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(combinao de coloraes
nucleide e anel FtsZ)
Ciclo celular
(ex. Eschericia coli)
Fase C
Fase D
E. coli
Tempo de gerao mdio, em condies ptimas
~ 25 minutos
A
B
CRESCIMENTO EXPONENCIAL
Imagine que arranja uma forma de manter uma populao de clulas de E. coli em
crescimento exponencial durante 24 horas. Se partir de uma nica clula, estime
quantas clulas obteria aps esse perodo de 24 horas.
24 horas 57 duplicaes
1 clula
(10-12 gramas)
= 140.737.488.400.000.000 clulas
(~1,4 x 1017)
~ 144 Kg de biomassa
CRESCIMENTO
EXPONENCIAL
[clulas]
(http://www.e-escola.utl.pt)
21
[clulas]
N0. 21
N0
Nt = N0.2n
n =
log Nt - log N0
log 2
g=t/n
2n
22
N0.22
(aps n geraes)
Fase
exponencial
dNt
dt
-taxa especfica
= .Nt
de crescimento da
populao microbiana
Equivalente a
Ou Nt = N0 e
N,
N0
g
t0
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, th edition,Mc GrawHill, 2002
(t-t0)
y = b + ax
a - declive (= )
b ordenada na origem (= ln N0)
Unidades :
tempo-1
(h-1; min-1)
g=
ln 2
(h; min)
I0
I0
DO = Abs
= - log T/100
= log (I0/I)
Prescott, Harley & Klein, Microbiology,
th edition,Mc GrawHill, 2002
Medido
DO640nm
Terico
Medies no
espectrofotmetro
0
Concentrao de clulas
BIOMASSA -
Cmara de contagem
Observao no
Microscpio
ptico
Figure 6.5
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, th edition,Mc GrawHill, 2002
Fase estacionria
Fase de morte
Fase de latncia
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, th edition,Mc GrawHill, 2002
Fase exponencial
N (clulas / mL)
1.0 x 104
1.0 x 104
1.5 x 104
3.0 x 104
3.6 x 104
4.9 x 104
5.0 x 104
0
0.5
1
2
2.5
3
4
Latencia
Exponencial
x 104 N
(Escala logaritmica)
5
4
3
1
Estacionria
Populao duplica
em 1h
ln N2 ln N1
=
Declive: 0,7
Tempo (h)
= 0.7 h-1 )
(2-1)
declive = 0.7
Exemplo:
Crescimento
diuxico
ln [ Clulas viveis]
lactose
Consumo de lactose
Glucose
esgotada
Consumo de glucose
Tempo
Glucose rapidamente metabolizada;
Represso da expresso do opero da lactose
(Fenmeno: Represso Catablica)
-galactosidade
glucose + galactose
INFLUNCIA DA CONCENTRAO DE
NUTRIENTE LIMITANTE
NO CRESCIMENTO MICROBIANO
30
15
2
1
[Nutriente], S (---)
[Biomassa] X (mg/L)
5
4
3
0
Tempo (h)
At low nutrient concentrations both growth rate and growth yield are affected.
max
EQUAO DE MONOD
S
= max
Ks + S
max
2
Ks
,S
Concentrao
saturante de S
max
KS
Constante de semi-saturao
- numericamente igual concentrao de substrato
que permite uma taxa de crescimento igual a
metade da max;
reflecte a afinidade dos sistemas de transporte
transmembranar para a molcula do nutriente
limitante (maior Ks menor afinidade menor )
Os valores das constantes max e KS dependem:
- das caracteristicas intrnsecas do microrganismo;
- do substrato limitante;
- das condies ambientais (ex. Temperatura, pH, etc.)
Microrganismo
Temperatura
Escherichia coli
Escherichia coli
Escherichia coli
Saccharomyces cerevisiae
Candida tropicalis
37C
37C
37C
30C
30C
Nutriente limitante
Glucose
Glicerol
Lactose
Glucose
Glucose
max (h-1)
0.8-1.4
0.9
0.8
0.5
0.5-0.6
Ks (mg/L)
2-4
2
20
25
50-75
,S
Rendimento
do crescimento, Y =
=
Massa de nutriente usada
X
S
Medida da eficincia com que a clula utiliza para crescimento (i.e. biossntese de novo
de biomassa) a energia que produz.
S
ENERGIA ( ATP)
TIPOS E EXEMPLOS DE
PRODUTOS DE ORIGEM
MICROBIANA
Concentrao
de produto formado
Concentrao de clulas ou
massa celular
Formao de
metabolito primrio
Crescimento
Crescimento
Formao de
metabolito secundrio
Tempo
Metabolito secundrio
aps a fase de produo das
clulas (aps o crescimento exponencial),
normalmente a partir de um metabolito
primrio ou de substrato usado para
crescimento que esteja em excesso
Ex. antibiticos produzidos
por fungos miceliais ou por
bactrias)
CULTURA CONTNUA DE
MICRORGANISMOS NO QUIMIOSTATO
S0, F
Esquema de
funcionamento
de um bioreactor para a
cultura contnua de
microrganismos
(exemplo - quimiostato)
X, S, F
QUIMIOSTATO opera por fornecimento do nutriente limitante do crescimento a uma taxa constante
(relacionada com o caudal de entrada do meio de cultura fresco), de modo que a densidade celular
(biomassa) e a taxa especfica de crescimento do microrganismo se ajustam a este fornecimento.
