24/3/2010

MICROBIOLOGIA - 3
Nutrio e crescimento microbiano ZOOTECNIA
Admilton Jnior

NUTRIO MICROBIANA Introduo

De todos os organismos vivos, os microrganismos so os mais versteis e diversificados em suas exigncias nutricionais. Alguns so to exigentes quanto o homem e outros animais. Todos os organismos vivos compartilham algumas necessidades nutricionais em comum: - carbono - nitrognio - gua

NUTRIO MICROBIANA

Em algumas situaes os microrganismos so estudados em seu hbitat natural.

Ex.: Fendas termais, sistemas de tratamento de resduos, solo

Para caracterizar suas propriedades (morfolgicas, fisiolgicas e bioqumicas) necessrio o cultivo em laboratrio. Cultivo in vitro: quando se conhece as exigncias nutricionais Cultivo in vivo: quando exigncias nutricionais especficas so desconhecidas.

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NUTRIO MICROBIANA

Para o cultivo in vitro so utilizados meios de cultura que simulam e at melhoram as condies naturais. Os elementos qumicos principais para o crescimento das clulas incluem C, N, H, O, S e P e so denominados de macronutrientes.

O carbono um dos elementos mais importantes para o crescimento microbiano todos requerem carbono Os compostos orgnicos so os que contm carbono Exceo para o dixido de carbono que considerado como inorgnico.

NUTRIO MICROBIANA

MACROnutrientes: necessrios em grande quantidade. Tem papel importante na

estrutura e metabolismo.

MICROnutrientes: quantidades mnimas. Funes enzimticas e estruturais das biomolculas

Uma clula tpica

C N H P, S, K, Na ...
Matria seca gua

Componentes necessrios s clulas

Fonte de Carbono
Compostos orgnicos: - Carboidratos - Lipdeos - Protenas Deles se obtm energia e unidades bsicas para o crescimento celular.

Utilizao de CO2 (microrganismos autotrficos) a forma mais oxidada do carbono, assim a fonte de energia provm da luz.

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Componentes necessrios s clulas

Fonte de Nitrognio
- elemento mais abundante depois do C, cerca de 12% (constituinte das protenas, cidos nuclicos, etc.)

Molculas orgnicas (aminocidos, protenas, etc.) Molculas inorgnicas (NH3, NO3-, N2)

Componentes necessrios s clulas

Hidrognio
- Principal elemento dos compostos orgnicos e de diversos inorgnicos
(gua, sais e gases)

Funo do H: Manuteno do pH Formao de ligaes de H entre molculas Serve como uma fonte de energia nas reaes de oxi-reduo da respirao

Oxignio
- Elemento comum encontrado nas molculas biolgicas (aminocidos,
nucleotdeos, glicerdeos ...)

- obtido a partir das protenas e gorduras. Na forma de oxignio molecular (O2), requerido por muitos para os processos de gerao de energia.

Componentes necessrios s clulas

Outros macronutrientes:
P S K Snese de cidos nuclicos, ATP; Estabilidade de aminocidos, componente de vitaminas; Atividade de enzimas;

Mg Estabilidade dos ribossomos; Ca Estabilidade da parede celular e termoestabilidade de endsporos; Na Requerido por microrganismos marinhos; Fe Papel-chave na respirao, componente dos citocromos e das protenas envolvidas no transporte de eltrons.

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Requisitos nutricionais -

Micronutrientes

Traos dos seguintes METAIS so necessrios na composio de um meio de cultura: Zn, Cu, Mn, Co, Mo e B
Exercem funo estrutural em vrias enzimas

- Nem sempre sua adio necessria - Meios sintticos com compostos de alto grau de pureza e gua ultra pura podem apresentar deficincias desses elementos.

gua e outros aditivos

gua
- Componente absolutamente indispensvel (com exceo dos protozorios que englobam partculas slidas) Laboratrio: destilada, filtrada, deionizada

Outros aditivos
Funes: aumentar a converso, evitar precipitao de ons, controlar a espuma, provocar inibio, estabilizar o pH.
Quelantes:

na autoclavagem ocorre a precipitao dos fosfatos metlicos

Ex.: EDTA, cido ctrico, polifosfatos

MEIOS DE CULTURA

Solues nutrientes para promover o crescimento de microrganismos.

