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Fundao Oswaldo Cruz

Presidente
Paulo Ernani Gadelha Vieira
Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio
Diretor
Mauro de Lima Gomes
Vice-diretora de Pesquisa e Desenvolvimento Tecnolgico
Marcela Pronko
Vice-diretor de Ensino e Informao
Marco Antnio Carvalho Santos
Vice-diretor de Gesto e Desenvolvimento Institucional
Jos Orblio de Souza Abreu
Instituto Oswaldo Cruz
Diretora
Tnia Cremonini Arajo Jorge
Vice-diretora de Pesquisa, Desenvolvimento Tecnolgico e Inovao
Mariza Gonalves Morgado
Vice-diretora de Ensino, Informao e Comunicao
Helene dos Santos Barbosa
Vice-diretora de Servios de Referncia e Colees Cientficas
Elizabeth Ferreira Rangel
Vice-diretor de Desenvolvimento Institucional e Gesto
Christian Maurice Gabriel Niel

Volume 5
ORGANIZADORAS

Etelcia Moraes Molinaro


Luzia Ftima Gonalves Caputo
Maria Regina Reis Amendoeira

Copyright 2012 dos autores


Todos os direitos desta edio reservados
Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio/Fundao Oswaldo Cruz

Conselho Editorial
Dr. Maria Regina Reis Amendoeira (presidente)
Dr. Ana Luiza Lauria Filgueiras
Dr. Clarissa Menezes Maya Monteiro
Dr. Ftima Conceio Silva
Dr. Herman Gonalves Schatzmayr (in memoriam)
Dr. La Camillo-Coura
Dr. Lycia de Brito Gitirana
Dr. Marcia Cristina Ferro Alexandre
Dr. Marco Antonio Ferreira da Costa
Dr. Margareth Maria de Carvalho Queiroz
Dr. Maria Helena Migues da Rocha Leo
Dr. Otlio Machado Pereira Bastos
Dr. Paulo Roberto Soares Stephens

Coordenao Editorial
Ctia Guimares

Secretria-executiva da coleo
Josane Ferreira Filho

Desenhos
Newton Marinho da Costa Junior

Edio de Texto
Lisa Stuart
Projeto Grfico e Editorao
Marcelo Paixo
Capa
Z Luiz Fonseca
Fotos
Rodrigo Mexas

Catalogao na fonte
Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio
Biblioteca Emilia Bustamante
M722c

Molinaro, Etelcia Moraes


Conceitos e mtodos para a formao de profissionais em laboratrios
de sade: volume 5 / Organizao de Etelcia Moraes Molinaro, Luzia
Ftima Gonalves Caputo e Maria Regina Reis Amendoeira. Rio de
Janeiro: EPSJV; IOC, 2012.
476 p. : il. , tab. , graf.
ISBN: 978-85-98768-41-0
1. Tcnicas e Procedimentos de Laboratrio.2. Pessoal de Laboratrio.
3. Laboratrios. 4. Formao de Tcnicos. 5. Sade e Educao. I. Ttulo.
II. Caputo, Luzia Ftima Gonalves. III. Amendoeira, Maria Regina Reis.
CDD 542.1

Autores
Alba Valria M. Silva
Mdica veterinria, mestre e doutora em Biologia Parasitria pela Fundao Oswaldo Cruz
(Fiocruz).
Aline Carvalho de Mattos
Biloga, especialista em Malacologia de Vetores pelo Instituto Oswaldo Cruz (IOC/
Fiocruz); tecnologista em Sade Pblica do IOC/Fiocruz e gerente de qualidade do
Laboratrio de Referncia Nacional em Malacologia Mdica do IOC/Fiocruz.
Andr Figueiredo Barbosa
Bilogo, mestre em Cincias (Biologia Celular e Molecular) pelo Instituto Oswaldo Cruz
(IOC/Fiocruz) e egresso do Curso Tcnico de Pesquisa em Biologia Parasitria do mesmo
instituto; tcnico em Sade Pblica do IOC/Fiocruz e professor do Curso de Ps-graduao
Lato Sensu em Entomologia Mdica do IOC/Fiocruz.
Catarina Macedo Lopes
Biloga, mestre em Biologia Animal pela Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
(UFRRJ) e especialista em Entomologia Mdica pelo curso de Entomologia Mdica do
Instituto Oswaldo Cruz (IOC/Fiocruz); tecnologista em Sade Pblica do IOC/Fiocruz.
Danuza Pinheiro Bastos Garcia de Mattos
Mdica veterinria, doutoranda em Medicina Veterinria, Higiene Veterinria e
Processamento Tecnolgico de Produtos de Origem Animal pela Universidade Federal

Fluminense (UFF) e mestre em Biologia Parasitria pela Fundao Oswaldo Cruz (Fiocruz);
professora assistente da UFF.
Delir Correa Gomes Maues da Serra Freire
Historiadora natural, doutora em Medicina Veterinria/Parasitologia Veterinria pela
Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ); pesquisadora titular do Instituto
Oswaldo Cruz (IOC/Fiocruz).
Fernanda Barbosa de Almeida
Biloga, doutoranda pelo Programa de Ps-graduao em Microbiologia da mesma
universidade; tecnologista da Fundao Oswaldo Cruz (Fiocruz) e mestre em Morfologia
pela Universidade do Estado do Rio de Janeiro (Uerj); gerente tcnica do Servio de
Referncia Nacional em Hidatidose.
Jacenir Reis dos Santos Mallet
Biloga, doutora em Biologia Parasitria pela Fundao Oswaldo Cruz (Fiocruz) e mestre em
Cincias Morfolgicas pela Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ); pesquisadora
titular do Instituto Oswaldo Cruz (IOC/Fiocruz).
Joo Carlos Araujo Carreira
Doutor e mestre em Biologia Parasitria pela Fundao Oswaldo Cruz (Fiocruz); pesquisador
associado do Laboratrio de Toxoplasmose do Instituto Oswaldo Cruz (IOC/Fiocruz).
Jos Roberto Machado e Silva
Biomdico, doutor em Parasitologia Veterinria pela Universidade Federal Rural do Rio de
Janeiro (UFRRJ) e mestre em Biologia Parasitria pelo Instituto Oswaldo Cruz (IOC/
Fiocruz); professor adjunto e chefe do Departamento de Microbiologia, Imunologia e
Parasitologia da Faculdade de Cincias Mdicas da Universidade do Estado do Rio de
Janeiro (Uerj), e bolsista de Produtividade do Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientfico e Tecnolgico (CNPq).
Lucas de Andrade Barros
Bilogo, mestre em Morfologia pela Universidade do Estado do Rio de Janeiro (Uerj);
gestor de Qualidade, Biossegurana e Ambiente do Servio de Referncia Nacional
em Hidatidose e bolsista de produtividade do Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientfico e Tecnolgico (CNPq).
Marcelo Knoff
Bilogo, doutor em Biologia Parasitria pelo Instituto Oswaldo Cruz (IOC/Fiocruz) e
mestre em Medicina Veterinria/Parasitologia Veterinria pela Universidade Federal Rural

do Rio de Janeiro (UFRRJ); pesquisador titular do Laboratrio de Helmintos Parasitos de


Vertebrados do IOC/Fiocruz.
Margareth Maria de Carvalho Queiroz
Biloga, doutora e mestre em Cincias Veterinrias (Parasitologia Mdica e Veterinria)
pela Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ), e especialista em Parasitologia
pela mesma instituio; pesquisadora em Sade Pblica do Instituto Oswaldo Cruz (IOC/
Fiocruz) e de Produtividade do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e
Tecnolgico (CNPq).
do IOC/Fiocruz.
Monique Albuquerque Motta
Biloga, doutora em Biologia Parasitria pelo Instituto Oswaldo Cruz (IOC/Fiocruz);
pesquisadora adjunta em Sade Pblica do Laboratrio de Transmissores de Hematozorios
zdo IOC/Fiocruz e professora dos cursos de ps-graduao stricto sensu e lato sensu e do
Curso Tcnico de Pesquisa em Biologia Parasitria do (IOC/Fiocruz).
Nataly Arajo de Souza
Biloga, doutora em Biologia Parasitria pela Fundao Oswaldo Cruz (Fiocruz) e mestre
em Parasitologia Veterinria pela Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ);
pesquisadora titular do Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses do Instituto Oswaldo
Cruz (IOC/Fiocruz).
Patricia Riddell Millar Goulart
Mdica veterinria, doutora e mestre em Medicina Veterinria pela Universidade Federal
Fluminense (UFF); professora adjunta de Parasitologia da UFF.
Rosngela Rodrigues e Silva
Biloga, doutora e mestre em Biologia Parasitria pelo Instituto Oswaldo Cruz (IOC/
Fiocruz); coordenadora do Servio de Referncia Nacional em Hidatidose e pesquisadora
titular do Laboratrio de Helmintos Parasitos de Vertebrados do IOC/Fiocruz.
Silvana Carvalho Thiengo
Biloga, doutora em Cincias Veterinrias pela Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
(UFRRJ), mestre em Cincias Biolgicas/Zoologia pela Universidade Federal do Rio de
Janeiro (UFRJ), com curso de aperfeioamento em Helmintos de Importncia Econmica
pelo International Institute of Parasitology (Inglaterra); pesquisadora titular do Instituto
Oswaldo Cruz (IOC/Fiocruz) e chefe do Laboratrio de Malacologia do IOC/Fiocruz.

Teresa Cristina Monte Gonalves


Biloga, doutora em Biologia Parasitria pela Fundao Oswaldo Cruz (Fiocruz) e mestre
em Cincias/Zoologia pelo Museu Nacional/Universidade Federal do Rio de Janeiro
(UFRJ); pesquisadora do Instituto Oswaldo Cruz (IOC/Fiocruz).
Teresa Fernandes Silva do Nascimento
Biloga, doutora e mestre em Biologia Parasitria pelo Instituto Oswaldo Cruz (IOC/
Fiocruz); pesquisadora em Sade do IOC/Fiocruz, chefe do Laboratrio de Transmissores
de Hematozorios do IOC/Fiocruz e curadora da Coleo de Culicdeos do mesmo
laboratrio.

Sumrio
Prefcio

11

Apresentao da coleo

15

Apresentao das organizadoras

17

Captulo 1. Protozoologia

21

Captulo 2. Introduo helmintologia

191

Captulo 3. Metodologia bsica para a coleta


e o processamento de helmintos parasitos

251

Captulo 4. Entomologia

283

Captulo 5. Malacologia

413

Prefcio
O Chico Trombone costumava me dizer:
Isso eu sei fazer, dr. Luiz Fernando, aprendi com Joaquim Venncio.
E era com orgulho que se referia a seu mestre.
Vimos, portanto, que a formao de tcnicos j vem dos tempos de Oswaldo. claro que no era institucionalizada como hoje. Eram outros tempos.
Joaquim Venncio nasceu na fazenda Bela Vista, Minas Gerais. Era a
fazenda da me de Carlos Chagas, pai. Em 1916, veio trabalhar no Instituto
Oswaldo Cruz. Veio e deu certo. O dr. Lutz teria dito certa vez:
No troco o Venncio por nenhum doutor de Oxford ou de Cambridge.
Se no disse, pensou.
Eficincia nos processos de seleo de pessoal? Competncia do servio de
recursos humanos? Evidentemente que no. No havia nada disso nessa poca.
As coisas eram muito mais simples, e davam certo. Veio porque era amigo do
velho Carlos Chagas. Amigos de infncia. Brincaram juntos na fazenda.
Quando Joaquim Venncio faleceu em 27 de agosto de 1955, teve seu
necrolgio publicado na Revista Brasileira de Biologia lugar de necrolgio

12 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

de cientista famoso. Cito textual: Joaquim Venncio conseguiu durante cerca


de 35 anos que trabalhou ativamente, aprender zoologia, que conhecia de
modo invejvel. Como decorrncia das contingncias da vida, no teve oportunidade de instruir-se, mas sua mentalidade era de um homem culto. Pela
convivncia com o dr. Lutz, pela observao direta do que via nas excurses e
no laboratrio, adquiriu conhecimento detalhado de vrios grupos zoolgicos,
principalmente, anfbios, moluscos fluviais e trematdeos. Chegou a conhecer
muito bem os anfbios e, com grande facilidade, os classificava nas excurses
pela voz. Dadas as indicaes feitas pelo dr. Lutz em seus trabalhos, h casos
em que foi citado na literatura como colaborador direto.
Joaquim Venncio era, sem dvida, um naturalista. Era competente, tinha o
domnio do ofcio, a maestria da arte.
E gostava de ensinar. Ensinou muita gente.
Certa vez, o Venancinho me disse:
Era a Escola do Venncio, n? Foi muito boa, n?
***
Na presidncia de Srgio Arouca, resolvemos atualizar a Escola de Venncio. E foi assim que surgiu a Escola Politcnica, com o nome do seu patrono. Cresceu e abriu vrias frentes, desde a vocao cientfica aos cursos de
nvel mdio, complementados pela formao de tcnicos. Foi um xito, como
a antiga. Aparece sempre nos primeiros lugares nas avaliaes e j se estendeu
a outras instituies.
***
E agora surgem os livros didticos: organizada por Etelcia Molinaro, Luzia
Caputo e Regina Amendoeira, vem luz a coleo Conceitos e mtodos para
formao de profissionais em laboratrios de sade, reunindo professores de
vrias unidades da Fiocruz.

Prefcio | 13

Os captulos oferecem a histria da tcnica, os seus fundamentos, a maneira


moderna de realiz-la, as suas aplicaes, a organizao do laboratrio etc.
til para os cursos da Fundao Oswaldo Cruz e para outros externos.
Mostra, tambm, o quanto as unidades da Fiocruz esto integradas na realizao de suas tarefas.
Ensino questo primordial. Sem ele, o pas no se desenvolve.
Est de parabns a Fiocruz pela realizao de mais uma tarefa de primordial
importncia.
Oswaldo Cruz est orgulhoso dos seus continuadores.
Luiz Fernando Ferreira
Pesquisador emrito da Fundao Oswaldo Cruz

Apresentao
A coletnea de livros intitulada Conceitos e mtodos para formao de
profissionais em laboratrios de sade, organizada por Etelcia Molinaro,
Luzia Caputo e Regina Amendoeira, , antes de tudo, uma obra original,
importante e necessria. Original porque no existe na literatura tcnica
em sade, na rea biomdica brasileira e internacional, ao menos que eu
saiba, algo semelhante em abrangncia, profundidade e seleo dos temas
abordados; importante pelo pblico-alvo a que se destina, muito alm da
formao de tcnicos de laboratrios, abrangendo certamente todos os
profissionais de sade; e necessria porque servir como obra de referncia
para a formao dos mencionados tcnicos e como consulta obrigatria para
todos os profissionais de sade que necessitem de esclarecimento dos aspectos tcnicos ali abordados.
Versada em cinco volumes e 23 captulos, organizados em sequncia lgica, desde a biossegurana e as boas prticas de laboratrio, passando por
todos os fundamentos das tcnicas laboratoriais bioqumica bsica, biologia
celular e molecular, histologia e ultraestrutura , at atingir o cerne da prtica

16 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

laboratorial, da imunologia infectoparasitologia virologia, bacteriologia,


micologia, protozoologia e helmintologia e seus vetores, com a entomologia
mdica e a malacologia. Os autores dos respectivos captulos so do melhor
nvel intelectual e cientfico, com titulao de mestres, doutores e especialistas, e com grande experincia prtica nos assuntos de que tratam.
Parabenizo o Instituto Oswaldo Cruz e a Escola Politcnica de Sade
Joaquim Venncio, que patrocinaram esta obra de referncia, e que, desde
os seus primrdios, valorizaram a qualidade da formao dos seus tcnicos
e com eles povoaram e esto povoando o Brasil de norte a sul e de leste a
oeste com o que temos de melhor os fundamentos para uma boa pesquisa.
Aproveito esta oportunidade para homenagear a figura de Henry Willcox,
que, no incio da dcada de 1980, quando o convidei para me ajudar na
coordenao dos cursos de Ps-graduao em Biologia Parasitria e Medicina
Tropical do Instituto Oswaldo Cruz, foi o grande incentivador para criarmos
paralelamente o Curso de Tcnico em Pesquisa, do qual foi o seu primeiro
coordenador.
Igualmente parabenizo as organizadoras desta coletnea, e a Fiocruz como
um todo, pelo lanamento desta obra pioneira.
Jos Rodrigues Coura
Pesquisador titular emrito da Fundao Oswaldo Cruz
Chefe do Laboratrio de Doenas Parasitrias
do Instituto Oswaldo Cruz/Fiocruz

Apresentao das organizadoras


Um sonho quase realizado
Oswaldo Cruz, 1872-1917

As alteraes pelas quais passa o mundo com a globalizao trazem como


consequncia o surgimento de novos paradigmas tecnolgicos, fazendo-se necessrio que o ensino na rea da sade atenda s exigncias do mundo moderno, do trabalho e do atual perfil do tcnico da rea.
Os cursos para a formao de tcnicos da Fundao Oswaldo Cruz (Fiocruz) buscam demonstrar os princpios cientficos envolvidos com as tcnicas laboratoriais, preparando os alunos para as transformaes no mundo do
trabalho em sade decorrentes do desenvolvimento tecnolgico e cientfico.
Nesse contexto, duas unidades tcnico-cientficas da instituio o Instituto
Oswaldo Cruz (IOC) e a Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio
(EPSJV) so historicamente as responsveis pela coordenao de cursos e
especializaes tcnicas que se firmaram como modelos desses princpios. Essas
unidades sempre estiveram intrinsecamente ligadas na rea de ensino tcnico,

18 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

e os professores realizam permanentemente parcerias entre si. Muitos de ns,


egressos desses cursos, somos hoje docentes e autores desta coleo.
Alm da formao tcnica de profissionais em nvel regional e nacional,
intensificou-se a demanda pelo estabelecimento de cooperaes tcnicas internacionais na Fiocruz, que, por sua expertise e capacidade de produzir, passou
a divulgar conhecimentos, elaborando cursos, metodologias e tecnologias educacionais. A Escola Politcnica Joaquim Venncio, desde 2004, um centro
colaborador da Organizao Mundial da Sade (OMS) para a educao de
tcnicos em sade.
A ideia da publicao desta coleo surgiu da necessidade conjunta das
duas unidades citadas da Fiocruz de produzir material didtico que atendesse
aos alunos dos cursos de nvel tcnico em Sade da Fiocruz e de outros locais.
Desse modo, o nosso principal desafio oferecer um contedo que abarque
todos os temas da rea tcnica da sade tratados nos principais cursos de nvel
mdio e que, ao mesmo tempo, possa manter-se suficientemente atualizado.
Dada a complexidade da estrutura instrumental e pedaggica dos cursos
tcnicos, fez-se necessrio publicar uma coleo escolhendo-se tpicos de
importncia bsica. Para tanto, foram convidados pesquisadores e professores
com experincia de ensino em cursos de nvel tcnico e com destacado conhecimento nos temas abordados nos 23 captulos que integram os cinco volumes
da coleo.
A coleo Conceitos e mtodos para formao de profissionais em laboratrios de sade tem como objetivo integrar conhecimentos tericos e prticos, proporcionando ao aluno informaes que possibilitem uma permanente
reflexo de seu papel como agente transformador dos processos e atividades
de ensino, pesquisa cientfica e desenvolvimento tecnolgico. Outro objetivo
inconteste destes livros servir aos professores, como norteadores da definio
curricular de seus cursos.
Visando garantir a autonomia dos autores, e respectivas responsabilidades,
foi mantida a formatao original dos textos, inclusive as fotos, figuras, diagra-

Apresentao das organizadoras | 19

mas. Podem ocorrer, tambm, repeties de contedo em alguns captulos,


mas, a nosso ver, a retirada de partes j abordadas em captulos anteriores,
poderia descontextualizar o texto.
O pontap inicial deste sonho s foi possvel pelo incondicional apoio
dado pelo professor Andr Paulo da Silva Malho, pela dra. Isabel Brasil
Pereira, pessoa-chave desencadeadora do processo, e a dra. Tnia Cremonini
de Arajo Jorge, que apoiaram e incentivaram institucionalmente o projeto.
Agradecemos especialmente aos autores que abraaram este trabalho com muito entusiasmo e que possibilitaram a sua concretizao. E um carinho especial
para Josane Ferreira Filho pela organizao paciente de nossas reunies e
textos, a gratido das organizadoras e dos autores.
Agradecemos em especial aos renomados cientistas emritos da Fundao
Oswaldo Cruz, doutores Luiz Fernando Ferreira patrono da EPSJV e
Jos Rodrigues Coura, que nos deram a honra de apresentar esta coleo.
Esperamos, assim, contribuir para a sistematizao do conhecimento dos
leitores sobre os diferentes tpicos abordados nos captulos, apresentando
cada assunto de forma didtica e sinttica, e recomendando a consulta literatura especializada sempre que houver necessidade de aprofundamento do
conhecimento em determinados temas.
Etelcia Molinaro
Luzia Caputo
Regina Amendoeira

Protozoologia | 21

Captulo 1

Protozoologia
Maria Regina Reis Amendoeira
Danuza Pinheiro Bastos Garcia de Mattos
Joo Carlos de Arajo Carreira
Alba Valria Machado da Silva
Patrcia Riddell Millar Goulart

Introduo

A protozoologia o segmento da cincia que estuda os protozorios.


Protozoologia, do grego protos = primeiro + zoon = animal + logos = cincia.

Dentro da classificao dos seres vivos, o estudo do reino Protista ganha


importncia por incluir o sub-reino Protozoa,1 que engloba os protozorios:
Organismos providos de organelas membranosas variadas: ncleo, mitocndrias, aparelho de Golgi, lisossomas, vacolos, entre outras.
1

22 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

seres unicelulares, eucariotas, que apresentam organelas2 capazes de desempenhar funes em sua nutrio, locomoo e na reproduo de suas diferentes
formas. As organelas dos protozorios podem ser estticas ou dinmicas:
organelas estticas externas: membrana, pelcula,3 teca,4 lorica,5

parede cstica6

internas: axstilos7
organelas dinmicas (locomoo) pseudpodes8

flagelos9

clios10
Os protozorios podem ter habitat:11
aqutico vivem na gua do mar ou no fundo dos oceanos;
em gua doce, salobra ou poluda;
terrestre vivem no solo ou em matria orgnica
em decomposio.

Estruturas celulares (mitocndrias, aparelho de Golgi, ribossomas, entre outras) que, nos protozorios, diferenciam-se para desempenhar determinadas funes, as quais, no caso dos metazorios,
so de competncia de diferentes rgos.
3
Membrana delgada.
4
Envoltrio protetor de alguns protozorios.
5
Carapaa externa protetora de alguns protozorios.
6
Envoltrio que protege o cisto, de estrutura resistente.
7
Estrutura celular formada por microtbulos, encontrada em girdias e tricmonas.
8
Projees originadas por movimento do citoplasma que ocorrem em alguns protozorios.
9
Filamento protoplasmtico, muito mvel, utilizado na locomoo de alguns protozorios.
10
Formao mvel presente na superfcie de alguns protozorios e que os auxilia em sua locomoo nos fluidos que os circundam.
11
Tipo de lugar onde um organismo vive e se reproduz.
2

Protozoologia | 23

Os protozorios esto divididos em protozorios de vida livre e protozorios


parasitos:
os protozorios de vida livre, que formam colnias, podem apresentar
natao livre, ser ssseis12 ou ter elementos de ambas as categorias;
os protozorios parasitos vivem sobre (ectoparasitos) ou no ambiente
interno (endoparasitos) de algumas plantas e animais. Nesse ltimo caso,
podem parasitar desde outros protozorios at o homem.
Das mais de 60 mil espcies descritas no sub-reino Protozoa, metade so
fsseis, cerca de 25 mil so seres de vida livre e aproximadamente 10 mil
so parasitos de diferentes animais ou vegetais, mas apenas algumas dezenas
de protozorios tm o homem como hospedeiro. O sub-reino Protozoa
dividido em sete filos; quatro deles Microspora, Sarcomastigophora,
Apicomplexa e Ciliophora apresentam interesse mdico, por reunirem parasitos que podem ser patognicos para o ser humano ou para outros animais.
Filo Microspora
Dentre os protozorios patognicos que o filo agrupa, sabe-se que so
capazes de produzir esporos unicelulares contendo a forma infectante endoplasmstica em seu interior. Esse filo recentemente passou a apresentar interesse
mdico, a partir da descoberta de que seus integrantes podem vir a parasitar o
homem. Embora na maioria dos compndios esse filo esteja classificado como
protozorio, atualmente o grupo enquadrado na classe dos fungos. O filo
Microspora no ser abordado neste captulo.
Filo Sarcomastigophora
Rene os protozorios capazes de se locomoverem por flagelos (subfilo
Mastigophora) e aqueles capazes de emitir pseudpodes (subfilo Sarcodina).
12

Protozorio que adere diretamente ao substrato, sem pedculo ou haste de sustentao.

24 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Subfilo Mastigophora
Ordem: Kinetoplastida
Gneros: Trypanosoma e Leishmania
Subordem: Diplomonadina
Gnero: Giardia
Espcie: Giardia intestinalis
Ordem: Trichomonadida
Gnero: Trichomonas
Espcie: Trichomonas vaginalis
Subfilo Sarcodina
Ordem: Amoebida
Gneros: Entamoeba
Endolimax
Iodamoeba
Acanthamoeba
Hartmannella
Naegleria
Vahlkampfia
Filo Apicomplexa
So esporozorios que apresentam deslocamento por deslizamento (sem
pseudpodos, flagelos ou clios) determinado pela contrao de microtbulos
subpeliculares e pelo complexo apical de penetrao; todos os membros do
filo so parasitos obrigatrios, ou seja, apresentam alguma deficincia metablica e, por isso, dependem de um hospedeiro para sobreviver.

Protozoologia | 25

Ordem: Eucoccidiida
Gneros: Toxoplasma
Isospora
Sarcocystis
Cryptosporidium
Ordem: Hemosporidiida
Gnero: Plasmodium
Ordem: Piroplasmida
Gnero: Babesia
Filo Ciliophora
Assim chamados porque seu deslocamento determinado pelo batimento
de clios. Dentre os protozorios desse filo, a nica espcie que pode vir a
parasitar o homem o gnero Balantidium, espcie Balantidium coli, maior
protozorio parasito humano.
Ordem: Trichostomatida
Gnero: Balantidium

1. Protozorios do filo Sarcomastigophora, subfilo Mastigophora,


ordem Kinetoplastida, famlia Trypanosomatidae

A famlia Trypanosomatidae engloba oito gneros: Trypanosoma, Leishmania, Endotrypanum, Leptomonas, Herpetomonas, Crithidia, Blastocrithidia e
Phytomonas.
Os gneros Trypanosoma, Leishmania e Endotrypanum so representados
por organismos heterxenos, parasitos de vertebrados; em sua maioria, so
transmitidos por vetores hematfagos: artrpodes ou sanguessugas.

26 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Os gneros Leptomonas, Herpetomonas, Crithidia e Blastocrithidia so


representados por organismos monoxnicos, descritos originalmente como parasitos de insetos e outros invertebrados.
O gnero Phytomonas, como os trs primeiros, representado por organismos heterxenos, porm so parasitos de plantas, transmitidos por vetores
hempteros fitfagos.
Por serem capazes de causar graves doenas, os gneros Trypanosoma e
Leishmania so de grande importncia no que se refere sade humana e animal. Em virtude disso, veremos a seguir as principais caractersticas de algumas
das espcies de maior importncia pertencentes a esses dois gneros.

1.1 Gnero Trypanosoma

Nesse gnero, os parasitos so observados nos hospedeiros vertebrados


sob a forma tripomastigota; por causa da sua grande variabilidade, tm sido
agrupados pelas caractersticas de seus diversos hospedeiros vertebrados: tripanossomos de peixes, anfbios, rpteis, aves e mamferos.
Em relao aos tripanossomos de mamferos, diferentes subgneros foram
criados e includos em duas sees: Salivaria e Stercoraria.
A seo Salivaria se caracteriza por parasitos que evoluem na poro anterior do vetor e que so transmitidos por inoculao, atravs da picada. Nessa
seo esto includos quatro subgneros: Dutonella, Nannomonas, Trypanozoon e Pycnomonas.
A seo Stercoraria se caracteriza por parasitos que se desenvolvem na
poro posterior do tubo digestivo de seus vetores e pela transmisso ser feita
pela contaminao por meio de suas fezes. Nessa seo, foram includos trs
subgneros: Megatrypanum, Herpetosoma e Schizotrypanum.

Protozoologia | 27

1.1.1 Seo Stercoraria principal representante

A) Trypanosoma (Schizotrypanum) cruzi


o agente etiolgico da doena de Chagas em humanos ou da tripanossomase americana em animais.
a) Morfologia e biologia
Hospedeiros vertebrados: o homem e vrias espcies de mamferos silvestres e domsticos, inclusive o gamb.
Hospedeiros invertebrados: insetos (hempteros) hematfagos conhecidos
como triatomneos e popularmente chamados de barbeiros em virtude de
seus hbitos de picarem as pessoas na face. Os principais gneros de triatomneos transmissores (vetores) da doena de Chagas em nosso pas so Triatoma,
Rhodnius, Panstrogylus e Dipetalogaster.13
Morfologia
Tripomastigotas: so as formas responsveis pela transmisso natural do parasito; tm a forma de um C ou um S e um longo flagelo, que percorre,
aderido, todo o corpo do protozorio e que conta tambm com uma poro
livre, a qual emerge de sua extremidade anterior. Os tripomastigotas no tm
capacidade de multiplicao e quando isolados a partir dos barbeiros (triatomneos), so chamados de tripomastigotas metacclicos. Os tripomastigotas
metacclicos, aps serem eliminados nas fezes e na urina pelos triatomneos, so
responsveis pela infeco dos mamferos. Essas formas efetuam a invaso dos
tecidos do hospedeiro atravs das mucosas ou da pele lesionada. As formas
tripomastigotas, quando isoladas do sangue de mamferos, so chamadas de
tripomastigotas sangucolas ou circulantes. Ao serem ingeridas juntamente
com o sangue do hospedeiro vertebrado pelos triatomneos, so as principais
responsveis pela transferncia do parasito do mamfero para o inseto.
13

Ver o captulo Entomologia neste volume.

28 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 1. Desenho esquemtico da forma tripomastigota de Trypanosoma cruzi.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Figura 2. Esfregao sanguneo corado pelo Giemsa, com tripomastigota


de Trypanosoma cruzi (A), 1000X.
Foto: Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz.

Protozoologia | 29

Amastigotas: so as formas do parasito que fazem multiplicao intracelular obrigatria no hospedeiro vertebrado; tm formato arredondado ou
ovoide e no apresentam flagelo livre.

Figura 3. Desenho esquemtico da forma amastigota do Trypanosoma cruzi.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Epimastigotas: so as formas responsveis pela multiplicao do parasito


no tubo digestivo do vetor o hospedeiro invertebrado. Tm formato fusiforme e um longo flagelo, que percorre, aderido, todo o corpo do protozorio,
mas que tambm possui uma poro livre.

Figura 4. Desenho esquemtico da forma epimastigota do Trypanosoma cruzi.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

30 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 5. Formas epimastigotas (A) e tripomastigotas metacclicas (B) de


Trypanosoma cruzi em meio de cultura corado pelo Giemsa, 1000X.
Foto cedida pela Dra. Celeste Souza (Laboratrio de Imunomodulao
e Protozoologia/IOCFiocruz).

Ciclo biolgico do Trypanosoma (Schizotrypanum) cruzi


Depois de serem sugados por um triatomneo juntamente com o sangue de
um mamfero infectado, os tripomastigotas sangucolas iniciam, ainda no estmago do vetor, o processo de diferenciao para epimastigotas. Ao atingirem
o intestino mdio, as formas epimastigotas multiplicam-se por fisso binria,
dando origem a vrias geraes dessas formas. Grande quantidade de epimastigotas alcana a ampola retal e os tbulos de Malpighi do inseto. Nesses
locais, os epimastigotas, por meio de seus flagelos, aderem s paredes, iniciando um processo de metaciclognese diferenciao de epimastigotas em
tripomastigotas metacclicos.
A transmisso do T. cruzi do inseto para o hospedeiro mamfero ocorre
posteriormente, quando um triatomneo infectado se alimenta em outro mamfero ainda no exposto ao parasito. Durante ou logo aps o repasto sanguneo, os triatomneos tm como hbito defecar e urinar. Aps a picada, o
hospedeiro geralmente se coa, por causa da reao alrgica causada pelas

Protozoologia | 31

substncias presentes na saliva do vetor. desse modo que frequentemente


os parasitos so veiculados para algum local de pele lesionada ou para as
mucosas do hospedeiro.
Ao invadirem o organismo de um mamfero hospedeiro, os tripomastigotas
metacclicos penetram em clulas do local, mas tambm podem ser fagocitados por macrfagos. Uma vez no interior dessas clulas, os tripomastigotas se
diferenciam em amastigotas e iniciam um processo de multiplicao por fisso
binria. Aps vrios ciclos de multiplicao, as formas amastigotas iniciam a sua
diferenciao em tripomastigotas. Durante o processo, as clulas hospedeiras
so rompidas pela ao dos parasitos, e os tripomastigotas liberados atingem
a circulao sangunea, disseminando-se por todo o organismo. Essas formas
tripomastigotas presentes no sangue, chamadas tripomastigotas sangucolas, so
capazes de invadir macrfagos, fibras musculares esquelticas, cardacas e nervosas. Os tripomastigotas sangucolas tambm podem infectar os triatomneos.
Todo o processo desde a ingesto dos tripomastigotas sangucolas pelos
triatomneos at a liberao dos tripomastigotas metacclicos nas suas fezes pode
levar de 20 a 45 dias. Vale lembrar que o Trypanosoma cruzi possui vrias cepas
que podem apresentar diferenas nos padres de crescimento e diferenciao
celular, dependendo da espcie de triatomneo envolvida na infeco.

32 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 6. Ciclo biolgico do Trypanosoma (Schizotrypanum) cruzi.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Ciclo biolgico do T. cruzi no gamb (Didelphis spp)


No gamb, o T. cruzi apresenta um comportamento mpar: esse marsupial
o nico hospedeiro no qual o T. cruzi capaz de desenvolver todo o seu
ciclo, tanto o que ocorre nos mamferos quanto aquele que se d nos vetores. No gamb, o ciclo referente aos mamferos acontece no interior dos
vasos sanguneos, com a presena de tripomastigotas sangucolas, e tambm
em fibras cardacas e plexos neurais, onde ocorre a multiplicao das formas
amastigotas. O ciclo correspondente aos vetores ocorre na luz das glndulas
de cheiro do gamb, onde o parasito se multiplica na forma epimastigota
extracelularmente, diferenciando-se, tambm, em tripomastigota metacclico.
Apesar da importncia biolgica de tal ciclo, o nmero de infectados pelo
gamb no tem grande impacto do ponto de vista epidemiolgico.

Protozoologia | 33

Figura 7. Ciclo biolgico do Trypanosoma (Schizotrypanum) cruzi no gamb.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

b) Relao parasitohospedeiro
Habitat: sangue (extracelularmente), clulas do sistema fagoctico mononuclear (SFM), fibras musculares cardacas, esquelticas ou lisas e clulas do
sistema nervoso.
Aps a fase da infeco, ocorre a evoluo para a fase crnica denominada por alguns autores de fase indeterminada, pois uma fase latente
onde no h sintomatologia clnica , que pode evoluir para a fase crnica
sintomtica de 10 a 15 anos aps a fase aguda da infeco, ou a doena
pode permanecer assintomtica por toda a vida do paciente. Nessa fase, a
quantidade de parasitos no sangue muito baixa.
Como j mencionado anteriormente, a doena causada pelo T. cruzi nos
humanos chama-se doena de Chagas. Ela apresenta grande variabilidade em
seus quadros clnicos e tambm nos aspectos histopatolgicos. Em razo dos
sintomas, a doena de Chagas dividida em fase aguda e fase crnica. Na
fase aguda, o paciente pode apresentar chagoma de inoculao (cutneo)
ou sinal de Romaa (edema de plpebra), febre, hepatoesplenomegalia (fgado e bao aumentados) e miocardite. Na fase crnica, o indivduo pode

34 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

permanecer assintomtico ou seu quadro evoluir para cardiopatia chagsica


crnica, megaesfago ou megaclon. A cardiopatia chagsica, que pode levar
cardiomegalia aumento significativo do tamanho do corao , ocorre
basicamente por causa da destruio das fibras cardacas, com sua substituio
por tecido conjuntivo, o que prejudica a capacidade de contrao do rgo.
A destruio das clulas do corao responsveis pelo controle dos batimentos
(feixe de His) tambm leva a alteraes cardacas.
As formas conhecidas como megas caracterizam-se pelo aumento excessivo do esfago (megaesfago) ou do clon (megaclon). Essas formas so
provocadas pela destruio de fibras nervosas, principalmente parassimpticas,
que ocasionam descontrole dos movimentos peristlticos (disperistaltismo) e
levam ao aumento excessivo do rgo: no caso do esfago, pelo acmulo de
alimentos decorrente da dificuldade de deglutio; no caso do clon, pela
reteno do bolo fecal.
c) Diagnstico
Fase aguda
Mtodos parasitolgicos diretos
Pode-se fazer o exame direto do sangue utilizando-se o esfregao sanguneo, posteriormente fixado com metanol e corado por corantes derivados do
Romanowsky. J o mtodo de Strout consiste na centrifugao do sangue sem
a adio de anticoagulante e na observao do parasito entre as hemcias e
o soro. Com a utilizao dos mtodos citados acima, possvel observar as
formas tripomastigotas sangucolas do T. cruzi. Outro mtodo direto a puno de linfonodos, principalmente quando se observa enfartamento ganglionar
prximo ao chagoma de inoculao. Com essa metodologia, possvel observar as formas amastigotas em clulas do sistema fagoctico mononuclear por
exemplo, nos macrfagos.

Protozoologia | 35

Imunodiagnstico
O diagnstico sorolgico da infeco chagsica baseia-se na deteco de
anticorpos anti-T. cruzi das classes IgM (fase aguda) e IgG (fase crnica) no
soro do paciente. Os testes sorolgicos, em geral, apresentam variabilidade
na sensibilidade e na especificidade. No entanto, fatores como imunocompetncia do hospedeiro, qualidade do antgeno e dos reagentes e calibrao
dos instrumentos, entre outros, podem interferir no resultado do teste. Pode
ocorrer, inclusive, reao cruzada com soro de pacientes de reas endmicas
de leishmaniose. Alguns exemplos de mtodos para o imunodiagnstico de
T. cruzi so a reao de imunofluorescncia indireta (Rifi) e os testes imunoenzimticos, como o ELISA (do ingls Enzyme-Linked Immuno Sorbent
Assay), por exemplo.
Mtodos moleculares
O mtodo mais utilizado o da reao em cadeia da polimerase, com deteco do DNA do cinetoplasto (kDNA) do parasito por meio da utilizao
de amostras de sangue e/ou tecidos dos indivduos infectados.
Fase crnica
Mtodos parasitolgicos indiretos
Xenodiagnstico: tem por base a multiplicao das formas epimastigotas
no trato digestivo do triatomneo, permitindo sua deteco nas fezes ou na
urina dos insetos alimentados com sangue do paciente aps perodo de 1 a 3
meses. Existe ainda a opo do xenodiagnstico artificial, utilizado quando
no se pode praticar o xenodiagnstico natural e quando se objetiva pesquisar o parasito em outros lquidos, como o cefalorraquidiano, que, misturado
com o sangue, sugado pelos triatomneos. Para tanto, o sangue dos pacientes coletado com anticoagulante, mantido a 37C e oferecido aos insetos
atravs de uma membrana.

36 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Hemocultura: o isolamento do T. cruzi pode ser realizado em diferentes


meios de cultivo acelulares (NNN, LIT) que contenham hemina ou derivados
da hemoglobina. A hemocultura requer condies asspticas14 para a coleta e
o manuseio da amostra de sangue, sendo pouco prtica em trabalhos de campo. Outras desvantagens associadas a essa tcnica so o grande volume do
inculo que deve ser utilizado e o perodo de exames das culturas. As formas
observveis em hemocultura so as epimastigotas e as tripomastigotas. As percentagens de positividade obtidas na hemocultura convencional por diferentes
estudos so muito semelhantes quelas observadas no xenodiagnstico.
Imunodiagnstico
Por meio de imunofluorescncia indireta (Rifi) e teste imunoenzimtico de
reao (ELISA).
Diagnstico molecular
Reao em cadeia da polimerase (PCR).
e) Epidemiologia
Distribuio geogrfica
O T. cruzi encontrado somente no continente americano, desde o sul dos
Estados Unidos at o sul da Argentina e do Chile. No entanto, em algumas
reas nos Estados Unidos, por exemplo , embora a infeco j tenha sido
detectada em mamferos silvestres, a infeco humana no ocorre ou rara. A
infeco humana mais comum na Amrica do Sul, e os pases mais acometidos so Brasil, Argentina, Chile, Colmbia e Venezuela. A infeco por esse
protozorio ocorre basicamente em reas rurais e periurbanas pobres, onde o
tipo de moradia (barro, palha) favorece a colonizao por triatomneos.

14

Livre de contaminao microbiana.

Protozoologia | 37

Prevalncia
Segundo a Organizao Mundial da Sade (OMS) (2010), a doena
de Chagas atinge cerca de 10 milhes de pessoas no mundo, principalmente
na Amrica Latina, tendo causado, em 2008, mais de 10 mil mortes, com
uma incidncia de 300 mil novos casos ao ano. No Brasil, cerca de 2 milhes de pessoas esto infectadas.

Mecanismos de infeco
Para o homem, o principal mecanismo de infeco ativo cutneo, com a
penetrao das formas tripomastigotas metacclicas na pele lesionada, na mucosa
ou na conjuntiva, sempre mediante o contato com as fezes de triatomneos infectados, que ocorre durante a hematofagia, pois o inseto frequentemente defeca
sobre a pele do hospedeiro. Outro modo comum de infeco a transfuso
sangunea; pela transfuso possvel que um indivduo que nunca tenha tido contato com barbeiros por exemplo, indivduos de reas urbanas e que possuem
melhores condiesde moradia seja infectado. J foram descritos casos de
infeco transplacentria e de infeco por transplante de rgos. A infeco oral
pode ocorrer pela ingesto de alimentos contaminados com material infectante
fezes, urina e triatomneos triturados proveniente especialmente de triatomneos.
g) Profilaxia e controle
De maneira geral, a metodologia recomendada para o controle da doena
de Chagas est relacionada aos seguintes fatores:
controle dos triatomneos, com o uso de inseticidas nos esconderijos
dos insetos;
educao ambiental, com a melhoria das habitaes, para que os barbeiros no encontrem condies favorveis de desenvolvimento;
educao sanitria visando esclarecer a populao sobre a doena, procedimento fundamental para que ela busque medidas prticas a fim de
evitar a infeco;

38 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

conscientizao dos responsveis por bancos de sangue, a fim de evitar


a transmisso por meio de transfuso sanguinea: realizao de testes sorolgicos nos candidatos a doadores e quando isso no for possvel, ou
no for confivel a triagem sorolgica dos doadores, ou, ainda, em regies
onde a prevalncia da endemia seja elevada, adicionar substncias tripanossomicidas s partidas de sangue destinadas transfuso;
controle da transmisso congnita: todo recm-nascido de me com
sorologia positiva para T. cruzi deve ser examinado imediatamente aps
o nascimento para pesquisa de IgM anti-T. cruzi; no caso de resultado
positivo, o recm-nascido deve ser tratado imediatamente;
controle de transplantes de rgos: doador e receptor devem ser examinados sorologicamente. Sendo o primeiro positivo e o segundo susceptvel, o ideal medicar o doador durante os 10 dias que precedem a
cirurgia e o receptor, nos 10 dias seguintes ao ato cirrgico. No sendo
isso possvel, o receptor deve ser tratado como caso agudo da doena.
1.1.2 Seo Salivaria principais representantes

A) Trypanosoma (Trypanozoon) brucei


O Trypanosoma (Trypanozoon) brucei apresenta trs subespcies: Trypanosoma brucei gambiense, Trypanosoma brucei rhodesiense e Trypanosoma
brucei brucei. T. brucei gambiense e T. brucei rhodesiense so os agentes
etiolgicos da doena do sono, descrita em seres humanos, ao passo que
o Trypanosoma brucei brucei causa a tripanossomase africana, ou nagana,
doena descrita em animais.
a) Morfologia e biologia
Hospedeiros vertebrados: para Trypanosoma brucei gambiense e Trypanosoma brucei rhodesiense, o homem e vrias espcies de mamferos silvestres

Protozoologia | 39

e domsticos; para Trypanosoma brucei brucei, vrias espcies de mamferos


silvestres e domsticos.
Hospedeiros invertebrados: insetos (dpteros) vetores hematfagos, do
gnero Glossina, conhecidos como glossindeos e popularmente chamados
de mosca ts-ts.
Morfologia
Tripomastigotas: so as principais formas responsveis pela transmisso
do parasito. Tm formato em S e possuem flagelo, que percorre, aderido,
todo o corpo do protozorio e que apresenta tambm uma poro livre curta,
a qual emerge de sua extremidade anterior. Os tripomastigotas, quando presentes no intestino mdio das moscas ts-ts (glossindeos), tm capacidade
de multiplicao, sendo, nesse caso, chamados de tripomastigotas procclicos. J nas glndulas salivares das moscas ts-ts, os tripomastigotas no tm
capacidade de multiplicao; nesse caso, so chamados de tripomastigotas
metacclicos. Os tripomastigotas metacclicos so responsveis pela infeco
dos mamferos, aps serem introduzidos na corrente sangunea juntamente com
a saliva quando a mosca se alimenta, mediante a insero da probscide na
pele do hospedeiro.
As formas tripomastigotas encontradas nos mamferos podem ser observadas no sangue, na linfa e no fluido espinhal. Quando observados nos mamferos, os tripomastigotas do T. brucei tambm apresentam diferenas morfolgicas e podem ser descritos como formas finas ou formas largas e curtas. As
formas finas alcanam 30m15 ou mais de comprimento e so responsveis
pela multiplicao do parasito nesses hospedeiros; as formas largas e curtas,
que no apresentam a poro livre do flagelo, com comprimento de 15m,
so responsveis pela transferncia do parasito do mamfero para o inseto.

15

m = micrmetro

40 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 8. Desenho esquemtico das formas tripomastigotas do T. brucei:


A) forma fina; B) forma larga; C) forma procclica; D) forma metacclica.
Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Epimastigotas: so as formas responsveis pela multiplicao do parasito


nas glndulas salivares das moscas ts-ts.

Figura 9. Desenho esquemtico da forma epimastigota do T. brucei.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Ciclo biolgico do Trypanosoma brucei


Durante o repasto sanguneo, a mosca ts-ts (glossina) inocula tripomastigotas metacclicos na pele do hospedeiro mamfero. Os parasitos entram no
sistema linftico e, posteriormente, na corrente sangunea. No hospedeiro
mamfero, essas formas metacclicas se diferenciam em formas tripomastigotas

Protozoologia | 41

sangucolas finas ou largas. As formas tripomastigotas sangucolas finas se


multiplicam por fisso binria e so carreadas para outras partes do corpo,
podendo ser encontradas na linfa e no fluido espinhal, entre outros.
As glossinas se infectam quando ingerem, durante o seu repasto sanguneo em um hospedeiro infectado, formas tripomastigotas sangucolas largas. No
intestino mdio das moscas, os parasitos se diferenciam em tripomastigotas
procclicas, os quais tambm se multiplicam por fisso binria e saem do intestino, diferenciando-se em epimastigotas. As formas epimastigotas migram,
ento, para as glndulas salivares, aderindo-se s microvilosidades das clulas e
iniciando, em seguida, um processo de multiplicao por fisso binria. Aps
vrios ciclos de multiplicao, parte dessas formas epimastigotas se diferencia
em tripomastigotas metacclicas. O ciclo na ts-ts dura em mdia trs semanas.

Figura 10. Ciclo biolgico do Trypanosoma brucei.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

42 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

b) Relao parasitohospedeiro
A infeco pode ocorrer em trs estgios:
1 estgio pode haver o desenvolvimento de um cancro tripanossmico no local da picada, conhecido como cancro de inoculao, e inchao
edematoso, que desaparece aps trs semanas em mdia;
2 estgio denominado estgio hemolinftico, apresenta os seguintes
sintomas: febre, tremores, dores musculares e articulares, linfadenopatia (gnglios linfticos aumentados), mal-estar, perda de peso, anemia e trombocitopenia (reduo do nmero de plaquetas no sangue);
3 estgio conhecido como estgio meningoenceflico, nele o parasito
invade o sistema nervoso central, ocasionando dores de cabea, sonolncia,
convulses epilpticas e apatia que progride para o coma.
O curso da infeco muito mais grave para o T. b. rhodesiense do que
para o T. b. gambiense. A doena pode levar os indivduos morte num
perodo mdio de, para o T. b. gambiense, seis meses a seis anos e, para o
T. b. rhodesiense, de at seis meses.
Acredita-se que a patologia da doena do sono esteja relacionada a mecanismos imunolgicos.
c) Diagnstico laboratorial
Mtodos parasitolgicos diretos
Pode-se fazer o exame direto de amostras provenientes do sangue, do
fluido do cancro, do aspirado de linfonodos, da medula ssea e, no estgio
final da infeco, do lquido cefalorraquidiano. Com o exame a fresco dessas
amostras, observa-se a motilidade do parasito; esse material pode ser fixado
posteriormente com metanol e corado pelo Giemsa para visualizao das
formas tripomastigotas.

Protozoologia | 43

Mtodos parasitolgicos indiretos


Inoculao do sangue em animais de laboratrio (ratos e camundongos)
para isolar o parasito; esse mtodo, porm, tem seu uso limitado quando se
trata do tipo 1 do T. b. gambiense, pois seu crescimento muito lento nesses
animais.
Imunodiagnstico
So utilizados os mtodos Rifi, de hemaglutinao e ELISA.
d) Epidemiologia
A tripanossomase africana uma zoonose envolvendo animais, silvestres
ou domsticos, e o homem.
A doena do sono, que atinge os humanos no continente africano e que
pode levar morte quando no tratada, causada pelos parasitos T. b. gambiense tipo 1 (parte oeste da frica e frica central), T. b. gambiense tipo
2 (Costa do Marfim) e T. b. rhodesiense (poro leste da frica) essa
ltima, a forma mais grave da doena. J a subespcie T. b. brucei (frica
tropical) atinge somente os animais, causando uma doena denominada nagana. Essa infeco se restringe aos pases africanos, porque a transmisso da
infeco depende somente das moscas ts-ts, presentes apenas na frica
subsaariana.
Segundo a OMS, tm sido reportados em mdia 20 mil novos casos ao
ano, com uma prevalncia de 50 mil a 70 mil casos (Organizao Mundial
da Sade, 2010). So raras as infeces entre os viajantes e a maioria delas
causada pela subespcie T. b. rhodesiense.
A epidemiologia da doena do sono causada por T. b. gambiense tem como
caracterstica o fato de ser ela essencialmente rural; os humanos se infectam
ao se aproximarem de cursos de gua onde h a presena da mosca. J T. b.
rhodesiense uma zoonose de animais selvagens que atinge o homem quando
ele entra em contato com o foco epizotico, tornando-se hospedeiro acidental.

44 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

A transmisso da infeco se d principalmente por meio da picada da


mosca ts-ts infectada, podendo ocorrer, raramente, de forma congnita,
por transfuso de sangue e por acidente de laboratrio.
e) Profilaxia e controle
Uma das medidas para a profilaxia e o controle da infeco a reduo
da exposio da populao a reas onde ocorre a presena da glossina, ou
seja, lugares prximos de rios e matas. Em reas de risco, os indivduos devem
usar roupas que cubram todo o corpo, de tecido pesado e com cores neutras, pois as moscas ts-ts so atradas pelo movimento e por cores fortes.
Outras medidas de controle so o diagnstico e o tratamento dos pacientes
e o controle vetorial.

B) Trypanosoma (Herpetosoma) rangeli


a) Morfologia e biologia
Parasita o homem e grande nmero de mamferos, mas no causa doena.
Assim como o T. cruzi, o T. rangeli transmitido ao hospedeiro vertebrado
por triatomneos, com a diferena de que o T. rangeli transmitido pela picada principalmente de hempteros do gnero Rhodnius. Os parasitos podem
ser isolados da corrente sangunea alguns meses aps a infeco.
Morfologicamente, a forma tripomastigota sangucola do T. rangeli delgada e de extremidade bastante afilada, assemelhando-se do T. cruzi; ele
apresenta um cinetoplasto de formato arredondado, porm bem pequeno e
pouco evidente.

Protozoologia | 45

b) Epidemiologia
Tem distribuio geogrfica sobreposta (simpatria) ao T. cruzi. O T. rangeli
j foi encontrado no Brasil, Venezuela, Colmbia, Panam, El Salvador, Costa
Rica, Guatemala e Honduras, sempre em situaes nas quais o protozorio no
causava doena sintomtica no homem.
Em reas onde o T. cruzi e o T. rangeli esto presentes, os testes sorolgicos podem apresentar resultados falsos positivos, pois existe a possibilidade
de reaes cruzadas. Para distinguir essas duas protozooses, recorre-se ao
xenodiagnstico uma vez que o T. rangeli coloniza as glndulas salivares do
vetor , cultura tecidual ou, ainda, s tcnicas de biologia molecular, como
a reao em cadeia da polimerase.

1.2 Gnero Leishmania

A) Leishmania spp (leishmaniose tegumentar e visceral)


a) Morfologia e biologia
As leishmanioses constituem um grupo de doenas, nas quais esto envolvidas mais de vinte espcies, causadas por parasitos intracelulares do gnero
Leishmania. So protozorios digenticos16 e que apresentam duas principais
formas evolutivas: promastigota e amastigota; ambas se multiplicam por diviso binria e desenvolvem-se, respectivamente, no trato digestivo do inseto
vetor ou em meios de cultura acelulares e no interior de clulas do sistema
fagoctico mononuclear dos hospedeiros mamferos.
Hospedeiros vertebrados: o homem, roedores, candeos silvestres e domsticos, marsupiais, equinos, preguias e felinos, entre outros.
Hospedeiros invertebrados: insetos flebotomneos dos gneros Phlebotomus, no Velho Mundo, e Lutzomyia e Psychodopygus, no Novo Mundo.
16

Parasito que necessita de dois ou mais hospedeiros para a realizao de seu ciclo de vida.

46 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Habitat: clulas pertencentes ao sistema fagoctico mononuclear.


Morfologia
Forma amastigota: forma intracelular observada no hospedeiro vertebrado;
possui formato ovoide ou esfrico, ncleo arredondado, cinetoplasto em forma de basto, reto ou curvo, sem flagelo livre.

Figura 11. Desenho esquemtico da forma amastigota de Leishmania spp.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Figura 12. Amastigotas de Leishmania: material de medula ssea corado


pelo mtodo May-GrunwaldGiemsa, 1000X.
Foto cedida pela Dra. Celeste Souza (Laboratrio de Imunomodulao e Protozoologia/IOCFiocruz).

Protozoologia | 47

Figura 13. Amastigotas de Leishmania: imprint de leso tegumentar,


corado pelo mtodo May-GrunwaldGiemsa, 1000X.
Foto cedida pela Dra. Celeste Souza (Laboratrio de Imunomodulao e Protozoologia/IOCFiocruz).

Forma promastigota: observada no tubo digestivo do hospedeiro invertebrado e em meio de cultura acelular. Tem formato fusiforme ou piriforme,
ncleo arredondado, cinetoplasto em forma de basto e flagelo exteriorizado
na poro anterior do parasito.

Figura 14. Desenho esquemtico da forma promastigota de Leishmania spp.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

48 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 15. Formas promastigotas de Leishmania spp em meio de cultura,


1000X: A) ncleo; B) cinetoplasto; C) flagelo.
Foto cedida pela Dra. Celeste Souza (Laboratrio de Imunomodulao e Protozoologia/IOCFiocruz).

Ciclo biolgico da Leishmania spp


A transmisso da leishmaniose ocorre no momento do repasto sanguneo
do vetor, com a inoculao de formas promastigotas metacclicas, fagocitadas
por macrfagos teciduais, na derme do hospedeiro mamfero. No interior dos
macrfagos, os promastigotas sofrem alteraes morfolgicas e bioqumicas,
resultando nas formas amastigotas, e se inicia o processo de reproduo por
diviso binria no interior dos fagolisossomas. Posteriormente, aps o rompimento da clula hospedeira, os amastigotas so liberados, disseminando-se
no organismo do hospedeiro, mediante a fagocitose por outros macrfagos,
clulas dendrticas e fibroblastos.
Nos flebotomneos, o ciclo do parasito tem incio no momento do repasto sanguneo das fmeas, quando so ingeridos amastigotas de mamferos
infectados. No intestino do flebotomneo, os parasitos se diferenciam na
forma promastigota, dando incio a vrios ciclos de multiplicao por diviso
binria. Com isso, o grande nmero de parasitos acaba determinando a obstruo mecnica das partes altas do tubo digestivo do inseto, e isso dificulta
a sua ingesto de sangue, levando-o a picar mais vezes para completar a sua

Protozoologia | 49

alimentao. As formas promastigotas tornam-se infectantes por volta do


stimo dia, estando aptas a prosseguir no ciclo evolutivo quando novamente
o vetor se alimente de sangue.

Figura 16. Ciclo evolutivo da Leishmania spp.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

b) Leishmnias e leishmaniose
Do ponto de vista clnico, as leishmanioses do Novo Mundo se dividem
em dois grandes grupos: tegumentar (cutnea) e visceral.
Leishmaniose tegumentar
Os parasitos do gnero Leishmania induzem respostas complexas no hospedeiro vertebrado, efetuadas e/ou moduladas pelo sistema imune do mesmo.
Principais formas cutneas no Novo Mundo
A) Leishmania (Viannia) braziliensis
Tem ampla distribuio no Brasil, na Venezuela, na Guiana Francesa e na
Amrica Central. encontrada em reas de colonizao recente ou antiga,

50 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

e, nessas ltimas, o ciclo de transmisso est associado a animais domsticos como ces, equinos e mulas , e a sinantrpicos como roedores. A
ocorrncia de casos humanos est relacionada ocupao desordenada na
periferia dos grandes centros urbanos ou aos desmatamentos. As espcies
vetoras mais comuns so Lutzomyia intermedia, L. whitmani e Psychodopygus
wellcomei.
B) Leishmania (Viannia) guyanensis
Ocorre em territrios da Venezuela, na Guiana Francesa, no Suriname e no
Brasil, podendo ser observada na Calha Norte da Amaznia, principalmente
em reas de desmatamento e de colonizao recente. O ciclo epidemiolgico
est relacionado a alguns hospedeiros silvestres, tais como a preguia, o tamandu, marsupiais e roedores; os casos humanos ocorrem com a invaso da
mata pelo homem, com finalidades de desmatamento ou agricultura. As espcies vetoras mais comuns so Lutzomyia umbratilis, L. whitmani e L. anduzei.
C) Leishmania (Leishmania) amazonensis
Ocorre na Colmbia, no Panam e no Brasil, onde observada na Bacia Amaznica e nos estados do Maranho, Bahia, Minas Gerais, Gois e
Rio de Janeiro. Seu ciclo epidemiolgico silvestre, envolvendo roedores
silvestres e marsupiais como hospedeiros. A infeco no homem pouco
frequente. Seu vetor Lutzomyia flaviscutellata.
D) Leishmania mexicana
Ocorre no Mxico, na Guatemala e em Belize, como zoonose florestal.
Seu ciclo epidemiolgico silvestre, sendo os roedores os principais reservatrios. A lcera dos chicleros, como conhecida, uma doena ocupacional, visto que a populao mais atingida a dos trabalhadores extratores
de chicle. As espcies vetoras mais comuns so Lutzomyia flaviscutellata e
Lutzomyia panamensis.

Protozoologia | 51

Principais formas cutneas no Velho Mundo


A) Leishmania major
Ocorre na frica e na sia. Conhecida como leishmaniose cutnea mida,
esse tipo de Leishmania raramente afeta o homem. Seu ciclo zoontico,
envolvendo roedores silvestres como reservatrios. A principal espcie vetora
Phlebotomus papatasi.
B) Leishmania tropica
Ocorre na Europa, na frica e na sia. Possui caractersticas antroponticas,
ou seja, transmitida de homem a homem pelo inseto vetor. A principal
espcie vetora Phlebotomus sergenti.
Leishmaniose visceral
A relao parasitohospedeiro pode levar a amplo espectro clnico, que
vai desde infeces assintomticas (leishmaniose visceral subclnica) com
ausncia de sintomatologia, mas presena de anticorpos para o parasito at
formas mais graves, que culminam com o bito. Nos quadros mais graves, a
progresso da doena geralmente insidiosa, com perodos de incubao que
levam meses ou anos.
Forma visceral no Novo Mundo
A) Leishmania infantum chagasi
Ocorre nas Amricas. Possui um ciclo domstico no qual, alm do
homem, o co o principal reservatrio envolvido e um ciclo silvestre
envolvendo candeos silvestres e marsupiais. As espcies vetoras mais comuns
so Lutzomyia longipalpis, L. evansi e L. cruzi.
Formas viscerais no Velho Mundo
A) Leishmania donovani
Ocorre na frica Oriental, na ndia e na China. A L. donovani caracteriza-se por ser uma antroponose. Em cerca de 10% dos casos, os pacien-

52 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

tes desenvolvem uma sndrome denominada leishmaniose drmica ps-calazar


(PKDL, do ingls post - kala.azar.dermal leishmaniasis). A principal espcie
vetora Phlebotomus argentipes.
B) Leishmania infantum
Ocorre na frica Ocidental e Central, no Oriente Mdio, na China e
no Mediterrneo. A L. infantum acomete principalmente o co e crianas
abaixo de 5 anos, e, em contraste com L. donovani, o nvel de infeco em
flebotomneos geralmente baixo. A transmisso acontece essencialmente
no ambiente rural, e os ces so considerados os principais reservatrios. As
principais espcies vetoras so Phlebotomus argentipes e P. perniciosus.
Sintomatologia
As leishmanioses consistem em quatro principais sndromes clnicas:
leishmaniose cutnea, leishmaniose mucocutnea, leishmaniose visceral e
leishmaniose drmica ps-calazar.
Leishmaniose cutnea: no local da picada surge uma ferida na qual pode
desenvolver-se um processo necrtico ou uma lcera, que costumam curarse espontaneamente. As principais espcies responsveis pela leishmaniose
cutnea no Velho Mundo so L. major e L. tropica; as principais espcies responsveis pela leishmaniose cutnea no Novo Mundo so Leishmania
(Viannia) braziliensis, L. (V.) guyanensis, L. mexicana e L. (L.) amazonensis.
L. (L.) amazonensis um parasito que normalmente causa leishmaniose cutnea, porm, em alguns indivduos surgem leses mltiplas difusas, com grande
quantidade de parasitos. Esse tipo de leishmaniose, a leishmaniose cutnea
difusa, conhecido como forma anrgica da doena.
Leishmaniose mucocutnea: os pacientes apresentam ulceraes destrutivas e desfigurantes nas mucosas oral e nasal; em geral, no ocorre cura espontnea. As leses so causadas por metstases que migram por via hematognica. Essas leses podem aparecer meses ou anos aps o primeiro episdio

Protozoologia | 53

da leishmaniose cutnea ocasionada por L. (V.) braziliensis.


Leishmaniose visceral: a sndrome clnica mais grave das leishmanioses
e, quando no tratada, pode levar morte. Os pacientes podem apresentar
febre, cansao e perda de peso, alm de aumento de linfonodos, do fgado
e do bao. As espcies responsveis so L. (L.) infantum, L. (L.) donovani
e L. (L.) chagasi.
Leishmaniose drmica ps-calazar: uma sequela que costuma aparecer
em mdia dois anos depois da cura completa, aps o tratamento, da leishmaniose visceral. Caracteriza-se por leses nodulares, com grande quantidade de
amastigotas. A espcie responsvel L. (L.) donovani.
c) Diagnstico
Leishmaniose tegumentar
Mtodos diretos (evidenciao do parasito)
Bipsia de leses cutneas: com a amostra retirada da leso, realiza-se o
imprint em lmina, o qual fixado posteriormente com metanol e corado pelo
Giemsa, Leishman ou Pantico.17 Tambm possvel fazer a histopatologia do
material. A utilizao dessa tcnica permite observar as formas amastigotas.
Puno da borda inflamada: o material processado da mesma forma que
no imprint. A utilizao dessa tcnica permite observar as formas amastigotas.
uma tcnica pouco utilizada na rotina diagnstica.
Meio de cultura (cultivo em meios acelulares)
Semear em meio apropriado NNN, LIT, BHI ou Schneider material
obtido de puno ou bipsia. Manter na temperatura de 24 a 27C e
No mtodo pantico utilizam-se corantes capazes de evidenciar todas as estruturas histolgicas
existentes no material examinado.

17

54 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

observar semanalmente, por quatro semanas, em microscpio ptico. A utilizao dessa tcnica permite observar as formas promastigotas. uma tcnica
pouco utilizada na rotina diagnstica.
Inoculao em animal de laboratrio
Inoculao do material obtido de puno ou bipsia por via subcutnea
ou intradrmica em hamster. A inoculao de animais, embora no tenha aplicao prtica para fins de diagnstico imediato, pode ser til para o isolamento do parasito visando sua caracterizao e aos estudos epidemiolgicos. A
utilizao dessa tcnica permite observar as formas amastigotas. uma tcnica
pouco utilizada na rotina diagnstica.

Mtodos indiretos
Imunolgicos
Teste intradrmico: uma reao de hipersensibilidade celular retardada
utilizada no diagnstico da leishmaniose tegumentar, porm indica somente a
reatividade aos antgenos utilizados; tem sido tambm empregado no controle
da cura.
Pesquisa de anticorpos sricos: as tcnicas mais utilizadas so a reao de
imunofluorescncia indireta (Rifi) e o teste imunoenzimtico ELISA.
Moleculares
Reao em cadeia da polimerase: utilizada para deteco do kDNA
(DNA do cinetoplasto) do parasito, por meio de amostras de sangue e/ou
tecidos de pacientes infectados.

Protozoologia | 55

Leishmaniose visceral
Mtodos diretos (evidenciao do parasito)
Aspirado (puno) de material do bao, medula ssea ou linfonodo:
com qualquer dessas amostras realizado o esfregao em lmina, posteriormente fixado com metanol e corado pelo Giemsa, Leishman ou Pantico. A
utilizao desse mtodo permite observar as formas amastigotas.
Bipsia de fgado ou bao: imprint e/ou histopatologia para observao
das formas amastigotas. A bipsia de bao ou de fgado um procedimento
de elevado risco que s deve ser realizado em condies especiais e por
mdicos.
OBS.: Embora de maior simplicidade e menor risco para o paciente,
o material de medula ssea, coletado atravs de puno do esterno,
da tbia ou da crista ilaca, tambm deve ser coletado por mdicos, em
ambiente com condies adequadas.
Esfregaos do material biolgico coletado: devem ser feitos em papel de
nitrocelulose, visando ao diagnstico por PCR.
Meio de cultura (cultivo em meios acelulares)
Semear em meio apropriado NNN, LIT, BHI, Schneider material
obtido de puno ou bipsia. Manter entre as temperaturas de 24 a 27C
e observar semanalmente, por quatro semanas, em microscpio ptico. A
utilizao dessa tcnica permite observar as formas promastigotas.
Inoculao em animal de laboratrio
Inoculao do material obtido de puno ou bipsia por via intraperitoneal em hamster. A utilizao dessa tcnica permite observar as formas
amastigotas. Essa metodologia, embora no tenha aplicao prtica para fins

56 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

de diagnstico imediato, pode ser til para o isolamento do parasito, visando


caracterizao da Leishmania spp.
Mtodos indiretos
Imunolgicos
Pesquisa de anticorpos sricos: so utilizados os mtodos Rifi (os ttulos
sorolgicos costumam ser mais altos na leishmaniose visceral) e ELISA.
Antgenos recombinantes: tm sido usados nos testes imunoenzimticos e
em testes rpidos de dip stick, para diagnstico de campo. Entre eles, temos
o K39, um teste altamente especfico na deteco de indivduos na fase
aguda da infeco.
Moleculares
PCR: deteco do kDNA (DNA do cinetoplasto) do parasito, utilizando amostras de sangue e/ou tecidos de pacientes infectados.
d) Epidemiologia
A leishmaniose acomete mais de 12 milhes de pessoas em 88 pases;
calcula-se que cerca de 350 milhes de indivduos encontrem-se em situao
de risco. A reemergncia das leishmanioses provavelmente consequncia
de novas caractersticas epidemiolgicas, ocasionadas por fluxos migratrios,
alteraes antrpicas no ambiente, participao de novas espcies vetoras,
bem como de reservatrios secundrios, e ocupaes desordenadas na periferia das grandes cidades. Em adio a esses fatores, a ocorrncia de doenas
imunossupressoras, tais como a Aids, e de outras situaes que levam imunossupresso transplantes, drogas e desnutrio, muito comuns em pases
do Terceiro Mundo e em desenvolvimento tm levado ao aparecimento de
formas clnicas atpicas nos indivduos com leishmaniose, pois conhecido o
comportamento oportunista desse protozorio.
A epidemiologia da leishmaniose visceral americana vem se alterando ao

Protozoologia | 57

longo dos tempos. Inicialmente, a doena mantinha um perfil rural, mas de


transmisso peridomiciliar, sendo as crianas as mais acometidas. Nos ltimos
vinte anos, verificou-se grande emigrao de pessoas de reas rurais para reas
urbanas. Essas pessoas frequentemente se instalam na periferia das grandes
cidades, lugares de crescimento rpido e desordenado, e trazem consigo animais domsticos, o que contribui para o processo de urbanizao da doena.
Ao serem criados no peridomiclio, esses animais propiciam a domicializao
de L. longipalpis; consequentemente, a densidade desse vetor pode alcanar
nveis bastante elevados nas habitaes humanas e em criadouros de animais.
Aos poucos, a doena passou a adquirir caracterstica periurbana e, hoje, se
encontra em plena urbanizao, estando presente em bairros urbanizados de
grandes cidades.
Atualmente a epidemiologia da leishmaniose tegumentar americana (LTA)
pode apresentar dois padres epidemiolgicos distintos:
surtos epidmicos, quando ocorrem desmatamentos e explorao da
mata por ao antrpica;18 nesse caso, a LTA fundamentalmente uma
zoonose de animais silvestres que pode acometer o homem quando ele
entra em contato com os focos zoonticos.
surtos relacionados ao fluxo migratrio e s ocupaes desordenadas na
periferia dos grandes centros urbanos, nos quais animais domsticos por
exemplo, ces e equinos e tambm sinantrpicos por exemplo, roedores podem ter papel importante como hospedeiros do parasito.
Segundo o Ministrio da Sade, a leishmaniose visceral endmica no
pas, ocorrendo surtos com alguma frequncia. A protozoose est presente
em 19 estados brasileiros, sendo que, em 2005, dos 3.203 casos notificados, a maior incidncia foi observada no Nordeste (55,5% do total
de casos), seguido pela regio Sudeste (21,5%), regio Norte (16%)
e, finalmente, regio Centro-Oeste (7%). Tm sido registrados em mdia
18

Por ao do homem.

58 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

cerca de 3.500 casos por ano, com uma taxa de letalidade que, em algumas
regies, atinge 10%.
e) Profilaxia e controle
Muitas vezes, a profilaxia e o controle das leishmanioses so de difcil execuo. preciso proceder ampla anlise local da epidemiologia da doena
a fim de avaliar a utilizao de medidas profilticas e de controle, quando
viveis. As estratgias de controle utilizadas no Brasil devem estar integradas
e focadas no diagnstico e tratamento dos casos humanos, em inquritos
sorolgicos, na eliminao de ces soropositivos, no manejo ambiental e no
controle qumico para a reduo da espcie vetora.
Combate ao flebotomneo: algumas medidas que podem ser adotadas so
uso de inseticidas no ambiente (fumac) em reas endmicas urbanas; uso de
repelentes ao entrar na mata; uso de telas de malha fina, impedindo a entrada
do vetor no domiclio. Em relao ao manejo ambiental, evitar desmatamentos
e construes prximas de reas de florestas.
Controle de reservatrios: segundo a Organizao Mundial da Sade
(2010), ces comprovadamente parasitados por Leishmania chagasi devem
ser submetidos eutansia. Atualmente outras medidas de controle tambm
tm sido utilizadas, tais como borrifao de inseticidas nos cachorros, uso de
coleiras com deltametrina e vacinao dos ces, porm algumas dessas estratgias exigem ainda maiores estudos.

Protozoologia | 59

2. Protozorios do filo Sarcomastigophora, subfilo Mastighopora,


ordem Diplomonadida

A) Giardia lamblia
a) Morfologia e biologia
A Giardia lamblia, tambm conhecida como Giardia duodenalis e Giardia
intestinalis, pertence ao filo Sarcomastigophora e ao subfilo Mastigophora.
So parasitos do intestino delgado de uma srie de mamferos, incluindo o
homem, no qual pode causar diarreia aguda e crnica. Anteriormente acreditava-se que homens e outros animais eram infectados por espcies diferentes,
mas atualmente h uma tendncia a se crer tratar-se de uma mesma espcie
que pode parasitar homens, ces, gatos e mais uma srie de outros mamferos.
Existem variaes genticas dentro do gnero e da espcie G. lamblia. Diferenas dos isolados19 influenciam diretamente a especificidade ao hospedeiro, crescimento, desenvolvimento, virulncia, antigenicidade e sensibilidade
a drogas. Vrios estudos sugerem o risco de transmisso zoontica, ou seja,
entre homens e animais.
Morfologia
Os trofozotas so piriformes,20 apresentam simetria bilateral e dois ncleos
anteriores. Sua poro dorsal convexa, e a ventral, cncava com um grande
disco suctorial21 em sua metade anterior que facilita a adeso do protozorio
s clulas do epitlio intestinal. Como estrutura de locomoo, apresentam
quatro pares de flagelos (dois anteriores, dois laterais, dois ventrais e dois
posteriores), que se originam de blefaroplastos.22 H dois axonemas paralelos
que vo de sua extremidade anterior at a extremidade posterior em dois
blefaroplastos. Abaixo do disco suctorial esto uma ou duas estruturas curvas,
Grupo de protozorios obtidos de um mesmo hospedeiro.
Forma de pera.
21
Tambm chamado de disco ventral ou disco adesivo.
22
Corpsculo basal do flagelo.
19
20

60 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

em forma de vrgulas, intensamente coradas, chamadas de corpos parabasais


ou corpos medianos. No h citstoma. Seu tamanho varia de 9 a 20 m
mais comumente tm de 10 a 18 m de comprimento por 5 a 10 m
de largura.
Os cistos possuem formato ovalado, elptico ou mais raramente esfrico,
so refringentes, de parede bem fina, com tamanho variando de 8 a 14 m
de comprimento por 6 a 10 m de largura. Apresentam as mesmas estruturas intracitoplasmticas que os trofozotas corpos parabasais, ncleos, axonemas , em mesmo nmero ou, quando o cisto est maduro, duplicadas.

Figura 17. Giardia lamblia: A) trofozota; B) cisto.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Figura 18. Ciclo biolgico da Giardia lamblia.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Protozoologia | 61

As formas trofozotas encontram-se aderidas, por meio de seu disco suctorial, s clulas do epitlio intestinal do hospedeiro. Nesse local, utilizam
produtos da digesto do hospedeiro para sobreviver. A multiplicao ocorre
por diviso binria longitudinal. Alguns trofozotas sofrem encistamento: recolhem seus flagelos, encurtam o corpo e formam uma parede ao seu redor.
Os cistos so eliminados para o meio ambiente nas fezes do hospedeiro.
Essas estruturas resistem por cerca de duas semanas em condies favorveis,
permanecendo viveis para infectar novos hospedeiros.
A infeco ocorre por meio da ingesto de cistos, principalmente por
contaminao da gua e de alimentos. No intestino delgado (criptas do duodeno) ocorre o desencistamento, que d origem a dois trofozotas.

b) Patogenia e manifestaes clnicas
A presena dos trofozotas aderidos mucosa intestinal causa alteraes
locais que podem prejudicar a absoro de nutrientes, como vitaminas e gorduras lipossolveis, pelo intestino. Alguns locais onde a Giardia lamblia se
fixa podem apresentar impresses circulares deixadas por seu disco suctorial,
com o que se altera a funo das microvilosidades da regio. Muitos casos de
parasitismo podem passar despercebidos. As manifestaes mais frequentes
so quadros de diarreia, perda de peso e presena de muco e gordura nas
fezes (esteatorreia). Quadros de intolerncia lactose j foram observados
em associao com o parasitismo. A hipersensibilidade local, mediada por
IgE, leva ao aumento do peristaltismo e, fora do intestino, pode ocasionar
manifestaes cutneas, como leses semelhantes urticria, que j foram
observados em indivduos parasitados por Giardia lamblia.
c) Diagnstico laboratorial
O diagnstico feito principalmente por meio de exames coproparasitolgicos para pesquisa de cistos e trofozotas. Em fezes diarreicas, possvel a

62 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

observao de trofozotas por meio do exame direto (a fresco) ou mediante


esfregaos fecais. Para uma melhor observao do trofozota, deve ser utilizado material fresco (at uma hora aps a coleta das fezes) ou conservado pelo
fixador de Schaudinn (1903). A simples visualizao a fresco ou a colorao
pelo lugol j so suficientes para diagnosticar a presena do trofozota. Em fezes moldadas, onde h grande nmero de cistos, os mtodos de concentrao
so os mais indicados, por sua maior sensibilidade. Dentre os mais indicados,
encontram-se os mtodos de Faust e cols. (1938) e Ritchie (1948).
Como a liberao de cistos nas fezes pode ser irregular, recomenda-se a coleta de mais de uma amostra, em dias no consecutivos, mantendo-se o material
em solues conservadoras, tais como o MIF (mercurocromo ou mertiolate +
iodo + formol).
Apesar de no fazer parte da rotina diagnstica, em razo das dificuldades tcnicas para a sua realizao, a pesquisa microscpica do lquido jejunal
ou de bile, obtidos por endoscopia, apresenta grande sensibilidade nessa
parasitose.
A pesquisa de coproantgenos pode ser realizada principalmente pelo
mtodo ELISA; j a pesquisa de cistos pode ser feita por imunofluorescncia
direta. Geralmente, essas tcnicas utilizam anticorpos monoclonais contra os
antgenos dos cistos e dos trofozotas de Giardia lamblia.
A sorologia tem sido empregada apenas em estudos epidemiolgicos devido alta prevalncia de giardase no mundo. Os ttulos anti-Giardia IgM
so apenas elevados naqueles indivduos com infeco corrente. Aproximadamente um tero dos pacientes desenvolvem anticorpos especficos de resposta
anti-Giardia IgA. Resultados negativos no afastam a doena. Anticorpos
anti-IgG podem se manter elevados por longos perodos, o que prejudica o
diagnstico, principalmente em se tratando de regies endmicas.
A deteco do DNA de Giardia lamblia pela reao em cadeia da polimerase (PCR) altamente sensvel, porm, ao menos atualmente, pelo alto
custo relativo, pouco realizada na rotina diagnstica.

Protozoologia | 63

d) Epidemiologia
A distribuio geogrfica desse gnero mundial. Surtos de giardase humana esto normalmente associados contaminao de reservatrios de gua
para o abastecimento da populao. H maior prevalncia da protozoose em
regies tropicais e subtropicais onde as condies sanitrias so precrias e h
maior resistncia do cisto que pode se manter vivel por vrios meses s
condies ambientais. No Brasil, a prevalncia geral oscila, segundo os pesquisadores, de 4 a 30%. A maior incidncia ocorre entre 8 meses e 12
anos de idade, caindo significativamente na fase adulta. Alguns estudos indicam a possibilidade de existirem reservatrios no humanos dessa infeco
principalmente ratos e ces , porm esses dados devem ser analisados
mais profundamente para que fique clara a real importncia desses animais
na epidemiologia da giardase humana. Pelas caractersticas de transmisso,
comunidades fechadas como creches, escolas, enfermarias e afins se mostram
mais propensas transmisso entre seus membros. Alm disso, como possvel
encontrar cistos de G. lamblia na regio embaixo das unhas, os manipuladores
de alimentos podem transmitir o parasito para grande nmero de pessoas.
e) Profilaxia e controle
Como outras parasitoses intestinais de transmisso passiva oral, as medidas
mais eficientes nesse campo so: educao sanitria da populao; busca de
casos, principalmente na populao pr-escolar e escolar, seguida por tratamento especfico; tratamento de gua e esgoto; cuidados gerais no preparo
de refeies; corte de unhas; lavagem das mos aps defecar, entre outras.

64 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

3. Protozorios do filo Sarcomastigophora, subfilo


Mastighopora, ordem Trichomonadida
A) Trichomonas vaginalis
A espcie Trichomonas vaginalis pertence ordem Trichomonadida, famlia
Trichomonadidae. Acomete diversas regies do sistema urogenital de mulheres e homens.
a) Morfologia e biologia
Existe apenas a forma trofozotica, que tem de 8 a 32 m de comprimento por 5 a 14 m de largura, aspecto piriforme ou ameboide, quatro flagelos
livres e um recorrente (formando uma membrana ondulante) e o axstilo.

Figura 19. Trofozota de Trichomonas vaginalis.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

O habitat principal do T. vaginalis, nas mulheres, a cavidade vaginal, seguida por exo e endocrvix, tero, trompas de Falpio e uretra. Nos homens,
uretra, prstata, vescula seminal e epiddimo so os locais que podem albergar
o parasito. Sua reproduo ocorre por diviso binria longitudinal, o que possibilita um grande aumento da populao em seu habitat. A transmisso ocorre

Protozoologia | 65

principalmente durante o ato sexual sem o uso de preservativos. Em gestantes


infectadas por esse parasito, pode ocorrer infeco dos bebs durante a passagem pelo canal de parto. Raramente, tambm pode ocorrer transmisso por
meio de roupas ntimas e de material de exame ginecolgico, ou pelo contato
da genitlia com meio contaminado, tal como banheiras e piscinas.

