Quim. Nova, Vol. 35, No.

1, 114-118, 2012 DETERMINAO ESPECTROFOTOMTRICA POR INJEO EM FLUXO DE GLIFOSATO EM FORMULAES COMERCIAIS DE HERBICIDAS

Artigo

Aline Santana da Silva, Leonardo Pezza e Helena Redigolo Pezza* Instituto de Qumica de Araraquara, Universidade Estadual Paulista, CP 355, 14801-970 Araraquara - SP, Brasil Recebido em 21/2/11; aceito em 8/6/11; publicado na web em 22/7/11

FLOW-INJECTION SPECTROPHOTOMETRIC DETERMINATION OF GLYPHOSATE IN COMMERCIAL FORMULATIONS OF HERBICIDES. A flow injection spectrophotometric procedure for the determination of glyphosate in commercial formulations of herbicides is proposed. The determination is based on the reaction of glyphosate and p-dimethylaminocinnamaldehyde, in acid medium, yielding a colored compound (lmx = 495 nm). Under optimal conditions, Beers law is obeyed in a concentration range 40-640 mg mL-1 with a correlation coefficient of 0.9996. The detection limit was 8.60 mg mL-1 for glyphosate. The method was successfully applied for the determination of glyphosate in commercial formulations of herbicides. Recovery of glyphosate from various commercial samples of herbicides range from 91.0 to 110%. Keywords: glyphosate; herbicides; flow injection analysis.

INTRODUO O glifosato [N-(fosfonometil)glicina, C3H8NO5P] um herbicida (agrotxico) ps-emergente, pertence ao grupo qumico glicina substituda e txico para organismos aquticos, pouco txico para organismos do solo, aves e abelhas, e pouco bioacumulvel.1 Os produtos tcnicos base do ingrediente ativo glifosato, em geral, so classificados na classe III (produto perigoso).2 um dos herbicidas mais comumente utilizado no mundo, no controle de plantas daninhas e em diversos tipos de culturas,3 sendo metabolizado a cido aminometilfosfnico (AMPA) em plantas e solos atravs da degradao via sarcosina e glicina.4 No Brasil constata-se o crescente aumento no consumo de agrotxicos em razo, principalmente, da expanso da fronteira agrcola e do aumento de terras onde praticado o plantio direto. Dentre os agrotxicos consumidos, o glifosato o ingrediente ativo situado em primeiro lugar no ranking de comercializao no pas, representando 76% da comercializao da classe de uso de herbicidas, sendo reportada a comercializao de 71 marcas comerciais de produtos formulados base de glifosato, por 20 diferentes empresas registrantes.1 Embora o glifosato no seja considerado um srio contaminante para o homem, os efeitos deste herbicida no meio ambiente ainda no foram completamente elucidados.5 O glifosato utilizado nas formulaes comerciais usualmente associado com o surfactante polioxietilenoamina (POEA), para o qual nenhum limite especfico de exposio ocupacional foi estabelecido. Alguns dos efeitos txicos das formulaes so atribudos presena desse ingrediente nas formulaes comerciais.4,6 A forte reteno do glifosato pelo solo, sua alta solubilidade em gua e permanncia no meio ambiente7-9 podem favorecer o aumento da concentrao deste herbicida na natureza e causar significativo impacto ambiental,10,11 especialmente em efluentes de fbricas produtoras de glifosato, representando srios riscos a ambientes agrcolas e aquticos.12 H relatos de diversos mtodos para a determinao de glifosato em matrizes diversas, incluindo as tcnicas de cromatografia em camada delgada (TLC),13 cromatografia de interao hidroflica (HILIC),14 cromatografia lquida de alta eficincia (HPLC),10,15 croma*e-mail: hrpezza@iq.unesp.br

