03/09/2019

Coleta
• A coleta dos espécimes clínicos é a primeira etapa do
Coleta e diagnóstico laboratorial e deve ser feita corretamente.

Processamento de • Sob pena de inutilizar todo o procedimento

laboratorial posterior, pois amostras coletadas
Amostras Micológicas inadequadamente podem redundar em resultados
falsos.

Prof. M.Sc. Lucas Bochnia Bueno

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• Então, a positividade e segurança de um exame direto

dependem da obtenção de uma amostra apropriada.
• O paciente deve suspender o uso de qualquer
medicamento antifúngico oral por 20 (vinte) dias ou
tópico por pelo menos 10 (dez) dias precedentes a
coleta.
• É de suma importância ressaltar que todos os
espécimes clínicos encaminhados ao laboratório de
micologia médica devem vir acompanhados de uma
ficha padrão, contendo todos os dados clínicos e
epidemiológicos do paciente.

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MATERIAL NECESSÁRIO

• Bisturi pequeno ou lâmina de bisturi;

• Pinça de depilação;
• Essa ficha deve conter, no mínimo, as seguintes • Estiletes;
informações: identificação, origem, residência, tempo • Tesouras;
de evolução da doença, localização e aspectos clínicos
• Lâminas de microscopia;
da lesão, possível contato com animais, uso de drogas
antifúngicas nos últimos 30 dias e suspeita clínica, • Placas de Petri;
quando informado pelo médico. • Frascos;
• Tubos de ensaio com salina esterilizada;
• Swabs;
• Fita adesiva

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PELE
• No dia da coleta, o paciente pode e deve fazer a
higiene corporal normal.
• Não é permitido o uso de cremes, loções, pomadas,
ou outras substâncias gordurosas, pois além de
formarem artefatos dificultando a detecção de
estruturas fúngicas, impede o isolamento dos fungos.
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• Não é necessário fazer raspagem profunda porque o
fungo se encontra na camada mais superficial da pele
chamada córnea, e uma amostra úmida, favorece o
desenvolvimento de bactérias e fungos
contaminantes.
• Nos casos em que não há escamas aparentes,
procura-se raspar bem o local e apelar para a técnica
da fita adesiva.
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• Se o paciente tiver “frieira” (lesão úmida) entre os
dedos das mãos ou pés, colher a amostra com swab
acondicionando em tubo com salina.
• Se a lesão for seca, descamativa fazer duas lâminas
com durex e tentar obter por raspagem, em placa as
escamas, usando lâmina de microscopia ou bisturi.
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• Após assepsia local com álcool a 70%, as amostras de
lesões de pele como escamas ou crostas, devem ser
colhidas preferencialmente com uma lâmina de bisturi
descartável ou com a borda da lâmina de vidro de
microscopia, muito limpa; deve-se colher, raspando
em vários pontos da lesão, procurando as bordas das
lesões mais recentes onde o fungo se encontra em
crescimento ativo.
• Nas lesões cutâneas com vesículas (bolhas pequenas)
e pústulas (bolhas pequenas inflamadas com pus) faz-
se punção com seringa e agulha ou pressiona-se com
o swab, dispondo a amostra em tubo contendo salina.
• O teto das vesículas (pele que cobre as vesículas) deve
ser retirado com pinça de depilação.
• Nas lesões inguinais, inguino-crurais ou axilares, como
são regiões de dobras, geralmente encontram-se
úmidas, fazendo-se necessária a assepsia com álcool a
70%.
• Deixar a região secar um pouco e tentar raspar a pele.
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• Colher também em salina, e fazer duas lâminas com
durex tentando obter pêlos (raros) presos na fita.
• Na lesão anal e perianal, além de colher a amostra na
salina, fazer duas lâminas com durex.
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COURO CABELUDO
• As amostras de lesões no couro cabeludo devem ser
obtidas através da raspagem do local.
• Raspam-se as escamas com bisturi cego ou lâmina de
microscopia.
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• A amostra deve conter tocos de cabelo, o conteúdo
dos folículos tapados e as escamas de pele.
• Os cabelos da área também podem ser puxados com
pinça (os cabelos infectados são facilmente
removíveis).
• Para o exame do couro cabeludo ou dos cabelos, os
mesmos devem estar limpos e secos.
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CABELOS E PÊLOS
• Se a lesão for ao longo do cabelo ou pêlo, como
nódulos, por exemplo, esses devem ser cortados com
tesoura e acondicionados em placas de Petri.
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UNHAS
• Para exame de escamas ungueais, deve-se retirar
totalmente o esmalte pelo menos 2 (dois) dias antes da
coleta.
• As regiões de onde vão ser coletadas as amostras devem
ser limpas com gaze ou algodão com álcool a 70%, para
eliminar contaminantes bacterianos superficiais.
• Os fragmentos de unhas alteradas podem ser colhidos,
raspando-os com o bisturi ou com o auxílio de uma tesoura
limpa.

