PCR LTEX Protena C Reativa

1. FINALIDADE
Teste de aglutinao para determinao qualitativa e quantitativa da Protena CReativa no soro.
2. INTRODUO
A Protena C-Reativa (PCR) foi demonstrada por Tillet e Francis em 1930.
Quimicamente a PCR uma globulina pentamrica com mobilidade eletrofortica na
zona gama. A PCR considerada uma protena de fase aguda encontrada no soro
em estados inflamatrios especficos ou no. A presente tcnica utiliza uma reao
de aglutinao de partculas de ltex em lmina que fornece resultados em 2
minutos.
3. IMPORTNCIA CLNICA
A PCR detectada em inmeros processos inflamatrios inclusive no infecciosos,
em alguns processos neoplsicos e tambm nos processos em que h destruio de
tecidos, como o infarto agudo do miocrdio. O teste da PCR mais comumente
aplicado no monitoramento de doenas como a artrite reumatide e febre reumtica
aguda entre outras. Sabe-se que no decorrer do processo inflamatrio, o aumento da
PCR verifica-se antes da elevao da velocidade de hemossedimentao (VHS),
posteriormente ambos mantm-se elevados, e no processo de cura, a PCR retorna
aos nveis de normalidade antes da VHS. A titulao das amostras positivas, portanto
de suma importncia, uma vez que h correlao direta entre aumento de ttulo e
piora do quadro clnico. Amostras com baixos ttulos podem indicar prematuramente
alguns quadros infecciosos como os ps-operatrios (em estados no complicados o
pico se d no 3 dia do ps-operatrio e retorna ao normal at o 7 dia).
4. AMOSTRA
a- Preparo do paciente
Instruir o paciente a fazer um jejum prvio de pelo menos 8-12h, para evitar uma
possvel ocorrncia de fenmenos interferentes tais como a lipemia.
b- Tipos de amostra
A amostra para a prova o soro (no usar plasma) recm-obtido, separado o mais
rapidamente possvel aps a coleta, isento de hemlise ou lipemia.
c- Armazenamento e estabilidade
Entre a coleta e a execuo da anlise, a amostra deve ser mantida em geladeira (28oC) aonde a PCR mantm-se estvel por at 7 dias, desde que no haja
contaminao microbiana. No congelar.
d- Critrios para rejeio
As amostras que se apresentarem hemolisadas, lipmicas, com indcios de
contaminao microbiana ou de congelamento devero ser rejeitadas.
e- Precaues e cuidados especiais
- Todas as amostras devem ser manipuladas com extrema cautela, pois podem
veicular diversas doenas infecto-contagiosas (hepatite, SIDA etc.). Seu descarte
deve ser feito preferencialmente aps sua autoclavao devendo-se evitar sua
eliminao diretamente no meio ambiente. Igual cuidado se recomenda no descarte
de outros materiais como ponteiras plsticas, agulhas e seringas.
5. INFORMAES GERAIS SOBRE O PRODUTO
a- Princpio de tcnica
O soro em anlise colocado em contato com um reagente que contm partculas de
ltex revestidas com anticorpo anti-PCR. A PCR se presente, provoca a aglutinao
visvel a olho nu das partculas do ltex. A reao pode ser qualitativa ou quantitativa
(atravs da diluio da amostra).
b- Reagentes
- Reagente do Ltex: contm partculas de poliestireno ltex, revestidas com antiPCR obtido por imunizao animal, suspensas em tampo glicina pH 8,2, contendo
ainda 0,1% de azida sdica como preservativo. A sensibilidade do reativo 6,5 mg/L
em PCR .
- Controle PCR Positivo: Soro humano contendo PCR e 0,1% de azida sdica como
preservativo, pronto para uso (no necessita diluio).
- Controle PCR Negativo: Soro humano normal, contendo 0,1% de azida sdica como
preservativo, pronto para uso (no necessita diluio).
- Tampo glicina concentrado 20 vezes: soluo salina-glicina tamponada, que aps
diluda a 1:20 apresenta um pH final 8,2 e que contm 0,1% de azida sdica como
preservativo.
OBS: Os controles positivo, negativo e tampo glicina acompanham apenas os
produtos de cdigo 551000 e 550190.
c- Armazenamento e estabilidade
Para fins de transporte o conjunto pode ser mantido em temperatura ambiente por at
3 dias. No laboratrio deve ser armazenado em geladeira (2-8 oC) aonde permanece
estvel at a data de validade expressa em rtulo desde que isento de contaminao
qumica ou microbiana. No congelar nenhum dos componentes do conjunto.
d- Precaues e cuidados especiais
- Os reagentes destinam-se ao uso diagnstico in vitro, no devendo ser ingeridos ou
entrar em contato com a pele e mucosas;
-Deve-se manipular os reagentes com cautela no sentido de evitar sua contaminao
qumica ou biolgica;
- Os controles foram testados para a presena de anticorpos anti-HIV e HbsAg,
entretanto recomenda-se sua manipulao com a maior cautela possvel;
- Os reagentes por conterem azida sdica em sua composio, no podem entrar em
contato com metais (como existente em alguns tipos de tubulao), pois h risco de
exploso (formao de azidas metlicas); quando de seu descarte, usar gua em
abundncia.

6. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS NECESSRIOS (porm no includos)

- Fonte de luz branca incidente;
- Pipetas graduadas;
- Tubos de ensaio e estante
- Lmina de vidro com fundo preto com 6 delimitaes (551017).
7. PROCEDIMENTO TCNICO
7.1 Prova qualitativa (triagem)
a- Deixar que os reagentes e amostras adquiram a temperatura ambiente;
b- Adicionar uma gota (0,05mL) da amostra e uma gota dos controles positivo e
negativo (0,04mL) nas delimitaes da lmina de vidro;
c- Agitar vigorosamente o reagente Ltex (em vrtex ou batendo contra a palma da
mo 10-15 vezes), e adicionar uma gota (0,04mL) deste amostra e controles,
homogeneizando a seguir com os bastes prprios;
d- Agitar em agitador mecnico tipo Kline ou similar (cerca de 80 a 100rpm) por 2
minutos;
e- Resultados: observar a lmina sob uma fonte de luz branca incidente, a olho nu,
procurando uma aglutinao das partculas do ltex, o que caracteriza reao
positiva. A no ocorrncia de aglutinao caracteriza reao negativa.
Observao: quando a amostra apresentar uma ligeira aspereza (diferente do
controle negativo), pode estar ocorrendo o fenmeno da prozona, neste caso, dilui-se
a amostra a 1:10 no tampo glicina (diludo) e repete-se a determinao, e se o
resultado obtido for positivo parte-se para a quantificao da amostra, do contrrio,
considera-se a amostra como no reagente.
7.2 Prova quantitativa
a- Preparar uma srie de diluies do soro entre 1:2 e 1:128 (podendo ir alm deste
ttulo), numerando 7 tubos (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 e 1:128), acrescentando a
seguir 0,5 mL de tampo glicina pH 8,2 em cada um deles , e 0,5 mL da amostra no
primeiro tubo, homogeneizando e transferindo 0,5 mL desta diluio para o prximo
tubo, e assim por diante desprezando a ltima alquota;
b- Testar as diluies conforme o disposto na tcnica qualitativa, substituindo as
amostras pelas diluies;
c- Resultado: o ttulo considerado como a recproca da maior diluio que
apresentar reao positiva (aglutinao visvel a olho nu).
ATENO: Os conta-gotas do reagente ltex e dos controles dispensam 0,04mL
(40L) por gota, mas o usurio pode a seu critrio, visando aumentar o rendimento
do material, utilizar gota de 0,020 mL (20 L) dos controles e do reagente ltex para
realizar as reaes, medida atravs de pipetadores apropriados. Recomendamos que
para tal finalidade sejam usadas apenas ponteiras descartveis a fim de se evitar a
contaminao dos reagentes e controles.
7.3 Precaues e cuidados especiais
- Homogeneizar corretamente o ltex antes de executar a prova;
- A rotao da lmina muito rpida pode ocasionar a ruptura das ligaes entre a
PCR da amostra e as partculas de ltex do reagente causando resultados falso
negativos;
- Para diluio de amostras usar apenas o tampo glicina;
- Manter a lmina de reao sempre limpa, seca e desengordurada antes do uso;
- O uso de reagentes com partculas ressecadas pode ocasionar resultados falso
positivos, para se evitar, guardar os frascos com os conta-gotas preenchidos;
- A intensidade da aglutinao no proporcional concentrao de PCR na
amostra analisada ( necessria a execuo da tcnica quantitativa para todas as
amostras reativas);
- No utilizar o microscpio para executar a leitura da prova;
- O uso de outras substncias que no o tampo glicina na diluio das amostras
(tais como gua destilada ou soluo salina) acarreta alterao no padro de
resposta do reagente do ltex;
8. RESULTADOS
- Valor de Referncia: at 6,5 mg/L
Os resultados podem ser emitidos sob dois critrios, em mg/L de PCR ou indicando o
ttulo.
- Negativo
Reportar como Amostra analisada no reagente ou
PCR inferior a 6,5 mg/L (sensibilidade do reagente)
- Positivo
Reportar como Amostra analisada reagente at o ttulo ...(indicar o ttulo obtido) ou
PCR: .... mg/L
Para obter o resultado em mg/L de PCR, multiplica-se o ttulo obtido por 6,5 .
Exemplo: uma amostra reagente at o ttulo 1:16:
PCR = 16 x 6,5 = 104,0 mg/L
- Os resultados obtidos por esta metodologia podem apresentar variaes quando
comparados a metodologias instrumentais (como turbidimetria), sendo aceitvel a
variao de um ttulo a mais ou um ttulo a menos quando comparados lotes ou
reagentes de procedncias diferentes. Como o valor de referncia de at 6,5 mg/L ,
valor este que coincide com a sensibilidade da metodologia, os ttulos 1/1 devem
ser considerados dentro da faixa normal, e nos casos em que a prova usada
como triagem, considerando os fatos expostos, pode ser recomendada a execuo
dos testes com as amostras diludas 1/2 (uma parte de amostra para uma parte de
tampo glicina). Todas as amostras positivas devem ser tituladas.

