MANUAL DE ANLISES FSICAS E QUIMICAS

Mtodos Utilizados

Oxignio dissolvido: Mtodo proposto por Winkler (1888) e modificado por Pomeroy & Kirchman (1945) e Golterman et al., (modificado) 1978.

Alcalinidade: Standard Methods, 1998

Dureza: Standard Methods, 1998.

Amnia: Standard Methods, 1998

Nitrito: Standard Methods, 1998

Nitrato: Standard Methods, 1998

Fsforo total: Standard Methods, 1998 (Modificado)

Ortofosfato Solvel: Standard Methods, 1998

OXIGNIO DISSOLVIDO
Procedimento no campo:

Encher cuidadosamente num frasco de DBO, de maneira que o fluxo de gua seja atravs de um tubo de borracha, alcanando o fundo do frasco. Evitar a entrada de bolhas de ar. Introduzir cuidadosamente a tampa, evitando sempre o aprisionamento de bolhas. Aps alguns minutos, remova a tampa e adicione: 1mL de Sulfato manganoso e 1mL de Azida sdica (para frascos de 200 ml). Recolocar a tampa firmemente evitando a formao de bolhas de ar. Misturar bem. Forma se um precipitado de hidrxido manganoso, que oxidado a Hidrxido Oxidomangnico, na presena de O2 na atmosfera. Acondicionar no escuro at o momento da anlise, de preferncia imersos em gua com gelo.

Procedimento no laboratrio:

Deixar sedimentar o precipitado. Pode ser estocada por uma semana, preferencialmente em gua ou na geladeira. Introduzir 1ml de Acido sulfrico para cada 100ml de gua e recolocar a tampa, evitando a perda do precipitado ou a entrada de ar. Misturar bem. O precipitado se dissolve e os ons mangnicos em soluo cida, oxidam iodeto a triiodeto (I3-) e iodo livre. Transferir 50 ou 100ml da amostra atravs de uma pipeta volumtrica, para um erlemmeyer. Titular com soluo de tiossulfato de sdio a 0,0125N ou valor prximo at obter uma colorao amarela clara. Adicionar algumas gotas de amido (azul-escuro) e continuar a titulao at o ponto de viragem (incolor). A titulao deve ser feita o mais rpido possvel para evitar a perda de iodo por volatilizao. Fazer rplica.

FRMULA PARA CALCULAR O OXIGNIO DISSOLVIDO Vc = (Vf 2). 100 Vf

Vc = volume corrigido Vf = volume do frasco OD = Voltit. N. 8 . 1000 Vc Vtit = volume gasto de tiosulfato de sdio N = normalidade do tiossulfato Preparao dos reagentes: Soluo Sulfato Manganoso (MnSO4. 5H2O, 50%) Dissolver 500g de MnSO4. 5H2O ou 350,6g de MnSO4 em gua destilada, filtrar se necessrio e completar para 1litro. A soluo de sulfato manganoso no deve dar colorao azulada em meio cido em presena de amido. A soluo vlida por dois anos. Iodeto Alcalino Azida (val. 2 anos)

Dissolver 500g de NaOH (hidrxido de sdio) ou 700g de KOH (hidrxido de Potssio) e 135g de NaI (Iodeto de sdio) ou 150g de KI (Iodeto de Potssio) em gua destilada. Mantenha a soluo quente at que o NaI se dissolva. Resfriar a soluo e diluir para 1 litro. Deixar a soluo estabilizar e decantar durante uma noite, se necessrio, filtrar. Dissolver 10g de azida sdica em 40ml de gua destilada e adicionar a soluo anterior. A soluo pronta conter um total de 1400ml. A azida sdica utilizada para eliminar a interferncia do NO2 quando est presente acima de 50g/L. Indicador de Amido 1%

Coloque 1g de amido em 100ml ou 10g em 1000ml de gua destilada, ferva 90-100C, sem parar de agitar. Deixar esfriar. Adicione 0,1g de cido saliclico ou 3ml de clorofrmio, filtre a soluo usando algodo ou papel filtro e guarde na geladeira.

 Soluo Tiossulfato de sdio (Na2S2O3). a) Soluo estoque de tiossulfato a 0,1N A gua para preparao desta soluo tem que ser nova, destilada e fervida por 15 minutos e aps a fervura deixar esfriar com o recipiente tampado. Preparar a soluo quando a gua estiver totalmente fria. Dissolver 24,82g de Na2S2O3.5H2O em gua destilada e fervida e diluir para 1000ml. Preserv-la com 5ml de clorofrmio P.A.

b) Soluo titulante a 0,0125N. Diluir a soluo de Tiossulfato para 0,0125N (N/8) usando a frmula da concentrao: C1V1 = C2V2, onde: C1 = concentrao da soluo me V1 = volume desejado C2 = concentrao desejada, neste caso 0,0125mL V2 = volume que se quer diluir, neste caso 1L ou 1.000mL EXEMPLO PARA UMA NORMALIDADE DESEJADA DE 0,0125ML: C1V1 = C2V2 0,1.V1 = 0,0125.1000 V1 = 125mL

