Controle do Crescimento Microbiano

1. Introduo
1.1. Quais os principais crescimento microbiano? Temperatura pH Disponibilidade de H2O Disponibilidade de O2 fatores limitantes para o

1.2. Uso dos agentes de controle - estudos com microrganismos ou sua aplicao - evitar infeces - evitar a decomposio de materiais

Condies que Afetam a Atividade de um Agente de Controle Microbiano

* tamanho da populao

* intensidade ou concentrao do agente

* tempo de exposio * temperatura do ambiente * natureza do meio: umidade, pH... * tipo de microrganismo**

Influncia do Tamanho Inicial da Populao sobre a Efetividade de um Agente de Controle

Influncia da concentrao de Fenol sobre o crescimento de Escherichia coli

Fenol a 35 C

Cortesia da Universidade de Cambridge

Influncia da temperatura no crescimento de Escherichia coli exposta a Fenol

Cortesia da Universidade de Cambridge

3. Tipos de Agentes de Controle e Mecanismos de ao 3.1. Controle Antimicrobiano por Agentes Fsicos - Esterilizao pelo calor

- Esterilizao por radiao

- Esterilizao por filtrao

3.2. Controle Antimicrobiano por Agentes Qumicos

- Agentes qumicos de uso externo (tpico) 3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo 3.3.1. Frmacos antimicrobianos sintticos

3.3.2. Antibiticos
3.3.3. Frmacos antifngicos 3.3.4. Frmacos antivirais

3.1. Controle Antimicrobiano por Agentes Fsicos

3.1.1. Calor mido

* desnaturao de protenas e enzimas

a) gua fervente (100 C) - clulas vegetativas x esporos

b) Sob presso (autoclavagem) 121 C a 1,1 kg cm-2 - rpido aquecimento - grande penetrao c) Pasteurizao 1860: Louis Pasteur/vinho 62,8 C/30 min ou 72 C/15 s

Medida da Esterilizao pelo Calor

Efeito da temperatura na viabilidade de uma bactria mesoflica

Fonte: Madigan et al., 2004. Microbiologia de Brock

Relao Entre Temperatura e Tempo de Morte em Mesfilos e Termfilos

Termfilos

Mesfilos

Fonte: Madigan et al., 2004. Microbiologia de Brock

3.1. Controle Antimicrobiano por Agentes Fsicos

3.1.2. Calor Seco

* Oxidao dos constituintes orgnicos * Menor eficincia que o calor mido

a) incinerao: eliminao de contaminantes e cadveres, esterilizao da ala de platina

b) forno de Pasteur * 160 C durante 2 h

3.1.3. Baixas Temperaturas

* preservao de alimentos, drogas * inibio das reaes metablicas * formao de cristais de gelo (congelamento) * reduo da gua disponvel

Tempo necessrio para matar endsporos bacterianos pelo calor

Espcie Calor mido Temp C Tempo (min) 100 105 8-15 5-10 Calor seco Temp C Tempo (min) 140 160 180 >180 9-90 3 50 15-35 5 50 15-35 5

Bacillus anthracis

Clostrid. botulinum 100 110 115 C. perfringens 100 105 115 120 100 105

300-530 120 32-90 130 10-40 140 5-45 5-27 4 1 5-90 5-25 120 130 140

C. tetani

130 140 160

20-40 5-15 12

3.1. Controle Antimicrobiano por Agentes Fsicos

3.1.4. Radiaes
* Energia eletromagntica: raios csmicos a ondas de rdio

a) ionizante: raios gama

Gamma radiation, also known as gamma rays (denoted as ), is electromagnetic radiation of high frequency (very short wavelength). They are produced by high energy sub-atomic particle interactions in natural processes and man made mechanisms. These include electron-positron annihilation, neutral pion decay, fusion, fission, lightning strike, inverse Compton scattering and synchrotron radiation. Gamma ray production events range from production of a single gamma photon to explosive bursts that are the most powerful observed in the visible universe. Because gamma rays are a form of ionizing radiation, they pose a health hazard when absorbed by living tissue.

3.1. Controle Antimicrobiano por Agentes Fsicos

3.1.4. Radiaes
* Energia eletromagntica: raios csmicos a ondas de rdio

a) ionizante: raios gama, raios-X, feixes de eltrons: *ionizao das molculas ex. H2O OH* (hidroxil) + e- + H+ Poderoso oxidante * alto poder de penetrao b) no ionizante: * luz ultravioleta: 136 a 400 nm (** 260 nm) * excita os eltrons produzindo vrios tipos de reao: DNA (mais afetado) - dmeros de pirimidina * baixo poder de penetrao

Capela de fluxo laminar com uma fonte de radiao ultravioleta utilizada para a descontaminao das superfcies internas

Sensibilidade de Microrganismos e de Funes Biolgicas Radiao

Gray (Gy) uma unidade do Sistema Internacional de medidas, que representa a quantidade de energia de radiao ionizante absorvida (ou dose) por unidade de massa, onde: 1 Gy = 1kg.m-2 s-2 O nome da unidade em homenagem a Louis Harold Gray (19051965), um radiologista britnico.