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• O material que se deposita embaixo da unha pode ser • Em casos de paroníquia (lesões na região da cutícula),
retirado cuidadosamente com o bisturi, com um palito colhem-se as escamas e, se possível, o pus, com um
(tipo de manicure), previamente esterilizado, ou outro swab.
objeto pontiagudo estéril.
• Procurar penetrar bem e colher sempre na região
• Se as lesões são manchas esbranquiçadas na
limite entre a parte saudável e a afetada pelo fungo.
superfície da unha, raspar por cima com bisturi,
• Desprezar sempre as escamas mais externas ou o removendo as escamas em placa de Petri.
material mais superficial, pois se encontram
contaminados com a poeira.

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• Unhas extraídas por processos cirúrgicos não são

adequadas ao exame micológico ou com resíduos
medicamentosos ou de esmalte são consideradas
amostras inadequadas.

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MEMBRANAS MUCOSAS
• Para as infecções de boca ou vagina, o raspado com
lâmina de bisturi ou espátula, nas partes afetadas
(áreas com eritema e/ou placas brancas), é melhor do
que o swab, se o material for processado
imediatamente.
• No caso de coleta vulvar/vaginal, o swab (sempre
embebido em salina ou água estéril) é o mais
adequado.
• Não esquecer que o swab tem que ser mantido úmido
até ser processado o exame.

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OUVIDO

• As infecções fúngicas de ouvido são geralmente secas,

exceto quanto associadas a infecções bacterianas.
• A raspagem do material é sempre melhor para o
diagnóstico laboratorial, embora o swab também
possa ser usado.

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OLHO
• Deve ser solicitado meio de cultura ao laboratório e o
material retirado das áreas de ulcerações e
supurações pelo oftalmologista deve ser inoculado
imediatamente no meio;
• Lágrima e fluídos podem se coletados com pipeta
plástica estéril – chamada de pipeta Pasteur
descartável ou pipeta de transferência.
• O swab não é adequado para este tipo de material.

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AMOSTRAS SUBCUTÂNEAS
• Pode ser raspado as escamas ou crostas da parte
superficial da lesão.
• Aspirado do pus e/ou biopsia, são mais apropriados
para o exame.
• O pus é coletado assepticamente de abscessos não
drenados com uma agulha estéril em seringa.

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• Após a coleta, retirar a agulha com uma pinça e passar

o material para um frasco estéril.
• Nas lesões ulceradas, caso o material tenha que ser
colhido com swab (o que não é recomendado), deve
ser retirado da parte mais profunda da lesão, evitando
encostar na periferia e na pele adjacente.
• Se algum grão for visível no pus, este deve ser incluído
na amostra.

