puno cardaca repetida no
recomendada, mas, se necessria, dever ser cuidadosamente justificada em funo
de seus efeitos adversos. Neste caso, dever se dar preferncia canulao de longa
durao.
TABELA 1 PRINCIPAIS VIAS DE COLETA DE SANGUE EM ANIMAIS CONVENCIONAIS E NO CONVENCIONAIS
EM EXPERIMENTAO.
Veia Veia / Veia
Veia Veia Marginal Veia Puno Veia Seio Artria Corte na da
Cava Ceflica da Orelha Femoral Cardaca Jugular Orbital Caudal Cauda Asa
Rato X X X X X
Camundongos X X X X
Cobaia X X X X
Coelho X X
Hamster X X X X
PNH X X
Co X X X
Gato X X X
Aves X X X
Gamb X X
Bovinos X X
Pq. Ruminantes X X
Furo X X X X
Gerbil X X X
Porco X X
Peixes X X
R X
Serpentes X
Tartaruga X X
Adaptado de Manual sobre al cuidado y uso de los animales de experimentacin, do Conselho Canadense de Proteo aos
Animais.
TABELA 2 VOLUME DE SANGUE CIRCULANTE EM ANIMAIS
CONVENCIONAIS E NO CONVENCIONAIS ADULTOS, SADIOS E
ALIMENTAO ADEQUADA.

mL/kg
Gato 47-66
Gado 60
Frango 60
Co 79-90
Furo 75
Gerbil 67
Cabra 70
Cobaia 67-92
Hamster 78
Cavalo 75
Camundongo 78-80
Porcos 65
PNH* 54
Coelho 44-70
Rato 50-70
Ovelha 60
*PNH - primatas no humanos

REFERNCIAS

Morton DB, Abbot D, Barclay R, Close BS, Ewbank R, Gask D, Heath M, Mattic S, Poole
T, Seamer J, Southee J, Thompson A, Trussel B, West C, Jennings M. (1993) Removal of
blood from laboratory mammals and birds. Laboratory Animals 27:1-22.

Canadian Council On Animal Care (1998). Manual sobre el cuidado y uso de los animales
de experimentacin. v.1 Extrado de:
http://www.ccac.ca/en/CCAC_Programs/Guidelines_Policies/GUIDES/SPANISH/toc_v1.h
tm
37

CAPTULO 8 Ftima Conceio-Silva &


Celina Bessa

EUTANSIA

PRINCPIOS GERAIS

Eutansia (eu=bom; thanatos= morte) palavra de origem grega que significa


morte serena, sem sofrimento. considerada a forma correta de interromper
procedimentos experimentais quando detectado qualquer tipo de reao adversa, ou ao
final de uma experimentao, mesmo que bem sucedida. Pelas normas ticas, a no ser em
casos especficos e excepcionais, animais no devem ser reutilizados.
Evitar o sofrimento, minimizar o desconforto e dor durante qualquer procedimento
envolvendo o uso de animais em experimentao um compromisso do pesquisador. A
determinao do momento da eutansia deve levar em considerao o protocolo
experimental e o bemestar do animal. A escolha dos protocolos deve contemplar o maior
benefcio, o melhor resultado, com a utilizao do menor nmero de animais possvel.
A eutansia deve ser realizada por mtodo que produza inconscincia com analgesia
rpida e morte subseqente, sem nenhuma evidncia de dor ou agonia do animal. Neste
contexto, a escolha do mtodo deve tambm evitar a excitao do animal, ser irreversvel,
produzir o mnimo de conteno, alm de ser apropriado para a idade, espcie e estado de
sade do animal. Tambm no pode ser esquecida a necessidade de segurana fsica e
emocional para o pesquisador. A realizao da eutansia requer pessoal treinado e
experiente, bem estruturado emocionalmente, consciente da importncia do procedimento.
No permitida a realizao do procedimento por menores de idade. O mtodo deve
reproduzir o menor impacto na natureza e ser realizado em local apropriado, longe da rea
onde outros animais so mantidos. Por fim o mtodo escolhido, dentro destes parmetros,
no deve resultar em modificaes biolgicas, histolgicas ou outras incompatveis com o
protocolo experimental.
Mesmo levando-se em considerao as particularidades de algumas espcies como a
paralisao de coelhos e galinceos frente a situaes de estresse, alguns sinais podem ser
considerados gerais para a maioria dos animais usados em experimentao. Dentre eles
podemos citar como indcio de sofrimento: vocalizao, tentativa de fuga, agresso
defensiva, salivao, emisso de fezes e urina, midrase, taquicardia, sudorese, tremores,
espasmos musculares. Por ltimo, importante reafirmar a necessidade de local especfico
para a realizao do procedimento, j que a vocalizao e a liberao do contedo de
glndulas de odor ou a secreo de ferormnio pode ser sentida por outros animais levando
a situao de angstia desnecessria. A morte do animal deve ser confirmada por apnia
seguida de parada cardaca. preciso lembrar que a apnia por si s no significa morte,
pois muitos medicamentos produzem apnia com manuteno de contrao cardaca.
38