3.1. Controle Antimicrobiano por Agentes Fsicos

3.1.5. Filtrao

* Chamberland (1884): primeiro filtro bacteriolgico de porcelana para gua * Modernos: membranas de steres de celulose - poros uniformes - dimetro varivel - descartveis
* ex. filtros HEPA (high efficiency particulate air): acetato de celulose dobrado ao redor de folhas de alumnio - retm 99% da matria particulada

Filtros HEPA Utilizados em Cmaras de Fluxo Laminar

Unidades de Membranas Filtrantes Descartveis, Pr-Esterilizadas e Montadas

Fonte: Madigan et al., 2004, 2010. Microbiologia de Brock

Filtros Microbiolgicos

Filtro de profundidade (Fibras de papel ou de borossilicato)

Membrana Filtrante (Acetato de celulose, nitrocelulose ou polissulfona)

Filtro Nucleoporo (Filmes de policarbonato)

Fonte: Madigan et al., 2004. Microbiologia de Brock

Micrografia Eletrnica de Varredura de Bactrias e Algas Aquticas Retidas em um Filtro Nucleopore

Fonte: Madigan et al., 2004. Microbiologia de Brock

Agentes Qumicos

3.2. Controle Antimicrobiano por Agentes Qumicos

3.2.1. Esterilizantes a) xido de etileno * ativo contra clulas vegetativas e endsporos * alta penetrao, mas necessita longa exposio * lquido abaixo de 10,8C, acima disso um gs * inativao das protenas com H lbil (-SH, -NH) H2C-CH2 + R-SH O R-S-CH2CH2O-H (inativao)

b) Alquilantes (alquilao de protenas: cross-link) radical livre, carbeno, etc. * -propionolactona * Glutaraldedo * Formaldedo (formol)

3.2. Controle Antimicrobiano por Agentes Qumicos

3.2.2. Desinfetantes a) Fenis (cido carblico): primeiro agente qumico usado para o controle microbiano * Joseph Lister (1865): efetivo agente antissptico em hospitais * soluo a 5% mata clulas vegetativas, mas no os endsporos

Joseph Lister

Fenol

b) lcoois * Etlico a 60-85%: mata clulas vegetativas * Metanol: mais eficiente porm muito txico * Desnaturao de protenas * Dissolvem os lipdeos da membrana

3.2. Controle Antimicrobiano por Agentes Qumicos

c) Halognios: iodo, cloro, bromo * iodo e compostos relacionados: agente oxidante, combina-se com a tirosina, inativando protenas * cloro: formao de cido hipocloroso liberando radicais de oxignio d) Metais pesados: chumbo, zinco, prata, cobre, mercrio * combinam-se com protenas, provocando sua inativao

ex.
SH enzima SH + HgCl2 enzima S Hg + 2HCl S

3.2. Controle Antimicrobiano por Agentes Qumicos

e) Detergentes * desnaturao das membranas - Aninicos: [C9H19COO]-Na+ (sabo) - Catinicos: Cloreto de amnio

- No inicos: octoxinol (etileno)

Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo

- A maioria dos agentes fsicos muito drstica e a maioria dos agentes qumicos muito txica para uso interno em humanos - Mesmo antisspticos moderados podem ser aplicados somente sobre a pele - Diferentes tipos de frmacos antimicrobianos so produzidos continuamente pela indstria farmacutica

- Os frmacos antimicrobianos so classificados de acordo com sua estrutura molecular, seu mecanismo de ao e seu espectro de atividade antimicrobiana
- Categorias de frmacos antimicrobianos: Agentes sintticos Antibiticos

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo

3.3.1. Frmacos antimicrobianos sintticos
Salvarsan primeiro agente quimioterpico: composto orgnico com arsnio uso do arsnico para tratamento da sfilis: at 1900 (muito txico) Paul Erlich - Prmio Nobel 1908

Paul Erlich
Fonte: Madigan et al., 2004. Microbiologia de Brock

Salvarsan

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo

3.3.1. Frmacos antimicrobianos sintticos Sulfonamidas * Gerhard Dogmagk da Bayer (1935) - teste com corantes orgnicos sintticos contra estreptococos: Prontosil * Jacques Trfoul (Sulfanilamida): anlogo estrutural do PABA (c. p-aminobenzico)
(c) cido flico

- PABA: coenzima para formao de c. tetraflico (sntese de timidina e aminocidos) - Seres humanos no usam PABA, sintetizam viatmina B9 a partir do c. flico dos alimentos * 1945: milhares de derivados (SULFONAMIDAS)

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo

3.3.2. Antibiticos
Definio: Agentes antimicrobianos produzidos por microrganismos (bactrias e fungos) exibindo funo de inibir ou matar outros microrganismos

Ganhadores do Premio Nobel em Fisiologia e Medicina de 1945 Descoberta da Penicilina e seus efeitos curativos em vrias doenas infeciosas"

