FERMENTAO Fermentao

ALCOLICA DEdeSUBSTRATO
alcolica substrato amilceoAMILCEO
hidrolisado... HIDROLISADO 429
ENRIQUECIDO COM MELAO DE CANA

Alcoholic fermentation of starchy hidrolisated substrate with sugar cane residue

Lizandra Bringhenti1, Claudio Cabello2, Luiz Henrique Urbano3

RESUMO
A farinha constitui um dos principais produtos da mandioca, e seu uso muito difundido em todo o Pas. Durante o
processamento da mandioca para a obteno da farinha gerado um resduo slido proveniente da decantao da manipueira, o qual
composto essencialmente por amido. Diante da importncia do aproveitamento de resduos agroindstrias para a gerao de energia
e como fonte de renda para as empresas, com este trabalho objetivou-se avaliar o efeito da adio de melao (resduo da produo de
acar de cana) no preparo de solues de amido para hidrlise enzimtica e fermentao alcolica. Os resultados obtidos demonstraram
que a adio de melao no resduo amilceo inicial em doses a partir de 10% levou a um aumento no teor de acares no mosto
promovendo um aumento de 112% na produo de etanol, em relao ao substrato sem aditivo. Contudo, a seleo de leveduras
adaptadas ao substrato faz-se necessria para um melhor rendimento em etanol.
Termos de indexao: Resduo amilceo, melao, fermentao alcolica.

ABSTRACT
The cassava flour is a one of most important commercial product of cassava industries. During the cassava flour processing
is obtained a solid residue from manipueira decantation, which is characterized by high level of starch. Due the importance of the
residue usage as energy source and income product for industries this work had as purpose to evaluate the addition of sugarcane
residue (melao) as supplementary raw material in hydrolysis and fermentation process of cassava starch solution for ethanol
production. The results showed that the increase of sugarcane residue percentage in initial solution (> 10%) caused the increase of
sugar concentration in must and high ethanol yield (increase of 112% when compared with substrate the without sugarcane residue).
The yeast selection and substrate adaptation is necessary for increase of ethanol production from cassava starch residue.
Index terms: Starch residue, sugarcane residue and alcoholic fermentation.

(Recebido em 2 de agosto de 2004 e aprovado em 11 de setembro de 2006)

INTRODUO labirinto ficando depositado o amido residual, o qual

Graas vasta biodiversidade encontrada em seu
territrio, o Brasil dispe de uma grande variedade de
resduos agrcolas e agroindustriais, cujo bioprocessamento
de grande interesse econmico e social. importante
fomentar a demonstrao das vantagens existentes e
encorajar o investimento no desenvolvimento de novas
tecnologias para se obter ganho energtico a partir de
recursos renovveis, que so produzidos em grande
quantidade no Pas.
As agroindstrias que fabricam farinha de mandioca
no Brasil apresentam variados nveis tecnolgicos em seus
processos produtivos, os quais refletem tanto na qualidade
do produto quanto na quantidade e composio dos
resduos gerados.
Durante o processo de fabricao da farinha de
mandioca na etapa de prensagem gerado um resduo
lquido denominado manipueira, descrito como a gua
de constituio das razes de mandioca. Este resduo
passa por um processo de decantao em sistema de
apresenta-se como substrato potencial para processos
fermentativos.
A produo de lcool fino a partir dos resduos da
indstria da mandioca acena como uma alternativa para
transformar o resduo amilceo em co-produto, gerando
no s receita para a indstria como todos os benefcios
mercadolgicos de uma indstria limpa. Aliado a crescente
evoluo tecnolgica, hoje necessrio reavaliar antigos
projetos, outrora descartados pela sua inviabilidade
econmica.
O lcool fino matria-prima para as indstrias
de bebidas, de perfumarias, produtos farmacuticos
e, eventualmente indstrias qumicas e alimentcias.
Na indstria de bebidas o lcool fino usado
principalmente na correo do teor alcolico de
vinhos, fabricao de vodca, licores e aperitivos. Na
indstria farmacutica usado na extrao de
princpios ativos naturais, elaborao de perfumes e
como diluente.

