Biotecnologia – Prova • “Biotecnologia define-se pelo uso de

Classificação dos Processos Fermentativos conhecimentos sobre os processos biológicos e

 Os comportamentos relativos das funções sobre as propriedades dos seres vivos, com o fim
μ=μ(t), fornecem a base para uma importante de resolver problemas e criar produtos de
classificação dos processos fermentativos utilidade.”
proposta por GADEN. • A definição ampla de biotecnologia é o uso de
fermentação alcoólica organismos vivos ou parte deles, para a
As velocidades produção de bens e serviços.
específicas de • Nesta definição se enquadram um conjunto de
crescimento (μx) atividades que o homem vem desenvolvendo há
do microrganismo milhares de anos, como a produção de
apresenta o alimentos fermentados (pão, vinho, iogurte,
andamento das cerveja, e outros).
outras duas • Por outro lado a biotecnologia moderna se
curvas. Então a considera aquela que faz uso da informação
formação de genética, incorporando técnicas de DNA
produto (o recombinante.
metabólito primário) está associado ao crescimento.
fermentação cítrica
Observam-se
duas fases
distintas: 1ª
fase, onde a
velocidade
específica de
consumo do
açúcar está
diretamente
relacionada à
de crescimento do microrganismo, não havendo
praticamente formação do produto (ácido cítrico).
Há semelhança entre os perfis das três velocidades
específicas.
Formação do produto parcialmente associada ao
crescimento. 1-produção
fermentações antibiótico
complexas 2-Consumo
A máxima açúcar
velocidade 3-Consumo de
oxigênio
específica de 4-Crescimento
produção do de
antibiótico microrganismo
ocorre
quando as
demais
velocidades
específicas sofreram redução significativa.
No início há fermentação predominante as
transformações produtoras de energia com a
formação biomassa, sendo que o antibiótico é
formado quando o metabolismo oxidativo se
encontra atenuado.
Cinética Cinética de Reações Enzimática
• A velocidade de uma reação (transformação dos Objetivos: (a) medir as velocidades das
reagentes em produto) é informado pela transformações que se processar; (b) estudar a
cinética; influência de condições de trabalho ( como exemplo:
• O exemplo da conversão irreversível de uma concentrações dos reagentes e das enzimas,
substância A em B: A  B temperaturas, pH, concentrações de ativadores e de
•
d A
A velocidade da reação (V) será: inibidores) naquelas velocidades; (c) correlacionar
d B  V  (quer por meio de equações empíricas, quer por
V dt
dt meio de modelos matemáticos) as velocidades das
• A unidade de V é moles/litro/segundo, se e transformações com alguns que as afetam; (d)
representarem as concentrações molares de B e estabelecer critérios para o controle do processo; (e)
de A. A velocidade da reação diminui à medida colaborar na otimização do processo considerado; (f)
que a reação prossegue e a concentração de A é projetar o reator mais adequado.
reduzida. Medida da Velocidade
• A velocidade é proporcional à concentração de A reação:
S  P  Q  ...
E
A: d A
V   k A S-Substrato / P e Q –Produtos/ E-Enzima
dt
A constante k é chamada constante de velocidade da (catalizador)
-1
reação (unidade de s ).  Exemplo: Decomposição da água e oxigênio, na
 A maior parte das reações químicas processadas presença da enzima catalase: H2O2
nos organismos são mais complexas, por H2O + ½ O2
envolverem pelo menos três moléculas - Medir a concentração do substrato (ou de um dos
