Validao Microbiolgica de

Desinfetantes
0epartamento de Tecno|og|a |oqu|m|co Farmacut|ca
Faculdade de Cincias Farmacuticas
8em|nr|o 866_ 2 de agosto de 2004
"6ontro|e de 6ontam|nao H|crob|o|g|ca"
Profa. 0ra. Thereza 6hr|st|na V. Penna (tcvpennausp.br}
Objetivos: remover matria orgnica e arrastar
microrganismos das superfcies aplicadas;
Causa: Matria orgnica favorece proliferao
microbiana;
Ferramenta: gua + detergentes (neutros +
enzimas) + auxiliares mecnicos;
Pr-requisito: desinfeco e esterilizao;
Efeito: Facilitar acesso do agente desinfetante
ao microrganismo.
Proced|mentos de L|mpeza
Procedimentos para eliminar microrganismos
patognicos, com exceo dos esporos.
Fatores interferentes:
limpeza prvia do item;
concentrao do agente qumico;
tempo de exposio;
temperatura e valor de pH do produto
dissolvido.
Procedimentos de Desinfeco
Nveis de Desinfeco
Desinfeco de baixo nvel: destruio das clulas, vrus
e fungos.
Sobrevivem: Mycobacterium tuberculosis, esporos
bacterianos, vrus da Hepatite B (HBV) e esporos.
Desinfeco de mdio nvel: destruio Mycobacterium
tuberculosis, a maioria dos vrus (inclusive o HIV) e dos
fungos.
Sobrevivem: Mycobacterium spp, esporos
bacterianos e vrus.
Desinfeco de alto nvel:
Sobrevivem: esporos bacterianos mais
resistentes.
Objetivo: Eliminao ou destruio
completa de todas as formas de vida: vrus,
bactrias, fungos, protozorios, esporos;
Assegurar: Nvel de segurana de
esterilidade;
Garantir: CONSERVAO do item.
Processos de Ester|||zao
Esler|||zadoras a 0x|do de El||ero (ET0)
P|asra de Perx|do de l|drogr|o e oulros gases
(vapor de c|do peracl|co e perx|do de r|drogr|o;
ox|gr|o, r|drogr|o e gs argr|o)
vapor de Forra|deido
Htodos f|s|co
qu|m|cos
0|ulara|deido
Forra|deido
Ac|do peracl|co/ gua ox|gerada
C|oro
C|orex|d|ra
Htodos qu|m|cos
vapor salurado/auloc|aves
Ca|or seco/ eslulas
Ra|os 0ara/Cooa|lo
F||lraao
Htodos f|s|cos
ALTERNAT|VA8 HET0008
Indicador Biolgico (IB)
O indicador biolgico uma suspenso caracterizada de
microrganismos especficos resistentes a um determinado
processo.
Os indicadores biolgicos no devem ser patognicos.
Devem multiplicar-se rapidamente facilitando sua deteco.
Permitir a reprodutibilidade e a preciso do teste.
Apresentar resistncia ao agente esterilizante, desinfetante ou
sanitizante independente da microbiota presentes no artigo ou
ambiente.
GUA
Sistemas de Tratamento e
Purificao
GUA Principais Contaminantes
Contaminantes particulados: originrios da fonte (poo ou
superfcie), incrustao das tubulaes, material das vlvulas,
lamas, poeiras, plen, areia, minerais no dissolvidos e materiais
orgnico (restos de vegetais, animais, etc);
Contaminantes inorgnicos: includos o clcio, magnsio, zinco,
ferro, alumnio e outros sais, assim como metais pesados (cromo,
nquel, cobalto etc), os gases dissolvidos de carbono, que alteram o
valor de pH > 7,0;
GUA Principais Contaminantes
Contaminantes orgnicos: so os subprodutos resultantes da
degradao vegetativa natural. TOC (carbono orgnico total),
presentes no p e em substncias aderentes superfcie.
Contaminao microbiolgica: microrganismos em geral e
subprodutos, incluindo endotoxinas e pirognios.
Indicador biolgico representativo ao
bioburden especfico da superfcie a ser
limpa.
Sistemas de Purificao de gua
A pureza da gua depende da sua utilizao.
A gua na indstria farmacutica o principal insumo :
-Incorporao ao produto;
-Processos de limpeza, enxague, desinfeco e
higiene pessoal e diluio de desinfetantes.
O sistema de purificao da gua deve atender a
qualidade esperada.
Devido ao procedimento de limpeza e desinfeco do sistema
