Conceitos e Métodos para A Formação de Profissionais em Labortórios Da Saude

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Conceitos e Mtodos para a Formao de Tcnicos em Laboratrios de Sade
2 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade
FUNDAO OSWALDO CRUZ

Presidente
Paulo Ernani Gadelha Vieira
ESCOLA POLITCNICA DE SADE JOAQUIM VENNCIO
Diretora
Isabel Brasil Pereira
Vice-diretor de Pesquisa e Desenvolvimento Tecnolgico
Maurcio Monken
Vice-diretora de Ensino e Informao
Mrcia Valria Morosini
Vice-diretor de Gesto e Desenvolvimento Tecnolgico
Sergio Munck
INSTITUTO OSWALDO CRUZ
Diretora
Tnia Cremonini Arajo Jorge
Vice-diretora de Pesquisa, Desenvolvimento Tecnolgico e Inovao
Mariza Gonalves Morgado
Vice-diretora de Ensino, Informao e Comunicao
Helene dos Santos Barbosa
Vice-diretora de Servios de Referncia e Colees Cientficas
Elizabeth Ferreira Rangel
Vice-diretor de Desenvolvimento Institucional e Gesto
Christian Maurice Gabriel Niel
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Conceitos e Mtodos para a Formao de Tcnicos

em Laboratrios de Sade
Volume 1
ORGANIZADORAS
Etelcia Moraes Molinaro

Luzia Ftima Gonalves Caputo
Maria Regina Reis Amendoeira
Copyright 2009 dos autores

Todos os direitos desta edio reservados
Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio/Fundao Oswaldo Cruz
Conselho Editorial
Dr. Ana Luzia Lauria Filgueiras
Dr. Ftima Conceio Silva
Dr. Herman Schatzmayr
Dr. La Camillo-Coura
Dr. Lycia de Brito Gitirana
Dra. Marcia Ferro
Dr. Marco Antonio Ferreira da Costa
Dr. Margareth Maria de Carvalho Queiroz
Dr. Maria Regina Reis Amendoeira
Dr. Otlio Machado Pereira Bastos
Capa
Z Luiz Fonseca
Fotos
Rodrigo Mexas
Maria Eveline Castro Pereira
Moyses Gomes Marcelino
Desenhos
Newton Marinho da Costa Jnior
Reviso
Ana Lucia Proa Melo
Secretria Executiva da Coleo
Josane Ferreira Filho
Projeto Grfico e Editorao

Marcelo Paixo
Catalogao na fonte
Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio
Biblioteca Emlia Bustamante
M722c
Molinaro, Etelcia Moraes

Conceitos e mtodos para a formao de profissionais em laboratrios
de sade: volume 1 / Organizao de Etelcia Moraes Molinaro, Luzia
Ftima Gonalves Caputo e Maria Regina Reis Amendoeira. - Rio de
Janeiro: EPSJV; IOC, 2009.
290 p. : il. , tab.
ISBN: 978-85-98768-41-0
1. Tcnicas e Procedimentos de Laboratrio.2. Pessoal de Laboratrio.
3. Laboratrios. 4. Formao de Tcnicos. 5. Sade e Educao. I. Ttulo.
II. Caputo, Luzia Ftima Gonalves. III. Amendoeira, Maria Regina Reis.
CDD 542.1
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Autores
Cntia de Moraes Borba
Biloga, mestre e doutora em Biologia Parasitria pela Fundao Oswaldo Cruz. Pesquisadora Associada do Instituto Oswaldo Cruz/IOC/Fiocruz.
Cleide Cristina Apolinrio Borges
Biloga, especialista em Entomologia Mdica pelo Instituto Oswaldo Cruz/IOC/Fiocruz.
Tecnologista em Sade Pblica do Centro de Criao de Animais de Laboratrio/Fiocruz.
Biloga, especialista em Criao e Manejo de Animais Silvestres pela Sociedade Nacional de Agricultura e em Zoologia pelo Conselho Regional de Biologia, mestre em Biologia Animal pela UFRRJ. Tecnologista Snior em Sade Pblica da Escola Politcnica de
Sade Joaquim Venncio/Fiocruz.
Joel Majerowicz
Mdico Veterinrio, Mestre em Tecnologia de Imunobiolgicos peo IOC/Bio-Manguinhos/
Fiocruz. Tecnologista Snior em Sade Pblica, Diretor do Centro de Criao de Animais
de Laboratrio da Fundao Oswaldo Cruz/Fiocruz.
Joseli Maria da Rocha Nogueira
Biloga, especialista em Microbiologia e Anlises clnicas, mestre em Microbiologia Veterinria pela UFRRJ e doutora em Cincias pela Ensp/Fiocruz, Tecnologista Snior da
Escola Nacional de Sade Publica Sergio Arouca/Fiocruz. Professor colaborador da UFRJ
e professor adjunto da Unigranrio.
Marcelo Pelajo Machado

Mdico, doutor em Biologia Celular e Molecular pela Fundao Oswaldo Cruz, psdoutor pelo Deutsches Krebsforschungszentrum, Alemanha, Pesquisador Titular da Fundao Oswaldo Cruz, Chefe do Laboratrio de Patologia do Instituto Oswaldo Cruz.
Marco Antonio Ferreira da Costa
Engenheiro Qumico licenciado em Qumica, mestre em Educao pela Unesa,
mestre em Psicopedagogia, Universidade de La Habana, doutor em Cincias, Instituto Oswaldo Cruz/IOC e professor-pesquisador da Escola Politcnica de Sade
Joaquim Venncio/Fiocruz.
Maria Beatriz Siqueira Campos de Oliveira
Biomdica, especialista em Microbiologia (Sobeu) e Liofilizao pela Edwards, Crowley,
Inglaterra, mestre em Educao pela Unesa, doutoranda em Ensino em Biocincias e
Sade pelo IOC/Fiocruz. Tecnologista Snior em Sade Pblica da Escola Politcnica de
Sade Joaquim Venncio/Fiocruz.
Maria Eveline de Castro Pereira
Administradora, mestranda no Programa de Ps-graduao Stricto Sensu em Ensino de
Biocincia e Sade do Instituto Oswaldo Cruz/IOC/Fiocruz. Analista em Cincia e
Tecnologia do IOC/Fiocruz.
Mnica Mendes Caminha Murito
Engenharia Qumica e mestre em Biocincias e Sade pelo IOC/Fiocruz. Pesquisadora
visitante da Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio/Fiocruz.
Paulo Roberto de Carvalho
Qumico Industrial, especialista em Gesto Ambiental pela Unesa, mestre em Sistemas de
Gesto em Segurana do Trabalho pela UFF e doutor em Cincias pelo IOC/Fiocruz.
Professor-pesquisador da Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio/Fiocruz.
Pedro Paulo de Abreu Manso
Tcnico em Histologia pela Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio, bilogo e
mestre em Cincias pelo programa de Biologia Celular e Molecular do Instituto Oswaldo
Cruz/IOC. Tecnologista em Sade Pblica do Laboratrio de Patologia do Instituto
Oswaldo Cruz, e Professor de Biologia da Secretaria Estadual de Educao.
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Sebastio Enes Reis Couto

Medico Veterinrio. Especialista em Planejamento e Produo de Animais de Laboratrio, Gnotobiticos e Livre de Germes Patognicos Especficos/SPF. Tecnologista Snior
em Sade Pblica do Centro de Criao de Animais de Laboratrio/Cecal da Fundao
Oswaldo Cruz/Fiocruz.
Silvio Valle Moreira
Mdico Veterinrio, Pesquisador Titular da Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio
e coordenador de cursos de Biossegurana na Fundao Oswaldo Cruz.
Simone Ramos
Biolga, especialista em Virologia pelo Instituto Paulo de Ges UFRJ, mestre em
Cincias - Instituto Paulo de Ges UFRJ.
Wildeberg Cal Moreira
Mdico Veterinrio, mestre em Tecnologia de Imunobiolgicos pelo IOC/Bio-Manguinhos/
Fiocruz. Tecnologista Pleno em sade pblica do Cecal/Fiocruz
Virgnia de Lourdes Mendes Finete
Qumica e mestre em Qumica Analtica pela Pontifcia Universidade Catlica do Rio de
Janeiro. Professora de Qumica na Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio da
Fundao Oswaldo Cruz/Fiocruz.
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Sumrio
Prefcio
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Apresentao da coleo 15
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Apresentao pelas organizadoras
Captulo 1. Biossegurana e boas prticas laboratoriais
21
Captulo 2. Conceitos e tcnicas bsicas aplicadas em laboratrio 67

Captulo 3. Microscopia da luz
125
Captulo 4. Animais de laboratrio
155
Captulo 5. Fundamentos em qumica experimental
223
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PREFCIO
O Chico Trombone costumava me dizer:
Isso eu sei fazer, Dr. Luiz Fernando, aprendi com Joaquim Venncio.
E era com orgulho que se referia a seu mestre.
Vimos, portanto, que a formao de tcnicos j vem dos tempos de
Oswaldo. claro que no era institucionalizado como hoje. Eram outros
tempos.
Joaquim Venncio nasceu na fazenda Bela Vista, em Minas Gerais. Era
a fazenda da me de Carlos Chagas, pai. Em 1916, veio trabalhar no Instituto
Oswaldo Cruz. Veio e deu certo. O Dr. Lutz teria dito certa vez:
No troco o Venncio por nenhum doutor de Oxford ou de
Cambridge.
Se no disse, pensou.
Eficincia nos processos de seleo de pessoal? Competncia do
servio de recursos humanos? Evidentemente que no. No havia nada
disso nessa poca. As coisas eram muito mais simples, e davam certo. Veio
porque era amigo do velho Carlos Chagas. Amigos de infncia. Brincaram
juntos na fazenda.
Quando Joaquim Venncio faleceu, em 27 de agosto de 1955, teve
seu necrolgio publicado na Revista Brasileira de Biologia. Lugar de ne-
crolgio de cientista famoso. Cito textual: Joaquim Venncio conseguiu,

durante cerca de 35 anos que trabalhou ativamente, aprender zoologia
que conhecia de modo invejvel. Como decorrncia das contingncias da
vida, no teve oportunidade de instruir-se, mas sua mentalidade era de um
homem culto. Pela convivncia com o Dr. Lutz, pela observao direta do
que via nas excurses e no laboratrio, adquiriu conhecimento detalhado
de vrios grupos zoolgicos, principalmente anfbios, moluscos fluviais e
trematdeos. Chegou a conhecer muito bem os anfbios e, com grande
facilidade, os classificava nas excurses pela voz. Dadas as indicaes feitas
pelo Dr. Lutz em seus trabalhos, h casos em que foi citado na literatura
como colaborador direto.
Joaquim Venncio era, sem dvida, um naturalista. Era competente,
tinha o domnio do ofcio, a maestria da arte.
E gostava de ensinar. Ensinou muita gente.
Certa vez, o Venancinho me disse:
Era a Escola do Venncio, n? Foi muito boa, n?
* * *
Na presidncia de Sergio Arouca, resolvemos atualizar a Escola de
Venncio. E foi assim que surgiu a Escola Politcnica, com o nome do seu
patrono. Cresceu e abriu vrias frentes, desde a vocao cientfica aos
cursos de nvel mdio complementados pela formao de tcnicos. Foi um
xito, como a antiga. Aparece sempre nos primeiros lugares nas avaliaes
e j se estendeu a outras instituies.
* * *
E agora surgem os livros didticos. Organizado por Etelcia Moraes
Molinaro, Luzia Ftima Gonalves Caputo e Maria Regina Reis Amendoeira, vem luz a coleo Conceitos e Mtodos para a Formao de
Prefcio
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Tcnicos em Laboratrios de Sade , reunindo professores de vrias unidades da Fiocruz.

Os captulos oferecem a histria da tcnica, os seus fundamentos, a
maneira moderna de realiz-la, as suas aplicaes, a organizao do laboratrio etc.
til para os cursos da Fundao e para outros externos. Mostra,
tambm, o quanto as unidades da Fiocruz esto integradas na realizao de
suas tarefas.
Ensino questo primordial. Sem ele, o pas no se desenvolve.
Est de parabns a Fiocruz pela realizao de mais uma tarefa de
primordial importncia.
Oswaldo Cruz est orgulhoso dos seus continuadores.
Luiz Fernando Ferreira
Pesquisador Emrito da Fundao Oswaldo Cruz
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Apresentao
A coletnea de livros intitulada Conceitos e Mtodos para a Formao
de Profissionais em Laboratrios de Sade, organizada por Etelcia Moraes
Molinaro, Luzia Ftima Gonalves Caputo e Maria Regina Reis Amendoeira
antes de tudo uma obra original, importante e necessria. Original porque no
existe na literatura tcnica em sade, na rea biomdica brasileira e internacional, pelo menos que eu saiba, algo semelhante em abrangncia, profundidade
e seleo dos temas abordados; importante pelo pblico alvo a que se destina, muito alm da Formao de Tcnicos de Laboratrios, abrangendo certamente todos os profissionais de sade, e necessria porque servir como
obra de referncia para a formao dos mencionados tcnicos e de consulta
obrigatria para todos os profissionais de sade que necessitem de esclarecimento dos aspectos tcnicos ali abordados.
Versada em cinco volumes e 22 captulos, organizados em sequncia
lgica, desde a biossegurana e boas prticas de laboratrio, passando por
todos os fundamentos das tcnicas laboratoriais, bioqumica bsica, biologia
celular e molecular, histologia e ultraestrutura, at atingir o cerne da prtica
laboratorial, da imunologia infectoparasitologia virologia, bacteriologia,
micologia, protozoologia e helmintologia e seus vetores, com a entomologia
mdica e a malacologia. Os autores que escrevem os respectivos captulos,
so do melhor nvel intelectual e cientfico, com a titulao de mestres, doutores e especialistas, com grande experincia prtica nos assuntos de que tratam.
Parabenizo o Instituto Oswaldo Cruz e a Escola Politcnica Joaquim
Venncio, que patrocinaram esta obra de referncia, os quais, desde seus
primrdios, valorizaram a qualidade da formao dos seus tcnicos e com eles
povoaram e esto povoando o Brasil de Norte a Sul e de Leste a Oeste com
o que temos de melhor os fundamentos para uma boa pesquisa. Aproveito
esta oportunidade para homenagear a figura de Henry Willcox, que no incio
da dcada de 1980, quando o convidei para me ajudar na coordenao dos
cursos de ps-graduao em Biologia Parasitria e Medicina Tropical do Instituto Oswaldo Cruz, foi o grande incentivador para criarmos paralelamente o
Curso de Tcnico em Pesquisa, do qual foi o seu primeiro coordenador.
Igualmente parabenizo as organizadoras desta coletnea e a Fiocruz como
um todo, pelo lanamento desta obra pioneira.
Jos Rodrigues Coura
Pesquisador Titular Emrito
Chefe do Laboratrio de Doenas Parasitrias IOC/Fiocruz
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Um sonho quase realizado

(Oswaldo Cruz 1872-1917)
As alteraes pelas quais passa o mundo com a globalizao trazem

como consequncia o surgimento de novos paradigmas tecnolgicos, fazendo-se necessrio que o ensino da rea da sade atenda s exigncias do
mundo moderno, do trabalho e do atual perfil do tcnico da rea.
Os cursos para a formao de tcnicos da Fundao Oswaldo Cruz Fiocruz buscam demonstrar os princpios cientficos envolvidos com as tcnicas
laboratoriais, preparando os alunos para as transformaes no mundo do trabalho em sade, decorrentes do desenvolvimento tecnolgico e cientfico. Neste contexto, duas Unidades Tcnicas Cientficas desta instituio, o Instituto Oswaldo Cruz IOC e a Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio
EPSJV, historicamente so as responsveis por coordenarem cursos e especializaes tcnicas que se firmaram como modelos desses princpios. Essas
Unidades, na rea de ensino tcnico, sempre estiveram intrinsecamente ligadas,
e os professores realizam permanente parecerias entre si. Muitos de ns,
egressos desses cursos, so hoje docentes e autores desta coleo.
Alm da formao tcnica de profissionais em nvel regional e nacional,
intensificou-se, na Fiocruz, a demanda para o estabelecimento de cooperaes
tcnicas internacionais, que por sua expertise e capacidade de produzir, pas-
sou a divulgar conhecimentos, elaborando cursos, metodologias e tecnologias

educacionais. A Escola Politcnica Centro Colaborador da Organizao
Mundial da Sade (OMS) para a educao de tcnicos em sade, desde
2004.
A ideia da publicao dessa coleo surgiu da necessidade conjunta das
duas Unidades da Fiocruz de produzir material didtico, que atendesse aos
alunos dos cursos de Nvel Tcnico em Sade da Fiocruz e de outros locais.Desse
modo, o nosso principal desafio oferecer contedo que abarque toda a rea
tcnica de sade utilizada nos principais cursos de nvel mdio, e, que ao
mesmo tempo, possa manter-se suficientemente atualizado.
Dada a complexidade da estrutura instrumental e pedaggica dos Cursos
Tcnicos, se fez necessria a publicao de uma coleo, escolhendo-se tpicos de importncia bsica. Para tanto, foram convidados pesquisadores/professores com experincia em ensino de Cursos de Nvel Tcnico e de destacado
conhecimento nos temas abordados nos 22 captulos, que constituem os cinco
volumes da coleo.
A coleo Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em
Laboratrios de Sade tem como objetivo integrar conhecimentos tericos e
prticos, proporcionando ao aluno informaes que possibilitem uma permanente reflexo de seu papel como agente transformador dos processos e
atividades de ensino, pesquisa cientfica e desenvolvimento tecnolgico. Outro objetivo inconteste destes livros servir para professores, como norteadores
da definio curricular de seus cursos.
Visando garantir a autonomia dos autores, e respectivas responsabilidades,foi mantida a formatao original dos textos, inclusive as fotos,
figuras, diagramas. Podem ocorrer tambm, algumas repeties de contedo
em alguns captulos, mas, a nosso ver, a retirada de partes de captulos j
abordadas poderia descontextualizar o texto.
Um sonho quase realizado
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O pontap inicial deste sonho s foi possvel pelo incondicional apoio

dado pelo professor Andr Paulo da Silva Malho, pela Dra. Isabel Brasil
Pereira, pessoa-chave desencadeadora do processo, e pela Dra. Tnia
Cremonini de Arajo Jorge, que apoiaram e incentivaram institucionalmente
este projeto. Agradecemos especialmente aos autores que abraaram este
trabalho com muito entusiasmo e que possibilitaram a sua concretizao. E
um carinho especial para Josane Ferreira Filho pela organizao paciente de
nossas reunies e textos, com a gratido das organizadoras e autores.
Agradecemos em especial aos renomados cientistas emritos da
Fundao Oswaldo Cruz, doutores Luiz Fernando Ferreira patrono da
EPSJV , Jos Rodrigues Coura, que nos deram a honra de apresentar
esta coleo.
Esperamos assim, estar contribuindo para a sistematizao do conhecimento dos leitores sobre os diversos tpicos abordados em cada captulo, apresentando cada assunto de forma didtica e sinttica, recomendando
a consulta literatura especializada sempre que houver necessidade de
aprofundamento do conhecimento em determinados temas.
Luzia Ftima Gonalves Caputo
Maria Regina Reis Amendoeira
Organizadoras
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Captulo 1
Biossegurana
e boas prticas laboratoriais
Cntia de Moraes Borba
Marco Antonio F. da Costa
Maria Eveline de Castro Pereira
Paulo Roberto de Carvalho
Silvio Valle
Introduo
O laboratrio um ambiente extremamente hostil. Convivem no mesmo

espao equipamentos, reagentes, solues, microrganismos, pessoas, papis,
livros, amostras, entre outros elementos. Para que esse sistema funcione de
forma adequada e segura, torna-se necessrio:
Disciplina;
Respeito s normas e legislaes pertinentes;
Trabalhar no contexto da qualidade e da Biossegurana;
Conscincia tica.
O ambiente laboratorial deve ser entendido como um sistema complexo, onde existem interaes constantes entre os fatores humanos, ambientais,
tecnolgicos, educacionais e normativos. Essas interaes, muitas vezes, favorecem a ocorrncia de acidentes.
Um instrumento que pode contribuir para a minimizao dessas ocorrncias desagradveis a Biossegurana, definida como:
Conjunto de estudos e aes destinados a prevenir, controlar, reduzir ou eliminar riscos inerentes s atividades que
possam comprometer a sade humana, animal, vegetal e o
meio ambiente.
Nessa linha, devemos entender os conceitos de perigo, risco e acidente.
O perigo uma possibilidade de causar danos, o
PERIGO, RISCO,
risco a probabilidade de concretizao desse
perigo e acidente a concretizao desse risco.
ACIDENTE
BIOLGICO
Relativo a, ou prprio dos seres vivos (Dicionrio

Houaiss da Lngua Portuguesa).
No Brasil, a Biossegurana possui duas vertentes:

A legal, que trata das questes envolvendo a manipulao de
Organismos Geneticamente Modificados (OGMs) e pesquisas
com clulas-tronco embrionrias, e que tem uma lei, a de n o
11.105, chamada Lei de Biossegurana, sancionada pelo governo brasileiro em 24 de maro de 2005 (SILVA, PELAEZ e
VALLE, 2009; VALLE, 2009; VALLE e BARREIRA, 2007).
A praticada, aquela desenvolvida, principalmente, nas instituies de sade e laboratrios em geral, que envolve os riscos por
agentes qumicos, fsicos, biolgicos, ergonmicos e psicossociais,
Biossegurana e boas prticas laboratoriais
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presentes nesses ambientes, que se encontra no contexto da

segurana ocupacional (COSTA e COSTA, 2009; COSTA e
COSTA, 2005, 2006; VALLE e TELLES, 2003; CARVALHO, 1999).
Este captulo, portanto, tem como objetivo apresentar, de forma didtica, algumas caractersticas da Biossegurana e da qualidade praticadas em espaos laboratoriais. Estando a Biossegurana e a qualidade aliceradas, principalmente, na postura profissional, consideramos importante discutir, tambm, alguns conceitos relacionados tica.
1. Facilitando a prxis da Biossegurana
O homem um ser biolgico, logo, um produto da natureza. Mas

tambm um ser social, isto , um produto da cultura, do saber, das suas
interrelaes. De acordo com Schramm (2006),
o humano enfrenta seu estado de necessidade e precariedade de vrias maneiras, inclusive com o saber-fazer racional e
operacional da tecnocincia. Ademais, neste sculo adquiriu a competncia biotecnocientfica, que visa transformar e
reprogramar o ambiente natural, os outros seres vivos e a si
mesmo em funo de seus projetos e desejos, fato que se
torna, cada vez mais, motivo de grandes esperanas e angstias, consensos e conflitos, em particular do tipo moral.
As preocupaes da citao anterior, oriundas do desenvolvimento tcnico-cientfico do nosso tempo, vm impactando de forma acentuada as relaes humanas e, nesse sentido, torna-se importante compreender alguns conceitos como os de moral, tica, biotica, deontologia, diceologia, Comits de
tica em Pesquisa, Comits de tica no Uso de Animais e as relaes desses
conceitos com o direito. A devida compreenso desses conceitos facilitar,
sobremaneira, o entendimento das relaes que envolvem a Biossegurana
(GOLDIM, 2009).
O funcionrio no tem moral. Ele agiu sem tica. Afinal de

contas, o que MORAL e o que TICA?
Normalmente, as palavras moral e tica so utilizadas como sinnimos, vinculadas a um conjunto de regras obrigatrias. Esta confuso ocorre h
muitos sculos. A prpria etimologia destes termos gera confuso, j que tica
vem do grego ethos, que significa modo de ser, e moral tem sua origem
do latim, que vem de mores, significando costumes. Podemos definir esses
termos da seguinte forma:
um conjunto de normas que regulam o comportamento
humano. Estas normas so adquiridas pela educao, pela
MORAL tradio e pelo cotidiano, ou seja, pelo processo de
culturalizao. A moral algo pessoal e ntimo. Por exemplo:
andar com os seios mostra na praia no moralmente
aceito no Brasil, porm, em outros pases isso normal.
TICA
o conjunto de valores que orientam o comportamento

humano em sociedade. O que a caracteriza a reflexo
sobre a ao humana. Por exemplo: tico jogar resduo
qumico na pia?
Valores so normas, princpios ou padres sociais aceitos ou mantidos

por indivduo, classe, sociedade, etc. Vsquez (1998) aponta que a tica
terica e reflexiva, enquanto a moral eminentemente prtica. Uma completa a
outra, havendo um interrelacionamento entre ambas, pois, na ao humana, o
conhecer e o agir so indissociveis.
Normas ticas, segundo Christofari (1998: 57),
dizem respeito ao agir humano. So aquelas que disciplinam o comportamento do homem, tanto o de foro ntimo e
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subjetivo, quanto o de natureza exterior e social. Prescrevem

deveres para a consecuo de valores. Entretanto, no apenas implicam em juzos de valor, mas impem a escolha de
uma diretriz, de carter obrigatrio num determinado grupo
social. Sua principal caracterstica a possibilidade de serem
violadas.
E Biotica, o que ?
Existem vrias definies para o termo Biotica, do grego bios (vida) e
tica. Podemos defini-la da seguinte forma:
uma rea do conhecimento interdisciplinar (integrao entre as disciplinas), cuja finalidade compreender e resolver
BIOTICA questes ticas relacionadas aos avanos tecnolgicos da
Biologia e da Medicina e questes que de alguma forma influenciam as nossas vidas.
A Biotica est apoiada em quatro princpios:

Autonomia;
No-maleficncia;
Beneficncia;
Justia.
Princpio da autonomia o respeito vontade, crena, aos valores
morais do indivduo e sua intimidade. Discusses sobre os limites morais da
eutansia, do aborto, entre outros, esto no contexto deste princpio. As pessoas tm o direito de decidir sobre as questes relacionadas ao seu corpo e sua
vida. Em indivduos intelectualmente deficientes, e no caso de menores de 18
anos, este princpio deve ser exercido pela famlia ou pelo responsvel legal.
Princpio da beneficncia Assegura o bem-estar das pessoas, evitando danos, e garante que sejam atendidos seus interesses. Busca-se a maximizao
do benefcio e a minimizao dos agravos.
Princpio da no-maleficncia Assegura que sejam minorados ou

evitados danos fsicos aos sujeitos da pesquisa ou pacientes. universalmente
consagrado atravs do aforismo hipocrtico primum non nocere (primeiro no
prejudicar).
Princpio da justia Exige equidade, ou seja, a obrigao tica de
tratar cada indivduo de acordo com o que moralmente correto e adequado
e de dar a cada um o que lhe devido.
Em junho de 2005, em reunio na sede da Organizao das Naes
Unidas para a Educao, a Cincia e a Cultura (Unesco), para ser discutida
a Declarao Universal sobre Biotica e Direitos Humanos, o Brasil teve um
importante papel ao propor e conseguir a aprovao da incluso neste documento dos campos sanitrio, social e ambiental. Esta declarao foi
aprovada por aclamao em outubro de 2005, na 33 a sesso da Conferncia Geral da Unesco.
O importante dessa declarao que a Biotica no fica restrita s
cincias da sade, mas a tudo aquilo que de alguma forma tenha implicao
sobre as nossas vidas. Portanto, entre as questes discutidas na Biotica,
temos:
Aborto Eutansia Clonagem Pesquisas com/em humanos Alimentos transgnicos Fertilizao in vitro
Uso de clulas-tronco embrionrias Testes com novos
medicamentos Aquecimento global Tratamento e disposio de resduos, entre outros.
E o que Deontologia?
A palavra deontologia originria do grego deontos (o que obrigatrio) e logos (estudo). Com isso, podemos defini-la da seguinte forma:
DEONTOLOGIA
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um tratado de deveres e/ou condutas que

regem um profissional. O profissional est sujeito a uma deontologia especfica para o exerccio da sua profisso conforme o cdigo de
tica da sua classe.
Existem inmeros cdigos de Deontologia, sendo esta codificao da

responsabilidade de associaes ou conselhos profissionais. Normalmente, os
cdigos deontolgicos tm por base as grandes declaraes universais e esforam-se por traduzir o sentimento tico expresso nestas, adaptando-o, no
entanto, s particularidades de cada pas e de cada grupo profissional. Estes
cdigos propem sanes, segundo princpios e procedimentos explcitos,
para os infratores do mesmo. Alguns cdigos no apresentam funes normativas,
tendo apenas uma funo reguladora.
CDIGO DE TICA Visa formao da conscincia profissional sobre padres de conduta de uma determinada classe.
E Diceologia?
Diceologia deriva do grego diceo (direitos) e logos (estudo). Portanto, podemos defini-la como:
DICEOLOGIA
um tratado sobre os direitos profissionais de

uma determinada classe, luz do seu cdigo
de tica.
O que so os Comits de tica em Pesquisa?

