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DESENVOLVIMENTO DE COSMECUTICOS A PARTIR DE EXTRATOS ANTIBACTERIANOS DE PINHO MANSO (Jatropha curcas L.)
Mauro Jos Couto Bintencourt1 Eduardo Muniz Santana Bastos2 Vitor Hugo Moreau3 Astria Dias Ferro Gonzales4 Resumo: Os cosmecuticos representam uma alternativa barata e eficaz para o tratamento das infeces de pele e vem sendo prescritos, cada vez mais, por dermatologistas tanto para embelezamento como para tratamento das dermatites. O pinho manso (Jatropha curcas L) da famlia Euforbicea apresenta grande diversidade de uso, principalmente com potencial oleaginosa para produo de biodiesel e na medicina popular como antiinflamatrio, repelente, cicatrizante, coagulante sanguneo e tratamento de feridas na pele. O presente trabalho teve como objetivo produzir extratos ativos das folhas do pinho manso, testar sua atividade antibacteriana contra bactrias dermopatgenos e veicular formas cosmecuticas (pomada, creme, gel e sabonete) contendo o extrato da planta. Observou-se atividade antibacteriana para microrganismos do gnero Staphylococcus. As formas cosmecuticas foram desenvolvidas com sucesso. Desta forma pretende-se contribuir com a viabilizao econmica do uso da Jatropha curcas L. como oleaginosa para produo de biodiesel, de acordo com o Programa Nacional de Produo e Uso de Biodiesel (PNPB) do Governo Federal que busca encontrar oleaginosas com as condies tcnicas e econmicas que justifique seu uso para este fim. O pinho manso se apresenta como uma boa alternativa dentro deste contexto desde que produtos com alto valor agregado sejam obtidos a partir da sua biomassa para viabilizar o plantio em escala industrial, assim como dentro do Programa de Agricultura Familiar. Palavras-chave: Cosmecuticos; Pinho Manso;Infeco de Pele. Abstract: The cosmeceuticals represent a cheap and effective alternative for the treatment of skin infections and it has being prescribed and increased by dermatologists for beauty as well as treatment of dermatitis. Jatropha (Jatropha curcas L) Euphorbia family has a great diversity to use, especially with a potential oilseed crop for biodiesel production and in popular medicine as antiMestrando em Bioenergia pela Faculdade de Tecnologia e Cincias (FTC). Farmacutico pela Universidade Federal da Bahia (UFBA). Professor da Faculdade de Tecnologia e Cincias (FTC). E-mail: mbitencourt.ftc@gmail.com 2 Farmacutico pela Faculdade de Tecnologia e Cincias (FTC). E-mail:eduardomunizm@hotmail.com 3 Doutor em Qumica Biolgica pela Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ). Professor. Adjunto da Universidade Federal da Bahia (UFBA) e Professor Titular da Faculdade de Tecnologia e Cincias (FTC). E-mail: vhmoreau@pq.cnpq.br 4 Doutora em Qumica Biolgica pela Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ). Professora Titular da Faculdade de Tecnologia e Cincias (FTC). Gerente de Ps-graduao e Pesquisa da Rede FTC. E-mail: astriadfg@yahoo.com.br
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Dilogos & Cincia Revista da Faculdade de Tecnologia e Cincias Rede de Ensino FTC. ISSN 1678-0493, Ano 9, n. 27, set. 2011. www.ftc.br/dialogos
inflammatory, insect repellent, wound healing, blood clotting and wound healing in the skin. This objective of this study is to produce active extracts from the leaves of Jatropha curcas, to test its antibacterial activity against bacteria skin pathogens cosmeceuticals and vehicular forms (ointment, cream, gel and soap) containing the plant extract. It was observed the antibacterial activity for microorganisms of the genus Staphylococcus. The cosmeceuticals forms were successful developed. Thus it is intended to contribute to the economic feasibility of the use of Jatropha curcas L. as oilseed for biodiesel production, according to Programa Nacional de Produo e Uso de Biodiesel (PNPB) of Federal Government that seeks to find oil with the technical and economic conditions to justify its use for this purpose. Jatropha is presented as a good alternative since high added value products are obtained from its biomass in order to enable planting on an industrial scale, as well as in the Program of Family Farming. Key-words: Cosmeceutical, Jatropha, Skin Infection. 