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Micologia Médica
Micologia Médica
INTRODUO
Durante muitos anos a Micologia teve pouca expresso na rea
mdica, possivelmente pela falta de diagnstico adequado. Ultimamente, o
nmero de pacientes suscetveis aos mais variados tipos de infeces tem
aumentado significantemente. Com esse crescimento, as infeces fngicas
vm se tornando mais freqentes.
Com o aparecimento da antibioticoterapia, utilizao de mtodos
imunossupressores,
surgimento da AIDS e
Cromomicose,
Esporotricose
Micetoma (eumicetoma e actinomicetoma)
Zigomicose
Rinosporidiose
Doena de Jorge Lobo
Feo-hifomicose
Hialo-hifomicose
Sistmicas:
Paracoccidioidomicose
Histoplasmose
Oportunistas:
Criptococose
Aspergilose
PARTE I
MICOSES SUPERFICIAIS
Micoses que desenvolvem alteraes apenas na camada mais
superficial do estrato crneo e no induz, na maioria das vezes, qualquer
resposta inflamatria no hospedeiro.
Principais Doenas e agentes etiolgicos:
Pitirase versicolor Malassezia furfur
Piedra negra Piedraia hortae
Piedra branca Trichosporon beiguele
- Pitirase versicolor:
Infeco geralmente assintomtica, mas, em raras ocasies, pode ser
relatado pelo paciente um discreto prurido. Apresenta-se como manchas
hipo ou hiperpigmentada, descamativas geralmente no trax, pescoo e
braos em adultos jovens, sem distino de sexo. Os principais fatores
endgenos para o aparecimento das leses so: Pele gordurosa, elevada
sudorese, fatores hereditrios e uso de terapia imunossupressora.
Ag. Etiolgico: Malassezia furfur
Diagnstico:
Raspado de pele clareado com KOH.
Escamas de Pele com Malassezia Furfur
Coradas pelo P.A.S: Leveduras arredondadas, formando aglomerados em
forma de cachos de uva ou mosaico; hifas curtas e grossas, em forma de Y
ou L, de cor vermelha.
Isolamento: Para isolamento primrio de fungo de material clnico, com
suspeita de petirase versicolor, devemos utilizar um meio especialmente
preparado para o isolamento dessas leveduras, visto que so
lipodependente.
- Piedra Negra
Micose que se caracteriza clinicamente pelo aparecimento, nos
cabelos e raramente em outros plos do corpo humano, de ndulos
endurecidos e de colorao escura. Doena benigna, baixo contgio, carter
crnico, freqentemente recidivante que afeta ambos os sexos.
Ag. Etiolgico: Piedraia hortae
Diagnstico:
Piedraia hortae
Em plo: Produz a piedra negra. Nmero varivel de ndulos duros,
escuros (marrons e negros), localizados ao longo do plo.
Microscopicamente observam-se hifas, formando um pseudo-tecido (ou
pseudoparnquima), devido a justaposio das mesmas. O aspecto de
mosaico, com reas mais claras, onde se localizam os ascos contendo
ascosporos, s visveis aps esmagamento e clareamento com KOH.
- Piedra Branca:
Ndulos fracamente aderidos aos cabelos ou plos de cor brancaamarelado. Doena de distribuio geogrfica com predileo por climas
tropicais e temperados, de carter assintomtico, benigno e de baixo
contgio, que acomete indistintamente cabelos e plos das regies axilares,
pubianos, perianal, barba e bigode.
Agente etiolgico: Trichosporon beigelli
Diagnstico:
Trichosporon beigelii
Em plo: Produz a piedra branca, geralmente localizada na extremidade do
pelo. A superfcie homognea, devido massa de leveduras. A cor varia
de branco a amarelo.
MICOSES CUTNEAS
Dermatofitose
Candidase
Dermatfitos:
Pertencem ao grupo dos fungos denominados de dermatfitos os
fungos filamentosos, hialinos, septados, algumas vezes artroconidiados,
queratinoflicos, passveis de colonizar e causar leses clnicas em plos
e/ou extrato crneo de homens e animais. So divididos em trs gneros:
Trichophyton, Microsporum e Epidermophyton. Em relao ao seu habitat
podem ser divididos em geoflicos- vivem em solos, zooflicos vivem em
animais e antropoflicos vivem no homem.