Classes

Quimicamente definidos (sais, compostos orgnicos purificados, gua) Complexos (utilizam hidrolisados casena, carne, soja, levedura)

No existe um meio de cultura universal, mas Existem vrios tipos meios para diversas finalidades
Para obter sucesso no cultivo de microrganismos necessrio o conhecimento de suas exigncias nutricionais, para que os nutrientes sejam fornecidos de forma e proporo adequada.

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MEIOS DE CULTURA

Condies ambientais

v v v v v

Temperatura oxignio pH Radiao eletromagntica Presso atmosfrica, hidrosttica e osmtica

Efeito do oxignio no crescimento microbiano

Meio gelatinoso com indicador redox: Rosa quando oxidado Incolor quando reduzido

Durante as reaes de reduo do O2 so formados vrios intermedirios txicos. Ex: H2O2, OH, O2Os microrganismos aerbios e facultativos utilizam enzimas como a catalase para destruir as formas txicas

Aerbio

Anaerbio Facultativo Microaerfilo

Anaerbio aerotolerante

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Sistema para cultivo de anaerbios

Sistema para cultivo de aerbios

CRESCIMENTO MICROBIANO
Em microbiologia crescimento geralmente o aumento do nmero de clulas Na maioria dos procariotos ocorre a fisso binria: crescimento e diviso

Varia de minutos at dias Depende muito das condies ambientais Escherichia Coli - 20 minutos Pisolithus microcarpus 2,5 dias

O padro de crescimento o exponencial

9000 8000 7000 6000 clulas 5000 4000 3000 2000 1000 0 0 50 100 150 minutos 200 250 300

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O ciclo de crescimento
A fase exponencial reflete apenas uma parte do ciclo de crescimento de uma populao microbiana O crescimento de microrganismos em um recipiente fechado (batelada) apresenta um ciclo tpico com todas as fases de crescimento.

1) Fase Lag
Perodo de adaptao da cultura Mudana de meio, preparao do complexo enzimtico Reparao das clulas com danos.

2) Fase exponencial
Fase mais saudvel das clulas onde todas esto se dividindo. A maioria dos microrganismos unicelulares apresentam essa fase, mas as velocidades de crescimento so bastante variveis: - Procariticos crescem mais rapidamente que os eucariticos - Eucariticos menores crescem mais rapidamente que os maiores

3) Fase estacionria:
Num sistema fechado (tubo, frasco ou biorreator) o crescimento exponencial no pode ocorrer indefinidamente. Ocorre a limitao por depleo de nutrientes e acmulo de metablitos. Diviso = morte crescimento lquido nulo Ainda pode ocorrer: metabolismo energtico e produo de metablitos secundrios

4) Fase de morte (declnio):

A manuteno de uma cultura no estado estacionrio por longo tempo conduz as clulas ao processo de morte. - A morte celular acompanhada da lise celular

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MEDIDAS DO CRESCIMENTO MICROBIANO

Podem ser realizadas pelos seguintes mtodos: 1) Peso seco total das prprias clulas filtrao, secagem e pesagem 2) Peso de algum componente celular extrao, secagem e pesagem 3) Variao no nmero de clulas a) contagem de clulas totais b) contagem de clulas viveis

a) Contagem de clulas totais (contagem microscpica direta) Utilizam-se cmaras especiais de contagem (lmina com grade quadriculada) Ex.: Cmara de Neubauer

MEDIDAS DO CRESCIMENTO MICROBIANO contagem direta

Vantagens: mtodo rpido e fcil

No distingue as clulas vivas das mortas

Desvantagens

Pode-se omitir clulas pequenas Clulas mveis precisam ser imobilizadas Entre outras.

MEDIDAS DO CRESCIMENTO MICROBIANO contagem indireta

b) Contagem de clulas viveis:

Contagem das colnias formadas em meio de cultura em placas.

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Diluio das suspenses celulares

Amostras concentradas precisam ser diludas

Razes:
Erros devido juno de clulas na colnia Restries podem fazer clulas viveis no originar colnias

So empregadas vrias diluies decimais porque difcil prever o nmero de viveis. contada a placa com 30 a 300 colnias

MEDIDAS DO CRESCIMENTO MICROBIANO

Outros mtodos: Turbidimetria

As clulas dispersam a luz e quanto mais clulas mais turvo o meio Pode ser medida com um espectrofotmetro

O uso da turbidimetria exige a construo de uma curva padro Turbidez X quantidade de clulas

Contagem eletrnica