1 Introduo 1.1 Cosmecuticos A pele considerada o maior rgo do corpo e protege o meio interno do meio externo, apresentando mltiplas funes como a proteo contra agentes fsicos, qumicos e biolgicos do ambiente (KESSEL, 2001). Entretanto, este tegumento pode sofrer agresses diversas incluindo infeces bacterianas. Produtos com atividade dermatolgica que apresentam benefcios sade humana embora no sejam considerados medicinais so chamados cosmecuticos ou dermocosmticos. O termo cosmecutico foi criado h mais de trinta anos por Albert M. Kligman para designar uma classe de produtos tpicos situados, segundo seu mecanismo de ao, entre os cosmticos e os produtos farmacuticos (medicamentos). Segundo Kligman (1997), o cosmecutico faz mais pela pele que um cosmtico, mas tem um efeito menor que o de um medicamento. Estes produtos, no entanto, so embasados em atributos funcionais mensurveis pois suas frmulas contm compostos bioativos (KLIGMAN, 2002). Os dermatologistas orientam sobre os cuidados com a pele e buscam, cada vez mais, a prescrio de cosmecuticos como aliados no tratamento dos agravos a este rgo. Os cosmecuticos podem promover diminuio de rugas, desaparecimento de manchas, minimizao de cicatrizes, entre outros benefcios que, alm de estticos, garantem a integridade de um dos rgos mais importantes do nosso corpo, a pele (DRAELOS, 2005). 1.2 Formas Cosmecuticas A cosmecutica traz muitos termos da cosmtica e da farmcia para denominar seus produtos e se apoia nas formas farmacuticas para a elaborao e incorporao dos princpios ativos, muitas vezes, derivados de fitoterpicos. Forma farmacutica uma denominao utilizada __________________________________________________________________________
para descrever o conjunto das principais caractersticas fsicas e qumicas do medicamento, cosmtico ou cosmecutico relacionadas com sua aparncia e outros aspectos ligados liberao do princpio ativo. Esta pode ser gasosa, lquida, slida ou pastosa (semi-slida) (GOODMAN e GILMAN, 2006). A apresentao de formas cosmecuticas pode ser encontrada em creme, pomada, gel e sabonete e seu uso vai depender do local de aplicao, do tipo de pele e da ao esperada pelo produto (SILVA, 2006; LOYD, 2007). 1.3 Programa Nacional de Produo e Uso de Biodiesel (PNPB). O biodiesel um combustvel produzido a partir de leos vegetais ou gordura animal para uso em motores a diesel, puro ou misturado ao diesel derivado do petrleo. O Governo Federal vem investido esforos para viabilizar a produo de biodiesel como uma alternativa renovvel ao diesel de petrleo. Entre as diversas vantagens do uso do biodiesel est a diminuio da emisso de carbono e composto de enxofre na atmosfera, alm de ser uma fonte renovvel de energia. No Brasil, o Programa Nacional de Produo e Uso de Biodiesel (PNPB), opera com a adio obrigatria de 5 % de biodiesel ao diesel de petrleo desde 2009 (BRASIL, 2009). A obteno de biodiesel se d a partir de reaes de transesterificao de um leo (animal ou vegetal) com um lcool, geralmente metanol ou etanol em presena de um catalisador (IBICT, 2009). O fato da maior parte da produo de leo vegetal estar relacionada com o setor de alimentos para consumo humano apontado como um problema da produo de biodiesel no mundo, podendo gerar uma competio entre a produo de combustveis e alimentos, elevando os preos deste ltimo. O Brasil o 2 maior produtor mundial de soja (IBGE, 2010). Desta forma, a distribuio de matria prima para produo de biodiesel no pas est representada por 81,3 % a partir de leo de soja, 16,1 % de gordura bovina (sebo de boi) e apenas 2,6 % de outras matrias primas (ANP, 2009). 1.4 Pinho Manso (Jatropha curcas L.) Um dos maiores entraves para o desenvolvimento do PNPB a obteno de matria-prima para produo de biodiesel (plantas oleaginosas). Este deve atender a todas as caractersticas desejadas que tornem esse produto economicamente vivel e social e ambientalmente adequado. Outro desafio est relacionado com o aproveitamento da biomassa residual da produo de oleaginosas. Portanto, descobrir fontes oleaginosas que tenham alta produo, baixo custo e tecnologia de manejo, se tornou um dos pontos fundamentais do Programa. __________________________________________________________________________
Dentro dessa perspectiva, o pinho manso (Jatropha curcas L.) se mostra uma candidata promissora para a produo de leo aplicado a biodiesel, principalmente em cultivares familiares de pequeno e mdio porte (OPENSHAW, 2000). uma planta nativa no Pas, encontrada em locais de baixa pluviosidade e em solos pouco ricos do ponto de vista agronmico, tendo-se assim se tornado uma excelente candidato para sua utilizao na produo de biodiesel (SHAH, 2004). O uso da biomassa residual de pinho-manso para obteno de produtos de alto valor agregado configura uma ferramenta importante para o aumento da viabilidade econmica do uso do de pinho manso como matria-prima para produo do biodiesel. Assim, preciso encontrar uso adequado para os