enzima e seu substrato, mas as enzimas não são rígidas

Enzimas como o modelo sugere.

O princípio básico – Estabilização do A hipótese do “ajuste induzido”

Enzimas são altamente flexíveis, moléculas
estado de transição
conformacionalmente dinâmicas, e muitas de suas
Em todas as reações químicas, os átomos reagentes ou
propriedades mais marcantes, incluindo a ligação do
moléculas passam através de um estado que é
substrato e catálise, são devido a sua flexibilidade
intermediário na estrutura entre o(s) reagente(s) e o(s)
estrutural. A capacidade de flexibilidade conformacional
produto(s). Considerando a transferência de um próton da
das proteínas levaram Daniel Koshland a levantar a
molécula de água para o ânion cloreto:
hipótese de que a ligação de um substrato (S) por uma
enzima é um processo interativo. Isto é, a forma do sítio
reagentes estado de transição produtos ativo da enzima é realmente modificado pela ligação de S,
num processo de reconhecimento dinâmico entre a
Na estrutura central, o próton está sendo transferindo e
enzima e o substrato chamado ajuste induzido. Na
está igualmente compartilhado pelos ânions hidroxila e
essência, a ligação de um substrato altera a conformação
cloreto. Esta estrutura representa, tão próximo como
da proteína, de maneira que a proteína o substrato “se
possível, a transição entre os reagentes e os produtos, e é
ajustam” mais precisamente. O processo é
conhecida como estado de transição1.
verdadeiramente interativo de maneira que a
Reações químicas nas quais um substrato (S) é convertido conformação do substrato também muda se adaptando a
a um produto (P) podem ser descritas como envolvendo conformação da enzima.
um estado de transição (que é indicado como X‡), uma
Esta idéia também ajuda a explicar algo sobre o enorme
espécie intermediária na estrutura entre S e P. O papel
poder catalítico das enzimas: na catálise enzimática, a
catalítico de uma enzima é reduzir a barreira energética
orientação precisa dos resíduos catalíticos que compõem
entre substrato e estado de transição. Isto é conseguido
o sítio ativo é necessária para a reação ocorrer; a ligação
através da formação de um complexo enzima-substrato
do substrato induz esta orientação precisa pelas
(ES). Este complexo é convertido ao produto passando
mudanças que causa na conformação da proteína.
através de um estado de transição, EX‡. Como mostrado, a
energia de EX‡ é claramente menor que X‡. Pode-se ser
tentado a concluir que este decréscimo na energia explica
Especificidade e reatividade
a aceleração na velocidade obtida pela enzima, mais há
Considere-se, por exemplo, porque a hexoquinase cataliza
mais coisas implicadas.
a fosforilação dependente de ATP de hexoses mas não
aceptores de grupos fosforil menores tais como glicerol,
etanol ou mesmo água. Certamente estes compostos
Hipótese da “chave e fechadura” menores não são estericamente proibidos de se
Estudos pioneiros sobre especificidade enzimática na
aproximarem do sítio ativo da hexoquinase. De fato, a
virada do século feitos pelo químico orgânico Emil Fischer
água pode penetrar o sítio ativo facilmente e serve como
levaram a noção da enzima como uma “fechadura” e seu
um aceptor de grupos fosforil altamente efetivo. A
substrato particular como a “chave”. Esta analogia
hexoquinase deveria mostrar alta atividade ATPásica. Mas
captura a essência da especificidade que existe entre uma
isto não ocorre. Somente a ligação de hexoses induz a
hexoquinase a assumir sua conformação totalmente ativa.

1
É importante aqui distinguir estados de transição de “Ajuste induzido” e o estado de
intermediários. Um estado de transição é visto como uma
distorção extrema de uma ligação, e então o tempo de
transição intermediário
vida de um típico estado de transição é da ordem da O complexo cataliticamente ativo enzima:substrato é uma
-13
duração de uma vibração da ligação, tipicamente 10 estrutura interativa na qual a enzima faz com que o
seg. Intermediários, por outro lado, têm tempo de vida substrato adote uma forma que imita o intermediário da
-13 -3
mais longo, na faixa de 10 a 10 seg.

