LIPASE Liquiform
Instruções de Uso
Finalidade . Sistema enzimático para determinação quantitativa
da lipase pancreática em soro e plasma.
Uso profissional.
[Somente para uso diagnóstico in vitro.]
Princípio . O substrato cromogênico 1-2-o-dilauril-rac-glicero-
3-ácido glutárico(6-metilresorufina)-ester é clivado em meio alcalino
por ação catalítica da lipase e forma o 1-2-o-dilauril-rac-glicerol
e o intermediário instável ácido glutárico-(6-metilresorufina)ester que
se decompõe espontaneamente no meio alcalino para formar
ácido glutárico e metilresorufina (cor vermelha). A intensidade da cor
vermelha formada é diretamente proporcional à atividade da lipase
na amostra.
Lipase
substrato cromogênico 1-2-o-dilauril-rac-glicerol + ácido
glutárico-(6-metilresorufina) ester.
decomposição
Ácido glutárico-(6-metilresorufina) ester
espontânea
ácido glutárico + metilresorufina
Características do sistema1,2 . O sistema Lipase Liquiform
da Labtest utiliza um substrato cromogênico sintético similar
aos triglicérides com ácidos graxos de cadeias longas, que é
clivado por ação da lipase pancreática ativada enzimaticamente pela
colipase na presença de surfactantes.
O ensaio enzimático utiliza uma microemulsão homogênea estável
que proporciona uma interface com qualidade constante entre as
fases lipóide (substrato) e aquosa (meio da reação contendo
lipase). Por consequência se obtém a otimização do desempenho
do ensaio com elevada especificidade analítica e excelente
reprodutibilidade metodológica.
Várias esterases comumente presentes nas amostras de sangue,
capazes de produzir interferências em outros métodos para
determinação da lipase, incluindo o método turbidimétrico, não
produziram interferência neste método.
O método é cinco vezes mais sensível que o método turbidimétrico
e não apresenta os inconvenientes de resultados negativos quando
a lipase se encontra com atividade diminuída ou próxima do limite
inferior do intervalo de referência.
01 Português - Ref.:
107
Ref.: 107
MS 10009010138
Concentrações de triglicérides até 2000 mg/dL, bilirrubina até 60
mg/dL e hemoglobina até 500 mg/dL não interferem
significativamente na reação.
O método pode ser utilizado em procedimento manual ou
procedimentos semiautomáticos e totalmente automatizados que
permitem a aplicação de sistema bi-reagente.
‰
Metodologia . Enzimática colorimétrica.
Reagentes
‰
1. - Reagente 1 - Armazenar entre 2-8ºC.
Contém tampão 50 mmol/L pH 8,0; colipase 1,0 mg/L;
ativador; surfactante e azida sódica <0,095%.
2. - Reagente 2 - Armazenar entre 2-8ºC.
Contém tampão 10 mmol/L pH 4,0; 1-2-o-dilauril-rac-glicero-3-ácido
glutárico(6-metilresorufina)ester 270 mol/L; surfactante e azida sódica
<0,095%.
Os reagentes quando armazenados nas condições indicadas são
estáveis até a data de expiração impressa no rótulo. Durante o
manuseio, os reagentes estão sujeitos a contaminações de natureza
química e microbiana que podem provocar redução da
estabilidade.
Os reagentes devem ser protegidos da luz.
Precauções e cuidados especiais
Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na
manipulação dos reagentes, que não devem ser pipetados com a
boca.
Os Reagentes 1 e 2 contêm azida sódica que é tóxica. Não ingerir
e, no caso de contato com os olhos lavar imediatamente com
grande quantidade de água e procurar auxílio médico. A azida sódica
pode formar compostos altamente explosivos com tubulações de
chumbo e cobre. Portanto, utilizar grandes volumes de água para
descartar os reagentes.
Materiais necessários e não fornecidos
1. Fotômetro com cubeta termostatizada a 37ºC capaz de medir
com exatidão a absorbância em 570 nm (550 a 600).
2. Pipetas para medir amostras e reagentes.
3. Cronômetro.
 Amostra 7. Usar a diferença de absorbância (A) entre os dois tempos
(A180 - A90) para calcular os resultados.
Usar soro ou plasma (heparina). Amostras com EDTA, citrato ou
fluoreto produzem resultados diminuídos por inibição da atividade
Cálculos . Ver linearidade.
da lipase.