resduos (folhas, caule, cascas e torta) gerados a partir da extrao do leo. O aproveitamento desta biomassa na elaborao de coprodutos de alto valor agregado fundamental para tornar vivel a produo de pinho manso, principalmente em sistemas de agricultura familiar (OLIVEIRA, 2009). No presente trabalho demonstramos uma alternativa para o aproveitamento de biomassa (partes area da planta) residual de pinho manso na produo de produtos de alto valor agregado, como cosmecuticos. Agregar ainda, valor cadeia produtiva e viabilizar a produo de pinho-manso, principalmente para agricultura familiar e para produo de biodiesel, de forma que, sua produo se torne vivel economicamente sendo incorporado ao PNPB. 2 Metodologia 2.1 Material e Mtodos Folhas de Jatropha curcas foram coletadas no municpio de Mutupe, localizado no sudoeste da Bahia, zona fisiogrfica do recncavo, regio do Vale Jiquiri a 235 km de Salvador. A coleta teve o apio e orientao tcnica do pessoal da Comisso Executiva do Plano da Lavoura Cacaueira (CEPLAC). Logo aps a coleta, o material foi secado temperatura ambiente em local arejado. Aps a secagem foi colocado em estufa a 40 C, por 24 horas e posteriormente triturado em moinho eltrico de ps (MARCONI, mod. MA 340). 2.2 Obteno do Extrato O material vegetal que foi seco em estufa de circulao de ar com temperatura constante de 40 C. A massa inicial seca de 1500 g de folhas secas do vegetal (Jatropha curcas L.) foi triturada utilizando-se multiprocessador. 600 g de droga vegetal reduzida foram transferidas para um erlenmeyer de 2 L e uma soluo hidroalcolica (Metanol 96,4 %) foi adicionada, iniciando-se o processo de macerao. O sobrenadante foi filtrado a cada 3 (trs) dias utilizando__________________________________________________________________________
se papel de filtro (Whatman). O filtrado foi submetido a evaporador rotatrio (40 C e 90 rpm) com presso reduzida e obteve-se um extrato viscoso. O material obtido foi seco em estufa, a temperatura de 45 C, gerando uma pasta de colorao esverdeada. Todos os procedimentos foram realizados no escuro para se evitar a fotodegradao dos princpios ativos. 2.2.1 Obteno do extrato hexnico O extrato metanlico concentrado foi solubilizado em 300 mL da mistura metanol/H2O (270:30) e transferido para um funil de separao. 300 mL de hexano foram adicionados e o funil foi agitado para particionar os compostos solveis em hexano. A frao hexnica foi separada por decantao e concentrado em evaporador rotatrio (40 C e 90 rpm). Esse processo foi repetido trs vezes e ao final, o extrato concentrado de Jatropha curcas L. em hexano das trs decantaes foi reunido em uma nica amostra. 2.3 Atividade Antimicrobiana do Extrato de Pinho manso (Jatropha curcas L) Na realizao dos ensaios de atividade antimicrobiana do extrato das folhas da Jatropha curcas L., cinco espcies de bactrias Gram-positivas com potencial de infeco da pele humana foram utilizadas: Staphylococcus aureus (C1); Staphylococcus saprophyticus (C2); Staphylococcus epidermidis (C3); Corynebacterium spp (C4) e Micrococcus spp (C5). Para avaliar a atividade antibacteriana do extrato de pinho manso testes de sensibilidade antimicrobiana in vitro, foi utilizada tcnica de difuso em Agar Mueller Hinton tcnica do disco (BAUER et al., 1966). Discos de papel de filtro com 6 mm de dimetro foram esterilizados em autoclave com temperatura de 121 C por 20 min e adicionados do extrato de pinho manso diludos em metanol. Os discos foram, ento, secos em estufa a 40 oC para evaporao do metanol. Diferentes concentraes de extrato foram utilizadas para todos os microrganismos testados. As massas finais de extrato utilizadas em cada disco foram 2,8 g, 5,5 g, 8,3 g e 11 g. Discos contendo antibitico de referncia (Vancomicina, 30 g) e contendo metanol foram utilizados como controle positivo e negativo, respectivamente. Placas de Petri foram repicadas com os micro-organismos em camada uniforme utilizando alas de Drigalski. Os discos foram postos sobre o agar e as placas incubadas em estufa a 37 oC por 48 h. Aps o crescimento bacteriano, as placas foram fotografadas e os halos de inibio medidos com ajuda do software GIMP (www.gimp.org). As atividades antimicrobianas foram determinadas com base no dimetro dos halos de inibio. Medidas de concentrao inibitria mnima (CIM) foram realizadas com os micro-organismos que apresentaram __________________________________________________________________________
sensibilidade aos extratos pelo ensaio de diluio seriada em caldo, utilizando as normas padronizadas pelo National Comitee for 15 Clinical Laboratory Standards.
