6 - Meios de fixao e conservao de cadveres e peas isoladas A utilizao de cadveres um mtodo de ensino amplamente realizado.

. Em decorrncia desse fato existe a necessidade de preservao de corpos para estudos anatmicos e histolgicos o que se torna maior a cada dia, pois cada vez mais difcil preencher a demanda de cadveres nas faculdades de medicina, veterinria, odontologia, enfermagem e demais reas da sade. Portanto, a utilizao destes corpos deve ser otimizada, para que um maior nmero de alunos e pesquisadores possa usufruir das vantagens do estudo em um corpo natural. Os tecidos provenientes de cadveres so objetos de estudo nas mais diversas reas da cincia, mas, para possibilitar seu estudo por tempo superior ao tempo de autlise e sem a ao de microrganismos, necessrio o uso de mtodos de fixao e preservao, que consiste em mergulh-los em solues qumicas denominadas fixadores. A fixao extremamente importante, pois mantm os tecidos firmes, insolveis e protegidos. Assim, a boa conservao das peas, alm de no permitir a deteriorao do material, tambm evita a proliferao de patognos que podero causar doenas nas pessoas que freqentam o laboratrio. Por exemplo, a contaminao por fungos nas peas anatmicas pode desencadear em alunos e profissionais,quadros de alergia em decorrncia da grande exposio de esporos fngicos suspensos no ar. Os principais grupos de fixadores so os fenis, aldedos, cidos,compostos halogenados, agentes oxidantes, metais pesados e seus saiscorantes, enxofre e tiossulfatos. Os cidos mais usados so o pcrico, actico, brico, saliclico e arsnico. Entre os sais esto o cloreto de sdio, os hipocloretos de sdio, o potssio ou clcio, o sulfato de potssio, o nitrato de potssio, oacetato sdico, o sulfato ferroso e outros. Os mais comuns so o formaldedo, aglicerina, o lcool etlico e o fenol. O formal de do o fixador e conservante mais utilizado, comumente em soluo aquosa a 10%. Por ser barato e penetrar rapidamente nos tecidos (seis milmetros em doze horas) amplamente utilizado nos laboratrios de anatomia, porm, muitas outras substncias, quando em contato com os tecidos, impedem a proliferao de microrganismos. Breve histrico da conservao de cadveres A fixao pode ser feita por mtodos qumicos ou fsicos (congelamento), sendo a fixao qumica um processo complexo e pouco compreendido (JUNQUEIRA & CARNEIRO, 2008). As tcnicas de conservao do corpo humano tem inicio com os Egpcios, atravs do processo de mumificao (natural) e o embalsamamento (qumico), porm mais com fins religiosos, do que cientfico, sem nenhuma descrio e comprovao de resultados. J no sculo XVI o belga Andras Vesalius realizou as primeiras dissecaes em cadver humano e props a sua configurao anatmica em seu famoso De Humani Corporis Fabrica, ficando consagrado como o Pai da moderna anatomia, e assim surge a necessidade deconservao deste material para fins didticos.Segundo KLEISS & SIMONSBERGER (1964), as primeiras descries destas tcnicas de conservao de cadveres foram feitas por Ambroise Par no seu Tratado de Cirurgia (1544), e por Petrus Florestius, que fez

uma descrio detalhada dos mtodos utilizados para embalsamamento de pontfices de Roma,com resultados controversos, ora bons, ora inadequados.Posteriormente, as tcnicas de fixao e preservao melhoram com a introduo de certas substncias, que injetadas intravascularmente, realizam uma verdadeira fixao nos tecidos mediante a coagulao rpida das protenas No final do sculo XVII, o lcool etlico fui usado sem boa aceitao .Mais tarde, Guilhermo Hunter, em torno do sculo XVIII, utilizou o lcool etlico associado pimenta negra, para conservar peas anatmicas injetadas com sebo ou cera, porm esta tcnica teve alguns entraves, gerando episdios distintos,como a ingesto do lquido de conservao de peas anatmicas que estavam sendo transportadas entre pases. Na mesma poca, Pierrento Diones empregou a pulverizao de cido tnico a fim de se evitar o crescimento de fungos. Froncois Chaussier empregou o bicloreto de mercrio para evitar a putrefao e favorecer a mumificao. Em 1835 foram empregadas solues aquosas de arsnico associadas ao lcool e, posteriormente, o almen tambm foi utilizado para injeo intravascular