Figura 20. Ciclo biolgico do Trichomonas vaginalis.

b) Patogenia e manifestaes clnicas


As principais leses determinadas pelo Trichomonas vaginalis so explicadas principalmente pela irritao da mucosa local causada pelos parasitos, que
gera uma resposta inflamatria e leses celulares.
Em mulheres, a tricomonase manifesta-se sob a forma de vaginite com
intenso corrimento fluido e aspecto bolhoso, com odor desagradvel, mais frequente no perodo ps-menstrual, e cuja colorao, de acordo com a presena
de elementos da microbiota normal feminina, pode variar de tons amarelados
a esverdeados. O quadro pode estar acompanhado de prurido ou irritao
vulvovaginal de intensidade varivel e dores na regio do baixo ventre. A
mulher apresenta dor e desconforto nas relaes sexuais e ao urinar, quando

66 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

ocorre uretrite. comum tambm o aumento na frequncia com que urina.


A tricomonase no homem geralmente assintomtica, ou apresenta-se como
uma uretrite com leve prurido. Aproximadamente 25% a 30% das mulheres
infectadas podem estar tambm infectadas nas glndulas de Skin e de Bartholin, podendo ou no existir sintomatologia. Pela dificuldade dos frmacos
utilizados no tratamento chegarem a essas glndulas, pode ocorrer permanncia
do protozorio em tais locais, gerando insucesso teraputico, e isso pode levar
ideia equivocada de resistncia s drogas utilizadas. Por conta das alteraes
locais desencadeadas pelo protozorio, a tricomonase urogenital tem sido
apontada como um fator de risco para a aquisio do vrus da imunodeficincia
humana (HIV, do ingls Human Immunodeficiency Virus).
c) Diagnstico laboratorial
Em mulheres, so utilizados com mais frequncia: exame microscpico da
secreo vaginal ou cervical, diluda em soluo fisiolgica; anlise do centrifugado do lavado vaginal; e pesquisa de trofozotas no sedimento do centrifugado urinrio. O cultivo desses materiais em meio nutritivo pode aumentar a
quantidade de trofozotas, melhorando a sensibilidade no diagnstico.
Em indivduos do sexo masculino com suspeita de tricomonase, examina-se
a secreo uretral ou a descarga decorrente de massagem prosttica, utilizando-se as mesmas tcnicas citadas para o diagnstico em mulheres.
Para ambos os sexos, podem ser realizados mais raramente a reao de
imunofluorescncia direta e o teste ELISA.
d) Epidemiologia
A tricomonase urogenital a doena sexualmente transmissvel (DST) no
viral mais comum no mundo. Em razo de sua forma de transmisso, a faixa
etria sexualmente ativa da populao a mais acometida. Sua distribuio
cosmopolita23 ou seja, encontrada em diversas regies do mundo , e a
chance de infeco diretamente proporcional ao nmero de parceiros sexu23

Com a ampla distribuio mundial; comum a vrios pases.

Protozoologia | 67

ais. Em razo dos preconceitos que cercam as DSTs e da no notificao obrigatria de tal infeco, no existem dados fidedignos sobre a prevalncia e a
incidncia da tricomonase, tanto em nvel mundial quanto em nvel nacional.

e) Profilaxia e controle
A educao sanitria da populao quanto aos aspectos relativos transmisso/preveno de DSTs a forma mais eficiente de controle dessa protozoose. recomendvel o uso de preservativos durante todo o ato sexual; o
uso individual de roupas ntimas; a esterilizao dos aparelhos ginecolgicos;
a higiene adequada de assentos sanitrios e cuidados ao se utilizarem sanitrios pblicos; e o diagnstico e tratamento dos indivduos parasitados e
do(s) seu(s) parceiro(s) sexual(ais). Para o caso da transmisso por canal de
parto, a pesquisa cuidadosa de T. vaginalis deve ser includa entre os exames
pr-natais de rotina.

4. Protozorios do filo Sarcomastigophora, subfilo Sarcodina,


ordem Amoebida
4.1 Principais amebas parasitos do intestino humano e amebas
de vida livre oportunistas

As amebas mais comumente encontradas no intestino humano pertencem


ao subfilo Sarcodina, classe Lobosea, ordem Amoebida, famlia Entamoebidae. Quatro espcies do gnero Entamoeba podem habitar o intestino grosso
de humanos, sendo a Entamoeba histolytica a nica espcie comprovadamente patognica; as demais Entamoeba dispar, Entamoeba hartmanni e Entamoeba coli so consideradas comensais. A espcie Entamoeba gengivalis
pode ser encontrada na cavidade oral, mas no causa danos locais. Outras
espcies de amebas comensais pertencentes a diferentes gneros tambm so
encontradas no intestino humano: Endolimax nana e Iodamoeba btschlii,
alm de Dientamoeba fragilis, um flagelado com fase ameboide. Algumas

68 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

amebas de vida livre, como Naegleria fowleri, Achanthamoeba castellanii e


Achanthamoeba astronyxis, podem causar, em determinadas situaes, infeces severas, com quadros como os de meningoencefalite24 em humanos.

4.2 Morfologia e biologia dos gneros Entamoeba, Endolimax e Iodamoeba

A) Entamoeba histolytica
Hospedeiros: homem (hospedeiro principal), outros primatas, ces e gatos.
Habitat: intestino grosso, essencialmente ceco, reto, sigmoide e incio do
clon ascendente, por serem locais de menor velocidade do trnsito intestinal.
Eventualmente, principalmente na dependncia do isolado do parasito, pode
ocorrer a forma extraintestinal da infeco, acometendo principalmente o fgado, o pulmo, o crebro e a pele.
a) Morfologia
Trofozota: a forma vegetativa do protozorio, encontrada no hospedeiro. Possui formato irregular (ameboide) por causa da emisso de pseudpodes. Sua membrana citoplasmtica delicada. Seu ncleo possui grnulos
de cromatina perifrica delicados e regularmente distribudos na face interna
da membrana nuclear. O cariossomo25 puntiforme e central. Quando na luz
intestinal, os trofozotas possuem dimenses entre 12 e 40 m; entretanto,
nos quadros de amebase invasiva, quando os trofozotas esto em intensa
atividade fagoctica, podem chegar a 60 m de dimetro, apresentando o citoplasma repleto de vacolos digestivos contendo hemcias e restos celulares,
e lesionar a parede intestinal, atingindo outros rgos.
Inflamao do crebro e das meninges que o envolvem.
Corpsculo central ou excntrico presente no ncleo de alguns protozorios, visualizado aps a
colorao por hematoxilina frrica; o mesmo que endossomo.

24
25

Protozoologia | 69

Cistos: so as formas de resistncia do parasito fora do organismo do hospedeiro. So eliminados com as fezes no ambiente. Possuem forma arredondada, medem de 10 a 15 m e podem apresentar de um a quatro ncleos,
dependendo do estgio de maturao. Cistos imaturos podem apresentar
um, dois ou trs ncleos e corpos cromatoides em forma de basto; pode-se
observar tambm, nas coloraes permanentes, como a hematoxilina frrica,
um vacolo de glicognio.26 As duas ltimas estruturas no so visualizadas
nos cistos tetranucleados e maduros.

Figura 21. Entamoeba histolytica: A) trofozota grande;


B) trofozota pequeno; C) cisto jovem ou imaturo; D) cisto maduro.
Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

26

Regio ocupada pelo glicognio, que removido pelo processo de colorao.

70 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 22. Ciclo biolgico da Entamoeba histolytica.

b) Amebase
Entende-se por amebase a infeco causada pela espcie E. histolytica. Tal
evento pode desencadear alteraes como diarreia com presena de sangue
(disenteria amebiana) em decorrncia de leses ulceradas causadas pelos trofozotas da ameba. Em alguns casos, trofozotas podem atingir outros rgos,
por meio da circulao sangunea, gerando leses necrticas principalmente
no fgado, pulmo e crebro. A amebase extraintestinal pode ser fatal e,
por causa de sua prevalncia, considerada a terceira infeco parasitria por
protozorio que mais causa bitos no mundo, colocando-se depois apenas da
doena de Chagas e da malria.
A maior parte dos casos de infeco por E. histolytica registrados como
amebase so assintomticos. Entretanto, sabe-se hoje que muitos casos de parasitismo por Entamoeba dispar (amebdeo morfologicamente idntico E. histolytica) foram erradamente considerados infeces por E. histolytica. Alguns
pesquisadores consideram que a patognese da amebase depende de fatores
inerentes ao parasito cepas mais ou menos virulentas, produo de protenas
responsveis pela adeso celular, formao de poros e lise das clulas-alvo ,
e de fatores inerentes ao hospedeiro resposta imunolgica, dieta alimentar e
sua microbiota intestinal.

Protozoologia | 71

c) Diagnstico laboratorial
Forma intestinal
A forma aguda da amebase exibe quadros clnicos comuns a outras
doenas que produzem disenteria ou diarreia. O diagnstico deve basear-se
em exames parasitolgicos ou, quando isso no possvel, em provas indiretas
e outros recursos laboratoriais. Como a liberao dos parasitos ocorre de modo
intermitente, devem-se realizar vrios exames (de 3 a 5), em dias diferentes,
para que se possa obter um resultado mais seguro.
Fezes diarreicas: os trofozotas so as formas mais encontradas em fezes
diarreicas, sendo a primeira opo o exame direto, que deve ser feito com
fezes coletadas e enviadas ao laboratrio em menos de uma hora, a fim de
se evitar a degradao dos trofozotas. Caso esse exame resulte positivo
para a presena de trofozotas de amebdeos, o material em seguida
corado por hematoxilina frrica (HF) ou tricromo (corante alternativo),
para exame pormenorizado da morfologia e dimenses dos trofozotas,
que vai permitir a diferenciao entre as diferentes espcies que podem ser
encontradas no homem.
Fezes moldadas: os cistos resistentes a tcnicas de concentrao fecal
como as descritas por Faust e cols. (1938) e Ritchie (1948) so as
formas predominantes. Podemos ainda utilizar outros materiais para a pesquisa em casos particulares, tais como material aspirado de leses ulceradas
coletado por endoscopia (retossigmoidoscopia), com posterior colorao
por HF.
Muitos pesquisadores tm utilizado o teste de imunoabsoro enzimtica
ELISA, com anticorpos policlonais anti-Entamoeba, a fim de detectar antgenos parasitrios nas fezes de pacientes; no entanto, esse teste no capaz de
distinguir E. histolytica de E. dispar, sendo sua utilidade limitada.

72 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Formas extraintestinais
Alguns exames, tais como cintilografia, ressonncia magntica e radiografia
podem apresentar resultados que levantem a suspeita de amebase extraintestinal. No entanto, para a sua confirmao, so necessrias tcnicas que evidenciem diretamente a presena de trofozotas: coleta de material em aspirados
e/ou bipsias e colorao pela hematoxilina frrica. Essas tcnicas apresentam
alguns inconvenientes, por serem muito invasivas e por apresentarem baixa
sensibilidade. Dessa forma, mtodos de diagnstico imunolgico imunofluorescncia indireta (IFI), ELISA, hemaglutinao indireta, reao de fixao
do complemento, aglutinao do ltex, contraimunoeletroforese, imunodifuso
dupla em gel de gar tm ganhado mais espao no mercado.
Hemaglutinao, reao de fixao do complemento e contraimunoeletroforese so mtodos muito sensveis, mas como os anticorpos envolvidos nesses
processos persistem durante muitos anos aps a infeco, pouco informam
sobre a situao atual do paciente. Contudo, apesar de estarem em desuso,
podem ser utilizados em inquritos epidemiolgicos.
OBS.: Somente E. histolytica responsvel pelos quadros amebianos
invasivos, levando produo de anticorpos especficos; nas infeces
por E. dispar, tais anticorpos no so encontrados no soro. E. dispar
indistinguvel morfologicamente de E. histolytica; sua diferenciao
feita exclusivamente por tcnicas moleculares ou imunolgicas.
d) Diagnstico diferencial morfolgico
importante fazer a diferenciao das espcies de amebas no diagnstico
coproparasitolgico.
Entamoeba hartmanni
Os trofozotas de Entamoeba hartmanni so pequenos e delicados (com
6 a 12 m). Apresentam apenas um ncleo pequeno, com cariossoma em
geral puntiforme e excntrico. Em cerca de dois teros dos casos, a cromatina
perifrica semelhante da E. histolytica; em um tero dos casos, porm,

Protozoologia | 73

pode-se apresentar formando barras ou desenhos em forma de crescente, de


tamanho varivel, mas sempre colados face interna da membrana nuclear. Os
cistos so tetranucleados, com dimenses menores que os da E. histolytica
(geralmente tm de 5 a 8 m).

Figura 23. Entamoeba hartmanni: A) e B) trofozotas; C) cisto.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Entamoeba coli
Os trofozotas de E. coli variam geralmente de 18 a 28 m de dimetro,
apresentam ncleo visvel mesmo a fresco, com o cariossoma posicionado fora
do eixo central do ncleo (excntrico), e um anel de grnulos perifricos mais
grosseiro e irregular. O endoplasma bastante granuloso, com muitos vacolos
contendo grande nmero de bactrias fagocitadas, leveduras e, muito raramente, hemcias. No cisto, o citoplasma no apresenta vacolo e, conforme o seu
grau de desenvolvimento, pode apresentar de um a oito ncleos. A dimenso
do cisto varia de 15 a 25 m. Os cistos tambm podem apresentar corpos
cromatoides lembrando agulhas ou espculas. Vacolos de glicognio e corpos
cromatoides so raros em cistos maduros.

Figura 24. Entamoeba coli: A) trofozota; B) cisto.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

74 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Endolimax nana
Seus trofozotas so os menores encontrados nos humanos seu tamanho
varia de 6 a 12 m. Apresentam ncleo pequeno, vesicular, com membrana
nuclear delicada e sem revestimento interno de grnulos de cromatina; seu cariossomo relativamente grande, compacto e irregular, e algumas vezes ligado
carioteca27 por filamentos delgados. Endolimax nana emite lentamente seus
pseudpodos grossos e hialinos. O ncleo no visvel nos exemplares vivos.
Os cistos so elpticos ou ovoides, com quatro ncleos pequenos, pobres
de cromatina, mas lembram o aspecto descrito nas formas trofozoticas, com
cariossoma grande e irregular. Algumas vezes, os corpos cromatoides, que tm
tamanho reduzido e formato varivel arredondado, ovoide ou em forma de
bastonete curto , podem ser observados. Pode tambm haver um vacolo
de glicognio.

Figura 25. Endolimax nana: A) e B) trofozotas; C) cisto.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Iodamoeba btschlii
Os trofozotas variam geralmente de 6 a 16 m, e seu ncleo possui
uma membrana espessa sem cromatina perifrica. O cariossoma volumoso,
central e est separado da membrana por uma fileira de grnulos acromticos.
Quando corado pela hematoxilina, pode-se observar que o cariossomo
constitudo de vrios grnulos escuros interligados por material um pouco
menos denso. O citoplasma muito vacuolizado, e dentro dos vacolos
27

Membrana que envolve o ncleo da clula.

Protozoologia | 75

encontram-se muitas bactrias e partculas fagocitadas. Seu aspecto granuloso


e escuro lembra o citoplasma da Entamoeba coli. A forma cstica tem contorno irregular e um nico ncleo. Nas preparaes coradas pelo lugol, os
cistos so muito caractersticos, no s pela forma irregular, como tambm por
conterem uma ou duas reas de glicognio, de limites nitidamente marcados.

Figura 26. Iodamoeba btschlii: A) trofozota; B) cisto.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

e) Epidemiologia
A infeco por E. histolytica cosmopolita, sendo mais frequente em regies
de clima tropical e subtropical. As taxas de prevalncia so influenciadas pelo
nvel sanitrio das regies, de modo que, quanto mais precrio o saneamento
bsico local, tanto maiores as taxas de prevalncia. A transmisso ocorre pela
contaminao do meio ambiente com fezes de pessoas parasitadas. Os cistos
tornam-se maduros em at dois dias em condies ambientais adequadas. gua
e alimentos contaminados podem servir de veculo para os cistos. Alguns insetos,
como baratas e moscas, podem carrear os cistos em sua superfcie corporal. Sua
prevalncia e gravidade variam muito segundo as diferentes regies, sendo a
mortalidade mundial pela amebase de 40 mil a 110 mil casos por ano. A frequncia de localizaes extraintestinais tambm varia geograficamente, sendo que
Mxico, ndia e norte da frica apresentam as mais elevadas taxas das mesmas.
No Brasil, a regio Norte onde ocorre a maior prevalncia de amebase e os
casos mais graves, tanto intestinais quanto extraintestinais.

76 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Os casos agudos de disenteria amebiana so pouco relevantes na transmisso do parasito, uma vez que os trofozotas no sobrevivem muito tempo
fora do organismo hospedeiro. Assim, os indivduos assintomticos ou oligossintomticos28 so os principais responsveis pela contaminao ambiental
com cistos.
f) Profilaxia e controle
medidas de saneamento bsico;
educao sanitria;
higiene pessoal (lavar as mos antes de ingerir alimentos e aps utilizar
o banheiro) e de alimentos;
controle de pragas (moscas e baratas);
identificao e tratamento das pessoas parasitadas.

5. Protozorios do filo Apicomplexa (esporozorios)

Formam um grupo homogneo de parasitos obrigatrios da classe Sporozoea, ou Sporozoa, com reproduo sexuada alternando-se com reproduo
assexuada.
O complexo apical dos esporozorios uma estrutura especial, que auxilia
o parasito a invadir as clulas do organismo hospedeiro.
a) Morfologia e biologia
Morfologia
O complexo apical (fig. 27) formado por anis (a) localizados no
polo anterior do parasito, embaixo da membrana celular; esses anis envolvem
o conoide (b) e so ligados entre si por fibras do conoide (c). As roptrias
(d) e os micronemas (e) (organelas alongadas), na regio anterior entre o
28

Forma muito benigna da doena, apresenta manifestaes clnicas atenuadas.

Protozoologia | 77

complexo apical e o ncleo, excretam materiais proteicos para a aderncia


e a penetrao do parasito na clula hospedeira , atravessam o conoide e
terminam em uma depresso central no polo anterior. Sob a membrana celular
externa, est a membrana interna (f), porosa, sustentada por certo nmero de
microtbulos do conoide (g) que contribuem para manter a forma alongada
do parasito.

Figura 27. Desenho esquemtico de um protozorio do filo Apicomplexa.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Ciclo biolgico dos esporozorios


Os esporozorios alternam dois ciclos reprodutivos: ciclo esquizognico
(reproduo assexuada) e ciclo esporognico (reproduo sexuada) (fig. 28).
Ciclo esquizognico: a esquizogonia (1) comea com a entrada do esporozota (a), forma invasiva, na clula hospedeira; no interior dessa, transforma-se em esquizonte (organismo arredondado) (b); o esquizonte passa
por mltiplas divises nucleares, que do origem aos merozotas (c), formas
invasivas que podem repetir a esquizogonia ou produzir, por gametogonia,
gametcitos masculinos (d) e femininos (e) que evoluem para gametas.

78 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Ciclo esporognico: a esporogonia (2) tem incio com a fuso dos gametas (f) e a formao do ovo ou zigoto (g). Na ordem Eucoccidiida, o zigoto
produz um envoltrio resistente, tornando-se oocisto imaturo, que, no meio
ambiente (h), evolui, e o esporoblasto no seu interior divide-se em esporocistos (i) no interior dos quais formam-se esporozotas, com capacidade invasiva
(j). Os oocistos maduros (infectantes) so ingeridos por um hospedeiro,
fechando-se o ciclo biolgico.

Figura 28. Desenho esquemtico do ciclo evolutivo dos esporozorios:


1) esquizogonia precedendo gametogonia; 2) esporogonia formao do
zigoto esporocistos esporozotas.
Ilustrao: adaptada de Rey, 2008 por JCA Carreira e AVM Silva
(Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

b) Sistemtica
A classificao utilizada neste captulo a proposta pelo Comit de Sistemtica e Evoluo, da Sociedade de Protozoologia (Levine et al., 1980):

Protozoologia | 79

Reino Protista Whittaker, 1977


Filo Apicomplexa Levine, 1970
Classe Sporozoea Leuckart, 1879
Subclasse Coccidia Leuckart, 1879
Ordem Eucoccidiida Lger & Duboscq, 1910
Subordem Eimeriina Lger, 1911
Famlias:
1) Eimeriidae
Gneros: Eimeria e Isospora que parasitam animais domsticos, inclusive Isospora belli, que infecta o homem.
2) Cryptosporidiidae
Gnero: Cryptosporidium geralmente no so patognicos;
no entanto, em indivduos imunodeprimidos (por exemplo,
com Aids) causa doena.
3) Sarcocystidae
Gneros: Sarcocystis e Toxoplasma as espcies que tm
importncia mdica so Sarcocystis hominis, Sarcocystis
suihominis e Toxoplasma gondii.
Ordem Hemosporidiida
Gnero: Plasmodium

5.1 Protozorios do filo Apicomplexa, ordem Eucoccidiida,


gnero Toxoplasma

O Toxoplasma gondii um protozorio intracelular obrigatrio, eucariota,


com capacidade para formar cistos teciduais na fase crnica da infeco. O
parasito invade de preferncia as clulas do sistema fagoctico mononuclear,
os leuccitos e as clulas parenquimatosas.
O Toxoplasma gondii foi descrito pela primeira vez em coelhos de
laboratrio por Splendore, em julho de1908, no Brasil. Em outubro do

80 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

mesmo ano, na Tunsia, Nicolle e Manceaux observaram o parasito em


um pequeno roedor africano (Ctenodactylus gundi), mas o denominaram
Leishmania gondii. Somente em fevereiro de 1909, Nicolle e Manceaux o
nomearam como o novo parasito Toxoplasma gondii.
A partir de sua descoberta, a lista de espcies de Toxoplasma foi aumentando conforme se encontravam animais naturalmente infectados. As espcies
eram descritas de acordo com os diferentes hospedeiros.
Em 1939, Sabin concluiu que todas as espcies at ento encontradas
no eram nem hospedeiros especficos nem imunologicamente diferentes
e que deveriam pertencer a uma s espcie. Sendo assim, segundo a lei
da prioridade, deveriam ser chamados de Toxoplasma gondii Nicolle &
Manceaux, 1909.
Seus hospedeiros intermedirios compreendem diversas espcies de animais de sangue quente, como aves e mamferos, incluindo o homem. Como
hospedeiros definitivos, encontram-se apenas membros da famlia Felidae, sendo o gato o representante de maior relevncia, em virtude de sua proximidade
com humanos e animais domsticos.
Considerada uma das zoonoses parasitrias mais comuns em todo o mundo, a toxoplasmose possui importncia mdica humana e veterinria.
a) Morfologia e biologia
Morfologia
Taquizotas (do grego tachys = rpido): formas encontradas tanto no interior de clulas nucleadas (fig. 29 e 30) quanto nos lquidos corporais (sangue,
saliva e leite, entre outros). Responsveis pela fase aguda da infeco em hospedeiros intermedirios, tm reproduo rpida, dividindo-se assexuadamente
por endodiogenia (formao de clulas-filhas dentro da clula-me) no interior
de vacolo parasitforo, formando com a clula hospedeira o denominado
grupo tecidual. Apresenta forma alongada, ligeiramente arqueada, medindo
de 2 a 4 m de largura por 4 a 8 m de comprimento, com extremidade an-

Protozoologia | 81

terior mais afilada do que a posterior. Ultraestruturalmente, os taquizotas revelam inmeras organelas e incluses, sendo que um anel polar envolve conoide,
roptrias, micronemas, microporo, mitocndrias, microtbulos subpediculares,
retculo endoplasmtico, complexo de Golgi, ribossomas, ncleo e vacolo de
glicognio (fig. 31).

Figura 29. Desenho esquemtico de taquizotas livres e no


interior de macrfago, formando grupo tecidual.
Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Figura 30. Taquizotas de Toxoplasma gondii em exsudato peritoneal


de camundongos, corado pelo mtodo May-GrunwaldGiemsa, 1000X.
Foto: Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz.

82 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 31. Desenho esquemtico da ultraestrutura da forma


taquizota de Toxoplasma gondii.
Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Bradizotas (do grego bradys = lento): formas encontradas no interior


de cistos teciduais (fig. 32), caractersticas da fase crnica da infeco em
hospedeiros intermedirios. Dividem-se assexuadamente, de forma lenta, por
endogenia no interior de cistos. Os bradizotas so as formas infectantes e so
capazes de suportar temperaturas de geladeira.
Cistos: encontrados principalmente no tecido nervoso, na musculatura
(cardaca e esqueltica) e na retina. Apresentam tamanho varivel de at
300 m, dependendo do nmero de bradizotas em seu interior que
em alguns casos, pode chegar a centenas , mas sem qualquer reao no
tecido hospedeiro em redor do cisto. Os cistos permanecem vivos durante
praticamente toda a vida do hospedeiro. Os cistos em carne de porco ou na
carne de carneiro so inativados aps 24 horas em temperaturas de -20C e
depois de trs dias em temperaturas de -15C. So mais resistentes pepsina
e tripsina do que os taquizotas, e a 61C, morrem em quatro minutos.

Protozoologia | 83

Figura 32. Desenho esquemtico de bradizotas no interior de cistos de T. gondii.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Oocistos: formas imaturas, no esporuladas, produzidas no epitlio intestinal dos feldeos (hospedeiros definitivos) e eliminadas com as fezes desses
animais. So arredondadas e medem de 10 a 13 m por 9 a 11 m, tendo
uma parede que confere resistncia s condies adversas do meio ambiente.
Os oocistos esporulam e se tornam infectantes no meio ambiente em temperatura e umidade adequadas. Quando esporulados, ocorre a formao de dois
esporocistos, cada um deles com quatro esporozotas (fig. 33). Os oocistos
maduros permanecem infectantes no meio ambiente mido por cerca de um
ano, em temperaturas variando de 4 a 37C; morrem a - 21C.

Figura 33. Desenho esquemtico do oocisto maduro de T. gondii, com dois


esporocistos, cada um deles com quatro esporozotas.
Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

84 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

OBS.: Os taquizotas, bradizotas e esporozotas de Toxoplasma gondii


so semelhantes ultraestruturalmente, mas diferem em certas organelas e
incluses.

Ciclo biolgico do Toxoplasma gondii


O Toxoplasma gondii apresenta um ciclo biolgico heterxeno facultativo,
com baixa especificidade para hospedeiros, exceto no que se refere ao seu
hospedeiro definitivo.
O ciclo do protozorio complexo, alternando uma fase sexuada (isosporiana ou entrica), que ocorre nas clulas epiteliais do intestino delgado dos
hospedeiros definitivos (feldeos) (fig. 34), com outra assexuada (extraintestinal) nos hospedeiros intermedirios, que tambm pode ocorrer nos tecidos
dos hospedeiros definitivos (fig. 35).

Figura 34. Fase sexuada (isosporiana ou entrica) nos hospedeiros definitivos.

Protozoologia | 85

Figura 35. Fase assexuada (ciclo extraintestinal) nos hospedeiros intermedirios.

Os gatos domsticos (principalmente jovens ou no imunes ao parasito),


entre os outros feldeos, tm papel de maior destaque por sua importncia na
transmisso da toxoplasmose humana.
Em hospedeiros nos quais no houve ainda o desenvolvimento da imunidade especfica, o T. gondii invade qualquer clula do organismo infectado,
exceto as hemcias. Dentro do vacolo parasitforo, os taquizotas sofrem
multiplicao rpida, por endogenia, formando grupos teciduais repletos de
parasitos que acabam por romper a clula e vo invadir outras clulas. Alguns
deles caem nos lquidos biolgicos (sangue, lquido aminitico, esperma, lquido cefalorraquidiano, saliva, lgrimas, entre outros) antes de entrar em outra
clula. Aps o desenvolvimento da imunidade, a multiplicao torna-se muito
lenta; com isso, os bradizotas, tambm por endogenia, passam a se multiplicar
dentro dos cistos.

86 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

c) Relao parasitohospedeiro
A virulncia do Toxoplasma gondii varia segundo a cepa do parasito.
As cepas esto agrupadas em trs gentipos: tipos I, II e III. As do tipo I
so altamente virulentas (mais patognicas); as dos tipos II e III so relativamente de baixa virulncia. As linhagens virulentas de T. gondii produzem
infeco aguda, com os protozorios invadindo principalmente macrfagos e
leuccitos, e distribuindo-se para todos os tecidos do organismo. As clulas
hospedeiras se assemelham a um envelope repleto de taquizotas, formando
um grupo tecidual que acaba por romper-se e disseminar os parasitos, que
passam a invadir novas clulas. O resultado, dependendo do caso, pode ser
fatal em poucos dias.
O mecanismo que determina a virulncia das diferentes cepas de Toxoplasma gondii e a sua patogenicidade no hospedeiro ainda no conhecido.
Tambm ainda so pouco conhecidos os tipos de gondii que circulam entre
os hospedeiros brasileiros e quais os mais prevalentes. Esse conhecimento
pode ajudar na epidemiologia da toxoplasmose.
Na primeira semana de infeco, as linhagens no virulentas de T. gondii
produzem grupos teciduais pequenos, que desaparecem depois de duas semanas. No entanto, no crebro e em outros tecidos, bradizotas envoltos por
uma membrana cstica se multiplicam, formando o cisto.
Hospedeiro
A infeco por T. gondii varia de intensidade, de acordo com as diversas
espcies de hospedeiros por exemplo, diferentes linhagens de camundongos. A proteo do hospedeiro decorrente principalmente da imunidade
celular. Em humanos, a infeco por T. gondii tem graus diferentes de patogenicidade, variando desde casos assintomticos at quadros severos, incluindo
o bito. Os casos mais graves so a infeco congnita e a toxoplasmose em
imunossuprimidos.

Protozoologia | 87

Meio ambiente
A frequncia da infeco por T. gondii influenciada pelos seguintes fatores: alimentar, cultural, idade, procedncia rural ou urbana, condies socioeconmicas e caractersticas ambientais. A ocorrncia de elevada precipitao
pluvial tem papel importante no aumento das taxas de infeco
d) Toxoplasmose
A toxoplasmose , classicamente, dividida em forma congnita (que ocorre quando a gestante adquire a primo-infeco durante a gestao, passando
o parasito para o beb) e forma adquirida (que ocorre aps o nascimento).
Toxoplasmose congnita
As mulheres grvidas na fase crnica de infeco toxoplsmica geralmente
no a transmitem para seus filhos no tero, nem abortam por isso. Porm, no
caso de se infectarem durante a gestao, o risco de passarem a protozoose
por via transplacentria grande e, principalmente no caso de a gestante ser
imunossuprimida, podendo ocorrer reativao de uma infeco crnica, quando no proteger o feto. A infeco ser mais ou menos grave dependendo
da virulncia da cepa do parasito, da capacidade dos anticorpos maternos
de protegerem o feto e do perodo gestacional em que a mulher se encontra.
medida que aumenta a idade gestacional, aumenta o risco de transmisso
materno-fetal, porm decresce a severidade da infeco.
A ocorrncia da infeco toxoplsmica congnita no primeiro trimestre
da gravidez menos frequente, fica em torno de 10 a 15% do total de
gestantes infectadas durante a gestao, porm mais grave, pois costuma
levar a aborto espontneo. No segundo trimestre, aumenta a possibilidade
de transmisso (30%), podendo ocorrer toxoplasmose aguda ou subaguda
do feto, com leses disseminadas, principalmente no sistema nervoso e retina,
causando um quadro chamado de ttrade de Sabin, com retinocoroidite,
calcificaes cerebrais, microcefalia ou hidrocefalia e alteraes neurolgicas.

88 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

No terceiro e ltimo trimestre da gestao, as chances de o feto adquirir a


infeco aumentam para 60%. Geralmente a infeco assintomtica ou, ao
nascer, a criana apresenta um quadro clnico relativamente brando. No entanto,
em alguns casos as manifestaes podem ocorrer mais tardiamente (dias ou mesmo anos aps o nascimento), e a criana pode apresentar algum sinal ou sintoma
sugestivo da infeco congnita, como comprometimento da viso, audio ou
do sistema nervoso central. Caso apresente a forma aguda grave, podem ocorrer
ictercia, exantema, hepatoesplenomegalia e, em alguns casos, linfadenopatia,
hepatite, pneumonite, adenite e derrames cavitrios. Nesses casos, pode haver
abortamento, morte fetal ou morte do beb aps o nascimento.
OBS.: Na toxoplasmose congnita, em casos de infeco subaguda e
crnica, as leses viscerais regridem, permanecendo as neurolgicas e
oculares.
Toxoplasmose adquirida
O curso clnico da toxoplasmose pode variar desde formas assintomticas
e subclnicas at formas generalizadas da doena, com o comprometimento do
sistema nervoso central, podendo tambm evoluir para processos infecciosos
agudos fatais, dependendo de vrios fatores, principalmente idade e estado
imunolgico do indivduo.
Em indivduos imunocompetentes, a toxoplasmose tem curso benigno e
autolimitado, e raramente evolui para a forma grave, sendo na maioria das vezes
assintomtica (cerca de 90% dos casos). Tais infeces s so detectadas
casualmente, em inquritos sorolgicos. Por outra parte, quando sintomtica,
aparecem quadros de sintomatologia varivel, durando de semanas a meses. As
manifestaes clnicas mais frequentes so linfadenopatia, febrcola, cefaleia,
mialgia, artralgia e fadiga.
Durante a fase a crnica da toxoplasmose, os cistos teciduais do Toxoplasma gondii so bem controlados pelo sistema imune do hospedeiro, que

Protozoologia | 89

continuamente estimulado por antgenos parasitrios, o que leva aquisio


de imunidade protetora contra reinfeces entretanto, h evidncias de que
ela pode ocorrer, ao menos em crianas. Nas crianas, o T. gondii geralmente
produz infeco subaguda com encefalopatia e retinocoroidite que, nos
casos congnitos, particularmente grave.
Em indivduos imunodeficientes, o T. gondii o mais frequente protozorio
causador de enfermidades oportunistas, devido tanto reativao de infeco
latente quanto por primo-infeco, podendo manifestar-se de maneira grave,
com quadros de encefalite e miocardite, ou de forma disseminada, acometendo diversos pontos do organismo, chegando a culminar no bito.
A presena de cistos em indivduos imunossuprimidos por qualquer razo
por exemplo, pessoas com infeces virais decorrentes do HIV, pessoas
que receberam transplantes ou com algum tipo de cncer e em tratamento quimioterpico, entre outros sempre um grave risco, pois quando o sistema
imune est comprometido, pode ocorrer reativao dos parasitos quiescentes encistados, levando intensa proliferao de taquizotas. Nos casos de
imunossupresso, pode ocorrer subitamente uma encefalite aguda, levando o
indivduo a bito em poucos dias. Em alguns casos, porm, pode haver evoluo lenta, alm de outras manifestaes clnicas de intensidade varivel.
A toxoplasmose ocular caracterizada por retinocoroidite leso mais
frequente associada protozoose, com 30% a 50% dos casos atribudos
ao Toxoplasma gondii. A forma ocular resultante da toxoplasmose congnita
pode se manifestar antes do nascimento ou tardiamente, aps o mesmo. O
nmero de casos de toxoplasmose ocular adquirida aps infeco aguda por
T. gondii no congnita tem aumentado consideravelmente. Erechim, no norte, do estado do Rio Grande do Sul, apresenta a maior prevalncia mundial
de toxoplasmose ocular adquirida: 17,7%.
d) Diagnstico
O diagnstico clnico da toxoplasmose adquirida muito difcil, pois na
maioria das vezes a infeco subclnica e, quando com sintomatologia evi-

90 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

dente, pode ser confundida com outras afeces de etiologias diversas. Nesse
caso, os sinais e sintomas da protozoose so apenas sugestivos, tornando-se
necessria a utilizao de mtodos de diagnstico laboratorial.
Mesmo nos casos de toxoplasmose congnita e de toxoplasmose ocular,
com retinocoroidites, quando a clnica traz forte suspeita da protozoose, o
diagnstico feito laboratorialmente. O diagnstico da infeco pelo T. gondii
pode ser feito por mtodos sorolgicos, histolgicos, biolgicos, moleculares
ou pela combinao desses.
Imunodiagnstico mtodos sorolgicos
A pesquisa direta para evidenciar o protozorio em material biolgico
suspeito difcil, onerosa e requer tempo, por isso os mtodos mais utilizados
so os sorolgicos.
Usualmente, o diagnstico laboratorial baseado na pesquisa de anticorpos especficos anti-T. gondii, principalmente imunoglobulinas das classes
IgG e IgM; mais raramente, tambm so dosadas as imunoglobulinas IgA
e IgE. Atualmente, a baixa avidez de IgG tem sido referida como um bom
marcador para infeces primrias recentes causadas por Toxoplasma gondii.
Os anticorpos IgG sofrem progressivo amadurecimento, elevando a avidez
na fase crnica da toxoplasmose. Sendo assim, a baixa avidez de IgG indica
infeco aguda. O teste de avidez IgG tem sido recomendado para mulheres
grvidas, sendo utilizado para auxiliar em outros mtodos sorolgicos que
dosem IgG e IgM.
OBS.: Teste de avidez de IgG avidez corresponde fora de ligao entre o antgeno e o anticorpo, fora que aumenta progressivamente
com o passar do tempo.
A reao de Sabin-Feldman (teste do corante) foi muito utilizada no
passado e considerada clssica para o diagnstico da toxoplasmose nas fases
aguda ou crnica. Alm de muito especfica e sensvel, no ocasiona reao
cruzada com outras infeces, mas tornou-se obsoleta por necessitar de fator

Protozoologia | 91

acessrio29 e de parasitos vivos o que constitui fator limitante para o seu


uso. A reao de imunofluorescncia indireta (Rifi), de sensibilidade igual
do teste do corante, tem sido utilizada como padro ouro em alguns
laboratrios. Porm, atualmente, o ELISA e suas variaes so os mtodos
mais utilizados para o diagnstico da infeco toxoplsmica, embora alguns
laboratrios utilizem a reao de hemaglutinao, o ELIFA (do ingls Enzyme
Linked Immuno-filtration Assay), a reao de enzimoimunoensaio de micropartculas MEIA (do ingls Microparticle Capture Enzyme Immunoassay), a
reao de aglutinao por imunoabsoro ISAGA (do ingls Immunosorbent
Aglutination Assay) e os mtodos Immunoblotting e Western-blot.
Testes sorolgicos utilizados na captura de IgM anti-T. gondii
mensurado pela cor ELISA
mensurado pela fluorescncia ELIFA
mensurado pela aglutinao ISAGA

Deteco do parasito em material biolgico suspeito


A evidenciao do parasito durante a fase aguda da infeco pode no ser
muito fcil, pois a parasitemia30 fugaz e, na fase aguda da infeco, s observvel quando os taquizotas podem ser encontrados no sedimento do lquor
ou em cortes de tecidos corados pelo Giemsa; s vezes, quando o nmero de
parasitos reduzido, mesmo cortes de tecidos suspeitos corados pela hematoxilina eosina, como bipsias de gnglios, no permitem bons resultados.

29
30

Conjunto de componentes do soro de humanos e animais sem anticorpos anti-T. gondii.


Presena de parasitos na corrente sangunea.

92 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Mtodos histolgicos
O diagnstico histopatolgico pode ser uma alternativa quando a evidenciao do parasito necessria, como no caso de imunocomprometidos ou
de toxoplasmose congnita.
A avaliao macro e microscpica do material biolgico retirado de indivduo com suspeita de infeco pelo T. gondii deve ser realizada por profissional patologista, uma vez que, mesmo quando se encontram estruturas sugestivas, torna-se necessrio estabelecer a diferenciao com outros protozorios
(Leishmania, Sarcocystis) e fungos (Histoplasma, Cryptococcus).
A tcnica de histopatologia realizada por meio de amostras de diversos
tecidos, aps processamento, corte e colorao.31
A presena de taquizotas em tecidos e fluidos corporais pode revelar
casos de infeco aguda; entretanto, dificilmente detectada em preparaes
convencionais para histopatologia.

Figura 36. Cisto de Toxoplasma gondii em musculatura esqueltica


de camundongo, corado por hematoxilina eosina, 1000X.
Foto: Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz.

31

Ver o volume 2 desta coleo.

Protozoologia | 93

Figura 37. Cisto de Toxoplasma gondii em corte histolgico de crebro


de camundongo, corado por hematoxilina eosina, 1000X.
Foto: Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz.

Tcnica de imuno-histoqumica
Para aumentar a eficincia da tcnica de histologia, tm sido empregadas
tcnicas de imuno-histoqumica utilizando imunoperoxidase. A demonstrao
de taquizotas pela imunoperoxidase, colorao com Giemsa ou PAS em
qualquer tecido ou fluido corpreo pode comprovar uma infeco ativa por
Toxoplasma gondii.

Figura 38. Corte de crebro de camundongo com cisto de Toxoplasma gondii


marcado por tcnica de imuno-histoqumica peroxidase, 1000X.
Foto: Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz.

94 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Mtodos biolgicos bioensaio


O isolamento do parasito feito por meio da inoculao de material suspeito (sangue, creme leucocitrio, saliva, macerado de tecidos, entre outros),
proveniente de indivduos com suspeita de infeco toxoplsmica, em animais
susceptveis (geralmente so utilizadas fmeas jovens de camundongos ou
galinhas). Embora apresente grande eficincia, uma tcnica demorada seis
a oito semanas e que requer infraestrutura laboratorial com condies ideais
para a sua implantao. Em caso de suspeita de toxoplasmose congnita,
devem-se procurar parasitos na placenta.
No caso dos animais, o poder infectante do isolado de T. gondii pode
variar e muitas vezes necessrio realizar repiques cegos, a fim de adapt-lo
ao novo hospedeiro.
Visando reduzir o tempo e aumentar a segurana laboratorial e tambm
evitar, por questes ticas, o uso de animais , tm sido utilizados cultivos
celulares. Esse mtodo sensvel, mas requer at quatro semanas para a
concluso do diagnstico. Embora seja um mtodo menos eficiente do que o
isolamento em animais, tm sido obtidos bons resultados.
Mtodos moleculares
O diagnstico molecular baseia-se na deteco de DNA especfico do T.
gondii em tecidos ou fludos biolgicos; essa deteco pode ser realizada por
meio da reao de polimerase em cadeia, utilizando materiais como lquido
amnitico, placenta, tecido cerebral, sangue, lquor, humor vtreo, humor
aquoso, lavados broncoalveolares e fluidos pleurais e peritoneais. A titulao
de anticorpos em pacientes imunocomprometidos muitas vezes leva a resultados inespecficos, o que aumenta a importncia de metodologias como as da
PCR e de isolamento parasitrio para essas populaes.
OBS.: A identificao de isolados de T. gondii por meio da genotipagem tem sido objeto de estudo.

Protozoologia | 95

e) Epidemiologia da toxoplasmose
A toxoplasmose uma zoonose de ampla distribuio geogrfica, sendo
encontrada em todos os continentes e nos mais variados climas. As menores
prevalncias tm sido encontradas em regies frias ou ridas, onde a baixa
densidade de feldeos, aliada menor sobrevida de oocistos no solo, diminui
os ndices de parasitismo de herbvoros, roedores e pssaros e, consequentemente, dos carnvoros que deles se alimentam. A variabilidade na frequncia da infeco est ligada a diversos fatores: padres culturais da populao,
hbitos alimentares, idade, procedncia rural ou urbana, entre outros.
A prevalncia da infeco por Toxoplasma gondii varia entre as regies e
entre as populaes abordadas. No h relatos de toxoplasmose em ilhas do
Pacfico onde no existem gatos. De 20% a 83% da populao mundial esto infectados pelo parasito. No Brasil, de 50 a 80% da populao adulta
apresenta anticorpos anti-T. gondii: 74,5% na regio do Alto Uruguai (Rio
Grande do Sul); 72,16% no Rio de Janeiro; 58,9% a 77,9% em So
Paulo; e 73,9% em Manaus.
O fator idade tambm tem sido associado ao aumento da frequncia da
infeco pelo T. gondii, pois com o aumento da faixa etria aumentam as
chances de o indivduo entrar em contato com um dos diversos mecanismos
de transmisso, considerados como dados cumulativos.
A procedncia rural ou urbana tem sido apontada como um fator importante para a prevalncia da protozoose. No entanto, algumas vezes, no tm
sido encontradas diferenas na prevalncia entre as duas reas. Isso pode
sugerir que a causa da positividade nessas localidades seja devida, possivelmente, a fatores comuns tanto zona urbana quanto zona rural.
Em algumas regies rurais, podem ocorrer casos humanos de reaes cruzadas
com Sarcocystis spp, mas os casos confirmados sorologicamente so rarssimos.
H alta prevalncia da infeco toxoplsmica, tanto em animais silvestres
quanto nos domsticos, naturalmente infectados. Animais domsticos tm
sido apontados como fonte de infeco para o homem. No entanto, esse
fato s tem importncia quando associado ao hbito de ingerir carne crua

96 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

ou malcozida. Por outra parte, a presena de gatos parece ser relevante,


uma vez que esses animais tm comprovada importncia na manuteno do
ciclo do parasito.

Transmisso
Todas as trs principais formas evolutivas do T. gondii (taquizotas, cistos contendo bradizotas e oocistos contendo esporozotas) so capazes de
infectar tanto o hospedeiro definitivo (os gatos) quanto o hospedeiro intermedirio (vrias espcies de aves e mamferos, inclusive o homem), variando
apenas o mecanismo.
Mecanismos de transmisso: um importante mecanismo de transmisso a
ingesto de carne crua ou malcozida de animais (hospedeiros intermedirios),
assim como a manipulao de animais de abate destinados ao consumo humano quando os mesmos alojam bradizotas encistados. Embora a ocorrncia da
infeco por cistos de T. gondii na carne seja baixa, a frequncia com que
consumida aumenta o risco de infeco toxoplsmica. Esse um dos mecanismos mais frequentes, mesmo porque os produtos crneos no cozidos como
o caso de linguias e outros embutidos e de carnes ingeridos crus, carpaccios
entre eles tambm esto envolvidos. A possibilidade de infeco de indivduos que manuseiam de forma contnua produtos de origem animal por
exemplo, magarefes e donas de casa no preparo das refeies tambm no
deve ser descartada.
So considerados fontes de infeco animais bovinos, caprinos, ovinos,
sunos, animais de companhia, ratos, aves e um grande nmero de animais
silvestres. Esses ltimos, quando caados e ingeridos crus, s contaminam uns
poucos predadores. No entanto, como a maioria dos animais utilizada na alimentao humana herbvora, provavelmente sua infeco se d pela ingesto
de oocistos.
A ingesto de gua ou alimentos crus (verduras e frutas sem lavar)
contaminados com oocistos esporulados de T. gondii (contaminao do meio

Protozoologia | 97

ambiente, principalmente solo e gua, por fezes de felinos parasitados e posterior manipulao do solo contaminado) importante mecanismo de transmisso
da protozoose. Esse meio de infeco possivelmente o responsvel pela
prevalncia da infeco por T. gondii em indivduos vegetarianos e animais
herbvoros. Crianas podem se infectar ao brincar em tanques de areia contaminados por gatos infectados, ou mesmo no contato com esses animais.
A cada evacuao, os gatos eliminam de 2 milhes a 20 milhes de
oocistos. Com temperatura e umidade adequadas, os oocistos permanecem
viveis no meio ambiente por muitos meses , s vezes, por at um ano.
Os oocistos, que podem ser disseminados por vrios meios chuva, vento,
fauna coprfila , ampliam enormemente as fontes de infeco, inclusive no
peridomiclio.
A ingesto de leite de vaca ou cabra e de ovos de galinha, pato ou
outras espcies, contaminados com taquizotas, pode ser considerada uma
forma potencial de transmisso do T. gondii, embora o parasito raramente seja
isolado desses produtos. A transmisso durante a amamentao no foi ainda
comprovada em humanos, mas taquizotas j foram isolados do leite de mulheres na fase aguda da infeco. Desse modo, concebvel que o leite no
pasteurizado seja veculo de transmisso do parasito, porm a fervura destri
todas as formas de taquizotas do T. gondii.
Existe ainda a possibilidade de transmisso congnita, pela passagem de
taquizotas atravs da placenta, nos casos de infeco aguda, durante a gestao no s da mulher, mas tambm de outros animais. Esse tipo de transmisso s ocorre aps a infeco materna logo, ocorre indiretamente, com
a participao de oocistos ou cistos de T. gondii.
Outros mecanismos de infeco de menor importncia epidemiolgica,
mas que no deve ser negligenciada, so os transplantes de rgos principalmente corao e rim, contendo cistos ou taquizotas; a transfuso sangunea e de leuccitos taquizotas so a principal forma envolvida; acidentes
de laboratrio taquizotas e oocistos so as principais formas envolvidas;
ingesto de leite cru e por meio da saliva taquizotas a forma envolvida;

98 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

e artrpodes formigas, moscas e baratas, entre outros , como carreadores


mecnicos de oocistos. Alm disso, as chuvas e os ventos podem carrear os
oocistos para outros locais.

Figura 39. Ciclo de transmisso do Toxoplasma gondii: A) nos gatos, ocorre


a fase sexuada do protozorio; B) os oocistos, eliminados com as fezes felinas,
poluem o solo e podem ser carreados por vetores mecnicos (moscas, baratas,
formigas, minhocas); C) e D) roedores e outros animais hospedeiros intermedirios se infectam no pasto; E) ingesto de carne malcozida de animais infectados; F) as crianas se infectam ao brincarem na areia poluda por fezes de
gatos; G) os taquizotas so responsveis pela transmisso por vrios mecanismos, tais como a infeco transplacentria, pela ingesto de leite cru (incluindo
amamentao) e por via transfusional.
Ilustrao: MRR Amendoeira e DPBG Mattos (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Protozoologia | 99

F) Profilaxia e controle
As medidas profilticas que podem ser tomadas para prevenir a infeco
por Toxoplasma gondii esto diretamente relacionadas aos mecanismos de
transmisso do parasito:
ingerir carne e derivados crneos bem cozidos;
ingerir hortalias e frutas bem lavadas;
ingerir leite fervido ou pasteurizado;
lavar as mos ao manipular esses alimentos crus; habituar as crianas a
essa prtica higinica;
tratar o mais precocemente mulheres grvidas com infeco recente possvel;
impedir o acesso de gatos aos tanques de areia (cobrindo-os ou telando
o local);
evitar contato com gatos errantes ou desconhecidos;
evitar que os gatos domsticos cacem, fornecendo-lhes rao ou alimentos enlatados ou fervidos;
esterilizar com gua fervendo os lugares onde os gatos defecam.
combater os ratos;
evitar que moscas, baratas, formigas entrem em contato com os alimentos;
evitar a presena de gatos errantes no local onde vivam crianas pequenas, mulheres no incio da gravidez ou indivduos imunossuprimidos.
Essas medidas podem ser atingidas com:
saneamento bsico;
educao sanitria;
incinerao das fezes de gatos;
controle de roedores;
utilizao de tampas nas caixas de areia de praas pblicas;
controle de insetos sinantrpicos;
controle da produo de produtos crneos;
higienizao adequada de hortalias e frutas.

100 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

5.2 Protozorios do filo Apicomplexa, ordem Eucoccidiida,


gnero Isospora

a) Morfologia e biologia
A infeco por Isospora belli chamada de isosporase ou isosporose. Os
oocistos de Isospora belli so elpticos e algumas vezes apresentam estreitamento de uma ou ambas as extremidades, lembrando a forma de um pescoo.
Medem cerca de 30 m de comprimento por 10 a 12 m de largura.
Hospedeiro: homem.
Habitat: intestino delgado.
OBS.: Cistos teciduais j foram identificados em vrios casos de isosporose humana. Eles podem ser vistos com exame cuidadoso de microscopia de luz ou por microscopia eletrnica. possvel que essas formas
csticas sejam as responsveis pela latncia da infeco por Isospora
observada em algumas situaes e tambm pela resistncia ao tratamento
com o medicamento de escolha.

Figura 40. Oocistos de Isospora belli: A) imaturo, com um s esporoblasto;


B) com dois esporoblastos que evoluiro para dois esporocistos; C) oocisto
maduro, contendo quatro esporozotas em cada um dos esporocistos.
Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Protozoologia | 101

Figura 41. Oocisto imaturo de Isospora belli corado por


safranina-azul de metileno, 1000X.
Foto cedida pelo professor Sidnei Silva (Instituto de Pesquisa Clnica Evandro Chagas/IOCFiocruz).

Ciclo biolgico da Isospora belli


O ciclo de vida da Isospora belli monoxnico, pois exige somente um
hospedeiro para completar o seu ciclo evolutivo. Apesar disso, h relatos de
hospedeiros paratnicos32 que podem apresentar fases do ciclo biolgico em
seus tecidos.

Seres vivos que albergam e transportam parasitos sem fazerem parte de seu ciclo evolutivo, ou seja,
no h evoluo do parasito nesse tipo de relao.

32

102 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 42. Ciclo biolgico da Isospora belli.

b) Relao parasitohospedeiro
Em geral, a infeco por Isospora belli permanece assintomtica. Porm,
algumas vezes podem ocorrer clicas abdominais, meteorismo,33 diarreia, febre, anorexia,34 dor de cabea e nuseas. O incio das manifestaes clnicas
ocorre, provavelmente, de 7 a 10 dias aps a contaminao do indivduo, e
os sinais e sintomas podem durar 10 dias ou mais. No entanto, a evoluo
para a cura espontnea, mesmo sem medicao.
Em pacientes com Aids ou com outras condies que determinem imunocomprometimento, geralmente a isosporose se torna crnica e intermitente.35
J no caso de indivduos imunocompetentes, a evoluo da infeco por
Isospora belli , em geral, benigna.
Flatulncia (excesso de gases nos intestinos ou estmago).
Diminuio ou falta de apetite.
35
Perodos com manifestaes clnicas que se alternam com perodos sem sintomas.
33
34

Protozoologia | 103

c) Diagnstico laboratorial
O diagnstico feito por meio de exames de fezes para pesquisa de
oocistos a partir da terceira semana de infeco. Dentre os exames mais indicados, esto os mtodos de Faust e cols. (1938) e de Ritchie (1948), que
so mtodos de concentrao.
Geralmente acopla-se a tcnica de concentrao (sedimentao ou flutuao) a tcnicas de colorao. Considerando-se que Isospora belli um
coccdeo entrico, devem-se utilizar as tcnicas de colorao derivadas do
Ziehl-Neelsen ou a safranina-azul de metileno, que so bastante eficientes na
identificao dos oocistos.
Como a liberao de oocistos nas fezes pode ser irregular e com carga parasitria pequena, recomenda-se a repetio dos exames negativos, devendose fazer coleta de mais de uma amostra em dias no consecutivos.
d) Epidemiologia
A infeco por Isospora belli em humanos cosmopolita. Por causa de sua
ampla distribuio geogrfica e por sua ocorrncia ser rara, a manuteno de
casos de infeco faz supor a existncia de hospedeiros no humanos.
Com o aparecimento dos casos de Aids na dcada de 1980, a isosporase tem sido responsabilizada por surtos de diarreia. Estudos de prevalncia
mostram que esses casos atingem 0,2% dos pacientes com Aids submetidos
a exames de fezes nos Estados Unidos, 10,5% dos imunodeficientes no Rio
de Janeiro e 15% dos pacientes com Aids do Haiti.
A frequncia do encontro de Isospora belli em comparao com casos de
infeco por Sarcocystis hominis varivel, dependendo da regio estudada.
No Chile, os casos de isosporose so nove vezes mais frequentes do que os
de S. hominis; j em So Paulo, ocorrem trs casos de S. hominis para cada
dois de I. belli.
Pouco se sabe sobre a forma de transmisso da isosporase; provavelmente
a infeco se d por meio da ingesto de gua ou alimentos contaminados
com oocistos de I. belli.

104 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

e) Profilaxia
Como em outras parasitoses intestinais, a profilaxia baseada na educao
sanitria das populaes residentes.

5.3 Protozorios do filo Apicomplexa, ordem Eucoccidiida,


gnero Sarcocystis

Existem diversas espcies de Sarcocystis e elas so encontradas numa grande variedade de vertebrados: desde peixes at mamferos.
a) Morfologia e biologia
Os oocistos das duas principais espcies de Sarcocystis que parasitam o
homem Sarcocystis hominis e Sarcocystis suihominis so muito parecidos, de
forma que no possvel distinguir uma espcie da outra por meio do oocisto.
Como a membrana dos oocistos muito frgil, na maioria das vezes so encontrados esporocistos isolados ou dois esporocistos acoplados, um ao lado do outro,
com quatro esporozotas bem definidos dentro de cada um deles.
Os esporocistos, ovoides, medem de 10 a 18 m de comprimento por
7,5 a 12 m de largura.

Figura 43. Desenho esquemtico de esporocistos unidos de Sarcocystis hominis.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Protozoologia | 105

b) Relao parasitohospedeiro
A doena provocada pelas espcies de Sarcocystis, que recebe os nomes
de sarcocistose, sarcosporidiose e sarcosporidase, no muito frequente no
homem. Sarcocystis hominis e Sarcocystis suihominis, espcies que parasitam
o homem, possuem ciclo evolutivo heterxeno obrigatrio, envolvendo um
hospedeiro definitivo e um intermedirio.
Sarcocystis hominis
Hospedeiro definitivo (ciclo sexuado do protozorio): homem e alguns
macacos.
Hospedeiro intermedirio (ciclo assexuado do protozorio): gado bovino.
Sarcocystis suihominis
Hospedeiro definitivo (ciclo sexuado do protozorio): homem.
Hospedeiro intermedirio (ciclo assexuado do protozorio): msculos do
porco.

Figura 44. Evoluo de Sarcocystis sp no hospedeiro intermedirio.

106 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 45. Evoluo de Sarcocystis sp no hospedeiro definitivo.

OBS.: Como a formao de gametas ocorre diretamente ou seja,


no h ciclo esquizognico , as leses da mucosa intestinal no homem
so mnimas e, em geral, os casos so assintomticos e de cura espontnea. A infeco por Sarcocystis sp atinge a musculatura esqueltica e
cardaca dos animais, sendo um problema para a medicina veterinria.

c) Diagnstico laboratorial
O diagnstico feito pelo encontro de oocistos esporulados ou esporocistos nas fezes. Tcnicas de concentrao, como as de Faust e cols. (1938)
e Sheather (1923) usando-se soluo aucarada, em lugar de sulfato de
zinco, pois os oocistos e esporocistos so leves e flutuam bem em solues
que contenham acar ou sal em elevadas concentraes, com densidades
altas , so as mais utilizadas.

Protozoologia | 107

d) Epidemiologia
A infeco por Sarcocystis sp cosmopolita. Em alguns lugares, 100%
dos bovinos e caprinos esto infectados com alguma espcie de Sarcocystis.
Os esporocistos esporulados resistem bem nos esgotos e no meio ambiente.
Por isso, em regies onde existe contaminao das pastagens com resduos de
esgotos aumenta a probabilidade de infeco do gado bovino.
Os herbvoros se infectam ao ingerirem pasto poludo com fezes humanas
que contenham oocistos maduros ou esporocistos; os porcos se infectam ao
ingerirem alimentos contaminados com fezes humanas contendo oocistos. O
homem se infecta pela ingesto de carne crua ou malcozida de bovinos (S.
hominis) ou porcos (S. suihominis).
H relatos de que o homem pode funcionar como hospedeiro intermedirio, desenvolvendo o ciclo do protozorio no tecido muscular, porm de forma
assintomtica ou com sintomatologia branda.
e) Profilaxia e controle
para prevenir a infeco humana: as carnes de bovinos e sunos devem ser
ingeridas bem cozidas e os abatedouros de animais devem ser fiscalizados.
para evitar a infeco de bovinos e sunos: deve-se dar destino adequado s fezes humanas, impedindo que contaminem o meio ambiente.

5.4 Protozorios do filo Apicomplexa, ordem Eucoccidiida,


gnero Cryptosporidium

Cryptosporidium so protozorios, encontrados em grande variedade de


vertebrados, que podem parasitar aves, peixes, rpteis e mamferos inclusive
o homem. Atualmente contam-se 22 espcies desse protozorio.
Cryptosporidium spp considerado um dos principais responsveis por
diarreias infantis em crianas de 2 a 5 anos que frequentam creches. Em indivduos imunocompetentes, a infeco autolimitada, causando diarreia com

108 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

cura espontnea. J em indivduos imunodeficientes por diversas causas, os


casos de diarreia so prolongados e graves.
Apesar de existirem 16 espcies consideradas vlidas, as principais espcies que infectam o homem em todo o mundo, incluindo o Brasil, so C.
hominis e C. parvum sendo a espcie C. hominis, com ciclo de transmisso
basicamente antropontico (de homem a homem), a mais prevalente entre a
populao humana e a espcie C. parvum est mais envolvida na transmisso
zoontica, uma vez que responsvel pela infeco de diversas espcies de
animais, entre outros, bovinos e macacos.
20% dos oocistos tm parede fina se rompem continua a esquizogonia.
80% dos oocistos tm parede espessa vo para o meio ambiente.

a) Morfologia e biologia
Morfologia
Os oocistos maduros so esfricos ou ovoides, com quatro esporozotas,
e medem de 4 a 5 m; essa a forma infectante, que eliminada, em fezes
diarreicas, pelos pacientes ou animais parasitados. A maioria dos oocistos tem
parede cstica dupla e espessa e muito resistente ao meio ambiente. Alguns
oocistos, porm, possuem parede cstica nica e delgada, to frgil que muitas vezes se rompe ainda dentro do intestino do hospedeiro.

Protozoologia | 109

Figura 46. Desenho esquemtico do Cryptosporidium parvum no intestino do


camundongo: A) oocisto maduro com quatro esporozotas; B) esquizonte aps
a esquizogonia.
Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Ciclo biolgico do Cryptosporidium sp


O ciclo de vida do Cryptosporidium sp monoxnico.

Figura 47. Ciclo biolgico do Cryptosporidium sp.

110 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

b) Relao parasitohospedeiro
A transmisso da protozoose se d pela contaminao fecal/oral entre
pessoas, ou por meio de animais da ser considerada uma zoonose , ou,
ainda, por gua ou alimentos contaminados com oocistos.
O perodo de incubao da infeco dura de 4 a 14 dias, e o incio das
manifestaes clnicas explosivo, com enterocolite aguda. Em indivduos
imunocompetentes, o quadro clnico de diarreia e clicas autolimitado, com
cura espontnea ao fim de uma ou duas semanas.
A gravidade da criptosporidiose maior quando h imunodeficincia de
qualquer natureza, principalmente em casos de Aids. Nesses casos, o incio
insidioso e se agrava progressivamente, com diarreia aquosa, clicas, dor
epigstrica, nuseas e vmitos, mal-estar e perda de peso, podendo ocorrer
desidratao e caquexia e at a morte. Os pacientes imunodeprimidos com
criptosporidiose tm intolerncia lactose e m absoro de gorduras. Vrios
antibiticos tm sido ensaiados para diminuir a diarreia, mas at o presente
no h nenhum tratamento eficaz.
Como os oocistos se tornam maduros (infectantes) dentro do organismo
do hospedeiro, h possibilidade de autoinfeco. A presena de oocistos de
parede fina pode ocasionar seu rompimento ainda no interior do intestino,
provocando a chamada infeco interna; j a autoinfeco externa se d quando o hospedeiro ingere as formas infectantes do parasito, geralmente oocistos
de parede espessa.
c) Diagnstico laboratorial
O diagnstico feito pela pesquisa de oocistos nas fezes (por mtodos
de concentrao e colorao) ou sorologicamente (pelas tcnicas de ELISA
ou Rifi).
O diagnstico laboratorial da criptosporidiose se baseia no encontro e na
identificao dos oocistos nas fezes dos hospedeiros infectados. Para tanto,
devem ser realizadas tcnicas de concentrao e coloraes especficas. As
fezes podem ser concentradas por metodologias convencionais como a

Protozoologia | 111

tcnica de centrifugo-sedimentao em formol-ter e o mtodo de Ritchie


(1948), ou mesmo tcnicas de centrifugo-flutuao, como o mtodo de
Sheather (1923), no qual os oocistos flutuam numa soluo saturada de
sacarose com densidade de 1.200 g/L.
Os esfregaos fecais so confeccionados com o sedimento obtido mediante
mtodos de concentrao e, posteriormente, submetido a tcnicas de colorao especficas. A tcnica da fucsina-carbol, ou seja, a colorao por fucsina
fenicada, base das coloraes derivadas do Ziehl-Neelsen, de ampla utilizao no diagnstico das enterococcidioses. Tambm muito utilizada a tcnica
da safranina-azul de metileno. Os oocistos apresentam a caracterstica de ser
lcool-cido resistentes; portanto, fixam bem a fucsina fenicada.
Existem hoje, disponveis comercialmente, kits para a pesquisa de coproantgenos que detectam, por ELISA, a presena de antgenos dissolvidos nas
fezes. So bastante sensveis e especficos, porm o alto custo ainda limita a
sua utilizao na rotina laboratorial.
Os oocistos de Cryptosporidium so idnticos para todas as espcies consideradas vlidas, e o diagnstico por tcnicas moleculares tem sido utilizado
para diferenciar os diferentes subtipos do protozorio. As tcnicas mais utilizadas so a PCR e suas variaes.36
Os mtodos sorolgicos no so muito utilizados, mas, quando empregados, ocorre, pelo menos na tcnica de Rifi, a presena de ttulos sorolgicos
elevados at um ano aps a infeco.

36

Ver o captulo Biologia molecular, no volume 3 desta coleo.

112 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 48. Oocistos de Cryptosporidium sp corados por


safranina-azul de metileno, 1000X.

Foto cedida pelo professor Sidnei Silva (Instituto de Pesquisa Clnica Evandro Chagas/IOCFiocruz).

d) Epidemiologia
A criptosporidiose uma zoonose de animais domsticos e do gado
encontrada em todos os continentes, sendo considerada cosmopolita. Sua
prevalncia varia de regio para regio. Em pases desenvolvidos, ocorre em
0,6 a 20% de diferentes populaes; entre indivduos HIV-positivos com
diarreia, a ocorrncia dessa doena est em torno de 14%. J em relao
aos pases em desenvolvimento, a frequncia de infectados bem maior, de
4 a 32%, sendo de 24% a prevalncia entre os imunossuprimidos pelo
vrus HIV.
Os bovinos, por eliminarem grandes quantidades de oocistos, so muito
importantes na cadeia epidemiolgica da infeco.
OBS.: A prevalncia da criptosporidiose mais elevada entre os
homossexuais aidticos. Os indivduos com Aids so muito importantes
na transmisso da infeco, por serem grandes eliminadores de oocistos.
Vale ressaltar que, aps a introduo da terapia antirretroviral de alta
potncia HAART (do ingls Highly Active Antiretroviral Therapy),
e como resultado da melhora na imunidade celular desses indivduos,
houve uma queda no nmero de pacientes que apresentavam diarreia
por esses agentes.

Protozoologia | 113

Os oocistos de Cryptosporidium sp so bastante resistentes no meio


exterior; so resistentes tambm maioria dos desinfetantes e clorao at
4,9% ou mais. Os oocistos so destrudos apenas pelo formol a 10% e pelo
aquecimento a 65C durante 30 minutos.
Muitos surtos esto relacionados com a poluio hdrica, e a ingesto de
gua contendo oocistos de Cryptosporidium sp um problema de sade
pblica que no deve ser negligenciado. Melhorias no saneamento bsico j
ajudariam nesse tipo de transmisso da protozoose.
A transmisso de homem a homem muito importante, e os casos de autoinfeco devem ser levados em conta quando se tomem medidas profilticas
para o controle da protozoose. Os hbitos higinicos inadequados so um dos
fatores que contribuem para esse tipo de infeco.
No Brasil, os surtos de criptosporidiose tm aumentado entre crianas que
frequentam creches, provavelmente por esses serem ambientes que favorecem
a doena, por causa do contato direto crianacriana, crianafuncionrio.
e) Controle
Os pacientes HIV positivo devem ser assistidos com cuidados especiais
para no haver contaminao do ambiente e das outras pessoas em torno,
inclusive do cuidador, que deve usar luvas, lavar (para remoo mecnica) e
desinfetar as mos, esterilizar materiais utilizados no paciente e descontaminar
todas as superfcies que, direta ou indiretamente, entraram em contato com
o mesmo.

114 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Quadro 1
Principais diferenas morfolgicas e biolgicas entre os gneros
Protozorios

Isospora belli

Sarcocystis
hominis

Sarcocystis
suihominis

Cryptosporidium
sp

Toxoplasma
gondii

Presente nas
fezes humanas
ou de outros
animais
parasitados.
So eliminados
totalmente
maduros
(forma
infectante),
com quatro
esporozotas
medindo de 4
a 5 m

Presente
nas fezes de
felinos, so
eliminados
imaturos e
evoluem
no meio
ambiente

Presentes
imaturos nas fezes
humanas (com
um blastmero
apenas);
desenvolvem-se no
meio externo

Ausentes nas
fezes humanas

Ausentes nas
fezes humanas

Esporocistos

Dois dentro do
oocisto, cada
um com quatro
esporozotas

Saem juntos
com as fezes
humanas,
isolados ou
acoplados
em pares,
cada um
com quatro
esporozotas

Saem juntos
com as fezes
humanas,
isolados ou
acoplados
em pares,
cada um
com quatro
esporozotas

Ausentes

Dois dentro
do oocisto,
cada um
com quatro
esporozotas

Ciclo

Monoxnico

Heteroxnico
obrigatrio

Heteroxnico
obrigatrio

Monoxnico

Heteroxnico
facultativo

Hospedeiro
definitivo

Homem

Homem

Homem

Homem

Felinos
(gato)

Ausente

Mamferos,
inclusive o
homem, e
aves

Oocistos

Hospedeiro
intermedirio

No conhecido

Bovinos

Sunos

Protozoologia | 115

5.5 Protozorios do filo Apicomplexa, ordem


Hemosporidiida, gnero Plasmodium

A malria considerada a doena tropical mais importante pela


Organizao Mundial da Sade, sendo um problema de sade pblica em
mais de cem pases. Em 2009, foram detectados cerca de 225 milhes
de casos da infeco no mundo. causada por protozorios pertencentes
ao filo Apicomplexa, sendo que quatro espcies so parasitos de humanos:
Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium malariae e Plasmodium
ovale. Apenas as trs primeiras ocorrem naturalmente no Brasil, onde 97%
dos casos esto relacionados a P. falciparum ou P. vivax.
a) Morfologia e biologia
O plasmdio tem como hospedeiros definitivos as fmeas de mosquitos
do gnero Anopheles nas quais ocorre sua reproduo sexuada , sendo
os humanos hospedeiros intermedirios, apresentando apenas a multiplicao
assexuada do parasito em suas hemcias e clulas hepticas.
Principais formas do protozorio encontradas no homem
esquizontes pr-eritrocticos (em hepatcitos);
merozotas (produzidos nas fases pr e eritroctica);
trofozotas sanguneos (hemcias);
esquizontes (hemcias);
gametcitos (hemcias).

116 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 49. Desenho esquemtico de um merozota de plasmdio.


Ilustrao: adaptada de Rey, 2008, por JCA Carreira e AVM Silva
(Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Figura 50. Desenho esquemtico de um trofozota de plasmdio.


Ilustrao: adaptada de Rey, 2008, JCA Carreira e AVM Silva
(Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Protozoologia | 117

Figura 51. Desenho esquemtico de um esquizonte de plasmdio.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Formas encontradas nos mosquitos:


microgametas e macrogametas (no estmago);
zigoto ou oocineto (entre epitlio e membrana basal do basal do
estmago);
oocisto (entre epitlio e membrana basal do estmago);
esporozotas (na hemolinfa e nas glndulas salivares).

b) Ciclo biolgico dos plasmdios


O ciclo de vida dos plasmdios heteroxnico obrigatrio. No hospedeiro
intermedirio (homem), ocorre apenas a reproduo assexuada do parasito;
no hospedeiro definitivo (anofelino), ocorre sua reproduo sexuada.

118 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 52. Ciclo biolgico do Plasmodium sp no hospedeiro intermedirio (homem).

Figura 53.Ciclo biolgico do Plasmodium sp no hospedeiro definitivo (anofelino).

c) Malria
Os indivduos parasitados apresentam um quadro de infeco sistmica
que se manifesta em geral com febre em intervalos relativamente regulares
(perodo entre esquizogonias), anemia, ictercia, alteraes circulatrias e

Protozoologia | 119

aumento do bao, e, nos casos de malria cerebral, dores de cabea, convulses e coma.
A multiplicao do Plasmodium leva lise de hemcias e liberao de metablitos parasitrios. H prejuzo na oxigenao dos tecidos e danos decorrentes
de tal hipxia. Hemcias parasitadas pelo Plasmodium falciparum tornam-se mais
aderentes s paredes dos capilares, reduzindo a perfuso tecidual.37
A hemozona, ou pigmento malrico, liberada com o rompimento celular, pode formar depsitos em vrios rgos fgado, bao, crebro e medula
ssea , dando aos mesmos uma colorao enegrecida.
A periodicidade no aparecimento do quadro febril varia conforme a
espcie do parasito. Esse intervalo de 36 a 48 horas em infeces por P.
falciparum; de 48 horas em infeces por P. vivax; e de 72 horas nas infeces
por P. malariae, sendo a malria referida popularmente, nesses casos, respectivamente, como febre ter maligna, febre ter benigna e febre quart.
d) Diagnstico laboratorial
Parasitolgico
O diagnstico parasitolgico consiste em pesquisa das formas sanguneas
do protozorio no interior de hemcias, avaliando sua morfologia, em distenso delgada ou espessa. O sangue deve ser coletado preferencialmente
prximo ao momento de um acesso malrico e por puno capilar.
Distenso delgada (esfregao) e gota espessa: so os mtodos mais utilizados pelas vantagens que apresentam tempo reduzido para a liberao
do resultado, baixo custo e por permitirem a diferenciao entre as espcies de Plasmodium. Porm tm alguns inconvenientes, como a exigncia
de profissionais experientes para a realizao de uma boa colorao e para
a leitura das lminas, podendo ainda apresentar resultado falso negativo
em casos de parasitemia baixa.
Fluxo constante de sangue que assegura a oxigenao e a nutrio dos tecidos, assim como a
remoo dos resduos metablicos e do excesso de CO2 .

37

120 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Mtodo da centrifugao do micro-hematcrito QBC (do ingls Quantitative Buff Coat): at oito vezes mais sensvel que as tcnicas anteriores,
esse mtodo permite o diagnstico parasitolgico mesmo em casos de
baixa parasitemia. Exige maiores recursos no laboratrio, o que eleva o
seu custo. Alm disso, a identificao da espcie parasitria mais difcil.
Sorolgico
Rifi: considerado o teste de referncia para o diagnstico da malria, apresenta boa sensibilidade, especificidade e reprodutibilidade. Pode fornecer
resultado falso positivo, quando da presena de fator reumatoide, de
conjugados mal titulados e de anticorpos autoimunes. Exige equipamentos
especiais e pessoal com treinamento especfico.
ELISA: entre as suas vantagens, esto o seu baixo custo em relao aos
outros mtodos, a automao e a possibilidade de pesquisa de antgenos
circulantes.
Molecular
PCR e hibridizao de DNA so tcnicas de altas sensibilidade e especificidade que permitem a realizao de grande nmero de amostras.
Entretanto, seu custo operacional ainda muito elevado.

Protozoologia | 121

Esquema 1. Diagnstico diferencial das espcies de Plasmodium.

A distribuio das formas evolutivas do protozorio na fase eritrocitria


varia conforme a espcie de Plasmodium, assim como o seu tropismo por hemcias mais jovens ou maduras. As formas listadas a seguir so as encontradas
usualmente no sangue perifrico dos pacientes:
Plasmodium vivax
Trofozota jovem: apresenta aspecto de anel, com o citoplasma espesso
e arqueado, e cromatina nuclear geralmente nica, condensada e situada
prximo borda do trofozota (como se fosse a pedra do anel). Encontrado principalmente em hemcias jovens, deixa-as com aspecto maior
e mais plido do que o normal.
Trofozota ameboide: seu citoplasma irregular, vacuolizado, e seu ncleo, nessa fase, no se encontra em diviso.
Esquizonte: citoplasma irregular, muito vacuolizado e com cromatina em
diviso (incio da esquizogonia).

122 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Roscea ou mercito: cada fragmento do ncleo, acompanhado de uma


poro de citoplasma, forma tantos merozotas quantas forem as fragmentaes nucleares. Formam-se de 12 a 14 merozotas, os quais, dispostos
de forma irregular em uma massa de pigmentos, ocupam completamente a
hemcia.
Macrogametcito: precursor do gameta feminino, de formato arredondado ou oval, citoplasma abundante, ncleo grande, com cromatina grande
e perifrica. Ocupa quase todo o volume da hemcia hipertrofiada.
Microgametcito: precursor do gameta masculino, semelhante ao macrogametcito, porm com cromatina menos condensada e usualmente
central.
Plasmodium falciparum
Trofozota jovem: citoplasma delicado, gro de cromatina saliente (anel
de bacharel) ou duplo, e presena de hemcias poliparasitadas.38
Macrogametcito: alongado e curvo, em forma de crescente (forma de
banana), com ncleo denso cercado de pigmento malrico.
Microgametcito: mais curto e menos curvado que o macrogametcito,
seu citoplasma cora-se de forma menos intensa, sua cromatina mais difusa
e o pigmento malrico disseminado.
Obs.: Em casos de infeces graves, possvel encontrar, em sangue
perifrico, trofozotas maduros, esquizontes e mercitos, esses com de 8
a 36 merozotas, dispostos ao redor de uma massa de pigmentos. Usualmente tais formas se encontram apenas na circulao sangunea visceral.

38

Dois ou mais trofozotas parasitando a mesma hemcia.

Protozoologia | 123

Plasmodium malariae
Trofozota jovem: tem aspecto de anel, citoplasma espesso e cromatina
saliente e se posiciona em faixa na hemcia.
Trofozota maduro: assume o aspecto de faixa em quase todo o dimetro
da hemcia, apresenta citoplasma compacto e cromatina pouco visvel.
Esquizonte: citoplasma disforme, cromatina em diviso e presena de pigmentos grosseiros ao longo do corpo do parasito; apresenta-se em posio
de faixa equatorial na hemcia.
Roscea ou mercito: cada fragmento do ncleo, acompanhado de uma
poro de citoplasma, forma tantos merozotas quantas forem as fragmentaes nucleares geralmente de 8 a 10 merozotas, dispostos como as
ptalas de uma flor, com citoplasma residual no centro.
Macrogametcito: tem formato redondo, com poucos pigmentos grosseiros, e cromatina perifrica semelhante ao P. vivax, porm de tamanho mais
reduzido.
Microgametcito: com formato redondo, tem poucos pigmentos grosseiros e cromatina central nica e menos evidente, mais difusa do que a do
macrogameta.

Figura 54. Desenho esquemtico de trofozotas de plasmdios


no interior da hemcia do hospedeiro intermedirio.
Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

124 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 55. Fotos de distenses delgadas sanguneas, coradas pelo Giemsa,


1000X: A) trofozotas e macrogametcito de Plasmodium falciparum (setas);
B) macrogametcito de Plasmodium vivax (seta);
C) trofozota de Plasmodium vivax (seta).
Fotos: Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz.

e) Epidemiologia
Cerca de cem pases, principalmente da frica, sia e Amrica Latina,
ainda apresentam reas endmicas para a malria. O sudeste asitico, a China
e algumas reas da Amrica do Sul apresentam transmisso focal limitada
ao interior de florestas, de forma sazonal (com picos depois do incio e
seguindo-se ao fim das chuvas). Nesses locais, a populao de risco consiste
em trabalhadores que entram em contato com as florestas.
A transmisso da malria mais comum no interior das habitaes, em
reas rurais e semirrurais. Pode ocorrer em reas urbanas, principalmente nas
zonas de periferia. Em altitudes superiores a 2.000 metros, o risco de aquisio de malria menor, pois o ambiente desfavorvel ao mosquito. O
principal transmissor na regio amaznica o Anopheles darlingi. Ele utiliza
grandes colees de gua como criadouro e atualmente mais relacionado
transmisso extradomiciliria. A espcie Anopheles aquasalis predomina na
faixa litornea, inclusive no Rio de Janeiro. Essa espcie apresenta maior atividade durante a noite, do crepsculo ao amanhecer, e pica tanto no interior
quanto no exterior das habitaes.
A transmisso do Plasmodium pode ocorrer tambm, de forma menos
frequente, por meio de transfuses sanguneas, transplantes de rgos, utilizao compartilhada de seringas e agulhas, e da gestante para o filho (malria
congnita), antes ou durante o parto.

Protozoologia | 125

A espcie P. falciparum causa a malria em sua forma mais grave, podendo


ser fatal. Segundo a OMS, em 2009 ocorreram cerca de 780 mil bitos
por malria no mundo. O risco de aquisio no uniforme dentro de um
mesmo pas; dessa maneira, atualmente a transmisso da malria no Brasil
est basicamente restrita Amaznia Legal. Nas capitais dessa regio, em
geral o risco pequeno (em Belm, quase inexistente), porm pode haver
transmisso significativa nos arredores das cidades (periferia de Manaus e de
Porto Velho, por exemplo). Nos estados fora da regio amaznica, o risco
de transmisso local (autctone) pequeno ou inexistente. Entretanto, como
ainda existe Anopheles em reas atualmente livres da malria, h risco de
ocorrer a reintroduo da mesma.
f) Profilaxia
eliminao de criadouros de anofelinos (uso de larvicidas e predadores);
uso de inseticidas de ao residual;
uso de telas nas casas;
uso de roupas protetoras, principalmente ao entardecer e ao amanhecer;
controle dos bancos de sangue;
tratamento dos indivduos parasitados (principalmente aqueles com gametcitos circulantes);
quimioprofilaxia para viajantes e grupos de risco.

