Cintica e regulao

enzimtica
IST FML
2 Semestre 2007/2008
Trabalho realizado por:

Miguel Amador n58484
Joana Nunes n58497
Joo Marques n58513

Cintica Enzimtica
Estrutura Enzimtica Constituio em Aminocidos
Mecanismos de Aco Enzimtica
So difceis de definir quantitativamente
Determinar constantes da reaco catalisada
influenciam
necessrio Pelo que
Cintica Enzimtica
Cintica Enzimtica
Estudo da velocidade de uma reaco qumica que ocorre na presena de
um enzima
Permite elucidar sobre:
Os pormenores do mecanismo cataltico das enzimas
O papel das enzimas no metabolismo
Controle da actividade
Mecanismos de inibio

Velocidade vs. Concentrao
A concentrao de substrato influencia a velocidade de uma reaco
Estudo da relao entre a concentrao e a velocidade:
. No inicio da reaco a quantidade de substrato constante, j que a
quantidade de substrato muito maior do que a de enzima.
.Determina-se a velocidade inicial de reaco, V
o
,para uma determinada
[S].
.Obtm-se valores para vrias concentraes de substrato, mantendo
constante a concentrao de enzima.
Assim podemos traar os valores num grfico, em que exprimimos V
o

como funo de [S]
Velocidade vs. Concentrao
Dados:
Para [S] baixas, V
o
aumenta quase linearmente
Para [S] maiores, V
o
aumenta mais gradualmente
Para [S] mais elevadas, atinge-se uma velocidade mxima, V
mx
.
Equao de Michaelis-Menten
Comportamento explicado pela formao do complexo enzima-substrato ES
1. O enzima liga-se ao substrato reversivelmente formando o complexo ES
2. O complexo ES dissocia-se em enzima livre e produto da reaco
Reaco
rpida
Reaco
mais lenta
.A reaco 2, mais lenta, limita a velocidade global da reaco.
.A velocidade proporcional concentrao do complexo ES.
.A cada momento o enzima existe na forma livre e no complexo ES.
.A velocidade mxima (V
mx
) da reaco ocorre quando todos os enzimas esto
associadas a molculas de substrato.
Deduo da Equao Michaelis-Menten
A curva que representa a relao entre [S] e V
o
tem forma idntica para a maior
parte dos enzimas. Esta curva pode ser descrita algebricamente pela equao de
Michaelis-Menten.
Hiptese: o passo limitante da velocidade das reaces enzimticas a desassociao
do complexo ES
A equao de Michaelis-Menten
Deduo da Equao Michaelis-Menten
Presuposto: no h transformao de produto em substrato
Reaces de formao e desassociao do complexo ES:
V
o
pode ser considerado como a velocidade com que ocorre a quebra da ligao ES
No fcil determinar [ES]!
[E
T
] - concentrao total da enzima
A concentrao de enzima livre , assim, [E
T
]-[ES]
Deduo da Equao Michaelis-Menten
.Passo 1
Velocidade de formao de ES
Velocidade de degradao de ES

.Passo 2
[ES] constante, ou seja, a velocidade de degradao e formao de ES so iguais.
.Passo 3
Deduo da Equao Michaelis-Menten
.Passo 4
Obtemos V
o
, substituindo [ES]
A velocidade mxima quando [ES]=[E
T
]!
Equao de Michaelis-Menten
Anlise da Equao Michaelis-Menten
K
m
unidades de concentrao

A equao de Michaelis-Menten, que nos d a relao quantitativa entre a
velocidade inicial V
0
, a velocidade mxima V
mx
e a quantidade inicial de
substrato [S], todas relacionadas pela constante de Michaelis K
m

No caso de V
0
ser exactamente metade de V
max
:
K
m
corresponde concentrao de substrato para a qual V
0
metade da velocidade mxima
Anlise da Equao Michaelis-Menten
A equao de Michaelis-Menten muito til para determinar os valores de K
m
e V
mx
das
reaces.
Os enzimas que exibem uma dependncia hiperblica de V
0
em funo de [S] diz-se que seguem
a cintica de Michaelis-Menten.
Enzimas cujo mecanismo obedea s duas reaces anteriores podemos dizer que o valor de K
m

est relacionado com a afinidade do enzima para o substrato, e logo diferente de substrato para
substrato e de enzima para enzima.
O V
mx
a velocidade mxima que a reaco pode alcanar, na situao virtual em que todos
os enzimas se encontram ligados ao substrato.
Equao de Lineweaver-Burk
Podemos transformar a equao de Michaelis-Menten, invertendo-a:
Esta forma da equao de Michaelis-Menten chama-se equao de Lineweaver-Burk
Equao de Lineweaver-Burk
Grfico de 1/[V
0
] em funo de 1/[S]
Obtm-se uma funo
linear!
.Esta recta tem um declive K
m
/V
mx