TAXA DE DILUIO
Caudal de alimentao do meio fresco = caudal de sada da cultura = F (Litros/hora)
Volume da cultura no quimiostato = V = constante (L)
F
D taxa de diluio =
V
ESTADO ESTACIONRIO
O quimiostato permite manter a populao microbiana em crescimento
equilibrado, isto , na fase de crescimento exponencial, durante
perodos de tempo longos i.e. em ESTADO ESTACIONRIO.
dX
dt
Massa celular
produzida
.X
Massa celular
que sai no
efluente
V = volume de cultura
no quimiostato (L)
.X
Estado
dX
=0
estacionrio
dt
.X =
F
V
.X
S0, F
X, S, F
X massa celular (g/L)
F
V
F caudal (L/h)
=D
S concentrao de nutriente
Limitante (g/L)
T tempo (h)
=D
(S0)
(S)
(D)
Exemplo: Volume cultura = 5000 mL; Caudal atravs do
quimiostato, F = 2500 mL/hora --- D = 0,5 h-1
Nota: alterao de F alterao da taxa de diluio, D
WASHOUT
(quando D Dc
(X)
(S0)
(S)
(D)
A afirmao (ou no) de um dado microrganismo face a outro (p.ex., se a populao for mista), depende da
relao entre os coeficientes de Monod para os microrganismos em causa (depende em particular da constante de
semi-saturao para o substrato S, KS, que inversamente proporcional eficincia com que o microrganismo
utiliza o nutriente limitante).
EXEMPLO
Quimiostato a
operar com D = A
Microrganismo A
Microrganismo B
D = A = max A
maxA ~ maxB
KsA + S
S
B = max B
KsB + S
CRESCIMENTO MICROBIANO
O tempo de duplicao (ou gerao) pode repetir-se vrias vezes, enquanto estiverem disponveis no
meio de cultura nutrientes em quantidade suficiente para assegurarem os metabolismos
catablico (bioenergtico) e anablico (biossntese) das clulas e enquanto as condies ambientais
forem favorveis.
Contadores electrnicos
(ex. Contador coulter, citmetro de fluxo)
Fcil e rpido
No permite distinguir clulas viveis de mortas
til para microrganismos grandes, mas no para a maior parte das
bactrias
Fase exponencial
Crescimento da populao com taxa (velocidade) constante. Durante esta fase, em que
todos os nutrientes esto presentes em excesso, os microrganismo dividem-se e a
populao cresce com uma taxa especfica de crescimento mxima. O valor desta taxa
de crescimento depende do potencial gentico do microrganismo, da composio do
meio de cultura e das condies de crescimento (temperatura, pH, disponibilidade de
gua, etc.).
Fase estacionria
O crescimento da populao pra, devido a esgotamento de nutriente essencial
ou acumulao de metabolito txico. Parte das clulas podem permanecer viveis durante
algumas horas custa do consumo de materiais de reserva endgenos.
Algumas espcies bacterianas exibem, nesta fase de crescimento, a produo de endsporos.
Fase de morte
Perda irreversvel da capacidade de diviso celular; ocorre o decrscimo progressivo
no n de clulas viveis da populao.
QUIMIOSTATO opera por fornecimento do nutriente limitante do crescimento a uma taxa constante
(relacionada com o caudal de entrada do meio de cultura fresco), de modo que a densidade celular
(biomassa) e a taxa especfica de crescimento do microrganismo se ajustam a este fornecimento.
Meio de cultura fresco (esterilizado) fornecido contnuamente (caudal F), o qual contm, entre outros
nutrientes, o nutriente limitante (concentrao S0). Simultneamente, parte da cultura removida, com
o mesmo caudal F a que meio de cultura fresco entra. O efluente removido contm clulas do
microrganismo (biomassa, X), assim como produto(s) sintetizado(s) pelas clulas. A concentrao de
nutriente limitante sada (S) , em condies operacionais adequadas, muito baixa ou
aproximadamente nula.
X = Y (S0-S)
onde Y o rendimento do crescimento para o substrato limitante e S representa a
concentrao residual do nutriente limitante no quimiostato.
Modelo para o crescimento no quimiostato equao de Monod
i.e., o valor da taxa de diluio, D, relaciona-se com a concentrao de nutriente
limitante do crescimento com base na equao de Monod
S
D=
D = max
Ks + S
S=
D. KS
max - D
A gama de valores de taxa de diluio, D, a que o quimiostato pode operar limitada. O valor limite
a taxa de diluio crtica (Dc). Para valores muito altos da taxa de diluio (D Dc), o crescimento
celular no consegue compensar a diluio da cultura, e a populao de clulas sai do quimiostato
(Wash-out lavagem do quimiostato) ; consequentemente, nessas condies, a concentrao de
nutriente limitante aumenta, porque no consumido ; quando D Dc S=S0)
A taxa de diluio torna-se crtica e ocorre o Wash-out quando a taxa de diluio a que o
quimiostato opera ultrapassa a taxa especfica mxima de crescimento da populao microbiana (mx)
Se ocorrer:
1 Contaminao da cultura
Em cultura contnua, necessrio manter condies de esterilidade durante perodos longos.
A adio contnua de meio fresco e o arejamento aumentam a probabilidade de ocorrer contaminao
da cultura. Contudo, condies especiais, tais como temperaturas elevadas, valores de pH extremos
e substratos pouco usuais podem reduzir a probabilidade de ocorrer contaminao da cultura.
2 Degenerescncia da cultura
Durante a multiplicao celular dum certo microrganismo pode ocorrer uma mutao expontnea, e
surgir um mutante vivel na cultura.
Consequncias
Em cultura contnua, um microrganismo invasor (contaminante ou mutante vivel) acumula
no quimiostato se for competitivo, isto , se utilizar o nutriente limitante eficientemente face
estirpe microbiana original contaminao da cultura original.
Mas, se no for competitivo, expulso do quimiostato.
Na cultura bacth, todo o contaminante (ou, mutante vivel) capaz de utilizar o
nutriente limitante acumula no meio de cultura, juntamente com o microrganismo
que se pretende cultivar contaminao da cultura original.