Aula 03 Biosseguranca

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Biossegurana
Dra. Patricia Busko Di Vitta,
Setor Tcnico de Tratamento de Resduos Qumicos e Solventes STRES-IQUSP Bloco 0 Ramal 3081 pabusko@iq.usp.br patricia.vitta@usp.br
03/08/2011 STRES - IQUSP

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Objetivo
Divulgar informaes teis e prticas sobre biossegurana em laboratrio: Grupos de risco biolgico e OGMs; Reduo de risco; Normas Universais; e descontaminao de material Descarte biolgico.
reas Crticas
Laboratrios de manipulao de OGM Laboratrios de manipulao de microorganismos Laboratrios de radioistopos com OGM Biotrio Salas de limpeza e descartes
Biossegurana
Trata das regras e condutas para a utilizao, conteno, transporte e eliminao de OGMs. Visa a preveno do escape de organismos patognicos, de substncias nocivas e de OGMs; Visa e preveno sade do trabalhador e ao meio ambiente
OGMs
Os OGMs so organismos cujo material gentico (ADN) no foi modificado por multiplicao e/ou recombinao natural, mas pela introduo de um gene modificado ou de um gene pertencente a uma outra variedade ou espcie.
Biossegurana
Treinamento; Planejamento e Organizao: Manuseio e transporte de vidrarias, reagentes, equipamentos, instrumentos e outros materiais; Higiene, limpeza, desinfeco Resduos biolgicos, qumicos,etc. Utilizao de EPC e EPI; Sinalizao; Procedimentos operacionais; Registros de atividades; Registros e comunicao de acidentes
Risco Biolgico
Presente em agentes de origem biolgica, capazes de produzir efeitos nocivos em humanos e animais: Microorganismos (virus, bactrias, fungos, protozorios) Toxinas e alrgenos derivados de microorganismos, parasitas, insetos, animais e plantas Plantas, animais, bactrias, leveduras, fungos, protozorios, metazorios, etc. OGMs Amostras biolgicas (Sangue, secrees, derrames e lavados cavitrios) Peas cirrgicas, bipsias
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Biossegurana
http://www2.iq.usp.br/bioquimica/index.dhtml?pagina=826&chave=UpP
http://www2.iq.usp.br/bioquimica/index.dhtml?pagina=827&chave=5FA
http://www2.iq.usp.br/bioquimica/Biosseguranca/diretrizes_biosseguranca_IQ.doc
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Classificao de OGMs
Os OGMs so classificados em Grupo I e Grupo II. A classificao dos OGMs em Grupo I ou Grupo II considera os riscos associados aos seguintes componentes: A classe de risco, de acordo e as caractersticas do organismo receptor ou parental (hospedeiro), - o vetor, o inserto, - o OGM resultante. De acordo com o critrio de patogenicidade o organismo receptor ou parental a ser utilizado no trabalho que originar o OGM classificado com base no seu potencial patognico para o homem e para os animais, em 4 classes de risco a saber:
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Classificao de OGMs
Ser considerado como OGM do Grupo I aquele que se enquadrar no critrio de no patogenicidade, resultando de organismo receptor ou parental no patognico (classificado como Classe de Risco 1, de acordo com o Apndice 2 destas Normas), alm da observncia dos demais critrios estabelecidos no Anexo 1 da Lei 8.974/95. Ser considerado como OGM do Grupo II qualquer organismo que, dentro do critrio de patogenicidade, for resultante de organismo receptor ou parental classificado como patognico (classificados como classe de risco 2, 3, ou 4) para o homem e animais. Alguns organismos so pragas quarentenrias de plantas. Aqueles compreendidos na Lista A1 no existem no pas e tm a sua importao terminantemente proibida, no podendo ser objeto de trabalho. Os da Lista A2 j entraram no Pas, porm, esto sob controle oficial do Ministrio da Agricultura, e s podem ser trabalhados dentro da rea endmica.
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Classificao de OGMs
(a) Classe de risco 1 - (baixo risco individual e baixo risco para a comunidade) - organismo que no cause doena ao homem ou animal. (b) Classe de risco 2 - (risco individual moderado e risco limitado para a comunidade) - patgeno que cause doena ao homem ou aos animais, mas que no consiste em srio risco, a quem o manipula em condies de conteno, comunidade, aos seres vivos e ao meio ambiente. As exposies laboratoriais podem causar infeco, mas a existncia de medidas eficazes de tratamento e preveno limitam o risco, sendo o risco de disseminao bastante limitado.