Os Comits de tica em Pesquisa (CEP) com Seres Humanos so
espaos acadmicos que avaliam a adequao tica dos projetos de pesquisas que envolvam seres humanos. Quando a pesquisa envolve animais,
esses comits so chamados de Comits de tica no Uso de Animais
(CEUA).
No caso dos CEPs, esta avaliao realizada luz da resoluo n.
196 do Conselho Nacional de Sade (CNS), de 10 de outubro de
1996, e no caso dos animais, luz da Lei de Procedimentos para o Uso
Cientfico de Animais, n. 11.794, de 8 de outubro de 2008.
Todos os CEPs devem ser credenciados junto Comisso Nacional
de tica em Pesquisa (Conep). uma comisso do CNS, criada atravs
da resoluo n. 196/96 e com constituio designada pela resoluo n.
246/97, com a funo de implementar as normas e diretrizes
regulamentadoras de pesquisas envolvendo seres humanos, aprovadas pelo
conselho. Tem funo consultiva, deliberativa, normativa e educativa, atuando conjuntamente com uma rede de CEPs, organizados nas instituies
onde as pesquisas se realizam. A Conep e os CEPs tm composio
multidisciplinar com participao de pesquisadores, estudiosos de Biotica,
juristas, profissionais da sade, das cincias sociais, humanas e exatas e
representantes de usurios.
Um instrumento obrigatrio nos projetos de pesquisa que envolvem
seres humanos o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE).
A pesquisa s pode ser iniciada se todos os indivduos participantes tiverem acesso aos objetivos da pesquisa, seus benefcios e possveis riscos,
mecanismos de proteo, endereo dos pesquisadores, e declararem (ou
seus representantes legais) formalmente o aceite para a participao no
estudo ou em terapias especficas. uma deciso voluntria.
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2. Legislao Brasileira de Biossegurana
A aprovao da Lei de Biossegurana (lei n. 11.105, de 24 de maro

de 2005) teve como motivao principal pr fim aos impasses jurdicos sobre
a liberao comercial dos Organismos Geneticamente Modificados (OGMs),
tambm conhecidos por transgnicos.
Apesar do amplo entendimento existente atualmente com a palavra
biossegurana, como podemos constatar nos diversos artigos publicados, no
contexto da Lei de Biossegurana vigente no Brasil ela s se aplica aos OGMs
como previsto no:
Art. 1 Esta lei estabelece normas de segurana e mecanismos de fiscalizao sobre a construo, o cultivo, a produo, a manipulao, o transporte, a transferncia, a importao, a exportao, o armazenamento, a pesquisa, a
comercializao, o consumo, a liberao no meio ambiente
e o descarte de organismos geneticamente modificados
OGMs e seus derivados, tendo como diretrizes o estmulo
ao avano cientfico na rea de biossegurana e biotecnologia,
a proteo vida e sade humana, animal e vegetal e a
observncia do princpio da precauo para a proteo do
meio ambiente.
O legislador, com o objetivo de esclarecer os limites da lei e enfatizar

que ela se limita a uma determinada e especfica biotecnologia, previu as
seguintes definies:
Art. 3 Para os efeitos desta Lei se considera:
I organismo: toda entidade biolgica capaz de reproduzir
ou transferir material gentico, inclusive vrus e outras classes
que venham a ser conhecidas;
II cido desoxirribonucleico ADN, cido ribonucleico
ARN: material gentico que contm informaes
determinantes dos caracteres hereditrios transmissveis descendncia;
III molculas de ADN/ARN recombinante: as molculas

manipuladas fora das clulas vivas mediante a modificao
de segmentos de ADN/ARN natural ou sinttico e que
possam multiplicar-se em uma clula viva, ou ainda as molculas de ADN/ARN resultantes dessa multiplicao; consideram-se tambm os segmentos de ADN/ARN sintticos
equivalentes aos de ADN/ARN natural;
IV engenharia gentica: atividade de produo e manipulao de molculas de ADN/ARN recombinante;
V organismo geneticamente modificado OGM: organismo cujo material gentico ADN/ARN tenha sido modificado por qualquer tcnica de engenharia gentica;
VI derivado de OGM: produto obtido de OGM e que
no possua capacidade autnoma de replicao ou que no
contenha forma vivel de OGM.
A Lei de Biossegurana prev que as demais biotecnologias que no

envolvam a produo de OGMs e seus derivados, apesar de apresentarem
trocas de genes e at a possibilidade de um certo grau de risco biolgico, no
so regulados por esse marco legal.
Existem alguns procedimentos bsicos e necessrios para a liberao
comercial de um OGM: as condies bsicas necessrias para que a instituio
requerente solicite a autorizao de uso comercial, a tramitao das solicitaes
na Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana (CTNBio), os critrios bsicos para viabilizar a anlise das solicitaes, a tramitao de processos envolvendo a necessidade de estudos e de relatrio de impacto ambiental, as
condies para a existncia de audincias pblicas e a possibilidade de recursos administrativos por parte dos agentes interessados nas revises das decises
tomadas pela CTNBio.
Toda instituio que utilizar tcnicas e mtodos de engenharia gentica
ou realizar pesquisas com OGM e seus derivados dever criar uma Comisso
Interna de Biossegurana (CIBio), alm de indicar um tcnico principal res-
| 31
ponsvel para cada projeto especfico. Os critrios a serem observados na

constituio da CIBio e os mecanismos de funcionamento foram estabelecidos atravs da resoluo normativa n. 1, de 20 de junho de 2006.
A CTNBio constituda por 27 membros titulares e respectivos suplentes, assim distribudos: 12 especialistas de notrio saber cientifico e tcnico,
em efetivo exerccio profissional (trs de cada uma das reas de sade humana,
animal, vegetal e ambiental), nove representantes de rgos, sendo um de
cada respectivo ministrio (ministrios da Cincia e Tecnologia, da Agricultura,
Pecuria e Abastecimento, da Sade, do Meio Ambiente, do Desenvolvimento Agrrio, do Desenvolvimento, Indstria e Comrcio Exterior, da Defesa, da
Secretaria Especial de Aquicultura e Pesca e das Relaes Exteriores) e seis
especialistas representantes de organizaes da sociedade civil (nas reas de
Defesa do Consumidor, Sade, Meio Ambiente, Biotecnologia, Agricultura
Familiar e Sade do Trabalhador).
Dentre as competncias da CTNBio, encontra-se a de emitir resolues, de natureza normativa, sobre as matrias de sua competncia. Para
pedidos de liberao comercial, a deciso favorvel dever ter o voto de
no mnimo 14 dos membros da CTNBio. O Conselho Nacional de
Biossegurana (CNBS) um rgo de assessoramento superior do presidente da Repblica, ao qual compete a formulao e a implementao da
Poltica Nacional de Biossegurana, o estabelecimento de princpios e
diretrizes para a ao administrativa dos rgos e entidades federais relacionados biossegurana, a anlise de recursos interpostos pelos rgos de
registro e fiscalizao a decises de liberao comercial dos transgnicos e
seus derivados efetuadas pela CTNBio, a anlise dos aspectos de convenincia e oportunidade socioeconmicas e do interesse nacional nos processos de liberao comercial, quando submetidos ao conselho pela
CTNBio, e sempre que entender necessrio poder avocar e decidir sobre
qualquer processo de liberao comercial de OGM e derivado.
O CNBS decidir sobre os recursos dos rgos de registro e fiscalizao relacionados liberao comercial e encaminhados no prazo de trinta dias
a partir da data de publicao da deciso da CTNBio. Depois de analisados
os aspectos de biossegurana pela CTNBio, vencidos possveis recursos e no
havendo mais estudos adicionais que os rgos de registro e fiscalizao entendam necessrios para atender s suas reas de competncia, ocorrer o registro
no rgo competente, podendo ento ser utilizado comercialmente.
Quando a CTNBio entender que o transgnico potencialmente ou
efetivamente causador de degradao ambiental, bem como determinar a necessidade de licenciamento ambiental, o processo ser encaminhado ao rgo
competente do Ministrio do Meio Ambiente.
Ao se apresentar o processo para liberao comercial, de acordo com a
lei brasileira, pode-se perceber o grau de complexidade. O objetivo de criar
uma lei capaz de agilizar a aprovao de OGM no pas baseou-se fundamentalmente no fortalecimento dos poderes da CTNBio, em detrimento das competncias dos rgos de fiscalizao e controle dos ministrios afins.
A incluso de uma srie de dispositivos burocrticos que garantem a
possibilidade de recursos s decises tcnicas tomadas pela CTNBio pode
fazer com que a lei de biossegurana, diferentemente das expectativas iniciais
de simplificao e de agilizao do processo de avaliao comercial, continue
sendo a principal fonte de riscos e incertezas comercializao dos transgnicos.
3. Conteno e infraestrutura laboratorial
A conteno laboratorial tem como objetivo reduzir a exposio da equipe

de profissionais que trabalha num laboratrio, seja na bancada ou mesmo na limpeza, a riscos biolgicos, qumicos e fsicos, como a radiao ionizante.
Para se definir a conteno necessria, importante uma anlise de risco
da atividade a ser desenvolvida nesse local, ou seja, quais os agentes qumicos,
| 33
biolgicos e fsicos que sero manipulados. importante que o profissional

conhea a composio e os riscos associados a cada material com o qual vai
trabalhar, podendo, para tanto, consultar o protocolo do experimento a ser
realizado, a Ficha de Informao de Segurana de Produto Qumico (ABNT/
NBR 14725) e/ou o Manual de Biossegurana.
Segundo o Ministrio da Sade, a conteno pode ser classificada
como primria que visa a garantir a proteo do ambiente interno do laboratrio e secundria, que est relacionada proteo do ambiente externo e
proporcionada pela combinao de infraestrutura laboratorial e prticas
operacionais (SKARABA, et al., 2004; PESSOA e LAPA, 2003).
3.1. Barreiras primrias
Os equipamentos de proteo so barreiras primrias que visam a proteger o profissional (individual) e o ambiente (coletivo). A Norma
Regulamentadora n. 6, do Ministrio do Trabalho e Emprego, estabelece que
o empregador deve adquirir e fornecer ao trabalhador equipamentos de proteo individual (EPI), orientando e treinando sobre o uso adequado, guarda e
conservao, realizando periodicamente a higienizao e a manuteno, substituindo imediatamente sempre que danificado e extraviado.
Toda vez que as medidas de proteo coletiva forem tecnicamente
inviveis e no oferecerem completa proteo contra os riscos de acidentes no
trabalho e/ou doenas profissionais, o equipamento de proteo individual
deve ser utilizado pelo profissional como um mtodo de conteno dos riscos.
Historicamente, os trabalhadores da rea da sade que atuam em hospitais,
clnicas odontolgicas, veterinrias e laboratrios so considerados como
categoria profissional de alto risco, pois esto frequentemente expostos aos
riscos biolgicos, principalmente quando manuseiam fluidos corpreos e sangue (NISHIDE e BENATTI, 2004).
Os equipamentos de proteo individual so todos os dispositivos de

uso individual destinados a proteger a sade e a integridade fsica do trabalhador. A seguir, so enumerados os EPIs disponveis na maioria dos laboratrios
de pesquisa, clnico e ensino.
Protetores faciais Oferecem uma proteo face do
trabalhador contra risco de impactos (partculas slidas,
quentes ou frias), de substncias nocivas (poeiras, lquidos e vapores), como tambm das radiaes (raios
infravermelho e ultravioleta, etc.).
Protetores oculares Servem para proteger os
olhos contra impactos, respingos e aerossis.
importante que sejam de qualidade comprovada, a fim de proporcionar ao usurio viso transparente, sem distores e opacidade.
Protetores respiratrios So utilizados para proteger o
aparelho respiratrio. Existem vrios tipos de respiradores,
que devem ser selecionados conforme o risco inerente
atividade a ser desenvolvida. Os respiradores com filtros
mecnicos, por exemplo, destinam-se proteo contra
partculas suspensas no ar, os com filtros qumicos protegem contra gases e vapores orgnicos. As mscaras, que podem
ser semifaciais e de proteo total, so necessrias no caso de uso
de gases irritantes como o cloreto de hidrognio.
Protetores auditivos Usados para prevenir a
perda auditiva provocada por rudos. Devem
ser utilizados em situaes em que os nveis de
rudo sejam considerados prejudiciais ou nocivos em longa exposio.
| 35
Luvas Previnem a contaminao das mos do trabalhador

ao manipular, por exemplo, material biolgico potencialmente patognico e produtos qumicos. Alm de reduzir
a probabilidade de que os microrganismos presentes nas
mos dos trabalhadores possam ser transmitidos aos pacientes durante um atendimento mdico-hospitalar.
Jalecos So de uso obrigatrio para todos
que trabalham nos ambientes laboratoriais
onde ocorra a manipulao de microrganismos patognicos, manejo de animais, lavagem de material, esterilizao, manipulao
de produtos qumicos. Devem ser de mangas
compridas, cobrindo os braos, o dorso, as
costas e a parte superior das pernas.
Calados de segurana So destinados proteo dos
ps contra umidade, respingos, derramamentos e impactos
de objetos diversos, no sendo permitido o uso de tamancos, sandlias e chinelos em laboratrios.
Equipamentos de proteo coletiva (EPC)
Tm como funo a proteo do ambiente e a
manuteno da sade, alm da integridade dos
ocupantes de uma determinada rea. Podem ser
de uso rotineiro, como as cabines de segurana
biolgica e capelas de exausto qumica, ou
para situaes emergenciais, como os extintores
de incndio, chuveiro e lava-olhos, que devem
estar instalados em locais de fcil acesso e bem
sinalizados.
Cabines de Segurana Biolgica (CSB)

Em 2909 a W. K. Mulford Phamaceutical CO, uma
indstria farmacutica americana, concebeu o primeiro
modelo de cabine para proteger a sade dos profissionais durante a preparao de tuberculina.
So equipamentos concebidos para manter uma rea,
denominada zona de trabalho, livre de partculas ou de
provveis contaminantes, tais como bactrias, que possam alterar o produto com o qual se trabalha, afetar a
sade do trabalhador e o ambiente. A proteo se efetiva mediante a combinao de elementos
eletromecnicos/eletrnicos (motor, ventilador, filtro,
dutos e iluminao) e processos fsicos (fluxo laminar,
diferena de presso) que impulsionam o ar atravs de
filtros especiais (Hepa) de grande superfcie, que tm
uma eficincia mnima de reteno de partcula de
99,99%, quando o tamanho das mesmas de 0,3 m
(micrmetros).
As cabines devem ser submetidas periodicamente manuteno e a trocas dos filtros e o laboratrio deve
possuir relatrio da manuteno mantido disposio da
fiscalizao do trabalho.
3.2. Barreiras secundrias (infraestrutura laboratorial)
Uma instalao adequada aquela que est de acordo com o funcionamento do laboratrio e com o nvel de biossegurana recomendado para os
agentes manipulados no local, atuando tambm como uma barreira de conteno secundria. Para os laboratrios de Nvel de Biossegurana 1 (NB-1)
onde so manipulados agentes biolgicos da classe de risco 1 , so recomendados os seguintes critrios para rea fsica:
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Identificao do nvel de Biossegurana e dos microrganismos (Fi-
gura 1).
Figura 1- Sinalizao
Separao do laboratrio do acesso pblico.

Laboratrio com acesso controlado.
Local para armazenar EPIs de uso exclusivo no
laboratrio.
Paredes, tetos e pisos, impermeveis e resis-
tentes desinfeco.
Autoclave prxima ao laboratrio, para maio-
res informaes veja captulo 2, pgina 87.

Nos laboratrios de Nvel de Biossegurana 2 (NB-2), so manipulados microrganismos da classe de risco 2. Alm dos critrios relacionados no
risco 1, so recomendados tambm:
Lavatrio para as mos prximo entrada do laboratrio.
Torneira com acionamento sem uso das mos.
Sistema central de ventilao.
Janelas vedadas.
Antecmara.
Sistema de gerao de emergncia eltrica.
Cabine de segurana biolgica (OPS, 2009; CAMPOS, 2003).
Na figura 2, apresentamos um layout de um laboratrio NB-2, onde

consta no seu interior uma autoclave que ser utilizada para inativar os resduos
gerados durante o experimento para posterior descarte. Constam tambm o
lavatrio para lavagem de mos prximo entrada e o cilindro de gs instalado
na parte externa, abastecendo atravs de tubulao a estufa de CO 2 que fica
dentro do laboratrio.
Figura 2 Layout de um laboratrio NB-2
Os laboratrios de Nvel de Biossegurana 3 (NB-3) so aqueles

onde so manipulados microrganismos de alto risco individual e moderado
risco para a comunidade. J nos de Nvel de Biossegurana 4 (NB-4) so
manipulados agentes biolgicos com alto risco individual e para a comunidade.
Os critrios recomendados para o funcionamento desses laboratrios so bastante complexos e de elevado custo. Para mais esclarecimentos dos laboratrios
citados, consulte a documentao do Ministrio da Sade (2006) sobre as
diretrizes para o trabalho em conteno com agentes biolgicos.
4. P
rincpios gerais da qualidade em laboratrios
Princpios
O mundo vive em permanente desenvolvimento e muitas so as atividades cientficas que se apresentam repletas de incertezas. Nesse sentido, coerncia e responsabilidade se fazem necessrias para se reconhecer e tratar com
afinco essas questes (CARVALHO, 2008). A busca permanente da qua-
| 39
lidade total nas atividades cientficas remete necessidade de treinamento,

aquisio e domnio de conhecimentos para a execuo das atividades com
vistas a assegurar a preciso, a validade, a qualidade dos resultados e a manuteno da integridade das pessoas, das instalaes, das mquinas, dos instrumentos e dos equipamentos.
As Boas Prticas de Laboratrio (BPL) so definidas pela Organization
for Economic Co-operation and Development (OECD) como um sistema da
qualidade relativo ao processo organizacional e s condies sob as quais
estudos no-clnicos, ou seja, estudos biomdicos no realizados em humanos,
referentes sade e meio ambiente, so planejados, realizados, monitorados,
registrados, arquivados e relatados (BRASIL, 2009; BRASIL, 2005; BRASIL, 2001).
Segundo a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (Anvisa), os princpios das Boas Prticas de Laboratrio so aplicveis em estudos que dizem
respeito ao uso seguro de produtos relacionados sade humana, vegetal e
animal e ao meio ambiente.
Com o intuito de se garantir a aplicao dos princpios das BPL, um dos
instrumentos utilizados nos laboratrios so os Procedimentos Operacionais
Padro (POP).
POP
um documento que expressa o planejamento do trabalho com vistas a padronizar e minimizar a ocorrncia de
desvios na execuo das atividades e assim garantir aos
usurios servios ou produtos livres de variaes indesejveis, independentemente de quem as realize.
Um procedimento operacional padro tem como meta
garantir que a qualidade dos exames seja a mesma em
todas as etapas do processo em qualquer momento.
Cabe aqui uma referncia a um tema que j h algum tempo vem sendo
discutido e aplicado em alguns cursos de especializao e atualizao na rea
da sade, notadamente na Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio
(EPSJV) da Fundao Oswaldo Cruz (Fiocruz). Trata-se da aplicao das
boas prticas nas atividades laboratoriais com foco diferenciado das BPL, ou
seja, capacitar e ampliar conceitos de profissionais que atuam em laboratrios,
no que tange s prticas laboratoriais, com vistas a assegurar: o entendimento
dos procedimentos, a busca da preciso, da validade e da qualidade dos
resultados e a manuteno da integridade das pessoas, das instalaes, dos
equipamentos e dos materiais.
Equipamentos, materiais e reagentes
Equipamentos de laboratrio requerem condies ambientais apropriadas para o devido funcionamento, alm de locais para instalao livres de
interferncias (vibraes, correntes de ar, incidncia de luz solar, umidade e
calor) e, no tocante instalao na rede eltrica, devem ser conectados a
tomadas adequadamente aterradas (CARVALHO, 1999). No que concerne
ao funcionamento, os equipamentos devero ser operados por pessoal capacitado, alm de serem atendidos todos os requisitos que preconizam o manual
de operao original ou nos manuais traduzidos para a lngua portuguesa,
preferencialmente no POP destinado ao mesmo.
Os equipamentos que so responsveis pelo controle das condies
ambientais indispensveis para o estudo e a gerao de dados devero ter
configurao, capacidade e localizao adequadas.
Determinados procedimentos so necessrios para que os equipamentos
funcionem a contento e os dados por eles fornecidos sejam capazes de expressar a realidade das amostras analisadas. Os equipamentos devem estar em
condies de utilizao e devem seguir um plano rigoroso de validao, quali-
| 41
ficao, calibrao e manuteno. Assim sendo, um sistema que contemple

limpeza, inspeo peridica, manuteno preventiva e calibrao ser relevante
e necessrio, o que implica, para tal, a utilizao de um POP para cada tarefa.
Cabe ainda manter no laboratrio os registros escritos de operao, calibrao,
manuteno e demais dados considerados relevantes.
CALIBRAO
Segundo o Instituto Nacional de Metrologia,

Normalizao e Qualidade Industrial (Inmetro,
2000), o conjunto de operaes que
estabelece, sob condies especificadas, a relao
entre os valores indicados por um instrumento de
medio ou sistema de medio ou valores
representados por uma medida materializada ou
um material de referncia, e os valores
correspondentes das grandezas estabelecidos por
padres (INMETRO, 2000).
Ainda no que tange aos equipamentos cientficos, h de se priorizar os

processos de manuteno preventiva (tarefas de manuteno previamente planejadas e desempenhadas, objetivando manter as condies satisfatrias de
operao) em detrimento da manuteno corretiva (tarefas de manuteno
no-planejadas para restaurar as capacidades funcionais de equipamentos ou
sistemas falhados). Os equipamentos, devidamente inclusos em sistemas preventivos de manuteno, certamente tero assegurado uma vida til prolongada
e reduo nos custos de manuteno, tendo em vista que determinadas causas
so de fcil deteco e podem ser tratadas por meio de manutenes preventivas (COUTO et al., 2003; SANTOS et al., 2007).
Quanto aos materiais, esses devem ser de origem conhecida e ter assegurado a sua qualidade. Para tanto, necessrio que se estabeleam procedimentos de controle de fornecedores, ou seja, que seja exigido dos mesmos a
apresentao de certificados de controle de qualidade. Quanto exigncia

aos fornecedores, esses devero apresentar materiais devidamente rotulados
com as seguintes informaes: origem, identidade, composio, data de produo, validade, condies de estocagem e informaes de periculosidade
(simbologias de risco e de preveno).
Exemplos de simbologias de riscos
Os smbolos de segurana so, no
Brasil, normatizados pela Associao Brasileira de Normas Tcnicas
(ABNT). Servem para lembrar o
risco do manuseio do produto, representando nos pictogramas os
primeiros sintomas com o contato
com a substncia.
TXICO
CORROSIVO
EXPLOSIVO
INFLAMVEL
Exemplos de simbologias de preveno
SUJEITO A
QUEDAS
NO
FUMAR
CHOQUE
ELTRICO
EXTINTOR
USO DE
CULOS
MANGUEIRAS
OXIDANTE
NOCIVO
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Quando se trata de armazenamento de materiais, algumas regras

devem ser estabelecidas e seguidas a risco, de modo a manter a integridade dos mesmos. Para cada material, dever ser reservado um local definido
e identificado, bem como se estabelecer um sistema de identificao e
codificao de cada produto. H de se estabelecer tambm um fluxo de
movimentao para os materiais de grande porte, pesados e que necessitam de cuidados especiais.
Produtos biolgicos e os considerados perecveis devero ser organizados e armazenados em locais apropriados (limpo, sem umidade, protegido de insetos e animais) de modo a no ficar por muito tempo estocado,
facilitando assim o seu envelhecimento e a sua deteriorao.
Os demais produtos, considerados perigosos (gases explosivos e
inflamveis, substncias explosivas, comburentes e radioativas), os produtos qumicos e os solventes inflamveis sero armazenados em local apropriado, devidamente demarcado, livre de interferncia (ambiental e pessoal) e sinalizado.
A Norma Regulamentadora 26 do Ministrio do Trabalho e Emprego tem como objetivo fixar as cores que devem ser usadas nos locais de
trabalho para a preveno de acidentes, identificando os equipamentos de
segurana, delimitando reas, identificando as canalizaes empregadas nas
indstrias para conduo de lquidos e gases e advertindo contra riscos.
Todo laboratrio deve ser sinalizado de forma a facilitar a orientao
dos usurios e advertir quanto aos potenciais riscos presentes no local. A
utilizao correta e o respeito sinalizao de segurana so entendidos
como barreiras primrias das medidas de conteno. As cores no dispensam o emprego de outras formas de preveno de acidentes e devero ser
acompanhadas dos sinais convencionais ou da identificao por palavras.
VERMELHA
Usada para distinguir e indicar equipamentos e aparelhos de proteo e combate a incndio. Pode ser
usada excepcionalmente tambm com sentido de
advertncia de perigo, como em botes interruptores de circuitos eltricos para paradas de emergncia, etc.
AMARELA
Em canalizaes, deve ser empregada para identificar gases no liquefeitos. Tambm pode ser empregada para indicar cuidado, assinalando, por exemplo, meios-fios, corrimos, cavaletes, etc.
BRANCA
Empregada em passarelas e corredores de circulao, localizao de bebedouros, coletores de resduos, reas destinadas armazenagem, zonas de
segurana, etc.
PRETA
Ser empregada para indicar as canalizaes de inflamveis e combusteis de alta viscosidade, como
leo lubrificante, asfalto, leo combustvel, alcatro, piche, etc. Poder ser usada tambm em substituio ao branco ou combinado a este, quando
condies especiais o exigirem.
AZUL
Utilizada para indicar Cuidado!, ficando o seu

emprego limitado a avisos contra uso e movimentao de equipamentos, que devero permanecer fora
de servios. Ser usada tambm em canalizaes
de ar comprimido, colocado em ponto de arranque ou fontes de potncia.
| 45
VERDE
Caracteriza segurana. Dever ser empregada para

indicar canalizaes de gua, localizao de EPI , fontes lavadoras de olhos, dispositivos de segurana, mangueiras de oxignio (soldas oxiacetilnica), etc.
LARANJA
Dever ser empregada para identificar canalizaes

contendo cidos, faces internas de caixas protetoras de dispositivos eltricos, face externa de polias
e engrenagens, etc.
PRPURA
Dever ser usada para indicar os perigos provenientes das radiaes eletromagnticas penetrantes de
partculas nucleares, como, por exemplo, em porta
e aberturas que do acesso a locais onde se manipulam ou armazenam matrias radioativas ou materiais contaminados por radioatividade.
LILS
Empregada para indicar canalizaes que contenham

lcalis. As refinarias de petrleo podem utilizar esta
cor para a identificao de lubrificantes.
CINZA
O cinza-claro indica canalizaes em vcuo e o

cinza-escuro usado para identificar eletrodutos.
ALUMNIO
Utilizada em canalizaes contendo gases liquefeitos, inflamveis e combustveis de baixa viscosidade

