Biologia Celular - Sebenta Da Faculdade de Farmácia Da Universidade Do Porto

2006/2007
1 ANO
1 SEMESTRE
BIOLOGIA CELULAR
Jorge Paulos
Biologia Celular - 1 Ano - FFUP
2006/2007
Captulo 1 - A evoluo da clula
1. Do Procarionte ao Eucarionte
A identidade celular foi conseguida a partir do momento em que a primeira clula ganha uma
membrana plasmtica, com funes de proteco e regulao da entrada e sada de substncias da clula.
Isto fez com que o meio intracelular fosse diferente do meio externo, do ponto de vista fisico-qumico.
Porm, o grande avano adaptativo sofrido pelas clulas foi a formao de vesculas, compartimentos e
retculos originados da membrana primordial. Com isto, nasce a clula eucaritica, com o seu sistema de
endomemranas.
Este sistema possibilitou:
Maior crescimento celular;
Maior especializao, diviso de tarefas entre componentes celulares e eficincia metablica;
Maior proteco do material hereditrio;
Maior diversidade de rotas metablicas;
Facilidade no contacto e na aglomerao intermolecular.
As clulas procariticas so muito diferentes das eucariticas.

A sua principal caracterstica , ento, a ausncia de
membrana celular, individualizando assim, o ncleo. Para
alm disso, no tm alguns organelos, o que lhes confere um
tamanho bastante reduzido. O DNA que possuem encontra-se
na forma de um anel no-associado a protenas.
Eubactrias verdadeiras bactrias
Arqueobactrias clulas primitivas, geralmente
anaerbias, que vivem nos ambientes mais inspitos.
As clulas eucariticas so mais complexas que as procariticas. Possuem membrana nuclear

individualizada e vrios tipos de organelos. A maioria dos animais e plantas a que estamos habituados esto
dotados deste tipo de clulas.
Fungos
Protozorios
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Captulo 1 - A evoluo da clula |
Clulas animais
Clulas vegetais
Procariontes
Eucariontes
Organismos
Bactrias, Cianobactrias
Protistas, Fungos, Plantas, Animais
Medida
Metabolismo
10 m
Anaerbio, Aerbio
10 - 100 nm
Aerbio
Organelas
Ausentes
Ncleo, Complexo de Golgi,

Mitocndria, Retculo
Endoplasmtico, etc.
RNA e
protenas
RNA sintetizado no ncleo;

Ambos sintetizados no mesmo local Protenas sintetizadas no
citoplasma
Ribossomas
Tipo 70S
Tipo 80S
Citoplasma
No tem citosqueleto: correntes

citoplasmticas, exocitose e
endocitose ausentes
Tem citosqueleto: correntes

citoplasmticas, exocitose e
endocitose presentes
Organizao
Principalmente unicelular
Principalmente multicelular
Fontes
Necessitam de uma fonte de C e de Requerem uma grande quantidade

N
de compostos e alguns ies
2. Do RNA ao DNA
No processo de evoluo celular, atravessaram-se as seguintes fases:
RNA capaz de dirigir a sua auto-replicao;
RNA capaz de intervir na sntese de protenas (ribossomas);
Aparecimento da membrana celular;
Aparecimento do DNA como molcula mais estvel do que o RNA, e com capacidade para dirigir a
sua prpria replicao (replicao semi-conservativa).
O DNA mais estvel do que o RNA porque:

Tem um a desoxirribose em vez de um a ribose.A ribose tem um grupo O H no carbono 2que pode
sofrer hidrlise;
O DNA constitudo por 2 cadeias anti-paralelas, sendo mais difcil ocorrerem mutaes;
O DNA possui a base timina, em vez do uracilo. Este ltimo mais instvel pois pode sofrer
metilao;
O DNA possui um mecanismo de auto-reparao de erros.
Assim, o RNA foi progressivamente substitudo pelo DNA, que ganhou uma importncia vital para os
organismos vivos.
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3. Aparecimento de novos genes

Mutao Intragnica
Duplicao Gnica
Troca de segmentos de DNA entre dois genes
Mutao Horizontal
Genes Ortlogos genes considerados homlogos que apresentam a mesma funo em organismos
diferentes mas provenientes do mesmo organismo progenitor (genes alterados dentro de linhagens
especficas, aps diferenciao).
Genes Parlogos genes considerados homlogos, presentes num mesmo organismo , que no
apresentam a mesma funo. Assim, estes genes so duplicados dentro de uma mesma linhagem, no
importando se tm a mesma funo ou no.
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Biologia Celular 1 Ano - FFUP
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Genes Homlogos so genes que apesar de pertencerem a diferentes organismos, so estruturalmente

semelhantes e cumprem funes idnticas.
4. Alteraes celulares em clulas animais
Necrose todo o contedo intracelular expulso para o exterior, sendo associada a vrios tipos de clulas
simultaneamente. A necrose abrange alteraes regressivas reversveis que, em algum ponto e por algum
estmulo descohecido, passam a ser irreversveis. Instalada a irreversibilidade e a necrose propriamente
dita, inicia-se um processo de desintegrao celular (autlise).
| Captulo 1 - A evoluo da clula
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Apoptose tambm designada por morte celular programada um tipo de auto-destruio celular que
requer energia e sntese proteica para a sua execuo. Est relacionada com a homeostase na regulao
fisiolgica do tamanho dos tecidos, exercendo um papel oposto ao da mitose. Portanto consiste numa
morte desejvel e necessria que participa na formao dos rgos.
Autofagia neste processo, a clula elimina organelos envelhecidos atravs da formao de
autofagossomas. O objectivo deste processo converter os componentes da clula em alimento para
prolongar a sobrevivncia do organismo.
Morte autofgica induzida em algumas clulas, considerada uma morte celular programada e associada
a clulas isoladas.
5. Organizao molecular
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Captulo 2 Componentes qumicos celulares e

Macromolculas
1. Aminocidos
Um aminocido qualquer molcula que contm simultaneamente grupos funcionais amina e cido
carboxlico.
Um aminocido constitudo por:

Carbono
Grupo amina
Grupo carboxilo
tomo de hidrognio
Cadeia lateral radical que influencia:
O ponto isoelctrico do aminocido;
O prprio aminocido (porque varia de aminocido para aminocido);
O tipo de aminocido formado quanto polaridade, porque existem aminocidos apolares,
polares neutros ou polares com carga.
Os aminocidos apresentam um determinado estado de ionizao que se encontra dependente do pH

do meio. Assim, podem existir na forma ionizada io dipolar ou zwiterio que para um determinado
valor de pH, tantas cargas positivas como negativas. Este valor designado por ponto isoelctrico.
Quando o pH do meio bsico (pH do meio superior ao ponto isoelctrico), o aminocido comporta-se
como um cido, ficando carregado negativamente, por perda de protes.
Quando o pH do meio cido (pH do meio inferior ao ponto isoelctrico), o aminocido comporta-se
como uma base, ficando carregado positivamente, por ganho de protes.
Aminocidos essenciais so aqueles que no existem no nosso organismo, tendo portanto que ser
obtidos atravs da alimentao. So todos da forma L, excepto os que so da forma D (alguns antibiticos e
nas paredes das bactrias).
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2. Hidratos de carbono
Os hidratos de carbono (ou glcidos) so substncias sintetizadas pelos organismos vivos.
Tm funo energtica e estrutural pois participam da arquitectura corporal dos seres vivos. Para alm
disso, tambm tm funo anticoagulante, lubrificante e participam na sinalizao celular.
A frmula geral da estrutura dos hidratos de carbono (CH2O)n, sendo que cada um deles possui na sua
estrutura:
Grupo aldedo (CHO) aldose
Grupo cetona (C = O) cetose
Os hidratos de carbono podem dividir-se em: monossacardeos, oligossacardeos e polissacardeos.
Os monossacardeos ou acares simples constituem as molculas dos carboidratos, as quais so
relativamente pequenas, insolveis em gua e no hidrolisveis. Em geral, obedecem frmula bsica dos
hidratos de carbono.
Os oligossacardeos ou acares pequenos so constitdos por duas a dez molculas de
monossacardeos, como os dissacardeos que tm duas. (Ex.: maltose, lactose e sacarose.)
Os polissacardeos ou acares mltiplos so formados pela unio de mais de dez molculas
monossacardeas, constituindo, assim, um polmero de monossacardeos, geralmente de hexoses. Ao
contrrio dos anteriores, so insolveis em gua, no alterando assim o equilbio osmtico das clulas e
prestando-se muito bem s funes de armazenamento e reserva nutritiva. (Ex.: celulose, amido e
glicognio.)
3. Lpidos
Os lpidos (ou lpideos) so biomolculas insolveis em gua, e solveis em solventes orgnicos, como o
lcool, benzina, ter ou clorofrmio.
A maioria dos lpidos so molculas anfipticas, isto , possuem uma cabea que polar ou hidroflica, e
uma cauda constituda por uma parte apolar ou hidrofbica, isto , que repele a gua. Assim, de todos os
lpidos enunciados acima, apenas os triglicerdeos no so molculas anfipticas.
3.1.
cidos Gordos
Os cidos gordos so cidos monocarboxlicos de cadeia normal hidrocarbonatada e que possuem

um grupo carboxlico (COOH) que permite a ligao a outras molculas. So armazenados no citosol sob a
forma de gotculas de gordura, os triglicerdeos.
Ao longo de uma cadeia hidrocarbonatada de um cido gordo, existe sempre uma ligao dupla que
lhe confere uma quebra extremamente importante para as membranas biolgicas.
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Captulo 2 Componentes qumicos celulares e Macromolculas |
3.2.
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Triglicerdeos (ou Triacilgliceris)
Os triglicerdeos so lpidos formados pela ligao de trs molculas de cidos gordos com uma de
glicerol, atravs de ligaes ster. Normalmente, os cidos gordos que participam na estrutura de um
triglicerdeo so diferentes entre si.
Quando necessrio, os cidos gordos so libertados das molculas de triglicerdeos e quebrados em
unidades com dois tomos de carbono.
3.3.
Fosfoglicerdeos / Fosfolpidos
Os fosfoglicerdeos so lpidos constitudos por uma molcula de glicerol, duas cadeias de cidos
gordos (uma saturada e uma insaturada), um grupo fosfato e uma molcula polar ligada a ele (serina,
etanolamina, colina ou inositol). Assim, a sua
designao depende da molcula polar presente
(Ex.: serina fosfatidilserina).
As suas principais funes so no processo de
sinalizao celular e na constituio das membranas
biolgicas Cada membrana constituda por uma
dupla camada fosfolipdica organizada de modo a
que as cabeas hidroflicas fiquem viradas para o
lado exterior da membrana e as caudas hidrofbicas
para o interior. Esta organizao permite tornar a
membrana selectiva pois s atravessam a membrana
por difuso simples as substncias lipossolveis.
3.4.
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Esfingolpidos
Os esfingolpidos provm da esfingosina que um aminolcool, e cujo grupo amina se pode ligar a
um cido gordo formando a ceramida. Existem dois tipos de esfingolpidos:
Esfingofosfolpidos so as ceramidas que contm fosfato. Um exemplo a esfingomielina que o
componente principal da mielina das clulas nervosas. So constitudos por:
Fosfocolina ou Fosfoetanolamina
Ceramida
Glicolpidos so as ceramidas que contm acares. Podem ser de dois tipos:
Cerebrosdeos constitudos por ceramida e 1 a 4 molculas de acar
Gangliosdeos constitudos por ceramida e n molculas de acar (contm, para alm de
outras molculas, o cido N-acetilneuramnico).
Nos animais, os glicolpidos so derivados da ceramida, enquanto que nas plantas so derivados do
glicerol. Assim, nas membranas das clulas animais:
Camada interna fosfatidilserina e fosfatidiletanolamina
Camada externa fosfatidilcolina e esfingomielina
Nota: A fosfatidilserina uma molcula negativa, sendo importante porque dificulta ou facilita a passagem
de determinado tipo de molculas.
3.5.
Glicolpidos / Grupos sanguneos
Antignios O Glicose + Galactose + N-Acetilgalactoseamina + Galactose + ...

Antignios A Antignio O + N-Acetilgalactoseamina
Antignios B Antignio O + Galactose
4. Nucletidos
Os nucletidos so compostos ricos em energia que auxiliam os processos metablicos na maioria das
clulas. So constitudos por:
Uma base azotada (purina / pirimidina)
Uma pentose (ribose / desoxirribose)
Um ou vrios grupos fosfato
As principais funes dos nucletidos so:
Transferncia de sinais qumicos (ex.: CoA)
Constituio de cidos nucleicos
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Constituio de molculas que permitem efectuar o armazenamento de energia (ex.: ATP)

Controlo das reaces intermoleculares (ex.: AMP cclico)
Bases azotadas
Purinas Adenina (A) e Guanina (G)
Pirimidinas Uracilo (U), Timina (T) e Citosina (C)
Pentoses
-D-Ribose
-D-Desoxirribose
Nota:
Nucletido base + pentose + fosfato
Nuclesido base + pentose
Base
Adenina
Guanina
Citosina
Timina
Uracilo
Nuclesido
Adenosina (A)
Guanosina (G)
Citidina (C)
Timidina (T)
Uridina (U)
5. Protenas
As protenas so compostos orgnicos de estrutura complexa, sintetizadas pelos organismos vivos
atravs da condensao de um grande nmero de molculas, atravs de ligaes peptdicas.
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Ligao peptdica
As ligaes estabelecidas entre aminocidos numa determinada protena denominam-se ligaes
peptdicas e estabelecem-se entre o grupo carboxilo de um aminocido e o grupo amina do aminocido
seguinte. Estas ligaes podem ser quebradas por enzimas ou atravs de tratamentos drsticos como a
adio de cidos ou bases fortes a temperaturas elevadas, pelo facto de serem ligaes extremamente
fortes.
Tendo por base o mecanismo de ligao conclui-se que o primeiro aminocido da cadeia polipeptdica
tem o grupo amina livre e o ltimo tem o grupo carboxlico livre.
Composio
Quanto sua composio molecular, as protenas podem ser classificadas em:
Simples protenas constitudas unicamente por aminocidos
Conjugadas protenas que apresentam a cadeia de aminocidos ligada a um radical diferente
(grupo prosttico). Dependendo do grupo prosttico, as protenas podem ser classificadas em:
Glicoprotenas glcido (ex.: mucina)
Cromoprotenas pigmento (ex.: hemoglobina)
Fosfoprotenas cido fosfrico (ex.: vitelina)
Nucleoprotenas cido nucleico
Lipoprotenas lpido
Forma
Quanto sua forma, as protenas podem ser classificadas em:
Globulares presentes no sangue e solveis em gua, com estrutura compacta, o que permite o
transporte de lpidos
Fibrosas protenas estruturais, cuja forma se define segundo um eixo, sendo insolveis em gua
(ex.: colagnio)
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Estrutura
Primria dada pela sequncia de aminocidos ao longo da cadeia polipeptdica. o nvel
estrutural mais simples e mais importante, por ser dele que deriva todo o arranjo espacial da
molcula. Esta estrutura especfica para cada protena, sendo determinada geneticamente. Como
a sua constituio s definida pela sequncia de aminocidos, a orientao espacial da molcula
no tem qualquer relevncia.
Secundria dada pelo arranjo espacial de aminocidos prximos entre si na sequncia primria
da protena. o ltimo nvel de organizao das protenas fibrosas, mais simples estruturalmente.
Esta estrutura ocorre graas possibilidade de rotao das ligaes entre os carbonos dos
aminocidos e os seus grupos amina e carboxilo. Existem dois tipos de estrutura secundria:
define-se entre pequenas zonas da cadeia entre aminocidos adjacentes.
estabelecimento de pontes de hidrognio entre diferentes cadeias peptdicas.
Terciria resulta do enrolamento da protena no espao, sendo mantida por pontes de hidrognio
e pontes dissulfito. Basicamente, esta estrutura confere actividade biolgica protena. Enquanto a
estrutura secundria determinada pelo relacionamento estrutural de curta distncia, a terciria
caracterizada pelas interaces de longa distncia entre aminocidos.
Os aminocidos apolares vo dispr-se essencialmente no interior da molcula, porque tm de
existir grupos polares superfcie para permitirem a dissoluo em gua.
A estrutura terciria , ento, determinada e estabilizada por determinados factores como:
Interaces hidrofbicas tendncia dos am inocidos apolares fugirem da gua.
Ligaes inicas foras de atraco entre aminocidos com radicais carregados com
cargas opostas.
Foras de van der Waals
Pontes de hidrognio ligaes com tratamentos fracos que podem ser quebradas porque
so covalentes.
Ligaes dissulfito ligaes no covalentes que resultam da oxidao, permitindo que
duas cistenas (aminocidos no carregados) possam reagir entre si.
Quaternria existente nas molculas com vrias cadeias polipeptdicas. Depende da forma como
as vrias cadeias se organizam entre si, sendo que as interaces so as mesmas da estrutura
terciria.
Desnaturao de protenas
A desnaturao consiste na perda de actividade biolgica da protena devido quebra das ligaes
no covalentes e das pontes dissulfureto, que asseguravam a manuteno da sua estrutura terciria e
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quaternria. No entanto, durante a desnaturao, a estrutura primria da protena no se altera, ou seja, a

sequncia linear dos aminocidos mantm-se constante.
Os agentes desnaturantes mais comuns so:
Ureia agente desnaturante que corta as ligaes no covalentes (ligaes hidrofbicas).
-mercaptoetanol agente redutor que corta as pontes dissulfito.
Atravs de um ensaio enzimtico, foi concludo que a conformao de uma protena est na
sequncia dos aminocidos, ou seja, se a estrutura primria no for mantida, a protena no volta a ter
actividade.
A dilise consiste na remoo dos agentes desnaturantes, permitindo que a protena volte a
adquirir a sua conformao nativa, readquirindo a sua actividade biolgica (renaturao). No caso da
protena ser constituda por apenas uma cadeia peptdica, a actividade biolgica restabelecida quando a
sua estrutura terciria a correcta. Caso a protena seja constituda por mais do que uma cadeia peptdica,
ela s volta a adquirir a sua actividade biolgica quando se apresenta na correcta estrutura quaternria.
No ocorre renaturao caso os agentes desnaturantes utilizados tenham sido:
Enzimas (proteases)
Meios de pH muito cido ou muito bsico, quando associados a temperaturas da ordem dos 180C.
5.1.
Enzimas
So especficas
Apresentam um local activo para ligao do substrato
Podem ou no ter um local alostrico
Podem sintetizadas sob a forma de zimognio
Podem ter necessidade de coenzimas
No se consomem nas reaces
So a maior e mais especfica classe de protenas
Local activo da enzima local de ligao da enzima ao substrato.
Local alostrico local de ligao da molcula efectora que pode activar ou inibir a enzima.
Coenzima enzima inicialmente inactiva (sintetizada no organismo), e que para se tornar activa tem que
sofrer protelise.
Zimognios so formas precursoras das enzimas (forma inactiva) que tambm tm que sofrer protelise
para se tornarem activas.
Constante de Michaelis (Km) valor de concentrao de substrato para o qual a velocidade da reaco
atinge metade do valor mximo. Se Km for um valor baixo significa que a enzima muito especfica, e que
se liga fortemente ao substrato. Se o valor de Km for elevado pode concluir-se que a enzima pouco
especfica e que o substrato no se liga muito fortemente enzima.
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Quanto mais substrato se adicionar enzima, maior a velocidade de produo do produto da reaco.
Quando a enzima entra em saturao, a velocidade de formao de produtos estabiliza.
Modos de actuao das enzimas

Modelo chave-fechadura o substrato encaixa perfeitamente no local activo da enzima, havendo
uma total complementaridade entre ambos.
Modelo do encaixe induzido o substrato e o local activo tm conformaes diferentes. O
substrato induz uma alterao na conformao do local activo da enzima.
Inibio o centro activo no est apto para ligar-se a nenhum substrato. Se no local alostrico se
ligar um efector positivo, induz-se uma alterao da conformao do local activo, que passa a
poder ligar-se ao substrato. Se no local alostrico se ligar um efector negativo (inibidor), o local
activo no vai permitir que nenhum substrato se ligue.
5.2.
Anticorpos
Anticorpos policlonais populao total de imunoglobulinas presentes num soro animal. So anticorpos
que so sintetizados num animal, mas que reconhecem diferentes partes da protena antignica (diferentes
determinantes antignicos ou eptopos). Este tipo de anticorpos reconhecem sempre o antignio, mesmo
que este esteja sob a forma desnaturada.
Anticorpos monoclonais um tipo de imunoglobulinas sintetizadas por um nico clone (clula) e que
especfica para um nico determinante.
Eptopos so sequncias de aminocidos relacionadas com a estrutura primria.
Eptopos conformacionais a protena quando est no seu estado nativo, vai adquirir uma
determinada conformao (estrutura terciria).
Estruturas moleculares derivadas de modificaes ps-traduo estas modificaes que
podem vir a conferir um reconhecimento aos anticorpos e permitir a activao das protenas
(ex.: glicoprotenas, adio de fosfatos, etc.)
Imunognio qualquer substncia capaz de induzir uma resposta imunitria.
Imunoglobulina protena complexa, constituda por vrios domnios (estrutura quaternria). Possui duas
cadeias leves e duas cadeias pesadas, ligadas por pontes dissulfureto.
6. cidos nucleicos
Os cidos nucleicos so cidos orgnicos complexos formados por uma longa cadeia de nucletidos,
presente no ncleo e, por vezes, no citoplasma das clulas vivas. Os dois tipos, DNA e RNA, constituem a
base da hereditariedade. Os nucletidos, medida que se vo organizando na cadeia de cido nucleico
constituem o cdigo gentico.
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6.1. cido desoxirribonucleico (DNA)

Dupla hlice (2 cadeias);
Cadeias antiparalelas;
Cadeias complementares (numa cadeia temos uma purina e noutra temos uma pirimidina): C G ,
A = T;
Os nucletidos ligam-se entre si por ligaes fosfodister;
A estabilidade devida s ligaes entre as bases: ligaes de hidrognio, interaces hidrofbicas,
foras de van der Waals e existncia da dupla cadeia.
A base azotada liga-se ao carbono 1da respectiva pentose atravs de um a ligao glicosdica.
A molcula de DNA possui um esqueleto constitudo por desoxirribose+fosfato, sendo que as bases
azotadas se encontram no seu interior.
A sntese de DNA faz-se sempre da extremidade 5para a 3da cadeia.
Um gene uma poro de DNA que d origem a uma molcula de RNA funcional.
Nucleossomas e a fibra de 30 nm
A cromatina nos ncleos encontra-se
organizada estruturalmente, e a um nvel
bsico, em subunidades com a forma de
esferas, com dimetro de 10 nm, designadas
por nucleossomas. Estes so protenas
carregadas positivamente, na medida em que o
DNA tem grupos fosfato carregados
negativamente.
O estudo estrutural detalhado mostra que
cada nucleossoma constitudo por um
esqueleto central proteico, constitudo pelo
octmero de histonas 2x (H2A, H2B, H3 e H4),
em torno do qual o DNA se enrola duas vezes,
sendo este duplo enrolamento estabilizado por
uma outra quinta histona (H1). O comprimento
do DNA corresponde a 146 pares de bases
nucleotdicas.
As histonas so protenas altamente
conservadas, ricas em aminocidos carregados
positivamente. Desta forma, significa que no
sofreram quaisquer alteraes durante a
evoluo.
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Nveis de compactao da molcula de DNA
Os nucleossomas so o primeiro nvel de compactao do DNA. O nvel seguinte consiste na

concentrao dos nucleossomas justapostos, com enrolamento helicoidal posterior, formando uma longa
fibra de 30 nm. As histonas, com a sua forma alongada, interactuam contribuindo assim para a
aproximao dos nucleossomas e para a sua justaposio.
Com o prosseguimento do ciclo celular, a fibra de cromatina organiza-se em nveis, sucessivos de
complexidade, ainda hoje pouco esclarecidos, at formar o corpo do cromossoma em metafase. Este
constitudo, de acordo com a hiptese mais aceite actualmente, por uma nica fibra de cromatina,
composta por uma longa molcula de DNA, que percorre cada cromatdeo de um extremo ao outro.
Cromossomas
Um cromossoma uma molcula de DNA associada a protenas histnicas e
no histnicas. constitudo por dois cromatdeos ligados pelo centrmero que
se caracteriza por ser uma zona altamente compacta.
Para que um cromossoma seja funcional, tem de possuir:
Origem de replicao local onde se inicia a replicao do DNA;
Centrmero regio especializada e complexa dos cromossomas que
apresenta poucos ou nenhuns genes. o ponto de unio dos cromatdeos irmos
e contm uma estrutura (o cinetocoro) a que as fibras do fuso se ligam durante a
mitose e a meiose, pelo que tem um papel importante no movimento dos
cromossomas em direco aos plos;
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Telmero sequncias de DNA existentes nas zonas terminais dos cromossomas, que impedem um
encurtamento de DNA pela aco de uma enzima especfica. O telmero pode ter o comprimento de
algumas centenas de pares de bases e participa na estabilidade e na replicao do cromossoma. Um
crom ossom a norm alpossuidois telm eros. A enzim a que protege os telm eros designa-se telomerase,
que j no est presente na maioria das clulas adultas. Nas clulas embrionrias, existe sempre a
telomerase, na medida em que esto em constante desenvolvimento.
O genoma humano contm 23 pares de cromossomas, logo existem 46 molculas de DNA.
Caritipo
O caritipo o conjunto dos cromossomas duma clula eucaritica, normalmente definido em termos
do seu nmero, dimenses e morfologia (forma e estrutura). caracterstico de cada espcie como, por
exemplo, o caritipo humano. Este constitudo por 22 pares de cromossomas homlogos (autossomas) e
um par de cromossomas sexuais (heterossomas).
Bandas G possuem baixo teor em GC (guanina + citosina) e so escuras devido colorao de Giemsa.
Bandas R elevado teor em GC e apresentam cor mais clara. Correspondem a zonas com maior densidade
de genes, especialmente genes que so expressos em todos os tipos de clulas.
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Politinizao h repetio da molcula de DNA mas no h separao. Existe o cromossoma polytene e

por isso que se consegue observar ao MOC.
Cromatina
Nas clulas eucariticas, a parte no nucleolar do ncleo formada, na sua maior parte, por uma
estrutura fibrosa, a que se d o nome de cromatina. Esta constituda por DNA associado a uma
quantidade igual de protenas bsicas, as histonas, e protenas no histnicas.
A cromatina no ncleo em interfase est topologicamente compartimentada em domnios estruturais
correspondentes a cada cromossoma e territrios, como por exempo, os dos centrmeros e os dos
telmeros.
Existem dois tipos de cromatina:
Eucromatina a cromatina activa e a zona geneticamente mais activa do genoma, estando nela
situadas as regies do DNA com uma hipersensibilidade marcada DNAase. Esta cromatina situa-se no
interior do nucleoplasma.
Heterocromatina corresponde s regies menos activas e inactivas do genoma, tem uma
estrutura condensada e mantm o seu grau de condensao durante todo o ciclo celular. Localiza-se ao
longo do interior do invlucro nuclear e junto dos poros nucleares.
Facultativa segmentos cromossmicos ou cromossomas inteiros que durante o perodo
precoce do desenvolvimento embrionrio se inactivam e condensam, continuando neste estado
em todos os tecidos ou em muitos deles ex.: um dos cromossomas X das clulas femininas.
Constitutiva caracteriza-se por ser constitudo por sequncias que se encontram
altamente repetidas e organizadas lado a lado (em tandem). Assim, encontra-se em posies
idnticas nos cromossomas homlogos.
6.2. cido ribonucleico (RNA)

Possui, normalmente, uma cadeia simples e linear, mas que pode sofrer emparelhamento sobre si
(por emparelhamento de bases), originando conformaes espaciais mais complexas;
Envolvido na sntese de protenas;
Consiste num grande nmero de nucletidos unidos, cada um dos quais compreende o acar
ribose, um grupo fosfato e uma de quatro bases azotadas;
Existe em trs formas principais, cada uma delas com funo diferente na sntese das protenas:
mRNA, tRNA e rRNA.
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RNA de transferncia (tRNA)

Pequena molcula de RNA que se combina com um aminocido especfico e o transporta para o
ribossoma durante a sntese de protenas;
Tem uma estrutura tridimensional especfica;
Inclui um tripleto de bases numa das extremidades (o anticodo) que complementar de um outro
conjunto de 3 nucletidos do mRNA (o codo);
N a extrem idade 3tem o codo ACC que o local onde se vai ligar o aminocido;
Os nuclesidos modificados so: pseudouridina, dihidrouridina, inosina e ribotimidina.
RNA mensageiro (mRNA)

Cadeia linear;
Sintetizado no ncleo;
Possui uma sequncia de 3 nucletidos (codo), complementar do anticodo do tRNA;
Actua como molde para a ligao de aminocidos ao nvel do ribossomas durante a sntese das
protenas.
RNA ribossmico (rRNA)

Est presente nas subunidades dos ribossomas;
Pode formar estruturas complexas, semelhantes a ganchos e ansas, estabilizados pelo
emparelhamento de bases;
Todo o rRNA (5S, 5.8S, 28S e 18S) sintetizado no nuclolo, excepto a fraco 5S que sintetizada
no nucleoplasma;
O poliribossoma existe nas clulas quando h sntese de protenas citoslicas.
As ribozimas so molculas de RNA com funes catalticas que permitem o corte de determinadas
zonas de molculas de RNA.
Ribossomas
Constitudos por RNA associado a protenas;
So constitudos por duas subunidades (uma maior e outra menor);
Nos procariticos, os ribossomas so do tipo 70S, em que a subunidade maior uma 50S e a
subunidade menor uma 30S.
Nos eucariticos, os ribossomas so do tipo 80S, em que a subunidade maior uma 60S (que est
associada a 49 protenas) e a subunidade menor uma 40S (que est associada a 33 protenas). A
subunidade maior constituda por 3 fraces (5S, 5.8S e 28S) e a subunidade menor constituda
por 1 fraco (18S).
Cdigo gentico
O cdigo gentico a informao para a construo das protenas, inscrita no material gentico. No
tem vrgulas na sua escrita, ou seja, lido na totalidade, sem quaisquer interrupes. Apresenta as
seguintes caractersticas:
20
2006/2007
Degenerado existem vrias codes que codificam o mesmo aminocido;

Universal lido da mesma maneira, desde as bactrias at aos mameros (com excepo das
mitocndrias, nas quais h algumas variaes no modo de leitura);
Possui 43 = 64 codes;
Existem 3 codes stop ou de terminao, para os quais no h nenhum anti-codo complementar,
sendo responsveis por sinalizar o fim do processo de traduo (UAG, UGA, UAA);
Existe um codo de iniciao que codifica a metionina e que sinaliza o incio do processo de
traduo (AUG).
21
2006/2007
Captulo 3 Mtodos de estudo das clulas
1. Centrifugao
Na centrifugao, o comportamento de uma partcula num campo de centrifugao, depende do seu
peso e da resistncia que encontra ao mover-se no meio da suspenso.
A taxa de sedimentao :
Directamente proporcional ao tamanho da partcula;
Directamente proporcional diferena entre a densidade da partcula e a densidade do meio;
Nula quando a densidade da partcula iguala a do meio;
Inversamente proporcional viscosidade.
Directamente proporcional fora centrfuga.
1.1. Centrifugao Diferencial ou Fraccionada

Consiste em aumentar progressivamente o tempo de centrifugao e a fora centrfuga, de modo a
que se separem diferentes compostos, sucessivamente menos densos.
No caso da centrifugao diferencial de uma clula previamente homogeneizada, primeiro
sedimentam os ncleos (zonas mais densas da clula); depois (com aumento da fora centrfuga e do
tempo de centrifugao) sedimentam mitocndrias, cloroplastos, lisossomas e peroxissomas;
posteriormente sedimenta a membrana plasmtica, fraces microssomais e polirribossomas; em seguida,
depositam-se ribossomas e o que resta so as pores solveis do citoplasma.
22
Captulo 3 Mtodos de estudo das clulas |
2006/2007
1.2. Centrifugao Contragradiente

A separao depende da densidade da partcula. As partculas vo movimentar-se at atingir uma
densidade igual do meio. uma centrifugao isopprica porque a densidade rigorosa, o que obriga a
um maior cuidado com a velocidade e com o tempo de centrifugao.
Isto acontece pois se aumentarmos muito estes factores, todas as partculas acabam por
sedimentar. Nesta experincia, utiliza-se um meio com um gradiente de concentrao em sacarose, sendo
que as partculas que se encontram mais no fundo do tubo tm maior concentrao de sacarose.
Centrifugao por densidade moderada

Aqui, efectua-se a separao por tamanho por e densidade, em que a zona de maior densidade tem
uma densidade menor que a partcula a separar. Assim, o tempo e a velocidade de centrifugao tm de
ser controlados cuidadosamente.
Centrifugao isopcnica
Nesta centrifugao, a separao efectuada apenas por densidade, sendo que a zona de maior
densidade tem uma densidade maior que a partcula a separar.
2. Cromatografia
A cromatografia um mtodo de purificao de protenas. Neste mtodo, utilizada uma coluna cheia
com uma matriz com caractersticas especficas de acordo com o tipo de cromatografia que se vai realizar.
No cimo da coluna, coloca-se a amostra que equilibrada com um tampo. Este tampo vai atravessando a
coluna e medida que isto acontece, a amostra vai descendo ao longo da mesma.
| Captulo 3 Mtodos de estudo das clulas
23
2.1.
2006/2007
Cromatografia de filtrao por gel

Nesta cromatografia, utiliza-se uma matriz
inerte e porosa para que se possam separar as
protenas pelo seu tamanho e peso molecular.
As protenas de grande peso molecular no
entram nos poros e so eludas em primeiro
lugar. As protenas mais pequenas penetram
tanto mais profundamente nos poros, quanto
mais pequenas forem, e necessitam de
maiores quantidades de tampo para serem
eludas da coluna.
Para concluir se uma determinada protena
se encontra num determinado lquido
recolhido,
procede-se
a
uma
espectrofotometria a 280 nm.
2.2.
Cromatografia de troca inica
Nesta cromatografia, as protenas so separadas de acordo com a sua

carga. Utilizam-se colunas que so carregadas positiva ou negativamente,
atraindo as protenas de carga negativa ou positiva, respectivamente.
Quando uma coluna tem carga positiva, atraindo protenas com carga
negativa, diz-se que ocorre uma troca aninica. Quando a coluna possui carga
negativa, atraindo protenas carregadas positivamente, diz-se que ocorre uma
troca catinica.
As protenas de carga contrria matriz so atradas por ela, sendo
retardadas relativamente a outras que no sejam atradas pela matriz, e que vo
ser eludas em primeiro lugar.
A eluio da protena vai ser efecutada por uma soluo tampo, cujo
pH altere a carga da protena, de acordo como o seu ponto isoelctrico.
Podemos dar o exemplo de uma troca aninica (protena carregada
negativamente e coluna carregada positivamente). Se adicionarmos uma
soluo com um pH muito baixo (abaixo do ponto isoelctrico da protena), a
protena tem que funcionar como uma base, aceitando H+ e ficando carregada positivamente. Neste caso, a
protena deixa de ter afinidade com a matriz e eluda.
24
2006/2007
3. Electroforese (em gel de poliacrilamida)

A electroforese um mtodo de separao e caracterizao de protenas. A acrilamida uma substncia
neurotxica que vaireagir com a N ,N -metileno-biscarilamida, formando uma rede porosa: a poliacrilamida.
Quanto maior a concentrao de poliacrilamida, mais finos sero os poros (que permitem separar as
protenas pelos seus pesos moleculares). Para alm da poliacrilamida, tambm podem utilizar-se como
suporte a nitrocelulose (usada em anlises crticas) ou a agarose.
Basicamente, a electroforese um mtodo til para estudar patologias, para efectuar testes de
controlo da qualidade e para verificao de doenas.
Electroforese nativa (PAGE)

Nesta electroforese, no utilizado nenhum desnaturante, sendo que as protenas se movimentam e
so separadas tendo em conta a massa e a carga (ponto isoelctrico).
Electroforese com desnaturante (SDS-PAGE)

Nesta electroforese, utiliza-se um detergente o SDS (sdiododecilsulfato) que fortemente aninico,
logo vai desnaturar as protenas e fazer com que elas adquiram
carga negativa. Por vezes, juntamente com o SDS pode utilizar-se
um agente redutor (-mercaptoetanol) que tem a capacidade de
quebrar as pontes dissulfureto da protena.
As protenas so colocadas no tanque de electroforese,
misturadas com o SDS. Como adquirem carga negativa, so
atradas para o plo positivo que est situado no lado oposto do
tanque. Neste processo, as protenas migram ao longo do gel de
poliacrilamida de acordo com o seu peso molecular, sendo que
quanto mais pequenas forem, mais rapidamente vo descer ao
longo do tanque, ficando mais prximas do plo positivo (neste
caso, as protenas migram ao contrrio da cromatografia em gel,
sendo que as protenas mais pequenas so recolhidas em primeiro lugar).
Depois de realizar a electroforese, fixam-se as protenas ao gel com cidos ou lcoois e procede-se
sua colorao.
Na colorao, podem utilizar-se trs substncias diferentes:
Azul de Comassie
Nitrato de prata mais sensvel que o anterior porque detecta protenas mais pequenas.
Especficas no caso de as protenas serem enzimas.
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2006/2007
Focagem isoelctrica
A focagem isoelctrica permite separar as protenas segundo a sua carga, sendo til para determinar
rigorosamente o ponto isoelctrico de uma dada protena. Como se analisa a carga, o meio de suporte
pode ser a poliacrilamida ou a agarose.
O gel usado possui anflitos que so molculas cujo ponto isoelctrico conhecido. Assim, neste
mtodo, necessrio aplicar uma corrente elctrica para que os anflitos se desloquem e criem um
gradiente de pH. Estes anflitos devem possuir um conjunto de caractersticas:
Condutividade no ponto isoelctrico;
Inertes com as protenas em estudo;
Capacidade tampo para no alterar o pH
do meio;
Solveis no ponto isoelctrico;
Interaco mnima com as protenas;