tografia lquida com deteco por massas (LC-MS),16 cromatografia gasosa (GC),17 eletroforese capilar (CE),7 espectrofotometria na regio visvel,18,19 dentre outros.20-22 Entretanto, nota-se a inexistncia de descrio de trabalhos envolvendo a determinao de glifosato utilizando anlise em fluxo. Dentre os mtodos propostos para a determinao de glifosato, as tcnicas cromatogrficas so frequentemente empregadas por apresentarem seletividade e sensibilidade.15,16 A ausncia de grupos cromforos que absorvem no UV-Vis ou fluorforos em sua estrutura dificulta a quantificao deste analito, havendo, portanto, a necessidade de aplicao de tcnicas de derivatizaes (pr- ou ps-coluna), nas determinaes cromatogrficas.23-25 Em geral, as tcnicas de derivatizao requerem vrias etapas para melhorar a resoluo e a seletividade do mtodo. Alm disso, estas apresentam baixa preciso, requerem longo tempo de extrao e anlise, a utilizao de solventes txicos, alm de possibilitar a formao de produtos instveis.23,24 Atualmente, o uso de metodologias analticas que no necessitam de derivatizao, empregando sistemas simples, de baixo custo e com resultados satisfatrios e rpidos uma das reas que tem despertado grande interesse, principalmente quando precisam ser tomadas decises rpidas. Os mtodos de anlise envolvendo procedimentos em fluxo para a determinao de glifosato representam uma alternativa atrativa em relao aos mtodos analticos atualmente existentes para a sua determinao. A anlise por injeo em fluxo (FIA) foi proposta em 1975 e, desde ento, alcanou grandes propores no ramo da pesquisa, abrangendo vrias reas da qumica analtica.26-28 Essa aceitao foi devida possibilidade deste procedimento propiciar o desenvolvimento de mtodos analticos de melhor preciso empregando equipamentos de baixo custo, bem como a possibilidade do pesquisador desenvolver seu prprio mdulo de anlise.29-31 Outras vantagens na aplicao dos sistemas em fluxo em relao aos procedimentos existentes na literatura so o pouco uso de vidrarias, a utilizao de um sistema fechado, o que minimiza os riscos de contaminao, e o baixo consumo de reagentes, o que o torna um procedimento mais limpo.32,33 Considerando que o glifosato vem sendo utilizado no Brasil desde 1978, em numerosas condies de agricultura, reas urbanas, manuteno de estradas e ferrovias, envolvendo inmeras formulaes comerciais, produzidas por empresas com diferentes nveis tecnolgicos,

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o desenvolvimento de mtodos rpidos e ambientalmente mais benignos para o controle de qualidade das formulaes comerciais deste herbicida de suma importncia para o setor industrial, bem como para o controle de adulteraes e/ou falsificaes desses produtos. No presente trabalho, proposto um procedimento em fluxo com deteco espectrofotomtrica para a determinao direta de glifosato, o qual baseado na reao entre glifosato e p-dimetilaminocinamaldedo (p-DAC) em meio cido, produzindo um composto colorido que apresenta mximo de absoro em 495 nm. O mtodo proposto foi validado e aplicado na anlise de glifosato em formulaes comerciais de herbicidas. PARTE EXPERIMENTAL Equipamentos No sistema em fluxo foi empregada uma bomba peristltica da marca Gilson, de 8 canais, com rotao varivel (1-50 rpm) para a propulso dos fluidos. Um injetor comutador manual de acrlico com barra deslizante, tubos de Tygon (1,42 mm d.i.), tubos de polietileno (0,8 mm d.i.) e conectores foram utilizados para o transporte e insero das solues (amostra e reagente) no sistema em fluxo por linha nica. Para controle e aquisio dos dados, foi utilizado um microcomputador equipado com uma interface eletrnica (OOIBase32-Ocean Optics). Para medida dos sinais transientes, utilizou-se uma lmpada de tungstnio e um espectrofotmetro da marca Ocean Optics UBS 2000, equipado com cela de fluxo de 80 mL e caminho ptico de 1 cm. Os volumes das alquotas de padro e amostra para preparo das solues foram medidos com auxlio de buretas automticas Metrohm modelo 665 (com preciso de 0,001 mL). Reagentes e solues Todos os reagentes empregados foram de grau analtico e usados sem purificao prvia. No preparo das solues foi utilizada gua de alta pureza (resistividade 18 M cm) obtida em sistema de purificao Milli-Q (Millipore Corp., Bedford, MA, USA). Soluo padro 2000 mg mL-1 de glifosato foi preparada a partir de glifosato de alta pureza (Sigma Aldrich, 96%). A curva analtica empregada para determinao de glifosato foi construda mediante diluies adequadas da soluo estoque de glifosato para as concentraes finais de 40, 80, 160, 240, 320, 400, 480, 560 e 640 mg mL-1. No preparo da soluo de reagente cromognico, foram pesados 0,0751 g de p-dimetilaminocinamaldedo (p-DAC), que foram dissolvidos em 2,50 mL de HCl 1,00 mol L-1, e em seguida diludo com gua desionizada para o volume de 50,00 mL, obtendo uma soluo de concentrao final de 0,15% (m/v) de p-DAC em HCl 0,05 mol L-1. Esta soluo estvel por uma semana quando mantida sob refrigerao a 4 oC. Aquisio e preparo das amostras Para a aplicao do mtodo proposto, 4 amostras de herbicidas comerciais de diferentes marcas (A, B, C, D), com contedo nominal de 360 g L-1 de glifosato na sua forma cida, foram adquiridas em estabelecimentos agropecurios da cidade de Araraquara SP (Brasil). A amostra D foi diluda a 25% (m/v) em nosso laboratrio. No preparo das solues para anlise, duas diluies sucessivas foram estabelecidas. Inicialmente, preparou-se uma soluo com concentrao final de 5,0 g L-1 de glifosato por diluio adequada da soluo de herbicida original. Na sequncia, 1,00 mL desta soluo foi transferida para balo de 50,00 mL, aps correo do pH para aproximadamente 2,0; com soluo de HCl diludo (1,00 mol L-1).