Teste (A180 - A90)

A atividade da lipase na amostra é estável 7 dias entre 2-25ºC e 1
Lipase (U/L) = x CC
ano a 20ºC negativos. Congelar o material em recipiente
Calibrador (A180 - A90)
hermeticamente fechado (“criotubos”) para evitar evaporação. Evitar
congelamentos e descongelamentos repetidos. Amostras
CC: concentração do calibrador
descongeladas devem ser bem homogeneizadas antes da utilização.
Não usar vórtex ou similar. Não usar amostras com sinais de
contaminação microbiana.
Exemplo

Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de Teste: A90 = 0,0334 A180 =
0,0864 Calibrador: A90 = 0,0492 A180
sangue não transmitem infecções, todas devem ser
= 0,1273
consideradas como potencialmente infectantes. Portanto, ao
manuseá-las devem-se seguir as normas estabelecidas para Concentração do Calibrador: 93,4 U/L
biossegurança.
0,0864 - 0,0334
Para descartar os reagentes e o material biológico sugerimos Lipase (U/L) = x 93,4 =
aplicar as normas locais, estaduais ou federais de proteção 63,4 0,1273 - 0,0492
ambiental.
Devido a grande reprodutibilidade que pode ser obtida com a
Interferências metodologia, o método do fator pode ser empregado.

Concentrações de bilirrubina total até 60 mg/dL, hemoglobina até CC

500 mg/dL e triglicérides até 2000 mg/dL não interferem FATOR =
significativamente na reação. Calibrador (A180 - A90)

Amostras com bilirrubina, hemoglobina e triglicérides em

Lipase (U/L) = Teste (A180 - A90) x
concentrações maiores que as acima referidas devem ser diluídas
em NaCl 150 mmol/L (0,85%) antes de se realizar os ensaios.
Fator
Multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluição.
Procedimento
A metodologia deve ser
necessariamente realizada
em formato bi-
reagente e a ordem de adição:
reagente 1, amostra e reagente
2 não deve ser alterada.
Os reagentes devem
permanecer abertos e fora da
temperatura de
armazenamento somente o
tempo necessário para obter
o volume a ser utilizado no
teste.
1. Ajustar a temperatura do
fotômetro para 37ºC e o
comprimento de onda em
570 nm (550 - 600);
2. Acertar o zero com água
deionizada;
E
x
93,4
e
m
p
l
o
3. Em um tubo rotulado
Teste ou Calibrador, pipetar
0,70 mL do Reagente 1;
4. Adicionar 0,010 mL de
amostra ou calibrador;
5. Adicionar 0,40 mL do
Reagente 2, homogeneizar,
transferir imediatamente para
a cubeta termostatizada e
disparar simultaneamente o
cronômetro;
6. Medir as absorbâncias aos
90 e 180 segundos;

02 Português - Ref.:
107
Fato
r= =
1196
0,1
273
-
0,0
492

Lipase (U/L) = (0,0864 -

0,0334) x 1196 = 63,4

Calibração . A
absortividade molar da
metilresorufina, produto da
reação, é utilizada como
sistema de referência para
a calibração do ensaio.

Calibrações manuais
obter o fator de calibração
ao usar novo lote de
reagentes ou quando o
controle interno da
qualidade indicar.

Sistemas automáticos
Branco de reagentes: água
ou solução de cloreto de
sódio 150 mmol/L (0,85%);
Calibrador: Linha Calibra da
Labtest.

Intervalos de calibração;
Calibração de 2 pontos ao
mudar de lote;
Calibração de 2 pontos
quando o controle da
qualidade indicar.