Logo devemos tirar 125ml da soluo estoque 0,1N e diluir para 1000ml em gua destilada.

c) Padronizao do Tiossulfato de sdio com Dicromato de potssio (val. 2 anos) Aps a diluio necessrio fazer a padronizao do tiossulfato de sdio da seguinte forma: Secar o dicromato de potssio 130C por 30 minutos, Pesar 0,4903g de dicromato de potssio, dissolver em gua destilada e diluir para 1L (sol. 0,01N); Tomar 10ml do dicromato de potssio 0,01N e mais 90mL de gua destilada, em um balo volumtrico de 100ml. Transfere o contedo para um erlemmeyer de 250ml. Adiciona 1ml de cido sulfrico concentrado e 1g de KI Iodeto de potssio. Agita e titula com o tiossulfato diludo anteriormente at obter uma colorao amarelo-claro. Adicionar cerca de 1ml da soluo indicadora de amido (azul-escuro). Continuar titulando at o ponto de viragem. Calcular a normalidade atravs da frmula:

N1V1 = N2V2
Onde: N1 = normalidade do dicromato (0,01N); V1 = vol. do dicromato (10ml); N2 = normalidade desejada do tiossulfato (o que se deseja procurar) V2 = vol. do tiossulfato gasto (na bureta);

ALCALINIDADE

As amostras devem ser coletadas em frascos de polietileno ou vidro, estes devem ser preenchidos completamente e mantidos fechados, evitando assim a perda ou ganho de CO2 ou outros gases. As amostras devem ser preservadas a 4C. As analises devem ser realizadas ate 24 horas aps a coleta. No caso de grande atividade biolgica, analise deve ser feita em ate 6 horas aps a coleta. Deve-se evitar a agitao da amostra.

Mtodo
A titulao potenciomtrica o mtodo utilizado para analises de alcalinidade, devido a maior preciso e confiabilidade assegurada por este.

Reagentes e preparao
1. Soluo de carbonato de Sdio (0,05N) Secar 3 a 5 gramas de Na2CO3a 250C durante 4 horas e deixar esfriar em dessecador. Pesar 2,65g e dissolver em gua destilada. Completar o volume para 1 litro. Validade da soluo: 1 semana. 2. Soluo de Acido Sulfrico (0,1N) Diluir 2,8ml de H2SO4 e completar para 1 litro em gua destilada.

3. Soluo de Acido Sulfrico (0,02N) Diluir 200ml de acido sulfrico 0,1N em 1 litro de gua destilada. Padronizar com Carbonato de Sdio. Procedimento da padronizao do H2SO4 (0,02N): Mede-se um determinado volume da soluo de carbonato de sdio (mesmo volume utilizado na amostra (Vcar)) de normalidade conhecida (Ncar = 0,05N) e faz-la reagir com a soluo de acido sulfrico, sob leve agitao. O volume gasto ate o segundo pondo de inflexo (pH = 4,5) o volume do acido (Vacp) padronizado. Logo, N = Vcar * Ncar Vacp

Metodologia
Mede-se 100ml da mostra em uma proveta e transfere-se esta volume para um Becker de 125ml. Calibra-se o potencimetro (pH = 7 e pH = 4 respectivamente) Verifica-se o pH inicial da amostra (anota-se em tabela apropriada)

Titula-se com H2SO4

Clculos
Alcalinidade total (mg CaCO3/l) = N*A * 50000 VA Onde: A = volume de acido gasto na titulao (ml) N = normalidade do acido (N) VA = volume da mostra (ml)

DUREZA
(Mtodo titulomtrico com EDTA)

REAGENTES Soluo tampo pH = 10,0 0,1(Vlido at a estabilidade do pH)

Dissolver 16,9 g de cloreto de amnio (NH4Cl), 1,179g do sal de EDTA, 780mg de sulfato de magnsio hepta-hidratado (MgSO4 7H2O) ou 688 mg de cloreto de magnsio hexa hidratado (MgCl2 6H2O) em 143 ml de hidrxido de amnio concentrado (NH 4OH). Diluir com agua destilada para um volume de 250 ml. Abandonar a soluo quando um ou mais ml no do a amostra um pH = 10 0,1 no final da titulao. Soluo inibidora de dureza Dissolver 5 g de sulfeto de sdio nona hidratado (Na 2S 9H2O) ou 3,7 de sulfeto de sdio penta hidratado (Na2S 5H2O) em 100 ml de gua destilada. Armazenar evitando contato com o ar. Soluo de HCl (1 + 1)

Misturar volumes iguais de HCl concentrado e gua destilada. Soluo de hidrxido de amnio 3N

Pipetar 21 ml do reagente concentrado e diluir a 100 ml de gua destilada. Indicador negro de ericromo T (Vlido por trs anos)

Misturar 1g do indicador com 100g de NaCl (Cloreto de sdio) em um almofariz ou gral e homogeneizar a mistura, a qual denominada de mistura seca.