Procedimento O mdulo de anlise empregado foi o sistema em linha nica, similar ao descrito anteriormente na literatura34 (Figura 1). Nessa Figura, o injetor est na posio de amostragem, sendo a amostra bombeada atravs da ala de amostragem. Quando o injetor comutado para a posio de insero (sentido da seta), insere-se o volume da ala de amostragem no caminho do fluido carregador e este transporta a amostra em direo ao detector, sendo que durante o transporte a amostra se dispersa continuamente no fluido carregador, gerando um gradiente de concentrao no percurso analtico.27 Um fluxo atravs do detector, posicionado aps a reao ter ocorrido, registra o sinal transiente por meio da absorbncia (lmx 495 nm) cuja magnitude proporcional concentrao de glifosato. Aps o registro do valor mximo de absorbncia, o injetor comutador retorna posio inicial (posio de amostragem) iniciando outro ciclo de medida.

Figura 1. Diagrama de fluxo do sistema FIA usado na determinao de glifosato. IC: injetor comutador; L: ala de amostragem (50 cm); A: soluo padro de glifosato ou amostra (0,6 mL min-1); Re; soluo de p-DAC 0,15% (m/v) (0,7 mL min-1); R: reator (100 cm x 0,8 mm d.i.); B: bomba peristltica; D: descarte e Det: detector. A seta indica a direo do fluxo

Otimizao das variveis A otimizao das condies experimentais para o emprego do sistema FIA proposto para a determinao de glifosato foi feita por meio de anlise quimiomtrica.35 O estudo das variveis envolvidas na reao foi feito por meio de planejamento fatorial fracionrio (25-1) e planejamento fatorial completo (23). Todos os ensaios realizados foram feitos em triplicata e os resultados foram analisados utilizando o software Statistics, verso 6.0. RESULTADOS E DISCUSSO Em artigo de reviso,36 os autores apresentam os valores das constantes de dissociao encontradas na literatura para o glifosato (pK1 = 0,8; pK2 = 2,16; pK3 = 5,46; pK4 = 10,14) as quais fornecem informaes sobre o grau de dissociao do herbicida em funo do pH. Desta forma, a amina secundria na molcula de glifosato pode reagir com p-DAC em meio cido, uma vez que a maior parte do glifosato se encontra protonado no stio do grupo amina. A reao entre aminas primria ou secundria e p-DAC ocorre via condensao do grupo amino protonado com o grupo carbonila do reagente, para produzir um sal imnio.37 O mecanismo provvel desta reao est apresentado na Figura 2, o qual se baseia em modelos de reaes sugeridas na literatura.37,38 Devido inexistncia de procedimentos de anlise em fluxo para o analito em estudo, optou-se por um sistema em linha nica para evitar uma maior diluio das solues, em decorrncia da reao empregada ser lenta e, tambm, pela vantagem de ser mais simples de ser executado por um tcnico na anlise de formulaes comerciais. Processos de fluxos intermitentes34 so melhoramentos no sistema de injeo-comutao que acarretariam menor consumo de reagentes e amostra com menor gerao de resduos, entretanto,

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Figura 3. Grfico de Pareto para a visualizao dos efeitos do sistema FIA e das variveis qumicas usando planejamento fatorial fracionrio

ciaram na reao entre p-DAC e glifosato, por apresentarem efeitos menores que 5%. Desta forma, as mesmas foram fixadas nos nveis mais baixos (-1). Alterando as condies experimentais, realizou-se o planejamento fatorial completo para as variveis: concentrao de p-DAC, reator e vazo. Os resultados obtidos esto apresentados na Figura 4.

