CRESCIMENTO MICROBIANO

em suspenso em meio lquido

Fases da diviso celular fisso binria (p.ex. E.coli)
Microscopia de
contraste de fase
Microscopia de fluorescncia
(colorao do nucleide
com DAPI)
Deteco das protenas que
formam o anel FtsZ)
- Anel proteico (~10000 molculas FtsZ) no centro da clula, quando comea a
segregao dos dois nucleides (DNA). Fts Filamentous temperature sensitive
- Proteinas Fts do anel proteico divisoma (no centro da clula em diviso; orquestra sntese da
membrana plasmtica e da parede celular durante enlongamento da clula, seguindo-se constrio
para formar o septo e separao das clulas).
(combinao de coloraes
nucleide e anel FtsZ)
Fase C
Ciclo celular
(ex. Eschericia coli)
Fase D
E. coli
Tempo de gerao mdio, em condies ptimas
~ 25 minutos
EXPERINCIA DE CRESCIMENTO DE UMA
POPULAO MICROBIANA EM SUSPENSO EM MEIO LIQUIDO
A
B
1. INOCULAO
2. INCUBAO COM AGITAO
ORBITAL CONSTANTE E
TEMPERATURA CONTROLADA
3. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE CLULAS, AO LONGO DO TEMPO
CRESCIMENTO EXPONENCIAL
Escherichia coli tempo de duplicao ~ 25 minutos
Imagine que arranja uma forma de manter uma populao de clulas de E. coli em
crescimento exponencial durante 24 horas. Se partir de uma nica clula, estime
quantas clulas obteria aps esse perodo de 24 horas.
24 horas 57 duplicaes
= 140.737.488.400.000.000 clulas
(~1,4 x 10
17
)
~ 144 Kg de biomassa
1 clula
(10
-12
gramas)
(http://www.e-escola.utl.pt)
Evoluo da concentrao de clulas da populao microbiana
[clulas] 1 2
1
2
2
2
n
(aps n geraes)
CRESCIMENTO
EXPONENCIAL
[clulas] N
0
N
0
. 2
1
N
0
.2
2
N
0
.2
n
(aps n geraes)
Concentrao de clulas no incio da
fase de crescimento exponencial
Concentrao de clulas aps
um periodo de tempo t de
crescimento exponencial - N
t
.
n
=
log N
t
- log N
0
log 2
n - n de geraes ocorridas durante o
perodo t de crescimento exponencial
N
t
= N
0
.2
n

g = t / n g o tempo de duplicao (ou, de gerao) (min ou h)

Representao grfica do crescimento exponencial
Escala logaritmica
t
0
N
0
Fase
exponencial
g
N
,
Cintica do crescimento exponencial
Crescimento exponencial equilibrado
clulas completamente adaptadas s
condies de crescimento
N pode representar:
- Concentrao de clulas, N;
- Densidade ptica da cultura, DO;
- concentrao de biomassa, X,
- concentrao de qualquer componente celular
(p.ex. proteinas)
dN
t
= .N
t
dt
Representao matemtica (fase exponencial)
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, th edition,Mc GrawHill, 2002
N
t
= N
0
e
(t-t
0
)
lnN
t
= lnN
0
+ (t-t
0
)
(1)
Equivalente a
Ou
-taxa especfica
de crescimento da
populao microbiana
(t-t
0
) = g quando N
t
= 2.N
0
Substituindo na equao (1)
g =
ln 2

(h; min)
- taxa especfica de crescimento da populao
microbiana (o valor de corresponde ao declive
da recta lnN
t
vs. (t-t
0
))
Unidades :
tempo
-1
(h
-1
; min
-1
)
ln N
t
= lnN
0
+ (t-t
0
)
(1)
A equao que representa o crescimento exponencial de uma populao microbiana
corresponde equao de uma recta ( onde y = lnN
t
, x = (t-t
0
))
y = b + ax
b ordenada na origem (= ln N
0
)
a - declive (= )
Estimativa da taxa especfica de crescimento da populao,
Estimativa do tempo de duplicao da populao, g
Contagem de clulas viveis (N)
- Mtodo das diluies sucessivas e espalhamento
em meio slido
Mtodo espectrofotomtrico (DO)
Determinao da massa celular (biomassa, X)
Contagem directa de clulas
Cmaras de contagem (microscpio ptico)
Contadores electrnicos
OBTENO DA CURVA DE CRESCIMENTO DA POPULAO MICROBIANA
MTODOS PARA AVALIAR A
CONCENTRAO DE CLULAS NUMA POPULAO MICROBIANA
CONTAGEM DE CLULAS VIVEIS
[expresso em UFC (Unidades Formadoras de Colnias) por ml de suspenso]
N = 1.59 x 10
5
UFC / ml
Mtodo das diluies sucessivas e
espalhamento em meio slido
As placas devem ter entre
~ 20 e 300 colnias
DETERMINAO ESPECTROFOTOMTRICA DA DENSIDADE CELULAR
(Densidade Optica DO