1
reação. Assim, um substrato pobre deve ser aquele que
foi menos efetivo no direcionamento da formação da
conformação otimamente ativa enzima:intermediário.
Esta conformação ativa da molécula enzimática presume-
se ser relativamente instável na ausência do substrato e a
enzima livre então reverte a um estado
conformacionalmente diferente.
Controle sobre a atividade
enzimática
A atividade apresentada pelas enzimas é afetada por uma
variedade de fatores, alguns dos quais são essenciais para
a harmonia do metabolismo.
1- A velocidade enzimática, v = d[P]/dt, diminui
quando o produto se acumula e o equilíbrio é
alcançado. O aparente decréscimo na velocidade
é devido a conversão de P em S pela reação
reversa conforme [P] aumenta. Uma vez [P]/[S] =
Keq, nenhuma reação posterior é aparente. Keq
define o equilíbrio termodinâmico. As enzimas
não têm influência na termodinâmica de uma
reação. Além disso, a inibição de um produto
pode ser um fenômeno cineticamente válido:
algumas enzimas são realmente inibidas pelos
produtos de sua reação.
2- A disponibilidade dos substratos e cofatores
determinará a velocidade da reação enzimática.
Em geral, as enzimas têm evoluído tanto que
seus valores de Km aproximadamente
prevalencem sobre concentração in vivo de seus
substratos. (Também é verdade que a
concentração de algumas enzimas nas células
está dentro da faixa de uma ordem de magnitude
ou mais da concentração de seus substratos.)
3- Há controles genéticos sobre a quantidade da
enzima sintetizada (ou degradada) pelas células.
Se o gene que codifica uma enzima particular é
ligado ou desligado, mudanças na quantidade da
atividade enzimática logo ocorrem. Indução, que
é a ativação da síntese enzimática e repressão,
que é a interrupção da síntese enzimática, são
importantes mecanismos para a regulação do
metabolismo. Controlando-se a quantidade de
uma enzima que está presente à qualquer
instante, as células podem também ativar ou
terminar várias rotas metabólicas. Controle
genético sobre os níveis enzimáticos têm a
resposta-tempo de minutos em bactérias a horas
(ou mais) em eucarióticos superiores.
4- As enzimas podem ser reguladas por modificação
covalente, a ligação covalente reversível de um
grupo químico. Por exemplo, uma enzima
totalmente ativa pode ser convertida na forma
inativa simplesmente pela ligação covalente de
um grupo funcional, tal como um fosforil.
Alternativamente, algumas enzimas existem no
estado inativo até que sejam especificamente
convertidas ao estado ativo através da adição
covalente de um grupo funcional. Reações de
modificação covalentes são catalisadas por
enzimas conversoras que são elas próprias
sujeitas a regulação metabólica.Embora a
modificação covalente represente uma alteração
estável da enzima, uma enzima conversora
diferente opera para remover a modificação, de
modo que, quando as condições que favoreciam
a modificação da enzima não se encontram mais
presentes, o processo pode ser revertido,
restaurando a enzima a seu estado não-
modificado. Muitos exemplos de modificação
covalente em importantes junções metabólicas
são encontrados nas rotas metabólicas. Por
serem as modificações covalentes eventos
catalisados por enzimas, elas ocorrem muito
rapidamente, com tempo-resposta de segundos
ou mesmo menos ainda para significantes
mudanças na atividade metabólica. O Prêmio
Nobel de 1992 em fisiologia e medicina Edmond
Fischer e Edwin Krebs foram agraciados por seus
estudos pioneiros de fosforilação protéica
reversível como uma importante estratégia para
a regulação celular.
5- A atividade enzimática pode também ser ativada
ou inibida através de interação não covalente da
enzima com pequenas moléculas (metabólitos)
que não sejam seu substrato. Esta forma de
controle é denominada regulação alostérica,
porque o ativador ou inibidor se liga a enzima em
sítio diferente (allo significa outro) do sítio ativo.
Além disso, tais reguladores alostéricos ou
moléculas efetoras, são estericamente muito
diferentes do substrato. Por isso esta forma de
regulação que resulta simplesmente da ligação
reversível de ligantes regulatórios a enzima, tem
2
 a resposta-tempo celular quase virtualmente
instantânea.
6- Controles especializados: A regulação enzimática
é um ponto importante para as células e a
evolução proveu uma variedade de opções
adicionais, incluindo zimogênios, isozimas e
proteínas moduladoras.
mantém juntos por causa de duas ligações dissulfeto, uma
de A a B e uma de B a C. É interessante notar que a
transformação do quimotripsinogênio inativo para a π-
quimotripsina requer a clivagem de somente uma ligação
peptídica em particular.