(exemplo: leo diesel, gasolina, querosene, leo
lubrificante, etc.).
MARROM
Pode ser adotada, a critrio da empresa, para

identificar qualquer fluido no identificvel pelas
demais cores.
A utilizao de cores no dispensa o emprego de outras formas de

preveno de acidentes. O uso das cores deve ser feito de modo criterioso, a
fim de no ocasionar distrao, confuso e fadiga ao trabalhador.
O Ministrio da Sade recomenda que o smbolo de risco
biolgico (Figura 3) seja colocado na entrada do laboratrio, informando tambm o microrganismo manipulado, a classe de risco, o nome do pesquisador responsvel, o endereo
e o telefone de contato. Alm disso, deve conter a frase:
Proibida a entrada de pessoas no autorizadas. Figura 3
Risco Biolgico
Figura 3
Risco Biolgico
H de se considerar a possibilidade de incompatibilidades nos locais de

armazenagem dos materiais. Nesse sentido, medidas de controle relativo s
condies ambientais devero ser estabelecidas. Materiais que sejam considerados relevantes nas atividades em geral sero analisados periodicamente para
garantir a inexistncia de contaminantes que possam comprometer a qualidade
dos trabalhos.
5. Agentes de risco em laboratrios
O ambiente laboratorial tem sido considerado insalubre por agrupar

atividades que requerem o uso de equipamentos, mquinas, reagentes e
materiais diversos, alm de viabilizar muitos procedimentos que oferecem
riscos de acidentes e doenas para os usurios em geral. Desse modo, cabe
a responsabilidade de se informar, treinar e at mesmo capacitar os sujeitos
potencialmente expostos aos riscos, de modo a evitar problemas de sade e
prevenir acidentes.
Consideram-se riscos ambientais os agentes fsicos, qumicos e biolgicos existentes no ambiente de trabalho, que, dependendo da sua natureza,
concentrao ou intensidade e tempo de exposio, so capazes de causar
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danos sade dos trabalhadores (CARVALHO, 1999). No que concerne

aos riscos ocupacionais, esses esto diretamente ligados s situaes de trabalho que podem romper o equilbrio fsico, mental e social das pessoas, e no
somente as situaes que originem acidentes e enfermidades (NISHIDE e
BENATTI, 2004).
Quando as medidas de proteo coletiva no so tecnicamente viveis e
no permitem a completa proteo ao usurio dos laboratrios contra os riscos
de acidentes provenientes do trabalho e/ou de doenas profissionais e do
trabalho, o EPI ser utilizado pelo usurio como forma de preveno aos riscos
inerentes ao ambiente (CARVALHO, 1999).
So considerados riscos ambientais aqueles causados por agentes fsicos,
qumicos, biolgicos, ergonmicos e de acidentes que, presentes nos ambientes de trabalho, so capazes de causar danos sade do trabalhador em
funo de sua natureza, concentrao, intensidade ou tempo de exposio.
A NR-5 classifica os riscos ambientais em cinco grupos:
FSICOS
Rudo, vibraes, presses anormais, temperaturas

extremas, radiaes, etc.
QUMICOS
Poeiras, fumos, nvoas, neblinas, gases, vapores

que podem ser absorvidos por via respiratria ou
atravs da pele, etc.
BIOLGICOS
Bactrias, fungos, bacilos, parasitas, protozorios,

vrus, entre outros.
ERGONMICOS
Trabalho fsico pesado, movimentos repetitivos, jornada prolongada, postura incorreta, tenses emocionais, monotonia, exigncia de uma maior ateno, responsabilidade e concentrao, jornadas longas de trabalho, treinamento inadequado ou
inexistente, conflitos, etc.
ACIDENTES
Arranjo fsico inadequado, mquinas e equipamentos sem proteo, iluminao inadequada, eletricidade, animais peonhentos, probabilidade de incndio ou exploso, etc.
5.1. Agentes biolgicos de risco
O risco por agente biolgico a probabilidade de um indivduo se

contaminar com um agente patognico, como, por exemplo, bactrias, vrus,
fungos e parasitas.
Todos os profissionais que trabalham em laboratrio com agentes ou
materiais biolgicos devem estar conscientes dos riscos inerentes a essa atividade e conhecer profundamente o agente e os procedimentos para minimizar o
risco de contaminao. Alm disso, as boas condutas de laboratrio devem ser
estritamente seguidas de modo a evitar que um procedimento realizado de
maneira incorreta ou mesmo displicentemente coloque em risco a segurana
do(s) profissional(is) e do ambiente (BRASIL, 2006; TEIXEIRA, 2000).
O manual de Biossegurana da Fiocruz (2005) descreve como regra
bsica para o trabalho em laboratrio:
Considerar todo material biolgico como infeccioso;
Trabalhar com ateno e sem tenso;
Sinalizar o risco do agente na entrada do laboratrio;
Notificar os acidentes e imediato cuidado mdico.
Alm disso, todo pessoal de laboratrio deve evitar trabalhar sozinho

com material infeccioso; ser protegido por imunizao quando disponvel;
manter o laboratrio limpo e arrumado; usar roupas protetoras, tais como
uniformes, aventais, jalecos e mscaras; usar luvas; no aplicar cosmticos;
evitar uso de lentes de contato; lavar as mos aps a manipulao de materiais
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contaminados; nunca pipetar com a boca; no fumar, no comer e no beber

no laboratrio; descontaminar a superfcie de trabalho, etc.
Outra atividade que requer cuidados especiais o cultivo de microrganismos. Lembre-se de que quando se cultiva um microrganismo visa-se a
obter uma quantidade grande de clulas e, por isso, o trabalhador deve
estar atento as suas condutas para evitar acidentes. O trabalhador deve abrir
cuidadosamente os tubos e frascos, identificados claramente, que contm o
agente evitando agit-los. Sempre se deve manipular os tubos, as pipetas e
as seringas com as extremidades em direo oposta a si. Os sobrenadantes
ou o contedo de pipetas devem ser desprezados sobre material absorvente
embebido em desinfetante contido em um frasco de boca larga para evitar a
produo de aerossis.
Se a atividade laboratorial envolver a infeco de animais de laboratrio,
o trabalhador deve tomar os seguintes cuidados: inicialmente, considerar como
potencialmente infectado todo animal, seja ele vertebrado ou invertebrado;
equipamentos de proteo devem ser utilizados durante o procedimento de
inoculao; seringas e agulhas utilizadas durante a inoculao devem ser descartadas em caixas coletoras apropriadas e autoclavadas ao final do procedimento;
identificar as gaiolas dos animais com todas as informaes relevantes (nmero
de animais, linhagem, sexo, idade, peso, data da infeco, microrganismo
inoculado, via e dose de inoculao e nome e telefone do pesquisador responsvel); durante a limpeza da cama e das gaiolas dos animais, equipamentos
de proteo individual devem ser utilizados para minimizar o risco de contaminao; autoclavar todos os materiais que tiveram contato com os animais
infectados; notificar todo e qualquer acidente/incidente proveniente do manuseio dos animais ou das gaiolas.
5.1.1. Classificao de risco dos microrganismos
Os agentes biolgicos so classificados de acordo com o risco que

oferecem ao trabalhador e coletividade. Assim, segundo o Ministrio da
Sade (2006), os microrganismos so classificados quanto ao risco como:
Classe de risco 1
Microrganismo que representa baixo risco individual e para a coletividade. Inclui os agentes biolgicos conhecidos por no causarem doenas
em pessoas ou animais adultos sadios. Exemplo: Bacillus subtilis, e os
agentes no includos nas classes de risco 2, 3 e 4 e que no demonstraram capacidade comprovada de causar doena no homem ou em
animais sadios. Vale lembrar que a no classificao de agentes biolgicos nas classes de risco 2, 3 e 4 no implica na sua incluso automtica
na classe de risco 1. Para isso dever ser conduzida uma avaliao de
risco, baseada nas propriedades conhecidas e/ou potenciais desses agentes
e de outros representantes do mesmo gnero ou famlia.
Classe de risco 2
Microrganismo que representa moderado risco individual e limitado

risco para a comunidade. Inclui os agentes biolgicos que provocam
infeces no homem ou nos animais, cujo potencial de propagao na
comunidade e de disseminao no meio ambiente limitado, e para os
quais existem medidas teraputicas e profilticas eficazes. Exemplo:
Schistosoma mansoni.
Classe de risco 3
Microrganismo que representa alto risco individual e moderado risco

para a comunidade. Inclui os agentes biolgicos que possuem capacidade de transmisso por via respiratria e que causam patologias humanas ou animais, potencialmente letais, para as quais existem usualmente
| 51
medidas de tratamento e/ou preveno. Representam risco se disseminados na comunidade e no meio ambiente, podendo se propagar de
pessoa a pessoa. Exemplo: Bacillus anthracis.
Classe de risco 4
Microrganismo que representa alto risco individual e para a comunidade. Inclui os agentes biolgicos com grande poder de
transmissibilidade por via respiratria ou de transmisso desconhecida.
At o momento no h qualquer medida profiltica ou teraputica
eficaz contra infeces ocasionadas por estes. Causam doenas humanas e animais de alta gravidade, com grande capacidade de disseminao na comunidade e no meio ambiente. Esta classe inclui principalmente os vrus. Exemplo: vrus ebola.
O Ministrio da Sade descreve ainda uma classe de risco adicional
chamada de Classe de Risco Especial. Ela rene os microrganismos que
representam alto risco de causar doena animal grave e de disseminao no
meio ambiente. Inclui agentes biolgicos de doena animal no existentes
no pas e que, embora no sejam obrigatoriamente patgenos de importncia para o homem, podem gerar graves perdas econmicas e/ou na produo
de alimentos.
Como os microrganismos podem acidentalmente penetrar no hospedeiro?
Segundo Sewell (1995), os profissionais de laboratrio
microbiolgico esto submetidos a um grande risco de se contaminar durante as suas atividades. Isso se deve a fatores que incluem o modo de
transmisso do agente, o desenvolvimento da infeco no hospedeiro, a
via e a fonte de infeco e o ambiente laboratorial (ventilao, equipamentos e procedimentos).
As vias de penetrao dos agentes biolgicos podem ser:

Area Em geral, essa via est relacionada com a produo de
aerossis. Os aerossis se formam dependendo da atividade realizada,

como macerao de tecidos, centrifugao, pipetagem, sonicao, agitao de suspenses celulares, abertura de ampolas liofilizadas, flambagem
de ala de platina etc. Uma vez formados, os aerossis podem ficar em
suspenso e propagar-se distncia contaminando vrios profissionais
pela inalao dos mesmos.
Oral A ingesto de microrganismos com maior frequncia ocorre
atravs de pipetagem com a boca, porm, outras formas de contaminao tambm so descritas, como levar boca itens do laboratrio (por
exemplo, canetas e lpis) e consumir alimentos e bebidas no local de
trabalho, fumar e falta de procedimentos higinicos (lavagem de mos).
Outra forma de infeco refere-se s projees de gotculas na boca.
Cutnea Acidentes com inoculao parenteral de material infeccioso
correspondem a uma das principais causas de contaminao do profissional de laboratrio. O microrganismo pode penetrar atravs da pele
aps ferimento com agulhas, lminas de bisturi ou vidraria quebrada
contaminadas. Outra forma de contaminao por essa via a mordida
ou o arranho de animais e ainda picada de insetos.
Ocular A contaminao da conjuntiva pode ocorrer por deposio
de gotculas de suspenses celulares ou mesmo por aerossis de material

infectante nos olhos.
5.1.2. Biossegurana no trabalho com os agentes biolgicos
Vrus
Os vrus so transmitidos de um hospedeiro a outro de vrias maneiras.

Podemos destacar o contato direto atravs das vias respiratrias, pelo
| 53
contato sexual, por alimentos e gua, pelo contato com sangue e seus
derivados. O profissional de laboratrio ou aquele que lida com pacientes est submetido a um significativo risco de contaminao por via
respiratria. Assim sendo, esses profissionais devem ter pleno conhecimento dos riscos durante a manipulao dos espcimes clnicos e dos
pacientes, levando em considerao as boas prticas de laboratrio e as
operaes que envolvem a produo de aerossis para preveno das
infeces por esses agentes.
Bactrias
As bactrias podem ser transmitidas ao profissional de laboratrio por

diferentes processos. A produo de aerossis e consequente inalao
dessas pequenas partculas , sem dvida, a principal via de contaminao. No entanto, existem outras atividades que mal realizadas podem
levar o profissional a adquirir uma infeco associada ao laboratrio,
como pipetagem, flambagem de ala bacteriolgica, descarte de resduos ou amostras clnicas etc. O uso de equipamentos de proteo e boas
prticas de laboratrio minimizam os riscos de infeco.
Fungos
Os fungos produzem estruturas denominadas esporos que facilmente

ficam em suspenso no ar. Dessa forma, aquele que trabalha em um
laboratrio manipulando fungos est submetido a um grande risco de se
expor a uma infeco mictica. As principais vias de contaminao no
laboratrio, comprovadas por levantamentos realizados sobre infeces
associadas ao laboratrio, esto relacionadas inalao de partculas
fngicas, carreadas por aerossis formados durante procedimentos
laboratoriais e por injrias causadas por agulhas ou instrumentos
perfurocortantes.
Parasitas
Infeces adquiridas em laboratrio por parasitas como Ascaris spp.,

Strongyloides spp., Enterobius spp. , Fasciola spp., Shistosoma spp.,
Giardia lamblia e Cryptosporidium parvum no tm sido relatadas com
frequncia em laboratrios clnicos (SEWELL, 1995). Casos de giardase
e criptosporidase so mais comuns em profissionais que manuseiam
animais infectados. No h registro de infeces associadas ao laboratrio com cestdeos. Os parasitas mais comumente relacionados contaminao durante atividade laboratorial so Toxoplasma gondii, Plasmodium
spp., Trypanosoma spp. e Leishmania spp. De um modo geral, o risco
de se infectar com esses agentes a autoinoculao com seringas e
agulhas contaminadas, contato de formas infectantes com leses de pele
ou mucosa ou, ainda, por mordedura de animais infectados. No podemos descartar a contaminao por via oral de algumas formas infectantes
presentes em material fecal.
Como inativar os agentes biolgicos?
Em se tratando de risco biolgico, o procedimento adequado para
inativar os resduos e as aes a serem tomadas em caso de acidentes so
extremamente relevantes. Durante o descarte e a retirada do material biolgico
da rea laboratorial, o microrganismo deve ser inativado por agentes qumicos
ou fsicos antes de exp-lo ao contato externo ao laboratrio e desinfetar as
superfcies de trabalho antes e aps qualquer procedimento.
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Agentes qumicos para inativar os agentes biolgicos (Fiocruz, 2005)
lcool a 70%
Parasitas, bactrias e retrovrus.
Formol a 4%
Parasitas, bactrias, fungos e vrus.
Cloro ativo a 1%
Parasitas, bactrias, fungos e vrus.
Agentes fsicos para inativar os agentes biolgicos (Fiocruz, 2005)
Calor mido
Autoclavao por
30min. a 120C
Parasitas, bactrias, fungos, vrus, inclusive as

formas vegetativas e esporuladas de bactrias
e fungos.
Incinerao
Destruio de carcaas de animais e resduos

previamente autoclavados.
5.2. Agentes qumicos de risco
No que concerne aos reagentes qumicos, h de se estabelecer critrios

rigorosos para a armazenagem, movimentao, uso nas atividades e resduos
gerados oriundos dos trabalhos. Tambm ser relevante que os fornecedores
disponibilizem todas as informaes sobre a segurana para o produto qumico
adquirido. Normalmente, os produtores/fornecedores disponibilizam as Fichas
de Informaes de Segurana de Produto Qumico (FISPQ) e essas devero,
obrigatoriamente, estar em local acessvel a todos os trabalhadores nos seus
locais de trabalho. Alm disso, de extrema importncia que seja incentivada
a leitura dessas fichas por todos os que transportam, armazenam, manuseiam os
produtos e recolhem os resduos qumicos.
As FISPQ contm informaes diversas sobre um determinado produto qumico (substncias ou misturas) quanto
proteo, segurana, sade e ao meio ambiente e
aes em situao de emergncia. Em alguns pases, essa
ficha chamada de Material Safety Data Sheet (MSDS).
Ainda com relao aos produtos qumicos, estes podem exercer impacto negativo sobre a sade dos homens e dos animais e afetar sobremaneira o
meio ambiente quando as medidas preventivas no so adotadas. Os produtos
qumicos, devido s suas caractersticas, podem afetar os trabalhadores de
formas variadas, desde leves processos alrgicos at o cncer (COSTA e
FELLI, 2005).
A diversidade de atividades no ambiente de trabalho promove diversos
efeitos sobre a sade do trabalhador, que, na maioria das vezes, no conhece
as caractersticas dos produtos qumicos no que tange ao grau de toxicidade,
inflamabilidade, corrosividade, explosividade e demais riscos de periculosidade
(CARVALHO, 2006).
| 57
Quanto s caractersticas dos produtos, esses podem ser: carcinognicos

(causam cncer); corrosivos (desgastam ou modificam); irritantes (produzem
irritaes); txicos (causam envenenamento e/ou morte); teratognicos (causam deformaes); mutagnicos (causam mutaes); alergnicos (causam reaes alrgicas); ionizantes (causam cncer e outras doenas); explosivos
(causam exploses); e espontaneamente combustveis (causam incndios e
exploses).
Outros fatores podero contribuir para afetar a qualidade dos resultados dos trabalhos, alm de atuarem como provveis geradores de acidentes, quando esto presentes envolvendo produtos qumicos: As condies
eltricas, eletrnicas e mecnicas dos equipamentos (ausncia de manuteno preventiva e manuteno corretiva deficiente); os hbitos do operador
no que concerne desateno e negligncia frente s atividades potencialmente de risco; a no observncia de normas; o excesso de material
sobre a bancada de trabalho; a ausncia de cabines de segurana qumica;
a desordem nos laboratrios (ausncia de organizao); e a ausncia de
polticas de administrao de resduos.
Com o intuito de minimizar ao mximo e at mesmo eliminar a
possibilidade de acidentes graves nos laboratrios que trabalham com produtos qumicos e demais materiais combustveis, comburentes, inflamveis e
explosivos, cabem algumas recomendaes quanto s aes preventivas
para controle de incndios em reas crticas de trabalho.
A ausncia de cuidados no que concerne preveno de incndios
poder gerar situaes extremamente graves. Pequenos focos de fogo requerem a ao imediata de pessoal capacitado, de modo a intervir adotando todas as medidas apropriadas e para controlar a situao. Assim sendo,
todos os equipamentos de combate a incndios devero estar disponveis
para o combate ao fogo nos seus primeiros momentos.
O fogo j acompanha o homem desde os tempos remotos e proporciona inmeros benefcios. Acontece que o fogo, quando foge do controle
do homem, se transforma em um incndio e provoca estragos no s para as
pessoas, mas tambm para os animais, as instalaes prediais e o meio ambiente.
O fogo tambm entendido como o produto de uma reao qumica
denominada combusto, que produz luz e calor ou somente calor e, para que
ocorra, necessita de quatro elementos bsicos: calor, combustvel, oxignio e
reao em cadeia. Esses quatro elementos reunidos formaro uma figura geomtrica conhecida por tetraedro. Assim, para o entendimento do que um
incndio, preciso conhecer o tetraedro do fogo (Figuras 4 e 5).
Figura 4 Representao do tetraedro do fogo
Figura 5 Representao do tetraedro do fogo expandido

Combustvel: o elemento que
serve de propagao do fogo.
Tem a propriedade de queimar
e pode ser slido, lquido ou
gasoso.
Reao em cadeia: torna a queima
autossustentvel. O calor irradiado
das chamas atinge o combustvel e este decomposto em partculas menores, que se combinam com o oxignio e queimam, irradiando
outra vez calor para o combustvel, formando
um ciclo constante.
Oxignio: tambm chamado de

comburente. Em propores adequadas (+ de 15%), combina com o
material combustvel, dando incio ao
fogo. O oxignio est presente no ar
que nos envolve.
Calor: elemento que serve para dar incio a um

incndio. O calor pode ser obtido pela transformao das energias mecnica, qumica e eltrica.
O calor mantm e aumenta a propagao.
| 59
Classe de incndio
Os materiais combustveis tm caractersticas diferentes e, portanto, queimam de modos diferentes. Conforme o tipo de material, existem quatro classes de incndios, a saber:
Classe A
Assim
identificado o
fogo em
materiais
slidos que
deixam
resduos,
como madeira,
papel, tecido
e borracha.
CLASSES DE INCNDIO
Classe B
Classe C
Classe D
Quando a
queima
acontece em
lquidos
inflamveis,
graxas e gases
combustveis.
Classe de
incndio em
equipamentos
eltricos
energizados.
A extino
deve ser feita
por agente
extintor que
no conduza
eletricidade.
Fonte: <www.casaolivetti.com.br/classes.html>.
Classe de
incndio, que
tem como
combustvel os
metais
pirofricos,
como
magnsio,
selnio,
antimnio,
ltio, potssio,
alumnio
fragmentado,
zinco, titnio,
sdio, urnio e
zircnio.
Classe K
Classificao
do fogo em
leo vegetal e
gorduras de
origem animal,
em cozinhas.
Caractersticas de agentes extintores de incndios

AGENTE
CLASSE DE INCNDIO VANTAGENS
gua (em jato ou

pulverizada)
Deve ser usada sempre que

no haja contraindicaes (de
preferncia, deve ser
pulverizada). Tem bom poder
de penetrao.
Neve carbnica
(extintor com dixido
de carbono sob
presso que solidifica
quando se expande
bruscamente)
BC
No deixa resduo, o que a

torna mais adequada para
equipamento sensvel. A mais
indicada para lquidos
extremamente inflamveis
Espuma fsica
(produzida a partir de
uma mistura de gua e
substncias tensioativos
por injeo mecnica
de ar)
AB
Muito boa para lquidos

extremamente inflamveis.
Pode ser utilizada em
situaes de incndio
iminente com ao preventiva.
A cobertura de espuma evita
reignies.
Espuma qumica
(extintor em que
ocorre uma reao que
liberta o gs dixido
de carbono que fica
disperso em um
lquido formando
espuma)
AB
Muito boa para lquidos

extremamente inflamveis. A
cobertura de espuma evita
reignies.
P normal (extintor em
que o p bicarbonato
de sdio ou de potssio)
BC
Forma uma nuvem de poeira

que protege o operador.
P polivalente
(extintor em que o p
dihidrogenofosfato
de amnio
P especial (extintor
em que o p grafite
ou cloreto de sdio
ou p de talco etc.)
Areia
Soluo especial
(extintor em que o
acetato de potssio se
encontra diludo em
gua)
ABC
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Forma uma nuvem de poeira

que protege o operador.
Atende a trs classes de
fogos.
nico extintor adequado para

incndios da classe D.
Qualquer outro tipo de
extintor provoca reaes
violentas.
AD
Por vezes, o nico meio de

extino disponvel para
incndios da classe D.
Ao se considerar a segurana
do pessoal que trabalha em
cozinhas e restaurantes, o
extintor classe K o mais fcil
de ser utilizado. Atua por
formao de neblina e o fogo
extinto por resfriamento e
pelo efeito asfixiante da
espuma.
Procedimentos quanto s medidas preventivas sero de responsabilidade

de todos os funcionrios, de frequentadores dos laboratrios (pessoal de
manuteno, estudantes e estagirios) e daqueles que so usurios das instalaes prediais. No que tange s medidas preventivas, algumas so descritas a
seguir:
No jogue resduos de produtos qumicos no cesto de lixo comum do
laboratrio. A possvel incompatibilidade dos resduos com outros materiais existentes no cesto (papel, pano, barbante, plstico, etc.) ser
uma condio favorvel para o incio do fogo.
No jogue palitos de fsforos, utilizados para o acendimento de bicos
de gs (Bunsen), diretamente no lixo. Antes de lanar no cesto, molhe

o mesmo para se certificar de que no oferece perigo.
No acenda chamas (fsforos, isqueiros, velas, etc.), a no ser que
seja necessrio e com o conhecimento e consentimento do professor ou

do monitor da aula.
No caso de falta de energia eltrica no laboratrio, jamais utilize velas,
fsforos e isqueiros para iluminar o ambiente. D preferncia s lmpadas de emergncia ou lanternas de pilhas.
Evite ao mximo o acmulo de lixo em locais no apropriados.
Os materiais de limpeza devero ser acondicionados em recipientes
prprios, devidamente identificados e em locais apropriados.

Mantenha desobstrudas as reas de escape e no deixe, mesmo que
provisoriamente, materiais nas escadas e nos corredores.

Mantenha todos os equipamentos eltricos desligados aps a utiliza-
o, desconectando-os das tomadas.

No conecte ou desconecte equipamentos com as mos molhadas.
No cubra fios eltricos com livros, cadernos, jalecos e outros materi-
ais que possam servir de combustvel em caso de superaquecimento.

No caso da corrente eltrica estar acima da capacidade da fiao, ocorrer o superaquecimento dos fios.
Ao utilizar materiais inflamveis, d preferncia s quantidades mni-
mas, armazenando os frascos na posio vertical, em local apropriado

(longe de fontes de calor) e na embalagem original.
Observe sempre as normas de segurana ao manipular gases, inflam-
veis e explosivos. No utilize chamas ou aparelhos superaquecidos prximos a esses tipos de materiais.
| 63
No improvise instalaes eltricas, nem efetue consertos em tomadas,
interruptores e equipamentos sem que esteja familiarizado com isso.

No sobrecarregue as instalaes eltricas com a utilizao do plugue
tipo T (benjamins). Tomada quente sinnimo de desperdcio e indicao de perigo (possibilidade de fogo).
No permita o uso de extenses, principalmente se essas forem em-
pregadas para ligar diversos equipamentos. Os equipamentos devero

ter a sua tomada (macho) conectada tomada (fmea) adequada e
devidamente aterrada.
No permita que os fios e cabos sejam emendados. Elimine a possibi-
lidade de utilizar fios e cabos descascados e estragados.

Todas as atividades em que o uso da eletricidade necessrio requerem
cuidados extremos, principalmente daqueles que esto se iniciando na vida
cientfica. A observncia das normas de segurana fundamental, de modo a
no se permitir que uma pessoa receba uma descarga eltrica, a qual muitas das
vezes poder ser fatal. De tempos em tempos, faa uma reviso nos fios dos
aparelhos eltricos e na instalao eltrica do seu ambiente de trabalho, devidamente assessorado por um profissional capacitado. No caso de um equipamento do laboratrio apresentar qualquer defeito, no pense duas vezes para
providenciar o conserto.
Referncias bibliogrficas
BRASIL. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Critrios para a habilitao de laboratrios segundo os princpios das boas prticas de laboratrio (BPL). Braslia, 2001.
BRASIL. Associao Brasileira de Normas Tcnicas. Identificao para o transporte terrestre, manuseio, movimentao e armazenamento de produtos NBR 7500. Disponvel
em <http://www.abnt.org.br>. Acesso em: abr. 2009.
BRASIL. Ministrio da Sade. Secretaria de Vigilncia em Sade. Departamento de
Vigilncia Epidemiolgica. Biossegurana em Laboratrios Biomdicos e de Microbiologia .
Braslia: Ministrio da Sade, 2005.
BRASIL. Ministrio da Sade. Secretaria de Cincias, Tecnologia e Insumos Estratgicos.

Departamento de Cincias e Tecnologia. Diretrizes Gerais para o Trabalho em Conteno
com Agentes Biolgicos. Srie A. Normas e Manuais Tcnicos. Braslia, 2006.
CAMPOS, A. Cabines de segurana biolgica. In: VALLE, S.; TELLES, J. L. Biotica
e Biorrisco. Rio de Janeiro: Intercincia, 2003.
CARVALHO, P. R. O Olhar Docente sobre a Biossegurana no Ensino de Cincias: um
estudo em escolas da rede pblica do Rio de Janeiro, 2008. Tese de Doutorado, Rio de
Janeiro: Instituto Oswaldo Cruz.
CARVALHO, P. R. Segurana qumica em laboratrios e unidades de sade. In:
MARTINS, E. V. et al. (Orgs). Biossegurana: informao e conceitos. Rio de Janeiro:
Fiocruz, 2006.
CARVALHO, P. R. Boas Prticas Qumicas em Biossegurana. Rio de Janeiro: Intercincia,
1999.
CHRISTOFARI, V. E.. Introduo ao Estudo do Direito. 4. ed. Canoas: Ulbra, 1998.
COSTA, M. A. F.; COSTA, M. F. B. Biossegurana de A a Z. 2. Edio. Rio de
Janeiro: Publit, 2009.
COSTA, M. A. F.; COSTA, M. F. B. Entendendo a Biossegurana: epistemologia e
competncias para rea de sade. Rio de Janeiro: Publit, 2006.
COSTA, M. A. F.; COSTA, M. F. B. Segurana e Sade no Trabalho: cidadania,
competitividade e produtividade. Rio de Janeiro: Qualitymark, 2005.
COSTA, T. F.; FELLI, V. E. A. Exposio dos trabalhadores de enfermagem s cargas
qumicas em um hospital pblico universitrio da cidade de So Paulo. Revista LatinoAmericana de Enfermagem, v. 13, n. 4, jul.-ago. 2005.
FIOCRUZ. Procedimentos para manipulao de microrganismos patognicos e/ou
recombinantes na Fiocruz. Rio de Janeiro: Fiocruz, 2005.
GOLDIM, J. R. Conceitos Fundamentais: da moral biotica. Disponvel em: <http://
www.ufrgs.br/bioetica/concei.ppt>. Acesso em: jan. 2009.
INMETRO. Vocabulrio Internacional de Metrologia. 2. ed. Rio de Janeiro: CNI/Senai,
2000.
MINISTRIO DA SADE. Classificao de risco dos agentes biolgicos. Secretaria de
Cincia, Tecnologia e Insumos Estratgicos, Departamento de Cincia e Tecnologia. Srie
A. Normas e Manuais Tcnicos. Braslia: Ministrio da Sade, 2006.
NISHIDE, V. M.; BENATTI, M. C. C. Riscos ocupacionais entre trabalhadores de
enfermagem de uma unidade de terapia de terapia intensiva. Revista da Escola de Enfermagem da USP, v. 38, n. 4, p. 406-414, 2004.
| 65
OPS/PMS. Cabinas de Seguridad Biolgica: uso, desinfeccin y mantenimiento. Disponvel em: <http://www.anvisa.gov.br/reblas/cabinas_seguridad.pdf>. Acesso em: jan.
2009.
PESSOA, C; LAPA, R. Bioinstalaes. In: VALLE, S.; TELLES, J. L. Biotica e
Biorrisco. Rio de Janeiro: Intercincia. 2003.
SCHRAMM, F. R. Biotica e Biossegurana . Mimeo, 2006. Disponvel em:
<www.antigona.org.br>. Acesso em: fev. 2009.
SEWELL, D. L. Laboratory-associated infections and biosafety. Clinical Microbiology
Reviews, v. 8, n. 3, p. 389-405, 1995.
SILVA, L. R.; PELAEZ, V.; VALLE, S. Implementao da Lei de Biossegurana no
Brasil. In: COSTA, M. A. F.; COSTA, M. F. B. (Orgs.). Biossegurana de OGMs:
uma viso integrada. Rio de Janeiro: Publit, 2009.
SKARABA, I; NICKEL, R.; WOTKOSKI, S. R. Barreiras de conteno: EPIs e EPCs.
In: MASTROENI, M. F. Biossegurana: aplicada a laboratrios e servios de sade. So
Paulo: Atheneu, 2004.
TEIXEIRA, P. Riscos biolgicos em laboratrios biomdicos . Curso de Biossegurana online, Escola Nacional de Sade Pblica, Fundao Oswaldo Cruz, 2000.
VALLE, S. A Lei de Biossegurana no Brasil. In: COSTA, M. A. F.; COSTA, M. F. B.
(Orgs). Biossegurana Geral. Rio de Janeiro: Publit, 2009.
VALLE, S.; BARREIRA, Y. (Orgs.). Biossegurana-Engenharia Gentica: legislao brasileira. Rio de Janeiro: Publit, 2007.
VALLE, S.; TELLES, J. L. Biotica Biorrisco: abordagem transdisciplinar. Rio de Janeiro:
Intercincia, 2003.
VSQUEZ, A. S. tica. 18. ed. Rio de Janeiro: Civilizao Brasileira, 1998.
Questes para reflexo
1. O ato de jogar na pia de um laboratrio resduos de substncias qumicas ou