 Soluo de EDTA 0,01 mol/l (Vlido por dois anos)

Dissolver 3,723g do sal de sdio do EDTA em gua e completar para o volume de 1 litro com gua destilada. Padronizar esta soluo com uma soluo de carbonato de clcio. Soluo de carbonato de clcio 0,01 mol/l

Pesar 10g de Carbonato de clcio (CaCO3) em um erlenmeyer de 500ml. Posteriormente adicionar lentamente HCl (1 + 1) at dissolver todo CaCO 3 . Adicionar 200 ml de gua destilada e ferver por 5 minutos para remover o CO2. Resfrie e adicione cinco gotas de indicador vermelho de metila e adicione HCl (1 + 1) ou NH4OH 3N at a soluo ficar alaranjada e elevar o volume 1 litro com gua destilada, num balo volumtrico.

Indicador vermelho de metila: dissolver 0,1g do reagente em 60 ml de etanol absoluto e levar o volume a 100 ml com gua.

Soluo de hidrxido de sdio 1N: dissolver 40 g de NaOH em gua e levar o volume a 1 litro com gua destilada.

PROCEDIMENTO Pipete 25 ml de amostra de carbonato de clcio e transferir para um erlenmeyer de 250 ml. Adicionar 25 ml de gua destilada, 1 ml da soluo tampo, 1 ml do inibidor e uma pitada do indicador negro de eriocromo T. Titular a amostra com a soluo de EDTA at a viragem do vinho para o azul e anotar o volume gasto (essa etapa no deve durar mais de 5 minutos). Repetir a titulao em triplicata

Calcular a molaridade do EDTA pela frmula:

Dureza total, mg de CaCO3/l =

Vgasto 1000 Vamostra

AMNIA
(Mtodo espectrofotomtrico do fenol) A amnia na gua est presente como NH4+ (ons amnio) e NH4OH no dissociado, e gerada como produto primrio final da decomposio de matria orgnica por bactrias heterotrficas (diretamente de protenas ou de outros compostos nitrogenados). Os ons amnio so muito mais reativos do que nitrato devido a sua alta energia qumica. A importncia da amnia est na sua assimilao pelo fitoplncton com menor gasto energtico que a assimilao de nitrato, o que requer ainda presena de enzima. (WETZEL, 1983; PAYNE, 1986). A toxicidade da amnia para animais e plantas aquticas de grande importncia. O gs amnia (NH3) dissolve muito facilmente na gua e forma hidrxido de amnia (NH4OH), o qual dissocia produzindo amnio (NH4+) e ons hidroxila (OH-). Em condies cidas a porcentagem de NH4OH decresce e em condies alcalinas ela aumenta. O NH4OH no dissociado txico, mas o on NH4+ no perigoso. A toxicidade do NH4OH varia no somente com o pH, mas tambm com a temperatura, oxignio dissolvido, dureza e contedo de sais da gua (GOLDMAN & HORNE, 1983).

REAGENTES Soluo de fenol

Prepare um banho de gua quente a 90C e coloque o frasco do reagente. Quando o fenol fundir pipetar 11,1 ml e dissolver em etanol 95% e levar o volume a 100 ml com etanol 95%. CUIDADO: usar luvas e proteo para os olhos quando manipular o fenol; manipular o reagente na capela ou num local de boa ventilao pra minimizar toda a exposio pessoal a esta substncia txica e voltil. Soluo de nitroprussiato de sdio 0,5% p/v

Dissolver 0,5g de Na2[Fe(CN)5(NO)]2H2O em 100 ml de gua deionizada ou destilada. Armazenar em frasco mbar por no mximo 1 ms ou mais dependendo da aparncia da soluo.

 Soluo de citrato alcalino Dissolver 200g de citrato de sdio (Na3C6H5O7 2H2O) e 10g de NaOH (Hidrxido de sdio) em gua deionizada ou destilada e levar o volume a 1 litro com gua deionizada ou destilada. Soluo de hipoclorito de sdio 5%

Pipetar 40 ml do reagente comercial (12,5%) ou P.A e diluir a 100 ml com gua deionizada ou destilada. Preparar a cada 2 meses. Soluo oxidante

Misture 100 ml da soluo de citrato alcalino e 25 ml da soluo de hipoclorito de sdio. Preparar no momento de uso.

Soluo Estoque de Amnia 1000 mg/l N-NH3: Dissolver 3,819g de NH4Cl (Cloreto de Amnia) (seco a 100C por 1 hora) em gua destilada e levar o volume a 1 litro com gua destilada. Preserv-la com uma gota de clorofrmio. Manter em frasco de vidro no refrigerador. Esta soluo estvel por vrios meses.