diferentes e por serem, geralmente, reversíveis. produtos) durante o desenvolvimento da reação a
São reações de segunda ordem, representadas: partir de seu inícios;
2A  B  C A B  C  D - Essas medidas conduzirão a curva de velocidade de
consumo do substrato (ou a formação do produto)
 As velocidades de reações serão varia com o tempo, porque, como consequência da
respectivamente: reação variam as condições em o sistema se
V  k AB
V  k A
2 encontra.
 O único instante em que as condições
Velocidade da Reação experimentais são conhecidas é o instante
 Estado Transição: As moléculas presentes em 1 inicial. A velocidade da reação
mol de uma substância precisam de uma enzimática deve ser calculada
quantidade mínima de energia para colidirem no instante t=0,
com orientação e ocorrer o processo reativo. obtendo assim a
 Energia Ativação: É o valor mínimo de energia velocidade inicial
que as moléculas dos reagentes devem possuir ou de consumo do
para que uma colisão entre elas seja eficaz. substrato ou de
Quanto maior for a energia de ativação, mais formação do
lenta será a reação. produto
- Separa os reagentes dos produtos e a velocidade da
reação pode ser aumentada da seguintes maneiras:
(1)Aumentando o número de moléculas em solução
conforme equação química; (2)Aumentando o  A velocidade da reação é frequentemente
número de choques entre as moléculas; representada por uma velocidade média de
(3)Diminuindo a barreira imposta pela energia consumo, ou de produção de alguma substância
ativação ou ainda variação de uma propriedade do
 A redução no valor da energia de ativação pode sistema (viscosidade, textura, absorbância, etc.)
ser obtida pela presença de catalizadores, em um intervalo de tempo prefixado.
compostos capazes de aumentar a velocidade
da reação sem alterar a proporção entre
reagentes e produtos encontrada no final da
reação e sem serem efetivamente consumidos
durante o processo;
 Os catalizadores aceleram uma reação química
consiste em
criar um novo
“caminho” de
reação, para o
qual a energia
 O modelo cinético de Michaelis e Menten é um
de ativação
dos mais aceitos com os objetivo básico de
requerida é
explicar a influência das concentrações iniciais
menor.
 de enzima e de substrato na velocidade inicial A constante km, denominada constante de Michaelis
da reação enzimática. da enzima é a concentração de substrato à qual
 As hipóteses básicas desse modelo são: (a) o corresponde uma velocidade igual à metade da
substrato e a enzima reagem reversivelmente máxima. V
entre si formando um composto intermediário  Fazendo S=km a equação resulta: v 
denominado complexo enzima-substrato; (b) o 2
complexo formado ou se decompõe, ou reage  Se a constante de velocidade k3 for muito
com substância, regenerando a enzima e menor do que k2: k2
formando os produtos da reação. km 
Influência das Concentrações da Enzima e do k1
Substrato Km será praticamente igual à constante de equilíbrio
 Lei de Michaelis e Menten : A velocidade da de dissociação do complexo ES.
reação é proporcional à concentração da  A determinação de km e V a partir de valores
enzima experimentais de S e v, pode ser efetuada
linearização: 1 1 km 1
  .
v V V S
Método de Lineweaver-Burk, consiste em inverter
ambos os membros.
 Obtendo-se assim o coeficiente linear (1/V) e o
coeficiente angular (km/V) da reta.