02 Português - Ref.:
107
 Linearidade Método Lipase
Comparativo (MC) Liquiform
A reação é linear entre 3,0 e 300 U/L. Em casos de valores maiores Número de amostras 88 88
que 300 U/L, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L (0,85%), Intervalo (U/L) -388 a 756 10 a 374
realizar nova determinação e multiplicar o resultado obtido pelo Lipase Liquiform =
fator de diluição. Equação da regressão
0,914*(MC)-0,581 U/L
Coeficiente de correlação 0,985
Controle interno da qualidade . O laboratório deve manter
um programa de controle interno da qualidade que defina
Utilizando a equação da regressão, o erro sistemático (bias) estimado
claramente os regulamentos aplicáveis, objetivos, procedimentos,
é igual a -10,5% para o nível de 30 U/L e -9,2% para o nível de 90
critérios para especificações da qualidade e limites de tolerância,
U/L. A média dos erros é menor que o erro sistemático analítico
ações corretivas e registro das atividades. Materiais de controle
da especificação desejável baseada nos componentes da VB que é
devem ser utilizados para monitorizar a imprecisão da medição e
10,1%.
desvios da calibração. Sugere-se
que as especificações para o coeficiente de variação e erro total
3-5
sejam baseadas nos componentes da variação biológica (VB) . Estudos de precisão . Os estudos de precisão foram
realizados utilizando duas amostras.
Sugere-se utilizar os produtos da linha Qualitrol - Labtest para
controle interno da qualidade em ensaios de química clínica.
Repetitividade - imprecisão intraensaio
Intervalo de referência 6,7
. Estes valores devem ser N Média DP (U/L) CV (%)
usados apenas como orientação. Recomenda-se que cada Amostra 1 21 30,0 0,204 0,68
laboratório estabeleça, na população atendida, sua própria faixa Amostra 2 21 90,0 0,585 0,65
de valores de referência.

Reprodutibilidade - imprecisão total

Idade Intervalo de referência (U/L)
N Média DP (U/L) CV (%)
<1 ano 0 - 29
Amostra 1 21 30,0 0,390 1,30
1 a 12 anos 10 - 37
Amostra 2 21 90,0 1,125 1,25
13 a 18 anos 11 - 46
>18 anos 13 - 60
A imprecisão encontrada atende a especificação desejável para
Conversão: Unidades convencionais (U/L) x 0,0167 = Unidades imprecisão total baseada nos componentes da VB que é 11,6%.
SI (kat/L)
O erro total (erro aleatório + erro sistemático) estimado é igual a
8 12,6% para o nível de 30 U/L e 11,3% para o nível de 90 U/L. Os
Características de desempenho resultados indicam que o método atende à especificação desejável
para erro total (29,1%) baseada nos componentes da VB.
Estudos de Recuperação . Em duas amostras com
concentrações de Lipase iguais a 48,7 U/L e 90,3 U/L foram
Sensibilidade metodológica . Uma amostra não
adicionadas quantidades diferentes do analito, sendo obtidos os
contendo Lipase foi utilizada para calcular o limite de detecção do
seguintes resultados:
ensaio, tendo sido encontrado um valor igual a 1,0 U/L,
equivalente à média de 10 replicatas mais três desvios padrão.
Atividade (U/L)

Recuperação Efeitos da diluição da matriz . Uma amostra com

Inicial Adicionada Esperada Encontrada concentração igual 298 U/L foi utilizada para avaliar a resposta do
(%)
48,7 48,7 97,4 90,3 92,7 sistema na diluição da matriz com solução de NaCl 150 mmol/L
90,3 90,3 180,6 164,2 91,2 (0,85%). Usando fator de diluição igual a 2 foi encontrada
recuperação média de 110,2% que corresponde a um erro
O erro sistemático proporcional médio estimado é igual a -2,4 U/L sistemático médio igual a 10,2%.
para o nível de 30 U/L e -7,2 U/L para o nível de 90 U/L.
Significado clínico . A lipase pancreática é uma enzima
Estudos de comparação de métodos . A exatidão do digestiva produzida principalmente pelas células acinares do pâncreas
método foi verificada por comparação com o método exócrino. Tem o papel fisiológico de hidrolisar triglicérides com
turbidimétrico, sendo obtidos os seguintes resultados: ácidos graxos de cadeias longas no intestino delgado (lipólise).