CURVA PADRO - AMNIO e N TOTAL Estoque (ml) 0,025 0,05 0,1 0,2 0,4 0,5 1,0 2,0 Diluio (ml de gua deionizada) 500 500 500 500 500 500 500 500 Concentrao desejada (g/l) 7,0 14,0 28,0 56,0 112,0 140,0 280,0 560,0

PROCEDIMENTO

a) Pipetar 25 ml de amostra e transferir para um erlenmeyer de 50 ml. b) Adicione com agitao vigorosa aps cada adio: 1 ml da soluo de fenol, 1 ml da soluo de nitroprussiato de sdio e 2,5 ml da soluo oxidante. c) Cobrir as amostras com papel filme e deixar a cor desenvolver temperatura ambiente por no mnimo 1 hora no escuro. A cor estvel por 24 horas. d) Determinar a absorbncia dos padres e amostras em 640nm contra um branco preparado com gua deionizada ou destilada.

Clculo N NH3 em mg/l =

absorbncia b a

Onde: b = coef. linear da curva de calibrao e a = coef. angular da curva de calibrao. OBSERVAO: os reagentes so conservados na geladeira

NITRITO
O nitrito, a forma reduzida parcialmente do nitrato, est presente na gua em quantidades insignificnates (GOLDMAN & HORNE). O nitrito em guas anxicas convertido em amnia. O nitrito como produto intermedirio da oxidao da amnia nitrato, provavelmente tenha sua produo dificultada nos ambientes onde ocorra falta de condies oxidantes. Crregos poludos podem conter at 2 mg/l de NO2-N O nitrito pode causar um problema respiratrio pela formao de

metahemoglobina, a qual reduz a capacidade de transporte de oxignio no sangue. Esta falta de oxignio nos tecidos pode produzir uma condio fatal conhecida como blue baby.

REAGENTES Reagente de cor

Em 800ml de gua destilada adicionar 100ml de cido fosfrico (H3PO4) concentrado e 10g de sulfanilamida. Aps a total dissoluo adicionar 1g de bicloridrato de N-(1-naftil)-etilenodiamina e levar o volume a 1 litro com gua destilada. Soluo de hidrxido de amnio (NH4OH) 3N: Pipetar 21ml do NH4OH concentrado e diluir para 100ml com gua destilada. Soluo de cido clordrico 1N

Diluir 89ml do Acido clordrico concentrado e diluir para 1 litro com gua destilada.

Soluo Estoque de Nitrito 250ml: Dissolver 1,232g de nitrito de sdio (NaNO2) em gua destilada e completar para o volume de 1 litro. Preservar com 1ml de clorofrmio concentrado e evitar o mximo de contato com o ar.

Soluo intermediria de nitrito 50mg/l: Pipetar 10ml da soluo da soluo anterior e diluir a 50ml com gua destilada.

CURVA PADRO - NITRITO Estoque (ml) 0,25 0,5 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 Diluio (ml de gua deionizada) 500 500 500 500 500 500 500 Concentrao desejada (g/l) 1,75 3,50 7,00 14,00 21,00 28,00 35,00

PROCEDIMENTO Se as amostras contem slidos suspensos, filtrar a amostra com membrana com poros de 0,45m. Se necessrio corrigir o pH da amostra para 5 9 usando HCl 1N ou NH4OH 3N. Pipetar 50 ml de amostra ou uma alquota adequada diluda a 50 ml e transferir para um erlenmeyer de 125 ml e adicionar 2 ml do reagente de cor. Aguardar 10 minutos. Determinar a absorbncia dos padres e amostras em 543nm contra um branco preparado com gua deionizada ou destilada.

Clculo N NO2- em mg/l =

absorbncia b a

Onde: b = coef. linear da curva de calibrao e a = coef. angular da curva de calibrao.

NITRATO (Cdmio)
A taxa de NO3-N para NH4-N em gua doce varivel em relao s fontes de ambas as formas de nitrognio combinado. Em reas onde as fontes naturais de NO3-N so baixas, a taxa pode aproximar em 1:1; onde ocorre de leve a moderada contaminao por despejos ou por onde h aplicao de fertilizantes nitrogenados contaminando guas, taxas na faixa de 1:10 so encontradas comumente (WETZEL, 1983). Segundo GOLDMAN & HORNE (1983) o nitrato, em contraste com outras formas nutrimentais como amnia, fosfato ou ons metlicos, move-se livremente pelo solo com as superfcies aquticas. a forma mais altamente oxidada de nitrognio e usualmente a forma mais abundante de nitrognio inorgnico combinado. O nitrato no txico nas quantidades encontradas em lagos e rios (cerca de 1 mg por litro). gua potvel padro para os humanos devem apresentar menos de cerca de 10 mg/l de NO3-N; e mesmo em altos nveis os malefcios sade provocados pelo nitrato so aparentemente pequenos.