materiais biolgicos pode ser considerado uma ao antitica? Por qu?
2. Em um laboratrio micolgico de anlises clnicas, trabalhavam um farmacuticobioqumico com grau de doutor (responsvel pelo laboratrio) e dois tcnicos de
nvel mdio e um auxiliar de servios tcnicos. O laboratrio realizava diagnstico
clnico micolgico de material (sangue, escarro, unha, raspado de pele, cabelo,
etc.) suspeito de conter fungos patognicos para o homem. O espao fsico era
pequeno, com muitos equipamentos antigos sem manuteno preventiva. O responsvel pelo laboratrio solicitou ao tcnico que providenciasse o exame ao
microscpio e a semeadura do escarro, que havia chegado de um paciente com
suspeita de paracoccidioidomicose, na tentativa de visualizao e isolamento do
fungo Paracoccidioides brasiliensis. O trabalho de rotina no laboratrio era realizado
em uma cabine de fluxo laminar horizontal, que havia sido herdada do setor de
preparo de meios de cultura e testes de esterilidade. Porm, quando a cabine estava
ocupada, o trabalho era feito em bancada na frente de um bico de Bunsen. O
tcnico ento preparou lminas e meio de cultura para a semeadura. Durante o
trabalho, o tcnico, utilizando a cabine como um equipamento de proteo, usava
luvas, mscaras cirrgicas e jalecos de mangas curtas.
Durante o manuseio do material, o tcnico acidentalmente se feriu com a ala de
platina contendo material clnico suspeito (fungo). Imediatamente comunicou o
fato ao responsvel do laboratrio, que o orientou a buscar atendimento mdico.
Fazendo uma anlise crtica da situao exposta acima:
2.1 Descreva as principais causas relacionadas ao acidente descrito no
laboratrio.
2.2 Cite os erros cometidos por cada profissional do laboratrio que
poderiam estar relacionados direta ou indiretamente ao acidente.
2.3 Faa uma anlise crtica do ocorrido levando em considerao a
estrutura do laboratrio, a classe de risco do microrganismo envolvido e os
equipamentos de proteo utilizados.
3 Quais so as exigncias para que um laboratrio esteja em conformidade com
as normas, regras e princpios preconizados pelas boas prticas de laboratrio, no
que tange instalao de balanas analticas e demais equipamentos de preciso,
com vistas obteno de resultados confiveis?
| 67
Captulo 2
Conceitos e tcnicas bsicas
aplicadas em laboratrio
Maria Beatriz Siqueira Campos de Oliveira
Joseli Maria da Rocha Nogueira
A preocupao com a organizao do laboratrio e a disposio, o

funcionamento e a manuteno dos equipamentos um tpico que deve
constar na lista de prioridades do tcnico de laboratrio da rea da sade. O
entendimento de alguns conceitos bsicos prprios da rea importante, bem
como o conhecimento dos tipos de vidrarias, dos equipamentos e das
metodologias aplicadas nos laboratrios. Dessa forma, a interdisciplinaridade
uma tnica na rea laboratorial que deve ser enfatizada pelos profissionais no
intuito de atender a legislao vigente, as boas prticas de laboratrio e as
normas de biossegurana. Nessa perspectiva, as instalaes, a infraestrutura e o
layout do laboratrio devem ser cuidadosamente planejados para aumentar a
segurana dos profissionais, a vida til e o bom funcionamento dos equipamentos e a qualidade dos ensaios.
O primeiro cuidado atender as normas de Biossegurana (ver captulo
1): verificar que as portas abram para fora, para facilitar a sada em casos de
emergncia, instalar chuveiros e lava-olhos em pontos estratgicos, observar os espaos entre os equipamentos que trabalham com compressor para
evitar aquecimento dos mesmos e instalar deionizador ou desmineralizador
em salas separadas, uma vez que a regenerao das resinas poder oxidar
superfcies metlicas.
O projeto de infraestrutura e de iluminao dos laboratrios deve
ser elaborado de acordo com as boas prticas de laboratrio ou de produo, dependendo da utilizao dos mesmos. Sendo assim, laboratrios de
produo tm um maior rigor de exigncia apresentando os cantos das
paredes arredondados, superfcies feitas com material limpvel (tinta epxi,
por exemplo), luminrias lacradas com troca de lmpadas pela parte superior do teto. Os aparelhos de ar condicionado e seus filtros tambm
requerem ateno especial.
Como j mencionado cada tipo de laboratrio de sade vai demandar
diferentes necessidades de acordo com as atividades desenvolvidas. O laboratrio de anlises clnicas ou biodiagnstico, por exemplo, exige uma sala
separada para coleta e recepo de material biolgico. Alm disso, um cuidado especial deve ser dado aos pronturios, as fichas que acompanham os
referidos materiais e a rotulagem das amostras, visto que qualquer erro nessa
etapa pode acarretar prejuzos graves.
Alm desses itens, outras padronizaes devem ser consideradas para
qualquer laboratrio, como tubulaes pintadas com as cores indicadas pela
Associao Brasileira de Normas Tcnicas (ABNT/NBR-6493/out. 1994):
ALARANJADO produtos qumicos no gasosos (ex.: soda custica)
AMARELO gases no liquefeitos (ex.: amnia, oznio)
AZUL ar comprimido
BRANCO vapor
CINZA-CLARO vcuo
Conceitos e tcnicas bsicas aplicadas em laboratrios
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CINZA-ESCURO eletroduto, painis eltricos

COR DE ALUMNIO gases liquefeitos inflamveis, combustveis de
baixa viscosidade (ex.: diesel, gasolina, querosene, lubrificantes,
solventes)
MARROM canalizao materiais fragmentados (minrio bruto),
petrleo bruto
PRETO combustveis de alta viscosidade (ex.: leo combustvel/BPF,
asfalto, piche)
VERDE EMBLEMA gua, exceto a de combate a incndios
VERMELHO gua e outras substncias destinadas a combater
incndio
Observaes:
Embora no conste na NBR, de uso comum distinguir a gua potvel com
a cor verde-claro (verde-claro/verde Nilo) da gua de uso industrial com a cor
verde emblema.
A cor marrom, como no caso citado, utilizada para pintura de tubulao de
guas servidas, isto , no de esgoto sanitrio (ex.: gua de descarte em
mquinas lavadoras, de ralos e de pias).
Importante: a tubulao de inox dever ser pintada com anis no meio de
cada seo reta e nas extremidades (iniciais e finais) das linhas.
Outros pontos que merecem ateno ao se elaborar as instalaes do
laboratrio so a localizao e os procedimentos relacionados aos gases comprimidos, principalmente os gases acondicionados em cilindros. Dessa forma,
devem ser observados os seguintes cuidados:
Em cilindros contendo gases fortemente oxidantes, as vedaes jamais
devero ser lubrificadas com graxa, leo ou glicerina.

Somente use cilindros quando estiverem equipados com vlvulas de
reduo.
Ao transportar cilindros deve-se, sempre, ter o cuidado de fechar a
vlvula de sada e nunca esquecer de usar a capa de proteo da vlvula

e um carrinho apropriado para transporte.
Nunca esquea os cilindros soltos no laboratrio.
Nunca coloque cilindros prximos a fontes de calor ou chama direta.
A temperatura da rea de estocagem no pode ultrapassar 40oC.

Antes de iniciar o trabalho, deve-se verificar a existncia de vazamen-
to, por meio de soluo de gua com sabo.

Cilindros vazios devem ser etiquetados e estocados em reas
separadas.
Gs
Hidrognio
Sulfeto de hidrognio
Nitrognio
Oxignio
Dixido de carbono
Propano
Butano
Risco
Fogo, exploso
Fogo, irritante, txico
Asfixia
Fortemente reativo
Asfixia e queimadura
Fogo, asfixia, exploso
Fogo, exploso
Acetileno
Fogo, exploso
Em relao s instalaes do laboratrio, devemos considerar um local

dedicado ao processo de lavagem e esterilizao, que podero estar contguos
ou separados. Neste local ficaro os destiladores ou outro tipo de gua
purificada por ultrafiltrao, autoclaves, fornos e geradores de vapor limpo.
Devem ser projetados, tambm, uma bancada de ao inox com tanques para
lavagem, alm de bancadas onde os materiais sero embalados para esterilizao. Devem estar previstas no projeto tomadas de 110 e 220 volts. Em
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alguns casos, a instalao eltrica deve possuir um disjuntor para cada equipamento, como, por exemplo, a autoclave.
1. Conceitos bsicos
1.1. Desinfeco por agentes qumicos:
Limpeza
a remoo da sujidade de qualquer superfcie, reduzindo o nmero de microrganismos. Esse procedimento deve ser obrigatoriamente realizado antes da esterilizao ou desinfeco. Para cada laboratrio deve
existir uma padronizao do processo de limpeza, incluindo tipo de gua
utilizada (ver item 2 tratamento de gua), sabo e detergente neutro.
Deve-se evitar produtos base de cidos forte e oxidante (por exemplo,
soluo sulfocrmica) com o objetivo de no causar danos ao solo e ao
lenol fretico. Outro cuidado importante a preocupao com o que
est sendo jogado nas pias e nos ralos dos laboratrios, pois os restos de
meio de cultura, reagentes e corantes que so descartados sem tratamento
vo causar danos, s vezes irreversveis ao meio ambiente.
Assepsia
Conceito desenvolvido pelo mdico hngaro Ignaz Semmelweis, em

1851. o conjunto de medidas preventivas que permitem manter um ser vivo
ou um meio inerte, isento de microrganismos, evitando a introduo de um
contaminante em ambiente ainda no contaminado ou que j foi controlado.
Normalmente se utiliza o termo tcnicas asspticas. Em um centro cirrgico
ou numa sala limpa de envase de vacinas, por exemplo, deve ser adotado um
conjunto de medidas asspticas para se evitar levar microrganismos para aquele
local o que causaria contaminao do ambiente.
Antissepsia
Refere-se desinfeco de tecidos vivos com antisspticos (agentes

qumicos), eliminando ou inibindo as formas vegetativas dos microrganismos. Os antisspticos so encontrados no mercado em vrias apresentaes, tais como: soluo, pomada, talco e creme.
Em relao classificao dos materiais hospitalares, temos:
Materiais crticos Materiais que entram em contato com vasos
sanguneos e tecidos livres de microrganismos. O material crtico
deve ser esterilizado. Ex.: instrumentais.
Materiais semicrticos Materiais que entram em contato com
mucosa e pele no ntegra. Esses materiais devem ser esterilizados
ou desinfetados de acordo com a necessidade de utilizao. Ex.:
inaladores.
Materiais no-crticos Materiais que entram em contato com a
pele ntegra. Esses materiais devem ser lavados de acordo com o
procedimento operacional padronizado e desinfetados, se for
necessrio. Ex.: comadre.
Desinfeco
um processo que reduz o nmero de microrganismos, eliminando

grande parte dos contaminantes existente em um local ou material. Atua sobre
as formas vegetativas, sem atingir necessariamente os esporos. A desinfeco
pode ser realizada por meios fsicos ou qumicos e est indicada para materiais
semicrticos e no-crticos. Em relao desinfeco de superfcies, devemos
sempre partir do local menos contaminado para o mais contaminado. Outra
atividade bsica a troca, sempre que possvel, do pano utilizado para a
aplicao do desinfetante como, por exemplo, entre bancadas e cho. Alm
disso, o nvel de desinfeco depender de variveis como temperatura, tem-
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po e concentrao de germicidas adicionados no processo. Pode ser de alto

nvel, intermedirio ou baixo.
Desinfeco de baixo nvel so inativadas as bactrias em
forma vegetativa, alguns vrus e alguns fungos. O Mycobacterium
tuberculosis, os esporos bacterianos, o vrus da hepatite B (HBV)
e os vrus lentos sobrevivem. Ex.: lcool etlico e isoproplico,
hipoclorito de sdio (100 ppm), fenlicos, quaternrio de amnia. Obs.: tempo de exposio < ou = a dez minutos.
Desinfeco de mdio nvel alm dos microrganismos destrudos
na desinfeco de baixo nvel so atingidos o Mycobacterium
tuberculosis, a maioria dos vrus (inclusive o HBV) e a maioria
dos fungos. Ainda sobrevivem o Mycobacterium intracelulare, os
esporos bacterianos e os vrus lentos. Ex.: lcool etlico e
isoproplico (70 a 90%), fenlicos, hipoclorito de sdio (100
ppm), pasteurizao 75oC a trinta minutos. Obs.: depende da
concentrao e/ou do perodo de exposio.
Desinfeco de alto nvel resistem apenas alguns tipos de
esporos bacterianos mais resistentes e os vrus lentos. Ex.:
glutaraldedo, soluo de perxido de hidrognio, hipoclorito de
sdio (1.000 ppm), cloro e compostos clorados, cido peractico,
orthophtalaldedo, gua superoxidada, pasteurizao 75oC a trinta minutos. Obs.: tempo de exposio > ou = vinte minutos.
Caractersticas ideais de um agente desinfetante:
amplo espectro;
ao rpida;
no ser afetado por fatores ambientais (ex.: luz);
deve ser ativo na presena de matria orgnica;
ser compatvel com sabes, detergentes e outros produtos

qumicos;
atxico (no deve ser irritante para o usurio);
compatvel com diversos tipos de materiais (no corrosivo em
superfcies metlicas e no deve causar deteriorao de borrachas,
plsticos e outros materiais);
efeito residual na superfcie;
fcil manuseio;
inodoro ou de odor agradvel;
econmico;
solvel em gua;
estvel em concentrao original ou diludo;
no poluente.
Efeitos dos agentes qumicos nas bactrias:
Os diferentes agentes qumicos, chamados germicidas, quando contidos
nas preparaes qumicas, podem produzir ao bactericida ou ao
bacteriosttica:
Ao bactericida O agente qumico tem a propriedade de
eliminar as bactrias. uma ao irreversvel porque a bactria
morta, mesmo que o agente qumico seja removido, no mais
capaz de se reproduzir.
Ao bacteriosttica O agente qumico tem a propriedade de
inibir a multiplicao das bactrias. Quando o agente qumico
removido, a multiplicao retomada.
Principais desinfetantes:
lcool O valor do lcool como germicida foi recentemente
revisto, uma vez que o lcool tem mais ao fixadora do que
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desinfetante, dependendo de sua concentrao. Os alcois etlico

e isoproplico so bactericidas intermedirios e rpidos, alm de
serem notadamente efetivos contra o bacilo da tuberculose, porm no so esporicidas. conveniente usar uma s concentrao
de lcool em todo o hospital, sendo a concentrao ideal de
70% de peso por volume, visto que a de 60% tem sua atividade bem diminuda. Os alcois evaporam-se rapidamente, coagulam protenas e so solventes orgnicos. Apesar da rpida evaporao, tm a vantagem de no deixar resduos em superfcies. So
necessrias repetidas aplicaes com lcool a 70% para se conseguir a ao adequada. Todavia sua utilizao pode danificar componentes de alguns instrumentais, ressecar artigos de borracha e
branquear a cobertura asfltica dos pisos. Deve-se evitar exposies por mais de dez minutos na pele por poder causar irritao,
apesar de nesse espao de tempo alcanar toda sua atividade
desinfetante considerando sua extraordinria capacidade germicida
e bactericida, o etanol a 70% pode ser usado em itens semicrticos
e no-crticos.
Compostos de cloro O cloro inorgnico, apesar de econmico, tem uso limitado, no podendo ser extensivamente usado
devido ao seu poder oxidante em vrias superfcies, principalmente metais. Apesar disso, a tradicional soluo de hipoclorito de
sdio a 2% um dos melhores e mais antigos germicidas para
desinfeco local. Na concentrao de 4 a 5%, tambm
tuberculocida, mas sem capacidade esporicida. Hipoclorito de
sdio, onde seja aplicvel, capaz de ter ao de amplo espectro (bactericida e viricida), o que o torna recomendvel como um
efetivo desinfetante intermedirio para itens no-crticos e
semicrticos.
Compostos fenlicos O cido fnico ou carblico considerado o mais antigo germicida existente. Apesar de no ser mais
usado como desinfetante, seus derivados so muito utilizados e
constituem os compostos fenlicos. Essa classe muito popular
para desinfeco domstica. Os fenlicos so bons bactericidas,
so estveis e permanecem ativos depois de algum tempo secos.
Sua diluio a 2 e 3% ativa quando em contato com matria
orgnica, por isso so os desinfetantes escolhidos para lidar com
contaminao fecal. Porm, os fenlicos so absorvidos por material poroso, alm de serem irritantes para a pele.
Consequentemente, seu uso na desinfeco de utenslios ou reas semicrticas limitado. Pelas mesmas razes e porque no so
esporicidas, no so usados em reas e material crticos.
Formol ou formaldedo um composto lquido claro, com
vrias aplicaes. Sua soluo a 37% vem sendo usada, normalmente, como preservativo (peas de anatmico), desinfetante e
antissptico. A formalizao ou fumigao uma desinfeco de
ambiente realizada por sublimao de formaldedo durante um
mnimo de seis horas temperatura de 200oC, usando aquecedor eltrico com timer. Aps a desinfeco, o formol presente
no ar desnaturado por evaporao de 3 g/m3 de carbonato de
amnia durante duas horas e trinta minutos a 200 oC. Aps a
desnaturao, o ar ventilado por duas horas filtros Hepa
(High Efficiency Particulate Air) a fim de retirar os eventuais
vapores residuais. O operador dever utilizar proteo ocular e
mscara de gs com cartucho adequado, uma vez que essa substncia cancergena de mucosa.
Glutaraldedo O dialdedo saturado relacionado quimicamente com o formaldedo. Pesquisadores concluram que a ao
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esporicida do glutaraldedo a 2% aquoso igual ao do formaldedo

a 8% tambm aquoso, desde que a soluo seja alcalinizada. As
solues aquosas de glutaraldedo so cidas e fracamente
microbicidas, mas podem ser ativadas pela alcalinizao com bicarbonato de sdio. Apesar disso, sofrem uma significante perda
de atividade em temperatura ambiente por duas semanas. O
glutaraldedo elimina algumas bactrias rapidamente, vrus no
envelopados em dez minutos, bacilo da tuberculose em vinte
minutos e esporos em perodo de trs a 12 horas. Portanto,
glutaraldedo aquoso a 2% alcalinizado um poderoso
germicida-esporicida, podendo ser usado em materiais
danificveis pelo lcool.
Iodforos Sabidamente, o iodo um dos melhores antisspticos
encontrados at os dias atuais talvez o melhor. Muitos iodforos
so considerados desinfetantes comprveis para uso geral, nas
adequadas concentraes, ainda que instveis na presena de
gua pura, calor e matria orgnica. Inativam vrus a 150 ppm e
destroem bacilos da tuberculose de 300 a 450 ppm.
Consequentemente, na concentrao de 300 a 450 ppm so
desinfetantes valiosos no uso em itens no-crticos e semicrticos.
Apesar disso, sua ao germicida provm da liberao do iodo
livre, o que o torna irritvel para a pele.
Metanol-etanol (formaldedo-lcool) A concentrao de 8%
do formaldedo um germicida de alto nvel. Essa atividade ainda
pode ser aumentada, adicionando-se lcool. Uma combinao de
8% de formaldedo com 65 a 70% de lcool (metanol-etanol)
tuberculocida em cinco minutos. Formalina (20%) um timo
esporicida, mas o tempo requerido para isso pode ser de trinta
horas ou mais. Quando combinado com lcool, apesar de sua
maior atividade, pode necessitar de at 18 horas dependendo

das condies do teste. Combinado com outros compostos qumicos, pode reduzir mais o tempo necessrio para sua ao esterilizante. Um aspecto importante a ser considerado a possvel
toxidez das substncias utilizadas e o grau de dano que pode
causar s superfcies e aos ambientes.
Quaternrios de amnio Os quaternrios tm tido seu uso
largamente difundido, tanto como desinfetante quanto como
antissptico. Contam com a importante qualidade de serem menos irritantes, por isso so to populares. fundamental considerar a suavidade desta classe de germicida quando for necessrio
escolher um desinfetante e/ou antissptico.
Avaliao microbiolgica dos desinfetantes:
As metodologias de avaliao dos desinfetantes tm sido permanentemente questionadas porque, em alguns casos, a eficcia do composto ativo
diferente daquela testada laboratorialmente. Vrias tcnicas vm sendo propostas baseadas na metodologia do coeficiente fenlico, descrita em 1903
por Rideal e Walker e idealizada para comparar a atividade antibacteriana
dos derivados fenlicos naturais do cido fnico (fenol). O teste, que era
realizado apenas frente Salmonella Typhi, hoje j sofreu vrias adaptaes
e inclusive utilizado no s para os compostos fenlicos, mas tambm
para outros compostos com ao antibacteriana. O protocolo oficial usado
no Brasil desde 1985 est atualmente descrito no manual da Association
of Official Analytical Chemist (AOAC) para a avaliao microbiolgica
de desinfetantes qumicos.
Na qualificao de desinfetantes domsticos, utiliza-se Staphylococcus
aureus (ATCC 6538) e Salmonella choleraesuis (ATCC 10708). Para desinfetantes institucionais, inclui-se tambm a Pseudomonas aeruginosa (ATCC
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15442). Para desinfetantes hospitalares, dependendo da rea, pode-se adicionar cepas de Mycobacterium.
Coeficiente fenlico
Para se estandardizar um desinfetante, necessrio determinar o coeficiente fenlico do mesmo (BREWER, 1943). Este coeficiente consiste na
determinao da ao germicida do agente qumico sobre o organismo teste
mediante determinadas temperaturas em funo do tempo, comparada com a
ao do fenol em condies idnticas.
Meio de cultura
Extrato de carne ....................................................... 0,5%
Peptona .................................................................... 1,0%
NaCl ....................................................................... 0,5%
Ajustar o pH = 6,8 0,1
Amostras padro para teste em cultura recente (24 horas):
Salmonella choleraesuis (ATCC 10708)

Staphylococcus aureus FDA 209 (ATCC 6538)
Pseudomonas aeruginosa (ATCC 15442)
Distribuir em tubos 25 x 250 ml, 10 ml de meio, e esterilizar. Adicionar a amostra padro, de escolha.
Tcnica:
a) Separar duas baterias, a primeira contendo dez tubos e a segunda,
dois tubos. Na primeira, adicionar 5 cm3 de vrias diluies do desinfetante
em teste. Na segunda, adicionar a diluio de fenol de 1/90 e 1/100
partindo de uma soluo de fenol a 5% (titulada por meio de bromo).
b) Adicionar a cada tubo das duas baterias 0,5 cm3 da cultura padro.
Manter os tubos em banho-maria a 20C e tirar repiques (ala 4 mm) de
cinco em cinco minutos, isto , aps cinco, dez e 15 minutos e se inocula em
outros tubos contendo meio de cultura estril. Os tubos semeados so incubados a 37C por 48 horas, quando so lidos e comparados os resultados.
Clculos:
Dividir a diluio do desinfetante capaz de matar a S. typhi em dez, mas no
em cinco minutos, pela maior diluio de fenol, que produz o mesmo efeito.
Exemplo:
a) Soluo de cido fnico padro:
Diluio
5 min.
10 min.
15 min.
1/90
1/100
- estril
+ crescimento
b) Soluo do desinfetante a verificar:

Diluio
5 min.
10 min.
15 min.
1/200
1/300
1/400
Resultado do coeficiente fenlico:

timo desinfetante, igual ou superior a 3;
Bom desinfetante, entre 2 e 3;
Mdio desinfetante, entre 1 e 2;
Pssimo desinfetante, abaixo de 1.
Coeficiente fenlico:
300 = 3,33
90
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Sanitizao
Mtodo que envolve diferentes processos, visando a obter o grau
de higiene e limpeza adequadas em todos os componentes do ambiente
de trabalho, reduzindo, assim, os microrganismos presentes a um nmero
compatvel com o produto e aceito pela legislao. O mtodo envolve
quatro estgios:
1. Limpeza inicial da sujidade macroscpica e grossa, utilizando gua;
2. Remoo fsica da sujeira promovida por detergentes;
3. Novo enxgue;
4. Aplicao de sanitizantes (desinfetantes).
1.2.Desinfeco por agentes fsicos
Pasteurizao
Processo idealizado por Louis Pasteur, em 1864, que verificou que o

aquecimento acima de 60oC de certas bebidas e alimentos, por um determinando tempo (chamado de binmio tempo x temperatura), evitava a sua
deteriorao, reduzindo de maneira sensvel o nmero de microrganismos presentes na sua composio.
A partir desta descoberta, esse foi o tratamento recomendado para
reduzir a populao de microrganismos termossensveis (sobretudo no
esporulados) presentes em amostras, principalmente nos alimentos, tais
como sucos de frutas e leite. Normalmente, empregado para produtos
que possuem caractersticas organolpticas e nutricionais altamente suscetveis a altas temperaturas. Este tratamento deve ser associado ao emprego
de outros mtodos, como refrigerao, adicionamento de acar ou aditivos
e uso de embalagens hermticas.
Existem, atualmente, trs tipos de pasteurizao:

Pasteurizao lenta na qual se utiliza menores temperaturas
(por volta de 65oC) durante maior intervalo de tempo (aproximadamente trinta minutos). Podemos denominar o processo como
LTLT (low temperature long time) baixa temperatura e longo
tempo. Este tipo melhor para pequenas quantidades de leite,
por exemplo, o leite de cabra.
Pasteurizao rpida na qual altas temperaturas so utilizadas
por curtos intervalos de tempo. A temperatura utilizada de
75oC durante 15 a vinte segundos. Podemos denominar esse
tipo de pasteurizao como HTST (high temperature and short
time) alta temperatura e curto tempo. mais usada no leite de
saquinho, do tipo A, B e C.
Pasteurizao muito rpida na qual as temperaturas utilizadas
so bastante altas (130oC a 150oC) mas durante um tempo
extremamente curto (de trs a cinco segundos). Este tipo mais
conhecido como UHT (ultra high temperature). utilizada nas
caixinhas de leite tipo longa vida.
Tindalizao
Processo vinculado ao fsico ingls Jonh Tindall. uma tcnica de esterilizao fracionada, em que o vapor fluente (gua de 60C a 90C)
aplicado durante trinta a sessenta minutos, por repetidas vezes, resfriando-se
entre cada aquecimento. Este processo usado quando no se deseja a
coagulao das protenas e o seu princpio visa a destruir as formas vegetativas
apenas, o que se consegue simplesmente pela aplicao do vapor fluente.
Durante o perodo de repouso temperatura ambiente (por volta de 24
horas), as formas de resistncia (esporos) passam para formas vegetativas e
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assim, quando submetidas novamente a vapor fluente, so destrudas. O

nmero de operaes pode variar de trs a 12 vezes, dependendo do
rigor e da qualidade desejada. um processo muito usado na indstria de
alimentos e farmacutica, quando se deseja preservar a qualidade do produto que est sendo esterilizado, pois podem ser mantidos praticamente
todos os nutrientes e as qualidades organolpticas do produto, em propores maiores do que quando se utilizam outros tratamentos trmicos.
Ex.: produtos aucarados ou que contenham gelatina.
1.3. Esterilizao
O ato de esterilizar visa destruio de qualquer microrganismo

existente, incluindo esporos, enquanto o ato de desinfetar preocupa-se
apenas com a destruio de formas vegetativas. A esterilizao, dessa
forma, o processo que promove a completa eliminao de todos os
microrganismos presentes (protozorios, vrus, fungos e bactrias), incluindo os esporos, em um determinado material ou ambiente. Utilizam-se
agentes fsicos e qumicos. diferente de limpeza e de assepsia, uma vez
que estes conceitos esto mais ligados ao controle de microrganismos, ao
passo que a esterilizao se refere eliminao total dos mesmos.
De uma maneira geral, os processos de esterilizao so fsicos e os
de desinfeco so qumicos (o que no quer dizer que no poderamos
fazer uma esterilizao qumica ou vice-versa).
Exemplo de esterilizao fsica:
Calor
Os processos mais comuns de controle baseiam-se no uso do calor,

sendo a via mida a mais efetiva.
Flambagem
SECO
Ar quente
CALOR
Temperatura (50 70C) Pasteurizao

gua fervente
Temperatura (100C)
vapor fluente
Temperatura superior a 100C vapor mido sob presso
Calor seco
De um modo geral, podemos dividir este tipo de esterilizao em duas

tcnicas: a utilizao do ar quente e a flambagem (incinerao):
Utilizao do ar seco ou ar quente recomendada quando o contato

direto com o calor mido (vapor) sob presso no adequado ao tipo
de material, como ocorre com certos tipos de vidraria, leo, ps e
substncias similares. O aparelho usado neste tipo de esterilizao um
forno (eltrico ou a gs) capaz de atingir altas temperaturas. A
despirogeneizao (destruio de pirognioas, substncias capazes de
elevar a temperatura corporal, frequentemente polissacardeos que podem ser de origem microbiana ver captulo sobre bacteriologia) s
pode ser feita no forno 180oC. A autoclave no elimina o pirognio.
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Obs.: Para esterilizao de vidraria limpa, uma exposio de duas horas

a 160oC considerada suficiente.
Incinerao a queima total de um material, usada para destruio de

carcaas de animais ou outros materiais infectados. A destruio de
microrganismos por calor direto tambm praticada na rotina do laboratrio quando a ala ou agulha de platina levada chama do bico de
Bunsen (flambagem). Primeiro se leva a ala chama interna de cor azul,
denominada de chama fria, e depois, vagarosamente,
se desliza a ala para a chama externa (vermelha) para
realizar a flambagem. Quando a ala ou agulha de platina ficar totalmente incandescente, sinal de que foi
feita a esterilizao. Esse procedimento evita a formao
de aerossis, responsveis pela contaminao do meio ambiente.
Calor mido
O calor sob forma de vapor dgua sob presso considerado o agente