de purificao de gua ser Clean in Place (CIP), pode
propiciar a formao de biofilmes em suas tubulaes.
Este biofilme pode albergar e conseqentemente espalhar
microrganismos dentro do sistema, aumentando o nmeros de
particulados, bactrias e o nvel do carbono orgnico total
(TOC).
Sistemas de Purificao de gua
GUA Formao de Biofilmes
Fluxo de um Sistema
de
Purificao de gua
WFI EM RECIRCULAO
Tratamento de gua
Poo
artesiano
Decatio-
nizador
Torre de
descarbonatao
Pr-Filtro
3m
Tanque
7500L
Tanque
25000L
Carvo
ativo
Pr-Filtro
1,0 - 1,2
m
D
e
i
o
n
i
z
a
d
o
r
Anftero
80C
Osmose reversa
Padres Farmacopeicos de
Qualidade de gua
< 100 UFC/mL Microrganismos
< 0,5 mg/L TOC
< 1,3 S/cm Condutividade
Limites gua Purificada
Validao de Desempenho
gua de alimentao Ponto 1
Filtros Multimeios Ponto2
Abrandadores Ponto 3
Filtro de Carvo Ponto 4
Filtro de 5 micras Ponto 5
Osmose Reversa Ponto 6
Deionizao continua Ponto 7
gua Purificada Ponto 8
UV- Ponto 9
Filtros de 0.05 micras Ponto 10
Pontos de Uso Ponto 11,12,13
gua de alimentao Ponto 1
Filtros Multimeios Ponto2
Abrandadores Ponto 3
Filtro de Carvo Ponto 4
Filtro de 5 micras Ponto 5
Osmose Reversa Ponto 6
Deionizao continua Ponto 7
gua Purificada Ponto 8
UV- Ponto 9
Filtros de 0.05 micras Ponto 10
Pontos de Uso Ponto 11,12,13
Monitorao Microbiolgica e de Pirognio
Amostragem: Pontos sanitizados com lcool 70%, e gua recebida em
sacos estreis de polietileno
Filtrao: As amostras so filtradas por membrana 0,45 um e
incubadas em meio especfico para contagem total e coliformes totais.
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
U
F
C
/
1
0
0
m
L
1 2 3 4 5 6 7 8 9
1
0
1
1
1
2
1
3
pontos de amostragem
Bioburden por Ponto de
Amostragem
Isolamento e identificao microbiana
100% 78 Contagem Total
1,28 1 F. multivorum
1,28 1 P. paucimobilis
1,28 1 P. alcaligenes
2,56 2 P. putida
2,56 2 A. lwoffi
5,13 4 P. fluorescences
6,42 5 F. aureum
11,54 9 P. diminuta
12,82 10 P. vesiculares
23,08 18 P. picketti
32,05 25 P. aeruginosa
% Colnias Microrganismos
reas midas: drenos, baldes,
mops... a pele... Podem ser fontes
permanentes de cepas de
Pseudomonas, espalhando-se para
outras reas.
Desinfeco pode ser ineficaz e
selecionar cepas resistentes.
Agentes qumicos
Ajuste de pH 30 Deionizador 0,3 0,5 HCl
Ajuste de pH 30 Osmose Reversa 2,4 0,5 c. Ctrico
Ajuste de pH 30
Osmose Reversa,
Deionizador
12,8 0,4 NaOH
Declorinao 90
Filtros Multimeios,
Abrandadores,
Filtro de Carvo
4,0 1,0
Bissulfito
de Na
+
Desinfetante 60
Tanque de gua e
linha de distribuio
10 0,5
Hipoclorito
de Na
+
Desinfetante 1 Pontos Externos 6-7 70 lcool
Desinfetante 180
Osmose Reversa,
Deionizador
2,1
PAA (0,45%)
+
H2O2 (2,2%)
Minncare
Aplicao
Tempo
de
Contato
(min)
Ponto de Uso pH
[ ] de uso
(%)
Agente
Concentrao Inibitria Mnima - MIC
Avaliao do espectro de ao do agente qumico, e
determinao da concentrao mnima inibitria,
Utilizando-se do mtodo clssico de diluio sucessiva.
Aferindo a resistncia inicial do microrganismo,
Portanto, MIC um parmetro importante para a escolha
do desinfetante.
Concentrao Inibitria Mnima - MIC
MIC - Resultados
0,06 0,25
0,5% Hipoclorito de
Na
+
0,1 0,3
0,4% NaOH
0,06 0,5
1% Minncare
2,18 17,5
70% Etanol
0,03 0,078
0,5% Bissulfito de Na
+
0,16 0,16
0,5% HCl
0,125 0,25
0,5% c. Ctrico
E. coli
ATCC25922
P. aeruginosa
Agente Qumico
inicial
Tempo de Reduo Decimal-
Valor D
Tempo necessrio para reduzir 1 ciclo
logartmico (90%) na populao microbiana
inicial frente ao agente qumico que est sendo
testado.
Valor - D
MIC
P.aeruginosa = 0,25%; E.coli = 0,06%
0
0,5
1
1,5
2
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
tempo de contato (min)
L
o
g