5.6 Protozorios do filo Apicomplexa, ordem Piroplasmida,


gnero Babesia

A) Babesia sp
a) Morfologia e biologia
A babesiose constitui importante enfermidade parasitria dos animais domsticos, podendo ocasionar grandes perdas econmicas no rebanho. Esse

126 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

parasitismo desencadeia um quadro clssico de anemia, com complicaes


decorrentes da multiplicao intraeritrocitria intensa.
Mais de 70 espcies conhecidas de Babesia apresentam como hospedeiros definitivos carrapatos ixoddeos. Grosseiramente, as espcies podem
ser divididas em dois grupos: grandes babsias (quando seu tamanho excede
2,5 m ou o raio da hemcia parasitada) e pequenas babsias (menores do
que 2,5 m).
Algumas caractersticas do ciclo evolutivo das diferentes espcies de babsia lembram o ciclo dos plasmdios humanos. A multiplicao assexuada
por esquizogonia ocorre no interior dos eritrcitos de mamferos, assim como
o incio da gametogonia, seguindo at a formao dos gametcitos. Os
gametcitos, quando ingeridos pelos carrapatos, do continuidade ao ciclo
evolutivo, amadurecendo em gametas no intestino do artrpode.
A fuso do microgameta ao macrogameta origina o zigoto, que evolui
para oocineto, onde os esporozotas sero formados. O rompimento do
oocineto libera os esporozotas, que migram para diversos tecidos (muscular, glandular, cutneo), sendo de especial relevncia quando infectam os
ovrios, pois, ento, so transmitidos de forma transovariana para a prxima
gerao de carrapatos. Nesse caso, os artrpodes nascem parasitados.
De acordo com a espcie, as babsias podem ser transmitidas to logo se
inicie a alimentao do hospedeiro, sendo inoculadas com a saliva do artrpode no mamfero. Ao alcanarem os eritrcitos, os esporozotas utilizam suas
estruturas apicais para penetrar na clula hospedeira, onde iniciam a multiplicao assexuada (esquizogonia). Alguns relatos indicam ainda a possibilidade
de transmisso por via placentria e de forma mecnica, por meio de puno
sangunea de animal infectado posteriormente inoculada em animal suscetvel.
A babesiose animal tem curso diferente segundo as espcies de parasito e
do hospedeiro em questo. Algumas alteraes so idnticas s apresentadas
por outros parasitos intraeritrocitrios, como os plasmdios.

Protozoologia | 127

b) Patogenia e manifestaes clnicas


Certas espcies podem levar aderncia de glbulos parasitados s paredes dos vasos, prejudicando bastante a oxigenao local e reduzindo a taxa de
espcimes detectveis nos exames parasitolgicos sanguneos. O quadro clnico envolve, dentre outros sintomas, anemia hemoltica,39 hemoglobinria,40
ictercia41 e dispneia,42 e leva progressiva debilitao da condio fsica do
animal, podendo ser fatal.
Casos de babesiose humana tm sido relatados em diversos pases, inclusive no Brasil. As espcies envolvidas at o momento so Babesia microti (que
possui murinos, e as espcies de carrapatos que os parasitam, como hospedeiros naturais), Babesia bovis e Babesia divergens (que tm bovinos, bubalinos e cervdeos como hospedeiros naturais). O quadro clnico humano
semelhante ao da malria; entretanto, o exame das formas sanguneas, quando
analisadas por profissionais capacitados, permite a distino morfolgica entre
os agentes. Seu formato pode variar de acordo com a etapa de evoluo no
hospedeiro, apresentando forma de vrgula, anel, ovoide ou mesmo ameboide
e irregular, e sempre com carioteca distinta. Casos de parasitismo humano
encontrados no Rio de Janeiro e em So Paulo trazem tona a discusso
sobre a maneira como a aquisio do parasitismo est ocorrendo na espcie.
Atualmente, a possibilidade de veiculao por transfuses sanguneas tem
sido apontada como uma das causas.
O diagnstico parasitolgico pode fornecer resultado falso negativo, dependendo da espcie de babsia e da parasitemia apresentada. Por isso,
recomenda-se a realizao de vrias coletas em dias diferentes e a associao
com outras tcnicas, como as de imunodiagnstico (Rifi, ELISA). As tcnicas
moleculares so empregadas como forma rpida e segura de diagnstico da
babesiose humana em alguns pases. O isolamento em animais de laboratrio
Anemia decorrente da destruio excessiva de hemcias.
Presena de hemoglobina na urina.
41
Deposio de pigmentos biliares no tegumento, ocasionando colorao amarelada na pele e nas
mucosas.
42
Dificuldade respiratria.
39
40

128 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

permite boa avaliao do parasito e sua identificao; entretanto, requer


tempo maior para a obteno do resultado.
A babesiose ocorre em todos os continentes, estando a distribuio das
espcies do protozorio diretamente relacionada distribuio das espcies
de ixoddeos transmissores.
c) Profilaxia e controle
O controle da enfermidade no rebanho deve ser feito em conjunto com o
combate ao carrapato, sem o seu completo extermnio, a fim de manter uma
imunidade regular nos animais. O contato de humanos com os artrpodes
deve ser evitado por meio do uso de roupas protetoras; aps exposio a
locais ou animais potencialmente infestados, tambm deve ser efetuada inspeo corporal.

6. Protozorios do filo Ciliophora, ordem Trichostomatida, famlia


Balantidiidae, gnero Balantidium

A) Balantidium coli
O Balantidium coli o nico ciliado patognico para o ser humano.
a) Morfologia e biologia
Morfologia
Trofozota: tem de 40 a 90 m de altura por 30 a 60 m de largura; seu
formato ovoide ou elptico e apresenta dois ncleos: um em forma de rim,
nitidamente de dimenso maior (macroncleo), e outro, prximo ao macroncleo, de difcil visualizao (microncleo). No citoplasma, h grandes vacolos
contrteis em nmero varivel. Nos polos celulares, encontram-se, opostamente,
o citstoma e o citopgio. Sua membrana plasmtica apresenta externamente
numerosas fileiras de clios (raramente visualizados nas preparaes permanentes,
pois so destrudos pelo processo de fixao e/ou colorao).

Protozoologia | 129

Cisto: com 40 a 60 m de dimetro, tem formato esfrico ou ovoide, com


dois ncleos semelhantes aos do trofozota. Seu citoplasma possui aspecto
hialino, com presena de vacolos. A membrana cstica relativamente grossa.

Figura 56. Balantidium coli: A) trofozota; B) cisto.


Ilustrao: JCA Carreira e AVM Silva (Laboratrio de Toxoplasmose/IOCFiocruz).

Ciclo biolgico do Balantidium coli


O B. coli se multiplica na luz do intestino grosso, geralmente sem causar
danos locais; ocasionalmente, porm, invade a mucosa e outros tecidos, possivelmente por meio da liberao de enzimas histolticas. A reproduo ocorre
por diviso binria (reproduo assexuada) e, algumas vezes, por conjugao
(reproduo sexuada). Periodicamente, formam-se cistos que so eliminados
nas fezes. Os cistos raramente so encontrados nas fezes humanas; entretanto,
so frequentes na evacuao de porcos parasitados. A infeco de um novo
hospedeiro ocorre por ocasio da ingesto dos cistos.

130 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 57. Ciclo biolgico do Balantidium coli.

b) Patogenia e manifestaes clnicas


A balantidase, infeco por B. coli, pode ter curso semelhante amebase; pode ser muitas vezes assintomtica ou levar a lceras, em forma de
gargalo de garrafa, na mucosa do intestino grosso, principalmente no ceco,
apndice e sigmoide. As manifestaes clnicas da balantidase podem ser a
presena de fezes diarreicas com sangue e/ou muco, febre e clica abdominal.
Em alguns casos, normalmente crnicos, os mesmo sintomas podem ser encontrados, porm de forma mais branda e acompanhados de tenesmo,43 perda
do apetite e anemia, normalmente alternando com perodos assintomticos.
As localizaes extraintestinais so pouco frequentes, podendo, nesse caso,
acometer pulmes, sistema urogenital ou fgado.

Sensao dolorosa na bexiga ou na regio anal, com desejo contnuo de urinar ou de evacuar,
sem xito.

43

Protozoologia | 131

c) Diagnstico laboratorial
Fezes diarreicas: por meio do exame direto possvel visualizar os trofozotas.
Fezes moldadas: so utilizadas tcnicas de concentrao, como as de Faust
e cols. (1938) e de Ritchie (1948).
Obs.: A fim de aumentar a sensibilidade diagnstica, a pesquisa de
formas parasitrias deve ser realizada em mais de uma amostra fecal (de 3
a 5), sendo que, exceto para a ltima coletada, utilizam-se conservantes
(MIF ou similares).
Outros materiais biolgicos: em casos especficos, pode-se utilizar ainda
para a pesquisa material aspirado, por meio de retossigmoidoscopia,44 de
leses ulceradas, com posterior colorao por hematoxilina eosina ou hematoxilina frrica.
d) Epidemiologia
A infeco por B. coli, apesar de ser amplamente distribuda no mundo,
pouco frequente em humanos, sendo mais encontrada em regies de clima
tropical e subtropical onde predominem a falta de educao sanitria das
populaes. O papel dos sunos como reservatrios e fontes de infeco
para humanos controverso. A dificuldade de encistamento do B. coli em
humanos, possivelmente fruto de resistncia natural, fator redutor da disseminao da parasitose. Os smios so reservatrios naturais do parasito.
e) Profilaxia e controle
destino adequado s fezes de sunos, homens e smios parasitados;
saneamento bsico e educao sanitria;
tratamento dos indivduos infectados.
44

Endoscopia realizada por via retal, para observao da regio do reto e sigmoide.

132 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

7. Protozorios parasitos de animais domsticos

O nmero de protozorios parasitos de animais domsticos muito grande. Tal como nos humanos, algumas protozooses podem ocasionar manifestaes clnicas de grau varivel, acarretando no animal desde infeces assintomticas at o bito, trazendo prejuzos econmicos (no caso de animais de
produo) e afetivos (no caso de animais de companhia). Alm disso, esses
animais podem servir como importantes fontes de transmisso de protozooses
para humanos e para outras espcies de animais, ocasionando inclusive surtos zoonticos que, eventualmente, podem dar origem a infeces humanas.
Alguns exemplos de protozorios parasitos esto relacionados no quadro 2.
Quadro 2. Principais protozorios parasitos de animais domsticos.
Gnero/
espcie

Principais
hospedeiros

Habitat

Formas diagnosticadas nos animais

Entamoeba
histolytica

Humanos e
outros primatas,
caninos, felinos
e sunos

Intestino grosso
e, eventualmente,
fgado, pulmo,
crebro

Trofozota de formato irregular,


ncleo apresentando cariossomo
puntiforme central e cromatina
perifrica. Cisto arredondado
(10 m a 15 m), com um a
quatro ncleos

Trato genital

Trofozota piriforme com cerca de


20 m por 10 m, apenas um
ncleo e quatro flagelos trs
anteriores livres e um recorrente,
formando a membrana ondulante
e se exteriorizando posteriormente

Sangue e linfa

Tripomastigota fusiforme,
alongada e fina (19 a 39
m), com flagelo de origem
posterior formando a membrana
ondulante, cinetoplasto pequeno
e subterminal

Tritrichomonas
foetus

Trypanosoma
brucei evansi

Bovinos

Hospedeiros
vertebrados:
equinos,
ruminantes,
sunos e felinos
Hospedeiros
invertebrados:
tabandeos

Protozoologia | 133

Trypanosoma
brucei
equiperdum

Leishmania spp

Equino

Trato urogenital

Morfologicamente semelhante ao
T. b. evansi

Hospedeiros
vertebrados:
humanos,
caninos,
equinos, felinos
e animais
silvestres

Clulas do
sistema fagoctico
mononuclear

Amastigotas ovalados, com


cinetoplasto em forma de basto,
associado a um flagelo rudimentar
(no exteriorizado)

Intestino delgado

Cistos pequenos, elpticos


e tetranucleados; trofozota
piriforme, com oito flagelos, dois
ncleos e disco suctorial

Hemcias

Merozotas de formato varivel


(piriformes, arredondados,
ovalados ou irregulares),
geralmente aos pares, unidos pela
extremidade mais afilada

Intestino grosso
ou delgado (de
acordo com a
espcie)

Oocistos identificados de
acordo com forma esfrica, oval
ou elipsoide e tamanho mais
comumente de 15 a 50 m.
Quando esporulados, apresentam
quatro esporocistos, com dois
esporozotas cada

Intestino delgado

Oocistos semelhantes aos de


Eimeria spp, porm apresentando,
quando esporulados, dois
esporocistos com quatro
esporozotas cada

Hospedeiros
invertebrados:
flebotomneos

Giardia lamblia

Babesia spp

Eimeria spp

Isospora spp
(Cystisospora
spp)

Caninos,
felinos,
pequenos
e grandes
ruminantes
Hospedeiro
definitivo:
carrapatos
ixoddeos
Hospedeiros
intermedirios:
mamferos
domsticos

Mamferos,
aves, rpteis e
peixes

Hospedeiros
definitivos:
caninos e felinos
Hospedeiros
paratnicos:
ratos e
camundongos

134 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Cryptosporidium
parvum e
C. muris

Humanos,
roedores e
gado
Hospedeiros
definitivos:
carnvoros
(principalmente
caninos e
felinos)

Sarcocystis spp

Toxoplasma
gondii

Hospedeiros
intermedirios:
mamferos,
aves, marsupiais
e animais
pecilotrmicos
(presas)

Hospedeiros
definitivos:
feldeos
Hospedeiros
intermedirios:
mamferos e
aves

Hospedeiros
definitivos:
candeos

Neospora
caninum

Hospedeiros
intermedirios:
bovinos,
ovinos,
caprinos,
equinos e
caninos

Clulas do intestino
delgado e grosso

Hospedeiros
definitivos: clulas
do intestino
delgado
Hospedeiros
intermedirios:
tecido muscular

Hospedeiros
definitivos: clulas
do intestino delgado
Hospedeiros
intermedirios:
diversos tipos
celulares
fibroblastos,
hepatcitos, entre
outros e cistos em
fibras musculares e
clulas nervosas
Hospedeiros
definitivos: clulas
do intestino delgado
Hospedeiros
intermedirios:
taquizotas em
diversos tipos
celulares e cistos
em tecido nervoso
(crebro, medula e
retina)

Oocistos esfricos (5 m por 4,5


m), com quatro esporozotas
alongados no interior
Hospedeiros definitivos:
oocistos de parede frgil, que
geralmente se rompem ainda
no intestino do hospedeiro
definitivo; esporocisto pequeno
(12 a 16 m por 8 a 11 m),
contendo quatro esporozotas
Hospedeiros intermedirios:
cistos (com bradizotas)
apresentando caractersticas
de parede e septos variveis
conforme a espcie, podendo
chegar a dimenses macroscpicas
Hospedeiros definitivos:
oocistos medindo cerca de
12 m por 10 m; quando
esporulados, possuem dois
esporocistos com quatro
esporozotas cada
Hospedeiro intermedirios:
cistos contendo bradizotas,
podendo chegar a 100 m;
taquizotas em forma de arco,
medindo de 6 a 8 m

Hospedeiros definitivos:
oocistos semelhantes aos de T.
gondii com, em mdia, 11,7 m
por 11,3 m
Hospedeiros intermedirios:
cistos teciduais com parede
espessa (mais de 4 m)

Protozoologia | 135

Hammondia spp

Hospedeiros
definitivos:
feldeos e
candeos

Hospedeiros
definitivos: clulas
do intestino
delgado

Hospedeiros
intermedirios:
caprinos, sunos
e roedores

Hospedeiros
intermedirios:
principalmente em
tecido muscular

Hospedeiros
definitivos:
feldeos

Besnoitia spp

Hospedeiros
intermedirios:
bovinos,
caprinos,
equdeos,
cervdeos,
roedores,
coelhos,
gambs e
lagartos

Hospedeiros
definitivos: clulas
do intestino
delgado
Hospedeiros
intermedirios:
principalmente
tecido conjuntivo,
subcutneo e
musculatura

Hospedeiros definitivos:
oocistos morfologicamente
semelhantes aos de T. gondii
Hospedeiros intermedirios:
cistos no septados, semelhantes
aos de T. gondii

Hospedeiros definitivos:
oocistos semelhantes aos de T.
gondii, com aproximadamente 12
m por 17 m
Hospedeiros intermedirios:
cistos de parede espessa com
bradizotas no interior

8. Sinopse diagnstica dos protozorios parasitos


Mtodos parasitolgicos
Permitem identificar os parasitos vivos ou mortos por sua morfologia na
microscopia. Podem ser diretos ou indiretos.
a) Diretos: so realizados diretamente do material coletado do hospedeiro (sangue, secrees, fezes, material de puno ou escarificao,
tecidos provenientes de bipsia ou necropsia). Exemplos:
exame a fresco, entre lmina e lamnula: organismos vivos no
corados ou mortos corados (microscopia);
material corado em lmina, sem ou com fixao prvia: gotas
espessas, distenses, estirados, impresses (imprint);

136 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

material enriquecido por centrifugao, sedimentao, flutuao ou passagem por gradiente;


material fixado para cortes histolgicos: cortes corados.45
b) Indiretos: so realizados aps procedimentos que objetivam enriquecer o material a ser examinado, utilizando-se metodologias que obrigatoriamente possibilitem a multiplicao dos parasitos, aumentando assim a
especificidade dos exames. Exemplos:
cultivo em meios especficos;
cultivo em clulas;46
xenodiagnstico natural ou artificial;
inoculao em animais de laboratrio.
Tcnicas imunolgicas
Podem evidenciar, de forma indireta, os parasitos, mediante pesquisa de
anticorpos especficos em seus hospedeiros (realizao de tcnicas sorolgicas).
Podem identificar o prprio parasito (ou seus antgenos) por meio da utilizao
de anticorpos monoclonais, entre outras tcnicas.47
Tcnicas moleculares
Podem detectar partes do genoma dos parasitos por meio da utilizao de
sondas moleculares especficas. Exemplo: PCR, entre outras tcnicas.48

45
46
47
48

Ver o captulo Tcnicas histolgicas, no volume 2 desta coleo.


Ver o captulo Cultivo celular, no volume 2 desta coleo.
Ver o captulo Imunologia, no volume 4 desta coleo.
Ver o captulo Biologia molecular, no volume 3 desta coleo (no prelo).

Protozoologia | 137

Outras tcnicas utilizadas em protozoologia


a) Investigao epidemiolgica ou estudos de populaes de parasitos
(geralmente em culturas) que identifiquem variaes intraespecficas:49
eletroforese para isoenzimas (zimodema);
eletroforese para caracterizao de DNA aps tratamento por
enzimas de restrio (esquizodema);
eletroforese em gradiente de pulso (cromossomos).
b) Pesquisa de protozorios (cistos ou trofozotas) em gua e solo:
flutuao;
filtrao.

8.1 Tcnicas utilizadas em protozoologia

8.1.1 Tcnicas para exames parasitolgicos sangue e outros tecidos


Do ponto de vista da parasitologia, existem algumas tcnicas amplamente
utilizadas no exame do sangue e de tecidos com o intuito de detectar a presena de protozorios parasitos. Essas tcnicas, descritas na literatura, apresentam valores de sensibilidade e especificidade variveis no que tange deteco
de formas parasitrias em diferentes tecidos, e a deteco pode ser realizada
de maneira direta ou indireta. Descrevemos a seguir alguns dos mtodos e
solues utilizados rotineiramente em laboratrios com o objetivo da deteco
de parasitos no sangue (como o Trypanosoma cruzi e o Plasmodium spp) ou
em outros tecidos (como a Leishmania spp).
49

Ver o captulo Cultivo celular, no volume 2 desta coleo.

138 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

8.1.1.1 Exame parasitolgico no sangue


a) Mtodos diretos
Exame a fresco ou direto
Fundamento: demonstrar, de forma rpida, os parasitos vivos no sangue.
Material necessrio:
1) Material para puno digital ou coleta de sangue venoso;
2) Lminas e lamnulas;
3) Soluo salina a 0,85% (opcional);
4) Microscpio.
Tcnica: para a realizao dessa tcnica, utiliza-se uma gota de sangue
obtida por puno capilar digital ou de sangue venoso coletado com anticoagulante. O material deve ser colocado entre lmina e lamnula e examinado no
microscpio, em objetiva de 40X. Diante do pequeno volume de sangue examinado a cada vez, preciso repetir o mtodo vrias vezes ao dia ou mesmo
em dias consecutivos at que o parasito possa ser detectado. Pode-se diluir a
gota de sangue em uma gota de soluo salina a 0,85%.
Exame a fresco ou direto utilizando-se animais de laboratrio
O sangue tambm pode ser proveniente de animais de laboratrio; no caso
de camundongos ou ratos, o mtodo deve ser realizado da seguinte forma:
Material necessrio (utilizando-se animais de laboratrio):
1) lcool a 70%;
2) Tesoura estril;
3) Lminas e lamnulas;
4) Soluo salina a 0,85% (opcional);
5) Microscpio.
Procedimento (utilizando-se animais de laboratrio):

Protozoologia | 139

a) Conter o animal e fazer assepsia de sua cauda com lcool a 70%;


b) Fazer um pequeno corte na cauda, com tesoura estril;
c) Coletar uma gota de sangue no centro da lmina, adicionar uma gota
de soluo salina (opcional) e cobrir com lamnula;
d) Observar no microscpio.
Material corado em lminas de distenso de sangue
Fundamento: fixao e colorao de material sanguneo para identificao
de formas evolutivas de parasitos.
A distenso do material pode ser realizada por meio de camada delgada ou
gota espessa; o material deve ser preparado e corado pelo mtodo de Giemsa
ou de Leishman. O exame do material corado permite, alm da deteco dos
tripanossomatdeos, a identificao especfica de Plasmodium spp, entre outros
parasitos. A desvantagem dos esfregaos corados que normalmente requerem
parasitemias elevadas para evidenciao do parasito. No entanto, a utilizao
de diferentes mtodos parasitolgicos isolados ou combinados pode permitir a
deteco rpida e precoce da infeco. A identificao dos parasitos realizada por um ou dois tipos de esfregao sanguneo.
Esfregaos estirados de sangue (camada delgada)
Vantagem: por formarem uma camada delgada de sangue, os esfregaos permitem melhor visualizao do parasito: as clulas sanguneas e os
parasitos ficam mais espaados, podendo ser mais bem observadas as
suas caractersticas morfolgicas.
Material necessrio:
1) Material para puno digital ou coleta de sangue venoso com anticoagulante;
2) Lminas e lamnulas;

140 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

3) Microscpio.
Material necessrio (utilizando-se animais de laboratrio):
1) lcool a 70%;
2) Tesoura estril;
3) Lminas e lamnulas;
4) Microscpio.
Procedimento:
a) Colocar uma pequena gota de sangue obtido por puno da polpa
digital ou de sangue venoso coletado com anticoagulante, na extremidade
de uma lmina. No caso de animais de laboratrio (camundongos ou ratos), retirar o sangue da cauda do animal infectado, fazendo um pequeno
corte com tesoura estril, aps a assepsia do local com lcool a 70%,
desprezando as primeiras duas ou trs gotas de sangue;
b) Com outra lmina apoiada sobre a primeira em ngulo de 45, fazer o
sangue se espalhar por capilaridade, de forma que o ngulo entre as duas
lminas seja preenchido por sangue;
c) Distender a gota deslocando a segunda lmina sobre a primeira, de
forma que todo o sangue seja distendido. No caso de coletas sem anticoagulantes (polpa digital, cauda de animais de laboratrio), o esfregao
deve ser feito rapidamente, em uma nica direo, antes que o sangue
comece a coagular;
d) Secar a preparao rapidamente, para no deformar os parasitos, agitando-a ao ar. Fixar e corar.
Obs. 1: Esfregaos devidamente secos e protegidos apresentam boas
condies por algumas semanas.
Obs. 2: Uma boa preparao em camada delgada deve ter:
no mnimo 2 cm de comprimento;
as margens livres em ambos os lados;

Protozoologia | 141

aps a colorao, os glbulos vermelhos deven estar em camada nica,


uns ao lado dos outros, com as hemcias levemente coradas, o ncleo
dos leuccitos corado em roxo-azulado e a imagem ntida e uniforme.

Figura 58. Esquema do procedimento de distenso delgada sangunea


(incorretamente conhecido como esfregao sanguneo).

Distenso espessa (gota espessa)


Vantagem: por utilizar maior quantidade de sangue em pequena rea,
a gota espessa propicia uma concentrao vinte vezes maior do que a
distenso delgada, sendo um mtodo de boa sensibilidade nos casos de
baixa parasitemia.
Material necessrio:
1) Material para puno digital ou coleta de sangue venoso com anticoagulante;
2) Lminas e lamnulas;
3) Palito ou ponteira;
4) Estufa (opcional);
5) Microscpio.
Material necessrio (utilizando-se animais de laboratrio):
1) lcool a 70%;
2) Tesoura estril;

142 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

3) Lminas e lamnulas;
4) Microscpio.
Procedimento:
a) Colocar quatro gotas pequenas de sangue obtido por puno da polpa
digital ou de sangue venoso coletado com anticoagulante no centro de uma
lmina; as gotas devem estar posicionadas como se formassem as extremidades de um quadriltero. No caso de animais de laboratrio (camundongos ou ratos), retirar o sangue da cauda do animal infectado, fazendo um
pequeno corte com tesoura estril aps a assepsia do local com lcool a
70%, desprezando as primeiras duas ou trs gotas de sangue;
b) Com o auxlio de um palito, ponteira ou outra lmina, juntar as gotas
com movimentos circulares em uma gota nica. No caso das coletas sem
anticoagulantes (polpa digital, cauda de animais de laboratrio), a juno
deve ser feita rapidamente, antes que o sangue comece a coagular;
c) Secar a preparao rapidamente, para no deformar os parasitos, agitando-a ao ar. Nesse caso, pode-se utilizar tambm a estufa a 37C;
d) Mergulhar a lmina em gua destilada tamponada;
e) Deixar em repouso para desemoglobinizar, por aproximadamente 10
minutos;
f) Retirar, deixar secar e corar.

Figura 59. Esquema do procedimento de gota espessa de sangue.

Protozoologia | 143

8.1.2 Tcnicas de concentrao para recuperao de protozorios encontrados no sangue


8.1.2.1 Principais mtodos de colorao empregados na pesquisa de
parasitos sanguneos ou teciduais
Geralmente so utilizados corantes derivados do Romanowsky, sendo o
mtodo de Giemsa o mais empregado.
Mtodo de Giemsa comum
Fundamento: colorao rpida que promove fixao do esfregao sanguneo pelo metanol e sua colorao pela soluo de Giemsa.
Material necessrio:
1) Preparado sanguneo (esfregao e/ou gota espessa);
2) Bquer 100 mL e proveta de 50-100 mL para diluio do Giemsa;
3) gua comum;
4) Pipeta Pasteur;
5) Suportes para lminas;
6) Metanol (lcool metlico absoluto) ou May-Grnwald;
7) Soluo aquosa de Giemsa;
8) Microscpio.
Procedimento:
a) Fixar o preparado de sangue com lcool metlico por 5 a 10 minutos;
b) Escorrer o lcool metlico e, sem lavar, deixar secar;
c) Cobrir o esfregao com soluo diluda do Giemsa (3 gotas do corante
para cada 2 mL de gua da torneira), deixando agir durante 30 a 40
minutos;
d) Lavar em gua corrente e deixar secar ao ar;
e) Observar no microscpio em objetiva de imerso.

144 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Mtodo de Giemsa (lento)


Fundamento: colorao lenta que atinge os mesmos objetivos do mtodo
de Giemsa comum.
Material necessrio:
1) Preparado sanguneo (esfregao e/ou gota espessa);
2) Bquer 100 mL e proveta de 50-100 mL para o preparo do Giemsa
lento;
3) gua comum;
4) Pipeta Pasteur;
5) Suportes para lminas;
6) Metanol (lcool metlico);
7) Soluo de HCl a 5 N (opcional);
8) Soluo de Giemsa lento;
9) Cuba de colorao;
10) Microscpio.
Procedimento:
a) Fixar o preparado de sangue com metanol por 5 a 10 minutos;
b) Escorrer o lcool metlico e deixar secar;
c) Imergir as lminas, por 15 minutos, em uma soluo HCl a 5 N (opcional);
d) Lavar com gua corrente (fluxo delicado) e deixar secar;
e) Corar o preparado com a soluo de Giemsa lento (quantidade suficiente para uma cuba de colorao), deixando agir por 12 a 24 horas;
f) Lavar rapidamente em gua corrente e deixar secar ao ar;
g) Observar no microscpio, em objetiva de imerso.

Protozoologia | 145

Obs.: A passagem pelo HCl opcional, sendo particularmente indicada nas situaes em que se deseje visualizar com clareza a posio
relativa do ncleo e cinetoplasto. No se aconselha aplicar essa etapa
do protocolo quando a tcnica for utilizada para corar esfregaos sanguneos. Esse protocolo pode ser aplicado com essa etapa para a colorao
de materiais provenientes de culturas de tripanossomatdeos.
Mtodo de Giemsa (tamponado)
Fundamento: colorao que promove uma fixao do esfregao sanguneo
pelo formol tamponado a 5% (ou metanol) e a sua colorao pela soluo
tamponada de Giemsa.
Material necessrio:
1) Preparado sanguneo (esfregao e/ou gota espessa);
2) Bquer 100 mL e proveta de 50-100 mL para diluio do Giemsa
no tampo;
4) gua comum;
5) Pipeta Pasteur;
5) Suportes para lminas;
6) Formol tamponado a 5% ou metanol (lcool metlico);
7) Soluo de HCl a 5 N (opcional);
8) Soluo tamponada de Giemsa;
9) Cuba de colorao;
10) Microscpio.
Procedimento:
a) Fixar o preparado de sangue com formol tamponado a 5% por 5 minutos (ou metanol por 5 a 10 minutos);
b) Escorrer o formol tamponado (ou o metanol) e deixar secar;
c) Imergir as lminas, por 10 minutos, em uma soluo HCl a 5 N (opcional);

146 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

d) Lavar bem com gua corrente (fluxo delicado) (no deve ficar resduo
de HCl) e deixar secar;
e) Corar o preparado com a soluo tamponada de Giemsa, deixando agir
por 45 minutos (em mdia);
f) Lavar rapidamente em gua corrente (fluxo delicado) e deixar secar ao ar;
g) Observar no microscpio em objetiva de imerso.
Obs.: A passagem pelo HCl opcional, sendo particularmente indicada nas situaes em que se deseje visualizar com clareza a posio
relativa do ncleo e cinetoplasto. No se aconselha aplicar essa etapa
do protocolo quando a tcnica for utilizada para corar esfregaos sanguneos. Esse protocolo pode ser aplicado com essa etapa para a colorao
de materiais provenientes de culturas de tripanossomatdeos.

Mtodo de May-GrnwaldGiemsa
Fundamento: colorao que permite alcanar os mesmos objetivos do
mtodo de Giemsa, no necessitando de outro reagente fixador alm do que
j faz parte da soluo corante (May-Grnwald).
Material necessrio:
1) Preparado sanguneo (esfregao e/ou gota espessa);
2) Bquer 100 mL e proveta de 50-100 mL para diluio do Giemsa;
3) gua comum;
4) Pipeta Pasteur;
5) Suportes para lminas;
6) Corante May-Grnwald;
7) Soluo aquosa de Giemsa (3 gotas do corante para cada 2 mL de
gua);
8) Microscpio.

Protozoologia | 147

Procedimento:
a) Cobrir o preparado de sangue com 20 gotas de May-Grnwald (o
fixador faz parte do corante) por 3 minutos;
b) Sem rejeitar o May-Grnwald, acrescentar 20 gotas de gua destilada,
deixando por 3 minutos;
c) Desprezar a mistura e, sem lavar a lmina, cobri-la com a soluo de
Giemsa diluda (3 gotas do corante para cada 2 mL de gua), deixando
agir por 20 a 30 minutos;
d) Lavar rapidamente em gua corrente e deixar secar ao ar;
e)Observar no microscpio em objetiva de imerso.
b) Mtodos indiretos
Hemocultura
Fundamento: processo para multiplicao de protozorios parasitos do
sangue em meio acelular; muito utilizado para cultivo de tripanossomatdeos
em meio acelular.
Material necessrio:
1) Material para coleta de sangue venoso com anticoagulante;
2) Tubos de ensaio;
3) Estante para tubos;
4) Pipetas de 1, 2 e 5 mL e pipetador;
5) Meio de cultura LIT (do ingls Liver Infusion Tryptose);
6) Pipeta Pasteur;
7) Estufa;
8) Lminas e lamnulas;
9) Microscpio.

148 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Procedimento:
a) Coletar cerca de 10 mL de sangue venoso do paciente suspeito com
anticoagulante.
b) Colocar alquotas de 1 a 2 mL de sangue total em tubos contendo
5 mL de meio LIT
c) Incubar a 28C e examinar em microscpio a cada 15 dias durante
4 meses.
Xenodiagnstico
Xenodiagnstico natural
Fundamento: processo biolgico de diagnstico baseado na suscetibilidade dos triatomneos infeco pelo Trypanosoma cruzi. Esse mtodo, introduzido por Brumpt em 1914, tem por base a multiplicao do T. cruzi no trato
digestivo do triatomneo e permite a sua deteco nas fezes ou na urina dos
insetos alimentados com sangue do paciente ou de animais com suspeita de
infeco, aps um perodo que varia de 1 a 3 meses.
Obs.: O xenodiagnstico uma tcnica perfeitamente aplicvel para
a pesquisa de campo e/ou o isolamento de amostras de T. cruzi de
pacientes e/ou animais. Entretanto, sua utilizao em pacientes pode
ocasionar com certa frequncia reaes alrgicas, decorrentes da saliva
dos triatomneos, levando rejeio do exame pelo paciente.
Material necessrio:
1) Aproximadamente 5 a 6 ninfas limpas (criadas em laboratrio com
sangue de aves) de quarto ou quinto estgio de desenvolvimento; as ninfas devem estar em jejum alimentar de 20 a 30 dias;
2) Caixa de carto tampada com pedao de fil (ou tela);
3) Elstico;
4) Pina de seco;

Protozoologia | 149

5) Lminas e lamnulas;
6) Pipeta Pasteur;
7) Soluo fisiolgica;
8) Microscpio;
9) Homogeneizador;
10) Gaze;
11) Centrfuga;
12) Microscpio de fase;
13) Seringas e agulhas;
14) lcool a 70%;
15) Animais de laboratrio (camundongos ou ratos);
16) Material para a colorao pelo mtodo de Giemsa tamponado.
Procedimento:
a) Colocar as ninfas na caixa de carto;
b) Cobrir com fil e prender com elstico;
c) Colocar em contato com a pele do paciente atravs do fil (em humanos, a caixa aplicada no antebrao; em animais, deve-se escolher um
local onde os pelos no dificultem a alimentao dos triatomneos);
d) Deixar de 30 a 60 minutos ou at que os barbeiros se desprendam
depois de cheios;
e) Aps 30 dias do repasto sanguneo, fazer exames peridicos das fezes
do barbeiro, colhendo-as com o auxlio de pina de seco do abdmen
do inseto no sentido crnio caudal. As fezes expelidas, s que se adiciona
uma gota de soluo fisiolgica, so examinadas em lmina e lamnula,
buscando-se formas flageladas mveis;
f) Aps seis semanas, caso os exames anteriores sejam negativos, trituramse os triatomneos em um homogeneizador, e o lquido obtido filtrado
em gaze, centrifugado durante 10 minutos a 2.500 rpm e seu sedimento
examinado, entre lmina e lamnula, em microscopia de fases. O restante
cora-se pelo Giemsa e inocula-se em camundongos.

150 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Xenodiagnstico artificial
Fundamento: processo biolgico de diagnstico baseado na suscetibilidade dos triatomneos infeco pelo Trypanosoma cruzi. Utilizado quando
no se pode praticar o xenodiagnstico natural e se objetiva pesquisar o T.
cruzi em outros lquidos, como o cefalorraquidiano, que, misturado com o
sangue, sugado pelos triatomneos.
Material necessrio:
1) Frasco borrel contendo 10 mL de sangue citratado suspeito, com a
boca recoberta por intestino de boi umedecido ou luva de ltex presa com
elstico;
2) Cuba de vidro para suporte;
3) Caixa de carto tampada com pedao de fil.
Procedimento:
a) Colocar o frasco de borrel com o sangue em banho-maria a 37C por
10 minutos;
b) Colocar a caixa de carto com as ninfas na cuba;
c) Colocar o tubo de borrel invertido sobre a gaze, ficando a membrana
em contato com a mesma;
d) Colocar o conjunto em estufa a 37C por 1 hora;
e) Seguir os passos anteriores para o exame dos triatomneos.

8.1.1.2 Exame de outros tecidos


Bipsia
Fundamento: remoo de amostra tecidual de determinado organismo vivo
para o diagnstico laboratorial.
A bipsia de tecido humano deve ser feita por mdicos; o material biolgico em animais pode ser retirado por tcnicos especializados. O material

Protozoologia | 151

para bipsia de pele pode ser obtido, com o auxlio de lmina de bisturi
ou punch de 4 a 6 mm de dimetro, aps anestesia e assepsia do local.
No caso das leishmanioses que apresentem mltiplas leses, recomenda-se
fortemente retirar o material de leses mais recentes, uma vez que so mais
ricas em parasitos. O fragmento de tecido obtido pode ser subdividido para
procedimentos diversos como histopatologia, preparao de esfregaos por
aposio, semeadura em meio de cultura, inoculao em hamster. Vale salientar que amostras visando ao diagnstico molecular devem ser fixadas em
etanol a 70%, pois outras substncias por exemplo, o formol podem
inibir a reao da PCR.
Material necessrio (utilizando-se animais de laboratrio):
1) Animal de laboratrio (camundongo, hamster ou rato) infectado e
apresentando leso;
2) Gaze;
3) lcool iodado;
4) Lmina de bisturi estril;
5) Pina dente de rato;
6) Xilocana a 2%;
7) Soluo fisiolgica.
Procedimento utilizando-se animais de laboratrio:
a) Retirar todo o pelo que estiver em redor da leso com auxlio de uma
tesoura;
b) Fazer assepsia da leso e do seu entorno com gaze embebida em lcool
70%;
c) Anestesiar o boto em torno da leso com xilocana a 2%;
d) Escarificar a borda da leso com auxlio de bisturi;
e) Fixar a parte da regio escarificada com a pina e, com o bisturi, retirar
um fragmento da borda da leso, sem tocar na pele exposta para evitar
contaminao;

152 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Tcnica do imprint e colorao


Fundamento (colorao): evidenciao do parasito em tecido. A pesquisa do parasito requer experincia e pacincia do microscopista devido baixa
parasitemia observada em infeces por Leishmania spp.
Material necessrio (imprint):
1) Fragmento da leso;
2) Pina dente de rato;
3) Placas de Petri contendo soluo salina estril (NaCl 0,85%);
4) Papel-filtro;
5) Lminas limpas e desengorduradas.
Material necessrio (colorao de imprint):
1) Lminas com imprint j secas;
2) Material para colorao pelo mtodo de Giemsa tamponado ou mtodo de Leishman;
3) Microscpio.
Procedimento:
a) Com auxlio da pina dente de rato, segurar um fragmento da leso ou
do rgo;
b) Absorver o excesso de sangue em papel-filtro recomenda-se a lavagem do fragmento de tecido em soluo salina estril (NaCl 0,85%)
para remoo do excesso de sangue;
c) Comprimir delicadamente o fragmento de trs a quatro vezes em uma
lmina;
d) Deixar secar em temperatura ambiente;
e) Fixar por 3 minutos com metanol;
f) Corar pelo mtodo de Giemsa tamponado ou mtodo de Leishman;
g) Observar no microscpio em objetiva de imerso.

Protozoologia | 153

8.1.1.3 Histopatologia
Consiste na coleta de fragmento de tecido para processamento por meio
de tcnicas histolgicas convencionais e colorao por hematoxilina eosina,
Giemsa ou Grocott. A anlise do material pode evidenciar, alm dos amastigotas de Leishmania, outros patgenos, tais como certos fungos e bactrias,
permitindo tambm um diagnstico diferencial de outras patologias inflamatrias e/ou neoplasias.50
Cultura para o isolamento de protozorios: Leishmania sp:
Fundamento: processo de diagnstico baseado na multiplicao in vitro de
Leishmania sp. A cultura para o isolamento de Leishmania sp pode ser realizada a partir de fragmento de tecido retirado na bipsia do bordo da leso,
semeado em meio LIT, NNN (gar-sangue)+LIT ou Schneider. A coleta do
material pode ser feita por meio da aspirao de material da leso utilizando-se
uma seringa de 5 mL com agulha de 25 mm x 8 mm, introduzindo-se, aps
assepsia e anestesia local, a agulha no bordo da leso e injetando-se de 1
a 3 mL de soluo salina estril; possvel aspirar o material, que pode ser
semeado em meio de cultura, por meio de movimentos rotacionais.
Leishmaniose visceral
Na leishmaniose visceral o agente etiolgico a Leishmania chagasi, demonstrada em amostras de tecido obtidas por puno de vsceras (bao,
fgado e medula ssea). A bipsia de bao e fgado procedimento de elevado risco e s deve ser realizada em condies especiais. Por causa da maior
simplicidade e do menor risco para o paciente, utiliza-se preferentemente
material de medula ssea coletado por puno do esterno, tbia ou da crista
ilaca, sendo o material dessa ltima preferencial em adultos. Com o material
coletado, devem ser feitos esfregaos corados pelo Giemsa, semeadura em
meio de cultura NNN+LIT, inoculao em hamster e, se possvel, esfregaos
50

Ver o captulo Tcnicas histolgicas, no volume 2 desta coleo.

154 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

sobre papel Whatman n 1 esterilizado ou papel de nitrocelulose, visando-se


ao diagnstico por PCR. A cultura deve apresentar positividade aps um
perodo de 4 a 5 semanas; os repiques das culturas devem ser feitos semanalmente. A inoculao de animais, embora no tenha aplicao prtica para fins
de diagnstico imediato, pode ser til para o isolamento do parasito visando
sua caracterizao e aos estudos epidemiolgicos.
Repicagem de culturas
Fundamento: permite fornecer as condies ideais para o metabolismo
dos parasitos por meio da passagem dos protozorios para um meio de cultura novo. A frequncia de repique ir variar de acordo com o parasito em
questo.
Material necessrio:
1) Pipetas estreis de 1 mL ou pipeta Pasteur;
2) Tubos com meio de cultura (NNN, LIT, NNN+LIT, entre outras.);
3) Tubos de cultura contendo parasitos.
Procedimento:
Com uma pipeta estril, transferir parte do material do meio de cultura
velho contendo parasitos para novos tubos, com meio de cultura novo (o
ideal que cada cultura velha fornea material para 2 a 4 novos tubos com
cultura nova).
Obs.: Para culturas que aparentem parasitos mortos, deve-se fazer a observao de uma gota das mesmas (entre lmina e lamnula) em microscpio. A presena de alguma forma parasitria em movimento indicar a
possibilidade de se fazer um repique para um meio de cultura novo.

Protozoologia | 155

Exame direto a fresco de meio de cultura


Material necessrio:
1) Tubo contendo cultura de parasitos;
2) Lminas e lamnulas;
3) Pipetas Pasteur;
4) Pera de borracha;
5) Microscpio.
Procedimento:
a) Com uma pipeta Pasteur, retirar o material do caldo de condensao do
meio de cultura (NNN, NNN+LIT, entre outros);
b) Aplicar duas pequenas gotas do material sobre a lmina;
c) Cobrir com lamnula;
d) Observar em microscpio ptico.
Colorao de material retirado de meio de cultura
Pode-se realizar o mtodo de May-GrnwaldGiemsa ou o mtodo de
Giemsa (comum).
Material necessrio:
1)Tubo contendo cultura de parasitos;
2) Lminas e lamnulas;
3) Pipetas Pasteur;
4) Pera de borracha;
5) Soro humano;
6) Microscpio.
Procedimento:
a) Com uma pipeta Pasteur, retirar o sedimento do meio de cultura e
aplicar duas pequenas gotas do material sobre uma lmina;
b) Acrescentar uma gota de soro humano;
c) Misturar;

156 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

d) Deixar secar ao ar;


e) Corar pelo mtodo de May-GrnwaldGiemsa ou mtodo de Giemsa
(comum);
f) Observar no microscpio em objetiva de imerso.
Exame direto a fresco de exsudatos
Material necessrio:
1) Lminas e lamnulas;
2) Seringa contendo exsudato;
3) Microscpio.
Procedimento:
a) Colocar o material retirado por puno intraperitoneal diretamente da
seringa na lmina (uma gota);
b) Cobrir com lamnula;
c) Observar em microscpio.
Colorao de material retirado de exsudato
Material necessrio:
1) Seringa contendo exsudato;
2) Lminas e lamnulas;
3) Pipetas Pasteur;
4) Pera de borracha;
5) Soro humano;
6) Microscpio.
Procedimento:
a) Colocar duas pequenas gotas do material de exsudato sobre a lmina;
b) Acrescentar uma gota de soro humano;
c) Misturar, fazendo um esfregao denso;
d) Deixar secar ao ar;

Protozoologia | 157

e) Corar pelo mtodo de May-GrnwaldGiemsa ou pelo mtodo de


Giemsa (comum);
f) Observar no microscpio em objetiva de imerso.
Criopreservao de tripanossomatdeos
Fundamento: tcnica que permite a manuteno e a preservao de tripanossomatdeos em baixas temperaturas, retardando-se o metabolismo celular,
porm mantendo-se a viabilidade das clulas por anos.
Material necessrio:
1) Tubos de criopreservao;
2) Glicerol estril;
3) Cultura de parasitos ou sangue infectado;
4) Gelo picado;
5) Gelo seco ou freezer -70C;
6) Botijo de nitrognio lquido;
7) Meio de cultura novo;
8) Animais de laboratrio (geralmente usam-se camundongos).
Procedimento para o congelamento:
a) Obter uma cultura em fase exponencial de crescimento ou sangue infectado;
b) Acrescentar 10% de glicerol e homogeneizar;
c) Aliquotar 1 mL para cada tubo de criopreservao;
d) Colocar os tubos de criopreservao em banho de gelo por 30 minutos;
e) Colocar os tubos de criopreservao no congelador por 1 hora ou o
tempo suficiente para congelar;
f) Colocar os tubos de criopreservao a - 70C por 45 minutos ou por
uma noite;
g) Colocar os tubos de criopreservao diretamente no interior do botijo
contendo nitrognio lquido (N2).

158 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Procedimento para o descongelamento:


a) Retirar os tubos de criopreservao contendo os parasitos congelados
do interior do botijo de nitrognio lquido, deixando-os em temperatura
ambiente para descongelamento total da amostra;
b) Transferir os parasitos para os meios de cultura (no caso de sangue,
inocular em animal susceptvel).
Quantificao celular avaliao quantitativa de tripomastigotas sangucolas de Trypanosoma sp em cmara de Neubauer
Fundamento: tcnica que possibilita a quantificao celular (parasitos),
necessria para a realizao de inculos precisos de protozorios em animais de laboratrio ou para cultura de clulas.
Mtodo de Hoff (1974)
Material necessrio:
1) Cmara de Neubauer (ou hemocitmetro de Neubauer);
2) Cloreto de amnio a 0,87%;
3) Tubos de ensaio pequenos;
4) Tesoura;
5) Caixa de conteno para o animal a ser sangrado;
6) Contador de clulas;
7) Cmaras midas;
8) Pipetadores, ponteiras e pipeta de hemoglobina previamente marcada
em 5 L.
Procedimento:
a) Colher 5 L de sangue do animal e diluir a 1:10 ou 1:20 em cloreto
de amnio a 0,87%;
b) Deixar hemolisar por 2 minutos;
c) Homogeneizar e colher uma amostra para preencher uma das lacunas da
cmara de Neubauer;

Protozoologia | 159

d) Aps cerca de 2 minutos em cmara mida, levar ao microscpio (objetiva de 40X) e contar os parasitos presentes nos quatro quadrantes da
cmara de Neubauer (os mesmos quadrantes utilizados para a contagem
de glbulos brancos);
e) Dividir por 4 o resultado obtido na contagem de parasitos somando-se
os quatro quadrantes contados. Obtm-se com isso uma mdia do nmero de parasitos encontrados em 0,1 L; multiplica-se essa mdia pelo
resultado da diviso por 10, obtendo-se o valor por L, e, em seguida,
multiplica-se o resultado pelo fator de diluio e depois por 1.000, para
s assim obter-se o valor de parasitos por mL.
Frmula do processo resumido
n de parasitos encontrados x diluio realizada x 104 = n parasitos por mL
4

OBS.: Ao contrar os protozorios, deve-se levar em conta as clulas
que esto nas quatro grades laterais sobre as linhas esquerda e no lado
superior (inclusive as que esto sobre a linha de fronteira) e desconsiderar as que esto sobre as linhas direita e inferior.

160 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 58. Desenho esquemtico de um hemocitmetro, ou cmara de Neubauer.

Preparo de Toxoplasma gondii para infeco de clulas


Fundamento: permite a obteno de parasitos por meio de lavado peritoneal de camundongos (Mus musculus), previamente inoculados com taquizotas de T. gondii, para a posterior infeco de clulas em cultura.
Material necessrio:
1) Camundongos previamente infectados com taquizotas de T. gondii;
2) Cmara de sacrifcio (CO2);
3) Prancha de disseco;
4) Pinas dente de rato;
5) Alfinetes;
6) Seringas de 3, 5 e 10 mL estreis;
7) Agulhas 25x10 ou 25x6 estreis;
8) Tubo Falcon de 15 mL;
9) Centrfuga;
10) Meio de cultura RPMI estril, contendo 200 U de penicilina e 200
g de estreptomicina por mL;
11) Formol a 2% em PBS;
12) Tubos tipo Eppendorf;

Protozoologia | 161

13) Cmara de Neubauer;


14) Pipetadores, pipetas e ponteiras;
15) Meio RPMI estril contendo 2% de soro fetal bovino;
16) Microscpio.
Procedimento:
a) Realizar o lavado peritoneal dos camundongos infectados;
b) Centrifugar o exsudato proveniente do lavado peritoneal a 500 rpm
durante 5 minutos para retirar as clulas do hospedeiro;
c) Retirar o sobrenadante rico em taquizotas de T. gondii e centrifugar a
2.000 rpm por 10 minutos;
d) Ressuspender o sedimento em volume conhecido de meio RPMI estril
contendo 200 U de penicilina e 200 g de estreptomicina por mL;
e) Diluir a suspenso 1:10 em formol a 2% em PBS e contar em cmara de Neubauer (colocar 90 L de formol a 2% em um tubo tipo
Eppendorf e adicionar 10 L da suspenso de taquizotas, como descrito
anteriormente);
f) Ajustar o nmero de macrfagos para cinco vezes em meio RPMI estril
contendo 2% de soro fetal bovino;
g) Infectar a cultura de macrfagos com os taquizotas, deixando interagir
por 2 horas;
h) Retirar as lamnulas e cor-las pelo mtodo de Giemsa (comum);
i) Observar ao microscpio em objetiva de imerso.
Mtodo de Giemsa para colorao de clulas infectadas
Material necessrio:
1) Lamnulas contendo macrfagos infectados;
2) gua destilada;
3) Glutaraldedo a 2% em PBS;
4) Geladeira;

162 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

5) Corante Giemsa Merck a 5% em gua bidestilada;


6) PBS;
7) Acetona;
8) Acetona-xilol;
9) Xilol;
10) Blsamo do Canad;
11) Microscpio.
Procedimento:
a) Rinsar a lamnula com PBS;
b) Fixar 2 minutos ou mais em glutaraldedo a 2% em PBS;
c) Remover o glutaraldedo de volta para o frasco e colocar na geladeira;
d) Rinsar duas vezes a lamnula com gua destilada;
e) Corar por 40 minutos com o corante Giemsa a 5%, em gua bidestilada;
f) Descorar duas vezes durante 5 minutos cada com PBS;
g) Rinsar com gua destilada;
h) Desidratar com acetona;
i) Desidratar com acetona-xilol em partes iguais;
j) Desidratar duas vezes em xilol;
l) Montar em blsamo do Canad;
m) Observar no microscpio em objetiva de imerso.
Mtodo de Giemsa rpido para colorao de clulas infectadas
Material necessrio:
1) Lamnulas contendo macrfagos infectados;
2) gua destilada;
3) PBS;
4) Metanol;
5) Soluo aquosa de Giemsa (1:10 em gua destilada);
6) Blsamo neutro;
7) Microscpio.

Protozoologia | 163

Procedimento:
a) Rinsar as lamnulas em PBS a 37C;
b) Fixar em metanol por 3 minutos;
c) Corar o material com o corante Giemsa (1:10 em gua destilada) por
12 minutos;
d) Lavar rapidamente em gua corrente e deixar secar ao ar;
e) Montar em blsamo neutro;
f) Observar no microscpio em objetiva de imerso.
Reao de imunofluorescncia indireta (Rifi) para a infeco por
Toxoplasma gondii
Fundamento: mtodo imunolgico bastante aplicado no diagnstico de
infeces parasitrias, sobretudo para infeces por T. gondii, e que se baseia
na deteco da reao antgenoanticorpo, revelada pelo emprego de um
conjugado antianticorpo marcado com um fluorocromo que emite fluorescncia mediante a excitao com raios ultravioleta , observada em microscpio de fluorescncia (vide volume 4).
Manuteno de cepas no cistognicas de Toxoplasma gondii em
camundongos (Mus Musculus) da linhagem Swiss Webster
Fundamento: procedimento que permite a manuteno in vivo de cepas
de T. gondii em animais (camundongos) de laboratrios de pesquisa.
Material necessrio:
1) Trs a quatro camundongos (Mus musculus) fmeas da linhagem Swiss
Webster;
2) Seringa de 1 mL;
3) Agulha de insulina;
4) PBS pH 7,2;
5) lcool a 70%;

164 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

6) Gaze;
7) Prancha de disseco;
8) Tubo tipo Falcon 15 mL;
9) Cmara de Neubauer (ou hemocitmetro de Neubauer);
10) Contador de clulas;
11) Pipetadores de 10, 100 e 1.000 L e ponteiras;
12) Tubos tipo Eppendorf.
Procedimento:
a) Inocular trs a quatro camundongos (Mus musculus) fmeas da linhagem Swiss Webster com 1,5 x 106 taquizotas cada;
b) Aps 72 horas, realizar a lavagem peritoneal de cada um dos camundongos para a retirada dos taquizotas de T. gondii;
c) Transferir o lavado peritoneal em tubo cnico de 15 mL;
d) Colocar 90 L de PBS em dois tubos cnicos de 1,5 mL;
e) Colocar 10 L do exsudato no primeiro cnico de 1,5 mL e homogeneizar;
f) Colocar 10 L da diluio do primeiro cnico de 1,5 mL no segundo
cnico de 1,5 mL e homogeneizar;
g) Utilizar a diluio do segundo cnico de 1,5 mL para realizar a contagem dos parasitos na cmara de Neubauer;
h) Aps cerca de 2 minutos em cmara mida, levar ao microscpio (objetiva de 40X) e contar os parasitos presentes nos quatro quadrantes da
cmara de Neubauer (os mesmos quadrantes utilizados para a contagem
de glbulos brancos);
i) Dividir por 4 o resultado obtido na contagem de parasitos somados nos
quatro quadrantes contados. Obtm-se, assim, uma mdia do nmero de
parasitos encontrados em 0,1 L. Segue-se multiplicando o resultado da
diviso por 10 (obtm-se o valor por L), multiplicando-se, em seguida,
tanto pelo fator de diluio quanto por 1.000, para s assim obter o
valor de parasitos por mL.

Protozoologia | 165

j) Ajustar para 1,5 x 106 parasitos por 200 L de PBS.


k) Realizar o inculo de 1,5 x 106 parasitos por camundongo normal
(no infectado);
l) Aps 72 horas, realizar a lavagem peritoneal de cada camundongo para
a retirada dos taquizotas de T. gondii.
Criopreservao de taquizotas de Toxoplasma gondii por meio do
congelamento de macrfagos infectados
Material necessrio:
1) Sete a nove camundongos (Mus musculus) fmeas da linhagem Swiss
Webster;
2) Seringa de 1 mL;
3) Agulha de insulina;
4) PBS pH 7,2;
6) lcool a 70%;
7) Gaze;
8) Prancha de disseco;
9) Tubo cnico de 15 mL;
10) Centrfuga;
11) Cmara de Neubauer (ou hemocitmetro de Neubauer);
12) Contador de clulas;
13) Pipetadores de 10, 100 e 1.000 L e ponteiras;
14) Tubos cnicos de 1,5 mL;
15) Meio Eagle ou RPMI simples;
16) Meio de congelamento (meio Eagle ou RPMI com 10% de DMSO
e 20% de soro fetal bovino);
17) Tubos de criopreservao;
18) Geladeira;
19) Freezer -70C;
19) Botijo de nitrognio lquido;
20) Banho-maria.

166 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Procedimento para o congelamento:


a) Inocular trs a quatro camundongos (Mus musculus) fmeas da linhagem Swiss Webster com 1,5 x 106 taquizotas cada;
b) Aps 48 horas, realizar trs lavagens peritoneais de cada animal para a
remoo de macrfagos infectados com taquizotas de T. gondii;
c) Realizar contagem dos macrfagos em cmara de Neubauer;
d) Colocar os exsudatos em tubos cnicos de 15 mL e centrifugar a
1.200 rpm por 10 minutos;
e) Descartar o sobrenadante e ressuspender o sedimento em meio de
congelamento meio Eagle com 10% de DMSO e 20% de soro fetal
bovino , de forma a obter 1,0 x 106 clulas para cada mL de meio;
f) Distribuir 1,5 mL da suspenso celular em tubos de criopreservao
estreis e j identificados;
g) Colocar os tubos em geladeira a 4C por 20 minutos;
h) Deixar durante a noite em freezer a -70C;
i) Colocar os tubos de criopreservao diretamente no interior do botijo
contendo nitrognio lquido.
Procedimento para o descongelamento:
a) Retirar os tubos de criopreservao contendo as clulas infectadas congeladas do interior do botijo de nitrognio lquido, colocando-os em
banho-maria a 37C para descongelamento total;
b) Transferir os contedos descongelados para tubos cnicos de 15 mL,
adicionando um volume cinco vezes maior do que o volume do material
descongelado de meio Eagle simples;
c) centrifugar a 1.200 rpm por 10 minutos;
d) Descartar o sobrenadante e ressuspender o sedimento em meio Eagle
simples;
e) Inocular quatro a cinco camundongos (Mus musculus) fmeas da linhagem Swiss Webster no infectados com inculo variado;
f) Acompanhar a evoluo da infeco, observando o aparecimento de
manifestaes clnicas nos animais;

Protozoologia | 167

g) Realizar a eutansia dos animais de 48 a 72 horas aps o inculo, promovendo a lavagem da cavidade peritoneal, recuperando-se o exsudato
com taquizotas (confirmao da viabilidade dos taquizotas de T. gondii
aps a criopreservao);
h) Realizar a contagem em cmara de Neubauer e seguir promovendo
nova passagem dos parasitos em animais de laboratrio (camundongos)
susceptveis.

9. Tcnicas parasitolgicas para as fezes


9.1 Coleta de fezes para exame parasitolgico

A coleta de fezes tem recomendaes especiais, segundo as finalidades do


exame a que se destinam. Alguns cuidados gerais devem ser observados:
deve-se dar preferncia a frasco de plstico ou de vidro, limpo, de boca
larga, com tampa de fcil manuseio e que vede bem;
as fezes no devem ser coletadas junto com urina, gua ou outro elemento. A presena de urina acelera a fermentao bacteriana, prejudicando a
conservao do material;
as fezes no devem permanecer muito tempo em temperatura ambiente,
sendo conveniente envi-las ao laboratrio o mais breve possvel, ou conservar em geladeira a 4C por 24 horas no mximo;
pacientes submetidos a exame radiolgico de trnsito intestinal s devem coletar material para o exame de fezes aps a eliminao total do
contraste o que ocorre, em geral, 48 horas aps a sua ingesto;
fezes pastosas so utilizadas na pesquisa de ovos e larvas de helmintos
e cistos de protozorios pelos mtodos de rotina em parasitologia; fezes
lquidas (diarreicas) devem ser coletadas em solues conservadoras para
possibilitar a pesquisa de trofozotas de protozorios intestinais ou de

168 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

oocistos de coccdeos intestinais por mtodos especiais, como a colorao por hematoxilina frrica ou safranina-azul de metileno, entre outros.
Os conservadores mais utilizados so o formol a 10% e a soluo SAF
(cido actico, acetato de sdio e formol).

9.2 Principais tcnicas coproparasitolgicas

Exame direto a fresco


Fundamento: exame direto das fezes lquidas (diarreicas), obtidas naturalmente ou pelo emprego de purgativos salinos. muito valioso para a pesquisa
de trofozotas de protozorios. A estrutura e, particularmente, a mobilidade
dos trofozotas possibilitam o diagnstico especfico.
Exame direto de fezes com colorao pelo lugol
Material necessrio:
1) Amostras de fezes;
2) Soluo salina (NaCl 0,85%);
3) Lugol;
4) Frasco de borrel;
5) Basto de vidro (ou palito);
6) Pipeta Pasteur;
7) Lminas e lamnulas;
8) Microscpio ptico.
Procedimento:
a) Desmanchar uma poro das fezes em uma parte de soluo salina
(NaCl 0,85%), utilizando um frasco de borrel e um basto de vidro ou
palito;
b) Retirar uma parte da mistura com auxlio de uma pipeta Pasteur e depositar de 1 a 2 gotas do material sobre uma lmina;

Protozoologia | 169

c) Adicionar de 1 a 2 gotas de lugol sobre o material da lmina, misturando com o auxlio de uma lamnula;
d) Cobrir com lamnula e examinar no microscpio ptico (objetivas de
10X e 40X).
Tcnica de hematoxilina frrica para colorao de protozorios (Heidenhain, 1908)
Fundamento: mtodo de colorao que permite a observao de estruturas nucleares (a hematoxilina cora com grande especificidade a cromatina
nuclear), sendo de grande valia para o diagnstico diferencial das espcies de
protozorios enteroparasitos, notadamente das formas vegetativas (trofozotas). Indicada no exame de material diarreico, pode ser utilizada tambm para
a pesquisa de cistos em fezes pastosas ou moldadas.
Material necessrio (fixao):
1) Amostras de fezes conservadas no fixador de Schaudinn;
2) Conservador-fixador de Schaudinn novo com 5% de cido actico
(ou conservador-fixador SAF);
3) Soro inativado;
4) Banho-maria;
5) Suporte (rolha) de borracha;
6) Pina;
7) Gaze;
8) Funil pequeno;
9) Lugol;
10) Basto de vidro (ou palito);
11) Pipeta Pasteur;
12) Lminas e lamnulas;
13) Placas de Petri contendo as seguintes solues: fixador de Schaudinn com
5% de cido actico, lcool a 50%, lcool a 70%, lcool a 70% iodado,
lcool a 90%, lcool a 95%, hematoxilina a 0,5%, creosoto e xilol;

170 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

14) Duas placas de Petri com soluo de almen frrico a 2%;


15) Centrfuga;
16) Blsamo do Canad;
17) Microscpio ptico.
Procedimento (fixao):
a) Homogeneizar por agitao as amostras de fezes fixadas e conservadas
em fixador de Schaudinn;
b) Filtrar, atravs de gaze dobrada quatro vezes, para tubo de centrifugao de 15 mL, com auxlio de um pequeno funil, cerca de 4 mL da
mistura de fezes;
c) Centrifugar durante 2 minutos a 2.000 rpm;
d) Desprezar o sobrenadante;
e) Colocar uma lamnula (22 mm x 22 mm), presa por uma das bordas,
em um suporte de borracha (com forma circular de 15 mm de dimetro
e 3 mm de espessura). Prend-la, encaixando-a num entalhe que se
faz, com auxlio de um bisturi, na face plana do suporte;
f) Colocar uma gota de sedimento sobre a lamnula, aderindo-a por meio
da mistura do sedimento com trs gotas de soro sanguneo, inativado
em banho-maria a 56C por 30 minutos;
g) Emulsionar o material fazendo um esfregao (camada fina) com o auxlio
de outra lamnula;
h) Sem deixar o esfregao secar, colocar a lamnula, com a face que o
contm virada para baixo, no interior de uma placa de Petri contendo
novo lquido fixador de Schaudinn com 5% de cido actico. Manter
na placa por 2 a 5 minutos;
i) Colocar a lamnula com o esfregao em uma placa contendo lcool a
50%. Nessa etapa, inverter a posio da lamnula, colocando-a com
a face contendo o esfregao voltada para cima. Manter na placa por
2 a 5 minutos;
j) Imergir o esfregao em lcool a 70% iodado, deixando por 3 minutos.

Protozoologia | 171

Procedimento (colorao):
a) Imergir o esfregao em lcool a 95% para hidratao, deixando por
2 minutos;
b) Imergir o esfregao em lcool a 70% para hidratao, deixando por
2 minutos;
c) Imergir o esfregao em lcool a 50% para hidratao, deixando por
2 minutos;
d) Lavar em gua corrente (filete delicado) por 2 a 3 minutos;
e) Imergir o esfregao em soluo de almen frrico (mordente) a 2%,
deixando por 5 minutos;
f) Lavar em gua corrente (filete delicado) por 1 a 2 minutos;
g) Imergir o esfregao em soluo aquosa do corante hematoxilina a 0,5%,
deixando por 5 minutos;
h) Lavar em gua corrente (filete delicado) por 1 a 2 minutos;
i) Imergir o esfregao em soluo aquosa de cido actico a 7%, deixando por 5 minutos;
j) Lavar em gua corrente (filete delicado) por 2 minutos;
k) Imergir o esfregao em soluo diferenciadora de almen frrico a 2%,
deixando pelo tempo necessrio (curto espao de tempo) at que o
esfregao obtenha uma cor cinzento-azulada claro;
l) Realizar duas lavagens em gua corrente (filete delicado) por 3 minutos;
m) Imergir o esfregao em lcool a 50% para iniciar a desidratao, deixando por 2 minutos;
n) Imergir o esfregao em lcool a 70% para desidratao, deixando por
2 minutos;
o) Imergir o esfregao em lcool a 90% para desidratao, deixando por
2 minutos;
p) Imergir o esfregao em lcool a 95% (absoluto) para desidratao,
deixando por 2 minutos;
q) Imergir o esfregao em creosoto (pode ser ligeiramente aquecido) iniciando a clarificao do material, deixando por 2 minutos;

172 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

r) Imergir o esfregao em xilol para clarificao, deixando por 2 minutos;


s) Realizar a montagem em blsamo do Canad, sobre lminas, deixando
secar por 24 a 48 horas, para que a lamnula no corra o risco de
soltar da lmina, obtendo-se assim preparaes permanentes;
t) Observar no microscpio em objetiva de imerso.
Obs 1: O suporte de borracha tem a finalidade de facilitar a manipulao do material durante as diferentes etapas de fixao e colorao,
alm de permitir a identificao do mesmo mediante a gravao de um
nmero em uma das faces da borracha. Deve-se evitar a troca de material
quando amostras de diferentes procedncias esto sendo processadas.
Obs 2: Utilizar uma pequena pina para movimentao do suporte de
borracha entre as placas.
Obs 3: A soluo aquosa de hematoxolina a 0,5% deve ser preparada
para uso, no mnimo, com 48 horas de antecedncia.
Obs 4: Quando for necessria a observao dos esfregaos, eles devem
estar midos durante todas as etapas de fixao, colorao e montagem
final. Os esfregaos secos ou intensamente hidratados devem ser desprezados.
Tcnica de Blagg e cols. (1955), ou centrifugo-sedimentao em ter
Fundamento: fixao e preservao da matria fecal pela soluo de Sapero
e Lawless (1953) (soluo de MIF), modificada por Coutinho (1956).
Concentrao, por centrifugo-sedimentao, dos ovos e larvas de helmintos e
cistos de protozorios em um sistema formol-ter.
Material necessrio:
1) Amostras de fezes;
2) Basto de vidro;

Protozoologia | 173

3) Palito com algodo na ponta;


4) Rolha de borracha;
5) Gaze;
6) Funil pequeno;
7) Tubos de centrifugao de 15 mL;
8) ter comercial;
9) Lugol;
10) Lminas e lamnulas;
11) Pipeta Pasteur;
12) Centrfuga;
13) Microscpio ptico.
Procedimento:
a) Homogeneizar as amostras de fezes em MIF por agitao;
b) Filtrar, atravs de gaze dobrada em quatro, com auxlio de um pequeno
funil, para tubo de centrifugao de 15 mL (o volume no deve ultrapassar 1/3 da capacidade);
c) Dobrar o volume do filtrado, adicionando ter;
d) Fechar o tubo com rolha de borracha e agitar vigorosamente;
e) Retirar cuidadosamente a rolha e centrifugar a 2.500 rpm durante 1
minuto;
f) Desprezar o sobrenadante;
g) Adicionar duas gotas de lugol ao sedimento e agitar;
h) Transferir uma pequena parte do material, com o auxlio de pipeta
Pasteur, para a lmina e cobrir com lamnula;
i) Observar no microscpio em objetiva de 10X e de 40X
Obs 1.: preciso ressaltar que o uso de conservantes MIF (mercurocroo
ou mertiolate + iodo + formol) apresenta duas grandes vantagens: a obteno de amostra mdia do material eliminado por um mesmo indivduo
durante certo perodo; e a possibilidade de aplicao em inquritos parasitolgicos, sobretudo quando h acmulo de material a ser processado.

174 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

OBS 2.: Os cuidados exigidos para a execuo da tcnica so os mesmos aplicados no mtodo de Ritchie

Tcnica de Ritchie, ou centrifugo-sedimentao em formol-ter


Fundamento: mtodo de diagnstico parasitolgico das fezes; excelente
para a pesquisa de cistos de protozorios baseando-se na concentrao das
fezes por centrifugo-sedimentao em um sistema formol-ter.
Material necessrio:
1) Amostras de fezes;
2) Basto de vidro;
3) Palito com algodo na ponta;
4) Bquer ou borrel;
5) Rolha de borracha;
6) Gaze;
7) Pequeno funil;
8) Tubos de centrifugao de 15 mL;
9) ter comercial;
10) Lugol;
11) Formol comercial a 10%;
12) Lminas e lamnulas;
13) Pipeta Pasteur;
14) Centrfuga;
15) Microscpio ptico.
Procedimento:
a) Misturar, em um bquer ou borrel, uma poro das fezes em 10 partes
de gua;
b) Filtrar, atravs de uma gaze dobrada quatro vezes, com auxlio de um
pequeno funil, para tubo de centrifugao de 15 mL;

Protozoologia | 175

c) Centrifugar por 1 minuto a 2.500 rpm;


d) Decantar o sobrenadante e ressuspender o sedimento em gua;
e) Centrifugar por 1 minuto a 2.500 rpm;
f) Decantar o sobrenadante e ressuspender o sedimento em 10 mL da
soluo de formol comercial a 10%;
g) Agitar vigorosamente e deixar em repouso por 5 minutos;
h) Juntar 3 mL de ter comercial a esse preparo;
i) Fechar o tubo com rolha de borracha e agitar vigorosamente para emulsionar as gorduras fecais;
j) Centrifugar por 1 minuto a 2.500 rpm;
k) Retirar cuidadosamente a rolha e desprezar a mistura sobrenadante;
l) Limpar os detritos superficiais da parede do tubo com um palito contendo algodo na ponta;
m) Adicionar duas gotas de lugol ao sedimento e agitar;
n) Transferir uma pequena parte do material, com o auxlio de pipeta
Pasteur, para a lmina e cobrir com lamnula;
o) Observar no microscpio em objetiva de 10X e de 40X.
Obs: Como resultado da ltima centrifugao, formam-se no tubo quatro
camadas: a superior, de ter; a segunda de gordura; a terceira, de soluo
de formol; e a ltima, inferior, constituda pelo sedimento a ser examinado. Por vezes, a camada gordurosa to compacta que, para se efetuar
a decantao, necessrio desprend-la com um pequeno basto. Caso
aps a decantao a parede do tubo apresente resduos, conveniente
limp-la com um palitto de algodo para que o sedimento, ressuspenso
em lugol possa ser transferido livremente para a lmina.
Tcnica de Hoffmann, Pons & Janer (1934) ou de Lutz, ou sedimentao espontnea
Fundamento: mtodo muito eficiente de diagnstico parasitolgico das
fezes, sendo mtodo de eleio para ovos de Schistosoma mansoni, Ascaris

176 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

lumbricoides e Taenia sp, baseando-se na sedimentao espontnea de ovos


e larvas de helmintos e de cistos de protozorios em gua potvel, associada
ao da gravidade.
Material necessrio:
1) Amostras de fezes;
2) Basto de vidro;
3) Clice cnico de 100 mL;
4) Bquer ou borrel;
5) Gaze;
6) Funil pequeno;
7) gua;
8) Lugol;
9) Lminas e lamnulas;
10) Pipeta Pasteur;
11) Microscpio ptico.
Procedimento:
a) Adicionar cerca de 2 g de fezes em um bquer ou borrel contendo
gua e homogeneizar o material com o auxlio de um basto de vidro;
b) Filtrar, atravs de uma gaze dobrada quatro vezes, com auxlio de um
pequeno funil, para o clice cnico de 100 mL;
c) Deixar a suspenso de fezes em repouso durante 1 a 24 horas;
d) Aps esse perodo, decantar o sobrenadante cuidadosamente, para
no ressuspender o sedimento; caso o lquido sobrenadante ainda esteja turvo, fazer nova lavagem, com mais 1 hora de repouso;
e) Com o auxlio de uma pipeta Pasteur, recolher pequena parte do sedimento, transferindo-a para uma lmina;
f) Adicionar uma gota de lugol sobre o material, cobrindo-o com lamnula;
g) Observar no microscpio em objetiva de 10X e de 40X.

Protozoologia | 177

Tcnica de Faust e cols. (1938) ou centrifugo-flutuao em sulfato


de zinco a 33% densidade de 1.180 g/L
Fundamento: mtodo de diagnstico parasitolgico das fezes, utilizado
para pesquisa de protozooses intestinais especialmente em suas fases crnicas, baseando-se na concentrao dos cistos de protozorios por centrifugoflutuao, em uma soluo de sulfato de zinco a 33%, com densidade de
1.180 g/L.
Material necessrio:
a) Amostras de fezes;
b) Basto de vidro;
c) Bquer ou borrel;
d) Rolha de borracha;
e) Gaze;
f) Pequeno funil;
g) Tubos de centrifugao de 15 mL;
h) gua;
i) Soluo de sulfato de zinco a 33% densidade de 1.180 g/L;
j) Lugol;
k) Ala de platina;
l) Lminas e lamnulas;
m) Centrfuga;
n) Microscpio ptico.
Procedimento:
1) Adicionar cerca de 2 g de fezes em um bquer ou borrel contendo
gua e homogeneizar o material, com auxlio de um basto de vidro;
2) Filtrar atravs de uma gaze dobrada quatro vezes, com auxlio de um
pequeno funil, para um tubo de centrifugao de 15 mL;
3) Centrifugar por 1 minuto a 2.500 rpm;
4) Decantar o sobrenadante e ressuspender o sedimento em gua;

178 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

5) Centrifugar por 1 minuto a 2.500 rpm;


6) Decantar o sobrenadante e ressuspender o sedimento em 10 mL da
soluo de sulfato de zinco a 33%, densidade de = 1.180 g/L;
7) Fechar o tubo com rolha de borracha, agitar vigorosamente e centrifugar
por 1 minuto a 2.500 rpm;
8) Abrir cuidadosamente o tubo e, com o auxlio de uma ala de platina,
retirar uma gota da superfcie do lquido, colocando-a sobre uma lmina;
9) Adicionar uma gota de lugol sobre o material e cobri-lo com lamnula;
10) Observar no microscpio em objetiva de 10X e de 40X.

9.3 Solues utilizadas em protozoologia

lcool a 70%
lcool etlico absoluto
gua (comum) q.s.p.

70 mL
100 mL

Para o preparo de lcool a 70% a partir de lcool etlico comercial ou


etanol a 96%, realizar clculo de correo de acordo com a concentrao
inicial do lcool que se quer usar, conforme o exemplo abaixo:

Para cada 100 mL de lcool a 96%, tem-se 96 mL de lcool e 4 mL


de gua. Assim sendo:
% da soluo desejada x volume desejado = quantidade da soluo-me
a ser utilizada
% soluo-me
Por exemplo: 70% x 1000 mL = 729,2 mL (lcool 96% + 270,8 mL
(- q.s.p. 100mL) de gua destilada

96%

Protozoologia | 179

Dessa forma, prepara-se a soluo de lcool a 70% utilizando 73 mL


de lcool e adicionando-se gua (comum ou destilada) at o volume final de
100 mL.
PBS pH 7,2 (20X)
NaCl (cloreto de sdio) __________________________ 170 g
Na2HPO47H2O (fosfato de sdio dibsico) _________42,283 g
NaH2PO47H2O (fosfato de sdio monobsico) _______ 4,423 g
gua destilada q.s.p.
1.000 mL
Procedimento:
a) Misturar todos os reagentes;
b) Homogeneizar bem;
c) Medir o pH; caso necessrio, ajustar com hidrxido de sdio at chegar ao pH de 7,2.
Com essa frmula, obtm-se PBS 20 vezes concentrado. Para a sua utilizao, deve-se retirar 50 mL da soluo obtida e completar at o volume
final de 1.000 mL com gua destilada.
May-GrnwaldGiemsa
May-Grnwald em p
lcool metlico

0,2 g
100 mL

Dissolver todo o p em lcool metlico, filtrar em papel-filtro e acondicionar


em frasco escuro.

Soluo Giemsa para o mtodo Giemsa lento


Carbonato de potssio a 1% 25 gotas
Giemsa
125 gotas
gua destilada q.s.q. _______________ 100 mL

180 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Soluo tamponada de Giemsa


Giemsa ______________________ 1 a 2 gotas
Soluo tampo de colorao _______ 1 mL
Soluo tampo de colorao pH 7.2
Soluo A: Fosfato de sdio monobsico (NaH2PO42H2O) 0,2 M
NaH2PO42H2O 0,2 M
PM 137,99
1 M 137,99 g
0,2 M 27,598 g completar com H2O at 1.000 mL.
Para fazer 300 mL, deve-se pesar 8,2794 g.
Soluo B: Fosfato de sdio dibsico (Na2HPO4 12H2O) 0,2 M
Na2HPO4 12H2O 0,2 M
PM 358,14
1 M 358,14
0,2 M 71,628 g completar com H2O at 1.000 mL.
Para fazer 800 mL, deve-se pesar 57,3024 g.
Preparo da soluo estoque:
28 partes da soluo A ____________ 280 mL
72 partes da soluo B ____________ 720 mL
Preparo da soluo de colorao:
Diluir a soluo estoque em 1:10.
Preparo da soluo HCl a 5 N
HCl (mL) ______________ 41,97
H2O _________________ 58,03
Total _________________ 100 mL

Protozoologia | 181

Lugol (soluo iodo-iodurada, segundo Nicolle)


Iodo __________________ 5 g
Iodeto de potssio ________ 10 g
gua destilada __________ 100 mL
Para preparar a soluo de lugol, dissolve-se primeiramente na gua destilada o iodeto de potssio. Logo em seguida, dissolver o iodo. Manter em
frasco escuro e bem fechado.
Soluo de MIF
Soluo estoque:
gua destilada
50 partes
Soluo de mercurocromo a 0,2% ______ 40 partes
Formol comercial (formalina) ____________5 partes
Glicerina _________________________ 1 parte
Misturar os reagentes e homogeneizar bem.
Obs.: Coutinho (1956), nas modificaes propostas, sugere o uso de
mercurocromo.
Soluo de glicerina para montagem de lminas
Glicerina P.A.
90 partes
PBS ________________ 11 partes
Soluo estoque de azul de Evans
Azul de Evans ____________ 10 mL
PBS pH 7,2 _____________ 100 mL

182 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Soluo estoque de Giemsa


Pode ser adquirida j pronta no comrcio ou ser preparada no laboratrio,
de acordo com as seguintes frmulas:
Giemsa em p ____________ 3,8 g
Glicerol (puro) ____________ 125 mL
lcool metlico P.A. ________ 375 mL
Azur II eosina ___________ 3 g
Azur II ________________ 0,8 g
Glicerol (puro) __________ 250 mL
lcool metlico P.A.
250 mL
Misturar o lcool e o glicerol; adicion-los, pouco a pouco, ao p contido
em um grau, enquanto se tritura os gros com um pistilo; quando tudo estiver
bem dissolvido, guardar a mistura em local escuro por uma semana (tempo
de maturao ideal); decorrido esse tempo, filtrar a soluo em papel-filtro e
guardar em vidro escuro.
Soluo salina a 0,85%
NaCl ___________________ 8,5 g
gua destilada q.s.p. ________ 1 L
Dissolver o cloreto de sdio em 800 mL de gua destilada; completar o
volume at 1.000 mL.
Lquido fixador de Schaudinn
Soluo saturada de bicloreto de mercrio 2 partes 126,5 mL (sublimado corrosivo)
lcool etlico absoluto ou 96%
1 parte 63,5 mL
cido actico puro
5 % 12 mL
Para cada 95 mL da mistura de bicloreto de mercrio e lcool absoluto,
adicionam-se 5 mL de cido actico glacial no momento da utilizao do lquido
fixador.

Protozoologia | 183

Almen frrico
Sulfato de ferro III amoniacal ______ 2 g
gua destilada q.s.p.____________100 mL
Dissolver o sulfato de ferro III amoniacal em gua destilada a 40C e
armazenar em frasco de vidro escuro.
Soluo aquosa de hematoxilina a 0,5%
gua destilada
90 mL
lcool a 95% _________ 10 mL
Cristais de hematoxilina ____ 0,5 g
Dissolver a hematoxilina no lcool e completar com gua destilada at
100 mL. Essa soluo deve ser preparada, no mnimo, 48 horas antes do
uso e armazenada em recipiente mbar (no transparente).
Fixador SAF
Acetato de sdio___________ 15 g
cido actico ______________20 mL
Formaldedo _______________ 40 mL
gua destilada q.s.p._________ 1.000 mL
Misturar os reagentes e homogeneizar bem.
Meio RPMI 1640
RPMI (p)
NaHCO3
gua bidestilada q.s.p.