mais prtico e eficiente para esterilizao. Proporciona temperaturas mais elevadas que na ebulio, com vantagens como a rpida elevao de temperatura e
maior penetrabilidade. O aparelho utilizado para este fim recebe o nome de
autoclave. Geralmente, embora no sempre, a autoclave operada numa
presso de @15 libras por polegada quadrada (1 atmosfera = 121oC) sendo
o tempo varivel de acordo com o material a ser esterilizado.
Atualmente, alguns laboratrios j esto adotando normas mais rgidas na autoclavao de seus utenslios, principalmente em casos de material
cirrgico.
Aps a descoberta de que os prons (protenas infecciosas causadoras
de doenas chamadas de encefalopatias espongiformes transmissveis, como
Scrapie, Kuru, Creutzfeldt-Jakob e BSE) so capazes de resistir autoclavao
normal e a vrias substncias qumicas, esto sendo preconizadas autoclavaes

a 134oC por duas horas, na certeza de inativao destes elementos.
Os materiais que sero autoclavados devero estar devidamente acondicionados para que ao final do ciclo de esterilizao possam ser retirados e
utilizados com segurana. Para que isso acontea, alguns critrios devero ser
levados em conta na hora da escolha da embalagem para a esterilizao:
Deve-se levar em conta o material e o mtodo de esterilizao sendo
compatvel e resistente s condies fsicas do processo de esterilizao.
Deve proporcionar selagem adequada e barreira microbiana.
Deve permitir a penetrao e remoo do agente esterilizante.
Deve resistir a rasgos e ser livre de furos.
No pode ter na sua composio substncias txicas.
Deve apresentar custo-benefcio positivo.
Considerando a garantia da qualidade da esterilizao, podemos lanar
mo de indicadores qumicos e biolgicos oferecidos de diferentes formas no
mercado. Estes devero ser testados pelo controle da qualidade e mantidos na
validade e em condies ideais de estocagem.
Indicadores qumicos:
Externos: indicam o contato
do vapor com a superfcie
exposta.Devem ser usados em
todos os processos e pacotes.
Interno: indicam que o vapor
penetrou no interior da
embalagem.
Fitas ou etiquetas adesivas impregnadas com substncias

qumicas termosensveis especficas ao vapor que, ao serem
retiradas da autoclave, devero apresentar mudana de cor.
Impresso tinta indicativa termosensvel impressa diretamente
na embalagem que, ao ser retirada da autoclave, dever
apresentar mudana de colorao.
Tintas de papel impregnadas com tinta em concentrao
graduada com substncias qumicas termosensveis especficas
ao vapor que, ao serem retiradas da autoclave, devero
apresentar colorao marrom a preto.
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Indicadores biolgicos:
So utilizados espcimes bacterianos no patognicos com esporos altamente resistentes ao calor mido e dessecao. O exemplo mais comum o
Bacillus (Geobacillus) stearotermophilus, utilizado como desafio, j que, uma
vez tendo sido eliminado, todos os outros esporos e formas vegetativas
tambm o sero.
Para fazer o teste biolgico do funcionamento da autoclave, utilizase os esporos dentro de um recipiente, que ir passar pelo ciclo de esterilizao da autoclave. Coloca-se o pacote teste embaixo junto ao dreno
ou, nos modelos verticais, no meio da cmara, que so os pontos respectivamente mais frios em funo da localizao das resistncias. Ao final do
ciclo, aps o resfriamento total, abre-se o recipiente expondo os esporos
ao meio de cultura. Coloca-se para incubar em estufa bacteriolgica com
um controle positivo (outro indicador de controle idntico que no vai
para autoclave, mas deve ser ativado da mesma forma, j que a sua finalidade testar tanto a viabilidade dos esporos quanto verificar se a incubadora
est funcionando corretamente).
O resultado esperado a mudana de cor causada pela alterao de
pH da soluo que resulta da atividade microbiana. O teste levado ao
autoclave no deve mudar de cor, pois o esperado que os microrganismos tenham sido destrudos no processo de esterilizao. A leitura final
feita aps 24 a 48 horas de incubao dos indicadores. A recomendao
do Ministrio da Sade e da Vigilncia Sanitria o uso semanal dos
indicadores biolgicos.
Irradiao
Os efeitos das radiaes dependem da sua durao, do comprimento de onda, da intensidade e da distncia da fonte. Existem, atualmente,
pelo menos dois tipos utilizveis no controle de microrganismos. As

ionizantes (comprimento de onda mais curto e maior energia) e as no
ionizantes. Vamos citar as mais conhecidas:
Raios gama
Radiao do tipo ionizante, sem induzir aumento na temperatura, destri
componentes celulares orgnicos, entre eles as ligaes do DNA, atravs da ionizao da gua e produo de radicais livres (superxidos),
destruindo formas vegetativas e, em doses mais elevadas, esporos.
Apesar de o custo inicial deste tipo de processo ser elevado, a radiao
gama constitui hoje o mtodo de eleio para esterilizar grandes lotes de
itens de pequeno volume, como agulhas, seringas, luvas e cateteres.
Eventualmente, tambm pode ser usada para vacinas e na preveno da
deteriorizao de alimentos.
Raios UV
Apesar do baixo poder de penetrao, a radiao ultravioleta empregada com sucesso no ambiente hospitalar e no laboratrio (lmpada
germicida), funcionando como esterilizante de superfcie aps limpeza
com desinfetante. Usada tambm para controle de microrganismos do
ar, frequentemente encontrada em centros cirrgicos e capelas de
fluxo laminar. No utilizada em larga escala, pois pode causar danos
pele e crnea.
Filtrao
Como outro processo considerado de esterilizao, podemos citar a

filtrao atravs de substncias capazes de reter os microrganismos. Antigamente, eram usadas velas e filtros de amianto do tipo seitz. Atualmente, so mais
utilizadas as membranas de nitrocelulose de pequena porosidade (0,2m),
embora de forma efetiva estas funcionem muito bem, pois consideram tambm
| 89
a atrao eletrosttica das partculas e no agem realmente como esterilizantes,

j que podem eventualmente permitir a passagem de vrus e alguns gneros
bacterianos de menor dimetro.
xido de etileno
Amplo uso como esterilizante de instrumentos. Tem ao esporicida

mais rpida que o formaldedo gs. A esterilizao por xido de etileno um
mtodo especfico devido a sua complexidade, tanto relativa ao seu alto custo
quanto ao longo tempo requerido.
1.4. Medicamentos para controle bacteriano (ver captulo
sobre Bacteriologia no volume III)
Quimioterpicos
Produzidos por sntese qumica em laboratrio, ao invs de serem produzidos por um microrganismo.
Qualidades ideais de um agente quimioterpico:
Ser capaz de destruir ou inibir muitas espcies de microrganismos
patognicos. Quanto maior o nmero de diferentes espcies afetadas,
melhor o agente.
Inibir os microrganismos de tal maneira que se evite o desenvolvimento de formas resistentes produtoras de doenas.
No produzir efeitos colaterais indesejveis no paciente.
No eliminar microrganismos que normalmente habitam o trato intestinal ou outras reas do organismo (flora normal).
Ser altamente solvel nos fluidos corporais.
No pode ser inativado pelo cido estomacal, deve ser absorvido
pelo trato intestinal.
Antibiticos ou agentes antimicrobianos
So substncias obtidas a partir de microrganismos (principalmente fungos) que so utilizadas no tratamento de doenas, sobretudo de origem
bacteriana. A escolha do antibitico no tratamento de uma infeco depende
do microrganismo obtido a partir da cultura em laboratrios de anlises clnicas
e da sua sensibilidade verificada no antibiograma (ver captulo sobre Bacteriologia), pela gravidade da doena, da toxicidade e dos antecedentes de alergia
do paciente. Em infeces graves, pode ser necessrio combinar vrios antibiticos. A via de administrao pode ser oral (cpsulas, comprimidos), tpica
(colrios, pomada) ou injetvel (intramuscular, intravenosa). Nas infeces graves, deve-se utilizar a via intravenosa.
Para proceder adequadamente a qualidade dos testes e o controle dos
microrganismos, lanamos mo de processos de esterilizao, que podem ser
fsicos ou qumicos, como veremos a seguir.
2. T
ratamento de gua
Tratamento
Sistemas de tratamento de gua

A gua que bebemos denominada potvel e, por definio, pode ser
consumida por pessoas sem riscos de adquirirem doenas por contaminao da
mesma. Ela pode ser oferecida populao das cidades ou de reas rurais e vai
ou no precisar de tratamento prvio dependendo da origem do manancial. O
tratamento de gua tem como objetivo reduzir a concentrao de poluentes at
o ponto em que no apresentem riscos para a sade pblica. O grau e o tipo
de tratamento vo variar de acordo com as normas de cada pas e, principalmente, com a qualidade da gua de abastecimento. No Brasil, na maioria das
cidades, existe a necessidade de filtros domsticos. Entretanto, o Instituto
Nacional de Metrologia, Normalizao e Qualidade Industrial (Inmetro) alerta para alguns cuidados a serem tomados em relao a este sistema de filtrao
(www.inmetro.gov.br acesso em 24 out. 2008):
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No se deixe levar pelo ttulo, filtro ou purificador; os ensaios mostra-
ram que estes no tm diferena.

No se impressione com promessas de gua pura ou cristalina, pois
isso no significa que o filtro combata bactrias ou elimine possveis

riscos sade.
Em caso de dvida quanto procedncia da gua, no confie somente
no filtro. Nestes casos, ferva a gua por, pelo menos, 15 minutos.

Para os consumidores que se utilizam de fonte de gua in natura,
muito importante que a qualidade da gua seja verificada periodicamente

atravs de ensaios microbiolgicos e que a gua seja fervida aps a
filtragem.
de fundamental importncia manter a caixa dgua limpa, pois a falta
de higiene nesta pode ser um foco de contaminao da gua.

Segundo o Inmetro, a qualidade dos filtros domsticos existentes no
mercado nacional preocupante, particularmente no que diz respeito s informaes quanto utilizao e finalidade e quanto ao desempenho na eliminao
de bactrias. A inexistncia de normas e regulamentos contribui para atual
situao, cabendo ao Inmetro induzir a criao de uma norma brasileira para
este produto.
Entretanto, a gua que utilizamos em laboratrio tem um nvel de exigncia qumica e biolgica muito maior, mas, assim como nas vidrarias de
laboratrio, no podemos generalizar as especificaes da qualidade exigida
para os diversos laboratrios, sendo assim, os laboratrios de qumica, de um
modo geral, necessitam de gua deionizada, isto , livre de ons, enquanto os
de produo de diluentes, vacinas, medicamentos e os de bacteriologia usam
sistemas de ultrafiltrao ou destilao que removem coloides, bactrias e
pirognios. Dessa forma, iremos descrever um sistema de tratamento de gua,
ressaltando que no existe o sistema ideal para todos os laboratrios e a
escolha deve ser feita tendo em vista a finalidade, a origem do manancial, os

recursos financeiros disponveis e o consumo de gua. Na hora de se projetar
um sistema de tratamento de gua, deve-se entrar em contato com as empresas
fabricantes dos equipamentos para se verificar o consumo de gua, consumo
eltrico e gasto de material de consumo.
2.1. gua de alimentao
A origem da gua muito importante para se obter uma gua purificada

de qualidade WFI (water for injection). Independentemente se a gua vem
de um poo artesiano ou do Centro Municipal de Tratamento de gua,
tipo Cedae (no caso do Rio de Janeiro), uma filtrao inicial dever ser
realizada. Como o projeto e a operao do sistema de tratamento de gua
dependem da qualidade da gua de abastecimento, importante conhecer
as caractersticas e evidenciar as alteraes da qualidade da gua, com a
mudana das estaes, j que, dependendo da poca do ano, podemos ter
na gua elementos slidos provenientes do solo ou de outros locais por
onde ela passou, como ocorre nas enchentes, modificando as caractersticas
desta gua (dureza, salinidade, pH etc.).
A gua de alimentao deve ser monitorada a cada seis meses para se
ter certeza de que as caractersticas qumicas esto mantidas. No caso de se ter
uma gua muito ionizada, monta-se, ento, um Sistema Softened (como explicado a seguir), para se retirar a grande maioria dos ons e remover as substncias insolveis em suspenso. Caso haja muita matria orgnica, faz-se necessria a colocao de filtros de areia e carvo ativado. A qualidade da gua de
origem vai indicar os prximos passos do sistema de tratamento, nesse caso,
tubulaes antigas de ferro que levam a gua para as cisternas e caixas dgua
obrigaro a colocar na linha, tambm, um Sistema Softened.
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2.2. Sistema Softened (gua sem ferro)
A retirada de ferro da gua realizada por filtrao num leito composto

de mistura de calcita (CaCO3) e dolomita calcinada CaMg(CO3)2. A
filtrao precedida por uma oxidao sob ar comprimido em um cilindro para
oxidar sais de Fe++. Ctions de Fe++ so eliminados por filtrao sob a forma
de Fe+++ hidratado Fe(OH)3. O ar comprimido fornece o ar necessrio
para a oxidao. A gua ento distribuda para os filtros desferrificadores.
Esse tipo de tratamento, normalmente, antecede o sistema de purificao de gua utilizado nos laboratrios, ficando, geralmente, situado fora do
prdio. Caso a gua de abastecimento seja fornecida pelo centro de tratamento municipal, essa primeira etapa ser dispensada ou trocada por outra de
acordo com a necessidade.
Exemplo de utilizao da gua:
Instalaes sanitrias (chuveiro);
Circuitos de refrigerao (gua gelada);
Alimentao do desmineralizador ou do deionizador;
gua para laboratrio de qumica.
2.3. gua desmineralizada
Na realidade, tanto o desmineralizador quanto o deionizador tm o

mesmo objetivo: a retirada de ons da gua. Entretanto, convencionou-se que
o equipamento de desmineralizao possui duas colunas separadas, cada uma
contendo uma resina diferente (aninica e catinica), e no deionizador as duas
resinas esto juntas na mesma coluna, isto , coluna de leito misto. A resina
catinica contm ons disponveis capazes de remover ctions (Na +, Ca++,
Mg++, Fe+++ ,etc.). A circulao da gua do topo para o fundo do leito de
resina e a regenerao so realizadas da mesma maneira com cido clordrico
(HCl) servindo tambm como agente sanitizante.
A resina aninica retira os nions da gua (Cl -, SO--). A gua

decationizada passa para a forma hidroxlica. A regenerao feita da mesma
maneira contra-corrente com soluo alcalina forte (hidrxido de sdio
NaOH), a qual funciona tambm como agente sanitizante. A gua
desmineralizada distribuda para os laboratrios ou ento vai alimentar o
deionizador. Apesar de teoricamente a gua desmineralizada apresentar uma
qualidade qumica um pouco inferior que a gua deionizada, no existe a
necessidade de ter os dois sistemas em linha (desmineralizador deionizador).
Muitos laboratrios que possuem recurso financeiro fazem a opo de ter o
desmineralizador abastecendo o deionizador, com o objetivo de proteger o
segundo equipamento e com isso aumentar o intervalo entre as regeneraes e
diminuir o gasto de produtos e resinas.
Regenerao das resinas:
O local de entrada do cido e da base para a regenerao das resinas
no deve ficar dentro da sala, e sim do lado de fora. Pode ser comprado na
concentrao de 30% em tanques adaptveis tubulao. Na maioria dos
desmineralizadores, todo processo automtico.
A regenerao baseada no volume de gua que passa por aquela
resina, a no ser que a condutividade v alm do limite aceitvel (5mS). O
nmero de regeneraes em um ano pode variar de dez a vinte. Isto vai
depender da produo anual daquele laboratrio e da qualidade da gua de
alimentao. Conforme for diminuindo o tempo de intervalo entre uma regenerao e outra, sinal de que a resina est perdendo sua capacidade
regeneradora. O controle nesse caso, para ver se necessrio ou no fazer
uma nova regenerao, a condutividade da gua. E medida que se vai
aumentando o nmero de regeneraes, a tendncia da quantidade de resina
diminuir. Uma preocupao importante nos procedimentos de regenerao das
colunas quanto biossegurana. Equipamentos de proteo individual e
| 95
coletiva devem ser rigorosamente utilizados, uma vez que qualquer acidente
pode colocar o operador em risco de ter queimaduras provocadas por cido e
soda ou at mesmo problemas graves de sade por inalao de vapores. Um
reservatrio contendo resina sinttica com alto poder de absoro, caso haja
derramamento de cido e base no momento do processo de regenerao,
deve estar disponvel no laboratrio em local estratgico. Todas as conexes
utilizadas na instalao do equipamento devem ser de ao inox para resistir
ao oxidante dessas substncias.
Exemplo de utilizao da gua:
Produo de vapor (tubulao PVC);
gua (quente e fria) para lavagem de equipamentos;
Alimentao do deionizador;
gua para laboratrios de qumica.
2.4. gua deionizada
O tratamento de gua deionizada uma unidade composta de duas

colunas de leito misto, trabalhando em srie, chamada de Triobed. Cada
Triobed composta de uma resina cido forte, uma resina bsica forte e uma
resina neutra (que fica localizada no meio e a mistura das duas resinas).
A unidade Triobed trabalha no sistema clssico de leito misto. As
resinas so classificadas ou separadas pela diferena de densidade das partculas
depois de enxgue da coluna com gua desmineralizada por dez minutos, em
contra-corrente. A resina neutra uma camada com cerca de 12 a 25 cm de
altura entre as outras duas.
A resina cida (camada de baixo) regenerada em contra-corrente e a
resina bsica (camada de cima) em cocorrente. Depois de cada ciclo de
regenerao, feito o enxgue com gua desmineralizada. Duas bombas coletoras de gua deionizada distribuem gua para o sistema.
Regenerao das resinas:

Mover toda a resina para o topo da coluna e passar HCl a 30%.
Retirar o cido, com gua desmineralizada, levando para um tanque de
neutralizao, localizado ao lado de fora do prdio. Esta gua cida s ser
despejada para o esgoto quando estiver neutralizada com uma soluo alcalina.
Proceder da mesma maneira com a resina bsica, s que usando NaOH a
30%. Usa-se tambm o tanque de neutralizao, colocando-se uma soluo
cida. Deve-se lavar as resinas com gua desmineralizada, at o condutivmetro,
localizado no final da coluna marcar em torno de 1mS.
Exemplos de utilizao da gua:
Produo de vapor (tubulao em ao inox);
gua de lavagem de tanques;
Laboratrios de qumica e outros que precisem de gua deionizada;
Alimentao das unidades de ultrafiltrao e destilao.
2.5. gua bidestilada (WFI)
A gua de alimentao pr-aquecida num trocador de calor, por

condensao de vapor vindo da ltima coluna e dos pr-aquecedores pelo
condensado produzido em cada efeito. A gua de alimentao evapora parcialmente na primeira coluna aquecida por vapor industrial. O condensado de
vapor passa atravs do trocador e descarrega. O vapor puro produzido do
topo segue para o prximo efeito, onde o processo repetido. A gua
destilada produzida por condensao de vapor puro vai para o trocador. O
processo repetido por todas as colunas da mesma maneira. O vapor produzido no ltimo efeito condensado e resfriado. A gua bidestilada no deve
ser armazenada. Se isto precisar acontecer, deve ser feito um sistema de
looping a 85oC.
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gua para o preparo de vacinas;
gua para o preparo de diluentes e solues (WFI);
gua final (enxgue) de lavagem de vidrarias, frascos e rolhas;
Laboratrios em geral, principalmente os que precisam de gua
com qualidade microbiolgica muito boa.

2.6. gua ultrafiltrada (WFI):
Existem no mercado vrios modelos de ultrafiltradores que produzem

gua purificada do tipo WFI. Os cartuchos de ultrafiltrao so hidrfilos e
o fluxo inicial necessrio cada vez que novos cartuchos so usados. Deixe
sempre o sistema funcionar por quatro horas (para drenar) antes de usar a
gua. Ajuste o ejetor e a passagem das vlvulas para obter uma presso
compatvel com a presso transmembrana. A maioria dos equipamentos
desta natureza possui timer programvel. A gua ultrafiltrada no deve ser
armazenada. Se isto precisar acontecer, deve ser feito um sistema de looping
a 85oC.
gua para o preparo de vacinas e de diluentes e solues (WFI);
gua final (enxgue) de lavagem de vidrarias, frascos e rolhas;
Laboratrios em geral, principalmente os que precisam de gua
com qualidade microbiolgica muito boa.
Esquema de tratamento de gua

gua de entrada
Unidade de oxidao
Unidade desferrificadora
Instalaes sanitrias e
circuito de refrigerao
Hipoclorito de sdio
Detector de cloro
Estocagem em tanque
(20 min)
Filtro de carvo ativado
Desmineralizador
Produo de vapor,
laboratrio de qumica,
lavagem de tanque, etc.
Laboratrio de bacteriologia,
imunobiolgicos,produo de
WFI
Deionizador
Ultrafiltrao
Destilador
3. Equipamentos
3.1. Autoclave
um equipamento de laboratrio utilizado para

esterilizar objetos atravs de calor mido (vapor) combinado com presso. Dessa forma, a esterilizao a vapor realizada em autoclaves, cujo processo possui fases
de penetrao do vapor, remoo do ar e secagem. Ao
utilizar a autoclave, importante assegurar que o vapor deslocou todo o ar antes que a presso se eleve. Nesse sentido,
o vapor saturado, isento de ar, na presso de 1 atmosfera, tem uma
temperatura de 121oC.
Existem vrios modelos de autoclaves, mas, quanto fundamentao
da tcnica de autoclavao, podemos dividi-las em dois grandes grupos:
| 99
Gravitacional: o ar removido pelo vapor que injetado forando sua
sada ou atravs de uma bomba. A fase de secagem limitada, uma vez

que no possui capacidade para completa remoo do vapor.
Alto vcuo: introduz vapor na cmara interna sob alta presso com ambien-
te em vcuo. A fase de secagem melhor do que a gravitacional devido

alta capacidade de suco do ar realizada pela bomba de vcuo.
Os ciclos de esterilizao so orientados de acordo com as especificaes
do fabricante, com o tipo e a quantidade de material a ser esterilizado. Para se
ter uma boa esterilizao, preciso dispor o material de forma a permitir a
passagem de vapor por toda a cmara de forma homognea. Os materiais
devem ser montados utilizando papel cristal, kraft ou plstico especial para
autoclavao lacrados com fita para autoclave que serve tambm como indicador de que o vapor atingiu aquela superfcie.
As autoclaves devem ser calibradas e validadas de seis em seis meses pela
Garantia da Qualidade e deve ser feita manuteno preventiva anualmente.
3.2. Microscpio
Os estudos morfolgicos da clula normalmente comeam

com o emprego do microscpio tico, mais comumente denominado de microscpio de luz (por utilizar a luz como fonte de
formao de imagens) ou microscpio composto (por ser constitudo por dois sistemas de lentes sobrepostas: a objetiva e a
ocular). Este instrumento pode ser considerado como a ferramenta bsica em laboratrios da rea da sade, dessa forma dedicamos o captulo 3 desta coleo com detalhamentos da tcnica de microscopia
de luz.
A observao da clula ao microscpio tico feita por luz transmitida,
que exige que o objeto a ser estudado atenda a alguns critrios:
Ser suficientemente fino, para que a luz possa atravess-lo
o objeto deve ter uma espessura na ordem de 5mm, tornando-se

necessrio fazer esfregaos finos ou, em alguns casos, realizar cortes
histolgicos para atingir a espessura desejada (Ver detalhes no captulo de Tcnicas Histolgicas e Citolgicas captulo 11 e 12 do
volume 2 desta coleo).
Apresentar contrastes, diferenciando as regies celulares. Como os
constituintes celulares tm pouco contraste, necessrio utilizar coloraes artificiais. Os corantes so substncias que absorvem certos comprimentos de onda da luz visvel e tm afinidade por determinados constituintes celulares.
O microscpio de luz composto fundamentalmente das seguintes
partes:
Partes mecnicas
P base do aparelho, suporta todas as outras partes.
Brao preso ao p, rgido ou articulado, suporta o canho, a
platina, o condensador e o espelho ou fonte luminosa.

Canho o tubo onde se dispem as partes ticas de
ampliao. Pode ser fixo ao brao ou possuir movimento vertical.

Revlver uma pea giratria onde se conectam as objetivas
e que permite a instantnea mudana das mesmas.

Platina a mesa de trabalho, onde se coloca a preparao
para exame. Possui uma abertura central que d passagem luz

proveniente da fonte. Pode ser fixa ao brao ou possuir movimento vertical.
Charriot um dispositivo preso platina, dotado de movimen-
to antero-posterior e lateral, destinado a movimentar a preparao.
Conceitos e tcnicas bsicas aplicadas em laboratrios | 101
Parafuso macromtrico um dispositivo destinado a dar
grandes e rpidos deslocamentos verticais ao canho ou platina.

Serve para focalizao grosseira.
Parafuso micromtrico um dispositivo destinado a dar pe-
quenos e lentos deslocamentos ao canho ou platina. Serve

para focalizao fina.
Microscpio ptico:
Ocular;
Revlver;
Objetiva;
Parafuso macromtrico;
Parafuso micromtrico;
Platina;
Espelho;
Condensador.
Quanto ao sistema de iluminao, ele pode ser provido de: espelho ou
fonte de luz direta, que deve estar preso parte inferior do brao, refletindo
ou projetando a luz para a parte inferior do condensador; diafragma ou ris,
que, colocado sob o condensador, destina-se a restringir o dimetro de feixe
luminoso; condensador, que um sistema tico de refrao, preso parte
inferior do brao sob a platina, podendo ou no possuir movimento vertical (e
lateral para centralizao), destinado a fazer convergir sobre a preparao a luz
proveniente da fonte (consultar cap 3 de Microscopai de Luz).
O sistema de ampliao formado pelas objetivas e oculares. A
qualidade da visualizao da imagem ser proporcionada pelo poder de
resoluo, que pode ser definido como a capacidade que este sistema
possui de formar imagens distintas e ntidas de dois pontos situados muito
prximos em uma preparao.
Objetivas de imerso (abertura numrica de uma objetiva)
Para se aproveitar uma maior quantidade de luz quando a objetiva de

grande aumento, trabalha-se com a objetiva imersa em um lquido de alta
refringncia, em geral leo de cedro (ndice de refrao de 1,575). Com o
emprego desse leo, pode-se fazer convergir o feixe luminoso proveniente do
condensador, captando-se aqueles raios luminosos que, com objetivas secas,
seriam perdidos. Estas objetivas so denominadas objetivas de imerso. A
consequncia direta do emprego dessas objetivas o aumento da luminosidade.
No caso de uma objetiva seca, no existe leo, e o ndice de refrao igual
ao do ar, que 1.
Manejo do microscpio ptico
Colocar na objetiva de menor aumento e baixar a platina completa-
mente. Se o microscpio foi usado corretamente antes, ele j deve estar

nestas condies.
Colocar a lmina com a preparao sobre a platina e prend-la com as
pinas metlicas.
Comear a observao com a menor objetiva (colocar na de 10x para
observao de bactrias).
Para obteno do foco:
a) Aproximar ao mximo a lente da objetiva da lmina, atravs do

parafuso macromtrico. Este procedimento dever ser realizado
observando-se diretamente o local e no atravs da ocular, para
que no haja o risco de incrustar na objetiva a preparao ou
mesmo de quebrar a lmina.
b) Observar, atravs das oculares, a amostra e, atravs do parafuso macromtrico, ir separando lentamente a objetiva da preparao. Quando se observa a nitidez da amostra, gira-se o micromtrico
para obter o foco fino.
Ao mudar para a objetiva de 40x, deve-se redobrar a ateno, pois a
partir desta o foco fica muito prximo da lmina, sendo comum a ocorrncia de danos.
Utilizando a objetiva de imerso:
a) Abaixar totalmente a platina.

b) Subir totalmente o condensador para visualizar claramente o
crculo de luz que nos indica a zona onde devemos pingar o leo
de imerso.
c) Girar o revlver at a objetiva de imerso deixando-a na
metade do caminho entre ela e a objetiva de 40x.
d) Colocar uma gota mnima de leo de imerso sobre o crculo
de luz.
e) Terminar de girar suavemente o revlver at a posio da
objetiva de imerso
f) Olhando diretamente pela objetiva, levantar a platina lentamente at que a lente toque a gota de leo. Nesse momento, a
gota de leo se levanta e se une lente.
g) Focar cuidadosamente com o micromtrico. A distncia de
trabalho entre a objetiva de imerso e a preparao mnima,
menor do que com a de 40x. Deve-se ento ter muito cuidado
para no ocorrer qualquer problema durante a visualizao.
h) Uma vez que se colocou o leo de imerso sobre a preparao, no se pode voltar a utilizar a objetiva de 40x, pois esta
objetiva se mancharia de leo. Portanto, se desejar focar nova-
mente a mesma lmina, utilize outro campo. Neste caso, deve-se

abaixar a platina e repetir a operao a partir do passo trs.
i) Uma vez finalizada a observao da preparao, se abaixa a
platina e se coloca na objetiva de menor aumento girando o
revlver. Neste momento, j se pode retirar a lmina da platina.
Nunca se deve retirar a amostra com a objetiva de imerso em
posio de observao.
j) Limpar a objetiva de imerso com cuidado empregando um
papel especial para microscopia. Verificar tambm se a objetiva
de 40x est perfeitamente limpa.
Manuteno preventiva
Ao finalizar o trabalho, deve-se deixar o microscpio na objeti-
va de menor aumento em posio de observao.