ALGUNS EXEMPLOS E ESCLARECIMENTOS SOBRE MTODOS DE EUTANSIA


(para detalhamento ver tabela ao final deste captulo)

Dependendo da espcie animal e do protocolo de experimentao vrios modos de


eutansia podem ser indicados (detalhamento apresentado abaixo). No entanto, de um
modo geral podemos classificar a eutansia em qumica e fsica. Como mtodo fsico
podemos citar: a utilizao de trauma fsico cerebral, eletrocusso e decapitao. So
usados em situaes particulares, principalmente em casos em que a administrao de
drogas pode alterar a obteno de resultados. Estes mtodos devem ser evitados. A
eutansia por meios fsicos deve ser feita por pessoal bem treinado, pois, se no houver
preciso pode acarretar sobrevida temporria com sofrimento animal. Para sua aprovao o
responsvel deve demonstrar de maneira inequvoca que outro mtodo no pode ser
aplicado. Desta forma, sua utilizao restrita a casos muito especficos e devem ser
analisados de forma individual podendo no ser aceita nas condies propostas.
O deslocamento cervical usado para aves, pssaros, alguns rpteis e anfbios, alm
de camundongos. rpido e eficaz e pode ser obtido por trao ou presso sobre a regio
da nuca. Ocorre parada respiratria imediata seguida de hipxia e parada cardaca. Algumas
vezes nestes casos, podem ser observados efeitos de contrao muscular que esto
associados despolarizao das clulas nervosas e no presena de dor ou estresse.
A decapitao s aceita em peixes de pequeno porte, alm de roedores recm
natos, pois nestes casos os animais so resistentes s drogas tanto injetveis quanto
inalantes. Neste grupo, as terminaes nervosas ainda no so completas e a sensao
dolorosa diminuda ou ausente. A utilizao em outros animais / faixas etrias no
permitida.
A eletrocusso produz depresso cerebral direta e parada crdio respiratria
imediata, se usada na dosagem correta que pode variar com a espcie do animal, idade,
peso etc. No entanto, comumente vem acompanhada de contraes musculares
involuntrias. Devido dificuldade de execuo e ao efeito adverso observado este mtodo
no indicado em nosso meio.
A eutansia por exsanguinao no permitida sem uma prvia sedao. Em
adio, mesmo nestes casos s permitida quando comprovada a necessidade de coleta de
amostras de sangue em quantidades que no possam ser obtidas por outros meios. Deve ser
realizada por pessoal capacitado, pois requer preciso e rapidez de execuo. A aprovao
s poder ocorrer se a justificativa for consistente e de acordo com as normas internacionais
vigentes.
A prtica de traumatismo crnio enceflico apesar de constar dos guias
internacionais fortemente desaconselhada, pois sua aplicao exige preciso e a
possibilidade de falha na aplicao do mtodo no compensa a rapidez.
De um modo geral, a eutansia qumica deve ser o mtodo de escolha. Estes
mtodos tm como base a aplicao de superdosagem de frmacos que gerem inconscincia
(ausncia de reflexo pupilar, caudal e outros) e analgesia rpida seguidas de parada crdio
respiratria. As substncias mais comumente empregadas so os barbitricos e os
anestsicos. A via de administrao mais eficaz a endovenosa, podendo ser substituda em
algumas espcies pela via intraperitoneal nos caso de dificuldade de obteno de acesso
venoso.
Na avaliao da escolha do mtodo mais apropriado em cada protocolo preciso
levar em considerao: a espcie de animal, a rapidez, eficcia, a compatibilidade com a
39