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Considerações Importantes
• Todas as vezes que a coleta for com swab, este deve
ser umedecido em salina ou água estéril antes da
• Para todas as coletas descritas até aqui, colher todo o coleta.
material disponível na lesão.
• Após a coleta, deve permanecer em um frasco estéril
com salina suficiente para mantê-lo úmido até o
• Quanto mais material mais viabilidade na visualização procedimento do exame.
e no crescimento em cultura.

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URINA
• O paciente deve suspender o uso de qualquer
medicamento antifúngico oral por 20 (vinte) dias.
• Abstinência de água por 12h (doze horas).
• Para uma coleta correta, o paciente deve fazer a
higiene normal com água e sabão e secar-se bem.
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• As urinas de 24h (vinte e quatro horas) são
inadequadas por apresentarem um desenvolvimento
aumentado de bactérias e fungos que fazem parte da
microbiota.
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FEZES
• A amostra de fezes deve ser coletada em recipiente
adequado, devidamente identificado.
• A mesma pode ser dissolvida em solução fisiológica.
• Solicitar três amostras de fezes em dias diferentes.
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• A amostra deve ser a primeira urina da manhã de jato
médio, coletada em recipiente estéril, devidamente
identificado.
• Solicitar três amostras de urina da manhã em dias
diferentes.
• As amostras de urina têm validade de até uma hora
após a coleta a temperatura ambiente, para serem
processadas o mais rápido possível.
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• As amostras de fezes têm validade de até duas horas
após a coleta a temperatura ambiente, para serem
processadas o mais rápido possível.
• As amostras de fezes enviadas ao laboratório no final
do dia são inadequadas por apresentarem um
desenvolvimento aumentado de bactérias e fungos
que fazem parte da microbiota.
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• As amostras de fezes coletadas em recipientes

contendo formol são inadequadas para o exame, em
especial para a cultura, devido à propriedade
antifúngica do formol.

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ESCARRO
• Preferencialmente deve ser colhido por broncoscopia:
lavado ou aspirado brônquico.
• Quando não for possível, o escarro deve ser colhido
da mesma maneira como é colhido para o exame de
tuberculose, não esquecendo da higiene da boca
antes da coleta, para diminuir a contaminação pelos
saprófitas da cavidade bucal e da faringe.
• O escarro deve ser colhido de tosse profunda pela
manhã, logo após o paciente despertar.
• O material deve ser coletado em recipiente de boca
larga ou placa de Petri estéreis, devidamente
identificados.
• Solicitar três amostras em dias diferentes.

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• O exame de escarro, tanto o direto como a cultura, na

maioria das vezes não é satisfatório, porque não é
confiável, já que é uma amostra muito contaminada.
• Portanto, quando houver a possibilidade do exame
sorológico, deve-se optar pelo último.
• As amostras de 24h (vinte e quatro horas) e as que
foram coletadas em recipientes não esterilizados são
inadequadas.

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SANGUE • Deve-se coletar 3 - 5ml de sangue e depositar em

• O paciente deve suspender o uso de qualquer
medicamento antifúngico oral por 20 (vinte) dias.
• O paciente deve estar em jejum por 12h (doze horas).
• Deve ser feito assepsia antes da coleta, sendo a
amostra obtida por punção sanguínea.
tubo de ensaio esterilizado contendo EDTA 1%.
• A proporção utilizada é 0,1ml de EDTA 1% para cada
1ml de sangue.
• Fazer extensão sanguínea.
• Aquelas coletadas em tubo de ensaio não esterilizadas
ou sem anticoagulante são inviáveis.

