Tecnologia do DNA

Recombinante
 1943

1944 Introdução
1953
1956

1961-66
1973

1975

1982

1988

1990

1996
Tecnologia do DNA Recombinante

2000 -03
 Tecnologia do DNA Recombinante

Introdução

A tecnologia do DNA recombinante tem como

objetivo produzir moléculas de DNA a partir da
combinação de genes com proveniências diferentes.
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Enzimas de restrição
▪ São endonucleases encontradas em bactérias, e seu papel biológico é
proteger o genoma bacteriano de possíveis invasores, clivando
qualquer DNA exógeno.

▪ Reconhecem sequencias específicas de nucleotídeos;

▪ Mais de 90 endonucleases de restrição já foram identificadas,

purificadas e, inclusive, já são comercializadas.

▪ A disponibilidade dessas enzimas possibilitou a construção de mapas

de restrição;
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Enzimas de restrição
Exemplos:
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Vetores
▪ São moléculas de DNA que podem se replicar quando
introduzidas a uma célula hospedeira;

▪ A clonagem de fragmentos de DNA em vetores por meio

de enzimas de restrição e DNA Ligase possibilita a
propagação do fragmento clonado juntamente com o vetor.
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Plasmídeos
▪ São pequenas moléculas de DNA dupla-fita, circulares de
ocorrência natural em bactérias, que podem replicar
independentemente, sem estar associado a cromossomos.
▪ Para que os plasmídeos funcionem como vetores:

Origem de Resistência a Poli linker

replicação antibióticos

Sequência de DNA que auxilia

na replicação da molécula de Confere a seleção da bactéria São sequencias que contém
DNA a partir de interações que carrega o plasmídeo uma cópia de diversos sítios
com a DNA polimerase da de restrição diferentes
célula hospedeira.
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Bacteriófago
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Processo
Escolha do DNA a ser usado

Pode ser isolado dos Utiliza-se moléculas de

cromossomos do RNA mensageiro, através
organismo de interesse
(DNA genômico) do cDNA
Regiões reguladoras
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Processo
Ligação das moléculas do DNA a ser
utilizado em um vetor apropriado e
introdução em uma célula hospedeira

Vetores mais comuns:

➢ Plasmídeos
➢ Bacteriófagos
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Processo
Isolamento do gene de interesse
através de técnicas bioquímicas,
genéticas e imunológicas
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Processo
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