Figura 2. Esquema do mecanismo da reao entre glifosato e p-DAC

quando dispositivos automticos so disponveis para injeo, um procedimento com parada de fluxo uma opo melhor do que a adio por fluxos intermitentes.39 Otimizao das variveis Experimentos preliminares realizados em nosso laboratrio com a utilizao dos cidos clordrico, sulfrico, ntrico, perclrico e actico para o processamento da reao revelaram um sinal analtico superior para o cido clordrico, sendo este o selecionado para os experimentos de triagem descritos na sequncia. Para a obteno de uma melhor resposta analtica do sistema proposto, a triagem das variveis envolvidas na reao foi feita a partir de um planejamento 25-1 (fatorial fracionrio) e, em seguida, 23 (fatorial completo) com o intuito de determinar a influncia dos efeitos de cada varivel.35 As variveis de interesse foram: concentrao de p-DAC, concentrao de HCl, ala de amostragem, reator e vazo. Neste planejamento, 16 ensaios (n = 3) foram realizados, em condies experimentais definidas, preliminarmente, em dois nveis: alto (+1) e baixo (-1). Os resultados encontrados esto apresentados na Figura 3. O grfico de Pareto (Figura 3) representa a visualizao dos principais efeitos das variveis consideradas. Este grfico mostra que o sinal positivo indica que o melhor sinal analtico obtido quando h um aumento do valor da respectiva varivel, enquanto o sinal negativo indica que o melhor sinal favorecido quando h diminuio desta varivel, na faixa pr-estabelecida.30 Neste sentido, a concentrao de HCl e ala de amostragem foram as variveis que menos influenFigura 4. Grfico de Pareto para a visualizao dos efeitos do sistema FIA e das variveis qumicas usando planejamento fatorial completo

Neste ensaio, o grfico de Pareto obtido (Figura 4) mostra que sob esta condio de anlise, o reator a varivel que menos influencia na reao, sendo, portanto, fixada no nvel mais baixo (-1). Para a concentrao de p-DAC, maior resposta analtica seria obtida aumentando a concentrao desta soluo e, por questes de solubilidade, esta foi fixada no nvel mais alto (+1), uma vez que esta a concentrao mxima de p-DAC que a soluo de HCl 0,05 mol L-1 consegue dissolver. Para a varivel vazo, apesar do grfico de Pareto mostrar que diminuindo a vazo aumentaria a resposta analtica, esta foi mantida em 5 rpm, devido s vazes de 0,7 e 0,6 mL min-1 obtidas para as solues de reagente e de amostra, respectivamente. A Tabela 1 apresenta as variveis ensaiadas e as condies otimizadas empregadas, de acordo com o planejamento experimental adotado. Validao e aplicao do mtodo O mtodo analtico foi validado em termos de faixa linear dinmica, limite de deteco (LD), limite de quantificao (LQ), estudo de interferentes, preciso e ensaios de recuperao.40 A repetibilidade foi avaliada empregando medidas de 10 replicatas interdia e intradia

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Tabela 1. Variveis estudadas com suas respectivas condies experimentais otimizadas Varivel [p-DAC] (% m/v) [HCl] (mol L-1) Ala de amostragem (cm) Reator (cm) Vazo (mL min-1) Planejamento fatorial fracionrio Nvel (-1) Nvel (+1) Condio adotada 0,1 0,18 0,05 0,08 0,05 50 100 50 60 100 0,4 1,0 Nvel (-1) 0,1 100 0,7 Planejamento fatorial completo Nvel (+1) Condio adotada 0,15 0,15 150 100 1,4 0,7

de soluo padro de 300 mg mL-1, as quais apresentaram coeficiente de variao de 0,54 e 2,46%, respectivamente. Esses resultados de preciso podem ser considerados aceitveis, devido baixa porcentagem obtida para os respectivos coeficientes de variao.12 Curva analtica, LD e LQ A curva analtica foi obtida por injees sucessivas em triplicata de volumes de solues padro na faixa de concentrao de 40 a 640 mg mL-1 (2,37 x 10-4 a 3,78 x 10-3 mol L-1). A frequncia analtica obtida neste sistema foi de 24 medidas h-1 e os sinais transientes esto apresentados na Figura 5. O tratamento dos dados (n = 3) pelo mtodo dos mnimos quadrados forneceu a equao da reta: A = -0,00627 + 7,204x10-4 x C (R = 0.9996), onde A a absorbncia e C a concentrao do glifosato em mg mL-1.