(
U
F
C
/
m
L
)
P.aeruginosa D=9min
E.coli D=4min
Valor D Hipoclorito de Sdio 0,5%
Hipoclorito de Sdio 0,5%
N= (tempo total de aplicao)/valor D
N= 60 min de contato/ 9 min 5 ciclos
Ciclos Logartmicos Reduzidos
Minncare 1%
0,00
0,50
1,00
1,50
2,00
0 1 2 3 4 5 6
tempo de contato (min)
L
o
g

(
U
F
C
/
m
L
)
P.aeruginosa D=5min
E.coli D=4min
MIC
P.aeruginosa = 0,50%
E.coli = 0,06%
Valor D Minncare 1,0%
Ciclos Logartmicos Reduzidos
Minncare 1,0%
N= (tempo total de aplicao)/valor D
N= 180 min de contato/5 min 36 ciclos
Ambiente Hospitalar
Microrganismos so introduzidos por diversas fontes (ex.:
humanas, medicamentos, alimentos contaminados e , at
mesmo, por germicidas).
O ambiente mais susceptvel a contaminao e
proliferao de microrganismos o berrio, pois nele
esto os recm-nascidos, que por no terem seu sistema
imune completamente formado contraem doenas e
infeces com grande facilidade.
0uluoro de 199, a Furdaao 0sva|do Cruz
(F|ocruz) deleclou ler s|do a oaclr|a /c|nerooacrer
agerle causador da rorle de oeos ro losp|la|
Valerro-lrlarl|| Nossa 3errora de Nazar, er 8oa
v|sla. A oaclr|a ralura| das rucosas (ooca, rar|z, e
o|ros), e pode ser lala| er 18 roras as cr|aras
|rlecladas;
Ambiente Hospitalar
Ambiente Hospitalar
Nur periodo de 2 aros (199Z a 1999), lorar
rol|l|cados 2 o|los de recr-rasc|dos |rleclados
por $errar|a marcescens. 0ulros 11 oeos, eroora
|rleclados resse periodo, reag|rar cor arl|o|l|cos.
Ambiente Hospitalar
Varo de 2002- Vorle de ra|s de 15 oeos ra
3arla Casa de V|ser|crd|a de Vog| das Cruzes.
0epo|rerlo de pa| de oeo rorlo: As erlerre|ras
lraoa|ravar ser |uvas e v|v|ar desperleadas cor o
caoe|o ca|rdo pe|o roslo. vr|os paros sujos lorar
de|xados ao |ado da |rcuoade|ra da r|rra l||ra,
exp||cou.
Aor|| de 2002: pesqu|sadores |so|ar P.aerug|nosa
ru|l|res|slerle. A P. aerug|nosa a segurda causa de
|rlecao rosp|la|ar ro Pais. Ercorlrada ro re|o
aro|erle, e|a lorra-se ur r|sco para a saude aperas
erlre pac|erles deo|||lados ou que eslejar er