 Nos ensaios realizados diferem entre si apenas

pela concentração inicial do substrato e a
velocidade inicial da reação é afetada
 A curva obtida é análoga à que se observa em
fenômenos em que ocorre saturação: a
velocidade da reação é função crescente do
substrato até determinado valor dessa
concentração, mantendo-se praticamente
constante para concentrações de substrato
superiores a esse valor.

 Segundo a hipótese de Briggs e Haldane, a

concentração do complexo se mantém
constante (o regime transiente inicial muito
curto da ordem de alguns micro-segundos),
dx/dt=0.
k1.e.s e.s km 
k 2  k 3
x  k1
k 2  k 3  k1.s km  s
 Calcular a velocidade de formação do produto:
S
v  k 3.x  k 3.e
km  S
 O máximo valor da velocidade será alcançado
quando toda a enzima se encontrar na forma de
complexo, quando x=e
 Indicando-se com V essa velocidade máxima,
então:
V  k 3.e
 Logo:
S
v V
km  S

PROCESSO FERMENTATIVO
Esquema Geral de um Processo Fermentativo
 O sucesso de um processo fermentativo
depende quatro pontos básicos:
microrganismo; O meio de cultura; A forma de
condução do processo fermentativo; Etapas de
recuperação do produto.
 O processo fermentativo no Brasil fica bem
evidenciado na produção de etanol;
 No tratamento biológico de efluentes pela
digestão anaeróbia com o surgimento dos
reatores contínuos operados através de fluxo
ascendente e reciclo interno de células;
 A recuperação de produtos de alto valor
agregado como: Antibióticos; Enzimas; Outras
proteínas (insulina, hormônio do crescimento,
vacinas, etc ...);
- As operações de recuperação agregam 50 a 70% do
custo final do produto indicando a sua importância
em termos de uma adequada definição.
Cinética de Processos Fermentativos
 O estudo cinético de um processo fermentativo
consiste inicialmente na análise da evolução dos
valores de concentração de um ou mais
componentes do sistema de cultivo, em função
do tempo de fermentação.
 Os componentes são: O microrganismo (ou
biomassa); Os produtos do metabolismo (ou
metabólicos); os nutrientes ou substratos.
 Os valores experimentais de concentração,
quando representados em função do tempo,
permitirão os traçados das curvas de ajuste
indicados por X=X(t), P=P(t) e S=S(t).
Métodos Medição da Concentração Celular
 Os métodos comumente utilizados para a
medida da concentração celular X, sabe-se:
Turbidimetria ou espectrofotometria; Biomassa
seca; Número total de células; Número de
células unidades formadora de colônias;
Volume do sedimentos obtidos por
centrifugação.
 Quando as conclusões sobre um cultivo forem
baseadas unicamente em dois valores X, S ou P
(como valores iniciais e finais), é necessário o
conhecimento dos valores intermediários, que
permitem definir os perfis das curvas para
análise adequada do fenômeno;
 A descrição quantitativa de uma fermentação, a
identificação do processo está baseada no
instante em X e P apresentam os valores
máximos (Xm e Pm).
Parâmetros de Transformação
 As velocidades instantâneas de transformação
- V de crescimento ou reprodução de
O microrganismo. dx
rx 
dt
- V de consumo de substrato. dS
rs  
dt
dP
- V de formação de produto. rP 
dt
 As velocidades, traduzidas pelos valores das
inclinações das tangentes às respectivas curvas
são também conhecidas volumétricas de
transformação, cujas unidades correspondem a
-3 -1
(massa)X(comprimento) X(tempo) .
 Um interesse prático está na avaliação do
desempenho de um processo fermentativo, é a
produtividade em biomassa, através da
definição especial da velocidade.
- Está equação mostra que a produtividades
representa a velocidade média de crescimento
referente ao tempo total ou final da fermentação
xm  xo
Px 
Tf
- A Velocidade média de formação do produto, onde
Tfp não é necessariamente igual a Tf . A concentração
inicial do produto é geralmente desprezível frente ao
valor final máximo, Pm. Pm  Po
PP 
T fp
As Velocidades Específicas de Transformação
 A concentração microbiana X aumenta durante
um cultivo descontinuo, aumentando
conseqüentemente a concentração do
complexo enzimático responsável pela
transformação do substrato S no produto P, é
mais lógico analisar os valores das velocidades
instantâneas com relação à referida
concentração microbiana, especificando-as com
respeito ao valor de X em um dado instante.
 São denominadas velocidades específicas de
crescimento, consumo de substrato e formação
de produto respectivamente, tendo sido GADEN
o autor destas definições.
 Um determinado tempo t de fermentação, os
correspondentes valores de X, S e P podem ser
relacionados entre si, através de fatores de
conversão definidos:
- São denominadas velocidades específicas de
crescimento, consumo de substrato e formação de
produto respectivamente, tendo sido GADEN o
autor destas definições.
X  Xo P  Po
yx  yP 
S So  S S So  S
 X  Xo  O fator de conversão yx/s foi originalmente
yx  definido por MONOD, tendo sido útil na análise
P P  Po
de alguns processos, como, por exemplo, na
 Estas expressões podem ser aplicadas no tempo produção de proteínas unicelulares a partir de
final de fermentação, onde X=Xm, P=Pm e S=0, carboidratos ou hidrocarbonetos. Desde que
ou quando os fatores permanecem constantes seu valor seja conhecido, é possível calcular o
(o que não ocorre c/ freqüência). valor de X a partir de um valor conhecido de S e
Xm  Xo Xm  Xo Pm  Po vice-versa.
yx  yx  yP   dx dx dP
S So P Pm  Po S So yx  yx  yP 
S  ds P dp S  ds
 Eliminando-se a grandeza Xo pela combinação
das equações Xm  X Baseados na velocidade específica e na velocidade
yx  instantânea
S S rx  x rx  x rp p
yx   yx   yP  
- Nem sempre o substrato se esgota S rs  s P rP  P S rs s
completamente, quando a concentração celular
apresenta o seu valor máximo.

x  .
1 dx 1  dS  P  .
1 dP
 s  .  
x dt x  dt  x dt