Baixo peso molecular.
A protena vai deslocar-se ao longo da matriz, sendo atrada pelo plo de carga contrria sua. Num
determinado momento, a protena atravessa a zona da matriz onde esto situados os anflitos, cujo pH
igual ao seu ponto isoelctrico. Aqui, as cargas positivas da protena vo ser iguais s cargas negativas,
ficando a protena neutra. Assim, ela vai deixar de ser atrada para um dos plos e fica esttica junto aos
anflitos com o mesmo ponto isoelctrico.
Nota: Como o ponto isoelctrico dos anflitos conhecido, ento vai ficar a conhecer-se esse mesmo
atributo nas protenas.
4. Imunocitoqumica
A imunocitoqumica uma tcnica que permite localizar protenas num determinado local do interior da
clula. Para isso, utilizam-se molculas especficas para as protenas os anticorpos que localizam
antignios nas clulas. Por esta razo, este mtodo a base para a maioria dos processos que utilizam
anticorpos no seu procedimento.
A visualizao conseguida atravs de um processo de marcao do anticorpo feita com enzimas ou
fluorocromos (substncias fluorescentes). Como no possvel marcar todos os anticorpos (porque existe
um nmero muito elevado de protenas), inicialmente vo ser utilizados os anticorpos que no esto
marcados.
26
2006/2007
Os antignios primrios so produzidos directamente pelo organismo receptor do anticorpo e os

antignios secundrios so originrios de um outro organismo. No entanto, estes so marcados, inseridos
no interior do primeiro organismo e vo permitir o reconhecimento da regio constante dos anticorpos.
5. Citometria de fluxo
Este mtodo de estudo permite identificar clulas atravs de dois mecanismos: ou pela luz que as
clulas difundem, ou pela fluorescncia emitida quando atravessam um feixe de raios laser.
Aqui, a separao das clulas pode ser efectuada tendo em conta trs factores:
Marcadores;
Tamanho das clulas;
Contedo de DNA.
6. Microscopia
Uma vez que as clulas tm dimenses muito pequenas, ou seja, tm uma dimenso inferior ao poder
de resoluo da viso humana, torna-se obrigatria a utilizao de aparelhagem adequada para a sua
observao: os microscpios.
Consoante os microscpios, pode estudar-se:
Processos in vitro clulas em cultura, ou seja, a morfologia de clulas isoladas ou de tecidos
(identificar os determinados tipos de clulas que fazem parte do tecido);
A localizao de determinadas substncias desejas;
Processos in vivo seleccionar clulas vivas e injectar-lhes determinadas substncias no seu
interior observando, por exemplo, um determinado momento do ciclo celular.
No caso do estudo de clulas em tecidos ou do estudo da sua morfologia, recorre-se usualmente a
microscpios pticos.
Por outro lado, no caso de se estudarem as clulas isoladas ou mesmo um determinado organismo,
procedem-se a ensaios in vitro e in vivo.
6.1. Microscpio de fluorescncia

Estes microscpios so usados para estudar processos biolgicos na clula e a localizao de
determinadas substncias no seu interior, utilizando-se para o efeito corantes especiais, designados
fluorocromos. Estes tm a capacidade de localizar os constituintes desejados no interior das clulas,
existindo vrios tipos:
Vermelhos rodamina
Verdes fluorescena
Consoante o fluorocromo utilizado, vai ser emitida uma luz de determinada cor (vermelho ou
verde), tendo em conta aquilo que for reconhecido. Assim, quando se liga o microscpio, possvel
observar um campo escuro com vrias zonas coloradas dessas duas cores.
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2006/2007
A sua utilizao baseia-se na propriedade que certas substncias tm de absorver a luz a um

determinado comprimento de onda e, posteriormente, emitir luz a um comprimento de onda superior.
Este mecanismo depende do fluorocromo que est a ser utilizado, dentro do espectro vsivel, no entanto
existe apenas um nmero reduzido de substncias com capacidades de fluorescncia: a clorofila, a
riboflavina, a vitamina A ou a porfirina.
A base da tcnica para observar as clulas neste tipo de microscpio exactamente a mesma que
usada no microscpio de campo claro. Porm, enquanto no primeiro os anticorpos tm que estar marcados
com fluorocromo para serem vistos no microscpio, no segundo, os anticorpos tm de estar marcados com
uma dada enzima para ficarem corados.
por isso que a tcnica de fluorescncia vai decaindo, ou seja, ao fim de algum tempo de
permanncia do fluorocromo nas clulas, o seu efeito desaparece.
Desvantagens:
Durante a focagem, focam-se vrios planos simultaneamente, ou seja, verifica-se uma sobreposio
de imagens fluorescentes das molculas, a profundidades da clula, o que exibe uma imagem com
pouca definio.
Durante a fixao, pode haver destruio da antegenicidade das protenas, o que vai dificultar a sua
ligao aos anticorpos, portanto a fluorescncia emitida perde eficcia.
difcil utiliz-lo para seces de clulas finas.
O prprio meio em que as clulas esto pode emitir fluorescncia, obscurecendo o sinal emitido
pelo anticorpo (fenm eno declant).
6.2.
Microscpio confocal
Tal como o microscpio anteriormente referido, este tambm emite fluorescncia durante o
processo de observao. No entanto, difere do microscpio de fluorescncia nos seguintes aspectos:
Permite visualizar as molculas num nico plano de focagem e forma uma imagem a nvel de
computador (imagem tridimensional com mais pormenores) e bastante mais definida
deconvoluo.
Utiliza raios laser.
Tanto a fluorescncia do declant como a sobreposio de planos desaparecem.
Devido ao seu elevado custo, so usados nos laboratrios, os de fluorescncia e no confocal.
6.3.
Microscpio de contraste de fase / de interferncia
Este microscpio bastante utilizado para clulas vivas, em culturas, ou para observar movimentos
celulares. Baseia-se nas diferenas entre os ndices de refraco, entre o interior da clula e o exterior da
clula e zonas das clulas. Assim sendo, as diferentes espessuras e os diferentes tipos de refraco iro
converter-se em zonas claras e escuras.
O que este microscpio tem de especial relativamente aos outros,no que diz respeito morfologia
uma placa com um anel com orifcio e um anel escuro. Isto faz com que os raios que atravessam a
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2006/2007
preparao sofra refraco e difraco, atingindo a objectiva ao atravessar o

objecto. Os raios de luz no sofrem quaisquer desvios e passam pelo anel
escuro ao induzir um atraso fase da onda, permitindo assim observar as
zonas claras e escuras com maior nitidez.
A principal desvantagem deste microscpio o facto de apenas ser
possvel observar clulas isoladas ou tecidos ou cortes extremamente finos.
6.4.
Microscpio de fundo escuro
muito utilizado na microbiologia e serve para observar estruturas

muito pequenas, como as bactrias. Com este microscpio observamos o
fundo escuro e estruturas extremamente brilhantes.
Quando se liga o microscpio ptimo, possver o fundo todo
iluminado, o que no acontece com o microscpio de fundo escuro, na
medida em que os raios partem da fonte luminosa, atravessam o
condensador, mas nem todos atingem a objectiva. Apenas aqueles que
atravessam tambm o objecto que iro atingir a objectiva, dando origem s
estruturas brilhantes que constituem as clulas que se pretendem observar.
6.5.
Microscpios electrnicos
Estes microscpios servem, principalmente, para estudar todas as estruturas existentes no interior
da clula. Em comparao com os restantes, estes utilizam um feixe de electres (em vez de fotes),
existindo uma grande diferena de potencial entre o ctodo (filamento de tungstnio) e o nodo que vai
permitir a obteno de uma boa definio da imagem observada.
Quanto maior a voltagem, maior a definio da imagem e maior a resoluo do microscpio.
O poder da resoluo aproxima-se dos 0.1 nm, sendo muito pequeno em valor, mais muito grande
na visualizao das clulas. Esta diferena de potencial provoca uma acelerao dos electres, sendo que
para evitar as interferncias deste excesso de acelerao, todo o sistema est inserido num tubo
constitudo apenas pelo vazio, a fim de no haver absoro de electres.
Possui lentes electromagnticas onde se colocam as amostras, no entanto a imagem visualizada
num ecr.
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2006/2007
Modo de funcionamento:
1. Quando o filamento de tungstnio aquecido no vcuo, produz electres.
2. H uma grande diferena de potencial entre o nodo e o ctodo, que leva acelerao dos
electres.
3. Os electres passam no condensador e atingem o objecto a observar os electres tm fraco
poder de penetrao logo os cortes devem ser extremamente finos.
4. Muitos electres so dispersos pelos constituintes da estrutura celular e contribuem para a
formao de uma imagem intermdia dada pela objectiva. Aps a passagem dos electres, as
estruturas celulares ficam destrudas.
5. Esta imagem depois ampliada por outra bobina projectora que equivale ocular do microscpio
ptico.
6. A focagem feita pela variao da corrente electrnica que passa atravs das lentes
electromagnticas.
Tipos de microscpios electrnicos:

Transmisso (difere do segundo devido diferena de potencial)
Transmisso de alta voltagem
Esquadrinhamento SEM
Integrado STEM (transmisso + enquadrinhamento)
6.6. Microscpio de esquadrinhamento

Observa-se a superfcie da amostra no seccionada.
A superfcie da clula fixada, seca e recoberta por um metal pesado (platina), visualizando-se
ento uma pelcula sore a amostra. Os electres chocam com a camada metlica e so emitidos formando
uma imagem tridimensional.
30
2006/2007
7. Mtodos de introduo de substncias na clula

Microinjeco utilizao de uma seringa sendo que se injectam as substncias quando esto prestes a ser
analisadas no microscpio. De seguida, o sistema a ser utilizado vai induzir alteraes ao nvel da
membrana celular.
Electroporao colocao das substncias desejadas de inserir na clula em choques elctricos que
alteram a abertura de poros existentes na clula. Se estiverem fechados, impedem que as substncias que
entraram voltem a sair, e possvel que se registem os efeitos dessas substncias na conformao celular.
Lipossomas ao contactar com a membrana celular, as vesculas tm de ter protenas reconhecidas como
sendo protenas membranares atravs de receptores. Depois disto, fundem as 2 membranas, dando-se a
libertao do contedo da clulas vesiculares.
Introduo de genes introduo de partculas de DNA na clula sem alterar a conformao da sua
membrana plasmtica.
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2006/2007
Captulo 4 Energia celular
Fotossntese ou compostos com elevado

potencial energtico (Respirao)
ENERGIA
Sntese de
macromolculas
celulares (DNA,
RNA, protenas,
polissacardeos)
Sntese de outros
constituintes
celulares
(membrana
fosfolipdica)
Movimentos
celulares,
incluindo
contraces
musculares,
arrastamento de
clulas e
movimento de
cromossomas
durante a mitose
Transporte de
molculas contra
o gradiente de
concentrao
Criao de um
potencial
elctrico atravs
da membrana
(importante para
as funes
nervosas)
Calor
1. Gliclise
A gliclise a sequncia metablica de vrias reaces enzimticas, em que a glicose oxidada
produzindo duas molculas de cido pirvicoe dois equivalentes reduzidos de NAD +, que ao introduziremse na cadeia respiratria, produziro duas molculas de ATP.
Os organismos primitivos originaram-se num mundo cuja atmosfera carecia de O2 e, por isso, a gliclise
considerada com sendo a via metablica mais primitiva, estando portanto presente em todas as formas
de vida actuais.
Este processo, nos seres eucariontes, ocorre no citosol.
32
Captulo 4 Energia celular |
2006/2007
A gliclise divide-se em duas partes principais:

Na primeira, a glicose
fosforilada com o gasto energtico de
uma molcula de ATP para originar a
glicose-6-fosfato, que se isomeriza para
formar frutose-6-fosfato. A partir desta
molcula e com gasto de outra molcula
de ATP, forma-se a frutose-1,6-bifosfato.
Assim sendo, nesta fase, foram gastas
duas molculas de ATP. Esta uma
reaco irreversvel na qual intervm a
glicose e o ATP, onde constam cinco
reaces bioqumicas. A importncia dos
intermedirios fosforilados :
Grupos fosfato so ionizados a pH 7,
dando uma carga negativa aos
intermedirios
que
ento,
no
conseguem atravessar a membrana
celular;
Grupos fosfato so essenciais na
conservao da energia metablica;
A ligao dos grupos fosfato ao
centro activo da enzima fornece a
energia de ligao.
Na segunda parte, a frutose-1,6bifosfato divide-se em duas molculas:

gliceraldedo-3-fosfato
e
dihidroxiacetona-fosfato, por meio da enzima aldolase. Esta ltima molcula vai transformar-se tambm
em gliceraldedo-3-fosfato, duplicando a reaco a partir deste momento. O gliceraldedo-3-fosfato sofre
cinco reaces bioqumicas at se converter em piruvato. O piruvato pode ser oxidado a acetil-CoA na
presena de oxignio (na matriz mitocondrial) e o NADH formado vai ser oxidado atravs da oxidao
mitocondrial.
| Captulo 4 Energia celular
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2006/2007
2. Fermentao
A fermentao um processo anaerbio de transformao de uma substncia noutra, produzida a partir
de microrganismos, tais como bactrias e fungos, chamados nesses casos de fermentos.
Existem vrios tipos de fermentao, entre os quais:
Fermentao lctica em que o piruvato origina o cido lctico.
Fermentao alcolica em que o piruvato origina etanol e CO2.
3. Ciclo de Krebs
O ciclo de Krebs corresponde a uma srie de reaces qumicas que ocorrem no metabolismo celular.
exectuado nas mitocndrias dos eucariontes e no citoplasma dos procariontes. Trata-se de uma parte do
metabolismo dos organismos aerbios (utilizando oxignio da respirao celular) mas tambm dos
organismos anaerbicos (atravs da gliclise, por exemplo).
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2006/2007
Este ciclo inicia-se quando o piruvato que sintetizado na gliclise transformado em acetil-CoA por
aco da enzima piruvato-desidrogenase. Este composto reage com o oxaloacetato que um produto do
ciclo anterior, formando-se citrato. Este vai dar origem a um com posto de cinco carbonos, o cetoglutarato com libertao de NADH e de CO2. Por sua vez, o -cetoglutarato vai dar origem a outros
compostos de quatro carbonos com formao de GTP, FADH2, NADH e oxaloacetato.
4. Fosforilao oxidativa
O processo de fosforilao oxidativa refere-se fosforilao do ADP em ATP, utilizando para isso a
energia libertada nas reaces de oxidao-reduo.
As transferncias de electres constituem reaces desse tipo, que se processam com libertao de
energia, que pode ser aproveitada biologicamente para a sntese de ATP. A energia do transporte de
electres primariamente utilizada para bombear protes para o exterior da matriz mitocondrial. Como
consequncia deste mecanismo, vai haver a formao de um gradiente de protes, ou seja, um conjunto de
concentraes de protes diferentes dentro e fora da mitocndria. Como a membrana interna deste
organelo impermevel a protes, eles s podem voltar matriz e desfazer o gradiente atravs de locais
especficos da membrana interna.
A carga fica mais positiva no espao intermembranar, devido maior concentrao de protes e o pH
fica sucessivamente mais cido, o que conduz produo de ATP atravs da ATP sintase.
| Captulo 4 Energia celular
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2006/2007
5. Sntese de polmeros
Existem monmeros que contm a energia necessria sua prpria ligao cadeia em crescimento
(Tail polymerization) ex.: cidos nucleicos e polissacardeos.
Existem monmeros que transportam a energia necessria para que se ligue o monmero seguinte
(Head polymerization) ex.: protenas e cidos gordos.
6. Ciclo do azoto
O ciclo do azoto pode ocorrer nos nucletidos ou nas protenas. No caso dos nucletidos, originado
nas dietas e na biossntese, pois o azoto das bases azotadas proveniente da glutamina, da glicina
(aminocidos tambm importantes para a sntese de outros compostos) e do cido asprtico. Por sua vez,
as pentoses ribose e desoxirribose so provenientes da glicose. No que diz respeito s protenas, a origem
semelhante dos nucletidos.
Na biossntese de polmeros, podem existir reaces favorveis quando se produz energia necessria
para a sntese de molculas ou reaces desfavorveis quando no ocorrem devido ausncia de energia.
Relativamente regulao, controlada por mecanismos de feedback negativo e de modificaes
enzimticas. Isto acontece pois as enzimas s so activas quando esto fosforiladas.
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2006/2007
Captulo 5 Mecanismos genticos

1. Replicao semiconservativa do DNA
Na replicao da molcula de DNA, cada cadeia parental serve de modelo para a sntese de uma cadeia
filha que lhe complementar, processo que culmina com a obteno de duas molculas filhas idnticas ao
duplex inicial. Neste mecanismo de replicao, intervm um conjunto de factores proteicos que constituem
a maquinaria de replicao e que vo actuar ao longo de vrias fases deste complexo processo.
Enzimas envolvidas no processo

DNA polimerase enzima chave que catalisa a incorporao de desoxirribonuclesidos 5-trifosfato (dNTP)
na cadeia nascente de DNA. Nos procariontes, existem 3 tipos: as polimerases I e III so essenciais ao
processo de replicao, enquanto que a actividade da polimerase II est mais ligada ao processo de
reparao. Nos eucariontes, existem 5 tipos, mas apenas 2 so mais relevantes para o processo da
replicao do D N A. A polim erase inicia a cadeia continua e sintetiza os fragm entos de O kazaki e a
polim erase faz o elongam ento da cadeia contnua.
Helicase quebra as pontes de hidrognio entre bases complementares das 2 cadeias.
Protenas SSB (single stranded binding proteins) ligam-se cadeia de modo a que no se restabelea a
dupla hlice, enquanto as outras enzimas no esto ainda a actuar.
DNA primase sintetiza uma pequena molcula de RNA (primer).
DNA ligase liga os nucletidos de modo a formar-se uma cadeia.
Topoisomerases I e II evitam o super-enrolamento da cadeia, aps a actuao da helicase, cortando-a em
locais estratgicos. A topoisomerase II necessita de ATP para actuar.
Mecanismo geral de replicao

De um modo geral, o processo de replicao inicia-se a partir de uma origem de replicao
reconhecida por um complexo de reconhecimento da origem (ORC Origin Recognition Complex), que
aps associao com outras protenas, vai localizar nesse local dois complexos hexamricos de tipo helicase
que se vo mover em direces opostas na cadeia parental a partir da origem.
Estas enzimas desenrolam as duas cadeias que compem a dupla hlice, quebrando as ligaes de
hidrognio estabelecidas entre as bases azotadas complementares de cada cadeia.
s duas cadeias simples assim obtidas, associam-se protenas multimricas especficas que se vo
manter numa estrutura adequada ao seu reconhecimento pelo complexo de DNA polimerase, permitindo
que possam servir de modelo sntese das duas cadeias filhas que lhes sero complementares.
| Captulo 5 Mecanismos genticos
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Este conjunto de protenas e DNA, localizado na zona da origem de replicao, vai originar a
constituio de uma dupla forquilha de replicao, que se estende em direces opostas para os dois lados
da origem no caso mais comum da replicao bidireccional.
De modo a iniciar a sntese de cada cadeia filha, e devido impossibilidade de esta ser efectuada
pelas DNA polimerases, um novo complexo enzimtico denomiado primase ir sintetizar um fragmento de
RNA, o fragmento iniciador ou RNA iniciador,a partir da extrem idade 5de cada um a das novas cadeias a
sintetizar. Este fragmento iniciador tem como funo permitir a ligao cadeia nascente das enzimas que
constituem o com plexo da D N A polim erase,para que este contnue a sntese da cadeia filha na direco 5
para 3.
No entanto, devido ao antiparalelismo da cadeia de DNA parental, das duas cadeias filhas a
sintetizar, s um a poder ser feita de m odo contnuo na direco 5 para 3 a partir da regio da cadeia
principal imediatamente adjacente origem de replicao esta ser a cadeia avanada (cadeia contnua
ou leading).
A outra cadeia filha no poder ser sintetizada de forma contnua, pois estar condicionada pelo
facto da D N A polim erase ter um a nica direco de sntese (de 5 para 3). Assim , esta cadeia atrasada
(cadeia descontnua ou lagging) ir ser sintetizada na direco oposta ao avano da forquilha de replicao,
atravs da sntese e posterior ligao de mltiplos segmentos de DNA, todos iniciados por um pequeno
fragmento de RNA iniciador colocado pela primase os fragmentos de Okazaki.
O processo de juno de dois fragmentos de Okazaki implica a remoo do RNA iniciador existente
no fragm eto de O kazaki a partir da sua extrem idade 5 por um a enzim a do tipo RN Ase com actividade
exonuclesica 5-3.
Ao mesmo tempo, para preencher esse espao, so adicionados novos nucletidos na extremidade
3do fragm ento de D N A que lhe fica adjacente,com a ajuda de um a das D N A polim erases que constitue o
complexo de replicao.
Os dois fragmentos de DNA so finalmente ligados um ao outro pela DNA ligase, que estabelece a
ligao fosfodiester finalentre o grupo 3-OH do ltimo nucletido do primeiro fragmento de Okazaki e o
alfa-P da exterm idade 5do fragm ento de O kazakiadjacente que acabou de ser sintetizado.
De modo a aliviar a tenso de torso das cadeias durante o seu desenrolar pela helicase, enzimas
de tipo topoisomerases vo igualmente actuar neste processo. Estas enzimas associam-se com a dupla
cadeia parental a montante de cada uma das helicases e removem a tenso provocada pela toro da
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Captulo 5 Mecanismos genticos |
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cadeia dupla atravs de uma srie de cortes pontuais nas ligaes fosfodiester, reformadas de seguida pela
mesma enzima, que vo ocorrer durante o desenrolamento efectuado pela helicase.
Replicao dos telmeros / Funo da telomerase

A), B) A telomerase reconhece a cadeia simples deixada na
extrem idade 3 do telmer o aps a replicao e adiciona a esta
cadeia uma sequncia telomrica por transcrio reversa, utilizando
como modelo o RNA iniciador interno.
C) Por translocao, a telomerase reposiciona-se na nova
extrem idade 3da cadeia e recom ea o processo.
D) Aps mais uma etapa de transcrio reversa, foi colocado mais
um m otivo telom rico TTG G G G na extrem idade 3.
E) Utilizando a recm-sintetizada extrem idade 3 com o m odelo, a
prim ase vai sintetizar um RN A iniciador na direco 5 para 3, ao
qual se liga a DNA polimerase para iniciar a sntese de DNA e
preencher o fragmento em falta.
F) A DNA ligase une o fragmento de DNA sintetizado de novo
extrem idade 5 da cadeia preexistente. Aps a rem oo do RN A
iniciador,a extrem idade da cadeia 3do crom ossoma complexada
com protenas telomricas que vo promover a circularizao da
extremidade do cromossoma, de modo a estabiliz-la (G).
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Mecanismos de reparao de erros do DNA
Depurinao caso em que falta uma base na cadeia, criando-se portanto um local apurnico (caso
a base em falta seja uma purina), ou um local apirimidnico (caso a base em falta seja uma pirimidina). Tem
de haver quebra das ligaes fosfodiester entre nucletidos, preenchimento do espao vazio e novamente
ligao dos nucletidos. Para este processo, so ento necessrias as seguintes enzimas:
- Endonucleases
- DNA polimerase
- DNA ligase
Desaminao caso em que um uracilo est no lugar de uma citosina; hipoxantina em vez de
adenina ou xantina em vez de guanina. Neste processo intervm as seguintes enzimas:
- DNA glicosidases (remove o uracilo)
- Endonucleases
- DNA polimerase
- DNA ligase
2. Transcrio
A transcrio constitui o mecanismo universal da expresso dos genes, unidades de DNA que contm a
informao necessria especificao da sntese de todas as formas funcionais de RNA de cada clula.
Trata-se de um processo sequencial que se processa em 3 etapas:
Iniciao consiste no reconhecimento do stio do DNA genmico que ir ser copiado em RNA, e
condensao dos primeiros nucletidos constituintes das extrem idades 5P do RN A nascente.
Elongao consiste na polimerizao orientada dos nucletidos, reflectindo a sequncia do DNA
molde, e obedece regra da complementaridade estrutural das respectivas bases.
Terminao resulta da interrupo selectiva do processo de transcrio da cadeia molde do DNA,
delimitada pelo ltimo nucletido de cada gene activo, que corresponde portanto extremidade
3-OH da cadeia de RNA transcrito.
Existem zonas do DNA que so reconhecidas pela RNA polimerase e por protenas, como sendo o local
de incio da transcrio promotor. Este uma sequncia de nucletidos qual se ligam protenas que
informam a RNA polimerase que pode iniciar a sntese da molcula de RNA. Contm zonas consenso como
a TATA box que altamente conservada e que existe na maior parte dos genes, constituda por nucletidos
de adenina e timina (TATAAT).
Existe uma protena que reconhece o promotor a TBP. Esta vai ligar-se TATA box que se encontra 25
a 35 nucletidos acima do incio da cadeia e vo adicionar-se vrios factores de transcrio.
A RNA polimerase II tem uma sequncia de aminocidos terminal carboxlico que se designa CTD sinal
reconhecido por outras enzimas e que indica que a molcula sintetiza o mRNA. Depois da RNA polimerase II
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se ligar, necessrio que todos os factores de transcrio recebam a abertura da cadeia. Para isso
necessrio o TFIIH, que actua como uma cinase, fosforilando as protenas neste caso o terminal CTD.
Tipos de RNA
rRNA antes de passar para o citoplasma, associa-se a protenas e forma as unidades do
ribossoma.
mRNA RNA mensageiro, capaz de reconhecer o cdigo proteico.
tRNA ler a informao contida no mRNA.
snRNA relacionado com o proesso de splicing; reconhece zonas de RNA estranhas e remove-as.
snoRNA envolvido na degradao da molcula de rRNA sintetizado no nuclolo.
Tipos de RNA polimerases

RNA polimerase I responsvel pela sntese de cerca de 80% da totalidade do RNA celular, localizase no nuclolo, transcrevendo os genes dos RNA ribossomais, que conduzem produo dos rRNA 18S,
5.8S e 28S.
RNA polimerase II responsvel pela sntese de 2% do RNA celular, localiza-se no nucleoplasma, e
catalisa a sntese dos produtos primrios precursores dos mRNA, que do origem ao hnRNA nuclear.
RNA polimerase III responsvel pela sntese de cerca de 20% do RNA celular, est igualmente
localizada no nucleoplasma, e catalisa a sntese dos tRNA, snRNA e snoRNA.
3. Processamento do RNA heterogneo (hnRNA)
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3.1. Capping
N os eucariontes, a extrem idade 5 da m olcula , im ediatam ente aps a sua sntese, bloqueada
pela fixao ao nucletido 5 term inal da m olcula, de um resduo guanlico em posio invertida a
metilguanosina.
O capping ocorre ainda durante a fase de elongao das cadeias de RNA nascente. Esta estrutura,
designada cap, formada por adio do resduo G proveniente do dador GTP, formando uma ligao de
tipo pouco com um ,5-5trifosfato com o nuclesido trifosfato term inalda cadeia transcrita.
A presena desta estrutura 5 cap impede a degradao do mRNA e respectivos precursores
intranucleares pelas fosfatases ou pelas exonucleases, ao mesmo tempo que estimula a traduo dos
mRNA pelo aparelho de sntese proteica dos eucariotas, ao nvel do citoplasma.
A estrutura cap no s protege os mRNA eucariotas da degradao pelas nucleases, como tambm
intervm activamente na formao do complexo de iniciao da traduo.
Depois de as molculas de RNA nascente produzidas pela RNA polimerase II atingirem um

comprimento de 25 a 30 nucletidos, a 7-m etilguanosina e os outros com ponentes do 5 cap que se
encontram no m RN A eucaritico, so adicionados sua extrem idade 5. Este passo inicial do
processamento de RNA catalisado por um complexo enzimtico associado ao CTD fosforilado.
3.2. Splicing
Com apenas algumas excepes, a maior parte dos genes que codificam para as protenas nos
eucariotas superiores contm sequncias no codificantes, os intres, intercalados nas sequncias
codificantes, os exes.
O processo de eliminao dos intres durante a maturao dos mRNA designado splicing, e
consiste na exciso-reparao das cadeias dos respectivos produtos primrios da transcrio. O conjunto
dos precursores do mRNA nucleares, que incluem as formas que se encontrm nas diferentes fases de
maturao, constituem o RNA heterogneo nuclear (hnRNA). Este no se encontra livre no nucleoplasma,
mas sim associado a protenas, sob forma de partculas ribonucleoproteicas que, no citoplasma, contm os
mRNA maduros, aptos a ser traduzidos pelos ribossomas.
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Em unidades pequenas de transcrio, o fenmeno de splicing segue, normalmente, a

poliadenilao da extrem idade 3,enquanto que em m aiores unidades de transcrio,contendo um grande
nmero de exes, o splicing s se inicia quando a transcrio de todo o gene termina.
Splicing dos precursores dos mRNA

A eliminao das sequncias intrnicas presentes nos produtos
primrios da transcrio dos genes mRNA d-se mediante formao de
estruturas em ansa no RNA transcrito, atravs de um mecanismos de
transesterificao com form ao de um a ligao 2-5fosfodister entre
o resduo adenlico do stio de ligao do pr-mensageiro e o grupo
fosfato do resduo guanlico da extrem idade 5do intro.
Existem, no ncleo das clulas, pequenos RNA, os snRNA (small
nuclear RNA), que so constitudos por menos de 300 nucletidos, em
cuja composio predominam resduos urdlicos. Estes encontram-se
associados a protenas, formando partculas chamadas snRNP (small
nuclear ribonucleoproteins) s quais cabe um papel no processo de
eliminao dos intres da cadeia de RNA do produto primrio da
transcrio.
Nos eucariontes, a partcula U1-snRNP fixa-se ao stio da clivagem,
delim itado pela extrem idade 5 do intro, devido com plementar
estrutural com uma sequncia do U1RNA. O complexo U2-snRNP fixa-se
ao stio de ligao e ao nvel da sequncia de pirimidinas que se
encontram a m ontante do stio de clivagem , na extrem idade 3 do
intro, enquanto a partcula U5-snRNP reconhece o prprio stio de
clivagem em 3.
A ligao entre as protenas U1 e U2 leva aproximao das
extrem idades 5 e 3 do intro, facilitando a segunda reaco de
transesterificao necessria ligao entre os dois exes. Actuam em
seguida os complexos U4 e U6-snRNP associados numa partcula dotada
da capacidade de formar um complexo com o precursor do mRNA, de
grandes dimenses, o spliceossoma.
3.3.
Poliadenilao
Na maior parte dos eucariotas, d-se a adio de 200 a 300 resduos adenlics, que formam uma
cadeia de poli A na extrem idade 3 da m olcula. Esta reaco catalisada pela poli A polim erase que,
juntamente com a endonuclease, constitui um complxo que inclui ainda uma partcla ribonucleoproteica
contendo um pequeno RNA nuclear de composio rica em uridina, o U1RNA.
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Uma poli-A polimerase (PAP) conecta-se a um complexo

proteico antes de a clivagem ocorrer. Este facto para a
conexo da PAP liga a clivagem e a poliadenilao, para que
a extrem idade 3livre seja rapidam ente poliadenilada.
Seguidamente clivagem, a poliadenilao divide-se em

duas fases: em primeiro lugar, d-se a adio de 12 resduos
adenlicos de forma lenta e seguidamente ocorre a adio
dos restantes 200-250. Esta ltima fase requer uma ligao
de vrias cpias de PABPII (polyA-binding protein).
Esta protena tem a capacidade de ligar a cauda adenlia

mais curta inicialmente adicionda pela PAP, estimulando a
polimerizao de um novo conjunto de fragmentos
adenlicos. Para alm disso, a PABPII tambm responsvel
por sinalizar poli-A polimerase que pode finalizar a
polimerizao quando a cauda poli-A atinge um
comprimento de cerca de 250 nucletidos, ainda que o
mecanismo para controlar esse tamanho ainda no seja
conhecido.
4. Sntese do rRNA
As molculas de rRNA vo ser sintetizadas no nuclolo com excepo do gene que d origem fraco
5S, que existe no nucleoplasma. Existem vrias fraces de rRNA que no se associam s protenas, e que
vo dar origem s duas subunidades dos ribossomas.
A fraco 45S sintetizada pela enzima RNA polimerase I e a fraco 5S pela RNA polimerase III. A
fraco 45S vai ser degradada por outras pores de RNA no codificadas designadas snoRNA (small
nucleolar RNA), originando outras tres fraces de rRNA (5.85S, 18S, 28S).
A fraco 18S associa-se a protenas, e d origem subunidade menor do ribossoma, enquanto que as
fraces 5.85S e 28S do origem subunidade maior do ribossoma.
O componente fibrilar so as zonas do nuclolo que contm os RN As transcritos e a com ponente
granular composta pelas zonas que contm os RNAs associados a protenas. A lmina nuclear
constituda por filamentos intermedirios que fazem parte do citosqueleto e que so altamente
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organizados, existindo cromatina associada parte interna da membrana nuclear (heterocromatina

protena em forma condensada, sem genes activos).
5. Traduo
Formao do aminoacil tRNA
Esta fase o primeiro passo da sntese proteica e s ocorre na presena da aminoacil tRNA sintetase,
sendo que cada aminocido tem a sua. Os aminocidos de grandes dimenses penetram nas bolsas
enquanto que os mais pequenos so inicialmente activados pelas AMP (adenina monofosfato).
A cada codo do mRNA correspnde um anticodo dum tRNA que transporta um aminocido. As
molculas de tRNA podem servir de transportadores de aminocidos, estabelecendo uma ligao covalente
entre o grupo hidroxilo da ribose ligada adenina no extrem idade 3e o grupo carboxilo do am inocido a
ser transportado.
A reaco catalisada pelas enzimas sintetase de aminoacil-tRNA utiliza ATP e permite a esterificao
dos grupos O H em posio 3ou 2.A reaco ocorre em duas etapas:prim eiro a form ao dum am inoaciladenilato com libertao de pirofosfato e depois a reaco com o tRNA para a formao do aminoaciltRNA:
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O aminocido activado devido ligao do AMP ao seu grupo carboxlico formando-se um

aminocido adenilado. Este AMP proveniente da hidrlise do ATP j referido.
O aminocido adenilado transferido para uma molcula de tRNA havendo uma ligao do
grupo carboxlico do am inocido e do grupo hidroxilo do acar 3 do tRN A, sendo que com
esta ligao ster, fica formado o aminoacil tRNA.
1 - Iniciao
A traduo inicia-se quando h um aminoacil tRNA que se liga ao local P da subunidade pequena do
ribossoma, em vez de se ligar ao local A. Assim, com esta ligao, este aminoacil tRNA tem um codo
complementar de iniciao AUG. A ligao do aminoacil tRNA ao local P, bem como a ligao da
subunidade pequena ao mRNA, deve-se participao de factores proteicos ou factores de iniciao (eIF,
eIF1, eIF2 e eIF3).
O eIF2 vai, ento, ligar-se molcula de tRNA, fazendo com que esta molcula se possa ligar ao local P
do ribossoma. No entanto, esta molcula pode sofrer alteraes e deixa de se poder ligar ao tRNA, sendo
necessrios novos mecanismos de regulao.
O eIF2 na forma inactiva tem ligado a si GDP e na forma activa, troca para GTP. Para isso, necessrio
que o eIF2 sofra fosforilao atravs de cinases.
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As duas subunidades do ribossoma esto separadas no citosol. A pequena est ligada ao eIF3 e a grande
est ligada ao eIF6, sendo que quando se encontram neste forma, perdem a capacidade de se unir e
impedem o decorrer da traduo. Por sua vez, o eIF2 que permanece ligado ao GTP, pode associar-se ao
aminoacil tRNA e para se conseguir ligar ao local P do ribossoma, tem de estar aqui associada a subunidade
menor, ligando-se ao eIF1A, e formando um complexo de pr-iniciao (tem esta designao porque ainda
no comeou a sntese).
Depois de a molcula ter o eIF4, o complexo de iniciao liga-se, iniciando a sntese da molcula de RNA.
No entanto, se o tRNA est ligado a outras moleculas, caso haja um novo aminoacil tRNA no vai ter
capacidade de se ligar.
Quando se forma o complexo de iniciao, liga-se m olcula de RN A na extrem idade 5 e segue at
encontrar o codo AUG. Quando o encontra, d-se o estabelecimento de pontes de hidrognio entre o
codo e o anticodo presente a nvel do RNA. Quando h pontes de hidrognio, a subunidade maior pode
ento ligar-se, mas inicialmente o GTP hidrolisa-se e o eIF2 deixa de ter capacidade de ligao e todos os
factores ligados at ao momento, desligam-se tambm.
A partir deste momento, a subunidade maior do ribossoma j tem a capacidade de se associar menor.
No entanto, como tem ligado a si o eIF6, impede esta conexo, necessitando de um novo factor activo com
uma molcula de GTP que permita a ligao do eIF6 subunidade menor, o IF5. Assim que a ligao ocorre,
os factores eIF5 e eIF libertam-se, juntamente com a GTP, permitindo que finalmente se inicie a sntese do
peptdeo.
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2 - Elongao
Factores de Elongao permitem que a leitura codo-anticodo seja correcta.