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Processamento

• Exame direto – coloração e observação direta da

amostras

• Cultura/semeadura – observação do crescimento

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SEMEADURA
EXAME MICOLÓGICO DIRETO • Materiais de sítios estéreis - fazer a
• Aguardar o tempo suficiente para o clareamento do material semeadura em cabine de fluxo. Se não for
• Evitar o uso de lamínula da mesma largura da lâmina possível, fazer a semeadura o mais próximo
• Fazer pressão sobre a lamínula antes de levar ao microscópio de uma chama de bico de Bunsen.
• Não utilizar excesso do material biológico • Adotar os seguintes cuidados:
• Cortar as biópsias em pequenos fragmentos dentro de placas de
Petri • Usar luvas
• Utilizar objetivas de aumento de 10 e 40X - nunca usar a de 100X • Abrir o tubo de meio na hora da semeadura.
quando utilizar KOH.
• Exames diretos também podem ser feitos em materiais fixados e • Após semeadura, fechar imediatamente os
corados tubos.
• Em casos suspeitos de Cryptococcus, utilizar tinta nanquim

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• Segurar a tampa do tubo enquanto semeia.

• Flambar a boca do tubo na chama antes e após a
semeadura.
• Desprezar as primeira gotas quando for semear sangue ou
Líquor, se os mesmos estiverem em seringas.
• A semeadura deve ser feita em pelo menos dois tipos de
meio de cultura diferentes. Seletivo e não seletivo.
• Fazer a assepsia da rolha da garrafa de hemocultura.
• Fragmento de tecidos devem ser cortados de maneira
homogênea.

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Candida sp em esfregaço vaginal - GRAM

• COLORAÇÃO DE GRAM
• COLORAÇÃO DE GIEMSA
• COLORAÇÃO COM TINTA NANQUIM
• CORANTE AZUL DE LACTOFENOL
• SOLUÇÃO DE KOH

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Histoplasma capsulatum - Giemsa Criptococcus sp – Tinta Nanquim

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Aspergillus sp - AZUL DE LACTOFENOL
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• Ágar Batata – microcultivo em lâmina e produção do
pigmento rubro do T. rubrum
• Ágar CGB – separação das espécies de Cryptococcus
• Ágares: ALPISTE, STAIB e ÁGAR L -DOPA – separação de
leveduras em geral das leveduras das espécies de
Cryptococcus
• Ágar Cornmeal ( fubá) – microcultivo de leveduras em
geral e ajuda na identificação de C. albicans
• Ágar Czapek – estudo das frutificações e características
coloniais de Penicillium sp e Aspergillus sp
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MEIOS DE CULTURA UTILIZADOS DIARIAMENTE
• Ágar Sabouraud com antibiótico.
• Ágar Sabouraud sem antibiótico.
• Ágar Batata
• Ágar seletivo para fungos patogênicos
(CICLOHEXIMIDA)
• Ágar Sabouraud seletivo.
• Ágar Mycosel.
• Ágar Micobiótico.
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MEIOS DE CULTURA EM MICOLOGIA
• Ágar seletivo para fungos patogênicos – quando se quer
evitar oportunistas ou contaminantes
• Ágar Sabouraud com antibiótico – utilizado para todos os
fungos e evita contaminação bacteriana
• Ágar Sabouraud sem antibiótico – para quando houver
suspeição de Actinomicetos (pseudomicetomas)
• Ágar BHI e Ágar sangue – formas leveduriformes dos
termodimórficos
• Ágar uréia de Christisen - teste fisiológico para separar
gêneros e espécies quando um é ureáse positivo e outro
não
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• Ágar YNB – Auxanograma de carboidratos
• Ágar YCB – Auxanograma de fontes nitrogenadas
• Ágar de Dixon – isolamento de Malassezia sp – não
identifica espécies
• Meios líquidos para hemocultura – Normalmente
usados em casos de micoses sistêmicas ou
disseminadas Ex. : Bactec™
• Meios industrializados prontos para identificação
através de cores – muito utilizados para a
identificação de leveduras
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MEIOS COMERCIAIS LEVEDURAS
• Chromoagar Candida
• API 20C AUX (BioMérieux)
• ID 32C (BioMérieux)
• Candifast (International Microbio)
• Vitek (BioMérieux)
• Outros
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Obrigado!

lucas.buenoo@hotmail.com

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