- medida a um comprimento de onda, , particular)

Prescott, Harley & Klein, Microbiology,
th edition,Mc GrawHill, 2002
DO= Abs
= - log T/100
= log (I
0
/I)
I
0
I
0
I
I
I
0
intensidade de luz incidente
( particular)
I intensidade de luz transmitida
atravs da suspenso de clulas
Transmitncia (T) = (I/I
o
) x 100 (%)

D
O
6
4
0
n
m
0
Concentrao de clulas
Terico
Medido
Medies no
espectrofotmetro
BIOMASSA - representado normalmente por X
Estimativa da biomassa seca (peso seco)
- Pesagem da massa de clulas presentes na cultura microbiana.
- Peso seco ou hmido
- usado em circunstncias especficas, como, por exemplo
quando se pretende obter o rendimento em biomassa do crescimento.
Em certas condies, o aumento da massa
pode no reflectir crescimento da populao, mas
aumento de compostos de reserva
Cmara de contagem
Figure 6.5
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, th edition,Mc GrawHill, 2002
Observao no
Microscpio
ptico
Lmina de vidro especial, onde
est marcado um reticulado com
dimenses conhecidas; tambm
conhecida a distncia da lmina
lamela, sendo possvel estimar o
volume de suspenso de clulas
sobre o reticulado.
Fcil, barato e rpido.
til para contar clulas de
eucariotas e procariotas.
No distingue clulas viveis de
mortas.
CURVA DE CRESCIMENTO DUMA POPULAO MICROBIANA
EM DESCONTNUO (BATCH)
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, th edition,Mc GrawHill, 2002
Fase de latncia
Fase exponencial
L
o
g

O
p
t
i
c
a
l

D
e
n
s
i
t
y

(
O
D
.

-
-
-
)
Fase de morte
Fase estacionria
Cultura batch sistema fechado (excepto troca de gases)
Exemplo clculo da taxa especfica de crescimento
Variao da concentrao de clulas duma populao bacteriana
(incubao em meio de cultura lquido, a 37C)
Tempo (h) N (clulas / mL)
0 1.0 x 10
4
0.5 1.0 x 10
4
1 1.5 x 10
4
2 3.0 x 10
4
2.5 3.6 x 10
4
3 4.9 x 10
4
4 5.0 x 10
4
Estimativa da taxa especfica de crescimento da populao,
ln (3.0 x 10
4
) - ln (1.5 x 10
4
)
ln N
2
ln N
1
(2-1)
=
=
= 0.7 h
-1
(Anlise de regresso linear: ln N
t
vs. t declive = 0.7 = 0.7 h
-1
)
Latencia
Exponencial
Estacionria
Declive: 0,7
0 1 2 3 4
Tempo (h)
x

1
0
4

N
(
E
s
c
a
l
a

l
o
g
a
r
i
t
m
i
c
a
)

Populao duplica
em 1h
Estimativa do tempo de duplicao, g
g = ln2 / = ln2 / 0.7 = 1 h
1
2
3
4
5
Valores de g e de dependem de:
- potencial gentico da estirpe microbiana.
- composio do meio de cultura;
- condies ambientais (Temperatura, pH,
disponibilidade de gua, nvel de oxignio, etc.)
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, th edition,Mc GrawHill, 2002
Crescimento
diuxico
Consumo de glucose
Consumo de lactose
Glucose
esgotada
l
n