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Classificao de OGMs
(c) Classe de risco 3 - (elevado risco individual e risco limitado para a comunidade) - patgeno que geralmente causa doenas graves ao homem ou aos animais e pode representar um srio risco a quem o manipula. Pode representar um risco se disseminado na comunidade, mas usualmente existem medidas de tratamento e de preveno. (d) Classe de risco 4 - (elevado risco individual e elevado risco para a comunidade) - patgeno que representa grande ameaa para o ser humano e para aos animais, representando grande risco a quem o manipula e tendo grande poder de transmissibilidade de um indivduo a outro. Normalmente no existem medidas preventivas e de tratamento para esses agentes.
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Nvel de segurana em laboratrios
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Classificao de microorganismos infectantes
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FCF/USP
http://www.who.int/csr/resources/publications/biosafety/BisLabManual3rdwebport.pdf
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Grupo 1
Agentes que no causam doenas em humanos. E. Coli k12, Bacillus subtilis, Vrus adenoassociado sorotipos 1-4, Maloney murine leukemia virus (ecotropic, <50L) No exige infra-estrutura especial; No exige equipamentos de conteno; Pode ser manipulado na bancada; Descarte: Tratado, autoclavado ou incinerado
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Nvel de Biossegurana 1 barreiras primrias
- FCF/USP
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Nvel de Biossegurana 1 barreiras secundrias
- FCF/USP
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Grupo 2
Agentes de risco moderato e com pouca probabilidade de provocar doena grave, tratamentos disponveis (vacinas). Salmonela, Hepatitis B, retrovrus (Moloney, anfotrpico), adenovrus, vetores recombinantes de lentivrus, HeLa, HEK293 Sinalizao adequada; rea de acesso restrito durante experimentao; Uso do cabine de segurana biolgica (CSB, fluxo laminar), material no pode ser manipulado na bancada; Descarte: Tratado, autoclavado ou incinerado. 22
http://www.cavo.com.br
- FCF/USP 23
CSB
FCF/USP
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Grupo 3
Agentes com risco elevado de provocar doena grave. HIV, HTLV, tuberculose rea de acesso restrito, ante-sala, fluxo de ar direcionada, sada de ar com filtro; Uso de CSB (fluxo) apropriado Descarte: Tratado, autoclavado ou incinerado (descontaminado antes de sair da sala)
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FCF/USP
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- FCF/USP
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Sinalizao do Laboratrio
NB-2 /NB-3
FCF/USP
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Grupo 4
Agentes de alto risco e sem tratamento conhecido Ebola zair, Rift Valley Virus rea de conteno total Prticas especficas
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FCF/USP
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Rosario Hirata FCF/USP
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Laboratrios no IQUSP
Alexander Henning Ulrich Carla Columbano Oliveira Maria Julia Manso Alves@ Pedro Soares de Araujo Ronaldo Bento Quaggio Sergio Verjovski Almeida@ Suely Lopes Gomes Alicia Juliana Kowaltowski Bianca Silvana Zingales@ Cllia Ferreira Glaucia Mendes Souza Marisa Helena Gennari de Medeiros Ohara Augusto Regina Lcia Baldini Sandro Roberto Marana Shaker Chuck Farah Walter Ribeiro Terra Aline Maria da Silva Bettina Malnic Hugo Aguirre Armelin Mari Cleide Sogayar Nadja Cristhina de Souza Pinto Lardner
Walter Colli@
@ Laboratrios com reas de conteno nvel II para trabalho com OGMs do Grupo II. 32
E. coli , S. cerevisae, clulas tumorais PC12, Xanthomonas axonopodis pv citri, Dictyostelium discoideum, X. fastidiosa, T. Cruzi, Dictyostelium discoideum, Trichoderma reesei, pancreatic beta cells, Linhagens de clulas de camundongo, Pseudomonas putida 39D (ATCC 70008), baculovirus, retrovirus, vetores de lentivirus, diversas celulas de mamiferos e de inseto que foram geneticamente modificados (sf9), Saccharomyces cerevisiae, Agrobacterium rhizogenes, Xanthomonas axonopodis pv citri, Arabidopsis thaliana, Pichia pastoris, Xanthomonas axonopodis pv citri, Caulobacter crescentus
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Reduo de riscos
Equipamentos de proteo individual (EPI)

