Dogma Central da Biologia

Como o DNA se relaciona com as proteínas?

- É feita uma cópia (negativa) de um trecho de DNA (transcrição)

- mRNA é traduzido em proteínas (tradução)

out/2007 1
 Gene
Definição molecular atual

São segmentos úteis de DNA (ou RNA – em alguns

organismos). Toda seqüência de nucleotídeos necessária
para a síntese de uma cadeia polipeptídica ou de RNA
funcionais.
Seqüência codante
Cauda de poliadenina
ATG

Promotor E1 I1 E2 I2 E3 PoliA

Interruptor do gene Seqüência não-codante

Fatores transcricionais Splicing
RNA polimerase
 TRANSCRIÇÃO

• Processo pelo qual uma molécula de RNA é

sintetizada a partir da informação contida na
seqüência de nucleotídeos de uma molécula de DNA
fita dupla.

• A transcrição representa a diversidade e a

complexidade da expressão dos genes contidos em
um determinado genoma.

• Enquanto a síntese de DNA deve ser precisa e

uniforme, a transcrição reflete o estado fisiológico da
célula e, portanto, é extremamente variável para
atender às suas necessidades.
 TRANSCRIÇÃO
Características Gerais:

•Complementaridade
•Antiparalelismo ( T = U)
•Síntese 5'  3‘
•RNA Polimerase (RNAP):

• Funções
reconhecem e ligam-se
desnaturam DNA
mantém estável a dupla fita aberta
mantém estável DNA:RNA
terminam síntese
restauram DNA
 TRANSCRIÇÃO

• Apenas uma das fitas do DNA é utilizada como

molde, portanto, a molécula de RNA sintetizada é
complementar à fita de DNA que lhe deu origem e
idêntica à outra fita de DNA, sendo as timinas
substituídas por uracilas

• Em 1960, Hurwitz, Stevens e Weiss descobriram,

independentemente, uma enzima capaz de sintetizar
RNA na presença de DNA fita dupla e dos
nucleotídeos A, U, C, G.

• Esta enzima foi denominada RNA polimerase.

DNA Transcrição DNA RNA
 RNA POLIMERASE

• Reconhece e liga-se a seqüências específicas de

DNA;
• Desnatura o DNA expondo a seqüência de
nucleotídeos a ser copiada;
• Mantém as fitas de DNA separadas na região de
síntese;
• Renatura o DNA na região imediatamente
posterior à da síntese;
• Sozinha, ou com o auxílio de proteínas
específicas, termina a síntese do RNA.
 RNA POLIMERASE

Em eucariotos existem vários subtipos de RNA

polimerases envolvidas na síntese de RNAs
específicos:

. RNA polimerase I – localizada no nucléolo e

responsável pela síntese do RNA ribossômico
. RNA polimerase II – localizada no nucleoplasma
e responsável pela síntese do RNA mensageiro
. RNA polimerase III – também localizada no
nucleoplasma e responsável pela síntese do RNA
transportador
 TRANSCRIÇÃO

• Reação ocorre entre o radical hidroxil da

extremidade 3’ de um ribonucleotídeo e o grupo
fosfato do carbono 5’ do ribonucleotídeo a ser
incorporado

• A reação processa-se no sentido 5’ 3’ e a fita

de DNA copiada é a de sentido 3’ 5’

• Diferentemente da DNA polimerase, a RNA

polimerase não necessita de um iniciador
(primer) para processar a síntese da nova fita
 TRANSCRIÇÃO

1.INÍCIO
Reconhecimento de seqüências específicas no DNA

2. ALONGAMENTO
Incorporação dos ribonucleotídeos

3. TERMINAÇÃO
Seqüências no DNA são reconhecidas e a síntese é
interrompida
 INÍCIO DA TRANSCRIÇÃO

• O DNA apresenta seqüências específicas,

denominadas PROMOTORES, que sinalizam
exatamente onde a síntese do RNA deve ser
iniciada.

• Os promotores são, primeiramente,

reconhecidos por fatores de transcrição que,
ligados ao DNA, interagem com outros fatores,
formando um complexo ao qual a RNA
polimerase se associa.
 INÍCIO DA TRANSCRIÇÃO

• As seqüências reguladoras da transcrição podem ser

divididas em:

. elementos promotores: seqüências de 100 a

200 nucleotídeos próximos ao sítio de início da
transcrição que possuem seqüências consenso TATA
denominadas “TATA box”

. elementos “enhancer” ou amplificadores:

seqüências pequenas de DNA que podem ocorrer na
região “upstream” do gene. Ativam a expressão do
mesmo.
Amplificam o sinal 100 vezes e
os fatores de transcrição que se
ligam a eles são chamados
ativadores
 INÍCIO DA TRANSCRIÇÃO

As fitas do DNA se separam 10 bases

upstream ao sítio de iniciação, mais
especificamente no “TATA box”.