03 Português - Ref.:
107
Sua avaliação é essencial no diagnóstico das patologias pancreáticas.
Ela se eleva nas primeiras 8 horas após o início da agressão
pancreática, atingindo valores mais altos em 24 horas e mantendo-
se elevada em torno de 7 a 14 dias. Seus níveis geralmente não
permanecem elevados por mais de 2 semanas. Quando isso
acontece, sugere complicações como abscessos e pseudocistos.
Normalmente seus níveis elevam-se quase que paralelamente aos
da amilase, um pouco mais tarde, mantendo-se elevados por um
período mais longo. Seu aumento não necessariamente se
correlaciona com a gravidade da doença.
O uso combinado da avaliação sérica da lipase e de amilase
permite um melhor diagnóstico. Cerca de 20% dos casos de
pancreatite aguda cursam com níveis de amilase normais e com
a lipase isoladamente elevada. Nas parotidites agudas, em que a
amilase pode se apresentar elevada, os níveis séricos de lipase
não se alteram, auxiliando no diagnóstico diferencial.
Referências
1. Neumann U, Junius M, Maier B. A Sensitive Colorimetric Assay
for the Kinetic Lipase Determination in Serum. Boehringer
Mannheim GmbH, Biochemical Research Center, 1986.
2. Prinzing U, Zielenski L, Schellong L, Klein G, Meier G,
Hammer B. Kinetic colorimetric assay for pancreatic lipase
(PL) based on a chromogenic substrate. Poster No 122, 50th
Annual Meeting of the
American Association for Clinical Chemistry,1998.
3. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología
Molecular, Base de Datos de Variación Biológica.
Disponível em:
<http://www.seqc.es/ar ticle/ar ticleview/330/1/170> (acesso em
04/2006).

A lipase é, portanto um marcador mais específico de doença
pancreática aguda do que a amilase. Seus níveis estão aumentados
em pacientes com pancreatite aguda e recorrente, abscesso ou
pseudocisto pancreático, trauma, carcinoma de pâncreas,
obstrução dos ductos pancreáticos e no uso de fármacos
(opiáceos). Está também aumentada na maior parte das condições
inflamatórias da cavidade abdominal, doenças do trato biliar,
abscessos abdominais e insuficiência renal aguda e crônica (com
menor freqüência do que a amilase).
A lipase é filtrada pelos glomérulos, devido ao seu baixo peso
molecular. Em condições usuais, é totalmente reabsorvida pelos
túbulos proximais, estando ausente da urina de pacientes normais. Nos
distúrbios renais que cursam com alteração da capacidade de
reabsorção tubular, a lipase pode ser detectada na urina, numa
relação inversa com o clearance da creatinina.
4. Basques JC. Especificações da Qualidade Analítica. Labtest
Diagnóstica 2005.
5. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem
1981;27:493- 501.
6. Junge W, Abicht K, Goldman J, Luthe H, Niederau Ch, Parker
J, Watanabe S, Prinzing U, Klein G. Evaluation of the Colorimetric
Liquid Assay for Pancreatic Lipase on Hitachi Analyzers in 7
Clinical Centers in Europe, Japan and USA. Clin Chem Lab, 1999,
37 (Special Suppl): 49-63.
7. Abicht K, Heiduk M, Körn S, Klein G. Lipase, p-amylase, CRP-hs
and creatinine: reference intervals from infancy to childhood.
Poster presented at the 15th IFCC-FESCC EUROPEAN Congress of
Clinical Chemistry and Laboratory Medicine, 2003.