Os aspectos clnicos das leses dermatofticas so bastante variados e
resultam da combinao de destruio da queratina associada a uma
resposta inflamatria, mais ou menos intensa, na dependncia do binmio
parasito/hospedeiro. Na classificao clnica das dermatofitoses so
utilizadas as denominaes Tinea seguidas do stio anatmico das leses,
exemplo: Tinea capitis (couro cabeludo).
Descrio das principais dermatofitoses e seus agentes mais frequentes:
Tinea pedis (tinha do p): T. rubrum, T. mentagrophytes,
E.floccosum
Tinea ungueum (tinha da unha, onicomicose) : T. rubrum, T.
mentagrophytes
Tinea corporis, Tinea circinada (tinha de pele glaba): T. rubrum, T.
mentagrophytes, M. canis
Tinea barbae (tinha da barba): T. verrucosum, M. canis, T. violaceum
Tinea cruris (tinha da regio inguino-crural): T. rubrum, E.
floccosum
Tinea fvica (tinha alopeciante): T. schoenleinni
Tinea capitis (tinha do couro cabeludo): endotrix: T. mentagrophytes,
T. violaceum, T. tonsurans ectotrix: M. canis, M. gypseum
Obs.: endotrix: parasitismo no interior dos plos ectotrix: parasitismo
fora do plo
T.tonsurans:
Parasita antropoflico. Apresentam crescimento intermedirio, com
maturao 12-16 dias aps semeadura primria, colnias bastante variveis
que pode variar do algodonoso ao veludoso. Verso com colorao branco e
reverso apresenta tons variados de castanho-avermelhado. Apresenta
numerosos microcondeos dispostos em acldio e de formas variadas.
T. tonsurans
T. mentagrophytes:
T. mentagrophytes
T. verrucosum:
Trata-se de um fungo cosmopolita que parasita principalmente
bovinos, podendo esporadicamente causar leses em humanos.
Clinicamente pode causar leses bastante inflamatrias do couro cabeludo,
pele glaba, barba e bigode. Crescimento lento que varia de 13-25 dias.
Macroscopicamente, a colnia caracteriza-se por uma textura veludoso,
pigmentao do verso que varia do branco ao amarelo ocre. O reverso
apresenta-se em de amarelo com pigmento no difusvel pelo meio. A
microscopia ptica, de material proveniente de Agar Sabouraud no
apresenta microcondeos nem macrocondeos. O que chama a ateno e a
quantidade de cadeias formadas por clamidoconideos grandes.
T. verrucosum
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T. schoenleinii:
Crescimento lento que varia de 14 a 30 dias. Colnias com textura
veludosa e pigmentao que varia do bege ao castanho escuro. O reverso
segue o mesmo tom do verso no se observa pigmento difusvel no meio.
Na microscopia geralmente no so observados macrocondeos nem
microconseos; entretanto, vem-se numerosas hifas septadas e em
bifurcao, associadas a hifas em forma de candelabro e a hifas em forma
de cabea de prego.
T. schoenleinii
Gnero Microsporum:
M.canis:
um dermatfito zooflico transmitido ao homem por diversos
animais domsticos principalmente felinos jovens. Clinicamente,
responsvel por leses do couro cabeludo, caracterizada por grandes placas
de alopcia, principalmente em crianas. Crescimento rpido de 6-10 dias.
Textura algodonosa de tonalidade branca. O reverso apresenta-se de
colorao amarelo-limo. A microscopia direta da colnia mostra na
maioria das vezes grande quantidade de macrocondeos fusiformes
verrucosos, de paredes grossas e com numerosas septaes, que variam
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M. gypseum:
Espcie geoflica, que infecta o homem atravs do contato com o
solo contaminado. Colnia de crescimento rpido 3-5 dias.
Macroscopicamente a colnia possui textura pulverulenta com pigmentao
amarelo-acastanhado. O reverso pode apresentar variaes de cores que vo
do alaranjado ao marrom. Microscopicamente apresentam macrocondeos
simtricos, com 3-7 septos de paredes finas, extremidade arredondada e
superfcie levemente rugosa.