[

C

l
u
l
a
s

v
i

v
e
i
s
]
Tempo
Glucose rapidamente metabolizada;
Represso da expresso do opero da lactose
(Fenmeno: Represso Catablica)
Exemplo:
Crescimento de populao de Escherichia coli
em meio de cultura com duas fontes de C e energia,
glucose e lactose.
lactose glucose + galactose
-galactosidade
INFLUNCIA DA CONCENTRAO DE
NUTRIENTE LIMITANTE
NO CRESCIMENTO MICROBIANO
5
4
3
2
1
0 1 2 3 4
Tempo (h)
[
B
i
o
m
a
s
s
a
]
X
(
m
g
/
L
)

[
N
u
t
r
i
e
n
t
e
]
,

S

(
-
-
-
)
30
15
0
A cheio (vermelho) - Curva de crescimento expressa em termos de evoluo da concentrao total
de biomassa formada (escala logaritmica) em funo do tempo.
A tracejado (azul) Evoluo da concentrao do nutriente S ao longo do tempo de crescimento.
The relationship between concentration of limiting nutrient,
growth rate (green curve) and growth yield (red curve)
in a batch culture (closed system).
At low nutrient concentrations both growth rate and growth yield are affected.
A taxa especfica de crescimento, , depende da
concentrao de nutriente limitante (S) fornecida no meio de cultura
, S

max

max
2
K
s
Concentrao
saturante de S
EQUAO DE MONOD
=

max
S
K
s
+ S
Situao raramente encontrada nos
ambientes naturais, onde um ou mais nutrientes
esto normalmente presentes em concentraes
limitantes ( <
max
)

max
- Taxa especfica mxima de crescimento
- quando concentrao de S saturante;
sistemas de transporte transmembranar
para o nutriente S esto saturados
Constante de semi-saturao
- numericamente igual concentrao de substrato
que permite uma taxa de crescimento igual a
metade da
max
;
reflecte a afinidade dos sistemas de transporte
transmembranar para a molcula do nutriente
limitante (maior K
s
menor afinidade menor )
Os valores das constantes
max
e K
S
dependem:
- das caracteristicas intrnsecas do microrganismo;
- do substrato limitante;
- das condies ambientais (ex. Temperatura, pH, etc.)
K
S
Microrganismo Temperatura Nutriente limitante
max
(h
-1
) K
s
(mg/L)
Escherichia coli 37C Glucose 0.8-1.4 2-4
Escherichia coli 37C Glicerol 0.9 2
Escherichia coli 37C Lactose 0.8 20
Saccharomyces cerevisiae 30C Glucose 0.5 25
Candida tropicalis 30C Glucose 0.5-0.6 50-75
- Competio entre diferentes microorganismos (p.ex. S. cerevisiae e C. tropicalis)
, S
- Y reflecte a eficincia do crescimento microbiano relativamente ao nutriente (substrato) limitante
usado para crescimento
(fins comerciais / custos de produo)
Rendimento
do crescimento, Y =
Biomassa total formada (fase estacionria)
Massa de nutriente usada
=
X
S
Inibio pelo substrato
FACTOR DE RENDIMENTO EM ATP (Y
ATP
) =
Biomassa produzida (g)
ATP produzido (moles)
Medida da eficincia com que a clula utiliza para crescimento (i.e. biossntese de novo
de biomassa) a energia que produz.
Conceito de ENERGIA DE MANUTENO
Exemplo:
S fonte de C e energia, fermentiscvel (p.ex. glucose)
S
BIOSSNTESE DE MATERIAL CELULAR (CRESCIMENTO)
ENERGIA ( ATP)
Energia de MANUTENO (desvio)
(Ex. Gastos em renovao de macromolculas (protenas, RNA),
expulso activa de metabolitos txicos, manuteno de gradientes
electroqumicos de ies e do pH intracelular em nveis ptimos, etc.
Para uma dada estirpe microbiana, o valor Y
ATP
depende das condies ambientais.
Quanto mais afastadas das condies ptimas, maiores so os gastos de energia para manuteno:
Y
ATP
verifica-se que Y
ATP
real < Y
ATP
terico
(i.e., admitindo que
todo o ATP sintetizado
usado para
biossntese)
Prescott, Harley & Klein, Microbiology,
th edition,Mc GrawHill, 2002
Esquema de bioreactor (ou fermentador)
industrial para microrganismo aerbio
(Note os sistemas para medio e controlo de
temperatura, pH, nivel de oxignio e
para anlise de metabolitos biosensor unit)
Scale-up na produo industrial de microrganismos
(exemplo- produo de clulas da levedura Saccharomyces cerevisiae)
TIPOS E EXEMPLOS DE
PRODUTOS DE ORIGEM
MICROBIANA
Metabolitos primrios vs. secundrios
Metabolito primrio
associado ao metabolismo
essencial do microrganismo
(Ex. etanol, produzido em resultado
da fermentao alcolica)
Tempo
C
o
n
c
e
n
t
r
a