Esta fase requer factores de elongao que se ligam a uma molcula de ATP e ao aminoacil tRNA, sendo
que no caso dos eucariotas, este factor o EF1, que para ser activo tem de ter uma molcula de GTP.
Em primeiro lugar, ocorre o
emparelhamento entre o anticodo do
tRNA e o respectivo codo do mRNA no
local A, atravs de pontes de
hidrognio, bem como a hidrlise do
GTP (em GDP + Pi). Esta hidrlise
revela-se fundamental para que a
leitura seja correcta existindo, enquanto
isso, um tempo de espera.
Durante esse tempo de espera,
verifica-se se o aminoacil tRNA o
correcto ou no:
Se for incorrecto, o nmero de
ligaes que se subemtem entre o
codo e o anticodo so menores e
quando ocorre a hidrlise do GTP,
liberta-se o factor EF1 e o aminoacil
tRNA porque a ligao fraca.
Se for correcto, h separao do
complexo (GDP + EF1) do local A, sendo
libertados e o aminoacil tRNA mantmse estvel neste local.
A ligao peptdica existente entre o
aminocido do local A e do local P sintetizada e catalizada pela enzima peptidiltransferase. Para que o
local A fique livre, actua um segundo factor de elongao, o EF2. Este factor permite a translocao das
molculas de tRNA para outros locais do ribossoma e liga-se nas proximidades do local A, fazendo com que
o ribossoma se desloque trs nucletidos.
Assim, ocorre a transferncia do peptidil tRNA do local A para o local P, e de seguida para o local E,
acompanhada da sada do tRNA que se encontrava no local P para o citosol. Quando ocorre este processo,
o ribossoma altera a sua configurao e as suas ligaes iniciais so modificadas.
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3 - Terminao
Factores de Terminao/Libertao quando um

codo stop encontrado, fazem com que o
polipeptdeo seja libertado e as clulas ribossmicas se
dissociem.
Quando no mRNA surgem codes de terminao
codes stop (UAA, UAG, UGA) para os quais no h
nenhum anticodo do tRNA correspondente, o
crescimento da cadeia peridica termina. Estes codes
vo ento ser reconhecidos por factores de
terminao/libertao, existentes no citosol, ligando-se
directamente a eles.
Esta ligao altera a actividade da enzima
peptidiltransferase, levando adio de uma molcula
de H2O, em vez de um grupo amina de um aminocido
ao peptidil tRNA que se encontra no local P (perda no
prprio RNA). Como consequncia desta adio, h
libertao da cadeia peptdica para o citosol e
separao das duas subunidades dos ribossomas bem
como do mRNA.
Polissomas / Poliribossomas - no caso de as protenas serem sintetizadas no citosol, os poliribossomas

sintetizam as vrias molculas de protenas, em que cada um dos ribossomas d origem a uma molcula
proteica.
6. RNA monocistrnico e policistrnico

Nos seres eucariticos, existe o CAP (metilguanosina) que indica o primeiro codo a ser transcrito
(sendo que o primeiro aminocido a metionina). Depois existe o mRNA que vai originar uma nica
protena, logo o RNA monocistrnico.
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Nos seres procariticos, como no possuem o fragmento CAP, o que lhes indica onde se inicia a
transcrio uma sequncia de nucletidos junto extrem idade 5. N a m olcula de m RN A transcrita,
acontece que a molcula tem vrias sequncias codificadas, podendo dar origem a vrias protenas, logo o
mRNA procaritico policistrnico.
7. Sntese e monitorizao das protenas

Transcrio Processamento Formao de mRNA Passagem do mRNA para o citosol Vrios destinos
Depois de sintetizadas, as protenas podem ter os seguintes destinos:
Podem adquirir a sua conformao nativa;
Podem necessitar de ajuda de outras molculas para adquirirem a conformao adequada;
Podem sofrer degradao;
Podem ser agregadas.
8. Chaperes Moleculares
Enquanto a cadeia polipeptdica se encontra em crescimento, no pode enrolar para no adquirir
configurao diferente do normal. Para que isto seja possvel, ocorre a ligao de um conjunto de protenas
cadeia em crescimento - os chaperes moleculares impedindo:
Que esta adquira uma m conformao;
A precipitao das cadeias polipeptdicas (agregao de protenas).
Existem dois tipos de chaperes moleculares, o HSP70 e o HSP60, e foram descobertos quando as
clulas estavam sujeitas a aquecimento, verificando-se que havia protenas em excesso.
Quando a protena est 100% sintetizada, os chaperes libertam-se e vai dar-se o estabelecimento de
ligaes favorecendo a conformao normal da protena.
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9. Ubiquitinao
A ubiquitinao um processo de degradao de protenas que permite remover os chaperes
moleculares. Normalmente, as ubiquitinas existem em toda as clulas, havendo enzimas que permitem que
elas se liguem protena que vai ser degradada, formando depois uma cadeia de ubiquitinas ligada
protena.
As ubiquitinas ligam-se protena e sinalizam ao proteossoma (que reconhece a protena com a cadeia
de ubiquitinas) que existe uma molcula que tem de sofrer degradao. Esta molcula envia o sinal e ,
mais tarde, reconhecida pelo nucleossoma.
10. Diferenas entre Eucariticos e Procariticos

Eucariticas
Procariticas
Genes com zonas codificveis e zonas no codificveis.
Todos os genes so codificveis (contm exes).
Os genes so transcritos para uma molcula que vai

sofrer processamento e de seguida passa para o citosol.
Os genes so transcritos no citoplasma (e no no ncleo)

e a molcula no vai sofrer processamento.
O primeiro codo a ser transcrito indicado pela

m etilguanosina que existe na extrem idade 5, sendo o
primeiro AUG que est mais prximo desta
extremidade que vai indicar qual o codo a ser
traduzido.
O primeiro codo a ser transcrito indicado por uma

sequncia de seis nucletidos (logo indica que nesse
local que se vai iniciar tambm o processo de traduo).
O primeiro aminocido a metionina.
O primeiro aminocido : n-formil-metionin (derivado).
O processo de transcrio e de traduo do-se em

diferentes locais e a diferentes tempos.
O processo de transcrio d-se no mesmo local que o

processo de traduo.
O gene vai ser transcrito, processado e traduzido,

dando origem a um nico tipo de protenas RNA
D-se vrias vezes o incio do processo de traduo,

dando origem a vrios tipos de protenas RNA
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monocistrnico.
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policistrnico.
Captulo 6 Biomembranas
As membranas biolgicas so, sob o ponto de vista estrutural, bicamadas de lpidos anfipticos onde se
intercalam, aqui e alm, molculas proteicas. So estruturas termodinamicamente estveis, cuja
manuteno no requer hidrlise de ATP.
As membranas biolgicas permitem a separao do contedo celular do espao extracelular, j que a
natureza hidrofbica do interior da camada lipdica impede a passagem de gua. A troca metablica de
molculas solveis em gua entre a clula e o espao extracelular est condicionada pela formao de
canais transmembranares resultantes da associao dinmica de protenas que se encontram intercaladas
na bicamada fosfolipdica.
Nas clulas procariticas, as membranas biolgicas participam apenas na definio do limite da clula.
Nas clulas eucariticas, as membranas exercem tambm funo de invlucro, tanto do ncleo como de
organelos intracelulares. Assim, nestas clulas, as membranas biolgicas tm um papel fundamental, na
organizao da topografia do seu meio interno, separando-o em vrios compartimentos, sendo dois
principais: o nuclear e o citoplasmtico. As membranas subdividem ainda o citoplasma em dois espaos:
um que contnuo, designado por matriz citoplasmtica ou citosol, que fica entre a membrana plasmtica
e as membranas do ncleo e dos organelos citoplasmticos, e outro espao, que descontnuo, de
topografia exoplasmtica, constitudo pelo somatrio dos espaos contidos nos organelos ou vesculas que
so limitadas por membrana.
1. Estrutura geral das membranas biolgicas

Apesar de serem componentes da clula que esto sujeitos a grande especializao, todas as
membranas biolgicas apresentam uma estrutura geral que lhes comum. O elemento fundamental a
bicamada de fosfolpidos, todos de natureza anfiptica, os quais fazem com que a membrana seja
impermevel gua e a molculas solveis em meio aquoso.
A maioria das funes biolgicas das membranas so mediadas pelas suas protenas, as quais podem
atravessar inteiramente a espessura da bicamada lipdica ou estarem associadas apenas a um dos seus
folhetos. Por exemplo, na membrana exterior da clula, as protenas servem de receptores moleculares,
transmitindo informao do meio extracelular para o interior da clula, assim como formam junes
intercelulares, catalisam reaces qumicas ou ligam-se a componentes do citosqueleto.
As duas principais caractersticas das membranas biolgicas so:
Fluidez traduz-se pelo marcado movimento lateral a que os fosfolpidos e as protenas esto
sujeitos ao longo do plano de cada um dos folhetos da bicamada.
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Captulo 6 Biomembranas |
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Assimetria expressa-se pela diferente composio molecular observada nas duas metades da
membrana: os fosfolpidos e as protenas no se encontram distribudos de forma equivalente nos
dois folhetos da membrana, estando os glicolpidos presentes apenas no folheto exoplasmtico da
bicamada fosfolpidica.
2. Os lpidos da membrana
Mobilidade - O movimento lateral dos lpidos faz-se dentro de cada um dos folhetos da bicamada,
sendo raras as permutas destas molculas entre os dois folhetos (flip-flop) devido barreira hidrofbica
que os separa, o que requer aco enzimtica e consumo de energia.
A fluidez da bicamada depende da natureza qumica dos seus lpidos. Assim, um incremento de
molculas de colesterol diminui a fluidez da bicamada fosfolipdica, devido interaco destas molculas
com as regies polares dos fosfolpidos. De igual modo, a maior concentrao de fosfolpidos saturados
encontrada no folheto externo da membrana torna este folheto menos fluido do que o folheto interno.
Assimetria A desigual composio qumica dos fosfolpidos nos dois folhetos da bicamada implica
a natureza assimtrica da membrana. Os dois folhetos fosfolipdicos apresentam diferenas tambm de
carga elctrica, sendo o folheto citoplasmtico o de maior carga negativa. As protenas citoslicas ligam-se
a determinados grupos polares das molculas lipdicas, atravs de cinases, e os grupos polares das
molculas lipdicas sofrem modificao atravs da fosfolipase C (fosfatidilinositol). No entanto, a assimetria
no regra universal para todas as molculas da membrana, j que as molculas de colesterol se
encontram na maioria das clulas dos mamferos, em nmero semelhante nos dois folhetos da membrana.
| Captulo 6 Biomembranas
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2006/2007
2.1. Fosfolpidos
Os fosfolpidos so as molculas lpidicas que se encontram em maior abundncia nas membranas
biolgicas. Como molculas anfipticas que so, os fosfolpidos so constitudos por duas extremidades que
reagem diferentemente presena de gua: uma hidrofbica ou polar e outra hidroflica ou apolar, sendo
esta ltima constituda por duas caudas de cidos gordos. Em presena de gua, os fosfolpidos anfipticos
orientam-se de modo a evitarem o contacto das suas extremidades hidrofbicas com molculas de gua.
Por esta razo se organizam espontaneamente em pequenas formaes esfricas as micelas ou,
talcomo observado, nas membranas biolgicas, em bicamadas, com as extremidades hidrofbicas dos
fosfolpidos orientadas face a face, e para o interior da membrana. Cria-se assim um espao interior
bicamada fosfolipdica, que hidrofbico e se furta ao contacto com a gua.
Da composio fosfolipdica das membranas das clulas eucariticas destacam-se, em termos
quantitativos, quatro molculas: fosfatidilcolina, esfingomielina, fosfatidilserian e fosfatidiletanolamina. O
nico destes fosfolpidos que apresenta carga negativa a fosfatidilserina, os outros trs fosfolpidos no
apresentam carga a pH fisiolgico. No entanto, os fosfolpidos que se encontramem pequena concentrao
na membrana plasmtica podem ter uma grande relevncia na fisiologia da clula. o caso dos fosfolpidos
de inositol, que so elementos cruciais em mecanismos de transmisso de sinal para o interior da clula.
2.2.
Colesterol
Nas membranas da maioria das culas eucariticas, o

colesterol , a seguir aos fosfolpidos, a molcula lipdica que se
apresenta em maior abundncia. Em particular nas membranas de
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2006/2007
clulas que esto sujeitas a alteraes marcadas da sua forma, a presena de molculas de colesterol
essencial para que no ocorram roturas na bicamada fosfolipdica.
As molculas de colesterol tm tambm maior facilidade de saltarem entre os dois folhetos da
membrana (movimento de flip-flop) do que os fosfolipdos. A sua presena refora a impermeabilidade da
bicamada gua, diminui a fluidez da membrana e tambm a temperatura a que se regista a transio de
fase. As membranas de clulas procariticas so totalmente desprovidas de molculas de colesterol.
2.3.
Glicolpidos
Os glicolpidos encontram-se apenas no folheto exoplasmtico da membrana exterior das cluals

eucariticas. Ao contrrio dos fosfolpidos e do colesterol, os glicolpidos no tm a mnima capacidade de
fazer o movimento de flip-flop entre os dois folhetos da membrana.
Assim, estas molculas podem actuar como receptores especficos de molculas presentes fora da
clula, podendo tambm ligar-se a componentes da matriz extracelular.
2.4.
Rafts lipdicos
A membrana biolgica no toda ela de carcter homogneo,

existindo determinadas zonas onde se encontra uma maior
concentrao de algum tipo de molculas, que exercem a sua funo
especfica. Com isto, descobriu-se que existem microdomnios ao longo
das membranas, onde ocorrem alguns procesos relacionados com a
membrana.
Uma destas estruturas constituda pelos rafts lipdicos que so zonas mais espessas,
especializadas da membrana, ricas em esfingolpidos, colesterol e protenas. Parecem estar envolvidos em
mecanismos de adeso celular, sendo que as cadeias hidrocarbonadas dos esfingolpidos de uma
monocamada interagem com os esfingolpidos da outra monocamada comunicando, assim, entre si.
3. As protenas da membrana
A massa de uma protena da membrana de tamanho mdio 40 a 60 vezes superior massa de um
fosfolpido. Na maioria das membranas celulares, as protenas contribuem para cerca de metade da sua
m assa total,o que perm ite concluir que as protenas m em branares esto com o que dissolvidas num m ar
de pequenas molculas lipdicas que, em nmero, lhes so dezenas de vezes superiores.
Boa parte das protenas membranares, particularmente as que se expressam em espaos
exoplasmticos, contm resduos sacardeos e so, portanto, glicoprotenas. O processo de glicosilao das
protenas (e dos glicolpidos) da membrana faz-se durante o seu trfego intracelular e termina quando
estas molculas passam pelo complexo de Golgi. Tal como as molculas lipdicas da membrana, as
protenas esto sujeitas a movimentos de rotao e de deslocamento lateral e, tal como acontece com os
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glicolpidos, no lhes permitido movimento de flip-flop entre os dois folhetos da bicamada. Assim, os
movimentos de lateralidade das protenas na membrana podem ser medidos com exactido, aps
conjugao de ligando fluorescente protena.
3.1. Protenas integrais e perifricas

A identificao de partculas presentes nas preparaes de membrana sujeitas a criofactura
contriburam para a criao do conceito de protena integral e perifrica.
Protenas integrais (1, 2, 3, 4) atravessam o plano hidrofbico da membrana e so observadas nas

faces de fractura.
1 e 2 Protenas transmembranares
3 Protena ligada a um cido gordo (sintetizada no citosol)
4 Ligada ao glicosilfosfatidilinositol (sintetizada no retculo endoplasmtico)
Protenas perifricas (5, 6) no tm a capacidade de se integrar na membrana e so observadas
nas superfcies de membranas intactas.
Por atravessarem a bicamada fosfolipdica, as protenas integrais contm, necessairamente,
segmentos hidrofbicos na sua molcula e, por isso, so de purificao mais difcil do que as protenas
perifricas.
O seu isolamento requer ruptura da bicamada fosfolipdica, o que pode ser obtido tratando
preparaes de membrana com detergentes (Triton ou SDS), os quais, devido sua natureza anfiptica, se
ligam s regies hidrofbicas das protenas integrais, separando as extremidades no polares dos
fosfolpidos circundantes e formando micelas na gua.
A purificao das protenas perifricas mais fcil: basta tratar as preparaes da membrana com
solues de salinidade elevada, no sendo, portanto, requerida disrupo prvia da bicamada fosfolipdica.
NOTA: Ora dentro das protenas transmembranares consoante a funo dessas protenas das membranas,
elas podem obter ou apresentar estruturas de elementos diferentes. As protenas transmembranares,
portanto aquelas que atravessam totalmente a membrana podem ser protenas transportadoras:
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2006/2007
Ou transportam molculas de um lado para o outro da membrana, apresentando uma estrutura em

hlice que atravessa a camada lipdica;
Ou esto envolvidas no transporte atravs da formao de canais, apresentando uma estrutura em
camadas ex.: porinas (aparecem na membrana externa das mitocndrias e bactrias,
permitindo a passagem de molculas sem alterao da sua conformao, no envolvendo
dispndio de energia).
3.2.
Estudo das protenas da membrana
A membrana que apresenta um estudo mais avanado a dos eritrcitos, na medida em que:
Existem em grande quantidade (permitindo obter membranas puras que so depois dissolvidas
pelo SDS);
So anucleados;
No tm organelos;
Os eritrcitos maduros no tm ncleo, no tem capacidade de sintetizar, mas apresentam
mecanismos e enzimas que conseguem remover os produtos que so txicos para a clula. A forma
anterior dos eritrcitos a dos reticlcitos, onde se consegue observar RNA.
Inicialmente, os eritrcitos so conduzidos plasmlise atravs da insero numa soluo

hipotnica, obtendo-se membranas puras que sero sujeitas a electroforese em gel de poliacrilamida (onde
as protenas so separadas quanto sua massa). Os tipos de protenas encontrados so os seguintes:
Espectrina
Protena mais abundante nos eritrcitos humanos;
Possui cadeias e hlice (protena fibrosa) que depois se unem em determinados
pontos, formando uma rede de filamentos proteicos que constituem o citosqueleto (responsvel
pela forma das clulas);
Formada por dmeros que se unem atravs da actina e da topomiosina formando
tetrmeros;
Confere uma forma bicncava aos eritrcitos
A sua ligao com a banda 3 feita por aco da anquirina, permitindo a conexo
membrana.
Banda 3
Protena transmembranar que atravessa vrias vezes a membrana;
Protena glicosilada, mais negativa que a glicoforina;
Protena transportadora, responsvel pela deslocao do CO2 nos pulmes.
um canal inico que permite o transporte de CO2 sob a forma de HCO3- que tem carga
negativa. Por isso, este trocado pelo io Cl- carregado negativamente, para que a clula no fique
electricamente neutra.
Surge associada anquirina.
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Glicoforina
No tem funo cientificamente definida;
Protena que atravessa uma nica vez a membrana;
Protena altamente glicosilada;
Apresenta um peso molecular semelhante ao da Banda 3.
Banda 4.1
Liga a glicoforina actina;
Responsvel pela ligao membrana.
Actina
Responsvel pela ligao membrana.
Anquirina
Liga a espectrina membrana, ligando-se banda 3.
3.3.
Mobilidade das protenas ao longo da membrana
1) Recolha de uma clula de animal e de uma clula humana, e

marcao de ambas com fluorocromos, com o objecto de obter
uma boa visualizao ao microscpio.
2) Fuso das duas clulas num meio de substncias que
permitem esta reaco a clula que resulta da fuso designa-se
por heterocrio.
3) Marcao da membrana proteica do animal com
fluorocromos verdes e da membrana proteica do ser humano
com fluorocromos vermelhos, sendo que se encontram de lados
opostos do heterocrio.
4) Incubao do heterocrio a 37C durante 40 minutos,
fazendo com que as protenas das duas clulas sejam misturadas
e sejam encontrados fluorocromos dos dois tipos espalhados por
toda a membrana.
58
3.4.
2006/2007
Restrio da mobilidade das protenas
A mobilidade das protenas no permitida ao longo de toda a membrana nas culas epiteliais e
nos espermatozides.
No caso das clulas epiteliais, acontece que existem, na zona apical, junes celulares designadas
por tight junctions que fazem com que as protenas de parte apical no se movimentam para a parte basal
e vice-versa, pois so clulas polarizadas. Assim sendo, a funo das membranas nesta zona tem de ser
diferente das membranas da outra parte, sendo consideradas protenas especficas.
4. Os acares da membrana
Os acares que podem ser encontrados na membrana so:
Glicolpidos associados a lpidos
Glicoprotenas associados a protenas
Proteoglicanos existem no espao intracelular e so constitudos por uma parte de acar com
caractersticas especiais e por outra parte proteica.
As protenas e os lpidos podem sofrer glicosilao s em dois locais da clula: no retculo
endoplasmtico ou no complexo de Golgi. Da que s as protenas que vo ser sintetizadas no retculo que
podem sofrer glicosilao, porque de seguida vo para o complexo de Golgi onde podem:
Sofrer multiplicao da cadeia oligossacardica, que foi adicionada s clulas no retculo;
Sofrer outra glicosilao.
Ora as protenas que esto associadas ou sintetizadas no retculo vo ser transportadas para o
complexo de Golgi atravs de vesculas e deste vo ser transportadas para a membrana ou para o exterior
da clula, por vesculas. A vescula funde-se com a membrana e o seu contedo passa para o exterior.
Para alm disto, os acares da membrana encontram-se no lado no citoslico da membrana,
constituindo o glicoclice. Na sua maior parte, estes acares so importantes no reconhecimento celular,
como por exemplo quando os leuccitos atravessam os vasos sanguneos porque existem clulas que
expressam determinados acares que vo ser reconhecidos por protenas na outra clula e vo permitir
que as clulas comuniquem e atravessem a parede do capilar.
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5. Transporte atravs da membrana
Transporte passivo as molculas passam a favor do gradiente de concentrao atravs de determinadas

protenas (transportadoras ou canais), num processo espontneo e sem qualquer gasto de energia.
Transporte activo as molculas so transportadas contra o seu gradiente de concentrao.
Difuso simples as molculas passam a favor do gradiente de concentrao e como so lipdicas ou
polares no carregadas, de pequenas dimenses, conseguem atravessar determinadas membranas. No
entanto, ocorre mais lentamente que o transporte passivo.
5.1.
Protenas envolvidas no transporte de molculas
Bombas energticas de ATP protenas que transportam a molcula contra o gradiente, com gasto de
energia (transporte activo) GTPases.
Protenas canais conforme o canal est aberto ou fechado, necessita de um estmulo para permitir a
passagem das molculas, so de dois tipos:
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2006/2007
Pricas esto sempre abertas e o movimento a favor do gradiente de concentrao (permitem a

passagem do potssio para dentro e para fora da clula).
Canais inicos esto abertos ou fechados consoante as necessidades da clula, necessitando
estas de estmulos para abrir (ocorrem alteraes da voltagem, ligao a um ligando e stress
mecnico).
Protenas transportadoras ligam-se ao soluto a transportar, alteram a conformao e deixam-nas
passar, atravs de vrios processos. A molcula transportada a favor do gradiente fornece energia para
o transporte daquela que transportada contra.
Uniporte transporte de solutos de um lado para o outro da membrana de forma simples, a favor
do gradiente de concentrao e num mecanismo de difuso facilitada.
Simporte transporte de molculas contra o gradiente de concentrao num mecanismo de
transporte activo, em que a molcula a transportar e o io so transportados no mesmo sentido,
sendo um transportado a favor do gradiente e o outro contra (soluto).
Antiporte transporte de molculas tambm contra o gradiente de concentrao, em que a
molcula e o io so transportados para lados opostos da clula, sendo um a favor do gradiente e o
outro contra.
5.2. Transporte da glicose

A glicose transportada atravs das membranas ainda que seja uma molcula polar e incapaz de se
difundir nas membranas. Desta forma, pode atravess-las por transporte activo ou passivo.
Transporte passivo
Este transporte, baseado na difuso facilitada, responsvel pela passagem da glicose das clulas
epiteliais para o sangue. O transporte da glicose ocorre a favor do gradiente de concentrao e atravs de
transportadores da membrana, designados GLUT.
Quando a glicose se liga ao transportador, a configurao deste vai alterar-se e a glicose vai ser exposta
do outro lado da membrana, no havendo quaisquer gastos de energia.
61
2006/2007
Transporte activo
Este transporte, no se d conjuntamente com a hidrlise de ATP. responsvel pela passagem da
glicose do lmen intestinal at s clulas epiteliais contra o gradiente de concentrao. A energia
proveniente provm do cotransporte de Na+, que se encontra muito concentrado na zona extracelular e ao
entrar na clula a favor do gradiente gera energia suficiente para transportar a glicose tambm para o
interior da clula, mas contra o gradiente.
O transportador apresenta dois locais de ligao: um para o Na+ e outro para a glicose. Este transporte
activo est dependente do transporte activo primrio (bomba de Na+ e K+), que mantm uma concentrao
de Na+ baixa na zona intracelular e alta na zona extracelular, propcia para que ocorra o transporte. Caso
no existem ies Na+ no exterior da clula, no vai haver o transporte de glicose contra o gradiente de
concentrao.
5.3. Bomba de sdio e potssio (ATPases tipo P)

A bomba de sdio e potssio um complexo enzimtico que permite o transporte de Na+ de dentro
para fora da clula e de K+ de fora para dentro da clula. Funciona como uma bomba electrognica, j que
induz um dado potencial elctrico ao sairem 3 caties e entrarem apenas 2.
Para que o mecanismo ocorra so, ento, necessrios: Na+ e ATP no citosol e K+ no exterior da
clula. A protena transportadora tem um local de ligao para o Na+ e outro para o K+. Por cada ATP
hidrolisado so transportados 3 ies Na+ para o exterior da clula e 2 ies K+ para o interior, logo o lado
interno fica mais negativo.
O transportador expe a zona de ligao ao Na+ para o interior da clula e este io liga-se a ele.
Simultaneamente, ocorre uma hidrlise de uma molcula de ATP a ADP + Pi. O Pi originado vai provocar a
fosforilao do transportador, o que altera a sua conformao. Desta forma, ocorre a libertao do Na+ na
parte exterior da clula e a zona de ligao do K+ a exposta.
D-se a ligao de dois ies K+ a esta zona e a desfosforilao do transportador, que sofre uma nova
alterao na sua conformao, readquirindo a configurao inicial, ou seja, expe novamente os locais de
ligao para o Na+ no interior e para o K+ no exterior, perdendo afinidade e libertando os ies K+ para o
interior da clula.
Este tipo de transporte para K+ e Na+ permite manter a presso osmtica e, consequentemente, o
volume da clula, regulando a concentrao de solutos dentro e fora da clula. Os ies K + que entram na
clula atravs da bomba saem constantemente dessa atravs de canais inicos, tornando o fluxo de Na+ e
62
2006/2007
K+ num fluxo contnuo. Para alm disso, a clula recorre ao K+ para neutralizar as cargas negativas das
molculas orgnicas. O Na+ sai juntamente com molculas de gua para compensar a hipertonia causada
pelos solutos orgnicos que tendem a reter a gua no interior da clula.
5.4. Bomba de clcio (ATPases tipo P)

A bomba de clcio uma bomba que ocorre no retculo sarcoplsmico (existente nas clulas
musculares) e em que h hidrlise de ATP. O Ca2+ extremamente importante nas vias de sinalizao
celular em baixas concentraes no citosol, sendo que por mais pequenas que sejam as percentagens deste
io, desencadeia-se sempre um determinado conjunto de reaces.
O Ca2+ vai ser transportado contra o gradiente de concentrao, sendo removido do citosol para o
retculo sarcoplsmico. A bomba apresenta dois locais de alta afinidade para o Ca2+ e um local de ligao
para o ATP. Ocorre hidrlise do ATP em ADP + Pi, alterando-se a conformao do complexo e fazendo com
que os locais de baixa afinidade se orientem para o interior da clula e com que os ies Ca 2+ sejam
libertados para o exterior. De seguida, ocorre a desfosforilao do complexo, que volta a configurao
inicial onde os locais de alta afinidade se encontram expostos para o citosol.
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2006/2007
5.5. Transporte de molculas atravs da dupla membrana das bactrias

(ATPases tipo ABC)
Na membrana externa existem protenas canais
que permitem a passagem das molculas a favor do
seu gradiente de concentrao para o espao
intermembranar. Aqui, as protenas periplsmicas
reconhecem as molculas de soluto, alteram a sua
prpria conformao e ligam-se s protenas
transportadoras situadas na membrana interna.
Como se tratam de ATPases do tipo ABC, o
transpore tem de ser feito contra o gradiente de
concentrao, havendo gasto de energia. Assim, a
molcula vai atravessar a membrana interna e passar
para o interior da clula. Depois de a protena
transportadora libertar o soluto, separa tambm a
protena periplsmica da sua constituio, que fica livre
para receber uma nova molcula proveniente do
exterior.
Nos seres eucariotas, as clulas com este tipo de bombas, quando ligadas a determinados
medicamentos, tm a capacidade de permitir a resistncia a drogas devido ao transporte, do interior para
o exterior, das molculas de medicamentos recebidas.
5.6. Tipos de ATPases de transporte

Tipo P relacionadas com o transporte dos
ies Na+, K+, Ca2+ e H+, sendo que para alm
da hidrlise de ATP, sofrem fosforilao.
Tipo F transporte do io H+ que ocorre na
membrana das mitocndrias e dos
cloroplastos, sintetiza e hidrolisa ATP
consoante as necessidades da clula.
Tipo V transporte de ies H+ para o interior dos endossomas (vesculas celulares que tm a capacidade de
ao sofrerem maturao se transformarem em lisossomas importantes para a digesto celular e em enzimas
que vo permitir a degradao de todo o tipo de molculas em pH = 5). Caso ocorra uma mutao nestas
bombas, no h transporte de H+ para os lisossomas, no se atinge um pH = 5 e as enzimas no efectuam a
degradao das molculas que l chegam.
Tipo ABC transporte de ies e molculas pequenas, existindo essencialmente em bactrias e algumas
clulas de mamferos.
64
2006/2007
Captulo 7 Organizao interna das clulas
1. Destino das protenas

Todas as protenas, ao apresentarem-se como sendo as principais molculas responsveis pelas funes
da clula, excepto as das mitocndrias e dos cloroplastos, iniciam a sua sntese no citosol. Mais tarde, ou se
mantm no citosol ou passam para o retculo endoplasmtico.
Existem determinados sinais que conduzem as protenas para o seu
destino final:
Peptdeos sinais sequncias de aminocidos no terminal
amina ou carboxlico que indicam o destino das protenas, sendo
importantes para o funcionamento da molcula. Apresentam
diferentes caractersticas consoante o organelo de destino da
protena:
Mitocndrias aminocidos carregados positivamente
alternados com outros hidrofbicos.
Peroxissomas sequncia de aminocidos no terminal
carboxlico.
Retculo Endoplasmtico sequncia de aminocidos no
terminal amina ou noutras zonas da molcula.
Ncleo sequncia de aminocidos polares carregados
positivamente.
Signal patch sinal conformacionado, constitudo por uma
sequncia de aminocidos no adjacentes mas em que a protena ao enrolar, faz com que os aminocidos
fiquem juntos. As protenas envolvidas nestes sinais vo para os lisossomas ou para o ncleo.
No citosol as protenas podem sofrer alteraes ps-traduo:

Fosforilao
Glicosilao adio da N-acetilglucosamina a um resduo da serina
Ligao de coenzimas a algumas enzimas
Ligao a cidos gordos e incorporao na membrana (protenas integrais)
| Captulo 7 Organizao interna das clulas
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2006/2007
2. Ncleo
O ncleo delimitado do citoplasma por
um sistema membranar denominado
invlucro nuclear, constitudo por uma
dupla membrana com poros nucleares. No
lado interno deste invlucro, situa-se a
lmina nuclear, constituda por filamentos
intermedirios altamente organizados, que
confere forma ao ncleo e serve de
ancoragem cromatina. Na mitose ocorre a
despolimerizao dos filamentos, sempre
depois da fosforilao das lminas. No
ncleo, encontra-se o patrimnio gentico
da clula, sob a forma de molculas de DNA que quando associado a histonas, forma a cromatina, que se
espalha pelo interior do ncleo. Para alm da cromatina, identifica-se uma outra estrutura, o nuclolo, que
representa o local de biossntese de ribossomas.
Os poros nucleares so revestidos por protenas (nucleoporinas) que reconhecem peptdeos sinal (ricos
em arginina e lisina) ou signal patches das protenas a transportar.
No transporte de molculas entre o ncleo e o citosol (e vice-versa) intervm as seguintes protenas e

sinais:
NLS nuclear localization signal peptdeo sinal que indica que a protena vai para o ncleo
NES nuclear export signal peptdeo sinal que indica que a protena vai para o citosol
Ran-GDP existente no citosol / Ran-GTP existente no ncleo
Ran-GAP GTPase activating protein permite a hidrlise do GTP no citosol
GEF permite a passagem do GDP a GTP no ncleo
Im portinas e importam molculas para o ncleo, reconhecendo o NLS
Exportinas reconhecem as protenas que vo para o citosol, atravs do NES.
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Captulo 7 Organizao interna das clulas |
2.1.
2006/2007
Transporte de molculas entre o ncleo e o citosol
A protena que vai ser transportada para o citosol tem consigo um sinal de exportao nuclear o
NES -. Este sinal vai ser reconhecido pela exportina existente no ncleo e que necessita de estar associada
Ran-GTP para formar um complexo com a protena desejada.
Assim que o complexo fica formado, reconhecido pelas nucleoporinas (NPC) presentes no
envelope nuclear e passa para o citosol. Aqui, para a protena ficar livre no local desejado, tem de sofrer
separao dos restantes componentes do complexo. Desta forma, o GTP hidrolisado a GDP atravs da
Ran-GAP e ocorre a separao dos trs componentes: Ran-GDP, exportina e protena.
A protena permanece no citosol, a exportina passa novamente para o ncleo depois de ser
reconhecida pelas nucleoporinas para uma nova passagem, e a Ran-GDP tambm passa novamente para o
ncleo para que seja substituda em GTP atravs do GEF, na medida em que o Ran s fica activo ligado a
GTP e no a GDP.
2.2. Transporte de molculas entre o citosol e o ncleo

A protena apresenta um sinal de localizao nuclear (NLS) que vai ser reconhecido por importinas
e . A importina vai reconhecer o sinal existente na protena e liga-se a ela e, por sua vez, a im portina
vai ligar-se im portina .
Quando as importinas reconhem a NLS, ligam-se protena, formam o complexo e passam pelo
poro nuclear, uma vez que so reconhecidas pelas nucleoporinas, e chegam ao ncleo.
Aqui, a Ran-GTP (obtida pela transformao da Ran-GDP atravs do RCC1) actua sobre o complexo
pois reconhece a im portina , e dissocia a im portina e a protena, mas mantm-se ligado im portina .
D esta form a,num processo seguinte,as im portinas passam am bas para o citosol,onde a im portina sofre
a aco da Ran-GAP, hidrolisando a Ran-GTP a Ran-GDP e libertando finalm ente a im portina para o
citosol. Por sua vez, a Ran-GDP passa imediatamente para o ncleo atravs do poro nuclear para ficar
pronta para um novo processo.
67
2006/2007
3. Transporte mitocondrial
As protenas das membranas mitocondriais que esto envolvidas no transporte de protenas so:
Tom translocadores da membrana externa
Tim translocadores da membrana interna
Oxa translocadores da membrana interna que permitem a insero na membrana interna das
protenas sintetizadas no citosol ou na mitocndria.
3.1.
Transporte de protenas para a matriz mitocondrial

A protena nascente a ser transportada
para o ncleo apresenta um peptdeo sinal no seu
terminal amina. Depois de atravessar vrias
hidrlises de ATP, atinge a membrana externa da
mitocndria, onde se encontram os translocadores
externos Tom . No entanto, a protena no
pode estar na sua conformao nativa, sendo
necessrio que a ela se liguem chaperes assim
que termina a sua sntese, havendo gasto de
energia atravs de ATP.
O peptdeo sinal da protena reconhecido
pelo Tom 22 para que possa ultrapassar a
membrana externa atravs do Tom 40 que uma
protena canal. No espao intermembranar,
existem vrios pontos de contacto entre as duas
membranas, por onde a protena nascente vai
68
2006/2007
prosseguir o seu percurso. Para que a protena chegue matriz mitocondrial, tem de atravessar a
membrana interna da mitocndria, onde existem os translocadores internos Tim , sendo que assim que
inicia o processo de passagem pelo espao intermembranar, os chaperes desligam-se da protena.
Assim que a protena chega matriz, novos chaperes voltam a ligar-se por mais uma hidrlise de
ATP em ADP + Pi. Desta forma, s quando toda a protena se encontra na matriz mitocondrial que o
peptdeo sinal retirado por peptidases e os chaperes desligam-se, libertando a protena e permitindo
que ela adquira a sua conformao normal e a funo biolgica respectiva.
3.2. Transporte de protenas para o espao intermembranar

Neste caso, a protena para alm do peptdeo sinal que indicava para a matriz mitocondrial, tem
outro que indica para o espao intermembranar. Assim, inicialmente a protena passa para a matriz pelo
processo explicado anteriormente (3.1.) e s depois que prosseguem para o destino final.
Assim que a protena chega matriz, confrontada com a aco de chaperes para impedir que ela
consiga adquirir uma conformao errada. De seguida, o peptdeo sinal que conduzia a protena para a
matriz retirado por aco de peptidases e a protena encaminhada para a membrana interna da
mitocndria. Aqui, a protena fica presa, mas s at que o peptdeo sinal que encaminhava a protena para
o espao intermembranar seja retirado e a cadeia peptdica seja libertada para o espao intermembranar,
onde adquire a conformao nativa.
3.3. Transporte de protenas para a membrana interna