1
Doutoranda Energia na Agricultura, FCA/UNESP Fazenda Experimental Lageado s/n Cx. P. 237 Botucatu, SP.
2
Diretor CERAT/UNESP Fazenda Experimental Lageado s/n Cx. P. 237 Botucatu, SP dircerat@fca.unesp.br
3
Tcnico em Qumica, CERAT/UNESP Fazenda Experimental LageadoCinc.
s/n Cx. P. 237 Lavras,
agrotec., Botucatu,v.SP.
31, n. 2, p. 429-432, mar./abr., 2007
430 BRINGHENTI, L. et al.
Os amidos de mandioca apresentam pequenas
concentraes de matrias graxas e protenas e, portanto
o seu hidrolisado necessita ser aditivado com outros
materiais para torn-lo adequado fermentao alcolica.
O melao originrio da fabricao de acar de cana possui
oligoelementos, vitaminas e precursores, entre outros, que
tornam este material de baixo custo interessante como
aditivo, alm dos altos teores de acares fermentescveis.
Aliado a isso, experimentos realizados por Najafpour &
Shan-Poi (2003) demonstraram um aumento da quantidade
de acares fermentescveis em ensaios de hidrlise
enzimtica de melao de cana por conta da concentrao
de amidos presentes na cana de acar.
Este trabalho teve como objetivo avaliar a
fermentabilidade do hidrolisado obtido a partir misturas
de amido residurio da fabricao de farinha de mandioca
enriquecido com diferentes teores de melao.
MATERIAL E MTODOS
Material
O amido residurio do processamento de farinha
de mandioca foi doado pela empresa Plaza Indstria e
Comrcio Ltda, situada em Santa Maria da Serra-SP.
O melao de cana-de-acar obtido no processo
de cristalizao da sacarose foi concedido pela Usina de
Acar da Barra, localizada na cidade de Barra Bonita-SP.
Durante o processo de hidrlise foram utilizadas
uma -amilase -Termamyl 120L (Novo Nordisk), na primeira
fase da hidrlise e outras duas enzimas para a hidrlise
total a amiloglucosidase (AMG 300L) da NOVO NORDISK,
e pululanase (PROMOZIME) da NOVO NORDISK.
A cepa utilizada foi a Saccharomyces cerevisiae,
cedida pelo CPQBA/UNICAMP, mantida em meio PDA.
Preparao e padronizao dos substratos
Uma suspenso a 10% do resduo amilceo foi pr-
hidrolisada com -amilase Termamyl 120L, na proporo
de 1,5KMU/g de amido seco, na temperatura de 90C, por
2h. A quantidade total de carbono orgnico (TOC) do pr-
hidrolisado obtido foi medida. Em separado, foi preparada
uma soluo de mel residual e gua e a mesma foi
padronizada at obter-se a mesma quantidade de carbono
orgnico contida no hidrolisado.
Em erlenmeyers de 1000 mL foram adicionadas as
seguintes quantidades: 500 mL de hidrolisado sem adio
de melao, T1 (0%); 475mL de hidrolisado e 25 mL de sol.
melao residual, T2 (5%); 450 mL de hidrolisado e 50 mL de
sol. melao residual, T3 (10%); 425 mL de hidrolisado e 75
Cinc. agrotec., Lavras, v. 31, n. 2, p. 429-432, mar./abr., 2007
mL de sol. melao residual, T4 (15%); 400 mL de hidrolisado
e 100 mL de melao residual, T5 (20%) e 500 mL de soluo
de melao, T6 (100%). Deste modo, cada soluo produzida
apresentava a mesma concentrao de carbono orgnico
com diferentes concentraes de aditivo.
Hidrlise dos tratamentos
Para a hidrlise dos tratamentos anteriormente
preparados com amido residual da produo de farinha de
mandioca acrescido de melao residurio, foi utilizada a
metodologia descrita por Cabello (1995). Em cada um dos
erlenmeyers foram adicionadas outras duas enzimas,
280 L de amiloglucosidase, e 50 L de pululanase, para
realizar a hidrlise total do substrato. A soluo foi
tamponada com tampo acetato para pH 4,8 e mantida em
agitao a 60 C por 72 h. Decorrido este tempo elevou-se
o pH para 8,5 com adio de NaOH (1N).
Preparao do inculo
A cepa utilizada foi a Saccharomyces cerevisiae,
mantida em meio PDA.
Preparou-se um meio YM para desenvolvimento e
estoque da levedura utilizando-se 3g de extrato de levedura,
3g de extrato de malte, 5g de peptona, 10 g de dextrose, 20 g
de gar e gua destilada em quantidade suficiente para um
litro. Verteu-se 3mL de meio em tubos de ensaio,
posteriormente tampou-se com algodo e esterilizou-se em
autoclave a 121C por 15 min. Aps o resfriamento dos
tubos de ensaio inoculou-se a levedura mantendo-se os
tubos por 24h em estufa a 30C. Estes tubos foram cobertos
com glicerol estril e mantidos sob refrigerao.
A multiplicao para preparo do inculo foi realizada
inoculando-se uma alada da cultura em 100 mL de meio YM
sem gar, por 24h a 30C. Decorrido este perodo, os tubos
foram centrifugados a 1500 rpm por 5 minutos e a massa de
levedura decantada foi novamente inoculada num erlenmeyer
contendo 500 mL de meio YM permanecendo por 24h a 30C.
Fermentao das solues
As solues preparadas e hidrolisadas foram
inoculadas com 1mL de soluo contendo a levedura,
permanecendo em agitao constante a 37C por 28h.
O consumo de acares durante o processo
fermentativo dos diferentes tratamentos foi avaliado por
cromatografia (HPLC), em diferentes intervalos de tempo.
Perfil cromatogrfico
Para as anlises do perfil cromatogrfico antes e
durante a fermentao uma amostra de 10 mL de cada
 Fermentao alcolica de substrato amilceo hidrolisado... 431