obteno de resultados e a segurana para o operador. Desta forma, apesar de ser possvel a
utilizao de um nmero variado de mtodos de eutansia, as condies gerais devem
sempre ser observadas. A seguir resumiremos alguns detalhes sobre os agentes qumicos
mais comumente empregados e cujas especificaes podem tambm ser encontradas no
captulo sobre analgesia / anestesia.
Para a eutansia de animais de pequeno porte considerados no convencionais (ver
classificao dos animais usados em experimentao constante neste manual) como ces,
gatos, alguns animais de sangue frio e primatas no humanos, o uso de sedao (xilazina /
quetamina / diazepnicos / acepromazina) seguida por superdosagem de derivados do cido
barbitrico como o pentobarbital e o tiopental so os mais indicados devido facilidade de
aplicao, aliada a ao rpida e grande eficcia. Quetamina isolada no deve ser usada
pela dificuldade de verificao do efeito de sobredose. A ao dos barbitricos se inicia por
uma depresso profunda e rpida dos centros respiratrios levando apnia seguida de
parada crdio respiratria. De forma geral a dose para a eutansia deve ser calculada com
base no peso do animal e situa-se entre trs a quatro vezes a normalmente empregada para
anestesia / sedao (para detalhes consulte captulo referente). A via de escolha a
endovenosa e, na impossibilidade desta pode-se usar a via intraperitoneal. A exceo so
animais aquticos que, dependendo do tamanho podem receber a droga diluda na gua em
que esto sendo mantidos.
Animais de porte maior como eqinos e candeos maiores tambm so sedados e a
seguir submetidos a uma superdosagem de barbitricos (tiopental sdico). Em alguns casos,
depois de obtida a anestesia pode-se acelerar o procedimento com a injeo de soluo
saturada de sulfato de magnsio \ cloreto de potssio, sempre resguardado o bem estar do
animal e a obteno dos resultados sem interferncia das drogas para eutansia.
No se recomenda a utilizao de anestsicos inalatrios como o halotano,
isofluorano devido a potencial capacidade de produzir acidentes nos profissionais
responsveis pela manipulao.
Um dos mtodos mais empregados a inalao de gases no anestsicos. Devido
periculosidade para o operador (hepatotoxicidade, cardiotoxicidade e/ou carcinognese) e
as reaes irritativas no animal o uso de ter e clorofrmio proibido. Em adio, o ter
inflamvel e explosivo podendo causar acidentes graves. Carcaas embebidas em ter no
podem ser incineradas ou autoclavadas sem haver eliminao prvia dos resduos.
Atualmente o CO2 o gs aceito como de melhor eficcia / rapidez para a eutansia
de animais de pequeno porte como camundongos e outros pequenos roedores. Animais
maiores como coelhos, podem ser eutanasiados com CO2 contanto que recebam pr
anestesia como xilazina / diazepan, midazolan, entre outros. A forma ideal de
administrao a utilizao de cmaras apropriadas com vlvulas para controle da entrada
de gs e com vedao eficiente. A administrao deve ser lenta para que o animal entre em
narcose antes da parada cardio respiratria. Fluxos muito intensos podem causar estresse
desnecessrio levando a agitao, eliminao de urina e fezes e outros sinais de
desconforto. Concentraes em torno de 40% no interior da cmara levam a sedao
seguida de anestesia e morte neste grupo. Outros animais como ces e gatos podem
necessitar de doses maiores (60%). Este tipo de eutansia tambm pode ser empregado para
outros animais desde que resguardas as particularidades de cada um. No esquecer que
animais recm natos podem ser resistentes a esta forma de eutansia. Animais que podem
viver em condies de anaerobiose relativa como peixes e anfbios so normalmente
resistentes a este processo. Estudos j publicados tm demonstrado no haver nenhuma
40

repercusso de alterao de tecidos que contra indique sua utilizao na maioria dos
experimentos realizados em laboratrios de pesquisa.
Pssaros podem ser eutanasiados por inalao de CO (monxido de carbono)
comprimido em cilindros. No so aceitas outras formas de emisso de CO. Este agente
tambm no recomendado devido potencialidade de produo de acidentes.
Outra droga no permitida o cianeto de potssio, pois sua utilizao leva ao
aparecimento de convulses e contraturas antes da morte.
Lembramos que algumas drogas podem ser extremamente eficazes num grupo de
espcies e completamente contra indicadas em outras. Deve-se tomar especial ateno a
animais que foram previamente tratados com agentes paralisantes como o curare,
succinilcolina, sulfato de nicotina etc., pois neste caso a ausncia de reflexos ou mesmo a
depresso respiratria no necessariamente significam inconscincia e por isto o animal
pode estar sensvel a estmulos dolorosos sem, contudo conseguir promover reaes que
exteriorizem esta condio.
De forma resumida, a escolha do procedimento de eutansia deve levar em
considerao a espcie animal (tipo, idade, peso etc.), as condies experimentais e a
prtica do operador. De todos os mtodos aqui exemplificados os mais aceitos so a
inalao de CO2 e a superdosagem de barbitricos.
Ao submeter um projeto em cujo protocolo seja necessria a utilizao da eutansia,
o pesquisador deve fornecer todos os detalhes para que a eficincia, propriedade e
condies do procedimento possam ser avaliadas. Sempre que necessrio, os procedimentos
podero ser questionados e alternativas propostas. Os critrios para a utilizao de
eutansia na presena de efeitos adversos devem estar claramente explicitados (end
point).