aro|erles orde raja grarde uso de arl|o|l|cos.
Jurro de 2002: orze oeos rorrer er
ralerr|dade do Cear, vil|ras de |rlecao rosp|la|ar.
Ambiente Hospitalar
Surtos de infeco hospitalar podem ser
controlados por adequao dos mtodos de
limpeza, desinfeco e esterilizao, respeitando
as reas, equipamento e materiais mdico-
odontolgicos.
Ambiente Hospitalar
Microrganismos Testados (Gram-
negativos e Gram-positivos)
E.coli S.aureus
B.subtilis
B.stearothermophilus
Desinfetantes Concentraes e
Tempos de Contato
30a 18h 0,5% Formaldedo
30a 10h 2,2% Glutaraldedo
10a 1h 1 e 2% NaDCC
10a 1h 0,5% Hipoclorito de Sdio
30 segundos 0,4% Clorexidina
Tempo de
Contato
Concentrao Agente
MIC Tabela
0,075 0,02 S,75 0,0156 0,1SS 0,0071 S. aureus
0,01S 0,015 4,3S 0,006 0,13S 0,0141 S. marcencens
0,112 0,015 6,5 0,0156 0,325 0,0071 E. coli
0,03S 0,015 S,75 0,0117 0,325 0,0071 E. cloacae
0,112 0,015 4,3S 0,04 0,325 0,0063
A.
calcoaceticus
0,6 0,06 S,75 0,0235 0,325 1,0 B. subtilis
0,6 0,06 S,75 0,246 0,1SS B. stearo
NaDCC
CRA
pH>7
lcool Formaldedo Glutaraldedo
Clorexidina
Obs CRA: Compostos liberadores de cloro ativo
Agente
(%)
Bactria
Lavagem das Mos
Lavagem das Mos
Valor - D

Exerp| o: $. marcencens x C| orex| d| ra 0,1

Tempo UF6 Log UF6
0 20 1,3
1 9 0,95
2 0,ZZ
3 3 0,1Z
1 2 0,3
5 1 0

Valor - D
Clorexidina 0,4% x S.marcences
0
0,3
0,6
0,9
1,2
1,5
0 2 4 6
tempo de contato
L
o
g

U
F
C
D= 4 min
Valor - D
Equaao da rela: y = -0,25x 1,25Z
R
2
= 0,9923
0 |rverso do coel|c|erle argu|ar da
rela rd|a, porlarlo:
0 = 1/0,25
0= 1 r|rulos
Valor D CLOREXIDINA (400mg/L)
Desinfectio
n n=6
Sterilization
n=12
Microorganism pH Concentration
(mg/L)
D Value
(min)
t(min)=n.D t(min)=n.D
A.calcoaceticus 6.2 400 4.1 24.6 49.2
E. cloacae 6.2 400 8.13 48.78 97.56
E. coli 6.2 400 2.96 17.76 35.52
S. aureus 6.2 400 5.86 35.16 70.32
S.marcescens 6.2 400 4 24 48
B. stearothermophilus 6.2 2000 8.57 51.42 102.84
B. subtilis 6.2 2000 6.73 40.38 80.76
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
1.8
0 2 4 6 8
Time (min)
l
o
g

C
F
U
A calcoaceticus
E. cloacae
E.coli
S. aureus
S. marcescens
Valor D CLOREXIDINA (400mg/L)
Compostos Liberadores de Cloro Ativo
Aplicaes
Desinfeco em geral de objetos e
superfcies inanimadas, inclusive as
contaminadas com sangue e outros materiais
orgnicos;
Recipientes de descarte de materiais.
Desinfeco de superfcies e artigos semi-
crticos no-metlicos e artigos de lactrios.
Valor D Hipoclorito de Sdio
(0,5% ou 500mg/mL)
Desinfection
n=6
Sterilization
n=12
Microorganism pH Concentration
(mg/L)
D Value
(min)
t(min)=n.D t(min)=n.D
B. stearothermophilus 7 500 10.3 61.8 123.6
B. subtilis 7 500 9.21 55.26 110.52
E. coli 7 500 5.59 33.54 67.08
0
0.5
1
1.5
2
0 2 4 6 8 10 12
Time (min)
l
o
g

C
F
U
B.stearothermophilus
B. subtilis
E.coli
Valor D Hipoclorito de Sdio
(0,5% ou 500mg/mL)
Valor D LIBERADORES DE CLORO ATIVO
Desinfection
n=6
Sterilization
n=12
Microorganism pH Concentration
(mg/L)
D Value
(min)
t(min)=n.D t(min)=n.D
A.calcoaceticus 7 250 4.64 27.84 55.68
B. stearothermophilus 7 250 7.5 45 90
E. coli 7 250 7.47 44.82 89.64
S. aureus 7 250 6.68 40.08 80.16
S.marcescens 7 250 6.21 37.26 74.52
B. subtilis 7 1000 18 108 216
E. cloacae 7 1000 24.03 144.18 288.36
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
0 2 4 6 8 10 12
Time (min)
l
o
g

C
F
U
A calco aceticus E. clo acae
E. co li S . aureus
S . marcencens
Valor D LIBERADORES DE CLORO ATIVO
Valor D DICLOROISOCIANURATO DE
SDIO (NaDCC)
Desinfection
n=6
Sterilization
n=12
Microorganism pH Concentration
(mg/L)
D Value
(min)
t(min)=n.D t(min)=n.D
A.calcoaceticus 7 1000 5.77 34.62 69.24
E. cloacae 7 1000 4.73 28.38 56.76
E. coli 7 1000 5.87 35.22 70.44
S. aureus 7 1000 4.92 29.52 59.04
S.marcescens 7 1000 4.25 25.5 51
B. stearothermophilus 7 2000 5.3 31.8 63.6
B. subtilis 7 2000 2.6 15.6 31.2
0
0.5
1
1.5
2
0 2 4 6 8 10 12
Time (min)
l
o
g

C
F
U
A calcoaceticus
E. cloacae
E. coli
S. aureus
S. marcescens
Valor D DICLOROISOCIANURATO DE
SDIO (NaDCC)

GLUTARALDEDO

Aplicaes
Esterilizante e desinfetante
de equipamento mdico -
cirrgicos que no podem
ser submetidos a mtodos
fsicos de esterilizao.
Desinfeco rigorosa de
endoscpios de fibra tica,
para equipamento de
anestesia gasosa, artigos
metlicos e equipamentos
de aspirao.
Valor D GLUTARALDEDO (2000mg/L)
Desinfection
n=6
Sterilization
n=12
Microorganism pH Concentration
(mg/L)
D Value
(min)
t(min)=n.D t(min)=n.D
A.calcoaceticus 7.4 2000 4.17 25.02 50.04
B. stearothermophilus 7.4 2000 24.33 145.98 291.96
B. subtilis 7.4 2000 23.81 142.86 285.72
E. cloacae 7.4 2000 6.36 38.16 76.32
E. coli 7.4 2000 13.26 79.56 159.12
S. aureus 7.4 2000 5.67 34.02 68.04
S.marcescens 7.4 2000 4.82 28.92 57.84
0
0.5
1
1.5
2
2.5
0 5 10 15 20 25 30
Time (min)
l
o
g