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9. CONTROLE DA QUALIDADE
- Materiais necessrios
Controle positivo e negativo includos no conjunto, e amostras de referncia
certificadas.
- Periodicidade
Ao receber o conjunto, efetuar testes usando os controles que acompanham
o conjunto e amostras de referncia. Quando da execuo de uma bateria
de testes, recomenda-se a realizao dos controles que acompanham o
conjunto a cada bateria de teste.
- Interpretao e avaliao
Uma vez que a funo do controle de qualidade garantir que o material
usado esteja fornecendo resultados compatveis com os esperados e dentro
de um padro de desempenho, espera-se que o controle positivo apresente
aglutinao e que o controle negativo no apresente aglutinao. Dispondose de amostras de referncia com ttulo conhecido, pode-se avaliar a
sensibilidade do material, em periodicidade a ser estabelecida pelo prprio
laboratrio conforme seus procedimentos adotados.
10. CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO
A sensibilidade diagnstica 95,6% e a especificidade diagnstica 96,2%.
11. GARANTIA DA QUALIDADE
A Laborclin obedece ao disposto na Lei 8.078/90 - Cdigo de Defesa do
Consumidor. Para que o produto apresente seu melhor desempenho,
necessrio:
- que o usurio conhea e siga rigorosamente o presente procedimento
tcnico;
- que os materiais estejam sendo armazenados em condies adequadas;
- que os equipamentos e demais acessrios necessrios estejam em boas
condies de uso, manuteno e limpeza.
Antes de ser liberado para venda, cada lote do produto submetido a testes
especficos, que so repetidos periodicamente at a data de vencimento
expressa em rtulo. Os certificados de anlise de cada lote podem ser
obtidos junto ao site www.laborclin.com.br. Em caso de dvidas ou outras
informaes, contatar o SAC - Servio de Assessoria ao Cliente atravs do
telefone 0800-410027 ou pelo e-mail sac@laborclin.com.br. Quaisquer
problemas que inviabilizem uma boa resposta do produto, que tenham
ocorrido comprovadamente por falha da Laborclin sero resolvidos sem nus
ao cliente, conforme o disposto em lei.
12. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Tillet, W.S.; Francis, T.O. Serological reaction in pneumonia with a nonprotein-somatic of Pneumococcus. J. Exp. Mad.; 52:561, 1930.
2. Fischell, E.E Laboratory diagnostic procedures in the rheumatic diseases,
Ed. Cohen, p. 20, Boston, 1967.
3. Pusch, A.L., Serodiagnostic test for syphilis and other diseases in Todd
Sanfords clinical diagnosis by laboratory methods, 15th ed., 1974.
4. Hediund, P.. Clinical and experimental studies protein (acute phase
protein), Acta Med. Scand, suppl., 361:1, 1961.
5. Anderson, H.C. And Mac Carth, M. Determination of C-Reative Protein in
the blood as measure of the activity of the disease process in acute reumatic
fever, Amer. J. Med., 445 1950.
6- Robins, S. et al.: Patologia estrutural e funcional, 4a ed., G. Koogan, 1991.
7- Henry, J.B. et al.: Diagnsticos clnicos e conduta teraputica por exames
laboratoriais, 16a. Ed., Ed. Manole, 1983.
8. Jacobs, David S.: Laboratory test handbook, 4th ed, Lexi Comp, p. 387,
1996.
13. REGISTRO NO MINISTRIO DA SADE: 100.970.10.144
14. APRESENTAO
551000 PCR LATEX-PROT.C REATIVA-R=2mL-KIT 50T
550190 PCR LATEX-PROT.C REATIVA-R=4mL-KIT 100T
550191 PCR LATEX-PROT.C REATIVA-R=4mL-FR

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