A fita molde fica exposta e, desta forma, a

síntese da cadeia complementar de RNA
pode ser iniciada.
 ALONGAMENTO DA CADEIA

A polimerase desliza ao longo da fita molde

extendendo um cadeia de RNA crescente no
sentido 5’ 3’ através da adição de
ribonucleotídeos.

Este processo ocorre até a RNA polimerase

encontrar uma seqüência específica no DNA
que determina o término do alongamento.
 TÉRMINO DA TRANSCRIÇÃO

• Quando a RNA polimerase encontra o sítio de

terminação na fita molde, ela se desliga do DNA
juntamente com a nova cadeia de RNA sintetizada
devido à uma desestabilização do complexo de
transcrição

• O desligamento do RNA do sistema provoca a

ruptura do complexo de transcrição e as fitas do
DNA são renaturadas
Diferenças e semelhanças entre eucariotos e procariotos

Em procariotos a tradução (síntese de proteínas) e a

transcrição são praticamente simultâneas

Mas, em eucariotos a transcrição está separada da síntese de

proteínas (tradução) pela membrana nuclear
Os eucariotos processam extensivamente o RNA destinado a
se tornar mRNA; transcritos primários em eucariotos
recebem um "capuz" na extremidade 5' e uma cauda poli A
na extremidade 3'

Nos eucariotos quase todos os mRNAs são clivados; introns

são retirados para formar mRNAs com mensagens contínuas
 O PROCESSAMENTO DO RNA

• Os diferentes RNAs sintetizados no processo

de transcrição são chamados de transcritos
primários;

• Na maioria das vezes, esses transcritos não

representam a molécula madura, ou seja, aquela
cuja seqüência e estrutura correspondem à
forma final do RNA funcional;

• Esses transcritos necessitam sofrer

modificações que fazem parte do
processamento do RNA.
 PROCESSAMENTO DO mRNA

O transcrito primário da molécula de mRNA é

também conhecido como pré-mRNA

Este RNA precursor é sintetizado no núcleo e

sofre várias alterações transformado-se no
que se chama mRNA maduro ou processado.
O RNA maduro é, então, transportado ao
citoplasma onde será traduzido
 PROCESSAMENTO DO mRNA

• Após o início da transcrição da molécula de mRNA é

adicionado um resíduo de guanina à sua extremidade 5’.

• Este resíduo chamado “cap” sofre, então, metilação

(adição do radical metil) na posição 7 da guanina
resultando na formação do nucleotídeo 7-metilguanilato.

• O “cap” protege a extremidade 5’ da ação de

exonucleases e, também, é utilizado para
reconhecimento, pelo ribossomo, do sítio de início do
processo de síntese protéica.
 PROCESSAMENTO DO mRNA

• A maioria dos mRNAs possui uma seqüência de

resíduos de adenina na sua extremidade 3’ que é
chamada de cauda poliA e é adicionada à molécula
durante a transcrição.

• Quando se reconhece a seqüência AAUAAA,

altamente conservada e localizada 10 a 30
nucleotídeos “upstream” ao sítio de poliadenilação, é
um sinal de que a molécula está terminando e que
deve ser adicionada a cauda poliA à extremidade da
mesma.
 PROCESSAMENTO DO mRNA

• Após a adição do “cap” 5’ e da cauda poliA, a molécula de

pré-mRNA sofre o processo de excisão dos introns e
junção dos exons, mecanismo conhecido como “splicing”
e migra para o citoplasma da célula.

• Os introns apresentam um grau de conservação maior do

que os exons além de apresentarem uma característica
muito importante:
Os primeiros e os últimos dois nucleotídeos da
extremidade 5’ e 3’, GU e AG, são altamente conservados.
 RNAm liga-se as Ribonucleoproteínas
nucleares pequenas (snRNPs)

Splicing mediado por

spliceossomo:
Utiliza ATP

•FUNÇÃO:

 ajuda a clivar no sítio

de splicing
remove intron
une os éxons anteriores
e posteriores
 PROCESSAMENTO DO mRNA

Splicing:

•FUNÇÃO:

 ajuda a clivar no sítio

de splicing
remove intron
impede afastamento
dos éxons
une os éxons
PROCESSAMENTO DO mRNA
Estrutura do mRNA
 PROCESSAMENTO DO mRNA

• Um transcrito primário pode ser processado de

diferentes maneiras sendo que o que é intron
para um mRNA pode ser exon para outro mRNA
que provém do mesmo RNA precursor

• Esta diferença de processamento pode ser

devida à presença de dois ou mais sítios de
poliadenilação e/ou à diferença no processo de
“splicing” do pré-mRNA
•Control of alternative RNA splicing and gene expression by eukaryotic
riboswithces, Nature, vol. 447, pág. 497, 2007.
Processamento alternativo do RNA
23.000 genes
100.000 proteínas
 MOLÉCULAS DE RNA

• RNA mensageiro – carrega a informação copiada

do DNA sob a forma de inúmeros “triplets” cada um
especificando um aminoácido

• RNA transportador – decifra o código representado

pelo mRNA

• RNA ribossômico – associa-se com uma série de

proteínas para formar os ribossomos