No caso da protena ser destinada para a membrana interna da mitocndria, podem existir trs
casos possveis:
1) A protena constituda por dois peptdeos sinais: um que indica que a protena vai para a matriz e
um sinal stop-transfer que induz uma interrupo na deslocao da protena. A protena atravessa o
processo descrito em (3.1.) at ao momento em que a protena chega aos translocadores internos (Tim).
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Aqui, o segundo peptdeo sinal reconhecido e a protena fica presa membrana interna devido ausncia
de peptidases que reconheam a sequncia do peptdeo sinal a ser cortada.
2) A protena apresenta um peptdeo sinal que conduz a protena para a matriz e um outro que se
relaciona com os translocadores Oxa. A protena segue todo o processo (3.1.), sendo que na matriz o
primeiro peptdeo sinal retirado normalmente e o segundo vai ser reconhecido pelo Oxa1. Assim, a
protena adere membrana interna onde fica presa, e com os dois terminais virados para a matriz.
3) A protena no apresenta peptdeo sinal no terminal amina, mas apresenta vrios peptdeos sinais
ao longo da cadeia peptdica. Assim, ao longo do processo (3.1.), a protena no consegue passar atravs do
canal Tim, ficando presa membrana interna, e enrolando-se tantas vezes quantos peptdeos sinais tiver na
sua constituio. Neste caso, os dois terminais ficam virados para o espao intermembranar.
4. Peroxissomas
Os peroxissomas so organelos citoplasmticos limitados por uma membrana. Do seu contedo
destacam-se enzimas oxidativas, como a urato oxidase. As reaces de oxidao catalizadas por estas
enzimas produzem perxido de hidrognio (H2O2), que utilizado pela catalase (outra enzima abundante
no peroxissoma) para oxidar um conjunto de outros substratos, tais como fenis, cido frmico,
formaldedo e lcool.
Outra importante funo dos peroxissomas consiste na beta-oxidao dos cidos gordos em acetil-CoA.
Possivelmente, o peroxissoma representa o vestgio de um organelo primitivo, responsvel por metabolizar
o oxignio antes do aparecimento das mitocndrias. Tal como as protenas mitocondriais, as protenas
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destinadas ao peroxissoma so sintetizadas por ribossomas do citosol e depois dirigidas para peroxissomas
pr-existentes mediante a presena de sinais especficos.
Nas plantas, os peroxissomas podem existir nas folhas onde intervm na fotorespirao ou nas
sementes germinativas, onde transformam cidos gordos em cido succnico que, mais tarde,
transformado em acares (glioxissomas).
4.1.
Transporte de protenas do citosol para os peroxissomas
Nos peroxissomas, as protenas, ao contrrio do caso das mitocndrias, encontram-se na sua

conformao activa e vo atravessar a membrana com estas caractersticas. Apresentam um nico
peptdeo sinal no terminal carboxlico que vai ser reconhecido pelas Pex5, que so protenas citoslicas.
Os receptores da membrana reconhecem o Pex5 e permitem a passagem da protena para o
interior do peroxissoma onde a protena e o Pex5 se dissociam.
5. Retculo Endoplasmtico
O retculo endoplasmtico constitudo por um labirinto intracelular de cisternas, delimitadas por
membranas. Parte destas cisternas esto revestidas por ribossomas e denominam-se retculo
endoplasmtico rugoso. Outra parte no se associa a ribossomas e denomina-se retculo endoplasmtico
liso.
O retculo endoplasmtico rugoso responsvel pela sntese de todas as protenas secretadas para o
exterior da clula, bem como de todas as protenas transmembranares e das enzimas lisossmicas. Na
realidade, a sntese destas protenas inicia-se em ribossomas localizados no citosol. No entanto, estas
protenas distinguem-se das restantes por possurem um sinal que consiste numa sequncia especfica de
aminocidos.
O retculo endoplasmtico liso escasso na maioria das clulas. No entanto, este compartimento
encontra-se particularmente desenvolvido em certos tipos especializados de clulas. o caso das clulas do
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fgado, clulas musculares e clulas produtoras de hormonas esterides. O retculo liso tambm o local
de acumulao de enzimas responsveis pela sntese de hormonas esterides a partir do colesterol e, por
isso, encontra-se muito desenvolvido nas clulas produtoras deste tipo de hormonas. Finalmente, o
retculo liso contm protenas de transporte e sequestro de clcio, e por isso muito abundante nas clulas
musculares.
Microssomas vesculas resultantes da homogeneizao das clulas. Os microssomas lisos resultam do
retculo liso, do complexo de Golgi, da membrana, etc.. Depois da centrifugao, os microssomas rugosos
separam-se facilmente dos lisos porque a sua densidade bastante superior. Atravs do estudo destas
vesculas, pode concluir-se sobre a forma como as protenas so sintetizadas no retculo endoplasmtico.
5.1.
Sntese de protenas e a sua translocao atravs da membrana do RE
Assim que o peptdeo sinal do retculo endoplasmtico chega ao ribossoma, ligado a uma
protena que o reconhece (o SRP). O SRP entrega o ribossoma com a protena nascente ao receptor da SRP
que se situa na membrana do retculo endoplasmtico. Esta interaco reforada pela ligao de uma
molcula de GTP tanto ao SRP como ao seu receptor.
A transferncia da protena nascente at ao transportador canal da membrana do retculo
endoplasmtico est relacionada com a abertura desta molcula e com a insero do peptdeo sinal e do
segmento adjacente protena em crescimento.
O SRP e o seu receptor dissociam-se da protena canal, o GTP hidrolisa-se e seguidamente renemse todas as condies necessrias para a insero de uma outra cadeia polipeptdica. medida que a
cadeia cresce, passa atravs da protena canal para o lmen do retculo endoplasmtico, onde o peptdeo
sinal cortado por uma peptidase e rapidamente degradada. A cadeia peptdica continua a elongar-se
medida que o mRNA transcrito em direco extrem idade 3.Com o o ribossom a se encontra anexado
protena canal, a cadeia em crescimento expulsa atravs dela para o lmen do retculo endoplasmtico.
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Por fim, quando a transcrio est completa, o ribossoma libertado e o que resta da cadeia
peptdica passa tambm para o lmen do retculo, fechando a protena canal e conferindo a conformao
nativa protena sintetizada.
Nota: Algumas protenas secretoras entram no lmen do retculo endoplasmtico depois da transcrio
estar completa. Nestes casos, o transporte tambm condicionado por um complexo proteico adicional, da
famlia dos chaperes, designado BiP.
Este complexo embebido na membrana junto protena canal, onde reconhecido pelo lmen do
retculo endoplasmtico. Tal como os outros chaperes, o BiP possui um domnio peptdico e um domnio
de ATPase. Assim que o terminal amina da protena chega ao lmen do retculo endoplasmtico, a
peptidase corta o peptdeo sinal. A interaco do BiP-ATP com a restante poro lumnica da protena
provoca a hidrlise do ATP, produzindo uma alterao conformacional no BiP.
De seguida, o BiP-ADP obtido permanece ligado cadeia proteica, induzindo uma sequncia de
hidrlises de ATP que permite a ligao de vrias complexos BiP-ADP molcula, at que toda ela esteja no
lmen do retculo. Quando isto acontece, as molculas de BiP trocam espontaneamente o ADP por ATP,
levando libertao do polipeptdeo que vai adquirir a sua conformao nativa.
5.2. Sntese de protenas transmembranares

As protenas nem sempre apresentam um peptdeo sinal no terminal amina. A protena
transmembranar um destes casos, fazendo com que essa parte da molcula fique virada para o lado
citoslico e deixe de ser reconhecida pelo translocador.
O reconhecimento feito a um sinal situado no meio da protena, atravs de um SRP e depois por
um translocador. Como o terminal amina no conseguiu penetrar no interior do retculo endoplasmtico, a
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passagem fica impedida e a sntese da protena continua. No final, o terminal amina indica que o destino
o retculo e que passava para o lmen. No entanto, a sntese continua at que o outro peptdeo sinal se
localize na membrana, onde vai ficar alojado e onde faz com que o terminal amina fique virado para o lado
citoslico e o terminal carboxlico para o lmen.
Existem quatro tipos de protenas transmembranares:

Tipo 1 apresentam um peptdeo sinal do terminal amina e esto ligadas membrana com o seu terminal
amina virado para o lmen e com o terminal carboxlico virado para o citosol.
Tipo 2 no possuem peptdeos sinais no terminal e esto orientadas ao contrrio das anteriores: com o
terminal amina para o citosol e o terminal carboxlico para o lmen.
Tipo 3 apresentam a mesma orientao das tipo 1, mas no apresentam peptdeo sinal no terminal. Estas
diferenas na topologia reflectem os diferentes mecanismos utilizados pela clula para estabelecer a
orientao da membrana dos segmentos transmembranares.
Tipo 4 contm mltiplos peptdeos sinais ao longo da cadeia proteica e nenhum no terminal, fazendo com
que a protena apresente tantas hlices transmembranares quantos peptdeos sinais tiver. As protenas tipo
4 aqui representadas correspondem s protenas com receptores tipo G que a orientam com o terminal
amina para o lmen e com o terminal carboxlico para o citosol. No entanto, existem protenas tipo 4 que
podem ter um nmero diferente de hlices e adquirir vrias orientaes para os terminais.
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5.3. Sntese de protenas ligadas ao GPI (glicosilfosfatidilinositol)

Algumas protenas da superfcie celular
encontram-se ligadas bicamada fosfolipdica
no por uma sequncia de aminocidos
hidrofbicos, mas sim por uma molcula
anfiptica covalentemente ligada, o GPI
(glicosilfosfatidilinositol). Esta molcula
constituda por uma parte hidrofbica que
contm cadeias de cidos gordos e uma parte
polar que contm resduos de hidratos de
carbono e grupos fosfato.
Estas protenas so sintetizadas e inicialmente ancoradas membrana do retculo endoplasmtico,
precisamente como as protenas transmembranares tipo I, com o peptdeo sinal do terminal amina. No
entanto, uma pequena sequncia de aminocidos situada no domnio do lmen, adjacente membrana,
reconhecido por uma transmidase localizada no interior da membrana do retculo. Esta enzima corta o
interior da protena percursora, deixando-a dividida em duas partes: a primeira fica anexada membrana
do retculo com a configurao referida anteriormente e a segunda vai ligar-se a um ponto de ligao do
GPI que tambm se situa na membrana. Assim, esta protena adquire a sua maturao ligada a esta
molcula.
5.4. Sntese da cadeia oligossacardica

O dolicolfosfato um lpido fortemente hidrofbico, que contm aproximadamente 95 tomos de
carbono e que se encontra embebido na membrana do retculo endoplasmtico. Duas molculas de Nacetilglucoseamina e cinco de manose so adicionadas uma a uma ao dolicolfosfato, na face citoslica da
membrana do retculo.
Os dadores de UDP (uridinadifosfato nucletido) presentes nestas e noutras reaces seguintes
so sintetizados no citosol. Assim, o primeiro resduo de acar adicionado ao dolicolfosfato atravs de
uma ligao extremamente energtica. A tunicamicina que bloqueia a primeira enzima neste percurso, vai
inibir a sntese de todos os oligossacardeos nas clulas.
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Depois de o dolicolfosfato com os 7 resduos de acar sofrer flip-flop, passa para o lmen do
retculo, onde as 4 manoses restantes so adicionadas uma a uma, juntamente com 3 molculas de glicose.
Nas reaces seguintes, o acar a ser adicionado inicialmente transferido de um UDP para um
transportador de dolicolfosfato situado no lado citoslico. O transportador sofre ento flip-flop para a face
do lmen e o acar transferido para o oligossacardeo crescente. Por fim, o transportador volta a sofrer
flip-flop e volta novamente para o lado citoslico.
O precursor completo no processo anterior transferido do transportador dolicol para um

susceptvel resduo de aspargina que se encontra numa protena nascente, assim que a aspargina passa
para o lado do lmen do retculo endoplasmtico.
5.5. Acumulao de protenas com conformao errada no R.E.

A acumulao de protenas ocorre com grande quantidade de chaperes, logo necessrio enviar
um sinal clula para que ela consiga sintetiz-los em quantidade suficiente.
Estas protenas com conformao errada enviam sinais a protenas transmembranares que
funcionam como cinases, sofrendo auto-fosforilao. Esta cinase activa transforma-se numa
riboendonuclease que vai cortar molculas especficas de pr-mRNA em dois locais, removendo os intres
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e formando uma molcula de RNA no citosol. Esta molcula activa de mRNA vai ser traduzida para originar
uma protena que vai actuar como factor de transcrio.
Estes factores vo ligar-se a um determinado gene e induz a sua activao, provocando uma sntese
de uma molcula de mRNA e sendo transportado para o ncleo atravs do reconhecimento por importinas.
Por fim, codificam-se os chaperes do retculo endoplasmtico que ao serem produzidos no retculo
endoplasmtico, ajudam as protenas a adquirir a sua conformao.
5.6. Fosfoglicerdeos no retculo endoplasmtico

Sntese
A sntese de fosfolipdeos no retculo endoplasmtico ocorre no lado citoslico da membrana do
retculo endoplasmtico. O principal fosfolpido sintetizado a fosfatidilcolina, que pode ser formado em
trs etapas, a partir de colina, dois cidos gordos e glicerolfosfato. Cada etapa catalisada por enzimas na
membrana do retculo endoplasmtico que tm os seus centros activos voltados para o citosol, onde so
encontrados todos os metablitos necessrios. Assim, a sntese de fosfolpidos ocorre exclusivamente na
lmina citoslica da membrana do retculo endoplasmtico.
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Flip-flop dos fosfoglicerdeos

Pelo facto de a sntese lipdica ocorrer na metade
citoslica da bicamada do retculo endoplasmtico, existe a
necessidade de um mecanismo que transfira algumas das
molculas fosfolipdicas recm-formadas lmina do lmen
da bicamada. Nas bicamadas lipdicas sintticas no existe
um mecanisamo de transferncia de molculas recmsintetizadas para o lmen.
No retculo, todavia, os fosfolipdeos equilibram-se
atravs da membrana em minutos, o que quase cem mil
vezes mais rpido que o flip-flop espontneo. Este
movimento transbicamada rpido parece ser mediado por
um transportador de fosfolipdeo denom inado m isturador,
que equilibra fosfolipdeos entre as duas lminas da
bicamada lipdica, fazendo com que os diferentes tipos de
fosfolipdeos paream estar distribudos igualmente entre as
duas lminas da membrana do retculo endoplasmtico.
Uma vez que novas molculas de lpidos so adicionadas s metade citoslica da bicamada, e que
as molculas de lpidos no se movem espontaneamente de uma monocamada outra, o transportador de
fosfoglicerdeo ligado m em brana (m isturador) necessrio para transferir m olculas de lpido da
metade citoslica para a metade do lmen, de modo que a membrana se desenvolva como uma bicamada.
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O m isturador no especfico para grupos cabea de fosfoglicerdeo em particular e,portanto,equilibra

os diferentes fosfoglicerdeos entre as duas monocamadas.
Sntese de colesterol e ceramida

No retculo endoplasmtico liso, ocorre tambm a sntese de colesterol, hormonas esterides a
partir do colesterol e ceramida. A ceramida constituinte dos esfingolpidos e d origem esfingosina
quando se liga a um cido gordo.
Transporte de fosfoglicerdeos
Vesculas transportar para o complexo de Golgi, lisossomas e
membrana plasmtica
Protenas da membrana existem protenas no citosol que
reconhecem os fosfolpidos, ligam-se a elas e transportam-nos para a
membrana do organelo desejado. No caso da mitocndria, a
fosfatidiletanolamina, no vai ser transferida. A fosfatidilserina sofre
descarboxilao na membrana da mitocndria e transforma-se em
fosfatidiletanolamina, para depois ser integrada na membrana.
Contacto entre membranas quando as membranas podem
contactar directamente entre si, transportam as molculas atravs dos
pontos de contacto.
5.7. Destino das protenas sintetizadas no retculo endoplasmtico

No retculo endoplasmtico, ocorre a sntese das protenas que vo ser transportadas para as vrias
fraces do complexo de Golgi, e daqui para os lisosomas ou membrana. A partir deste momento, so
secretadas de duas formas:
Excretadas continuamente por exocitose (secreo constitutiva);
Ficam retidas na clula e s se recebem estmulo externo que so excretadas (secreo regulada).
Quando as protenas passam para o complexo de Golgi e depois para os lisossomas e para o
exterior da clula, significa que as vesculas vo ser diferentes. Por outro lado, existem vesculas do retculo
para as organelas e protenas que atinjam o complexo de Golgi podem voltar ao retculo endoplasmtico se
tiverem conformao inadequada.
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5.8. Ubiquitinao
Quando as protenas so consideradas anormais, ou ficam no lmen ou passam para o complexo de
Golgi, no conseguindo completar o transporte para o seu destino. Quando isto acontece, devido ao facto
de as protenas provocarem destabilizao da clula, tm uma conformao imprpria e so reconhecidas
por chaperes, fazendo com que as protenas passem para o citosol atravs do translocador que as
reconheceu quando entraram para o lmen do retculo.
Este translocador uma protena
transmembranar que reconhece a
protena como protena que deve ir para o
lmen do retculo e permitindo-lhe a
passagem para o citosol. Posteriormente,
ocorre
a
remoo
da
cadeia
oligossacardica atravs da glicanase, num
processo designado ubiquitinao.
Neste processo, as ubiquitinas que
esto no citosol reconhecem a protena
num determinado aminocido que tem
compatibilidade com a ubiquitina. A protena que tem a cadeia de ubiquitinas vai ser reconhecida por um
proteossoma que tem a capacidade de destruir as protenas e de controlar a qualidade da clula.
O processo de ubiquitinao ocorre no citosol, mas tambm pode dar-se no ncleo. Quando isto
acontece, protenas que so transportadas para o ncleo podem estar a adquirir uma conformao errada.
Assim, tanto podem sofrer uma desfosforilao ou uma fosforilao como podem ser sintetizadas em
determinadas alturas por diferentes processos, sendo no final eliminadas.
6. Complexo de Golgi
O complexo de Golgi localiza-se, geralmente, perto do ncleo e constitudo por uma srie de cisternas
empilhadas, rodeadas por inmeras vesculas. Em cada pilha de cisternas distingue-se uma face cis (ou face
de entrada), mais prxima do ncleo, uma face trans (ou face de sada), mais afastada do ncleo e uma
face mdia situada entre as duas anteriores.
Junto face cis, as vesculas representam um sistema de vaivm entre o Golgi e o retculo
endoplasmtico rugoso: das cisternas do retculo destacam-se, continuamente, vesculas que se fundem
com as cisternas do complexo de Golgi, transportando as protenas destinadas via de secreo; em
sentido inverso, destacam-se vesculas das cisternas do Golgi que retornam ao retculo transportando
protenas que no entram na via de secreo.
Da face trans destacam-se vesculas destinadas ou via de secreo ou aos lisossomas. Ao atravessar o
complexo de Golgi, as protenas sofrem uma srie de modificaes que incluem a remoo de alguns
acares (geralmente resduos de manose), a adio de outros (por exemplo, N-acetilglucosamina,
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galactose e cido silico). O complexo de Golgi , portanto, o local da clula onde se produzem as
glicoprotenas e os proteoglicanos.
No complexo de Golgi existe, ainda, o TGN (Trans Golgi Network) que parte as vesculas para as
diferentes partes da clula (membrana, lisossomas, exterior da clula, etc.)
6.1. Modificao das glicoprotenas sintetizadas no retculo endoplasmtico

As enzimas que catalisam cada um dos passos deste
processo encontram-se situadas em compartimentos indicados.
Depois da remoo de trs resduos de manose no cis-Golgi (1),
a protena passa por progresso cisternal para o medial-Golgi.
Aqui, trs resduos de N-acetilglucosamina so adicionados
(2,4), outros dois resduos de manose so removidos (3) e
adicionado um nico resduo de fucose (5).
O processamento terminado no trans-Golgi por
adio de trs resduos de galactose (6) e finalmente pela
ligao de um resduo de cido N-acetilneuramnico a cada um
dos resduos de galactose (7). Enzimas especficas de
transferncia adicionam acares ao oligossacardeo, um a um,
dos nucletidos de acar precursores importados do citosol.
Este percurso representa o processamento do
complexo de Golgi para uma glicoprotena habitual. Assim,
alteraes na estrutura de oligossacardeos do tipo N-ligao
podem provocar diferenas nos passos deste processamento do
complexo de Golgi.
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6.2. Glicosliao do tipo O-ligao

Os oligossacardeos tipo ligao-O, geralmente ligados a serina ou treonina, apresentam dimenses
reduzidas e contm entre um e quatro resduos de acar. Nesta glicosilao, o primeiro acar a
acetilglucosamina, sendo que medida que a protena passa uma cisterna para outra, sofre maturao.
(Tambm pode acontecer quea galactose seja o acar inicial e se ligue hidroxilisina.)
Esta glicosilao ocorre no lmen do complexo de Golgi atravs da interveno das
glicosiltransferases que adicionam um monossacardeo (ligado a um nucletido) de cada vez, protena.
6.3. Compartimentalizao do complexo de Golgi (marcao de enzimas)

O estudo da actividade enzimtica dos elementos do complexo de Golgi no se tem limitado s
observaes in situ mas tambm s suas subfraces obtidas por mtodos de centrifugao diferencial e
electroforese de fluxo livre. Foi a partir da deteco de certas enzimas que muito se avanou no
esclarecimento de algumas funes do complexo de Golgi. Entre as enzimas marcadores do complexo de
Golgi, existem as seguintes:
TPPase localiza-se no trans-Golgi
CMPase localiza-se no trans-Golgi
NDPase localiza-se no trans-Golgi
NADPase localiza-se no medial-Golgi
AcPase localiza-se no trans-Golgi
AMPase tem uma distribuio compartimentada que se traduz pela localizao da enzima.
A primeira demonstrao da heterogeneidade das cisternas do complexo de Golgi residiu nos
resultados citoqumicos que demonstravam j diferenas qualitativas. Estas diferenas, especialmente bem
documentadas no hepatcito in situ e nas fraces isoladas, serviram como marcadores para o estudo da
forma e disposio do complexo de Golgi em muitas outras clulas.
Assim, os achados citoqumicos permitiram admitir a especializao dos componentes do Golgi e a
sua diferenciao em cis e trans. A glicosilao das protenas o modelo melhor conseguido na
demonstrao da compartimentao do complexo de Golgi, sendo a glicosilao a principal modificao
qumica das protenas que passam pelo complexo de Golgi.
6.4. Processamento da cadeia oligossacardica das glicoprotenas

A estrutura precursora de todos os oligossacardeos ligao-N, nas plantas e nos animais, um
oligossacardeo ramificado que contm 2 molculas de N-acetilglucosamina, 9 manoses e 3 glicoses. Este
oligassacardeo est ligado por um resduo pirofosforil a um lpido no saturado, fortemente hidrofbico
o dolicol que est includo na membrana do retculo endoplasmtico.
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O processo de sntese complexo, uma vez

que os glucdios so adicionados um a um,
inicialmente na superfcie citoslica do retculo e mais
tarde na sua prpria luz onde se concluir a sntese
do sacardeo. Este depois transferido para os
resduos asparagina dum polipptido em formao,
por intermdio da oligossacardeo transferase. No
retculo endoplsmico, imediatamente aps a
actuao desta enzima, as 3 glicoses (que actuam
como sinal de finalizao ou maturao do
oligossacardeo) e 1 manose so removidas. Do
retculo endoplsmico, esta glicoprotena passa ao
complexo de Golgi por meio de vesculas (COP II) e
aqui processada, pela interveno dum conjunto de
reaces coordenadas, que consistem na remoo de
cinco das 8 manoses restantes, na adio de 3 N-acetilglucosaminas, 3 galactoses, 3 resduos de cido Nacetilneuramnico (cido silico) e uma fucose, uma reaco de cada vez, em relao a cada cadeia do
oligossacardeo.
6.5. Sntese de proteoglicanos

Os glicosaminoglicanos so polissacardeos complexos, geralmente de cadeia linear e elevado peso
molecular, existentes na matriz extracelular e superfcie das clulas. Podem ainda ocorrer
intracelularmente e, em situaes patolgicas, ser a acumulados.
O cido hialurnico talvez o nico glicosaminoglicano que, nos sistemas biolgicos, no se
encontra associado a protenas por ligaes covalentes. Todos os outros se apresentam, geralmente,
ligados a um compontente proteico, associao esta que origina macromolculas designadas
proteoglicanos.
Os proteoglicanos podem, ento, diferir devido s caractersticas da sua poro proteica e/ou ao
tipo, nmero e particularidades dos glicosaminoglicanos e oligossacardeos que possuem. hoje
reconhecido que o nmero de diferentes proteoglicanos passvel de ser sintetizado e secretado por um
nico tipo celular bastante considervel. A sntese das pores proteicas segue o esquema clssico das
protenas para exportao, precedendo o incio da sntese das cadeias de glicosaminoglicanos. O cido
hialurnico, por sua vez, sintetizado por uma enzima localizada na membrana celular, sendo
directamente libertado para o espao extracelular. Para alm disso, este cido uma molcula
polianinica, mantendo uma conformao expandida nos tecidos por repulso electroesttica e reteno
de uma grande quantidade de molculas de gua.
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6.6. Sntese de esfingolpidos e de esfingomielina

Os glicolpidos e a esfingomielina so derivados da ceramida (esfingosina + cidos gordos) e so
importantes na constituio da membrana. A ceramida vai ser sintetizada no retculo endoplasmtico e ao
ser transportada para o complexo de Golgi pode seguir duas vias:
Sofre uma glicosilao e transforma-se num glicolpido;
Sofre uma adio de uma fosfocolina, transformando-se numa esfingomielina.
Quanto ao complexo de Golgi, este para al de ser responsvel por direccionar o destino das
diferentes molculas, vai permitir a modificao de protenas sintetizadas no retculo endoplasmtico,
modificando a cadeia oligossacardica, induzindo a glicosilao que vai permitir a formao dos
proteoglicanos, ou induzindo a formao de um glicolpido (ou esfingolpido), consoante a situao.
6.7. Tipos de vesculas de transporte

Vesculas revestidas por clatrina participam na endocitose e no transporte de molculas do
complexo de Golgi para endossomas tardios ou lisossomas.
COP I apresentam um revestimento diferente e tm a capacidade de transportar as protenas da
zona trans para a zona cis, ou da zona cis para o retculo endoplasmtico.
COP II transportam as protenas entre as cisternas do complexo de Golgi e o retculo
endoplasmtico.
6.8. Formao de vesculas

No processo de formao de vesculas, esto sempre envolvidas GTPases que so activas quando
ligadas ao GTP e inactivas quando ligadas ao GDP, pois caso estivessem sempre activas o processo seria
contnuo.
Formao das vesculas revestidas por clatrina
Estas vesculas formam-se em zonas da membrana designadas coated pits que so poroes de
membranas que existem no complexo de Golgi e na membrana plasmtica. Assim, podem formar-se no
complexo de Golgi para levar as protenas para os lisossomas ou na membrana plasmtica para permitir
processos de endocitose.
As membranas tm de possuir receptores para as molculas que tm sinais para serem
transportadas para endossomas e, no lado de invaginao, devem existir molculas adaptadoras que vo
ser reconhecidas pela clatrina e que se designam por adaptinas. (Este processo de associao no consome
energia.)
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Para haver fuso da membrana da vescula, h

necessidade da interveno de uma GTPase, a dinamina, que
actua formando e terminando a vescula.
A clatrina apenas necessria para a formao da
vescula, sendo dissociada no final do processo, com a ajuda de
chaperes, hidrlise do ATP e, provavelmente, pela controlo da
concentrao de clcio. Assim sendo, s no final da dissociao
que a vescula reconhecida pelos lisossomas e se funde com as
suas membranas.
Formao das vesculas COP I e COP II

Para que haja formao de vesculas, necessrio que haja a interveno de protenas que se inserem
na membrana, sendo elas as GTPases: para a COP I a ARF e para a COP II a Sar1.
Estas protenas existem no citosol na forma inactiva e ligadas ao GDP. Tm incorporadas molculas
lipdicas e enquanto permanecerem inactivas, as molculas lipdicas ficam protegidas do meio aquoso
(citosol).
Quando a GTPase se torna activa, necessita da protena GEF (que permite a transformao de GDP em
GTP). Assim, o GEF faz esta transformao, sendo que o GTP ao reagir com a GTPase vai permitir que o
cido gordo altere a sua conformao, ficando inserido na membrana. Esta molcula lipdica vai ser
reconhecida pelo revestimento (COP I ou COP II) e este vai ligar-se GTPase.
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Para ocorrer a dissociao do revestimento, o GTP tem de ser hidrolisado. Com isto, altera-se a
conformao e o cido gordo vi ser recolhido na molcula, havendo um local de ligao para o entre o
revestimento e a protena.
6.9. Fuso de membranas

A membrana da vescula tem que ter sinais que vo ser reconhecidos pela membrana-alvo. Atravs
de estudos sobre vrus, tornou-se facilitado o estudo sobre a fuso das membranas, na medida em que o
vrus que se encontra numa clula, permite que haja a fuso das duas membranas e que o seu contedo se
liberte no interior da vescula resultante.
No processo de fuso de membranas existem:
Protenas fusognicas (SNAREs):
v-SNARE existe nas membranas onde se formam as vesculas;
t-SNARE existe nas membranas das organelas alvo onde se fundem as membranas.
Protenas que controlam a especificidade (Rab):
Rab GTPase que controla a especificidade da ligao v-SNARE/t-SNARE e que na sua forma
citoslica, fica inactiva e designa-se Rab-GDP.
Protenas que permitem a dissociao (NSF):
NSF permite a dissociao das SNAREs aps a fuso das membranas (hidrlise do ATP).
SNAPs permitem a ligao do NSF vescula.
Interveno das SNAREs
As protenas na membrana interna de uma dada vescula possuem v-SNAREs, cruciais para uma
eventual fuso da vescula com uma membrana-alvo apropriada. Pouco dpois de a vescula estar formada,
o revestimento expe as uas v-SNAREs. O local especfico de ligao das v-SNAREs na membrana da
vescula encaminha-se para os organelos-alvo que possuem membranas onde se encontram as tSNAREs.
Com a aproximao das duas membranas, as duas bicamadas fundem-se e formam-se um complexo
SNARE.
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Interveno da Rab e do respectivo efector

O Rab uma GTPase que est
inactiva no citosol porque est ligada a
um GDP e outras molculas que
impedem a activao. Quando fica
activa devido presena de GTP (RabGTP) j se pode ligar a uma vescula do
organismo dador que tem v-SNAREs.
Esta vescula aproxima-se da
membrana-alvo
apropriada,
onde
existem efectores Rab e t-SNAREs.
Assim, os efectores reconhecem o RabGTP e os t-SNAREs reconhecem os vSNAREs, formando-se um complexo
com cada. De seguida, ocorre a fuso
das membranas e a libertao do
complexo SNARE para uma nova fuso
vesicular.
Interveno do NSF e das SNAPs

Depois de ocorrer a fuso das duas membranas, ocorre imediatamente a dissociao das protenas
SNARE que constituem o seu complexo. Para isto ocorrer, intervm a NSF juntamente com uma protena
SNAP que se liga ao complexo. A NSF catalisa a hidrlise do ATP em ADP + Pi conduzindo dissociao das
duas protenas para uma nova fuso membranar.
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6.10. Processamento das protenas transportadas para endossomas tardios

Os resudos de M6P (manose 6-fosfato) que direccionam as protenas para os lisossomas so
sintetizados no cis-Golgi por duas enzimas do complexo de Golgi.
(1) Uma fosfotransferase da GlcNAc (N-acetilglucosamina) transfere uma molcula de GlcNAc
fosforilada para o carbono-6de um ou m ais resduos de m anose.D evido exclusividade de as
enzimas dos lisossomas conterem sequncias que so reconhecidas e ligadas a esta enzima, os
grupos de GlcNAc fosforilados so adicionados especificamente s enzimas dos lisossomas.
(2) Depois da libertao protena modificada da fosfotransferase, uma fosfodiesterase remove o
grupo GlcNAc, deixando na enzima do lisossoma um resduo fosforilado de manose.
6.11. Transporte das protenas para endossomas

A secreo das enzimas lisossomais M6P das protenas membranares e sintetizadas ocorre no TGN.
Aqui, os receptores transmembranares para a M6P ligam cuidadosamente os resduos de M6P s protenasdestino dos lisossomas, tendo em conta a sua especificidade.
As vesculas de clatrina que contm os receptores M6P e as enzimas lisossomais separam-se do
TGN, perdem o seu revestimento e subsequentemente fundem-se com os endossomas tardios. Tendo por
base que os receptores do M6P podem ligar a M6P no pH ligeiramente cido (6,5) do TGN mas nunca num
pH inferior a 6, as enzimas lisossomais so libertadas dos endossomas tardios, que apresentam pH prximo
de 5.
Alm disso, a fosfatase que se localiza no interior destes endossomas remove geralmente o fosfato
dos resduos de M6P das enzimas lisossomais, prevenindo quaisquer novas ligaes do receptor de M6P
que pudessem ocorrer devido ao pH cido dos endossomas. As vesculas que se vo separando dos
endossomas tardios reciclam o receptor M6P de novo ao TGN ou, em casos particulares, superfcie da
clula. Eventualmente, os endossomas tardios fundem-se com lisossomas, entregando as enzimas
lisossomais ao seu destino final.
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6.12. Deslocao das vesculas no interior da clula

Devido orientao dos microtbulos fixada pelo MTOC, a direco do transporte (para o interior
para o exterior da periferia da clula) depende da protena motora utilizada. Algumas cargas como grnulos
de pigmento, podem alternar a direco do moviento no interior de um nico microtbulo.
Neste caso, tanto o movimento de avano como o de retrocesso das protenas motoras dos
microtbulos tm de estar associados mesma carga. Estudos recentes identificaram a dinactina num
complexo com cinesina.
Um modelo prope que a dinactina seja parte do receptor da membrana e funcione como
adaptador comum para a cinesin de ligao e para a dinena citoplasmtica. Consequentemente, a direco
do movimento pode ser alterada pela troca da protena motora actual por outra.
Todos os microtbulos com a sua extremidade (+) virada para a periferia da clula, irradiam de um
MTOC no regio do complexo de Golgi. O transporte de avano dependente das cinesinas conduz as
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mitocndrias, os lisossomas e um sortido de vesculas para o retculo endoplasmtico ou para a periferia da

clula. Por sua vez, o transporte retrgrado depende das dinenas transporta mitocndrias, elementos do
retculo endoplasmtico e endossomas tardios para o centro da clula.
6.13. Tipos de secreo

Secreo constitutiva intervm molculas que esto a ser sintetizadas e a serem excretadas
continuamente da clula. Existe ainda um conjunto de vesculas que se formam, as vesculas secretoras,
onde se acumulam molculas e que permanecem na clula at que o organismo necessite delas.
Secreo regulada necessita de um estmulo do exterior, podendo ser um neurotransmissor ou uma

hormona, que se liga a um receptor da membrana e faz com que as molculas existentes sejam secretadas
da clula.
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7. Lisossomas
O s lisossom as so sacos intracelulares delim itados por um a m em brana e cheios de enzim as
hidrolticas, capazes de digerir todas as macromolculas da clula. Conhecem-se cerca de 40 tipos de
enzimas lisossmicas, que incluem proteases, nucleases, glicosidases, lipases, fosfolipases, fosfatases e
sulfatases. Todas estas enzimas tm uma particularidade: so preferencialmente activas em meio cido e,
para acidificar o seu meio interno, os lisossomas possuem na membrana uma bomba de protes.
Deste modo, a clula est duplam ente protegida contra um ataque por parte das enzim as
lisossmicas. Por um lado, a membrana impede o acesso das enzimas ao citoplasma. Por outro, no caso de
eventual fuga, as enzimas no so activas ao pH neutro do citoplasma.
Os lisossomas tm bombas de hidrognio tipo V que permitem bombear H+ do citosol para os
lisossomas e o consequente abaixamento do pH.
Na clula, os lisossomas desempenham fundamentalmente trs funes:
Digerem macromolculas provenientes do exterior pela via da endocitose, fornecendo nutrientes
para o metabolismo da clula.
Desempenham um papel fundamental na destruio de componentes celulares obsoletos
autofagia.
Participam na degradao de microrganismos ou partculas nocivas clula atravs do mecanismo
de fagocitose.
7.1.
Formao dos lisossomas
Existem trs tipos de vesculas:

Endossomas perifricos no possuem enzimas hidrolticas e s
so transformados pelos endossomas tardios.
Endossomas tardios recebem as enzimas hidrolticas do
complexo de Golgi.
Lisossomas
Os endossomas perifricos transformam-se em lisossomas atravs de
um destes dois processos:
As vesculas sofrem maturao e portanto vo-se transformando
progressivamente em lisossomas.
Existem trs vesculas que comunicam entre si e transportam as
molculas entre si por um sistema de vesculas que vo
transportando o contedo do endossoma para o endossoma tardio e
depois para o lisossoma.
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7.2. Transporte das enzimas hidrolticas do complexo de Golgi para os

lisossomas
As enzimas hidrolticas so sintetizadas no retculo endoplasmtico e que se sofrem transformao
de fosforilao da manose na posio 6 no complexo de Golgi. Isto um sinal que vai ser reconhecido pelo
receptor do M6P que se encontra no TGN e que permite a ligao das molculas fosforiladas.
Depois desta ligao, a vescula perde o revestimento de clatrina e dissocia-se formando uma
vescula de transporte. Esta vescula vai de encontro ao endossoma tardio, com o qual funde a membrana,
libertando o seu contedo para o interior do endossoma. Neste endossoma, ocorre a hidrlise do ATP,
enviando uma molcula de H+ para o seu interior e diminuinodo o pH. Com isto, o M6P dissocia-se do
receptor, para de seguida lhe ser removido o grupo fosfato e originar a enzima hidroltica.
Por fim, os receptores de M6P aderem membrana do endossoma e aqui so recicladas para uma
nova utilizao.
7.3. Provenincia dos materiais que chegam aos endossomas
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Endocitose / Pinocitose
Na pinocitose ocorre a formao de vesculas revestidas por clatrina nos coated pits. Uma partcula de
LDL (low-density lipoprotein) uma esfera com aproximadamente 25 nm de dimetro, apresenta um
fosfolpido externo que contm uma nica molcula de uma protena designada apoB-100.
A maior parte das clulas produz receptores para a superfcie da clula, que se ligam especificamente
protena apoB-100 e englobam a LDL atravs da endocitose mediada por esses receptores. Depois da
endocitose, as partculas de LDL so transportadas para os lisossomas atravs de um percurso endoctico e
depois so degradadas por hidrolases lisossmicas. Os receptores de LDL, que se dissociam dos seus
ligandos no endossoma tardio, vo ser reciclados para a membrana celular.
Tendo por base que o endossoma tardio tem pH = 5.0 no seu interior, vai ento fundir-se com o
lisossoma e as protenas e lpidos da partcula livre de LDL so distribudas para as suas partes constituintes,
por enzimas no lisossoma , formando uma vescula que contm cidos gordos, aminocidos e colesterol.
Por fim, o material no digerido nos lisossomas eliminado por exocitose e formam-se cavolas em
que no h formao de vesculas revestidas, mas sim a formao de cavolas em rafts lipdicos atravs da
caveolina.
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Nota: Nos receptores dos coated-pits, podem surgir dois casos distintos :
(A) O receptor de LDL est localizado na membrana plasmtica apresenta um local de ligao para
o LDL e um terminal na parte inferior que permite o emparelhamento com o coated-pit
revestido por clatrina. Depois de ocorrer esta ligao, os LDL vo ligar-se aos receptores que se
encontram no coated-pit.
(B) O receptor de LDL diferente do anterior porque no apresenta o terminal de ligao para o
coated-pit revestido por clatrina. Assim, as partculas de LDL ligam-se aos receptores que
permanecem nos locais originais da membrana e o coated-pit fica vazio.
Fagocitose
A fagocitose uma forma especial da endocitose onde
partculas de grandes dimenses, como microrganismos, so
ingeridos atravs de grandes vesculas fagocticas, os fagossomas.
Existem dois tipos de clulas que realizam a fagocitose: os
macrfagos e os neutrfilos. Estes dois tipos de clulas desenvolvemse a partir de uma mesma clula precursora e defendem o nosso
organismo contra infeces provocadas pela ingesto de
microrganismos. Para alm disso, os macrfagos tambm so
importantes no processo de eliminao de clulas velhas ou
danificadas.
Enquanto que as vesculas endocticas envolvidas no processo
de pinocitose so pequenas e uniformes, os fagossomas apresentam
dimetros determinados pelo tamanho da partcula ingerida. Os
fagossomas fundem-se com lisossomas e o material ingerido
degradado. De seguida, substncias indigestveis permanecem nos
lisossomas, formando corpos residuais.
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Para serem fagocitadas, as partculas tm de ligar-se inicialmente superfcie do fagcito. Estes tm

uma grande variedade de receptores na sua superfcie, que esto funcionalmente ligados maquinaria
fagoctica da clula. Ao contrrio da pinocitose, a fagocitose um processo com iniciadores que requer os
receptores activados a transmitir sinais para o interior da clula para iniciar a resposta.
Os melhores iniciadores so anticorpos que se ligam superfcie dos microrganismos infecciosos para
formar um revestimento onde a cauda de cada anticorpo (regio Fc) se encontra virada para o exterior. O
revestimento por anticorpos reconhecido por receptores especficos (receptores Fc) na superfcie dos
macrfagos e dos neutrfilos. A ligao destes anticorpos aos receptores induz, ento, a emisso de
pseudpodes pela clula fagoctica, que englobam a partcula e se fundem para formar o fagossoma.
Autofagia
A autofagia consiste na digesto intracelular de organelos e estruturas da prpria clula. Deste modo,
podem ser eliminados organelos que deixaram de ser necessrios actividade celular. Este processo
relativamente selectivo, sendo includos nos vacolos de autofagia, principalmente, os organelos que
deixaram de ser funcionais. Contudo, em certos casos, a autofagia pode ser muito mais generalizada.
7.4. Destino dos diferentes tipos de receptores