DESCARTE DOS ANIMAIS APS EUTANSIA

Mesmo que no tendo sido infectado por nenhum agente patognico durante a
experimentao, os animais devem ser considerados como potencialmente infectados. De
forma geral, animais de pequeno porte devem ser autoclavados para posterior descarte em
lixo biolgico destinado incinerao. Animais de porte mdio e grande devem ser
enviados a fornos crematrios, devidamente embalados e identificados de acordo com as
normas de biossegurana existentes no Campus. Alternativamente, na impossibilidade de
uso de autoclave, os animais podem ser formolizados por exposio de vsceras a aplicao
de formol 10%. No entanto, preciso frisar que este mtodo no recomendvel devido
gerao de resduos txicos e sua utilizao em nossa Instituio deve ser abolida o mais
breve possvel.

ALGUNS GRUPOS DE ANIMAIS E SEUS MTODOS DE EUTANSIA


Ver tambm resoluo n. 714 de junho de 2002 Conselho Federal de
Medicina Veterinria
Alguns animais devem ser submetidos eutansia sob a
responsabilidade de um mdico veterinrio.
41

Mtodo de Roedores e Roedores e Ces e gatos


eutansia coelhos coelhos maiores
pequenos
CO2 Mtodo de escolha Mtodo de escolha No aceito
(dependendo do (dependendo do
peso), alguns grupos peso). Animais
consideram que maiores que 1 kg
mesmo animais devem ser
pequenos devem ser submetidos
submetidos s superdosagem de
superdosagem de barbitricos
barbitricos.
Superdosagem de Mtodo de escolha Mtodo de escolha Mtodo de escolha
barbitrico (EV ou (apenas por via EV)
IP)
Superdosagem de Mtodo de escolha Mtodo de escolha Mtodo de escolha
anestsico
Exsanguinao em Outro mtodo Outro mtodo No aceito
animal anestesiado aceitvel aceitvel
KCl EV em animais Outro mtodo Outro mtodo Outro mtodo
previamente aceitvel aceitvel aceitvel
sedados
Decapitao Apenas em recm- No aceito No aceito
natos de roedores
Deslocamento Aceito para No aceito No aceito
cervical camundongos
Crioeutansia Aceito para recm No aceito No aceito
(nitrognio lquido - nato de
N2) camundongos e
ratos, alm de
peixes pequenos
42

Mtodo de aves peixes Rpteis e


eutansia anfbios
CO2 Mtodo aceitvel Mtodo aceitvel Mtodo aceitvel
desde que o animal
no seja resistente
ao CO2
Superdosagem de Mtodo de escolha Mtodo de escolha Mtodo de escolha
Barbitrico EV
Superdosagem de Mtodo de escolha Mtodo aceitvel Mtodo de escolha
anestsico
Exsangunao em Mtodo aceitvel No utilizado No utilizado
animais
anestesiados
Decapitao Mtodo aceitvel Mtodo de escolha Aceitvel
em exemplares dependendo da
pequenos espcie

Mtodos de Primatas no
eutansia humanos
CO2 No aceitvel
Superdosagem de Mtodo de escolha
barbitricos EV
Aps sedao
Superdosagem de Mtodo de escolha
anestsicos
Aps sedao
Outros mtodos No aceito
43

DETALHAMENTO
Usar sempre a via endovenosa ou intraperitoneal, com veculo na temperatura
ambiente, agulha de calibre apropriado para cada espcie assim como volumes apropriados
(ver captulo referente a inoculaes). A dosagem, se no especificada, deve ser de trs a
quatro vezes a dose usada para anestesia (vide tabelas no captulo anestesia / sedao
constante neste guia de procedimentos).

animal Especificaes e Mtodo de observaes


pr-tratamento eutansia de
escolha*1
Camundongos adultos CO2 (40% em ar Superdosagem de
atmosfrico com anestsicos e
administrao lenta) barbitricos podem ser
seguido de usadas principalmente
deslocamento cervical no caso de necessidade
de sangria branca;
tambm aceito o
deslocamento cervical,
se realizado por pessoal
treinado.
camundongos Recm-natos, Decapitao/ So resistentes ao CO2
embries ou fetos. crioeutansia
Hamster / gerbil e Se necessrio usar CO2 (40% em ar Considerar
similares sedao prvia com atmosfrico com superdosagem anestesia
xilazina ou diazepan. administrao lenta) ou tiopental sdico
Ratos Se necessrio, CO2 (40% em ar Considerar
sedao prvia com atmosfrico com superdosagem anestesia
xilazina ou diazepan administrao lenta) ou tiopental sdico
cobaias Sedao prvia com Superdosagem dePode-se fazer sangria
xilazina ou diazepan tiopental sdico branca sob anestesia.
Nestes casos deve-se
verificar a morte do
animal
coelhos Sedao prvia com Superdosagem de Pode-se sedar o animal e
diazepan, midalzolan, tiopental sdico fazer sangria branca.
xilazina. Nestes casos deve-se
sempre aplicar uma
superdose de barbitrico
aps para ter certeza da
morte do animal
Outros roedores, Acepromazina + Superdosagem de CO2 (40% em ar
usados em quetamina tiopental sdico atmosfrico com
laboratrio. administrao lenta)
Outras espcies de Acepromazina + Superdosagem de CO2 (40% em ar
roedores de origem quetamina tiopental sdico atmosfrico com
silvestre*2 administrao lenta)
44

