1. Quais são os componentes químicos de um PCR? E a função de cada um?

Dna-polimerase: A mais usada é a taq-polimerase; é a catalisadora da extensão dos

primer, aumento na sua concentração pode resultar na diminuição da sua
especificidade.
Solução tampão : Basicamente esta solução contém íons diverso( Na, Cl, K entre
outros) que otimizam as condições de reação.
MgCl : Doador muito estável de íons de Mg, que são cofatores indispensáveis para a
atividade da enzima.
DNTP: Desequilibrio das misturas de dNTP reduz a fidelidade da Taq. O dNTP reduz
o Mg livre, interferindo assim com a atividade da polimerase e diminuindo o
anelamento do primer.

2. Quais são as etapas do PCR? Explique cada uma delas.

O procedimento de PCR envolve três etapas, cada uma repetida muitas vezes.
1 – Desnaturação O DNA genômico contendo a sequência a ser amplificada é
desnaturado por aquecimento a cerca de 95°C por cerca de 30 segundos. A dupla fita é
aberta (desnaturada), tornando-se uma fita única.
2 – Anelamento ou hibridização Após a separação das fitas, um par de iniciadores ou
primers (uma fita de DNA específica para o gene que se quer estudar) complementam a
fita oposta da sequência de DNA a ser amplificada. Ou seja, um deles é complementar à
sequência em uma fita da dupla-hélice de DNA e o outro é complementar à sequência na
outra fita. O molde é determinado pela posição dos iniciadores que se anelam a fita. Essa
etapa ocorre a uma temperatura de 60°C.

3 – Extensão ou polimerização Com o molde já identificado, a enzima DNA-polimerase

adiciona as bases complementares, formando uma nova fita e então tem-se novamente a
duplicação da fita de DNA. Esse processo acontece a uma temperatura de 72°C.

3. Faça uma analogia entre o PCR realizado “in vitro” e a duplicação de DNA
realizada fisiologicamente.
- qual procedimento limita o inicio e o final de um gene – “semelhante ao inicio e
término da forquilha de replicação”?
- como que eu separo as fitas duplas de DNA? – semelhante à helicase.
- se eu não tenho a primase para adicionar os primers como eles são alinhados? De
onde esses são obtidos?
- como que eu resolvo a questão do PCR não ter os fragmentos de Okazaki para
realizar a duplicação da fita descontinua?
- de onde eu obtenho os d-nucleotídeos? Para realizar a polimerização da fita?

4. Dê um exemplo prático e explique como eu uso a técnica de PCR.

A PCR ou Reação em Cadeia da Polimerase é uma técnica utilizada diariamente nos
laboratórios e possibilita a amplificação de um dado fragmento da amostra de DNA
inicial de forma exponencial. Graças ela, um teste genético pode ser iniciado a partir
de uma única célula, pois o DNA será́ multiplicado in vitro em quantidade suficiente
para ser detectado no teste. Assim, pequenas quantidades de amostras recolhidas a
partir de uma cena de crime podem ser comparadas com o DNA de outras pessoas,
identificando ou descartando suspeitos durante uma investigação.