1,04 g
0,2 g
100 mL

Agitar por aproximadamente 40 minutos em bquer, com auxlio de agitador


automtico e magneto, para que ocorra a dissoluo completa.

184 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Meio NNN (Novy, McNeal e Nicolle) meio difsico


Cloreto de sdio (NaCl) ___________ 6 g
gar _________________________ 14 g
gua destilada __________________ 900 g
Sangue de coelho desfibrinado _______ 135 mL (15%)
Procedimento
a) Misturar a quente cloreto de sdio, gar e gua destilada. Esterilizar
por 20 minutos em autoclave a 120C e 1 atmosfera. Deixar atingir
a temperatura entre 40C e 50C para acrescentar, nesse momento,
o sangue desfibrinado, agitando suavemente. Distribuir o meio ainda
lquido em tubos de ensaio ou frascos de cultura. Deixar solidificar,
mantendo os tubos com inclinao conveniente. Fazer a prova de esterilidade (deixar por 48 horas em estufa a 37C). Guardar em geladeira
at o momento do uso. Esse meio apresenta uma base slida inclinada
e caldo de condensao.
b) A colheita do sangue de coelho deve ser assptica, por meio de puno cardaca, e o sangue deve ser desfibrinado com o auxlio de prolas
de cristal em frasco estril.
c) Esse meio indicado para o cultivo de flagelados do gnero Leishmania
e para a espcie Trypanosoma cruzi.
d) A partir da cultura, podem ser feitas preparaes coradas. O lquido de condensao passado para o tubo de centrifugao, onde
lavado com soluo fisiolgica (NaCl a 0,9%) por meio de duas
a trs centrifugaes a 2.000 rpm. O sedimento ps-lavagem deve
ser misturado com duas a trs gotas de soro humano ou de animal de
laboratrio para s aps seguir com o preparo de esfregaos delgados
ou espessos, deixando secar e corando pelos mtodos de Giemsa ou
May-GrnwaldGiemsa. Para que as coloraes sejam mais satisfatrias, deve ser utilizado o corante Giemsa adicionado de uma gota de

Protozoologia | 185

soluo de bicarbonato de sdio a 1% para cada 10 mL da soluo


corante. O tempo de colorao deve ser ampliado para 40 minutos.
e) Para o isolamento de espcies e subespcies do gnero Leishmania, o
material a ser semeado deve ser obtido de acordo com os preceitos
estabelecidos no estudo especfico dos assuntos. A semeadura deve
ser imediata coleta, emulsionando-se o material no lquido de condensao do meio. O material deve ser semeado em mais de um tubo,
e os tubos armazenados em estufa a 25C at a realizao dos exames,
que devem ser feitos a partir do quarto dia.

Meio de cultura LIT
Soluo 1:
NaCl
4,0 g
KCl _______________0,4 g
Soluo 2:
Triptose
Infuso de fgado
gua destilada q.s.p.

5,0 g
5,0 g
880 mL

Etapas para o preparo:


a) Dissolver o infuso de fgado em 200 mL de gua destilada, em banhomaria ou chama de gs;
b) Filtrar ainda quente em algodo;
c) Recolher o filtrado e juntar com os ingredientes das solues 1 e 2;
d) Ajustar o pH entre 7,4 e 7,6;
e) Acrescentar 100 mL de soro bovino;
f) Inativar a 68C durante 1 hora, agitando o meio de 5 em 5 minutos;
g) Acrescentar 20 mL (0,2%) de hemoglobina e antibiticos (penicilina
250 L/mL estreptomicina 50-100 mg/mL);
h) Filtrar em Zeitz e distribuir em quantidades desejadas.

186 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Referncias bibliogrficas
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Introduo helmintologia | 191

Captulo 2

Introduo helmintologia
Jos Roberto Machado-Silva
Rosngela RodrigueS-Silva
Lucas de andrade barros
Fernanda Barbosa de Almeida

1. Consideraes gerais

Helmintologia a rea do conhecimento que se dedica ao estudo dos


helmintos, ou, em seu termo vulgar, dos vermes. Helmintose ou helmintase
a nomenclatura utilizada no caso de o hospedeiro estar infectado por
helmintos. Devido ao nmero de hospedeiros infectados e aos agravos
sade, os helmintos so considerados problemas de sade pblica na medicina
humana e veterinria. De acordo com o tipo de corpo, os helmintos podem
ser organizados em dois grupos: os nematelmintos, que apresentam o corpo
cilndrico e so representados pela classe Nematoda, e os platelmintos, que,
em geral, apresentam o corpo achatado dorso-ventralmente. Nesse grupo, esto
includas as classes Trematoda, com helmintos de corpo foliceo, exceto o gnero
Schistosoma, e a classe Cestoda, tambm conhecida por Cestoidea, que possui

192 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

helmintos de corpo segmentado. Essas duas classes tambm se diferenciam pelo


nmero de ventosas: duas na classe Trematoda e quatro, na Cestoda.
No ciclo biolgico dos helmintos, h diferentes estgios evolutivos:
vermes adultos, ovos e larvas. Nos nematelmintos, a fase adulta apresenta
diferenciao sexual evidente, na qual os espcimes machos so menores do
que as fmeas, ao passo que a quase totalidade dos platelmintos representada
por helmintos hermafroditas, isto , a presena, no mesmo indivduo, dos
sistemas reprodutores masculino e feminino.
Alm das diferenas no aspecto externo do corpo e no sistema reprodutor,
a organizao do sistema digestrio tambm permite a distino entre as classes,
posto que nos Nematoda o sistema digestrio completo, sendo composto
de boca, faringe, esfago e nus (nos machos) ou cloaca (nas fmeas). Os
platelmintos no apresentam sistema digestrio completo. Os trematdeos tm
boca, no fundo da ventosa oral, faringe e intestino que termina em saco
fechado , determinando que as excretas sejam eliminadas pela boca. Os
cestoides no apresentam sistema digestrio, efetuando a nutrio por osmose
atravs do tegumento, a parte externa do corpo dos platelmintos.
Os ovos de nematoides tm trs camadas: uma externa lipdica, uma
quitinosa intermediria e uma vitelnica interna, mais ou menos espessas, que
asseguram maior ou menor barreira ao desenvolvimento das larvas no interior
do ovo.
De acordo com o ciclo biolgico, os helmintos podem ser classificados
como geo-helmintos, quando ocorre uma mudana de fase evolutiva no solo,
tal como de estgios no interior do ovo ou de ovo para larva ou, ainda, de
uma fase larvar (rabditoide) para outra (filarioide), como nos nematoides.
J nos bio-helmintos, as fases larvrias se desenvolvem em hospedeiros
intermedirios no ciclo biolgico: esporocisto para cercrias em trematdeos
e embrio hexacanto para larva cisticercoide em cestoides.
No corpo humano so encontrados helmintos nos intestinos delgado e
grosso, e em vrios outros locais: fgado, sistemaas nervoso, circulatrio e
linftico e tecido subcutneo.

Introduo helmintologia | 193

2. Helmintos intestinais humanos

No intestino so encontrados com muita frequncia helmintos adultos


de vrias espcies de nematoides e cestoides. Para alguns nematoides, a
transmisso ocorre por via oral, mediante a ingesto de alimentos contaminados
com ovos embrionados (com uma larva infectante); o caso de Ascaris
lumbricoides e Trichuris trichiura. Para outras espcies, como Strongyloides
stercoralis, Ancylostoma duodenale e Necator americanus, a transmisso
ocorre por larvas infectantes que penetram na pele dos indivduos ao andarem
descalos.
Algumas espcies de nematoides intestinais Ascaris lumbricoides,
Strongyloides stercoralis, Ancylostoma duodenale e Necator americanus
tm um ciclo pulmonar caracterstico, denominado ciclo de Loss. Nesse ciclo,
as larvas sofrem amadurecimento no pulmo, mudam de estgio evolutivo,
rompem os capilares, caem nos alvolos, sobem pela rvore brnquica, alcanam
a traqueia e, ao serem deglutidas, atingem seu destino final: o intestino. O
habitat dos vermes adultos de Ascaris lumbricoides, Strongyloides stercoralis,
Ancylostoma duodenale e Necator americanus o intestino delgado; j o
habitat de Trichuris trichiura e Enterobius vermicularis o intestino grosso. O
diagnstico laboratorial dos nematoides intestinais feito pelo encontro de
ovos ou larvas nas fezes dos indivduos, geralmente por meio de mtodos de
rotina parasitolgica.
Em relao aos cestoides, a transmisso se d apenas por via oral, quando
os indivduos ingerem carnes contaminadas por formas larvrias de Taenia solium
ou de Taenia saginata. Em outras espcies, a transmisso feita apenas pela
ingesto de ovos de Hymenolepis nana (Rodentolepis nana) encontrados no
ambiente; j no caso de Hymenolepis diminuta, a transmisso acontece pela
ingesto de pequenos colepteros. Todas essas espcies habitam o intestino
delgado. O diagnstico laboratorial feito pelo encontro de proglotes (ou
progltides) nas fezes dos indivduos. Os detalhes sobre o parasitismo por
helmintos intestinais mais comuns em nosso pas so apresentados a seguir.

194 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

2.1 Cestoides com habitat em intestino delgado humano

A) Taenia solium e Taenia saginata (tenase)


a) Morfologia
Os vermes adultos so grandes: T. solium mede de 1,5 a 4 metros de
comprimento; e T. saginata, de 4 a 12 metros. O nome vulgar (popular)
mais utilizado para o gnero solitria. O corpo achatado, em forma de
fita, e dividido em trs regies, a saber: esclex (regio anterior de fixao no
intestino), com quatro ventosas e dupla coroa de ganchos (acleos) cora
presente em T. solium e ausente em T. saginata; colo, regio de crescimento
do helminto; e estrbilo, composto por segmentos denominados proglotes.
Dependendo da sua organizao interna, as proglotes so classificadas
como imaturas (sem maturao sexual), maduras (sistemas genitais masculino
e feminino desenvolvidos) e grvidas (ramificaes uterinas repletas de
ovos). As proglotes grvidas se diferenciam entre as espcies: na T. solium,
apresentam aspecto dendrtico e menor nmero de ramificaes uterinas, com
maior espao entre elas; na T. saginata, apresentam aspecto dicotmico e
maior nmero de ramificaes uterinas, com menor espao entre elas. Os
ovos pequenos, esfricos, marrons, medindo cerca de 20 a 40 m1 de
dimetro , so morfologicamente indistinguveis e constitudos por uma casca
externa e uma interna que protegem o embrio, conhecido como hexacanto
ou oncosfera. O cisticerco (forma larvar) apresenta formato elptico ou
semiesfrico, com dimetro de maior eixo medindo de 8 a 10 mm. A larva
de T. saginata apresenta quatro ventosas no protoesclex; a de T. solium tem
uma coroa de acleos no centro das quatro ventosas.

m = micrmetros.

Introduo helmintologia | 195

Figura 1. Formas evolutivas de Taenia solium e Taenia saginata: A) Esclex de T.


solium, com coroa de ganchos (acleos) (1) e ventosas (2); B) Esclex de T.
saginata, com ventosas (3); C) Ovo; D) Proglote de T. solium, com ramificaes
dendrticas; E) Proglote de T. saginata, com ramificaes dicotmicas.

b) Ciclo biolgico
A infeco humana ocorre pela ingesto de carne bovina, crua ou mal cozida,
contaminada pelas larvas de T. saginata, ou de carne suna, contaminada com T.
solium. No intestino delgado, ocorre a desinvaginao da larva, quando essa
se fixa na mucosa intestinal e se transforma em verme adulto. A tnia adulta
comea a eliminar proglotes grvidas com 80 mil a 100 mil ovos, de 60 a 70
dias aps a ingesto da carne. Os ovos eliminados pelo hospedeiro definitivo
contaminam o solo, sendo ingeridos por sunos ou bovinos. No intestino
delgado do hospedeiro intermedirio, ocorre a liberao da oncosfera, que
atravessa a mucosa intestinal e alcana a circulao, podendo se desenvolver
no crebro, lngua e corao. O ciclo recomea quando o homem ingere esses
tecidos contaminados. Durante episdios de vmitos nos indivduos com T.

196 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

solium, as proglotes grvidas podem chegar ao estmago e ativar o embrio


(oncosfera), que volta ao intestino delgado e se desenvolve em cisticerco,
caracterizando a autoinfeco interna.

Figura 2. Ciclo biolgico da Taenia sp.

c) Relao parasitohospedeiro
A doena causada pela presena dos vermes adultos no intestino, que no
provoca alteraes importantes no local de fixao, conhecida como tenase.
Com muita frequncia se observam indivduos assintomticos. Os principais
sintomas so dor abdominal, nuseas, falta de apetite ou apetite exagerado
e perda de peso. As principais complicaes so apendicite (penetrao de
uma proglote e obstruo do apndice ileocecal) e obstruo intestinal pela
massa do estrbilo (extremamente rara).
d) Diagnstico laboratorial
Realizado pela pesquisa de proglotes ou de ovos eliminados nas fezes. A
obteno de proglotes pode ser conseguida, principalmente, por tamisao,

Introduo helmintologia | 197

que consiste em desfazer o bolo fecal com gua corrente em uma peneira de
malhas finas (tamis), para reter as proglotes. As proglotes retidas devem ser
comprimidas entre duas lminas de vidro e clarificadas com cido actico, a
fim de se identificarem as espcies pela morfologia das ramificaes uterinas.
Esse procedimento importante pela possibilidade de autoinfeco por T.
solium.
importante lembrar que as proglotes de T. solium costumam ser expulsas
passivamente, misturadas a material fecal, ou ao fim da defecao. J as de
T. saginata saem normalmente de forma isolada, podendo estar envolvidas
pela massa fecal. Por possurem musculatura mais potente que as proglotes
da T. solium, o que determina uma atividade motora, as proglotes de T.
saginata conseguem locomover-se, forando a passagem pelo orifcio anal a
qualquer momento do dia ou da noite, e suas proglotes podem ser vistas com
frequncia na roupa de cama ou em peas ntimas de vesturio. Esse pode ser
um meio de obteno do proglote sem uso da tamisao.
Normalmente, o encontro de ovos nas fezes acidental, pois as proglotes
saem ntegras nas fezes. A pesquisa de ovos com fita adesiva a melhor
tcnica para encontrar os ovos de Taenia, tendo em vista que, ao passar pelo
orifcio anal, as proglotes so comprimidas e tendem a extravasar parte do seu
contedo (ovos). Porm, em razo da semelhana morfolgica entre os ovos
das mesmas, no possvel estabelecer o diagnstico da espcie parasitria.
e) Epidemiologia
O parasitismo pelo gnero Taenia encontrado em praticamente todas as
partes do mundo, apresentando maior prevalncia nas regies onde inexiste
ou precria a inspeo sanitria das carcaas de bovinos e/ou sunos.
No Brasil, pas no qual a maioria da carne consumida no fiscalizada, a
prevalncia da tenase/cisticercose alta, e tais patologias esto largamente
dispersas no territrio nacional, principalmente nas cidades do interior.
Hbitos de determinados segmentos populacionais podem fomentar ou inibir
tal transmisso, como o caso da proibio da ingesto de carne suna por

198 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

judeus ortodoxos e da carne de origem bovina por grupos indianos, como os


hindus. Como o nico hospedeiro definitivo o homem, o destino inadequado
de suas fezes o elemento fundamental na manuteno da transmisso dos
ovos de Taenia para seus respectivos hospedeiros intermedirios. A utilizao
de fezes humanas como adubo e o frequente hbito coprofgico de sunos
criados soltos por seus donos ajudam a disseminar a doena. Outro fator
determinante para a propagao dessa helmintose a elevada capacidade do
ovo de Taenia resistir ao tratamento dos esgotos e s inundaes. Em casos
mais raros, a ordenha manual de bovinos por mos contaminadas por ovos do
parasito podem ser uma fonte de transmisso. Porm, o mau hbito do homem
de defecar no solo , sem dvida, o elo mais significante dessa transmisso.
f) Profilaxia e controle
Inspecionar rigorosamente da carne de consumo humano, fiscalizar os
matadouros, evitar comer carne crua ou malcozida e tratar os indivduos
infectados so medidas importantes para a profilaxia da tenase. O destino
adequado dos dejetos, por meio da construo de sistema eficiente de
saneamento bsico, evita que sunos, bovinos, alimentos e gua sejam
contaminados com ovos de Taenia. Os indivduos com sintomatologia ou
suspeita de tenase devem realizar o diagnstico laboratorial e ser tratados.
Medidas de higiene pessoal, tais como sempre lavar as mos aps a ida ao
banheiro, antes de manipular alimentos e antes de fazer as refeies, so
prticas fundamentais. Lavar bem os alimentos contribui para a profilaxia e o
controle da cisticercose.
B) Rodentolepis (Hymenolepis) nana e Hymenolepis diminuta
(himenolepase)
a) Morfologia
O verme adulto de R. nana mede cerca de 2 a 4 cm de comprimento por
1 cm de largura e o de H. diminuta mede cerca de 30 cm de comprimento. O

Introduo helmintologia | 199

esclex de R. nana tem coroa simples de ganchos, o que permite diferenci-lo


de H. diminuta, que no tem coroa de ganchos. Os ovos de R. nana medem
40 m de dimetro e apresentam um embrio completamente formado. H.
diminuta mede 70 a 80 m de dimetro. A larva denominada cisticercoide
tem o esclex invaginado com coroa de ganchos, mas sem vescula.

Figura 3. A) Ovo de Hymenolepis diminuta;


B) Ovo de Rodentolepis (Hymenolepis) nana.

b) Ciclo biolgico
O ciclo evolutivo de H. nana do tipo monoxeno. O verme adulto
produz no intestino delgado numerosos ovos, que so liberados nas fezes.
Novos indivduos podero se infectar com esses ovos, os quais, no intestino
delgado, liberam os embries, que se fixam e do origem ao verme adulto. O
ciclo total desde a ingesto de ovos at o desenvolvimento do verme adulto
e o aparecimento de ovos nas fezes dura um ms.
J o ciclo de H. diminuta do tipo heteroxeno. Os ovos podem ser
ingeridos por insetos (hospedeiro intermedirio), e a larva cisticercoide
forma-se nos tecidos desses artrpodes, que so ingeridos acidentalmente.
No intestino delgado do hospedeiro definitivo, o esclex desinvagina, fixa-se
na mucosa e cresce at formar o verme adulto. A infeco humana por H.
diminuta pouco frequente. Os roedores so os hospedeiros naturais desse
helminto.

200 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 4. Ciclo biolgico do Rodentolepis nana.

Figura 5. Ciclo biolgico do Hymenolepis diminuta.

Introduo helmintologia | 201

c) Relao parasitohospedeiro
De maneira geral, a presena de poucos vermes adultos no intestino no
provoca alteraes importantes no local de fixao. Com muita frequncia,
observam-se indivduos assintomticos. Os principais sintomas so dor abdominal,
nuseas, falta de apetite, irritabilidade, dor de cabea e perda de peso.
d) Diagnstico laboratorial
O exame coproparasitolgico feito para pesquisar os ovos tpicos de
Rodentolepis e Hymenolepis, e as tcnicas mais utilizadas so as de Faust e
colaboradores (1938), a de Sheather (1923) e Ritchie (1948) modificada.
e) Epidemiologia
A himenolepase encontrada em todas as partes do mundo, principalmente
nos pases ou regies mais frias. Dois fatores so importantes para a ocorrncia
dessa parasitose: densidade populacional e hbito de viver em ambientes
fechados. Crianas na faixa escolar so as mais frequentemente infectadas.
f) Profilaxia e controle
Higiene pessoal com lavagem constante das mos, destino adequado dos
dejetos, uso de aspirador de p e tratamento dos infectados. O combate
aos insetos de cereais e s pulgas no ambiente e o exame de fezes nos demais
membros da comunidade (famlia e creche) evitam a manuteno das fontes
de infeco.
2.2 Nematoides de habitat intestinal humano

A) Ascaris lumbricoides (ascariose, ascarase)


a) Morfologia
Os vermes adultos machos so longos, medem cerca de 15 a 30 cm de
comprimento, apresentam extremidades afiladas e cor leitosa. A extremidade

202 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

posterior facilmente reconhecida pelo enrolamento ventral em forma de


espiral, o que os diferencia das fmeas adultas, que apresentam a extremidade
afilada e retilnea. As fmeas medem de 30 a 40 cm, e tm cor semelhante
aos machos. O nome vulgar mais conhecido da Ascaris lombriga.
Podem ser eliminados trs tipos de ovos pela fmea. Caso o ovo tenha
sido gerado por fecundao do espermatozoide do macho, ele considerado
frtil; esse o ovo de A. lumbricoides mais frequentemente eliminado. Os
ovos frteis so elpticos ou esfricos, medem cerca de 50 a 70 m de
comprimento por 45 a 60 m de largura. Por causa da membrana externa
mamilonada, apresentam cpsula espessa que se cora de marrom pelos
pigmentos fecais, em torno de uma massa embrionria de nica clula. Com
menor frequncia, alguns ovos no apresentam membrana mamilonada externa,
sendo considerados descorticados, o que determina uma superfcie de casca
lisa e transparente, que envolve massa embrionria de nica clula. Caso o
ovo no tenha sido fecundado, consequentemente infrtil e mede cerca de
80 a 90 m de comprimento por 40 a 55 m de largura, apresentando-se
com os mamilos da membrana externa maiores e irregulares.
Os indivduos infectados podem eliminar nas fezes ovos frteis apenas,
ovos frteis e infrteis ou apenas ovos infrteis. Os ovos frteis podem
contaminar o ambiente em locais com condies sanitrias deficientes.

Figura 6. A) Ovo frtil de Ascaris lumbricoides com presena da membrana


mamilonada; B) Ovo frtil descorticado; C) Ovo infrtil.

Introduo helmintologia | 203

b) Ciclo biolgico
Os ovos frteis ou infrteis so afetados de maneira diferente pelo ambiente.
Para os frteis, temperaturas em torno de 25C a 30C, umidade mnima
de 70% e oxignio so fatores que permitem o desenvolvimento de uma
larva de primeiro estgio (L1) que evolui para larva de segundo estgio (L2)
e, posteriormente, para larva infectante de terceiro estgio (L3) dentro do
ovo, com movimento observado entre lmina e lamnula ao microscpio. Nos
infrteis, no h a formao da larva porque o ovo no foi fecundado.
Dentro do hospedeiro, ocorre uma migrao muito acentuada. Aps a
ingesto, os ovos larvados passam pelo estmago, as larvas saem do ovo no
intestino delgado migram para o ceco, onde atravessam a parede intestinal e
penetram na circulao sangunea ou linftica, a fim de atingir o corao e os
pulmes quando ocorre o ciclo de Loss , evoluindo para larva de quarto
estgio (L4). A migrao continua, e as L4 atingem a faringe, onde podem
ser expelidas com a expectorao ou ingeridas, passando pelo estmago e
transformando-se em adultos jovens no intestino delgado. Em aproximadamente
60 dias, realizam a cpula e as fmeas produzem ovos que saem nas fezes.

Figura 7. Ciclo biolgico do Ascaris lumbricoides.

204 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

c) Relao parasitohospedeiro
A patogenia caracterizada pelo processo migratrio das larvas no
pulmo, que determina um quadro de pneumonite, no qual h febre, tosse e
eosinofilia. Caso o indivduo seja hipersensvel, pode ocorrer a denominada
sndrome de Loeffler. Na infeco intestinal, os vermes adultos ocasionam
ao espoliadora, txica, mecnica e, com menor frequncia, localizaes
no habituais (ectpicas). As manifestaes clnicas envolvem desconforto
abdominal, nuseas e perda de apetite. Esses quadros so mais graves em
crianas desnutridas e que apresentem grande nmero de vermes. A ao
irritativa mais grave desenvolvida pelos adultos diretamente sobre a parede
intestinal a formao de volumosas massas que lembram novelos, conduzindo
algumas vezes produo de espasmos e de obstruo intestinal e peritonite,
com ou sem perfurao do intestino.
d) Diagnstico laboratorial
feito com base no exame de fezes de rotina. Em razo do grande nmero
de ovos eliminados normalmente nas fezes em torno de 200 mil ovos
por fmea/dia e de sua densidade de valor intermedirio, praticamente
todas as tcnicas de concentrao, sedimentao e flutuao apresentam boa
sensibilidade para a ascariose. As principais tcnicas utilizadas so as de
Lutz (1919) ou Hoffman, Pons e Janer (1934), Ritchie (1948), Faust
e colaboradores (1938), Sheather (1923) e Willis (1921). O emprego
de mtodos quantitativos como os de Kato-Katz (Katz, Chaves e Pellegrino,
1972) e Stoll (1923) permitem a quantificao do nmero de ovos e,
consequentemente, a estimativa da carga parasitria do indivduo.
Obs: Cuidado com a morfologia dos ovos infrteis ou frteis descorticados nas fezes, pois a mesma pode determinar falsos negativos ou identificao errnea, uma vez que se assemelham a ovos de ancilostomdeos,
apresentando, porm, casca mais grossa.

Introduo helmintologia | 205

e) Epidemiologia
A infeco por A. lumbricoides est amplamente distribuda nas regies
tropicais e temperadas do planeta. Em todos os estados do Brasil, h relatos
de infeco por esse helminto. Entretanto, h reas de alta transmisso o
Nordeste, reas de mdia transmisso, o Norte, o Centro-Oeste e o Sudeste,
e de baixa transmisso, o Sul. Alguns fatores interferem nessa distribuio:
grande nmero de ovos produzidos pelas fmeas, condies deficientes de
saneamento, concentrao de indivduos e caractersticas climticas, havendo
maior prevalncia da infeco em regies midas e quentes.
f) Profilaxia e controle
Recomenda-se o tratamento dos indivduos infectados, instalao de
saneamento bsico e educao em sade.

B) Ancylostoma duodenale e Necator americanus (ancilostomose,


ancilostomase).
a) Morfologia
So helmintos com regio anterior diferenciada (cpsula bucal com
dentes ou lminas cortantes); a regio posterior dos machos no apresenta a
extremidade recurvada, possuindo uma bolsa copuladora bem caracterstica
dessas espcies. Os machos de A. duodenale medem de 9 a 11 mm e as
fmeas, de 10 a 13 mm. Em N. americanus, os machos medem de 5 a 9
mm e as fmeas, de 9 a 11 mm

206 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 8. A) Extremidade anterior de Necator americanus, que mostra o par


de placas cortantes no interior da cpsula bucal; B) Extremidade anterior de
Ancylostoma caninum, mostrando a cpsula bucal e os trs pares de dentes
ventrais; C) Extremidade posterior de um exemplar macho de Ancylostoma,
com a bolsa copuladora sustentada por raios musculares.

Os ovos das duas espcies so muito parecidos, ovoides e casca: eles tm


forma: fina e transparente. No interior do ovo, desenvolve-se uma larva com
o tubo digestivo diferenciado em corpo, istmo e bulbo (L2, larva rabditoide).
No ambiente, ocorre a maturao para um estgio posterior, com esfago
cilndrico e sem bulbo (L3, larva filarioide).

Figura 9. A) Ovo de ancilostomdeo no incio da segmentao,


como se apresenta nos exames de fezes; B) Ovo embrionado,
depois de permanecer alguns dias no ambiente.

Introduo helmintologia | 207

b) Ciclo biolgico
A infeco por N. americanus se d pela penetrao cutnea das larvas
filarioides infectantes (L3). No A. duodenale, alm desse tipo de transmisso,
constata-se tambm a infeco por via oral, quando as larvas filarioides so
ingeridas com o alimento. No entanto, os autores divergem se a transmisso
se d exclusivamente pela penetrao cutnea, ou se tambm ocorre por via
oral. Alcanada a circulao cutnea, as larvas L3 so levadas ao corao e aos
pulmes. De forma semelhante ao A. lumbricoides, as larvas realizam o ciclo de
Loss, atingindo a fase adulta no intestino delgado. Acredita-se que na transmisso
por via oral o ciclo de Loss no ocorra. Da invaso das larvas infectantes at o
aparecimento de ovos nas fezes so necessrios de 35 a 60 dias.

Figura 10. Ciclo biolgico de Ancylostoma duodenale e Necator americanus.

c) Relao parasitohospedeiro
A gravidade dessa helmintose depende do local de migrao das larvas,
do nmero de vermes adultos localizados no intestino e do estado nutricional
do indivduo. No intestino, o helminto se fixa pela cpsula bucal, causando

208 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

intensa anemia. Os sintomas dessa fase incluem palidez e conjuntivas e


mucosas descoradas.
d) Diagnstico laboratorial
O exame de fezes por mtodos qualitativos sedimentao espontnea,
sedimentao por centrifugao e flutuao indica apenas a presena ou
no de ovos, porm com esses mtodos no possvel no possvel a
identificao da presena de ovos de ancilostomdeos. Com esses mtodos
no possvel a identificao de ovos, por causa da semelhana morfolgica
entre os ovos de diferentes parasitos. Como o nmero de vermes importante
na patogenia, sua estimativa pode ser realizada por mtodos quantitativos,
cujo resultado expressa o nmero de ovos por grama de fezes.
e) Epidemiologia
A transmisso dos ancilostomdeos depende dos seguintes fatores:
indivduos infectados que contaminam os solos com as suas fezes; tipo de
solo; e condies climticas favorveis ao ciclo biolgico dos helmintos:
umidade, presena de oxignio e temperatura adequada. A infeco ocorre
preferencialmente em crianas maiores de 6 anos, adolescentes e indivduos
mais velhos.
f) Profilaxia e controle
Inclui o tratamento dos infectados e o planejamento de educao sanitria,
nos quais se destacam a aplicao de medidas higinicas gerais, como destino
adequado dos dejetos, evitar andar descalo em ambientes contaminados
com as larvas do helminto e cuidados na manipulao e no armazenamento
dos alimentos.

Introduo helmintologia | 209

C) Strongyloides stercoralis (estrongiloidose ou estrongiloidase)


a) Morfologia
Diferentemente de outras espcies de nematoides, S. stercoralis apresenta
seis estgios evolutivos. A forma parasitria uma fmea partenogentica, que
mede de 1,7 a 2,5 mm de comprimento por 0,03 a 0,04 mm de largura, no
apresentando receptculo seminal. Os ovos elpticos, de casca fina, medindo
de 50 a 58 m de comprimento por 30 a 34 m de largura, apresentam uma
larva rabditoide e raramente so encontrados nas fezes. A larva rabditoide de
S. stercoralis tem as mesmas caractersticas gerais dos ancilostomdeos, porm
o primrdio genital bem desenvolvido em S. stercoralis. No ambiente, as
larvas evoluem para os estgios filarioide, adultos de vida livre ou estercorais.
A principal caracterstica da larva filarioide de S. stercoralis sua extremidade
posterior, que termina em ponta entalhada. Os machos medem 0,7 mm de
comprimento por 40 m de largura e extremidade posterior caracterstica de
outros machos de nematoides. As fmeas estercorais medem de 0,8 a 1,2 mm
de comprimento por 50 a 75 m de largura e apresentam receptculo seminal.

Figura 11. Formas evolutivas de Strongyloides stercoralis: A) Ovo embrionado,


com larva no interior; B) Larva rabditoide encontrada nas fezes, que apresenta
esfago rabditoide com regio anterior cilndrica e alongada (corpo) (1), regio
intermediria estreitada (istmo) (2) e regio posterior globulosa (bulbo) (3); C)
Macho de vida livre encontrado no solo a seta indica dois pequenos espculos
que auxiliam na cpula; D) Fmea de vida livre; E) fmea partenogentica.

210 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

b) Ciclo biolgico
As fmeas partenogenticas habitam o intestino delgado. Os ovos so
depositados na mucosa intestinal e as larvas alcanam luz intestinal. As larvas
rabditoides eliminadas nas fezes dos indivduos parasitados podem seguir
dois ciclos: no ciclo direto, elas sofrem progressivas mudas e evoluem para
larvas filarioides infectantes; j no ciclo indireto, as larvas rabditoides sofrem
mudas e se transformam em machos e fmeas de vida livre. Aps a cpula,
as fmeas pem os ovos, liberando larvas rabditoides que evoluem para
larvas filarioides infectantes. Os dois ciclos se completam com a penetrao
das larvas infectantes pela pele. Aps atravessarem o tegumento, as larvas
invadem a corrente sangunea e realizam o ciclo pulmonar descrito para Ascaris
e ancilostomdeos.
Pessoas que andam descalas em ambientes contaminados por fezes humanas
se infectam de forma semelhante infeco por ancilostomdeos. Outras
formas de infeco so observadas na estrongiloidase: autoinfeco externa
ou exgena, quando larvas rabditoides se transformam em filarioides na regio
perianal e penetram no hospedeiro; e autoinfeco interna ou endgena,
quando as larvas rabditoides se transformam em filarioides ainda na luz intestinal
e penetram na mucosa intestinal (leo ou clon). Essa situao no s leva
manuteno prolongada do parasitismo, como tambm ao desenvolvimento
da superinfeco, que pode ocorrer em indivduos com estrongiloidase e
constipao intestinal, por causa do retardamento na eliminao das fezes.
Nos indivduos com baixa imunidade (sob o uso de drogas imunossupressoras,
radioterapia, sndrome da imunodeficincia adquirida, uso de corticoides
e alcoolismo crnico), pode ocorrer a autoinfeco interna, com larvas de
diferentes estgios (L1, L2 e L3) em diferentes rgos.

Introduo helmintologia | 211

Figura 12. Ciclo biolgico do Strongyloides stercoralis.

c) Relao parasitohospedeiro
Depende do local de migrao das larvas (pele e pulmes) e,
principalmente, das leses no duodeno e jejuno provocadas por fmeas e larvas.
Geralmente, a penetrao cutnea assintomtica, seguida de manifestaes
pulmonares semelhantes a uma pneumonia atpica. Os principais sintomas
envolvem a localizao intestinal e de formas disseminadas em indivduos com
imunocomprometimento.
d) Diagnstico laboratorial
O exame de fezes feito para pesquisar larvas em fezes sem utilizar
conservantes, como os mtodos de BaermannMoraes (Baermann, 1917;
Moraes, 1948) e Rugai, Mattos e Brisola (1954). Esses mtodos se baseiam
no hidro e no termotropismo das larvas. O exame de uma nica amostra de
fezes falha em detectar larvas em at 70% dos casos. Para se atingir 100%
de sensibilidade do exame de fezes, necessrio o exame de, pelo menos,
trs amostras fecais, coletadas em dias consecutivos.

212 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Os mtodos indiretos, como o hemograma, auxiliam o diagnstico


laboratorial, pois na fase aguda da infeco a taxa de eosinfilos pode ser
de at 82%, reduzindo-se para 8 a 15% na fase crnica. Os mtodos
imunolgicos e o diagnstico por biologia molecular tm sido empregados
com sucesso na infeco por S. stercoralis.
e) Epidemiologia
A semelhana de transmisso com os ancilostomdeos indica que os mesmos
fatores influenciam no aparecimento, manuteno e disperso do S. stercoralis.
A presena de fezes de animais domsticos, como os ces, contaminando o
solo mais um fator que influencia a distribuio geogrfica de S. stercoralis.
f) Profilaxia e controle
O tratamento dos infectados uma das medidas indicadas, porm
S. stercoralis o mais difcil de ser tratado. As medidas indicadas em
ancilostomdeos tambm podem ser citadas para S. stercoralis.
D) Trichuris trichiura (tricocefalose, tricurase)
a) Morfologia
A regio anterior afilada e a posterior alargada, lembrando um chicote,
so as principais caractersticas da morfologia externa dos vermes adultos de
T. trichiura. Os vermes machos medem cerca de 3 a 5 cm de comprimento,
sendo um pouco menores que as fmeas. Os ovos medem de 50 a 55 m de
comprimento por 22 a 23 m de largura e apresentam a forma de um barril
alongado, com poros salientes e transparentes em ambas as extremidades.

Introduo helmintologia | 213

Figura 13. A) Ovo de Trichuris trichiura, com poros (1) nas extremidades; B)
Macho de T. trichiura com regio posterior curvada ventralmente; C) Fmea de
T. trichiura note-se a regio posterior retilnea.

b) Ciclo biolgico
Da mesma maneira que A. lumbricoides, as condies ambientais favorecem
o desenvolvimento de larvas infectantes no interior do ovo de T. trichiura.
Quando ingeridos, os ovos embrionados liberam as larvas, que saem pelas suas
extremidades. Diferentemente de A. lumbricoides, as larvas de T. trichiura no
realizam o ciclo de Loss, permanecendo por alguns dias na mucosa duodenal
e migrando, posteriormente, para a regio cecal, onde completam o ciclo.
Por volta de 70 a 90 dias da ingesto dos ovos embrionados, comeam a
aparecer ovos nas fezes.

214 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 14. Ciclo biolgico do Trichuris trichiura.

c) Relao parasitohospedeiro
A gravidade da infeco depende da carga parasitria, da idade e do
estado nutricional dos hospedeiros em geral, crianas. Em infeces macias,
h intensa irritao intestinal que pode levar exteriorizao do reto (prolapso
retal). A grande maioria dos indivduos assintomtica. O quadro clnico
dos sintomticos representado por dores abdominais, perda de apetite,
desnutrio, insnia, nervosismo e retardamento no desenvolvimento fsico.
d) Diagnstico laboratorial
Da mesma maneira que A. lumbricoides, devido grande fecundidade das
fmeas, e tambm por ser intermediria a densidade de seus ovos, sua pesquisa
nas fezes no oferece dificuldades para a maioria dos mtodos de concentrao
para pesquisa de ovos (tcnica de Kato-Katz), nos mtodos de flutuao (tcnica
de Faust, 1938 e tcnica de Willis, 1921), sedimentao (tcnica de Ritchie,
1948 e tcnica de Lutz, 1919).

Introduo helmintologia | 215

e) Epidemiologia
As condies ambientais interferem diretamente na distribuio geogrfica
de A. lumbricoides e T. trichiura. Apesar da semelhana no mecanismo de
transmisso, a infeco por T. trichiura menos frequente. Crianas em idade
pr-escolar tm grande importncia na transmisso por meio da contaminao
do peridomiclio ou na maior suscetibilidade infeco. A distribuio
geogrfica cosmopolita, com maior ocorrncia em lugares de clima quente e
mido onde falte o saneamento bsico. O grande nmero de ovos produzidos
pelas fmeas, as condies de saneamento e a concentrao de indivduos so
fatores que interferem na distribuio geogrfica.
f) Profilaxia e controle
Recomenda-se o tratamento dos indivduos infectados, instalao de
saneamento bsico e educao em sade.

E) Enterobius (Oxyurus) vermicularis (enterobiose ou enterobase)


a) Morfologia
E. vermicularis um pequeno nematoide, mais conhecido como Oxyurus
vermicularis, com expanses na extremidade (asas ceflicas) e uma cauda
afilada como marcante caracterstica das fmeas. A fmea mede cerca de 10
mm, ao passo que o macho mede cerca de 3 a 5 mm de comprimento, com
a regio posterior curvada ventralmente. Os ovos medem de 50 a 60 m
de comprimento por 20 a 30 m de largura, com um dos lados ligeiramente
achatado e o outro, convexo, o que lhes d um aspecto de um D grosseiro.

216 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 15. A) Ovo de Enterobius (Oxyurus) vermicularis; B) Macho de E.


vermicularis com regio posterior curvada ventralmente;
C) Fmea de E. vermicularis.

b) Ciclo biolgico
Completamente diferente de outros nematoides intestinais, os ovos
dependem pouco de condies ambientais para se tornarem infectantes, pois,
quando o ovo sai do hospedeiro, no interior do mesmo encontra-se uma
larva j formada. Quando ingeridos, os ovos embrionados liberam as larvas
no intestino delgado, as quais se alimentam e migram para o ceco, habitat
dos vermes adultos. Um a dois meses depois, as fmeas, contendo de 10
mil a 16 mil ovos no tero, migram para a regio perianal, o que ocorre
principalmente noite, devido diminuio da temperatura nessa regio.
Os ovos podem ser eliminados pela ruptura do corpo da fmea, devido ao
ressecamento, ou pela oviposio atravs do orifcio vulvar.

Introduo helmintologia | 217

Figura 16. Ciclo biolgico do Enterobius vermicularis.

c) Relao parasitohospedeiro
Os vermes adultos provocam uma ao mecnica e irritativa no intestino.
O sintoma mais frequente coceira na regio anal, causada pela presena de
fmeas na pele da regio.
d) Diagnstico laboratorial
Sintomas como prurido anal noturno e presena de vermes adultos no
perneo caracterizam a infeco por E. vermicularis. O exame de fezes
pouco eficiente, pois os ovos no so eliminados com as fezes. O diagnstico
laboratorial mais eficiente quando, pela manh, sem higiene prvia, se
aplica na pele da regio perianal uma fita adesiva transparente (mtodo de
Graham, 1941). Os ovos aderem superfcie gomada da fita que, depois
de removida da pele, colada sobre uma lmina de microscopia e examinada
ao microscpio.

218 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

e) Epidemiologia
Diferentemente de outras parasitoses intestinais, a infeco por E.
vermicularis mais comum nos pases de clima frio e temperado, em razo
da menor frequncia dos banhos e do maior confinamento em ambientes
fechados. A transmisso do E. vermicularis tambm comum em creches,
orfanatos e no ambiente domstico. A transmisso pode ser de um indivduo
para outro (heteroinfeco) ou no mesmo indivduo (autoinfeco).
f) Profilaxia e controle
Inclui o tratamento dos infectados e, nos contactantes, a aplicao de
medidas higinicas gerais e pessoais, como banhos matinais dirios, evitar
sacudir as roupas de cama e de dormir dos indivduos infectados, ferver essas
roupas, cortar as unhas rente, evitar superlotao de quartos e educao
sanitria domstica e nas instituies que abrigam crianas.

3. Helmintos habitat tecidual humano

A) Schistosoma mansoni (esquistossomose mansnica)


a) Morfologia
O verme adulto macho mede cerca de 1 cm de comprimento e apresenta,
na regio anterior, duas ventosas: uma oral e outra ventral. O corpo do verme
achatado dorsoventralmente, formando um tubo longitudinal, conhecido como
canal ginecforo. Nesse canal fica alojada uma fmea, que mede 1,5 cm e que
tambm apresenta duas ventosas, porm bem menos desenvolvidas do que as
dos machos. Os ovos recm-eliminados pelas fmeas na parede dos vasos que
irrigam o intestino so imaturos. O ovo maduro mede cerca de 150 m de
comprimento por 65 m de largura. A cercria (fase larvria) mede cerca de
500 m de comprimento e tem cauda bifurcada.

Introduo helmintologia | 219

Figura 17. Formas evolutivas de Schistosoma mansoni: A) Ovo embrionado;


B) Miracdio; C) Cercria; D) Verme adulto macho: lobos testiculares (1),
ventosa oral (2), ventosa ventral ou acetbulo (3); E) Verme adulto fmea:
otipo (4), ovrio (5) e glndulas vitelnicas (6).

b) Ciclo biolgico
Embora os ovos do trematdeo de S. mansoni sejam eliminados nas fezes,
a luz intestinal no o habitat dos vermes adultos, e sim o sistema vascular
sanguneo. Os ovos maduros so eliminados nas fezes dos hospedeiros
infectados e alcanam uma coleo dgua. Sob a ao da luminosidade e da
temperatura, o miracdio sai do ovo e nada no ambiente, at encontrar um
molusco de gua doce de certas espcies do gnero Biomphalaria, no Brasil, e
Bulinus, na frica. O miracdio penetra nesses moluscos, modifica a sua forma
e origina milhares de cercrias que sairo do molusco sob a ao dos mesmos
fatores citados para o miracdio. As cercrias nadam na gua e penetram em
indivduos que entram em contato com as guas contaminadas. A penetrao
na pele faz que as cercrias modifiquem a sua morfologia, invadam alguns
vasos sanguneos, passem pelo corao e pelo pulmo, at atingirem o fgado.
A ocorre a maturao sexual, e os vermes acasalados migram para os vasos
que irrigam o intestino para a postura dos ovos, ainda imaturos. Depois de

220 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

cerca de uma semana, o desenvolvimento embrionrio se completa, com a


formao do miracdio.

Figura 18. Ciclo biolgico do Schistosoma mansoni.

c) Relao parasito-hospedeiro
A penetrao da cercria provoca reao local (dermatite cercariana),
acompanhada de intensa coceira. A presena dos vermes adultos vivos no
provoca alteraes importantes no local de fixao. Diferentemente de outros
helmintos, os ovos que no saram junto com as fezes provocaro uma resposta
inflamatria principalmente no fgado e no intestino que, com o passar do
tempo, comprometer a fisiologia do rgo. Os sintomas podem ser pouco
elucidativos, como perda de apetite e pequenos surtos diarreicos, ou mais
importantes, como o aumento do fgado e do bao e insuficincia heptica.
d) Diagnstico laboratorial
Pode ser realizado por meio de mtodos qualitativos de rotina parasitolgica,
que detectam os ovos do helminto nas fezes. Por sua simplicidade e baixo

Introduo helmintologia | 221

custo, o mtodo da sedimentao espontnea (Lutz, 1919; ou Hoffman, e


Pons e Janer, 1934) bastante utilizado. Para se estabelecer a viabilidade
ou no dos ovos, deve-se avaliar a atividade do miracdio no interior do
ovo por exemplo, na lmina preparada pelo mtodo da sedimentao.
Outra opo utilizar a ecloso miracidiana, colocando as fezes do paciente
suspeito em um frasco de gargalo fino e expondo a parte superior do
recipiente luz. Os miracdios eclodidos a concentrados podero ser vistos
a olho nu ou com lupa.
O conhecimento sobre a carga parasitria til na determinao da intensidade da infeco, que um fator que interfere na morbidade da esquistossomose. O mtodo de Kato-Katz amplamente utilizado para a estimativa da
carga parasitria, a partir da determinao do nmero de ovos por grama de
fezes (opg) de S. mansoni.
O exame parasitolgico de fezes tem pouca sensibilidade em indivduos com
baixas cargas parasitrias. Durante a fase crnica, h eliminao irregular de ovos
nas fezes, e nas infeces unissexuadas (por um nico sexo) no h produo
de ovos. Dessa forma, os ensaios imunolgicos so teis para o diagnstico.
Os antgenos utilizados so vermes adultos, antgenos recombinantes e
extratos de ovos. Os mtodos mais significativos detectam anticorpos na
fase aguda (IgM) ou crnica (IgG), destacando-se a imunofluorescncia e
a tcnica ELISA (do ingls Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay). H
tambm tcnicas desenvolvidas para a pesquisa de antgenos circulantes no
soro e tcnicas de biologia molecular, baseada na pesquisa de DNA de S.
mansoni nas fezes e no soro dos pacientes. Porm, as tcnicas de diagnstico
no parasitolgico no esto disponveis para uso na rotina.
e) Epidemiologia
A instalao ou manuteno da esquistossomose depende de fontes de
infeco (humanas, principalmente) que contaminem o ambiente aqutico com
fezes contendo ovos viveis, colees de gua doce com moluscos suscetveis
liberando cercrias e indivduos que tenham contato com tais colees de

222 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

gua. Trabalhadores rurais, escolares e turistas so grupos que apresentam


risco na esquistossomose. A poluio do ambiente aqutico do peridomiclio,
dos locais de trabalho ou de recreao, importante fonte de infeco na
esquistossomose.
f) Profilaxia e controle
Consiste em instalar uma rede de saneamento bsico que evite a
contaminao ambiental com fezes, alm do combate aos moluscos, com
modificaes ambientais que dificultem a sobrevivncia dos mesmos, e a
aplicao de drogas moluscicidas. Outras aes especficas so programas de
educao destinados mudana de hbitos que possam facilitar a transmisso
na populao; identificao das fontes de infeco, por meio de diagnstico
laboratorial; e tratamento com esquistossomicidas.

B) Fasciola hepatica (fasciolose ou fasciolase)


a) Morfologia
Como a maioria dos helmintos trematdeos, Fasciola hepatica hermafrodita. O verme adulto mede cerca de 2 a 4 cm de comprimento por 1 ou 2
cm de largura. O corpo achatado dorsoventralmente e tem o formato de
uma folha vegetal oblonga. Sua cor pardo-acinzentada. Na regio anterior,
possui duas ventosas, uma oral, com a abertura bucal no fundo de sua cavidade, e uma ventral.
Os ovos tm forma elptica e casca fina, apresentando um oprculo em
uma das extremidades. Medem de 130 a 150 m de comprimento por 60
a 100 m de largura.

Introduo helmintologia | 223

Figura 19. Verme adulto de Fasciola hepatica.

b) Ciclo biolgico
O ciclo biolgico heteroxeno. Os vermes adultos habitam o interior da
vescula e dos canais biliares mais calibrosos do hospedeiro vertebrado. Os ovos
so arrastados pela bile, misturam-se s fezes e alcanam o ambiente externo.
O desenvolvimento embrionrio e a formao do miracdio ocorrem quando os
ovos entram em contato com a gua em temperatura adequada. Aps a ecloso
do ovo, o miracdio comea a nadar e penetra no hospedeiro intermedirio
(moluscos do gnero Lymnaea). No interior dos moluscos, o miracdio
transforma-se em esporocisto e, dentro deste, formam-se as rdias. Essas ltimas
podem resultar em rdias de segundo estgio ou em cercrias. As cercrias
liberadas aderem com suas ventosas vegetao aqutica e com a descarga
do contedo das glndulas cistgenas dorsais e ventrais, h formao de uma
camada cstica. As cercrias envoltas pelas camadas csticas se transformam em
metacercrias. O hospedeiro vertebrado se infecta ao ingerir gua ou vegetais
aquticos (agrio) contaminados com metacercrias. O desencistamento ocorre
no intestino delgado. Liberadas dos cistos, as larvas perfuram a parede intestinal
e invadem a cavidade peritoneal. A migrao para o fgado continua, havendo
perfurao da cpsula de Gilson, que reveste o rgo.

224 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 20. Ciclo biolgico da Fasciola hepatica.

c) Relao parasitohospedeiro
So observadas numerosas leses na superfcie do fgado, podendo
produzir pequenas hemorragias, hematomas e inflamao. H hipertrofia dos
canais biliares. A sintomatologia mais caracterstica compreende aumento
doloroso do fgado, febre e acentuada eosinofilia de 60 a 80% de
eosinfilos no sangue. Dores abdominais e diarreia podem acompanhar a
febre. Aps algumas semanas so observadas ulceraes na parede dos canais
biliares, alm da destruio do epitlio, com submucosa espessada e infiltrada
de elementos inflamatrios. O fgado e a vescula biliar podem apresentar
aumento de tamanho. Fenmenos obstrutivos, fibrose e calcificao das vias
biliares so geralmente observados. A fasciolose em suas formas mais graves
conduz cirrose biliar, com compresso e atrofia do parnquima adjacente e
insuficincia heptica.

Introduo helmintologia | 225

d) Diagnstico laboratorial
O diagnstico clnico caracterizado pela eosinofilia acompanhada de febre, dor e aumento do fgado. O diagnstico seguro se d pelo encontro de
ovos nas fezes do hospedeiro definitivo. Mtodos de diagnstico imunolgico,
particularmente a tcnica ELISA, mas tambm a imunofluorescncia indireta, a
hemaglutinao passiva e a precipitao em gel do resultados confiveis.
e) Epidemiologia
A fasciolose uma zoonose cosmopolita, muito frequente em pases
dedicados pecuria. No Brasil, a fasciolose ocupa extensas reas da
regio Sul e Sudeste. No Rio Grande do Sul esto os maiores focos dessa
parasitose.
f) Profilaxia e controle
Consumir agrio somente de hortas cercadas e irrigadas, de modo a
impedir a contaminao das valas com fezes de gado. Nunca consumir agrio
silvestre. Ferver ou filtrar a gua em zonas endmicas. Combate aos moluscos
transmissores dessa parasitose.

C) Wuchereria bancrofti (filariose)


Entre os filardeos que infectam o homem Wuchereria bancrofti,
Onchocerca volvulus e Mansonella ozzardi , W. bancrofti a espcie mais
frequente e com maior distribuio geogrfica.
a) Morfologia
Os vermes adultos so alongados e delgados. Os machos medem de 3
a 4 cm de comprimento por 0,1 mm de largura; as fmeas medem de 7 a
10 cm de comprimento por 0,3 mm de largura. A forma larvria denominada
microfilria mede de 250 a 300 m de comprimento e coberta por uma de-

226 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

licada membrana externa, denominada bainha. A presena dessa estrutura, a


forma e a disposio de clulas subcuticulares e clulas somticas, permitem
a distino de outras espcies. No inseto vetor, tambm so encontradas
microfilrias com cerca de 2 mm de comprimento.

Figura 21. Desenho esquemtico de microfilria de Wuchereria bancrofti.

b) Ciclo biolgico
W. bancrofti desenvolve parte do ciclo no homem e parte em mosquitos
hematfagos do gnero Culex, que apresentam a microfilria infectante (larva
do tipo L3) na bainha de sua tromba. Quando o mosquito pica o indivduo,
as microfilrias saem da tromba e penetram no orifcio feito na pele pela
picada. Da pele, as microfilrias penetram nos vasos linfticos e sofrem duas
mudanas de estgio evolutivo (L4 e adultos jovens), antes de chegarem ao
estgio adulto. Da penetrao das microfilrias infectantes at o surgimento
de microfilrias (produzidas e eliminadas pelas fmeas) no sangue transcorrem
cerca de 9 a 12 meses. Quando os mosquitos picam indivduos infectados,
as microfilrias circulantes so ingeridas e sofrem mudanas morfolgicas at o
surgimento da microfilria infectante. Uma caracterstica importante nesse ciclo
que as microfilrias sanguneas apresentam periodicidade: durante o dia
esto localizadas nos capilares pulmonares e aumentam progressivamente em
nmero na corrente sangunea ao anoitecer, at atingirem o pico nas primeiras
horas da manh.

Introduo helmintologia | 227

Figura 22. Ciclo evolutivo da Wuchereria bancrofti.

c) Relao parasitohospedeiro
O desenvolvimento da doena clnica depende da resposta imune do
hospedeiro e da infeco bacteriana secundria geradora de erisipela. Alguns
pacientes permanecem assintomticos por anos, ao passo que os sintomticos
apresentam um processo de inflamao dos vasos linfticos, acompanhado de
febre, dor de cabea, dor local e vermelhido na regio atingida. Na fase
crnica da doena, predominam os fenmenos obstrutivos, agravados pelas
reaes inflamatrias nos pontos de distrbio da circulao linftica, como
o edema linftico (linfoedema), no qual so encontrados, alm da linfa,
microfilrias, o que estimula ainda mais a resposta inflamatria local. Esse
substrato possibilita o surgimento da fibrose local, comprimindo o tegumento
cutneo, o qual, para no se romper por causa da alta presso exercida,
se hipertrofia lentamente, iniciando-se a paquidermia, em geral conhecida
como elefantase. A elefantase pode ocorrer em vrias regies do corpo,
porm predomina nos membros inferiores, na genitlia e, em menor grau, nos
membros superiores, escroto e mama. A estase sangunea e o processo de

228 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

ruptura tegumentar propiciam a instalao de frequentes infeces bacterianas


tegumentares secundrias, o que complica ainda mais o quadro clnico.
d) Diagnstico laboratorial
O diagnstico parasitolgico da filariose feito pela pesquisa de
microfilrias no sangue perifrico no perodo noturno. A tcnica mais utilizada
a gota espessa de sangue colhido por puno capilar. Tambm se utilizam
tcnicas de concentrao, como a filtrao em membrana de policarbonato e a
tcnica de Knott (1939). Como a deteco de anticorpos no indicada na
filariose, a alternativa realizar a pesquisa de antgenos solveis pela tcnica
de ELISA ou por imunocromatografia rpida. Tcnicas de biologia molecular
para a pesquisa de DNA do helminto, como a da reao em cadeia da
polimerase (PCR), so bastante sensveis e especficas.
e) Epidemiologia
As principais reas endmicas esto na sia, frica e ndia. No Brasil,
a transmisso urbana e focal, e concentra-se em Recife e seus arredores
(Olinda, Paulista e Jaboato dos Guararapes). Os principais fatores
determinantes da transmisso so presena de fmeas do mosquito Culex
quinquefasciatus, pacientes com microfilrias circulantes e longo tempo de
moradia em rea endmica.
f) Profilaxia e controle
A implantao de sistema adequado de saneamento bsico, a drenagem
de canais e a recuperao de reas degradadas, ao diminurem os possveis
criadouros dos mosquitos, reduzem o risco de infeco. O combate s
larvas do mosquito deve ser feito com larvicidas qumicos. O tratamento da
populao humana visa interromper a transmisso e a evoluo da doena.
Preconiza-se a higiene diria, com gua e sabo, do membro atingido, a fim
de evitar infeces bacterianas secundrias, que agravam o quadro.

Introduo helmintologia | 229

D) Onchocerca volvulus (oncocercose ou oncocercase ou filariose


subcutnea)
a) Morfologia
Os vermes adultos so longos, delgados e apresentam uma cutcula com
estriao transversal, tendo a fmea entre 30 e 80 cm de altura por 0,3 a
0,4 cm de dimetro e o macho, de 3 a 5 cm de altura por 0,15 a 0,2 cm
de dimetro. As microfilrias, encontradas na pele do hospedeiro definitivo
(homem) a qualquer hora, tm de 150 a 370 m de comprimento. So
desprovidas de bainha, o que as diferencia das microfilrias de Wuchereria, e
apresentam ncleos somticos, corados em preparaes com Giemsa.

Figura 23. Desenho esquemtico de microfilrias de Onchocerca volvulus.

b) Ciclo biolgico
O ciclo biolgico heteroxeno. No Brasil, o nico hospedeiro definitivo
o homem. Os vermes adultos habitam ndulos subcutneos, geralmente
encapsulados, chamados oncocercomas. Os hospedeiros intermedirios so
insetos do gnero Simulium (borrachudos). Durante o repasto sanguneo, os
insetos ingerem as microfilrias presentes na pele ou nos oncocercomas. As larvas
infectantes (L3) surgem depois de uma a trs semanas de desenvolvimento na
musculatura torcica e migram para a probscide do inseto. Durante o novo
repasto sanguneo, as larvas presentes em sua probscide penetram ativamente
atravs da pele do hospedeiro definitivo, onde os adultos se desenvolvem de

230 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

6 a 12 meses depois. O ciclo se completa em 10 a 15 meses, quando j


sero encontradas as microfilrias na pele do hospedeiro.

Figura 24. Ciclo biolgico do Onchocerca volvulus.


c) Relao parasitohospedeiro
A localizao dos parasitos adultos encapsulados e normalmente enovelados por longos perodos em tecido subcutneo determina ndulos
constitudos por camadas concntricas que tm como substrato inflamatrio
crnico, contendo plasmcitos, eosinfilos, fibroblastos, clulas gigantes e
granulomas. Tais leses, denominadas oncocercomas, determinam necrose
local, com espessamento nodular que se intensifica de forma proporcional
intensidade lesional e ao tempo de parasitismo, medindo inicialmente de
1 a 8 mm e alcanando pouco mais de 10 mm com o passar dos anos;
aps a morte dos adultos, entra em progressiva regresso, at confinar-se
massa fibrtica residual, que constitui a sequela de tais leses. A longevidade parasitria pode chegar a perodos de 12 a 15 anos, porm
sua capacidade reprodutiva cai progressivamente com o tempo de infeco.
Existe a possibilidade do encontro de adultos entre os espaos nodulares,

Introduo helmintologia | 231

camadas musculares e em locais prximos a ossos e articulaes. Quando


machos e fmeas esto presentes nos oncocercoma, ocorre a fecundao das
ltimas, em perodos que variam de um a quatro ciclos reprodutivos anuais,
produzindo-se em cada um deles de 200 mil a 400 mil larvas microfilrias
com grande mobilidade, o que lhes possibilita chegar ao tecido conjuntivo,
com vida mdia de 6 a 30 meses.
As leses cutneas determinadas pela presena macia de microfilrias
acarretam distrbios inflamatrios que, mesmo aps a morte das mesmas,
determinam aumento de fibroblastos e polissacardeos entre as fibras colgenas. Isso possivelmente explica o edema epitelial, a despigmentao
e a substituio progressiva do tecido drmico normal por tecido fibroso.
Na fase crnica, o edema epitelial diminui, mas a hiperqueratose e a despigmentao cutnea evoluem continuamente, ocorrendo simultaneamente
atrofia de glndulas sebceas e folculos pilosos, acarretando a flacidez
cutnea denominada geriatrodermia. Podem ocorrer formas mais graves, com
intenso prurido, erupo papular e despigmentao localizada.
No incomum a ocorrncia de leses linfticas em decorrncia da localizao de microfilrias nesses locais, determinando fibrose em grau varivel
e possibilidade de obstrues linfticas, com linfoedema localizado. A localizao ocular de microfilrias determina as mais graves leses ocasionadas
por essa parasitose; elas ocorrem principalmente aps a morte larvar e so
cercadas por eosinfilos e linfcitos. Essas leses podem evoluir, em razo
da reatividade do hospedeiro e do nmero de leses, para uma resoluo
sem sequelas ou para leses permanentes na crnea, ris, coroide, retina
e nervo ptico. Na crnea, aps leses inflamatrias puntiformes, pode
ocorrer cronicidade do processo de invaso fibroblstica e consequente
perda de viso.
d) Diagnstico laboratorial
A pesquisa de microfilrias por bipsia, seja cutnea, seja de ndulos
subcutneos, com a retirada de fragmento local e sua colocao em soluo
fisiolgica em lmina, a forma mais sensvel de pesquisa parasitria. O exame

232 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

oftalmolgico nas formas oculares pode evidenciar as microfilrias na cmara


anterior do globo ocular. A pesquisa de anticorpos pelos mtodos ELISA e
de hemaglutinao normalmente utilizada para pesquisas epidemiolgicas.
e) Epidemiologia
A oncocercose est dispersa pela maioria dos pases da frica, sia,
Amrica Central e Amrica do Sul. Nesse ltimo continente, j foi
identificada na Colmbia, na Venezuela, nas Guianas e no Brasil. Em nosso
pas, Roraima e Amazonas so reas endmicas dessa filariose. O homem
o hospedeiro definitivo de maior importncia, porm chimpanzs e gorilas j
foram identificados como reservatrios no humanos da oncocercose na frica.
Os seus transmissores (hospedeiros intermedirios) esto representados por
simulideos, sendo que, no Brasil, as espcies mais relevantes so o Simulium
guianensis e o Simulium oyupocrene. Os simulideos fazem sua oviposio
exclusivamente em guas bem oxigenadas, e apresentam rea de disperso
prxima dos rios que sero a sede de seu ciclo de reproduo. A maioria das
transmisses ocorre na margem desses rios.
f) Profilaxia e controle
A profilaxia dessa parasitose dificultada pelas peculiaridades do ciclo
vital de seus transmissores, porm as linhas bsicas de controle devem buscar o
tratamento dos homens parasitados, a retirada de possveis sedes de ovos, larvas
e pupas dos rios (galhos, troncos e afins) e o combate aos espcimes adultos.
E) Echinococcus granulosus (hidatidose cstica) e Echinococcus vogeli
(hidatidose policstica)
Apesar de constituir parasitose intestinal, por apresentar adulto em intestino
delgado de candeos, no homem a doena somente ocorre como resultado da
infeco pelo estgio larvar de tendeos (hidtide ou cisto hidtico) do gnero
Echinococcus. A hidatidose uma das parasitoses humanas mais importantes
do ponto de vista de sade pblica, existindo em todos os continentes.

Introduo helmintologia | 233

a) Morfologia
O verme adulto mede de 4 a 8 mm em E. granulosus e cerca de 12 mm
em E. vogeli. Ambos possuem o corpo dividido em esclex globoso, com
quatro ventosas e um rostro armado de duas fileiras de ganchos; colo ou regio
proglotognica, delgado e curto, e o estrbilo, formado por trs ou quatro
proglotes, das quais apenas a ltima grvida. Os cistos hidticos (forma
larvar), vulgarmente chamados de vescula aquosa ou bolha dgua, so tipicamente uniloculares em E. granulosus e policsticos em E. vogeli. Apresentam-se
como uma esfera cheia de lquido transparente. Externamente, so compostos
por membrana adventcia, que uma reao tecidual do rgo parasitado
presena da larva; membrana anista, constituda de escleroprotenas; e membrana germinativa, de natureza celular, responsvel por secretar o lquido hidtico
e em cuja parede interna brotam as vesculas prolgeras com os protoscleces.
Essas vesculas podem estar aderidas parede por um pedculo, ou podem se
soltar e ficar livres no lquido hidtico, compondo a areia hidtica. Os ovos
so semelhantes aos do gnero Taenia sp., medindo de 32 a 38 m de comprimento por 25 a 35 m de largura. Apresentam membrana externa radiada
(embriforo) e uma larva (oncosfera ou embrio hexacanto) com seis ganchos.

Figura 25. Verme adulto de Echinococcus sp.

234 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

b) Ciclo biolgico
O E. granulosus possui um ciclo de vida heteroxeno. A forma adulta
encontra-se fixada s vilosidades da mucosa do intestino delgado de candeos
domsticos e silvestres, como lobos e chacais (hospedeiros definitivos). As
proglotes grvidas, com vrias centenas de ovos, so eliminadas com as fezes
do animal medida que se desprendem do estrbilo. Esses ovos, contendo
a oncosfera, so ingeridos pelo hospedeiro intermedirio (bovinos, ovinos,
sunos, equinos...) no solo contaminado. Quando a oncosfera liberada
no intestino delgado desses hospedeiros, atravessa as paredes do intestino
e penetra nos vasos sanguneos e linfticos, atravs dos quais levada aos
tecidos do organismo. Nos hospedeiros intermedirios, a larva do helminto
(metacestoide) se desenvolve mais frequentemente no fgado (75%) e no
pulmo (10%).
O E. vogeli realiza seu ciclo biolgico em hospedeiros definitivos, como
o co selvagem (Speothos venaticus) e o co domstico (Canis familiaris),
nos quais se desenvolve o verme adulto, e em hospedeiros intermedirios,
tais como pacas (Cuniculus paca) e cutias (Dasyprocta aguti), nos quais se
desenvolve a forma larvar (cisto hidtico). Por ser um hospedeiro acidental no
ciclo de ambas as espcies, o homem ingere ovos presentes no ambiente ou
se contamina no contato ntimo com ces infectados. O ciclo no interior do
homem semelhante ao que ocorre nos hospedeiros intermedirios naturais: a
forma larvar de E. granulosus (fig. 26) se desenvolve no fgado e no pulmo
e, no caso de E. vogeli (fig. 27), desenvolve-se quase que exclusivamente
no fgado.

Introduo helmintologia | 235

Figura 26. Ciclo biolgico de Echinococcus granulosus.

Figura 27. Ciclo biolgico de Echinococcus vogeli.

236 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

c) Relao parasitohospedeiro
Os indivduos infectados permanecem assintomticos at que os cistos
comecem a produzir uma compresso nas estruturas dos rgos afetados ou
circunvizinhos, ou se tornem palpveis. Os sinais e sintomas apresentados
dependem da localizao anatmica da larva. O fgado e o pulmo constituem
os rgos fortemente envolvidos na infeco em humanos e em animais. As
hidtides encontradas no fgado tm estrutura similar s encontradas em outros
rgos, porm a reao do hospedeiro (pericisto) particularmente intensa
nesse rgo. Na forma larvar, a estrutura cstica, na superfcie e no interior
do fgado, apresenta proliferao endgena e exgena de vesculas que,
sucessivamente, terminam por envolver outros rgos abdominais.
d) Diagnstico laboratorial
A hidatidose humana uma das poucas infeces parasitrias para as quais
o diagnstico laboratorial bsico principalmente imunolgico. O imunodiagnstico, baseado na deteco de anticorpos circulantes contra os antgenos do
cisto hidtico, de grande importncia no diagnstico da hidatidose, complementando o diagnstico clnico em pacientes que apresentam manifestaes ou
imagens de cistos hidticos. Quando, clinicamente, o paciente encaminhado
para cirurgia de coleta do lquido hidtico, o diagnstico morfolgico realizado pelas medidas dos ganchos rostelares.
Existem mtodos sorolgicos para o diagnstico complementar da
hidatidose: ensaio imunoenzimtico (ELISA), Immunoblotting e reao em
cadeia de polimerase (PCR). Recentemente, est sendo utilizado o mtodo
de Immunoblotting, que permite observar a reao dos anticorpos presentes
no soro de um paciente diante de protenas antignicas do lquido hidtico.
e) Epidemiologia
A prevalncia do E. granulosus maior em regies com criao de ovinos e
bovinos. A hidatidose cstica considerada altamente endmica. Atualmente
encontrada em regies do hemisfrio norte (Alasca e Canad), em quase

Introduo helmintologia | 237

todos os pases da Europa, no continente africano (Marrocos, Arglia, Tunsia, Lbia, Sudo, Etipia, Somlia, Qunia, Uganda e Tanznia), na Oceania
(Austrlia e Nova Zelndia) e na Amrica Latina (reas rurais do Chile,
Argentina, Uruguai e extremo sul do Brasil). Os casos de hidatidose humana
quase sempre ocorrem em locais de alta taxa de infeco de carneiros ou bovinos. O hbito de alimentar ces de pastoreio com vsceras de carneiros em
abatedouros e tambm o fato de ces errantes se alimentarem de tais vsceras
facilitam a transmisso da parasitose.
A hidatidose policstica provocada por E. vogeli, tambm denominada
hidatidose neotropical, ocorre quase que exclusivamente em regies tropicais.
J foram relatados casos no Panam, Colmbia, Equador e Venezuela. No
Brasil, houve relato de casos nas regies vizinhas ao estado do Amazonas, no
Centro-Oeste e na regio Sudeste. Os casos de hidatidose policstica humana
esto relacionados com o hbito de caar pacas. O hbito de alimentar os
ces com as vsceras das pacas facilita a transmisso da parasitose.
f) Profilaxia e controle
O elo mais frgil na cadeia epidemiolgica constitudo pela infeco dos
ces com vsceras contaminadas. Bastaria, portanto, impedir que os ces se
alimentassem de vsceras cruas para que rapidamente se esgotassem as fontes de
ovos de Echinococcus, visto que os helmintos no duram mais do que alguns
meses na fase estrobilar. As medidas profilticas so: programa adequado
de esclarecimento e educao sanitria, interdio de abates clandestinos,
controle sanitrio do gado abatido, diagnstico e tratamento anti-helmntico
de ces parasitados e aperfeioamento de tcnicas agropecurias. Medida
importante na hidatidose humana evitar o contato ntimo com ces que
tenham se alimentado de vsceras cruas de bovinos ou ovinos.

238 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

F) Cysticercus cellulosae (cisticercose)


a) Morfologia
uma vescula translcida que contm um lquido claro como gua e pode
atingir 15 mm de comprimento por 7 a 8 mm de largura. Em seu interior, a
estrutura que mais se destaca o esclex da futura tnia, com quatro ventosas
e uma dupla coroa de ganchos.
b) Ciclo biolgico
O homem, acidentalmente, pode contaminar-se com alimentos ou gua
contendo ovos de T. solium. Nesse caso, os embries (oncosferas) saem
do ovo no intestino delgado, fixam-se em determinados rgos tais como
olhos, crebro, corao e no tecido subcutneo e transformam-se em larvas
denominadas cisticercos, ocasionando a cisticercose.

Figura 28. Ciclo biolgico do Cysticercus cellulosae.

Introduo helmintologia | 239

c) Relao parasito-hospedeiro
A presena de larvas causa a cisticercose; dependendo da localizao
das mesmas, a sintomatologia ser diferenciada. O processo patognico
atribuvel a dois fatores principais: o primeiro a compresso mecnica e
o deslocamento de tecidos, ou estruturas, decorrentes da localizao e do
crescimento do cisticerco, podendo obstruir, por exemplo, o fluxo normal de
lquidos orgnicos, como o lquido cefalorraquidiano; o segundo o processo
inflamatrio que geralmente envolve o parasito e que pode, eventualmente,
estender-se a estruturas vizinhas.
Os sintomas e as eventuais sequelas surgem meses ou at anos aps o incio
da infeco. As manifestaes clnicas causadas pelo cisticerco dependem no
somente da localizao, bem como do nmero de cisticercos, de seu estgio
de desenvolvimento e das respostas orgnicas do hospedeiro humano.
O cisticerco mais frequentemente encontrado no sistema nervoso central.
As leses presentes nos hemisfrios, ventrculos e base do crebro podem
causar principalmente cefaleia, vmitos, convulses, desordem mental com
formas de delrio, prostrao, alucinaes, hipertenso intracraniana e demncia. A neurocisticercose tem longa evoluo que afeta a qualidade de vida do
paciente, com importantes consequncias socioeconmicas. Na cisticercose
ocular, podem surgir reaes inflamatrias exsudativas que promovero diversos graus de agresso, podendo levar cegueira. As cisticercoses muscular e
subcutnea provocam poucas alteraes clnicas.
d) Diagnstico laboratorial
Para saber a localizao do cisticerco ou conhecer o seu estgio evolutivo,
podemos utilizar os seguintes exames diagnsticos: imagens raios X,
ressonncia magntica, tomografia computadorizada etc. (nas imagens
radiolgicas so encontrados os cisticercos calcificados); bipsias; exames
de fundo de olho; mtodos de imunodiagnstico ELISA, Western-blot,
imunofluorescncia indireta etc. para a deteco de anticorpos no lquido
cefalorraquidiano e no soro; e pesquisa de DNA.

240 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

e) Epidemiologia
A cisticercose humana um importante problema de sade pblica em
reas carentes de condies sanitrias. Curiosamente, a infeco tambm preocupa pases desenvolvidos que recebem migrantes de reas endmicas. A
cisticercose frequente na sia, frica e Amrica do Sul em reas onde as
condies de saneamento bsico sejam deficientes. O destino inadequado
de fezes humanas tambm pode contaminar hortalias, posteriormente consumidas pelos indivduos.
f) Profilaxia e controle
Os indivduos com sintomatologia ou suspeita de tenase devem realizar
o procedimento para diagnstico laboratorial e ser tratados. Medidas de
higiene pessoal, como banhos e lavagem frequente das mos, principalmente
depois das evacuaes, antes de manipular alimentos e antes das refeies,
so prticas fundamentais para o controle da doena. Lavar bem os alimentos
tambm contribui para a profilaxia e o controle da cisticercose.

4. Zoonoses provocadas por helmintos

So parasitoses ou doenas provocadas por cestoides e nematoides que


normalmente infectam animais e que, eventualmente, so transmitidas para o
homem. Sua ocorrncia se deve ao contato com animais domsticos infectados, aos mtodos de produo de alimentos e a hbitos culturais e higinicos.
Devido sua localizao tecidual, o diagnstico laboratorial feito por mtodos imunolgicos, moleculares ou por imagens.
A) Toxocara canis (toxocarase, larva migrans visceral humana)
a) Morfologia
T. canis pertence mesma famlia do A. lumbricoides. O verme adulto
macho mede de 4 a 10 cm de comprimento e a fmea, de 6 a 18 cm de

Introduo helmintologia | 241

comprimento. Alm dos trs lbios que precedem a boca, possuem duas
expanses cervicais, em forma de aleta. Os ovos so esfricos e medem de
75 a 90 m.
b) Ciclo biolgico
Os vermes adultos so encontrados no intestino delgado de ces. As
fmeas produzem grande quantidade de ovos, que so expelidos nas fezes
dos ces. Assim como A. lumbricoides, os ovos eliminados so imaturos e
dependem de condies favorveis de umidade, temperatura e oxigenao
para embrionamento dentro do ovo e formao da larva L3 infectante. O embrionamento no solo dura em torno de 28 dias. Os animais jovens se infectam com os ovos embrionados que eclodem no intestino. As larvas realizam
o ciclo de Loss, atravessam a parede intestinal e alcanam a circulao, passando pelo fgado, corao e pulmo. Ao chegarem ao intestino, crescem e
se desenvolvem em vermes adultos, o que dura em torno de quatro semanas.
Se uma cadela infectada engravida, as larvas que esto realizando o ciclo de
Loss so ativadas e invadem a placenta, infectando o feto e transformando-se
em vermes adultos. Depois do nascimento, o ciclo recomea, e cezinhos com
trs semanas de idade j eliminam ovos nas fezes.
O homem se infecta ingerindo ovos embrionados presentes no solo ou em
alimentos e gua contaminada. A ecloso e a liberao das larvas ocorrem
no intestino delgado. Essas invadem a mucosa e atingem a circulao, sendo
levadas para diversos rgos e tecidos (fgado, pulmo, msculos, olhos, rins
e corao).

242 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 29. Ciclo biolgico do Toxocara canis.

c) Relao parasitohospedeiro
A migrao das larvas acompanhada por hemorragia e inflamao. Ao
redor das larvas que ficam retidas nos rgos h formao de granulomas. O
perodo de sobrevida das larvas pode variar de alguns dias a vrios meses,
na dependncia de resposta tecidual eficiente. Aps alguns dias, ocorre
significativa reduo do substrato inflamatrio, com reparo local normalmente
regenerativo. Qualquer tecido pode ser sede de leses, porm fgado, pulmes, encfalo, globo ocular e gnglios linfticos so os locais mais afetados.
Tais agresses frequentemente determinam inflamao e necrose de capilares e
tecidos locais circunjacentes. As principais alteraes sintomticas so febre,
palidez, hepatite, hepatomegalia (aumento do fgado), esplenomegalia (aumento do bao), pneumonia parasitria com tosse, dificuldade respiratria,
miocardite, nefrose e leses cerebrais, do globo ocular e ganglionares. As

Introduo helmintologia | 243

queixas mais comuns no acometimento ocular so dor e diminuio da acuidade visual. Na maioria dos casos, os indivduos no apresentam sintomas.
d) Diagnstico laboratorial
H leucocitose e eosinofilia. A pesquisa de anticorpos anti-Toxocara em
soro e lquor feita pela tcnica de ELISA. Mais recentemente, foi desenvolvida a tcnica de Immunoblotting, que permite o diagnstico e o controle
de cura da infeco.
e) Epidemiologia
A sndrome da larva migrans visceral geralmente est associada contaminao de praas pblicas, parques e praias com ovos de T. canis. Caixas de
areia em parques e creches tambm podem funcionar como fontes de infeco.
Por causa do intenso contato com essas fontes de infeco, frequentemente
so as crianas as mais acometidas pela sndrome. Ter ces adultos em casa
no parece ser fator importante; entretanto, a presena de filhotes aumenta
a probabilidade de ocorrer infeco humana. No h certeza se a atividade
profissional de veterinrios, tratadores e capturadores de ces aumenta o risco
de infeco por T. canis.
f) Profilaxia e controle
Medidas de controle sanitrio que diminuam a contaminao ambiental
pelos ovos do helminto devem ser estimuladas. Proprietrios de cachorros
devem recolher as fezes dos animais, evitando que fiquem abandonadas em
locais pblicos. Evitar que os animais defequem em praas pblicas, parques,
praias e caixas de areia. Para a reduo da contaminao ambiental, recomenda-se o tratamento dos ces com anti-helmnticos.
B) Larva migrans cutnea (dermatite serpiginosa)
Essa denominao se refere exclusivamente migrao de larvas, em terceiro
estgio, de Ancylostoma braziliense, A. caninum, A. tubaeforme e Uncinaria

244 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

stenocephala no extrato epitelial da pele humana. A larva migrans cutnea


conhecida tambm como bicho geogrfico ou bicho das praias.
a) Morfologia
O verme adulto de Ancylostoma braziliense caracteriza-se por apresentar
uma cpsula bucal com apenas um par de grandes dentes ventrais, alm de
outro par bem rudimentar. Os machos medem de 5 a 7,5 mm de comprimento
e as fmeas, de 6,5 a 9 mm.
b) Ciclo biolgico
Os vermes adultos habitam o intestino delgado dos ces parasitados.
Os ovos so eliminados nas fezes. No solo, as larvas rabditoides eclodem e
contaminam o ambiente. Aps duas mudas, as larvas rabditoides transformamse em filarioides infectantes. Essas penetram na pele humana, mas no alcanam
a circulao. As larvas vivem por longo perodo na camada epitelial, e sua
atividade fica reduzida a caminhar ao acaso, abrindo um tnel.

Figura 30. Ciclo biolgico da Larva migrans cutnea.