Outros animais Obrigatrio o pr- Superdosagem de --------------


silvestres *2 tratamento com barbitricos (como o
sedao do animal tiopental sdico)
Primatas no Sedao com Superdosagem de Ajustar a dose ao porte
humanos qualquer quetamina + diazepan tiopental sdico do animal
porte
Aves Em determinadas Superdosagem de Pode-se sedar o animal e
condies CO2 pode tiopental sdico fazer sangria branca.
ser aceito Nestes casos deve-se
sempre aplicar uma
superdose de barbitrico
aps, para ter certeza da
morte do animal
anfbios ------------ barbitricos CO2
rpteis ------------ barbitricos CO2
peixes Observar o tamanho Decapitao Alternativamente peixes
do animal (pequenos) ou muito pequenos podem
anestsicos como ser eutanasiados com a
benzocana (maiores) diluio do anestsico na
gua do aqurio
Ces Acepromazina + Superdosagem de ------------
quetamina tiopental sdico EV
Gatos Xilazina ou Superdosagem de ------------
acepromazina + tiopental sdico EV
quetamina

*1- de acordo com determinados protocolos, e por solicitao do responsvel, a CEUA


poder avaliar outros mtodos. A deciso ser tomada caso a caso, levando-se em
considerao o custo benefcio e o bem estar animal.

*2- animais silvestres devem ter licena do IBAMA para captura, transporte, criao e
eutansia. A no ser em casos excepcionais, avaliados um a um, animais silvestres no
podem ser introduzidos no Campus e toda a manipulao, inclusive eutansia, deve ser feita
em local apropriado prximo s reas de captura. As carcaas podem ser taxidermizadas
(para depsito em coleo) ou formolizadas e encaminhadas para incinerao. Os tecidos e
secrees obtidos devem ser condicionados e transportados de acordo com as normas de
biossegurana do Campus.

REFERENCIAS

CANADIAN COUNCIL ON ANIMAL CARE- http://ww.ccac.ca

CCAC, guide volume 1 (2nd edition), 1993


45

American Society Of Ichthyologists And Herpetologists, The Herpetologists' League, And


The Society For The Study Of Amphibians And Reptiles. Guidelines For The Use Of Live
Amphibians And Reptiles In Field Research. J. Herpetol. 1987; 4 (Suppl.): 1-14.

American Society Of Ichthyologists And Herpetologists, American Fisheries Society,


American Institute Of Fisheries Research Biologists. Guidelines For The Use Of Fishes In
Field Research. Copeia (Suppl.) 1987: 1-12.

American Veterinary Medical Association. 1993 Report Of The AVMA Panel On


Euthanasia. J. Am. Vet. Med. Assoc. 1993; 202(2): 229-249.

http://www.nature.com/nature/journal/v441/n7093/full/441550a.html

http://www.nature.com/nature/journal/v441/n7093/full/441570a.html

Resoluo n 714, de 20 de junho de 2002 do Conselho Federal de Medicina Veterinria.


Disposio sobre os mtodos de anestesia e eutansia em animais
46

CAPTULO 9 Norma Labarthe &


Etelcia Moraes Molinaro

PESQUISAS COM ANIMAIS SILVESTRES

Animais Silvestres - todos aqueles animais pertencentes s espcies nativas,


migratrias e quaisquer outras, aquticas ou terrestres, que tenham todo ou
parte de seu ciclo de vida ocorrendo dentro dos limites do territrio
brasileiro, ou em guas jurisdicionais brasileiras. Ampliando a abrangncia
de proteo conferida fauna silvestre, inclui-se tambm a proteo dos seus
ninhos, abrigos e criadouros naturais, considerados propriedade do Estado.
Para os fins operacionais, excetuam-se dessa definio os peixes, crustceos e
moluscos susceptveis a pesca e que so regidos por normas especficas.

http://www.ibama.gov.br/fauna/conhecimentos.php

A CEUA entende que os pesquisadores devero atender legislao


vigente em todas as etapas de seus trabalhos, portanto, trabalha para que a
tica e a legislao sejam respeitadas em todas as suas dimenses.