em cadveres, porm, hoje utilizado principalmente na preparao de peles de animais. O lcool etlico ainda continua a ser utilizado, porm no ofixador mais adequado, sendo mais empregado como conservante. Karl Schelle, em 1779, descobre a glicerina, representando um grande avano na preparao de peas anatmicas, sendo aplicada pela primeira vez no sculo XVIII pelo anatomista Carlo Giacomini. Em 1853, o qumico alemoTauflieb descobriu a ao fixadora do cloreto de zinco. Diversos reagentes qumicos foram utilizados, e alguns encontram-se ainda em uso. No entanto, em1868, por August Von Hoffman, ocorre a descoberta mais importante, o formol (formaldedo ou aldedo frmico), passando este a ser empregado nas tcnicas anatmicas e microscpicas.Essa tcnica a mais empregada atualmente, dado o baixo custo e a rpida penetrao tecidual, mas traz como principal desvantagem o odor forte e irritante de mucosas, j que o produto voltil. Outro aspecto a ser considerado, que a formolizao uma tcnica que demanda espao. O cadver ou pea deve permanecer por longo perodo submerso no lquido antes de ser dissecado e ainda permanecer submerso para armazenamento. H uma srie de outras tcnicas de conservao de cadveres na forma de peas anatmicas, atualmente em uso, como a Glicerinao, que conserva a pea em glicerina, facilitando o manuseio, podendo ficar em ambiente seco; a macerao, que retira todas as partes moles da estrutura, mantendo apenas o tecido sseo; a diafanizao , que gera peas translcidas; e a corroso,que consiste no preenchimento das estruturas tubulares com resina seguida por corroso cida dos tecidos no preenchidos. No final do sculo XX surge uma nova tcnica, colocando a anatomiade novo no centro da ateno popular e da polmica cientfica. A Plastinao uma tcnica inovadora que impe a substituio das molculas de gua do corpo por um polmero, mantendo a estrutura e as caractersticas originais da pea deforma inodora e resistente, gerando peas de fcil conservao, j que esto, a grosso modo, plastificadas, podendo ficar expostas, como em um museu (VONHAGENS et al., 1987). Fixadores BEHMER et al. (1976); ALVES (2002); JUNQUEIRA & CARNEIRO(2008) e RODRIGUES (2010) ressaltaram que os fixadores so substncias qumicas que mantm a integridade dos tecidos aps

a morte, sem ocasionar alteraes da estrutura celular. Suas finalidades bsicas so as de evitar ao mximo as alteraes na constituio qumica celular; insolubilizar as protenas dos tecidos por meio de ligaes cruzadas entre os aminocidos, o que de fundamental importncia na fixao, pois so essas protenas as responsveis pela manuteno estrutural das clulas e tecidos e inativar enzimas proteolticas o mais rapidamente possvel, pois estas ltimas so as responsveis pela degradao espontnea que os tecidos sofrem aps a morte, isto , a autlise. E por fim, evitar a proliferao bacteriana e fngica, permitindo assim o estudo da clula ou do tecido como se estivesse, naquele momento, vivos.Alguns tipos de fixadores s podem ser usados para pequenos fragmentos de tecidos, como o aldedo glutrico, o lcool e o ter. Outros como o formaldedo ou aldedo frmico, podem ser utilizados para fragmentos maiores, pois apresentam maior poder de penetrao. O tempo de fixao depende do tipode fixador e da temperatura em que este se encontra: quando, por exemplo,deseja-se uma fixao rpida, emprega-se o formol (denominao dada a qualquer diluio a partir do formaldedo comercialmente puro 40%), aquecida a50oC durante 1h. Este mesmo fixador, temperatura ambiente, requer pelo menos 12h para exercer sua atividade completamente. A temperatura aumenta a velocidade de fixao, aumentando a penetrao do fixador atravs do tecido(BEHMER et al., 1976; RODRIGUES, 2010).EERDEN & NIE (1981) realizaram um levantamento sobre as principais tcnicas e solues conservadoras de tecidos, enviando para o Departamento de Anatomia das Faculdades de Medicina, um questionrio sobre o embalsamamento e armazenamento de cadveres humanos. Concluram, aps a anlise das respostas, que no existe um mtodo padro, e que so utilizadas diferentes tcnicas, bem como diferentes solues conservadoras para tal fim. ALVES (2002) e RODRIGUES (2010) acrescentaram que no h fixadores