Zimogênios
A maior das proteínas se torna totalmente ativa quando
sua síntese é completa e espontaneamente se dobram em
sua conformação tridimensional nativa. Algumas
proteínas, no entanto, são sintetizadas como precursores
inativos, chamados zimogênios ou proenzimas, que
somente adquirem a atividade total sob clivagem
proteolítica específica de uma ou várias de suas ligações
peptídicas. Ao contrário da regulação alostérica ou
modificação covalente, a ativação de zimogênios por
proteólise específica é um processo irreversível. A
ativação das enzimas e outras proteínas fisiologicamente
importantes por proteólise específica é uma estratégia
freqüentemente explorada por sistemas biológicos para
ativar um processo no tempo e local apropriado, como
nos seguintes casos ilustrativos.

Insulina - Alguns hormônios protéicos são sintetizados na

forma de moléculas precursoras inativas, das quais os
hormônios ativos são produzidos por proteólise. Por
exemplo, insulina, um importante regulador metabólico,
é gerado por proteolítica excisão de um peptídeo
específico da proinsulina.

Enzimas proteolíticas do trato digestório - Enzimas do

trato digestório que servem para hidrolisar proteínas da
dieta são sintetizadas no estômago e pâncreas como
zimogênios. Somente sob ativação proteolítica estas
enzimas estão aptas a formar um sítio de ligação ao
substrato cataliticamente ativo. A ativação do
quimotripsinogênio é um exemplo interessante. O
quimotripsinogênio é uma cadeia polipeptídica de 245
resíduos interligada por cinco ligações dissulfeto. O
quimotripsinogênio é convertido a uma forma ativa
enzimaticamente chamada π-quimotripsina quando a
15 16
tripsina cliva a ligação peptídica entre Arg e Ile . A
πquimotripsina enzimaticamente ativa age sobre outras
moléculas de π-quimotripsina retirando dois dipeptídeos,
Ser14-Arg15 e Thr147-Asn148. O produto final deste
processamento é a protease madura α-quimotripsina, na
qual as três cadeias peptídicas, A (resíduo 1 a 13), B
(resíduos 16 a 146) e C (resíduos 149 até 245) que se