C
F
U
A calcoaceticus B. stearothermophilus
B. subtilis E.cloacae
E.coli S. aureus
S. marcescens
Valor D GLUTARALDEDO (2000mg/L)
FORMALDEDO
Aplicaes
Fumigao de ambientes
fechados ;
Esterilizante de artigos
crticos termossensveis;
Desinfeco de artigos
semicrticos;
Desinfeco de capilares
dos sistemas dialisadores;
No recomendado para
desinfeco rotineira de
superfcies, devido a sua
toxicidade.
Valor D FORMALDEDO (500mg/L)
Desinfection
n=6
Sterilization
n=12
Microorganism pH Concentration
(mg/L)
D Value
(min)
t(min)=n.D t(min)=n.D
A. calcoaceticus 6.5 500 5.13 30.78 61.56
B. stearothermophilus 6.5 500 11.75 70.5 141
B. subtilis 6.5 500 15.85 95.1 190.2
E. cloacae 6.5 500 4.44 26.64 53.28
S. marcescens 6.5 500 2.06 12.36 24.72
0
0.5
1
1.5
2
2.5
0 2 4 6 8 10 12 14
Time (min)
l
o
g

C
F
U
A calcoaceticus B.stearothermophilus
B.subtilis E.cloacae
S. marcescens
Valor D FORMALDEDO (500mg/L)
Valor D HYDROGEN PEROXIDE (1.5%)
Auxiliar de limpeza
Desinfection
n=6
Sterilization
n=12
Microorganism pH Concentration
(%)
D Value
(min)
t(min)=n.D t(min)=n.D
B. stearothermophilus 2,5 23 4,67 28,02 56,04
B. subtilis 2,5 1,5 4,9 29,4 58,8
E. cloacae 2,5 1,5 1,74 10,44 20,88
E. coli 2,5 1,5 2,25 13,5 27
S. aureus 2,5 1,5 3,13 18,78 37,56
Obs. Recomendao concentrao de 7,5%, como
desinfetante.
Valor D HYDROGEN PEROXIDE (1.5%)
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
0 2 4 6 8 10 12
time (min)
l
o
g

C
F
U
B. stearothermophilus
B. subtilis
E. coli
S. aureus
Valor D H
2
O
2
+ PERACETIC ACID
Desinfection
n=6
Sterilization
n=12
Microorganism pH Concentration
(mg/L)
D-value
(min)
t(min)=n.D t(min)=n.D
A.calcoaceticus 2.3 1000 3.34 20.04 40.08
B. stearothermophilus 2.3 1000 8.88 53.28 106.56
B. subtilis 2.3 1000 5.88 35.28 70.56
E. cloacae 2.3 1000 3.39 20.34 40.68
E. coli 2.3 1000 6.45 38.7 77.4
S. aureus 2.3 1000 4.03 24.18 48.36
S.marcescens 2.3 1000 3.84 23.04 46.08
Valor D H
2
O
2
+ PERACETIC ACID
0
0.5
1
1.5
2
2.5
0 5 10 15 20
Time (min)
l
o
g

C
F
U
A calcoaceticus B. stearothermophilus
B. subtilis E. cloacae
E. coli S. aureus
S.marcescens
Fenol + detergentes
Adicionado em baldes com gua e
detergente neutro, na limpeza de superfcies
no crticas.
Resultados prvios: Contagem geral de
microrganismos inferior a 30 UFC/ mL de
gua
Refernc|as |b||ogrf|cas
8raz|||ar V|r|slry ol lea|lr's 0|recl|ves: r
o
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