Luvas, avental, mscara, botas, culos de proteo Usar e trocar! Descarte e remoo de lixo, existncia de extintores de incndio, lavador de olhos, sinalizao, sadas de emergncia. Proteger o operador e o laboratrio Proteger ambiente
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Medidas coletivas
Conteno primria
Conteno secundria
Reduo de riscos
Os acidentes em laboratrios de Microbiologia, normalmente ocorrem pela formao de aerossis, por respingos, pipetagens incorretas, injees, trabalhos com grandes quantidades e/ou concentraes elevadas de microorganismos, laboratrios superlotados de pessoal e material, infestao por roedores, por insetos e entrada de pessoas no autorizadas. Para evitar a maior parte destes riscos, devem ser tomados cuidados especiais, desde a concepo geral e instalao do laboratrio. As infeces por micro-organismos em laboratrios de Microbiologia podem ocorrer atravs da pele, das vias digestivas e mucosa bucal, das vias respiratrias e mucosa 36 nasal e dos olhos e ouvidos.
Normas universais
Procurar treinamento e informao antes de iniciar atividades ou utilizar equipamentos; No comer, beber, armazenar alimentos em geladeiras, mquinas de gelo ou cmaras frias do laboratrio; Usar EPIs; No aplicar maquiagem, pentear cabelo, manipular lentes de contato, etc.; No pipetar com a boca; No tocar em maanetas, telefones, olhos, nariz,bolsas, bolsos, telefones, etc. com luvas; Obedecer as regras de descarte de material biolgico; Lave as mos sempre; No retirar canetas ou qualquer outro instrumento do laboratrio sem descontaminar antes. No mastigar lpis/caneta e no roer as unhas; 38 Etc.
Mais Normas...
Conhea o Mapa de Riscos de seu local de trabalho Um aviso na porta do laboratrio dever ser colocado indicando a natureza do agente patognico com que se trabalha; O laboratrio deve ser mantido limpo e em ordem, devendo serem dele retirados quaisquer materiais que no tenham relao com o trabalho; As bancadas do laboratrio devem ter a superfcie muito lisa, de maneira a serem facilmente limpas e desinfectadas; As superfcies das bancadas devem ser recobertas com papel absorvente, sempre que exista a possibilidade de respingos de material perigoso; As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas pelo menos uma vez por dia e sempre que ocorrer caso de derramamento de substncias potencialmente perigosas; 39
Mais Normas...
Use sempre avental ou uniforme enquanto estiver no laboratrio; estas roupas no devem sair do recinto de trabalho e, devem ser desinfetadas por procedimentos adequados; Em todos os trabalhos nos quais existe possibilidade de contato direto acidental com sangue, material infeccioso ou animais infectados, devem ser usadas luvas; estas luvas, antes de descartadas, devem ser esterilizadas em autoclaves; Deve ser desenvolvido no pessoal o hbito de conservar as mos longe da boca, nariz, olhos e rosto; Deve ser evitado o uso de barba quando se trabalha com microorganismos perigosos Todos os procedimentos devem ser efetuados de maneira a se evitar, ao mximo, a formao de aerossis;
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Mais Normas...
Somente devero ser autorizadas a entrar no laboratrio pessoas que tenham sido informadas sobre os possveis riscos e satisfaam os requisitos que se exigem para o acesso; durante o trabalho, as portas devem ser mantidas fechadas; somente tero acesso ao local animais e pessoas autorizadas; no se deve permitir a entrada de crianas no laboratrio; No se deve permitir a entrada no laboratrio de animais que no tenham relao com os trabalhos que esto sendo efetuados; Deve ser estabelecido um programa de luta contra os insetos e roedores; As sub-culturas de micro-organismos infecciosos devem ser feitas em capelas; Nunca umedea rtulos com a lngua; use gua ou rtulos autoadesivos;
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Mais Normas...
As pipetas desinfetantes; usadas devem das ser imediatamente imersas em Proteja a ponta superior esterilizao; pipetas com algodo antes da
Utilize seringas com acessrio especial para evitar que a agulha se separe da seringa; No empregue chumaos de algodo ao esvaziar uma seringa contendo ar ou excesso de lquido. Use um pequeno frasco cheio de algodo embebido em desinfetante; Use seringas e agulhas hipodrmicas somente para injeo parental, aspirao de lquidos dos animais de laboratrio e de vacinas contidas em frascos com tampas perfurveis. No as use para manipular lquidos infecciosos; nestes casos, devem ser empregadas pipetas automticas;
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Mais Normas...
Antes e depois de injetar materiais infecciosos em animais, esfregue o local da injeo com desinfetante; As centrfugas usadas para material txico ou infeccioso devem ser protegidas por anteparos; Use para centrifugao somente tubos no danificados e tampados. Tenha certeza de que o lquido contido no tubo no transbordar durante a centrifugao; Culturas lquidas de organismos altamente infecciosos requerem cuidados especiais, pois qualquer movimento que agite a superfcie do lquido, produzir aerossol; os liquidificadores do origem a pesados aerossis; Amostras de soro sangneo de todo o pessoal do laboratrio e demais pessoas expostas aos riscos a ele inerentes, devem ser conservadas como referncia;
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Mais Normas...
Todos os lquidos e slidos contaminados devem ser descontaminados antes de eliminados ou ento, reutilizados. Os materiais esterilizados em autoclaves ou incinerados fora do laboratrio devero ser acondicionados em recipientes fechados e impermeveis; Os meios de cultura slidos e/ou lquidos utilizados para crescimento de bactrias devem ser autoclavados antes de serem encaminhados ao lixo; Siga as instrues do IQUSP e do laboratrio para descartar substncias qumicas, agentes biolgicos, radioativos, resduos e o lixo; informe-se dos procedimentos junto s Comisses pertinentes;
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Mais Normas...
Todos os derramamentos, acidentes e exposies reais ou potenciais por material infectado devem ser imediatamente notificados ao chefe do laboratrio. Devem existir protocolos escritos para estes episdios, onde so previstos avaliaes, vigilncia e tratamento mdico apropriados; Em caso de respingos, cubra imediatamente a rea com desinfetante adequado. A toxina botulnica deve ser coberta com soluo saturada de carbonato de sdio; O chefe do laboratrio deve providenciar para que o pessoal receba uma formao apropriada sobre segurana no laboratrio. Deve ser adotado um manual sobre segurana ou de operaes, no qual sejam identificados os riscos a que o pessoal est exposto e indicadas as prticas ou procedimentos adequados par reduzi-los ao mnimo ou elimin-los. O pessoal tambm deve ser informado sobre a 45 existncia;
Procedimentos de Descontaminao
Esterilizao Uso de processos fsicos ou qumicos com a finalidade de destruir microorganismos viveis Desinfeco Uso de processos fsicos ou qumicos, sobre objetos inanimados, para eliminar microorganismos patognicos conhecidos Antisepsia Aplicao de germicida sobre a pele ou tecido vivo com a finalidade de destruir microorganismos ou inibir o ser crescimento
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Descarte de material biolgico