REAGENTES Grnulos de cobre-cdmio de 0,3 1,5mm Lavar 25g de novos ou usados grnulos de cdmio de 0,3 1,5 mesh com HCl (1 + 1), deixe ferver bem e enxge com gua. Fazendo movimentos circulares lave os grnulos de cdmio com 100 ml de soluo de sulfato de cobre (CuSO4 2%) por 5 minutos ou at a cor azul desaparecer e os grnulos apresentarem uma colorao avermelhada. Suavemente lave os grnulos de cdmio com gua destilada para remover todo cobre precipitado.

Soluo de HCl (1 + 1): Misturar volumes iguais de cido clordrico (HCl) concentrado e gua destilada. Pode-se usar a seguinte proporo para fazer 100ml de HCl: 50ml de acido clordrico e 50ml de gua destilada. Soluo de sulfato de cobre 2%: dissolver 20g de CuSO4 5H2O em 500ml de gua destilada e elevar a um volume de 1 litro com gua destilada.

PREPARAO DA COLUNA DE REDUO

Coloque fibra de vidro na base da coluna e encha com gua destilada. Adicione, com a ajuda de uma esptula, grnulos de cobre-cdmio suficientes para formar uma coluna de 18,5 cm de altura. Coloque outra quantidade de fibra de vidro cobrindo o cdmio presente na coluna. Mantenha o nvel da gua sempre acima dos grnulos de cobre-cdmio para evitar a entrada de ar. Lave a coluna com 200ml da soluo diluda de cloreto de amnio-EDTA. Ative a coluna passando atravs dela a uma vazo de 7 10ml/min, no mnimo 100ml de uma soluo composta de: 25ml de soluo de nitrato de potssio ou nitrato de sdio (1mg/l) e 75ml da soluo concentrada de cloreto de amnio-EDTA. Soluo de cloreto de amnio EDTA concentrado: Dissolver 13g de NH4Cl (Cloreto de Amnia) e 1,7g do sal de sdio do EDTA em 900 ml de gua destilada. Ajustar o pH para 8,5 com NH4OH (Hidrxido de amnio) concentrado e levar o volume a 1 litro com gua destilada. Soluo diluda de cloreto de amnio EDTA diludo: Retira 300ml da soluo do cloreto de amnio concentrado e adiciona 200ml de gua destilada, dando um total de 500ml.

Soluo de 1mg/l de Nitrato: Inicialmente prepara-se a soluo estoque de nitrato (100mg/l) da seguinte forma: 0,7218g de nitrato de potssio (KNO3) ou 0,6071g de nitrato de sdio (NaNO3) em gua destilada e completa para 1 litro. Posteriormente retire 10ml da soluo anteriormente preparada e complete para 1 litro de gua destilada. A soluo estoque de nitrato (100mg/l) tambm servir para fazer a curva padro desse parmetro.

OBSERVAO: Mantenha a coluna de cdmio sempre cheia com a soluo de cloreto de amnio diludo e caso a mesma fique sem uso durante dois dias necessrio que antes de cada anlise passe na coluna 100ml de cloreto de amnio concentrado. Esse processo chamado de CHOQUE NA COLUNA.

PREPARAO DAS AMOSTRAS a) Se necessrio ajustar o pH da amostra para 7 9 com HCl ou NaOH diludos. Isto garante um pH de 8,5 aps a adio da soluo de cloreto de amnio-EDTA.

b) Pipetar 25ml de amostra ou uma alquota adequada diluda a 25 ml e transferir para um erlenmeyer de 125ml e adicionar 75 ml da soluo concentrada de cloreto de amnio-EDTA e misture. Passe a amostra atravs da coluna a uma vazo de 7 10ml/min. c) Descarte os primeiros 25ml e colete o resto da amostra original. OBSERVAO: no preciso lavar a coluna entre uma amostra e outra, mas se a coluna no for reusada vrias horas ou mais, coloque 50ml da soluo de cloreto de amnio-EDTA diluda no topo da coluna e deixe passar atravs da coluna. Armazene os grnulos de cobre-cdmio nesta soluo e nunca a deixe secar. d) To breve quanto possvel e no mais que 15 minutos aps a reduo, adicione 2ml do reagente de cor a 50ml da amostra e misture. O preparado estvel at cerca de 15 minutos. e) Determinar a absorbncia dos padres e amostras em 543nm contra um branco preparado com gua deionizada. Reagente de cor

Em 800ml de gua destilada adicionar 100ml de cido fosfrico (H3PO4) concentrado e 10g de sulfanilamida (C6H8N2O2S). Aps a total dissoluo adicionar 1g de bicloridrato de N-(1-naftil)etilenodiamina e levar o volume a 1 litro com gua destilada.

Clculo
absorbncia b a

N NO3- em mg/l =

Onde: b = coef. linear da curva de calibrao e a = coef. angular da curva de calibrao.

RESUMO: Retira 25mL da amostra; Acrescenta 75mL de cloreto de amnio concentrado Passa na coluna e descarta os primeiros 10mL e coleta os outros 50mL

 Acrescenta 2mL do reagente de cor imediatamente Ler a um comprimento de onda de 543nm.