Quando no se est utilizando o microscpio, deve-se mant-
lo coberto com capa, preferencialmente de tecido, para evitar

que se suje e as lentes fiquem danificadas. Se no se utiliza o
aparelho com frequncia, deve-se guard-lo em sua caixa dentro
de um armrio para proteg-lo do p.
Nunca se deve tocar as lentes com as mos. Se elas se sujarem,
devem ser limpas suavemente com papel de filtro ou papel para

lentes.
No se deve deixar lminas sobre a platina quando no se est
utilizando o microscpio.
Depois de utilizar a objetiva de imerso, deve-se limpar o leo
com lenos de papel especiais para tica ou papel de filtro (menos recomendvel). Em qualquer caso, deve-se passar o papel na
lente em somente um sentido com suavidade. Se o leo chegar a
secar na objetiva, deve-se limp-la com uma mistura de lcoolter (9:1). No se deve abusar deste tipo de limpeza, porque o
uso em excesso destes solventes poder danificar as lentes. Nunca forar os botes (parafusos) giratrios do microscpio
(macromtrico, micromtrico, platina, revlver e condensador).
A mudana das objetivas dever ser realizada girando o revlver
e visualizando diretamente sobre a preparao para prevenir o

contato da lente com a amostra. Nunca mudar de objetiva segurando pelo tubo, nem faz-lo observando atravs da ocular.
3.3. Banho-maria
O banho-maria um equipamento utilizado

em laboratrios, que permite aquecer substncias de forma indireta (por imerso), ou seja,
que no podem ser expostas a fogo direto.
Tambm pode ser utilizado para descongelamento
ou incubao de produtos biolgicos.
Condies gerais:
A limpeza do equipamento deve ser feita com gua potvel e sabo
neutro (Extran a 10%). Enxaguar bem e enxugar somente com gaze por fora.
No utilize solventes, tais como benzina, thiner e lcool.
Manejo:
a) Verificar a instalao e se a voltagem da tomada compatvel com a
do equipamento.
b) Verificar o nvel de gua, observando que o volume ideal corresponde
metade do volume total.
c) Verificar o tipo de gua utilizada que dever ser filtrada.
d) Depois de ligado o equipamento, a gua leva, em mdia, 15 minutos para aquecer.

e) O tempo de uso vai variar de acordo com o material utilizado.
f) Verificar sempre o nvel da gua, j que esta evapora e, por isso,
dever ser reposta.
g) Com o fim do procedimento, retirar a tampa e, em alguns modelos,
a capa de revestimento interno, para propiciar o despejo da gua diretamente na pia.
h) Aps verificar se o equipamento est seco, recolocar a capa de
revestimento e a tampa para que o equipamento fique pronto para
novo uso.
3.4. Balana eletrnica de preciso
A balana eletrnica de preciso utilizada

para se pesar diferentes substncias no laboratrio
de sade.
Condies gerais:
Observar se a balana est instalada em local
livre de altas temperaturas e da ao direta de correntes de ar muito fortes, tais como ventiladores. A balana deve estar instalada em local de fcil visibilidade
para o operador e onde no haja vibrao. Devem ser ajustados os ps
regulveis da mesma de modo que ela fique bem apoiada e nivelada (verifique
a indicao do nvel).
Deve-se fechar a porta da balana sempre que se colocar um produto.
Procure colocar o produto sobre o prato da balana com suavidade, lembrando-se sempre que se trata de um equipamento sensvel. Para limpeza, utilize
um pano mido com gua e sabo neutro. No utilize solventes, tais como
benzina, thiner e lcool. Ao transportar o equipamento de um local para

outro, sempre trave a balana e procure manuse-la com cuidado, tomando
todas as precaues para reinstalao.
Manejo:
a) Verificar a instalao e se a voltagem da tomada compatvel com
a do equipamento.
b) A balana no deve ser desligada, permanecendo em stand-by.
c) Aguarde at que haja marcao no visor.
d) Aparte o boto relativo calibrao para iniciar a mesma.
e) Calibre de acordo com o manual do fabricante.
f) Quando a calibrao estiver completa, aparecer no visor vrios
zeros.
g) Inicie ento a pesagem.
h) Coloque o recipiente a ser descontado sobre o prato da balana,
que imediatamente mostrar seu peso no visor.
i) Tecle tara para zerar a balana.
j) Coloque o produto a ser pesado no recipiente tarado, sem retir-lo
de cima do prato, e proceda a operao normal de pesagem.
k) Caso queira eliminar a memorizao da tara para obteno do
peso bruto, retire o recipiente com o produto da balana e, em
alguns segundos, os visores retornaro condio inicial ou aperte
a tecla tara com a balana vazia, para que o cancelamento desta
funo seja imediato.
l) Aps o uso, utilizar um pincel fino para retirar todos os resduos
provenientes da pesagem.
m) Fechar o gabinete da balana e mant-la em stand-by.
n) Realizar a manuteno preventiva anualmente ou semestralmente de

acordo com o fluxo de utilizao.
3.5. Centrfuga
um equipamento que acelera o processo

de sedimentao devido ao movimento centrfugo de rotao acelerado, no qual as partculas de
maior densidade so arremessadas para o fundo
do tubo.
Condies gerais:
Observe se a centrfuga est instalada em
local livre de altas temperaturas. Os ps regulveis
devem ser ajustados da mesma de modo que ela
fique bem apoiada e nivelada (verifique a indicao do nvel). Certifique-se
das boas condies da instalao eltrica. Para limpeza, utilize um pano mido
com gua e sabo neutro. No utilize solventes, tais como benzina, thiner e
lcool. Caso a mesma seja refrigerada, deve-se lig-la com antecedncia para
que a temperatura esteja adequada antes da sua utilizao.
Manejo:
a) Verificar a instalao e se a voltagem da tomada compatvel com a
do equipamento.
b) Os tubos que iro para a centrfuga devem conter a mesma quantidade de material e devem ter o mesmo peso.
c) Colocar os tubos, equilibrando no sentido transverso.
d) Depois dos tubos equilibrados, deve-se fechar a centrfuga.
e) Ligar a chave geral e ajustar o tempo e a velocidade de acordo com
o que a tcnica pedir.

f) Aps o trmino do tempo marcado, o equipamento desliga automaticamente.
g) Esperar parar totalmente e abrir a tampa, retirando os tubos.
h) Realizar a manuteno preventiva anualmente ou semestralmente de
acordo com o fluxo de utilizao.
3.6. Capela e Cmaras de segurana
H muitos tipos de capelas e de cmaras, cada uma com seu prprio

projeto e funcionalidade. Para
identificar quais tipos voc necessita ou esto presentes em seu
laboratrio ou saber exatamente
qual tipo est presente em seu
laboratrio, apresentamos abaixo
uma lista de definies, descries e caractersticas tcnicas, suas
vantagens e desvantagens.
Capelas para Qumica geral & orgnica
Uma capela de exausto um gabinete com ventilao forada,
localizado em um ambiente laboratorial cujo layout deve estar corretamente
projetado, de modo a proteger o operador mas no danificar o meio
ambiente, utilizando um sistema de filtrao que leve para fora do edifcio
os efluentes indesejveis provocados por procedimentos efetuados no interior da capela.
Estes gabinetes podem ser construdos de alvenaria ou com materiais
adequados para cada caso. obrigatrio que as capelas possuam uma
janela envidraada que abra verticalmente e permanea aberta em qualquer

posio (altura), uma vez que est balanceada por um sistema de contrapesos. Em alguns casos, dispe de um sistema defletor para direcionamento
do fluxo de ar interno.
O termo capela de exausto o mais difundido, mas outros termos
tambm so utilizados, como capelas qumicas, gabinetes, etc. As capelas de
exausto so, na realidade, um equipamento de proteo coletiva (EPC) do
trabalhador em laboratrio, sendo disponveis no mercado em muitas formas,
tamanhos, materiais e diferentes revestimentos, e devem ser configurados para
acomodar uma grande variedade de procedimentos qumicos. Entretanto, esta
flexibilidade pode oferecer equipamentos que resultem em diferentes desempenhos e nveis de proteo ao operador (Para mais detalhes, veja o captulo 1
de Biossegurana).
Cmaras ou Cabines de segurana biolgica e fluxos laminares
As cmaras ou cabines de segurana biolgicas (CSB) e os fluxos
laminares so usados para a manipulao de agentes biolgicos, produo
de diluentes e imunobiolgicos, meios de cultura e diversos materiais que
precisam ser processados em ambiente estril. Alm disso, algumas capelas
de fluxo laminar no apenas protegem o operador da exposio de produtos biolgicos como tambm precisam garantir a segurana do produto e
do ambiente. Dessa forma, existem diferentes modelos de cabines, mas
todos possuem filtros absolutos ou filtros Hepa, que possuem alta eficincia (no mnimo, 99,97% na coleta de partculas de at 0,3 micros) e
devem ser substitudos periodicamente de acordo com sua saturao.
Os fluxos podem ser encontrados em dois modelos, chamados de
bancada limpa que no so de cmaras debiossegurana, pois ou liberam ar
filtrado (HEPA) para a superfcie de trabalho ou para o operador:
Fluxo vertical Protege, principalmente, o operador das substncias
que est manuseando.
Fluxo horizontal Protege, principalmente, o produto que est
sendo processado. Somente podero ser envasados ou manipulados

materiais que no tragam riscos de contaminao ao operador.
As cabines de segurana biolgica podem ser divididas em 3 classes,
sendo a classe II com vrias subdivises:
Classe I Fornece segurana pessoal e ambiental, mas no do produ-
to, funcionando como uma coifa provida de filtro HEPA para proteo
ambiental. Sua utilidade no laboratrio muito limitada, geralmente
usada para acondicionar equipamentos que podem gerar aerossis, como
centrfugas.
Classe II Pode ser subdividida em vrios tipos (A, B1,B2 e B3).
Fornece proteo pessoal ambiental e do produto. O ar captado pela

grelha frontal protegendo o operador e passando por filtros HEPA,
diminuindo a contaminao na superfcie de trabalho interna. Na do
tipo A, o ar filtrado recirculado ao laboratrio, sendo a mais comum
nos laboratrios brasileiros devido ao fator custo/benefcio. Dentre as
cmaras do tipo B e B1, a mais simples, funcionando como a do tipo
A, porm com exausto externa. Na do tipo B2, no h nenhuma
recirculao de ar dentro da cmara,o ar que entra filtrado, com
reteno biolgica e qumica e filtrado antes de ser eliminado para o
exterior. Na B3, a mais cara desta categoria, o cuidado para no haver
nenhum tipo de vazamento de resduo qumico ou biolgico maior,
protegendo mais o ambiente.
Classe III Fornece proteo mxima ao ambiente e ao operador. Foi
construda para atividades com nvel 4 de biossegurana, hermeticamente

fechada com visor fixo, e tem luvas de borracha resistentes e acopladas. Seu
acesso feito por caixa de porta dupla que poder ser descontaminada
aps a operao, alm de os filtros possurem um incinerador de ar.
Condies gerais:
Verificar a voltagem da tomada da capela (110 ou 220 volts).
Passar desinfetante no corrosivo antes e depois da operao se a categoria
do equipamento permitir.
Manejo:
a) Ligar a ventilao e a lmpada ultravioleta por dez a quinze minutos. Durante esse tempo, no se deve aproximar da capela.
b) Aps esse tempo, desligar a lmpada ultravioleta e ligar a luz fria.
c) Se houver mostrador,verificar se a presso da ventilao est
ideal.
d) Utilizar luvas durante a manipulao do material biolgico, tomando cuidado para no fazer movimento muito brusco para no contaminar o material.
e) Durante a manipulao do material, somente as mos do operador
podero estar no interior do equipamento.
f) Terminado o procedimento, desinfetar a bancada e desligar a luz
fria e a ventilao.
g) Se o equipamento apresentar algum problema no seu funcionamento, como falta de luz, por exemplo, os fusveis ou as lmpadas
devero ser trocadas antes de chamar a manuteno.
h) Uma vez por ano, deve-se agendar com o tcnico para que seja
feita a manuteno preventiva.
3.7. Forno/estufa
Esse equipamento muito utilizado em

laboratrios de sade, mas possui duas possibilidades de uso. A primeira se refere esterilizao de materiais e geralmente isso feito
na temperatura de 180o C, durante duas horas. Nesse caso, chamamos de forno para
secar e esterilizar materiais (forno Pasteur). A
segunda tem como finalidade o acondicionamento de meios de cultura proporcionando o crescimento de microrganismos em temperaturas controladas, geralmente utilizando 36 oC para bactrias e 25 oC para fungos.
Condies gerais:
Tanto o forno quanto a estufa devem ter cmara externa e interna confeccionadas em ao com isolamento interno e na porta. A porta poder ser do
mesmo material da carcaa ou de vidro especial, que permita a visualizao da
parte interna. Existem vrios modelos com capacidade que vai de vinte a mais
de trezentos litros e nmero variado de prateleiras. Precisam ser providos de
termostato de controle, indicador de temperatura (termmetro) e regulador de
temperatura.
Manejo:
a) O equipamento dever ser mantido na temperatura desejada (controle interno com termmetro de mximo e mnimo).
b) No se deve abrir toda hora a porta do forno/estufa e nem deixar a
porta aberta.
c) No se deve guardar nenhum tipo de alimento nem utilizar o equipamento para aquec-los.
d) Todo material guardado no forno/estufa dever ser etiquetado, inclusive com o nome do responsvel.
e) Dever ser observado o tempo de incubao dos lotes e dos diferentes microrganismos de acordo com suas necessidades, no momento da
retirada dos produtos armazenados.
f) Dever ser observado o tempo necessrio esterilizao/secagem no
caso da utilizao como forno.
g) A cada dois meses, deve-se proceder limpeza total.
A limpeza deve ser feita da seguinte maneira:
Desligue o aparelho no boto on/off e retire a tomada;
Abra as portas, deixando-as abertas durante todo o processo;
Passe um pano para secar;
Passe um pano com desinfetante hipoclorito de sdio (100 ppm).
4. Vidrarias de laboratrio
As vidrarias de laboratrio so categorizadas de acordo com o fim a que

se destinam. Sendo assim, cada laboratrio vai demandar caractersticas especficas e muitas vezes com alto grau de exigncia, de tal forma que no se
poder generalizar as especificaes, as lavagens e os tratamentos para todas as
vidrarias. Por exemplo, um laboratrio de qumica necessitar de vidrarias
volumtricas aferidas enquanto um laboratrio de bacteriologia ter como primeira exigncia vidrarias estreis. Se utilizarmos as vidrarias de um laboratrio
de qumica para atendermos as necessidades dos microbiologistas, isto ,
esterilizarmos tal material em forno ou autoclave, deixaremos os tcnicos de
qumica na mo, pois, na primeira esterilizao, toda vidraria perder a aferio
e as vidrarias volumtricas construdas para se ter preciso no podero mais ser
utilizadas para este fim com a dilatao do vidro submetido ao calor, terminase por descalibrar totalmente a referida vidraria.
As vidrarias volumtricas so construdas para conter precisamente um

dado volume lquido e, com exceo das pipetas, possuem forma de pera,
fundo chato e gargalo comprido. Podem ser providas ou no com tampa
esmerilhada e normalmente so feitas de vidro resistente e com qualidade
qumica que no altere o produto no seu interior. As vidrarias que tm como
objetivo medir volumes lquidos devem ser calibradas para conter ou, ento,
para livrar os volumes requeridos.
Existem, ainda, utenslios semelhantes aos descritos a seguir, manufaturados em outros materiais como polmeros especiais. Seu uso depende da necessidade do laboratrio e, em alguns casos, podem ser descartveis.
Balo de fundo chato
Utilizado como recipiente para conter lquidos ou solues, ou mesmo para fazer reaes com desprendimento de
gases. Pode ser aquecido em banho-maria quando no for necessria sua caracterstica volumtrica precisa.
Balo de fundo redondo
Dever ser utilizado acoplado a um suporte, uma vez que

esse tipo de vidraria no possui estabilidade para ser colocado na
bancada sem apoio. Normalmente, empregado em sistemas de
refluxo e evaporao a vcuo, conectado a um roto-evaporador.
Balo volumtrico
O balo volumtrico um recipiente em forma de pera,

de fundo plano e com um gargalo retilneo, comprido, estreito
e com tampa que possui volume definido. utilizado para o
preparo de solues em laboratrio.
Erlenmeyer
Este frasco ideal para armazenar, aquecer e

misturar produtos, podendo ser tambm utilizado em
preparo de meios de cultura. Os modelos graduados
so muito usados nos laboratrios de qumica para a
realizao de titulaes com auxlio da bureta.
Becker
um tipo de recipiente de uso geral em

laboratrio, normalmente utilizado para fazer
reaes entre solues, dissolver substncias
slidas, efetuar reaes de precipitao e aquecer lquidos. Geralmente graduado, pode ser
usado para efetuar medidas imprecisas (normalmente com preciso variante em 5% do marcado). H dois tipos de
becker: o de forma baixa e o de forma alta.
Tubo de ensaio
Tubos de vidro empregados para fazer reaes em pequena

escala, principalmente em Microbiologia e Hematologia. So utilizados com ou sem tampa, em vrias atividades (ex.: centrifugao, triagem, cultura, etc.). Podem ser aquecidos utilizando acessrios apropriados, diretamente sob a chama do bico de Bunsen, em movimentos
circulares.
Pipeta graduada
Vidraria constituda por um tubo de vidro graduado utilizado para medir e transferir
volumes. Permite medir volumes variveis, portanto, no pode ser aquecida.

No vidraria de escolha para realizar medies precisas em qumica, uma vez
que para tal existem as pipetas volumtricas.
Pipeta volumtrica
Vidraria constituda por um tubo

de vidro com um bulbo na parte central. O trao de referncia relativo ao
volume definido gravado na parte do tubo acima do bulbo. usada para
medir lquidos com elevada preciso. No deve ser aquecida.
Bureta
Aparelho utilizado em anlises volumtricas, que consiste em

um tubo longo com graduaes permanentes em linhas bem delineadas
a fim de facilitar a leitura. Acompanha torneira de vidro ou teflon que
permite o escoamento dos lquidos de forma uniforme. Geralmente,
usada em laboratrios de qumica para prticas de titulaes.
Proveta
Instrumento cilndrico graduado utilizado para medir e

transferir volumes variveis de lquidos em grandes quantidades,
se necessrio. Pode ser encontrada em diferentes volumes.
No pode ser aquecida.
Condensador
Utilizado na destilao, tem como finalidade

condensar vapores gerados pelo aquecimento de lquidos. Os mais comuns so os de Liebig e o de
serpentina.
Funil de separao
Utilizado na separao de lquidos no miscveis e na

extrao lquido/lquido.
Kitassato
Utilizado em conjunto com o funil de Buchner em

filtraes (sob suco) a vcuo. constitudo de um vidro
espesso e um orifcio lateral.
Dessecador
Recipiente fechado hermeticamente, contendo um

agente desumidificante, usado para guardar substncias em
atmosfera com baixo ndice de umidade.
Basto de vidro
O basto de vidro utilizado

para agitar substncias, facilitando a
homogeneizao. Auxilia tambm na transferncia de um lquido de um recipiente para outro.

Funil analtico
Usado na filtrao e para reteno de partculas

slidas, podendo ser colocado papel de filtro no seu
interior. No deve ser aquecido. Pode ser de vidro
borosilicato ou de vidro alcalino. Possui diferentes tamanhos que vo definir sua capacidade volumtrica (ex.:
15 ml, 30 ml, 60 ml, 125 ml, 500 ml, 1.000 ml).
Funil de Buchner
Instrumento de porcelana utilizado em filtraes a

vcuo. Pode ser usado com a funo de filtro em conjunto
com o kitassato.
Vidro de relgio
Pea de vidro de forma cncava usada

para separar pequenas quantidades de substncias, evaporar pequenas quantidades de solues, cobrir bqueres e outros recipientes,
alm de auxiliar na pesagem de substncias
no volteis e no higroscpicas. Por ser frgil ao calor direto, no pode ser
aquecido.
Gral e pistilo
O gral tambm chamado de almofariz. Usado

na triturao e pulverizao de slidos em pequena
escala. Pode ser de diferentes materiais (porcelana,
gata ou polietileno) e diversos tamanhos (100 ml,
180 ml, 305 ml, 610 ml e 1.160 ml).
Cadinho
Pea geralmente de porcelana, mas que tambm pode ser de ferro, chumbo ou platina, cuja
utilidade aquecer substncias a seco e com grande intensidade de calor, por isto pode ser levado
diretamente ao bico de Bunsen.
Cpsula de porcelana
Pea de porcelana que apresenta paredes

finas que no resistem ao atrito, usada para evaporar lquidos das solues e na secagem de substncias em estufas. Pode ser empregada, tambm, para
a fuso de materiais slidos e ceras, no devendo
ser utilizada na preparao de frmulas farmacuticas, pois podem liberar ons.
4.1. Outros equipamentos
Anel ou argola
Acessrio usado para fixar alguns tipos de

funil no suporte para a realizao da filtrao.
Esptulas e colheres
Instrumentos confeccionados em inox ou

polipropileno utilizados para transferir pequenos
volumes ou misturar solues, sendo encontrados
no mercado em diferentes tamanhos e formatos.
Estante para tubos de ensaio
Instrumento confeccionado em madeira ou

metal (ao inox, alumnio, etc.), usado como suporte para tubos de ensaio. Possui diferentes dimetros
e alturas para diferentes espessuras e comprimento
de tubos. Pode ser levada estufa e, em alguns
casos, cmara fria.
Garra de condensador
Acessrio de metal utilizado para prender o

condensador haste do suporte ou outras peas como bales, erlenmeyers, etc.
Pina de madeira
Acessrio cuja finalidade prender o tubo de ensaio

para que ele seja levado chama e possa ser manipulado, muitas
vezes, fazendo uma pequena agitao durante o aquecimento.
Pina metlica
Tambm chamada de tenaz, um acessrio usado para manipular objetos aquecidos, como cadinhos
e cpsulas, entre outros.
Pissete ou frasco lavador
Garrafinha plstica com bico acoplado usada para

lavagens de materiais atravs de jatos de gua, lcool ou
outros solventes. Tambm serve como recipiente para esses lquidos.
Suporte universal
Acessrio feito em ferro utilizado em operaes como

filtrao, suporte para condensador, bureta, sistemas de destilao, etc. Serve tambm para sustentar peas em geral.
Trip
Acessrio usado para ser colocado sobre a chama,

geralmente, do bico de Bunsen, com o objetivo de
efetuar aquecimentos de solues em vidrarias diversas
de laboratrio.
Garra dupla
Acessrio confeccionado em metal utilizado para fixar buretas ao suporte universal, principalmente nas prticas de titulao.
Referncias Bibliogrficas
BENNETT, J. W. & CHUNG, H. T. Alexander Fleming and discovery of penicillin.
Adv. Appl. Microbiol., 49: 163 184, 2001
BEST, M. & NEUHAUSER, N.. Ignaz Semmelweis and the birth of infection control.
Qual Saf. Health Care. 13(3): 233-234, 2004.
BRASIL. Ministrio da Sade. Coordenao de Controle de Infeco Hospitalar.
Processamento de Artigos e Superfcies em Estabelecimentos de Sade. Segunda Edio:
Braslia, 1994.
BRASIL. ANVISA, Resoluo 2606. Agencia Nacional de Vigilncia Sanitria. Ministrio da Sade, 11 de agosto de 2006.
BREWER, CM, Variations in Phenol Coefficient Determinations of Certain Disinfectants.
American Journal of Public Health, vol. 33, 261-264. March, 1943
DUBOS, R.. Pasteur and modern science. Anchor Books and Doubleday & Co. Inc,
Garden City: NY, 1960.
FREITAS, Marcelo Bessa de, BRILHANTE Ogenis Magno e ALMEIDA, Liz Maria
de. Importncia da anlise de gua para a sade pblica em duas regies do Estado do
Rio de Janeiro: enfoque para coliformes fecais, nitrato e alumnio. Cad. Sade Pblica
vol.17 no.3 Rio de Janeiro Maio/Junho, 2001.
MOROZOWSKI, E. Conteno primria de riscos biolgicos. Seleo instalao e uso
de gabinetes de segurana biolgica. HCL, Curitiba, 68p.1997.
MOROZOWSKI, E. Conteno primria de riscos biolgicos. Seleo instalao e usode
gabinetes de segurana biolgica.HCL, Curitiba, 68p, 1997.
TYNDALL, J.P.. On heat as a germicide when discontinuously applied. Proceedings of
the Royal Society of London, 25: 569, 1877.
| 125
Captulo 3
Microscopia de luz
Pedro Paulo de Abreu Manso
Marcelo Pelajo Machado
1. Introduo
Os conhecimentos que possumos hoje nas reas de Biologia Celular,

patologia e histologia se devem ao desenvolvimento de tcnicas que nos
possibilitaram ver um mundo fascinante. Com o avano tecnolgico, estas
ferramentas se desenvolveram a um ponto que o microscpio se tornou fundamental em laboratrios de pesquisa e de diagnstico.
Conhecer os fundamentos da Microscopia e a forma correta de utilizar
um microscpio essencial para qualquer profissional que trabalha nessas reas. Neste captulo, iremos discutir princpios bsicos e algumas modalidades
de microscopia de luz.
Os microscpios de luz, como o prprio nome sugere, so microscpios que utilizam luz do espectro visvel ou no para gerar uma imagem. Tambm
podem ser chamados de fotnicos, ou seja, que utilizam ftons, os quais so
partculas de luz. Muitos microscpios, como o confocal, detectam a luz sob
esta forma. Muitas vezes, estes microscpios so chamados de pticos, e de
fato o so, pois as imagens so geradas com base em princpios da ptica.
Contudo, os microscpios eletrnicos tambm utilizam princpios pticos para

gerar a imagem, embora no usem luz e sim eltrons. Ento, chamamos de
microscpio de luz aqueles que possuem uma fonte de luz para gerar a imagem
e eletrnicos aqueles que utilizam eltrons.
2.Luz
Para compreender os princpios da microscopia fotnica, preciso conhecer algumas caractersticas da luz. Dependendo da ocasio em que observarmos o comportamento da luz, podemos consider-la como uma partcula ou
como uma onda. Para a maior parte das explicaes aqui apresentadas, nos
deteremos ao conceito de que a luz uma onda.
A luz que enxergamos compreende uma pequena faixa do espectro de
ondas eletromagnticas, que chamamos de regio visvel. Esta regio varia do violeta
ao vermelho, o que numericamente pode ser expresso por cerca de 400 e 700
nanmetros (nm) de comprimento de onda. A luz branca que observamos normalmente formada pelo somatrio de todos os comprimentos de onda do espectro
visvel. Algumas lmpadas especiais utilizadas em microscopia, como as de vapor de
mercrio, emitem luz em espectros que ultrapassam essa regio.
A luz pode sofrer interferncias que so fundamentais para o processo
de formao da imagem, dentre as quais duas devem ser consideradas para o
estudo da microscopia: a difrao e a refrao. A difrao est diretamente
ligada ao processo de formao da imagem e a capacidade de resoluo de
uma lente; j a refrao nos permitir entender tanto por que utilizamos meios
de imerso para objetivas quanto o princpio da microscopia de contraste
diferencial de interferncia.
Para entender o que difrao, tomaremos o exemplo de um telhado
de zinco perfurado, muitas vezes citado em msicas e poemas, como o transcrito a seguir, de um trecho da msica Cho de Estrelas, de Silvio Caldas e
Orestes Barbosa.
Microscopia de luz | 127
A porta do barraco era sem trinco