Introduo helmintologia | 245

c) Relao parasitohospedeiro
O mecanismo de transmisso exclusivamente ativo cutneo, por larvas
dos agentes acima mencionados. A movimentao das larvas possibilitada
pela liberao de enzimas e pela destruio mecnica da camada de Malpighi,
determinada pelo movimento em direo ao estrato epitelial, normalmente
no perfurando o tecido subcutneo, determinando trajeto superficial que,
em um dia, pode chegar a 15 cm, acarretando inicialmente aparecimento
de ppulas e pequenos ndulos, que progridem para leses serpentiformes.
Como reao a essas leses, ocorre processo inflamatrio, que, na fase inicial
da primoinfeco, tem predominncia de eosinfilos e macrfagos, porm
em pequeno nmero, o que determina macroscopicamente pequenos pontos
eritematosos. Na continuao do processo ou nas reinfeces, a resposta
imunolgica migrao larvar determina aumento significativo no nmero
de eosinfilos, macrfagos e linfcitos e na intensidade de sua resposta,
aumentando a necrose local, o que permite que o processo, sinuoso e irregular,
com frequente presena de vesculas e queixa de prurido de intensidade
varivel, seja facilmente notado na ectoscopia. As leses escoriativas so
porta de entrada para agentes de infeces bacterianas secundrias. Caso essas
ltimas no ocorram, aps alguns dias as leses tendem a significativa reduo
de substrato inflamatrio, com reparo local normalmente regenerativo.
d) Diagnstico laboratorial
A bipsia de tegumento no ponto mais distal da leso a opo diagnstica mais sensvel para a deteco das larvas, porm, pela caracterstica
invasiva da tcnica, utiliza-se a ectoscopia das leses, baseada no aspecto
macroscpico das mesmas, para a confirmao etiolgica da sndrome.
e) Epidemiologia
Apesar de ser uma sndrome cosmopolita, o nmero de casos relatados
muito pequeno quando comparado com a prevalncia esperada. Possivelmente isso se deve subnotificao dos casos diagnosticados e s dificuldades

246 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

de confirmao diagnstica, principalmente em casos de infeco bacteriana


secundria ou por mltiplas larvas. As principais fontes de infeco so o parasitismo de ces e gatos em nosso pas, principalmente por A. braziliense.
Os locais onde existe maior contaminao por larvas potencialmente determinantes de larva migrans cutnea so o solo arenoso, principalmente na orla das
praias, jardins e caixas de areia. O local das praias atingido pela gua do mar
inadequado para a sobrevida larvar; alm disso, pelas condies climticas
do nosso pas, mesmo em locais livres da gua marinha as larvas principalmente
no vero so destrudas pela desidratao, ao contrrio do que ocorre nos
pases de clima temperado ou frio da Europa e Amrica do Norte, onde as
praias so a principal fonte (reservatrio ambiental) de infeco. No Brasil,
os parques pblicos e outros locais com solo arenoso constituem a principal
fonte de contato com tais larvas. Em alguns locais onde a populao de ces
satisfatoriamente controlada do ponto de vista sanitrio, os gatos, por seus
hbitos de enterrarem suas excretas, constituem os mais importantes elos da
cadeia infectiva. As faixas etrias de pr-escolares e escolares, por terem
maior contato com os locais mencionados, so as mais atingidas. No entanto,
por no existir proteo nas reinfeces, todos podem ter tal sndrome.
f) Profilaxia e controle
Em virtude das caractersticas epidemiolgicas acima expostas, a profilaxia
da larva migrans cutnea de difcil execuo, baseando-se somente em medidas gerais de controle: tratar sistematicamente as infeces de ancilostomdeos parasitos de ces e gatos, capturar e eliminar animais sem proprietrios,
impedir o contato de crianas com locais arenosos que possam sofrer contaminao de ces e gatos e cobrir caixas recreativas de areia aps os horrios
de recreao.

Introduo helmintologia | 247

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Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 251

Captulo 3

Metodologia bsica para coleta


e processamento de helmintos parasitos
Marcelo Knoff
Delir Corra Gomes

O objetivo deste captulo oferecer aos alunos dos cursos tcnicos da


rea de sade uma ferramenta sinttica das tcnicas mais usuais para os procedimentos de coleta, fixao, colorao e preservao em meio lquido ou
em montagem definitiva de helmintos coletados dos mais variados grupos
de vertebrados. Com o estudo dos helmintos parasitos, esperam-se alcanar
diversos objetivos, como os estudos sistemticos, ecolgicos, profilticos,
histopatolgicos, dos ciclos de vida e, ainda, a anlise das relaes parasitohospedeiro. No decorrer desse estudo, so utilizadas tcnicas nas quais
o conhecimento e a aplicao correta so fundamentais para atingir os objetivos. Essas tcnicas envolvem desde mtodos para a coleta do hospedeiro
e dos parasitos, em infeces naturais e experimentais, at procedimentos de
fixao, colorao e diferentes meios de preservao e de apropriados aos
distintos grupos de helmintos. Muitas so as publicaes que discorrem sobre
os diferentes mtodos utilizados para tais objetivos.

252 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

1. Amostragem e necropsia dos hospedeiros

Ao se efetuar uma amostragem de um hospedeiro com o objetivo de


proceder anlise helmintolgica, adota-se algumas vezes a realizao de
uma anlise pela coleta de suas fezes ou do muco presente em membranas
de partes do corpo, quando do animal vivo, ou pela necropsia. Para isso,
imprescindvel que a amostra seja a mais representativa possvel.

1.1 Coleta e exame de fezes

Tcnicas qualitativas tm sido utilizadas para detectar a presena de ovos


ou larvas de helmintos nas fezes, independentemente da avaliao dos nveis
de infeco, sendo um importante processo diagnstico. Para a pesquisa
de ovos de nematoides, utilizam-se os mtodos de Willis (1921), Hoffman, Pons e Janer (1934) e direto. Na pesquisa de larvas de nematoides,
utilizam-se, para Strongyloides, o mtodo de Baermann (1917) e, para
microfilrias sanguneas, o de Ohishi (Ohishi, Kobayashi e Kume, 1959).
Tcnicas quantitativas tm sido utilizadas no s para detectar a presena
de helmintos parasitos de animais, por meio da pesquisa de ovos ou larvas,
como tambm para avaliar o seu nmero e o grau de infeco, permitindo,
mas, estabelecer os casos em que recomendvel o tratamento das helmintoses. Para a contagem de ovos de nematoides, utiliza-se a tcnica de McMaster (Gordon e Whitlock, 1939); para a contagem de ovos de trematdeos,
o mtodo Watanabe (Watanabe, Nagayama e Iwata, 1953). H outras
tcnicas que so, ao mesmo tempo, qualitativas e quantitativas, como a tcnica de Verster de contagem de ovos por grama (opg) para Fasciola hepatica
(Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, s.d.), e a tcnica de Ueno
(Ueno e Gonalves, 1998), para larvas de Dictyocaulus.
Mtodo de Willis (enriquecimento): coloca-se em um pequeno tubo
de ensaio 1g de fezes diludas em soluo saturada de NaCl. O lquido

Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 253

deve atingir o bordo do tubo. Colocar sobre o tubo uma lamnula, de


modo que toque toda a superfcie do lquido, e deixar repousar durante
1 minuto. Retirar rapidamente a lamnula, colocando-a sobre uma lmina.
Examinar com pequeno aumento. Os ovos dos helmintos, por sua menor
densidade, tendem a subir, aderindo-se parte inferior da lamnula colocada na superfcie do lquido. Essa tcnica indicada para pesquisa de ovos
dos nematoides: Ancylostoma spp., Necator sp. etc.
Tcnica de Hoffman: preparar uma suspenso fecal com gua de torneira ( 2 g para 10 ml) em um clice, misturar bem e, se necessrio,
esperar algum tempo para amolecer as fezes. Acrescentar 200 a 300 ml
de gua de torneira. Filtrar atravs de gaze dobrada, com auxlio de um
funil, para o clice de Hoffman. Completar o volume do clice com gua e
aguardar de 1 a 2 horas. Com pipeta, coletar, do fundo, uma amostra do
sedimento, colocando-a entre a lmina e a lamnula. Examinar ao microscpio. Essa tcnica indicada para ovos provenientes de humanos, como
Schistosoma mansoni, cestoides e Ascaridoidea.
Tcnica de Ueno: pesar 3 g de fezes frescas; colocar as fezes em uma
gaze com 10 a 12 cm de lado dobrada, depois, colocando-a dentro
de um tubo de centrfuga de 10 cm de altura por 3,5 cm de dimetro.
Suspender a preparao por um grampo. Encher o tubo at cobrir as fezes, para que a gua escorra pelas paredes do tubo. Deixar em repouso
absoluto por 24 horas. Pipetar 0,5 ml do depsito acumulado no fundo
do tubo, sem agit-lo. Levar ao microscpio em lmina (sem lamnula).
Contar as larvas existentes no lquido e dividir por 3 o total de larvas
contadas. Essa tcnica utilizada para herbvoros.
Cultura de larvas de estrongildeos (tcnica utilizada para a obteno de larvas infectantes em grande nmero): das fezes utilizadas para
ovoscopia, depois de misturadas e tornadas bem soltas, so colocadas 40
gramas em bquer de 250 ml. Quando as fezes so pastosas, torna-se
necessrio adicionar serragem ou fezes esterilizadas at que a mistura fique

254 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

mais densa. As fezes assim acondicionadas nos frascos so cobertas por


uma placa de Petri emborcada. Diariamente, faz-se a aerao das culturas
por alguns minutos, umedecendo-se as que estiverem muito secas. O
crescimento de fungos no prejudica o desenvolvimento das larvas. As
culturas so assim mantidas durante oito dias em meio ambiente, com
temperatura entre 22C e 33C. Para a coleta de larvas, enche-se o
frasco com gua de bica at a borda, coloca-se a placa de Petri sobre o
frasco e, em seguida, emborca-se o conjunto. O lquido permanece no
frasco e, pouco a pouco, torna-se turvo. Ao redor do frasco, coloca-se
gua de torneira que em geral se mantm limpa , at a altura de 0,5
cm. As larvas passam para o lado de fora. Depois de 8 horas, as larvas
so retiradas com uma pipeta, e a suspenso colocada em um tubo de
ensaio, onde as larvas se concentram.
Tcnica de opg para Fasciola hepatica de Verster: emulsificar 10 g de
fezes em 100 ml de gua em um liquidificador. Passar atravs de peneira
com malha de 250 m para um bquer. Desprezar o sedimento que fique
na peneira. Passar o contedo do bquer em uma peneira de 37 m. Os
ovos dos trematdeos Fasciola, Paramphistomum etc. ficaro retidos na
peneira. Lavar a peneira, passando o material para um bquer. Decantar
por 10 minutos. Adicionar gua no resduo. Decantar a cada 2 minutos,
repetidamente, at o sobrenadante ficar claro. Analisar o sedimento ao
microscpio. Contar o nmero de ovos e dividir por 10. Usar soluo de
verde de metila a 3% para evidenciao.
Tcnica de centrifugao e concentrao de ovos de helmintos:
colocar 1g de fezes frescas em 100 ml de gua no frasco Erlenmayer de
125 ml. Misturar bem para obteno de uma suspenso. Colocar num
tubo de centrfuga de 10 ml e centrifugar por 3 minutos, a 1.500 rpm. Decantar o sobrenadante e juntar a soluo saturada de NaCl (ou ZnSO4,
ou acar). O sedimento deve entrar em suspenso. Centrifugar novamente durante 3 minutos, a 1.500 rpm. Colocar uma lamnula em cima do

Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 255

tubo (o lquido deve atingir a borda do tubo) e esperar por 2 minutos.


Retirar a lamnula, colocando-se sobre uma lmina. Contar os ovos (de
nematoides e trematdeos) e dividir por 10 para obteno de opg.
Tcnica de Baermann: coletar 10 g de fezes e colocar sobre uma tela
de malha de 250 m, apoiada nos bordos de um funil. Fechar o funil
com um tubo de borracha e um grampo, na sua parte inferior. Colocar
gua levemente aquecida no funil, at cobrir parcialmente as fezes. Aps
12 horas, escoar 5 ml em uma placa de Petri. Examinar o sedimento ao
microscpio, entre lmina e lamnula. As larvas presentes nas fezes, em
contato com a gua levemente aquecida, migraro para o fundo.

1.2 Necropsia

Para a coleta de helmintos, extremamente importante fazer corretamente


a necropsia dos hospedeiros, que dever considerar os resultados a serem
almejados, ou seja, coleta de ecto-helmintos ou de endo-helmintos, ou de
ambos, ou, ainda, de determinados grupos ou stios de infeco. As caractersticas de cada micro-habitat tambm devem ser consideradas, sendo
necessrio estabelecer um procedimento sequencial para otimizar a coleta
e preservar os espcimes. Sempre que possvel, os hospedeiros devem ser
examinados logo aps sua coleta e morte.
Com as dificuldades geralmente encontradas quando estamos em trabalho
de campo para realizar adequadamente a necropsia logo aps a captura,
preciso transportar os hospedeiros para o laboratrio, em baixa temperatura,
etiquetados e individualizados em sacos plsticos, o mais rpido possvel.
Muitas vezes o uso de anestsicos aconselhvel, mas em outras pode ser
prejudicial, como o caso de certos ectoparasitas que podem deixar de ter
movimentos ativos e prejudicar a sua visualizao e coleta. O procedimento de
morte do hospedeiro deve ser simples e eficaz, a fim de minimizar o sofrimento.

256 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Antes da necropsia, os hospedeiros devem ser medidos e pesados, e sua


espcie determinada corretamente. Na impossibilidade, deve-se fixar em formalina 10% ou etanol 70GL ou congelar os hospedeiros no momento da
necropsia para que sejam determinados posteriormente por um especialista.
Deve-se registrar o sexo e o estgio de maturao, a data e o local da coleta e
outras informaes que se julguem necessrias. Recomenda-se o preenchimento de um formulrio de necropsia, devidamente numerado, no qual constem o
os dados dos helmintos; tambm preciso anotar os helmintos identificados
e coletados em cada stio de infeco/infestao.
A necropsia deve ser iniciada pelo tegumento, fazendo-se uma inspeo
macroscpica, se possvel com o auxlio de uma lente de aumento, uma vez
que muitos parasitos que a se localizam so visveis a olho nu. No caso de
estarem aderidos, ser necessrio realizar uma inciso prxima ao local da
adeso para remov-los. Pequenos pontos de colorao diferente daquela
do tegumento e formaes nodulares mais ou menos volumosas podem ser
causados por algum tipo de parasito, localizado no seu interior, e devem ser
retirados e seu contedo examinado. Alguns vertebrados peixes e rpteis,
por exemplo devem ter suas escamas examinadas. Olhos e superfcies de
mucosas devem ser analisados. Retira-se o muco para uma placa de Petri com
o auxlio de um pincel fino ou com uma pisseta, aplicando-se jatos de soluo
NaCl na concentrao correta (0,65%-0,85%).
As narinas devem ser abertas com o auxlio de uma tesoura. Em seguida,
os parasitos devem ser lavados com soluo de NaCl a 0,65%, para animais
de sangue frio (pecilotrmicos), ou a 0,85%, para animais de sangue
quente (homeotrmicos), ou, ainda, com formalina 1:4.000. O contedo
dessa lavagem deve ser recolhido em placas de Petri para anlise ao estereomicroscpio.
No caso de peixes, devem ser examinadas as suas brnquias. Para a
retirada delas, necessrio primeiro levantar e remover os oprculos. Aps
uma anlise macroscpica, removem-se os arcos branquiais individualmente,
que devem ser retirados fazendo-se uma inciso junto de suas bordas com

Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 257

o auxlio de uma tesoura e uma pina, removendo-os para uma placa de


Petri com gua. Isso permitir visualizar parasitos visveis apenas microscopicamente e observar a sua distribuio pela superfcie branquial. As artrias
branquiais devem ser expostas e examinadas para se observar a presena
de trematdeos digenticos no aparelho circulatrio. Para isso, a membrana
que as recobre deve ser retirada com o auxlio de uma tesoura pequena e
uma pina de ponta fina.
Prosseguindo-se, faz-se a abertura da cavidade visceral e a exposio dos
rgos. Devido s particularidades dos diversos grupos de vertebrados, h
procedimentos diferentes para cada um deles. Pequenos rpteis, anfbios e
mamferos so fixados em uma bandeja, em decbito dorsal, fazendo-se uma
inciso na pele do mento ao pbis. A pele deve ser retirada cuidadosamente,
pois pode conter filardeos (nematoides), geralmente presentes nas regies
abdominal, axilar e inguinal no tecido subcutneo.
Nos peixes, deve-se fazer uma inciso ao longo da linha mdia ventral, comeando logo acima do nus e se estendendo at a regio anterior, evitandose com isso que se corte o intestino, o que permitiria a sada de contedo
intestinal para a cavidade visceral e, at mesmo, a destruio de alguns helmintos a presentes. Nos mamferos, necessrio que a cavidade torcica seja
aberta; para isso, secionam-se as costelas. Em seguida, abrem-se as paredes
laterais da cavidade visceral a fim de expor os rgos internos para o exame.
Esse exame preliminar permite detectar helmintos localizados ou aderidos
superfcie dos rgos ou na prpria cavidade visceral (estgios larvais de
cestoides, trematdeos digenticos, nematoides e acantocfalos). Logo aps,
todos os rgos devem ser retirados individualmente e colocados em placas
de Petri, com soluo de NaCl (0,65%-0,85%).
Cada rgo deve passar por um exame macroscpico preliminar, atentando-se para diferenas de colorao e textura e para a existncia de ndulos.
Nesse caso, as reas afetadas devem ser isoladas e observadas em separado,
com o auxlio de estereomicroscpio e/ou microscpio. Em seguida, a superfcie dos rgos deve ser examinada ao estereomicroscpio. Aqueles que no

258 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

forem ocos devem ser dissecados para a anlise dos tecidos recomenda-se
a anlise de pequenos pedaos de tecido, esmagando-os entre lmina e lamnula, ou entre duas lminas.
Quanto ao sistema digestrio, fundamental a realizao do exame do
seu contedo. O rgo deve ser aberto com cuidado, por meio de um corte
longitudinal, com o auxlio de uma tesoura de ponta fina e uma pina. O
contedo intestinal deve ser retirado com o auxlio de um pincel, e no raro
com jatos dgua, para a remoo do excesso de muco, e analisado ao estereomicroscpio e ao microscpio ptico. Frequentemente encontramos aderidos, luz intestinal, cestoides e acantocfalos e preciso remov-los com
cuidado, a fim de manter a sua integridade. O exame da parede do intestino
requer que essa seja cortada em pores pequenas para facilitar a observao
ao estereomicroscpio e ao microscpio ptico.
As vsceras devem ser analisadas meticulosamente pulmes, rins, vescula
biliar, vescula gasosa (em peixes), bexiga urinria e corao devem ser abertos
e seu contedo analisado separadamente , pois talvez se encontrem formas
adultas e larvas de trematdeos digenticos, de cestoides e de nematoides.
O crebro e os olhos devem ser expostos e analisados macro e microscopicamente. Nessa regio, frequentemente so encontradas larvas de trematdeos digenticos, de cestoides e de nematoides. No raro devemos proceder
dissecao dos olhos, onde podem ser encontradas no humor vtreo, ou
mesmo ao esmagamento do cristalino, para facilitar a retirada de diferentes
estgios ontogenticos, dependendo do grupo do helminto.
O msculo deve ser analisado de forma macro e microscpica; nesse ltimo caso, a anlise deve ser feita mediante cortes de amostras pequenas e
pouco espessas. No caso do msculo de peixes especificamente, que em geral claro e hialino, a amostra pode ser colocada contra um fundo iluminado
(negatoscpio) a fim de facilitar o encontro de helmintos macroscpicos.
necessria, s vezes, a utilizao da digesto do tecido por pepsina e tripsina,
de modo a permitir o isolamento de helmintos que se alojam no msculo.

Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 259

2. Monogenoides

A maioria dos monogenoides so ectoparasitas na superfcie do corpo, narinas, brnquias e cavidade opercular de peixes. Poucas espcies localizam-se
no estmago, cavidade visceral, ovidutos ou canais urinrios de vertebrados.
Tambm so encontrados sobre o corpo de anfbios, ou como hiperparasitas
sobre o exoesqueleto de crustceos parasitos de peixes. Suas dimenses variam de menos de 1 mm a cerca de 3 cm de comprimento, so hermafroditas
e de ciclo direto. A caracterstica morfolgica predominante desses helmintos
conter um aparelho de fixao ao hospedeiro o haptor , localizado na
parte posterior do seu corpo. Na maioria das espcies, o haptor tem estruturas esclerotizadas, chamadas ganchos, barras ou ncoras; em outras, apresenta
ventosas, formas como pinas ou um conjunto de ganchos.
Para a coleta dos monogenoides, deve-se reduzir ao mximo a manipulao
do hospedeiro, visando-se evitar a perda desses helmintos. Hospedeiros de
porte pequeno devem ser colocados vivos, durante cerca de 2 horas, em
uma soluo de formalina a 1:4.000. Essa tcnica de coleta tem a vantagem
de manter vivos os peixes, que podem ser devolvidos posteriormente ao seu
ambiente natural. Em seguida, examina-se o lquido em placas de Petri ao
estereomicroscpio para observar os parasitos que se destacaram da superfcie pela ao do formol. Nos peixes de grande porte, faz-se a raspagem da
superfcie, removendo-se o muco com soluo de formalina na mesma concentrao dentro de um recipiente. Para a anlise das brnquias, retiram-se os
arcos branquiais, que so colocados em um recipiente com tampa de rosca,
contendo formalina a 1:4.000; em seguida, fecha-se a tampa e agita-se o
recipiente para que os parasitos se desprendam. Na coleta de espcimes das
narinas, elas devem ser abertas com tesouras e/ou pinas, ambas de ponta
fina, e lavadas cuidadosamente com jatos de formalina na mesma concentrao
referida, utilizando-se uma pisseta. Em trabalhos de campo, quando no h
tempo para procedimentos mais detalhados, os hospedeiros devem ser fixados
em formalina a 10% para depois serem analisados; nesse processo de fixao,
apenas um pequeno nmero de helmintos se destaca do hospedeiro.

260 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Alguns parasitos coletados, principalmente os maiores espcimes, podem


estar enrolados; quando isso ocorre, necessrio fazer a distenso de ambas
as extremidades dos parasitos com o auxlio de pincis de poucas cerdas,
pressionando-se, posteriormente, uma lamnula acima do espcime, para logo
aps colocar-se o fixador a frio.
A utilizao dessas tcnicas permite a coleta da maioria dos espcimes
nos hospedeiros. importante o exame ao estereomicroscpio da superfcie
do corpo e das brnquias, a fim de detectar o nmero de espcimes que no
tenham se desprendido.

3. Trematdeos digenticos

Os Digenea, ou trematdeos digenticos, so platelmintos com um ciclo


de vida complexo, que envolve, quase sempre, ao menos dois hospedeiros:
um intermedirio (que na maior parte dos casos um molusco) e um definitivo
(peixe, ave ou mamfero). Os vertebrados tambm podem servir como um
segundo hospedeiro intermedirio.
Os trematdeos digenticos so endoparasitas e, apesar de serem descritos como helmintos achatados por pertencerem ao filo Platyhelminthes, algumas espcies podem ter forma cilndrica, esfrica ou piriforme. Normalmente,
o corpo tem duas ventosas, uma oral e outra ventral, essa conhecida por acetbulo. O tamanho pode variar de menos de 1 mm a at alguns centmetros
de comprimento.
A maioria das espcies hermafrodita, com exceo dos esquistossomatdeos, que parasitam o sistema sanguneo, e dos didimozoideos, que parasitam
peixes marinhos. O sistema digestrio normalmente incompleto, pois quase
sempre os cecos terminam em fundo cego.
Vivem nos sistemas digestrio, respiratrio e circulatrio, no aparelho urinrio, nos ductos pancreticos, na vescula biliar e nos ductos biliares de
vertebrados. Algumas espcies so encontradas no sistema digestrio de hiru-

Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 261

dneos. Outros habitats incomuns incluem o ducto nasolacrimal, a membrana


nictitante, a bolsa de Fabricius e os oviductos das aves; podem tambm estar
encistados no duodeno de anfbios ou encistados aos pares nas nadadeiras na
face interna dos oprculos; em tecidos dos arcos; e nos filamentos branquiais
de peixes.
Para que os helmintos de um rgo no se misturem com os de outro, ou
mesmo com sesses diferentes de um mesmo rgo, deve-se analisar cada
rgo em placas de Petri diferentes, passando o contedo por uma peneira
de 100 a 150 m de malha e lavando-o na torneira sob jato dgua, ou
deixar decantar o sobrenadante. Aps essa lavagem, no s o contedo deve
ser transferido para placas de Petri, mas tambm o respectivo rgo, que
deve ser colocado em outra placa de Petri, contendo gua de torneira. Os
helmintos devem ser transferidos, por meio de pipeta ou pincel, para placas
de Petri contendo soluo de NaCl a 0,65%, para animais pecilotrmicos,
e a 0,85%, para animais homeotrmicos.
Aps a anlise de todos os rgos e a coleta de todos os helmintos,
passa-se etapa de compresso. Os helmintos grandes (de no mnimo
0,5 cm) devem ser comprimidos entre lminas; os pequenos, entre lmina
e lamnula; j aqueles extremamente pequenos (menores que 1 mm) no
devem ser comprimidos, uma vez que a compresso feita para diminuir a
altura do parnquima. Quando a compresso for feita com duas lminas,
elas devem ser amarradas com linha e deixadas de p, em recipiente com
fixador a frio.
O tempo de compresso para helmintos grandes de 24 horas para helmintos pequenos, por volta de 30 minutos. Antes de comprimir os helmintos
pequenos entre lmina e lamnula, eles devem ser colocados sobre uma gota
espessa de soluo de NaCl; aps isso, coloca-se sobre eles a lamnula com
pequenos pesos em cima os quais podem ser pequenos frascos de vidro preenchidos com gua ou esferas de chumbo , a fim de se regular o peso. Essa
ao deve ser realizada dentro de uma placa de Petri, aplicando-se depois,
cuidadosamente, o fixador frio, de maneira que o conjunto fique submerso.

262 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Caso os helmintos fiquem aderidos ao vidro por causa da compresso por


tempo excessivo, um pincel de ponta fina ajudar na sua remoo, que deve
ser realizada ao estereomicroscpio. Helmintos muito pequenos devem ser
mortos com o fixador a frio, sem compresso.
3.1 Formas larvais de trematdeos digenticos

Os estgios larvais dos trematdeos digenticos nem sempre habitam o


mesmo hospedeiro, podendo ser de vida livre. Normalmente, os ovos passam
ao ambiente e, em condies ideais, do origem a miracdios. Esporocistos,
rdias, rdias-filhas (quando h) e cercrias podem ser obtidos, em geral,
diretamente dos moluscos hospedeiros intermedirios, por simples dissecao
em soluo salina fisiolgica a 0,65%. Muitas vezes, as cercrias so obtidas
sem a necessidade do sacrifcio dos moluscos, pelo isolamento dos mesmos
em recipientes pequenos e sua estimulao mediante uma fonte luminosa e
trmica. As metacercrias, fase encontrada em algumas espcies, podem estar
encistadas e aderidas a substratos vegetais caso, por exemplo, da Fasciola
hepatica. Ou podem estar encistadas em outros moluscos ou invertebrados
ou mesmo em vertebrados, como Ascocotyle (Phagicola) longa, em peixes.
A dissecao de artrpodes resulta no excistamento mecnico e qumico das
metacercrias. Em outros gneros, as metacercrias so coletadas na cavidade
pericrdica dos moluscos.
Esporocistos, rdias, rdias-filhas no devem ser comprimidos quando da
fixao, exceto as metacercrias, que, aps o excistamento, podem ser comprimidas com as mesmas tcnicas utilizadas para os trematdeos pequenos.

4. Temnocefaldeos

Conhecidos tambm como turbelrios, os temnocefaldeos so platelmintos que se caracterizam por apresentar tentculos ceflicos. So ectocomensais

Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 263

que vivem na cavidade paleal de moluscos aquticos, sobre o exoesqueleto


de crustceos dulceaqucolas e nas axilas de quelnios de gua doce.
Sua coleta deve ser realizada com pincel e devem ser removidos depois
para uma placa de Petri contendo gua destilada. Devem ser comprimidos e
fixados como os trematdeos digenticos pequenos.

5. Aspidobtreos

Pertencem a outra subclasse de trematdeos, so endoparasitos e podem


ser encontrados no tubo digestrio de telesteos e tartarugas, na vescula
biliar de peixes elasmobrnquios, ou na cavidade pericrdica, rim e brnquias
de moluscos bivalvos de gua doce. Caracterizam-se morfologicamente por
possurem ventosa posterior dividida dentro de compartimentos. Devem ser
coletados e fixados da mesma forma que os trematdeos.

6. Cestoides

So platelmintos pertencentes classe Cestoidea, subclasse Eucestoda.


Caracterizam-se pela simetria bilateral, so achatados dorso-ventralmente, exclusivamente parasitos e no possuem sistema digestrio. Geralmente, so
constitudos por uma regio anterior chamada esclex, que contm rgos de
fixao ventosas, btrios, botrdios, tentculos , e por uma regio posterior com uma srie de segmentos, chamados proglotes, contendo os rgos
sexuais o estrbilo. A maioria das espcies hermafrodita.
Os cestoides adultos podem ser encontrados em qualquer classe dos vertebrados, praticamente confinados sempre ao intestino, raramente na cavidade
celomtica e nos ductos biliares ou pancreticos. Devem ser mortos sob a ao
do frio, no refrigerador, e em gua destilada, objetivando o relaxamento da musculatura. fundamental para o diagnstico que o esclex tenha sido coletado.

264 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Todo o cestoide, partes dele contendo o esclex ou segmentos do estrbilo com proglotes imaturas, maduras e grvidas devem ser comprimidos entre
lminas e colocados no fixador a frio.
Em alguns cestoides, por exemplo, nos da ordem Ciclophyllidae pertencentes famlia Taenidae necessrio o estudo do nmero e da morfologia
dos ganchos do rostelo contido no esclex; sob o estereomicroscpio, fazse a separao do rostelo do esclex, por meio de corte com uma lmina
de barbear, visualizando-se depois, em montagem en face, o que permite
a contagem do nmero total de ganchos. Para o estudo da morfologia dos
ganchos, deve-se esmagar o rostelo entre lmina e lamnula, o que possibilita a
visualizao dos ganchos lateralmente. Dependendo da ordem de cestoides,
necessrio o estudo de cortes histolgicos transversais das proglotes maduras.
Nesse caso, alguns exemplares devem ser fixados sem compresso, em soluo
de formol a 10%.

6.1 Formas larvais de cestoides

As larvas de cestoides podem ser encontradas encistadas, livres no celoma, na musculatura de vertebrados ou na hemocele de artrpodes. Helmintos
encistados sempre devem ser removidos, com agulhas entomolgicas ou de
acupuntura das membranas csticas antes de serem submetidos ao fixador.
Plerocercos da ordem Trypanorhyncha, aps terem sido liberados dos cistos,
devem ser colocadas em gua destilada no refrigerador, para que os tentculos
desinvaginem e eles morram relaxados.

7. Girocotildeos e anfilindeos

So platelmintos pertencentes classe Cestoidea, subclasse Cestodaria,


encontrados na vlvula espiral (intestino) de peixes elasmobrnquios, princi-

Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 265

palmente da subclasse Holocephali por exemplo, Gyrocotylidea ou no


intestino e na cavidade celomtica de peixes telesteos e tartarugas por
exemplo, Amphilinidea.
O mesmo processo utilizado para coleta e morte dos grandes trematdeos
digenticos deve ser empregado para esses helmintos.

8. Acantocfalos

Esse filo de helmintos se caracteriza por animais de simetria bilateral, com


probscide anterior guarnecida de ganchos e sistema digestrio ausente. Os
sexos so separados e apresentam dimorfismo sexual. Os adultos so encontrados exclusivamente no intestino dos hospedeiros definitivos, os quais so
todas as classes de vertebrados.
Devem ser coletados do intestino do hospedeiro e levados para uma
placa de Petri contendo soluo de NaCl na concentrao correta (0,65%0,85%); logo aps, devem ser transferidos para gua destilada e colocados
no refrigerador, a fim de que morram com a probscide extrovertida. Antes
da fixao, restos de tecido e muco do intestino do hospedeiro devem ser
removidos da probscide com o auxlio de um pincel ou de uma agulha de
acupuntura.
8.1 Formas larvais de acantocfalos

O acntor a larva embrionada capaz de infectar o artrpode hospedeiro


invertebrado. encontrado nas fezes do hospedeiro definitivo, ou em plantas
submersas (geralmente em espcies aquticas), fixo por filamentos polares. A
acantela, estgio posterior ao acntor, pode ser encontrada na hemocele ou
na serosa intestinal dos artrpodes. Seu desenvolvimento resulta no cistacanto
ou juvenil, larva infectante envolvida em um envelope hialino, encontrado tanto em tecidos do artrpode quanto em hospedeiros paratnicos vertebrados.

266 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

As larvas encistadas em hospedeiros intermedirios e/ou paratnicos (cistacantos) devem ser removidas do cisto e tratadas, assim como as formas no
encistadas (acantelas), como os adultos.

9. Nematoides

Filo de helmintos caracterizado por apresentar corpo alongado, geralmente


fusiforme, no segmentado. Os nematoides so envoltos por uma cutcula e
possuem sistema digestrio completo. Os sexos so separados, e algumas
vezes apresentam grande dimorfismo sexual. Podem ser livres ou parasitos, ou,
ainda, podem ter uma fase de vida livre e outra parasitria; s vezes, tm geraes alternadas de vida livre e de vida parasitria; em geral so ovparos, mas
algumas vezes vivparos. Seu tamanho varia de frao de milmetros a prximo
de um metro. Adultos podem ser encontrados parasitando o tubo digestrio,
suas cavidades e vrios rgos internos de todos os grupos de vertebrados.
Devem ser, preferencialmente, coletados vivos, com o auxlio de um pincel,
e transferidos para uma soluo de NaCl na concentrao correta (0,65%0,85%). A soluo com os nematoides deve ser agitada fortemente, de
modo a permitir a limpeza dos lbios, da abertura bucal e da superfcie da
cutcula. Os espcimes pequenos, como as larvas, devem ser coletados e mantidos em recipientes pequenos; os espcimes mortos devem ser diretamente
fixados a frio.

9.1 Formas larvais de nematoides

Dependendo da ordem qual o nematoide pertence, o estgio larval


pode ser encontrado em invertebrados ou em vertebrados. Nos vertebrados,
muitas vezes apresentando-se no interior de cistos, podem ser encontrados na
musculatura, em todos os rgos internos, nas serosas e cavidades do corpo,
no intestino e em vasos sanguneos.

Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 267

Larvas vivas encistadas devem ser removidas dos tecidos do hospedeiro,


dissecados com o auxlio de uma pina pequena, agulhas de acupuntura ou
um pincel pequeno de cerdas finas. Logo depois de colocadas em placas
de Petri com soluo NaCl na concentrao correta (0,65%-0,85%), os
envoltrios csticos devem ser removidos, e as larvas, tratadas como os nematoides adultos.

10. Fixao

A maioria dos platelmintos e os acantocfalos mortos em gua destilada no


refrigerador ou aqueles que tenham sido comprimidos devem ser fixados em
AFA (lcool etlico, formalina e cido actico), onde devem permanecer por
no mximo 48 horas, sendo depois transferidos para etanol 70GL, onde
podem ficar por tempo indeterminado.
Os monogenoides devem ser fixados em formalina a 5%.
Os nematoides vivos so transferidos da soluo de NaCl para uma placa
de Petri com pouco lquido. Aquece-se o fixador AFA a 65C e derrama-se
rapidamente sobre os nematoides, deixando-se o fixador esfriar nessa placa
de Petri. Podem permanecer por 48 horas no fixador; depois devem ser
transferidos e conservados em etanol 70GL, com ou sem a adio 5% de
glicerina (a glicerina evita que a cutcula se torne quebradia).

11. Colorao

Existem dois processos para a colorao: o progressivo e o regressivo. No


progressivo, usa-se o corante bem diludo, e os helmintos ficam imersos no
corante at que cada rgo ou tecido, em sua cromofilia, adquira sua intensidade especfica. No processo regressivo, usa-se o corante puro ou pouco
diludo, corando-se em excesso; logo aps, procede-se diferenciao com

268 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

etanol 70GL clordrico a 0,5-1%. O processo regressivo mais rpido e


fcil de controlar.
Os monogenoides, trematdeos digenticos, temnocefaldeos, aspidobtreos, cestoides adultos e acantocfalos podem ser corados pela hematoxilina
ou pelo carmim de Mayer ou de Langeron. Sendo um corante nuclear, a
hematoxilina cora principalmente os ncleos e evidencia as estruturas internas
mais delicadas. J os carmins resultam em um colorido mais intenso, mas no
evidenciam as estruturas mais delicadas. Os girocotildeos e os anfilindeos
devem, preferencialmente, ser corados pelo carmim de Semichon. Acantocfalos muitas vezes requerem que se faam pequenos furos no tegumento, com
alfinetes bem finos ou agulhas de acupuntura, para que o corante penetre mais
facilmente. Esse procedimento favorecer, posteriormente, a penetrao do
clarificador e do blsamo do Canad, evitando o enrugamento do espcime
no momento da montagem em lmina definitiva.
Para a observao da morfologia da maioria das espcies de nematoides,
no necessria a colorao, mas deve ser feita a clarificao.
O processo de corar com a hematoxilina mais demorado do que com o
carmim, pois a hematoxilina dissolvida em meio aquoso. Como o carmim
alcolico e dissolvido sempre em etanol 70GL, isso faz que os helmintos
conservados em etanol 70GL passem diretamente do meio onde se encontram conservados para o corante.
O tricrmico de Gomori produz resultados que facilitam a observao de
estruturas esclerotizadas dos monogenoides.

Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 269

Quadro 1. Sequncia para a colorao de helmintos pelo mtodo


da hematoxilina com processo regressivo.
1
2

Etapa
Etanol 70GL
Etanol 50GL

Durao
15 minutos
15 minutos

Etanol 30GL

15 minutos

Hematoxilina

tempo varivela

gua destilada

lavagem rpida

gua de torneira

15 minutos

Etanol 30GL

15 minutos

Etanol 50GL

15 minutos

Etanol 70GL

15 minutos

10 Etanol 70GL clordrico a 0,5% tempo varivelc

Processo
hidratao
colorao
oxidaob

desidratao
diferenciao

11 Etanol 70GL

15 minutos

12 Etanol 80GL

15 minutos

13 Etanol 90GL

15 minutos

14 Etanol absoluto 1

15 minutos

15 Etanol absoluto 2

15 minutos

16 Creosoto de faia

tempo varivel,
at a clarificao e
montagemd
montagem

desidratao

O tempo nas hematoxilinas varia de acordo com o helminto, o seu tamanho e a diluio do
corante. Pequenos helmintos e seus estgios larvais necessitam de 15 a 30 minutos, ao passo que
os espcimes maiores exigem de 45 a 60 minutos.
b
A gua de torneira oxida as hematoxilinas, mudando sua colorao de roxa para azul.
c
A diferenciao pelo etanol clordrico deve ser controlada ao estereomicroscpio para clarificar o
tegumento e o parnquima. O observador deve tirar o helminto no totalmente diferenciado, uma
vez que o mesmo perder um pouco mais de corante ao passar pela sequncia de desidratao.
d
O creosoto de faia usado como clarificador, inclusive completando a desidratao. Nunca usar o
xilol. O tempo ideal para a clarificao de um helminto depende de seu tamanho e do grupo a que
pertence. Helmintos no creosoto tendem a flutuar e a se aderir na borda da placa de Petri e preciso
controlar os helmintos individualmente, para impedir que isso ocorra, levando-os, delicadamente,
com um estilete, uma agulha de acupuntura ou um pincel fino de poucas cerdas, para o fundo da
placa.
a

270 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Quadro 2. Sequncia para a colorao de helmintos pelos


mtodos de carmim no processo regressivo.
Etapa

Durao

Etanol 70GL

15 minutos

Carmim

tempo varivel

Etanol 30GL

lavagem rpida

Etanol 70GL clordrico a 0,5%

tempo varivel

Etanol 70GL

15 minutos

Etanol 80GL

15 minutos

Etanol 90GL

15 minutos

Etanol absoluto 1

15 minutos

Etanol absoluto 2

15 minutos

10 Creosoto de faia

tempo varivel

Quadro 3. Sequncia para a colorao de monogenoides pelo mtodo


tricrmico de Gomori no processo regressivo.
1

Colocar os espcimes em gua por 3-5 minutos


Transferir os espcimes para uma pequena gota de corante no centro de uma
placa de Petri pequena
Corar por 1 a 3 minutos

Preencher a placa de Petri com etanol absoluto

Colocar gotas de gua para diferenciar

Transferir os espcimes para outra placa de Petri contendo etanol absoluto

Desidratar os espcimes por 1 a 5 minutos

Transferir para creosoto de faia para clarificar

12. Clarificao

Os helmintos em geral so clarificados quando deixados no creosoto. Existem, porm, dois processos especiais para a clarificao de nematoides, um

Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 271

para montagem em blsamo do Canad e outro para montagem em gelatina


de glicerina.

1
2
3
4
5
6
7

Quadro 4. Processo de clarificao de nematoides


para a montagem em blsamo do Canad.
Etanol 70GL, para remoo da glicerina
Etanol 80GL
Etanol 90GL
Etanol absoluto 1
Etanol absoluto 2
Lactofenol de Amann
Creosoto de faia

Obs.: Os nematoides muito grandes devem passar por fenol 10% aps
o lactofenol. Tambm se utiliza a lavagem rpida, em cido ltico glacial,
antes da clarificao com fenol.
No estudo morfolgico de nematoides, importante a observao de
estruturas bucais; a fim de se ter uma viso apical das mesmas, so feitas
montagens especiais da regio anterior, utilizando-se cortes da regio anterior
dos espcimes de nematoides, feitos com lmina de barbear ou bisturi de lmina bem fina. Esse procedimento realizado sob o estereomicroscpio, e as
partes cortadas so montadas na posio en face. Essa montagem realizada
com clarificao em glicerina.

1
2
3

Quadro 5. Sequncia do processo de clarificao de nematoides


para a montagem em gelatina de glicerina.
Adicionar poucas gotas de cada vez de glicerina pura na placa Petri onde os
nematoides j se encontram em etanol 70GL glicerinado a 5%
Transferir um nematoide de cada vez para a glicerina pura aps a evaporao
do etanol
Montar em gelatina de glicerina

272 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

13. Montagem

O procedimento de montagem em lmina deve ser realizado sempre sob


o estereomicroscpio. Todos os helmintos devem ser montados isoladamente,
um espcime em cada lmina. No caso de helmintos que apresentam dimorfismo sexual, macho e fmea devem ser montados em lminas separadas, a no
ser que a finalidade da montagem seja, por exemplo, demonstrar didaticamente um casal de Schistosoma mansoni em cpula.
Em uma infrapopulao,1 d preferncia a montar primeiro os melhores
espcimes disponveis e, depois, os piores. Dessa maneira o melhor espcime
ser sempre o nmero 1 do lote.
Girocotildeos devem ser mantidos no clarificador, pois em geral so muito
grandes.
Cestoides tm de ser cortados de acordo com o tamanho da lamnula utilizada para cobri-los. Montar, em uma mesma lmina, a poro com o esclex,
um conjunto com proglotes imaturas, um conjunto com proglotes maduras e
um conjunto com proglotes grvidas. Para cestoides grandes ou mais largos,
algumas vezes so necessrias duas ou mesmo trs lminas para o mesmo espcime. Todas as lminas utilizadas devem ser etiquetadas com o mesmo nmero
do lote da coleta, adicionando-se ao nmero, sequencialmente, letras.
Cada lmina ou lamnula deve ser previamente limpa com um leno de
papel fino seco, a fim de remover a cera protetora que as recobre. Coloca-se
o helminto no centro da lmina, contendo uma gota de blsamo do Canad,
que pode ser diludo, previamente, com um pouco de xilol. O helminto
sempre deve ser posicionado com a face ventral para cima. Quando necessrio, completar com um pouco mais de blsamo, no diludo, para encobrir o
helminto. Coloque delicadamente a lamnula acima do blsamo.
Nematoides muitas vezes no so montados em lminas definitivas; so,
em geral, preservados em etanol glicerinado, e a observao de suas estruturas
internas se d quando esto sendo clarificados em lactofenol, entre lmina e
lamnula, depois devem ser colocados novamente em etanol.
1

Nmero total de espcimes de uma espcie coletado em um hospedeiro.

Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 273

Quadro 6. Procedimento para montagem de nematoides


em gelatina de glicerina.
1

O recipiente com gelatina de glicerina deve ser aquecido em banho-maria

Colocar, com um basto de vidro, uma gota de gelatina lquida,


proporcional ao tamanho do espcime e da lamnula usada para cobri-la,
sobre a lmina

A gota no pode ir alm da lamnula

Lutar com esmalte incolor para as unhas

Deixar as lminas secarem. Pode-se levar as lminas para uma estufa


controlada a 37C, por 24 a 48 horas, o que diminui o tempo de
secagem

Depois de secas, as lminas montadas devem ser etiquetadas

14. Etiquetagem do material montado em lmina e do


material preservado em meio lquido

Etiquetas podem ser escritas mo, com lpis ou nanquim, ou digitadas no


computador, impressas em um papel contendo algumas informaes bsicas,
tais como:
nmero do espcime;
nome genrico e especfico do helminto;
stio de infeco ou infestao;
localidade de coleta do hospedeiro;
data de coleta do hospedeiro;
nome da pessoa que coletou/determinou o helminto;
tipo de corante utilizado no helminto;
meio de preservao;
categoria do espcime: holtipo, partipo, espcime representativo
(voucher).

274 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Etiquetas para lminas devem ser coladas em uma das extremidades dessas;
etiquetas para material preservado em meio lquido devem ter tamanho
compatvel com o do recipiente. Caso se tenha optado pelo nanquim, antes
de as etiquetas serem colocadas dentro do meio lquido, deve-se remover o
excesso de tinta das mesmas com um jato dgua (isto evita a absoro do
nanquim pelo helminto).

Modelo de etiqueta para lmina


MK-366-1Diphyllobothrium latum
Homo sapiens
Fezes
Rio de Janeiro, RJ, Brasil
21/04/2005
Col. Knoff
Det. Knoff et al.
Carmim de Langeron
Blsamo do Canad
Voucher

15. Utenslios

Bandejas para necropsia: de dimenses variadas, segundo o tamanho


do hospedeiro, de ao ou plstico. So muito teis, pois possibilitam
perda mnima de material.
Peneiras para coleta: devem ser utilizadas peneiras de ao inoxidvel,
com telas de malha variando de 100 at 150 m de abertura e dimetros
de 8 a 20 cm, disponveis no mercado. Podem tambm ser confeccionadas de acordo com a necessidade, com malhas de 35 a 250 m de
abertura.
Peneiras para colorao: servem no transporte dos helmintos atravs
das etapas da sequncia de colorao, sendo transferidas de soluo para
soluo com o auxlio de uma pina. A tela da peneira deve ser de musseline de nilon, e quanto menor a abertura da malha, melhor a abertura
da malha est condicionada ao tamanho do helminto. No so vendidas

Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 275

no comrcio e devem ser confeccionadas. A tela da peneira de colorao colada, com adesivo para tubos de PVC, em pequenos tubos de
PVC de dimetro reduzido, com as bordas previamente lixadas. Depois
de coladas, devem ser deixadas sob presso por 24 horas. A altura das
peneiras de colorao deve ser menor do que a altura das placas de Petri
(1,5 a 2 cm), o que permite permanecerem tampadas durante o processo
de colorao, evitando que os lquidos evaporem.
Obs.: Como o adesivo de PVC no resiste ao creosoto de faia, os helmintos devem ser retirados das peneiras na etapa do etanol absoluto 2. Os
helmintos devem ser transferidos do etanol absoluto 2 para o creosoto de
faia com o auxlio de um pincel pequeno e de poucas cerdas e finas.
Pinas de joalheiro: as de ponta fina e sem serrilhado so as mais
indicadas em helmintologia.
Pincis pequenos, pincis de tamanho 0: cortar algumas cerdas,
diminuindo seu nmero, para tarefas mais delicadas.
Placas de Petri: de tamanhos variados.
Formulrio de necropsia, lpis ou lapiseira, borracha.
Tesouras: pequenas, mdias e grandes, de ponta fina.
Tesouro destrinchador.
Bquers de 50 ml, 100 ml, 200 ml, 500 ml e 1 l.
Gral.
Pisseta.
Tubos de ensaio.
Centrfuga.
Funil pequeno, papel-filtro, anteparo de funil.

276 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Clice Hoffman.
Tubo de borracha, grampos.
Gaze.
Bico de Bunsen ou placa aquecedora.
Termmetro qumico (-10 a 110C).
Microscpio ptico binocular.
Estereomicroscpio.
Lupa de mo: com no mnimo 2 a 4 vezes de aumento; facilita no
exame da superfcie de hospedeiros.
Pipetas de Pasteur, bulbos de borracha para pipeta na falta desses,
usar pipetas plsticas descartveis.
Bisturi, lminas de bisturi, lmina de barbear.
Trena de mo.
Lanterna: ser til, caso falte luz durante a necropsia.

Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 277

Abaixo, formulrio de necropsia de vertebrados.

Formulrio de Necropsia
N. ______
Nome especfico: _____________________. Nome vulgar: ______________.
Sexo/estgio de maturao: ____________________.
Data de coleta: __/__/____. Local de coleta: _________________________.
Modo de captura: ___________________. Armazenagem: (

) Sim (

) No

Peso: ______. Comprimento total: _________. Comprimento padro: ________.


Stios de infeco/infestao parasitos

Obs.:

No.

278 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

16. Solues e suas frmulas

Fixador AFA: etanol 70GL (93 partes) + formalina comercial (3740%; 5 partes) + cido actico glacial (2 partes).
Formalina 10%: formalina comercial (10 partes) + gua destilada
(90 partes).
Formalina 1:4.000: gua destilada (4.000 ml) + formalina comercial
(1 ml).
Diferenciador etanol 70GL clordrico a 0,5%: etanol 70GL
(200 ml) + cido clordrico (1 ml).
Hematoxilina de Delafield: hematoxilina em p (4 g) + etanol
absoluto (25 ml) + metanol (100 ml) + almen de amnia
[NH4Al(SO4)2.12H2O] (400 ml) + glicerina (100 ml).
Como fazer: dissolver a hematoxilina no etanol absoluto. Misturar,
gradualmente, a soluo saturada aquosa de almen de amnia
(aproximadamente 1 parte de almen para 11 partes de gua destilada).
Expor luz por 3 a 5 dias em um balo volumtrico com tampa de algodo.
Filtrar. Adicionar ao filtrado a glicerina e o metanol. Deixar amadurecer por
seis semanas. Guardar em frasco escuro, se possvel coberto com papel
laminado. Filtrar sempre antes de usar.
Carmalmen de Mayer: carmim em p (5 g) + almen de potssio
[KAl(SO4)2.12H2O] (6 g) + cido actico glacial (25 ml) + gua
destilada (100ml).
Como fazer: dissolver o carmim e o almen na gua destilada fervendo.
Deixar esfriar. Adicionar o cido actico. Deixar amadurecer por 10
dias. Filtrar e adicionar 0,5 ml de formalina a 37%, para impedir o
aparecimento de fungos. Diluir de acordo com a necessidade. Guardar em
um frasco escuro. Filtrar sempre antes de usar.

Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 279

Carmim de Langeron: carmim em p (5 g) + cido clordrico (5 ml)


+ etanol 70GL (250 ml) + gua destilada (5 ml).
Como fazer: adicionar o cido gua, nunca ao contrrio. Colocar o
lquido junto com o carmim em um gral, misturando bem. Levar ao fogo
e deixar cozinhar por 1 hora, em um balo volumtrico com tampa de
algodo. Filtrar. Guardar em frasco escuro. Filtrar sempre antes de usar.
Carmim de Semichon: carmim em p (at a saturao) + cido actico
glacial (100 ml) + gua destilada (100 ml).
Como fazer: adicionar o cido gua, nunca ao contrrio. Adicionar o
carmim at a saturao. Aquecer a 95-100C por 15 minutos. Deixar
esfriar e filtrar. Adicionar alguns cristais de timol, para evitar fungos (cristais
inteiros, no macerar). Guardar em frasco escuro. Filtrar sempre antes de
usar. Diluir na proporo de 1:1 com etanol 70GL.
Tricrmico de Gomori: cromotropo 2R (0,6 g) + azul de anilina
(0,6 g) + cido fosfomolibdnico (1 g) + cido clordrico (1 ml) +
gua destilada (100 ml).
Como fazer: juntar o cromotropo, o azul de anilina e o cido
fosfomolibdnico. Dissolver na gua destilada. No filtrar. Aguardar cerca
de 24 horas antes de usar. Adicionar gua para reduzir a rapidez da
colorao. Guardar no refrigerador. Usar frio.
Gelatina de glicerina: gelatina granulada (6 g) + fenol (1 g) +
glicerina (50 ml) + gua destilada (40 ml).
Como fazer: colocar a gelatina na gua destilada; deixar descansar por 15
minutos. Derreter a gelatina em banho-maria, filtrando em vrias camadas
de musseline de nilon, molhadas em gua quente. Em seguida, dissolver o
fenol na glicerina e juntar gelatina. Guardar em frascos escuros. Ao usar,
aquecer a gelatina de glicerina em banho-maria.

280 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Referncias bibliogrficas
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Entomologia Mdica | 283

Captulo 4
Entomologia Mdica
Teresa Fernandes Silva do Nascimento
Maria Goreti Rosa-Freitas
Monique de Abuquerque Motta
Andr de Figueiredo Barbosa
Nataly Arajo de Souza
Maurcio Luiz Vilella
Margareth M. C. Queiroz
Jacenir Reis dos Santos Mallet
Catarina Lopes de Macedo
Teresa Cristina Monte Gonalves

284 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

1. Consideraes gerais
1.1 Definio

A entomologia a parte da cincia que estuda os insetos. Como a maioria


das palavras cientficas, entomologia uma palavra grega, uma unio de
entomo = inseto e logos = cincia.
Entomologia: do grego

entomo = inseto + logos = cincia

Inseto: do latim in sectu = separado em


sees

1.2 Campo de aplicao

A entomologia uma especialidade cientfica importante. Os insetos tm


muitas formas de interao com os seres humanos e outros seres vivos. Algumas
espcies so benficas, outras deletrias. Das espcies benficas, as primeiras
que nos vm mente so as abelhas, com seu adocicado produto, e o bichoda-seda, com a produo de seu finssimo fio. Dentre os efeitos benficos,
esto a ao dos insetos como polinizadores e como recicladores de matria
orgnica; no caso dos insetvoros e parasitoides, resalta-se a ao no controle de
populaes de outros insetos. Insetos tambm so utilizados como alimento em
algumas partes do mundo. Alm disso, o uso medicinal de moscas necrobiontfagas em feridas necrosadas ainda uma alternativa teraputica em alguns casos.

Entomologia Mdica | 285

Um interessante ramo da entomologia o estudo da biologia, ecologia


e biogeografia dos insetos para aplicao na medicina legal, a entomologia
forense, que engloba trs tpicos: entomologia mdico-criminal, entomologia urbana e entomologia de produtos armazenados. Como o prprio nome
revela, a entomologia mdico-criminal aquela de interesse processual. Insetos hematfagos alimentam-se constantemente em seres humanos. O sangue
ingerido por esses insetos pode ser recuperado e usado para identificar o
indivduo do qual proveio o repasto. As marcas de picadas e suas reaes
podem ser usadas para colocar um indivduo na mesma rea onde os insetos
foram encontrados. Material gentico, como o DNA contido no sangue do
inseto, pode ser recuperado, analisado e usado como evidncia em processos
criminais, com baixa taxa de erro.
As pesquisas nessa rea so feitas desde 1850 e vm obtendo progresso nas ltimas dcadas, nas diversas instituies de pesquisa existentes.
Os vestgios entomolgicos podem ser coletados por peritos bem treinados;
entretanto, imprescindvel que a identificao do espcime seja acurada, o
que depender de um entomologista experiente. A entomologia forense pode
ser utilizada em investigaes sobre trfico de entorpecentes, maus-tratos e
morte violenta. Nesse ltimo caso, a metodologia pode ajudar a esclarecer a
identidade do morto, a causa da morte e o lugar onde ocorreu, mas, principalmente, pode definir a cronotanatognose intervalo de tempo entre a morte e a localizao do cadver. Para a estimativa do intervalo ps-morte, so
utilizados dados dos hbitos e da biologia das espcies necrfagas. Diversos
autores recomendam que, em caso de suspeita de morte por envenenamento,
os insetos coletados sempre sejam analisados quanto aos vestgios toxicolgicos, havendo ou no amostras de tecido do cadver para anlise.
Vrias espcies ainda destroem construes, so pragas agrcolas, pestes
ou vetores de doenas humanas. sobre as espcies de artrpodes pestes e
vetores de doenas humanas que este captulo tratar.

286 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

1.3 Vetores e parasitos

Vrias espcies de artrpodes so parasitos e vetores de doenas para


o homem, e delas se ocupa a entomologia mdica. Os artrpodes podem
ser deletrios pela picada venenosa, por exercerem o hematofagismo ou por
transmitirem parasitos ao homem.
Hematfago: do grego hemato = sangue
+ fago = alimentar-se

Alguns hematfagos podem ter preferncia pelo sangue humano ou pelo


sangue de outros animais; h ainda aqueles que so eclticos: sugam o sangue
tanto de humanos quanto de animais. O hematofagismo em si um hbito
parasita que impe perda de sangue ao hospedeiro. Alm disso, ao sugar
o sangue do hospedeiro, vrios parasitos podem ser transmitidos, o que faz
dos artrpodes vetores de diversas doenas. A entomologia mdica abrange
o estudo de artrpodes que no so insetos, estendendo-se ao estudo dos
crustceos, miripodos e queliceratas.
2. Filo Arthropoda
2.1 Caractersticas gerais

Os artrpodes so o mais importante grupo de invertebrados em nmero


de espcies, alm de serem extremamente bem-sucedidos na explorao dos
mais variados ambientes terrestres, areos, de gua doce e marinhos. um
grupo muito diversificado. Entre os seus representantes, incluem-se caranguejos, camares, lacraias, piolhos-de-cobra, aranhas, escorpies e insetos. Os
primeiros artrpodes, os trilobitas, surgiram h aproximadamente 600 milhes

Entomologia Mdica | 287

de anos nos oceanos. Espcie j extinta, os trilobitas eram invertebrados que


possuam corpo segmentado, organizado em cefalotrax e abdome, e simetria
bilateral, com um exoesqueleto de calcrio e quitina, brnquias, um par de
antenas e olhos compostos.
A caracterstica que d nome ao filo Arthropoda so os apndices articulados formados por articulaes mveis de vrios tipos, de acordo com a
sua funo. As patas so usadas principalmente para locomoo; as peas
bucais, para captura de presas, suco e triturao de alimentos; as antenas,
para sensoriamento e percepo de estmulos.
Artrpode: do grego
arthro = articulao + poda = p

O filo Arthropoda possui simetria bilateral, apndices articulados, exoesqueleto quitinoso e cavidade geral, ou hemocele, na qual circula a hemolinfa.
A hemolinfa um fluido aquoso, contendo ons, molculas e clulas, com vrias funes. Esse fluido circula em baixa presso e com fluxo lento, passando
por cavidades chamadas hemocele. Uma das suas principais funes a troca
qumica de alimentos e rejeitos metablicos, hormnios, clulas e molculas
de defesa imune entre os tecidos dos insetos. A hemolinfa se movimenta
pstero-anteriormente e pode ter cor avermelhada, amarelada ou esverdeada.
Os artrpodes possuem sistema circulatrio aberto e lacunar, sistema digestivo completo, sistema nervoso formado por gnglio cerebral e cadeia
ganglionar ventral. Os artrpodes so dioicos, de reproduo sexuada e
fecundao interna. Existem espcies que so hermafroditas.
Diico: sexos separados em indivduos machos e fmeas.

288 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Fecundao interna: o macho deposita as clulas sexuais masculinas dentro do corpo da fmea, no qual se encontram as clulas
sexuais femininas.

As estruturas sensoriais dos artrpodes so eficientes e diversificadas. Possuem sensores qumicos capazes de reconhecer a presena de alimentos ou de
inimigos naturais e tambm de identificar seus parceiros sexuais; receptores de
paladar, como aqueles localizados nas patas das moscas; sensores posturais
os estatocistos semelhantes aos encontrados nos demais invertebrados; e
receptores olfativos, auditivos e luminosos.
A utilizao de sensores visuais, olfativos, de temperatura e outros determina o comportamento dos artrpodes na procura da fonte alimentar, sua relao com o hospedeiro e a transmisso de patgenos. Insetos como mosquitos
e borrachudos utilizam seus sensores visuais para escolher cores onde pousaro e faro seu repasto sanguneo. Os tabandeos podem detectar grandes
contornos que contrastam com o cu, alimentando-se, preferencialmente, em
grandes ungulados. Sensores olfativos para o dixido de carbono, exalado na
respirao de vertebrados, e para o cido ltico, molcula comum no suor humano, podem indicar a existncia de fontes de alimentao. O conhecimento
desses mecanismos de atrao pode ser utilizado na confeco de armadilhas
para esses artrpodes.
O esqueleto rgido dos artrpodes, embora confira ao grupo proteo
mecnica, tambm limita o seu crescimento: para crescer, o exoesqueleto
trocado num processo denominado muda ou ecdise; ocorrem de 4 a 7 mudas
do exoesqueleto at o artrpode atingir o estgio adulto. O exoesqueleto
vazio abandonado recebe o nome de exvia.

Entomologia Mdica | 289

Muda ou ecdise: mudana de exoesqueleto


Exvia: exoesqueleto vazio abandonado
Apesar de sua grande diversidade, todos os artrpodes
exibem, em comum, as seguintes caractersticas:
exoesqueleto quitinoso dividido em placas ou escleritos, unidos
por estruturas membranosas
simetria bilateral
corpo segmentado
apndices articulados
aparelho circulatrio aberto, com vaso dorsal
cordo nervoso ventral
musculatura predominantemente estriada
2.2 Metamorfose

Os artrpodes podem manter a mesma forma ou se transformar durante o seu ciclo de vida. Aqueles que no modificam a sua morfologia so
denominados ametbolos. Entre os que se transformam, h os que sofrem
metamorfose parcial os hemimetbolos ou total os holometbolos. Os
ametbolos e alguns hemimetbolos como piolhos e hempteros vivem
no mesmo ambiente em todas as fases de sua vida, competindo entre si. Os
holometbolos como borboletas, moscas e mosquitos exploram ambientes
distintos nas diferentes fases de seu ciclo de vida e no competem entre si. A
no competio entre os estgios uma grande vantagem para o grupo dos
holometbolos.
2.3 Taxonomia

Taxonomia a disciplina cientfica que cuida da ordenao das espcies em


grupos com base em caractersticas comuns. Os grandes grupos taxonmicos

290 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

so divididos nos seguintes nveis: reino, filo, classe, ordem, famlia,


gnero e espcie. Esses nveis ainda podem ser subdivididos pela adio de
supergrupos e subgrupos.
As espcies tm dois nomes cientficos em latim. Por exemplo, o mosquito
vetor do vrus da dengue tem o nome cientfico Aedes aegypti: Aedes o
nome do gnero; aegypti, o nome da espcie. Essa uma linguagem adotada
por todos os especialistas. Assim, seja qual for o nome vulgar localmente
dado ao mosquito Aedes aegypti, possvel uma comunicao correta entre
os estudiosos sobre a espcie em questo, mencionando-se o seu nome
cientfico. At o nvel da ordem, esta a posio taxonmica dos artrpodes
de interesse mdico:
reino Animalia > sub-reino Bilateria > filo Arthropoda > subfilo Crustacea;
reino Animalia > sub-reino Bilateria > filo Arthropoda > subfilo Chelicerata
> classe Arachnida;
reino Animalia > sub-reino Bilateria > filo Arthropoda > subfilo Myriapoda
> classes Chilopoda e Diplopoda;
reino Animalia > sub-reino Bilateria > filo Arthropoda > subfilo Hexapoda
> classe Insecta.

2.4 Subfilos e classes de artrpodes mais comuns


e de importncia mdica

Dentro do filo Arthropoda, destacam-se o subfilo Crustacea e as classes


Chilopoda, Diplopoda, Arachnida e Insecta entre as espcies de importncia
mdica e veterinria; as principais caractersticas dos subfilos e filos de
artrpodes esto sumarizadas no quadro 1.

Entomologia Mdica | 291

Quadro 1. Classes e subclasses do filo Arthropoda de interesse mdico.


Subfilo

Classe
Vrias classes

Crustacea

(caranguejos,
camares,
coppodes)

Caractersticas

geralmente possuem apenas


cefalotrax e abdome
pares de patas em nmero
variado
dois pares de antenas
apresentam cabea e
muitos segmentos corporais

Chilopoda
(centopeias,
lacraias)
Myriapoda

Diplopoda
(piolhode-cobra,
gongolo)
Arachnida
Chelicerata

(aranhas,
escorpies,
carrapatos,
caros)
Insecta

Hexapoda

(mosquitos,
besouros,
vespas,
mariposas,
borboletas,
formigas,
flebtomos)

um par de patas por


segmento corporal
um par de antenas
primeiro par de patas
modificado em pinas
venenosas
cabea, trax curto,
abdome segmentado
dois pares de patas por
segmento corporal
um par de antenas
dois segmentos corporais:
cefalotrax e abdome
quatro pares de patas
um par de quelceras
no possuem antena
possuem cabea, trax e
abdome
trs pares de patas
um par de antenas
diversas modificaes nos
apndices

Fonte: Adaptado de University of Sydney, 2004.

Esquema*

292 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

2.4.1 Subfilo Crustacea


Os crustceos possuem dois pares de antenas, numerosos pares de patas,
geralmente cinco ou mais, e o corpo dividido em cefalotrax e abdome. Os
representantes dos crustceos mais conhecidos so os camares, os siris, os caranguejos e as lagostas. Nos crustceos, o cefalotrax dotado de uma extremidade
serrilhada, chamada rostro. A boca ventral, com mandbulas, que so peas
mastigadoras. Os principais apndices articulados esto ligados ao cefalotrax.
Muitas das patas apresentam apndices birremes adaptados natao. No sistema nervoso, existem gnglios supraesofgicos que formam o crebro. A viso
dada por olhos compostos, pedunculados e mveis. Pelos distribudos por todo
o corpo so responsveis pelo equilbrio, tato, gosto e olfato. H crustceos
ssseis, como as cracas, que vivem fixos a um substrato. Outros, como o paguro
ou bernardo-eremita, apresentam a poro posterior do corpo desprovida de
exoesqueleto e ocupam conchas deixadas por moluscos mortos. Os crustceos
habitam ecossistemas tanto marinhos quanto de gua doce, havendo mesmo representantes que habitam ambiente terrestre mido, como o tatuzinho-de-jardim.
Uma grande populao de microcrustceos do ambiente aqutico, como os
coppodes e o krill, forma o zooplncton. Algumas espcies de crustceos coppodes so vetores de helmintos, como o caso da difilobotrase.
Algumas espcies de coppodes so vetoras de helmintos.

2.4.2 Subfilo Myriapoda


No subfilo Myriapoda encontram-se as classes Chilopoda e Diplopoda.
Classe Chilopoda

Os quilpodes, conhecidos vulgarmente por centopeias, lacraias ou escolopendras, apresentam corpo alongado e achatado dorsoventralmente, com
um nmero variado de segmentos, que podem chegar a 170. Na cabea,

Entomologia Mdica | 293

possuem um par de longas antenas, um par de mandbulas, dois pares de maxilas e um par de forcpulas ou aguilho, estrutura inoculadora de veneno. So
artrpodes de hbitos predatrios, e alguns gneros como Scolopendra, que
alcana 30 cm alimentam-se de pequenos lagartos, rs, pssaros e at de
morcegos. So encontrados principalmente em regies quentes, escondendose durante o dia debaixo de pedras e troncos cados, sendo ativos noite,
quando saem em busca de alimento. Algumas espcies desse gnero podem
inocular potente veneno ou peonha, em cuja composio entram proteases,
histamina, acetilcolina e serotonina, capazes de causar acidentes peonhentos
srios. Acidentes peonhentos em humanos tm sido relatados, com quadro
clnico de febre e reaes alrgicas fortes. Apesar da dor intensa que podem
causar, raramente so fatais. No Brasil, a lacraia mais comum a Scolopendra
viridicornis, que pode atingir 20 cm de comprimento.
Classe Diplopoda

Os diplpodes so tambm chamados de piolhos-de-cobra, gongolos e


embus. Possuem corpo semicilndrico, formado de 25 a 100 segmentos.
Apresentam, na regio ceflica, antenas curtas e olhos simples. De hbitos noturnos, habitam lugares escuros e midos. So herbvoros e detritvoros. Como
mecanismo de defesa, esses artrpodes, ao serem tocados, enrodilham-se em
espiral, o que lhes confere uma superfcie de maior resistncia. Entretanto,
apesar de no atacarem e no inocularem veneno, so capazes de liberar fluidos irritantes, como as benzoquinonas, que podem fluir dos poros ou serem
ejetados distncia de at 1 metro. Em contato com a pele humana, esses
lquidos podem causar sensao de ardncia como de uma queimadura leve;
caso o contato com o fluido seja mantido por longo tempo, pode ocasionar
a formao de bolhas, vesculas e ulceraes. Os raros acidentes humanos
ocorridos tm sido relatados com crianas ou profissionais que coletam esses
artrpodes para fins de pesquisa, sem tomar as devidas precaues, como o
uso de luvas e pinas, ou seja, uso de equipamentos de proteo individual

294 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

(EPIs) adequados. Um caso registrado nos arquivos mdicos de leso da


mucosa ocular que progrediu para conjuntivite e ulcerao da crnea, levando
o indivduo cegueira em 7 dias. A espcie de diplpode mais importante
no Brasil Rhinocricus padbergi.

2.4.3 Subfilo Chelicerata


Classe Arachnida

A classe Arachnida engloba as aranhas, os escorpies, os caros e os


carrapatos. Assim como os crustceos, os aracndeos apresentam o corpo
dividido em duas partes: cefalotrax e abdome. Quando adultos, possuem
quatro pares de patas, podendo ter apenas trs nas fases imaturas. No
possuem antenas. A grande maioria tem hbitos terrestres, sendo parasitos,
predadores ou hematfagos. Dessa forma, esto relacionados com a transmisso
de patgenos para o homem e os animais. O sistema circulatrio aberto, e o
sangue contm hemocianina. A respirao traqueal, nico sistema presente em
aracndeos pequenos; nos escorpies e em muitas aranhas, existe uma abertura
ventral no abdome que se comunica com os pulmes foliceos. A estrutura
interna desses rgos assemelha-se a um livro com as folhas entreabertas, cujas
lminas delgadas so vascularizadas e permitem a ocorrncia de trocas gasosas
entre o sangue e o ar. Esse tipo especial de respirao pulmonar chamado de
respirao filotraqueal. A excreo realizada por meio dos tbulos de Malpighi
e, em aracndeos maiores, pelas glndulas coxais, localizadas no cefalotrax.
O produto mais importante da excreo nitrogenada, nesses animais, a
guanina. As aranhas possuem sexos separados, e frequentemente os machos
so menores do que as fmeas. A importncia mdica dos aracndeos est
no fato de algumas espcies causarem acidentes srios por picada venenosa,
como o caso das aranhas e escorpies, serem vetores de doenas humanas
e veterinrias, como o caso dos carrapatos, e tambm por causarem alergia,
como os caros do p domstico.

Entomologia Mdica | 295

As aranhas possuem o cefalotrax unido ao abdome por um pedculo.


Na regio anterior do cefalotrax, encontram-se oito olhos simples e alguns
apndices articulados. As quelceras so estruturas adaptadas para a captura
do alimento, e sua extremidade tem forma de garra, dotada de um orifcio no
qual se abre a glndula do veneno. Os pedipalpos so apndices teis na
triturao dos alimentos. Os machos usam os pedipalpos para a deposio
dos espermatozoides. Muitas aranhas, ao inocularem o veneno na presa,
inoculam tambm enzimas digestivas, que realizam digesto extracorporal, ou
seja, os tecidos da presa so parcialmente digeridos por essas enzimas antes
da sua ingesto pela aranha. Aps certo tempo, essas aranhas simplesmente
sugam os tecidos do animal morto, j liquefeitos e parcialmente digeridos. Na
poro posterior do abdome, abrem-se as fiandeiras, estruturas responsveis
pela confeco das teias. As teias servem de abrigo, proteo, local de acasalamento e armadilha para a captura de insetos e de outros animais, que so
a sua principal fonte alimentar. A seda da teia se solidifica em contato com
o ar. Os acidentes decorrentes de picadas de espcies peonhentas esto
relacionados aos gneros Latrodectus, ou viva-negra, Loxosceles, ou aranhamarrom, Lycosa sp, ou aranha-de-grama, e Phoneutria sp, ou armadeira.
Os escorpies so os mais primitivos de todos os artrpodes terrestres
atuais. Habitam regies quentes e secas, escondendo-se durante o dia em vrios locais protegidos, saindo noite para capturar suas presas, principalmente
insetos e aranhas, capturados com seus pedipalpos e mortos com o ferro.
A fecundao dos escorpies interna e, em muitas espcies, o desenvolvimento dos ovos tambm , ou seja, ocorre dentro do sistema reprodutor
feminino. Apresentam o corpo alongado, dividido em cefalotrax e abdome.
No cefalotrax, h um par de quelceras, um par de pedipalpos bastante
desenvolvidos que termina em forma de pinas, semelhantes s pinas dos
caranguejos, e quatro pares de patas. O abdome formado por duas regies
distintas: uma poro anterior larga e achatada, constituda por sete segmentos, denominado pr-abdome, e uma poro posterior, cilndrica e estreita,
formada por cinco segmentos, denominada ps-abdome. O ltimo segmento

296 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

do ps-abdome recebe o nome de tlson, e sua extremidade distal termina


em um ferro (acleo, aguilho), em cuja poro arrendada esto localizadas
as glndulas de veneno. O gnero Tityus abriga as espcies mais perigosas no
Brasil, sendo o Tityus serrulatus a espcie responsvel por acidentes de maior
gravidade e considerada a espcies mais venenosa da Amrica do Sul.
Tlson: ltimo segmento do abdome; em sua extremidade distal h um
ferro onde desemboca a glndula de veneno.

Os caros e carrapatos apresentam cefalotrax e abdome fundidos, o


que lhes d ao corpo o aspecto de um segmento nico. Os carrapatos so
hematfagos. Existem espcies zooflicas, antropoflicas e eclticas. Algumas
espcies de carrapatos so importantes vetores de doenas para o homem e os
animais, como encefalites e viroses, febres recorrentes, doena de Lyme, febre
maculosa, babesiose e tularemia. A ao deletria que os carrapatos exercem
sobre seus hospedeiros pode ser de diferentes tipos. Quando extraem um
grande volume de sangue, ou h um alto nvel de infestao, pode-se dizer que
uma ao espoliativa. Caso desencadeiem uma reao alrgica ou irritante no
hospedeiro, causada pelo contato com as substncias contidas em sua saliva,
dizemos que ocorreu uma ao txica. Caso estejam infectados com algum
agente patognico, como vrus, bactrias ou protozorios, que possam ser
transmitidos ao hospedeiro durante o repasto sanguneo, dizemos que houve
uma ao patognica.
Os caros podem ser predadores, fitfagos, detritfagos e importantes
ectoparasitas humanos, como o Demodex folliculorum, que habita o folculo
piloso humano e determina o aparecimento dos chamados cravos da face,
ou aqueles causadores de alergias e encontrados no p domstico, como
os caros do gnero Dermatophagoides. Outro caro, o Sarcoptes scabiei,
o agente causador da sarna humana. Suas fmeas penetram na pele, por
onde caminham, fazendo tneis epidrmicos nos quais deixam seus ovos. A
infestao da pele causa intensa coceira e costuma ser acompanhada por in-

Entomologia Mdica | 297

feces bacterianas associadas. Essas espcies sero vistas com mais detalhes
nas prximas sees.

2.4.4 Subfilo Hexapoda


Classe Insecta

O grande sucesso dos insetos deve-se em parte ao seu exoesqueleto, que


lhes confere uma mistura de flexibilidade e fora, permitindo que o inseto tenha
liberdade de movimento e, ao mesmo tempo, no perca em defesa e proteo.
O exoesqueleto constitudo de cutcula, a membrana mais externa, epiderme
e membrana basal. A cutcula uma camada relativamente fina de material
no celular que delimita a superfcie externa do corpo, de estrutura flexvel
e elstica. Imediatamente aps ser formada, branca, podendo permanecer
dessa cor em muitas formas jovens. Na maioria dos adultos, a cutcula passa
por um processo qumico que resulta no seu endurecimento e escurecimento,
processo denominado esclerotizao. A cutcula possui uma camada de cera
e formada por quitina um polissacardeo nitrogenado insolvel na gua ,
lcool, lcalis e cidos diludos, ou pelos sucos digestivos de outros animais.
A funo da cutcula evitar a perda de gua, prevenir a predao e prover
camuflagem. O exoesqueleto responsvel pela cor, que provm de pigmentos
oriundos de plantas e do metabolismo.
Exoesqueleto: cutcula de revestimento dos atrpodes formada por
protena e quitina.
Quitina: polissacardeo nitrogenado (C8H18O5N) insolvel na gua.

Os primeiros insetos viveram h mais de 300 milhes de anos. Os insetos


esto presentes em todos os ecossistemas do planeta: nos oceanos e rios,

298 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

nas florestas e desertos, e at na neve. Atualmente existem mais de 1 milho


de espcies catalogadas. Novas espcies, desconhecidas para a cincia, so
descritas diariamente. Os insetos so responsveis pela polinizao de mais de
70% de todas as plantas com flores. Sua importncia mdica est relacionada
transmisso de doenas como a malria, a dengue, a febre amarela e a
doena de Chagas, entre outras. A estocagem de alimentos e a produtividade
agrcola sofrem grandes perdas pela ao destruidora de muitas espcies de
insetos, que podem devorar lavouras inteiras, como os gafanhotos, ou transmitir
doenas para as plantaes.
Os insetos so animais invertebrados, com exoesqueleto quitinoso e trs
pares de patas. O corpo dividido em trs partes: cabea, trax e abdome.
Nessas duas ltimas partes, pode-se notar uma segmentao mais evidente.
Na cabea, encontram-se um par de antenas e um par de olhos compostos,
nos quais a imagem se forma em mosaico. Junto da boca, esto as peas, ou
aparelhos bucais especializados. As antenas so apndices mveis que podem
funcionar como rgos olfativo, auditivo, gustativo e ttil.
No trax, esto as patas e asas (quando presentes). Em algumas espcies,
existem halteres ou balancins, cuja funo o equilbrio e a direo do voo.
Os insetos desprovidos de asas, como a traa-dos-livros, so denominados
pteros; os que possuem um par de asas so os dpteros; os que dispem de
dois pares de asas so chamados tetrpteros. As asas podem ser agrupadas
nos seguintes tipos: membranosas, tgminas, litros e hemilitros. As asas dos
besouros tm o par anterior espesso, formando uma carapaa protetora, e
so chamadas litros. Alguns insetos, como as formigas e os cupins, tm asas
apenas nos seus estgios sexualmente ativos, enquanto os demais membros da
sociedade (soldados, operrias) no possuem asas.
Os insetos apresentam fecundao interna, e as fmeas so ovparas, depositando os ovos, para se desenvolverem, fora do corpo. Formas especiais de
reproduo, como a partenognese, a pedognese, e a poliembrionia, tambm
so observadas.

Entomologia Mdica | 299

A excreo dos insetos, cujo principal resduo metablico o cido rico,


feita pelos tbulos de Malpighi. O sistema nervoso ganglionar, com um
gnglio cerebroide bem desenvolvido e um cordo nervoso ventral. rgos
auditivos esto presentes, como o rgo timpnico, localizado no trax ou
no abdome. Machos de mosquitos pertencentes famlia Culicidae possuem
receptores de som, chamados rgos de Johnston, nas antenas.
Todo inseto tem:
exoesqueleto quitinoso
trs pares de patas
peas bucais externas, ou ectognatas
de cinco a doze segmentos abdominais

a) Posio taxonmica
Os insetos pertencem classe Insecta. As ordens Diptera, Hemiptera,
Anoplura, Siphonaptera e Homoptera, que sero detalhadas nas prximas
sees, so de interesse mdico; as ordens Lepidoptera e Coleoptera tm
certo interesse mdico, pois podem causar envenenamento se ingeridas.
b) Morfologia externa dos insetos
O conhecimento da morfologia importante, pois ela se relaciona com
a funo, ou seja, tipos de alimento, parceiros e habitat, que, por sua vez,
guardam relao com a epidemiologia das doenas. As asas e a funo do
voo, por exemplo, do aos mosquitos e s moscas capacidade de procurar
hospedeiros de forma mais efetiva que os piolhos. A procura de abrigo
dentro do domiclio humano tambm facilita a proximidade com o homem.
A coevoluo entre o tipo de aparelho bucal e o tipo de alimentao dos
diferentes insetos hematfagos com ciclos de parasitos causadores de doenas
no homem determina uma interao especfica na qual, muitas vezes, apenas

300 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

uma espcie de inseto funciona como vetor de determinado parasito. Exemplos dessa interao so os ciclos da leishmaniose tegumentar e da malria.
Os flebtomos tm a probscide curta, cortam os tecidos, permitindo o
extravasamento do sangue para uma pequena leso sob a pele, da qual sugam
diretamente o sangue. Como as formas infectantes da leishmnia ficam situadas
nas bordas da leso, a leishmnia ingerida junto com o sangue e fragmentos
do tecido dilacerado. Os mosquitos, por sua vez, tm probscide longa
que permite a eles ingerir sangue como atravs de uma agulha de seringa. O
plasmdio da malria corre livre pelas veias do hospedeiro e sugado pelo
mosquito. Essas adaptaes morfolgicas ao longo da evoluo propiciaram o
desenvolvimento da relao parasitohospedeiro e dos ciclos de transmisso
nos estgios que atualmente observamos.

Figura 1. Esquema de um inseto apresentando a morfologia externa e a interna:


A) Cabea: antena (1), ocelo inferior (2), ocelo superior (3), olho composto
(4), crebro e gnglios cerebrais (5), gnglio subesofgico (31) e peas bucais
(32); B) Trax: protrax (6), artria dorsal (7), tubos traqueais e espirculos (8),
mesotrax (9), metatrax (10), primeiro par de asas (11), segundo par de asas
(12), tarsmero (21), garras tarsais (22), tarso (23), tbia (24), fmur (25),
trocnter (26), intestino anterior (estomodeo) (27), gnglios torcicos (28), coxa
(29) e glndula salivar (30); C) Abdome: intestino mdio (mesntero) (13),
corao (14), ovrio (15), intestino posterior (proctodeo) (16), nus (17),
vagina (18), gnglios abdominais (19) e tbulos de Malpighi (20).
Ilustrao: Adaptada de Jaworski, 2008.