Sir Alexander Fleming

Ernst B. Chain

Sir Howard Florey

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo

3.3.2. Antibiticos
- Espectro de ao: * Largo espectro (ex: Tetraciclina) * Baixo espectro (ex: Vancomicina)

Produo e Utilizao Anual de Antibiticos no Mundo

* * *

* Antibiticos -lactmicos

Fonte: Madigan et al., 2004. Microbiologia de Brock

Principais Agentes Antimicrobianos de Procariotos

Antibiticos -lactmicos: * Principais representantes: penicilinas e cefalosporinas * 50% dos antibiticos produzidos mundialmente * Produtores: Penicillium chrysogenum: penicilina Acremonium spp.: cefalosporina * Inibem a sntese de peptidoglicano (transpeptidao) * Provocam a liberao de autolisinas: digesto da parede j existente * Espectro: ativos contra bactrias Gram positivas * Aparecimento de resistncia: produo de -lactamases

Principais Agentes Antimicrobianos de Procariotos

Antibiticos Aminoglicosdeos: * Aminoacares unidos por ligaes glicosdicas * Principal representante: Estreptomicina (produzida por Streptomyces griseus) * Ao: inibio da sntese de protenas (ligao com a subunidade 30S)
* Espectro: ativos contra G- e G+, usados clinicamente contra Gram negativos
* Rpido aparecimento de cepas resistentes * Apenas 3% do total de antibiticos produzidos

Principais Agentes Antimicrobianos de Procariotos

Antibiticos Macroldeos: * Grande anel lactona conectado com acares * Principal representante: Eritromicina (produzida por Streptomyces erythreus) * Ao: inibio da sntese de protenas - combina-se com a subunidade 50S ribossomal * Ativos contra bactrias Gram + e Gram * Usado em substituio penicilina para pacientes alrgicos

Eritromicina
Fonte: Madigan et al., 2010. Microbiologia de Brock

Mecanismos de Ao de Alguns dos Principais Agentes Antimicrobianos de Procariotos

Sntese Protica (inibidores de 50S)
Eritromicicina (macroldeo)

Sntese Protica (inibidores de 30S)

* Principais alvos: - Parede celular - Membrana plasmtica - Processos biossintticos: sntese de protenas sntese de c. nuclicos

Fonte: Madigan et al., 2010

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo

3.3.3. Frmacos Antifngicos
* Apresentam problemas para o desenvolvimento de quimioterpicos * Muitos frmacos antifngicos podem ser utilizados apenas em aplicaes tpicas (superfcie) * Alguns apresentam toxicidade seletiva: afetam estruturas ou processos metablicos especficos dos fungos * Principais representantes: Polienos (Streptomyces nodosus; S. nursei) Azis (frmacos sintticos)

Mecanismos de Ao de Agentes Quimioterpicos Antifngicos

Fonte: Madigan et al., 2010. Microbiologia de Brock

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo

3.3.3. Frmacos Antivirais Controle de vrus
* a condio de parasita intracelular obrigatrio - ntima ligao com as funes da clula hospedeira - dificuldade de controle

a) Anlogos de Nucleosdeos
* AZT (Zidovudine): anlogo estrutural da timidina - bloqueia a sntese de DNA intermedirio dos retrovrus (transcriptase reversa)
* Aciclovir: inibe o alongamento do cido nucleico viral

b) Neviparina: liga-se transcriptase reversa, inibindo sua ao c) Rifamicina: inibe a RNA polimerase

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo

3.3.3. Frmacos Antivirais Interferon: * substncias antivirais produzidas por clulas animais * protenas de baixo PM

* inibem a multiplicao dos vrus por estimular a produo de protenas antivirais

* ligao a receptores de clulas no infectadas * especficos para cada tipo de clula e no de vrus * eficientes para vrus de baixa virulncia

* sua produo induzida pela presena do vrus, pelo cido nucleico viral ou pelo vrus inativado por radiao

Drogas Antivirais Criadas por Computador

Drogas antivirais geradas por computador. Inibidores de proteases virais

Fonte: Madigan et al., 2004. Microbiologia de Brock

Aparecimento de Resistncia a Drogas Antimicrobianas em Alguns Patgenos Humanos

* *

* Apresentam linhagens que no podem ser controladas com os frmacos atualmente conhecidos
Fonte: Madigan et al., 2010. Microbiologia de Brock

Aparecimento de Resistncia a Drogas Antimicrobianas

Neisseria gonorrhoaea

Surgimento de bactrias resistentes s drogas antimicrobianas. (a) relao entre o uso do antibitico e a porcentagem de bactrias resistentes (b) porcentagem de casos relatados de gonorria causada por linhagens resistente s drogas
Fonte: Madigan et al., 2004. Microbiologia de Brock

Avaliao da Sensibilidade a Antibiticos por Mtodos de Diluio

Fonte: Madigan et al., 2004. Microbiologia de Brock

Teste de Difuso em Discos - Antibiograma

Padres definidos pelo Instituto de Padres Clnicos e Laboratoriais (CLSI)

Fonte: Madigan et al., 2010