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INTRODUO
Em
postulou
balano hormonal, proposta por SKOOG & MILLER (1957), tem tornado possvel o estudo da morfognese in vitro e sua aplicao mais prtica, a micropropagao.
CONCEITO
Micropropagao o desenvolvimento de novas
plantas em um meio artificial sob condies asspticas, a partir de pequenos propgulos (explantes); Para as frutferas, as partes mais empregadas so pices caulinares, micro-estacas, embries, calos celulares; A cultura de tecidos difere dos mtodos tradicionais, a micropropagao emprega propgulos pequenos, controle assptico, controle do meio ambiente e rpida multiplicao das frutferas, quando comparada com os mtodos tradicionais.
FASES DA MICROPROPAGAO
A rpida multiplicao em cultura de tecido pode 1. 2.
ocorrer devido: A um aumento da formao de brotaes axilares, seguido do enraizamento individual destas brotaes; produo de brotaes adventcias, tambm seguida de enraizamento destas brotaes; embriognese de clulas somticas. DEBERG & MAENE (1981) enfatizam que cinco fases so importantes para a micropropagao eficiente de uma espcie, sendo elas:
3.
LUZ
plantas estoques (matrizes) tratadas com luz vermelha produzem mais brotaes por explante do que plantas no-tratadas.
TEMPERATURA
tecidos so expostos a condies de estresse, o metabolismo de compostos fenlicos estimulado. Isto leva a reaes de hipersensibilidade, tais como a liberao do contedo nas clulas danificadas, as reaes nas clulas vizinhas, mas, sem mostrar sintomas de danos, e/ou a morte prematura de clulas especficas no lugar do ferimento ou o lugar de infeco. De um modo geral, de acordo com RHODES & WOOLTORTON (1978), h trs tipos possveis de resposta ao estresse ou dano: Oxidao de compostos fenlicos pr-formados, ocorrendo a formao de quinonas e material polimerizado, sntese de monofenis e sntese de derivados de polifenis.
SNTESE DE MONOFENIS
Pode levar ao acmulo de maiores quantidades
de produtos pr-formados nos tecidos no danificados ou ao aparecimento de novos produtos que desempenham um papel no mecanismo de proteo do tecido contra a contaminao (fitoalexinas). O papel destes produtos j mencionados pode ser o de formar uma barreira fsica contra a invaso (lignina), ou um inibidor de crescimento microbiano (quinonas, fitoalexinas).
COMPOSTOS FENLICOS
Um grupo especial de compostos fenlicos so as
auxinas protetoras (antioxidantes que inibem a oxidao do AIA catalizado pelas peroxidases). Numa planta intacta, h um gradiente na inibio da degradao enzimtica do AIA que inversamente proporcional idade do tecido. Isto mostra que a inibio diminui em direo base do caule, ou a concentrao de auxinas protetoras maior nas folhas mais novas e nos interndios. De um modo geral, os fenlicos so produtos facilmente oxidados. Tais produtos podem ser fitotxicos, ou mesmo aumentar os processos de oxidao, porque depois de ocorrer a oxidao, eles se tornam oxidantes muito fortes.
respeito ao cultivo de tecidos, os objetivos so de dois tipos: primeiro, deve-se tentar ter as auxinas protetoras dentro do tecido para estimular o crescimento; aps, devese limitar a biossntese de compostos fenlicos, ou quando eles so liberados no meio de cultura, deve-se aumentar o perodo necessrio para iniciar sua oxidao.
GEORGE & SHERRINGTON (1984) mostram alguns passos para se evitar o escurecimento do tecido e do meio, na fase 1 da micropropagao:
2.
3.
4.
5.
adsoro com carvo ativado ou polivinilpirrolidona); Modificao do potencial redutor (agentes redutores ou menos oxignio disponvel); Inativao (agentes quelantes) ou reduo da atividade da enzima fenolase (baixo pH, escurido, entre outros). Nem todo antioxidante eficaz nesta fase (o cido ascrbico); O mangans (Mn++, um cofator de peroxidases) e o cobre (Cu++, parte da complexa enzima fenolase), podem estimular a oxidao de fenis.
ESTDIO 2: MULTIPLICAO
Nesta fase, cultivam-se brotaes com a finalidade de
aumentar o nmero de estacas. Aqui, podem ocorrer inmeros subcultivos at atingir um nmero de brotaes que sero enraizadas. Pretende-se, nesta fase, obter brotaes alongadas e aptas para a fase de enraizamento; Para a maioria das frutferas, o mtodo mais usado o da formao adventcia de caules (facilita grandemente e de forma rpida o aumento de propgulos); Para cada espcie, no entanto, tem-se que determinar se este sistema produz plantas com as mesmas caractersticas genticas da planta-me; A calognese axilar tambm empregada na micropropagao e garante a obteno de indivduos com idntica composio gentica da planta matriz.
condies totalmente artificiais, agora passam para condies naturais (FASE CRTICA); Essa mudana, por ser brusca, deve ocorrer paulatinamente: - As folhas das plantas micropropagadas apresentam uma menor quantidade de ceras epicuticulares que, associada pouca funcionabilidade dos estmatos, as torna suscetveis a grandes perdas de gua por transpirao (1 a 2 semanas sombrite e nebulizao em casa de vegetao ou telado).
TERMOTERAPIA
As plantas matrizes ou estoques so colocadas
em ambiente com temperatura elevada, geralmente acima de 30C (varia de acordo com a espcie e variedade) por um perodo mnimo de 20 dias, mas, preferivelmente, acima de 40 dias. Este tempo necessrio para inativar o vrus ou micoplasma presente na planta; Concomitantemente, ocorre crescimento das brotaes da planta estoque, que provavelmente no acusaro a presena do vrus; Estas brotaes so ento retiradas e podero, aps o enraizamento, servir de fonte de material vegetativo livre de vrus.
CULTURA DE MERISTEMA
Neste caso, faz-se a retirada do meristema,
tecido de gemas vegetativas, terminais ou axilares; Este tecido transferido para um meio de cultura contendo reguladores de crescimento, onde, atravs do processo de diferenciao, ocorrer a formao de brotaes que seguiro as etapas j mencionadas anteriormente.
Figura 2: Diagrama da cultura de meristema: a limpeza clonal poder ser obtida no final deste processo.
se obter a limpeza clonal. As plantas passam por um perodo de termoterapia que se sucede retirada do meristema, o qual inoculado em um meio de cultura semelhante ao anterior.
MICROENXERTIA
Este processo empregado para aquelas
espcies que no podem ser submetidas a temperaturas elevadas e, principalmente, para as espcies que, ao serem multiplicadas in vitro, apresentam uma reverso ao estdio de juvenilidade. Neste caso, o meristema coletado enxertado em porta-enxerto crescido in vitro; Este processo apresenta um baixo rendimento; comumente empregado para os citrus, podendo tambm ser usado para a cultura da ameixeira e pessegueiro.
Figura 3: Diagrama da tcnica de microenxertia in vitro para obteno de plantas isentas de vrus e micoplasmas.
OBRIGADO