M. gypseum
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Gnero Epidermophyton;
E. floccosum:
Dermatfito antropoflico. Crescimento rpido 7-10 dias.
Macroscopicamente essas colnias apresentam textura algodonosa. A
colorao dos bordos e do verso amarelo-esverdeada. O reverso da
colnia tende a acompanhar a colorao do verso. Pigmento difusvel no
meio. Microscopicamente, caracteriza-se pela presena de macrocondeos
de parede fina, com 2 a 5 septos e agrupados em cachos.
E. floccosum
-Candidases:
Nome de conotao genrica para denominar doenas causadas por
Cndida albicans e outras espcies. O habitat da Candida bastante amplo,
no homem essa levedura habita a mucosa digestiva e por contigidade a
mucosa vaginal. A infeco pode atingir mucosas, tecido cutneo e em
alguns casos pode ser sistmica. As manifestaes clnicas apresentam
grande diversidade de quadros, podendo ser divididas em trs grandes
grupos: Candidase cutneo-mucosa, Candidase sistmica e candidase
alrgica. As principais espcies patognicas so:
C. albicans
C. tropicalis
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C. pseudotropicalis
C. guilliermondi
C. parapsilosis
C. krusei
MICOSES SUBUTNEAS
Micoses subcutneas so infeces causadas por um grupo
diversificados de fungos que ataca o homem e os animais . As leses
aparecem inicialmente a partir de um ponto de inoculao de estruturas
fngicas, atravs de traumatismos diversos. Podem permanecer localizados
ou se espalhar pelos tecidos adjacentes, por via linftica ou hematognica.
As maiorias dos fungos envolvidas so saprbios habituais do solo e
vegetais em decomposio.
As principais micoses subcutneas so; Cromoblastomicose, esporotricose,
micetoma (eumicetoma e actinomicetoma), zigomicose, rinosporidiose,
doena de Jorge Lobo, feo-hifomicose e hialo-hifomicose.
Cromoblastomicose:
Infeco crnica, granulomatosa, caracterizada por leses nodulares,
verrucosas, papilomatosas, por vezes ulceradas, localizadas,
preferencialmente nos membros inferiores, tendo como agente etiolgico
fungos de colorao escura (demaciceos), distribudos por diversas
espcies. Os principais so: Fonsecaea pedrosoi, F. compacta,
Phialophora verrucosa, Clodophialophora carrionii e Rhinocladiella
aquaspersa.
A principal via de contgio se faz atravs de soluo de continuidade
produzida na pele por fragmentos de vegetais ou madeira contaminados.
Diagnstico:
Exame direto: Material proveniente das leses (escamas, crostas ou pus)
ou pequeno fragmento de bipsias clarificado com KOH. Observam-se
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Esporotricose:
A esporotricose uma infeco de evoluo sub-aguda ou crnica,
caracterizada por pequenos tumores subcutneos (gomas), que tendem
supurao e ulcerao. O agente etiolgico o Sporothrix schenckii, fungo
dimrfico, que se introduz nos tecidos orgnicos atravs de traumatismo
ou, raramente, por inalao. Esse fungo encontrado em vida saproftica
em vegetais, solo, guas contaminadas e animais. A forma clnica mais
freqente da micose a linfangite nodular ascendente, que se inicia pela
inoculao do agente, geralmente nas extremidades (cancro de inoculao),
atingindo os glnglios linfticos.
Diagnstico:
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Micetomas:
Definio: Micetoma uma sndrome clnica, de evoluo crnica,
caracterizada pelo aumento de volume de uma regio ou rgo, com a
presena ou no de fstulas que drenam um material seroso ou seropurulento no qual podem ser encontrados gros. A trade de tumefao,
fstulas que drenam e a presena de gros usada no sentido restrito para
definir o termo micetoma. O Gro um aglomerado de microrganismos.
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O micetoma pode ser provocado tanto por bactrias como por fungo
verdadeiro.
Os micetomas so classificados em dois grupos: actinomicticos ou
actinomicose e maduromicticos ou maduromicose. O primeiro grupo,
mais numeroso, esto os micetomas produzidos por bactrias, os
actinomicetos. No segundo esto os micetomas provocados por fungos
verdadeiros, ou eumicetos.
Ainda os micetomas actinomicticos (de origem bacteriana) podem
ser divididos em dois grupos, segundo a origem endgena ou exgena do
agente:
- Actinomicose, de origem endgena, provocada por actinomicetos
anaerbicos, sendo os mais freqentes o Actinomyces israelli, e
Arachnia propionica.
- Nocardiose, de origem exgena, provocada por actinomicetos
aerbios, sendo os mais freqentes a Nocardia asterides, N.
brasiliensis e vrias espcies do gnero Streptomyces,
principalmente o S. somaliensis.
Os micetomas maduromicticos, causados pelos eumicetos so
provocados principalmente pelo Madurella grisea, M. mycetomatis e
Pyrenochaeta romeroi.
Diagnstico:
O diagnstico laboratorial dos micetomas baseado na observao
dos gros, que drenam espontaneamente das leses, ou que so
extrados atravs de puno ou biopsia.
Gro de actinomiceto
Em corte de tecido: O gro aparece no meio de uma rea com grande
infiltrao linfocitria, sem forma regular e sem estrutura interna bem
definida. constitudo de massas de finssimos filamentos. Nas bordas
freqentemente formam-se massas irregulares ou expanses com forma de
clava . A cor varia muito devido diversidade dos agentes causais (desde
azul a vermelho claro), variando tambm conforme a tcnica de colorao.
Gro maduromictico
Em corte de tecido: Gros grandes, de forma irregular, contorno bem
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Entomoftoromicose:
uma infeco crnica do tecido subcutneo e mucosa, causada por
fungos que vivem saprofiticamente no solo , vegetais em decomposio e
fezes de rpteis e anfbios. A infeco ocorre com maior freqncia atravs
da inalao ou inoculao de esporos. Os principais agentes etiolgicos
so; Delacroixia coronata e o Basidiobolus ranarum.
Feo-hifomicose:
A designao feo-hifomicose foi proposta por Ajello, em 1974, para
denominar infeces cutneas, subcutneas e profundas, agudas ou
crnicas, causadas por uma grande variedade de fungos escuros com
exceo dos agentes da cromoblastomicose. Os principais agentes
etiolgicos so; Bipolaris oregonensis, Cladosporium bantianum e
Exophiala jeanselmei.
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Exophiala jeanselmei.
Bipolaris oregonensis
Cladosporium bantianum
Hialo-hifomicose:
Esse termo foi proposto por Ajello, 1982, para agrupar as infeces
ocasionadas por fungos filamentosos hialinos, septados, no formadores de
estruturas especficas (como os gros dos eumicetomas) e que, at ento,
no eram patgenos clssicos. A maioria dos fungos produtores dessa
micose so saprofticas habituais do solo, parasitas de vegetais e
degradadores de materiais orgnicos. Grande parte desses fungos
oportunista, com limitado poder patognico. Os principais so;
Acremonium falciforme, Penicillium marneffei, Scedosporim apiospermum
e Scopulariopsis brevicaulis.
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Penicillium sp
Scedosporium
Scopulariopsis
Acremonium
Rinosporidiose:
uma infeco mictica submucosa, crnica, de evoluo lenta e
granulomatosa, causada pelo Rinosporidium seeberii. Essa infeco
caracterizada pela formao de plipos vegetantes localizados,
principalmente nas mucosas nasal e conjuntival. O fungo um provvel
habitante de guas estagnadas, poos e audes, sendo uma das possveis
vias de aquisio da infeco.
Diagnstico:
Exame direto: KOH do material biolgico (plipos) observa-se clulas
arredondadas (esporngio) de parede espessura variando de 10 a 100 m
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MICOSES PROFUNDAS
Paracoccidioidomicose (PCM):
Trata-se de infeco granulomatosa de evoluo crnica, com grande
polimorfismo crlnico, onde as formas pulmonares e cutneo-mucosas
predominam, seguindo-se outros rgos, como gnglios linfticos, suprarenal, bao fgado, intestinos, ossos, etc. Na grande maioria dos casos, os
pulmes esto comprometidos e, em geral, tal localizao acompanhada
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Histoplasmose:
uma doena granulomatosa, tendo como agente etiolgico o fungo
Histoplasma capsulatum, que apresenta especial afinidade pelo sistema
retculo endotelial, produzindo diversas manifestaes clnicas.
Classificao das formas clnicas;
Assintomtica: Indivduos que entram em contato com o fungo mais no
desenvolvem sintomas. Algumas vezes podem aparecer sintomas que se
assemelham desde uma tuberculose a um resfriado. Os glnglios
mediastinais podem estar envolvidos. Quando no ocorre a cura
espontnea, evolui para a forma generalizada.
Generalizada: Ocorre por disseminao pulmonar apresentando sintomas
de acordo com o rgo afetado principalmente os que fazem parte do
sistema retculo endotelial como fgado, bao e linfonodos.
O contgio atravs da inalao de esporos do fungo.
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Diagnstico;
Exame direto: Material biolgico com KOH as formas de leveduras
dificilmente so encontradas por este mtodo.
Em corte de tecido corado pela H.E.: Clulas parasitrias arredondadas,
aparecendo como elementos intracelulares, de parede grossa e citoplasma
retrado. Observa-se uma zona clara entre a parede e o citoplasma, o que
simula uma cpsula.
MICOSES OPORTUNISTAS
Criptococose:
Infeco subaguda ou crnica, de comprometimento pulmonar, sistmico e
do sistema nervoso central, causado pelo Cryptococcus neoformans. A
infeco primria no homem sempre pulmonar, devido a inalao do
fungo da natureza. A infeco pulmonar quase sempre subclnica e
transitria; entretanto, pode emergir ao lado de outras doenas que
debilitem o indivduo, tornar-se rapidamente sistmica e fatal. Portanto
conhecida como infeco oportunista. O fungo possui forte
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neurotropismo.
Diagnstico:
Materiais biolgicos: lquor, escarro, pus ganglionar, exudatos de leses
cutneas e mucosas, urina e sangue.
Exame direto: A fresco com tinta nanquim. O fungo visualizado como
uma clula arredondada.
Macromorfologia: Culturas de crescimento rpido (3 dias). Colnia plana
ou levemente elevada, brilhante, mida, com frequncia mucide. Cor
inicialmente creme tornando-se bronzeada.
Micromorfologia: Clulas arredondadas ou ovalada, isoladas ou com
brotamento nico; parede grossa, bem refringente e vacolos no
citoplasma. Cpsula bem ntida em preparaes com tinta nanquim.
Aspergilose:
A arpergilose no seu sentido amplo definida como um grupo de doenas
na qual fungos do gnero Aspergillus esto envolvidos. Esses fungos so
cosmopolitas e extremamente presentes na natureza, sendo encontrados em
restos orgnicos, no solo, no ar e sobre a superfcie de seres vivos, etc. Por
essas razes, representa no laboratrio de micologia, uma fonte freqente
de contaminao dos meios de cultura e de espcimes clnicos a serem
analisados. No homem a doena depende do estado fisiolgico geral ou
local do hospedeiro.
As principais manifestaes clnicas so:
Aspergilose pulmonar: Aspergiloma (bola fngica), Aspergilose invasiva,
Aspergilose alrgica, Aspergilose bronco-pulmonar
Aspergilose disseminada
Otomicose
Onicomicose
Diagnstico:
Exame direto: Em KOH hifas hialinas
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Cultura:
Macromorfologia: Colnia de crescimento rpido, inicialmente branca,
passando a azul, verde, amarela ou preta. Reverso incolor, amarelo ou
preto. Pulvurulenta ou granulosa, com borda franjada e contorno circular
ou lobado, mas limitado.
Micromorfologia: Hifas vegetativas, ramificadas, septadas, incolores e
refringentes. Conidiforo, com haste simples, saindo de uma clula base, e
extremidade globlosa (vescula). Da superfcie da vescula saem filides ou
esterigmas, em forma de garrafas e disposio radiada no seu conjunto. Na
extremidade de cada filide forma-se uma cadeia de esporos basipetos
(condio ou fialosporo), globosos, de cor varivel.
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PARTE II
2- Microcultivo em lmina:
No microcultivo em lmina, as estruturas permanecem ntegras alm
de ser utilizado um meio de cultura (gar batata), que estimula a
produo de macro e microcondeos, que na maioria das vezes
identificam o fungo. Estimula, tambm, a formao de pigmento.
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20g
cido lctico
20ml
Glicerina
40ml
gua destilada
20ml
Azul-algodo
0,05g
10g
Glicose
gar
5g
10g
30
gua
500ml
IDENTIFICAO DE LEVEDURAS
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preparao
do
tipo
lmina-lamnula,
para
observao
2- MICROCULTIVO DE LEVEDURAS
Esta tcnica baseia-se no princpio de que leveduras, quando
incubadas num meio com Tween-80 apresentam a capacidade de
filamentar, formando pseudo-hifas e/ou hifas verdadeiras. Assim, pelas
caractersticas morfolgicas diferenciadas das estruturas filamentosas,
pode-se sugerir a espcie de levedura implicada na identificao.
Tcnica:
Preparar gar Fub e colocar 3 ml de meio, ainda lquido, sobre a
lmina do microcultivo, com pipeta estril. Esperar solidificar. Com
ala de platina, pegar um pouco da colnia de levedura crescida no gar
e semear em estria no gar Fub. Cobrir com lamnula estril. Deixar 2 a
3 dias 25oC e observar a preparao, da forma como est, em
microscpio com aumento de 400x.
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Material:
gar Fub:
Farinha de milho amarela
6,25g
gua
150 ml
gar
1,9 g
Tween 80
1,5 ml
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Assimilao de Nitrognio:
A assimilao de nitrognio demonstra a capacidade que algumas
leveduras apresentam de assimilar nitrato de potssio (nitrognio
inorgnico), como nica fonte de nitrognio utilizado na sua viabilidade
biolgica.
Tcnica:
Prepara-se o meio Yeast Carbon Base, de acordo com as indicaes do
fabricante.
Aps a preparao e autoclavao, o meio deve ser estocado em
geladeira, at o momento do uso.
No momento do uso, fundem-se 20 ml do meio, e aps resfriar a uma
temperatura de 45-50 oC acrescenta-se a este 1 ml da suspenso de
levedura previamente preparada (com uma turvao correspondente ao
tubo 5 da escala de MacFarland)
Aps movimentos no muito bruscos de agitao para homogeneizar o
inculo, despeja-se o meio numa placa de Petri
Aps solidificao do meio, distribuir pequenas quantidades de
compostos nitrogenados (nitrato de potssio e peptona)
A peptona aqui empregada como controle da viabilidade do inculo,
visto que todas as leveduras a utilizam como fonte nitrogenada.
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4- FERMENTAO DE CARBOIDRATOS:
A capacidade de uma levedura fermentar determinado carboidrato
est diretamente ligada habilidade desta de possuir sistemas enzimticos
eficientes, capazes de permitir, em baixas tenses de oxignio, degradar
acares para produo de energia, formando, entre outros metablitos,
etanol e gs carbnico.
Assim, utiliza-se tambm na identificao das leveduras essa
caracterstica fenotpica, onde se investiga a habilidade que uma
determinada levedura possui de fermentar um acar, atravs da
demonstrao da produo de CO2.
Tcnica:
Prepara-se o meio basal para fermentao e distribudos em tubos de
ensaio, contendo um tubo de Durham invertido em seu interior, em
alquotas de 3 ml.
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Material:
Meio de cultura
Azul de bromotimol
0,03 g
Extrato de levedura
2,7 g
Peptona
4,5 g
gua destilada
600 ml
Etanol a 95%
1,8 ml
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ISOLAMENTO DE FUNGOS DO AR
A. Finalidade: O isolamento de fungos anemfilos importante na
determinao da flora do ar de uma rea, nos estudos sobre alergia a
fungos, na determinao do grau de contaminao de ambientes, para
obteno de amostras de interesse industrial, etc.
B. Fundamento: Usando-se a tcnica de exposio de placas com meio de
cultura durante tempos pr-fixados, os esporos em flutuao no ar
sedimentam sobre o meio e ai germinam.
C. Material:
a. Placa com gar Sabouraud ou gar batata dextrose.
b. Lactofenol azul algodo
c. Lminas, lamnulas, alas, etc.
d. Tubos com gar-Sabouraud ou gar batata inclinado.
D.Execuo da tcnica:
1. Abrir a placa e expor durante 20 minutos
2. Fechar, identificar e incubar temperatura ambiente
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A. Exame direto
B. Cultura
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42
b. Cultura
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PRODUO DE UREASE
A. Finalidade: Identificao de C.neoformans.
B. Fundamento: Produzindo urease, C. neoformans decompe a uria
com formao de amnia que alcaliniza o meio, provocando a viragem do
indicador.
C. Material:
1. Meio de Christensen
2. Amostra de levedura
D. Preparo do material:
Meio de Christensen:
Uria gar base (Difco).................... 29 g
gua destilada................................. 100 ml
Esterilizar por filtrao
gar............................................... 15 g
gua destilada................................ 900 ml
Autoclavar 115C - 15 minutos.
Esfriar at 50 - 55C, misturar a base e distribuir esterilmente em tubos.
Solidificar inclinado.
E. Execuo da tcnica:
1. Semear na superfcie
2. Incubar a 37C
3. Observar a viragem do indicador (hidrlise da uria= viragem para
vermelho)
F. Resultado:
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Resultado:
O T. mentagrophytes penetra perpendicularmente dentro do pelo, formando
orifcios em forma de cunha. O T. rubrum no perfura o pelo.
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10 g
20 g
15 g
1000 ml
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PARTE III
FLUXOGRAMAS
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PARTE IV
UNIVERSIDADE SO PAULO
FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS
LABORATORIO DE MICOLOGIA CLNICA
PROTOCOLO PARA IDENTIFICAO DE LEVEDURAS
Iniciais do paciente:_____________________
Material biolgico:_____________________________________
Exame direto:_________________________________________
Cultura:______________________________________________
1 MORFOLOGIA
a) Macroscpia:
ASD: Cor:_________________Textura:___________________
b) Microscpia:
Agar Fub: Data:____________________
Pseudomiclio ( ) Miclio verdadeiro ( ) Clamidsporo ( )
Arranjo dos Blastocomidios ( ) Artrocondios ( )
Tubo germinativo:____________________________
Outras caracteristicas:___________________________
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2 PROVAS BIOQUMICAS
a) Auxonograma: Data:________________
1 G Glicose (
)
2 GA Galactose (
)
3 SOR L Sorbose (
)
4 SU Sacarose (
)
5 MA Maltose (
)
6 CE Celobiose (
)
7 TR Trealose (
)
8 LA Lactose (
)
9 ME Melibiose (
)
10 RA Rafinose (
)
11 ST Amido solvel (
)
12 LAR L Arabinose (
)
13 RI D Ribose (
)
14 GL Glicerol (
)
15 ER Eritritol (
)
16 RIB Ribitol (
)
17 GAL Galactiol ou Ducitol (
)
18 MAN D Manitol (
)
19 GLU D Glucitol ou Sorbitol (
)
20 LAC cido Ltico (
)
21 CIT cido Ctrico (
)
22 SUC cido Succinico (
)
23 I Inositol (
)
24 MZ Melezitose (
)
25 X L Arabinose (
)
26 DAR D Arabinose (
)
27 RH Raminose (
)
28 AS Salicina (
)
29 Peptona (
)
30 NO3 Nitrato (
)
b) Zimograma: Data:________________
Controle
Glicose
Lactose
Rafinose
Galactose
(
(
(
(
(
)
)
)
)
)
Sacarose
Maltose
Trealose
Celobiose
Melibiose
(
(
(
(
(
)
)
)
)
)
52
Resultados
+ Forte
+ W Fraco
+ VW Muito fraco
+ S Lento
- Negativo
V Varivel
+/- ----------------
Repleto de gs
Gs pela metade do tubo
Somente uma bolha gs
Formao de gs aps 3 dias
Sem gs
Algumas cepas (+) e outras (-)
4 A identificao deve ser feita de acordo com Kreger Van Rij, 1984.
53
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