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2.4 Preparaes Cosmecuticas 2.4.1 Pomada, Creme, Gel e Sabonete Preparao cosmecuticas na forma de pomada, creme e gel, foram produzidas utilizando-se vaselina branca como base (base de hidrocarbonetos), emulso leo-em-gua e gel base, respectivamente. 0,1 g de extrato de pinho manso foram incorporados em 99,90 g de vaselina branca purificada, base de creme lanete ou base de carboximetilcelulose, utilizando boas prticas de manipulao farmacotcnica. A incorporao foi feita em grau de porcelana usando esptula de PVC. Para a preparao na forma de sabonete, usou-se 99,90 g de base slida neutra para sabonete contendo glicerina purificada, como excipiente para incorporar e 0,1 g do extrato de pinho manso. Desta forma, obteve-se as formas cosmecuticas citadas 0,1 % (1 mg/g) em peso do extrato de pinho manso. 3 Resultados 3.1 Atividade Antimicrobiana O extrato alcolico de J. curcas apresentou formao de halo circundante ao disco para todas as espcies de Staphylococcus testadas, demonstrando a inibio do crescimento bacteriano. A Figura 1 mostra o perfil tpico observado para a inibio de crescimento dos microorganismos sensveis. A frao hexnica do extrato no demonstrou atividade aprecivel contra nenhuma das espcies testadas (dados no mostrados).
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Figura 1: representao tpica da atividade antibacteriana utilizando a tcnica de Disco em Meio Slido como anlise semi-quantitativa.
A Figura 1 mostra a inibio do crescimento bacteriano no disco da vancomicina (Van 30) e a inibio crescente acompanhando o aumento da quantidade de extratos nos discos de teste. No houve inibio aprecivel no disco controle (X), mostrando que a inibio observada no pode ser atribuida ao metanol residual nos discos. Nos discos contendo os extratos de Jatropha curcas L. (discos de 1 a 4) verifica-se claramente a inibio do crescimento bacteriano com a formao de halo em volta dos discos impregnados. A Tabela 1 mostra os valores aferidos para os dimetros dos halos de inibio para cada microorganismo testado em diferentes quantidades de extrato.
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Tabela 1. Dimetro dos halos de inibio aferidos para cada microorganismo testado em diferentes quantidades de extrato em mm. Bactrias Van 30g 11 g C1 C2 C3 C4 C5 7,38 8,24 7,30 8,43 7,43 2,32 1,52 1,98 ** ** Massa do extrato da J. curcas (*) 8,3 g 1,93 1,89 1,44 ** ** 5,5 g 1,68 1,52 1,29 ** ** 2,8 g 1,59 1,18 1,22 ** **
Staphylococcus aureus (C1), Staphylococcus saprophyticus (C2), Staphylococcus epidermidis (C3), Corynebacterium spp (C4) e Micrococcus spp (C5). Controle positivo: Vancomicina 30 g; (*) Mdia de trs ensaios; (**) no formou halo. O controle negativo (metanol) no apresentou atividade antimicrobiana frente a nenhum microorganismo testado e o controle positivo, a vancomicina, um antibitico muito usado em ambiente hospitalar, apresentou inibio dos microorganismos testados conforme esperado. Os resultados retrataram a susceptibilidade das cepas de Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus e Staphylococcus epidermidis ao extrato de forma dose-dependente (Tabela 1), no entanto, no apresentou atividade contra as bactrias Corynebacterium spp e Micrococcus spp em nenhuma das concentraes testadas. A Tabela 2 mostra estes mesmos resultados corrigidos para as quantidades de extrato usadas em cada disco, em mm/g. Neste caso, pode-se avaliar a atividade relativa do extrato de pinho manso frente a Vancomicina (controle positivo).