Entomologia Mdica | 301

As estruturas que fazem parte do aparato bucal dos insetos so o lbio,


o labro, um par de palpos labiais, um par de palpos maxilares e o clpeo.
As peas do aparato bucal so modificadas em cada grupo de insetos, dependendo dos hbitos alimentares. Assim, de acordo com esses hbitos, o
aparelho bucal pode ser sugador, mastigador, triturador e lambedor.
Tipos de aparato bucal
dos insetos
sugador
mastigador
triturador
lambedor

De acordo com o grupo de insetos, as antenas possuem diferentes formatos e tm funes variadas, como olfativas e acsticas. Com as antenas, os
insetos podem encontrar alimentos, hospedeiros e parceiros sexuais, podem
se comunicar e evitar a predao, atravs de feromnios, que so substncias
qumicas liberadas e captadas pelos sensores contidos nas antenas.
O trax dividido em trs segmentos: protrax, mesotrax e metatrax.
Cada segmento tem um par de patas e, nos insetos alados, um ou dois pares
de asas: um no mesotrax, outro no metatrax. Cada segmento torcico consiste em placas endurecidas, ou escleritos. Os escleritos dorsais so chamados
notos, os laterais so chamados pleura e os ventrais, esternos. O 1 segmento
do protrax o pronoto. O pronoto o esclerito dorsal do protrax, que
pode estar modificado em vrias ordens.
As patas anteriores esto inseridas no protrax, as patas mdias, no mesotrax e as posteriores, no metatrax. Cada pata tem seis partes principais,
listadas, do corpo poro distal, como coxa, trocnter, fmur, tbia, tarso
e garras. O fmur e a tbia podem ser modificados com espinhos. Como o
aparelho bucal e as antenas, as patas dos insetos so modificadas para funes
diferentes, dependendo do ambiente e do estilo de vida.

302 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Trax dos insetos


as inseres de asas e pernas ocorrem no trax
as divises do trax so protrax, mesotrax e metatrax
o trax apresenta aberturas para trocas gasosas
Patas dos insetos
anteriores
mdias
posteriores
Os tipos de pata so importantes para caracterizar os hbitos
do inseto:
saltatrias saltam
raptoras captura de presas
cursoriais correm
natatrias nadam
gressoriais andam
fossoriais escavam
As patas tm seis segmentos:
coxa
trocnter
fmur
tbia
tarso
garras

Os insetos tm muitos tipos de asas; num mesmo espcime pode at


mesmo coexistir mais de um tipo de asa. As veias da asa so um carter
taxonmico importante na caracterizao dos gneros e espcies. Na maioria
dos insetos, a presena de escleritos axilares permite que as asas se dobrem
sobre o inseto. Isso possibilita aos insetos caberem em espaos menores.

Entomologia Mdica | 303

c) Abdome
O abdome contm a maioria dos rgos vitais e pode apresentar at doze
segmentos. Os segmentos abdominais dorsais so denominados tergo; os ventrais, esterno. Aberturas chamadas espirculos para trocas de gases podem ser
encontradas no tecido conjuntivo entre o tergo e os esternos. As estruturas
reprodutivas dos machos incluindo o edeago, ou pnis, e frequentemente
um par de claspetes esto situadas no 9 segmento; as estruturas reprodutivas das fmeas esto localizadas nos 8 e 9 segmentos abdominais. O ltimo
segmento pode trazer apndices, que so chamados cercos.

Figura 2. Alguns himenpteros possuem cercos modificados que


permitem a eles perfurar certas superfcies para a oviposio.
Ilustrao: Reproduzida de University of Minnesota, s.d.

d) Morfologia interna dos insetos


Como mencionado anteriormente, os insetos possuem simetria bilateral.
O corpo, geralmente alongado, segmentado e dividido em cabea, trax e
abdome. A percepo sensorial, a integrao neural e a ingesto de comida
so funes localizadas na cabea. Alguns rgos com funes digestivas,
respiratrias e circulatrias, incluindo o corao, esto localizados no trax. No
abdome, esto localizados outros rgos dos sistemas digestivo, respiratrio
e circulatrio, alm dos sistemas excretor e reprodutor.

304 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Todos os msculos dos insetos, inclusive os do tubo digestivo e do


corao, so de tipo estriado esqueltico. Para mover antenas, patas, asas
e outros apndices, geralmente h msculos flexores e pares antagnicos de
msculos. A hemolinfa e a elasticidade da cutcula colaboram nos movimentos.
O tamanho reduzido dos insetos combinado com a quantidade de
msculos permitem movimentos como andar, saltar e voar grandes distncias,
carregar pesos, localizar parceiros e alimentos, e nadar. A agilidade conferida
pelo sistema muscular d aos insetos preciso de movimentos, o que lhes
permite escapar de agresses do hospedeiro e de predadores.
O sistema nervoso dos insetos consiste em um crebro, localizado na
cabea, e em um cordo nervoso, localizado ventralmente, com gnglios em
cada segmento, que podem estar fundidos ou no.
Muitos rgos dos insetos produzem hormnios, a maioria com funo de
controle nos processos reprodutivos e de metamorfose e muda. As clulas
neurossecretoras segregam um ou mais hormnios com papel no crescimento,
metamorfose e reproduo. O corpora allata produz hormnio juvenil cuja funo
a de inibir a metamorfose; esse hormnio est envolvido na vitelognese, na
funo das glndulas reprodutivas acessrias, na produo de feromnio e no
comportamento sexual. O corpora cardiaca produz um hormnio importante
na diferenciao de ovrios e glndulas reprodutivas acessrias, e tambm na
oognese. A glndula protorcica est envolvida na produo de ecdisona,
que o hormnio responsvel pela muda na metamorfose.
Grande nmero de espcies de insetos vive parte ou a totalidade de sua
vida na gua nas estratgias de controle da populao desses insetos.

O sistema circulatrio dos insetos formado por um nico vaso, que se


localiza na parte dorsal, da cabea at a poro posterior do abdome, e por
onde flui a hemolinfa. O corao pulsa de maneira peristltica, empurrando o
sangue da cabea para o abdome.

Entomologia Mdica | 305

Os crustceos e os aracndeos empregam a hemolinfa como veculo de


distribuio de oxignio e gs carbnico gases respiratrios , usando o
pigmento respiratrio hemocianina, semelhante hemoglobina dos aneldeos e
dos vertebrados. A distribuio dos gases respiratrios em insetos, quilpodes
e diplpodes se d por um sistema de canais, chamados traqueias, pois sua
hemolinfa no possui pigmentos respiratrios.
A respirao do inseto realizada sem pulmes, por meio de um sistema
de tubos e de sacos internos que se difundem ou so bombeados ativamente, entregando o oxignio diretamente aos tecidos. O oxignio entra no corpo dos insetos atravs de espirculos e, em seguida, passa pelas traqueias e
traquolas, at atingir os tecidos. O dixido de carbono faz a rota contrria.
A troca gasosa se d por difuso simples. Os espirculos de um a dez
pares de pequenas aberturas no exoesqueleto localizam-se na parte lateral
do corpo, indo do mesotrax, passando pelo metatrax, e alcanando os
primeiros sete ou oito segmentos abdominais. Alguns insetos podem fechar
seus espirculos.
Os insetos tm um sistema digestivo completo, com um tubo que vai da
boca ao nus. O sistema excretor consiste nos tbulos de Malpighi, para a
remoo dos dejetos nitrogenados, e no intestino posterior, para a regulao
osmtica de gua e sais. O canal alimentar est dividido em trs regies:
estomodeu, mesntero e proctodeu. Alguns insetos produzem fluidos digestivos, secretados pelas glndulas salivares, para comear a digesto. Mediante
movimentos peristlticos, a faringe leva a comida para o papo, onde ela
estocada. O proventrculo pode ser provido de dentes que ajudam a reduzir
as partculas de comida possvel que ocorra absoro de comida nessa
regio. O mesntero, que produz e secreta enzimas digestivas, absorvendo os
produtos da digesto, possui clulas epiteliais com ou sem cutcula presente.
Esses tecidos so delicados e protegidos pela membrana peritrfica, que evita
o contato direto com a comida. A maioria das atividades enzimticas e de
absoro ocorre nessa regio. Na regio do proctodeu, situam-se os tbulos

306 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

de Malpighi, que diferem dos nefrdios por no lanarem resduos metablicos


diretamente no exterior, e sim no interior do intestino.
Membrana peritrfica: composta de quitina e protena, essa membrana
reveste o epitlio do intestino mdio. Ao separar o alimento do epitlio,
ela o protege da ao de microrganismos ingeridos com o alimento e da
abraso, alm de promover a compartimentalizao das enzimas digestivas,
aumentando a eficincia da digesto. de grande importncia no ciclo de
vida de diversos parasitos.
Glndulas salivares: so de grande importncia no ciclo de vida dos insetos
e na transmisso de parasitos, como os da malria, as leishmnias e alguns
tipos de tripanossomas.

A reproduo da maioria dos insetos interna, sexuada e dioica, ou


seja, indivduos machos e fmeas combinam material gentico. Contudo,
pode haver insetos que se reproduzem por partenognese, quando h
apenas fmeas, e hermafroditas, com ambos os sexos no mesmo indivduo.
As gnadas geralmente esto localizadas na parte posterior do abdome. As
fmeas possuem uma estrutura acoplada ao ovrio chamada espermateca, com
funo de estocagem de esperma. Nos machos, os vasos deferentes so dutos
que se unem e desembocam no tubo ejaculatrio. Os sistemas masculino e
feminino possuem glndulas acessrias.
grande a variao nos sistemas reprodutivos dos insetos. Essa variao
determina a taxonomia das espcies. Espcies estreitamente relacionadas so
muitas vezes isoladas geneticamente por pequenas variaes na morfologia
dos rgos reprodutivos que probem o acasalamento interespecfico. A
maioria dos insetos ovpara, mas os insetos tambm podem ser ovovivparos
ou vivparos. A chegada ao estgio adulto, ou imago, d-se depois de uma
ou mais metamorfoses. No imago, esto presentes todos os rgos que
caracterizam um adulto da espcie.

Entomologia Mdica | 307

Quadro 2. Morfologia interna de um inseto.


Sistema

Nervoso

Circulatrio

Respiratrio

Digestivo

Reprodutor

Ilustrao: Adaptada de University of Minnesota, s.d.

Esquema

308 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

3. Principais ordens de insetos de interesse mdico

As ordens da classe Insecta de interesse mdico relacionadas a doenas


humanas, ou antroponoses, e a doenas humanas e de animais, ou antropozoonoses, so Diptera, Hemiptera e Anoplura. Na ordem Diptera, sero vistas as
famlias Culicidae, Psychodidae, Simuliidae e Ceratopogonidae.
Antroponoses: doenas humanas
Antropozoonoses: doenas humanas e de animais

3.1 Ordem Diptera

A ordem Diptera se sobrepe em importncia mdica e veterinria a todas


as outras ordens de insetos, uma vez que grande nmero de espcies est
implicado na veiculao de doenas. Os dpteros tm como caracterstica um
par de asas, de onde advm o nome Diptera, e o segundo par transformado em
balancins (halteres), rgo que d equilbrio ao voo. Dentro dessa ordem existem
tambm espcies sem asas. Os dpteros so holometbolos, ou seja, sofrem
metamorfose completa durante o seu desenvolvimento. Na ordem Diptera,
subordem Nematocera, encontram-se trs famlias Culicidae, Psychodidae
e Ceratopogonidae e a subordem Brachycera (Muscomorpha), que so
de interesse mdico e sero descritas a seguir. As espcies hematfagas so
vetores biolgicos de diversos parasitos. As moscas saprfagas e coprfagas
so vetores mecnicos de diversos agentes etiolgicos de doenas bactrias,
vrus, fungos, cistos e oocistos de protozorios, larvas e ovos de helmintos.
Muitos dpteros frequentam habitaes humanas, hospitais, restaurantes, feiras
livres, lixes, dentre outros bitopos.
Diptera, do grego
di = dois + ptera = asas

Entomologia Mdica | 309

3.1.1 Famlia Culicidae


Pertencem famlia Culicidae insetos vulgarmente conhecidos como
mosquitos, carapans, muriocas ou pernilongos. So dpteros nematceros, de corpo delgado e porte pequeno, possuindo, como os demais
membros da ordem Diptera, um par de asas e um par de halteres. Os
culicdeos diferem dos outros dpteros pela presena de escamas nas veias
alares. No possuem ocelos. So insetos holometbolos, cujas formas
imaturas habitam diferentes colees hdricas, dependendo da espcie.
Apresentam acentuado dimorfismo sexual, sendo os machos menores do
que as fmeas e com as antenas plumosas. As fmeas so, em sua maioria,
hematfagas, alimentando-se do sangue de vertebrados para o desenvolvimento de seus ovos. Tal comportamento alimentar resulta na transmisso de
diversas doenas ao homem e aos animais. Os patgenos que estiverem no
sangue ingerido podero se multiplicar e infectar os rgos e as glndulas
salivares das fmeas, sendo transmitidos a outros vertebrados em um prximo repasto sanguneo. Essa caracterstica tem feito aumentar o nmero de
pesquisas sobre a famlia. Encontrados em praticamente todos os continentes, com cerca de 3.500 espcies formalmente descritas, distribudas em
44 gneros e 145 subgneros, os culicdeos possuem grande capacidade
vetorial, veiculando diversos agentes patognicos. A regio neotropical
detm 27% das espcies, sendo a regio de maior endemicidade dos
culicdeos e de onde provavelmente se originou essa famlia de dpteros,
no incio do Cretceo.
a) Taxonomia
Os culicdeos esto divididos em duas subfamlias: Culicinae e Anophelinae; essas, por sua vez se subdividem em 11 tribos: Aedeomyiini, Aedini, Culicini, Culisetini, Ficalbiini, Hodgesiini, Mansoniini, Orthopodomyiini,
Sabethini, Toxorhynchitini e Uranotaeniini. At a dcada de 1990, a tribo
Toxorhynchitini era considerada uma subfamlia dentro dos culicdeos (subfa-

310 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

mlia Taxorhynchitinae). Estudos sistemticos e filogenticos atuais situam esse


txon como tribo dentro da subfamlia Culicinae. Nessa tribo, encontram-se as
espcies sem interesse mdico, pois as fmeas no so hematfagas.
Para identificarmos certas espcies de culicdeos, as ferramentas da
taxonomia morfolgica clssica no satisfazem plenamente a correta
classificao dos espcimes. Essa identificao muitas vezes exige o uso
de mtodos da sistemtica integrada, que utiliza tcnicas da citologia, da
bioqumica e da biologia molecular como a citotaxonomia, PCR e RAPDPCR de regies do DNA, a anlise isoenzimtica e de hidrocarbonetos de
cutcula. A sistemtica integrada usa, ainda, tcnicas de estudos morfolgicos
tradicionais, empregando programas estatsticos e filogenticos para separar
e permitir um melhor conhecimento das espcies.
As tcnicas da sistemtica integrada so imprescindveis no estudo de complexos de espcies crpticas, que so morfologicamente idnticas, porm no
trocam material gentico. Nesses complexos de espcies, as diferenas geralmente no esto restritas morfologia, podendo haver variaes em aspectos
biolgicos e/ou moleculares. Estudar o comportamento e a morfologia dessas
espcies essencial para entender as relaes entre os vetores e seus patgenos. Espcies crpticas de anofelinos tm caractersticas comportamentais
importantes, por exemplo, na epidemiologia da malria.
As espcies mais importantes, por serem vetores e pragas, pertencem aos
gneros Anopheles, Culex, Aedes, Psorophora, Mansonia, Haemagogus e
Sabethes. Alm de transmitirem a malria, algumas espcies de Anopheles so
vetores de filarioses Wuchereria bancrofti, Brugia malayi e Brugia timori e
de algumas arboviroses. Determinadas espcies de Culex transmitem a filria
Wuchereria bancrofti e uma variedade de arboviroses. As espcies de Aedes
so vetores importantes de febre amarela, de dengue, do vrus do Nilo Ocidental e de muitas outras arboviroses. Em certas reas, so igualmente vetores
das filrias Wuchereria bancrofti e Brugia malayi. As espcies de Mansonia
transmitem algumas arboviroses, Brugia malayi e, s vezes, Wuchereria bancrofti.

Entomologia Mdica | 311

Os mosquitos Haemagogus e Sabethes so vetores da febre amarela e de


outras arboviroses nas Amricas do Sul e Central. O gnero Psorophora so
pragas das Amricas do Sul e do Norte, cujos indivduos, ao atacarem em alta
densidade, tm picada muito incmoda, alm de transmitirem alguns arbovrus.
Muitas espcies de mosquitos, mesmo no sendo vetores de doenas, podem
ser incmodas pela picada.
b) Caractersticas gerais
Como a maioria dos insetos, os culicdeos apresentam o corpo dividido em
cabea, trax e abdome, sendo essa diviso observada tanto nas formas adultas quanto nas formas larvais. Nas pupas, porm, podemos definir outro tipo
de diviso, que consiste em cefalotrax (cabea fundida ao trax) e abdome.
O tamanho dos adultos est em torno de 0,5 cm, sendo os machos geralmente menores que as fmeas. Os culicdeos so insetos holometablicos, ou seja,
tm metamorfose completa desde o ovo at a fase adulta alada, passando por
quatro estdios de larva e uma fase de pupa livre.

Figura 3. Aspecto da morfologia externa de um culicdio adulto fmea: A)


cabea, trax e abdome, vista lateral; B) cibrio; C) escudo e escutelo, vista
dorsal; D) cabea, vista dorsal; E) abdome, vista dorsal; F) asa, vista lateral.
Ilustrao: Tereza Fernandes da Silva Nascimento, reproduzida de Consoli e Loureno-de-Oliveira e Silva, 1987.

312 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 4. Ciclo biolgico dos mosquitos.


Ilustrao: Reproduzida de Forattini, 1973.

As fmeas depositam seus ovos diretamente na gua, nas bordas dos criadouros ou em substratos midos flutuando na gua, em diferentes tipos de
criadouros, dependendo da espcie. A escolha do local para a oviposio
responsvel pela distribuio da espcie na natureza e nos diferentes tipos
de locais de reproduo. Fatores fsicos, biolgicos e qumicos influenciam
a escolha dos criadouros. Dentre os fatores fsicos, esto a luminosidade, o
comprimento de onda da luz refletida no criadouro, a temperatura. Dentre os
fatores biolgicos, esto a presena ou ausncia de vegetais e microrganismos.
J dentre os fatores qumicos, esto a presena de subprodutos de vegetais
e microrganismos, oxignio dissolvido e a salinidade. As fases imaturas se
desenvolvem no meio aqutico. O aparelho reprodutor da fmea formado
por um par de ovrios situados na poro posterior do abdome, os quais
esto repletos de ovarolos. Esses ovrios se conectam, atravs de ovidutos
laterais, a um oviduto principal, que desemboca na cmara genital ou vagina.
As espermatecas, que variam de uma a trs, so quitinizadas e se abrem na
vagina. O aparelho genital feminino tambm pode apresentar uma glndula

Entomologia Mdica | 313

acessria e uma bursa copulatria, ou vagina. O aparelho reprodutor do


macho composto por um par de testculos alongados, localizados dorsoventralmente na altura dos 5 e 6 segmentos abdominais. Cada testculo possui
um vaso eferente, que desemboca em um ducto deferente, e duas vesculas
seminais fundidas ao vaso deferente, podendo possuir ainda duas glndulas
acessrias ladeando essas vesculas. A genitlia masculina ou rgo copulador
dos culicdeos sofre uma rotao de 180 no decorrer do primeiro dia ou
mesmo nos dois primeiros dias de emergncia do adulto, e as estruturas que
eram ventrais passam a ser dorsais e vice-versa. Esse processo chamado de
inverso. O acasalamento s pode ser iniciado aps a total rotao da genitlia do macho. Curiosamente, os primeiros indivduos a emergir das pupas em
um criadouro so os machos. Isso d a eles tempo para que sua genitlia esteja
apta a realizar o processo de cpula quando as fmeas emergem.
Quanto ao acasalamento, os mosquitos podem ser divididos em dois
grupos: espcies estenogmicas e eurigmicas. As espcies estenogmicas se
acasalam em pequenos espaos, durante o voo ou pousadas sobre uma superfcie. As espcies eurigmicas precisam formar enxames, os quais, por sua vez, so
dependentes de maiores espaos e de condies fsicas e biolgicas especiais,
como intensidade luminosa, presena de referenciais e correntes de ar. Existem
espcies facultativas que, embora estenogmicas, como Aedes aegypti e Culex
quinquefasciatus, j foram encontradas participando de enxames na natureza.
O acasalamento nos mosquitos geralmente ocorre antes do primeiro repasto
sanguneo da fmea, mas tambm pode ocorrer depois. Aps a cpula, os espermatozoides so armazenados na espermateca das fmeas e vo gradativamente
fecundando os ovos durante o processo de postura. Isso pode ocorrer vrias
vezes, com apenas uma cpula. Verificou-se, por exemplo, em Aedes fluviatilis,
at quinze desovas fertilizadas por espermatozoides provenientes de uma nica
cpula. Entretanto, isso no significa que a fmea s copule uma vez; ela pode
mesmo ser inseminada por vrios machos em um voo nupcial.
Tanto os machos quanto as fmeas necessitam de uma fonte de alimentao
rica em carboidratos, a qual, de maneira geral, provm de seivas de plantas,

314 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

frutos e flores. O acmulo de glicognio e triglicerdeos determina o potencial


de atividade e longevidade desses insetos. S as fmeas so hematfagas,
pois da alimentao sangunea depende o desenvolvimento de seus ovos. No
entanto, os mosquitos da tribo Toxorhynchytini constituem exceo a essa
regra, uma vez que as fmeas no so hematfagas. Da hematofagia decorre a
importncia mdica e econmica dos culicdeos. H necessidade de protenas
e de pelo menos dez aminocidos, como arginina, isoleucina, leucina, lisina,
fenilalanina, treonina, triptofano, valina, histidina e metionina na dieta da fmea
para que ocorra uma produo normal de ovos.
Eurigmicas: do grego

eurs, eurea, eur = largo + gmos = casamento


Estenogmicas:, do grego

stens = estreito + gmos = casamento

Subfamlia Anophelinae
Pertencem a essa subfamlia os insetos transmissores da malria, conhecidos
vulgarmente por fininho ou agulhinha.
a) Taxonomia
O gnero Anopheles compreende seis subgneros: Nyssorhynchus,
Kerteszia, Stethomyia, Lophopodomyia, Anopheles e Cellia. O subgnero
Cellia de importncia mdica no Velho Mundo.
b) Caractersticas gerais
So mosquitos delgados, sem muitas cerdas, de colorao geral branca
e preta. Os adultos so desprovidos de cobertura contnua escamosa nos

Entomologia Mdica | 315

segmentos abdominais, sendo possvel observar a existncia de conjuntos localizados desses anexos. O escutelo apresenta a margem arredondada, exceto
no gnero Chagasia. Os palpos femininos so de comprimento equivalente
ao da probscide, exceto no gnero Bironella. Os ltimos segmentos palpais
do macho so em forma de clave. Outra marca do dimorfismo sexual so as
antenas com flagelos mais plumosos, nos machos, e o toro, ou 2 segmento
antenal, maior do que o das fmeas. A garra tarsal do tarso anterior nica
e denteada. Os anofelneos podem ser facilmente distinguidos dos demais
culicdeos graas ao posicionamento do seu corpo em relao ao substrato.
Ao pousarem, mantm a probscide e o corpo em linha reta, formando um
ngulo reto ou quase reto com a superfcie onde esto pousados. As larvas so
desprovidas de sifo respiratrio. Possuem cabea mais longa do que larga, a
cerda 1 do 1 ao 7 segmento abdominal palmada. Por causa da ausncia
do sifo respiratrio, as larvas de anofelneos tambm podem ser facilmente
reconhecidas entre os outros culicdeos, pois assumem postura horizontal em
relao superfcie lquida do criadouro quando necessitam respirar. Na gua,
movimentam-se de forma brusca, flexionando o corpo muito rapidamente. As
pupas possuem trompa ou tuba respiratria curta, de aspecto alargado, e com
abertura em forma de fenda que percorre a trompa at a base. A cerda 9 do
3 ao 8 segmento abdominal apresenta frequentemente aspecto espiniforme.
Os ovos so postos isoladamente e contam com flutuadores expanses dispostas bilateralmente. Cada flutuador comporta uma srie de compartimentos,
chamados de gomos ou costeletas, contendo ar, e isso permite a flutuao dos
ovos no meio lquido.
Os subgneros Stethomyia e Lophopodomyia no possuem importncia
epidemiolgica. Na regio neotropical, os subgneros que encerram espcies
de interesse epidemiolgico so Anopheles, Kerteszia e Nyssorhynchus.
c) Importncia mdica
A subfamlia Anophelinae inclui os mosquitos vetores da malria. O subgnero Nyssorhynchus constitui o grupo de anofelneos que encerra o maior

316 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

nmero de vetores, principais ou secundrios, da malria humana. No Brasil, o


principal vetor o Anopheles darlingi. Outros importantes vetores em nosso
pas so Anopheles albitarsis, Anopheles aquasalis e, no subgnero Kerteszia,
Anopheles cruzii e Anopheles bellator.
Subfamlia Culicinae
A subfamlia Culicinae engloba vrios vetores de doenas para o homem
e animais, como dengue, febre amarela, arboviroses e filarioses. A subfamlia
Culicinae est subdividida em dez tribos; delas, as tribos Aedini, Culicini,
Mansoniini e Sabethini so as de maior interesse mdico.
Arbovrus: do ingls
arthropod borne vrus = vrus transmitido por artrpodes
A febre amarela uma arbovirose, causada por um vrus
da famlia Flaviviridae, com ciclos silvestre e urbano
A) Tribo Aedini
a) Taxonomia
A tribo Aedini est composta por doze gneros; deles, trs ocorrem no
Brasil: Aedes, Haemagogus e Psorophora. As espcies de Aedes de importncia mdica encontram-se nos subgneros Stegomyia, que inclui o Aedes
aegypti e o Aedes albopictus, e no subgnero Ochlerotatus, que inclui o
Aedes scapularis e o Aedes taeniorhynchus.
b) Caractersticas gerais
As espcies tm hbitos variveis de hematofagia, mas geralmente so
agressivas e picam durante o dia ou no crepsculo vespertino. Os aedini depositam os ovos separadamente, em intervalos de um dia ou mais. A postura de
ovos feita, de preferncia, na borda de uma coleo de gua ou na superfcie

Entomologia Mdica | 317

da gua, em guas limpas existentes em barris, potes de barro, vasos, cacos de


garrafa, ou na borda de locais midos sujeitos inundao. Os ovos resistem
dessecao por vrios meses. Ao contato com a gua, as larvas eclodem. Por
essa caracterstica, os aedini preferem criadouros transitrios, que se enchem
com a gua das chuvas, o que tambm determina o aumento da populao
desses mosquitos durante a poca chuvosa. O ciclo de vida dura de 11 a 18
dias, em temperaturas de 26C. Uma fmea pode fazer doze ou mais repastos
sanguneos em um ms, fato que de importncia epidemiolgica. exceo
do gnero Haemagogus, os aedini so mosquitos com escamas brancas e pretas no trax e nas asas, e cuja morfologia caracterstica de cada espcie. Os
Haemagogus so mosquitos com escamas coloridas e iridescentes.
c) Importncia mdica
Os aedini transmitem dengue, febre amarela, vrus Oropouche e Mayaro,
encefalite Rocio e vrias outras arboviroses e filarioses: Aedes aegypti vetor
da dengue e da febre amarela urbana; Aedes albopictus vetor potencial
de dengue; Aedes scapularis apresentou vrios arbovrus isolados e foi incriminado como vetor do vrus da encefalite Rocio e como vetor potencial da
filria Wuchereria bancrofti; Aedes taeniorhynchus foi encontrado infectado
na natureza com vrios arbovrus, e considerado vetor potencial da filria
Dirofilaria immitis.
As vrias espcies do gnero Psorophora so mosquitos vorazes e que
atacam em grande nmero, podendo se tornar pestes em si. Psorophora ferox
foi encontrada naturalmente infectada com arbovrus causadores de encefalites
e portando ovos da mosca Dermatobia hominis, causadora da miase conhecida
como berne.

Haemagogus janthinomys vetor primrio de febre amarela silvestre no


Brasil; j Haemagogus leucocelaenus e Haemagogus albomaculatus tm sido
incriminados como vetores secundrios da febre amarela.

318 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

B) Tribo Culicini
a) Taxonomia
A tribo Culicini est composta de quatro gneros, dos quais Culex e Deinocerites so encontrados no Brasil.
b) Caractersticas gerais
Os culicini so mosquitos que exercem a hematofagia noite ou no crepsculo vespertino. Gostam de picar aves e humanos. As colees de gua onde
as fmeas depositam os ovos variam de espcie para espcie. As fmeas de
culicini podem depositar seus ovos em colees de gua pura ou estagnada,
no ambiente silvestre, semissilvestre ou nas imediaes do domiclio humano.
Os ovos so desprovidos de flutuadores e so postos aglutinados, na vertical,
formando uma jangada. As larvas tm sifo respiratrio e dispem-se em ngulo perpendicular ou oblquo superfcie da gua. O ciclo de vida de ovo a
adulto de 10 a 11 dias. Quando em repouso, os espcimes adultos ficam
com o corpo paralelo superfcie. Os culicini so mosquitos de aspecto cinza
ou marrom e possuem escamas escuras nas asas.
c) Importncia mdica
Na tribo Culicini encontra-se o gnero Culex, de vetor da filariose bancroftiana e da malria aviria. A espcie Culex quinquefasciatus o mosquito
comum, espcie cosmopolita que ataca o homem noite; Culex quinquefasciatus transmissor da filria Wuchereria bancrofti, que causa elefantase; Culex
quinquefasciatus, Culex nigripalpus, Culex coronator e Culex declarator so
espcies que j foram encontradas infectadas, na natureza, com arbovrus.
C) Tribo Mansoniini
a) Taxonomia
A tribo Mansoniini est composta de dois gneros: Mansonia e Coquilettidia.

Entomologia Mdica | 319

b) Caractersticas gerais
Os mansoniini so mosquitos grandes e vorazes. Atacam em grande nmero, a qualquer hora do dia, podendo se constituir em pestes no s para o
homem, mas tambm para os rebanhos. As fmeas de mansoniini depositam
seus ovos juntos, em crculo, flutuantes ou submersos, perto de plantas flutuantes. As larvas e pupas desses mosquitos tm a caracterstica especial de
retirarem o oxignio que respiram de sacos aerferos de plantas flutuantes, no
precisando ir at a superfcie da gua para respirar. As larvas se alimentam de
matria orgnica em suspenso. Os adultos so mosquitos grandes, com trax
de aspecto felpudo e escamas largas nas asas.
c) Importncia mdica
Na tribo Mansoniini, o gnero Mansonia possui espcies importantes pela
agressividade e ao espoliativa quando em grande nmero. Vrias espcies
de Mansonia, como Mansonia humeralis, Mansonia indubitans e Mansonia
amazonensis, so espcies cuja agressividade e ao espoliativa as fazem ser
consideradas pestes frequentemente associadas a lagos de hidreltricas. Mansonia titillans foi encontrada naturalmente infectada com arbovrus causadores
de encefalites e doenas febris, e portando ovos da mosca Dermatobia hominis, causadora da berne.
D) Tribo Sabethini

a) Taxonomia
A tribo Sabethini est composta por catorze gneros, com cerca de 420
espcies. Nove gneros esto na regio neotropical Isostomyia, Johnbelkinia,
Runchomyia, Shannoniana, Trichoprosopon, Sabethes, Limatus, Wyeomyia e
Onirion com cerca de 225 espcies. Entretanto, por causa da dificuldade
na identificao das espcies, acredita-se que o grupo deva ser maior.

320 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

b) Caractersticas gerais
Os mosquitos da tribo Sabethini so mosquitos silvestres que apresentam
no s grande diversidade morfolgica e biolgica, mas tambm beleza incomum, graas s escamas coloridas, com reflexos metlicos, que lhes recobrem
o corpo. A distribuio geogrfica das espcies da tribo Sabethini se d
nas regies Neotropical, Oriental e na Australsia. Apenas algumas espcies
ocorrem na Amrica do Norte. Os sabetneos so mosquitos de hbito diurno, e suas formas imaturas se desenvolvem quase que exclusivamente em gua
acumulada em diferentes tipos de plantas fitotelmatas bromlias, helicnias,
buritis, bambus e arceas, dentre outras , mas tambm podem se desenvolver
em certos recipientes naturais, como ocos de rvores e sementes, e em folhas
cadas no cho.
Diversas espcies de sabetneos apresentam comportamento diferenciado,
nas diferentes fases de desenvolvimento, do comportamento das demais espcies de mosquitos. Os adultos, por exemplo, quando pousados, mantm as
pernas posteriores voltadas para cima, sobre o trax. As fmeas, principalmente aquelas de espcies dos gneros Sabethes e Wyeomyia, antes de pousarem
para realizar a hematofagia, aproximam-se e recuam, em vrios crculos de voo
em torno do hospedeiro. Esses mosquitos, portanto, so considerados mosquitos de ndole tmida, em oposio ao comportamento agressivo de outras
espcies de mosquitos. Em relao postura dos ovos, tambm h, entre os
sabetneos, comportamentos peculiares, como a postura de ovos atravs de
pequenos orifcios em bambus ou entre estreitas axilas de plantas, observada
em algumas espcies de Wyeomyia. Um comportamento de oviposio muito
especial e nunca observado em outros grupos o descrito para Trichoprosopon digitatum: as fmeas de Trichoprosopon digitatum permanecem pousadas
sobre sua postura, protegendo-a, e ali continuam durante o desenvolvimento
de seus ovos at a ecloso das larvas.

Entomologia Mdica | 321

Figura 5. Sabethes sp.

Ilustrao: Genilton Vieira (Laboratrio de Produo


e Tratamento de Imagem/IOCFiocruz).

As larvas de algumas espcies dos gneros Runchomyia e Wyeomyia,


que apresentam as maxilas do aparato bucal muito desenvolvidas, tm
comportamento agressivo, predador e mesmo canibal, atacando formas imaturas
de outras espcies, podendo ou no com-las.
Para a cpula, os machos no fazem enxame, como a maioria dos mosquitos, pois so estenogmicos. Os machos e as fmeas possuem o corpo
revestido por escamas de reflexos metlicos e aparentemente utilizam esses reflexos para a mtua atrao. J foram descritos elaborados comportamentos de
corte, envolvendo a utilizao de um substrato, durante a cpula de Sabethes
cyaneus e Sabethes chloropterus. Os machos dessas duas espcies efetuam
movimentos rtmicos com o corpo e, principalmente, com as pernas para atrair
as fmeas para o acasalamento.
c) Importncia mdica
Por se tratar de mosquitos silvestres, os sabetneos esto constantemente em
contato com diferentes tipos de animais que lhes servem de fonte de alimentao sangunea, ambiente com grande diversidade de patgenos. Com exceo
do gnero Sabethes, espcie vetora que participa do ciclo silvestre da febre

322 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

amarela, o papel dos sabetneos na epidemiologia de ciclos silvestres de vrias


outras arboviroses e parasitoses no est esclarecido.

3.1.2 Famlia Psychodidae


Os psicoddeos so insetos cosmopolitas, ou seja, esto amplamente difundidos na superfcie terrestre, vivendo preferencialmente em ambientes silvestres
com muita umidade. Algumas espcies desenvolveram capacidade adaptativa
para frequentar os ambientes prximos s habitaes humanas. Alguns grupos
vivem associados a ambientes modificados pela ao antrpica, como banheiros, bueiros, estaes de tratamento de gua e esgotos. Graas sua abundncia na natureza, suas formas imaturas desempenham um papel ecolgico
importante na decomposio de nutrientes. So holometbolos e as formas
imaturas podem se desenvolver em meios aquticos, semiaquticos ou em habitats terrestres de muita umidade. Alguns psicoddeos criam-se com frequncia
em redes de encanamentos domiciliares. Algumas dessas espcies, como o
Telmatoscopus albipunctatus, embora no hematfagas, j foram incriminadas
como vetores mecnicas de patgenos humanos. As formas imaturas tambm
podem ser importantes na sinalizao da qualidade do ambiente e atuam como
purificadores de sistemas de esgoto. Os adultos apresentam voo curto e geralmente saltitam na superfcie de pouso; tm hbitos noturnos, mas em ambientes
sombreados podem ser encontrados pousados nas horas claras do dia.
Algumas espcies de psicoddeos so consideradas como um dos mais
primitivos grupos de dpteros. Registros fsseis indicam que so originrios do
Perodo Tercirio (65 milhes de anos atrs) e h evidncias fsseis de que
possam ter existido desde o Jurssico, h 208 milhes de anos.

Entomologia Mdica | 323

Figura 6. Aspecto geral da morfologia de um psicoddeo adulto.


Ilustrao: Reproduzida de Forattini, 1973.

Subfamlia Phlebotominae
Os flebotomneos tiveram sua origem possivelmente durante o perodo
Cretcio Inferior. No Brasil, de acordo com a regio geogrfica, so
popularmente conhecidos como birigui, mosquito-palha, cangalinha, anjinho,
arrupiado e tatuquira.
a) Taxonomia
As subfamlias Sycoracinae e Phlebotominae so aquelas que apresentam
interesse mdico, por serem hematfagas. Apenas a subfamlia Phlebotominae
tem espcies vetores de doenas, como leishmanioses, bartonelose e vrias
arboviroses.
Em todo o mundo, so conhecidas mais de oitocentas espcies de
flebotomneos, sendo 65% delas da regio neotropical. No Brasil, h mais
de 250 espcies descritas, as quais representam 31% do total mundial e
48% das que ocorrem na regio neotropical. Da subfamlia Phlebotominae,
existem trs gneros no Novo Mundo: Lutzomyia, Brumptomyia e Warileya.
No Velho Mundo, so igualmente trs os gneros existentes: Phlebotomus,
Sergentomyia e Chinius.

324 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

b) Interesse mdico
Os flebotomneos participam da transmisso de doenas ao homem, cujos
agentes etiolgicos podem ser bactrias, arbovrus e protozorios, destacandose, entre os ltimos, as leishmnias. Algumas espcies so dotadas de notvel
grau de antropofilia, o que lhes confere importante papel na veiculao de
patgenos humanos. Espcies dos gneros Phlebotomus e Lutzomyia so
incriminadas como vetores de leishmanioses. A hematofagia em flebotomneos
est restrita s fmeas.
c) Caractersticas gerais
Os adultos apresentam tegumento cuticular de fina espessura, o que os
torna sensveis s flutuaes de temperatura e umidade. Em geral, apresentam
atividade noturna, que se inicia no crepsculo vespertino e pode alcanar o
crepsculo matutino. Os flebotomneos so de porte pequeno, tm em torno
de 4 mm, e possuem corpo piloso, de tonalidade variando do amarelo-palha
ao castanho e asas de formato lanceolado, alongadas e hialinas, densamente
revestidas de cerdas que, na maioria das vezes, permanecem eretas, dando
ao inseto um aspecto bem caracterstico (fig. 7). So diicos, de fecundao
interna e holometablica.

Figura 7. Adulto fmea de flebotomneo ingurgitado.


Foto: Elizabeth Rangel (Laboratrio de Transmissores de Leishmaniose/IOCFiocruz).

Entomologia Mdica | 325

Os ovos tm forma elipsoide ou ovoide. Logo aps a postura,


apresentam-se esbranquiados ou amarelados, mas, em algumas horas, tornamse castanho escuro. Cada fmea coloca em mdia quarenta ovos. A postura
feita isoladamente ou em pequenos grupos. Os ovos aderem-se ao substrato
por meio de uma substncia viscosa, rica em cidos graxos, produzida pelas
glndulas acessrias. Essa substncia recobre os ovos e responsvel pela
impermeabilizao gua, podendo atuar ainda como feromnio de oviposio,
atraindo e estimulando a oviposio. A postura ocorre cerca de 5 dias aps o
repasto sanguneo, e a ecloso dos ovos se d em 5 a 7 dias. Tanto as fmeas
capturadas na natureza quanto as criadas no laboratrio morrem durante ou
logo aps a postura. As fmeas tm concordncia gonotrfica, isso , ovipem
a cada repasto sanguneo.
As larvas so terrestres e criam-se embaixo das camadas foliculares que
revestem o solo, em ocos de rvores, frestas de rochas, tocas de animais
silvestres ou nos espaos entre as razes tubulares, em condies de alta umidade
e abundante matria orgnica. So esbranquiadas, de aspecto vermiforme e
cobertas de cerdas. A pea bucal da larva do tipo mastigador, e elas se
alimentam de matria orgnica em decomposio.
Na face ventral do 1 ao 7 segmento abdominal, observam-se falsas
patas. Os dois ltimos segmentos abdominais mostram morfologia modificada
para se adaptar funo locomotora. Neles, esto implantadas as cerdas
caudais, responsveis pela fixao da larva por ocasio da muda.
As larvas passam por quatro estdios, que duram ao todo em torno de
20 dias, antes de se tornarem pupas. As pupas so esbranquiadas e/ou
amareladas, e sua cor vai escurecendo medida que se aproxima a emergncia
do adulto. O processo de pupa at a emergncia do adulto leva em torno de
10 dias (fig. 8). As pupas possuem comportamento caracterstico: enrugam
a ltima exvia larval e prendem-se ao substrato elas no se locomovem,
executam apenas movimentos de flexo e extenso e no se alimentam.
Sua respirao area e feita por um sistema de traqueias que se abrem

326 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

em espirculos dispostos simetricamente, aos pares, nas faces laterais do


cefalotrax e no 8 segmento abdominal da pupa.
Considerando-se o comportamento tanto dos adultos quanto das
formas imaturas, os flebtomos so denominados criptozorios. Os
criptozorios so animais que vivem grande parte da vida escondidos em
abrigos midos, com pouca ou nenhuma luminosidade e movimentao
de ar, abandonando-os somente quando ocorre mudana das condies
ambientais ou para se alimentarem. Sua atividade est muito correlacionada
s mudanas na intensidade da luz. Portanto, esperado que seu
comportamento seja diretamente afetado por variaes ocorridas nas
diferentes fases lunares, quando as noites podem ter maior ou menor
luminosidade. As fmeas tm antropofilia mais intensa durante a lua cheia,
quando as noites so mais claras.

Figura 8. Ciclo evolutivo de flebotomneo:


A) Ovo; B) Larva; C) Pupa; D) Diferentes fases do ciclo.
Fotos: Reproduzidas de Pessoa e Martins, 1982.

Entomologia Mdica | 327

Os flebotomneos de ambos os sexos alimentam-se de nctar, seiva de


plantas, frutas maduras e de uma substncia rica em carboidratos e aminocidos
excretada por insetos afdeos e coccdeos. S as fmeas so hematfagas. A
probscide das fmeas adaptada para puno e suco, e apresenta uma
extremidade serrilhada. Como nos mosquitos, o sangue rico em protenas propicia a maturao dos ovos. Parece existir uma atividade antibacteriana e antifngica no papo das fmeas. Esse aspecto da fisiologia das fmeas permite a
transformao, diferenciao e multiplicao da leishmnia dentro do aparelho
digestivo, favorecendo o estabelecimento da infeco e uma maior capacidade
de transmisso dos parasitos para o hospedeiro vertebrado, uma vez que as
leishmnias no crescem na presena de fungos e bactrias.
O abdome consta de dez segmentos, sendo os trs ltimos modificados
para conformar a genitlia. No macho, a genitlia compe-se de trs pares
de apndices. A fmea apresenta os trs ltimos segmentos abdominais arredondados, encaixados uns nos outros quando em repouso, o que torna
a extremidade do seu corpo arredondada. A abertura anal encontra-se no
10 segmento abdominal, e a ela se ligam apndices largos e arredondados,
chamados cercas. Internamente, nessa regio, encontra-se um par de espermatecas, de importncia taxonmica.

Figura 9. Tipos de espermateca de fmeas de flebotomneo.


Ilustrao: Reproduzida de Galati, 2003.

328 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 10. Genitlia de macho de flebotomneo.


Ilustrao: Reproduzida de Forattini, 1973.

Figura 11. Variaes especficas da genitlia masculina dos flebotomneos.


Ilustrao: Reproduzida de Galati, 2003.

Entomologia Mdica | 329

No rgo genital masculino, os canais deferentes vindos dos testculos


terminam na bomba genital, onde est localizado o edeago. A genitlia
masculina tem valor taxonmico, pois nela existem espinhos e cerdas que
variam em nmero, tamanho e forma, de espcie para espcie cuja funo
a de apreenso da fmea no momento da cpula.

3.1.3 Famlia Simuliidae


Os insetos do gnero Simulium so conhecidos popularmente como
borrachudos ou piuns. Os simulideos so insetos holometbolos, de tamanho
relativamente pequeno, de cor geralmente escura ou em tons castanhos.
a) Taxonomia
As espcies de interesse mdico encontram-se no gnero Simulium.
b) Interesse mdico
A importncia mdica dos simulideos deve-se ao fato de as espcies
do gnero Simulium, como Simulium guianenses, Simulium oyapockense e
Simulium roraimense, serem vetores da filria Onchocerca volvulus, que causa
a oncocercose. No homem, as microfilrias permanecem na derme ou migram
para tecidos conjuntivos olhos, rins , formando aglomerados de adultos.
Na pele, ocorrem ndulos de oncocerca, despigmentao e perda da elasticidade. As microfilrias podem causar alteraes oculares decorrentes de
reaes inflamatrias, envolvendo microfilrias mortas, no globo ocular, ocasionando cegueira.
Os borrachudos tambm representam um grave problema com sua picada.
As picadas causam intenso prurido e edema, que duram, em geral, vrios dias,
podendo acarretar infeces secundrias. O quadro mais srio em pessoas
sensveis, nas quais aparece eritema, febres, linfangite e complicaes alrgicas.

330 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

c) Caractersticas gerais
As fmeas e machos adultos podem viver de 3 a 4 semanas na natureza.
As fmeas depositam seus ovos sobre pedras, galhos e folhas ou em substratos
encontrados em cachoeiras, rios ou crregos. Cada fmea coloca em mdia,
por postura, duzentos a trezentos ovos, que amadurecem em 5 a 6 dias, dependendo da temperatura da gua e da espcie. Aps esse perodo, as larvas
eclodem e se fixam. As larvas se locomovem, aderidas aos substratos, por meio
de uma teia produzida por substncia salivar. A fase larval dura aproximadamente
15 dias, depois dos quais a larva se torna pupa, em um casulo. Os stios de
desenvolvimento ovolarvapupaadulto so cachoeiras, rios ou crregos, com
correnteza e guas cristalinas. Aps 4 dias, o casulo se rompe e o adulto, dentro
de uma bolha de ar, atinge a superfcie da gua.
Os adultos podem viver na natureza por mais ou menos 3 a 4 semanas.
O raio de voo dos adultos de aproximadamente 40 km de distncia a partir
do curso dgua. Os adultos usam como suporte de descanso rvores e plantas herbceas. Apenas as fmeas adultas so hematfagas. Os adultos machos
alimentam-se de sucos vegetais. As fmeas alimentam-se do sangue de mamferos e aves; algumas espcies preferem o homem. O ato da picada rpido e
silencioso, e dura de 3 a 8 minutos. Por causa das propriedades anestsicas da
saliva, no momento em que ocorrem, as picadas so indolores. A atividade de
alimentao das fmeas se realiza principalmente nos perodos da manh e da
tarde. O sangue ingerido utilizado para o desenvolvimento dos ovos no interior
das fmeas. O desenvolvimento dos ovos varia conforme a temperatura ambiente.

Figura 12. Desenho de um simulideo.


Ilustrao: Reproduzida de Hatlen, 2006.

Entomologia Mdica | 331

3.1.4 Famlia Ceratopogonidae


O maruim ou mosquito-plvora um inseto dptero membro da famlia
Ceratopogonidae.
a) Taxonomia
O gnero Culicoides engloba as espcies de interesse mdico.
b) Interesse mdico
O maruim o responsvel pela transmisso do vrus Oropouche, uma
virose que provoca dores no corpo, febre e fotofobia. Insetos dessa famlia
so tambm responsveis pela virose da lngua azul (Bluetongue disease) de
ovinos e bovinos.
c) Caractersticas gerais
Os maruins so insetos de pequenas dimenses. Suas larvas vivem na gua
doce ou salgada, conforme a espcie. hematfago e antropoflico, e penetra
pelo meio dos cabelos e por dentro das roupas, causando urticria com suas
doloridas picadas. O mosquito-plvora encontrado no interior de matas
midas e brejos. de pequeno tamanho, 1 a 2 mm, e de cor preta. Tem
picada puntiforme que arde como um gro de plvora. As espcies do litoral
so conhecidas por maruim ou mosquitinho-do-mangue. Pode ser encontrado
desde o sul dos Estados Unidos at a Argentina. No Brasil, encontra-se comumente o Culicoides paraensis. O maruim se reproduz em lugares alagados,
como banhados, nos quais exista matria orgnica em decomposio.

3.1.5 Infraordem Muscomorpha (Cyclorrhapha)


Diversas espcies de moscas da infraordem Muscomorpha so vetores
de doenas humanas e pragas de plantas cultivadas. As espcies da famlia
Tephritidae atacam frutos, as moscas da famlia Agromyzidae so minado-

332 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

ras de folhas, as Pantophthalmidae cavam galerias em troncos ou galhos e


as Cecidomyiidae so galhcolas. Contudo, muitas espcies so benficas,
pois atuam ou como agente polinizador, algumas com comportamento muito especializado, ou como predadoras ou parasitoides de outros insetos
que so praga de lavouras.
a) Taxonomia
As famlias de dpteros de interesse mdico e forense no Brasil so da
subordem Brachycera, infraordem Stratiomyomorpha, famlia Stratiomyidae;
na infraordem Muscomorpha, a srie Aschiza, famlia Phoridae e Syrphidae;
na srie Schizophora, os Acaliptrados das famlias Sepsidae, Sphaeroceridae,
Piophilidae, Drosophilidae e Otitidae, e os Caliptrados das famlias Calliphoridae, Fanniidae, Muscidae e Sarcophagidae. De menor importncia, esto as
espcies das famlias Micropezidae, Richardiidae, Ropalomeridae, Lauxanidae,
Tephritidae, Tipulidae, Tabanidae, Anthomyidae e Dolichopodidae. Para a
identificao dos adultos e larvas de famlias de dpteros muscoides, sugeremse as chaves propostas por McAlpine et al. (1981).

Figura 13. Diferentes espcies de dpteros: A) Cochliomyia macellaria;


B) Chrysomya megacephala; C) Peckia chrysostoma;
D) Chrysomya albiceps; E) Eristalis tenax.
Fotos: Margareth Queiroz (Laboratrio de Transmissores de Leishmaniose,
Setor de Dpteros de Importncia Forense/IOCFiocruz) e Elliot Queiroz.

Entomologia Mdica | 333

b) Interesse mdico
Alm das espcies sugadoras, moscas saprfagas e coprfagas so
responsveis por transportar mecanicamente diversos agentes etiolgicos de
doenas, tais como bactrias, vrus, fungos, cistos e oocistos de protozorios,
larvas e ovos de helmintos, entre outros, pois muitos desses insetos frequentam
residncias, hospitais, aterros sanitrios, bem como locais de alimentao
coletiva, o que facilita a transmisso de doenas provocadas por esses agentes.
As larvas de vrias espcies de Muscomorpha, principalmente da famlia
Calliphoridae, merecem especial destaque em sade pblica, por produzirem
miases primrias, que so afeces causadas por larvas de moscas no homem,
animais domsticos e silvestres. Essas larvas so parasitos obrigatrios de
vertebrados. As miases causadas por Cochliomyia hominivorax so as mais
prevalentes nas regies quentes e midas dos pases tropicais e subtropicais.
A enfermidade ocorre com mais frequncia em indivduos que moram em reas
de periferias e zonas rurais. Em geral, a miase atinge reas descobertas com
leses no corpo, pois a oviposio da mosca mais fcil nesses locais. Nesse
caso, as miases so de tipo tecidual e podem invadir cavidades; vulgarmente
chamadas bicheiras, a infestao promovida por larvas biontfagas, que
parasitam tecidos sadios. Indivduos que vivem em locais com condies
precrias de higiene so os mais afetados pela doena.

Figura 14. Miase primria por Cochliomyia hominivorax.

Foto: Margareth Queiroz (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses,


Setor de Entomologia Mdica e Forense/IOCFiocruz).

334 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

As miases furunculoides, conhecidas por berne, so promovidas tambm


por larvas biontfagas que parasitam tecidos sadios, e so causadas pela mosca
da espcie Dermatobia hominis. Outro tipo de miase, a miase secundria
causado pela invaso dos tecidos por larvas necrobiontfagas, ou seja, aquelas
que tm afinidade por tecidos necrosados. Os gneros de moscas mais frequentes para esse tipo de miase so Sarcophaga e Fannia e a espcie Cochliomyia
macellaria. Nas Oestridae, as larvas so endoparasitas de mamferos bovinos,
equinos, ovinos, caprinos, roedores e marsupiais, dentre outros, e acidentalmente do homem. Esses insetos podem ser utilizados na entomologia forense.

3.2 Ordem Hemiptera


A ordem Hemiptera tem mais de 80 mil espcies e nela se incluem os
percevejos e as cigarras. Os hempteros so divididos, quanto aos hbitos,
em fitfagos, predadores e hematfagos. Os fitfagos se alimentam da seiva
de plantas e apresentam significativa importncia para o setor agrcola. Os
predadores se alimentam da hemolinfa de outros insetos, sendo importantes
no controle de insetos que so pragas agrcolas. Os hematfagos se alimentam
do sangue de vertebrados humanos e de outros animais e possuem interesse
mdico como vetores de patgenos.

3.2.1 Famlia Reduviidae


a) Taxonomia
Dentre as famlias que compe a ordem, destaca-se a Reduviidae, constituda de aproximadamente 22 subfamlias, das quais apenas a subfamlia
Triatominae hematfaga.
A subfamlia Triatominae, formada por percevejos, constituda de 15
gneros, classificados em cinco tribos e 140 espcies. A maioria delas ocorre
nos pases do continente americano. Ao todo, 40 espcies so da Amrica
do Norte, 28 das quais encontradas exclusivamente no Mxico. No Brasil,

Entomologia Mdica | 335

ocorrem 58 espcies, dentre elas grande parte no ambiente silvestre, sem


importncia epidemiolgica relevante.

Figura 15. Diferentes espcies de hempteros: A) Hemptero fitfago


subfamlia Metacanthinae; B) Hemptero predador da subfamlia Reduviinae;
C) Hemptero hematfago da subfamlia Triatominae.
Fotos: Catarina Lopes de Macedo (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses, Setor de
Entomologia Mdica e Forense/IOCFiocruz).

Os trs principais gneros de triatomneos envolvidos na transmisso da


doena de Chagas so Rhodnius, Panstrongylus e Triatoma. Esses gneros se
diferenciam facilmente pela largura da cabea e pela posio do tubrculo
antenfero em relao distncia anteocular aquele que vai da margem
anterior do olho ao pice do clpeo. O gnero Rhodnius apresenta a cabea alongada e cilndrica, com os tubrculos antenferos inseridos prximo
extremidade anterior da cabea. O gnero Triatoma tem cabea de tamanho
intermedirio, com tubrculos antenferos inseridos na metade da regio anteocular. O gnero Panstrongylus apresenta cabea globosa, com os tubrculos antenferos inseridos junto da margem anterior dos olhos compostos.
As principais espcies de interesse mdico no Brasil so Triatoma infestans, Panstrongylus megistus, Triatoma brasiliensis, Triatoma sordida e o
Triatoma pseudomaculata.

336 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 16. Os trs principais gneros envolvidos na transmisso da doena


de Chagas: A) Rhodnius; B) Panstrongylus; C) Triatoma.
Fotos: Catarina Lopes de Macedo (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses,
Setor de Entomologia Mdica e Forense/IOCFiocruz).

b) Interesse mdico
Os triatomneos hematfagos so conhecidos por diversos nomes nas diferentes regies onde se relata a sua ocorrncia; quase sempre, o significado
desses nomes est relacionado com a cultura regional e com as adaptaes do
inseto ao ambiente domiciliar. No Brasil, conhecido pelos seguintes nomes:
barbeiro, chupo, chupana, finco, bicudo, percevejo, bicho-de-parede,
bicho-de-parede preto, chupa-pinto, percevejo-do-serto, percevejo-francs,
percevejo-gaudrio, percevejo-grande, procot, prorocot, barato, bruxa,
piolho-de-piaava, quiche do serto, rondo, vunvun, cascudo.
Atualmente, tcnicas bioqumicas, moleculares e citogenticas, alm da
morfologia clssica, tm sido utilizadas para a identificao de muitas espcies
de hempteros.
O Triatoma infestans, um hemptero vetor da doena de Chagas, j foi
o principal vetor do parasito Trypanosoma cruzi no Brasil. Desde 2006,
no entanto, o Brasil recebeu o certificado emitido pela Organizao PanAmericana da Sade (Opas) e pela Organizao Mundial de Sade
(OMS) de erradicao da transmisso vetorial da doena de Chagas
pelo Triatoma infestans. Essa certificao foi fruto da intensificao das
aes de controle impetradas pelo Ministrio da Sade, em articulao com
as trs esferas de governo federal, estadual, municipal que conformam o
Sistema nico de Sade (SUS).

Entomologia Mdica | 337

c) Caractersticas gerais
O desenvolvimento dos triatomneos do tipo hemimetablico. As formas
jovens so muito parecidas com as formas adultas; entretanto, apenas os adultos possuem asas, podendo, portanto, voar. O ciclo de vida compreende uma
fase de ovo, cinco estdios de ninfa e a fase adulta. Para que ocorra a muda
de um estdio ninfal para o outro, inclusive do ltimo estdio ninfal para a fase
adulta, necessrio que os triatomneos realizem repasto sanguneo.
O tempo de desenvolvimento desde a fase de ovo at a fase adulta varia
em cada espcie, podendo oscilar de 6 meses a 2 anos. Logo aps a muda,
as ninfas e as formas adultas so rosadas; vo escurecendo posteriormente,
com o endurecimento progressivo da cutcula. O tempo mdio de vida de um
triatomneo de 1 a 2 anos.

Figura 17. Ciclo de vida de um hemptero.

Fotos: Catarina Lopes de Macedo (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses,


Setor de Entomologia Mdica e Forense/IOCFiocruz).

338 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

No ambiente silvestre, os barbeiros vivem em diversos abrigos rochas,


palmeiras, tocas e ninhos e se alimentam de mamferos, aves e rpteis. Entretanto, com as crescentes alteraes no ambiente natural, esses insetos passaram
a se instalar em construes que servem de moradia para humanos, bem como
em anexos utilizados para abrigar os animais domsticos. Dessa forma, a infestao das habitaes pelo inseto no est restrita somente s construes do tipo
pau-a-pique, onde se escondem em frestas e rachaduras, mas tambm ocorre
em casas de alvenaria, onde encontram abrigo atrs de mveis e de quadros
nas paredes e embaixo de colches.

Figura 18. A) Triatoma wygodzinskyi, espcie de triatomneo que habita o


ambiente silvestre e tem como abrigo as frestas de rochas; B) Coleta de ovos
de triatomneos embaixo de um colcho.
Fotos: Catarina Lopes de Macedo (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses,
Setor de Entomologia Mdica e Forense/IOCFiocruz).

A capacidade vetorial dos triatomneos determinada pelo grau de associao do inseto com o homem e seu domiclio e pelo tempo entre o repasto
sanguneo e a defecao. Ninfas e adultos se alimentam de sangue e so
capazes de se infectar e transmitir o parasito Trypanosoma cruzi, que depositado junto com as fezes do barbeiro e entra no organismo do hospedeiro
pela soluo de continuidade dada pela picada quando o hospedeiro se coa.

Ninfas em qualquer fase e os adultos machos e fmeas


dos barbeiros se alimentam de sangue.

Entomologia Mdica | 339

Algumas espcies depositam seus ovos soltos nos ectopos que habitam;
outras, entretanto, colocam seus ovos agrupados e aderidos aos seus hospedeiros ou ao substrato dos ectopos onde habitam.

3.2.2 Famlia Cimicidae


Os cimicdeos so os percevejos-de-cama.
a) Taxonomia
A espcie antropoflica mais comum o Cimex lectularius, encontrado em
climas temperados; Cimex hemipterus encontrado em regies tropicais, infestando aves e morcegos; Leptocimex boueti, encontrado nos trpicos da frica
ocidental e da Amrica do Sul, infesta morcegos e seres humanos. Existem,
ainda, outras espcies de percevejos que preferem o sangue de outros animais,
como pssaros ou morcegos.
b) Interesse mdico

Cimex lectularius leva cerca de cinco minutos para ingurgitar-se. O hospedeiro geralmente no acorda enquanto est sendo picado, pois a saliva
do percevejo contm anestsicos, alm de anticoagulantes. Sua picada pode
causar reaes alrgicas; at o momento, porm, no h descrio de doenas
transmitidas ao homem pelos percevejos. Uma caracterstica compartilhada com
a picada das pulgas a tendncia dos percevejos de exibirem um padro de
picadas sequenciais, em que as picadas so enfileiradas. Isso pode ser causado
pela perturbao do percevejo durante o repasto, que se reposiciona antes de
recomear a alimentao. Alternativamente, a explicao pode ser a de que o
percevejo estaria procurando repetidamente uma veia.
As respostas individuais do hospedeiro variam de acordo com o tipo da
pele, o ambiente e a espcie de percevejo. Em raros casos, as reaes alrgicas
s picadas podem se tornar srias, surgindo infeces bacterianas secundrias.

340 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Indivduos infestados podem apresentar ansiedade, stress e insnia. A infestao de uma casa por percevejos pode ser adquirida durante uma viagem,
quando eles podem se esconder nas bagagens. Mveis usados, ou a contiguidade com casas ou apartamentos infestados, tambm podem ser outro modo
de infestao.
Percevejos adultos conseguem viver at um ano sem repasto sanguneo.
Os percevejos so pequenos e geis. Muitas vezes, apenas o uso de inseticidas no consegue elimin-los. Deve se usar, para isso, uma combinao de
tratamentos, que inclui lavagem dos tecidos atingidos em temperaturas acima
de 49C, aspirao de todos os carpetes, mveis estofados e rachaduras na
madeira, eliminao do mofo e asperso de inseticidas em p, que costumam
conter vidro modo ou p de slica e agem como abrasivos e dessecantes,
entre outros.
c) Caractersticas gerais
Os percevejos so hemimetbolos, rpidos, geis, tm cor vermelho-amarronzada e so pteros. Os adultos, que podem viver at quatro anos, tm
aproximadamente 0,60 cm de comprimento, ou seja, so do tamanho de
uma semente de ma, e, como so achatados dorsoventralmente, podem se
esconder em pequenas frestas. Camas e sofs so os locais preferidos por esses
pequenos insetos, que podem ser encontrados ainda em poltronas, cadeiras
estofadas, cabeceiras e estrados de cama, cortinas, tapearias, fendas e buracos
nas paredes, molduras, armrios, bolsas, roupa, gavetas, livros velhos, papis
e pilhas de roupa. Nesses locais, os percevejos se escondem e depositam at
cinco ovos por dia.
As ninfas de percevejo so menores e translcidas. Os percevejos-de-cama
preferem exercer a hematofagia noite, quando o seu hospedeiro est dormindo, mas tambm podem exerc-la a qualquer hora do dia se lhes for oferecida
oportunidade. Os percevejos procuram por repasto sanguneo a cada 5-10
dias aproximadamente.

Entomologia Mdica | 341

As fmeas so inseminadas atravs da perfurao da cavidade abdominal


pelo aparato genital do macho, em um processo chamado inseminao traumtica. As fmeas pem, em mdia, 500 ovos durante suas vidas. As ninfas
eclodem em uma a duas semanas, e passam por cinco estgios at se tornarem
adultas, o que dura geralmente cinco semanas, temperatura de 25C.

Figura 19. Cimex lectularius, o percevejo-de-cama.


Foto: Reproduzida de Cuerden, 2007.

3.3 Ordem Anoplura

A ordem Anoplura agrupa insetos vulgarmente conhecidos como piolhos


e chatos. Existem aproximadamente 15 famlias de Anoplura. Entretanto,
apenas duas apresentam interesse mdico: Pediculidae e Phtiridae.

3.3.1 Famlia Pediculidae


Nessa famlia se encontram os piolhos.
a) Taxonomia

Pediculus o nico gnero da famlia Pediculidae. Dentro deste gnero,


apenas duas espcies so encontradas no homem: Pediculus capitis, parasito

342 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

cujo habitat so os cabelos da cabea, e Pediculus humanus, o piolho-docorpo ou muquirana. Os ovos so ovoides e apresentam oprculo na sua
extremidade mais larga. Pediculus humanus, que tem comprimento maior,
coloca seus ovos nas fibras das vestes, sendo tambm um vetor natural de
molstias como o tifo, febre recorrente e febre das trincheiras.

Figura 20. Pediculus capitis, o piolho-da-cabea.


Foto: Luzia Caputo (Laboratrio de Patologia, setor de Histotecnologia/IOCFiocruz.

3.3.2 Famlia Phtiridae


Nessa famlia encontram-se os chatos.
a) Taxonomia
A famlia Phtiridae tem um nico gnero, Phtirus, o qual, por sua vez,
tem duas espcies: Phtirus pubis ou chato, que parasita os pelos pbicos
humanos; e Phtirus gorillae, um ectoparasita de gorilas. Phtirus pubis no
possui diviso clara entre os tagmas, tendo a cabea e o trax fusionados.

Entomologia Mdica | 343

Figura 21. Phtirus pubis, o chato, parasito dos pelos pbicos humanos.
Ilustrao: Reproduzida de Rey, 2008.

b) Interesse mdico
Muitas espcies de piolhos podem ser, alm de ectoparasitas, pestes para
os animais e vetores de doenas como o tifo, a febre recorrente e a febre das
trincheiras. O tifo causado pela bactria Rickettsia prowazekii. A doena
se estabelece quando as fezes do parasito entram em contato com feridas na
pele do hospedeiro, permitindo que a bactria entre na corrente sangunea.
Os principais sintomas so dores de cabea, dores nas articulaes, febre alta
com delrios e erupo cutnea.
A febre recorrente causada por espiroquetas do gnero Borrelia, e pode
se apresentar de duas maneiras: forma epidmica, causada exclusivamente por
Borrelia recurrentis e transmitida de homem para homem pelo piolho Pediculus
humanus; uma forma endmica, causada por outras espcies de Borrelia e transmitida por carrapatos. A febre recorrente caracteriza-se por perodos de febre,
intercalados por outros no febris, com os perodos febris terminando em crise.
A febre das trincheiras uma doena infecciosa aguda causada por uma
bactria da famlia Rickettsiaceae, que tambm transmitida pelo Pediculus
humanus. O quadro clnico caracteriza-se por febre, cefaleia, mal-estar, dor e
fraqueza nas pernas. Essa doena teve grande incidncia no perodo das duas
guerras mundiais, por causa das precrias condies de higiene nas regies de
combate, ou seja, nas trincheiras, surgindo da o nome da doena.

344 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

c) Caractersticas gerais
Os piolhos apresentam uma morfologia altamente adaptada ao hbito ectoparasitrio, tendo corpo achatado dorsoventralmente, ausncia de asas, reduo
dos rgos visuais e estruturas modificadas para se manterem presos ao corpo
dos hospedeiros. Somente o abdome possui segmentao distinta. Os olhos so
reduzidos a apenas um omatdeo ou esto ausentes, no apresentando ocelos.
As peas bucais so do tipo picador-sugador, sendo constitudas por probscide curta (haustelo) com pequenos dentculos internos, eversveis, e estrutura
picadora, formada por trs estiletes, que se acomodam em um saco trfico. Os
ovos, conhecidos como lndeas, so ovais e operculados e sempre aderidos ao
hospedeiro. Aps a ecloso, a ninfa passa por trs mudas, formando o adulto.
Os piolhos mastigadores da ordem Mallophaga se alimentam de detritos
de pele, penas e pelos de aves e mamferos; os piolhos sugadores de sangue
da ordem Anoplura so parasitos exclusivamente de mamferos, inclusive do
homem. Os insetos de ambas as ordens so hemimetablicos e passam todo
o seu ciclo vital sobre os seus hospedeiros. A relao parasitohospedeiro
tende a ser especfica, e tem sido demonstrada estreita relao fisiolgica entre
os componentes do sangue de determinados hospedeiros e seus parasitos anopluros. Como os piolhos passam todo o ciclo sobre seus hospedeiros, sua reproduo tambm ocorre sobre o hospedeiro. De modo geral, as populaes
apresentam maior nmero de fmeas do que de machos. Em algumas espcies,
os machos so bastante raros.

3.4 Ordem Siphonaptera


Siphonaptera: do grego
siphon = tubo ou tubulao + aptera = sem asas
Os sifonpteros so insetos ectoparasitas, conhecidos como pulgas. As famlias Pulicidae, Tungidae e Rhopalopsyllidae so as de interesse mdico. A
denominao Siphonaptera apropriada a esses insetos, cujo aparato bucal

Entomologia Mdica | 345

adaptado para perfurar a pele. Os sifonperos no possuem asas. Na fase adulta, todas as pulgas so parasitos hematfagos. A maioria das espcies se alimenta
em mamferos menos de 10% das espcies tm pssaros como hospedeiros.
Uma grande diversidade de espcies ocorre nas zonas temperadas do planeta.
As pulgas so insetos holometablicos, ativos, com ps traseiros fortes
adaptados ao salto e um corpo achatado lateralmente, o que lhes permite
moverem-se facilmente por entre os pelos ou as penas dos hospedeiros. O
corpo da pulga duro e lustrado; coberto com muitas cerdas e espinhos
curtos dirigidos para trs, que tambm ajudam os movimentos no hospedeiro.
O corpo resistente da pulga pode suportar grande presso, uma adaptao
de sobrevivncia s tentativas de eliminao pela coceira. Mesmo quando
pressionada entre os dedos, a pulga sobrevive.
Ao contrrio dos piolhos, a maioria das pulgas gasta um tempo considervel
longe do hospedeiro. Os adultos, que vivem por um ano ou mais, podem sobreviver por semanas ou meses sem uma refeio de sangue. As pulgas adultas
so resistentes e podem ficar sem repasto sanguneo at por um perodo de um
ano. As pulgas possuem cerdas genais, em forma de pente, na regio frontal
da cabea e cerdas pronotais, chamadas ctendios, no trax. As pulgas pem
pequenos ovos esbranquiados, de forma oval, em lotes de vinte ou mais.
Entre 2 e 14 dias as larvas eclodem dos ovos.
A larva da pulga vermiforme, coberta por cerdas escassas, com aparato
bucal mastigador; as pulgas no tm olhos. As larvas, que raramente vivem no
corpo do hospedeiro, so encontradas geralmente livres, alimentando-se de restos orgnicos, inclusive de fezes das pulgas adultas. O perodo larval tem trs
estgios que duram de 7 a 14 dias, quando ento ocorre a formao da pupa.
As pupas so envoltas por um casulo de seda coberto de partculas de poeira.
Aps 14 dias, as pulgas emergem da pupa. Ao emergirem, as pulgas adultas
devem encontrar um hospedeiro dentro de duas semanas, seno morrem.
Uma vez que a larva da pulga precisa amadurecer no ninho do hospedeiro,
a pulga infesta somente animais que fazem ninho, como ratos, camundongos,

346 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

gatos e ces. Animais que no fazem ninho, como vacas, cavalos e cervos, no
tm pulgas. Em algumas espcies de pulgas, o ciclo reprodutivo da fmea
desencadeado por hormnios reprodutivos do hospedeiro-fmea. Dessa forma, fica assegurado que uma gerao nova de pulgas amadurecer antes que a
prole do hospedeiro deixe o ninho.
A importncia mdica das pulgas, alm da picada irritante e das alergias que
ocasiona, est na transmisso de micrbios patognicos para os seres humanos e
outros animais. Por exemplo, as pulgas do gato, Ctenocephalides felis, e do co,
Ctenocephalides canis, so hospedeiros intermedirios dos helmintos Dipylidium
caninum e Hymenolepis spp, que parasitam ces, gatos e seres humanos. A pulga do homem a Pulex irritans. A pulga do rato, Xenopsylla cheopis, o vetor
primrio de Yersinia pestis, bactria causadora da peste bubnica.

Figura 22. Imagem de uma pulga.

Foto: Luzia Caputo (Laboratrio de Patologia, setor de Histotecnologia/IOCFiocruz.

As pulgas podem ser controladas por inseticidas. Terras de diatomceas


e brax tem sido usados com sucesso no lugar de inseticidas, txicos para
animais e para o homem. A terra de diatomcea e o brax absorvem lipdeos
cuticulares do exoesqueleto, causando desidratao.
A umidade crtica para a sobrevivncia da pulga. Os ovos precisam de
umidade relativa de pelo menos 75% e as larvas precisam de pelo menos
50% para sobreviverem. Em reas midas, aproximadamente 20% dos ovos
sobrevivem at a idade adulta, enquanto em reas ridas menos de 5% completam o ciclo vital. As pulgas adultas precisam de temperaturas que variem

Entomologia Mdica | 347

de 21C a 32C para sobreviver. Baixas temperaturas retardam ou interrompem completamente o ciclo de vida da pulga. Uma combinao de umidade
controlada, temperatura e limpeza a vcuo pode ser suficiente para reduzir, e
mesmo eliminar, a infestao por pulgas.

3.4.1 Famlia Tungidae


Nessa famlia encontra-se o bicho-do-p.
a) Taxonomia
A espcie de interesse mdico Tunga penetrans, conhecida como bichodo-p. O bicho-do-p relativamente comum nas zonas rurais.
b) Interesse mdico
O bicho-do-p tem esse nome por penetrar na pele, geralmente entre os
dedos do p, onde a pele mais fina. A infestao se d usualmente ao se
andar descalo em currais, chiqueiros e praias infestadas. Recebe vrios nomes: batata, bicho, bich, bicho-de-cachorro, bicho-de-porco, bicho-do-p,
bicho-do-porco, bitacaia, chique, chitacaia, dengoso, espinho-de-bananeira,
esporo, jatecuba, matacanha (em Angola e Moambique), moranga, ngua,
olho-branco, olho-de-pinto, piolho-de-fara, pitxoca/pitxoka, pulga-da-areia,
pulga-de-bicho, pulga-do-porco, pulga-penetrante, sico, taura, tauru, tatarn, tuuru, tunga, tunguau, vitacaia, xiquexique, xquia, zunga, zunge, zunja.
A Tunga penetrans, que tem aproximadamente 1 mm de comprimento,
entra na pele do hospedeiro para se alimentar do sangue necessrio ao desenvolvimento dos ovos. No hospedeiro, o abdome da fmea se expande
enormemente, entre o 2 e o 3 segmento abdominal, e a pulga fica com
a forma de um saco redondo, com o tamanho de uma ervilha e repleto de
ovos. A permanncia da fmea fecundada do bicho-do-p dentro da pele do

348 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

hospedeiro humano e de outros animais causa coceira, dor, edema e ulcerao


que pode servir como porta de entrada para infeces bacterianas secundrias.
Infeces bacterianas graves so exemplificadas por lceras, ttano e mesmo
gangrena, que podem levar at mesmo amputao da perna.

Figura 23. Um tungdeo, o bicho-do-p.


Ilustrao: Reproduzida de British Museum of Natural History, 1909.

3.5 Ordem Blattaria


Blattaria ou Blattodea uma ordem de insetos cujos representantes so
popularmente conhecidos como baratas. um grupo cosmopolita, encontrado
em todo o planeta. Apenas 1% das espcies considerada sinantrpica.
a) Taxonomia
Dentre as espcies mais comuns esto Blatta orientalis, Blattella germanica
e Periplaneta americana. O registro fssil mais antigo de uma barata datado
do Perodo Siluriano, h aproximadamente 400 milhes de anos. No entanto,
as baratas de hoje mudaram pouco, permanecendo insetos no especializados.
As mudanas ocorreram na genitlia da fmea, na forma de pr os ovos e nas
asas. Na genitlia feminina, houve reduo do ovipositor, que no mais visvel
externamente. Em torno de 60 milhes de anos atrs, os ovos passaram a ser
colocados no interior de uma ooteca, em vez de individualmente, com o que
se evita a dessecao. As asas deixaram de ter como funo principal o voo,
havendo reduo das asas em alguns casos.

Entomologia Mdica | 349

b) Interesse mdico
Dentre os principais problemas de interesse mdico que a barata pode
ocasionar, est a sua atuao como vetor mecnico de patgenos diversos
como vrus, bactrias, fungos, protozorios e vermes; como vetor biolgico de
helmintos; e como vetor de reaes alrgicas, causadas pelo contato com as
fezes e exvias. Alm disso, a barata inutiliza alimentos, pois deixa um odor
repugnante por onde passa; ri e suja utenslios, como roupas e livros; praga
agrcola de relativa importncia, uma vez que ri razes e se alimenta de produtos armazenados; e causa problemas psicolgicos de nojo e medo.
c) Caractersticas gerais
As espcies Periplaneta americana, Blatta orientalis e Blattella germanica
so ovparas. As baratas so hemimetlicos e paurometablicos, ou seja, os
imaturos e adultos vivem no mesmo habitat. Dependendo da espcie, o tamanho das baratas varia de 3 mm a 10 cm de comprimento. As baratas tm
corpo oval, achatado dorsoventralmente e, em geral, de colorao escura. A
cabea curta, subtriangular, com peas bucais mastigadoras, antenas longas
e filiformes, geralmente dois ocelos e olhos compostos. Os olhos compostos
esto presentes na maioria das espcies, exceo das espcies caverncolas.
O trax possui trs pares de pernas do tipo ambulatoriais. Quando presentes,
h dois pares de asas, que podem cobrir o abdome.
As baratas gostam de lugares quentes e midos, podendo ser encontradas
sob pedras, cascas de rvores e no interior das edificaes humanas, onde preferem a cozinha e a rede de esgotos. As espcies sinantrpicas so onvoras,
tm hbitos gregrios e so noturnas. As baratas preferem a noite para procurar
alimento e parceiros para acasalamento e para realizar oviposio e disperso.
Durante o dia, permanecem escondidas, descansando. Na verdade, as baratas
passam 75% de seu tempo imveis. As baratas urbanas so capazes de viver
trs dias sem gua e dois meses sem comida.

350 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Na maioria das espcies, os ovos esto contidos em um estojo denominado ooteca. A ooteca varia em forma, tamanho e nmero de ovos de espcie
para espcie. O nmero de ovos dentro da ooteca pode variar de 4 a 50
ovos. A ooteca geralmente depositada em locais escondidos, e muitas vezes
cobertos com detritos, para manter a umidade e servir de camuflagem contra
predadores. A durao do estgio de ovo varia, dependendo da espcie e da
temperatura. Por exemplo, na barata americana, a durao da fase a 29C
de aproximadamente cinco semanas. A durao e o nmero de estgios ninfais
variam tambm segundo a espcie, o sexo e as condies ambientais. Em geral,
condies desfavorveis levam a um maior nmero de estgios. Para a barata
americana, a durao do estgio ninfal a 29C de aproximadamente oito
meses; a espcie apresenta entre 11 e 12 estgios. A diferena entre as ninfas
e os adultos est nas asas e nos rgos sexuais. Assim, nas ninfas, as asas esto
ausentes e os rgos sexuais no esto desenvolvidos.
As baratas tm muitos inimigos naturais: bactrias, vermes, fungos, protozorios,
artrpodes como caros, aranhas, besouros, escorpies , hempteros, himenpteros, vertebrados predadores e parasitos. Seis famlias de himenpteros, por exemplo, se desenvolvem nos ovos das baratas e algumas famlias de vespas alimentam
suas larvas com ninfas de barata.

Curiosidades
Para muitos povos e regies, as baratas tm um lugar de destaque no
folclore, havendo meno a elas em modinhas, supersties, jogos infantis,
medicina popular, provrbios, adivinhaes, ditados e na alimentao.
Na medicina popular, existem relatos do uso de Blatta orientalis
principalmente nas curas do alcoolismo, asma, bronquite, clicas intestinais,
dores de cabea e ouvido, furnculos e gripe. De fato, pesquisadores
russos e alemes dos sculos XIX e XX conseguiram comprovar o efeito
teraputico das baratas.

Entomologia Mdica | 351

Muitos povos orientais e indgenas usam baratas, ingeridas cruas ou


cozidas, na sua alimentao.
As baratas tambm so utilizadas como material didtico em aulas
de anatomia na rea de entomologia; como alimento na manuteno de
criaes de outros insetos; e como iscas por pescadores.
Em ecossistemas naturais, as baratas so importantes fontes de alimento
de diversas espcies de animais. Alm disso, as baratas atuam na reciclagem
dos nutrientes, uma vez que so saprfagas.

Figura 24. Periplaneta americana ou Blatta americana, uma espcie de barata.


Foto: Reproduzida de Rafael, Silva e Dias, 2008.

3.6 Ordem Acari

Os caros compreendem um grupo de artrpodes (aracndeos) de habitat e hbitos variados, e na sua maioria terrestres. No possuem cefalotrax
distinto, como nos outros aracndeos: o prprio abdome se funde aos demais
segmentos para constituir um nico segmento, denominado idiossoma. As quelceras e demais peas bucais esto reunidas em uma estrutura nica, denominada captulo ou gnatossoma. Os adultos e as ninfas possuem quatro pares de
pernas; na fase larval, apresentam apenas trs pares. Nessa ordem, esto os
carrapatos, os caros do corpo, dos clios e da poeira domstica. Podem ser

352 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

parasitos de mamferos, aves, rpteis e de outros artrpodes. Os caros so


achatados dorsoventralmente.