Tratamento Qumico (IQUSP); Tratamento Fsico (IQUSP); Desativao eletrotrmica (triturao e aquecimento anlogo a microondas) (LIMPURB); Incinerao; Outros.
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Tratamento Qumico Cloro ativo Perxido de Hidrognio Sais de amnio quaternrio xido de etileno Formaldedo Glutaraledo Fenol Etc.
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Tratamento Qumico (Hipoclorito) Cloro ativo (10-12% hipoclorito) Diluir antes de usar (1:10) gua sanitria (2-2,5% hipoclorito) Diluir (1:1) ou usar diretamente Desinfectante hospitalar (1% hipoclorito) Usar diretamente
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Tratamento Qumico
1) Para preparar o lcool a 70 % ( 5%) mistura-se 7 volumes do lcool etlico comercial (92-96o GL) com 3 volumes de gua. 2) O formol comercial (formalina) contm cerca de 37 a 40 % de formaldedo. As solues de formol so corrosivas e no devem ser autoclavadas pois agridem as vlvulas e os sensores da autoclave; 3) O hipoclorito de sdio comercial contm cerca de 10% de substncia ativa, mas pode ser fornecido comercialmente em outras concentraes mais baixas. J a gua sanitria contm apenas 2 a 2.5 % de substncias ativas, durante o prazo de validade. As solues para descontaminao devem ser preparadas no mesmo dia de uso devido instabilidade do hipoclorito de sdio. As solues de hipoclorito so estveis a pH elevado (em torno de 11), pela adio, via de regra, de hidrxido de sdio . OBS. O tempo de ao necessrio para que os agentes qumicos inativem um microorganismo varia muito. Deve-se procurar informaes exatas para 50 cadaagente a ser inativado por cada substncia qumica.