.A interseco da recta no eixo 1/V
0
corresponde ao valor 1/V
mx

.A interseco com o eixo 1/[S] corresponde a -1/K
m

Permite uma determinao de V
mx
precisa!
Inibio enzimtica
Reversvel
Irreversvel
Competitiva
Anti-Competitiva
Mista
Inibio Reversvel Competitiva
H competio pelo centro activo do enzima
O inibidor estruturalmente semelhante ao
substracto
A inibio pode ser contrariada adicionando
mais substracto ao meio
O Km aumenta e o Vmax no se altera
Inibio Reversvel Competitiva
Inibio Reversvel Competitiva
Inibio Reversvel Competitiva
Inibio Reversvel Anti-Competitiva
O inibidor liga-se a um local especfico do
enzima (que no o centro activo)
O inibidor liga-se apenas ao complexo ES,
formando o complexo ESI
O Km diminui e o Vmax diminui
Inibio Reversvel Anti-Competitiva
Inibio Reversvel Anti-Competitiva
Inibio Reversvel Anti-Competitiva
Inibio Reversvel Mista
O inibidor liga-se a um local especfico do
enzima (que no o centro activo)
O inibidor liga-se tanto ao enzima livre
como ao complexo ES
Vmax diminui
Km pode aumentar, diminuir ou manter-se
Inibio Reversvel Mista
Inibio Reversvel Mista
Inibio Reversvel Mista
Inibio Reversvel
Vmax aparente Km aparente
Sem inibio

Vmax Km
Inibio
competitiva
Vmax Km
Inibio Anti-
Competitiva
Vmax/ Km/
Inibio Mista

Vmax/ Km/
Quando = , a Inibio Mista tem o nome de
Inibio No Competitiva
Inibio Irreversvel
O inibidor combina-se permanentemente ao
enzima de uma das seguintes formas:
Ligao covalente

Destruio de um grupo funcional essencial ao
funcionamento do enzima

Ligao no covalente particularmente estvel
Hexocinase
A hexocinase fosforila a glucose para glucose-6-fosfato
Reaco ocorre com consumo de ATP juntamente
com um io Mg2+
O Km para a glucose 0.1mM, e a concentrao de
glucose na clula 4mM
A hexocinase regulada alostericamente pelo
produto da sua prpria reaco
Hexocinase
A hexocinase uma enzima do tipo indutivo
Hexocinase
Fosforilao impede a sada de glucose da clula
Hexocinase
Reaco catalisada pela hexocinase
Hexocinase
No fgado tambm existe uma hexocinase, mas com
menor afinidade para com a glucose
Esta s est activa quando a concentrao de
glucose no sangue muito elevada
No fgado, a glucose convertida em glicognio
Quando a concentrao de glucose no sangue baixa,
o fgado no compete com outros tecidos
Hexocinase
A fosforilao da glucose reversvel!
A converso da glucose-6-fosfato em
glucose ocorre no fgado durante a
gluconeognese.
Enzimas Reguladores
Enzimas que aumentam ou diminuem a sua
actividade em reaco a determinados factores.
Fazem normalmente parte de sequncias
metablicas.
Permitem regular a actividade de toda a
sequncia metablica e possibilitam clula
ajustar-se s suas necessidades energticas e
biomolculares.
Tipos de Moduladores
Mecanismos que regulam a actividade enzimtica:
Variao da concentrao de substrato
Variao de pH e temperatura
Inibio enzimtica
Modulao covalente
Modulao alostrica
Modulao alostrica
Ocorre em enzimas que possuem um local de modulao alostrico
Modulador alostrico
Positivo
(activam o enzima)
Negativo
(inibe o enzima)
Heterotropismo
(o modulador
diferente do substrato)
Homotropismo
(o modulador
igual ao substrato)
A ligao entre o modulador e o enzima no-covalente e o local de modulao
especifico para cada modulador, no caso dos enzimas heterotrpicos
Modulao alostrica
Induz:
Modificaes conformacionais
na estrutura espacial do
enzima
Modifica a afinidade do
enzima para com os seus
substratos
Modulao alostrica
Um modelo muito comum de
regulao alostrica a inibio
por retroalimentao, onde o
prprio produto da reaco
actua como modulador da
enzima que a catalisa.

Cintica
No seguem a cintica de
Michaelis-Menten
Comportamento sigmide
[S] para a qual V
0
=V
mx
/2 no
corresponde ao K
m

O comportamento sigmide explicado pela interaco entre as subunidades das
protenas, j que mudanas estruturais numa subunidade so transferidas para as
adjacentes, atravs de interaces no covalentes entre elas.
Cintica
Enzimas homotrpicas pequenas variaes na concentrao
do modulador podem provocar grande variaes na actividade
do enzima.
Enzimas heterotrpicas dificil generalizar a forma como
se comportam . Apresentam uma grande variabilidade no
comportamento.
Cintica
Modulao covalente
Fosforilao
Adenilao
Urinilao
ADP-ribosilao
Metilao
Grupos adicionados ou retirados do enzima atravs
de modificaes covalentes
Fosforilao
Ligao de um grupo Fosforil a determinados resduos de
aminocidos
catalisada por quinases
um processo reversvel
Fosfatase remove os grupos fosforil adicionados
Fosforilao
Influencia a polaridade
dos aminocidos
Permite o estabelecimento
de pontes hidrogeninicas
Importantes para a estrutura e
conformao da molcula
O grupo fosforil:
Adenilao
adicionado um grupo Adenil tirosina
Uridilao
adicionado um grupo uridil tirosina
ADP-Ribosilao
acresentada uma ADP-Ribose, com incidncia nos resduos
Arginina, Glutamina, Cistena e Histidina alterada (diftamida-a)
Metilao
adicionado um grupo metil em resduos de glutamato
Zimognios
A regulao enzimtica pode passar ainda pela existncia de
um precursor, sem capacidade cataltica, que, no caso das
proteases, so chamados zimognios.
Zimognio Clivagem proteoltica
Enzima activa