o

d
e

c

l
u
l
a
s

o
u
m
a
s
s
a

c
e
l
u
l
a
r

C
o
n
c
e
n
t
r
a

o

d
e

p
r
o
d
u
t
o

f
o
r
m
a
d
o
Crescimento
Crescimento
Formao de
metabolito primrio
Formao de
metabolito secundrio
(







)
(







)
Metabolito secundrio
aps a fase de produo das
clulas (aps o crescimento exponencial),
normalmente a partir de um metabolito
primrio ou de substrato usado para
crescimento que esteja em excesso
Ex. antibiticos produzidos
por fungos miceliais ou por
bactrias)
CULTURA CONTNUA DE
MICRORGANISMOS NO QUIMIOSTATO
QUIMIOSTATO opera por fornecimento do nutriente limitante do crescimento a uma taxa constante
(relacionada com o caudal de entrada do meio de cultura fresco), de modo que a densidade celular
(biomassa) e a taxa especfica de crescimento do microrganismo se ajustam a este fornecimento.
X, S, F
Esquema de
funcionamento
de um bioreactor para a
cultura contnua de
microrganismos
(exemplo - quimiostato)
S
0
, F
Caudal de alimentao do meio fresco = caudal de sada da cultura = F (Litros/hora)
Volume da cultura no quimiostato = V = constante (L)
F
D taxa de diluio = (h
-1
) (inverso do tempo de reteno mdio da clula
V no interior do quimiostato)
O quimiostato permite manter a populao microbiana em crescimento
equilibrado, isto , na fase de crescimento exponencial, durante
perodos de tempo longos i.e. em ESTADO ESTACIONRIO.
TAXA DE DILUIO
ESTADO ESTACIONRIO
Equao do estado estacionrio no quimiostato
Balano de massas massa celular, X
(no h morte celular;
no h entrada de clulas do exterior, X
0
=0))
S
0
, F
X, S, F
V = volume de cultura
no quimiostato (L)
X massa celular (g/L)
F caudal (L/h)
S concentrao de nutriente
Limitante (g/L)
taxa especfica de crescimento (h
-1
)
T tempo (h)
Massa celular
produzida
Variao da
massa celular
no quimiostato
= -
Massa celular
que sai no
efluente
dX
dt
= 0
Estado
estacionrio

