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Não Oficial Gabarito Exercicios de Cinetica 2 PDF
Não Oficial Gabarito Exercicios de Cinetica 2 PDF
Uma vez que ambas as equações de reta possuem o mesmo coeficiente linear, a Vmax será igual para
ambas:
1
𝑉!"# = 𝑉!"# !"# !"!#!$%& = = 7,69. 10!! 𝑚𝑜𝑙. 𝑠 !! = 46,2 µ𝑚𝑜𝑙. 𝑚𝑖𝑛!!
1,3×10!
Como já fora visto anteriormente, podemos calcular Km a partir do coeficiente angular de cada
equação de reta:
13
𝐾! !"# !"!#!$%& = = 𝟏𝟎. 𝟏𝟎!𝟔 𝑴 = 𝟏𝟎𝝁𝑴 (𝒄𝒉𝒂𝒎𝒂𝒅𝒐 𝑲𝒎 𝒂𝒑𝒂𝒓𝒆𝒏𝒕𝒆)
1,3×10!
40
𝐾! !"# !"!#!$%& = = 𝟑𝟎. 𝟎𝟖×𝟏𝟎!𝟔 𝑴 = 𝟑𝟎. 𝟖 𝝁𝑴
1,3×10!
b) Qual é o tipo de inibição?
𝐶𝑜𝑚𝑝𝑒𝑡𝑖𝑡𝑖𝑣𝑎, 𝑝𝑜𝑖𝑠 𝑉!"# 𝑛ã𝑜 𝑠𝑒 𝑎𝑙𝑡𝑒𝑟𝑎 e 𝐾! !"# !"!#!$%& > 𝐾! !"# !"!#!$%& .
c) Qual é a constante de afinidade do inibidor?
1
[𝐼]
𝐾! !"!#$%&$ = 𝐾! 1+
𝐾!
𝐾! [𝐼] 10 𝜇𝑀. 2𝑚𝑀
𝐾! = = ≅ 𝟏𝒎𝑴
𝐾! !"!#$%&$ − 𝐾! 30,7 𝜇𝑀 − 10 𝜇𝑀
d) Se [S]=10uM e [I]=2mM qual é a fração de moléculas de enzima ligadas ao substrato, e
ao inibidor?
Enquanto que fEI, a fração de moléculas ligadas ao inibidor, poderia ser calculada por:
10𝜇𝑀 10𝜇𝑀
𝑓!" 𝑠𝑒𝑚 𝑖𝑛𝑖𝑏𝑖𝑑𝑜𝑟 − 𝑓!" 𝑐𝑜𝑚 𝑖𝑛𝑖𝑏𝑖𝑑𝑜𝑟 = − = 0.5 − 0.26
10𝜇𝑀 + 10𝜇𝑀 10𝜇𝑀 + 30.76𝜇𝑀
= 0.24
Velocidade (µmol/min)
[S] µM Sem inibidor Com inibidor
3 10.4 2.1
5 14.5 2.9
10 22.5 4.5
2
30 33.8 6.8
90 40.5 8.1
a) Quais são os valores de KM e Vmax na presença do inibidor? Compare com os valores obtidos no
exercício anterior
Para obter os valores de KM e Vmax devemos converter os dados da tabela acima para mol/segundo,
fazer o gráfico de Linewaver-Burk (duplo-recíproco) e uma regressão linear para obter os coeficientes
de reta. A figura abaixo mostras um gráfico de velocidade de reação em função da concentração de
substrato (esquerda) na ausência (azul) e na presença do inibidor (vermelho), e o gráfico de duplo-
recíproco correspondente à direita.
−7 7
x 10 x 10
7 3
6
2.5
5
2
1.5
1
2
0.5
1
0 0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
−5 5
x 10 x 10
As equações de reta ajustadas para os dados obtidos na ausência e presença do inibidor são:
3
b) Qual é o tipo de inibição?
Observa-se que na adição do inibidor diminuiu a Vmax em aproximadamente cinco vezes, de 0.77 para
0.15 µmols-1, enquanto que o KM manteve-se igual. Trata-se, portanto, de um inibidor não-
competitivo.
d) Se [S] = 30 µM, qual fração das moléculas de enzima estarão em complexo com o substrato na
presença e ausência de 100 µM deste inibidor?
Assim como no exercício anterior, a fração de moléculas de enzima em complexo com o substrato na
preseça do inibidor é dada por:
!"
!
𝑣 𝑉!"# [𝑆] 30
𝑓!" = = !" = = 0.75
𝑉!"# 𝑉!"# 𝐾! + [𝑆] 30 + 10
Observa-se, portanto, que a adição de 100 µM do inibidor não competitivo não alterou a fração de
moléculas em complexo com o substrato. O inibidor não-competitivo não altera a fração de
moléculas de enzima em complexo com o substrato mas altera o número total de moléculas de
enzima disponíveis para interagir com o substrato.
3. A enzima urease aumenta a velocidade da hidrólise da uréia em pH 8,0 e 20º C por um fator de 1014.
Uma dada quantidade de urease pode hidrolisar completamente uma certa quantidade de uréia em
5 minutos a 20º C e pH 8,0.
a) Quanto tempo (em anos) levaria para que essa mesma quantidade de uréia fosse hidrolisada sob
as mesmas condições na ausência da urease?
Se a enzima aumenta a velocidade da reação de hidrólise da uréia em um fator de 1014, o tempo
para que a reação se complete também é acelerado nesta mesma ordem de grandeza. Se a
reação não for catalisada pela enzima (ausência da enzima), o tempo necessário para a reação se
completar será 1014 vezes maior, logo a resposta seria t = 5 min x 1014 = 9,5 x 108 anos
b) Dois tipos de urease (A e B) foram isoladas de 2 espécies de animais diferentes. As enzimas
possuem a mesma Vmáx, mas diferentes valores de Km. A enzima A tem Km=2 µM e a enzima B
tem Km=0,5 µM. Qual destas enzimas possui maior afinidade pelo substrato? Calcule a Vmax
utilizando a Equação de Michelis-Menten.
A enzima B, devido ao seu menor valor de Km, para se cacular Vmax basta montar a equação de
MM para cada enzima e iguala-las.
4
c) Para as duas ureases (A e B) foram realizadas experimentos cinéticos e o gráfico resultante está
mostrado abaixo. Aponte qual é a curva que corresponde a Urease A e qual corresponde à B, e
demonstre como você chegou a esta conclusão.