Degradados conjuntamente com a molcula dos lisossomas
Transportadas de uma zona da membrana para outra
Regressam membrana para serem reutilizados.
8. Mitocndrias
8.1. Composio das mitocndrias
Mitocndrias so organelos celulares presentes na maioria das clulas eucariticas e responsveis,
em condies aerbias, pela obteno da maior parte da energia necessria s clulas que as possuem.
Tm aspecto morfolgico muito varivel, podendo ocorrer, contrariamente ao que o seu nome indica, sob
diversas formas, como redonda, oval e em bastonete ou filamento, e apresentando variaes no seu
tamanho, nmero e distribuio, no s segundo os diferentes tipos de clulas como tambm durante o
ciclo de vida de uma mesma clula.
Uma clula humana contm, em mdia, cerca de 3000 a 5000 destes organelos citoplasmticos.
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As mitocndrias contm duas membranas muito diferentes, que definem dois compartimentos: o
espao intermembranar e a matriz mitocondrial.
Membrana externa contm protenas canais que permitem a passagem das substncias entre o
citosol e o espao intermembranar. Tem tambm enzimas envolvidas na sntese de lpidos que s existem
ao nvel da mitocndria.
Membrana interna forma invaginaes designadas por
cristas mitocondriais, cujo nmero varia com o tipo de clula, ou
seja, podem ter mais ou menos cristas consoante o nvel de energia
que a clula consome. Contm cardiolipinas (duplo fosfolpido) que
muito importante pois reduz a permeabilizao da membrana a
ies. Assim sendo, a membrana interna contm todas as protenas
que intervm na transferncia de electres, onde se d a
fosforilao oxidativa, ou seja, todas as protenas que so
transportadoras de electres. Estas protenas so constitudas por
vrias cadeias polipeptdicas e formam grandes complexos
enzimticos. Por fim, esta membrana contm a ATP sintetase (que
uma ATPase) que permite a sntese de ATP e que constituda por vrias cadeia polipeptdicas que tambm
tm a capacidade de hidrolisar o ATP.
Espao intermembranar espao delimitado pelas duas membranas, apresentando composio
semelhante do citosol.
Matriz mitocondrial local onde ocorre grande parte dos processos energticos da mitocndria.
Apesar de tambm ser um dos compartimentos da mitocndria, apresenta composio diferente do espao
intermembranar. Para alm disso, um local muito especializado e contm uma substncia fundamental
onde coexistem DNA e ribossomas.
8.2. Diviso das mitocndrias

A informao gentica que vai ser descodificada, que vai dar origem sntese
das enzimas, existe no ncleo. No entanto, se so enzimas necessrias sobrevivncia
da mitocndria e se vo dar origem replicao da molcula de DNA mitocondrial,
existe no ncleo devido evoluo em que houve transferncia de material gentico
entre a mitocndria e o ncleo.
Assim sendo, inicialmente os seres procariontes tinham a sua prpria
informao gentica para que houvesse todo este conjunto de mecanismos. A partir do
momento em que foram englobados nas clulas eucariticas durante a evoluo, muito
material gentico existe na mitocndria foi transferido para o ncleo celular.
Com este processo de transferncia de informao gentica, descobriu-se que
as mitocndrias que iam desaparecendo durante a evoluo celular, sofriam este
fenmeno devido a processos de fuso e diviso prpria, observados unicamente em
microscopia electrnica.
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8.3. Metabolismo aerbio

A principal fonte de energia celular em clulas
no fotossintticas a glicose. A sua degradao
completa em dixido de carbono e gua est ligada
sntese de cerca de 32 ATP. Os primeiros estdios, em
clulas eucariticas, ocorrem no citosol levado sntese
de 2 ATP. Os estdios terminais ocorrem na
mitocndria, podendo levar produo de cerca de 30
ATP, embora a energia possa tambm ser utilizada para
produo de calor e transporte de molculas. De
qualquer das formas, a mitocndria pode ser
considerada como a bateria da clula.
As clulas utilizam ATP como fonte de energia imediata para a realizao de vrios processos
qumicos, mecnicos e osmticos. Em organismos aerbios, o piruvato completamente oxidado at
dixido de carbono e gua. Em clulas eucariticas, este processo ocorre nas mitocndrias e muito
importante na medida em que, como referido, proporciona a sntese de muito mais ATP do que o formado
durante a gliclise.
Assim, o metabolismo aerbio na mitocndria comea com a produo de acetil-CoA a partir de
piruvato, pelo complexo piruvato-desidrogenase. No entanto, a acetil-CoA pode tambm ser originada a
partir da oxidao de cidos gordos, por enzimas da matriz mitocondrial, e a partir de aminocidos,
representando assim um intermedirio central no metabolismo oxidativo da mitocndria. As principais
fontes da acetil-CoA so o piruvato e cidos gordos, que so selectivamente transportados do citosol, pois a
degradao de aminocidos ocorre principalmente no citoplasma.
Ciclo de Krebs
No ciclo de Krebs, a acetil-CoA posteriormente metabolizada numa srie de reaces sequenciais,
catalisadas por enzimas, conhecidas como o ciclo do cido ctrico ou ciclo de Krebs. Daqui resultam 3
molculas de NADH, 1 de FADH2, 1 de GTP e 2 de CO2. Alm destas, formam-se ainda mais duas molculas
que so muito importantes no metabolismo dos aminocidos. So elas o oxaloacetato e o alfasetoglutarato
que actuam como compostos intermedirios, da sntese dos aminocidos, para alm de fazerem parte do
prprio ciclo.
Fosforilao oxidativa
O NAD+ capta electres e transforma-se em NADH e capta protes e portanto tem a capaciade de se
transformar em NADH. O mesmo acontece com o FAD.
Ao haver a transferncia de electres ao longo da membrana, eles tornam-se cada vez menos
energticos. Existe tambm uma enzima na membrana interna, a ATP sintetase, que permite que os
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protes existentes em grande quantidade no espao intermembranar, consigam passar a favor do seu
gradiente para a matriz mitocondrial e quando isso acontece, o ADP transforma-se em ATP. Para alm
disso, tambm hidrolisa ATP consoante as condies da mitocndria, como as concentraes de ATP e o
gradiente electroqumico de protes.
Gradiente electroqumico de protes

Se os protes existentes na matriz passam para o espao intermembranar, cria-se um pH cido neste
local. Para alm disso, ocorre um aumento e consequente excesso de cargas positivas no espao
intermembranar, cuja diferena com as negativas, facilita o transporte de molculas para dentro e para
fora da matriz. O gradiente electroqumico gera um gradiente de pH atravs da membrana, e um potencial
de membrana atravs da membrana interna da mitocndria.
A dissipao deste gradiente (transporte de protes do espao intermembranar para a matriz
mitocondrial) utilizado por um complexo enzimtico da membrana interna (a ATP sintetase) para formar
ATP. No entanto, o gradiente electroqumico de protes no utilizado apenas para a sntese de ATP.
Conforme as necessidades especficas da clula, a energia armazenada usada para outras funes
importantes, como o transporte de molculas e ies para a mitocndria. Por exemplo, ela utilizada no
trasnpotre de ADP, fosfato, piruvato e clcio (importante regulador da actividade enzimtica).
O gradiente de pH serve para o transporte de piruvato para o interior da clula. No caso das clulas
eucariticas, o io transportado era o Na+ e nos procariotas era o H+. Aqui nas eucariticas, o io que vai ser
cotransportado o H+, logo o cotransporte simporte. O Pi vai ser transportado por simporte, transporte
activo secundrio e a favor do seu gradiente de concentrao.
Cadeia respiratria
A cadeia respiratria permite que a grande quantidade de energia libertada pela reduo de oxignio a
gua ocorra em vrias pequenas reaces de oxidao/reduo, de maneira a que possa ser armazenada
em vez de se dissipar sob a forma de calor. Cinco complexos enzimticos de mltiplas unidades
polipeptdicas (complexos I a V), juntamente com a ubiquinona (coenzima Q) e o citocromo c, constituem a
cadeia respiratria ou cadeia de transporte de electres. A maior parte dessas estruturas so componentes
intrnsecos da membrana interna mitocondrial.
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Ubiquinona (Coenzima Q) pequena molcula hidrofbica (membrana interna)

Citocromo c presente no espao intermembranar
NADH desidrogenase ou NADH reductase protenas com flavina, ferro e enxofre, que recebem os
electres do NADH
Succinato redutase protenas com ferro e enxofre
Complexo bc1 ou citocromo c reductase citocromos e protenas com ferro e enxofre
Citocromo c oxidase citocromos e protenas com cobre
8.4. ATP sintetase

O H+ existe em maior concentrao no espao intermembranar, existindo assim um canal que
permite a passagem de H+ para o interior da matriz, a favor do gradiente. Quando isto acontece, vai ser
accionado um mecanismo que faz com que a bomba funcione e produza energia suficiente para se ligar ao
Pi e, portanto, produzir ATP.
Assim sendo, esta molcula enzimtica reversvel, pois tanto sintetiza como hidroliza ATP.
Imaginando que ocorre uma acumulao de ATP, ou que, pelo contrrio, no existem ies H+, ou que as
concentraes de ADP e Pi dentro da matriz so baixas, o que vai acontecer que automaticamente a
bomba funciona em sentido contrrio para reequilibrar as concentraes de ADP, P i e ATP, originando
novamente um gradiente electroqumico de protes.
Com isto, conclui-se que este gradiente tem sempre de estar presente. Caso contrrio, todo o
mecanismo pra e a bomba deixa de funcionar, no havendo produo de ATP que necessrio para o
bom funcionamento da clula.
Atravs deste mecanismo, possvel compreender que a morte celular programada est
relacionada com a cadeia respiratria de electres, sendo que existe um conjunto de processos de
sinalizao neste processo. Molculas que se ligam membrana mitocondrial vo formar poros fazendo
com que o citocromo c passe para o citosol e deixe o espao intermembranar. Consequentemente, no vai
haver transferncia de electres, pelo que a sntese de ATP diminui e a clula ir sentir essa diferena.
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A mitocndria uma organela que contm DNA, que sofre replicao, sendo que esta no ocorre
s na fase S do ciclo celular mas tambm no ncleo. Esta replicao pode fazer-se ao longo de todo o ciclo,
sendo possvel que algumas molculas se repliquem mais que outras. No entanto, o factor mais importante
que ocorra a duplicao do DNA mitocondrial.
8.5. Interveno das mitocndrias no processo de transcrio

O processo de transcrio um processo simtrico, isto , s existe um promotor onde se vai ligar
a RNA polimerase e que vai transcrever toda a molcula de DNA. Seguidamente, ocorre o processamento,
originando as chamadas cadeia pesada e cadeia leve, que depois de processadas vo dar origem s
molculas de rRNA, mRNA e tRNA.
Sendo assim, a cadeia pesada origina:
2 rRNA que existem a nvel da mitocndria;
Todas as molculas de rRNA;
10 molculas de RNA poly-A (mRNA).
Por sua vez, a cadeia leve origina:
8 molculas de tRNA;
1 RNA poly-A (mRNA).
8.6. Semelhanas entre mitocndrias e clulas procariticas

Como provm de seres procariticos, tudo o que inibe a sntese proteica dos seres procariticos,
inibe tambm a sntese proteica do DNA mitocondrial. O principal exemplo so os antibiticos que
interferem com a sntese de protenas dos seres procariticos, porque tambm intervm com a sntese
proteica a nvel da mitocndria.
O incio da sntese das protenas e idntico pois no existe o cap e o codo AUG a provocar a
sntese, mas sim uma sequncia de 6 nucletidos que vo ser indicadores do incio da sntese das protenas.
Por outro lado, tambm tm alguns codes que so diferentes dos seres eucariticos, podendo ser lidos de
maneiras diferentes e originar molculas diferentes. Em suma, as principais semelhanas so: serem ambos
inibidores da sntese, controlarem o incio da sntese proteica e terem DNA circular.
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8.7. RNA e protenas mitocondriais

Existe um promotor e toda a molcula de DNA vai ser transcrita dando origem ao tRNA, rRNA e
depois aos RNA-polyA. Para ocorrer o processo de transcrio so necessrios factores de transcrio e
RNA polimerases provenientes do citosol e que vo ser transportadas para a mitocndria para intervirem
neste processo.
Os ribossomas so constitudos por RNA e protenas sintetizadas, no na mitocndria mas que
provm do citoplasma. Para se dar o processo de traduo, existem vrias enzimas, sendo as principais a
aminoacetilsintetase e a peptidiltransferase que so sintetizadas tambm no citosol.
Durante o processo de evoluo, houve transferncia de genes da mitocndria para o ncleo, pois
inicialmente todas as enzimas sintetizadas no citosol existiam nos seres procariticos que eram autonomos,
e que tinham ao nvel do DNA os genes que codificavam estas protenas. medida que houve evoluo
foram, ento, sendo transferidos para o ncleo.
9. Citosqueleto
Depois de um perodo em que o protoplasma foi descrito como uma substncia homognea e
transparente, comearam a surgir descries da presena, no seu seio, de elementos figurados sob a forma
de grnulos, fibrilas e vacolos. Na sequncia da observao, em vrios tipos celulares, da presena de
componentes fibrosos, surgiram duas teorias: a teoria fibrilar e a teoria reticular.
Em qualquer delas est implcita a existncia de uma armao estrutural ou citosqueleto. Para a teoria
fibrilar o protoplasma era formado por numerosas fibrilas entrecruzadas, no seio de uma substncia
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homognea. Segundo a teoria reticular, os filamentos constituam uma rede de elementos anastomosados.
As vrias teorias sobre a natureza do protoplasma, surgidas na sequncia da aplicao das mais variadas
tcnicas de colorao e de impregnao, foram entretanto sujeitas a intensa crtica pelos que consideravam
que os agentes utilizados alteravam as estruturas, produzindo artefactos.
Ncleo, organelos e outras formaes encontrar-se-iam includos no seio de uma substncia
transparente ou translcida, mais ou menos viscosa, o hialoplasma ou substncia fundamental. Hoje
sabemos que o citoplasma estruturado por um conjunto de estruturas filamentosas, de natureza
proteica, formando uma rede dinmica, altamente complexa e interdependente denominada citosqueleto.
As funes atribudas ao citosqueleto dependem no s das caractersticas dos seus elementos
constituintes, mas tambm das propriedades de um grande nmero de protenas acessrias que com ele se
associam, nomeadamente permitindo interaces entre os seus vrios elementos e destes com outras
estrturas celulares. Nos ltimos anos, a possibilidade de envolvimento de componentes do citosqueleto,
em funes menos bvias, como a transduo de sinais e o estabelecimento, manuteno e funo de
domnios citoplasmticos, nomeadamente atravs do envolvimento na segregao intracelular de
protenas e mRNA, tem aumentado ainda mais o interesse por este conjunto de estruturas. Morfolgica,
bioqumica e funcionalmente distinguem-se trs grandes sistemas de estruturas filamentosas: os
microtbulos, os filamentos de actina e os filamentos intermdios, que podem funcionar de modo
integrado, embora apresentem padres de organizao, dinmica e funes especficas.
9.1. Filamentos de actina / Microfilamentos
Constituio
Os microfilamentos ou filamentos de actina so estruturas filamentosas de cerca de 5-7 nm de
dimetro que se observam no citoplasma das clulas eucariticas sob a forma de feixes de filamentos
paralelos ou de redes de filamentos anastomosados.
So particularmente evidentes no citoplasma cortical, em estreita associao com a membrana e
no eixo de prolongamentos celulares. So constitudos fundamentalmente pela polimerizao de uma
protena globular denominada actina G, que uma das protenas mais abundantes nas clulas eucariotas,
originando filamentos de actina F.
A estrutura dos monmeros no conhecida, mas os dados existentes apontam para que tenham
forma em halter. Admitia-se que os microfilamentos eram constitudos por duas cadeias de actina F
enroladas helicoidalmente, mas a utilizao de tcnicas de reconstruo de imagem e de simulao por
computador indicam, como modelo mais provvel, o de um filamento helicoidal formado por uma cadeia
simples de monmeros.
A organizao espacial dos microfilamentos muito varivel e complexa nas clulas no
musculares. Nas regies submembranares do citoplasma, organizam-se em redes de malhas, mais ou
menos apertadas, em pequenos feixes ou, como acontece nos fibroblastos e em clulas em cultura
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constituindo feixes longos e densos as fibras de stress. Os feixes de microfilamentos que se observam no
eixo dos prolongamentos celulares tm aspecto varivel, caracterizando-se pelo nmero e regularidade de
orientao dos seus elementos.
Os microfilamentos encontram-se em todo o citoplasma, embora se localizem, preferencialmente,

na regio cortical das clulas, que a rea adjacente membrana plasmtica. Define-se, assim, uma rede
cortical de microfilamentos, que em associao com a miosina parece exercer papis importantes na
fagocitose, na citocinese (atravs do anel contrctil na zona de separao das duas clulas filhas) e na
locomoo celular.
Protenas de polimerizao e seus efeitos neste processo

Nos mecanismos de polimerizao e despolimerizao dos filamentos de actina, intervm vrias
protenas que se encontram associadas aos filamentos, sendo responsveis basicamente pela estabilizao
do filamento, pela regulao do seu comprimento e pela organizao espacial.
As protenas associadas que participam na regulao dinmica de polimerizao dos
microfilamentos actuam por vrios mecanismos:
Sequestrao de monmeros de actina G, limitando a sua polimerizao (Profilina)
Uma das protenas citoslicas que intervm na polimerizao dos microfilamentos a profilina que
tem a capacidade de se ligar aos monmeros de ATP-actina, formando um complexo estvel. Na maior
parte dos casos, a profilina pode moderar 20% da actina no-polimerizada nas clulas, sendo este um nvel
relativamente baixo para que actue como protena efectiva.
Inicialmente, a profilina promove o reconhecimento dos filamentos de actina como sendo um factor de
troca de nucletidos. Assim, s interage com componentes da membrana que estejam envolvidos em
sinalizao celular, o que sugere que ela seja particularmente importante no controlo do reconhecimento
da actina na membrana plasmtica.
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Associao lateral a segmentos dos filamentos, impedindo a sua fragmentao

Devido abundncia no citosol e habilidade de ligao ao complexo ATP-actina G (mas no actina F), a
timosina considerada a principal protena relacionada com a actina existente nas clulas. A sua ligao ao
ATP-actina G previne a sua polimerizao e, consequentemente, a timosina vai funcionar como um
moderador nos monmeros de actina num equilbrio em que um aumento da concentrao citoslica da
timosina ir provocar um aumento da concentrao das subunidades de actina e uma consequente
diminuio da concentrao de actina F.
Isto acontece na medida em que os filamentos de actina esto em equilbrio com os seus monmeros.
Este efeito da timosina nos nveis de actina F foram experimentados laboratorialmente em clulas vivas.
Ligao a uma extremidade dos filamentos de actina F, impedindo o crescimento ou dissociao

Por fim, o ltimo modo de actuao das protenas na polimerizao dos microfilamentos do
citosqueleto est relacionado com a inibio da formao da actina F, sendo que este processo ocorre
atravs da ADF (actin depolymerizing factor).
Modo de actuao
Quando se encontra associado a uma molcula de ATP um determinado monmero e ocorre a
polimerizao, d-se a hidrlise do ATP, formando-se um filamento de actina. A actina est associada
miosina, importante no contraco muscular, no movimento celular e na forma da clula. No caso dos
eritrcitos, a actina estava associada espectrina, tornando-se lgico que tenham aco na morfologia da
clula e quando recebem um estmulo exterior sofrem alterao e com isto induzem a alterao da
morfologia celular.
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A actina G associada molcula de ATP para se dar a polimerizaao e a despolimerizaao, e a

molcula de ADP tem de passar a ATP. Os filamentos de actina e os microtbulos contm, para estarem
estabilizados, outras molculas que podem associar-se ao filamento ou aos monmeros. As protenas
associadas aos filamentos podem impedir que o filamento sofra despolimerizao, regular o seu
comprimento e impedir que ocorra a substituio da molcula de ATP pela de ADP, ou pela organizao
espacial dos filamentos.
Nucleao dos filamentos de actina

Uma famlia de actin-related proteins (ARPs) exibindo 50% da sua sequncia como sendo similar
actina, foi identificada em vrios organismos eucariticos. Um dos principais grupos de ARPs, um complexo
de sete protenas, designado Arp 2/3, estimula a ligao da actina.
Isoladamente dos extractos celulares na base da sua habilidade para ligar a profilina, o complexo Arp
2/3 liga-se a 70 da parte lateral do filamento de actina para originar um filamento-filho. A combinao dos
filamentos-me e filho cria uma rede em que o complexo Arp 2/3 se encontra localizado nos pontos de
ramificao.
Assim, como resultado, os segmentos finais dos filamentos agora criados sofrem elongamento, e so
capazes de criar uma fora para empurrar a membrana para a frente. importante referir que a
ramificao estimulada pela famlia de protenas WASp, sob o controlo das GTPases. As protenas de
ligao das actinas como a filamina estabilizam a rede de ramificao onde as protenas de rompimento de
actina como a cofilina induzem a desconexo das estruturas previamente ramificadas.
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9.2. Microtbulos
Os microtbulos so estruturas tubulares com cerca de 25 nm de
dimetro. Em corte transversal, tm perfil circular, podendo reconhecer-se
uma zona central pouco densa com 15 nm de dimetro, limitada por uma
parede com 5 nm de espessura. Em corte longitudinal, isolados ou em feixe,
seguem trajectrias rectilneas ou ligeiramente curvas e tm aparncia
rgida, l ogo o seu com prim ento varivelpodendo atingir vrios m .
Foram inicialmente observados como componentes de estruturas
celulares complexas, como o centrolo, corpsculos basais, fibras de fuso e
axonemas de clios e flagelos. Os microtbulos citoplasmticos que se
observam isolados, em feixes paralelos ou constituindo conjuntos muito
ordenados so considerados como componentes do citosqueleto. O padro
da sua distribuio celular e as suas modificaes em diferentes situaes
so facilmente apreciadas pela tcnica de imunofluorescncia.
Basicamente, os microtbulos so constitudos pela polimerizao
de um heterodm ero de tubulina e tubulina , originando uma parede
constituda por 13 protofilamentos alinhados longitudinalmente. As tubulinas e so protenas
globulares, que nos vertebrados so codificadas por uma famlia de genes muito conservados durante a
evoluo.
Orientao celular dos microtbulos

Os microtbulos e os protofilamentos que os constituem so estruturas polarizadas cujas
extremidades tm propriedades diferentes, exibindo polaridade estrutural e funcional. extremidade a
que se associam preferencialmente novas subunidades d-se a designao de extremidade mais (+)
oposta de extremidade menos (-). A primeira capaz de crescimento mais rpido que a segunda, tendendo
esta at a perder subunidades caso no seja estabilizada.
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Na clula em interfase, os microtbulos esto organizados de modo polarizado, sendo que as

extremidades (+) apontam para a periferia celular e as extremidades (-) partem de uma regio que as
estabiliza. Esta regio, denominada centro organizador de microtbulos (MTOC) na maior parte das clulas
animais em ciclo celular, corresponde ao centrossoma.
Formao de um microtbulo
O primeiro passo no processo de formao de um microtbulo a nucleao, e requer a presena de
tubulina, Mg2+ e GTP, a uma temperatura de 37 C. Esta fase relativamente lenta at que o microtbulo
esteja a comear a formar-se. De seguida ocorre a segunda frase designada elongao, que ocorre de
forma muito mais acelerada.
Na nucleao, forma-se um heterodm ero devido juno de um a tubulina com um a tubulina .
Depois, este complexo anexa-se a outros dmeros para formar olgomeros, que se elongam para formar os
protofilamentos. Cada um dos dmeros transporta, normalmente, duas molculas de GTP que aparentam
ter funes de ligao s m olculas de tubulina .Q uando esta ligao ocorre,o G TP hidrolisado a G D P e
os olgomeros podem, por vezes, juntar-se a microtbulos j formados.
No interior da clula, os microtbulos formam-se numa rea junto ao ncleo, o MTOC. Quando o GTP
adicionado, tem a capacidade de quebrar o GDP, atravs da remoo de um grupo fosfato (P i).
Consequentemente, o papel usual da hidrlise do GTP pode actuar de forma a promover o constante
crescimento dos microtbulos medida que eles vo sendo necessrios na clula.
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Localizao dos microtbulos

Os microtbulos localizam-se como componentes do fuso acromtico, dos centrolos, dos clios, dos
flagelos e dos corpos basais. Assim sendo, as suas principais funes so:
Movimentos dos cromosomas durante a mitose;
Movimento das organelas;
Transporte intracelular de materiais;
Mobilidade intracelular;
Secreo de molculas.
Centros organizadores microtubulares

Centrossomas esto localizados num dos lados do invlucro nuclear. Embebido nos
centrossomas, est um par de centrolos, constitudo por nove grupos de 3 microtbulos. A matriz
pericentriolar constituda por protenas (tubulina ), parte do centrossom a responsvel pela nucleao
dos microtbulos. Devido ao fato de os microtbulos crescerem a partir do centrossoma, este , ento,
considerado um dos centros organizadores dos microtbulos.
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Corpos basais os microtbulos do axomea inserem-se a nvel citoplasmtico no corpo basal ou

cinetossoma. Este trata-se de um cilindro oco, cuja parede constituda por 9 tripletos de microtbulos.
Aos tripletos esto associadas inmeras outras protenas que constituem a matriz do corpo basal e que
asseguram, quer a sua fixao ao citosqueleto celular, quer a sua motilidade. O corpo basal possui vrias
actividades enzimticas, tais como a fosforilase de nuclesidos purnicos e a ATPase Ca 2+-Mg2+ dependente,
que se encontram envolvidas na transduco de sinais que regulam a motilidade celular.
Clios e flagelos - os clios so projeces citoplasmticas mveis, contendo no seu interior um
citosqueleto embebido por uma matriz proteica e rodeado por uma diferenciao da membrana celular. A
funo dos clios destina-se a facilitar a locomoo celular, e a deslocar fluidos ou clulas na superfcie das
clulas epiteliais. Os flagelos das clulas eucariticas possuem uma estrutura semelhante dos clios,
encontrando-se nos protozorios flagelados, clulas vegetais. Contudo, so mais longos em geralmente, em
menor nmero. Assim sendo, os clios tm movimento em chicote, enquanto que os movimentos flagelares
so do tipo sinusoidal. A organizao ultrastutural do citosqueleto do clio ou do flagelo designa-se
axonema.
Protenas associadas aos microtbulos

O estudo da formao de microtbulos in vitro, a partir de tubulina purificada, levou identificao de
um conjunto de protenas que co-polimerizam com a tubulina. Genericamente, estas protenas
denominam-se protenas associadas aos microtbulos, por a eles se ligarem in vitro e in vivo. Estas
protenas podem interferir com a ligao dos microtbulos a outras estruturas celulares, ou com a dinmica
de polimerizao e despolimerizao, permitindo, deste modo, a modulao das suas funes.
Foram isoladas e caracterizadas duas classes dessas protenas: as MAP (Microtubule Associated
Proteins) e as tau (Low Molecular Weight Proteins). Adicionadas a solues purificadas de tubulina, as MAP:
Baixam a concentrao crtica necessria formao dos microtbulos
Favorecem o seu crescimento e diminuem a taxa da sua dissociao.
Correspondem s projeces laterais (braos) que se observam na superfcie exterior dos
microtbulos.
Alm de controlarem a sua formao e estabilizao, participam nas ligaes cruzadas entre
microtbulos vizinhos, com formao de feixes e na ligao de microtbulos a outras estruturas
celulares.
Funcionam como alvos dos sinais intracelulares (cAMP, Ca2+) que regulam a organizao
estrutural e funcional dos microtbulos, sendo possvel que s diferentes espcies moleculares destas
protenas correspondam localizaes e funes especficas.
Em sentido lato, podemos tambm considerar, como protenas associadas aos microtbulos, as
denominadas motores moleculares, que:
So enzimas que associam a energia libettada pela hidrlise de nucletidos produo de
movimento vectorial ao longo da rede celular de microtbulos, conferindo assim movimento
intracelular a vesculas e organelos.
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Ligam-se por uma das extremidades ao microtbulo e pela outra estrutura que se
movimenta.
So dependentes dos microtbulos os movimentos, em ambos os sentidos, que se observam
entre o corpo celular e aqueles prolongamentos.
Existem, ento, dois tipos de protenas motoras associadas aos microtbulos:
Dinenas possibilitam o movimento em direco extremidade (-);
Cinesinas possibilitam o movimento em direco extremidade (+).
Efeito de drogas
So conhecidas vrias drogas que interferem in vitro e in vivo no estado de polimerizao da tubulina.
A mais conhecida a colchicina, que inibie in vitro a polimerizao da tubulina e provoca in vivo a
dissociao dos microtbulos citoplasmticos. As molculas de colchicina ligam-se com grande afinidade
aos dmeros de tubulina inibindo a sua polimerizao.
Tambm a vinblastina se liga s molculas de tubulina impedindo a sua polimerizao e originando a
formao de agregados paracristalinos desta protena.
Em contraste com os anteriores, existe o taxol, que se associa a polmeros de tubulina, com uma aco
estabilizadora. Assim, baixa a concentrao crtica de tubulina necessria polimerizao, que promove
mesmo em condies desfavorveis (ausncia de MAP e GTP, baixas temperaturas).
A utilizao experimental destas substncias tem sido muito proveitosa nos estudos sobre a formao
e funes dos microtbulos.
9.3. Filamentos intermdios

Os filamentos intermdios so estruturas formados por membros de uma famlia de protenas
relacionadas entre si. Os filamentos intermdios tm um dimetro compreendido entre o dos
microfilamentos e os microtbulos. A maior parte dos filamentos interdios esto localizados no citosol
entre o envelope nuclear e a membrana celular, sendo que as lminas nucleares se encontram no ncleo
da clula. Normalmente, os filamentos intermdios so abundantes nas clulas sujeitas a um stress
mecnico.
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Estrutura
A estrutura dos filamentos intermdios extremamente condensada. Cada protena tem um domnio
globular nos terminais N e C, que rodeiam o domnio hlice-.O bloco bsico de construo dos filam entos
intermdios um dmero paralelo, formado atravs da interaco da cadeia hlice- para form ar um
conjunto de estruturas enroladas entre si. Os filamentos intermdios citoplasmticos ligam-se s unidades
no-polares dos filamentos que, de seguida, se ligam a estruturas de maior comprimento.
A orientao anti-paralela dos tetrmeros significa que ao controlo dos microtbulos e dos
microfilamentos que apresentam uma extremidade positiva e uma negativa, os filamentos intermdios no
tm qualquer polaridade.
Geralmente, os microtbulos no existem nas plantas nem nos fungos, e a sua formao no envolve a
hidrlise do ATP ou do GTP.
Quanto aos filamentos intermdios da membrana plasmtica, algumas citoqueratinas interagem como
desmossomas (adeso clula-clula) e hemidesmossomas (adeso clula-matriz) atravs de protenas
adaptadoras.
Tipos de filamentos intermdios

Existem cerca de 70 genes diferentes que codificam vrias protenas dos filamentos intermdios. No
entanto, diferentes tipos de filamentos intermdios partilham caractersticas bsicas: todos so polmeros
que geralmente medem entre 9 e 11 nm de dimetro quando se encontram completamente ligados. Os
filamentos intermdios encontram-se subdivididos em cinco tipos, com base nas semelhanas nas
sequncias dos aminocidos e na estrutura da protena.
Tipos 1 e 2 Citoqueratinas cidicas e bsicas-neutras so as mais diversas dentro dos filamentos
intermdios, estando as diferentes isoformas divididas em dois grupos:
Citoqueratinas epiteliais
Citoqueratinas tricocticas
Tipo 3 constitudo por 4 protenas que podem formam protenas homo ou heteropolimricas:
desmina, vimentina, protena acdica fibrilar e periferina.
Tipo 4 constitudo pelas 3 protenas dos neurofilam entos,a nestina e a -internexina.
Tipo 5 constitudo pelas lminas nucleares.
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Captulo 8 Junes celulares e adeso celular

Uma juno celular uma estrutura situada num tecido de um organismo multicelular. As junes
celulares so particularmente abundantes nos tecidos epiteliais e consistem em complexos basicamente
proteicos que induzem o contacto entre clulas vizinhas, entre uma clula e a matriz extracelular ou ento
a construo de barreiras paracelulares de tecido epitelial, controlando o transporte paracelular.
Normalmente, as junes celulares permitem:
Conferir uma maior fora e rigidez aos tecidos;
Transferir a informao entre os espaos intra e extracelular;
Controlar a passagem de molculas ou ies atravs de camadas celulares;
Movimentar ies e molculas entre citoplasmas de clulas vizinhas.
Nos vertebrados, existem trs principais tipos de junes celulares:
Junes de ancoragem;
Junes comunicantes;
Junes apertadas.
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Captulo 8 Junes celulares e adeso celular |
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1. Organizao dos tecidos

No nosso organismo coexistem vrios tipos de tecidos, sendo os mais abundantes o muscular, o
epitelial, o sanguneo, o linfide e o conjuntivo. Todos eles so constitudos por clulas e a forma como eles
mantm as clulas ligadas varia de tecido em tecido.
O tecido epitelial constitudo por clulas polarizadas, sendo que a zona apical diferente da zona
basolateral. As protenas podem mover-se ao longo da membrana, mas h determinadas clulas em que
isso no acontece e um desses grupos o das clulas epiteliais que intervm nas junes celulares.
2. Junes de ancoragem
Estas junes celulares ligam as clulas e o seu citosqueleto a clulas vizinhas ou matriz extracelular.
So maioritariamente abundantes em tecidos que esto submetidos a um stress mecnico severo, como
num msculo cardaco.
Nas junes de ancoragem intervm dois principais tipos de protenas:

Protenas de aderncia intracelular formam um placa no lado citoplasmtico da membrana
plasmtica e ligam-se a filamentos de actina ou a filamentos intermdios.
| Captulo 8 Junes celulares e adeso celular
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Protenas de adeso transmembranares contm um domnio extracelular que se liga matriz

extracelular ou a domnios extracelulares de protenas de adeso transmembranares da outra
clula. A zona intracelular da protena liga-se a protenas de aderncia intracelular.
Assim sendo, existem vrios subtipos das junes de ancoragem, sendo as principais as junes de
aderncia, os desmossomas, os hemidesmossomas e as junes focais.
Junes de aderncia
As junes de aderncia so localizadas abaixo das junes
ocludentes nos tecidos epiteliais. Rodeiam completamente as clulas,
constituindo como que um cinto volta destas. As junes de aderncia
so uma complexa estrutura formada pelas membranas das clulas
adjacentes, em que as protenas integrais pertencem famlia das
caderinas.
As extremidades das caderinas de cada membrana interpenetram-se
no espao intracelular, constituindo a poro aderente da estrutura. A
outra extremidade das caderinas liga-se em cada uma das clulas
adjacentes a protenas do grupo das cateninas e .
Do ponto de vista molecular, estas junes subdividem-se em dois
grupos: o primeiro composto pelas que contm vinculina e talina, e o
segundo pelas que no contm a protena de 135 kDa, logo conclui-se que as protenas de aderncia se
ligam aos filamentos de actina.
Desmossomas
Estas estruturas ocorrem nas membranas de duas clulas vizinhas, nomeadamente em epitlios. So
constitudos por duas placas densas, situadas na poro citoplasmtica adjacente s membranas celulares
das duas clulas vizinhas.
Nos desmossomas, as protenas de aderncia ligam-se a filamentos intermdios.
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Hemidesmossomas
So junes morfologicamente semelhantes a desmossomas,
mas qumica e funcionamente diferentes. Ligam a superfcie basal
das clulas epiteliais lmina basal subjacente. Os
hemidesmossomas contm vrios polipeptdeos, como por
exemplo as integrinas que atravessam a membrana celular e se
projectam para a lmina basal.
Junes focais
So junes semelhantes aos hemidesmossomas, diferindo
apneas nos filamentos de citosqueleto durante o processo de
juno. Assim sendo, enquanto que nos hemidesmossomas ocorre
nos filamentos intermdios, nas junes focais ocorre nos
microfilamentos.
3. Junes comunicantes
As junes comunicantes so estruturas presentes em muitos tecidos e em quase todas as espcies
animais. Ao microscpio electrnico, observam-se zonas onde as membranas de duas clulas adjacentes
ficam separadas por um interstcio. As junes de cada uma das membranas so constitudas por molculas
proteicas transmembranares que formam estruturas designadas por conexes, cada um formado por seis
protenas idnticas, aderentes entre si.
Estas protenas pertencem famlia das conexinas, as quais consistem, nas clulas humanas, pelo
menos em 13 protenas diferentes. As conexes de duas clulas vizinhas formam um canal contnuo que
conecta as duas clulas vizinhas.
As junes comunicantes permitm a comunicao entre as clulas com passagem de pequenas
molculas ou ies. So estruturas dinmicas que abrem ou fecham sob aco de modificaes celulares. O
aumento de Ca2+ citoplasmtico, ou a diminuio de pH intracelular diminuem a permeabilidade das
junes. As propriedades funcionais das junes comunicantes so fundamentais na contraco cardaca,
nos movimentos peristlticos do intestino, na embriognese, e na diferenciao das clulas germinais.
A passagem inica condiciona uma corrente elctrica, pelo que tambm so conhecidas por sinapses
elctricas.
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4. Junes apertadas
As junes apertadas ou junes tight encontram-se
frequentemente na poro apical lateral das clulas epiteliais de
revestimento, sendo constitudas por bandas finas que rodeiam
completamente as clulas e contactam com estruturas idnticas de
clulas adjacentes.
Vistas ao microscpio electrnico, aparecem como uma srie de
ligaes entre os folhetos externos das membranas de clulas
adjacentes, tornando o espao intercelular impermevel a
molculas, sais e mesmo ies. A observao de microfotografias de
tecidos tratados com substncias coloidais de peso molecular ele
vado mostra o espao intracelular preenchido por este produto
opaco aos electres, excepto ao nvel das junes ocludentes.
As partculas intramembranares so de natureza proteica
protenas integrais e esto presentes em cada uma das membranas das clulas adjacentes. Entre as mais
importantes protenas destacam-se as claudinas (essenciais para a formao e funo das junes) e as
ocludinas (que apresentam funo desconhecida). No entanto, j foram tambm identificadas outras
protenas como a ZO-1 e a ZO-2, sendo que no ponto de contacto entre as protenas integrais de cada
membrana adjacente, o espao intercelular nulo e um ponto completamente impermevel passagem
de substncias do lmen para o espao intercelular.
5. Molculas de adeso
A adeso celular no ocorre exclusivamente atravs das junes celulares mas tambm a partir de
molculas de adeso que existam nas membranas celulares. Todas as molculas de adeso so CAMs (cell
adhesion molecules) existindo, ento, vrias classes de CAMs consoante a sua dependncia relativamente
ao clcio.
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Consoante o tipo de molculas que existam nas duas membranas das clulas, ou entre a membrana da
clula e a matriz extracelular, formam-se interaces homoflicas (caso as duas molcuas sejam iguais) ou
heteroflicas (caso as duas molculas sejam diferentes). Existe ainda um terceiro caso possvel em que as
duas molculas atravs uma outra atravs da aco de uma molcula ligante proveniente do meio
extracelular.
5.1.
Selectinas
As selectinas constituem uma das famlias das CAMs que esto relacionadas com as interaces
leuccitos-clulas vasculares. Um jogador-chave nestas interaces a selectina-P que se encontra na
superfcie das clulas endoteliais.
Todas as selectinas contm um domnio dependente do Ca2+, localizado na extremidade mais
afastada da regio extracelular da molcula e reconhece oligossacardeos em glicoprotenas ou glicolpidos.
Assim, as selectinas podem ser caracterizadas como sendo protenas transmembranares que ligam hidratos
de carbono (lectinas) em clulas.
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So consideradas importantes nas interaces referidas leuccitos-clulas endoteliais dos vasos

sanguneos (ligao fraca e reversvel), permitindo a migrao dos leuccitos para os tecidos. Tendo em
conta esta caracterizao, conclui-se que as selectinas actuam conjuntamente com as integrinas e que
existem trs principais tipos de selectinas: selectina-L (leuccitos), selectina-P (plaquetas) e selectina-E
(clulas endoteliais activas).
Migrao dos leuccitos atravs dos vasos sanguneos

(1) Na ausncia de qualquer inflamao ou infeco, os leuccitos e as clulas endoteliais das paredes
dos vasos sanguneos encontram-se em estado de repouso.
(2) Um conjunto de sinais inflamatrios libertado em reas susceptveis de leso e activa as clulas
endoteliais que se encontravam em descanso, para que estas movam as selectinas para a superfcie celular.
As selectinas agora expostas, medeiam a ligao dos leuccitos atravs da interaco de ligandos de
hidratos de carbono com os leuccitos. A activao do endotlio tambm provoca a sntese do PAF
(platelet-activating factor) e do ICAM-1, que se vo expressar na superfcie celular. O PAF e outros
activadores normalmente secretados, induzem depois alteraes na form a dos leuccitos, com o a L2,
que se expressa atravs de linfcitos T. (3)
A ligao subsequente que se verifica entre as integrinas activadas nos leuccitos e as CAMs no
endotlio, resulta numa adeso firme (4) e movimento consequente (extravaso) para o tecido (5).
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5.2. Caderinas
As caderinas so molculas-chave na adeso clula-clula e na sinalizao
celular e desempenham um papel extremamente importante durante a
diferenciao e manuteno da integridade dos tecidos.
As caderinas E- (epitelial), P- (placenta e epiderme) e N- (nervos e msculos)
so as caderinas clssicas, sendo as mais frequentemente expressas,
particularmente durante o incio da diferenciao. Folhas de clulas epiteliais
polarizadas contm, normalmente, caderina-E em quantidades abundantes, ao
longo das suas superfcies laterais. No entanto, ainda que a caderina-E esteja
concentrada nas junes de aderncia, ela tambm est presente ao londo das
superfcies laterais onde se pensa que ela se liga s membranas celulares
adjacentes.
Por sua vez, as caderinas no-clssicas so as caderinas dos desmossomas.
Os domnios citoslicos das caderinas no-clssicas interagem com a placoglobina
(que sim ilar em estrutura a -catenina) e com placofilinas. Estas protenas
adaptadoras que formam pequenas placas citoplasmticas so caractersticas dos
desmossomas que interagem com os filamentos intermdios. Consequentemente,
pode concluir-se que os desmossomas e as junes de aderncia esto ligados a
fibras de citosqueleto diferentes.
Na membrana plasmtica, as caderinas associam-se entre si e formam dmeros ou olgomeros, ou
seja, existem ligaes homoflicas.
5.3. Protenas de adeso da superfamlia das imunoglobulinas

Numerosas protenas transmembranares caracterizadas pela presena de vrios domnios de
imunoglobulina nas suas regies extracelulares, constituem a superfamlia das IgCAMs.
O domnio Ig uma protena comum, que contm entre 70 e 110 resduos e que inicialmente foi
identificada em anticorpos. Dentro de todas as IgCAMs existem as seguintes:
NCAMs (neural CAMs) ligam clulas atravs de mecanismos homoflicos e tm um papel
importante na diferenciao das clulas musculares e nervosas. Por vezes podem conter cido
silico, impedindo a adeso celular.
ICAMs (intercellular CAMs) transportam os leuccitos para os tecidos e ligam clulas atravs de
mecanismos heteroflicos.
JCAMs (junction CAMs) fazem parte das junes apertadas.
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2006/2007
5.4. Integrinas
As integrinas compreendem protenas integrais heterodimricas
que funcionam como receptores de adeso, mediando vrias interaces
clula-matriz. Nos vertebrados, so conhecidas pelo menos 24
heterodm eros de integrinas, com postos por 18 tipos de subunidades e
8 tipos de subunidades .
Assim , um a cadeia sim ples pode interagir com qualquer uma
das cadeias , form ando integrinas que ligam diferentes ligandos. Este
fenmeno de diversidade combinatria permite um nmero
relativamente baixo de componentes para servir um grande nmero de
diferentes funes.
Para alm disso, as integrinas ligam-se s lamininas, fibronectina
da matriz extracelular e aos filamentos de actina no lado citoslico, com
excepo dos hemidesmossomas que se ligam aos filamentos
intermdios.
As integrinas so ainda responsveis pela activao de vias de sinalizao intracelular e por
processos de sobrevivncia celular (clulas endoteliais, musculares e epiteliais).
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2006/2007
Captulo 9 Matriz extracelular

A matriz extracelular formada por um conjunto extremamente diversificado de molculas localizadas
nos espaos intercelulares dos tecidos, as quais tm a capacidade de interagir formando agregados
tridimensionais complexos, ligando-se ainda a receptores celulares especficos.
A matriz extracelular encontra-se particularmente desenvolvida em tecidos que desempenhem
predominantemente funes mecnicas ou de suporte, como por exemplo os que constituem os tendes,
ossos, cartilagens ou cpsulas fibrosas de diversos rgos, que se designam tecidos conjuntivos. No
entanto, todos os tipos celulares tm a capacidade de sintetizar e secretar componentes da matriz, pelo
que aquele territrio extracelular se pode encontrar, em maior ou menor abundncia, na globalidade dos
tecidos.
O que sucede que tanto do ponto de vista quantitativo como qualitativo, a matriz extracelular varia de
tecido para tecido. Neste contexto, consideram-se dois grandes territrios na matriz extracelular, os
comparimentos intersticial e o pericelular.
Compartimento intersticial - est fundamentalmente vocacionado para o desempenho de
funes estruturais, sendo especialmente abundante nos tecidos conjuntivos.
Compartimento pericelular est fundamentalmente envolvido em processos de modulao
do comportamento celular, nomeadamente em fenmenos de adeso, migrao,
proliferao/apoptose e diferenciao celular. Existe em todos os tecidos e influencia a
expresso gentica das clulas que com ele contactam. So exemplos de matrizes pericelulares,
as lminas basais, o glicoclice e a zona pelcida.
Em suma, as principais funes da matriz extracelular so:
Organizar os tecidos quanto sua forma e funo;
Coordenar as funes celulares activando as vias de sinalizao celular que controla (sobrevivncia,
proliferao e diferenciao).
As principais molculas que intervm na ligao clula-matriz so as integrinas e as molculas mais
abundantes so os proteoglicanos e o colagnio, mas tambm existem outras bastante conhecidas e
importantes.
| Captulo 9 Matriz extracelular
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2006/2007
Comparao entre forma e tamanho das macromolculas da matriz extracelular
1. Glicosaminoglicanos (GAG)
Os glicosaminoglicanos so polissacardeos complexos, geralmente de cadeia linear e elevado peso
molecular, existentes na matriz extracelular e superfcie das clulas, nomeadamente entrando na
constituio das lminas basais e do glicoclice. Podem ainda ocorrer intracelularmente e, em situaes
patolgicas, ser a acumulados.
So polmeros resultantes da repetio de um dissacardeo formado por uma N-acetilhexosamina (Nacetilglucosamina ou N-acetilgalactosamina) e um cido urnico segundo padres que, por serem
caractersticos, permitem subdividir os GAG em vrias populaes distintas.
O cido hialurnico talvez o nico GAG que, nos sistemas biolgicos, no se encontra associado a
protenas por ligaes covalentes. Todos os outros apresentam-se, geralmente, ligados a um componente
prtico, associao esta que origina macromolculas designadas proteoglicanos, descritos seguidamente.
2. Proteoglicanos
Os proteoglicanos so um subconjunto das glicoprotenas que contm cadeias polissacardicas
covalentemente ligadas os glicosaminoglicanos.
Tal como outras glicoprotenas, os proteoglicanos so sintetizados no retculo endoplasmtico, e
apresentam, tambm, cerca de 80% a 90% da molcula constituda por acares e apenas uma pequena
parte de protenas, o que confere uma cadeia no ramificada e com uma constituio especfica (por ser
constituda por dissacardeos especficos).
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Captulo 9 Matriz extracelular |
2006/2007
A sua cadeia polissacardica liga-se a um resduo de serina e constituda por xilose, duas molculas de
galactose e cido glucurnico, a que se seguem sequncias repetidas de unidades dissacardicas.
Os proteoglicanos so secretados pelas clulas que existem no tecido os fibroblastos. As principais
funes dos proteoglicanos so:
Regular o trfico de molculas com base no seu tamanho e carga;
Controlar a sinalizao celular;
Regular a actividade das molculas secretadas.
Tendo em conta a sua constituio, os proteoglicanos podem estar ligados s membranas atravs da
sua parte proteica ou ligados ao glicosilfosfatidilinositol (GPI).
Exemplos: agrecano (cartilagem), perlicano, decorina e sindecano (membranas).
3. Colagnio
O colagnio uma protena extracelular fibrosa que desempenha inequvocas funes estruturais, e nas
quais uma parte aprecivel das suas molculas tem uma conformao em tripla hlice, que lhe confere
uma rigidez considervel.
A formao da tripla hlice est relacionada com a estrutura primria e modificaes ps-traduo que
ocorrem nas trs cadeias polipeptdicas de cada molcula de glicognio as cadeias . A estrutura primria
destas cadeias maioritariamente formada por uma sequncia de trs resduos de aminocidos Glicina,
X, Y. Nas regies X e Y, designadas por domnios colagnicos, os aminocidos colocados so
frequentemente a prolina e a hidroxiprolina, respectivamente.
Reconhecem-se, actualmente, cerca de 20 tipos de colagnio, distintos tanto na constituio das suas
cadeias com o na sua capacidade de polim erizao, na sua localizao e nas suas funes especficas.
Admite-se que os colagnios mais abundantes so dos tipos I, II e III, sendo que os V e XI tambm entram
na composio de fibrilas cilndricas que apresentam uma periodicidade transversal as fibrilas nativas. A
excepo o colagnio tipo IV que um dos principais constituintes das lminas basais, sendo que da sua
polimerizao no resultam fibrilas, mas sim uma malha molecular que interage com outros constituintes
das lminas basais.
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Sntese do colagnio
Os colagnios so habitualmente secretados sob a forma de precursores, os procolagnios, sendo estes
posteriormente clivados extracelularmente para dar origem s molculas de colagnio propriamente ditas,
tambm designadas por tropocolagnios. As molculas de colagnio tm a capacidade de polimerizar
espontaneamente e de forma muito ordenada, originando as fibras de colagnio.
Os vrios passos da biossntese podem ser descritos da seguinte forma:
1 - As cadeias de procolagnio so sintetizadas nos ribossom as associados m em brana do retculo
endoplasmtico e os oligossacardeos de asparagina so adicionados ao terminal C do propptido. 2 - Os
propptidos associam-se para formar trmeros e esto covalentemente ligados atravs de pontes dissulfito,
sendo que os resduos no tripleto Gly-X-Y esto covalentemente modificados. 3 - As modificaes facilitam
a formao da tripla hlice e a sua estabilizao, assim como a ligao de uma protena chaperona (Hsp47)
que estabiliza as hlices ou previne a agregao prematura dos trmeros. 4 e 5 Os procolagnios formados
so transportados para e atravs do complexo de Golgi, onde ocorre a associao lateral a pequenos feixes.
As cadeias so ento secretadas (6), os terminais N e C dos propptidos so removidos (7) e os trmeros
renem-se em fibrilas e so covalentemente ligados (8).
4. Fibronectinas
Vrios tipos de clulas sintetizam a fibronectina, uma protena abundante na matriz extracelular em
todos os vertebrados.
As fibronectinas so essenciais para a migrao e diferenciao de vrios tipos de clulas na
embriognese. Estas protenas so tambm importantes no anexo das clulas matriz extracelular atravs
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da ligao a outros componentes da matriz, particularmente s fibrilas de colagnio, proteoglicanos de

sulfato de heparano ou at os receptores de adeso como as integrinas.
Fisicamente, as fibronectinas so dmeros de dois polipptidos semelhantes ligados ao terminal C,
atravs de duas pontes dissulfito, que podem existir sob vrias isoformas: forma solvel ou de fibrilas
insolveis (neste caso necessitam de outras protenas).
5. Lmina basal
Nos animais, o epitlio e outros grupos organizados de clulas esto rodeados pela lmina basal, uma
espcie de folha de componentes da matriz extracelular.
A lmina basal encontra-se diferentemente estruturada, consoante os tecidos. Assim, a lmina basal
desempenha as seguintes funes:
Papis bastante importantes na regenerao, depois de os tecidos serem danificados;
Importante no desenvolvimento embrionrio, ao auxiliar os embries de 4 e 8 clulas a
aderirem, formando as esferas embrionrias;
Determina a polaridade celular;
Influencia o metabolismo celular.
A maior parte dos componentes da lmina basal so sintetizados por clulas que nela permanecem.
Assim, existem quatro principais componentes que constituem a lmina basal:
Colagnio tipo IV
Laminina
Perlicano
Glicoprotenas
Degradao da lmina basal

Os processos de degradao da lmina basal iniciam-se extracelularmente com a disrrupo parcial das
fibrilas de colagnio por um conjunto de colagenases da grande famlia das metaloproteases da matriz
(MMP) dependentes do clcio e do zinco, sendo completado intracelularmente aps fagocitose dos
resduos inicialmente obtidos.
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A laminina tem receptores presentes junto ao colagnio tipo IV que vo ser reconhecidos por
molculas presentes na lmina basal. Devido presena da colagenase que mantm a estrutura da lmina
basal atravs da facilitao da migrao, a lmina basal digerida progressivamente depois da fagocitose
dos resduos. Com este mecanismo, criam-se fendas ao longo da lmina basal, permitindo a migrao das
molculas e a consequente degradao total da lmina a partir do lado intracelular.
6. Laminina
A laminina a principal protena da matriz na lmina basal, sendo uma protena heterotrimrica, com
elevado peso molecular. Existem vrias isoformas de laminina, contendo cadeias polipeptdicas
ligeiramente diferentes.
Alguns dom nios globulares no term inal C da subunidade da lam inina m edeiam as m olculas
dependentes de Ca2+ e a ligao de hidratos de carbono especficos a molculas especficas da superfcie
celular como o sindecano e o distroglicano. Os domnios globulares encontram-se numa grande variedade
de protenas e podem mediar a ligao a esterides, protenas e at hidratos de carbono.
Quanto s funes, intervm na:
Regulao da passagem de nutrientes;
Organizao de tecidos;
Selectividade do movimento das clulas.
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Captulo 10 Comunicao extracelular

Os mecanismos de comunicao celular dependem, basicamente, de molculas sinalizadoras
extracelulares, produzidas pelas clulas, para sinalizar s suas vizinhas ou s clulas mais distantes. Eles
dependem, tambm, de sistemas proteicos elaborados existentes nas clulas que lhes permitem
responder, de forma especfica, a determinados subgrupos desses sinais.
Essas protenas vo desde receptores de superfcie celular que se ligam molcula sinalizadora at uma
variedade de protenas sinalizadoras intracelulares que distribuem o sinal para regies adequadas da
clula. Entre as protenas sinalizadoras intracelulares encontram-se quinases, fosfatases, protenas que se
ligam a GTP e muitas outras protenas com as quais essas interagem. No final de cada uma destas rotas de
sinalizao encontra-se as protenas-alvo que so alteradas quando o caminho est activo, mudando o
comportamento da clula. Dependendo do efeito, essas protenas-alvo podem ser reguladoras de genes, de
canais inicos, componentes de uma rota metablica, de partes do citosqueleto, etc.
Os mecanismos que permite que uma clula exera influncia sobre o comportamento de outra
existiam, provavelmente, no mundo dos organismos unicelulares muito tempo antes do aparecimento dos
organismos pluricelulares.
1. Sinais extracelulares
A maneira especfica pela qual a clula reage ao seu
ambiente varivel. Ela varia de acordo com o conjunto de
protenas receptoras que a clula possui, o que determina o
subgrupo particular de sinais ao qual ela pode responder, o
que, por sua vez, varia de acordo com a maquinaria
intracelular, por meio da qual a clula integra e interpreta os
sinais que recebe.
Cada tipo celular exibe um conjunto de receptores que o
torna capaz de responder a um conjunto de molculas
sinalizadoras produzidas por outras clulas. Estas molculas
regulam o comportamento celular, trabalhando de forma
coordenada. Como est exibido na figura, uma clula
necessita de mltiplos sinais para sobreviver (setas azuis) e
sinais adicionais para se dividir (seta vermelha) ou diferenciar (setas verdes). Se a clula for privada dos
sinais de sobrevivncia apropriados, ela sofre uma forma de suicdio conhecido por morte celular
programada, ou apoptose.
| Captulo 10 Comunicao extracelular
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Activao da sinalizao intracelular

Depois de passar o receptor, vo existir no interior da clula, protenas que vo desencadear uma srie
de reaces. As protenas so as cinases que induzem a fosforilao de outras molculas, as fosfatases que
desfosforilaram, e protenas G que tm a capacidade de ligar o GTP ou o GDP e so molculas que so
activas em GTP ou inactivas em GDP.
Para alm destas protenas, existem tambm mensageiros que actuam a vrios nveis: nvel de
protenas de factores de transcrio, nvel de protenas que intervm no metabolismo ou podem alterar as
protenas que fazem parte do citosqueleto. Quando se ligam a estas molculas, alteram a transcrio
gentica, activando ou reprimindo a expresso de um determinado gene, permitindo a sntese ou no de
uma determinada protena. Ao ligar-se ao citosqueleto, alteram tambm a forma dessa mesma clula.
A resposta da clula a um sinal extracelular est dependente dos receptores que ela tem. Por outro
lado, a via de transduo de sinal, porque existem vrias, e quando a molcula se liga ao receptor pode
induzir a activao de vrias vias e portanto conforme a via activada, existe uma resposta diferente.
Consoante a via de activao, os processos intracelulares afectados tambm vo ser diferentes, logo uma
molcula extracelular ao ligar-se ao receptor duma cula, nao vai sempre induzir as mesmas respostas do
que quando se liga a outra clula resposta diferente consoante o tipo de clula.
2. Formas de sinalizao
Sinalizao dependente de contacto muitas molculas
sinalizadoras permanecem ligadas superfcie das clulas e influenciam
somente clulas que estabelecem contacto. Esta sinalizao importante,
especialmente durante o desenvolvimento e na resposta imunitria.
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Captulo 10 Comunicao extracelular |
2006/2007
Sinalizao parcrina as molculas sinalizadoras so

secretadas e podem ser levadas para longe, actuando em alvos
relativamente distantes, ou podem agir como mediadores locais
afectando apenas as clulas que esto muito prximas da clula
sinalizadora. Para que os sinais parcrinos possam ser recebidos
s pelas clulas-alvo adequadas, as molculas secretadas devem
ter sua difuso restrita; por isso elas so, com frequncia,
captadas rapidamente pelas clulas-alvo das vizinhanas, destrudas por enzimas extracelulares ou
imobilizadas pela matriz extracelular.
Sinalizao sinptica nos organismos multicelulares

bastante complexos, os grupos de clulas especializadas
evoluram com a funo especfica de estabelecer comunicao
entre partes distantes do corpo. As mais sofisticadas so as
clulas nervosas (neurnios), que estendem longos
prolongamentos (axnios) que lhes permitem entrar em
contacto com clulas-alvo distantes. Quando activado por sinais do meio ou de outras clulas, o neurnio
envia impulsos elctricos (potenciais de aco) ao longo do seu axnio; quando um impulso desse tipo
chega extremidade do axnio, promove a secreo pelos terminais nervosos a localizados, de um sinal
qumico chamado neurotransmissor. Esses sinais so secretados em junes celulares especializadas,
chamadas sinapses qumicas, desenhadas de forma a assegurar que o neurotransmissor seja liberado
especificamente na clula-alvo ps-sinptica.
Sinalizao endcrina - uma clula sintetiza uma
determinada substncia que tem de passar a corrente
sangunea e s depois que vai actuar em clulas-alvo que
esto muito distantes. Se umas molculas so sintetizadas e
passam a corrente, vai haver diminuio das substncias,
provocando uma resposta demorada, porque se sintetiza
uma molcula numa parte, para s mais tarde vir a actuar.
Sinalizao autcrina as clulas podem

enviar sinais para outras clulas do mesmo tipo,
assim como para elas mesmas. Nesta sinalizao,
uma clula secreta molculas sinalizadoras que
se ligam aos seus receptores na prpria clula.
Durante o desenvolvimento, por exemplo,
quando uma clula decide seguir uma
determinada rota de diferenciao, ela comea a
secretar sinais autcrinos, o que refora a sua
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deciso anterior. A sinalizao autcrina mais efectiva quando realizada, simultaneamente, por clulas
vizinhas do mesmo tipo, e parece ser usada para encorajar grupos de clulas idnticas a tomar os mesmos
caminhos ao longo do desenvolvimento. Assim, a sinalizao autcrina o possvel mecanismo responsvel
pelo efeito com unidade observado nos estgios precoces do desenvolvim ento, durante o qual um grupo
de clulas idnticas responde a um sinal indutor de diferenciao, enquanto uma clula isolada do mesmo
tipo no responde.
Sinalizao das junes comunicantes as
junes comunicantes nas clulas de um embrio em
desenvolvimento so feitas e desfeitas em padres
especficos e interessantes, sugerindo, fortemente, que
elas desempenham um papel importante nos processos
de sinalizao que ocorrem entre essas clulas. Da
mesma forma que na sinalizao autcrina, a
comunicao por junes comunicantes auxilia na coordenao do comportamento de clulas similares
adjacentes. Contudo, ainda no se sabe quais as pequenas molculas importantes que actuam como
transportadoras de sinais deste tipo, bem como no se conhecem as funes especficas da comunicao,
atravs dessas junes, no desenvolvimento animal. Assim, em suma, as clulas conectadas por junes
comunicantes compartilham pequenas molculas, inclusive pequenas molculas sinalizadoras
intracelulares, podendo assim, responder a sinais extracelulares de maneira coordenada.
3. Tipos de receptores
Na maioria dos casos, as molculas sinalizadoras so hidroflicas e os
receptores so protenas transmembranares na superfcie da clula-alvo.
Ao ligarem-se a uma molcula sinalizadora extracelular, esses receptores
so activados e geram uma cascata de sinais intracelulares, que alteram o
comportamento da clula.
Em outros casos, os receptores so intracelulares, e a molcula

sinalizadora tem que penetrar na clula-alvo para activ-los, sendo que
isso requer que ela seja suficientemente pequena e hidrofbica para que
se possa difundir atravs da membrana plasmtica.
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Superfamlia dos receptores nucleares

Estes receptores existem na clula sob a forma inactiva associados a outras molculas que vo impedir
que os receptores funcionem. Quando os receptores esto no citosol, tornam-se activos aps a ligao da
molcula de sinalizao extracelular que se liga ao receptor, o inibidor desliga-se. Assim, o receptor pode
passar ao ncleo, ligar-se ao DNA e induzir a expresso ou represso de um determinado gene. No caso de
existirem receptores nuclares, tornam-se activos quando existem no ncleo ligados ao DNA e quando a
molcula de sinalizao extracelular se liga ao receptor, induzindo tambm a expresso ou represso do
gene.
As molculas capazes de induzir este tipo de resposta so molculas que se ligam quer aos receptores
citoslicos quer aos nucleares, e so sempre hidrofbicas. So as hormonas esterides (cortisol, ou
hormonas sexuais), vitamina D, hormonas da tiride (provm de um aminocido que a tirosina) e os
retinides. No caso das tirides e dos retinides ligam-se a receptores nuclares que j esto associados a
DNA, logo automaticamente vo induzir a alterao de um determinado gene.
4. Tipos de receptores de superfcie

Receptores associados a canais inicos esto envolvidos na sinalizao sinptica rpida entre
clulas electricamente excitveis. Esse tipo de sinalizao mediado por um pequeno nmero de
neurotransmissores que abrem ou fecham, temporariamente, um canal inico formado pela protena
qual se ligam, alterando por um perodo curto, a permeabilidade da membrana plasmtica aos ies e, dessa
forma, a excitabilidade da clula ps-sinptica. Os receptores associados a canais inicos pertencem
grande famlia das protenas transmembranares multipasso.
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Receptores associados protena G actuam indirectamente na regulao da actividade de uma

protena-alvo ligada membrana plasmtica, que pode ser tanto uma enzima como um canal inico. A
interaco entre o receptor e a protena-alvo mediada por uma terceira protena, chamada protena
trimrica ligante de GTP (Protena G). A activao da protena-alvo altera a conformao de um ou de mais
mediadores intracelulares (se a protena-alvo for um canal inico). Os mediadores intracelulares afectados,
por sua vez, alteram o comportamento de outras protenas de sinalizao na clula. Todos os receptores de
ligao protena G pertencem grande famlia das protenas homlogas transmembranares de sete
passos.
Receptores associados a enzimas quando activados, funcionam directamente como enzimas, ou

esto associados directamente a enzimas activadas por eles. So formados por protenas
transmembranares unipasso, cujo stio de interaco com o ligante est do lado de fora da clula e cujo
stio cataltico, ou de ligao enzima, do lado de dentro. Esses receptores apresentam uma estrututra
heterognea em comparao com as outras duas classes. A grande maioria, contudo, representada por
cinases ou associada com cinases e, quanto activada, induz a fosforilao de grupos especficos de
protenas nas clulas-alvo.
5. Sinalizao intracelular
Os sinais recebidos por receptores associados protena G ou associados a enzimas, na superfcie de
uma clula, so transmitidos para o seu interior por uma combinao de molculas de sinalizao
intracelular. A cadeia de eventos de sinalizao intracelular resultante altera protenas-alvo que sero
responsveis pela modificao do comportamento da clula.
As protenas de sinalizao intracelular so as protenas de sinalizao intracelular. Muitas delas
transmitem o sinal para dentro da clula activando a protena sinalizadora seguinte na cadeia ou gerando
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pequenos mediadores intracelulares. Essas protenas podem ser classificadas de acordo com a sua funo
particular, embora muitas se possam inserir em mais de uma das seguintes categorias:
Protenas transmissoras simplesmente passam a mensagem para o prximo componente da
cadeia de sinalizao.
Protenas mensageiras carregam o sinal de uma parte da clula para outra, por exemplo, do
citosol para o ncleo.
Protenas adaptadoras conectam protenas
sinalizadoras.
Protenas amplificadoras geralmente, so enzimas
ou canais inicos, intensificam o sinal recebido por
meio da produo de grande quantidade de
mediadores intracelulares pequenas ou pela activao
de um grande nmero de protenas sinalizadoras a
jusante. Uma cadeia de transmisso com mltiplas
etapas de amplificao , frequentemente, conhecida
como cascata de sinalizao.
Protenas transdutoras alteram a forma do sinal. A
enzima que produz AMPc um exemplo, ao converter
e amplificar o sinal, actuando tanto como transdutora
como amplificadora.
Protenas de bifurcao propagam o sinal de uma
rota de sinalizao para outra.
Protenas integradoras recebem sinais de duas ou
mais rotas sinalizadoras e inegram-nos antes de
transmiti-los mais frente.
Protenas reguladoras de genes latentes so
activadas na superfcie celular por receptores activos e
migram para o ncleo, onde estimulam a transcrio
gnica.
Outros tipos de protenas intracelulares tambm desempenham papis importantes na sinalizao
intracelular, como est mostrado, a azul, na figura. As protenas moduladoras modificam a actividade de
protenas sinalizadoras intracelulares, regulando a intensidade ao longo de uma determinada rota de
sinalizao. As protenas de ancoramento mantm determinadas protenas sinalizadoras numa localizao
precisa da clula atravs da sua fixao membrana ou ao citosqueleto. Por fim as protenas de suporte
so protenas adaptadoras e/ou de ancoramento que unem protenas sinalizadoras mltiplas em um
complexo funcional e, comummente, as mantm em uma localizao especfica.
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Protenas de sinalizao intracelular

Geralmente, so protenas ou mensageiros secundrios. As protenas so as cinases,as fosfatases ou as
proteinas G.
Protenas G so GTPases, estando activas quando ligadas a GTP e inactivas quando ligadas a GDP.
Para se tornarem activas ou inactivas, necessria a interveno de outras protenas como o GEF que
transforma o GDP em GTP e o Gap que tem a capacidade de hidrolisar o GTP a GDP. Estas protenas G so
activas aps ligao ao receptor da membrana. Em primeiro lugar, estas protenas so diferentes porque
so trimricas, tendo trs unidades: , e .Q uando se d a ligao da m olcula extracelular ao receptor,
este vai induzir a activao da protena G, atravs da interveno do GEF, para que haja a passagem de GDP
a G TP.Com isto,a nica subunidade ligada ao G D P passa a ser a .Assim ,esta vai-se ligar ao receptor e vai
haver a transferncia de G D P a G TP na subunidade , havendo alterao da conform ao, e havendo
dissociao das restantes subunidades.
Cinases e fosfatases as cinases vo fosforilar determinados aminocidos como a timosina, a
serina ou a treonina, existindo vrios tipos. O receptor pode apresentar actividade cinsica ou fosfatsica,
induzindo a fosforilao ou desfosforilao da molcula. O receptor pode interagir com cinases citoslicas
ou membranares e a actividade cataltica da cinase pode ser regulada pelas prprias cinases, provocando a
alterao do nvel de segundos mensageiros.
Segundos Mensageiros clcio, AMP cclico, 1-2,diacilglicerol, inositol-trifosfato. O clcio, por
exemplo, existe em baixas concentraes no citosol, sendo que estas baixas concentraes so mantidas
atravs de bombas de clcio na membrana plasmtica, na membrana mitocondrial ou na membrana do
retculo endoplasmtico.
Activao das protenas G
No estado no-estimulado, o receptor e a protena G
esto inactivos. Embora estejam mostrados na imagem
como entidades separadas na membrana plasmtica, em
alguns casos, pelo menos, esto associados num complexo
pr-formado. A ligao de um sinal extracelular ao receptor
altera a conformao deste que, por sua vez, altera a
conformao da protena G associada a ele. A alterao da
subunidade da protena G perm ite a troca do seu G D P por
GTP. Isso provoca a sua dissociao em dois componentes
activos um a subunidade e um com plexo , podendo,
ambos, regular a actividade de protenas-alvo na
membrana plasmtica. O receptor permanece activo
enquanto o sinal externo estiver ligado a ele, podendo, por
isso, catalisar a activao de muitas molculas de protena
G.
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6. Via de transduo do AMPc

Quando a clula recebe um estmulo, a concentrao de AMPc
aumenta numa resposta muito rpida. A molcula extracelular ligase ao receptor que se liga s protenas G , e a subunidade fica
activada, induzindo a consequente activao da adenilciclase
(enzima que tem a capacidade de formar AMPc a partir de ATP).
Estas pequenas molculas tm a capacidade de se ligar a
inibidores que so a PKA (proteina-cinase A) que existe sob a
forma inactiva no citosol mas quando h produo do AMPc tem a
capacidade de se ligar ao inibidor, este desliga-se e a PKNA tornase activa, fosforilando vrios substratos. Depois disto, o substrato
fosforilado pode-se ligar ao DNA, induzindo a activao ou
represso dos genes. Entre a ligao do AMPc ao inibidor e a
transcrio dos genes, h uma grande quantidade de molculas
(que no estudamos) que vo intervir.
7. Via de transduo do IP3/DAG

Esta via de transduo pode ser comandada atravs do ligado de ligao dos receptores da protena-G e
de outros receptores variados, tendo como objectivo a activao da fosfolipase C. A clivagem do PIP2 pela
fosfolipase C conduz formao do IP3 e do DAG.
Depois da difuso atravs do citosol, o IP3 interage com o Ca2+ e abre os seus canais na membrana do
retculo endoplasmtico, provocando a libertao dos ies Ca2+ para o citosol. Uma das respostas celulares
induzida pela ascenso do Ca2+ citoslico o recrutamento da protena-cinase C (PKC) para a membrana
plasmtica, onde activada pelo DAG.
A PKC activa pode fosforilar vrias enzimas e receptores celulares e ainda alterar algumas das suas
actividades. Desta forma, tal como o Ca2+ do retculo endoplasmtico esgotado, os canais de Ca2+
comandados pelo IP3 ligam-se e abrem os canais de Ca2+ do TRP na membrana plasmtica, permitindo o
fluxo de Ca2+ extracelular para o interior da clula.
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2006/2007
Captulo 11 Ciclo celular

A noo de ciclo celular, tempo compreendido entre a mitose de uma clula e a mitose seguinte de uma
ou duas clulas filhas, trouxe uma nova dimenso ao estudo da proliferao e da diferenciao das clulas.
A capacidade de reproduo ou proliferao uma caracterstica fundamental das clulas indiferenciadas.
A proliferao celular normal regulada de forma a que a produo de novas clulas compense,
exactamente, a perda de clulas pelos tecidos.
A maioria dos tecidos de um organismo adulto, com excepo do tecido muscular e do tecido nervoso,
possui um compartimento de clulas indiferenciadas susceptveis de se dividirem, originando, por mitose,
clulas filhas com as mesmas caractersticas morfolgicas, fisiolgicas e genticas da clula que lhes deu
origem. Tornou-se aparente, depois da descoberta do ciclo celular, que todas as clulas, quer in vitro quer
in vivo duplicam o seu DNA antes da diviso mittica. A fase de sntese do DNA (fase S) e a mitose (fase M),
ambas distintas, permitem estabelecer um pequeno intervalo (gap) entre o fim da mitose e o incio da fase
da sntese fase G1 e um segundo intervalo entre o fim da fase de sntese e o comeo da mitose fase
G2.
A noo fundamental, obtida a partir da descoberta do ciclo celular, a da existncia da fase de sntese
do DNA num tempo bem determinado no niclo, no meio da interfase. Na interfase, os cromossomas no
so visveis e verifica-se crescimento celular custa da sntese de protenas, ribossomas e retculo granular.
As clulas saem do ciclo celular quando iniciam a sua diferenciao e maturao, logo a interfase inclui
todo o tempo do ciclo celular compreendido entre duas mitoses sucessivas, que corresponde a cerca de
90% da durao do ciclo. A seguir mitose de uma clula, as clulas-filhas podem seguir trs vias
alternativas:
Um processo que conduz diferenciao e maturao, tornando-se clulas no proliferativas,
saindo do ciclo de diviso e migrando para camadas mais superficiais (caso dos epitlios) ou
diversos compartimentos celulares (caso das clulas sanguneas);
Ou iniciarem nova fase de sntese aps uma fase ps-mittica de durao normal;
Ou ainda, entrarem numa fase ps-mittica prolongada, reentrando, mais tarde, em nova fase de
sntese do DNA e cumprindo outro ou mais ciclos de diviso.
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Captulo 11 Ciclo celular |
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1. Controlo do ciclo celular

