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Microrganismos
Microbiologia o estudo dos microrganismos, um grande grupo de seres vivos capazes de existirem como clulas nicas ou em agrupamentos em que cada clula um indivduo.
Autonomia: cada clula microbiana independente quanto a seus processos vitais de obteno de energia, crescimento e reproduo. Todos os microrganismos tm estrutura celular: PROCARIOTOS e EUCARIOTOS
CPSULA PAREDE CELULAR MEMBRANA CITOPLASMTICA FILAMENTO CROMOSSMICO ( DNA ) GRNULOS DE RESERVA
0,2 a 2,0 m
MITOCNDRIA FLAGELO
> 2,0 m
MICROSCPIO PTICO: Utiliza luz visvel como fonte de iluminao Aumento de at 1000x (boa resoluo) Estruturas no evidenciadas Objetos devem ser muito finos Uso de corantes: h mais de 150 anos!
MICROSCPIO ELETRNICO Utiliza eltrons como fonte de iluminao ao invs de luz Direcionamento dos eltrons por campo magntico
MICRORGANISMOS DO SOLO
Funes:
Decomposio Ciclagem de nutrientes FBN Fotossntese Interaes: ... micorriza
O solo constitui um sistema muito dinmico e organizado e representa um excelente meio para a sobrevivncia e proliferao de uma variedade de organismos representada por componentes macro e microscpicos
DENSIDADE E BIOMASSA DE ORGANISMOS DO SOLO ORGANISMOS QUANTIDADE ESTIMADA (NO / m2) Biomassa (g / m2)
BACTRIAS FUNGOS NEMATIDES PROTOZORIOS ALGAS L. DE COLEPTEROS LARVAS DE DPTEROS MINHOCAS TRMITAS FORMIGAS ARACHNIDA
1013 - 1014 1010 - 1011 108 - 1010 1010 1010 10 - 103 10 - 103 102 102 - 105 102 - 105 10
50 100 10 9 1
50 4 0,5 0,5
EUCARIOTOS: FUNGOS ALGAS MACROFAUNA: ANELDEOS, TRMITAS, FORMIGAS MESOFAUNA: CAROS, COLMBOLOS MICROFAUNA: PROTOZORIOS, NEMATIDES
Morfologia e fisiologia variam bastante entre espcies Taxonomia destes grupos sofre mudanas contnuas
Distncia evolutiva
CLASSIFICAO DOS ORGANISMOS (Woese et al., 1990 e Cavalier-Smith, 1993) IMPRIOS: 1. BACTERIA 2. EUCARYOTA DOMNIO 1/REINO 1: ARCHAEBACTERIA DOMNIO 2/REINO 2: BACTERIA OU EUBACTERIA DOMNIO 3: EUCARYA REINO REINO REINO REINO REINO REINO 3: 4: 5: 6: 7: 8: ARCHAEZOA (?) PROTOZOA CHROMISTA PLANTAE FUNGI ANIMALIA
BACTRIAS Procariticas = grupo mais numeroso do solo Rpido crescimento e decomposio de vrios substratos Participao na ciclagem de nutrientes Transformaes bioqumicas especficas: nitrificao/desnitrificao, oxidao/reduo de S Fixao Biolgica de N2 Ao antagnica aos patgenos Produo de substncias de crescimento vegetal (RBPCP)
PROTOZORIOS (<0,2 mm) Alta diversidade morfolgica e de hbitos alimentares. Vida livre (a maioria) ou associados a outros seres vivos. Higrfilos - gua para atividade metablica. Condies desfavorveis: cistos (estdio inativo). Descritas 30.000 espcies vivas e muitos fsseis. Protozorios de vida livre: alimentam-se de substncias orgnicas dissolvidas e de outros animais, podem ser predadores (de bactrias, leveduras, de outros protozorios, esporos de fungos e algas) = equilbrio biolgico do solo !
ALGAS ALGAS VERDES (as mais abundantes no solo) ALGAS VERMELHAS Distribuio ampla: sobre ou no solo; lama, areia, neve e presas a plantas ou animais. So os principais microrganismos fotossintetizantes que vivem no solo (alta luminosidade, umidade e baixa acidez).
FUNGOS Eucariticos, a maioria com formas filamentosas Clulas ou estruturas de repouso (esporos) e hifas Quimiorganotrficos: saprfagos, parasitas e simbiontes* Aerbios obrigatrios Representam 70 a 80% da biomassa microbiana Presena: teor de M.O., pH (5,5) e umidade
* Micorriza
MICROBIOLOGIA DA RIZOSFERA
MICRORGANISMOS RIZOSFRICOS atividade nos ciclos biogeoqumicos de nutrientes transformaes da matria orgnica influncia no enraizamento produo de substncias promotoras de crescimento absoro de nutrientes proteo vegetal contra estresses, etc
RIZOSFERA (Hiltner, 1904). Volume de solo ao redor de razes onde o crescimento bacteriano estimulado. Esquema
Na prtica: como separar a rizosfera. Esfera de maior atividade fsica, qumica e biolgica
ATIVIDADE FSICA Ao agregante sobre as partculas do solo A penetrao das razes no solo afeta a aerao
ATIVIDADE QUMICA Precipitao/acmulo de sais Variaes no pH Alterao da relao O2/CO2 (respirao) Produtos orgnicos diversos (mucigel, exsudatos) ATIVIDADE BIOLGICA Proliferao e atividade de microrganismos Ecossistema microbiano complexo (efeito rizosfrico)
(Foster et al., 1983)
EFEITO RIZOSFRICO* Microrganismos Relao R:S Bactrias Fungos Actinomicetos Protozorios Algas 23:1 12:1 7:1 2:1 0,2:1
* Influncia das razes sobre os microrganismos Densidade de propgulos na rizosfera Densidade de propgulos no solo adjacente
IMPORTANTE
RIZOBACTRIAS PROMOTORAS DE CRESCIMENTO (RBPC) Azotobacter, Acetobacter, Bacillus, Pseudomonas, Azospirillum, Agrobacterium, ... Antagonismo Produo de SPC
RIZOBACTRIAS DELETRIAS DE CRESCIMENTO (RBDC) Enterobacter, Klebsiella, Arthrobacter, Pseudomonas, .. Substncias txicas HCN, H2S, cidos, etanol, compostos fenlicos Razes Germinao de sementes
RBDC
Modificao da populao rizosfrica Manipulao da pop. presente (condies-solo/planta) Introduo de microrganismos especficos Devem ser capazes de:
Aquisio e uso de nutrientes pela planta Supresso de doenas (efeito controle biolgico) Produo vegetal pela liberao microbiana de SPC
inoculao
Ecologia microbiana do solo: Estuda as relaes entre os microrganismos do solo e seus hbitats e adaptao ao ambiente
O SOLO COMO HBITAT MICROBIANO Sistema heterogneo, descontnuo e estruturado. Formado por microhbitats discretos com diferentes caractersticas qumicas, fsicas e mineralgicas e diferentes comunidades biolgicas. A condio fsico-qumica de um microhbitat em um dado momento denominada microambiente.
45%
Areia Bactria
-
Argila
-
M+
+ - -
Silte
Hifa fngica
O microambiente do solo
Protena +
i st Pe
s da ci
+ + +
Antibiticos
NO2Mg2+
Clula microbiana
+
NH4+ NO3Argila
Ca2+ H+
Colide orgnico
Al3+
e ilm F
a gu d
Diversos fatores regulam a atividade microbiana nos microambientes do solo: - Umidade (gua) - Temperatura - Radiao solar - Aerao - Composio da soluo do solo - pH
- Substrato (alimento) - Fatores de crescimento - Nutrientes minerais - Interaes clulas x colides - Mineralogia do solo
Distribuio da Microbiota
Colonizao e decomposio de substratos Antibiticos e outros metablitos
Microrganismos do solo
SIMBIOSES
Patgenos
x Plantas
Solos supressivos
TRANSFORMAES E CICLO DO C
CO2
ATMOSFERA
Representao esquemtica da decomposio e ciclagem de nutrientes em solo agrcola. (Siqueira & Franco, 1988)
Fotossntese X Decomposio
CO2
Lipde os
( CHO)n
Protenas
Li gnina
O utros
RIZOSFERA
NUTRIENTES DISPONVEIS
Mineralizao
cidos hmicos
cidos flvicos
Funes do hmus no solo: Agregao e estabilidade, aerao e reteno de gua Reservatrio de macro (N, P, S) e micronutrientes Complexao de elementos metlicos e agrotxicos Vitaminas, substncias promotoras de crescimento vegetal Proteo e nutrientes para os microrganismos
TRANSFORMAES E CICLO DO N
TRANSFORMAES E CICLO DO NITROGNIO Litosfera: 98% do N existente (rochas, sedimentos, fundo dos oceanos). N forma gasosa: 78% da atmosfera (N2)
N=N
Principal entrada
N2 NO3-
N2
N2
NO3-
NH3
NO3-
NO3-
NH 3
NH 4+
Principais perdas
NO2-
Ciclo do nitrognio
TRANSFORMAES E CICLO DO P
TRANSFORMAES E CICLO DO P P: cidos nuclicos e ATP Ciclo aberto! (P na atmosfera muito baixo) Solos brasileiros: N e P so os mais limitantes! Perdas de P: eroso ............ rios e oceanos! (3,5 milhes de t = perda anual) P da soluo do solo = plantas e microrganismos 0,1-0,3 mg/kg solo
Incio
NITROGNIO DO SOLO
AR
NN
FERTILIZANTES 49 milhes t de N ano-1
FIXAO BIOLGICA DE N2
Organismos procariticos (Brookes, 1995) Complexo enzimtico: Nitrogenase + Fe, Mg, Mo e ATP
Fixao anual de N atmosfrico Fixao industrial Descargas eltricas FBN TOTAL Oceanos Sistemas terrestres Leguminosas Arroz Pastagens Outras Florestas Outros 49 milhes de t N ano-1 10 175 36 139 35 4 45 5 40 10
BACTERIA: Rhizobium, Bradyrhizobium, Sinorhizobium, Mesorhizobium, Azorhizobium, Azospirillum, Beijerinckia, Acetobacter, Derxia, Azotobacter, Bacillus, Clostridium, celulolticos, ciclo do S, denitrificadores, etc. ARCHAE: Halfilos e metanognicos ALTA DIVERSIDADE = RESILINCIA NO SISTEMA OCORRNCIA GENERALIZADA
ASSOCIAES DE DIAZOTRFICOS COM ESPCIES VEGETAIS Colonizao da rizosfera e ENDOFITICAMENTE Di e MONOCOTILEDNEAS Gneros mais comuns: Azospirillum, Azotobacter, Bacillus, Azoarcus, Herbaspirillum, Acetobacter Fixao de N por gramneas: 25-50 kg N/ha/ano (17% N) Trigo, arroz, milho... Cana-de-acar: obteno at de 60% do N exigidos
CIANOB. x PLANTAS: Anabaena (Nostoc) e Azolla Seis espcies de Azolla Biomassa: 100 kg N em 37d de cultivo (dobra 5-7d) sia: uso como adubo verde ou junto com arroz Controle de plantas daninhas: competio por luz Alimentao de peixes, aves e sunos
SIMBIOSE RIZBIO-LEGUMINOSA
EXPLORADA DESDE O SC. XIV (Allen & Allen, 1981) - Rotao com leguminosas Fertilidade Nutrio Mineral
Papilionoideae: (13.000 sp.) > nodulferas (feijo, soja) Mimosoideae: (2.700 sp., maioria arbreas tropicais) Caesalpinoideae: (1.900 sp.) 70% no nodulam
(Siqueira, 1993)
TAXONOMIA DO RIZBIO Grupo de bactrias: Gram -, aerbias obrigatrias Ndulos (hipertrofias corticais em plantas)
Meios YMA com rizbio de crescimento lento e alcalinizante (esq.) e de crescimento rpido e acidificante (dir.)
ESTABELECIMENTO DA SIMBIOSE NODULAO: seqncia de eventos bioqumicos, genticos e fenolgicos, sendo cada etapa regulada por genes especficos da planta e do rizbio e seus produtos, resultando em relaes compatveis ou no. 1. ENTRADA DO RIZBIO: Clulas da epiderme Ferimentos (pontos crescimento das razes laterais) Plos absorventes (soja, feijo)
CLULAS DA EPIDERME
quimiotaxia: reversvel
PLO RADICULAR
CLULAS DA EPIDERME
Cordo de infeco
N2 fixado
kg de N ha 1 ano -1 60-178 3,0-110 73-354 72-124 168-280 50-103 52-77
Espcie de leguminosa
Forrageiras Leucena (Leucaena leucocephala) Centrosema (C. pubescens) Estilosantes (Stylosanthes spp.) Espcie arbrea Acacia (Acacia mearnsii) Sesbania sesban Calliandra calothyrsucs Gliciridia sepium Floresta tropical Em regenerao Aps estabilizao (40 anos)
(Siqueira & Franco, 1988; People et al., 1995 )
N2 fixado
kg de N ha -1ano -1 500-600 126-398 34-220 200 160-195 474-581 586-700 71-78 35-45
Eficincia da inoculao com rizbio (isolado 127) em feijoeiro, comparada adubao nitrogenada (N) e sem inoculao (T)
MICORRIZAS ARBUSCULARES
ASPECTOS GERAIS E TIPOS Definio: simbiose (associao simbitica) entre razes e certos fungos do solo. No patognica Processo de evoluo das plantas terrestres Ocorrncia generalizada Importante papel funcional no ecossistema
TIPOS: caractersticas do fungo, colonizao, alterao na raiz, especificidade, classificao do fungo e da planta ARBUSCULAR (ENDOMICORRIZA) ECTOMICORRIZA ECTENDOMICORRIZA ARBUTIDE MONOTROPIDE ERICIDE ORQUIDIDE
CLASSIFICAO TAXONMICA
http://invam.caf.wvu.edu
FAMLIA GLOMACEAE
FAMLIA GIGASPORACEAE
Reao ao Melzer
Gigaspora gigantea
Paraglomus occultum
GERMINAO DOS ESPOROS E CULTIVO in vitro Fungo MA: BIOTRFICO OBRIGATRIO Propagao: PLANTAS Vantagens, se fosse possvel o cultivo in vitro: TAXONOMIA (caractersticas morfolgicas e bioqumicas) INCULO (padronizao e pureza) GENTICA (estudos) INOCULANTES (em larga escala)
ESTABELECIMENTO DA ASSOCIAO SEQUNCIA DE EVENTOS: PLANTA e FUNGO COLONIZAO * Germinao dos esporos Crescimento da hifa infectiva (apressrio) Colonizao intra (arbsculos) e intercelular NO H SINTOMAS DE RESPOSTA INVASO! Desenvolvimento extrarradicular (miclio externo) ABSORO DE NUTRIENTES (ativo) E GUA PRODUO DE ESPOROS
ECOLOGIA DAS MICORRIZAS ARBUSCULARES Ocorrncia: Trpico 10x > Temperado 97% das Fanergamas (flores) Razes sem alterao morfolgica Observao: MICROSCPIO: colorao ESPOROS: extrao e separao
NUTRIENTES: inibio em ALTA fertilidade (P) ACIDEZ E METAIS: tolerncia variada PLANTA HOSPEDEIRA: generalizada/no especfica BIOTA DO SOLO: predadores, hiperparasitas, actinomicetos CONDIES FSICAS DO SOLO: manejo (ar, cultura, etc.)
A) NUTRICIONAIS: OS MAIS CONSISTENTES! Aumento da absoro de nutrientes (P): fsico e fisiolgico (80%P, 60%Cu, 25%N, 25%Zn, 10%K) Armazenamento temporrio de nutrientes (hifa, razes) Favorecimento de microrganismos benficos Aumento na nodulao e fixao de N2 Amenizao dos efeitos adversos do pH, Al, Mn, metais pesados e outros na absoro de nutrientes
B) EFEITOS NO NUTRICIONAIS Favorecimento da relao gua-planta Produo e acmulo de substncias de crescimento Reduo dos danos causados por patgenos Maior tolerncia a estresses ambientais e fitotxicos Melhoria na agregao do solo
APLICAO DAS MICORRIZAS ARBUSCULARES SUSTENTABILIDADE: Utilizao de microrganismos e processos biolgicos benficos!
INOCULAO COM FUNGOS MAs EXPLORAO COMERCIAL EM LARGA ESCALA (?) Atualmente: MULTIPLICAO em solos/substratos TRAP CULTURE Vasos-armadilha (plantas hospedeiras) Solo, areia, argilas, turfas, compostos orgnicos, etc. Capim sudo, grama batatais, braquirias, sorgo, milho, capim colonio, carrapicho beio de boi, estilosantes, etc.
SISTEMAS DE PRODUO DE MUDAS VIABILIDADE Inoculao das mudas na semeadura direta ou repicagem Esporos ao lado da plntula ou sobre as razes Cuidados na conduo das mudas (...)
ECTOMICORRIZAS
87
ORIGEM: mais recente que MAs (130 milhes anos) Evidncias da famlia PINACEAE OCORRNCIA: 10% espcies vasculares e 90% rvores Temperado 35 FAMLIAS de plantas
Pinaceae(95%), Myrtaceae (90%), Leguminosae (16%)
BRASIL: Plantios de Pinus e Eucalyptus, Cassia, Bauhinia, etc. 46 sp (19 gneros) + 15 sp no identificadas ESTIMATIVA: Mais de 5.000 espcies de fungos ECM
FUNGOS EPGEOS
Rhizopogon, Amanita, Boletus, Laccaria, Pisolithus, Romaria, Scleroderma, etc.
FUNGOS HIPGEOS
Tuber (trufas europias), Alpova, Chondrogaster, Hysterangium, etc.
FORMAO DA SIMBIOSE ECTOMICORRZICA Processo seqenciado - rpido (7 dias) ativao propgulos agregao das hifas estruturas (manto e Rede de Hartig) inchamento e ramificao das razes curtas
A) ABSORO DE NUTRIENTES Aumento da explorao do solo e serapilheira Aumento na mineralizao e solubilizao de nutrientes (N, P e K)
B) TOLERNCIA A METAIS PESADOS Reteno de metais no miclio e razes colonizadas Efeitos: fungo, planta, metal e condies Fungos (isolados) TOLERANTES !
C) RELAO COM PATGENOS (AGENTES DE BIOCONTROLE DE DOENAS) Fusarium, Phytophthora, Pythium, Rhizoctonia Nematides
competio por substratos barreira fsica do manto substncias antimicrobianas barreira qumica (tanino) em clulas corticais
APLICAO DE FUNGOS ECM (INOCULAO) EFICINCIA: fungo, planta e condies ambientais Especificidade seleo de isolados compatveis
Qualidades do fungo para a inoculao: crescer em meio de cultura boa colonizao e resposta da planta agressivo e competitivo adaptado ao novo meio (alta T e baixa U) especfico para a planta
QUANDO INOCULAR ?
Plantios com espcies exticas Revegetao de solos degradados reas desprovidas de vegetao Solos inertes, desinfestados (sem propgulos) reas com espcies de fungos no eficientes ou em baixa densidade
TIPOS DE INOCULANTE 1) MICELIANOS: miclio + turfa/vermiculita EUA: P. tinctorius e Hebeloma crustuliniforme (MYCORTREE): custo de US$10.00 para 1000 mudas 2) NATURAIS: terrio/solo de reas povoadas Ineficincia e contaminao Brasil: terrio ou basidiocarpos coletados = viveiro 3) ESPOROS: trufas (Frana), EUA (viveiros) Espcies esporulantes Problemas com eficincia
VANTAGENS DA INOCULAO:
menor tempo de permanncia no viveiro reduo de danos: transporte/transplantio maior sobrevivncia e crescimento inicial no campo maior produtividade dos plantios florestais
Pinus
Boletus
MICRORGANISMOS DO SOLO
Funes:
Decomposio Ciclagem de nutrientes FBN Fotossntese Interaes: ... micorriza