Mas a lua furando nosso zinco
Salpicava de estrelas nosso cho
Tu pisavas nos astros distrada
Sem saber que a ventura desta vida
a cabrocha, o luar e o violo. (grifos nossos)
As estrelas que salpicavam o cho, to belamente citadas pelo poeta, na

verdade fisicamente eram a luz da lua difratada, ao passar por um orifcio
circular formado pelo furo no telhado de zinco. Se voc imaginar esta cena, vai
perceber que, ao passar pelos pequenos furos no telhado, a luz se espalha
formando um cone de iluminao que chega at o cho, onde ilumina, formando pontos circulares que o autor chamou de estrelas. Se observarmos este
fenmeno esquematicamente (Figura 1), veremos a luz chegando ao orifcio e
sendo difratada, o que gera um espalhamento dessa luz.
Figura 1 O fenmeno da difrao da luz
Esquema apresentando o fenmeno da difrao, atravs do exemplo da luz da lua penetrando em um

telhado de zinco. A luz que chega ao telhado sofre um espalhamento, formando um cone de iluminao
at o cho. No detalhe, as ondas luminosas que chegam ao orifcio circular (furo no telhado) sendo
difratada (esquerda). Detalhe de dois orifcios prximos, onde a luz difratada nestes orifcios sofre
interaes positivas e negativas, que formaro regies claras e escuras (direita).
Ao transportar este exemplo para a formao de imagem em um microscpio, vemos que cada amostra observada um telhado de zinco cheio de
pequenos furos, onde a luz passa e sofre difrao. Toda amostra possui
estruturas que esto separadas por uma distncia, que atuam da mesma forma
que furos no telhado. A luz difratada de pontos prximos sofrer interaes
positivas e negativas que iro gerar regies de alta luminosidade e de baixa
luminosidade, que nos permitiro formar uma imagem da amostra. Alm disso,
a capacidade que uma lente possui de distinguir dois pontos (resoluo)
dada por sua capacidade de captar raios difratados. Quanto mais raios difratados
uma lente captar, maior ser sua abertura numrica e consequente resoluo.
A refrao da luz um fenmeno que ocorre devido a diferenas na
velocidade em que a luz passa por determinados meios. Dependendo do
ndice de refrao de alguns objetos, a luz passa de forma mais rpida ou mais
lenta por este, o que pode gerar desvios que influenciam na percepo da
imagem. Um exemplo fcil para compreendermos a refrao a viso de um
peixe no fundo de um lago (Figura 2). Como o ndice de refrao da gua
diferente do ndice de refrao do ar, observamos o peixe acima da profundidade em que ele realmente est, pois a luz sofre um desvio ao mudar de um
meio para outro, no caso da gua para o ar.
Figura 2 Exemplo de refrao da luz
Um homem observa o peixe no lago acima do nvel onde este realmente est. Isso se deve ao desvio
que a luz sofre ao passar da gua para o ar, os quais possuem ndices de refrao diferentes. Arte
grfica: Newton Marinho da Costa Jr.
O caminho que a luz percorre nos microscpios faz com que um feixe
luminoso passe por diferentes meios. No caso, por exemplo, da observao
de preparados em lminas, a luz sofre refrao ao passar do vidro da lmina
para o ar e, em seguida, do ar para o vidro presente na objetiva. Essa mudana
de meios pode causar perda de raios luminosos que so refratados. A utilizao de um meio de imerso com um ndice de refrao semelhante ao do vidro
reduz quase completamente essa perda.
3. Microscpios
O primeiro microscpio surgiu por volta de 1595, com os trabalhos do

fabricante de culos holands Zacharias Janssen, que uniu duas lentes em um
mesmo eixo, possibilitando a observao de pequenas estruturas. Em 1665,
Robert Hooke construiu o primeiro microscpio que se baseava na utilizao
de uma lente ocular prxima ao olho e uma objetiva. Os trabalhos de Hooke
culminaram no livro Micrographia, o qual apresenta a descrio de diferentes
seres vivos sob Microscopia. Neste tratado, encontra-se a primeira observao
de cortes de cortias, onde foram visualizados poros chamados naquela ocasio de clulas. Desde ento, o microscpio vem sendo crescentemente
considerado uma poderosa ferramenta para as cincias naturais, sendo aprimorado ao longo dos anos.
Os microscpios de hoje so mais complexos que os da poca de
Janssen e Hooke, mas seguem a mesma lgica de utilizar lentes associadas
para gerar uma imagem ampliada. Na Figura 3, indicamos cada parte do
microscpio. Como todo instrumento de preciso, os microscpios possuem uma parte mecnica que os sustentam e permitem sua regulagem. Esta
parte composta de uma base e uma coluna, que suportam o microscpio;
um tubo que une as objetivas s oculares; o macromtrico e o micromtrico,
que fazem o ajuste de aproximao entre a objetiva e a amostra, possibilitando que a amostra seja focalizada; uma platina e um charriot, que permi-
tem a movimentao da amostra; e o revlver, que sustenta as objetivas e

permite a troca destas quando necessrio.
Alm dos elementos mecnicos, o microscpio possui ainda componentes pticos, que so: a fonte de iluminao, que normalmente em microscpios convencionais uma lmpada de halognio; o diafragma de campo; o
condensador, que concentra os raios luminosos na amostra; o diafragma do
condensador que possibilita a regulagem correta do contraste no microscpio;
e as lentes objetivas e oculares, que do o aumento e a resoluo da imagem.
A ampliao obtida em um microscpio dada pelo produto entre o aumento
da objetiva e o aumento da ocular. Portanto, se estivermos utilizando uma
objetiva de 40x e uma ocular de 10x, estaremos ampliando o objeto analisado
em 400x. Na parte ptica, os microscpios ainda possuem as lentes do tubo,
que ficam no interior do canho (ou tubo) e so responsveis por formar a
imagem ampliada da objetiva na regio de foco da ocular.
Figura 3 Principais elementos pticos e mecnicos de um microscpio de luz
Algumas amostras no podem ser observadas em microscpios retos

pois no cabem no espao entre a platina e a objetiva. Garrafas de cultura, por
exemplo, no podem ser observadas nestes microscpios, pois a amostra fica
muito longe da objetiva. Para este tipo de espcime, utilizamos microscpios
invertidos, cuja fonte de iluminao est localizada acima da platina e as objetivas esto posicionadas abaixo desta (Figura 4).
Figura 4 Microscpio invertido
Obs.: Note que as objetivas esto abaixo da platina e a fonte de iluminao

encontra-se na parte superior.
4. Aumento x resoluo
Durante a rotina em laboratrios de pesquisa e diagnstico, muito

frequente a necessidade de utilizar microscpios. Esses equipamentos nos
permitem observar muito alm de nossa capacidade visual. As medidas utilizadas em um microscpio ptico so da ordem de micrmetros ( mm), que
equivalem milsima parte de um milmetro. Para termos ideia do que isso,
podemos pegar uma rgua e tentar dividir o espao de um milmetro em mil
pedaos. Isso seria impossvel, pois no somos capazes, sem o auxlio de
ferramentas apropriadas, de enxergar ou fazer traos com espessura suficiente.
Veramos estes traos como um borro. Isso acontece pois nossos olhos no
so capazes de aumentar esta rgua a ponto de enxergarmos o espao entre as
linhas, alm de no possurem resoluo suficiente para distinguir este espao.
Os microscpios no s nos auxiliam aumentando as estruturas observadas, mas tambm a resoluo de nossa viso. A resoluo a capacidade de
distinguir dois pontos prximos. A resoluo mxima de nossos olhos em
torno de 200 mm, o que quer dizer que dois pontos separados por uma
distncia menor que esta so observados como um nico ponto, como no caso
das linhas da citada rgua. O microscpio nos permite aumentar esta resoluo
para cerca de 0,2 mm. Voltando ao exemplo, observaremos uma rgua
micromtrica de 2 mm dividida em duzentas partes. Se tirarmos uma foto desta
rgua e ampliarmos com zoom digital, o que observamos uma nica linha na
vertical. Isso ocorre porque, embora tenhamos ampliado a imagem, no modificamos a resoluo. Se, em uma outra ocasio, utilizando agora uma lente com
maior resoluo, observarmos a mesma rgua, seremos capazes de distinguir os
traos que a dividem (Figura 5).
Figura 5 Rgua de 2 mm dividida em duzentas partes
(A) Foto com mquina fotogrfica convencional.

(B)
Zoom digital da imagem A. Houve um aumento sem ganho de resoluo.
(C) Imagem adquirida com uma lente objetiva de aumento 2,5x com resoluo superior da
mquina fotogrfica. possvel ver os traos maiores.
(D) Fotomicrografia com uma lente objetiva de 10x e resoluo superior s anteriores. Podemos
observar os traos que compem a rgua.
5. Objetivas
muito comum olharmos para as lentes que ficam afixadas no revlver do

microscpio apenas para averiguar qual o aumento com o qual estamos analisando nossa amostra. No entanto, essas lentes, que por serem o elemento ptico mais
prximo da amostra so chamadas de objetivas, representam muito mais do que
isso. Na verdade, elas so provavelmente o componente mais importante do sistema ptico de um microscpio, sendo determinantes na resoluo da imagem, no
contraste com o qual os detalhes so visualizados, na profundidade do espcime do
qual obtida informao e tambm no dimetro do campo de anlise. Nesse
sentido, os demais elementos pticos do microscpio so importantes e podem at
atuar corrigindo ou modificando o padro da luz, mas, de fato, servem mesmo para
ampliar e manter a qualidade da imagem gerada pelas objetivas.
Entende-se por lente um dispositivo habitualmente feito de vidro, capaz de
produzir convergncia ou divergncia de raios luminosos que por ele passem. As
objetivas modernas, na verdade, so compostas por vrios desses elementos,
chegando a conter at 15 ou 16 lentes na sua construo interna.
Existem objetivas de diversas especificaes e, portanto, destinadas a aplicaes mais gerais ou mais especficas. Essas caractersticas, detalhadas a seguir e
apresentadas na Figura 6, esto anotadas no corpo da lente:
Figura 6 Exemplo de objetiva com indicao dos campos nela gravados
5.1. Fabricante
Nome da empresa responsvel pela montagem da objetiva.

5.2. Denominao (classe de objetiva e correo cromtica)
A geometria ptica possui limitaes que precisam ser levadas em conta

em Microscopia. Nesse sentido, alguns efeitos indesejados podem ocorrer
com a luz quando esta atravessa uma lente, aos quais denominamos aberraes. Por exemplo, duas aberraes ocorrem no mesmo eixo da objetiva: a
aberrao esfrica, na qual os raios que passam pelo eixo da lente e os que
passam pela periferia possuem pontos de foco diferentes; e a aberrao
cromtica, na qual o mesmo ocorre em relao aos diferentes comprimentos
de onda.
O termo grafado neste campo se refere classe e ao tipo de correo
que a objetiva possui. Pode variar um pouco de acordo com o fabricante, mas,
de forma geral, encontramos as seguintes especificaes:
a) Plan: as lentes planas apresentam correo esfrica, ou seja, todo o
campo est em foco. Achroplan so mais recomendadas para uso em luz
transmitida e Epiplan o so para luz refletida.
b) Achromat: lentes acromticas que possuem correo cromtica para
duas cores. comum que as correes estejam combinadas. Assim, por
exemplo, lentes planacromticas (Planachromat) corrigem tanto o foco
das duas cores quanto a homogeneidade de foco do campo de anlise.
c) Apochromat: lentes acromticas que possuem correo cromtica
para quatro cores. Da mesma forma que o item anterior, podem ter
tambm correo esfrica, passando a se chamar planapocromticas
(Planapochromat).
d) Fluar: lentes que possuem elementos de fluorita (fluoreto de clcio).
No possuem o campo plano, mas so excelentes para microscopia de
fluorescncia. Existem lentes desse tipo com correo esfrica ( PlanFluar

ou PlanNeofluar), mas que tm menor taxa de transmisso de luz em
fluorescncia, embora sejam excelentes para microscopia de polarizao
e de contraste de interferncia. Todas as lentes Fluar possuem correo
cromtica para trs ou quatro cores.
A classe se refere ao tipo de aplicao para a qual aquela objetiva foi
desenhada. Assim, utilizando como exemplo as lentes da fabricante Carl Zeiss,
podem constar, entre outros, os seguintes termos:
a) LD (long working distance): para trabalho com grande distncia do
espcime, como em culturas de clulas sob anlise em microscpios
invertidos.
b) EC (enhanced contrast): ideais para fluorescncia.
c) LCI (life cell imaging): desenhadas para trabalho com clulas vivas.
d) C (C-Apochromat): para microscopia confocal.
e) W ou WN: desenhadas para aplicaes em eletrofisiologia.
5.3. Magnificao/abertura numrica
O primeiro valor, antes da barra, indica a magnificao, ou seja,

quantas vezes aquela objetiva capaz de ampliar a imagem da amostra.
Aps a barra, consta a abertura numrica (NA), a qual pode ser expressa
pela seguinte frmula:
NA = n (sen ), onde:
a) n o ndice de refrao do meio entre a objetiva e a lamnula/
amostra;
b) metade do ngulo de abertura da objetiva.
Assim, importante reparar que, quanto maior a abertura numrica de
uma objetiva, mais curta ser a sua distncia de trabalho. Na prtica, lentes
com NA maior que 0,95 tendem a necessitar de um meio de imerso para

boa captao da luz.
fundamental observar tambm que a NA que indica a verdadeira
capacidade de resoluo (d) daquela lente, uma vez que esta ltima diretamente proporcional ao comprimento de onda (l) e inversamente proporcional
ao dobro da abertura numrica (NA), como expresso na equao:
d = l / 2NA
A partir dessa frmula, podemos observar que, sob um mesmo comprimento de onda (543 nm, por exemplo), uma objetiva 100x/0,75 tem uma
resoluo (d = 362 nm) inferior de uma 63x/1,40 (d = 194 nm).
5.4. Mtodo de contraste
Se a lente contiver um anel de fase no seu interior (destinado microscopia

de contraste de fase), ela indicar Ph, seguida de um nmero, o qual varia de
acordo com o fabricante. Para esse tipo de microscopia, importante que se
observe que este nmero deve ser o mesmo em relao ao indicado no anel
que ser colocado no condensador. A presena desse anel no interior dessas
lentes reduz a quantidade de luz por elas transmitida, de maneira que no so
habitualmente indicadas para microscopia de fluorescncia.
Da mesma forma, as inscries Pol e DIC se referem
adequabilidade da lente microscopia de polarizao e de contraste de
interferncia, respectivamente.
5.5. Meio de imerso
As lentes que exigem a utilizao de meio de imerso e, portanto, no

devem trabalhar com ar entre elas e o espcime sob anlise trazem escrita uma
das opes a seguir:
a) Oil : leo de imerso para microscopia. Este habitualmente

tem ndice de refrao (n) prximo a 1,51. Alguns fabricantes
produzem leos especiais, com este mesmo n, mas especialmente
desenvolvidos para uso em microscopia de fluorescncia.
b) W : gua. Deve-se empregar gua destilada. O uso de leo
de imerso nessas lentes pode danific-las.
c) Korr: Essas lentes possuem um anel que as ajusta para o uso
com leo para microscopia, gua ou glicerina (Gly).
Cabe mencionar que, de maneira geral, o mais adequado usar um
meio de imerso que tenha um n semelhante ao meio de montagem da amostra
que est sendo analisada. Nesse sentido, se precisarmos usar uma lente que
exija imerso, habitualmente escolhemos, por exemplo, uma que trabalhe com
leo para amostras montadas em blsamo do Canad e uma que trabalhe com
gua para clulas em cultura. A no observncia dessa regra pode ocasionar
uma grande queda na intensidade da luz captada e no contraste, por conseguinte gerando uma imagem de qualidade inferior desejada.
5.6. Comprimento do tubo
Indica se aquela objetiva foi desenhada para trabalho em distncia fixa

(habitualmente 160 mm) ou se corrigida para ptica infinita ( ou ICS).
Essa distncia chamada de comprimento mecnico do tubo e vai da base da
objetiva at a insero das oculares.
5.7. Espessura mxima da lamnula
Habitualmente, indica algo como 0,17 ou 0,19 0,15, que

corresponde espessura de lamnulas padro. A presena de um sinal de
negativo (-) aponta que esse ndice no interfere na qualidade da imagem da
objetiva. Por sua vez, o nmero zero (0) indica que essa lente deve ser
usada em preparaes sem lamnula. Assim como ocorre em algumas lentes de

imerso, algumas objetivas possuem um anel de regulagem para a espessura da
lamnula.
Cabe mencionar que, por vezes, a espessura do material presente entre
o espcime e a objetiva pode ser bem maior que os valores mencionados,
como o caso de placas ou garrafas usadas em culturas de clulas. Nesses
casos, habitualmente empregamos microscpios invertidos dotados de lentes
LD, que permitem o trabalho com distncias de mais de um milmetro.
Ainda sobre todas essas informaes contidas nas objetivas, cabe comentar que alguns fabricantes usam cores diferentes nas letras ou anis coloridos para indicar, por exemplo, o mtodo de contraste que aquela lente
possui, sua magnificao e o meio de imerso necessrio.
6. Como utilizar um microscpio
O microscpio um equipamento caro e frgil. Deve, portanto, ser

manipulado com muito cuidado. Para observar uma lmina ao microscpio,
preciso:
a) Ligar o microscpio na tomada, observando a voltagem correta, a fim
de evitar danos aos componentes eletrnicos do equipamento.
b) Aumentar a intensidade da luz aos poucos.
c) Colocar a lmina na platina e focaliz-la com a menor objetiva.
d) Regular o microscpio pelo ajuste de Khler (ver a seguir).
e) Trocar a objetiva sempre focalizando, at chegar ao aumento de
interesse.
f) Ao final da observao, a luz deve ser diminuda e em seguida
desligada.
g) Com o auxlio do macromtrico, a platina deve ser afastada totalmente da objetiva.
h) A lmina deve ser retirada.

i) A menor objetiva deve ser selecionada.
j) Retirar da tomada a fonte de alimentao.
l) Cobrir o microscpio com uma capa de pano, para proteg-lo de
poeira.
Se objetivas de imerso forem utilizadas, deve-se retirar o leo da
objetiva com o auxlio de um papel absorvente, passando-o delicadamente
para no arranhar a lente.
A limpeza das lentes objetivas e oculares do microscpio deve ser feita
com uma soluo de lcool-ter (9:1). O uso de xilol e outros solventes
orgnicos deve ser evitado, pois pode causar descolamento das lentes.
7. Iluminao de Khler
Desenvolvida por August Khler em 1893, a iluminao de Khler

o ajuste dos planos focais do microscpio, promovendo a coincidncia
dos focos do diafragma de campo, do objeto, da imagem formada no tubo
do microscpio e a imagem formada para o observador. O ajuste da
iluminao permite que a luz seja aproveitada integralmente e que a imagem
possua o melhor contraste possvel.
Para realizar a iluminao de Khler, preciso inicialmente focalizar
uma lmina (Figura 7A). Em seguida, fecha-se o diafragma de campo que
formar um crculo ou um hexgono luminoso (Figura 7B). Com os parafusos do condensador, deve-se centralizar esta figura geomtrica no campo
visual (Figuras 7C e 7D). As bordas deste hexgono devem ficar ntidas,
com o auxlio do ajuste de foco do condensador (Figura 7D). Em seguida,
abre-se o diafragma de campo at que a regio iluminada ocupe o campo
visual, sem que ultrapasse estes limites (Figura 7E).
Para finalizar o ajuste do microscpio, retira-se com cuidado a ocular

para correta observao do diafragma do condensador. Este deve ocupar
aberto cerca de 80% do campo, dando assim o contraste ideal para a amostra
(Figura 7F).
Figuras 7A a 7F - Etapas para obteno da iluminao de Khler
8. Tipos de Microscopia de luz

8.1. Microscopia de campo claro
o tipo de Microscopia bsica, em que no h interferncias no caminho ptico. Todo microscpio de luz possui esta forma de Microscopia. Na
microscopia de campo claro, a luz parte da fonte luminosa, concentrada pelo
condensador, interage com a amostra e coletada pela objetiva. A imagem
ampliada pela objetiva formada na lente do tubo e mais uma vez ampliada
pelas oculares, at chegar ao observador (Figura 8). Como o prprio nome
sugere, na microscopia de campo claro o fundo da imagem branco.
Para que a imagem seja observada neste tipo de Microscopia, necessrio que a amostra possua cor prpria ou que esta lhe tenha sido conferida
artificialmente. A cor permite um maior contraste entre as estruturas que possibilita sua correta observao.
Figura 8 Microscopia de campo claro
esquerda, caminho da luz em um microscpio de campo

claro reto, mostrando a luz saindo do diafragma de campo,
passando pelo condensador, onde concentrada na amostra,
e sendo captada pela objetiva. Acima, fotomicrografia de
clulas sanguneas de anfbio, coradas por Giemsa e
observadas sob microscopia de campo claro.
8.2. Contraste de fase
Algumas amostras so observadas ao microscpio sem colorao, como,

por exemplo, clulas em cultura. Para observao de amostras muito finas que
no podem ser coradas, deve-se utilizar tcnicas microscpicas de alto contraste. A Microscopia de contraste de fase se baseia no atraso que raios difratados
apresentam em relao a raios no difratados. Ao passar pela amostra, os raios
difratados adquirem uma diferena de velocidade de de comprimento de
onda em relao aos no difratados. Essa diferena pode ser eliminada se os
raios que no foram difratados forem acelerados ou retardados. Para tal, utilizase um anel de fase no condensador e na objetiva, que une os raios difratados
e os no difratados, aumentando assim as interaes positivas e negativas entre
estes raios e, consequentemente, o contraste da imagem (Figura 9).
Figura 9 Microscopia de contraste de fase
Imagem de campo claro de clulas em cultura no coradas (esquerda). Imagem em contraste de fase do
mesmo campo (direita).
Para que uma amostra seja observada neste tipo de Microscopia,

preciso que haja um anel de fase no condensador e objetivas especficas,
identificadas com as letras Ph (Figura 10). Inicialmente, deve-se regular o
microscpio, selecionar no condensador o anel de fase e a objetiva de fase.
Para ajustar a fase, devemos retirar uma das oculares com cuidado e alinhar o
anel de fase da objetiva ao anel de fase do condensador, alinhando a regio
sombreada de um com a do outro. Em seguida, colocamos a ocular em seu
local para a anlise do espcime.
Figura 10 Objetiva e condensador para microscopia de contraste de fase
8.3. Polarizao
A microscopia de polarizao permite que substncias com capacidade

de desviar a direo da luz, chamadas de anisiotrpicas, sejam observadas
seletivamente. Estas substncias podem estar depositadas normalmente nos
tecidos ou serem ligadas a determinadas estruturas por mtodos tintoriais. Este
tipo de microscopia muito utilizado para observao de sais, rochas, cristais,
cabelo, ossos, entre outras amostras que possuam em seu interior substncias
anisiotrpicas.
O microscpio de polarizao possui um funcionamento semelhante ao
de campo claro. So adicionados apenas um cristal polarizador, que ir selecionar apenas um plano da luz incidente, e um cristal analisador, que ir bloquear
a passagem da luz incidente que no sofreu desvios e selecionar apenas a luz
que foi desviada por uma substncia anisiotrpica. Para realizao desta
microscopia, basta selecionar o polarizador e o analisador e variar sua angulao,
at que a imagem seja formada com um fundo preto (Figura 11).
Figura 11 Microscopia de polarizao
Fotomicrografia de material corado por Picrosrius sob observao microscopia de polarizao. Esta
colorao especial prpria para identificar fibras colagnicas.
8.4. Contraste diferencial de interferncia de Nomarski (DIC)
A Microscopia de contraste diferencial de interferncia (DIC) permite

que amostras no coradas sejam observadas com alto contraste e sensao de
profundidade. Espcimes ligeiramente mais grossos que no podem ser observados em contraste de fase podem ser observados em DIC.
Em uma amostra, diferenas de composio e espessura entre regies
geram ndices de refrao ligeiramente diferentes. Essa diferena faz com que a
luz atravesse o espcime com velocidades distintas. Na dcada de 1950, o
fsico francs Georges Nomarski utilizou este princpio para criar um tipo de
microscopia de alto contraste. O contraste de Nomarski consiste na utilizao
de um analisador, semelhante ao da microscopia de polarizao, que seleciona
a luz em uma nica direo. Em seguida, a luz dividida em dois feixes
ligeiramente afastados por um prisma (prisma de Wollaston). Essa separao
faz com que uma regio da amostra seja iluminada por um feixe e outra
adjacente seja iluminada por outro. Depois de interagir com a amostra, esses
feixes so reunidos por um segundo prisma e, em seguida, passam por um
analisador que seleciona os feixes que sofreram mudana de angulao (Figura
12). A combinao destes feixes de luz, que interagiram com diferentes
regies da clula, criar interaes positivas e negativas que iro gerar uma
imagem de alto contraste (Figura 13).
Figura 12 Elementos pticos da microscopia de DIC
(A) Primeiro prisma de Wollaston situado antes do condensador.

(B) Prisma de Wollaston da objetiva.
(C) Segundo prisma de Wollaston encaixado sob a objetiva.
Figura 13 Microscopia de DIC
Clula em cultura observada em DIC, evidenciando a sensao de relevo dada por este tipo de
microscopia.
8.5. Microscopia de fluorescncia
Algumas substncias apresentam propriedade fluorescente, ou seja, quando

excitadas, com uma determinada fonte de energia, emitem luz. Esse fenmeno
foi descrito pela primeira vez pelo cientista ingls George G. Stokes, ao
trabalhar com um mineral que apresentava essas propriedades.
A fluorescncia ocorre quando eltrons de uma molcula so excitados
e mudam de camada eletrnica, passando a ocupar uma camada mais energtica.
Estes eltrons voltam a seu estado original emitindo luz. A luz emitida apresenta energia menor que a recebida durante a excitao. Isso se deve a uma ligeira
perda de energia sob a forma de calor. preciso lembrar que o comprimento
de uma onda eletromagntica inversamente proporcional sua energia, ou
seja, quanto menor a energia, maior o comprimento de onda. Portanto, a luz
emitida de uma molcula fluorescente possui um comprimento de onda maior
que a fonte de energia que a excitou. Esse fenmeno pode ser representado
de forma esquemtica pelo diagrama de Jablonski (Figura 14).
Figura 14 Diagrama de Jablonski
Um eltron em seu estado normal de energia excitado e elevado a um estado S1 em uma camada
mais energtica. Este eltron retorna camada original, perdendo parte da energia sob a forma de calor
e parte emitindo luz, em um comprimento de onda maior. Arte grfica: Newton Marinho da Costa Jr.
O primeiro microscpio que utilizava o princpio da fluorescncia foi

construdo por August Khler no incio do sculo XX. Contudo, sua aplicao era limitada. Somente com o desenvolvimento de anticorpos ligados a
fluorforos (molcula fluorescente), cerca de cinquenta anos depois, foi possvel sua utilizao em grande escala nos laboratrios. Os microscpios de
fluorescncia utilizam a luz como fonte de excitao. As substncias fluorescentes, ao serem iluminadas por esta fonte, emitem luz em um comprimento de
onda maior, ou seja, de menor energia. As molculas fluorescentes utilizadas
como sondas para microscopia, em geral, apresentam um espectro de excitao
e de emisso conhecidos. Como a luz emitida possui comprimento de onda
diferente do de excitao, possvel separ-las por filtros que limitam a passagem de luz em faixas determinadas. Dessa forma, possvel garantir que a
imagem observada gerada apenas onde h molculas fluorescentes (Figura
15). Se, por exemplo, esta molcula estiver ligada a anticorpos, podemos
ento dizer que a imagem gerada representa os locais onde aquele anticorpo
se ligou.
Quando observamos uma amostra em um microscpio de fluorescncia,

estamos observando a luz emitida pela amostra. Neste caso, a luz proveniente
da fonte luminosa no passa pela amostra, sofrendo interferncias que iro
gerar a imagem, como na microscopia de campo claro. A luz uma fonte de
energia que ir apenas excitar a molcula fluorescente. A imagem formada
pela luz emitida pela prpria amostra.
Os microscpios de fluorescncia atuais geralmente utilizam como fonte
luminosa lmpadas de vapor de mercrio ou xennio, capazes de emitir luz
branca de alto brilho. Uma faixa desta luz selecionada por um filtro de
excitao, no comprimento de onda ideal de excitao da molcula fluorescente. Os fluorforos presentes na amostra so excitados e emitem luz em um
comprimento de onda maior que o da excitao, que pode ser selecionado
por um filtro de emisso e detectado pelo observador ou por uma cmera
fotogrfica.
Figura 15 Clula VERO em cultura, marcada com faloidina-FITC
Essa droga capaz de interagir com filamentos de actina, os quais ento podem ser
visualizados microscopia de fluorescncia.
Os principais tipos de filtro utilizados em microscpios de fluorescncia

so:
Filtros de passagem curta (Short-pass filters): so frequentemente
utilizados como filtros de excitao, transmitem luz em uma faixa ligeiramente acima de um valor determinado em comprimentos de onda e
refletem ou absorvem outros comprimentos de onda.
Filtros de passagem longa (Long-pass filters): transmitem uma grande
faixa de luz acima do valor determinado em comprimento de onda e
reflete ou absorve valores abaixo.
Filtros de faixa (Bandpass filters): transmitem uma regio compreendida entre duas faixas de comprimento de onda, refletindo ou absorvendo
as demais.
O caminho ptico dos microscpios de fluorescncia (Figura 16)
diferente dos demais anteriormente apresentados neste captulo. A fonte de
luz passa pela objetiva antes de chegar amostra. Portanto, a luz que chega ao
espcime e a que emitida passa pelo mesmo caminho ptico. Para separ-las,
alm dos filtros de emisso e excitao, utilizamos um espelho dicrico, que
reflete um determinado comprimento de onda e transmite ou seja, deixa
passar outros comprimentos de onda. Os filtros e espelhos utilizados ficam
unidos em um cubo localizado acima da objetiva.
Figura 16 Caminho ptico de um microscpio de fluorescncia
A luz parte de uma lmpada policromtica, passa por uma lente condensadora que concentra os raios e,
em seguida, por um filtro de excitao que seleciona o comprimento de onda especfico para o fluorforo
observado (feixe azul). Dentro do cubo de fluorescncia se encontram o filtro de excitao, um espelho
dicrico e o filtro de emisso. A luz refletida pelo espelho dicrico passa pela objetiva, sendo concentrada
na regio iluminada da amostra. O espcime marcado com um fluorforo emite luz (feixe verde), que
transmitida pelo espelho dicrico e selecionada pelo filtro de emisso. A imagem final formada pela
ocular e pode ser observada diretamente. Arte grfica: Newton Marinho da Costa Jr.
8.6. Microscopia confocal
A Microscopia confocal se baseia no princpio da confocalidade, descrito pela primeira vez por Marvin Minski, em 1955, no qual dois anteparos
fsicos com um orifcio do tamanho da cabea de um alfinete (pinholes) so
colocados junto fonte de iluminao e ao detector. Estes orifcios esto no
mesmo plano focal que a amostra, ou seja, esto em foco. Os anteparos
funcionam como uma barreira fsica que impede a passagem dos raios luminosos das regies que no esto em foco, possibilitando que a imagem formada
seja apenas a do plano focal.
Para que uma amostra seja observada em microscpios fotnicos convencionais, preciso que esta seja fisicamente cortada em fatias muito finas.
Inicialmente, isso se deve ao fato de que a luz precisa atravessar a amostra.
Alm disso, os planos iluminados iro gerar imagens em foco e fora de foco.
Cortes espessos possuem muitos planos fora de foco, os quais iro criar uma
imagem borrada que dificultar a observao da imagem em foco. No caso da
microscopia confocal, como os planos fora de foco so eliminados pela ao
do pinhole, cortes relativamente espessos podem ser facilmente analisados,
pois somente o plano em foco ser observado. Isso permite que espcimes
inteiros sejam observados sem a necessidade de cortar fisicamente a amostra.
Se movimentarmos o micromtrico, aproximando e afastando a amostra da
objetiva, iremos variar o plano que estar em foco (Figura 17). Com o auxlio
de um computador, podemos unir as imagens de diferentes planos focais e
formar assim uma montagem tridimensional desta amostra.
Figura 17 Imagem de filamentos de actina em cultura de clulas observadas
sob microscopia confocal
Cada imagem representa um plano ptico de 0,6 micrmetros de espessura.
A maioria dos microscpios confocais utilizam lasers como fonte de