3.6.1 Subordem Ixodida, famlia Argasidae e Ixodidae


Um carrapato, ou carraa, um artrpode da ordem Acari. As famlias de
interesse mdico so as famlias Argasidae e Ixodidae.
a) Taxonomia
Os carrapatos mais comuns no Brasil so Boophilus microplus, Amblyomma
cajennense, Argas miniatus, Rhipicephalus sanguineus e Ornithodorus rostratus. Dentre os gneros de importncia, esto Argas; Dermacentor; Haemaphysalis, vetor da febre Q; Hyalomma e Rhipicephalus, vetores da babesiose e
teileriose; Ornithodorus, que transmite rickettsiose; e Ixodes, cuja saliva pode
causar prurido, eritema, febre e paralisia com contraturas, que pode ser fatal.
b) Interesse mdico
Os carrapatos so ectoparasitas hematfagos, responsveis pela transmisso de vrias doenas humanas e animais. O interesse mdico dos carrapatos
est no parasitismo espoliativo, na ao txica da saliva e no seu papel como vetor.
O parasitismo espoliativo causado pela hematofagia, ainda mais quando a infestao se d por grande nmero de espcimes. A ao txica causada pela saliva
dos carrapatos, que pode ser irritante, txica e alrgica. Alguns vrus causadores de
encefalites tambm podem ser transmitidos por carrapatos. A espcie Ixodes ricinus
e espcies do gnero Dermacentor causam, em vrios animais, paralisia por carrapato como resultado de uma toxina presente na saliva do inseto. A toxina atinge o
sistema nervoso, provoca falta de coordenao motora dificulta o andar e causa
tombos e incapacidade de permanecer em p , vmitos e pode levar letalidade. Os carrapatos podem ser vetores de vrus, bactrias e protozorios. Dentre as
doenas mais importantes causadas pela transmisso de patgenos aos humanos,

Entomologia Mdica | 353

esto a febre maculosa, causada por Rickettsia rickettsii e tambm denominada


rickettsiose; a borreliose, ou febre intermitente, incluindo a doena de Lyme, causada por vrias espcies de Borrelia sp; a febre Q; as babesioses; as teilerioses; as
ehrlichioses; e as meningoencefalites causadas por carrapato.

Boophilus microplus, o carrapato-de-boi, vetor de doenas ao gado bovino.


O carrapato-estrela, Amblyomma cajennense, o parasito mais comum no homem
e vetor da febre maculosa causada por Rickettsia rickettsii a rickettsiose mais
prevalente no Brasil. O carrapato-estrela, que tem o tamanho de um feijo verde,
infesta o homem, mamferos domsticos e silvestres e aves. A forma larval o micuim: abundante nos pastos nos meses de maro a julho, pode ficar at dois anos
sem se alimentar, esperando um hospedeiro. O micuim causa coceira e inflamao
srias. O Argas miniatus, o carrapato-de-galinha, transmite aos galinceos a bouba,
doena infecciosa semelhante sfilis. O Rhipicephalus sanguineus, o carrapatovermelho-do-co, tpico de ces e gatos; os adultos de Rhipicephalus sanguineus
preferem instalar-se nas patas e nas orelhas do co e so de difcil controle.
c) Caractersticas gerais
Existem espcies microscpicas de carrapatos de at 0,25 mm de dimetro. Os carrapatos vivem em touceiras, no capim, no cho, entre as madeiras,
em climas midos ou secos, em todos os continentes do planeta. Eles geralmente tm forma oval e, quando em jejum, so achatados no sentido dorsoventral, porm aps o repasto sanguneo ficam convexos e at esfricos. Os
carrapatos argasdeos, chamados de carrapatos moles, no possuem escudo,
seu corpo duro e o aparato picador pode ser observado em vista dorsal.
Os carrapatos ixoddeos, chamados carrapatos duros, possuem escudo, seu
corpo enrugado e o aparato picador ventral. A principal diferena entre os
carrapatos Argasidae e Ixodidae a permanncia no hospedeiro vertebrado.
Os argasdeos passam a maior parte do tempo livres no ambiente; normalmente no permanecem aderidos ao hospedeiro por perodos prolongados,
pois passam a maior parte do tempo escondidos em frestas e em abrigos

354 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

de animais, procurando o hospedeiro apenas para se alimentar, normalmente


quando os hospedeiros dormem. Os argasdeos so notveis por poderem
permanecer em jejum por perodos prolongados, de at mais de um ano, esperando pela oportunidade de se alimentar.
J os carrapatos da famlia Ixodidae permanecem longos perodos sobre
seus hospedeiros, com ciclos biolgicos de um a trs hospedeiros distintos.
Boophilus microplus, o carrapato-do-boi, por exemplo, um carrapato que
parasita um nico hospedeiro. Ele adere ao hospedeiro ainda na fase larval,
alguns dias aps a ecloso dos ovos. As larvas fazem o repasto sanguneo,
ingurgitam-se e realizam a muda, passando para ninfa e, posteriormente, chegando fase adulta. As fmeas caem no solo e procuram um local protegido
para realizar a postura dos milhares de ovos que produzem, morrendo em
seguida. J o carrapato-de-cavalo, Amblyomma cajennense, um carrapato
que parasita trs hospedeiros. As larvas e as ninfas caem ao solo para realizar
as mudas e em cada uma das mudas passam para outro hospedeiro, a fim de
fazer novo repasto sanguneo.

Figura 25. Carrapato argasdeo.


Foto: Reproduzida de Occi, s.d.

Entomologia Mdica | 355

Figura 26. A) Carrapato ixoddeo; B) Rostro magnificado.


Fotos: Reproduzidas de Occi, s.d.

Figura 27. Sequncia mostrando a dilatao do corpo


de um carrapato aps o repasto sanguneo.
Foto: Reproduzida de Koch, 1986.

3.6.2 Subordem Acarididae, famlia Sarcoptidae


Nessa famlia esto os caros causadores da sarna.
a) Taxonomia
Os caros da famlia Sarcoptidae so muito pequenos, de difcil visualizao a olho nu; possuem o corpo globoso e ligeiramente ovalado, com
rostro curto. As pernas so curtas e grossas, com ventosas tarsais ou pedicelos
simples e longos. Dois pares de pernas se localizam anteriormente, prximas
ao rostro; os outros dois pares esto situados mais afastados, posteriormente.

356 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Muitas espcies vivem como parasita da pele de mamferos e podem parasitar


o homem apenas acidentalmente. Dos caros da famlia Sarcoptidae, somente
o Sarcoptes scabiei encontrado parasitando o homem.
b) Interesse mdico

Sarcoptes scabiei um artrpode parasito da pele do homem, causador


da sarna. Suas fmeas cavam tneis em forma de S sob a pele do hospedeiro
para deposio dos ovos. As larvas eclodem em trs dias e movem-se sob a
pele; depois de trs ou quatro dias, transformam-se em ninfas octpodes e
amadurecem como caros adultos. Os caros adultos vivem de 3 a 4 semanas.
A movimentao dos artrpodes na pele do hospedeiro e a reao alrgica
que a acompanha produzem intenso prurido, que se intensifica noite. O ato
de coar danifica a pele e pode levar infeco bacteriana secundria sria. O
prurido e os caminhos avermelhados dos tneis em S na pele so os principais
sintomas da sarna. Os caros sarcoptes so transmitidos pelo contato direto.
So frequentes as infestaes de sunos por Sarcoptes scabiei.
c) Caractersticas gerais
A escavao da pele realizada pelo aparato bucal e por superfcies
cortantes presentes nas patas dianteiras do Sarcoptes scabiei. Os ovos so
postos pela fmea razo de 2 a 3 ovos/dia, durante aproximadamente dois
meses. Quando as larvas, que tm trs pares de patas, do caro sarcoptes
eclodem, saem para a superfcie da pele, procura de folculos pilosos onde
se alimentam e mudam para ninfas com quatro pares de patas. As fmeas tm
um estgio a mais de muda do que os machos. Assim, enquanto a fmea leva
17 dias para se tornar adulta, o macho se torna adulto entre 9 e 11 dias. A
fmea duas vezes maior em tamanho do que o macho.
Os caros sarcoptes adultos so esfricos, com dorso achatado e ventre
convexo como o de uma tartaruga, sem olhos, com mltiplas cerdas e com quatro

Entomologia Mdica | 357

pares de patas. As fmeas tm de 0,3 a 0,4 mm de comprimento e de 0,25 a


0,35 mm de largura; o tamanho dos machos metade do tamanho das fmeas.

Figura 28. Sarcoptes scabiei, aracndeo parasito da pele


do homem que causa a sarna.
Ilustrao: Reproduzida de Rey, 2008.

3.6.3 Subordem Actinedida, famlia Demodicidae


Na famlia Demodicidae est o gnero Demodex de caros, que parasitam
a face do homem.
a) Taxonomia
Cerca de 65 espcies de Demodex j foram descritas. As espcies que
parasitam o homem so Demodex folliculorum hominis, que habita os folculos
pilosos, e Demodex brevis, que habita as glndulas sebceas vinculadas aos
folculos pilosos.
b) Interesse mdico

Demodex folliculorum hominis e Demodex brevis so espcies antropoflicas


cosmopolitas conhecidas como caros dos clios, pois com frequncia so

358 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

encontradas nos clios. So tambm encontradas nas sobrancelhas, perto do


nariz, ouvido externo, podendo parasitar outras regies do corpo. Demodex
canis a espcie do co domstico que raramente causa infeco no homem.
A infestao por Demodex comum e geralmente sem sintomas, embora possam causar algumas doenas da pele.
c) Caractersticas gerais
As vrias espcies de Demodex so pequenos artrpodes parasitos que
vivem dentro ou no entorno de folculos pilosos e em glndulas sebceas ligadas
aos folculos pilosos de mamferos. Os caros da face adultos medem entre 0,1
mm e 0,4 mm de comprimento. O corpo alongado, semitransparente e consiste de dois segmentos fundidos, com quatro pares de patas no 1 segmento.
O corpo coberto de escamas que auxiliam no ancoramento dentro do folculo
piloso. O caro Demodex vive com a cabea dentro do folculo, alimentando-se
de clulas da pele e da matria sebcea que se acumula no folculo. O sistema
digestivo to eficiente que no existe orifcio excretor. A extremidade abdominal fica voltada para o interior do folculo. Os caros deste gnero no gostam de
luz. Especialmente noite, podem deixar o folculo piloso e andar vagarosamente
sobre a pele, a uma velocidade de 8 a 16 cm/hora. A fmea de Demodex
folliculorum mais curta e mais redonda do que o macho. Os machos e fmeas
de Demodex tm aberturas genitais, e a fecundao interna.
A reproduo ocorre na abertura do folculo piloso, e os ovos so colocados
dentro dos folculos pilosos ou das glndulas sebceas. Larvas de trs pares de
patas eclodem dos ovos aps 3-4 dias, e em 7 dias as larvas tornam-se adultos,
apresentando ento quatro pares de patas. Os caros crescidos deixam o folculoninho para procurarem outro folculo. Os adultos vivem durante vrias semanas.
Estima-se que a infestao em indivduos humanos idosos encontre-se
entre 96 e 98% desses indivduos, o que parece estar ligado quantidade
de matria sebcea mais alta que produzem. Os caros demodex podem

Entomologia Mdica | 359

ser observados, pelo microscpio, nos clios e nas sobrancelhas. Os caros


passam de hospedeiro pelo contato direto. Animais de diferentes espcies
hospedam diferentes espcies de caro demodex. Geralmente os caros de
uma espcie no so contagiosos para outra espcie. Na maioria dos casos,
os caros passam despercebidos, sem ocasionarem sintomas adversos; em
determinados casos, porm, relacionados com baixa do sistema imunitrio,
stress ou doena, as populaes do caro podem aumentar, resultando em
demodicose, patologia caracterizado por coceira, reaes inflamatrias e
granulomatosas, infeces secundrias e outras desordens da pele. A blefarite,
inflamao das plpebras, tambm pode ser causada por caros demodex.

Figura 29. Demodex folliculorum adulto.


Foto: Reproduzida de Rey, 2008.

3.6.4 Subordem Acaridida, famlia Pyroglyphidae


Nessa famlia esto os caros da poeira domstica, frequentemente observados no domiclio humano.
a) Taxonomia
Nessa famlia esto os caros sinantropoflicos Dermatophagoides farinae,
Dermatophagoides pteronyssinus e Euroglyphus maynei, com frequncia observados nas habitaes humanas de todo o planeta, e conhecidos como caros
da poeira domstica.

360 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

b) Interesse mdico
Os caros da poeira domstica se alimentam de detritos orgnicos, como
as descamaes da pele humana, abundantes no ambiente domstico. Os
caros da poeira da casa so uma causa comum da asma e provocam sintomas
alrgicos no mundo inteiro. As fezes dos caros da poeira domstica so fortemente alergnicas.
c) Caractersticas gerais
Os caros da poeira domstica adultos medem 0,5 mm de comprimento
e de 0,25 mm a 0,3 mm de largura. Eles apresentam cor azul cremosa, cutcula estriada, forma retangular e quatro pares de patas, possuindo idiossomo
ovoide e estriado. Como todo acari, os caros da poeira da casa tm oito
ps (exceto no primeiro estgio, quando tm trs pares). A vida mdia dos
machos de 10 a 19 dias. As fmeas grvidas vivem em torno de 70 dias,
colocando de 60 a 100 ovos. A exposio a temperaturas superiores a
60C e inferiores a -20C e umidade abaixo de 50% os destroem. Esse
aracndeo sobrevive em todos os climas, mesmo em altas altitudes.
Uma pessoa verte aproximadamente 1,5 g/dia de clulas epiteliais ou 0,30,45 kg/ano, o suficiente para alimentar aproximadamente 1 milho de caros. O controle dos caros da poeira domstica passa necessariamente pelo
controle da umidade, que deve ser mantida baixa. Os caros so encontrados
de preferncia nos quartos e nas cozinhas, vivendo em colches, tapetes,
estofados. Os alrgenos produzidos por eles esto entre os mais comuns alrgenos desencadeadores de asma. Alguns sinais principais de alergias causadas
por caros da poeira domstica so coceiras, espirros, olhos lacrimejantes e
vermelhos, coriza, febre do feno, obstruo pulmonar. A alergia pode ser
crnica. O p de boro usado frequentemente para erradicar caros da
poeira da casa pela desidratao que ocasiona aos caros.

Entomologia Mdica | 361

Figura 30. Dermatophagoides pteronyssinus, um dos caros da poeira domstica.


Foto: Reproduzida de University of Florida, s.d.

4. Tcnicas de coleta de insetos de interesse mdico

A coleta de espcimes de insetos necessria para conhecermos a epidemiologia das doenas. Quais espcies vivem em quais lugares, quando e em que
hospedeiro, so algumas das perguntas que se quer responder com as coletas.
Vrios tipos de equipamentos so usados para coletar insetos de interesse
mdico, como tubo manual de suco, armadilhas com iscas animais e luminosas,
armadilhas a gs e com feromnios.
Antes de iniciar a coleta de qualquer grupo de insetos, necessrio ter
em mente alguns parmetros, para que se saiba onde procurar os espcimes,
o que levar para campo, em que horrio do dia mais proveitosa a coleta,
como transportar o material coletado e como receber, triar e guardar o material
no retorno ao laboratrio.
Conhecimento da biologia e ecologia do inseto que se pretende
coletar: deve-se ter um mnimo de conhecimento a respeito do ciclo de
vida, dos principais criadouros, dos tipos de atrativos ou iscas e do horrio
de atividade do inseto em seu ambiente natural. De posse desses conhecimentos ser mais fcil encontrar no campo espcimes do grupo que se
quer estudar.

362 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Finalidade da coleta: necessrio definir qual o tipo de estudo que


est sendo desenvolvido e o tipo de material a coletar: se insetos adultos
ou formas imaturas, insetos mortos ou vivos. Definidos esses objetivos,
possvel programar no s o local adequado para a coleta, mas tambm
o material necessrio para realiz-la e quantos coletores sero necessrios
para o desempenho da tarefa.
Organizao do material: no dia anterior coleta deve ser preparado
todo o material que se necessita levar para o campo. O material deve
ser embalado adequadamente, para evitar danos ou extravio durante a
viagem, e colocado em uma caixa de fcil transporte e manuseio para
situaes de dificuldade no campo, como locais de difcil acesso, ngremes
ou alagados. Junto com o material de coleta, importante que se observem as regras de segurana, levando todos os equipamentos de proteo
individuais (EPIs) e equipamentos de proteo coletivos (EPCs), se for o
caso, necessrios para o tipo de coleta. Se a coleta for feita em perodos
regulares, semanais ou mensais, bom manter uma lista contendo todos
os itens necessrios junto da caixa de transporte dos insetos, de forma a
poder conferir a relao de itens com facilidade antes do dia da coleta,
repondo o material gasto ou inutilizado.
Programao do dia da coleta: o dia da coleta deve ser programado com
antecedncia com base em boletins meteorolgicos e na disponibilidade
de transporte e de pessoal.
Com os parmetros acima definidos, podemos reduzir o tempo gasto nas
coletas e calcular a quantidade de material que est sendo levada para o
campo, evitando-se desperdcio e excesso de peso, e contribuindo, ainda,
para manter no apenas a segurana das pessoas envolvidas nas coletas e no
transporte, mas tambm a integridade do material coletado.

Entomologia Mdica | 363

4.1 Coleta de formas adultas de insetos de interesse mdico

As formas adultas podem ser coletadas com rede entomolgica, capturadores de suco, bandeja dgua e armadilha luminosa, entre outros mtodos.
A rede entomolgica, tambm conhecida como pu, prpria para coletar insetos em voo. Consiste em um cabo de madeira com um aro de arame
numa extremidade, contendo um saco feito de tecido fil preso por uma das
pontas. A madeira deve ser leve para facilitar o manuseio. O cabo tambm
pode ser de alumnio. O dimetro do saco pode ser variado, levando-se em
considerao o tamanho do inseto que se quer coletar borboletas, mariposas, odonatas, vespas, cigarras, moscas. Porm, para insetos alados menores,
embora tambm seja utilizada, pode ser substituda pelo capturador de Castro.
O capturador de suco utilizado para capturar insetos alados quando
pousados sobre o hospedeiro para o repasto sanguneo. formado por um
tubo de vidro ou acrlico, provido de uma tela fina em uma extremidade,
qual est acoplado um tubo de borracha ou uma mangueira de garrote, que
servir para suco. Existem outros modelos de capturadores base de suco.
A suco pode ser com a prpria boca ou por uma bomba que gere presso
negativa. Sua finalidade aspirar o inseto para dentro do tubo de vidro. O
inseto poder ser transportado para uma gaiola, caso seja necessrio manter o
espcime vivo, ou para um frasco mortfero, contendo ter ou acetato de etila.
O capturador de suco excelente para a captura de mosquitos, moscas,
borrachudos, maruins e flebtomos, entre outros. A ideia desse tipo de capturador foi descrita em 1928 por Patrick Alfred Buxton, mdico entomologista
da London School of Hygiene and Tropical Medicine.

364 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 31. Capturador de suco.


Foto: Nataly Souza (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses/IOCFiocruz).

A bandeja dgua de fcil construo e emprego. Consiste numa frma


assadeira de bolo, quadrada, cujo fundo esteja pintado com uma colorao
atrativa, como o branco, o amarelo ou o verde. A tonalidade da cor pode
fazer toda a diferena no sucesso da coleta. A frma deve ser colocada no
solo e ficar cheia de gua, qual se acrescentam algumas poucas gotas de detergente, que servem para facilitar o afundamento dos insetos que nela carem.
Os insetos capturados no devem ser deixados na gua por muito tempo para
que no estraguem.
A armadilha luminosa usada para a coleta de insetos noturnos. Existem
vrios modelos de armadilhas luminosas. A lmpada pode ser de luz negra,
incandescente ou fluorescente. Uma variao da armadilha luminosa a coleta
em um pano sob uma fonte de luz. Coletar insetos sob as lmpadas da iluminao pblica ou na iluminao externa das residncias ou outros edifcios
tambm um mtodo que acaba rendendo bons exemplares. De forma geral,
as lmpadas isoladas, situadas longe das grandes concentraes urbanas de
luz, produzem os melhores resultados.

Entomologia Mdica | 365

Figura 32. Um tipo de armadilha luminosa.


Foto: Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses/IOCFiocruz.

A armadilha com isca, usada para atrair insetos zooflicos ou eclticos,


tem um animal como isca. Existem vrios modelos de armadilhas com isca,
que podem receber diferentes nomes de acordo com o seu inventor por
exemplo, armadilha de Shannon, de Damasceno, de Noireau, etc.

Figura 33. Tipos de armadilha com isca.

Foto: Nataly Souza, Maurcio Villela, Gustavo Aguiar


(Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses e Laboratrio de Dptera/IOCFiocruz).

366 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Os insetos capturados podem ser mortos pelo uso de um frasco mortfero.


O frasco mortfero um vaso de vidro contendo substncia venenosa voltil.
importante que esse frasco seja guardado em local seguro, longe do alcance
de crianas e animais domsticos, e que tenha uma etiqueta de identificao
contendo a palavra veneno bem visvel. Pode ser envolvido externamente por
uma camada de fita adesiva, como medida de segurana, caso venha a cair e
se quebrar. A colocao da fita adesiva facilita o seu descarte, sem extravasar
o contedo venenoso. O frasco mortfero no pode ser confeccionado com
vasilhames plsticos, pois ter e acetato de etila diluem o plstico.
Como construir um frasco mortfero
O frasco mortfero um vaso de vidro contendo substncia venenosa
voltil, para sacrificar os espcimes coletados. Pode ser construdo utilizando-se, por exemplo, um frasco de vidro de maionese de 500 g, vazio e
com tampa. Faz-se uma soluo de gesso e coloca-se uma camada de gesso
de 2 ou 3 cm no fundo do vaso. Aps a secagem do gesso, derrama-se
dentro do frasco uma quantidade do lquido mortfero ter ou acetato
de etila suficiente para umedecer o gesso sem encharc-lo. Esse tipo de
equipamento til, no campo, quando no se dispe de um freezer, que
um mtodo mais seguro para matar os espcimes.
Caso se tenha disposio um freezer, pode-se recorrer ao mtodo
base de resfriamento para sacrificar os espcimes. Eles devem ser colocados
dentro de um saco plstico etiquetado, com informaes sobre data da
coleta, local, nome do coletor, tipo de coleta e outros dados que se julgue
importantes, e postos no freezer por 5 a 10 minutos, at que morram.
importante que insetos pequenos e delicados no sejam misturados no
mesmo saco com insetos maiores e mais resistentes, pois, na nsia de se libertar,
os maiores destruiriam os menores. Certas vespas possuem grande quantidade
de glicerol no corpo e no devem ser mortas por esse mtodo, uma vez que

Entomologia Mdica | 367

o glicerol funciona como anticongelante e faculta a sobrevivncia do inseto


mesmo aps horas dentro do freezer.
4.2 Coleta de formas imaturas de insetos de interesse mdico

Formas imaturas aquticas podem ser coletadas com conchas e tubos sugadores. Elas podem ser mortas com gua quente e depois fixadas, para no
sofrerem melanizao, que o escurecimento da cutcula. A fixao feita
com uma mistura de 1 parte de querosene, 7 a 9 partes de lcool 96 GL,
1 parte de cido actico glacial e 1 parte de detergente incolor.
A seguir descrevemos os tipos de coletas mais utilizados em diferentes
grupos de insetos de importncia mdica.
4.3 Tcnicas de coleta de alguns insetos hematfagos

4.3.1 Coleta de culicdeos, flebotomneos, ceratopogondeos e simulideos


Mosquitos, flebtomos, maruins e borrachudos podem ser capturados com
armadilha luminosa, isca animal ou utilizando-se, quando pousem, nas horas de
preferncia de hematofagia para cada espcie, o capturador de Castro.
Para o transporte das fmeas de flebotomneos ao laboratrio, utilizam-se
gaiolas de tecido de nilon presas a armaes de ferro, contendo uma flanela
mida na sua lateral e envolvidas em saco plstico (fig. 34). As gaiolas so
semelhantes s sugeridas por Barraud para a criao em laboratrio. Para o
transporte de culicdeos, utilizamos gaiolas cilndricas de papelo ou plstico,
revestidas de papel-filtro.

368 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 34. Gaiolas para acomodao de flebotomneos.


Fotos: Nataly Souza (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses
e Laboratrio de Dptera/IOCFiocruz).

4.3.2 Coleta de triatomneos


A captura de triatomneos pode ser realizada por dois mtodos: busca
ativa e busca passiva. Na busca ativa, os coletores pesquisam o domiclio,
o peridomiclio e o ambiente silvestre em busca de marcas de fezes, exvias
e ovos eclodidos, como sinais importantes que indicam a presena de
triatomneos. Na busca passiva, a captura realizada com diferentes tipos de
armadilhas que atraem os insetos, sem a participao direta do coletor, da a
denominao passiva. As armadilhas podem ser luminosas ou com isca animal.
A armadilha luminosa do tipo Malaise consta de um tecido branco, medindo cerca de 1,5 m x 1,5 m, e de uma fonte luminosa, responsvel pela
atrao dos insetos. Essa armadilha deve ser montada no perodo noturno,
durante aproximadamente quatro horas, para que a luz atraia os insetos. A
armadilha com isca animal, ou armadilha de Noireau, comumente utilizada para
capturas no ambiente silvestre, consta de um pote plstico, com a tampa telada
na parte central, envolto por uma fita adesiva de dupla face na parte superior.
Em seu interior, colocado um animal, que pode ser um pinto ou um camundongo, cuja temperatura corporal, liberao de CO2 e dejees nitrogenadas
atraem o triatomneo. Esse tipo de armadilha usado em copas de palmeiras,
buracos de pedra, tocas de animais e ocos de rvores, entre outros.

Entomologia Mdica | 369

No domiclio, a pesquisa feita em estrados de cama, objetos guardados,


caixas, paredes, calendrios e fotos presas em paredes, roupas e em tetos revestidos de folhas de palmeira.Por ser uma rea onde existem muitos locais que
podem servir de abrigo para os triatomneos, a investigao no peridomiclio
mais abrangente. Por isso, um trabalho mais demorado e que requer muita
ateno. Muitas vezes existem no peridomiclio amontoados de telhas, lenhas
e tijolos, cercas de curral, galinheiro e pocilgas, paiis, fornos, entre outros.
As lenhas e cercas normalmente tm suas cascas soltas, e sob elas que os
triatomneos se escondem. Assim, as cascas devem ser removidas com cuidado
para a observao da presena de todas as formas do desenvolvimento isto
, de ovo a adulto.
No ambiente silvestre, as buscas so realizadas em locais que podem abrigar possveis hospedeiros, como roedores, tatus, gambs e aves, entre outros.
Esses ambientes incluem pedras, ninhos de aves, reas sob a casca de troncos
de rvores ou arbustos, troncos de rvore, tocas de animais, bromlias, palmeiras e outros, variando de acordo com a regio que est sendo pesquisada.
Para as buscas em reas de pedra, deve-se levant-las e, aps a observao,
deve-se retorn-las para a posio anterior, de modo a no alterar o ambiente.
No caso das palmeiras, possvel trabalhar com o uso de armadilha com isca
animal ou, ento, derrubando a palmeira. Nesse caso, preciso autorizao do
rgo de fiscalizao ambiental para a sua derrubada. O trabalho realizado,
retirando-se as folhas uma a uma at se chegar parte central.

370 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 35. Na busca ativa, os coletores pesquisam o domiclio,


o peridomiclio e o ambiente silvestre em busca de marcas de fezes (A),
exvias (B) e ovos eclodidos (C) e (D), como sinais importantes
que indicam a presena de triatomneos.
Fotos: Teresa Cristina Monte Gonalves, Catarina Macedo (Laboratrio de
Transmissores de Leishmanioses, Setor de Entomologia Mdica e Forense/IOCFiocruz).

Os insetos coletados devem ser acondicionados em recipientes, devidamente identificados quanto ao local de captura, nome do coletor e data. Esses
dados so de extrema importncia porque, havendo a necessidade de retornar
ao local de coleta para capturar mais espcimes, isso s ser possvel mediante
essas informaes.
Etiqueta de identificao
Nmero de acesso (registro de arquivo em ordem numrica crescente e outros cdigos)
Identificao da espcie
Nome do coletor
Data
Endereo de coleta
Coordenadas geogrficas (graus, minutos, segundos)
Local de coleta: ( )domiclio ( )peridomiclio ( )quarto ( )sala ( )galinheiro ( )chiqueiro ( )outros
Outras informaes

Entomologia Mdica | 371

O recipiente para o transporte do inseto vivo dever conter, em seu interior, papel dobrado em sanfona, para aumentar a superfcie de contato.
Pequenos orifcios devem ser feitos na tampa; no entanto, deve-se cuidar que
no sejam muito grandes, para que os ovos e ninfas de 1 estdio no passem.
No caso de insetos mortos, devem ser contidos no recipiente por um papel
fino (papel higinico ou leno de papel), a fim de evitar que se desloquem
dentro do recipiente, e que estruturas delicadas, como antenas, tarsos e cerdas, se danifiquem, o que dificultar a sua identificao.
4.4 Tcnicas de coleta de moscas

De acordo com o objetivo da coleta, os dpteros muscoides capturados


sero sacrificados ou mantidos vivos, o que determinar a maneira que devem
ser transportados ao laboratrio.

4.4.1. Subordem Brachycera, infraordem Muscomorpha, ou moscas das miases


Geralmente quem realiza a coleta de larvas das miases a equipe
mdica ou de enfermagem dos hospitais ou postos de sade. As larvas
so coletadas com o auxlio de pina; muitas vezes, coloca-se ter ou
leo mineral para facilitar a sada das larvas. Aps a retirada das larvas,
as mesmas devem ser submetidas soluo de cloreto de sdio a 0,9%,
com o objetivo de realizar uma lavagem por agitao. Aps a lavagem, as
mesmas devem ser preservadas em recipientes contendo formol a 10% ou
etanol 70% para, em seguida, serem encaminhadas a um especialista. No
laboratrio, as larvas so clarificadas em hidrxido de potssio a 10% e
em seguida transferidas para recipientes de vidro contendo lactofenol, com
a finalidade de promover a clarificao e a diafanizao do corpo da larva.
As larvas ento so montadas entre lminas e lamnulas para serem analisadas e identificadas de acordo com a chave dicotmica especfica. As
anlises devem ser realizadas em microscpio estereoscpico e microscpio

372 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

ptico. Todos os procedimentos utilizados devem ser realizados dentro


das normas de biossegurana.

4.4.2 Tcnicas de coleta e transporte de moscas de importncia forense


Antes do incio das coletas, necessrio observar o comportamento dos
insetos, alm de se determinar a sua posio ecolgica (necrfago/predador).
Insetos adultos mais geis, como as moscas, podem ser encontrados pousados
no corpo e ao seu redor, bem como sobrevoando reas circunvizinhas.

Figura 36. Espcimes de Calliphoridae pousados em galho de arbusto.


Foto: Margareth Queiroz (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses,
Setor de Entomologia Mdica e Forense/IOCFiocruz).

Os dpteros muscoides necrfagos so os insetos de maior importncia forense, pois utilizam a matria orgnica em decomposio como fonte proteica,
visando estimular a oviposio ou larviposio, ou para o desenvolvimento de
suas fases imaturas. Suas atividades aceleram a putrefao e a desintegrao
do corpo. Alm disso, cada fase da putrefao cadavrica oferece condies
e caractersticas prprias que atraem um determinado grupo de insetos; consequentemente, eles se sucedem de acordo com um padro.
A coleta de dpteros muscoides ao lado de cadveres precisa ser feita de
maneira cuidadosa, a fim de que se evitem leses ps-morte no corpo. Os
adultos das moscas podem ser coletados com o auxlio de rede entomolgica

Entomologia Mdica | 373

comum, passada por cima do cadver; aps terem sidos anestesiados, so retirados e transferidos para recipientes devidamente identificados. Outro recurso
a utilizao de armadilha confeccionada com papel adesivo, organizada em
forma de tenda, com ngulo de 60, montada distncia de 1 m do corpo.
No laboratrio, os espcimes que ficaram aderidos ao papel podem ser removidos da armadilha com o uso de xileno. Os inconvenientes desse mtodo
so os danos que possam ser provocados nos espcimes, dificultando a sua
identificao, alm do preo, pois o papel adesivo importado.
No caso de espcimes imaturos, ovos, larvas e pupas, a coleta pode ser
feita diretamente do cadver. necessrio transportar ovos e larvas em recipientes fechados por tecido de malha fina escaline, para evitar a asfixia, a fuga
de larvas pequenas e o ataque de dpteros predadores da famlia Phoridae.
Para a coleta de ovos, uma parte deve ser acondicionada em papel-filtro umedecido para evitar a desidratao e, consequentemente, a morte.
Na rotina de trabalho de peritos criminais em laboratrio de entomologia
forense, faz-se necessria a adio de substrato de criao base de carne
moda, peixe e fgado ou dieta artificial para a criao das larvas que eclodiro
dos ovos. Essa atividade permite a identificao das espcies presentes no
cadver, pois as chaves de identificao de ovos so inexistentes na literatura.
No entanto, a identificao por meio da microscopia eletrnica pode fornecer
resultado mais rpido, o que facilitaria bastante o trabalho dos peritos em
situaes nas quais no existem locais apropriados para a manuteno e/ou
criao dos imaturos. Diversos autores utilizaram a microscopia ptica e de
varredura para analisar a morfologia dos ovos e discutiram a importncia de
cada uma das estruturas como diagnstico na identificao das espcies.
J a coleta das larvas feita com pina, colheres e pincis finos de pelo
diretamente da massa que costuma ser encontrada nas bordas das leses, nos
orifcios naturais do corpo e em locais abrigados, como axilas, cabelos e atrs
das orelhas. necessrio verificar tambm o interior do corpo, dentro das
roupas e sob o cadver, cavando-se o solo em busca de larvas e de pupas.

374 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

A observao do local onde o cadver foi encontrado, principalmente em


caso de ambientes fechados, tambm necessria, pois a presena de insetos
em outras partes do ambiente serve para auxiliar na determinao do intervalo
ps-morte, evidenciando a presena de uma segunda gerao de insetos
criados naquele cadver. Em ambientes abertos, os despejos sanitrios, o lixo
e outros fatores que sirvam como atrativo para os insetos adultos devem ser
localizados. As larvas devem ser transportadas separadas em potes diferentes,
para evitar o fenmeno de predao, e agrupadas de acordo com o tamanho
e a semelhana entre si.

Figura 37. A) Coleta de larvas de moscas da carcaa de porco domstico;


B) Coleta de larvas de moscas acondicionadas em recipiente contendo dieta
base de carne bovina putrefata.
Fotos: Margareth Queiroz (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses,
Setor de Entomologia Mdica e Forense/IOCFiocruz).

Os imaturos devem ser transportados em bolsas trmicas contendo gelo


qumico, que diminui o metabolismo do inseto durante o transporte, visando
manter o estgio coletado at os exames laboratoriais. O transporte de pupas
deve ser feito em potes contendo serragem umedecida, vermiculita ou um pouco de solo do local, o que evitar a desidratao. O transporte das amostras
do solo feito em sacos plsticos, tipo Ziploc, para manter a umidade e
alguma reserva de ar. Todos os recipientes devem ser etiquetados com os dados da coleta, ou seja, dia, horrio, nmero da ocorrncia, local da coleta e

Entomologia Mdica | 375

outros dados. Tanto o especialista entomlogo quanto o perito que recebe o


material para exame devem ter cuidado com a cadeia de custdia.
Os dpteros muscoides mortos podem ser transportados em recipientes
contendo lcool etlico a 70%. Esses insetos tambm podem ser mantidos
secos e transportados em potes contendo papel-filtro picado para diminuir
o excesso de umidade e evitar stress fsico, impedindo que se danifiquem as
asas. Tambm podem ser transportados em envelopes triangulares de papel
ou, ainda, em envelopes de carta. Algumas armadilhas de coleta possuem recipientes coletores ou sacos plsticos para o recolhimento dos insetos atrados
e coletados, que podem ser transportados diretamente ao laboratrio.
Para o transporte do material vivo, as moscas podem ser coletadas com rede
entomolgica ou armadilhas, utilizando-se como atrativo animais domsticos com
ferimentos, carne em decomposio, fezes humanas ou de animais, frutos maduros
e carcaas de animais ou, no caso da entomologia forense, humanas, entre outros. Em seguida, esses insetos so levados em tubos coletores ao laboratrio ou
transferidos para gaiolas de madeira (30 cm x 30 cm x 30 cm), revestidas nos
lados com tela de nilon e com uma abertura frontal constituda por uma manga
de tecido de cor preta, a fim de permitir o manuseio das moscas.
Estudos sobre a distribuio temporal nas estaes do ano dos insetos de importncia forense esto sendo desenvolvidos no campus da Fundao Oswaldo
Cruz, no Rio de Janeiro. As armadilhas so constitudas por uma estrutura metlica em forma de pirmide de 1,5 m de altura, revestida por um tecido de cor
preta contendo, em sua parte inferior, uma tira de tecido de nilon branco que
permite a entrada de luz e ventilao. Na parte superior da pirmide, encontra-se
um tubo de PVC de 75 mm, que, em sua poro mediana, apresenta uma janela
de 25 cm x 11 cm com tecido de nilon fino de cor branca, por onde tambm
entra luz e ar para o interior do tubo. Os insetos que entram pela parte inferior
da pirmide tendem a voar para o alto, atrados pela luminosidade, e ficam presos no interior. A entrada do tubo afunilada a fim de evitar a fuga dos insetos
para o ambiente. De forma a impedir que animais necrfagos de grande porte
se alimentem das carcaas, confeccionou-se uma gaiola de tela metlica com as

376 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

laterais arrematadas com vergalho, que, depois de fixada ao solo, protege a


carcaa em decomposio no seu interior.

Figura 38. A) Armadilha utilizada em experimentos de entomologia forense (a


seta aponta para o tubo coletor, ampliado na figura ao lado); B) Tubo coletor.
Fotos: Margareth Queiroz (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses,
Setor de Entomologia Mdica e Forense/IOCFiocruz).

Para atrao dos insetos, so utilizadas, a cada estao, trs carcaas


de porcos domsticos, com aproximadamente 10 Kg de massa, uma para
cada armadilha. Os animais so comprados e abatidos no local em que
so criados, para o abastecimento do consumo humano. Aps o sacrifcio,
as carcaas so transportadas dentro de sacos plsticos para o local dos
experimentos; cada uma delas colocada em uma bandeja plstica contendo
solo do mesmo local e introduzida na gaiola, abaixo da armadilha. As gaiolas
so fotografadas e observadas nos horrios de coleta, com a finalidade de
acompanhar as transformaes morfolgicas para posteriores associaes com
a fauna colonizadora.

Entomologia Mdica | 377

Figura 39. Carcaas de Sus scrofa com diversas moscas


da famlia Calliphoridae realizando a postura de ovos sobre a carcaa.
Fotos: Margareth Queiroz (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses,
Setor de Entomologia Mdica e Forense/IOCFiocruz).

Figura 40. A) Larvas de moscas colonizando carcaa de porcos domsticos;


B) Larvas e ovos de moscas em carcaa; C) Larvas maduras de moscas no solo
em busca de pupao; D) Adultos de Calliphoridae se alimentando
do exudato liberado pela carcaa.
Fotos: Margareth Queiroz (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses,
Setor de Entomologia Mdica e Forense/IOCFiocruz).

378 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

As coletas de insetos so feitas diariamente, s 12 horas. O tubo desencaixado da armadilha e vedado na extremidade inferior, por onde os insetos
entram, transformando-se numa gaiola de transporte. No laboratrio, as gaiolas
so introduzidas no freezer a -17C de temperatura, permanecendo dentro
dele por 40 minutos. Aps o congelamento, os insetos so transferidos para
tubos de ensaio, com informaes sobre dia, horrio e nmero da carcaa onde
os insetos foram coletados. O material retorna ao freezer para que sejam feitas
triagem, identificao e contagem dos espcimes posteriores.

4.4.3 Tcnicas de criao de insetos de interesse mdico


Os insetos podem ser mantidos em colnias em laboratrio, servindo de
base para pesquisas em biologia, morfologia, ultraestrutura, comportamento,
estudos populacionais, estudos sobre a susceptibilidade a certos patgenos,
modelos experimentais, resistncia a inseticidas, gentica, citoqumica, citogentica, entre outras.
Embora a manuteno das colnias seja feita em ambientes adaptados e de
acordo com protocolos estabelecidos por normas de biossegurana, o material
usado na manuteno de colnias de insetos simples. Os materiais requeridos so facilmente encontrados, e as gaiolas podem ser manufaturadas.
Antes de iniciar a criao de uma espcie, deve-se ter um conhecimento
bsico sobre a biologia da espcie e procurar reproduzir as microcondies de
seus habitats naturais, recorrendo bibliografia especfica.
O insetrio deve ser montado em uma sala que possa ser vedada, para que
se mantenham as condies climticas ideais dentro dele, e telada, para evitar
a fuga de insetos. Existem equipamentos eletrnicos que controlam a temperatura e a umidade de locais onde aparelhos de ar condicionado e aquecedores
estejam ligados. As paredes e pisos devem ser pintados de branco e conter o
mnimo de mobilirio necessrio relativo manuteno das colnias. As mesas
ou estantes para a colocao de gaiolas dos insetos adultos e/ou bandejas
contendo formas imaturas, larvas e pupas devem ser vazadas para favorecer a

Entomologia Mdica | 379

aerao. Dentro do insetrio, deve haver uma pia para lavar o material utilizado
no manuseio dirio e um reservatrio contendo gua ambientada. gua ambientada a gua de torneira que se deixou descansar em recipiente fechado
por tecido fil por alguns dias para a evaporao do cloro dissolvido. Deve
existir um termmetro e um hidrmetro permanentemente na gaiola para medir
a temperatura e a umidade. Podem existir equipamentos que facultem a luminosidade controlada, com fotoperodos estabelecidos, como um cronmetro
ligado rede eltrica.
A entrada do insetrio deve conter uma dupla porta de segurana, com
uma pequena saleta entre elas, para evitar a sada de insetos adultos do insetrio ou, ainda, para evitar a entrada de insetos do ambiente externo que
poderiam contaminar a colnia, seja desovando em recipientes onde as larvas
se encontram, seja simplesmente danificando a colnia, ao invadirem as gaiolas
dos insetos adultos. Deve haver uma antecmara contgua ao insetrio que servir para o armazenamento de materiais utilizados no prprio insetrio como
cubas, gaze, algodo, fil, pipetas, estiletes, pinas, entre outros. Essa antecmara dever conter tambm uma pia para lavagem de material e preparao
de solues e uma bancada que permita a instalao de microscpios pticos
e estereoscpios ou de lupas.
Para a criao de espcies vetores de patgenos por exemplo, os da malria, dengue, febre amarela, encefalites e leishmanioses , principalmente quando
os insetos provm da natureza e podem estar infectados, devem ser tomadas
certas medidas extras de segurana. Entre as medidas de segurana, esto a
utilizao de equipamentos adequados, como telamento, antecmara, presso
negativa, cortina de vento; pessoal treinado; uma nica porta de acesso; duas
pias, no mnimo, sendo uma ligada a um reservatrio de gua sem cloro; a gua
drenada pelas pias deve passar por um reservatrio tratado regularmente.
Nos itens relacionados biossegurana, podem-se citar: treinamento adequado do pessoal antes do incio do trabalho; uso de avental ou jaleco, luvas e
demais EPIs; no tocar em maanetas, interruptores ou telefones com as luvas;

380 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

nunca sair do laboratrio usando jaleco ou luvas; nunca pipetar com a boca;
nunca fumar, comer ou beber no insetrio; no tocar o prprio rosto ou o
cabelo de luvas por isso recomenda-se prender o cabelo; lavar as mos
aps tirar as luvas; manter controle rotineiro dos insetos; seguir as normas
bsicas para trabalho em laboratrio e para trabalho com animais que serviro
como fonte de alimentao sangunea para os insetos hematfagos; manter
limpo e organizado todos os equipamentos e as reas de trabalho; descartar
do modo prescrito pelas normas de biossegurana vigentes os resduos qumicos e/ou biolgicos do laboratrio; e dedicar especial ateno ao material
biolgico infeccioso.
A alimentao sangunea deve ser administrada segundo a preferncia e o
horrio natural de alimentao de cada uma das espcies criadas, podendo ser
utilizados animais devidamente imobilizados ou um alimentador artificial para
insetos hematfagos.
As colnias devem oferecer um manejo com tcnicas que assegurem simplicidade e obteno do maior nmero possvel de posturas frteis, evitando-se,
alm disso, a excessiva manipulao dos ovos. A temperatura e a umidade devem ser controladas. Assim, para a criao de espcimes da famlia Culicidae,
as colnias devem ter acima de 70% de umidade relativa e temperatura de
27C1C; j para a criao de flebotomneos, a umidade relativa deve ficar
em 90%10% e a temperatura, em 25C1C. O monitoramento deve ser
dirio, inclusive nos finais de semana e feriados, visando assegurar o controle
do desenvolvimento excessivo de fungos, formigas e caros nocivos ao bom
desenvolvimento de larvas, pupas e adultos.
Tcnicas para obteno de posturas de flebotomneos

Dentro dos cuidados que devemos ter numa criao de insetos vetores, a
oviposio o momento mais delicado, e alguns pesquisadores desenvolveram
tcnicas para minimizar as perdas, que so muito grandes. A primeira tentativa
de atenuar essa perda foi feita utilizando-se caixas de madeira com paredes

Entomologia Mdica | 381

de vidro fechadas com um pano fino. Aps as fmeas estarem ingurgitadas,


a grande maioria dos pesquisadores as coloca individualmente em tubos de
polietileno, cilindros de vidro com papel-filtro e/ou algodo umedecidos ou
gesso (fig. 41).

Figura 41. A) Tubo de polietileno; B) Cilindro de vidro com papel-filtro


e/ou algodo; C) Cilindro de vidro com gesso umedecido.
Fotos: Nataly Souza (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses/IOCFiocruz).

Criao individual
As fmeas so individualizadas em tubinhos de polietileno forrados no
fundo com gesso, para manter os ovos recm-postos bastante umedecidos.
Essa tcnica em geral empregada quando os flebotomneos so de reas
onde mais de uma espcie predomina. As posturas so individualizadas em
placas de Petri forradas com gesso; quando nasce o primeiro adulto de cada
placa, ele ento identificado e, assim, as posturas vo sendo separadas de
acordo com cada espcie.
Criao em massa
A criao em massa de flebotomneos prev que as fmeas ingurgitadas, trazidas do campo ou nascidas em laboratrio, sejam liberadas em recipientes apropriados caixas maiores ou gaiolas. Tais recipientes podem ser de madeira, vidro

382 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

(fig. 42A), plstico ou acrlico (fig. 42B). Essa tcnica empregada quando
existe frequncia muito maior de uma nica espcie, no caso de o pesquisador
ter conhecimento prvio da espcie que atua na rea ou, a partir da gerao F2,
quando j h conhecimento sobre a espcie que est sendo criada.

Figura 42. Criao de flebotomneos: A) Criao em massa de flebotomneos


em cristalizadores; B) Pote plstico; C) Pupas de flebotomneos.
Fotos: Sandra Oliveira e Nataly de Souza (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses;
Laboratrio de Produo e Tratamento de Imagem/IOCFiocruz).

Tcnicas para evoluo das larvas


Para a evoluo das larvas de 1 a 4 estdios, alguns investigadores
utilizam placas de Petri forradas com papel-filtro, tubos forrados com gesso,
que serve como substrato para as larvas, blocos de gesso ou papel-filtro
com ovos, transportados para vasos de barro porosos revestidos ou no
de gesso (fig. 43A). Outros autores transportam o papel-filtro com os ovos
para um prato de barro, sobre uma placa de Petri com gua. Outros, ainda,
utilizam como substrato placas de Petri forradas com gesso ou tubos contendo

Entomologia Mdica | 383

no fundo algodo umedecido, coberto com papel-filtro (fig. 43B), onde as


fmeas fazem posturas.

Figura 43. Substratos utilizados para desenvolvimento das larvas de


flebotomneos: A) Substrato de gesso; B) Substrato de papel-filtro.
Fotos: Nataly de Souza (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses/IOCFiocruz).

Alimentao das larvas


Vrios estudos foram realizados por diferentes autores a fim de verificar
o meio de cultura mais adequado para ser utilizado como substrato na alimentao das larvas: terra colhida sob rvores, com folhas apodrecidas e
limo de barreira, triturada, tamisada e aquecida a 65C durante 48 horas;
terra de curral de jumentos com esterco e tratada como descrito anteriormente;
terra e vegetais em decomposio; terra com esterco de boi; e limo raspado
de troncos de rvores. Eles concluram que as terras ricas em matria vegetal
decomposta ou as que continham fezes secas de bovino eram as mais indicadas para a alimentao das larvas. Para as larvas de Phlebotomus argentipes, os
investigadores verificaram que uma rao base de p de fgado era melhor
do que a alimentao com fezes de coelho e terra. Podemos citar ainda outros
alimentos, como alface cozida e dfnia seca triturada (rao base de crustceos dessecados para peixes ornamentais). Mais recentemente, autores vm
introduzindo aminocidos na rao das larvas, com bons resultados. Atualmente, os mesmos autores, vm oferecendo uma mistura base de rao de

384 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

coelho, hmus de minhoca, farinha de osso e p de fgado (alimento rico em


aminocidos), com excelentes resultados.
Emergncia dos adultos e seu condicionamento em laboratrio
Os flebotomneos nascidos em laboratrio tm sido mantidos em diferentes
ambientes: frascos, caixotes de madeira e gaiolas de etamine, nilon, musseline
ou gaze.
Em geral, a alimentao dos adultos feita seguindo um padro de trs
dias de repasto rico em carboidratos e no quarto dia oferecido um hamster
anestesiado como fonte de alimentao sangunea. A partir desse momento,
as fmeas seguem uma das duas tcnicas de criao descritas anteriormente:
individual ou em massa.

Figura 44. Hamster oferecido como fonte de alimentao


em gaiola de criao de flebotomneos.
Foto: Nataly de Souza (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses/IOCFiocruz).

Entomologia Mdica | 385

Tcnicas para obteno de posturas de culicdeos


Como descrito para os flebotomneos, as fmeas adultas de culicdeos
criadas em um insetrio podem ser separadas individualmente, em frascos cilndricos, contendo no fundo algodo umedecido recoberto por papel-filtro,
para que desovem, ou podem ser mantidas em gaiolas apropriadas. O meio
oferecido deve simular as condies do criadouro da espcie na natureza, pois
algumas espcies colocam seus ovos diretamente na gua, outras, em superfcies
midas. Os ovos devem ser transferidos posteriormente para bandejas de criao, onde sero criadas as larvas recm-eclodidas. O mtodo utilizado para a
oviposio vai depender da espcie em questo e do tipo de estudo que se
deseja realizar. No entanto, deve haver uma gaiola para cada espcie.
Manuteno das larvas de culicdeos
Aps a desova, os ovos so semeados em recipientes apropriados. Bandejas retangulares de 30 cm x 40 cm, de material plstico, vidro ou esmaltadas,
com pouca profundidade, so ideais para a criao em massa, devendo ter fundo claro para melhor visualizao e manejo dos espcimes. Para a evoluo das
larvas de 1 a 4 estgios, os tubos individuais com posturas, contendo tira
de papel, algodo ou papel-filtro umedecidos, so colocados em bacias com
gua ambientada. Um nmero mximo de cem larvas deve ser colocado em
cada bandeja, para evitar competio e prejuzo do desenvolvimento. Algumas
espcies requerem recipientes menores. Para a alimentao das larvas, utilizase rao para peixes TetraMin, que essa rao pode ser oferecida de vrias
maneiras, dependendo da espcie de mosquito. Para larvas que se alimentam
na superfcie da gua, como as da subfamlia Anophelinae, a rao triturada,
peneirada e pulverizada seca sobre a superfcie da gua, ao passo que para
as larvas da subfamlia Culicinae, que se alimentam de detritos no fundo da
bandeja, essa rao deve ser molhada, ainda em forma de flocos, e mergulhada no fundo do recipiente. A superfcie e o fundo das bandejas devem ser
limpos diariamente, com o auxlio de papel-toalha aderido superfcie, e de

386 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

uma pipeta, usada para recolher o excesso de alimento do fundo. A comida


oferecida s larvas sempre que necessrio. As pupas no se alimentam. As
pupas devem ser retiradas todos os dias manualmente, com pipetas ou pequenas peneiras, dos recipientes e colocadas em gaiolas previamente identificadas,
onde sero mantidas at emergirem como adultos.
Manuteno e alimentao dos adultos de culicdeos
As colnias de culicdeos so mantidas em gaiolas cbicas de armao
de ferro ou alumnio com paredes de nilon ou tela metlica de malha fina.
Algumas gaiolas tambm podem ser confeccionadas em papel ou acrlico, com
dimenses variveis. O fundo dessas gaiolas deve ser forrado com papel-filtro
trocado regularmente para retirar os espcimes mortos e evitar que a colnia
seja contaminada por fungos.

Figura 45. Gaiolas para criao e manuteno de culicdeos.


Foto: Acervo do Laboratrio de Transmissores de Hematozorios/IOCFiocruz.

Os adultos machos e fmeas so alimentados com uma soluo aucarada


a 10%, colocada em frascos dentro da gaiola. Outras fontes alimentares
podem ser glicose, frutose, sacarose, passas e frutas. A alimentao sangunea
oferecida de acordo com a preferncia da espcie e com o horrio de
hematofagia. No Insetrio de Culicidae do Laboratrio de Transmissores

Entomologia Mdica | 387

de Hematozorios, do IOC/Fiocruz, utiliza-se atualmente um alimentador


artificial acoplado a um frasco contendo sangue de carneiro desfibrinado,
fornecido regularmente pelo prprio biotrio da instituio.
Cuidados gerais com as colnias de diferentes insetos
Seja qual for o tipo de inseto e de insetrio, o manuseio dos espcimes
deve ser feito criteriosamente a fim de evitar a mistura de espcies, garantindo a
confiabilidade do material. Por isso, todo e qualquer manuseio dos espcimes
deve ser feito separadamente, dentro de uma bandeja, para garantir a segurana.
Gaiolas com identificao duvidosa devem ser descartadas.

Figura 46. Bandejas para manuseio de colnias.

Foto: Luzia Caputo (Laboratrio de Patologia, setor de Histotecnologia/IOCFiocruz.

Os frascos de vidro onde so colocadas as fmeas para oviposio e tambm as gaiolas devem ser identificados por uma etiqueta com nmero, nome
da espcie, data da coleta e procedncia. Se for o caso, identificar o tipo de
experimento que est sendo realizado e o nome do responsvel. Paralelamente, deve ser preenchida uma ficha com todas essas informaes, acrescida do
nmero de insetos que deram incio colnia.

388 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

As colnias de triatomneos so mantidas em frascos de vidros de cerca de


10 a 15 cm de dimetro, com um pedao de papel-filtro forrando o fundo
e outro pedao, dobrado em forma de sanfona, disposto internamente. O
papel-filtro tem como objetivo retirar a umidade em excesso oriunda das fezes
e urina e aumentar a superfcie de contato para o deslocamento. A parte superior fechada com tela de nilon, presa por mais de um elstico e amarrada
com barbante.
Os adultos das colnias podem ser alimentados semanalmente, de 15 em
15 dias ou mensalmente, dependendo do interesse de incrementar a prole e o
crescimento da colnia. Quanto maior o nmero de repastos sanguneos, tanto
mais rpido e abundante ser o desenvolvimento das colnias.
A limpeza das colnias de triatomneos deve ser feita em intervalos de trs
meses aproximadamente. As colnias necessitam ter um nmero significativo
de espcimes para garantir a transmisso de bactrias Streptococcus, Staphylococcus, Mycobacterium, Pseudomonas e Eschericha e de fungos actinomicetos
entre os espcimes. Essas bactrias, muito importantes para o desenvolvimento
desses insetos, so transmitidas por meio do coprofagismo ou do canibalismo.
4.4.3 Tcnicas de disseco de insetos

As tcnicas de disseco so usadas para verificao de infeco natural


e experimental, para experimentos de fisiologia experimental e, ainda, para
identificao do txon. As modernas tcnicas bioqumicas e moleculares so
ferramentas que possibilitam identificar a presena e a identidade de parasitos.
No entanto, a disseco permite estudar a localizao do parasito em seu
micro-habitat, facultando a preveno de interaes.
Nesta seo, veremos, como exemplo, as tcnicas de disseco de culicdeos e dos triatomneos.

Entomologia Mdica | 389

Tcnicas de disseco de mosquitos


O trabalho pioneiro de Patrick Manson em 1878 um exemplo da importncia da tcnica de disseco. Aps dissecar e examinar uma srie de mosquitos, Manson comprovou o mecanismo de infeco de culicdeos por microfilrias que invadiam a circulao perifrica de humanos infectados. George
Low, poucos anos mais tarde, confirmou o trabalho de Manson, ao descrever
o encontro da microfilria de Wuchereria bancrofti na probscide de mosquitos
do gnero Culex. Em 1897, Ronald Ross identificou o Plasmodium parasito
da malria, e mosquitos do gnero Anopheles, esclarecendo o mecanismo de
transmisso (Jay, 2000).
As tcnicas de disseco podem ser aplicadas a mosquitos adultos visando
a extrao do tubo digestivo, isolamento das glndulas salivares exame de
ovrios e ovarolos, ou mesmo ser aplicadas a formas imaturas de mosquitos.
As tcnicas de disseco so teis na incriminao de vetores. As tcnicas tm
como objetivo a procura de infeces naturais, sua prevalncia, distribuio e
flutuaes, estudos de paridade das fmeas, clculo dos ndices de infeco
das populaes de mosquitos, determinao do grau ou intensidade de parasitismo por espcime por regio do trato digestivo e avaliao do nmero de
ciclos reprodutivos das fmeas.
Parmetros ecolgicos, como sazonalidade, ndice pluviomtrico e temperatura, so importantes na avaliao da prevalncia do parasitismo. O laboratrio
onde as disseces so efetuadas deve garantir condies suficientes de assepsia e de biossegurana para a realizao do exame dos mosquitos e do isolamento parasitrio, se for o caso. Os mosquitos podem ser transportados para
o laboratrio secos ou fixados em etanol a 70%, para extrao de DNA, ou
mesmo vivos, quando se almeja o exame a fresco.
Para a disseco, devem aspirar-se, com o auxlio de um capturador de
Castro, grupos de 10 a 20 exemplares vivos e submet-los a -4C por 10
minutos ou a -18C por 3 minutos, tempo suficiente para que os espcimes
fiquem adormecidos e viveis manipulao. O tempo de resfriamento deve

390 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

ser suficiente para permitir a evidenciao dos parasitos mveis e a sobrevida


dos parasitos em meio de cultura e para evitar o fcil arrebentamento do tubo
digestivo, o congelamento e/ou hidratao do material e as possveis alteraes
teciduais que prejudicariam os estudos de cunho histolgico ou ultraestrutural.
Deve-se evitar como mtodo para matar os mosquitos a exposio aos vapores
de ter ou de acetato de etila, por causa dos riscos ao trabalhador. Em seguida, deve-se transferir uma das fmeas anestesiadas para uma lmina devidamente
limpa, na qual se colocou uma gotcula de soluo salina a 0,9%. As restantes
devem ser levadas no capturador para um refrigerador, com temperatura em
torno de 8C de preferncia, ou ser mantidas numa caixa de isopor contendo
gelo em escamas, desde que a temperatura seja de 16C.
Asas e pernas devem ser removidas imediatamente, sob a lupa e com auxlio
de pinas ou estiletes, a fim de se diminuir a quantidade de fontes de cerdas ou
contaminantes. Deve-se proceder essa etapa rapidamente para evitar que a fmea
se restabelea e escape. Se houver alguma demora ou constando-se a movimentao da fmea, captur-la com o aspirador de Castro e retorn-la ao freezer.
Para facilitar a eviscerao, fazer um pequeno corte no tegumento do 7
segmento. Com uma das mos, pinar com cuidado o trax; com a outra mo,
destacar a extremidade do abdome e extrair o tubo digestivo, de modo que se
visualize da poro retal at a cardaca. Conservar a carcaa do inseto para os
casos em que se necessite realizar a identificao taxonmica. Cobrir o material
obtido com um fragmento de lamnula, acrescentando soluo salina. Examinar
o material ao microscpio.
Para a disseco das glndulas salivares, deve-se firmar o trax com a pina
ou estilete e puxar cuidadosamente a cabea, at as glndulas salivares serem
extradas.
Para a disseco dos ovrios, o procedimento semelhante disseco
do tubo digestivo, exceto pelo fato de que no se deve fazer o corte no 7
segmento. Aps a extrao dos ovrios, pode-se lavar o material em gua
destilada, gentilmente, para evitar a cristalizao posterior do NaCl, quando

Entomologia Mdica | 391

se guarde a lmina. Para que as terminaes das traquolas sejam bem visualizadas, deixar os ovrios secarem em temperatura ambiente o que os far inflar.
Examinar ao microscpio. Nas fmeas nulparas, as extremidades das traquolas
se apresentam enoveladas. Nas fmeas que j realizaram mais de uma postura,
as traquolas se mostram distendidas.
Para a disseco de ovarolos, trabalhar com pinas ou estiletes finos, removendo a membrana que envolve o ovrio, para que os ovarolos sejam separados. Segurando o ovrio pelo oviduto interno, tracionar cuidadosamente um ovarolo com
a outra mo, para que o pedculo seja esticado. Contar o nmero de dilataes
encontradas. Examinar o maior nmero de ovarolos. O nmero de dilataes nos
pedculos corresponde ao nmero de ovos produzido por cada ovarolo. A idade
fisiolgica da fmea corresponde ao ovarolo com o maior nmero de dilataes.
preciso no confundir as pores do clice ovariolar, que podem se desprender
do oviduto, com os resqucios do clice ou com dilataes verdadeiras.
Para a disseco de larvas e pupas, transferir, com o auxlio de uma pipeta,
as larvas individualmente do recipiente de manuteno para uma lmina de
vidro contendo pequena gota de soluo salina. Subtrair o mximo possvel
do lquido para evitar a movimentao da larva e, assim, facilitar o exame
dos caracteres morfolgicos para confirmao da identidade taxonmica do
espcime ao estereomicroscpio. Aps a identificao, pinar com uma mo
a regio torcica, sem exercer presso demasiada, e com a outra mo destacar
os trs ltimos segmentos abdominais, ao mesmo tempo em que o trato digestivo extrado com movimentos firmes, tomando cuidado para que no se
rompa. Como resultado de uma boa tcnica de disseco, o tubo digestivo se
mostrar distendido e permitir facilmente a distino visual de suas partes, do
intestino mdio torcico at a ampola retal, incluindo os tbulos de Malpighi.
Cobrir o material com lamnula e realizar o exame ao microscpio. O exame
pode ser a fresco ou aps a colorao.

392 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Clculo do ndice de infeco


Inicialmente, so consideradas positivas ou infectadas as fmeas nas quais
no foram evidenciados resduos de alimento sanguneo. Logo, o clculo
feito dividindo-se o nmero de fmeas positivas pelo total de exemplares
dissecados e efetivamente examinados. Ou seja, descartar da contagem o
material que no foi plenamente examinado devido aos erros no processo de
disseco. O clculo pode ser feito por espcie, pelo total de exemplares
examinados, por rea de coleta, pelo tipo de tcnica usada, entre outros.
Futuras coletas devem ser concentradas na rea onde foram encontrados os
espcimes positivos.
Material necessrio
a) Pipeta sorolgica;
b) Caixa de isopor pequena;
c) Cesto de descarte com saco plstico branco;
d) Dois capturadores de Castro;
e) Estereomicroscpio;
f) Estiletes ou pinas de disseco N4 ou N5;
g) Etanol a 70%;
h) Gelo em escama;
i) Jaleco descartvel;
j) Lminas e lamnulas limpas e estreis;
k) Leno de papel;
l) Luvas descartveis;
m) Microscpio de contraste de fase;
n) culos de proteo;
o) Papel absorvente para bancada;

Entomologia Mdica | 393

p) Pinas para as lamnulas;


q) Recipiente com soluo de hipoclorito de sdio a 0,5% para
descarte do material;
r) Seringas de insulina;
s) Soluo salina a 0,9% ou soluo salina tamponada.
Tcnicas de disseco de triatomneos
Para a disseco do trato intestinal, retiram-se as asas e, com o auxlio de
uma tesoura, cortam-se as laterais do abdome na altura do conexivo, no sentido pstero-anterior e, por ltimo, transversalmente, para a remoo da regio
dorsal. Deve-se tomar cuidado nessa etapa, principalmente se o inseto estiver
ingurgitado, para no romper o tubo digestivo. Macerar bem o material e
observar entre lmina e lamnula ao microscpio. Materiais da glndula salivar e
dos intestinos anterior, mdio e posterior devem ser identificados em separado,
para verificao exata do local em que se desenvolvem os patgenos.

Figura 47. Tcnica de disseco para a retirada dos tergitos abdominais:


A) Corte lateral nos conexivos de ambos os lados; B) Visualizao das
estruturas internas e da hemolinfa (material brilhante).
Foto: Catarina Macedo (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses,
Setor de Entomologia Mdica e Forense/IOCFiocruz).

394 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 48. Sistema digestivo e respiratrio de triatomneo.


Ilustrao: Adaptada de Ramirez-Perez (1985) por Tereza Cristina M.
Gonalves (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses/IOCFiocruz).

As glndulas salivares so muito diversificadas quanto ao nmero, tamanho,


forma e localizao nos diferentes triatomneos. Em geral, localizam-se na
cavidade torcica, junto da parte inicial do tubo digestivo, onde encontram
espao suficiente para o seu desenvolvimento. O deslocamento para a
regio abdominal resulta dos eventuais movimentos peristlticos dos rgos
vizinhos. As glndulas salivares so em nmero de trs pares, utilizando-se
a nomenclatura D1, D2 e D3 para cada um deles. O par D1 corresponde
s glndulas principais, o D2, s glndulas suplementares e o par D3, s
glndulas acessrias. Em todas as espcies de triatomneos estudadas,
sempre encontramos esses trs pares de glndulas salivares que, na maioria

Entomologia Mdica | 395

das vezes, so de aspecto translcido ou levemente amarelado, como ocorre


em Panstrongylus megistus. Entretanto, no gnero Rhodnius, que apresenta as
glndulas D1 e D2, as glndulas salivares so alongadas e de cor avermelhada,
por causa da presena de uma substncia denominada nitroforina.
As formas infectantes de Trypanosoma rangeli podem ser encontradas
em glndulas salivares de triatomneos do gnero Rhodnius. As formas
infectantes Trypanosoma rangeli so introduzidas no hospedeiro vertebrado
durante a salivao, no incio do repasto sanguneo.
Para a taxonomia das espcies, os testculos dos triatomneos so uma das
estruturas da genitlia interna dos machos que tm sido alvo de estudos com
fins taxonmicos. Cada testculo formado por sete folculos testiculares entrelaados, envolvidos por uma membrana. Esses folculos apresentam diferente
comprimento, que varia individualmente e de acordo com a idade. Existem ainda
diferenas entre os folculos de um s testculo. Estudos com abordagem morfolgica e morfomtrica dessas estruturas demonstraram a possibilidade de sua utilizao na diferenciao dos principais gneros, Triatoma, Rhodnius e Panstrongylus,
que participam na transmisso da doena de Chagas, bem como no estudo de
complexos de espcies crpticas.

4.4.4 Diferentes tcnicas de criao de moscas em laboratrio


Os adultos de moscas coletados sero alocados em gaiolas de madeira de
30 cm x 30 cm x 30 cm, com laterais revestidas por tela de nilon, apresentando uma abertura frontal de 9 cm de dimetro, com uma manga de tecido
preto para facilitar o manuseio dos insetos. A dieta dos adultos dever ser
base de protena animal, que pode ser carne bovina, equina ou suna ou
fgado, ainda, em decomposio. Para a alimentao dos adultos, dever ser
oferecida, sem interrupo, sacarose granulada ou soluo de mel a 50% em
placa de Petri de 45 mm x 12 mm; utilizar pedaos de tela de nilon na placa

396 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

de Petri para servir de substrato para o pouso; quando se utiliza sacarose,


obrigatrio o fornecimento de gua embebida em gaze de algodo (fig. 49).

Figuras 49. A) Gaiola para criao dos adultos de dpteros muscoides;


B) Recipiente contendo substrato para oviposio e criao das larvas; C)
Recipientes contendo dieta larval e vermiculita para pupao; D) Recipientes
cobertos com tecido de nilon presos por elstico.
Fotos: Margareth Queiroz (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses,
Setor de Entomologia Mdica e Forense/IOCFiocruz).

Como substrato para a oviposio, recomenda-se a utilizao de carne bovina, equina ou suna ou fgado em decomposio. As massas de ovos, cerca
de 30 mg por recipiente, so transferidas para uma dieta de carne ou fgado
em incio de decomposio, geralmente com uma semana de refrigerador a
12C. Essa dieta deve ser colocada em recipientes de plstico com capacidade
para 500 mL e introduzida dentro de outro recipiente, com capacidade para
1.000 mL, contendo vermiculita ou solo inerte, para maximizar a pupao.
Esse ltimo recipiente deve ser tampado com tecido de nilon de malha fina
por exemplo, escaline , preso nas bordas com elstico. Os sarcofagdeos
larvipositam no mesmo substrato citado acima e para cada larva so recomendadas 2 g de dieta/larva.

Entomologia Mdica | 397

Aps as larvas maduras abandonarem espontaneamente a dieta e passarem para


o recipiente contendo vermiculita, devem ser coletadas, pesadas em lotes de 10
espcimes um parmetro utilizado como referncia de controle da colnia , e
colocadas em tubo de ensaio contendo vermiculita, tampado com algodo hidrfobo, aguardando-se a emergncia dos adultos.
***
O mtodo acima o mais simples para a criao desses insetos. No entanto, um mtodo que necessita de um local especial, pois o cheiro desagradvel liberado principalmente pela ao das larvas no meio natural de criao
importuna trabalhadores e visitantes, contaminando tambm o seu entorno,
alm de estarem presentes microrganismos que podem ser patognicos para o
homem. Para minimizar esse transtorno, h diversos estudos ainda incipientes
sobre outros tipos de dietas artificiais.
Aps a emergncia dos adultos colonizados em laboratrio, eles devem ser
separados um a um, alocando-se um macho e uma fmea em gaiolas de madeira,
para acasalamento. A dieta dos adultos deve ser base de protena animal, que
pode ser carne em decomposio oferecida at o 4 dia ps-emergncia, a fim de
estimular a oognese. O fornecimento de carne dever ser suspenso no 4 dia e
reintroduzido no 11 dia ps-emergncia, com o objetivo de padronizar o incio
da fase de oviposio. Sacarose granulada ou soluo de mel a 50% devem ser
oferecidas sem interrupo, como alimentao para os adultos, em placa de Petri
45 mm x 12 mm. Na placa de Petri, usam-se pedaos de tela de nilon para servir
como substrato de pouso. Quando se utiliza sacarose, importante que se fornea
gua embebida em gaze de algodo.
5. Colees entomolgicas
Denominamos coleo entomolgica aquela formada por insetos e partes
estruturais de insetos catalogados, ordenados, preservados e armazenados de
maneira adequada, com o intuito de servir como fonte de consulta para dife-

398 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

rentes estudos principalmente relativos taxonomia dos grupos , podendo


ter ainda um carter decorativo em exposies e museus.
As colees entomolgicas proveem rico material de estudo. A viso atual
sobre as colees entomolgicas tem mudado muito, passando da ideia esttica de espcimes guardados em gavetas, alheios dinmica da vida, para
uma viso mais abrangente, onde so aplicadas novas tecnologias e abordagens
prprias para o conhecimento da biodiversidade.
Finalidades do acervo de uma coleo entomolgica
Preservao e guarda do material biolgico representativo da biodiversidade;
registro do contexto histrico e cultural relacionado a esse material. Os diversos
grupos biolgicos, criteriosamente representados, identificados e catalogados, sero de suma importncia para o conhecimento das espcies e suas relaes com o
ambiente em que vivem.
Preservao e guarda de material biolgico testemunho, ou seja, de colees
organizadas por especialista, durante expedies cientficas e utilizadas para desenvolver projetos de pesquisa, artigos, teses e monografias.
Preservao e guarda, como fiel depositria, de material-tipo, como partipos,
haltipos, sntipos, lecttipos e netipos, depositados pelos autores das espcies.
Treinamento de pessoal qualificado nas reas de curadoria, tcnicas de montagem, preservao e catalogao e manejo de banco de dados informatizados em
colees entomolgicas.
Divulgao cientfica do acervo e dos trabalhos desenvolvidos dentro da coleo entomolgica, seja por meio de publicaes em revistas cientficas, simpsios
e congressos destinados ao pblico especializado, seja mediante mostras cientficas
e exposies, destinadas a alunos, pesquisadores e ao pblico leigo.

Entomologia Mdica | 399

Colees entomolgicas virtuais que vale a pena visitar


Fundao Oswaldo Cruz
Coleo Entomolgica do Instituto Oswaldo Cruz
http://www.ioc.fiocruz.br/ce/index.htm
Museu de Histria Natural de Washington (National Museum of Natural History)
Ver os links para as colees entomolgicas em: http://entomology.si.edu
Museu de Histria Natural de Londres (Natural History Museum)
http://www.nhm.ac.uk/research-curation/collections/departmental-collections/
entomology-collections/index.html

5.1 Tcnicas de conservao e montagem de culicdeos

A montagem dos insetos tem sua importncia, pois, ao serem incorporados a


uma coleo, passam a fazer parte de um acervo e estaro disponveis para estudiosos da rea. Por isso, foi estabelecida uma padronizao na montagem, que
varia para as diferentes ordens de inseto. Uma vez que existe a simetria bilateral,
isto , o lado direito semelhante ao lado esquerdo, importante que um dos
lados seja preservado, para que todas as estruturas possam ser observadas.
Tcnica de montagem de mosquitos adultos em alfinete entomolgico
Com a finalidade de conservao dos espcimes para coleo entomolgica
e estudos taxonmicos, utiliza-se a tcnica de montagem de mosquitos adultos
em alfinete entomolgico.
Material necessrio:
a) Microscpio estereoscpico ou lupa;
b) Cortador de tringulos de papel;

400 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

c) Placa de Petri;
d) Alfinete entomolgico;
e) Pinas de ponta fina;
f) Estiletes;
g) Tringulos de papel;
h) Etiquetas de papel para identificao;
i) Suporte de madeira ou cortia para montagem, com altura padro para o
tringulo e as etiquetas;
j) Esmalte cosmtico incolor;
k) Gavetas e armrios entomolgicos para armazenar os espcimes;
l) Naftalina para conservao.
Obs.: Todo o material deve ficar guardado junto em uma caixa apropriada
e que contenha uma etiqueta de identificao Material para montagem de
mosquitos adultos, para facilitar a organizao no momento da montagem.
Procedimento:
A montagem feita com o auxlio de um tringulo de papel, produzido
com um cortador de tringulos. A ponta livre do tringulo pode ou no ser
dobrada para baixo, dependendo do tamanho do mosquito. O tringulo
de papel transpassado, prximo sua base, por um alfinete entomolgico,
com o auxlio de um pdio-suporte feito de madeira, isopor, plstico ou
cortia, com diferentes alturas padronizadas. Cada altura corresponde a um
procedimento: a parte mais alta do pdio destina-se ao tringulo de papel; a
parte mdia do pdio, primeira etiqueta; na parte baixa do pdio, coloca-se
a segunda etiqueta.

Entomologia Mdica | 401

Figura 50. Dispositivo para padronizao da altura de tringulos


e etiquetas na montagem de mosquitos adultos.
Ilustrao: Acervo do Laboratrio de Transmissores de Hematozorios/IOCFiocruz.

Os mosquitos so colocados, com o auxlio de pinas de pontas finas,


em uma placa de Petri e posicionados de lado, com as pernas voltadas para
baixo ou para a base do tringulo (fig. 51). Essa etapa e a seguinte devem
ser feitas sob a lupa, para que se possa observar bem a posio da ponta do
tringulo na pleura mesotorcica do mosquito. Coloca-se uma pequena gota
de esmalte cosmtico incolor junto do ngulo livre do tringulo de papel e
encosta-se cuidadosamente essa ponta na pleura mesotorcica do mosquito
a ser montado, de forma que as pernas fiquem voltadas para baixo ou
posicionadas em direo ao alfinete. Deve-se ter cuidado para no colocar
esmalte em excesso, danificando partes importantes para a identificao do
mosquito. Com o auxlio de um estilete fino, fazem-se as correes da
posio do espcime sobre o tringulo, antes que o esmalte seque. Depois
da secagem do esmalte e aps a certificao de que o espcime est fixado
firmemente, so colocadas as etiquetas de identificao.

402 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 51. Posio do mosquito adulto sobre o tringulo.

Ilustrao: Acervo do Laboratrio de Transmissores de Hematozorios/IOCFiocruz.


As etiquetas servem para a identificao do espcime alfinetado, bem
como para as informaes sobre local de coleta e nome de quem classificou
(fig. 52). A primeira etiqueta traz as informaes do pas, estado, municpio,
local de coleta, data e nome do coletor. A segunda etiqueta tem o nome da
espcie, do determinador e a data. Pode haver uma terceira etiqueta opcional,
com informaes sobre o substrato da coleta e outras informaes consideradas
importantes. Se o espcime fizer parte de uma coleo, deve ser atribuda a
ele uma numerao de acesso. Na maioria das vezes, a segunda etiqueta no
colocada no momento da montagem, uma vez que geralmente a identificao
feita em momento distinto ao da montagem.
Os exemplares montados, devidamente identificados, devem ser guardados em
caixas, gavetas ou armrios entomolgicos adequados, e mantidos em local seco
e arejado (fig. 53). Para a manuteno do bom estado dos espcimes, p de
naftalina, que ajuda a impedir o ataque de pragas, deve ser colocado no fundo das
caixas e/ou gavetas.

Entomologia Mdica | 403

Figura 52. Adulto montado com as respectivas etiquetas de identificao.


Ilustrao: Acervo do Laboratrio de Transmissores de Hematozorios/IOCFiocruz.

Em caso de se tratar de material-tipo de espcies em descrio ou recentemente


descritas, uma rodela ou pequeno retngulo de papel colorido deve ser transpassado pelo alfinete entomolgico, entre o inseto e a etiqueta mais alta, de forma a
facilitar a distino dos espcimes mais importantes em meio coleo.

Figura 53. Mosquitos montados em alfinetes entomolgicos e etiquetados.


Fotos: Acervo do Laboratrio de Transmissores de Hematozorios/IOCFiocruz

Tcnica de montagem de formas imaturas e exvias de culicdeos


Com a finalidade de conservao dos espcimes para coleo entomolgica
e estudos taxonmicos, utiliza-se a tcnica de montagem de formas imaturas e
exvias larval e pupal de mosquitos entre lmina e lamnula.

404 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Material necessrio:
a) Microscpio estereoscpico ou lupa;
b) Lmina e lamnula;
c) lcool absoluto;
d) Esmalte cosmtico incolor;
e) Cola plstica;
f) Eugenol ou cellosolve;
g) Pincis finos;
h) Estiletes;
i) Etiquetas de papel para identificao;
j) Gavetas e armrios entomolgicos para armazenar os espcimes.
Procedimento:
Na montagem de formas imaturas e exvias de culicdeos, devem ser usadas
larvas de 4 estgio na montagem, pois nelas a posio e a forma das cerdas
esto definidas, e a quetotaxia estudo de vrios aspectos dessas cerdas,
como tamanho, posio, forma e ramificaes utilizada para a identificao
das espcies. As larvas devem ser mortas por imerso em gua quente com
temperatura em torno de 60C, e, logo aps, transferidas para um recipiente
contendo hidrxido de potssio (KOH) a 10%, por aproximadamente 12
a 24 horas, para clarificao e remoo da gordura. Esse tempo deve ser
calculado pela maior ou menor quitinizao da pea: quanto mais quitinizada,
maior deve ser o tempo. As larvas devem ser mergulhadas em gua destilada
por 15 minutos, para que fiquem livres do hidrxido de potssio, antes da
prxima etapa.
O prximo passo a desidratao. As larvas devem ser transferidas para
recipientes contendo lcool em diferentes concentraes, de 70%, 80%,
90% e absoluto, permanecendo em cada um deles por 10 minutos. As exvias larvais e pupais devem ser processadas a partir dessa etapa. Nessa etapa,
as larvas devem ser mergulhadas em um lquido, que pode ser o eugenol ou o
cellosolve, para diafanizao e nele permanecer por poucos minutos (5 a 10

Entomologia Mdica | 405

minutos). Finalmente as larvas podem ser montadas entre lmina e lamnula com
blsamo do Canad, caso na fase anterior tenha sido usado o eugenol, ou com
euparal, caso tenha sido usado o cellosolve.
As lminas assim preparadas podem ficar arrumadas em bandejas de
madeira, na temperatura ambiente, at que sequem completamente. Preferencialmente, tambm podem ser colocadas dentro de uma estufa com temperatura entre 40 e 45C, para que sequem mais rpido e sejam eliminadas
pequenas bolhas de ar que se formam durante a montagem. Aps a secagem
completa das lminas, as bordas da lamnula devem ser seladas com esmalte
cosmtico incolor.
Em uma das extremidades da lmina deve ser colada, com cola plstica,
a etiqueta de identificao da coleta com informaes como coletor, local
e data e, na outra extremidade, a etiqueta de identificao do espcime
com informaes como nome cientfico, nome do identificador e data.
Em cada etapa, a transferncia das larvas e/ou exvias deve ser feita com
um pincel fino, para evitar a danificao de estruturas ou perda de cerdas.
Outra opo seria deixar as larvas em um mesmo recipiente, sem transferi-las,
e trocar as solues com o auxlio de uma pipeta de ponta muito fina. Nesse
caso, deve-se assegurar que todo o lquido seja retirado completamente antes
que a soluo da prxima etapa seja adicionada. Misturas de solues podem
danificar o processo.
Tcnicas de montagem e conservao de triatomneos, flebotomneos, ceratopogondeos e simulideos

O triatomneo adulto ou ninfa deve ser alfinetado, de preferncia, no lado


direito do pronoto, nunca no meio do pronoto, para que um dos lados tenha a
morfologia preservada, deixando na parte superior do alfinete espao suficiente
para segurar com a ponta dos dedos. O inseto deve ficar perpendicular ao
alfinete, para ser observado ao microscpio estereoscpio.