Estudos adio de padro e recuperao Para verificar a eficincia e exatido do mtodo proposto, as amostras de herbicidas foram fortificadas para avaliar as possveis interferncias da matriz. As amostras de herbicidas foram fortificadas com concentraes de 50, 100 e 150 mg mL-1 de soluo padro de glifosato. Cada amostra foi analisada em replicata (n = 3). Os resultados obtidos esto apresentados na Tabela 2.
Tabela 2. Resultados de recuperao de glifosato em formulaes comerciais de herbicidas. Concentrao de glifosato adicionada em cada amostra: 50, 100 e 150 mg mL-1 Amostras A Concentrao encontrada (mg mL-1) 51,3 107,0 150,8 55,2 105,5 163,9 45,5 91,4 145,4 49,2 97,8 144,9 Recuperao (%) 103 107 101 m a = 104 3 110 106 109 m a = 108 2 91,0 91,4 96,9 m a = 93,1 3,3 98,4 97,8 96,6 m a = 97,6 0,9

m a Mdia D.P.R. de trs determinaes. Figura 5. Sinais transientes obtidos em triplicata para solues padro de glifosato nas concentraes de 40 a 640 mg mL-1. As condies do sistema de injeo em fluxo so as mesmas especificadas na legenda da Figura 1

Os limites de deteco (LD) e quantificao (LQ) foram determinados segundo a recomendao da IUPAC:41 LD = 3 x (s/S) e LQ = 10 x (s/S), onde s o desvio padro das medidas referente ao branco (n = 10) e S a inclinao da curva analtica. Os limites de deteco e quantificao foram 8,6 e 28,7 mg mL-1, respectivamente. Estudo de interferentes A possvel interferncia de alguns ingredientes, coprodutos de sntese ou adulterantes, que podem estar podem estar presentes nas formulaes comerciais foi estudada. Mesmo havendo regulamentos para a comercializao dessas formulaes, os produtores no so obrigados a especificar no rtulo do produto a lista de ingredientes inertes. Dentre os interferentes, estudou-se a influncia de nitrosoglifosato, isopropilamina, formaldedo, polioxietileno de alquilamina, glufosinato, e 2,4-D. Foi considerado efeito de interferncia quando o sinal mostrou um erro maior do que 3% na determinao do glifosato. Nenhuma interferncia foi observada na presena dessas substncias quando em concentraes iguais ou o dobro da concentrao de glifosato.

A mdia de recuperao obtida foi na faixa de 91,0 a 110%, com coeficiente de variao menor que 8%. Estes dados indicam que apesar da presena de surfactante (polietoxietileno amina) nas amostras de herbicidas comerciais, a diluio estabelecida e as anlises realizadas em pH aproximadamente 2 promoveram resultados de recuperao com boa preciso, devido ao efeito da matriz no ser significativo.39 Aplicao do mtodo proposto Muitas formulaes de herbicidas alm da presena do ingrediente ativo glifosato contm em sua composio aditivos, tais como solventes, surfactantes, etc. O principal aditivo das amostras de herbicidas contendo glifosato , em geral, o surfactante POEA, polioxietileno de alquilaminas de cadeias longas.42 A presena deste surfactante de grande importncia, uma vez que garante a sua eficincia de aplicao nas culturas, por possibilitar melhor aderncia nas folhas e, com isso, maior permanncia no tecido vegetal. Devido a esse fato, alguns produtos de herbicidas comerciais de diferentes marcas foram selecionados para se avaliar a aplicao do mtodo proposto e os resultados obtidos encontram-se sumarizados na Tabela 3.