OBS: Aps acrescentar o reagente de cor, a leitura tem que ser feita em no mximo 15 minutos.

Soluo estoque de nitrato 100 mg/l: Dissolver 0,7218g de Nitrato de potssio (KNO3) ou 0,6071g de nitrato de sdio (NaNO3) em gua destilada e elevar a um volume de 1 litro com gua destilada. Preservar com 2ml de clorofrmio e estocar por no mximo 6 meses.

Soluo intermediria de nitrato 10 mg/l: Pipetar 10ml da soluo da soluo anterior e diluir a 100ml com gua destilada.

CURVA PADRO - NITRATO Estoque (ml) 0,05 0,1 0,2 0,4 0,5 1,0 2,0 Diluio (ml de gua deionizada) 500 500 500 500 500 500 500 Concentrao desejada (g/l) 10,0 20,0 40,0 80,0 100,0 200,0 400,0

FOSFRO TOTAL
(MTODO DO AC. ASCRBICO APS DIGESTO COM PERSULFATO)

O fsforo na gua ocorre em formas orgnicas e inorgnicas. A maior parte do fosfato inorgnico presente est na forma de ortofosfato (PO 4-3), com menores quantidades de monofosfato (H PO4-2) e dihidrogeno fosfato (H2 PO4-). Fsforo orgnico dissolvido usualmente representa o volume do fstoro solvel total. Uma pequena frao do fsforo total comumente presente na forma coloidal com alto peso molecular. Na maioria dos ambientes aquticos, o fsforo total particulado presente em quantidades muito maiores que o fsforo solvel. (GOLDMAN & HORNE, 1983). OBS: PARA O FSFORO A AMOSTRA NO FILTRADA REAGENTES Indicador fenolftalena 1% (val. 2 anos)

Dissolver 2,5g de fenolftalena em 150ml de etanol absoluto e completar com 100ml de gua destilada em um balo de 250ml. A fenolftalena que foi preparada para anlise de alcalinidade tambm pode ser utilizada para essa anlise. cido sulfrico 30% (val. 2 anos) Para digesto

Dissolver 300ml de cido sulfrico concentrado em 700ml de gua destilada num balo de 1000ml. Persulfato de potssio 5% - Refrigerar

Dissolver 25g de persulfato de potssio em 500ml de gua destilada fervida num balo. Hidrxido de sdio 6N (val. 1 ano)

Dissolver 120g de hidrxido de sdio em 250ml em gua destilada.

 Reativo misto Preparar na hora proporcional as amostras

Misturar 50ml de cido sulfrico 5N, 5ml de tartarato de antimnio e potssio, 15ml de molibdato de amnia e 30ml de cido ascrbico 0,1N.

cido sulfrico 5N: 140ml de cido sulfrico concentrado em 900ml de gua destilada esfriar e completar para 1 litro Tartarato de antimmio: dissolver 0,6858g em 250ml de gua destilada Refrigerar Molibdato de amnia: dissolver 20g em 500ml de gua destilada No refrigerar cido ascrbico: dissolver 0,88g em 100ml de gua destilada. Soluo estvel por uma semana, porm prefervel que o mesmo seja feito minutos antes de preparar o reativo misto. -

Soluo estoque de fsforo total 500ppm (em P-PO4-3): Dissolver 2,1935g de fosfato dicido de potssio (KH2PO4) em 1 litro de gua destilada ou deionizada.

OBS: 1ppm = 1mg/L e 1ppb = 1g/L

PROCEDIMENTO

Tomar 50ml da amostra em um erlemmeyer de 125ml. Adicionar 1 gota de fenolftalena (no mais). Se ficar rosa, adicionar algumas gotas ( gota a gota at o desaparecimento da cor ) de cido sulfrico 30% at descorar, e mais 0,5ml do mesmo acido. Adicionar 7,5ml de persulfato de potssio 5% Homogeneizar e cobrir com papel alumnio. Digerir por 30 minutos ( autoclave). Depois mede se tiver 50ml, mantm e caso no tenha adicione gua destilada at chegar a 50ml e caso ultrapasse jogar e manter os 50ml. Posteriormente adicione 1 gota de fenolftalena e depois adicione o hidrxido de sdio (NaOH 6N) at tornar a amostra alcalina (cor de rosa). Adicionar algumas gotas de cido sulfrico 30% at descorar, baixando o pH que ficar em torno de 7 aps diluio (incolor). Transferir 25ml em proveta e adicionar 4ml em do reativo misto, espera 15 minutos e ler em espectro = 880nm. A cor azul ser evidente caso contenha fsforo na amostra.

OBS: A leitura deve ser feita entre 10 e 30 min aps colocar o reagente misto.