perfeitos, porm pode-se empregar misturas para minimizar as limitaes de cada um. O fixador deve ser escolhido levando-se em conta as caractersticas do tecido, os exames pretendidos e as coloraes a serem aplicadas, ressaltando que, uma boa fixao dos tecidos fundamental para a observao em microscopia ptica. A fixao pode ser efetuada por imerso ou por perfuso, e deve ser realizada o mais breve possvel aps a remoo de uma Aspecto da macro configurao da cavidade pulpar, revelado pela tcnica da diafanizao onde se pode ver o verdadeiro labirinto da anatomia interna dental ou o sistema de canais radiculares, aps as consideraes bsicas da anatomia interna (coroa, raiz,esmalte, dentina, cmara pulpar, cemento, canal radicular e pice). Tcnicas alternativas de conservao de peas anatmicas: A elaborao de mtodos alternativos para a realizao de aulas prticas visa manter a educao atualizada e sincronizada com o processo tecnolgico, com o desenvolvimento de mtodos de ensino e contribui para o pensamento tico. Para isso, so implementados mtodos alternativos como: utilizao de cadveres formolizados ou preservados com soluo de Larssen, modelos sintticos (espumas, modelos em madeira e bexigas de ltex, vsceras e msculos de animais

abatidos, vdeos ilustrativos, suturas em panos, simulaes em vsceras do uso de eletro bisturi e criocirurgia, preparao de peas anatmicas, entre outros. Plastinao Plastinao um processo desenvolvido por von Hagens em 1977, quase baseia em impedir a decomposio e preservar espcimes anatmicos para a educao mdica e cientfica, substituindo todos os fluidos teciduais e solveis em gordura (gua e lipdeos) por polmeros (silicone, epxi, ou copolmero de polister), e depois passam por um processo de endurecimento pela luz, calor ou certos gases, que proporcionar a rigidez e conservao dos espcimes (VONHAGENS et al., 1987). Este mtodo apresenta um custo muito alto, e est sendo amplamente utilizado na Europa e nos EUA e j est sendo empregada em algumas universidades brasileiras (SILVA et al., 2008). A tcnica de plastinao permite a obteno de corpos inteiros, peas ou partes delas e desde a sua introduo foi uma verdadeira revoluo na educao, melhorando a qualidade da prtica docente e na investigao da anatomia macro e mesoscpica, como base para a interpretao das modernas tcnicas de diagnstico, como ressonncia magntica, endoscopia, tomografia, entre outras (VON HAGENS et al., 1987; O'SULLIVAN & MITCHELL, 1995;WEIGLEIN, 1997; BRAVO, 2006; DHINGRA et al., 2006; KCN et al., 2007;REYES-AGUILAR, 2007). A tcnica possibilita a utilizao de um nico cadver indefinidas vezes, alm da obteno de peas anatmicas reais, com preservao de estruturas anatmicas detalhadas. Os cadveres podem ser obtidos atravs de convnios com clnicas veterinrias mediante doao dos proprietrios (VONHAGENS et al., 1987). As tcnicas atuais de conservao baseadas em formaldedo utilizadas na rea de anatomia em muitas universidades no so as mais adequadas. Estas tm inconvenientes, como a rigidez e a perda da cor natural dos tecidos. Alm disso, as propriedades fsico-qumicas da soluo levam formao de gases,que afetam as pessoas que a manipulam, irritando a mucosa ocular. A inalao causa irritao na mucosa nasal e do trato respiratrio superior e pode at afetar os pulmes. Em tempos de exposio prolongada h tambm irritao cutnea (BALLENGUER, 1984; OLSEN et al., 1984). Em contrapartida, as peas plastinadas esto livres de odor, tm alta durabilidade, so secas e muito resistentes (REYES-AGUILAR, 2007). Corpo conservado pela tcnica plastinao A tcnica desenvolvida por Gunther Von Hagens em Heidelberg, na Alemanha, consiste basicamente em quatro etapas: (1) fixao: aps a dissecao, a pea ou cadveres so fixados em uma soluo de formol a 10% por um perodo de uma semana; (2) desidratao. Os espcimes biolgicos tm um alto teor de gua que deve ser removida. Isto conseguido por meio de um processo conhecido como substituio em congelamento, onde as amostras so colocadas em solvente orgnico, como a acetona a -25C. Ento, durante um perodo de quatro a cinco semanas, a gua dos tecidos lentamente substituda pela acetona; (3) impregnao forada, o solvente aqui substitudo por um polmero em uma cmara de vcuo em baixas temperaturas e endurecimento, onde a amostra preenchida de polmero colocada em uma cmara fechada, onde entra em