Observações 8. Labtest: Dados de Arquivo.

1. A limpeza e secagem adequadas do material utilizado são

Apresentação
fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obtenção de
resultados corretos. Produto Referência Conteúdo
1 3 X 10 mL
2. O laboratório clínico tem como objetivo fornecer resultados exatos Lipase Liquiform 107-3/16
2 3 X 6 mL
e precisos. A utilização de água de qualidade inadequada é uma
Lipase Liquiform 1 2 X 17 mL
causa potencial de erros analíticos. A água deionizada ou destilada 107-2/26
Labmax 560/400 2 2 X 9 mL
utilizada no laboratório deve ter a qualidade adequada a cada
aplicação. Assim, para preparar reagentes, usar nas medições e para
uso no enxágue final da vidraria, deve ter resistividade 1 Estão disponíveis aplicações para sistemas automáticos que
megaohm.cm ou condutividade permitem a utilização de metodologias bi-reagente.
1 microsiemens/cm e concentração de silicatos <0,1 mg/L.
Quando a coluna deionizadora está com sua capacidade saturada *O número de testes em aplicações automáticas depende dos
ocorre produção de água alcalina com liberação de vários íons, parâmetros de programação.
silicatos e substâncias com grande poder de oxidação ou redução
que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, Informações ao consumidor
alterando os resultados de modo imprevisível. Assim, é
fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da [Termos e condições de garantia]
água.
A Labtest Diagnóstica garante o desempenho deste produto dentro
3. Para uma revisão das fontes fisiopatológicas e medicamentosas das especificações até a data de expiração indicada nos rótulos, desde
de interferência nos resultados e na metodologia sugere-se que os cuidados de utilização e armazenamento indicados nos
consultar: www.fxol.org. rótulos e nestas instruções sejam seguidos corretamente.

04 Português - Ref.:
107
 Labtest Diagnóstica S.A.
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-
000 Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil -
www.labtest.com.br
Serviço de Apoio ao Cliente 0800 031 34 11 (Ligação
Gratuita) e-mail: sac@labtest.com.br

Revisão: Abril,
2014 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.
Ref.: 260117 Reprodução sob prévia autorização

05 Português - Ref.:
107
 Símbolos utilizados com produtos diagnósticos in vitro
Símbolos usados con productos diagnósticos in vitro
Symbols used with ivd devices

Conteúdo suficiente para < n > Risco biológico

testes Contenido suficiente para < n Riesgo biológico
> tests Contains sufficient for < n > Biological risk
tests

Data limite de utilização (aaaa-mm-dd ou Marca CE

mm/aaaa) Marcado CE
Estable hasta (aaaa-mm-dd o mm/aaaa) CE Mark
Use by (yyyy-mm-dd or mm/yyyy)

Material Calibrador Tóxico

Material Calibrador Tóxico
Calibrator Material Poison

Material Calibrador Reagente

Material Calibrador Reactivo
Calibrator Material Reagent

Limite de temperatura (conservar a) Fabricado por

Temperatura limite (conservar a) Elaborado por
Temperature limitation (store at) Manufactured by

Representante Autorizado na Comunidade Europeia Número do lote

Representante autorizado en la Comunidad Europea Denominación de lote
Authorized Representative in the European Community Batch code

Consultar instruções de uso Controle

Consultar instrucciones de uso Control
Consult instructions for use Control

Número do catálogo Controle negativo

Número de catálogo Control negativo
Catalog Number Negative control

Adições ou alterações significativas Controle positivo

Cambios o suplementos Control positivo
significativos Significant additions Positive control
or changes

Produto diagnóstico in vitro Controle

Dispositivo de diagnóstico in vitro Control
In vitro diagnostic device Control

Liofilizado Corrosivo
Liofilizado Corrosivo
Lyophilized Corrosive

Período após abertura Uso veterinário

Período post-abertura Uso veterinario
Period after-opening Veterinary use

Instalar até
Instalar hasta
Install before Ref.: 140214

06 Português - Ref.:
107