CURVA PADRO FSFORO TOTAL Estoque (ml) 0,025 0,05 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 1,0 Diluio (ml de gua deionizada) 200 200 200 200 200 200 200 200 Concentrao desejada (g/l) 5,0 10,0 20,0 40,0 60,0 80,0 100,0 200,0

ORTOFOSFATO SOLVEL (cido ascrbico)

REAGENTES: Acido sulfrico 5N

Adicionar, lentamente e com agitao, 140ml de cido sulfrico concentrado em 900ml de gua destilada. Tartarato de antimnio e potssio

Dissolver 1,3715g de K (SbO) C4H4O6. de H2O em 400ml de gua destilada e depois completar para 500ml. Guardar em frasco escuro. Soluo de molibdato de amnio

Dissolver 20g do molibdato de amnio em 500ml de gua destilada. Guardar em frasco escuro Acido ascrbico 0,1M

Dissolver 0,88g de cido ascrbico em 100ml de gua destilada. Soluo estvel por uma semana a 4C, porm prefervel que o mesmo seja feito minutos antes da preparao do reativo misto. Indicador fenolftalena 1% (val. 2 anos)

Dissolver 2,5g de fenolftalena em 150ml de etanol absoluto e completar com 100ml de gua destilada em um balo de 250ml. A fenolftalena que foi preparada para anlise de alcalinidade tambm pode ser utilizada para essa anlise.

Reagente misto:

50ml de acido sulfrico a 5N 5ml de tartarato 15ml de molibdato 30ml de cido ascrbico Total de 100ml

Misture aps a adio de cada reagente, os reagentes devem estar em temperatura ambiente, se a soluo ficar turva misture, deixe descansar at a turbidez desaparecer. O reagente estvel por 4 horas.

Soluo estoque de ortofosfato solvel 500ppm (em P-PO4-3): Dissolver 2,1935g de fosfato dicido de potssio (KH2PO4) em 1 litro de gua destilada ou deionizada.

OBS: 1ppm = 1mg/L e 1ppb = 1g/L

PROCEDIMENTO

Filtrar a amostra em filtro de fibra de vidro e depois em membrana de filtrao 0,45 m; Medir 50ml da amostra, ou diluio desta (5ml da amostra para 25 ml de gua destilada e depois completar para 50ml) Adicionar 1 gota de fenolftaleina. Se ficar rosa, neutralizar com algumas gotas de cido sulfrico (H2SO4 5N), at desaparecer a cor. Depois adicionar mais 1ml desse cido. Adicionar 8ml do reagente misto. Agite, aps 10 minutos, mas no mais que 30, mea a absorbncia a 880nm usando o branco (reagente sem amostra) como referncia. A cor azul ser evidente caso contenha fsforo na amostra.

Faixa da curva: 20 a 400 ug/L

CURVA PADRO ORTOFOSFATO SOLVEL Estoque (ml) 0,025 0,05 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 1,0 Diluio (ml de gua deionizada) 200 200 200 200 200 200 200 200 Concentrao desejada (g/l) 5,0 10,0 20,0 40,0 60,0 80,0 100,0 200,0

A curva tambm pode ser feita tomando as seguintes propores:

Estoque (ml) 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 12,0

Diluio (ml de gua deionizada) 100 100 100 100 100 100

FSFORO TOTAL (MOSSOR)

MTODO: Valderrama, J.C. The simultaneous analysis of total nitrogen and total phosphorus in natural waters. Mar. Chem., 10: 109-122, 1981.

O fsforo total alm de conter as formas dissolvidas, tratadas anteriormente, apresenta as formas de fsforo particuladas no disponveis absoro imediata pelo fitoplncton, ou seja, d uma medida do contedo de todas as formas de fsforos presentes na gua.

REAGENTES Reagente Oxidante (RO)

Preparar a soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 1M da seguinte maneira: Dissolver 40 gramas de NaOH em 1000ml de gua deionizada. Dissolver 50g de Persulfato de Potssio (K2S2O3) e 30g de cido brico (H3BO3) em 350ml da soluo de NaOH 1M (preparada anteriormente), completar at 1000ml com gua deionizada ou destilada. Estocar em frasco mbar em temperatura ambiente (Estvel por 6 a 8 meses). Soluo de Tartarato de Potssio e Antimnio (K5 C4H4O6. H2O) Dissolver 0,34g de tartarato de antimnio e potssio em 250ml de gua deionizada ou destilada. Aquecer se necessrio. Estocar em frasco de polietileno ou vidro em temperatura ambiente. A soluo estvel por muitos meses. Soluo de Molibdato de Amnia ((NH4)6 Mo7O24 . 4 H2O) Dissolver 15g de Paramolibdato P.A. em 500ml de gua deionizada ou destilada. Estocar em frasco de polietileno ou vidro no escuro, em temperatura ambiente. Soluo estvel indefinidamente.