tratamento nos diferentes tempos foi centrifugada a 12000
rpm durante 8 min., em seguida filtrada em membrana PVDF
(difluoreto de polivinilideno) 0,22m, de 13mm de dimetro,
hidroflica, sob vcuo. O tempo de corrida foi de 35min.
com temperatura de 65C e a fase mvel utilizada foi cido
sulfrico 0,005M. Foram determinadas as concentraes
de sacarose, frutose, glicose e lcool em cada amostra.
Anlise dos dados
Os resultados obtidos nas determinaes dos
teores de acares por cromatografia nas solues antes e
aps hidrlise, bem como o teor de acares no vinho e o
consumo de acares nos diferentes tratamentos, foram
submetidos anlise estatstica, sendo realizada a anlise
de varincia pelo teste F e as comparaes das mdias
pelo teste de Tukey ao nvel de 5% de probabilidade
(CAMPOS, 1984).
RESULTADOS E DISCUSSO
A determinao dos acares nos diferentes
tratamentos mostraram diferenas significativas entre os
tratamentos, bem como entre a concentrao mdia de
acares antes e aps o processo de hidrlise enzimtica.
Observou-se aumento dos acares fermentescveis com
o aumento da concentrao de melao, no ocorrendo
diferena significativa entre os tratamentos com 10, 15 e
20% de melao antes da hidrlise. Aps a hidrlise ocorreu
aumento dos acares nas solues evidenciando a
atuao das enzimas amilolticas tanto no amido originrio
do resduo da mandioca quanto dos amidos originrios do
melao (Tabela 1).
A partir da concentrao inicial de acares nas
amostras foi calculada a porcentagem de converso destes
acares no processo fermentativo (Tabela 2). Observa-se
que nos mostos obtidos dos tratamentos com 0 e 5% de
melao, o consumo de acares foi significativamente
menor que nos com concentraes a partir de 10%, os
quais ficaram prximos de 100%, demonstrando que a adio
de melao na fermentao de suspenses com amido
residurio de mandioca leva a um aumento significativo da
eficincia de fermentao.
Os resultados obtidos na determinao do teor de
lcool no vinho por cromatografia mostrou um aumento
deste com o aumento da concentrao de melao nas
solues iniciais, o que confirma os dados obtidos para
consumo de acares e concentrao de acares no vinho.
A partir dos resultados obtidos para o volume de
etanol no vinho calculou-se o rendimento prtico do processo
fermentativo em porcentagem de etanol (Figura 1). A adio
de 5% de melao levou a um aumento de 95,61% de