-
F
V
.X
dX
dt
=
.X
.X
F
V
.X =
F
V

= = D
D taxa de diluio (h
-1
)
= D
Estado estacionrio (steady state) no quimiostato
Dependncia da concentrao de biomassa (X), da concentrao de nutriente limitante (S)
e do tempo de duplicao da populao microbiana no estado estacionrio, em funo da
taxa de diluio a que o quimiostato opera (D).
(S
0
)
(X)
(S)
(D)
Nota: alterao de F alterao da taxa de diluio, D
Exemplo: Volume cultura = 5000 mL; Caudal atravs do
quimiostato, F = 2500 mL/hora --- D = 0,5 h
-1
WASHOUT
(quando D D
c
D
c
taxa de diluio crtica)
Desvio ao modelo estabelecido para o quimiostato (X em funo de D):
Caso - limitao do crescimento pela fonte de C
Microrganismos quimiorganotrficos hetrotrficos (p.ex., nutriente limitante S fonte de Carbono e
de energia) uma parte significativa da energia produzida a partir de S desviada para gastos
energticos de manuteno (Energia de Manuteno).
Mensurvel quando a taxa de diluio a que o quimiostato opera muito baixa
(S
0
)
(X)
(S)
(D)
Vantagens/aplicaes do crescimento microbiano em contnuo no quimiostato
(versus crescimento descontnuo ou batch):
Produto com caractersticas constantes durante perodos de tempo longos
Populao microbiana na fase exponencial do crescimento durante perodos
longos (semanas, meses)
Culturas em crescimento exponencial com taxas especficas de crescimento diferentes
(atravs da (simples) modificao da taxa de diluio til para estudos fisiolgicos)
Maiores produtividades, e eliminao de tempos mortos
Vantagens na seleco de microrganismos que sejam mais competitivos
na utilizao do nutriente limitante
Vantagens no estabelecimento de culturas de enriquecimento para isolamento de
populaes microbianas especficas a partir de populaes mistas (por ex., amostras
ambientais)
A afirmao (ou no) de um dado microrganismo face a outro (p.ex., se a populao for mista), depende da
relao entre os coeficientes de Monod para os microrganismos em causa (depende em particular da constante de
semi-saturao para o substrato S, K
S
, que inversamente proporcional eficincia com que o microrganismo
utiliza o nutriente limitante).
Microrganismo A Microrganismo B
EXEMPLO
Quimiostato a
operar com D =
A

A
=

max A
S
K
sA
+ S
D =
Se K
SB
> K
SA

B
=

max B
S
K
sB
+ S

B
<
A

B
< D
S o microrganismo A permanece no quimiostato
B no permanece no quimiostato (i.e. sofre washout)
Se K
SB
< K
SA