3

COAGULAÇÃO SANGUÍNEA – A formação dos coágulos
sanguíneos é o resultado de uma série de ativações de
zimogênios. A amplificação resultante desta cascata de
ativações enzimáticas permite a coagulação sanguínea
ocorrer rapidamente em resposta a uma injúria. Sete dos
fatores de coagulação em sua forma ativa são serina
proteases: kalikreina, XIIa, XIa, IXa, VIIa, Xa e a trombina.
Duas rotas para a formação dos coágulos sanguíneos
existem. A via intrínseca é instigada quando o sangue tem
contato físico causado por injúrias, com superfícies
anormais; a via extrínseca é iniciada pelos fatores
liberados pelos tecidos lesionados. As vias se misturam no
Fator X e culminam na formação do coágulo. A trombina
excisa peptídeos do fibrinogênio, ricos em cargas
negativas, convertendo-os em fibrina, uma molécula com
diferente distribuição superficial de cargas. A fibrina
prontamente agrega-os em fibras ordenadas que são
subseqüentemente estabilizadas por ligações covalentes
cruzadas. A trombina cliva especificamente ligações
peptídicas Arg-Gly e é homóloga a tripsina, que também é
uma serina protease (relembrando que a tripsina atua
somente em resíduos Arg e Lys).
Isozimas
Existem enzimas em mais de uma forma quaternária,
diferindo em suas proporções relativas de subunidades
polipeptídicas estruturalmente equivalentes mas
cataliticamente distintas. Um exemplo clássico é a lactato
desidrogenase de mamíferos (LDH), que existe como cinco
diferentes isozimas, dependendo da associação
tetramérica de suas duas diferentes subunidades: A4, A3B,
A2B2, AB3 e B4. As propriedades cinéticas das várias
isozimas LDH diferem em termos de suas afinidades
relativas para os vários substratos e sua sensitividade a
inibição pelo produto. Tecidos diferentes expressão
diferentes formas de isozimas, apropriadas a suas
necessidades metabólicas particulares. Pela regulação das
quantidade das subunidades A e B que sintetizam, as
células de vários tecidos controlam quais formas
isozímicas serão predominantes e então, quais
parâmetros cinéticos prevalecerão.
Proteínas moduladoras
São uma outra maneira das células mediarem a atividade
metabólica. Proteínas moduladoras são proteínas que se
ligam a enzimas e, através da ligação, influenciam a
atividade da enzima. Por exemplo, algumas enzimas, tais
como proteína quinase cAMP dependente, existe como
dímeros de subunidades catalíticas e subunidades
regulatórias. Estas subunidades regulatórias são proteínas
moduladoras que suprimem a atividade das subunidades
catalíticas. A dissociação das subunidades regulatórias
(proteínas moduladoras) ativa as subunidades catalíticas e
a reassociação novamente suprime a atividade. Inibidor 1
da fosfoproteína fosfatase (PPI-1) é outro exemplo de
proteína moduladora. Quando PPI-1 é fosforilada em um
de seus resíduos serina, liga-se a fosfatase fosfoproteína,
4
inibindo sua atividade fosfatase. O resultado é uma
aumentada fosforilação da enzima alvo interconversível
pelo ciclo proteína quinase/fosfoproteína fosfatase.
Inibição
Inibidores enzimáticos são classificados de várias
maneiras. O inibidor pode interagir tanto reversível como
irreversivelmente com a enzima. Inibidores irreversíveis
interagem com a enzima através de reações não
covalentes de associação/dissociação. Ao contrário,
inibidores irreversíveis normalmente promovem
alterações estáveis, covalentes, na enzima. Isto é, a
consequência da inibição irreversível é um decréscimo na
concentração da enzima ativa. As cinéticas observadas são
consistentes com esta interpretação.
Onde um inibidor I, se liga reversivelmente a enzima no
mesmo sítio que S. A ligação a S e a ligação a I são
mutuamente excludentes, processo competitivo. A
formação do complexo ternário, EIS, onde ambos S e I
estão ligados, é fisicamente impossível. Esta condição
leva-nos a antecipar que S e I devem compartilhar um alto
grau de similaridade estrutural porque eles se ligam ao
mesmo sítio da enzima. Também note-se que, no nosso
modelo, EI não reage para dar origem a E + P. Isto é, I não
é modificado por interação com E. A velocidade da reação
de formação do produto é v = k2 [ES].
É revelador a comparação a equação para o caso não-
inibido, a Equação de Michaelis-Menten) com a equação
para a velocidade da reação enzimática na presença de
uma concentração fixa de inibidor competitivo, [I]

Inibição reversível
Inibidores reversíveis caem em duas categorias principais:
competitivos e não competitivos (embora outras O termo Km no denominador no caso inibido é aumentado
categorias não comuns sejam conhecidas). Inibidores pelo fator (1 + [I]/KI); então, v é menor na presença do
competitivos são caracterizados pelo fato que o substrato inibidor, como esperado. Claramente, na ausência de I, as
e o inibidor competem pelo mesmo sítio ligante na duas equações são idênticas.
enzima, o chamado sítio ativo ou sítio de ligação ao
substrato. Assim, aumentando a concentração de S há o
favorecimento da ligação de S a enzima ao invés do
inibidor, I. Isto é, maior [S] pode reverter os efeitos de I. O
outro tipo principal, inibição não-competitiva, não pode
ser revertido pelo aumento de [S}. Os dois tipos podem
ser distinguidos pelos padrões particulares obtidos
quando os dados cinéticos são analisados em gráficos
lineares, tais como duplo recíproco (Lineweaver-Burk).
Um formulação geral para interações inibitórias comuns
em nosso simples modelo cinético enzimático devem
incluir:
Várias características da inibição competitiva são
E+I EI e/ou I + ES IES
evidentes. Primeiro, a uma dada [I], v decresce (1/v
Isto é, serão consideradas aqui combinações reversíveis aumenta). Quando [S] se torna infinita, v = Vmax e não é
do inibidor com E e/ou ES. afetada por I porque toda a enzima está na forma ES.
Note que o valor do intercepto em x diminui com o
Inibição competitiva aumento de [I]. Este intercepto de x é denominado Km
Considere o seguinte sistema aparente porque é o Km aparente sob estas condições. O
critério diagnóstico para a inibição competitiva é que V max

5
não seja afetado por I; isto é, todas as linhas tem um
intercepto em y comum. Este critério é também a melhor
indicação experimental para a ligação de duas substâncias
ao mesmo sítio. Inibidores competitivos lembra S
estruturalmente.
Succinato desidrogenase – um exemplo clássico de
inibição competitiva
A enzima succinato desidrogenase (SDH) é explicação razoável é que o inibidor está ligado a um sítio
competitivamente inibida por malonato. A similaridade
estrutural entre eles é óbvia e é a base da habilidade do
malonato imitar o succinato e ligar-se ao sítio ativo da
SDH. No entanto, ao contrário do succinato que é oxidado
pela SDH para formar fumarato, o malonato não pode
perder dois hidrogênios, conseqüentemente, ele não
reage.
Inibição não-competitiva
Inibidores não competitivos interagem com ambos, E e ES
(ou com S e ES, mas este é um caso raro e especial).
Obviamente então, o inibidor não se liga ao mesmo sítio
que S, e a inibição não pode ser revertida pelo aumento
de [S]. Há dois tipos de inibição não competitiva: pura e
mista.
Inibição não-competitiva pura
Nesta situação,a ligação de I por E não tem efeito na
ligação de S por E. Isto é, S e I se ligam a diferentes sítios
de E e a ligação de I não afeta a ligação de S. Considere o
sistema
A inibição não-competitiva pura ocorre se KI = KI’. Esta
situação é relativamente incomum; o gráfico de
Lineweaver-Burk para tal é dado a seguir. Note que Km
não é afetado por I (o intercepto em x permanece o
mesmo, com ou sem I). Note também que Vmax diminui.
Um padrão similar é visto se a quantidade de enzima no
experimento é diminuída. Então é como se I diminuísse
[E].
Inibição não-competitiva mista
Nesta situação a ligação de I por E influencia a ligação de S
por E. Ambos os sítios para I e S não próximos ou
mudanças conformacionais em E causadas por I afetam a
ligação de S. Neste caso, KI e KI’, como definidos
previamente, não são iguais, Ambos Km e Vmax são
alterados pela presença de I, e Km/Vmax não é constante.
Este padrão inibitório é comumente encontrado. A
distinto do sítio ativo, mas influenciando a ligação de S ao
sítio ativo.
Provavelmente estes efeitos são transmitidos via
alterações na conformação da proteína.
Inibição irreversível
Se o inibidor se combina irreversivelmente com a enzima,
por exemplo, por ligação covalente – o padrão cinético se
mostra como da inibição não-competitiva, porque o efeito
líquido é a diminuição da enzima ativa. Normalmente,
este tido de inibição pode ser distinguido da inibição
reversível não-competitiva uma vez que a reação de I com
E (e/ou ES) não é instantânea. Ao contrário, há uma
diminuição da atividade enzimática tempo-dependente
conforme E + I → EI ocorre e a velocidade desta inativação
pode ser acompanhada. Também, ao contrário das
inibições reversíveis, a diluição ou diálise da enzima não
dissocia o complexo EI e nem restaura a atividade
enzimática.
6
Substratos suicidas – Inativadores enzimáticos
baseados no mecanismo
Substratos suicidas são substratos inibidores análogos
desenhados para que, via ação catalítica normal da
enzima, um grupo muito reativo seja gerado. Este grupo
reativo então forma uma ligação covalente com um
vizinho ao grupo funcional dentro do sítio ativo da enzima
causando a inibição irreversível. Substratos suicidas,
também chamados substratos “cavalos de Tróia”, são um
tipo de marcador de afinidade. Como análogo do
substrato, eles se ligam com especificidade e alta
afinidade ao sítio ativo da enzima; em sua forma reativa,
eles se ligam covalentemente a enzima. Esta ligação
covalente efetivamente marca um grupo funcional
particular dentro do sítio ativo, identificando o grupo
como tendo papel chave no ciclo catalítico da enzima.

Penicilina – um substrato suicida

Vários fármacos na medicina atual usam inativadores
enzimáticos baseados no mecanismo. Por exemplo, o
antibiótico penicilina exerce seus efeitos pela reação
covalente com um resíduo essencial de serina no sítio
ativo da glicoproteína peptidase, uma enzima que atua
para formar as ligações cruzadas das cadeias
peptideoglicanas durante a síntese das paredes celulares
bacterianas. Uma vez que a síntese da parede celular seja
bloqueada, as células bacterianas são mais susceptíveis a
ruptura por lise osmótica, e o crescimento bacteriano é
interrompido.

7

Especificidade e
regulação
Uma molécula de enzima é tipicamente ordens de
magnitude maior que seu substrato. Seu sítio ativo
compraz somente uma pequena porção da estrutura total
da enzima. O sítio ativo é parte da conformação da
molécula enzimática arranjada para criar um bolso
especial ou depressão em sua estrutura tridimensional
que é complementar a estrutura do substrato. As
moléculas da enzima e do substrato “reconhecem” uma a
outra através de sua complementaridade estrutural. O
substrato se liga a enzima através de forças relativamente
fracas – liganções de H, ligações iônicas (pontes salinas) e
interações de van der Waals entre conjuntos
estericamente complementares de átomos. Estudos de
especificidade das enzimas fazem um exame da
velocidade das reações enzimáticas obtidos com vários
análogos estruturais do substrato. Determinando-se que
grupo funcional e grupos estruturais dentro do substrato
afetam a ligação ou catálise, enzimologistas podem
mapear as propriedades do sítio ativo, analisando
questões tais como: Ele pode acomodar grupos
estericamente ocultos? As interações iônicas entre E e S
são importantes? Ligações de H são formadas?
Regulação alostérica da atividade
enzimática
A regulação alostérica atua para modular enzimas
situadas em etapas chave nas vias metabólicas.
Considere-se como uma ilustração a seguinte via, onde A
é o precursor para a formação de um produto final F
numa sequência de cinco reações enzimaticamente
catalisadas:
Neste esquema, F simboliza um metabólito essencial, tal
como um aminoácido ou um nucleotídeo. Em tais
sistemas, F, o produto final essencial, inibe a enzyma 1, o
primeiro passo da via. Assim, quando suficiente F é
sintetizado, bloqueia sua posterior síntese. Este fenômeno
é chamado inibição por feedback ou retroinibição.
Propriedades gerais das enzimas
regulatórias
Enzimas tais como a enzima 1, que estão sujeitas a
retrorregulação, representam uma classe distinta das
enzimas, as enzimas regulatórias. Como uma classe, estas
enzimas tem certas propriedades excepcionais:
1- Sua cinética não obedece a equação de Michaelis-
Menten. Seu gráfico v versus [S] é de curvas
sigmóides, em forma de S e não hipérboles
retangulares. Tais curvas sugerem relação de segunda
ordem (ou maior) entre v e [S], isto é, v é
n
proporcional a [S] , onde n > 1. Uma descrição
qualitativa do mecanismo responsável pela curva
sigmóide é que a ligação de um S a molécula protéica
facilita adicionais moléculas de substratos se ligarem
à mesma molécula protéica. No jargão da alosteria, a
ligação do substrato é cooperativa.
2- A inibição de uma enzima regulatória por
retroalimentação não satisfaz nenhum padrão normal
de inibição, e o inibidor F tem muito pouca
similaridade estrutural a A, o substrato para a enzima
regulatória. F aparentemente atua em um sítio de
ligação distinto do sítio de ligação ao substrato. O
termo alostérico é correto, porque F não é similar
estericamente e, mais ainda, atua em sítio diferente
do sítio S. Este efeito é chamado inibição alostérica.
3- Enzimas regulatórias ou alostéricas como a enzima 1
são, em alguns instantes, reguladas por ativação. Isto
é, enquanto algumas moléculas efetoras tais como F
exercem efeitos negativos sobre a atividade
enzimática, outros efetores mostram influencias
estimulatórias ou positivas sobre a atividade.
4- Enzimas alostéricas tem organização oligomérica. Elas
são compostas por mais de uma cadeia polipeptídica
(subunidade) e têm mais que um sítio de ligação ao
substrato por molécula de enzima.
5- A hipótese levantada é que, de alguma maneira, a
interação de uma enzima alostérica com efetores
altera a distribuição das possibilidades
conformacionais ou interações de subunidade
8
 disponíveis para a enzima. Isto é, os efeitos
regulatórios exercidos sobre a atividade enzimática
são alcançados por mudanças conformacionais que
ocorrem na proteína quando os metabólitos efetores
se ligam.

Além das enzimas, proteínas não catalíticas podem exibir

muitas destas propriedades; a hemoglobina é um exemplo
clássico. Dados estes parâmetros, considere o que acontece
quando S é adicionado a uma solução de proteína
alostérica em equilíbrio conformacional. Embora a [R 0]
Modelos para o comportamento relativa seja pequena, S se ligará somente a R0, formando
alostérico das proteínas R1. Isto depleta a concentração de R0, perturbando o
equilíbrio T0/R0. Para restaurar o equilíbrio, moléculas na
O modelo de simetria de Monod, conformação T0 se transformam em R0. Esta mudança
disponibiliza mais R0 disponível para se ligar a S, dando R1,
Wyman e Changeux e diminuindo [R0], perturbando o equilíbrio T0/R0 e assim
Em 1965, Monod, Wyman e Changeux propuseram um
por diante. Então, estes equilíbrios ligados são tais que a
modelo teórico de transições alostéricas baseado na
ligação de S no estado R0 da proteína alostérica perturba o
observação que as proteínas alostéricas são oligômeros.
equilíbrio T0/R0 com o resultado que a ligação do
Eles sugeriram que proteínas alostéricas podem existir em
substrato direciona a transição conformacional T0 → R0.
(pelo menos) dois estados conformacionais, denominados
R, relaxado, e T, tenso, e que, em cada molécula protéica,
todas as subunidades têm a mesma conformação (tanto R
como T). Isto é, a simetria molecular é conservada.
Moléculas de conformações mistas (tendo subunidades
de R e T) não são permitidas por este modelo.

Na ausência do ligante, os dois estados da proteína

alostérica estão em equilíbrio:

Note que o subscrito “0” significa “na ausência do
ligante”). A constante de equilíbrio é denominada L:
L = T0/R0. L é presumidamente grande, isto é, a
quantidade da proteína no estado conformacional T é
muito maior que a quantidade na conformação R. Vamos
supor que L = 104.
As afinidades dos dois estados pelo substrato, S, são
caracterizadas pelas respectivas constantes de
dissociação, KR e KT. O modelo supõe que KT >> KR. Isto é, a
afinidade de R0 por S é muito maior que a afinidade de T0
por S. Vamos escolher o extremo onde KR/KT = 0 (isto é, KT
é infinitamente maior que KR). Com efeito, estamos
escolhendo condições onde S se liga somente a R (Se KT é
infinito, T não se liga a S).
Neste sistema simples, a cooperatividade é atingida
porque cada subunidade tem um sítio ligante para S e
então, cada molécula protéica tem mais que um sítio
ligante para S. Assim, o aumento na população dos
confôrmeros R dá um aumento progressivo no número de
sítios disponíveis para S. A extensão da cooperatividade
depende da razão relativa T0/R0 e das afinidades relativas
de R e T por S. Se L é grande (isto é, o equilíbrio tende
fortemente em favor de T0) e se KT >> KR, como no
exemplo anterior, a cooperatividade é grande. Ligantes
tais como S aqui que se ligam de maneira cooperativa,
fazem com que a ligação de um equivalente aumente a
ligação de equivalentes adicionais de S a mesma molécula
protéica e são denominados efetores homotrópicos
positivos (O prefixo homo indica que o ligante influencia a
ligação de tais moléculas).

9

Figura 1- Modelo Monod-Wyman-Changeux. Gráficos de
efeitos alostéricos para um tetrâmero (n = 4) em termos de Y, a
função saturação, versus [S]. Y é definido como [sítios de
ligação que estão ocupados pelo ligante]/[sítios de ligação
totais]. (a) gráfico de Y como função de [S], á vários valores de
L. (b) Y como função de [S], a diferentes c, odne c = K R/KT.
(quando c =0, KT é infinito).
Efetores heterotrópicos
Este simples sistema também dá uma explicação para as
mais complexas respostas de ligação de substrato a
efetores positivos e negativos. Efetores que influenciam a
ligação de outros ligantes além de si mesmos são
chamados efetores heterotrópicos. Por exemplo, efetores
que promovem a ligação do substrato são denominados
efetores heterotrópicos positivos ou ativadores
alostéricos. Retroinibidores se encaixam nesta classe.
Considere uma proteína composta por duas subunidades,
cada uma delas tem dois sítios ligantes: um para o
substrato, S, e um no qual os efetores se ligam, o sítio
alostérico. Presuma que S se liga preferencialmente
(“somente”) ao confôrmero R, presuma agora que o
efetor heterotrópico positivo A se liga ao sítio alostérico
somente quando a proteína está na conformação R e que
o efetor alostérico negativo I, se liga ao sítio alostérico
somente se a proteína está na conformação T. Assim, com
respeito a ligação ao sítio alostérico, A e I são
competitivos entre si.
Efetores positivos
Se A se liga a R0 formando a nova espécie R1(A), a
concentração relativa de R0 é dimiunída e o equilíbrio
T0/R0 é perturbado. Como conseqüência, uma transição
relativa T0 → R0 ocorre para restaurar o equilíbrio. O
efeito líquido é o aumento no número de confôrmeros R
na presença de A, significando que mais sítios de ligação
para S estão disponíveis. Por esta razão, A leva ao
decréscimo na cooperatividade da curva de saturação do
substrato, como visto pela mudança da curva à esquerda.
Efetivamente, a presença de A diminui o valor aparente
de L.
Figura 2 - Uma proteína dimérica que pode existir em dois
estados R0 e T0. Esta proteína pode ligar 3 ligantes:
1) Substrato (S): um efetor homotrópico positivo que se liga
somente a R no sítio S.
2) Ativador (A): Um efetor heterotrópico positivo que se liga
somente a R no sítio F.
3) Inibidor (I): um efetor heterotrópico negativo que se liga
somente a T no sítio F.
Efetores negativos
A situação contrária se aplica na presença de I, que se liga
somente a T. A ligação de I leva a um aumento na
população dos confôrmeros T, às expensas de R0. O
declínio na [R0] significa que este se liga menos para S ou
A. Consequentemente, a presença de I aumenta a
cooperatividade (isto é, a sigmoicidade) da curva de
saturação pelo substrato. Como evidenciado pela
mudança da curva para a direita. A presença de I aumenta
o valor aparente de L.
Sistemas K e Sistemas V
O modelo alostérico apresentado é chamado de sistema K
porque a concentração do substrado dá uma meia-
velocidade máxima, definida como K0,5, muda como
resposta aos efetores. Note que Vmax é constante neste
sistema.
Figura 3 - Efeitos de A:
A + R0 → R1(A)
Aumenta o número de confôrmeros R mudando
para
Mais sítios de ligação de S estão disponíveis.
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Diminui a cooperatividade da curva de saturação do substrato. Mecanismos de ação enzimática
O efetor A diminui o valor aparente de L.
Efeitos de I:

Aumento no número de confôrmeros T (diminuição de R0

como R0 → T0 para restaurar o equilíbrio).
Então, I inibe a associação de S e A com R diminuindo o nível de
R0. I aumenta a cooperatividade da curva de saturação do
substrato. I aumenta o valor aparente de L.

Uma situação alostérica onde K0,5 é constante mas a

aparente Vmax muda em resposta aos efetores é chamada
sistema V. Num sistema V, todos os gráficos v versus S são
hiperbólicos ao invés de sigmóides. O efetor
heterotrópico positivo A ativa aumentando Vmax,
enquanto I, o efetor heterotrópico negativo, a diminui.
Note que nem A nem I afetam K0,5. Esta situação surge se
R e T têm a mesma afinidade pelo substrato S, mas
A barreira energética da reação não catalisada é
claramente a diferença nas energias do estado S e X ‡.
Similarmente, a barreira energética a ser diminuída na
reação catalisada pela enzima, presumindo-se que E está
‡
saturada com S, é a diferença energética entre ES e EX . A
aceleração da velocidade por uma enzima significa
simplesmente que a barreira energética entre ES e EX é
‡

diferem em suas habilidades catalíticas e suas afinidades menor que a barreira energética entre S e X‡. Em termos
por A e I. A e I então podem mudar a distribuição T/R das energias livres de ativação, ΔGe‡ < ΔGu‡.
relativa. A Acetil-CoA carboxilase, a enzima que catalisa o
passo comprometido na via de biossíntese de ácidos
graxos, se comporta como um sistema V em resposta ao
seu ativador alostérico, citrato.

Sistemas K e sistemas V têm diferentes papéis

biológicos
Os sistemas K e V têm características que indicam que
trabalham melhor sob diferentes condições fisiológicas.
Enzimas de sistema K são adaptadas a condições nas quais
a concentração prevalecente do substrato é limitante da
velocidade, como quando [S] in vivo ≈ K0,5. De outro lado,
quando as condições fisiológicas são tais que [S] é
normalmente saturante para a enzima regulatória de
interesse, a enzima se comporta como sistema V para ter
uma resposta regulatória efetiva.

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