Informamos que todas as atividades com animais silvestres devem estar


em consonncia com as diretrizes da Comisso de Biossegurana/Fiocruz,
bem como com a documentao exigida pelos organismos reguladores, tais
como o IBAMA, Institutos Ambientais Estaduais ou Municipais, de colees
biolgicas cientficas e Conselho de Gesto do Patrimnio Gentico (CGen).
A aprovao da CEUA no exclui a necessidade destas aprovaes e
licenas para a realizao dos procedimentos, sendo os proponentes
responsveis por suas aquisies antes de iniciar seus trabalhos.

DETALHAMENTO DOS PROCEDIMENTOS DE:

Captura: Devero ser sempre detalhadas armadilhas (fabricante,


modelo, dimenses e material, incluindo calibre da tela ou grade e isca a ser
utilizada) ou pus (material, dimetro da boca, trama da tela etc.).
Quando o animal for capturado por procedimento qumico (arma ou
zarabatana) deve-se observar a distncia provvel entre o operador e o animal,
porte fsico, (espcie pretendida e possvel distrbio na comunidade silvestre
local). Tambm dever constar o tipo, volume e concentrao do componente
47

qumico a ser usado, alm do tempo mdio de conteno, formas de controle


de sedao e da recuperao do animal.
Alm disso, a descrio do nmero de armadilhas e do tempo que cada
armadilha permanecer no local, alm do intervalo entre sua colocao e
visitas subseqentes, nmero de expedies no mesmo local e avaliao do
estoque gentico, devero permitir que o leitor tenha plena percepo de cada
etapa a ser executada, inclusive com a informao de tempo mdio de
cativeiro antes do recolhimento/ soltura do animal. Nesta descrio devero
ser detalhados os procedimentos especiais em casos de injrias e traumatismos
sofridos pelos animais capturados ou no caso captura de animais gestantes ou
filhotes. Deve-se evitar a utilizao de fmeas de qualquer faixa etria.

Manipulao: Devero ser detalhados cuidados com o transporte dos


animais capturados e que incluam se o animal ser retirado da armadilha, se
ser transportado sob sedao e como ser o deslocamento base de campo.
Qualquer conteno qumica dever ser cuidadosamente detalhada. Todos os
procedimentos realizados com os animais capturados devero ser explicitados,
incluindo tempo mximo de manuteno de cada indivduo, tipo das gaiolas
de manuteno, nmero de animais por gaiola, alimentao e condies de
abrigo.
Detalhar plano de marcaes visual (visa evitar a manipulao duplicada no
mesmo animal) e permanente (recomenda-se o uso de microchips).
Descrever detalhadamente o end point e procedimentos de eutansia em
casos de acidente durante os trabalhos, sem omitir o destino das carcaas.
Todos os procedimentos visando s condies de segurana do animal e
manipuladores devem ser detalhados. A aprovao do procedimento pela
CEUA no garantia de sua realizao, j que outros parmetros como
normas de biossegurana (veiculao de agentes patognicos), controle de
diversidade gentica e proteo ambiental tambm fazem parte dos
documentos necessrios a realizao dos procedimentos de transporte e
manipulao.

Soltura: Descrever como ser garantido que a soltura ser realizada no


mesmo local da captura, com horrio e condies climticas da soltura e
condies individuais de cada animal a ser solto.

A CEUA se baseia principalmente na de Lei de Crimes Ambientais e na


Instruo Normativa No. 154 de 01 de Maro de 2007 do Ibama, brevemente
apresentadas abaixo:
48

A Lei de Crimes Ambientais (Lei No. 9.605 de 12 de fevereiro de 1998)


considera crime contra a fauna a manuteno de animais silvestres em
cativeiro sem a devida permisso, licena ou autorizao da autoridade
competente. No caso especfico de fauna silvestre entende-se como autoridade
competente o IBAMA.

A manuteno de animais silvestres em cativeiro tambm considerada


crime se a origem dos animais no estiver devidamente documentada atravs
de nota fiscal emitida pelo comerciante ou pelo criadouro que tem autorizao
do IBAMA para reproduzi-los em cativeiro. Nessa nota fiscal deve constar o
nome cientifico e popular do animal, o tipo e o nmero de identificao
individual do espcime (animal), que poder ser uma anilha fechada, tatuagem
permanente e/ou um microchip.

Segundo a Instruo normativa No. 154 de 01 de Maro de 2007 (DOU


No. 42 de 02/03/2007, Seo 1, pgina 57-59), o Ibama estabeleceu o Sistema
de Autorizao e Informao em Biodiversidade (Sisbio) e fixou normas sobre
a realizao de:

1. Coleta de material biolgico;


2. Captura ou marcao de animais silvestres in situ;
3. Manuteno temporria de espcimes de fauna silvestre em cativeiro;
4. Transporte de material biolgico;
5. Recebimento e envio de material biolgico ao exterior e,
6. Realizao de pesquisa em unidades de conservao federal ou em
cavidade natural subterrnea.