A maneira especfica pela qual a clula reage ao seu ambiente varivel. Ela varia de acordo com o
conjunto de protenas receptoras que a clula possui, o que determina o subgrupo particular de sinais ao
qual ela pode responder, o que, por sua vez, varia de acordo com a maquinaria intracelular, por meio da
qual a clula integra e interpreta os sinais que recebe.
1.1.
Pontos de contacto do ciclo celular
Na fase G1, existem dois pontos de controlo. O primeiro o ponto de restrio ou start, em que as
clulas caso tenham os nutrientes necessrios, podem continuar, seno ficam interrompidas na fase G0.
Depois de passar o ponto de restrio para a fase S, a clula tem de apresentar tamanho suficiente e um
ambiente favorvel para se dar a sntese de todas as molculas de DNA, para que mais tarde j na fase S
ocorra a replicao do DNA e a passagem da clula para a fase G2.
Para passar fase M, a molcula de DNA tem de estar completamente replicada (maquinaria de
replicao do DNA) e para alm disso, tm de existir condies ambientais favorveis (protenas e factores
de crescimento) e a clula tem de ter crescido o suficiente para ocorrer a sntese de protenas. Caso todos
estes requisitos sejam completos, a clula pode passar mitose.
1.2.
Reguladores do ciclo celular
Ciclinas variam ao longo do ciclo celular, tendo um ciclo de vida e sendo sintetizadas e
degradadas. Existem vrios tipos:
G1/S necessrias para a preparao da replicao do DNA
S necessrias para o incio da replicao do DNA (no intervm directamente, mas
permitem que o processo ocorra)
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M promovem a mitose, sendo importantes para a reorganizao do citosqueleto quando

a forma da clula alterada, do Complexo de Golgi e do retculo endoplasmtico. Permitem que a
clula mantenha a sua constituio, de forma a que na clula possa originar a diviso nuclear.
G1 promovem a passagem da clula atravs do ponto de restrio G1.
CDKs fosforilam, sendo cinases e dependentes das ciclinas. Existem sempre na mesma
concentrao ao longo do ciclo, mas sendo dependentes das ciclinas, tanto esto activas como
inactivas. Levam a oscilaes cclicas na fosforilao de protenas que iniciam ou regulam a
replicao de DNA, mitose e citocinese.
CKIs inibidores das CDKs, fazendo com que elas no tenham actividade quando ficam ligados.
Regulao das CDKs

Activao a ligao da ciclina
independente provoca uma activao parcial das
CDKs, mas a activao completa requer a
interveno do CAK para ocorrer a fosforilao do
complexo final. Em clulas animais, o CAK (CDKactivating kinase) fosforila a subunidade do CDK
depois da ligao da ciclina, num determinado
local especfico. Com isto, o complexo CDK-ciclina forma-se atravs de um grupo fosfato activo que se
localiza na subunidade, conferindo completa activao CDK.
Inactivao em clulas
proliferativas activas, a maior parte
da actividade das CDKs suprimida
durante a fase G1, resultando
numa transio estvel durante a
qual o crescimento celular e outros
factores de regulao celular podem comandar a entrada num novo ciclo. Na inibio das CDKs intervem
um grupo de protenas, as CKIs (CDK-inhibitor proteins) que se ligam a elas e inactivam o complexo CDKciclina, sendo que esta inibio pode ocorrer de duas formas distintas: utilizando os CKIs, em que as ciclinas
ao estarem associadas CDK e tm a fosforilao de um aminocido necessrio, a protena activa pode
sofrer inactivao se se ligar a uma CKI. Em determinadas situaes necessrio degradar os CKIs por
ubiquitinao. No outro caso de inibio, a protena que est activa tem uma fosforilao, atravs de uma
cinase sofre outra fosforilao e, consequentemente, torna-se inactiva.
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Activao das mCDKs
A CDK1 liga-se a M-ciclina, mas

mesmo assim continua inactiva, tendo
necessidade de sofrer fosforilaes, para
s depois sofrer uma desfosforilao e
passar a activa. Por aco da CAK, sofre
uma fosforilao e atravs da enzima
Wee1 que uma cinase, o complexo
sofre outra fosforilao o complexo
sofre 2 fosforilaes por aco de 2
enzimas diferentes.
Para se tornar activa, necessita de sofrer uma desfosforilao, por aco de uma fosfatase q a Cdc25.
A Cdc25 uma fosfatase que existe na celula sob a forma inactiva, e quando a clula necesssita, existe uma
cinase (polo cinase) que vai permitir que a Cdc25 sofra uma fosforilao. Ao sofrer fosforilao, a Cdc25
torna-se activa, actua como fosfatase e o complexo (M-CDK) torna-se activo. No entanto, o complexo activo
tem um efeito de sobre a Cdc25 inactiva, pois tem a capacidade de induzir a sua fosforilao e, por outro
lado, o complexo ainda tem a capacidade de inibir a Wee1.
Ubiquitinao das ciclinas ou CKIs
Os CKIs so moleculas com capacidade de inibir

CDKs, mas em determinadas alturas precisam de ser
degradados. A protena SCF tem a capacidade de
induzir a fosforilao dos CKIs e, com isto, permitir que
as molculas sejam reconhecidas como molculas a
degradar. Assim, o sinal a fosforilaao, e vai haver a
ligao de vrias molculas de ubiquitina. A protena
sofre fosforilao e, portanto permite, atravs de
vrias enzimas, a ligao da ubiquitina, sendo
degradada por um complexo enzimtico, o
proteossoma.
Existe ainda um complexo, o APC, que tem de se tornar activo para que as clulas em metafase
passem para a anafase. Se o complexo no for activo, a clula fica parada em metafase, no havendo
possibilidade de avanar na mitose. O APC inactivo liga-se a uma Cdc e com isto vai tornar-se activo,
funcionando como uma enzima que permite a ligao da ubiquitina as molculas que devem ser
degradadas. Desta forma, o APC activo vai funcionar como uma ubiquitina-ligase e para alm dele, tambm
intervm outras enzimas neste processo. Por fim, o APC activo vai permitir a ligao da ubiquitina s
ciclinas, formando um sinal que indica a degradao da molcula por ubiquitinao.
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2. Interfase
A vida de uma clula comea, no momento em que a diviso celular que a originou acaba e o momento
em que ela mesma se divide ou morre, ou seja, toda a actividade celular cessa. A interfase corresponde ao
perodo entre o final de uma diviso celular e o incio da segunda.
Geralmente, a clula encontra-se nesta fase a maior parte da sua vida (cerca de 90%) e durante esta
fase, o DNA no visvel ao microscpio ptico. A interfase constituda por trs fases: G1, S e G2. No
entanto, existe um estado estacionrio ou fase G0, onde a clula pode permanecer durante meses ou anos,
quando tm carncia de nutrientes, inibidores da sntese proteica ou uma populao supersaturada de
clulas junto a si.
2.1.
Fase G1
A fase G1 um perodo da interfase que se localiza antes da fase S. Para vrias clulas, esta fase
inclui o maior perodo de crescimento e diferenciao celular durante o seu perodo de vida. Durante esta
fase, muitos dos organelos celulares so sintetizados, fazendo com que a clula precise de enzimas e de
protenas estruturais, que tambm vo contribuir para uma grande sntese proteica.
No final desta fase, ocorre a separao dos centrolos e para a clula completar a fase G1 tem de
passar o ponto de restrio antes do incio da fase S.
2.2. Fase S
A fase S, ou fase de sntese, um perodo do ciclo celular durante a
interfase, entre as fases G1 e G2. Depois da fase G1, a clula entra na fase S onde
ocorre a sntese e a replicao do DNA. No incio da fase S, cada cromossoma
constitudo por uma molcula de DNA de dupla hlice, ou seja, por um
cromatdeo. Por sua vez, no final da fase, cada cromossoma vai apresentar duas
molculas de DNA com dupla hlice e, portanto, dois cromatdeos-irmos. Para
alm disso, o centrossoma tambm duplicado, e estes dois eventos apesar de
independentes, requerem vrios factores comuns para se processarem.
O resultado final a presena de material gentico duplicado na clula,
que eventualmente ser dividido em duas partes. Por fim, nesta fase, h a sntese
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2006/2007
de histonas. Os danos do DNA podem, frequentemente, ocorrer nesta fase, sendo que a sua reparao
iniciada imediatamente depois da replicao.
O centrossoma actua como centro organizador de microtbulos, sendo formado por material amorfo e
um par de centrolos. O aster um conjunto radial de microtbulos, que saem de um plo do fuso mittico
ou do centrossoma.
Ciclo centrossmico
O ciclo centrossmico inclui a separao do par de centrolos na fase G1 e a duplicao do

centrossoma na fase S, visto este ser necessrio para a formao dos plos do fuso. Na mitose, cada par de
centrolos faz parte de um centro organizar microtubular que inicia a formao dos microtbulos formando
um aster. Para esta duplicao do centrossoma, intervm ainda a CDK G1/S.
2.3. Fase G2
A fase G2 a terceira e final subfase da interfase do ciclo celular. Segue a completao da sntese
do DNA e a replicao dos cromossomas da fase S, e ocorre durante um perodo de tempo bem
determinado que compreende cerca de 4 a 5 horas. Nesta fase da interfase, o ncleo fica bem definido,
recoberto pelo envelope nuclear e contm pelo menos um nuclolo.
Ainda que os cromossomas tenham sido replicados, elas ainda no podem ser distinguidos
individualmente pois ainda se assemelham a pequenos agrupamentos de cromatina condensada. Esta fase
prepara a clula para a mitose (fase M) depois de verificar a replicao do DNA, a presena de mutaes no
DNA e de activar o MPF.
3. Mitose
A mitose um fenmeno celular que ocorre em diversos tipos de clulas, nas quais, por um complicado
processo de diviso nuclear e citoplasmtica, uma clula origina duas clulas filhas. Estas so
geneticamente iguais clula-me que lhe deu origem, mantendo-se inaltervel o nmero de
cromossomas especficos (2n 2n). um processo de diviso celular em que a perpetuao do genoma
celular se mantm inaltervel ao longo das diferentes geraes ps-mitticas.
Durante a mitose, ocorre, como mais adiante est pormenorizado, um conjunto complexo de
fenmenos biolgicos que se desenvolvem sucessivamente ao longo do processo. Enquanto que uns
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2006/2007
ocorrem simultaneamente, outros ocorrem interligados e dependentes de ocorrncias anteriores onde

actuam mltiplos factores reguladores do processo.
A quantidade de clulas que, nomesmo tecido, se encontram simultaneamente em mitose calculada
sob a forma percentual e chama-se ndice mittico. O ndice mittico apresenta uma percentagem muito
elevada nos pices vegetativos da raiz e do caule das plantas, bem como no testculo e no ovrio dos
animais, locais onde se produzem, por mitoses, respectivamente, as vrias geraes de espermatognias e
oognias.
O centrmero o ponto de unio dos cromatdeos-irmos e contm uma sequncia de DNA especfica
necessria para a separao dos cromtideos-irmos. Por sua vez, o cinetocoro uma estrutura proteica
adjacente ao centrmero onde se ligam os microtbulos cinetocorianos.
3.1.
Alteraes do invlucro nuclear ao longo do ciclo celular
Ao longo do ciclo celular, necessrio desaparecer o invlucro nuclear, e isso vai ocorrer atravs do
MPF que tem a capacidade de fosforilar as protenas constituintes da lmina nuclear constituda por
filamentos intermdios altamente organizados, que tm composio varivel. A lmina nuclear, ao sofrer
fosforilao, sofre desorganizao e h alterao da membrana do invlucro nuclear e consequente
desintegrao da mesma. No incio da profase, as lminas sofrem fosforilao e desintegrao e s depois
na telofase que a protena sofre desfosforilao, permitindo que haja novamente a formao do
invlucro nuclear.
Na profase tambm comea a formao do fuso acromtico, constitudo por vrios tipos de
microtbulos:
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2006/2007
Aster que partem dos centros organizadores microtubulares

Cinetocorianos ligam-se ao cinetocoro
Polares ligam-se a um microtbulo polar, sendo importante para o movimento dos cromossomas.
3.2. Regulao dos nveis de ciclina

No final da anafase, o APC (anaphase-promoting
complex) poliubiquitina as ciclinas mitticas. medida que
as ciclinas so degradadas por proteossomas, a actividade
da cinase MPF diminui abruptamente, desencadeando o
incio da telofase. A actividade do APC automaticamente
virada para as ciclinas mitticas atravs de um factor
especfico Cdh1 que fosforilado e de seguida
inactivado pelo complexo CDK-ciclina da fase G1.
Seguidamente, uma fosfatase especfica Cdc14
que remove o fosfato regulador do factor especfico na
anafase. Assim que ele inibido na fase G1, a concentrao de ciclinas mitticas aumenta, eventualmente
atingindo um nvel suficientemente elevado para estimular a entrada na mitose subsequente.
Actividade do MPF
Em todos os casos, a actividade do MPF e a concentrao de ciclinas so determinadas em vrios
momentos. Observaes microscpicas determinam a ocorrncia de eventos do incio da mitose incluindo
a condensao dos cromossomas e a desagregao do envelope nuclear e do fim do mitose como a
descondensao cromossmica e a reagregao do envelope nuclear.
O MPF um complexo proteico com capacidade de induzir a condensao dos cromossomas, a
alterao do citosqueleto, e a alterao do invlucro nuclear. As protenas qe podem sofrer fosforilao
so: histonas, lminas da lmina nuclear, protenas associadas aos microtbulos, filamentos intermdios e
protenas nucleares.
143
2006/2007
A fosforilao destas protenas induz a condensao dos cromossomas, porque h protenas

envolvidas na condensao, como a condensina (activada pelo MPF), a desagregao do invlucro nuclear
por aco da fosforilao das lminas, a desagregao do citosqueleto, do retculo endoplasmtico e do
complexo de Golgi devido fosforilao das protenas microtubulares e dos filamentos intermdios.
3.3. Regulao da actividade do MPF

A interaco da ciclina mittica (Cdc13) com a cinase dependente da ciclina (Cdc2) forma o MPF. A
subunidade CDK pode ser fosforilada em dois locais reguladores distintos: atravs da Wee1 na tirosina-15
(Y15) ou atravs do CAK na treonina-161 (T161). A remoo do fosfato na Y15 atravs da fosfatase Cdc25
produz um MPF activo onde a subunidade CDK monofosforilada na T161.
A subunidade da ciclina mittica contribui para a especificidade da ligao do substrato pelo MPF,
provavelmente atravs do facto de fazer parte da superfcie de ligao do substrato que tambm inclui o
resduo inibidor da Y15.
3.4. Profase
O incio da profase torna-se visvel com o
aumento de volume nuclear e aparecimento de
cromatina organizada sob a forma de longos e
finos filamentos cromossomas depois de se
condensar atravs das condensinas. Os
cromssomas profsicos so dicromatdicos, isto ,
cada cromossoma constitudo por duas
molculas de DNA rigorosamente iguais. O
nuclelo ou nuclolos iniciam a sua dissipao e,
gradualmente,
vo
desaparecendo
no
nucleoplasma. Com isto, os microtbulos citoplasmticos tambm se dissociam progressivamente, e o
centrossoma separa-se para os plos do fuso.
144
2006/2007
3.5. Prometafase
Incio da desorganizao e dissipao
do invlucro nuclear, dando lugar ao
aparecimento
de
fragmentos
dessen
invlucro, estruturas morfologicamente
semelhantes a cisternas do retculo
endoplasmtico, devido fosforilao da
lmina nuclear por aco das M-CDKs.
Os cromossomas prometafsicos continuam o seu encurtamento e espessamento, encontrando-se
sem posio preferencial no nucleoplasma.
Os cinetocoros dos cromossomas tornam-se visveis em cada um dos lados do centrmero e, ao
mesmo tempo, aparecem os microtbulos orientados para os plos do futuro fuso acromtico.
Cada cromossoma inicia o processo de orientao e deslocamento para o plano equatorial do fuso,
por meio dos diferentes tipos de microtbulos que, entretanto, se tornaram mais evidentes.
Os centrossomas j se encontram em plos opostos da clula a partir dos quais crescem
microtbulos que eventualmente estabeleceram uma ligao estvel com os cinetocoros.
Os cromossomas continuam a compactar e os braos dos cromatdeos-irmos separam-se
claramente. Quando os cromossomas j esto biorientados, iniciam a migrao em direco regio
equatorial da clula.
3.6. Metafase
Os cromossomas metafsicos (de
constituio dicromatdica) localizam-se
no plano equatorial do fuso por meio dos
seus centrmeros, de forma alinhada.
Os cromatdeos tornam-se mais
distintos por ligeiro afastamento dos seus
braos, ficando apenas aderentes na
regio do centrmero.
Os cinetocoros e os microtbulos
cinetocorianos tornam-se bem visveis e orientados longitudinalmente desde cada plo do fuso acromtico
at os cinetocoros.
a fase esttica da mitose.
Ocorre a activao do APC ou ciclossoma, e as ciclinas so degradadas.
O MPF inactivado.
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3.7. Anafase
Caracterizada pela ascenso polar de cada um dos
cromossomas filhos (cromatdeos-irmos dos cromossomas
metafsicos) resultante da separao dos cromossomas
dicromatdicos metafsicos.
Anafase A inicia a anafase, com a dissoluo da
coeso centromrica, nico ponto que unia os cromatdeos
de cada um dos cromossomas, sendo repuxado pelos
microtbulos cinetocorianos, e faz com que os cromatdeos-irmos (que passam a constituir cromossomas
monocromatdicos) se desloquem para os plos.
Anafase B durante a sua deslocao, os cromossomas continuam com o cinetocoro interligado
aos plos por meio dos microtbulos cinetocorianos. Os dois plos do fuso afastam-se um pouco mais um
do outro por alongamento da clula devido deslocao dos microtbulos polares e, consequentemente,
aumentando a distncia entre os cromossomas.
Verifica-se um aumento da concentrao de clcio e uma desfosforilao das protenas.
Separao dos cromatdeos-irmos

Recentes estudos genticos indicaram que o APC regula a separao dos cromatdeos-irmos no incio
da anafase. As protenas de coeso SMC ligam-se a cada um dos cromatdeos-imros e outras subunidades
coesivas como o Scc1 ligam depois as protenas SMC entre si, com o objectivo de efectuar a associao
entre os dois cromatdeos-irmos. A actividade obtida atravs desta ligao depende da securina, que est
presente em todos os eucariontes.
Assim que os cinetocoros estiverem ligados aos microtbulos, o APC dirigido por um factor de
especificidade Cdc20 que poliubiquitina a securina, conduzindo a clula para o incio da anafase. A
securina poliubiquitinada rapidamente degradada por proteossomas, libertando de seguida a separase.
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Livre do seu inibidor, a separase cliva o Scc1, partindo a protena de ligao entre os cromatdeosirmos. Assim que esta ligao quebrada, os cromatdeos-irmos podem mover-se para os plos opostos
e permitir o desenvolvimento da anafase.
3.8. Telofase
Reorganizao do invlucro nuclear,
rodeando os cromossomas que gradualmente se
despiralizam e se descondensam tornando-se
menos visveis.
Ocorre a nucleocinese, isto , a formao
dos ncleos-filhos.
O centrossoma de cada uma das futuras clulas-filhas fica localizado na regio citoplasmtica
perinuclear junto ao invlucro nuclear recm-formado.
A maior parte dos microtbulos do fuso despolimeriza durante o incio da telofase, e s se podem
observar numa zona entre os dois ncleos telofsicos.
Durante o perodo inicial da telofase, o citosqueleto das clulas-filhas, baseado nos filamentos
intermdios, ser alterado, conduzindo uma alterao significativa da morfologia celular. Conjuntamente,
comea a haver a redistribuio equitativa dos organelos celulares pelas clulas-filhas.
Assim, o nuclolo reaparece e formam-se clulas diplides (DNA = 2n).
3.9. Citocinese
O citoplasma dividido atravs de um processo denominado de clivagem.
Na maioria das clulas, a diviso segue-se rapidamente aps a segregao dos cromossomas
durante a mitose. A diviso inicia-se durante a anafase B, continua durante a telofase, terminando antes
das clulas entrarem novamente em interfase.
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Depende da formao de um anel contrctil, uma estrutura formada por filamentos de actina e
miosina II. O anel de contraco, forma-se exactamente a meio da distncia existente entre os dois
centrossomas do fuso mittico. formado por filamentos organizados paralelamente em relao ao plano
de diviso e numa associao estreita com a face citoplasmtica da membrana celular. Junto aos filamentos
de actina, esto os de miosina que, ao longo do processo de diviso, produzem uma fora que determina a
contraco do anel durante a telofase.
Forma-se o corpo mdio que contm a parte central dos microtbulos polares e um material denso
do qual se conhecem alguns componentes, mas pouco se sabe sobre a sua funo.
3.10. Mitose nas plantas

Uma grande variedade cortical de microtbulos rodeiam a clula durante a interfase. Redes de
microtbulos cobrem a parte terminal das clulas vegetais e permanecem intactos durante a diviso
celular. Assim que a clula inicia a profase, os microtbulos so agrupados junto ao ncleo e reorganizados
num rolo semelhante ao que surge na metafase das clulas animais.
No final da telofase, a membrana nuclear reorganiza-se em torno dos ncleos-filhos e o fragmoplasto
derivado do complexo de Golgi integrado no plano equatorial. Pequenas vesculas adicionais derivadas do
complexo de Golgi acumulam-se no plano equatorial e fundem-se com o fragmoplasto formando o plano
da nova clula.
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Captulo 12 Morte celular

A morte celular um processo comandado por agentes nocivos que podem ser agentes txicos ou
leses provocadas mecanicamente. Existem trs principais tipos de morte celular:
Necrose a manifestao final de uma clula que sofreu leses irreversveis. O conceito de morte
somtica envolve a interrupo definitiva das funes orgnicas e dos processos de metabolismo. Assim, a
necrose a morte celular ou tecidual acidental num organismo ainda vivo, ou seja, que ainda conserva as
suas funes orgnicas. Nesta morte, a clula sofre alteraes membranares, vacuolizao generalizada,
lise das membranas e inflamao.
Morte autofgica a clula elimina organelos envelhecidos, atravs da formao de vesculas com
o auxlio do retculo endoplasmtico liso. De seguida, o autofagossoma, seguindo o mesmo caminho dos
fagossomas, funde-se com um endossoma secundrio, recebendo enzimas hidrolticas do complexo de
Golgi. , deste modo, transformado em fagolisossoma. O processo culmina com a degradao do organelo
por aco das enzimas. A autofagia pode ser estimulada em determinadas situaes, como, por exemplo,
durante o jejum prolongado, aparecendo numerosos autofagossomas nos hepatcitos, com o objectivo de
converter os componentes da clula em alimento para prolongar a sobrevivncia do organismo.
Apoptose
| Captulo 12 Morte celular
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1. Apoptose
O falecimento das clulas por morte programada marcado por uma
sequncia bem definida de alteraes morfolgicas, normalmente
designado por apoptose.
As clulas em morte, encolhem e condensam, para depois fragmentar,
libertando pequenos corpos apoptticos, que geralmente so englobados
por outras clulas. O ncleo condensa e o DNA fragmenta-se. De forma
importante, os constituintes intracelulares no so libertados para o meio
extracelular onde poderiam exercer efeitos de eliminao nas clulas
vizinhas.
Os genes envolvidos na morte celular controlada codificam protenas
com trs funes diferentes:
Killer importantes para a clula comear o processo apopttico;
Destruction protenas que digerem o DNA numa clula em
apoptose;
Engulfment importantes para a fagocitose da clula em
apoptose por outra clula.
Na apoptose, ocorre ainda a degradao do citosqueleto, e a exposio
da fosfatidilserina para o lado no citoslico da membrana citoplasmtica,
envolvendo a activao em cascata de enzimas designadas por caspases.
Desta forma, as clulas ficam isoladas, no havendo nem lise das suas
membranas nem processo inflamatrio associado.
2. Vias Apoptticas
2.1.
Via mitocondrial
A via mitocondrial envolve membros pr-apopttios da famlia Bcl-2 que incluem a Bax e a Bid, que
normalmente se encontram fracamente associados membrana externa da mitocndria, prevalecendo
maioritariamente no citosol. A interaco entre o Bax e o Bid leva oligomerizao dos elementos, seguida
da insero na membrana externa da mitocndria. Estas molculas passam, ento, a constituir canais de
sada de protenas intermembranares desde a mitocndria at ao citoplasma, incluindo o citocromo c e o
factor indutor de apaoptose.
O citocromo c, uma vez libertado, activa uma protena citoplasmtica (Apaf1), a qual recruta e activa a
procaspase-9, constituindo um complexo proteico denominado de apoptossoma. A caspase-9, como
caspase iniciadora ir requerer e activar a caspase-3 executora,a qualdegradar protenas im portantes
para a variabilidade celular e, tambm, outras caspases.
150
Captulo 12 Morte celular |
2006/2007
As protenas Bcl-2 e Bcl-xL, membros anti-apoptticos da famlia Bcl-2 bloqueiam a morte celular por
prevenirem a libertao das protenas inermembranares da mitocndria. No entanto, uma vez ultrapassada
a fase de morte celular que envolve este organelo, as protenas anti-apoptticas deixam de ser qualquer
efeito na inibio da apoptose. As protenas anti-apoptticas podem interactuar entre si, regulando
reciprocamente as suas funes.
Por outro lado, a funo das caspases executoras tam bm pode ser m odulada por um outro tipo de
protenas, que se pode ligar caspase-9 e inibir a sua actividade de protease, bloqueando a este nvel o
processo apopttico.
Para todo este processo ocorrer, o Bax e o Bcl-2 tm de estar em equilbrio para que no final, atravs
de autoclivagem, a caspase-9 se torne activa, induzindo uma cascata de reaces das caspases e a apoptose
consequente.
As caspases so sintetizadas sob a forma de precursores inactivos as procaspases sendo protenas

altamente conservadas. Existem dois tipos de caspases:
Iniciadoras caspase-8 ou caspase-9
Executoras ou Efectoras caspase-7 ou caspase-3
2.2. Via dos receptores de morte

Paralelamente via mitocondrial, ocorre tambm a via dos receptores de
morte, que vo desencadear a activao das caspases a partir de diferentes tipos de
apoptossomas. Para isso, tm de existir, na membrana, receptores que vo
reconhecer protenas e desencadear a sua ligao e um conjunto de reaces que
levam morte da clula.
Os ligandos podem ser o Fas/Fas-L que uma protena, ou o TNF/TNFR que
uma citoquina, substncia sintetizada por linfcitos e com carcter inflamatrio. O
Fas-L e o TNF so protenas do meio extracelular que so receptores nas
membranas das clulas, sendo que o Fas-L reconhece o Fas e o TNF reconhece o
TNFR. Quando h ligao do ligando molcula, o receptor tem de ter domnios
intra e extracelulares para desencadear reaces no interior da clula.
O receptor vai reconhecer a procaspase-8 que ao ligar-se ao adaptador, tornase activa e activa a caspase-3. A caspase-8 por iniciar o processo uma caspase
iniciadora e pode impedir a apoptose quando haja mecanismos celulares que o
indiquem, mas a caspase-3, por ser executora, j no pode impedir a apoptose.
| Captulo 12 Morte celular
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2006/2007
Captulo 13 Meiose
A meiose um processo de diviso celular atravs do qual uma clula v o seu nmero de cromossomas
reduzido a metade. Por este processo so formados gmetas.
Nos organismos de reproduo sexuada, a formao dos seus gmetas ocorre por meio desse tipo de
diviso celular. Quando ocorre fecundao, pela fuso de dois desses gmetas, ressurge uma clula
diplide, que passar por numerosas mitoses comuns at formar um novo indivduo, cujas clulas sero,
tambm, diplides.
A meiose permite a recombinao gnica, de tal forma que cada clula diplide capaz de formar
quatro clulas haplides geneticamente diferentes entre si, explicando a grande variabilidade das espcies
com reproduo sexuada.
Os principais acontecimentos meiticos so:
Duas divises de DNA replicado originam quatro clulas haplides;
Nmero de cromossomas das clulas-filhas metade do nmero de cromossomas da clula-me;
Formao do complexo sinaptonmico;
Emparelhamento de cromossomas homlogos;
Formao de quiasmas.
1. Redistribuio do material gentico

Existem cromossomas homlogos, porque so muito semelhantes mas a sequncia de DNA no
exactamente a mesma, visto um ser de origem materna e outro ser de origem paterna. Quando h a
meiose, ocorre diviso e combinao diferente de todos os cromossomas homlogos, tornando as pessoas
geneticamente diferentes.
152
Captulo 13 Meiose |
2006/2007
Para alm disto, na meiose tambm acontece que: dado que os cromossomas homlogos em
determinada fase da meiose esto unidos, pode haver o crossing-over, fenmeno em que partes de um
gene de um cromossoma homlogo podem passar para o outro cromossoma homlogo, aumentando ainda
mais a variabilidade gentica.
2. Fases da Meiose
A meiose constituda por duas divises distintas, sendo que em qualquer uma delas se podem
considerar quatro fases: profase, metafase, anafase e telofase.
2.1.
Diviso I
Na diviso I da meiose, as clulas-filhas so haplides em relao ao nmero de cromossomas, mas

contm uma quantidade diplide de DNA. a diviso mais complexa, sendo designada diviso de reduo.
Os cromossomas emparelham e trocam material gentico (atravs de crossing-over) para, ento, darem
origem s duas clulas-filhas.
Profase I tem um evento nico atravs do emparelhamento dos
cromossomas homlogos, atravs da sinapse. O cromossoma resultante uma
ttrada, sendo composto por dois cromatdeos em cada cromossoma,
facilitando a ocorrncia do crossing-over. Durante este mecanismo, os
cromatdeos partem e podem ser re-anexados a um cromossoma homlogo
difernente. Consequentemente, em vez de se produzirem dois tipos de
cromossomas, so produzidos quatro, duplicando tambm a variabilidade dos
gentipos dos gmetas formados. A ocorrncia do crossing-over indicada por
uma estrutura especial, o quiasma, desde que os alelos recombinantes se
alinhem com outros do mesmo tipo. No final da profase I, os cromossomas homlogos separam-se
lentamente, devido ao facto de ainda estarem ligados pelo quiasmata. A profase I divide-se em cinco
estados:
Leptteno condensao dos cromossomas
Zigteno incio do desenvolvimento do complexo sinaptonmico
Paquteno surge aps a formao do complexo sinaptonmico
Diplteno observao do quiasmata e sntese de molculas
Diacinese dissociao do invlucro nuclear e dos nuclolos e condensao dos
cromossomas
| Captulo 13 Meiose
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2006/2007
Formao do complexo sinaptonmico

O complexo sinaptonmico uma estrutura formada entre os cromossomas homlogos, permitindo o
emparelhamento de regies exactamente correspondentes.
Nos cromossomas homlogos, vai haver estabelecimento de ligaes atravs de um conjunto de
protenas, que vo permitir a ligao entre as molculas de DNA dos dois cromossomas homlogos. Nesta
rede proteica, existem determinadas protenas em alguns espaos, os ndulos de recombinao, que so
os locais onde se d o crossing-over. Esta troca de genes, no pode ser feita em genes adjacentes, sendo
necessrio espaamento. Os ndulos de recombinaao tambm sao constitudos por protenas, muito
importantes para a recombinao gnica, como a Rad51.
Os ndulos de recombinao aparecem ao longo do complexo, e sero tantos quantos os crossingovers que ocorrerem.
Metafase I as ttradas alinham-se ao longo do plano equatorial. As fibras

deste plano ligam-se ao centrmero de cada par de cromossomas homlogos.
Anafase I as ttradas separam-se e deslocam-se para plos opostos das

fibras do plano equatorial. Aqui, os centrmeros permanecem intactos.
154
Captulo 13 Meiose |
2006/2007
Telofase I muito semelhante telofase mittica, excepto no facto de aqui

existir apenas um par de cromossomas replicados em cada clula.
2.2. Diviso II
A segunda diviso meitica, nas suas linhas gerais, segue os traos de uma diviso mittica ordinria.
Profase II os envelopes nucleares (caso se tenham formado na telofase I)

dissolvem-se e as fibras do plano equatorial reconstituem-se.
Metafase II os planos movem os cromossomas para a rea equatorial e anexamnos em lados opostos dos centrmeros na regio do cinetocoro.
Anafase II os centrmeros rompem e os cromossomas so formados em lados

opostos da clula.
Telofase II idntica telofase mittica, em que as clulas se dividem.
| Captulo 13 Meiose
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2006/2007
3. Diferenas entre Meiose e Mitose

Meiose
Mitose
Ocorre em clulas germinais. Duas divises
Ocorre em clulas somticas. Diviso nica.
Um ciclo de replicao do DNA seguido por duas divises

(meiose I e II) de que resultam quatro clulas germinais
haplides geneticamente diferentes
Um ciclo de replicao do DNA seguido por uma diviso de

que resultam duas clulas somticas diplides
geneticamente idnticas
O nmero de cromossomas dos produtos meiticos

metade do nmero cromossmico da clula-me
O nmero de cromossomas das clulas-filhas idntico ao

da clula-me
A clula que sofre meiose sempre diplide. Compreende

duas divises celulares sucessivas
A clula que sofre mitose pode ser diplide ou haplide.

Compreende apenas uma diviso
Diferencia-se o complexo sinaptonmico
No ocorre diferenciao do complexo sinaptonmico
H emparelhamento dos cromossomas homlogos
No h emparelhamento dos cromossomas homlogos.

Cada cromossoma comporta-se independentemente
Crossing-over ou sobrecruzamento entre cromossomas

homlogos
Normalmente o crossing-over somtico rarssimo
Formao de quiasmata
No h formao de quiasmata
Os produtos meiticos no podem empreender outra

diviso meitica, embora possam em alguns organismos
empreender divises meiticas
Produtos mitticos geralmente so capazes de sofrer outras

divises mitticas subsequentes
Quatro produtos celulares haplides (gmetas ou esporos)

produzidos por ciclo diferentes dos progenitores e entre si
Dois produtos diplides (duas clulas-filhas) produzidas por

ciclo e geneticamente iguais clula-me
Centrmeros dividem-se longitudinalmente apenas na

anafase II
Centrmeros dividem-se longitudinalmente na anafase
Formao de ttradas cromossmicas
No h formao de ttradas cromossmicas
Profase I mais longa
Profase mais curta
4. Influncia do gene Sry

A protena Sry (sex determining region of Y) vai fazer com que as clulas se transformem nas clulas
originrias das gnadas.
As clulas precursoras das gnadas, originrias das clulas germinais, vo para o local onde existem as
clulas a transformar. Se as clulas precursoras tiverem o cromossoma Y, vai haver expresso da protena
156
Captulo 13 Meiose |
2006/2007
Sry, que vai fazer com que as clulas precursoras se transformem e diferenciem em clulas de Sertoli, que
tm a capacidade de sintetizar hormonas que impedem a formao dos rgos sexuais femininos.
Por outro lado, diferenciam as clulas precursoras em clulas de Leydig que vo produzir testosterona,
induzindo a formao de clulas sexuais, os espermatozides.
5. Oognese
A oognese um processo que ocorre nos ovrios que conduz formao dos gmetas femininos.
Contrariamente espermatognese que se inicia na puberdade, a oognese inicia-se durante o
desenvolvimento embrionrio.
A oognese acompanhada da maturao dos folculos ovricos; num processo que compreende
quatro fases:
Multiplicao durante o desenvolvimento embrionrio, as clulas germinativas oognias

multiplicam-se, por mitoses sucessivas.
| Captulo 13 Meiose
157
Crescimento as oognias aumentam de volume, devido sntese e

acumulao de substncias de reserva, originando os ocitos I, que se
rodeiam de clulas foliculares, originando os folculos primordiais. Os
ocitos I iniciam a primeira diviso meitica, que se interrompe em
profase I.
Repouso os folculos primordiais, contendo os ocitos I em profase

I, permanecem inactivos desde o nascimento at puberdade. Nesta
fase, a maior parte dos folculos primordiais degenera.
Maturao - a maturao do ocito I torna-se evidente quando o

folculo atinge a fase de maturao. Quando isto acontece, o ocito I, que
se encontrava em profase I, recomea a diviso da meiose, originando
duas clulas haplides desiguais: uma maior, o ocito II e uma de menor
tamanho, o 1 glbulo polar. A diferena nos seus tamanhos deve-se a
uma citocinese desigual, isto , o citoplasma divide-se por gemiparidade.
Ambas as clulas se destacam da parede do folculo, para a cavidade
folicular. Aps a ruptura do folculo de Graaf, com a consequente
libertao do seu contedo, ocorre a ovulao, isto , a libertao do
ocito II para o pavilho da trompa.
6. Espermatognese
A espermatognese o processo de diferenciao das
espermatognias em espermatozides que ocorre nos tubos seminferos
dos testculos, de forma centrpeta (da periferia para o lmen) e
compreende quatro fases sucessivas:
Multiplicao nesta fase, as espermatognias esto localizadas na

periferia dos tubos seminferos. Desde a puberdade, estas clulas
entram em proliferao constante dividindo-se por mitoses sucessivas.
Crescimento as espermatognias aumentam de volume, devido
sntese e acumulao de substncias de reserva, originando os
espermatcitos I.
Maturao cada espermatcito I (com carga gentica 2n) divide-se
por meiose, originando duas clulas (com carga gentica n), mas com
cromossomas duplicados, donde vo resultar dois espermatcitos II.
Nestes, ocorre a meiose II formando-se 4 espermatdeos, estes j com
carga gentica n. Nesta diviso meitica, h a separao de 23
158
Captulo 13 Meiose |
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2006/2007
cromatdeos-irmos.
Diferenciao ocorre uma perda de grande parte do citoplasma, a reorganizao dos organelos
citoplasmticos e a diferenciao de um flagelo, a partir dos centrolos. Assim, os espermatdeos sofrem um
processo de transformao em espermatozides.
Precursores dos espermatozides
As clulas precursoras dos espermatozides no sofrem citocinese durante este processo de diviso.
Como no h separao das clulas, ficam interligadas atravs de pontes citoplasmticas. Desta forma, s
no final, quando j so espermatozides, que estas clulas se tornam individuais. Esta ligao por pontes
citoplasmticas tem o nome de sincitium.
| Captulo 13 Meiose
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Captulo 14 Cancro
O cancro compreende genericamente as doenas em que determinado grupo de clulas do organismo,
se divide de forma descontrolada, invadindo os tecidos adjacentes e/ou distantes. causado por mutaes
no ADN, que podem ser hereditrias mas, mais frequentemente, so adquiridas ao longo da vida.
Existem vrios tipos de cancro:
Carcinomas clulas epiteliais;
Sarcomas tecido conjuntivo ou muscular;
Leucemias clulas hematopoiticas.
O cancro adquire geralmente a designao de tumor ou neoplasia quando se forma uma grande massa
de clulas anormais, que pode ser benigna ou maligna.
1. Tumor benigno ou maligno