 Soluo H2SO4 140:900 (5N) Adicionar 140ml de H2SO4 em 900ml de gua deionizada ou destilada. Estocar em frasco mbar em temperatura ambiente. Soluo de cido Ascrbico

Dissolver 2,7g de cido ascrbico P.A. em 50ml de gua deionizada ou destilada. Esta soluo deve ser preparada na hora da anlise. Reagente Misto (Deve-se preparar na hora) 25 ml de tartarato de antimnio e potssio (soluo a) 50 ml de molibdatode amnia (soluo b) 125 ml de H2SO4 140:900 (soluo c) 50 ml de cido ascrbico (soluo d) Obs: para 10 amostras (com rplicas) preparar apenas metade do reagente misto (12,25: 25: 62,5: 25) Soluo Padro Estoque de Fosfato Monobsico de Potssio (KH2PO4 40 g/ml de P-PO4-3): Dissolver 0,1757g de KH2PO4 anidro em gua deionizada ou destilada. Adicionar para preservar, 2,5ml da soluo de H2SO4 1:1, algumas gotas de clorofrmio e diluir para 1000ml com gua deionizada ou destilada. Estocar em frasco mbar no escuro.

CURVA PADRO - FSFORO Estoque (ml) 0,025 0,05 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 1,0 Diluio (ml de gua deionizada) 200 200 200 200 200 200 200 200 Concentrao desejada (g/l) 5,0 10,0 20,0 40,0 60,0 80,0 100,0 200,0

PROCEDIMENTOS: 30ml da amostra no filtrada 4,0ml de reagente oxidante (RO), agitar e tampar com rolha ou papel alumnio Autoclavar por 1 hora, 1 atm, 120 C Esfriar bem Adicionar 3,4ml de reagente misto Leitura aps 30 minutos a 882 nm em cubeta de 5 cm.

Observao: A soluo estvel por 2 a 3 horas.

Solues estoques
Nitrito 50ppm(em N-NO2) = 0,2464g de NaNO2 Nitrato 100ppm(em N-NO3) = 0,7218g de KNO3 ou 0,6071g NaNO3 Amnia 1000ppm(em N-NH4) = 3,610g de NH4Cl Fsforo 500ppm(em P-PO4-3) = 2,1935g de KH2PO4 Sulfato 500ppm(em SO4-2) = 0,7395g de Na2SO4 Lembre-se: 1ppm = 1mg/L e 1ppb = 1ug/L

COMO OBTER A FRMULA DA CURVA PADRO NO EXCEL

No excel vc plota numa coluna os valores de concentrao e numa outra coluna as absorbncias, ento vc selececiona as duas colunas e na barra de ferramentas clique em inserir e escolha a opo grfico e nos tipos de grfico selecione disperso (XY) e avanar. Na segunda tela selecione srie em colunas e avanar. Na terceira tela vc d nome ao ttulo do grfico, diz quem X(concentrao) e Y(absorbncia) e novamente avanar. Na quarta e ltima tela clique em concluir. Ento aparece o grfico da curva de calibrao. S falta agora saber a equao da reta Na barra de ferramentas clique em grfico e depois em adicionar linha de tendncia e ento abrir uma nova tela onde vc escolhe o tipo de linha de tendncia e opes. No tipo de linha de tendncia selecione a opo linear. Nas opes selecione Exibir equao no grfico e depois Exibir valor de R-quadrado no grfico. Por fim ir aparecer no seu grfico a reta unindo os pontos e a sua equao Y = aX + b onde X =concentrao e Y = absorbncia. Aparecer tambm o valor do coeficiente de regresso linear. Quanto mais prximo de 1 melhor. Na prtica no se utiliza curvas de calibrao com valor de R menor que 0,99.

LIMPEZA DE MATERIAL E VIDRARIA

SOLUO DE CIDO CLORDRICO

Diluir 500ml do cido clordrico concentrado em 500ml de gua destilada ou de torneira. A soluo de cido clordrico diludo pode ser utilizado mais de uma vez para lavar vidrarias. O mesmo perder suas propriedades de limpeza quando apresentar uma colorao amarelada.

Observao:
As vidrarias antes de serem utilizadas devem ser lavadas da seguinte forma:

Deix-las totalmente submersas com cido clordrico por no mnimo 1hora. Aps esse perodo lavar bastante com gua destilada Caso seja possvel autoclavar por no mnimo 30 minutos e caso no seja possvel mantenha as vidrarias secando em um local considerado limpo.

DICAS
Ao misturar cido com gua nunca adicione o acido gua e sim o contrrio (colocar um pouquinho de gua no recipiente antes) Nunca utilizar recipientes de vidros para trabalhar ou acondicionar hidrxido de sdio ( corrosivo ao vidro). Utilizar beckers e recipientes de plstico Se um reagente slido estiver pedrado prefervel desfazer as pedras antes do que depois que estiver misturado ao lquido. Ao fazer reagentes sempre colocar a data de fabricao e o prazo de validade Aps utilizar a vidraria e outros equipamentos do laboratrio lave e guarde onde voc achou. Ajude a preservar o patrimnio que tambm nosso.