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Tabela 2. Atividade antimicrobiana do extrato pelo mtodo da difuso em Agar pela tcnica do disco. Resultados em mm/g. Massa do extrato da J. curcas (*) Bactrias C1 C2 C3 C4 C5 Van 30g 14,02 15,66 13,87 16,02 14,12 11 g 12,00 7,89 10,25 ** ** 8,3 g 13,23 12,93 9,87 ** ** 5,5 g 17,42 15,78 13,34 ** ** 2,8 g 32,54 24,14 24,78 ** **
Staphylococcus aureus (C1), Staphylococcus saprophyticus (C2), Staphylococcus epidermidis (C3), Corynebacterium spp (C4) e Micrococcus spp (C5). Controle positivo: Vancomicina 30 g; (*) Mdia de trs ensaios; (**) no formou halo. Os resultados apresentados em mm/g demonstram a atividade antimicrobiana do extrato de pinho manso dentro da mesma ordem de grandeza da Vancomicina. 3.2 Preparaes Farmacuticas As preparaes das formas cosmecuticas, pomada, creme, gel e sabonete, foram manipuladas e a incorporao do extrato de pinho manso s bases de pomada, creme, gel e sabonete ocorreu sem dificuldades. O extrato foi veiculado com boa distribuio e fcil homogeneidade. Ao final do processo os produtos cosmecuticos apresentaram boa consistncia correspondente a cada apresentao, colorao esverdeada, tpica do extrato de Jatropha curcas e aspecto atrativo como pode ser observado na Figura 2.
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(A) Pomada de Jatropha curcas L.
(B) Creme de Jatropha curcas L.
(C) Gel de Jatropha curcas L.
(D) Sabonete de Jatropha curcas L.
Figura 2: pomada (A), creme (B), gel (C) e sabonete (D) de pinho manso (Jatropha curcas L.) a 0,1 % em peso. 4 Discusso A resistncia bacteriana um problema de sade pblica (GOODMAN e GILMAN, 2006). A cultura da populao em se automedicar com antibiticos, aliado a outros fatores, proporcionou a alguns microorganismos a capacidade em desenvolverem resistncia a grande nmero de medicamentos antimicrobianos. A pesquisa por compostos provenientes de fonte renovvel de fcil acesso e baixo custo, capazes de inibir a proliferao de microrganismos patognicos faz-se necessrio para conter uma possvel endemia causada por cepas patognicas resistentes aos atuais antimicrobianos disponveis. Conclui-se, atravs da avaliao antimicrobiana do extrato da folha da Jatropha curcas L., que o referido extrato apresenta atividade antibacteriana contra bactrias do gnero __________________________________________________________________________
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Staphylococcus. A atividade apresentada pelo extrato bruto foi demonstrado em ser da mesma ordem de grandeza de concentrao da vancomicina (Tabela 2). Mesmo este resultado sendo obtido por ensaio semi-quantitativo, acreditamos que o princpio ativo purificado deva apresentar atividade antibacteriana bastante superior ao deste antibitico, demonstrando o potencial efeito deste fitoterpico, se utilizado puro. O extrato antibacteriano de pinho manso constitui uma perspectiva para obteno de antibitico natural por apresentar evidente atividade antimicrobiana frente a microorganismos Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus e Staphylococcus epidermidis. O pinho manso tem se mostrado uma potencial fonte importante de leo para a indstria bioenergtica. Diante desta descoberta, existe a possibilidade de uso da biomassa do pinho manso na elaborao de produtos de alto valor agregado, como cosmecuticos, viabilizando economicamente o plantio da Jotropha curcas L. para atender o Programa Nacional de Produo e Uso de Biodiesel (PNPB) do Governo Federal, principalmente no que diz respeito ao Programa de Agricultura Familiar. Frente ao carter indito dos resultados obtidos com este trabalho e ao potencial de mercado de produtos cosmecuticos baseados no extrato de Jatropha curcas uma Patente de Inveno abrangendo COMPOSIES FARMACUTICAS COM ATIVIDADE ANTIBACTERIANA CONTENDO EXTRATOS DE Jatropha curcas, PROCESSO DE OBTENO DOS EXTRATOS DE Jatropha curcas E SEUS USOS foi requerida junto ao Instituto Nacional de Propriedade Industrial (INPI).
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(A) Pomada de Jatropha curcas L.

(B) Creme de Jatropha curcas L.

(C) Gel de Jatropha curcas L.

(D) Sabonete de Jatropha curcas L.

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