A principal diferena entre um tumor benigno e um tumor maligno a sua capacidade de gerar
metstases pelo corpo, assim como a velocidade do aumento do tecido afectado, podendo assim medir a
agressividade do tumor.
Num tumor benigno, a massa de clulas no invasiva, sendo que as clulas ficam como que envolvidas
por uma membrana que impede que elas se desenvolvam e se espalhem indefinidamente. Num tumor
maligno, o descontrolo da diviso pode comear num determinado rgo e espalhar-se por outras reas do
organismo num curto espao de tempo. Isto acontece porque a massa de clulas que constitui o tumor
invasiva, passando para os vasos sanguneos e linfticos e formando tumores secundrios noutros locais.
160
Captulo 14 Cancro |
2006/2007
2. Carcinognese
O processo de carcinognese no mais que o processo de formao de um cancro, sendo que a
mutagnese a produo de uma alterao na sequncia de DNA, originando um cancro.
2.1.
Agentes carcinognicos
Os agentes carcinognicos so agentes mutagnicos, ou seja, substncias que ao entrarem em contacto

com o organismo, induzem a formao de um tumor. Podem ser:
Qumicos substncias presentes no ambiente, sejam elas naturais ou sintetizadas pelo Homem,
que se ligam ao DNA e causam mutaes ou inibem a actividade das enzimas relacionadas com a
reparao do DNA. Podem ser directos ou indirectos, consoante a incidncia que tiverem no
organismo.
Radiaes as radiaes ionizantes e excitantes podem provocar tumores atravs de mutaes
gnicas, activao de oncogenes e inactivao de anti-oncogenes. Podem provocar vrios tipos de
mutaes cromossmicas, mas o poder mutagnico depende da clula-alvo, da idade do paciente e
da resposta imunitria.
Vrus substncias que tm a capacidade de introduzir DNA nas clulas e induzir mutaes.
2.2. Formao de um tumor

Iniciador o benzopireno um mutagnio que por si s no induz a formao de um tumor. Assim,
causa leses genticas latentes, que quando em contacto prolongado com determinados agentes
cancergenos, pode levar expresso do cancro em causa.
Promotor no propriamente um carcinognio, mas pode induzir a formao de um tumor
quando actua a nvel de um tecido previamente exposto a um iniciador.
| Captulo 14 Cancro
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2006/2007
2.3. Propriedades celulares alteradas durante a carcinognese
Em primeiro lugar, se existem clulas que proliferam muito, significa que so clulas que
necessitam de uma grande quantidade de nutrientes.
So geneticamente instveis porque esto continuamente a proliferar, e os mecanismos de
reparao de DNA no so eficazes, no conseguindo reparar quaisquer mutaes. So evasivas, tendo
capacidade de invadir tecidos, a lmina basal, etc.. Normalmente, metastizam, no morrem por apoptose,
no sofrem diferenciao e fogem ao controlo dos sinais internos ou externos de proliferao.
2.4. Crescimento de um tumor
Quando h formao de um tumor, estas clulas proliferam muito e, como consequncia, no tm

tempo para se diferenciarem. Por isso, vo invadindo as camadas de clulas que vo sendo eliminadas, e as
clulas que deviam ser diferenciadas e/ou pouco diferenciadas, passam a ser todas pouco diferenciadas.
Como consequncia, as clulas tm estrutura pouco especializada, e forma-se o tumor.
O nuclolo proeminente porque se as clulas esto em proliferao, precisam de grande
quantidadede de nutrientes e h necessidade de sntese de protenas e de rRNA. Para alm disso, a relao
entre o ncleo e o citoplasma bastante elevada e a estrutura celular pouco especializada.
162
Captulo 14 Cancro |
2006/2007
3. Metstases
Uma metstase a formao de uma nova leso tumoral a partir da primeira mas sem continuidade das
duas. Assim sendo, implica que as clulas neoplsicas se desprendam do tumor primrio e caminhem
atravs do interstcio, ganhando uma via de disseminao para um local distante onde formam uma nova
colnia neoplsica.
Em cada um desses passos, as clulas malignas tm de superar os sistemas de controlo do organismo
que mantm as clulas nos seus locais primitivos. Assim, as metstases s ocorrem em tumores malignos e
quando surgem, o tumor quase sempre incurvel.
Para metastizar, as clulas necessitam de:
Perder a adeso s clulas vizinhas perda da expresso das molculas de adeso atravs das Ecaderinas;
Penetrar em outros tecidos tm de ter integrinas que funcionam como receptores das lamininas,
os quais permitem que a clula adira lmina; devem ter superfcie colagenase do tipo IV para
degradar a lmina.
Normalmente, as clulas cancergenas morrem mais facilmente que as clulas normais, devido
irradiao ou exposio a drogas que interferem com o metabolismo do DNA. Para alm disso, as
alteraes na replicao, recombinao e reparao do DNA tornam-nas progressivamente mais
vulnerveis.
| Captulo 14 Cancro
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2006/2007
Captulo 15 Parte Laboratorial
1. Microscopia
Os microscpios podem utilizar como fonte luminosa um feixe de fotes ou de electres sendo
designados respectivamente por microscpios fotnicos ou electrnicos. A qualidade de um microscpio
avaliada pelo seu poder de resoluo, ou seja pela sua capacidade de formar imagens distintas de dois
pontos ajdacentes, e no pelo seu poder de ampliao. O poder de resoluo do olho humano a uma
distncia de cerca de 25 cm de cerca de 0.1 a 0.3 mm, enquanto que o do microscpio ptico de cerca
de 0.2 m e o do microscpio electrnico da ordem de 1 .
Poder de resoluo a funo do comprimento de onda da luz utilizada e da abertura numrica.
Depende da largura do cone de iluminao, ou seja, depende do condensador e das lentes
objectivas.
da largura do ngulo de abertura
n ndice de refraco do meio que separa a amostra da objectiva
Abertura numrica a notao caracterstica da objectiva que relaciona o ngulo de abertura
com o ndice de refraco do meio situado entre o objecto e a lente frontal da objectiva.
ngulo de abertura ngulo formado pelos raios luminosos que delimitam o cone de luz que
atinge a lente frontal da objectiva. Varia com o ndice de refraco do meio existe entre o objecto e
a objectiva. Quanto maior a abertura numrica, menor o limite de resoluo e, portanto, maior
ser o poder de resoluo.
Visibilidade - a capacidade de ver ou detectar um objecto. Os objectos que podem ser
observados so: as peas naturalmente corados, as peas coradas artificialmente ou as peas com
ndices de refraco diferentes dos do meio onde esto inseridos.
ndice de visibilidade - a diferena entre os ndices de refraco do objecto e do meio.
Poder de ampliao a capacidade de fornecer uma imagem ampliada do objecto.
164
Captulo 15 Parte Laboratorial |
2006/2007
Principais diferenas entre o microscpio ptico e electrnico

Microscpio ptico
Microscpio electrnico
Lentes de vidro
Lentes electromagnticas
Feixe de fotes
Feixe de electres
Poder de resoluo cerca de 200 nm
Poder de resoluo cerca de 0.1 nm
Amplia cerca de 2.000x
Amplia cerca de 100.000x
Clulas vivas ou mortas
Clulas usualmente mortas
1.1.
Componentes do microscpio
Sistema mecnico
P
Brao
Tubo
Suporte do condensador
Suporte do diafragma
Suporte de porta-filtros
Parafuso macromtrico
Parafuso micromtrico
Botes de controlo da sobreplatina
Revlver
Platina
Pina de sobreplatina
Sistema ptico
Fonte luminosa faz variar a visibilidade e o contraste. O filtro de luz aumenta a visibilidade ou
reduz o contraste e vice-versa, conforme a cor do filtro e do objecto. A qualidade da imagem pode
ser aperfeioada pelo uso de filtros corados que tm influncia na composio espectral da luz no
tubo do microscpio. Os filtros corados so filtros de absoro de certas radiaes, e variam
conforme a sua cor e espessura.
Condensador fornece objectiva um cone de luz uniforme, concentra os raios luminosos na
preparao e aumenta o poder de resoluo
Diafragma controla a abertura do cone de luz
Objectivas fornecem uma imagem real, ampliada e invertida (imagem intermdia)
Oculares fornecem uma imagem virtual, ampliada e direita. O comprimento das oculares
varia na razo inversa da ampliao.
| Captulo 15 Parte Laboratorial
165
1.2.
2006/2007
Regras de observao e focagem de um microscpio
Posio do microscpio - em frente do observador.

Posio da preparao microscpica - apoiada sobre a platina e imobilizada pela pina da
sobreplatina mvel, com a lamela voltada para cima.
Posio do observador - sentado de forma a manter uma posio confortvel para a observao ao
microscpio. Deve observar pelas oculares com os olhos prximos das mesmas. A mo esquerda deve
estar, do mesmo lado, sobre o parafuso macromtrico, e tendo a mo direita ocupada com os parafusos
da sobreplatina mvel ou com o parafuso micromtrico, ou livre para escrever ou desenhar.
Focagem do microscpio - colocar a preparao microscpica na platina e certificar-se de que a
mesma est imobilizada pela mola da sobreplatina mvel e voltada para cima. Com a mo direita, mover
o parafuso das grandes deslocaes, fazendo subir a platina e aproximar, da preparao, uma objectiva
de pequena ampliao (4x). Certificar-se de que esta a objectiva que est no prolongamento do tubo.
Em seguida dever:
* observar pelas oculares
* ajustar a posio do condensador
* abrir o diafragma ris
* focar, observando pela ocular direita, mantendo o olho esquerdo fechado
* fechar o olho direito e observar pela ocular esquerda
* focar com o anel graduado do porta-ocular esquerdo, sem mexer nos botes de comando de focagem
* regular a distncia interpupilar
* tendo a mo esquerda no boto de comando do parafuso micromtrico que se desloca,
continuamente, num e noutro sentido, e tendo a mo direita nos parafusos de deslocao da
sobreplatina mvel, pode-se explorar a preparao (fig. 2):
* uma vez conseguida a focagem, a mo direita fica livre para escrever ou desenhar.
Mudana de objectiva - rodar o revlver at colocar a objectiva seguinte em posio de
observao, exactamente no prolongamento do tubo:
* ouvir o estalido (centrar)
* notar que as objectivas so para-focais : pode-se mudar de uma objectiva para a outra sem
necessidade de mover o parafuso macromtrico, bastando, para focar, usar o parafuso micromtrico
* ajustar a posio do diafragma do condensador, objectiva (uma objectiva de maior ampliao,
necessita de maior abertura do diafragma).
Utilizao da objectiva de imerso - depois de utilizar a objectiva a seco de maior ampliao, rodar
o revlver, deixando-o numa posio que, em relao posio de observao, seja intermediria entre
a objectiva de 40x e a objectiva de imerso:
* colocar uma gota de leo de imerso (leo de cedro) sobre a lmina
* rodar o revlver de modo a colocar a objectiva de imerso no prolongamento do tubo
* observar pelas oculares
* terminada a observao, descer a platina antes de retirar a preparao.
166
2006/2007
Cuidados a ter
* No tocar com os dedos na lente frontal
* No tocar com os dedos na lente ocular
* No deixar que a lente frontal das objectivas toque na lamela ou lmina das preparaes
* No utilizar a objectiva de imerso, sem usar o leo de cedro
* Limpar as lentes com um pano macio e um delicado movimento circular
* No retirar as objectivas dos seus encaixes no revlver
* No desmontar as objectivas nem as oculares
* No forar os parafusos
Recomendaes aps utilizao do microscpio
* Descer a platina
* Colocar a objectiva de menor ampliao
* Limpar a objectiva de imerso, retirando o leo de cedro (assim como da lente frontal do
condensador) com xilol, mas no deixar vestgios deste, porque descola as lentes.
2. Fixadores
Os fixadores so substncias ou agentes que induzem precipitao ou coagulao das protenas
tornando-as insolveis. Estes utilizam-se em tcnicas citolgicas para:
* inibir a actividade enzimtica da clula
* impedir a actividade e a proliferao de bactrias
* endurecer as clulas, para que elas resistam melhor s etapas seguintes das tcnicas citolgicas
* aumentar a afinidade das estrnturas celulares para os corantes citolgicos, tornando-as assim mais
facilmente corveis
* manter quanto possvel a morfologia e estrutura das clulas
2.1.
Tipos de fixadores
Agentes Fsicos
Calor - pode ser seco (chama, ex: bactrias) ou hmido (fervura).
De
um
modo
geral
so
profundamente a estrutura das clulas.
mtodos
grosseiros
violentos
que
alteram
Dissecao temperatura ambiente - em que h evaporao da gua das clulas e dos lquidos
intersticiais
Frio - que por si s no um agente fixador. O frio actua mais como um agente conservador, pois
suspende ou evita temporariamente os processos autolticos, os quais se restabelecem, logo que a pea
deixe de estar submetida ao frio.
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Agentes Qumicos
Metanol, etanol, cido clordrico, cido picrico, cido sulfrico, cido tricloroactico, tetrxido de
smio, cido actico, formaldedo etc.
Misturas de fixadores mais usadas em microscopia ptica:

* Lquido de Bouin (c. picrico + formol + c. actico)
* Lquido de Camoy (etanol + cloroformio + c. actico)
* Lquido de Fleming (c. Actico + trixido de crmio + tetrxido de smio)
* Lquido de Bouin-Allen (liq. De Bouin + c croinico + ureia)
* Lquido de Dubosq-Brazil (sol. alcolica saturada de c. picrico + formol + c. actico)
Quando uma pea colocada num fixador, a morte das clulas no ocorre instantneamente. O fixador
penetra na pea por difuso, de tal modo que a maioria das clulas perifricas fixam-se melhor e mais
rapidamente do que as centrais. A rapidez da fixao depende da barreira protica que se origina na
periferia do tecido.
Qualidades de um bom fixador
* ter um bom poder de penetrao
* ter poder de endurecimento
* ser rpido para impedir a alterao da estrutura da pea
3. Coloraes e corantes
Os corantes podem dividir-se em:
Corantes naturais: hematoxilina (extrada de uma leguminosa pau de campeche), carmin (extrado
da cochonilha, no pode ser usado em cortes de parafina), anil (extrado de uma leguminosa anileiro),
orcena (extrada de certos lquenes, corante de fibras elsticas)
Corantes artificiais: azul de metileno, azur I, azur II, azul de toluidina, vermelho neutro, etc.
-
Os corantes artificiais so compostos orgnicos da srie aromtica. Nem todas as substncias coradas,
orgnicas ou no, podem ser considerados corantes. Se existirem determinados grupos atmicos,
chamados cromforos, como o grupo ntrico (N02), nitroso (NO), azo (NN), que se combinem com
molculas de hidrocarbonetos aromticos transformam-nas em cromogneos, ou seja, ern compostos
capazes de gerar corantes.. Para que um cromogneo se transforme em corante necessita, por sua vez, de
168
2006/2007
se ligar a auxocrmios, agrupamentos com funes cidas ou bsicas, que permitem a formao de sais.
Tipos de corantes artificiais:

* cidos - eosina, fucsina cida, vermelho congo
* bsicos - vermelho neutro, verde de metilo, azul de metileno
* neutros - eosinato de azur de metileno.
Consoante a afinidade de determinadas estruturas das clulas ou tecidos para com um dado tipo
de corantes as estruturas podem ser designadas por:
* acidfilas - se coram com um corante cido (citoplasma)
* basfilas - se coram com um corante bsico (cromatina)
Para as preparaes fixadas por processos qumicos, um constituinte celular basfilo pode passar a
acidfilo, uma vez que a constituio fsico-qumica dos tecidos poder ser alterada.
Tipos de colorao quanto ao mtodo de actuao do corante
* Colorao simples ou progressiva - o corante deve deixar de actuar no momento em que a estrutura
celular, que se pretende evidenciar, atinja a colorao desejada.
* Colorao regressiva - h uma sobrecolorao recorrendo-se a um diferenciador (lcool a 90, lcool
clordrico) que progressivamente vai descorando at se atingir a colorao desejada. Para este tipo de
colorao os cortes tm de ser muito finos e de igual espessura, o soluto corante e o diferenciador devem
ser diludos
* Colorao com mordentes - a actuao do corante precedida de um banho com mordentes, substncias
que actuam sobre as estruturas aumentando a sua afinidade para os corantes ou o mordente est contido
na soluo de colorao. Um dos mordentes mais usados o sulfato de alumnio. A hematoxilina um
exemplo de um corante que necessita de mordentes.
4. Tcnicas citolgicas
Podemos considerar trs tipos de preparaes para os microscpios pticos:
4.1.
Preparaes a fresco ou extemporneas
um tipo de preparao utilizada a todo o momento, porque permite uma observao rpida e
imediata. As clulas so colocadas entre lmina e lamela. Por vezes utilizam-se lminas escavadas que
impedem a compresso dos microorganismos a observar.
169
2006/2007
Os meios usados devem ter caractersticas (ex: pH e isotonicidade), tanto quanto possvel, idnticas
ao meio onde vivem normalmente as clulas a observar.
As preparaes a fresco permitem observar: (no permitem distinguir estruturas que apresentem o
mesmo ndice de refraco do citoplasma)
Movimentos de ciclose
Cristais e cristalides
Ncleo e nuclolo
Vacolos
Gros e secreo e gotculas lipdicas
Nestas preparaes podem-se utilizar os chamados corantes vitais (corantes que se utilizam em
concentraes muito diludas). Exemplos de corantes vitais - vermelho neutro, vermelho congo, azul de
metileno, verde Janus (cora as mitocndrias). azul brilhante de cresilo, azur I, azur II.
Muitos corantes coram certas estruturas com uma cor diferente da sua ou seja, so corantes
reveladores de reaces qumicas e so designados por corantes metacromticos (ex: Vermelho neutro cor vermelho violcea - a pH cido fica vermelho cereja e a pH alcalino muda para amarelo/acastanhado ou
alaranjado; o vermelho congo fica azul a pH cido).
Limitaes do exame a fresco
S se aplica a materiais suficientemente transparentes.
A nutrio das clulas no suficiente e dentro de horas, as clulas comeam a mostrar sinais de
degenerescncia e posteriormente morrem.
As observaes tm assim uma durao muito limitada, sendo portanto preparaes efmeras que
no se podem conservar.
Observaes in vivo e in vitro
A observao in vivo corresponde ao estudo das clulas no seu prprio meio. um mtodo muito
utilizado para o estudo dos seres vivos de pequenas dimenses (protozorios e bactrias).
A observao in vitro permite o estudo das clulas vivas. Estas so previamente retiradas do meio
natural em que vivem e so colocadas em solues com composio qumica bem definida, de forma a que
se processe sem qualquer alterao o metabolismo celular.
4.2. Preparaes definitivas sem incluses

Este tipo de preparao constituda por diversas etapas:
Colheita da pea
Lavagem - depende da natureza da pea
Fixao - o tempo de fixao muito varivel
Dissociao consiste em subdividir a pea em pequenos fragmentos que posteriormente possam
ser facilmente manuseados e observados. Nesta fase podem-se empregar mtodos fsicos ou
mtodos qumicos.
170
2006/2007
Mtodos Fsicos
Distenso - estender a pea ao longo de uma lmina sob a forma de uma fina camada (ex.
esfregao sanguneo)
Dilacerao - separao das vrias partes da pea separando-as com o auxlio de agulhas de
dissecao (ex. preparaes de fibras musculares)
Agitao - coloca-se a pea num tubo de ensaio e agita-se, separando as vrias partes da
pea (ex. preparaes de fibras nervosas)
Raspagem - consiste em recolher com o bisturi o produto a observar (ex. preparaes das
clulas da mucosa lingual ou bucal)
Compresso - presso da lamela sobre a lmina de modo a que a pea sofra distenso (ex.
observao de parasitas)
Centrifugaco ou ultracentrifugao - dissociao mecnica dos vrios componentes
celulares (ex. preparaes de mitocndrias)
Mtodos Qumicos enzimas, lcool a 30-40, hidrxido de sdio ou potssio, cido aztico ou
sulfrico diludos, gua fervente, etc. A dissociao qumica pode ter diferentes designaes
consoante os dissociadores usados:
Digesto utilizao de enzimas
Descalcificao utilizao de cidos aztico, frmico, tricloroactico etc., em solues
aquosas de 1% a 5% durante 10 a 20h.
Lavagem - esta fase depende do dissociador usado
Colorao
Desidratao - esta desidratao feita com uma srie ascendente de lcoois ou acetona. (Ex.
alcol a 50, 75, 90, 100 e benzol ou xilol)
Montagem - cobre-se a preparao com um meio de montagem (blsamo do Canad, glicerina,
gelatina), que geralmente viscoso e endurece com o tempo, por fim coloca-se uma lamela de
proteco
Secagem - estufa a 50-60C
Lutagem - proteger os bordos da lamela com betume da Coreia, verniz ou parafina derretida,
impedindo assim a entrada de impurezas
Etiquetagem - a etiqueta deve conter o nome da pea, fixador, corantes, data e n da preparao
4.3. Preparaes definitivas com incluso

Microscopia ptica
Colheita - a pea depois de colhida, deve ser rapidamente colocada num fixador.
Fixao - pode variar de algumas horas a dias ou semanas.
Desidratao - compreende a passagem por uma srie ascendente de lcoois (por exemplo 70,
80, 90, 100 e benzol) cujo tempo de passagem varia com vrios factores. Geralmente usa-se 60 a 120
171
2006/2007
minutos em cada passo. Esta etapa necessria, dado que nos passos seguintes se utiliza a parafina, que
formada por uma mistura de hidrocarbonetos e insolvel em gua.
Impregnao - feita com uma mistura de benzol/parafina (1:1), a 56C, durante 1 hora, seguido de
um banho de parafina, temperatura de 56 C, durante 1 hora.
Incluso - a pea juntamente com a parafina so colocadas em moldes especiais, ficando a pea
includa em parafina, aps a solidificao da mesma. Separa-se o bloco dos moldes e este pode permanecer
assim at ser cortado.
Corte - efectuado por meio de uma faca colocada num aparelho especial chamado micrtomo, no
qual se regula a espessura do corte. Normalmente faz-se um corte de 4-8 tm de espessura, mas tudo
depende da natureza do tecido e do estudo que se pretende realizar.
Colagem e Secagem - o corte obtido colocado com gua albuminosa, a 37C,1 sobre uma lmina
de vidro, indo depois para a estufa a 40 onde permanece 1 a 2 dias.
Desparafinao - feita em xilol.
Rehidratao - realizada na srie descendente de lcoois (de lcool absoluto at lcool a 50 e
depois em gua).
Colorao - geralmente efectuada por corantes aquosos. Se o corante alcolico, deve-se proceder
rehidratao at ao grau alcolico correspondente soluo alcolica do corante. Geralmente utiliza-se
uma associao de dois corantes aquosos. Primeiro colocam-se as lminas contendo os cortes (em tinas
com ranhuras) em hematoxilina (de cor arroxeada) durante 10 a 15 minutos. Depois, lavam-se em gua
corrente e coram-se nas mesmas condies com a eosina (de cor avermelhada) durante 2 a 5 minutos.
Lavagem - em gua durante 30 minutos.
Desidratao - feita numa srie ascendente de lcoois demorando cerca de 1 minuto em cada
passagem.
Montagem, Secagem, Lutagem e Etiquetagem
Microscopia Electrnica
Colheita - consiste em retirar a pea histolgica, lav-la se necessrio e cort-la em pequenas
pores (volume no deve ser maior que o tamanho da cabea de um alfinete, 0,5 a 1 mm3). Deve ser
colocada rapidamente no fixador.
Fixao - esta operao consiste, em geral, em dois tipos de fixao, que podem ser seguidos ou
intercalados por uma lavagem em tampo durante 1 ou 2 horas.
- Gluteraldedo de 1 a 4% (10 fixador), durante 2 horas a 4C.
- Lavagem com soluo tampo durante 1 a 12 horas a 4C, se for caso disso.
- Tetrxdo de smio de 1 a 2% (2 fixador ou pos-fixador), durante 2 horas.
Desidratao - consiste em retirar a gua da pea citolgica numa srie ascendente de lcoois, com
tempos variveis.
Impregnao - consiste em introduzir as peas citolgicas numa mistura de &ido de propileno com
epon ou araldite, cuja concentrao deve aumentar do seguinte modo:
172
- 1 mistura de ox. prop. + epon (3:1)
1 hora
- 2 mistura de ox. prop. + epon (1 :1)
1 hora
- 30 mistura de ox. prop. + epon (1 :3)
1 hora
- 4 epon
1 hora
- 5 epon
30 minutos a 60
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Incluso - as peas histolgicas so retiradas do epon e colocadas em cpsulas de gelatina,

devidamente numeradas, e nelas introduzido novo epon. O epon uma substncia viscosa que polimeriza
a uma temperatura de 50-55C, pelo que endurece, decorridos 2-3 dias a 60C. Os blocos assim formados,
ficam a constituir peas que podem ser utilizadas muito mais tarde.
Corte - os cortes so feitos por meio de facas de vidro ou de diamante em aparelhos designados
por ultramicrtomos. Inicialmente fazem-se cortes semi- finos de 1 m que perrnite um estudo preliminar
da pea ao ME. Em seguida, fazem-se cortes ultra-finos de 600-700 de espessura. Os cortes assim obtidos
so recolhidos em pequenas grelhas de cobre.
Colorao - no uma designao correcta dado que os produtos usados com o corantes no
coram as organelas, mas imprimem-lhe um determinado contraste e tm a designao de contrastantes.
colorao dupla: acetato de uranilo (20 a 30 minutos) e o hidrxido de chumbo (10 a 15 minutos).
Observao - depois de contrastados os cortes j podem ser observados ao microscpio electrnico
e se necessrio fotografados.
5. Micrometria
A micrometria o captulo da microscopia que determina as dimenses de microorganismos ou peas
de tamanho mnimo, fazendo a medio em micrmetros cuja unidade mtrica a micra (m ou ).
Utilizam-se dois micrmetros (rguas graduadas): ocular e objectivo.
Micrmetro objectivo uma rgua graduada, de 1 nm, dividida em cem partes iguais que se coloca na
platina. Cada diviso do micrmetro igual a 10-2 m m = 10 m .
Ocular micromtrica - um disco de vidro, que se coloca na ocular, tendo gravada uma escala dividida em
cem partes iguais.
Coeficiente micromtrico o valor, em micras, de cada diviso do micrmetro ocular para um
determinado sistema ocular-objectivo.
173
2006/2007
Determinao do coeficiente micromtrico para um determinado sistema ocularobjectiva

Depois de iluminar o microscpio, coloca-se o micrmetro objectivo na platina e coloca-se o
micrmetro ocular numa das oculares.
A escala do micrmetro objectivo constitui o objecto a observar. A escala do micrmetro ocular e a
imagem do micrrnetro objectivo encontram-se no mesmo plano de focagem.
Rodando a ocular micromtrica, sobrepe-se, em posio paralela, as duas escalas, e faz-se
coincidir, exactamente, o zero.
Regista-se o nmero exacto de intervalos do micrmetro objectivo que correspondem a um
nmero exacto de intervalos do micrmetro ocular.
Medio de um objecto - conhecido este valor, quando se pretende medir qualquer objecto usando aquele
sistema ocular-objectivo, bastar substituir o micrmetro objectivo pela preparao que contm o objecto
em causa. Contam-se as divises da ocular micromtrica, nas quais est compreendido o objecto, e
multiplica-se o nmero de divises pelo valor do coeficiente micromtrico. Se o objecto ocupar 20 divises,
multiplica-se este valor por 4 m e a medio real do objecto ser de 80 m.
Cmara clara - um dispositivo que se adapta ao microscpio para desenhar. Sendo constituda por um
sistema de dois espelhos planos ou dois prismas de reflexo total. Este dispositivo projecta no plano da
imagem intermediria, uma imagem real e direita da folha de papel de desenho e da ponta do lpis. Um
observador olhando atravs da ocular do microscpio v simultneamente a preparao microscpica e as
imagens dos pontos de um plano exterior ao microscpio. Atravs da cmara clara pode-se determinar o
valor real de um objecto desenhado com ampliao conhecida.
6. Sangue
O sangue uma massa lquida formada por duas fases: elementos figurados e plasma.
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Plasma fase lquida que contm em suspenso os elementos figurados e tambm protenas, sais
inorgnicos, compostos orgnicos, tais como aminocidos, vitaminas, hormonas, hidratos de carbono e
lpidos.
6.1. Funes do sangue

O sangue actua essencialmente como meio de transporte;
Por seu intermdio, os leuccitos fagocitrios (neutrfilos) actuam como uma das primeiras
barreiras contra a infeco. Estas clulas ao percorrerem todo o organismo atingem o local da infeco e
atravessam a parede dos capilares (diapedese);
O sangue transporta o oxignio ligado hemoglobina dos eritrcitos, e o gs carbnico (C02), ligado
hemoglobina ou dissolvido no plasma sob a forma de bicarbonato;
Actua na distribuio de hormonas;
Tem um papel regulador na distribuio do calor, do equilbrio cido-bsico e do equilbrio osmtico;
Permite a troca de mensagens qumicas entre orgos distintos.
As clulas do sangue geralmente no se multiplicam na corrente sangunea, tm uma durao
relativamente curta e so continuamente substitudas por clulas novas produzidas em orgos
especializados. Antes de atingirem o estado de maturao, os elementos figurados do sangue passam por
diferentes etapas de diferenciao.
Os eritrcitos, os granulcitos e as plaquetas tm origem na medula ssea (tecido mieloide). Pode,
todavia observar-se eritropoiese extra-medular em casos de carncia.
Os linfcitos e moncitos tm tambm origem na medula ssea e diferenciam-se nos orgos
linfides: medula ssea, bao, timo e ndulos linfticos das mucosas.
Os granulcitos tm o ncleo de forma irregular e tm no citoplasma grnulos especficos com
diferente afinidade tintorial. O ncleo dos agranulcitos tem uma forma mais regular e o citoplasma no
possui granulaes especficas, podendo, no entanto, apresentar uma granulao no especfica designada
por granulao azurfila. Enquanto que o moncito apresenta este tipo de granulao, o linfcito pode ou
no apresentar este tipo de grnulos no citoplasma. As plaquetas so anucleadas e constitudas por
fragmentos citoplasmticos dos megacaricitos (precursores das clulas).
6.2. Elementos figurados do sangue

Eritrcitos - tm a forma de um disco bicncavo de 7,2 i de dimetro e 2,1 de espessura, o que lhes
proporciona uma grande superfcie e facilita a troca de gases. A concentao normal dos eritrcitos no
sangue da ordem dos 4,8 1,O xlO 2/1 na m ulher, e de 5,5 1,0x1012/1 no homem. O tempo de vida dos
eritrcitos de cerca de 120 dias.
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Leuccitos - so corpsculos incolores que esto implicados nas defesas celulares e imunes do
organismo. Tm uma forma esfrica quando em suspenso no sangue circulante, podendo assumir um
aspecto amebiforme se encontram um substrato slido. Verifica-se muitas vezes que os leuccitos deixam
os capilares e penetram no tecido conjuntivo. O nmero total de leuccitos no adulto de 7,5 3,5x109/1,
sendo estes valores inferiores nascena. O aumento e a diminuio do nmero de leuccitos no sangue
designa-se, respectivamente, por leucocitose e leucopenia.
Neutrfilos - tm cerca de 12 de dimetro, so esfricos enquanto circulantes, condio
em que parecem inactivos, deformando-se logo que encontram um substrato slido sobre o qual
emitem pseudpodes, movimentando-se a uma velocidade de 19 a 36 m por minuto. Constituem a
primeira linha de defesa contra a invaso de microorganismos e so fagcitos activos de partculas de
pequenas dimenses.
O ncleo pouco volumoso formado por 2 a 5 lbulos (geralmente 3), ligados entre si por
finas pontes de cromatina. As formas com mais de 5 lbulos so designadas hipersegmentadas e
representam clulas envelhecidas. Nos indivduos do sexo feminino aparece frequentemente um
apndice, muito menor que o lbulo nuclear, com a forma de uma raquete, que designado por
baqueta e que contm a crom atina sexual, constituda normalmente por um cromossoma X
heterocromtico.
O citoplasm a do neutrfilo abundante e carregado de pequenas granulaes neutrfilas
(dado que apresentam o mesmo tipo de afinidade para todos os componentes do corante
Romanovsky), cujas dimenses (0,3 a 0,8 ) se situam prximo do limite de resoluo do microscpio
Basfilos - medem cerca de 12 de dimetro. Embora no sejam muito activos, so
capazes de movimentao amibide e de fagocitose. O ncleo volumoso e de forma irregular
tomando geralmente a forma de um S. O citoplasma carregado de grnulos basfilos, de cor roxa
(esta cor deve-se s propriedades metacromticas da histamina, que um dos constituintes desta
granulao) e de maiores dimenses que as dos outros granulcitos, as quais sobrepem o ncleo
obscurecendo-o.
Eosinfilos - tm um dimetro de cerca de 9 e so clulas dotadas de movimento
amibide e capacidade de fagocitar. Esta fagocitose processa-se de um modo mais lento, mas mais
selectiva. O ncleo geralmente bilobulado, podendo apresentar 3 lbulos. A principal caracterstica
dos eosinfilos a presena de granulaes ovides que coram pela eosina (granulaes acidfilas,
cr alaranjada) e que so maiores que as dos neutrfilos. A membrana do citoplasma recortada
devido s granulaes.
Linfcitos - so clulas esfricas,com dim etro varivelentre 6 a 8 ,que tm a designao
de pequenos linfcitos. Juntamente com estes, ocorre uma pequena percentagem de linfcitos
mdios e grandes linfcitos. Embora morfologicamente semelhantes, os linfcitos constituem uma
populao celular heterognea. Variam em tamanho, em densidade e em longevidade (alguns vivem
poucos dias e outros podem viver at 10 anos). O linfcito pequeno, que predomina no sangue, tem
o ncleo esfrico, oval ou reniforme, geralmente em posio excntrica. A cromatina dispe-se em
grumos grosseiros ( mais compacta que a do moncito). O citoplasma muito escasso no pequeno
linfcito, aumentando a relao citoplasma/ncleo do pequeno para o grande linfcito.
Moncitos - tm um dimetro varivel entre 9 e 12 . Podem viver semanas ou meses. Tm
como principal funo a fagocitose de vrus, fungos e protozorios. O ncleo ovide, em forma de
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2006/2007
rim, ferradura ou enovelado, sendo geralmente excntrico. A cromatina pouco densa, o ncleo dos
moncitos mais claro do que o dos linfcitos. Tem o citoplasma bem definido e com granulao
azurfila de dimenses inferiores ao poder de resoluo do microscpio, que lhe confere um tom
purpura.
Plaquetas - so corpsculos anucleados com a forma de disco, que medem cerca de 3 de
dimetro e existem apenas nos mamferos. O seu valor no sangue humano est compreendido entre 150 e
400 x 109/L. A principal funo das plaquetas relaciona-se com a capacidade que tem o sangue de irnpedir
a sua prpria sada quando os vasos sanguneos so lesados. Quando h ruptura de um vaso sanguneo, as
plaquetas aglutinam-se, formando um tampo, que, dependendo do calibre do vaso, pode fechar
imediatamente a leso. Alm disso, participam na formao da tromboplastina, factor essencial para a
transformao do fibrinognio em fibrina, a qual forma o cogulo sanguneo.
177

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Biologia Celular - 1 Ano - FFUP

Captulo 1 - A evoluo da clula

As clulas procariticas so muito diferentes das eucariticas.

As clulas eucariticas so mais complexas que as procariticas. Possuem membrana nuclear

Captulo 1 - A evoluo da clula |

Protistas, Fungos, Plantas, Animais

Ncleo, Complexo de Golgi,

RNA sintetizado no ncleo;

No tem citosqueleto: correntes

Tem citosqueleto: correntes

Necessitam de uma fonte de C e de Requerem uma grande quantidade

O DNA mais estvel do que o RNA porque:

Biologia Celular - 1 Ano - FFUP

3. Aparecimento de novos genes

Captulo 1 - A evoluo da clula |

Biologia Celular 1 Ano - FFUP

Genes Homlogos so genes que apesar de pertencerem a diferentes organismos, so estruturalmente

4. Alteraes celulares em clulas animais

| Captulo 1 - A evoluo da clula

Biologia Celular - 1 Ano - FFUP

Captulo 1 - A evoluo da clula |

Biologia Celular 1 Ano - FFUP

Captulo 2 Componentes qumicos celulares e

Um aminocido constitudo por:

Os aminocidos apresentam um determinado estado de ionizao que se encontra dependente do pH

| Captulo 2 Componentes qumicos celulares e Macromolculas

Biologia Celular - 1 Ano - FFUP

Os cidos gordos so cidos monocarboxlicos de cadeia normal hidrocarbonatada e que possuem

Captulo 2 Componentes qumicos celulares e Macromolculas |

Biologia Celular 1 Ano - FFUP

Triglicerdeos (ou Triacilgliceris)

| Captulo 2 Componentes qumicos celulares e Macromolculas

Biologia Celular - 1 Ano - FFUP

Glicolpidos / Grupos sanguneos

Antignios O Glicose + Galactose + N-Acetilgalactoseamina + Galactose + ...

Captulo 2 Componentes qumicos celulares e Macromolculas |

Biologia Celular 1 Ano - FFUP

Constituio de molculas que permitem efectuar o armazenamento de energia (ex.: ATP)

| Captulo 2 Componentes qumicos celulares e Macromolculas

Biologia Celular - 1 Ano - FFUP

Captulo 2 Componentes qumicos celulares e Macromolculas |

Biologia Celular 1 Ano - FFUP

| Captulo 2 Componentes qumicos celulares e Macromolculas

Biologia Celular - 1 Ano - FFUP

quaternria. No entanto, durante a desnaturao, a estrutura primria da protena no se altera, ou seja, a

Captulo 2 Componentes qumicos celulares e Macromolculas |

Biologia Celular 1 Ano - FFUP

Modos de actuao das enzimas

Biologia Celular - 1 Ano - FFUP

6.1. cido desoxirribonucleico (DNA)

Captulo 2 Componentes qumicos celulares e Macromolculas |

Biologia Celular 1 Ano - FFUP

Nveis de compactao da molcula de DNA

Os nucleossomas so o primeiro nvel de compactao do DNA. O nvel seguinte consiste na

| Captulo 2 Componentes qumicos celulares e Macromolculas

Biologia Celular - 1 Ano - FFUP

Captulo 2 Componentes qumicos celulares e Macromolculas |

Biologia Celular 1 Ano - FFUP

Politinizao h repetio da molcula de DNA mas no h separao. Existe o cromossoma polytene e

6.2. cido ribonucleico (RNA)

| Captulo 2 Componentes qumicos celulares e Macromolculas

Biologia Celular - 1 Ano - FFUP

RNA de transferncia (tRNA)