B
>
A

B
> D
B permanece no quimiostato, juntamente com A

maxA
~
maxB
Em cultura contnua, um microrganismo invasor (p.ex. contaminante ou mutante vivel)
pode acumular no quimiostato, se for competitivo, isto , se utilizar o nutriente limitante
eficientemente face estirpe microbiana original contaminao da cultura original.
Mas, se no for competitivo, expulso do quimiostato.
NOTAS sobre crescimento microbiano
CRESCIMENTO MICROBIANO
O crescimento microbiano definido como o aumento coordenado de todos os constituintes celulares
(por exemplo, cidos nucleicos, protenas, lpidos ). Este aumento est normalmente associado ao aumento
do nmero de clulas em consequncia da multiplicao celular.
definido como o crescimento duma populao de clulas dum microrganismo, ou seja,
o aumento do nmero de clulas do microrganismo ao longo do tempo.
normalmente quantificado em termos do aumento no tempo de:
(i) n de clulas; (ii) densidade ptica da cultura; ou, (iii) massa celular (biomassa).
Em certas condies, o aumento da massa pode no reflectir crescimento da populao, mas
aumento de compostos de reserva (p.ex. glicognio, poli--hidroxibutirato, etc.)
Grande parte dos microrganismos multiplica-se por fisso binria (p.ex. maior parte das bactrias) ou
por gemulao (p.ex. maior parte das leveduras). Em consequncia do processo de multiplicao
celular, uma clula dar origem a duas ao fim de um certo perodo de tempo que designado por
tempo de gerao ou duplicao.
O conhecimento dos valores de (taxa especifica de crescimento) e de g (tempo de duplicao)
para um dado microrganismo permite:
- prever como evoluir a concentrao de clulas ao longo do tempo de incubao num determinado
meio de cultura e/ou em determinadas condies ambientais;
- testar o efeito de uma determinada alterao das condies ambientais sobre o
crescimento do microrganismo (p.ex. modificao do meio de cultura, da Temperatura, etc.)
OBJECTIVOS ESSENCIAIS:
seleccionar as condies de cultura ptimas para um dado microrganismo.
estabelecer mtodos que permitam controlar o crescimento de microrganismos.
O tempo de duplicao (ou gerao) pode repetir-se vrias vezes, enquanto estiverem disponveis no
meio de cultura nutrientes em quantidade suficiente para assegurarem os metabolismos
catablico (bioenergtico) e anablico (biossntese) das clulas e enquanto as condies ambientais
forem favorveis.
A durao do crescimento exponencial de bactrias em meio de cultura laboratorial
depende da bactria em causa e pode ficar limitada por falta de nutrientes, privao de
oxignio, acumulao de produtos txicos, ou outros factores.
Contadores electrnicos
(ex. Contador coulter, citmetro de fluxo)
So instrumentos usados para contar partculas em suspenso.
Possuem um pequeno orifcio onde estabelecida uma corrente elctrica
por recurso a 2 elctrodos.
Suspenso de clulas forada a passar pelo orifcio.
A passagem de cada partcula (clula, esporo, etc.) causa uma diminuio
momentnea da condutividade elctrica entre os elctrodos.
Os perodos de interrupo da corrente elctrica so contados,
sendo essa contagem uma medida do nmero de partculas presentes na
suspenso.
Fcil e rpido
No permite distinguir clulas viveis de mortas
til para microrganismos grandes, mas no para a maior parte das
bactrias
FASES DO CRESCIMENTO MICROBIANO EM DESCONTNUO
Fase de latencia
No ocorre aumento mensurvel do nmero de clulas. Fase de adaptao ao novo meio
(p.ex. sntese de novas enzimas) e a condies ambientais novas.
Durao da fase de latncia pode ser longa (vrias horas), quando esto presentes
compostos txicos, substratos dificeis de metabolizar ou o inculo insuficiente (n de
clulas viveis ou vitalidade das clulas insuficientes).
Fase exponencial
Crescimento da populao com taxa (velocidade) constante. Durante esta fase, em que
todos os nutrientes esto presentes em excesso, os microrganismo dividem-se e a
populao cresce com uma taxa especfica de crescimento mxima. O valor desta taxa
de crescimento depende do potencial gentico do microrganismo, da composio do
meio de cultura e das condies de crescimento (temperatura, pH, disponibilidade de
gua, etc.).
Fase estacionria
O crescimento da populao pra, devido a esgotamento de nutriente essencial
ou acumulao de metabolito txico. Parte das clulas podem permanecer viveis durante
algumas horas custa do consumo de materiais de reserva endgenos.
Algumas espcies bacterianas exibem, nesta fase de crescimento, a produo de endsporos.
Fase de morte
Perda irreversvel da capacidade de diviso celular; ocorre o decrscimo progressivo
no n de clulas viveis da populao.
Cultura batch sistema fechado (excepto troca de gases)
QUIMIOSTATO opera por fornecimento do nutriente limitante do crescimento a uma taxa constante
(relacionada com o caudal de entrada do meio de cultura fresco), de modo que a densidade celular
(biomassa) e a taxa especfica de crescimento do microrganismo se ajustam a este fornecimento.
Meio de cultura fresco (esterilizado) fornecido contnuamente (caudal F), o qual contm, entre outros
nutrientes, o nutriente limitante (concentrao S
0
). Simultneamente, parte da cultura removida, com
o mesmo caudal F a que meio de cultura fresco entra. O efluente removido contm clulas do
microrganismo (biomassa, X), assim como produto(s) sintetizado(s) pelas clulas. A concentrao de
nutriente limitante sada (S) , em condies operacionais adequadas, muito baixa ou
aproximadamente nula.
NOTAS SOBRE CULTURA CONTNUA
No estado estacionrio (no quimiostato):
a taxa especfica de crescimento do microrganismo () controlada pela taxa
de diluio a que o quimiostato opera (D) (i.e. vlida a equao = D)
e, consequentemente, pela razo entre o caudal (F) e o volume de cultura no
recipiente (V)
possvel obter populaes microbianas em crescimento com taxas especficas
de crescimento diferentes atravs da alterao da taxa de diluio aplicada no
quimiostato
a densidade celular (biomassa, X) obtida no quimiostato controlada pela
concentrao do nutriente limitante, sendo vlida a equao
X = Y (S
0
-S)
onde Y o rendimento do crescimento para o substrato limitante e S representa a
concentrao residual do nutriente limitante no quimiostato.
Modelo para o crescimento no quimiostato equao de Monod
i.e., o valor da taxa de diluio, D, relaciona-se com a concentrao de nutriente
limitante do crescimento com base na equao de Monod