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Tabela 3. Determinao de glifosato em formulaes comerciais de herbicidas Teor de glifosato D.P.R. encontrado2 (g L-1) (%) A 378,8 3,2 B 392,4 4,3 C 330,6 3,2 D4 274,6 1,2 1 Teor de glifosato fornecido pelo fabricante. 2 Mdia dos teores encontrado (n = 3). 3 Desvio padro relativo. 4 Amostra diluda.
3

Amostras

Teor rotulado de glifosato1 (g L-1) 360

CONCLUSO Os resultados obtidos mostram um bom desempenho do mtodo proposto para a anlise de glifosato em formulaes comerciais de herbicidas. O mtodo proposto simples, de baixo custo relativo, rpido, apresenta frequncia analtica de aproximadamente 24 medidas por hora sendo, portanto, uma alternativa vantajosa em relao a outros mtodos descritos na literatura. Alm disso, no h necessidade de etapas de pr-tratamento das amostras, requer baixo consumo de amostra e gera uma quantidade de resduo de aproximadamente 2,83 mg por anlise, o que implica em uma menor gerao de resduos quando comparado com os mtodos descritos na literatura, atendendo filosofia da Qumica Verde. O mtodo proposto apresenta absortividade molar (121,9 L mol-1 cm-1) inferior a dos mtodos espectrofotomtricos descritos na literatura.18,19 Entretanto, nas amostras analisadas (formulaes comerciais) a sensibilidade no fator preponderante haja vista que o glifosato est presente em grandes quantidades, exigindo diluies para a sua anlise. Adicionalmente, os mtodos espectrofotomtricos reportados na literatura apresentam como desvantagens a utilizao de reagentes e solventes txicos, como dissulfeto de carbono em meio de clorofrmio,18 a necessidade de aquecimento a 100 C para a promoo da reao19 aliado falta de reprodutibilidade. Desta forma, este estudo mostra a potencialidade do sistema de anlise por injeo em fluxo com deteco espectrofotomtrica para ser aplicado como um mtodo alternativo atrativo na determinao direta de glifosato em amostras de herbicidas comerciais. AGRADECIMENTOS CAPES, ao CNPq e CNPq/MAPA/SDA edital 64/2008 pelo apoio financeiro concedido. REFERNCIAS
1. Rebelo, R. M.; Vasconcelos, R. A.; Buys, B. D. M. C.; Rezende, J. A.; Moraes, K. O. C.; Oliveira, R. P.; Produtos agrotxicos e afins comercializados em 2009 no Brasil: uma abordagem ambiental, Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovveis Braslia: IBAMA, 2010. 2. IBAMA; Manual para requerimento de avaliao ambiental: agrotxicos e afins, Braslia: DIQUA/CGASQ, 2009. Disponvel em http://www.ibama.gov.br/qualidade-ambiental/manualdeprocedimentopara-registro-de-agrotoxicos/, acessada em Fevereiro 2011. 3. Abreu, A. B. G.; Matta, M. H. R.; Montagner, E.; Quim. Nova 2008, 31, 5. 4. Powell, H. A.; Kerby, N. W.; Rowell, P.; J. Chromatogr. 1990, 502, 201. 5. Vreeken, R. J.; Speksnijder, P.; Bobeldijk-Pastorova, I.; Noij, Th. H. M.; J. Chromatogr., A 1998, 794, 187. 6. Souza, T. A.; Matta, M. H. R.; Montagner, E.; Abreu, A. B. G.; Quim. Nova 2006, 29, 1372.