TABELA 1 Valores mdios de concentrao de acares (g/L) fermentescveis antes e depois da hidrlise enzimtica
nos diferentes tratamentos.
Concentrao de melao nas solues (%)
Amostragem 0 5 10 15 20 100
Antes hidrlise 100,5Bc 110,2Ac 143,2Ab 147,4Ab 151,0Bb 219,5Ba
Depois hidrlise 199,0Ab 129,8Ad 162,5Ac 171,2Ac 201,5Ab 255,8Aa
* Mdias seguidas de mesma letra maiscula na coluna no diferem entre si em nvel de 5% de significncia.
Mdias seguidas de mesma letra minscula na linha no diferem entre si em nvel de 5% de significncia.

TABELA 2 Concentrao mdia de acares (g/L) no vinho e porcentagem de consumo de acares nos diferentes
tratamentos.
Concentrao de melao nas solues (%)
Amostras 0 5 10 15 20 100
Vinho 117,3a 65,9a 7,7b 7,57b 8,80b 0,64b
Consumo de acares ( %) 41,04b 49,2b 95,26a 95,58a 95,63a 99,75a
* Mdias seguidas de mesma letra na linha no diferem entre si em nvel de 5% de significncia.

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rendimento em etanol em relao ao mosto proveniente da mais adaptadas ao meio fazem-se necessrias tendo em
hidrlise da soluo contendo apenas amido residurio de vista a produo de etanol a partir de resduo amilceo do
mandioca. Concentraes superiores de melao levaram a processamento de mandioca.
um aumento linear do rendimento de etanol.
CONCLUSES
A adio de melao ao substrato amilceo
140 120 derivado da industrializao da mandioca em doses a
120 100
partir de 10% levou a um aumento no teor de acares
Volume de etanol no vinho (mL)

no mosto, promovendo uma maior produo de etanol

rendimento de etanol (%)

100
80 cerca de 112% em relao soluo sem o aditivo.
80
60
Contudo, a seleo de leveduras adaptadas ao substrato
60 faz-se necessria para um melhor rendimento da
40
40 produo de etanol.
20
20 AGRADECIMENTOS
0 0
Os autores agradecem s empresas, pela doao
0 5 10 15 20 100
Concentrao de melao (%)
das matrias-primas e o CNPQ, pelo suporte financeiro.

Volume de etanol (mL) Rendimento de etanol (%) REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

FIGURA 1 Volume de etanol no vinho e rendimento de CABELLO, C. Identificao de parmetros para
etanol de acordo com as concentraes de melao na monitoramento de processo contnuo de hidrlise
soluo inicial. enzimtica, na produo de glicose a partir de fcula de
mandioca. 1995. 208 f. Tese (Doutorado em Agronomia) -
A formulao composta apenas por melao Faculdade de Cincias Agronmicas, Universidade
apresentou uma produo significativa de lcool se Estadual Paulista, Botucatu, 1995.
comparada com as demais, com um rendimento de etanol
de 96,29%. Num processo de fermentao, admite-se que CAMPOS, H. Estatstica aplicada experimentao com
rendimentos entre 43 e 49% sejam considerados adequados cana-de-acar. Piracicaba: FEALQ, 1984. 297 p.
e indicativos de um bom processo de fermentao.
Portanto, considerando que os rendimentos obtidos nos NAJAFPOUR, D. G.; SHAN-POI, C. Enzymatic hydrolisis
tratamentos com a adio de melao foram inferiores a 23%, of molasses. Bioresourse Technology, Essex, v. 86, p. 91-
uma melhor adaptao da levedura ou seleo de leveduras 94, 2003.

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