max
S
K
s
+ S
D = D =
D. K
S

max
- D
S =
Notas sobre as representaes grficas da concentrao de biomassa (X), da
concentrao de nutriente limitante (S) e do tempo de duplicao da populao
microbiana no estado estacionrio, em funo da taxa de diluio a que o
quimiostato opera (D).
A densidade celular (biomassa, X) igual, para uma gama larga de taxas de diluio a que o
quimiostato pode operar (consequentemente, a concentrao residual de nutriente limitante, S, no
quimiostato mantida com um valor baixo, uma vez que este nutriente est a ser consumido pelas
clulas da cultura em crescimento) ;
Apesar da concentrao de biomassa permanecer constante, a taxa especfica de crescimento pode
variar com a variao da taxa de diluio que aplicada no quimiostato (porque = D); quanto maior
a taxa de diluio, maior a taxa de crescimento da populao (e, inversamente, menor o
tempo de duplicao ou gerao).
A gama de valores de taxa de diluio, D, a que o quimiostato pode operar limitada. O valor limite
a taxa de diluio crtica (D
c
). Para valores muito altos da taxa de diluio (D D
c
), o crescimento
celular no consegue compensar a diluio da cultura, e a populao de clulas sai do quimiostato
(Wash-out lavagem do quimiostato) ; consequentemente, nessas condies, a concentrao de
nutriente limitante aumenta, porque no consumido ; quando D D
c
S=S
0
)
A taxa de diluio torna-se crtica e ocorre o Wash-out quando a taxa de diluio a que o
quimiostato opera ultrapassa a taxa especfica mxima de crescimento da populao microbiana (
mx
)
Cultura contnua permite estabelecer condies selectivas para o enriquecimento de
amostras ambientais (populaes mistas) em microrganismos especficos
Por exemplo:
microganismos capazes de metabolizar eficientemente nutrientes txicos ou
dificilmente metabolizveis (comparativamente a outros microrganismos presentes
numa amostra ambiental, p.ex. solo, gua, esgoto, etc.)
P.ex. til para o isolamento de microrganismos capazes de biodegradar
hidrocarbonetos do petrleo, benzeno, fenol, cido benzico, pesticidas ou
outros compostos orgnicos, a partir de solo (populao mista).
(nestes casos, o quimiostato inoculado com a amostra ambiental; o meio de cultura fresco contm o composto em causa
como substrato limitante para crescimento e fornecido contnuamente com taxa de diluio adequada; nestas condies,
prolifera(m) preferencialmente o(s) microrganismo(s) que seja(m) capaz(es) de metabolizar eficientemente o composto em
causa; outros microrganismos que no tenham essa capacidade (p.ex, com < D) eventualmente presentes na amostra
ambiental, sofrero washout, sendo expulsos do quimiostato)
Em cultura contnua, mediante a seleco de taxa(s) de diluio adequada(s), possvel
seleccionar uma populao de clulas dum microrganismo nico, que seja muito competitivo
e metabolize muito eficientemente um composto orgnico face a outros microrganismos
menos competitivos eventualmente presentes numa populao mista inicial.
Pelo contrrio, em cultura descontnua/batch, todos os microrganismos, mais ou menos competitivos
na utilizao do composto orgnico, permanecem no meio de cultura
cultura batch menos eficiente quando se pretende seleccionar microrganismos muito eficientes
na utilizao do composto em causa como substrato para crescimento.
1 Contaminao da cultura
Em cultura contnua, necessrio manter condies de esterilidade durante perodos longos.
A adio contnua de meio fresco e o arejamento aumentam a probabilidade de ocorrer contaminao
da cultura. Contudo, condies especiais, tais como temperaturas elevadas, valores de pH extremos
e substratos pouco usuais podem reduzir a probabilidade de ocorrer contaminao da cultura.
2 Degenerescncia da cultura
Durante a multiplicao celular dum certo microrganismo pode ocorrer uma mutao expontnea, e
surgir um mutante vivel na cultura.
Em cultura contnua, um microrganismo invasor (contaminante ou mutante vivel) acumula
no quimiostato se for competitivo, isto , se utilizar o nutriente limitante eficientemente face
estirpe microbiana original contaminao da cultura original.
Mas, se no for competitivo, expulso do quimiostato.
Na cultura bacth, todo o contaminante (ou, mutante vivel) capaz de utilizar o
nutriente limitante acumula no meio de cultura, juntamente com o microrganismo
que se pretende cultivar contaminao da cultura original.
Consequncias
Se ocorrer: