RELATORIO DE PRÁTICA DE CROMATOGRAFIA

GRUPO:

-José Reinaldo Riquet de Siqueira

-Morgana Martins

-Alexia Olimpia

-Ana Letícia

OBJETIVO

Entender a utilização do método da cromatografia na identificação dos aminoácidos presentes

em uma determinada substância.

MATERIAL:

-Placa de Sílica gel

-Placa de Pétri

-Bequer

-Proveta

-Reagentes

-Régua

-Estufa

-Prendedor

Metodologia:

1) Com um lápis, fazer marcações nas extremidades da placa de sílica gel, deixando um
espaço de 10mm da borda tanto superior, quanto inferior.
2) Com o auxílio de uma proveta, medir uma quantidade de 10ml de solvente (N-butanol,
ácido acético, água –proporção 4:1:1) e despejar em um Béquer.
3) Utilizar uma agulha capilar para despejar na placa de sílica gel a mistura de
aminoácidos desconhecida um pouco acima da linha marcada inferiormente.
4) Utilizando-se de um pregador, introduzir a placa no béquer e cobrir com a placa de
pétri até que a fase móvel chegue linha superior marcada.
5) Após a fase móvel chegar alinha superior, retirar a placa de sílica, secar e borrifar com a
solução de ninhidrina.
6) Levar a placa de sílica na placa de pétri para estufa por 5 minutos.
7) Após retirar a placa de sílica, realizar o calculo da razão de fluxo(RF) e com o resultado
verificar na tabela qual aminoácido está presente. OBS. Usar a altura do circuncentro
do resultado

RF= Distância (em, mm) percorrida pela a substância

-------------------------------------------------------------------
Distância (em, mm) percorrida pela a fase móvel
RESULTADOS OBSERVADOS

PLACA DE SÍLICA GEL 01(Fase móvel=5,4)

0,5
RF.1= 5,4 ~0,09 (LISINA)
1,3
RF.2= 5,4 ~0,240 (GLICINA)
PLACA DE SÍLICA GEL 02 (Fase móvel=5,5cm)

0,7
RF.1= 5,5 ~0,12 (LISINA)
1,2
RF.2= 5,5 ~0,2180 (GLICINA)

Discussão:
1-Qual o princípios de funcionamento dos seguintes métodos de
separação de proteínas?
a) Cromatografia de troca iônica e de peso molecular
Na cromatografia de troca Iônica, haverá uma separação de
acordo com a afinidade de carga do grupo funcional do
radical do aminoácido. Já na cromatografia de peso
molecular, a mistura de aminoácidos será coloca em um gel
 que separará gradativamente as biomoléculas de acordo
com os seus tamanhos.
b) Cromatografia em papel e de camada delgada
Nesse caso, utiliza-se a solubilidade relativa de
determinados aminoácidos dos quais, ao se saber como
eles se comportam ao longo da movimentação no papel,
pode-se identificar quais aminoácidos estão ali contidos
pelo o cálculo de Fatores de retenção.
2-Onde aplica-se a técnica de Cromatografia em papel?
Aplica-se a técnica de Cromatografia em papel quando se quer
analisar uma mistura de aminoácidos e os recursos são limitados.
3-Quais os outros métodos utilizados na identificação de
aminoácidos?
Eletroforese