contacto com um gs de cura, calor ou luz ultravioleta. Este gs endurece o polmero, secando a pea em cercade 48h. A secagem completa leva vrios meses (VON HAGENS et al., 1987; KCN et al. 2007, RIVERA et al., 2009).Segundo KCN (2007), um grande nmero de fatores deve ser considerado, como grau de decomposio, a distribuio do tecido adiposo e quantidade de sangue nas veias quando da escolha do polmero a ser utilizado. Soluo de Larssen modificada Trata-se de uma tcnica de tratamento qumico para a preservao de cadveres que sero utilizados em aulas de tcnica cirrgica, como mtodo alternativo ao uso de animais vivos (SILVA, 2003).SAMPAIO (1989), em um estudo sobre o crescimento do rim humano no perodo fetal, utilizou o lquido de Larssen conforme a frmula utilizada peloServio de Anatomia Patolgica do Hpital Cochin, da Universidade Ren Descartes Paris V, Frana, composta por 500 g de cloreto de sdio, 900 g de bicarbonato de sdio, 1000 g de hidrato de cloral, 1100 g de sulfato de sdio,500mL de soluo de formol a 10% e 1000 mL de gua destilada, para preservar fetos humanos. O autor relatou que o lquido de Larssen conservou a cor, a consistncia e as caractersticas das peas anatmicas, tendo ainda como finalidade dissolver cogulos e restaurar a volemia fetal, colocando os rins o mais prximo do natural.Os docentes da disciplina de tcnicas cirrgicas do Departamento deCirurgia da FMVZ/USP, modificaram a tcnica da soluo de Larssen, acrescentando glicerina, a fim de tornar as peas mais maleveis. A soluo de Larssen modificada pelos autores compreende a mistura de 100 mL de formalina a 10%, 400 mL de glicerol, 200 g de hidrato de cloral, 200 g de sulfato de sdio,200 g de bicarbonato de sdio, 180 g de cloreto de sdio e 2000 mL de gua destilada. A soluo foi utilizada na diluio de uma parte do concentrado para trs partes de gua destilada. A quantidade a ser utilizada para fixao de 10%do peso do animal a ser injetado via artria cartida comum, e ps fixao, os animais so acondicionados em sacos plsticos e crio preservados em cmera frigorfica com temperatura entre -20C e -16C, conforme protocolo preconizado por SILVA et al. (2003).SILVA (2003) e SILVA et al. (2004) utilizaram esta tcnica na preservao de cadveres que foram utilizados no ensino da cirurgia. Os cadveres preservados foram utilizados no mnimo 4 vezes, e durante o treinamento apresentavam textura, colorao e consistncia dos tecidos semelhantes ao encontrado em animais vivos, como a flexibilidade dasarticulaes, bem como ausncia de liberao de odores desagradveis oriundos do processo de decomposio.SCHERER (2009), em seu trabalho utilizando do modelo experimental de ces conservados com soluo de Larssen modificada para treinamento emvideocirurgia, relatou que foi vivel e efetivo para treinamento de tireoidectomia video endoscpica e nefrectomia total laparoscpica, evidenciando boa condio,tanto da cavidade abdominal como da regio cervical, e apresentou caractersticas teciduais semelhantes s de um animal vivo, principalmente no que se refere a tecidos corpreos extra-abdominais, como msculos e pele.Entretanto evidenciou rgos intra-abdominais com textura mais frivel. A presso de CO2 necessria a execuo do procedimento parece ser maior do que a rotineira em animal vivo, pelo fato dos tecidos musculares e cutneos apresentarem reduo significativa de elasticidade.

7 Disseco
A disseco na rea da anatomia humana o ato de explorar o corpo humano, ou seja atravs de cortes possibilitar a visualizao anatmica dos rgos e regies que existem no corpo humano e assim possibilitar o seu estudo. Atravs de muitos estudos de disseco foi possvel identificar e melhorar a rea mdica, atravs de conhecimentos bsicos como a localizao de vasos, nervos, ossos, msculos, com suas origens e inseres. Sem dvida o ato de dissecar muito importante e utilizado at hoje nos cursos de medicina. No Brasil ainda h muita dificuldade em conseguir cadveres para o estudo, j em outros paises como Bolvia, onde residem e estudam muitos estudantes de medicina brasileiros, j mais fcil.