Tratamento de lquidos: Aplicar 10% do volume final Deixar agir durante 30 minutos Descartar lquidos e enxaguar exaustivamente
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Tratamento fsico: Radiao (UV, gama) Trmico: Autoclave (slidos, lquidos): 121C, mnimo de 15 minutos (volumes grandes podem requerer mais tempo) Incinerao
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ESTERILIZAO E ACONDICIONAMENTO

Perfurocortantes (agulhas, vidro, ponteiras, etc.): Descarpack ou recipiente adequado; Sem repor capa em agulhas; Sem dobrar agulhas. Vidro quebrado: No manipular com a mo, sempre usar pina ou p de lixo Descarpack; Tratar quimicamente/autoclavar/lixo biolgico
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Bactrias Placas: autoclavar/lixo biolgico Lquido: Tratar com hipoclorito Tubos de ensaio/vidraria: Tratar com hipoclorito antes de lavar Sangue Soluo de hipoclorito 1-2%, 10% do volume final, 30 minutos Cultura de clulas Lquidos: Tratar com hipoclorito Placas, tubos e restos celulares: autoclavar/lixo biolgico 57
STRES - IQUSP
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Material biolgico: Material exposto a agentes biolgicos inclui ponteiras, pipetas, tubos, luvas, meios de cultura, frascos, placas de petri, restos celulares, carcaa de animal, peas cirrgicas, sangue, etc. Sempre deve ser tratado/descontaminado, idealmente antes de sair do laboratrio.
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Em caso de acidentes:
Notificar colegas, sinalizar a rea; Lavar pele com sabonete antimicrobiano; Cobrir material contaminado com papel toalha; Saturar com soluo de hipoclorito 1-2% (10% volume final); 30 minutos; Descartar material e lavar rea de trabalho; Lavar as mos; Preencher relatrio de acidente.
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Cuidados especiais
Bico de Bunsen para flambar (queimaduras, vazamentode gs, incndios) Auto clave (certeza de desinfeco, tomadas, fechamento) UV (usar culos de proteo, cuidado com exposio) Centrifugas (tubos inteiros, fechada) Brometo de etdio (trabalhar em rea designada; se for em p, trabalhar na capela; no colocar em microondas) Nitrognio Lquido (EPIs, queimaduras)
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Sites de interesse
CTNBio http://www.ctnbio.gov.br CDC http://www.cdc.gov/od/ohs/biosfty/biosfty.htm NIH Guidelines for rDNA http://www4.od.nih.gov/oba/rac/guidelines/guidelin es.html University of Wisconsin http://www2.fpm.wisc.edu/safety
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Referncias
Alguns slides dessa apresentao so de autoria do Prof. Dr. Bryan Strauss (INCOR) e dos Professores Mario e Rosrio Hirata (FCF) NR-32: Norma Regulamentadora 32 Resoluo CONAMA 283 (2001) Resoluo RDC n. 33, de 25 de fevereiro de 2003 At the Bench, Kathy Barker, CSHL Press At the Helm, Kathy Barker, CSHL Press Lab Math, Dany Spencer Adams, CSHL Press.html
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03/08/2011 STRES - IQUSP

Nvel de segurana em laboratrios

Classificao de microorganismos infectantes

Nvel de Biossegurana 1 barreiras primrias

Nvel de Biossegurana 1 barreiras secundrias

Nvel de Biossegurana 2 barreiras primrias

Nvel de Biossegurana 2 barreiras secundrias

Nvel de Biossegurana 3 barreiras primrias

Nvel de Biossegurana 3 barreiras secundrias

Nvel de Biossegurana 4 barreiras primrias

Nvel de Biossegurana 4 barreiras secundrias

Rosario Hirata FCF/USP

Descarte de material biolgico

Descarte de material biolgico

Descarte de material biolgico

Descarte de material biolgico

Descarte de material biolgico

Descarte de material biolgico

Descarte de material biolgico

Descarte de material biolgico

Descarte de material biolgico

Descarte de material biolgico

Descarte de material biolgico

Descarte de material biolgico

Descarte de material biolgico

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