7. Jiang, J.; Lucy, C. A.; Talanta 2007, 72, 113. 8. http://www.foe.co.uk/resource/reports/impacts_glyphosate.pdf, acessada em Novembro 2009. 9. Powles, S. B.; Lorraine-Colwill, D. F. ; Dellow, J. J.; Preston, C.; Weed Sci. 1998, 46, 604. 10. Khrolenko, M. V.; Wieczorek, P. P.; J. Chromatogr., A 2005, 1093, 111. 11. Skark, C.; Zullei-Seibert, N.; Schttler, U.; Schlett, C.; Int. J. Environ. Anal. Chem. 1998, 70, 93. 12. Gonzlez-Martinez, M. A.; Brun, E. M.; Puchades, R.; Maquieira, A.; Ramsey, K.; Rubio, F.; Anal. Chem. 2005, 77, 4219. 13. Bunyatyan, Y. A.; Gevorgyan, A. A.; Gig. Sanit. 1984, 5, 43. 14. Coutinho, C. F. B.; Coutinho, L. F. M.; Mazo, L. H.; Nixdorf, S. L.; Camara, C. A. P.; Lanas, F. M.; Anal. Chim. Acta 2007, 592, 30. 15. Qian, K.; Tang, T.; Shi, T.; Wang, F.; Li, J.; Cao, Y.; Anal. Chim. Acta 2009, 635, 222. 16. Hanke, I.; Singer, H.; Hollender, J.; Anal. Bioanal. Chem. 2008, 391, 2265. 17. Hu, J.-Y.; Chen, C.-L.; Li, J.-Z.; J. Anal Chem. 2008, 63, 371. 18. Jan, M. R.; Shah, J.; Muhammad, M.; Ara, B.; J. Harzard. Mater. 2009, 169, 742. 19. Bhaskara, B. L.; Nagaraja, P.; Helv. Chim. Acta 2006, 89, 2686. 20. Xiao, J.; Zhou, Q.; Yang, B.; Wang, Z.; Anal. Sci. 2004, 20, 1415. 21. Songa, E. A.; Arotiba, O. A.; Owino, J. H. O.; Jahed, N.; Baker, P. G. L.; Iwuoha, E. I.; Bioelectrochemistry 2009, 75, 117. 22. Simes, F. R.; Mattoso, L. H. C.; Vaz, C. M. P.; Sens. Lett. 2006, 4, 319. 23. Chiu, H.-Y.; Lin, Z.-Y.; Tu, H.-L.; Whang, C.-W.; J. Chromatogr., A 2008, 1177, 195. 24. You, J. ; Kaljurand, M. ; Koropchak, J. A.; Int. J. Environ. Anal. Chem. 2003, 83, 797. 25. Horwitz, W.; Latimer Jnior, G. W.; Official methods of analyzes of AOAC international, 18a ed., AOAC International: Gaithersourg, 2005, p. 60-100. 26. Ribeiro, P. R. S.; Gomes Neto, J. A.; Pezza, L.; Pezza, H. R.; Talanta 2005, 67, 240. 27. Reis, B. F.; Gin, M. F.; Kronka, E. A. M.; Quim. Nova 1989, 12, 82. 28. Ruzicka, J.; Anal. Chim. Acta 1995, 308, 14. 29. Fernndez-Ramos, J. M.; Garca-Campaa, A. M.; Als-Barrero, F.; Bosque-Sendra, J. M.; Talanta 2006, 69, 763. 30. Rufino, J. L.; Pezza, H. R.; Pezza, L.; Anal. Sci. 2008, 24, 871. 31. Oliveira, A. F.; Fatibello-Filho, O.; Talanta 1999, 50, 899. 32. Rocha, F. R. P.; Nbrega, J. A.; Fatibello-Filho, O.; Green Chem. 2001, 3, 216. 33. Anastas, P. T.; Crit. Rev. Anal. Chem. 1999, 29, 167. 34. Reis, B. F.; Quim. Nova 1996, 19, 51. 35. Barros Neto, B.; Scarminio, I. S.; Bruns, R. E.; Como fazer experimentos, 3 ed.; Ed. da UNICAMP: Campinas, 2007, cap. 6, p. 305-339. 36. Amarante Jr., O. P.; Santos, T. C. R.; Brito, N. M.; Ribeiro, M. L.; Quim. Nova 2002, 25, 589. 37. Feigl, F.; Spot Tests in Organic Analysis, 5th. ed.; Elsevier, Amsterdam, 1966, p. 243. 38. Zawilla, N. H.; Mohammad, M. A. A.; Kousy, N. M. E.; Aly, S. M. E.M.; J. Pharm. Biomed. Anal. 2002, 27, 243. 39. Zagatto, E. A. G.; Jacintho, A. O.; Mortatti, J.; Bergamin-Filho, H.; Anal. Chim. Acta 1980, 120, 399. 40. Lanas, F. M.; Validao de mtodos cromatogrficos de anlise, Editora RiMa: So Carlos, 2004, cap. 2, p. 9-28. 41. Long, L. G.; Winefordner, J. D.; Anal. Chem. 1983, 55, 712A. 42. Williams, G. M.; Kroes, R.; Munrol, I. C.; Regul. Toxicol. Pharmacol. 2000, 31, 117.