406 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Os flebotomneos, ceratopogondeos e simulideos so geralmente montados entre lmina e lamnula ou imersos em soluo alcolica em vidros transparentes, devido ao seu pequeno tamanho. Algumas vezes, no entanto,
possvel a montagem cuidadosa em alfinete entomolgico.
Existem vrias tcnicas de montagem que, de modo geral, seguem os procedimentos usados para culicdeos imaturos. Os procedimentos de etiquetagem
tambm so os mesmos usados para os culicdeos.
Tcnicas de conservao e montagens de moscas
Geralmente, o material entomolgico preservado a seco ou em meio lquido,
embora possam ser preservadas partes de um exemplar de forma diferente por
exemplo, a genitlia de Sarcophagidae, que pode ser montada e preservada montada em lmina, assim como diversas espcies de larvas de muscoides.
A maioria das moscas preservada a seco; dependendo de seu tamanho,
da resistncia do corpo e dos apndices, as moscas so espetadas em alfinetes
entomolgicos, colados a tringulos de cartolina ou inseridos em envelopes
ou invlucros de papel transparente. Esse material deve passar antes por uma
secagem, usualmente em placa de Petri, sob luz quente.
Alguns muscoides frgeis ou com apndices quebradios so preservados em meio lquido, em geral lcool etlico 70%. H casos especiais de
preservao em lquido usando-se lcool 80%, lcool glicerinado ou outras
combinaes.
As etiquetas de procedncia reproduzem os dados dos rtulos de campo
e so afixadas individualmente no material a seco ou em lotes do material em
meio lquido nesse caso, utiliza-se papel vegetal escrito a nanquim ou a lpis.
Em insetos secos, etiquetas, com dimenso e impresso uniformizadas, so usadas para economizar espao. A etiqueta deve conter o local de procedncia,
data da coleta e nome do coletor; alm de outros dados importantes para o
estudo, como substrato da coleta, hora da coleta, entre outros.

Entomologia Mdica | 407

Para as formas adultas, a alfinetagem deve levar em conta o grupo de insetos. Para cada grupo, h uma posio correta de alfinetagem que no danifica
ou atrapalha o exame das partes importantes na identificao. Os insetos
devem ser montados a uma altura uniforme do alfinete e, para isso, blocos de
alfinetagem so utilizados. Durante a secagem, devem ser corrigidas as posies das asas, pernas e antenas, dependendo do caso. Insetos pequenos so
colados na ponta de tringulos de cartolina, e esses so alfinetados pela base.
Alguns insetos pequenos no podem ser alfinetados ou colados, especialmente aqueles de corpo mole, exigindo montagem em lminas para colecionamento e preservao. O procedimento de montagem de insetos em lminas de
vidro para microscopia varia de acordo com o inseto e o meio de montagem.
Os ovos e as larvas so conservados e montados em via mida ou em lminas.
As moscas costumam depositar cerca de 300 ovos a cada postura, de acordo com a espcie. Essa postura, que pode se repetir de 3 a 4 vezes durante
toda a vida do inseto, costuma ser feita sob a forma de aglomerado ou em massa,
uma estratgia das fmeas para garantir a maior sobrevivncia da prole. A famlia
Sarcophagidae, no entanto, deposita diretamente larvas de primeiro nstar sobre
o cadver ou sobre o substrato de alimentao das larvas, sendo esse outro tipo
de estratgia utilizada pelos insetos na competio por alimento.
Os ovos so estruturas alongadas de cor branca, com a superfcie cncava, localizadas dorsalmente em relao ao corpo da fmea. So revestidos
pelo crion, que tm como funo principal proteger o embrio da dessecao. Na parte dorsal do ovo, pode ser observada uma regio diferenciada,
denominada rea mediana, responsvel principalmente pelas trocas gasosas
do embrio com o meio, servindo e que serve tambm como ponto de fissura para a ecloso da larva.
As larvas de dpteros muscoides apresentam formato vermiforme, so podes e possuem cabea vestigial, chamada acfala, formando um pseudoencfalo. A poro anterior afilada; a posterior termina de forma abrupta. Dessa
forma, as larvas esto adaptadas para se enterrarem, tanto nos tecidos quanto
no solo, e dar incio fase de pupa. O corpo dividido em 12 segmentos

408 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

e revestido por uma cutcula torcica coberta por espinhos ao longo de reas
ou faixas transversais.
A regio anterior constituda por peas fortemente esclerotizadas, denominadas escleritos, que formam o esqueleto cfalo-farngeo, onde se localizam os
ganchos bucais ou orais em forma de garra, com as extremidades agudas localizadas na face ventral do pseudoencfalo. Os ganchos bucais se articulam com o
esclerito hipostomal intermedirio, que se une a um grande esclerito faringiano,
constitudo de duas lamelas laterais, chamadas cornos, unidas ventralmente. Na
extremidade anterior do 1 segmento ou pseudocfalo, h um par de antenas
reduzidas, um par de pequenos palpos maxilares e um par de tubrculos ticos.
No 2 segmento, as larvas de segundo e terceiro nstar apresentam um par de
espirculos laterais semelhante a tubrculos, com projees que terminam em
aberturas espiraculares. No ltimo segmento da larva, h um par de espirculos
posteriores de grande importncia na identificao das espcies de dpteros
muscoides, bem como dos nstares larvais; cada espirculo geralmente rodeado
por um peritrema fortemente esclerotizado e pigmentado, que pode ser completo ou incompleto na parte ventral, formando uma pequena estrutura circular
que recebe o nome de boto espiracular, e que de extrema importncia na
identificao da espcie.

Figura 54. A) Larvas de muscoides no meio de criao; B) Espirculos


posteriores de larvas de moscas mostrando um par de aberturas espiraculares e
peritrema, elementos importantes para a taxonomia.
Fotos: Margareth Queiroz (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses,
Setor de Entomologia Mdica e Forense/IOCFiocruz).

Entomologia Mdica | 409

As larvas passam por trs nstares e duas mudas, e crescem bastante,


principalmente no segundo e terceiro nstares. O tamanho est relacionado
com a espcie, mas tambm sofre influncia da alimentao, da temperatura
e da umidade. As larvas se alimentam vorazmente em todos os nstares,
pois nessa fase que precisam acumular energia suficiente para todas as
transformaes que ocorrem na fase de pupa; por isso, as larvas dos dpteros
muscoides competem com as diversas espcies que colonizam cadveres ou
feridas dos animais em busca da maior quantidade de alimento.
As pupas podem ser alfinetadas ou conservadas em pequenos recipientes,
sem serem alfinetadas, e preservadas a seco.
As pupas so formadas a partir do endurecimento do exoesqueleto do
ltimo nstar larval; nessa fase, a larva sofre modificaes para dar origem
ao adulto. O puprio, ou seja, a casca da pupa que fica vazia com a
emergncia do adulto, imvel e tem forma ovoide ou de barril e colorao
castanho, que vai escurecendo com o passar dos dias. Nele ainda podem ser
observados caracteres da larva, como os resqucios dos espirculos, alm de
estruturas especficas dessa fase. Devem ser procurados no solo. Ao serem
coletados, sua cor deve ser anotada visto que puprios recentes so claros,
escurecendo gradualmente, at alcanar a cor marrom escura aps 24 horas.
Puprios vazios precisam ser coletados, pois indicam a emergncia recente de
adultos, podendo ser investigados nas roupas da vtima ou sob a mesma.

410 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 55. Larvas de Hermetia illuscens grandes e castanhas; larvas de Ophyra


sp, pequenas e claras, pupas novas claras e pupas velhas.
Foto: Margareth Queiroz (Laboratrio de Transmissores de Leishmanioses,
Setor de Entomologia Mdica e Forense/IOCFiocruz).

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Malacologia | 413

Captulo 5

Malacologia
Silvana Carvalho Thiengo
Monica Ammon Fernandez
Aline Carvalho Mattos

Malacologia o ramo da cincia que estuda os moluscos. Esse grupo, segundo maior em nmero de espcies descritas, possui incontestvel relevncia
por sua utilizao na alimentao desde os primrdios da humanidade, bem
como do ponto de vista biolgico e parasitolgico, como ser visto a seguir.
Entre as classes pertencentes ao filo Mollusca, Gastropoda e Bivalvia merecem destaque por sua importncia mdica, veterinria e econmica. Gastropoda engloba cerca de trs quartos do nmero total de espcies do filo,
incluindo os transmissores da esquistossomose e de outras helmintoses, alm de
espcies consideradas pragas de diferentes cultivos. Bivalvia abrange a maioria
das espcies de moluscos utilizadas na alimentao humana (ostras, mexilhes,
sernambi, entre outros) e tambm algumas que causam prejuzos econmicos
como os teredindeos, que perfuram ancoradouros e cascos de embarcaes
de madeira.

414 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

1. Gastrpodes

As principais caractersticas dos gastrpodes so: 1) ocorrncia de toro


durante o desenvolvimento embrionrio (giro de 180) da massa visceral,
havendo algumas excees; 2) presena de rdula (dentes quitinosos mveis dispostos em sries, que variam em nmero e forma, de acordo com o
tipo de alimentao); 3) presena de manto ou plio (tecido que recobre
a massa visceral, responsvel pela sntese da concha); 4) cavidade palial ou
cavidade do manto (onde ocorrem a circulao, a respirao, a excreo e
a reproduo); 5) sistema circulatrio aberto; 6) respirao branquial, pulmonar ou tegumentar; 7) tubo digestivo completo (com boca e nus, alm
de glndulas anexas); 8) sistema nervoso ganglionar; 9) um ou dois pares
de tentculos; 10) massa cefalopodal (expanso musculosa de superfcie
ventral em forma de sola, fundida com a cabea e que corresponde regio
que se expande para fora da concha); 11) msculo columelar (que prende
o corpo do animal concha); 12) concha geralmente univalva e espiralada,
porm pode ser reduzida e at mesmo estar ausente em algumas espcies
(os principais termos utilizados no estudo da concha esto representados na
fig. 1); 13) hermafroditas ou diicos, com fecundao externa, fecundao
interna, fecundao cruzada, autofecundao, partenognese, alternncia de
geraes e neotenia; 14) desenvolvimento direto (viviparidade, ovoviviparidade ou oviparidade) ou indireto, por meio de larvas fixas ou planctnicas
(trocfora e vliger); 15) habitat: marinho, lmnico (gua doce) e terrestre.
Tradicionalmente, a classe Gastropoda dividida nas subclasses Prosobranchia, Opisthobranchia e Pulmonata.

Malacologia | 415

Figura 1. Vista ventral da concha de Physa marmorata Guilding, 1828, em posio anatmica, mostrando os principais termos utilizados em conquiliologia. (Escala: 5 mm.)
Foto: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

1.1 Subclasse Prosobranchia

Possuem brnquias localizadas anteriormente ao corao, concha sempre


presente e oprculo; os sexos geralmente so separados (diicos) e a maioria
das espcies marinha, porm h representantes lmnicos e terrestres. As famlias
e superfamlia encontradas em ambientes lmnicos no Brasil so Ampullariidae,
Thiaridae e Rissooiidea (Fig. 2).

1.1.1 Ampullariidae
So os maiores gastrpodes lmnicos, podendo alcanar 17 cm de comprimento. Esto amplamente distribudos no pas, geralmente em guas lnticas.1 Sua concha globosa, com exceo do gnero Marisa (planispiral).
As espcies americanas possuem oprculo crneo. So animais diicos, mas,
geralmente, sem dimorfismo sexual externo muito evidente. Efetuam respirao dupla: pulmo e brnquia. So bastante resistentes dessecao. Os
1

guas lnticas so as guas paradas ou estacionrias, por exemplo, os lagos.

416 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

gneros encontrados no Brasil so Asolene, Felipponea, Marisa, Pomacea e


Pomella. Espcies de Pomacea e Marisa cornuarietis (Linnaeus, 1758) foram
utilizadas em programas de controle biolgico de Biomphalaria spp., transmissor da esquistossomose.

1.1.2 Thiaridae
Tm concha geralmente turriculada,2 e seus primeiros giros3 frequentemente
encontram-se danificados, ou mesmo ausentes, por causa do atrito com o
substrato. Possuem oprculo crneo. Vivem preferencialmente em ambientes
ricos em oxignio. Sua reproduo sexuada; na ausncia de machos, porm,
ocorre partenognese.
A espcie afro-asitica Melanoides tuberculatus (Mller, 1774), embora
extica, de ampla distribuio no territrio brasileiro. Na regio do Caribe,
foi utilizada, com sucesso, em programas de controle biolgico das espcies
transmissoras do Schistosoma mansoni Sambon, 1907.
Espcie extica toda espcie que no nativa de uma determinada rea.

1.1.3 Rissooiidea
Tm concha pequena oval-cnica, ou mesmo turriculada, e oprculo crneo s vezes calcificado; vivem em gua doce, podendo habitar gua salobra.
Alguns gneros encontrados no Brasil so Littoridina, Heleobia e Idiopyrgus.

2
3

De forma helicoidal alongada.


Cada volta em torno do eixo columelar.

Malacologia | 417

Figura 2. Exemplares de prosobrnquios: A) Pomacea insularum (dDOrbigny,


1835); B) Desova de Pomacea sp; C) Marisa planogyra Pilsbry, 1933; D)
Melanoides tuberculatus; E) Idiopyrgus sp. (Escala: 5 mm.)
Fotos: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

1.2 Subclasse Opisthobranchia

Est limitada ao ambiente marinho. Exemplo: o grupo Nudibranchia, que


engloba as lesmas do mar.

418 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

1.3 Subclasse Pulmonata

Apresentam tecido ricamente vascularizado que reveste o teto da cavidade


palial e que, fundido com o colo, forma um saco pulmonar. Possuem concha
externa ou interna, que pode estar reduzida ou mesmo ausente. A maioria
das espcies hermafrodita. A subclasse Pulmonata inclui trs ordens:
Stylommatophora, Systellommatophora e Basommatophora.

1.3.1 Ordem Stylommatophora


Abrange a maioria dos gastrpodes terrestres. Os estilomatforos possuem
dois pares de tentculos invaginveis e olhos situados na extremidade dos
tentculos ceflicos (posteriores). So hermafroditas, geralmente com abertura
genital nica. Nessa ordem est includo o molusco extico Achatina fulica
Bowdich, 1822, hospedeiro do Angiostrongylus cantonensis (Chen, 1935),
nematoide responsvel pela meningoencefalite eosinoflica.

Figura 3. Exemplar adulto e ovos de Achatina fulica.


Foto: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

1.3.2 Ordem Systellommatophora


No possuem concha. Apresentam dois pares de tentculos no invaginveis (retrteis). Ocorrem no ambiente terrestre exemplo, as lesmas, da famlia
Veronicellidae e marinho exemplo, os integrantes da famlia Onchidiidae.

Malacologia | 419

Algumas espcies de veroniceldeos (fig. 4) so as principais transmissoras do nematoide Angiostrongylus costaricensis Morera & Cspedes, 1971,
agente etiolgico da angiostrongilose abdominal.

Figura 4. Vista dorsal e ventral do veroniceldeo Sarasinula marginata (Semper,


1885), hospedeiro natural de Angiostrongylus costaricensis. (Escala: 12 mm.)
Foto: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

1.3.3 Ordem Basommatophora


Possuem concha sem oprculo. So aquticos a maioria de gua doce.
Apresentam um par de tentculos, no invaginvel, com os olhos situados na
base. So hermafroditas, com aberturas sexuais separadas.

2. Moluscos de importncia epidemiolgica

Os moluscos so hospedeiros de trematdeos digenticos e de alguns nematoides parasitos do homem e dos animais. No Brasil, as principais doenas
relacionadas aos moluscos so a esquistossomose, a fasciolose, a angiostrongilose abdominal e, recentemente, a meningoencefalite eosinoflica. Existem
outros moluscos que, acidentalmente, podem injetar veneno em seres humanos,
causando a morte por exemplo, gastrpodes marinhos da famlia Conidae;

420 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

suas vtimas so, em geral, mergulhadores e catadores de conchas. H ainda


outras espcies que podem causar intoxicao alimentar e transmitir o clera.

2.1 Ordem Basommatophora

A ordem Basommatophora possui cinco famlias: Ancylidae, Chilinidae,


Physidae, Lymnaeidae e Planorbidae, sendo as duas ltimas de importncia
mdica e veterinria, por compreenderem os transmissores dos trematdeos
Schistosoma mansoni e Fasciola hepatica Linnaeus, 1758.

2.1.1 Famlia Ancylidae


Possuem concha cnica, sem enrolamento; so animais pequenos, sem importncia mdico-veterinria (fig. 5). Os gneros presentes na Amrica do
Sul so Ancylus, Anisancylus, Burnupia, Ferrissia, Gundlachia, Hebetancylus e
Uncancylus.

Figura 5. Famlia Ancylidae. (Escala: 5 mm)


Foto: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

2.1.2 Famlia Chilinidae


Tm concha dextrgira, globosa, com dentes na parede columelar da abertura
(fig. 6). No Brasil, ocorrem apenas na regio Sul. No tm importncia mdica.

Malacologia | 421

Figura 6. Famlia Chilinidae. (Escala: 5 mm.)

Foto: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

2.1.3 Famlia Physidae


Apresentam concha com abertura para a esquerda (sinistrgira) e tentculos longos e filiformes (fig. 7). Sem importncia mdica. Entre as espcies
presentes no Brasil, esto Physa acuta Draparnaud, 1805 e Physa marmorata
Guilding, 1828.

Figura 7. Physa marmorata Guilding, 1828. (Escala: 5 mm.)


Foto: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

2.1.4 Famlia Lymnaeidae


Possuem concha com abertura para a direita (dextrgira), ausncia de dentes
na parede columelar da abertura e tentculos curtos e triangulares. Vivem
preferencialmente em guas estagnadas ou de curso lento e possuem hbitos
anfbios (fig. 8). Entre as espcies presentes no Brasil, Lymnaea columella Say,
1817 e Lymnaea viatrix dOrbigny, 1835 so responsveis pela transmisso

422 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

da Fasciola hepatica, trematdeo que parasita principalmente o fgado de


ruminantes. Vrios casos de fasciolose humana j foram registrados no Brasil.

Figura 8. Lymnaea columella Say, 1817. (Escala: 5 mm.)


Foto: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

2.1.5 Famlia Planorbidae


Tm concha geralmente planispiral, tentculos longos e filiformes e aberturas
genitais esquerda (fig. 9).

Figura 9. Representantes de trs espcies de diferentes gneros da famlia


Planorbidae no Brasil: A) Biomphalaria glabrata (Say, 1818); B) Plesiophysa
guadeloupensis (Fischer Maz, 1883); C) Drepanotrema lucidum (Pfeiffer,
1839). (Escala: A e B 3 mm; C 1,5mm.)
Fotos: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

Malacologia | 423

Alm do tamanho, tais espcies diferem em diversas caractersticas morfolgicas e conquiliolgicas. Por exemplo, somente nos exemplares do gnero
Drepanotrema a abertura da concha em forma de foice, e so observadas, na
maioria de suas espcies, faixas pigmentadas nos tentculos, nas faces dorsal e
lateral da cabea e nas margens da mufla e do p.
2.1.5.1 Gnero Biomphalaria
Apresentam concha planispiral, com dimetro variando nos indivduos
adultos de 7 mm a 40 mm. A cor natural da concha amarelo-palha, mas
modifica-se em contato com substncias corantes dissolvidas na gua dos criadouros, como o xido de ferro, que confere s conchas colorao mais escura,
passando por vrios tons de marrom at o negro.
No Brasil existem onze espcies e uma subespcie descritas no gnero
Biomphalaria, e apenas trs so hospedeiras naturais do trematdeo Schistosoma mansoni. Trs so hospedeiras potenciais, uma vez que se infectam quando
expostas experimentalmente ao parasito.
Hospedeiro natural: o parasitismo ocorre em condies naturais.
Hospedeiro potencial: o parasitismo ocorre em condies de laboratrio.
Alm da identificao baseada nos caracteres conquiliolgicos e anatmicos, existem estudos genticos (cruzamentos entre indivduos, utilizando o albinismo como marcador) e moleculares capazes de fornecer diagnstico preciso.
Principais caractersticas:
Apresentam dois tentculos longos e filiformes, e olhos na base dos tentculos. A boca contornada pela mandbula, que, quando vista de frente,
apresenta a forma de um T. No colo, encontram-se as aberturas genitais: a masculina, localizada atrs da base do tentculo esquerdo, e a feminina, localizada
um pouco mais atrs, sob a pseudobrnquia. O p oblongo. Na poro
ceflica da massa visceral, o manto dobra-se para formar a cavidade pulmonar.

424 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Quadro 1. Espcies e subespcies de Biomphalaria descritas para o Brasil,


assinalando as hospedeiras naturais, as potenciais e as no hospedeiras de
Schistosoma mansoni.
Hospedeiras
naturais
Hospedeiras
potenciais
No hospedeiras

Biomphalaria glabrata (Say, 1818)


Biomphalaria tenagophila (dOrbigny, 1835)
Biomphalaria straminea (Dunker, 1848)
Biomphalaria amazonica Paraense, 1966
Biomphalaria peregrina (dOrbigny, 1835)
Biomphalaria peregrina cousini Paraense, 1966
Biomphalaria intermedia Paraense & Deslandes.
Biomphalaria kuhniana (Clessin, 1883)
Biomphalaria schrammi (Crosse, 1864)
Biomphalaria oligoza Paraense, 1975
Biomphalaria occidentalis Paraense, 1981
Biomphalaria tenagophila guaibensis Paraense, 1984

Malacologia | 425

Figura 10. Conchas de espcies e subespcies de Biomphalaria que


ocorrem no Brasil: A) Biomphalaria glabrata; B) Biomphalaria tenagophila; C)
Biomphalaria straminea; D) Biomphalaria amazonica; E) Biomphalaria peregrina;
F) Biomphalaria intermedia; G) Biomphalaria kuhniana;
H) Biomphalaria schrammi; I) Biomphalaria oligoza; J) Biomphalaria
occidentalis; L) Biomphalaria tenagophila guaibensis. M) Biomphalaria cousini.
(Escala: 5 mm.)
Fotos: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

426 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 11. Biomphalaria, animal retirado da concha, com o manto levemente


rebatido, para visualizao dos rgos internos.
Estruturas: massa cefalopodal (ms), cavidade pulmonar (cp), mufla (mf), tentculo
(te), colo (c), abertura genital masculina (om), colar ou borda do manto (cm),
pseudobrnquia (ps), pneumstoma (pn), abertura anal (an), msculo columelar (mc),
crista lateral (cl), crista retal (ct), veia renal (vr), veia pulmonar (vp), tubo renal (tr), reto
(rt), glndula de albmen (ga), intestino anterior (ia), intestino mdio (im), intestino
posterior (ip), estmago (et), glndula digestiva (gd), p (p), ovoteste (ot).
Ilustrao: Extrada de Paraense, 1975.

Manto
No manto podem ser observados:
a) o corao, contido no pericrdio e constitudo por uma aurcula e
um ventrculo;
b) parte da glndula de albmen;

Malacologia | 427

c) as veias pulmonar e renal;


d) o ureter e seu meato;
e) o rim;
f) o pneumstoma;
g) a crista lateral.
O rim formado por uma poro sacular, justaposta esquerda do pericrdio, que se continua por uma poro tubular (tubo renal) situada entre a
veia renal e a veia pulmonar.
A observao do manto extremamente importante para a identificao especfica, uma vez que o principal carter diagnstico de Biomphalaria glabrata,
a crista renal, encontra-se no manto.

Figura 12. Estruturas do manto das bionfalrias: A) Manto de Biomphalaria sp;


B) Manto de Biomphalaria glabrata, com crista renal.
Estruturas: corao (co), pericrdio (pe), glndula de albmen (ga), veia pulmonar
(vp), veia renal (vr), tubo renal (tr), crista lateral (cl), crista renal (cr), colar do manto (cm), ureter (ur), meato do ureter (mu) e pneumstoma (pn).
Ilustrao: Extrada de Paraense, 1975.

428 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Sistema respiratrio
Predomina a respirao atmosfrica a hematose ocorre na rede vascular
da parede pulmonar, de onde o sangue flui para o corao por meio da veia
pulmonar. A respirao aqutica ocorre pela pseudobrnquia (sede principal)
e pelo tegumento em contato com o meio lquido.
Sistema nervoso
O sistema nervoso est formado por onze gnglios, sendo cinco em pares bucais, cerebrais, pleurais, pedais e parietais e um isolado visceral.
Esses gnglios formam um anel chamado anel periesofagiano ao redor do
esfago, logo atrs do saco bucal.
Sistema digestivo
A rdula, presente no saco bucal, raspa o substrato, extraindo os alimentos:
algas, bactrias, fragmentos de animais e vegetais, sais minerais e outros.

Figura 13. Sistema digestivo de Biomphalaria sp.


Estruturas: mandbula (ma); saco bucal (sb); dentes da rdula: central (c), marginal (m),
intermedirio (i) e lateral (l); glndula salivar (gs); esfago (ef); estmago: papo (pa),
moela (mo), piloro (pl); glndula digestiva (gd); intestino anterior (ia), mdio (im) e
posterior (ip); reto (re); crista retal (ct); nus (an). sistema nervoso: anel periesofagiano
(sn). sistema respiratrio: pseudobrnquia (pb). msculo columelar (mc).
Ilustrao: Extrada de Paraense, 1975.

Malacologia | 429

Sistema reprodutor
Embora os animais sejam hermafroditas, a fecundao cruzada predomina
sobre a autofecundao. Se a fecundao cruzada propicia maior variabilidade
gentica, a autofecundao garante a formao de uma populao a partir
de um nico indivduo (estudos experimentais realizados por W. L. Paraense
demonstraram que um nico exemplar de B. glabrata pode produzir cumulativamente 10 milhes de descendentes em trs meses).

Figura 14. Biomphalaria parcialmente dissecada, mostrando


a interao entre os rgos.
Estruturas hermafroditas: canal coletor do ovoteste (cc), vescula seminal (vs), ovispermiduto (od) e ovoteste (ot). Estruturas femininas: bolsa do oviduto (bo), espermateca
(es), canal da espermateca (ces), glndula nidamental (gn), oviduto (ov), vagina (va),
bolsa vaginal (bv), tero (ut) e glndula de albmen (ga). Estruturas masculinas: bainha
do pnis (bp), canal deferente (cd), prstata (pr), prepcio (pp) e espermiduto (ed).
Outras estruturas: Gnglios nervosos (sn), glndula salivar (gs), veia pulmonar (vp), veia
renal (vr), tubo renal (tr), crista renal (cr), pericrdio (pc), colar ou borda do manto
(cm), ureter (ur), meato do ureter (mu), cavidade pulmonar (cp), saco bucal (sb), esfago (ef), estmago (est), intestino (i) e glndula digestiva (gd).
Ilustrao: Extrada de Paraense e Deslandes, 1955.

430 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

A disseco do sistema reprodutor permite a identificao especfica dos planorbdeos, mediante a observao morfolgica dos rgos: presena e forma de
determinadas estruturas, quantificaes, propores entre rgos, mensuraes, posicionamento, dentre outros. De um modo geral, as espcies vetoras podem ser
identificadas com base nas caractersticas que se descrevem abaixo.

Biomphalaria glabrata: a concha de exemplares adultos tem de 20 mm a


40 mm de dimetro, de 5 mm a 8 mm de largura e cerca de seis a sete giros
as paredes laterais dos giros so arredondadas.

Malacologia | 431

Figura 15. Biomphalaria glabrata: A) Vista do lado direito, vista frontal e vista do lado
esquerdo, respectivamente; B) Manto de um exemplar adulto, onde se v a crista renal;
C) Manto de um exemplar jovem com linha renal pigmentada; D) Ssistema reprodutor:
canal coletor do ovoteste (cc), encruzilhada genital (eg), ovispermiduto proximal (odp),
ovispermiduto distal (odd), ovoteste (ot) e vescula seminal (vs); estruturas masculinas:
bainha do pnis (bp), canal deferente (cd), espermiduto (ed), msculos do complexo
peniano retrator (mr) e protrator (mp) , prepcio (pp) e prstata (pr); estruturas
femininas: bolsa do oviduto (bo), bolsa vaginal (bv), espermateca (es), glndula nidamental (gn), oviduto (ov), vagina (va) e tero (ut); corao (co), pericrdio (pe),
glndula de albmen (ga), veia pulmonar (vp), veia renal (vr), tubo renal (tr), crista lateral
(cl), crista renal (cr), linha renal pigmentada (lr), colar do manto (cm), ureter (ur), meato
do ureter (mu) e pneumstoma (pn).
Ilustrao: Extrada de Paraense, 1975.

432 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Biomphalaria tenagophila: a concha de exemplares adultos tem de 15 mm a


35 mm de dimetro, com cerca de sete a oito giros carenados, acentuadamente no lado esquerdo.

Figura 16. Biomphalaria tenagophila:


A) Concha: vista do lado direito, vista frontal e vista do lado esquerdo,
respectivamente; B) Manto mostrando o tubo renal liso; C) Sistema reprodutor:
canal coletor do ovoteste (cc), encruzilhada genital (eg), ovispermiduto proximal
(odp), ovispermiduto distal (odd), ovoteste (ot) e vescula seminal (vs); estruturas
masculinas: bainha do pnis (bp), canal deferente (cd), espermiduto (ed), msculos
do complexo peniano retrator (mr) e protrator (mp) , prepcio (pp) e prstata
(pr); estruturas femininas: bolsa do oviduto (bo), bolsa vaginal (bv), espermateca
(es), glndula nidamental (gn), oviduto (ov), vagina (va) e tero (ut). Estruturas:
corao (co), pericrdio (pe), glndula de albmen (ga), veia pulmonar (vp), veia
renal (vr), tubo renal (tr), crista lateral (cl), colar do manto (cm), ureter (ur), meato
do ureter (mu) e pneumstoma (pn).
Ilustrao: Extrada de Paraense, 1975.

Malacologia | 433

Caracteres diagnsticos de Biomphalaria tenagophila


concha carenada;
sistema reprodutor com bolsa vaginal bem definida;
anatomia quase idntica de B. glabrata, diferindo pela ausncia de
crista renal pigmentada.

Biomphalaria straminea: a concha de exemplares adultos tem de 10 mm


a 16 mm de dimetro, com 3 mm a 4 mm de largura e cerca de cinco giros.

434 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 17. Biomphalaria straminea: A) Concha: vista do lado direito, vista


frontal e vista do lado esquerdo, respectivamente; B) Manto, no qual se v o
tubo renal liso; C) Sistema reprodutor: canal coletor do ovoteste (cc), encruzilhada genital (eg), ovispermiduto proximal (odp), ovispermiduto distal (odd),
ovoteste (ot) e vescula seminal (vs); estruturas masculinas: bainha do pnis (bp),
canal deferente (cd), espermiduto (ed), msculos do complexo peniano retrator (mr) e protrator (mp) , prepcio (pp) e prstata (pr); estruturas femininas:
bolsa do oviduto (bo), enrugamento vaginal (ev), espermateca (es), glndula
nidamental (gn), oviduto (ov), vagina (va) e tero (ut).
Estruturas: corao (co), pericrdio (pe), glndula de albmen (ga), veia pulmonar (vp), veia renal (vr), tubo renal (tr), crista lateral (cl), colar do manto
(cm), ureter (ur), meato do ureter (mu) e pneumstoma (pn).
Ilustrao: Extrada de Paraense, 1975.

Caracteres diagnsticos de Biomphalaria straminea


parede dorsal da vagina enrugada devido presena de uma srie de
ondulaes transversais (enrugamento vaginal bem ntido).

Malacologia | 435

Observao: embora os caracteres diagnsticos mais marcantes das espcies transmissoras presentes no Brasil tenham sido relacionados anteriormente, a identificao precisa requer anlises criteriosas de vrios
exemplares (preferencialmente sries de indivduos), uma vez que existem outras espcies com caractersticas similares.

3. Tcnicas malacolgicas
3.1 Gastrpodes lmnicos

a) Coleta dos moluscos


Os moluscos lmnicos podem ser encontrados em diferentes colees hdricas, tais como audes, alagados, brejos, crregos, lagoas, lagos, valas de
esgoto ou drenagem, riachos e rios. A correnteza dos rios e dos crregos
um fator importante: as colnias geralmente so abundantes em guas estagnadas; em guas correntes, com velocidade superior a 30 cm por segundo, os
moluscos no formam populaes. Os representantes da classe Gastropoda
so encontrados aderidos vegetao, s rochas ou s margens do criadouro,
podendo tambm estar enterrados no fundo do corpo dgua esse ltimo
comportamento mais frequente nos moluscos pertencentes classe Bivalvia.
b) Equipamentos necessrios
a) Concha de captura: consiste de um cabo de madeira ou ao, com
aproximadamente 1 m de comprimento, acoplado a uma peneira ou a
uma concha perfurada de metal, com furos em torno de 2 mm. Para facilitar o transporte da concha, o cabo pode ser confeccionado em duas
partes unidas por uma rosca ou um parafuso. A largura da malha ou dos
furos importante, pois deve permitir somente a passagem da gua do
criadouro, retendo pequenos espcimes como Ancylidae, Antillorbis,

436 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Drepanotrema, Biomphalaria jovem e pequenos bivalves. Em alguns casos, a concha de captura pode ser substituda por uma draga e peneiras
para triagem;
b) Pinas longas e pinas com pontas finas: em alguns ambientes, pinas
com pontas finas so necessrias para retirar o molusco que se encontre
preso s frestas de rochas ou dos troncos;
c) Recipientes plsticos e sacos de plstico ou de tecido, umedecido,
em gua: para acondicionar os moluscos maiores, como Pomacea spp;
d) Luvas e botas de borracha, para proteo individual.
e) Caderneta de campo, lpis e fita adesiva para a identificao do
bitopo e da coleta: todas as anotaes devem ser feitas no local, relacionando tipo de ambiente, vegetao, topografia, clima, temperatura e
pH da gua, umidade do ar, fauna acompanhante e coordenadas geogrficas obtidas com um aparelho de sistema de posicionamento global
(GPS). Outras anlises da gua, como turbidez, oxignio dissolvido,
ferro, cloretos, gs carbnico, cloro e mangans, podem ser feitas no
local, com o uso de aparelhos especficos, ou aps o transporte da
amostra, no laboratrio;
f) Bolsa trmica ou isopor para o transporte: o uso de um pouco de
gelo aconselhvel nas regies mais quentes, desde que no entre em
contato direto com os recipientes contendo os moluscos;
g) Coletes com vrios bolsos, para facilitar o transporte do equipamento
de trabalho.
c) Mtodos de coleta
Os mtodos de coleta variam segundo o tipo de estudo: anlises qualitativas requerem vrias amostragens em pocas diferentes; anlises quantitativas
baseiam-se em tcnicas que envolvem a delimitao da rea amostral, o tempo
de coleta ou o nmero de conchadas e a quantidade de coletores.

Malacologia | 437

Figura 18. Conchas para a captura de moluscos lmnicos.

A tcnica de coleta consiste em raspar com a concha de captura a vegetao submersa, as margens e o fundo dos criadouros. Na superfcie, o material recolhido deve ser cuidadosamente analisado para detectar a presena
dos moluscos, observando-se folhas e pequenos gravetos onde espcimes
jovens ou pequenos moluscos como os ancildeos podem estar presos.
medida que os moluscos forem sendo encontrados, devem ser colocados
no recipiente plstico, sem gua, e o material da concha deve ser lavado
at a confirmao da ausncia de moluscos, para ento ser desprezado.
aconselhvel que se coloque no frasco um pequeno pedao de vegetao
(folha) retirado do criadouro, para manter a umidade; se forem coletados
exemplares da famlia Ancylidae, necessrio colocar um pouco da gua.
imprescindvel colocar uma etiqueta com o nmero de identificao referente s anotaes da caderneta de campo. A busca dos moluscos deve ser
realizada em diferentes pontos de cada criadouro, para se obter uma boa
amostragem da malacofauna presente.
Os criadouros podem ser temporrios, quando tm gua apenas em alguns
perodos, ou permanentes. Podem ser formados pela gua que mina do solo

438 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

(por vertentes, fontes ou poos); pela gua da chuva ou por drenagem de


superfcie; por guas acumuladas em recipientes artificiais, cisternas, sarjetas
ou valetas, charcos, inundaes, valas de irrigao e caldeires (grandes
colees de gua em cavidades de pedreiras). So de grande importncia
epidemiolgica lagoas, represas, crregos e rios, pela presena de pescadores ou banhistas, e os audes, por serem as nicas fontes de gua em certas
localidades.
Aps o reconhecimento do local, as equipes de campo devem identificar e
assinalar os criadouros atuais e potenciais dos planorbdeos, caracterizando aqueles de importncia epidemiolgica no que diz respeito frequncia da populao
ao local, ocorrncia de planorbdeos com formas infectantes de Schistosoma
mansoni, densidade populacional dos moluscos e espcie transmissora. Sempre que possvel, os dados pluviomtricos devem ser includos.
Em colees hdricas aparentemente secas, cobertas por camadas de barro
(crostas), a pesquisa de planorbdeos torna-se mais trabalhosa: o sedimento
deve ser removido com enxada (equipamento a ser inserido, conforme o ambiente a ser pesquisado) e cuidadosamente analisado quanto presena dos
moluscos, sendo importante o registro da profundidade.
Para o estudo quantitativo da malacofauna, existem diferentes mtodos
pelos quais possvel determinar a densidade das espcies presentes, conforme o interesse da pesquisa e o tipo de criadouro: tamanho, caractersticas da
vegetao, das margens, do substrato, profundidade, dentre outros. Entre os
mtodos utilizados, h relatos de coletas pelo mtodo de conchadas e pelo
mtodo de Olivier e Schneiderman (1956).
Para o mtodo de conchadas, inicialmente deve ser demarcado o ponto
exato onde ser realizada a captura, utilizando-se para isso estacas previamente
numeradas, que devem ser fixadas margem do criadouro. Em cada estao
so feitas dez conchadas, buscando-se coletar o maior nmero possvel de
moluscos; a fixao prvia do nmero de conchadas garante a comparabilidade
dos resultados e, assim, uma estimativa confivel da densidade de planorbdeos
em diferentes colees hdricas. A quantidade de planorbdeos obtida em

Malacologia | 439

cada estao dever ser dividida por 10 (nmero de conchadas), e o valor


encontrado corresponder ao nmero de moluscos de cada estao de captura.
Quanto maior a padronizao do mtodo, mais confiveis e comparveis sero
as informaes.
J o mtodo de Olivier e Schneiderman (1956) estipula que o nmero
de exemplares coletados em cada estao de captura deve ser dividido pelo
nmero de coletores (que devem ser experientes na realizao de coletas de
moluscos), e o valor encontrado deve ser dividido pelo tempo de coleta,
independentemente do nmero de conchadas. A dinmica populacional dos
planorbdeos nas diferentes estaes de coleta um fator importante para
caracterizar a potencialidade dos novos focos4 de esquistossomose.
Os moluscos coletados devem ser acondicionados em potes plsticos e encaminhados ao laboratrio, conforme tcnica de remessa descrita a seguir. No
laboratrio, a taxa percentual de moluscos infectados por Schistosoma mansoni
ser determinada com base nas tcnicas de exposio luz e de esmagamento,
tambm descritas a seguir.
O monitoramento dos moluscos, uma das primeiras etapas em estudos
epidemiolgicos em reas de esquistossomose, deve ser contnuo e sistemtico.
Outras aes, tais como a educao em sade e ambiente e o saneamento
hdrico, devem, se possvel, ocorrer concomitantemente.
d) Embalagem e remessa dos moluscos lmnicos
Para a remessa de moluscos vivos destinados identificao e ao exame de
infeco por Schistosoma mansoni, prope-se que seja adotada a tcnica que
se segue, desenvolvida por W. Lobato Paraense:
1) fundamental que se verifique se todos os moluscos esto vivos
antes de serem embalados; para isso, devem ser colocados numa fina
lmina de gua e observados quanto sua movimentao;

Criadouros onde se encontra o molusco infectado por Schistosoma mansoni.

440 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

2) Molhe com gua um pedao de gaze de algodo de 30 a 50 cm de


comprimento por 20 cm de largura, espremendo-o muito bem, de modo
que fique levemente mido. Esse detalhe muito importante, pois o excesso
de gua mata os moluscos por asfixia, uma vez que eles so pulmonados;
3) Estender a gaze sobre uma superfcie plana e colocar os moluscos
transversalmente e enfileirados, de modo que fiquem distantes uns dos
outros (fig. 19). Tal distncia depender do tamanho do exemplar, sendo
de 1 cm para os menores, por exemplo Drepanotrema, e de 2 cm para os
maiores, por exemplo Biomphalaria. Nenhum exemplar deve ser colocado
nas margens da gaze, as quais devem ter cerca de 3 cm livres, para facilitar
o fechamento do cilindro;
4) Uma vez que a fileira esteja pronta, a gaze deve ser dobrada sobre os
moluscos, e outros exemplares devem ser acondicionados sobre a gaze,
e novas fileiras organizando-se. Dessa forma, gradativamente, os moluscos
vo sendo organizados em fileiras, entre as dobras da gaze. Entre a ltima
fileira de moluscos e a margem superior da gaze, sobrar um pedao capaz
de envolver todo o cilindro. Para se formar o cilindro, as margens direita
e esquerda devem ser dobradas e, em seguida, a margem superior deve
envolver todo o material, evitando-se que os exemplares saiam do cilindro;
5) Caso existam muitos exemplares em uma nica amostra, vrios cilindros
devem ser formados, para garantir a sobrevivncia dos moluscos. Cada
amostra deve ser colocada em um saco plstico capaz de envolver todo o
cilindro, a fim de evitar que a gaze perca a umidade. A identificao de
cada amostra (com o nome da localidade, o tipo de criadouro, o nome
do coletor, a data da coleta e outros) deve ser colocada dentro do saco
plstico distante da gaze, usando-se dois sacos plsticos ou dobras no
plstico para impedir o contato do papel com a gua;
6) O material deve ser colocado em uma caixa resistente, envolta em pedaos de isopor, a fim de evitar qualquer coliso com as laterais da caixa
e possveis danos aos moluscos;

Malacologia | 441

7) A caixa no deve ser perfurada ou submetida refrigerao durante o


transporte;
8) preciso evitar a exposio do material a moscas durante todo o
procedimento de embalagem, pois esses insetos depositam seus ovos
nos tecidos dos moluscos, levando-os morte.
A longevidade dos moluscos sob essas circunstncias depender de vrios
fatores, tais como a espcie em questo exemplares de Pomacea possuem
maior resistncia, podendo sobreviver por vrias semanas ou meses, desde que
bem embalados e a presena de formas larvais de trematdeos os exemplares parasitados morrem mais facilmente.
Esse mtodo no recomendado para exemplares de ancildeos, os quais
devem ser transportados com uma pelcula de gua do criadouro, em frascos
hermeticamente fechados.

Figura 19. Etapas da embalagem de moluscos lmnicos para remessa.


Fotos: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

442 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

e) Manuteno dos gastrpodes lmnicos em laboratrio


A manuteno dos gastrpodes lmnicos em condies de laboratrio requer a dedicao constante do tcnico responsvel. Com a experincia adquirida, o profissional poder adaptar as tcnicas descritas a seguir colnia
utilizada, aos objetivos especficos do trabalho e s peculiaridades de cada
laboratrio.
gua: no deve conter traos de chumbo, cloro ou de qualquer
outra substncia qumica que a torne imprpria para o uso na criao.
Antes de ser utilizada nos aqurios, recomendvel manter a gua
fornecida pelas distribuidoras de abastecimento em recipientes durante
alguns dias, para que o cloro evapore.
Outro procedimento visando ao mesmo objetivo foi construdo no Laboratrio de Malacologia do Instituto Oswaldo Cruz (IOC), da Fundao Oswaldo Cruz (Fiocruz). Ele consiste em uma parede de pedra,
externa ao laboratrio, por onde a gua escorre e fica depositada num
tanque concretado, antes de ser usada. importante tambm que a
gua seja filtrada em papel-filtro, uma vez que a presena de larvas de
insetos, oligoquetos, microcrustceos e protozorios pode prejudicar a
criao. O pH deve ser mantido entre 6 e 8.
O volume de gua necessrio depender da quantidade de espcimes
em cada aqurio, bem como do tamanho dos moluscos, da espcie em
questo e da finalidade da criao. Assim, no existe uma proporo
nica entre o volume de gua e o nmero de moluscos. Em criaes
que visem somente manuteno da populao em laboratrio, aqurios com capacidade de 2 L podem comportar satisfatoriamente 1,8 L
de gua e 25 espcimes de Biomphalaria adultas. Como a densidade
de moluscos influencia diretamente o crescimento e o amadurecimento
sexual dos espcimes, criaes para a realizao de experimentos com
moluscos de tamanho semelhante ou para a obteno de moluscos grandes num curto espao de tempo requerem anlises prvias do volume
de gua necessrio.

Malacologia | 443

A substituio da gua depender das condies de criao, sendo


influenciada pelos seguintes fatores: mortalidade dos moluscos, excesso
de excrementos na gua, ausncia de substrato, presena excessiva de
alimento ou alta turbidez. Normalmente, a troca de gua ocorre entre 7
e 10 dias, podendo ser total ou parcialmente renovada, nesse caso,
aproveitada metade da gua, aps nova filtragem em papel-filtro. Para
a troca, todo o contedo do aqurio deve ser transferido para uma peneira com orifcios de pequeno dimetro, a fim de se evitar a perda dos
animais. Aps a montagem do aqurio, transfira o contedo da peneira,
observando cuidadosamente se algum exemplar ficou preso s malhas.
Substrato: os gastrpodes lmnicos so raspadores e utilizam o substrato como complemento alimentar e para auxiliar na triturao dos alimentos. O substrato para os aqurios formado por argila peneirada
(10 partes) enriquecida com carbonato de clcio (1,5 partes) e farinha
de ostra (2 partes). Em um aqurio com 1,8 L de gua e 25 moluscos
adultos, 3 gramas de substrato aproximadamente so suficientes, devendo o mesmo ser renovado a cada troca de gua. Nos aqurios maiores,
com 40 L de gua e cerca de 100 exemplares de Biomphalaria adultas,
devem ser adicionadas, em mdia, 75 g de substrato. Nos habitats
naturais, nota-se a influncia direta do substrato sobre a consistncia e
a cor da concha do molusco. A utilizao de uma camada de areia de
rio lavada e esterilizada no fundo do aqurio tambm recomendada
por alguns autores.
Alimentao: diferentes tipos de alimento foram utilizados em tentativas de se obter maior sucesso na criao de moluscos lmnicos; entre
eles, hortalias e legumes, como alface, couve, agrio e cenoura; formulaes contendo, por exemplo, alfafa, grmen de trigo e leite em p; e
raes prprias para peixes, roedores ou aves. Atualmente, o alimento
mais utilizado nas criaes em condies de laboratrio a alface, que
pode ser fresca ou desidratada. Esse alimento deve ser oferecido diaria-

444 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

mente aos moluscos, em quantidade proporcional ao consumo, para se


evitar o apodrecimento do vegetal no aqurio. A forma como a alface
oferecida varia conforme a idade do molusco e a espcie. Por exemplo,
amostras de Biomphalaria recm-eclodidas preferem alface desidratada,
enquanto Physa alimenta-se preferencialmente de alface semiapodrecida.
Qualquer criao necessita observao constante, e as adaptaes devem ser feitas diante das diversas situaes encontradas.
Montagem e manipulao do aqurio: os aqurios ideais devem
ser de vidro, por causa de facilidade de limpeza e da melhor visualizao de seu interior. Um fragmento de folha de isopor de 5 cm por
3,5 cm ou similar papel celofane ou plstico deve ser colocado
no aqurio, para facilitar a coleta das desovas, que sero feitas nele;
caso contrrio, as desovas geralmente so depositadas nas paredes.

Figura 20. Aqurios com exemplares de Biomphalaria (A) e Pomacea (B).

O uso de tampa imprescindvel, para evitar a fuga dos moluscos e


a exposio a insetos. A tampa de tela indicada preferencialmente,
por permitir melhor aerao. Em geral, no h necessidade de aerao
artificial; em algumas criaes, porm, conveniente incluir plantas
aquticas no aqurio por exemplo, eldea (Anacharis canadensis),

Malacologia | 445

samambaia-dgua (Ceratopteris thalictroides), higrfila an (Hygrophila


polysperma) e alface-dgua (Pistia stratiotes), que, alm de oxigenarem
a gua facilitam a coleta das desovas. O uso de plantas deve ser cauteloso
para impedir a disperso indesejada dos moluscos no ambiente natural ou
mesmo a mistura de populaes e espcies no laboratrio. Assim, antes de
introduzidas no aqurio, as plantas devem ser inspecionadas rigorosamente,
sob microscpio estereoscpico, para verificao da presena de animais
moluscos, microcrustceos, larvas de insetos, hirudneos e outros
ou mesmo de desovas. Os aqurios devem ser mantidos sob a luz de
lmpadas fluorescentes, com fotoperodo de 12 horas de luz para 12
horas de escuro, e em temperatura entre 23 e 26C.
A manipulao dos aqurios depender do objetivo de cada criao,
pois as colnias experimentais requerem maior controle do que aquelas
que objetivam somente a manuteno das populaes. Como o crescimento do molusco depende, alm de suas caractersticas genticas, das
presses ambientais entre elas, caractersticas dos criadouros como:
volume de gua, tipo de substrato , a densidade de moluscos, a
quantidade e a qualidade de alimento so fatores muito importantes na
criao.
Para manter uma criao com indivduos de vrias idades ou tamanhos,
as desovas devem ser separadas do aqurio onde esto os moluscos
adultos e postas em outro aqurio. As desovas podem ser retiradas
semanalmente, visto que, no caso da Biomphalaria, o tempo necessrio
para a ecloso dos ovos ocorre em torno de 6 a 9 dias em mdia em
7 dias e meio aps a postura para Biomphalaria glabrata e em 7 dias
para Biomphalaria straminea, mantidas sob as mesmas condies. Inicialmente, um pedao desidratado de alface deve ser colocado no aqurio;
e, medida que os moluscos crescem, a alimentao passa a ser gradativamente substituda por alface fresca. Caso haja muitos indivduos em
um nico aqurio, eles devem ser redistribudos em novos aqurios.
aconselhvel, nesse caso, que se aproveite a gua, completando os vo-

446 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

lumes com gua previamente filtrada. Quanto ao ritmo de crescimento,


os moluscos crescem mais rapidamente quando jovens. medida que
amadurecem sexualmente, o ritmo torna-se mais lento. Tal fato se reflete
na manipulao da criao, ou seja, na redistribuio dos moluscos para
outros aqurios, na periodicidade das trocas de gua e na distribuio
de alimento. Caso exemplares de Biomphalaria sejam utilizados em
cruzamentos experimentais, devem ser isolados em aqurios pequenos,
com capacidade para 200 mL, antes que atinjam a maturidade sexual,
o que ocorre aps o 20 dia.
Ao se iniciar uma criao a partir de indivduos coletados no campo,
deve-se atentar para alguns cuidados. A presena de formas larvais
de trematdeos nos moluscos normalmente impede a oviposio, interferindo, portanto, na criao. No caso da existncia de aneldeos
oligoquetas Chaetogaster, encontrados no colo e na cavidade palial do
molusco, observa-se maior mortalidade. Assim, para se iniciar a criao,
aconselhvel que os moluscos trazidos do campo sejam colocados em
frascos com um pouco de gua e expostos individualmente ao calor de
lmpadas incandescentes de 60 W durante 2 a 4 horas. Aps esse
perodo, devem ser agrupados, sob microscpio estereoscpio, somente
os indivduos no parasitados para formar a gerao parental.
Existem ainda variaes interespecficas que afetam a criao. mais
difcil manter determinadas espcies sob condies de laboratrio;
nesse caso, necessrio adaptar as metodologias existentes s peculiaridades de cada espcie. Por exemplo, alguns moluscos permanecem
determinado perodo fora da gua, aderidos parede do aqurio,
podendo ou no apresentar lamelas ou epifragmas nas aberturas das
conchas. J outros moluscos preferem depositar suas desovas sobre as
conchas de outros espcimes ou, mesmo, nas paredes do aqurio.

Malacologia | 447

f) Exame de formas larvais de trematdeos


Como os moluscos coletados nos bitopos naturais encontram-se frequentemente parasitados por formas larvais de trematdeos, so extremamente necessrias a pesquisa e a identificao dessas formas larvais,
especialmente as de Schistosoma mansoni.
Para a pesquisa de cercrias, os moluscos devem ser isolados em frascos
de vidro transparente com capacidade para 10 mL, contendo 4 mL de
gua desclorada e filtrada, e expostos luz de lmpadas incandescentes
de 60 W a uma distncia de 30 cm, durante 4 horas. Tal procedimento
fornece uma temperatura entre 28 a 30C que capaz de estimular a
emisso cercariana. A visualizao das cercrias nos frascos feita com o
auxlio do microscpio estereoscpico, com aumento de oito vezes. Os
moluscos parasitados devem ser reunidos em um aqurio para, a partir
deles, obter-se uma quantidade considervel de cercrias (pool). Os
moluscos que no emitiram cercrias devem ser novamente expostos
luz, a cada cinco dias, at o 30 dia, quando devem ser examinados
aps o esmagamento de suas conchas, para a confirmao da ausncia
de estdios larvais, e devem ser posteriormente desprezados. O pool
de cercrias ser utilizado para infectar experimentalmente camundongos
por via subcutnea, pela inoculao das cercrias, ou por via percutnea, pela exposio dos animais s cercrias, caso seja necessrio confirmar se o trematdeo em questo Schistosoma mansoni ou se deseje
isolar a cepa.

448 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 21. Exemplares de Biomphalaria expostos luz artificial.

A pesquisa de cercrias tambm deve ser realizada mediante a observao


da eliminao noturna das formas larvais, uma vez que existem trematdeos
com ciclos biolgicos que envolvem roedores ou outros animais de hbitos
noturnos. Para isso, os moluscos so postos nos frascos com gua, como mencionado anteriormente, e deixados no escuro durante a noite, a fim de serem
examinados na manh seguinte.
Para o esmagamento das conchas, os moluscos devem ser colocados entre
placas de Petri, de preferncia com o lado esquerdo voltado para cima, e
submetidos a uma leve presso, de modo que a concha se quebre sem destruir
o tecido do molusco. O profissional deve retirar, com pinas de pontas finas
ou estilete, os pedaos da concha e examinar cuidadosamente o molusco sob
microscpio estereoscpico, com aumento de oito vezes, procura de esporocistos ou rdias em todos os rgos.

Figura 22. Tcnica de esmagamento da concha para procura


de estdios larvais de trematdeos.

Malacologia | 449

g) Fixao dos gastrpodes lmnicos


Para o estudo morfolgico e a identificao das amostras, necessrio que os moluscos sejam anestesiados e fixados adequadamente. Os
anestsicos so utilizados para evitar que o molusco se contraia, o que
dificulta a disseco e a mensurao de suas estruturas. O anestsico
ideal para gastrpodes lmnicos, o pentobarbital sdico, comercializado sob nome comercial de Nembutal ou Hypnol.

Figura 23. Material necessrio para a fixao de moluscos: peneira,


termmetro, aquecedor, pina e recipiente com gua.

Figura 24. Exemplares de Biomphalaria anestesiados, submersos em gua a 70C.

450 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

A concentrao do anestsico e o tempo de imerso na gua quente variam


segundo o tamanho do animal. Para espcimes maiores, como os representantes
da famlia Ampullariidae, a concentrao deve ser de 0,1% e a imerso deve
ser de 90 segundos. Nos exemplares menores Biomphalaria, Helisoma,
Lymnaea e Physa a concentrao deve ser de 0,05% e a imerso ser feita
durante 30 a 40 segundos, ou de 15 a 30 segundos, para Drepanotrema e
representantes da famlia Ancylidae. Tambm possvel fixar o espcime sem
anestesia prvia, porm o animal se contrai.
Tcnica de fixao de gastrpodes lmnicos com o uso de anestsicos
a) Colocar os espcimes na soluo anestsica at que se observe o
total relaxamento do molusco, verificando, com um pincel ou estilete,
se o animal no se contrai ao ser tocado. O tempo necessrio ao
do anestsico varia conforme a espcie ou o tamanho do animal. Os
planorbdeos, em mdia, requerem entre 6 e 12 horas. Para exemplares
muito pequenos, como os ancildeos, duas horas so suficientes e, nos
maiores, da famlia Ampullariidae, por exemplo, so necessrias 20
horas ou mais. A quantidade de soluo anestsica ser aquela que
permita cobrir todos os exemplares a serem fixados e que permita que
eles se movimentem livremente.
b) Transferir os moluscos para um coador de plstico ou metal com 7 cm
de dimetro e mergulh-los em gua previamente aquecida a 70C, durante perodo adequado ao tamanho do animal. A temperatura da gua
e o tempo de imerso devem ser rigorosamente seguidos, caso contrrio,
ocorrer o cozimento da hemolinfa e dos tecidos, prejudicando a disseco ou, ainda, o desprendimento do msculo columelar, dificultando a
extrao do corpo do molusco da concha (fig. 24).
c) O coador com os moluscos deve ser mergulhado em gua temperatura ambiente, para que ocorra o resfriamento dos moluscos.
d) Com duas pinas, segurar o exemplar pela concha, mergulhando-o
em um recipiente com gua fria, e puxar o p do molusco, transversal-

Malacologia | 451

mente, para fora, com uma suave trao. Com esse procedimento, o
msculo se desprende e a parte mole pode ser extrada da concha, que
vai sendo ocupada pela gua, de forma a diluir os resduos de hemolinfa, facilitando a extrao (fig. 25).

Figura 25. Processo de retirada do molusco da concha.


Fotos: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

e) Colocar a parte mole do molusco no fixador Railliet-Henry, modificado para animais de gua doce; a concha deve ser posta para secar, aps
ter sido lavada e limpa com um pincel de pelo macio. A quantidade
de fixador no deve ser menor do que dez vezes o volume do material
a ser fixado.
Preparao de Railliet-Henry, adaptada para moluscos lmnicos
a) gua destilada: 930 mL;
b) Cloreto de sdio: 6 g;

452 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

c) cido actico glacial: 20 mL;


d) Formol neutralizado (um pedao de giz posto no frasco original):
50 mL;
e) Aps 24 horas, o lquido fixador deve ser trocado;
f) Uma vez bem fixado o material, a quantidade de fixador pode ser
reduzida, objetivando-se a conservao ou a remessa do material fixado.
O material conserva-se indefinidamente no fixador, motivo pelo qual
esse necessita periodicamente ser reposto, medida que ocorre sua
evaporao.
g) O material deve ficar por pelo menos 24 horas no fixador antes de
ser dissecado. Se houver necessidade de um diagnstico urgente, o
material pode ser colocado em estufa a 40-45C, por 12 horas, o que
acelera o processo de fixao.
Tcnica de fixao de gastrpodes lmnicos sem o uso de anestsicos
A tcnica de fixao sem anestsico difere da anterior nos tpicos a, b
e c. Os moluscos devem ser imersos individualmente e gradualmente em gua
a 70C da seguinte forma:
a) Pinar o molusco cuidadosamente do aqurio, evitando que o animal
se retraia para dentro da concha.
b) O molusco deve ser colocado na superfcie da gua, com a abertura
da concha voltada para cima, durante 15 segundos.
c) Em seguida, o animal deve ser imerso por mais 25 segundos, o que
completa o tempo de imerso necessrio.
d) Colocado na gua para resfriamento, o molusco deve ser extrado da
concha, seguindo-se, a partir dessa etapa, a metodologia descrita para
os moluscos que foram anestesiados.
No caso de espcimes com concha lamelada por exemplo, Biomphalaria
schrammi e de exemplares de tamanho muito pequeno ou com muitos giros
por exemplo, Drepanotrema , a parte mole no deve ser extrada da

Malacologia | 453

concha, porque facilmente pode se romper. Assim, o lote a ser fixado deve
ser separado em duas partes, metade guardada como parte mole e a outra,
como concha. O material destinado fixao e ao estudo morfolgico deve
ser colocado diretamente no fixador, aps a anestesia e o aquecimento em
gua a 70C.
O fixador Railliet-Henry deve ser trocado no mnimo duas vezes antes de
iniciar a disseco, para que o material fique bem fixado. At a descalcificao
da concha, o frasco deve ser observado frequentemente, pois, medida que a
concha corroda pela reao entre o cido actico e o carbonato de clcio,
ocorre produo de CO2 e a tampa do frasco pode abrir-se pela liberao do
gs formado. Nesse caso, o fixador deve ser trocado frequentemente.
Quanto ao material para conquiliologia, depois de aquecido, o molusco
deve ser mantido em gua, que deve ser trocada periodicamente, at o apodrecimento da parte mole; quando retirar a concha, deve ser limpa com um
pincel de cerdas macias e posta para secar.
Para estudos de biologia molecular, os moluscos devem ser fixados em
lcool a 90%.
Disseco de planorbdeos para identificao especfica
A tcnica de disseco descrita a seguir foi desenvolvida por Paraense e
Deslandes na dcada de 1950 e a utilizada no Laboratrio de Malacologia
do Instituto Oswaldo Cruz. A tcnica requer uma placa de Petri rasa, duas
pinas de ponta fina e reta (ou dois estiletes), um pincel com cerdas finas e
macias e um bom microscpio estereoscpico.
a) Escolher um exemplar dentre os moluscos fixados e coloc-lo numa
placa de Petri rasa, que contenha um pouco da soluo fixadora. O
molusco deve estar com o lado esquerdo, onde se localizam as aberturas
genitais masculina e feminina, voltado para cima.

454 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 26. Exemplares de Biomphalaria, lado esquerdo, e mostrando as


aberturas genitais masculina e feminina.
Fotos: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

b) Manter uma das pinas na regio cefalopodal, para firmar o animal,


enquanto a outra vai separando aos poucos a juno entre o manto e
o msculo columelar, sempre pelo lado esquerdo, at a altura do estmago, onde o msculo termina. Repetir o procedimento com o lado
direito do animal.

Figura 27. Exemplar de Biomphalaria, lado esquerdo, onde se v


o incio da separao entre o manto e o msculo columelar.
Foto: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

Malacologia | 455

Figura 28. Exemplar de Biomphalaria, lado esquerdo,


mostrando a separao do manto.
Foto: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

c) Feito isso, cuidadosamente desprega-se a parte anterior do manto,


que se encontra presa ao colo. Obtm-se, dessa forma, todo o manto
destacado e os rgos paliais corao, pulmo e tubo renal em
condies de serem examinados.

Figura 29. Exemplar de Biomphalaria, lado esquerdo, mostrando a separao


da parte anterior do manto, que se encontrava presa ao colo.
Foto: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

456 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

d) O gonoporo masculino encontra-se logo abaixo do tentculo esquerdo, ao passo que o feminino localiza-se posteriormente, sob o
colar do manto, prximo da abertura anal. Geralmente, possvel ver
por transparncia o prepcio e o delicado canal deferente, prximo do
gonoporo masculino. A disseco do complexo peniano se inicia nessa
regio, retirando-se cuidadosamente o tegumento sobre o complexo
e os msculos que o prendem, at que o prepcio e parte do canal
deferente fiquem bem expostos. O canal deferente bem fino e de
colorao esbranquiada; o prepcio facilmente reconhecido por ser
bem mais largo e apresentar colorao negra ou cinza escuro.

Figura 30. Exemplar de Biomphalaria, lado esquerdo,


com o manto sendo rebatido, solto em ambos os lados.
Foto: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

Malacologia | 457

Figura 31. Exemplar de Biomphalaria, lado esquerdo, com o manto rebatido.


Foto: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

Figura 32. Exemplar de Biomphalaria, lado esquerdo, com o manto retirado,


mostrando o prepcio e a abertura genital masculina (A) e o canal deferente
(B), visto por transparncia sob o tecido.
Foto: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

458 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 33. Exemplar de Biomphalaria, lado esquerdo,


mostrando a disseco do complexo peniano.
Foto: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

e) Em seguida, com a pina, puxar delicadamente o prepcio e o canal


deferente, at que fiquem completamente visveis.
f) Para facilitar a disseco do restante do sistema reprodutor, seccionar
e separar a cabea-p, o esfago, o reto e todo o msculo columelar,
de forma que restem na placa apenas o sistema reprodutor e parte do
sistema digestivo estmago, intestino e glndula digestiva.

Figura 34. Exemplar dissecado de Biomphalaria straminea,


evidenciando apenas o sistema reprodutor.
Foto: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

Malacologia | 459

g) Com o auxlio da pina e do pincel, retirar cuidadosamente o resto


de manto, muco e hemolinfa que geralmente se encontram recobrindo
o sistema reprodutor. Essa limpeza necessria para a visualizao das
estruturas com importncia taxonmica como a bolsa vaginal, o enrugamento vaginal e os divertculos prostticos.

Figura 35. Exemplar de Biomphalaria straminea mostrando


o complexo peniano dissecado e o enrugamento vaginal (ev).
Foto: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

h) A glndula de albmen, geralmente com colorao amarelada, encontra-se prxima ao carrefour, ou encruzilhada genital.
i) encruzilhada genital segue-se o delicado ovispermiduto, que se dilata mais adiante, formando a vescula seminal e o ovoteste, ou glndula
hermafrodita, que ocupa os giros mais internos da concha. O ovispermiduto, apesar de muito fino, pode ser facilmente visto em todo seu
trajeto at a vescula seminal, passando pela face ventral do estmago
e da glndula digestiva. Para dissec-lo, basta que se v retirando aos
poucos a glndula digestiva e o estmago. A glndula digestiva e o
ovoteste encontram-se recobertos por tegumento escuro (manto), que

460 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

deve ser retirado para facilitar a observao dos cinos. Esses so geralmente menores no ovoteste do que na glndula digestiva e normalmente
apresentam colorao branco-amarelada.

Figura 36. Exemplar de Biomphalaria com o sistema reprodutor dissecado.


Foto: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

j) Quando for necessrio distinguir com maior clareza as ramificaes e


quantificar os cinos do ovoteste ou dos divertculos prostticos, utilizase o lugol como corante.

3.2 Gastrpodes terrestres

a) Manuteno dos moluscos em laboratrio


Montagem e manuteno do terrrio
Utilizar um ou mais terrrios de vidro com tampa, colocando-se um peso
sobre a tampa para evitar que os moluscos fujam. A tampa de tela a
indicada, por permitir aerao e evitar exposio a insetos. Utilizar como
substrato 5 cm de terra autoclavada e levemente umedecida com gua.

Malacologia | 461

A quantidade de animais por terrrio varia de acordo com o tamanho,


normalmente no excedendo 15 exemplares. O terrrio deve ser identificado com uma etiqueta de papel vegetal contendo as informaes
da amostra: procedncia, identificao especfica, data da coleta e do
recebimento dos moluscos e outros. O ideal que essa etiqueta seja
escrita a lpis.
Para a limpeza dos terrrios, devem-se retirar os animais com o auxlio
de uma pina de metal e, caso haja exemplares mortos, eles devem ser
descartados para evitar a morte dos demais. Lavar os moluscos em gua
corrente, somente para retirar algum possvel excremento presente no
corpo dos animais. Trocar a terra somente quando estiver muito encharcada, ou apenas homogeneiz-la com o auxlio de uma pina de metal.
Limpar as paredes do terrrio com papel-toalha umedecido em gua
para remover o muco e os excrementos. Caso seja necessria a troca da
terra, ela deve ser totalmente substituda, aps a lavagem do terrrio em
gua corrente, por terra estril.

Figura 37. Terrrios de vidro para a criao de moluscos terrestres no


Laboratrio de Referncia Nacional em Malacologia Mdica (LRNM), do
Instituto Oswaldo Cruz.

462 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Alimentao: diferentes tipos de hortalias e legumes como alface,


agrio, pepino, agrio e cenoura podem ser utilizados. Entretanto,
os dois primeiros so mais utilizados nas criaes em condies de
laboratrio. A quantidade varia de acordo com o tamanho e o nmero
de animais dentro do terrrio. Deve-se retirar o talo da alface e fatiar
o pepino.

Pesquisa de formas larvais de helmintos tcnica de digesto
artificial de moluscos modificada de Wallace e Rosen (1969)
Essa tcnica utilizada para a pesquisa de larvas de nematoides
Angiostrongylus spp.

Material necessrio:
a) Pina dente de rato;
b) Rgua;
c) Papel absorvente;
d) Tesoura;
e) Placas de Petri
f) Frasco(s) de vidro;
g) Caneta de retroprojetor;
h) Microscpio estereoscpio;
i) Centrfuga;
j) Pipeta Pasteur;
k) Soluo de cido clordrico 0,7%;
l) Luva de ltex e jaleco descartvel de manga comprida.

Malacologia | 463

Figura 38. Material necessrio para a tcnica de digesto artificial.

Figura 39. Medicao de um exemplar de Achatina fulica


(comprimento da concha).

Procedimento:
1) Forrar a bancada com papel absorvente, para facilitar a limpeza do
local aps o processamento dos moluscos.
2) Com o auxlio de uma pina de metal, retirar o molusco do terrrio
e coloc-lo sobre a rgua. Medir cada animal (fig. 39) e anotar o
tamanho no protocolo de ensaio. Cada animal recebe um nmero de
identificao individual, que tambm deve ser anotado na placa de Petri
que ser utilizada.

464 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

3) O molusco deve ser embrulhado em papel absorvente para evitar


que muco e fragmentos de concha se espalhem quando ela for quebrada. Para separar o corpo do molusco (parte mole) da concha, ela deve
ser quebrada com o auxlio de um martelo de ferro. O material ento
desembrulhado e, com o auxlio de uma pina, retiram-se os fragmentos
da concha.
4) Transferir a parte mole para a placa de Petri identificada e, com o
auxlio de uma tesoura, cort-la em pequenos pedaos. Transferir os
pedaos para um frasco de vidro devidamente identificado, contendo a
soluo digestiva cido clordrico a 0,7% em temperatura ambiente.
O material deve ser mantido por 6 horas sob essas condies para que
a soluo de cido clordrico atue, digerindo o tecido do animal.
5) Decorrido esse prazo, o material deve ser transferido para o aparelho
de Baermann-Moraes (fig. 40). Antes de despejar a amostra, deve-se
testar a vedao das borrachas, utilizando-se gua, para evitar perda de
material caso haja um vazamento. Os fragmentos de tecidos do molusco
e o lquido devem ser transferidos para o aparelho, e os frascos que
continham as amostras devem ser colocados sob o funil correspondente.

Figura 40. Amostras no aparelho de Baermann-Moraes.

Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 465

6) Completar com gua reagente tipo III; a gua contida em cada funil
deve cobrir os fragmentos contidos na gaze.
7) No dia seguinte, transferir uma alquota do material (cerca de 10 mL)
para um tubo Falcon, identificando-o com o nmero da amostra, e centrifug-lo por 10 minutos numa rotao de 2.000 rpm. O material restante
no funil deve ser mantido, caso seja necessrio process-lo posteriormente.
8) Aps a centrifugao, desprezar o sobrenadante e, com o auxlio de
uma pipeta Pasteur, transferir uma alquota do material para uma placa
de Petri com fundo quadriculado, acrescentando gua reagente tipo III,
e examinar sob microscpio estereoscpio, com aumento maior ou igual
a 25 vezes, procura de larvas de nematoides.
9) Caso a amostra esteja muito escura, deve-se adicionar um pouco
mais de gua reagente tipo III, a fim de diluir o material e facilitar a
visualizao das larvas. A observao das larvas feita, inicialmente, a
fresco para observao de sua forma, estruturas, tamanho e movimento.
Dependendo do interesse da pesquisa, as larvas podem ser fixadas em
lcool 70% ou em fixador Railliet-Henry a quente ou podem ser separadas para sua inoculao em roedores. Aps serem fixadas, as larvas de
metastrongildeos como Angiostrongylus spp geralmente assumem a
forma de um C; j as de outros nematoides ficam retilneas.
10) As larvas devem ser coletadas posteriormente com uma pipeta
Pasteur e colocadas em tubos de criognio etiquetados com a
identificao da amostra.
Aps o exame e o diagnstico, os resduos lquidos devem ser colocados
em um frasco Erlenmeyer e aquecidos a 80C por cerca de 15 minutos,
antes do descarte. O material slido contido na gaze deve ser autoclavado
e descartado no lixo de risco biolgico. Todo o material utilizado deve ser
descontaminado em soluo de hipoclorito de sdio a 10%.

466 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 41. Observao da amostra sob o microscpio estereoscpio, detalhe


da placa de Petri quadriculada para a pesquisa de larvas e tubo de criognio
contendo larvas fixadas.

3.3 Espcies exticas continentais de importncia mdica e


econmica

De acordo com a Unio Internacional para a Conservao da Natureza


(IUCN), em todo o planeta, as espcies invasoras representam a segunda
maior ameaa biodiversidade, perdendo apenas para os desmatamentos.
Alm de prejudiciais do ponto de vista biolgico, as espcies exticas tambm
podem causar perdas econmicas e danos sade humana. A seguir, apresentamos uma relao de alguns exemplos de moluscos introduzidos no Brasil.
Moluscos terrestres

Helix aspersa Mller, 1774 e Helix pomatia Linnaeus, 1758: caracis comestveis europeus, conhecidos como escargot. Helix aspersa foi introduzido

Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 467

no Brasil, provavelmente por imigrantes, no incio do sculo XX. Na regio


Sul do pas, ocorre em densas populaes, em reas urbanas e periurbanas, e
tem causado destruio de hortas e jardins.
Achatina fulica Bowdich, 1822: caracol africano introduzido no Brasil na
dcada de 1980 para ser utilizado na alimentao humana. Ocorre atualmente em quase todos os estados brasileiros, geralmente em densas populaes,
destruindo hortas, jardins e diversos tipos de cultivo, causando prejuzos e
incmodo s comunidades afetadas. Alm dos previsveis impactos fauna e
flora, essa espcie est envolvida na transmisso do Angiostrongylus cantonensis (Chen, 1935), nematoide responsvel pela meningoencefalite eosinoflica,
zoonose endmica no sudeste asitico, porm com casos recentes no Brasil.
Moluscos lmnicos

Melanoides tuberculatus (Mller, 1774): molusco afro-asitico introduzido


no Brasil provavelmente por meio do comrcio de peixes e plantas aquticas ornamentais. Atualmente encontrado, tanto em tanques de piscicultura
quanto em bitopos naturais, em vrios estados brasileiros; forma populaes
extremamente densas e ocasiona, em alguns casos, o desaparecimento ou o
deslocamento de espcies nativas. Estudos realizados no Brasil e no Caribe
tm indicado a utilizao de Melanoides tuberculatus em programas de controle biolgico de espcies de Biomphalaria transmissoras da esquistossomose.
Limnoperna fortunei (Dunker, 1857) ou mexilho-dourado: molusco bivalve asitico introduzido no sul do Brasil na dcada de 1990, junto com a
gua de lastro de navios. Alm da ameaa malacofauna nativa, o fato de ser
encontrado em densas populaes e fixo ao substrato tem causado prejuzos
econmicos, principalmente ao setor de gerao de energia.
Corbicula fluminea (Mller, 1774) e Corbicula largillierti (Philippi, 1844):
moluscos bivalves, tambm de origem asitica, introduzidos na dcada de
1970 e atualmente encontrados em vrias bacias hidrogrficas brasileiras.

468 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Figura 42. A) Exemplares de Achatina fulica com diferentes idades;


B) Exemplares adultos de Megalobulimus sp (direita) e Achatina fulica
(esquerda); C) Corbicula largillierti; D) Helix pomatia; E) Limnoperna fortunei;
F) Melanoides tuberculatus. (Escala: 10 mm.)
Foto: Acervo do Laboratrio de Malacologia/IOCFiocruz.

3.4 Procedimentos para o controle do molusco


africano Achatina fulica

O controle do molusco africano, descrito a seguir, baseia-se nas instrues


seguidas pelo LRNM, do IOC, e nas instrues normativas n 73, de 18 de

Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 469

agosto de 2005, e n 109, de 3 de agosto de 2006, do Instituto Brasileiro


do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovveis (Ibama).
Identificao do molusco
Ao perceber a presena de caracis grandes, muito importante certificarse de que se trata do molusco africano, pois existem espcies nativas, ou seja,
da nossa fauna, muito semelhantes. Nas figuras 42A e 42B podem ser observadas conchas de Achatina fulica de diferentes tamanhos e da espcie nativa
Megalobulimus sp, frequentemente confundida com o molusco africano pelo
seu grande tamanho. Em caso de dvida sobre a identificao, o material deve
ser enviado ao Ibama ou a universidades, centros de pesquisa e autoridades
municipais secretaria municipal de sade, secretaria municipal de ambiente,
defesa civil, entre outros , observando-se o seguinte:
os exemplares (pelo menos 5 ou 6) devem ser coletados protegendo-se as mos com luvas ou sacos plsticos e colocados em lcool
comercial; a concha vazia ou uma foto de boa qualidade tambm servem
para a identificao;
colocar uma etiqueta de papel escrita a lpis com a data da coleta,
local e o nome do coletor no recipiente contendo os exemplares fixados
no lcool.
Uma vez confirmada a identificao, entrar em contato com as autoridades
acima citadas para comunicar a ocorrncia do molusco africano e receber orientaes sobre o procedimento de controle em sua cidade.
Importante: as espcies nativas que se assemelham a esse molusco raramente ocorrem em grandes populaes, diferentemente dos moluscos africanos, o
que constitui a principal fonte de problemas aos quais esto relacionados.

470 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Controle do molusco africano em residncias (jardins, hortas e


quintais) ou bairros
Os moluscos devem ser coletados manualmente, utilizando-se luvas
de borracha (ou similar) e, posteriormente, colocados em um recipiente,
como balde ou saco plstico. Os melhores horrios para o procedimento so pela manh bem cedo ou no final da tarde, pois, como os demais
moluscos terrestres, o molusco africano evita a exposio ao sol forte,
que o desidrata. Para uma grande quantidade de exemplares, utilizar
um martelo ou um instrumento similar a fim de quebrar bem as conchas
dos moluscos coletados; em seguida, coloc-los num buraco no terreno;
sempre que possvel, jogar cal virgem por cima, para evitar a contaminao do lenol fretico. Para quantidades menores, escolha uma dessas
duas maneiras para matar e descartar:
a) colocar os caramujos num recipiente com 6 colheres de sopa
de sal em um litro de gua, ou jogar apenas sal sobre eles. O sal
causa danos ao ambiente, por isso no deve ser colocado diretamente no solo. Para o descarte, as conchas devem ser quebradas
e colocadas em sacos de lixo.
b) colocar os caramujos num recipiente com uma parte de cloro
para trs de gua; manter os caramujos submersos por 24 horas.
Quebrar as conchas, coloc-las em sacos plsticos bem fechados
e jog-las no lixo domstico. importante coletar tambm os ovos
do molusco, que so encontrados semienterrados no solo. Os ovos
so facilmente reconhecveis: tm aproximadamente 5 mm de dimetro, forma arredondada, casca calcria amarelada e geralmente
so encontrados em grande nmero. Em seguida busca e coleta
de ovos, esmag-los bem e seguir o mesmo procedimento citado
para os moluscos. Caso no seja possvel enterrar os moluscos e os
ovos coletados, depois de destrudos, todos devem ser colocados
em sacos hermeticamente fechados, no lixo domstico.

Metodologia bsica para coleta e processamento de helmintos parasitos | 471

O controle peridico dos moluscos fundamental; para tanto, a


operao deve ser repetida sempre que novos moluscos forem localizados. Um nico molusco pode colocar at 400 ovos por desova, o que
acarreta rpida reinfestao do ambiente.
Recomenda-se que os procedimentos de controle sejam realizados em
toda a rea da infestao; isso requer coletas peridicas e, sempre que
possvel, a participao da comunidade (vizinhos, associaes de moradores,
ou do poder pblico).

Figura 43. Procedimentos para o controle de Achatina fulica:


coleta adultos e ovos.

Importante:
no utilize moluscicidas ou venenos, pois so muito txicos e outros
animais, ou mesmo pessoas, podem ser contaminados e at morrer;

472 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Tambm pode ser feita a incinerao dos exemplares, desde que


sejam tomados os devidos cuidados para evitar acidentes durante o
procedimento ou mesmo para evitar que o fogo se espalhe. Mesmo
quando os moluscos tenham sido incinerados, as conchas dos animais
devem ser quebradas para que no se tornem criadouros de larvas de
mosquitos, como os transmissores de dengue, malria e outros;
no comer moluscos encontrados livres no ambiente crus ou malcozidos;
o molusco africano no um animal perigoso: ele no morde, no
pica e no tem veneno. Como qualquer outro animal que vive livre em
ambiente aberto, existe o risco de o molusco transmitir doenas para o
homem, razo pela qual se recomenda o uso de luvas de borracha ao
manuse-los. Em caso de contato com o molusco ou de seu muco direto
com a pele, basta lavar bem a rea com gua e sabo;
para evitar a angiostrongilose abdominal e a meningoencefalite eosinoflica, o procedimento recomendado para a higienizao de verduras,
frutas e legumes consumidos crus so os que se seguem: lave bem esses
alimentos em gua corrente e deixe-os de molho por 30 minutos em
soluo de hipoclorito de sdio a 1% (1 colher de sopa de gua
sanitria diluda em 1 L de gua filtrada). Tambm se deve evitar o
consumo de moluscos, peixes ou crustceos crus. Com esses procedimentos, possvel evitar, alm de outros parasitos, a infeco por larvas
de Angiostrongylus spp, eliminadas no muco deixado pelos moluscos,
que podem contaminar os alimentos e causar as zoonoses acima citadas.
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Elaborao das imagens


Andr Favaretto Barbosa, Jos Eduardo Prado e Pablo Menezes Coelho
(Laboratrio de Malacogia, IOC/Fiocruz); Genilton Jos Vieira e Rodrigo da
Cunha Mexas (Laboratrio de Produo e Tratamento de Imagem, IOC/Fiocruz).