DEFINIES:

Captura - deter, conter ou impedir, temporariamente, por meio qumico ou


mecnico, a movimentao de um animal, seguido de soltura.

Coleta obteno de organismo silvestre animal, vegetal, fngico ou


microbiano, seja pela remoo do indivduo do seu habitat natural, seja pela
coleta de amostras biolgicas.

Transporte deslocamento de material biolgico no territrio nacional,


plataforma continental, no mar territorial, ou na zona econmica exclusiva.
49

Pesquisador profissional graduado ou de notrio saber, que desenvolva


atividades de ensino e pesquisa vinculada instituio cientfica.

Licena permanente ato administrativo vinculado pelo qual o IBAMA


faculta ao pesquisador o direito de realizar a captura, a coleta, e o transporte
de material biolgico de espcies da fauna silvestre, por perodo
indeterminado, desde que, atendido os requisitos previstos.

Material biolgico organismos ou partes desses.

Instituio Cientfica Instituio brasileira de ensino e pesquisa ou de


pesquisa que desenvolva atividades de pesquisa de carter cientfico ou
tecnolgico.

No Artigo 16 daquela Instruo fica o pesquisador obrigado a


apresentar parecer do Comit de tica da instituio a qual est
vinculado quando o projeto visar utilizao de espcimes vivos de
vertebrados silvestres em experimentos cientficos.
50

DROGAS PARA USO NO CONTROLE DA DOR DURANTE PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS COM


ANIMAIS NO CONVENCIONAIS (SILVESTRES)

Primatas Marsupiais* Prociondeos Musteldeos Observaes

Tiopental 8-10mg/kg(IV) 5mg/kg(IP) __ __ Pouca analgesia, indicado para


procedimentos no cirrgicos

Diazepam 0,5mg/kg (IM) 0,1-0,5mg/kg(IM) 0,5- 1mg/kg(IM) 0,5-1mg/kg (IM) Sedao

Ketamina 10-15mg/kg(IM) 15-30mg/kg (IM) 10-15mg/kg 10-15mg/kg Anestesia para procedimentos


(IM) (IM) rpidos. Pouca analgesia

Ketamina 10mg/kg(IM) 10mg/kg(IM) 5-10mg/kg(IM) 10mg/kg(IM) Anestesia cirrgica para


+Xilazina procedimentos rpidos e pouco
2mg/kg(IM) 1mg/kg (IM) 0,5-1mg/kg(IM) 2mg/kg(IP)
dolorosos
(atropina)
Tiletamina 2-6mg/kg (IM) 5-10mg/kg(IM) 2-8mg/kg (IM) 3-6mg/kg (IM) Sedao rpida
+Zolazepan
Fentanil +
0,05-1mL/kg (IM) 0,4mg/kg(IM) __ __ Grande analgesia. Recomendado para
Droperidol
procedimentos cirrgicos com
abertura de cavidades
IP intraperitonial IV intravenoso IM - intramuscular
Marsupiais Famlia Didelphidae (gamb, cuca, etc)
Musteldeos Famlia Mustelidae (furo, ferret, lontra, etc).
Prociondeos Famlia Procyonidae (quati, mo-pelada, etc.).
*Marsupiais com menos de 250g de peso, so imobilizados mais facilmente com anestesia voltil sob mscara (halotano ou isoflurano
+ oxignio).
51

COLETA DE SANGUE PRIMATAS, MARSUPIAIS, MUSTELDEOS E


PROCIONDEOS*.

Tamanho do Primata Marsupial Musteldeo Prociondeo


animal
Pequeno ou Veia femoral Veia jugular Veia jugular Veia jugular
filhote agulha 13x4,5 agulha 13x4,5 agulha 13x4,5 agulha 13x4,5
ou 20x5,5 ou 20x5,5
Mdio Veias ceflica Veias jugular Veias ceflica Veias ceflica
ou femoral ou ou femoral ou femoral ou ou femoral ou
braquial ou agulha 20x5,5 safena lateral safena lateral
safena lateral ou 25x6,0 ou jugular ou jugular
agulha 20x5,5 agulha 25x7,0 agulha 25x7,0
ou 25x6,0
Grande Veias ceflica Veias jugular Veias ceflica Veias ceflica
ou femoral ou ou femoral ou ou femoral ou ou femoral ou
braquial ou safena lateral safena lateral safena lateral
safena lateral agulha 25x7,0 ou jugular ou jugular
agulha 25x8 ou agulha 25x7,0 agulha 25x7,0
30x8,0 ou 30x8,0 ou 30x8,0
*animais contidos quimicamente - sedados

INJEES INTRAMUSCULARES - PRIMATAS, MARSUPIAIS,


MUSTELDEOS E PROCIONDEOS**.

Tamanho Primata Marsupial Musteldeo Prociondeo


do animal
Pequeno Msculos semi Msculos semi Msculos semi Msculos semi
ou filhote membranceo ou membranceo ou membranceo ou membranceo ou
semitendneo semitendneo semitendneo semitendneo
agulha 13x4,5 agulha 13x4,5 agulha 13x4,5 agulha 13x4,5
Mdio Msculos semi Msculos semi Msculos semi Msculos semi
membranceo ou membranceo ou membranceo ou membranceo ou
semitendneo semitendneo semitendneo semitendneo
agulha 20x5,5 ou agulha 20x5,5 agulha 25x6,0 agulha 25x6,0
25x6,0
Grande Msculos trceps ou Msculos semi Msculos semi Msculos semi
semi membranceo membranceo ou membranceo ou membranceo ou
ou semitendneo semitendneo semitendneo semitendneo
agulha 25x8 ou agulha 25x6,0 agulha 25x6,0 ou agulha 25x7,0
30x8,0 25x7,0
** animais contidos mecanicamente
Obs.: o volume da droga injetado no msculo depender do porte fsico do animal
52

CAPTULO 10

ENDEREOS IMPORTANTES

PRINCIPAIS ENDEREOS ELETRNICOS PARA BUSCA DE


PROCEDIMENTOS ENVOLVENDO EXPERIMENTAO
ANIMAL

Biblioteca Virtual de Biotica


http://www.ufrgs.br/bioetica/

Canadian Council on Animal Care (CCAC)


http://ww.ccac.ca

Colgio Brasileiro de Experimentao Animal (COBEA)


http://www.cobea.org.br

Comisso de tica na Experimentao Animal (CEEA)


IB/UNICAMPhttp://www.ib.unicamp.br/institucional/ceea/index.htm

National Institutes of Health


http://bioethics.od.nih.gov/animals.html

Research Animal Resource (RAR)


http://www.ahc.umn.edu/rar/

Sociedade Brasileira de Biotica


http://www.sbbioetica.org.br/default/default.asp

Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)


http://www.ufrgs.br/bioetica/

ENDEREO DA CEUA FIOCRUZ

http://www.presidencia.fiocruz.br/vppdt1/com_etn_uso_anim_.php
email- ceua@fiocruz.br
53

ANEXO

PRINCPIOS TICOS PARA O USO DE ANIMAIS DE


LABORATORIO (conforme preconizado pelo COBEA)

ARTIGO I Todas as pessoas que pratiquem a experimentao biolgica


devem tomar conscincia de que o animal dotado de sensibilidade, de
memria e que sofre sem poder escapar a dor;

ARTIGO II O experimentador , moralmente responsvel por suas


escolhas e por seus atos na experimentao animal;

ARTIGO III Procedimentos que envolvam animais devem prever e se


desenvolver considerando-se sua relevncia para a sade humana o animal,
a aquisio de conhecimentos ou o bem da sociedade;

ARTIGO IV Os animais selecionados para um experimento devem ser


de espcie e qualidade apropriadas a apresentar boas condies de sade,
utilizando-se o nmero mnimo necessrio para se obter resultados vlidos.
Ter em mente a utilizao de mtodos alternativos tais como modelos
matemticos, simulao por computador e sistemas biolgicos In vitro;

ARTIGO V imperativo que se utilizem os animais de maneira


adequada, incluindo ai evitar o desconforto, angstia e dor. Os
investigadores devem considerar que os processos determinantes de dor ou
angstia em seres humanos causam o mesmo em outras espcies, a no ser
que o contrrio tenha se demonstrado;

ARTIGO VI Todos os procedimentos com animais, que possam causar


dor ou angstia, precisam se desenvolver com sedao, analgesia ou
anestesia adequadas. Atos cirrgicos ou outros atos dolorosos no podem
se realizados em animais no anestesiados e que estejam apenas paralisados
por agentes qumicos e/ou fsicos;

ARTIGO VII Os animais que sofram dor ou angstia intensa ou crnica,


que no possam se aliviar e os que no sero utilizados devem ser
sacrificados por mtodo indolor e que no cause estresse;

ARTIGO VIII O uso de animais em procedimentos didticos e


experimentais pressupe a disponibilidade de alojamento que proporcione
condies de vida adequada s espcies, contribuindo para sua sade e
conforto. O transporte, a acomodao, a alimentao e os cuidados com os
54

animais criados ou usados para fins biomdicos devem ser dispensados por
tcnico qualificado;

ARTIGO IX Os investigadores e funcionrios devem ter qualificao e


experincia adequadas para exercer procedimentos em animais vivos.
Deve-se criar condies para seu treinamento no trabalho, incluindo
aspectos de trato e uso humanitrio dos animais de laboratrio.