iluminao. Estes geram um tipo de luz monocromtica de alta coerncia e
intensidade, que compensa a perda de luz causada pela utilizao do
pinhole. Por se tratar de uma luz puntiforme, a iluminao por laser no
capaz de formar uma imagem completa do campo sob observao. Por
conta disso, a imagem final montada por um programa de computador a
partir de aquisio ponto a ponto. Por esse motivo, no possvel que o
pesquisador observe a imagem confocal diretamente nas oculares do microscpio.
A luz emitida pela amostra captada por detectores especiais chamados fotomultiplicadores. Estes captam ftons e geram sinais eltricos de
intensidade proporcional quantidade de sinal captado. Existem dois tipos
de fotomultiplicadores: 1) monocromticos, que detectam qualquer fton,
sendo necessria a seleo do comprimento de onda especfico a ser observado, que feito pela utilizao de filtros; 2) policromticos, que
possuem regies com afinidade especfica por um determinado comprimento de onda.
O caminho ptico de um microscpio confocal pode ser
esquematizado no desenho a seguir (Figura 18). O feixe luminoso parte
do laser e interage com um ponto da amostra que emite fluorescncia. A
fluorescncia emitida pelo plano que est em foco captada pelo detector
enquanto os planos que no esto em foco so eliminados.
Figura 18 Esquema mostrando o caminho ptico em um microscpio confocal
Notar que somente o plano da amostra que est em foco observado enquanto os demais so
eliminados pelo pinhole. Arte grfica: Newton Marinho da Costa Jr.
9. Consideraes finais
Neste captulo, tivemos como objetivo central delinear alguns princpios

de microscopia, enfatizando seus componentes essenciais e apresentando resumidamente os tipos de microscopia de luz mais empregados, cujo conhecimento mandatrio aos profissionais tcnicos que atuam em laboratrio.
importante enfatizar que a microscopia de luz um conjunto de
tcnicas de complexidade bem maior do que a aqui apresentada. Alm disso,
esta profundamente dinmica, no sentido que o contnuo desenvolvimento
de novas tecnologias, sejam pticas ou mecnicas, tem impacto direto na sua
evoluo e, portanto, na sua aplicao.
Dessa maneira, a todo o momento, surgem novos componentes para

microscpios de luz (ex.: iluminao por LEDs, novas objetivas,
fotomultiplicadores de nova gerao, entre outros), assim como so desenvolvidas novas modalidades de microscopia (ex.: TIRF, iluminao estruturada,
spinning disk, entre outras). Cabe ao profissional que utiliza essa ferramenta
estar sempre atualizado para que possa sempre obter o mximo de informao
possvel de suas amostras.
Bibliografia consultada
BENCHIMOL, M. Mtodos de estudo da clula. FENORTE/UENF, 1996.
BCHERL, W. Introduo s tcnicas microscpicas. 4 ed. Editora Polgono, So Paulo. 1972.
DAVIDSON, M.W. and Abramowitz, M., Optical Microscopy, Encyclopedia of
Imaging Science and Technology, Hornak, J. (ed.), 2, 1106-1141, 2002.
KAPITZA, HG. Microscopy from the very beginning. Carl Zeiss, Oberkochen.1994
PAWLEY, JB. Handbook of biological confocal microscopy. 2 ed. Plenum press, New
York. 1995.
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Captulo 4
Animais de laboratrio
Joel Majerowicz
Sebastio Enes R. Couto
Cleide Cristina Apolinrio Borges
Wildeberg Cal Moreira
Simone Ramos
1. Consideraes gerais
A pesquisa cientfica, o ensino e as atividades relacionadas ao desenvolvimento tecnolgico e produo e ao controle da qualidade de vacinas e
medicamentos utilizam-se de animais de laboratrio. Seu uso com objetivos
cientficos ainda absolutamente necessrio para alcanar avanos na compreenso da biologia descobrindo-se novos medicamentos para o tratamento ou a
profilaxia de enfermidades e permitindo pesquisas bsicas, desenvolvimento
tecnolgico, ensino, produo e testes de imunobiolgicos. Uma vez que
ainda no h sistemas alternativos disponveis que permitam a substituio completa dos animais, necessrio o estabelecimento de uma cultura de cuidados,
conscincia e responsabilidade dirigidos melhoria e confiabilidade das descobertas cientficas e ao bem-estar animal.
Os biotrios1 so planejados de forma a atender s diretrizes de

Biossegurana2 e garantir as condies adequadas de trabalho com animais,
suas secrees e seus tecidos, alm de considerar a transmisso de zoonoses 3 e
os riscos inerentes aos agentes potencialmente perigosos.
A utilizao de animais de laboratrio permite vrias abordagens experimentais que no so possveis, ou mesmo permitidas por lei, em seres humanos. Alm disso, possvel mant-los em condies controladas (em biotrios)
que permitam estudar uma doena, seu agente patognico, os sinais clnicos e
sua prpria evoluo. H tambm algumas linhagens de animais que so geneticamente padronizadas e auxiliam a compreenso de fatores ambientais e genticos que incidem na evoluo de determinada enfermidade, sendo assim,
possvel estud-las em raas e/ou linhagens criadas para esse fim.
Animais de laboratrio ou modelos biolgicos so aqueles
utilizados com o intuito de alcanar analogia dos resultados
experimentais que seriam transferidos para os homens e
outros animais. Por exemplo, em estudos pr-clnicos, uma
das etapas mais importantes para a pesquisa na rea da
sade. Estes animais so selecionados, criados em biotrios
com adequaes quanto segurana biolgica, tem seu
comportamento, origem e linhagem conhecidos, recebem
cuidados especiais para a manuteno de seus ambientes
(alojamentos, temperatura e umidade controlados) e
ofertada nutrio adequada visando ao seu bem-estar.
Biotrios: casa da vida. Termo genrico que designa o local onde criado ou mantido qualquer animal
de laboratrio ou modelo experimental.
2
Conjunto de aes voltadas para a preveno, minimizao ou eliminao de riscos inerentes s
atividades de pesquisa, produo, ensino, desenvolvimento tecnolgico e prestao de servios, visando sade do homem e dos animais, a preservao do meio ambiente e a qualidade dos resultados
(TEIXEIRA & VALLE, 1996).
3
Zoonoses so doenas transmitidas entre animais e o homem.
Animais de laboratrio | 157
tica e bem-estar: princpios
O controle da experimentao animal regido por legislaes restritivas

internacionais que impulsionam a maior conscientizao dos cientistas envolvidos na manipulao e adoo de boas prticas. consenso que, alm da
atualizao da formao tcnica, imperioso exigir conscientizao tica e
imputao de responsabilidade legal na manipulao animal. Organizaes de
fomento para pesquisas, protocolos internacionais de produo de vacinas e
medicamentos, bem como para a publicao de resultados em perodicos
cientficos, exigem que todos os trabalhos que se utilizem de animais sejam
avaliados, monitorados e licenciados por Comisses de tica no Uso de
Animais (CEUAs)4 visando ao seu bem-estar.
A Associao Mundial de Veterinria (WVA), por exemplo, sugere
requisitos de bem-estar animal que devero ser seguidos:
Ausncia de fome e sede (gua e comida adequadas espcie).
No podem permanecer desconfortveis. O ambiente animal deve
possuir abrigo e local para descanso.

Preveno e diagnstico de enfermidades, bem como providenciar os
melhores meios para evitar dor, traumatismos e injrias.

Os animais devem possuir liberdade para manifestarem comportamen-
tos normais e estar em companhia de outros de sua espcie.

Assegurar as melhores condies para que no ocorra estresse, medo
e situaes aflitivas.
Ressalta-se que os beneficirios de vrios experimentos,
vacinas e medicamentos so os prprios animais, no campo
da medicina veterinria.
Comisses de tica so rgos colegiados institudos obrigatoriamente em instituies que se utilizam de
animais para fins cientficos.
4
Em 1959, foi sustentada pelos cientistas W. M. S.

Russel e R. L. Burch a ideia dos trs Rs (reduo,
refinamento e substituio - o terceiro erre replacement,
do ingls) sendo considerados como princpios bsicos
no mundo cientfico contemporneo para verificar os
objetivos, as necessidades e a importncia da utilizao
de animais pelos cientistas.
fundamental ter-se a conscincia de que o animal, como ser vivo,
possui hbitos de vida prprios da sua espcie, apresenta memria, preserva
o instinto de sobrevivncia e sensvel angustia e dor, razes que
preconizam posturas ticas tanto na criao como no desenvolvimento dos
estudos experimentais.
2. Conceitos bsicos
Edificao e instalaes prediais
Os biotrios classificam-se basicamente em criao e experimentao.

Os de criao se destinam reproduo e/ou manuteno das diversas espcies e linhagens de animais, com o objetivo de manter o padro gentico e
sanitrio das colnias, atravs de tcnicas de manejo zootcnico 5 e procedimentos operacionais (POP). Os biotrios de experimentao so destinados
realizao dos experimentos e testes com animais.
O desenvolvimento de projetos de arquitetura e o planejamento
operacional de biotrios so processos criativos que devem ser cuidadosamente avaliados de acordo com as espcies animais envolvidas. Os riscos associados aos experimentos e outras particularidades para estas instalaes tambm
Manejar: em sua forma literal, significa conduzir ou trabalhar com as mos. Na rea animal, um
conjunto de tcnicas de reproduo, criao e manuteno que propicie bem-estar comportamental e
fisiolgico e que garanta os padres gentico e sanitrio.
5
so considerados. O projeto arquitetnico das instalaes prediais, as barreiras

sanitrias e as barreiras de conteno so elaborados de modo a facilitar as
atividades e atender as condies ambientais prprias s espcies, minimizando
ou mesmo eliminando a ocorrncia de contaminaes (animais, pessoal e de
ambientes).
As instalaes so fisicamente separadas de outras construes e planejadas visando correta higienizao e desinfeco e para facilitar a manuteno
predial e de seus equipamentos. Os fluxos de processos e pessoal devem ser
delineados para que no ocorra o cruzamento entre entrada e sada desses
elementos, evitando a contaminao.
A arquitetura de um biotrio compreende uma estrutura bsica composta de salas de animais entre dois corredores. Na Figura 1, observa-se um
esquema da estrutura bsica de um biotrio com as instalaes necessrias para
a criao, manuteno e experimentao de roedores e coelhos. Estas instalaes tambm so adequadas para a manuteno de primatas no-humanos.
Figura 1 Desenho esquemtico bsico de um biotrio
reas comuns (administrao e vestirios). rea de lavagem contendo depsitos, tanque de imerso,
autoclaves de dupla porta, guichs de passagem. Antecmara de acesso, corredores limpo (de distribuio) e sujo (de recolhimento) e quarentena. Salas de animais, procedimento ou laboratrios.
Algumas recomendaes:
As superfcies de pisos, paredes e tetos devem ser lisas, resistentes e
impermeveis, fceis de lavar e desinfetar. Acessrios internos, como

luminrias, dutos de ar e tubulaes, so instalados de modo a evitar
pontos de acmulo de poeira. Uma pia para higiene das mos deve
estar disponvel prxima da sada das salas, provida de torneira com
acionamento por pedal, com o cotovelo ou automtica. A exausto do
sistema de ar condicionado diretamente para o exterior do prdio,
sem recirculao dependendo do nvel de biossegurana exigido.
A quarentena possui dois objetivos: avaliar a sade e dar condies
aos animais de se recuperarem do transporte, aclimatando-se ao novo

ambiente. Se possvel, a quarentena deve ser isolada de outras reas do
biotrio. Em primatas, a quarentena necessariamente realizada em
ambientes externos rea de criao e seus procedimentos so os mais
restritos. Ainda para este animal, o local da quarentena possui reas
contguas para apoio diagnstico e de cuidados de manejo.
As reas para estocagem de raes secas, equipamentos e materiais
utilizados pelos animais devero ser arejadas, a fim de minimizar a proliferao de microrganismos e evitar outras contaminaes. Um refrigerador ou uma cmara frigorfica deve estar disponvel para o armazenamento
de hortifrutigranjeiros.
A rea de higienizao, desinfeco e esterilizao isolada e afastada
das salas de animais, para no causar distrbios a eles, uma vez que as
autoclaves e os equipamentos de higienizao geram nveis elevados de
rudos, umidade e calor. A ventilao deve ser suficiente para evitar o
acmulo de odores e temperaturas elevadas, e os tanques so
dimensionados para a higienizao e desinfeco dos diversos materiais
de uso na manuteno animal. O ideal que haja separao entre
ambientes limpo e sujo.
As salas de animais so construdas de forma a permitir a separao por
espcie/linhagem. So isoladas dos outros ambientes e constantemente

higienizadas. S permitido o acesso aos trabalhadores habilitados
manipulao animal. Nos biotrios de experimentao, cada pesquisa
desenvolvida em ambiente exclusivo e salas especiais devem ser preparadas para os estudos que envolvam o uso de radiaes, agentes infecciosos com alto potencial de risco e substncias txicas.
A paramentao dos trabalhadores, de uso exclusivo, obrigatria nas
reas tcnicas, de forma a no carrear possveis contaminantes. Conforme a classificao microbiolgica dos animais, a higienizao corporal
dos trabalhadores obrigatria no acesso e na sada da rea controlada.
Barreiras sanitrias ou de conteno
As barreiras sanitrias ou de conteno compreendem as instalaes

prediais, os equipamentos e materiais utilizados para esterilizao ou desinfeco e os procedimentos de boas prticas. Essas barreiras so determinadas em
funo das espcies e da quantidade de animais, tipos de materiais, fluxos de
processos, manejo animal etc. Sero mais complexas quanto maior forem a
exigncia microbiolgica e/ou os riscos biolgicos associados.
O biotrio deve possuir como condies mnimas:
Sistema de ventilao apropriado assegurando a filtrao do ar para
evitar a contaminao de reas contguas.

Possuir um programa de controle peridico de animais invasores, utili-
zando produtos qumicos no txicos para vertebrados.

Fazer uso de sistemas que impeam o refluxo de gua, gases e a
penetrao de insetos e outros animais.

Higienizao ambiental regularmente.
Materiais, equipamentos, alimentos e todos os insumos vindos do
exterior podem estar contaminados e devem ser esterilizados ou

desinfetados e estocados em local especfico.
As barreiras sanitrias ou de conteno impedem que partculas indesejveis tenham acesso s reas de criao ou de
experimentao e que agentes patognicos se dispersem
no ambiente, garantindo o status sanitrio dos animais.
Alguns equipamentos so essenciais para garantir o status sanitrio dos
animais de criao ou de experimentao:
Autoclave o principal equipamento utilizado na esterilizao de
materiais e insumos, uma vez que a esterilizao por calor sob presso
um dos mtodos mais seguros e confiveis. Os materiais autoclavveis
so: gaiolas, tampas de gaiolas, frascos bebedouros, comedouros, ninhos, materiais de enriquecimento ambiental, bicos, forrao de gaiolas,6 uniformes, fichas e raes. Em biotrios de experimentao,
recomendado que existam duas autoclaves: um para entrada de matrias
e insumos e outro para descontaminao de resduos e materiais, evitando o contrafluxo.
Estufa de xido de etileno Equipamento utilizado para materiais
que no podem ser esterilizados por calor. O gs de xido de etileno

atua oxidando as protenas dos seres vivos presentes nos materiais,
promovendo sua inativao. Os materiais normalmente processados neste equipamento so os mesmos citados para a autoclave, com exceo
de raes e material de forrao das gaiolas, pois concentram o gs que
pode intoxicar os animais se ingerido ou inalado.
Para forrao de gaiolas, so utilizados a maravalha (raspas de madeira especial), sabugo de milho etc.
tambm chamada de cama.
Isoladores Utilizado para criar e manter animais livres de microrganis-
mos. Os isoladores comportam vrias gaiolas de pequenos animais dependendo de sua capacidade. Existe uma variedade de modelos de
isoladores, como os rgidos e os flexveis, providos de filtros de entrada
e sada de ar, onde a renovao do ar mantida atravs de ventilao
forada, com presso positiva ou negativa.7 A introduo de insumos e
materiais feita pelo porto de passagem8 com auxlio do cilindro de
esterilizao,9 onde os materiais foram previamente esterilizados. A utilizao de isoladores com presso negativa, em estudos com risco biolgico, confere ao pesquisador um eficiente mtodo de segurana, alm
de propiciar a vantagem de ter numa mesma sala isoladores com inculos
diferentes.
Microisolador So gaiolas para pequenos animais com tampa com
filtro, que isolam o ambiente interno da gaiola. So indicadas para

preservar a condio microbiolgica dos animais e tambm para evitar
que aerossis do seu interior se dispersem pelo ambiente. H o inconveniente de uma menor troca de ar da gaiola com o ambiente, aumentando a temperatura, a umidade relativa e a concentrao de gases.
Todas as atividades que necessitam da abertura deste tipo de gaiola
sero realizadas em cabine de conteno biolgica.
Mdulo para microisoladores Existem dois tipos. Um possui portas
e o fluxo de ar filtrado circula por todo o ambiente interno do mdulo.

No outro tipo, as gaiolas contm filtro e vlvulas para conexo de ar
individual e no tm porta, pois a circulao do ar restrita ao seu
interior. Esses equipamentos podem ser de presso positiva ou negativa.
Presso positiva ou negativa em biotrios est relacionada ao diferencial de presso entre duas reas ou
ambientes diferentes. A movimentao de ar segue um fluxo contnuo e controlado da rea de maior
presso para a de menor presso. Isto impede que partculas em suspenso circulem ou sejam carreadas
de um ambiente para outro.
8
Porto de passagem: abertura do isolador que, por mtodos qumicos, pode ser esterilizada e permitir
a entrada e sada de materiais, insumos e animais.
9
Cilindro de esterilizao: acessrio utilizado em isoladores para esterilizao de materiais e insumos.
7
So equipamentos de conteno primria10 que tm como uma das

principais vantagens a conteno de aerossis e de alrgenos no interior
da gaiola. Como vantagem adicional, h o controle dos parmetros
relativos temperatura, umidade relativa e ventilao, propiciando um
ambiente favorvel aos animais.
3. Biossegurana
Diferente de laboratrios, os biotrios possuem caractersticas particulares. Pelo fato de alojarem animais, h sempre riscos associados a seu manejo.
Alm deste, outros riscos associados aos biotrios so os riscos qumicos,
fsicos e ergonmicos.11
Os riscos qumicos esto relacionados principalmente ao uso rotineiro e
de grandes quantidades de desinfetantes e sanitizantes na higienizao de
materiais e ambientes, bem como de substncias txicas ou perigosas utilizadas
na experimentao animal. J os riscos fsicos envolvem o modo como os
animais se defendem perante os fatores de estresse ou medo. Arranhaduras e
mordeduras so as causas mais representativas de acidentes.
Os problemas de ergonomia esto associados ao levantamento de materiais e cargas de peso considervel e aos movimentos repetitivos na troca de
gaiolas e de outras prticas no manejo animal.
Os animais so reservatrios naturais de vrias zoonoses e podem, portanto, abrigar ou serem suscetveis a agentes infecciosos capazes de causar
doenas tambm nos seres humanos (riscos biolgicos). Dependendo da sensibilidade individual dos trabalhadores, podem ocorrer srios distrbios de
sade, pois os animais produzem constantemente, atravs de dejetos, urina,
Conteno primria: a proteo individual e do ambiente diante de um agente infeccioso. Essa
conteno se efetiva pelo emprego de tcnicas de manejo animal e pelo uso de equipamentos de
proteo individual e/ou coletivo.
11
a cincia que estuda as relaes da adequao do ambiente de trabalho ao homem. (COSTA e
COSTA, 2003).
10
secrees e descamao da pele, substncias causadoras de alergias (reao de

hipersensibilidade).
Risco biolgico e nveis de proteo
Forma de escape O agente infeccioso pode ser expelido pelos animais por via natural ou artificial. Excrees do agente pela urina, saliva e
fezes ou atravs de leses na pele so exemplos. H vrios mecanismos
de escape artificial, como bipsia, coleta de sangue, tecidos e fluidos
corpreos, necropsia e instrumental cirrgico contaminado.
Transmisso A transmisso do agente do animal ou do laboratrio
pode ocorrer por vrias rotas. A mais frequente envolve agulhas e
seringas contaminadas e a formao de aerossis e sua fcil disseminao
uma forma comum de transmisso.
Exposio A inalao, o contato com membranas mucosas e a
inoculao parenteral so as formas de exposio mais frequentes. Os
mecanismos mais comuns de exposio, quando animais de laboratrio
esto envolvidos, so:
Inoculao direta por agulhas, contaminao de cortes ou arranhes
preexistentes por instrumentos contaminados e agresso animal;

Inalao de aerossis durante o manejo animal e nos procedi-
mentos e manipulao na experimentao animal;

Contato das membranas mucosas dos olhos, boca ou narinas
por gotculas de materiais, mos e superfcies contaminadas;

Pipetar com a boca, embora esta ingesto seja pouco comum, uma
vez que as Boas Prticas Laboratoriais (BPL) desaprovam esta ao.

As caractersticas do animal, o agente infeccioso envolvido, o treinamento e
a experincia do pessoal, as atividades e os procedimentos requeridos na experimentao devem ser considerados na avaliao e seleo das regras de biossegurana.
Os laboratrios que manipulam microrganismos patognicos ou que tenham

a possibilidade de cont-los no material de trabalho so especiais. Nesses ambientes de trabalho, h risco de se contrair doenas infecciosas tanto pelo pessoal que
nele trabalhe como para os que esto prximos. A minimizao ou mesmo a
eliminao dos riscos se tornam possveis quando se faz uso das BPL e empregamse normas de biossegurana especficas ao nvel do risco.
Conteno So mtodos e tcnicas, procedimentos e prticas, equipa-
mentos de proteo individual e coletivo e condies de instalaes laboratoriais

que devem ser empregados ou condio bsica preconizada na manipulao ou estocagem de agentes infecciosos no ambiente laboratorial. A finalidade da conteno eliminar ou reduzir a exposio do pessoal, do laboratorial
e do ambiente externo ao agente de risco.
Conteno primria a proteo individual e do laboratrio diante de um
agente infeccioso. Essa conteno se efetiva pelo emprego de tcnicas laboratoriais

e pelo uso de equipamentos de proteo individual e/ou coletivo.
Conteno secundria a proteo das reas externas ao laboratrio de
uma contaminao do agente em uso. Isso ocorre por meio de instalaes,

sistemas de utilidades prediais e mtodos operacionais.
Recomendaes de biossegurana em biotrios
O nvel de biossegurana de um experimento determinado segundo o

microrganismo de maior risco.Existem quatro nveis de biossegurana, crescentes em
funo do grau de conteno e complexidade do nvel de proteo. A seleo do
nvel apropriado de biossegurana para o trabalho com um determinado agente ou
em experimentos com animais depende de inmeros fatores. Alguns mais importantes so: virulncia, patogenicidade,12 estabilidade biolgica, meio de propagao,
natureza e funo do laboratrio, procedimentos e manipulaes envolvendo o
a capacidade do patgeno de causar enfermidades e suas manifestaes clnicas nos hospedeiros
suscetveis.
12
agente, endemicidade13 do agente e existncia de vacina ou medidas teraputicas

efetivas (Tabela 1).
Tabela 1 Recomendaes de biossegurana para atividades com vertebrados
Nvel
Agentes de risco
Prticas
Equipamentos
(Barreiras primrias)
Instalaes
(Barreiras secundrias)
No causa doena.
Manejo e
procedimentos
padres
preconizados para
animais e vigilncia
sanitria.
Os normalmente preconizados para alojamento das

espcies animais.
Biotrio convencional;
sem recirculao de ar;
o direcionamento de ar
recomendado.
Associado com doena

humana. Contaminao
por autoinoculao,
ingesto e exposio de
membranas mucosas.
As prticas do
nvel 1 mais:
acesso limitado;
smbolo de risco
biolgico;
alerta de
precauo;
manual de
biossegurana;
descontaminao
de todo material
infeccioso e gaiolas
de animais antes
da lavagem.
Os equipamentos do nvel
1 mais: equipamentos de
conteno apropriado por
espcie;
equipamentos de proteo
individual (EPI);
proteo facial e
respiratria, se necessrio.
As instalaes do nvel 1
mais: autoclave;
pia na sada da rea de
animais.
Nativo ou extico com

potencial de risco por
aerossis; doenas que
podem causar srios
efeitos sade.
As prticas do
nvel 2 mais:
acesso controlado;
descontaminao
das roupas antes
de lavar;
descontaminao
de gaiolas antes de
remover a forrao
da gaiola;
desinfeco de
calados.
manuteno e manuseio de
animais; cabines classe I ou
II para manipulao que
possam criar aerossis
(inoculao, necropsia
etc.); EPI; proteo
respiratria apropriada.
mais: separao fsica entre
corredores de acesso;
acesso por dupla porta com
fechamento automtico;
autoclave no biotrio;
janelas lacradas;
aberturas seladas.
Agentes perigosos /
exticos que ponham em
risco a vida por
inexistncia de tratamento;
transmisso por aerossis
ou agente relacionado
com riscos desconhecidos
de transmisso.
As prticas do
nvel 3 mais:
entrada com troca
de roupas onde
roupas pessoais
so retiradas e
paramentao
apropriada
usada; banho na
sada; todo
material
descontaminado
antes de removido
do biotrio.
conteno mxima (classe
III) ou equipamento de
conteno parcial em
combinao com proteo
total do corpo, suprimento
de ar sob presso, usado
em todos os procedimentos
e prticas.
mais: prdio separado ou em
zona isolada; sistema de
suprimento e exausto de ar,
vcuo e descontaminao
exclusivos; outros
requerimentos especficos.
Carter de endmico de uma enfermidade. Presena de uma doena ou de um patgeno em uma

populao ou rea geogrfica.
13
Os requerimentos de construo, os procedimentos, as prticas, os

equipamentos e as precaues que devem ser consideradas na elaborao de
projetos e no desenvolvimento de atividades que envolvam animais vertebrados e em funo do nvel de biossegurana esto descritos a seguir.
Nvel de biossegurana 1
Prticas padres
A Acesso ao biotrio limitado ou restrito ao critrio do

coordenador.
B Fazer a higienizao das mos aps manusear culturas e/ou
animais e aps remover as luvas e antes de sair do biotrio.
C Nas reas de animais, no permitido comer, beber, fumar,
estocar alimentos de uso humano, aplicar cosmticos e manusear
lentes de contato.
D Todos os procedimentos devem ser realizados cuidadosamente, visando a minimizar a formao de aerossis.
E As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas aps
o uso ou imediatamente aps o derrame de material vivel.
F As portas das salas de animais devem abrir para seu interior e
serem de fechamento automtico.
G Todo resduo proveniente da sala de animais deve ser apropriadamente descontaminado, preferencialmente por autoclave,
antes de ser disponibilizado como lixo. Carcaas de animais so
incineradas.
H Deve haver um programa efetivo para controle de insetos e
roedores.
Prticas especiais
A O coordenador do biotrio o responsvel pelo acesso

limitado s reas de animais e deve informar dos riscos potenciais
a quem precisa entrar nessas reas. Em geral, pessoas em condies que possam elevar os riscos de aquisio de infeces no
devem ter acesso s reas de animais.
B O coordenador do biotrio deve estabelecer diretrizes e
procedimentos pelos quais as pessoas tomaro conhecimento dos
riscos em potencial e procedimentos especficos antes de terem a
liberao para o acesso s salas de animais.
C O material utilizado para forrao das gaiolas removido de
forma a minimizar a criao de aerossis e deve ser descartado em
concordncia com os requerimentos apropriados (legais ou
institucionais).
D As gaiolas podem ser lavadas manualmente ou em mquinas.
A temperatura final de enxgue na lavagem mecnica deve ser de
82,7C (180F).
E Deve-se usar roupas apropriadas (jalecos, aventais ou uniformes) na rea de animais. Recomenda-se que o uniforme de uso
no biotrio no deva ser usado em outras reas.
F Um manual de biossegurana preparado e adotado. As
pessoas so informadas dos riscos especiais e requerido que
elas leiam e sigam as instrues, prticas e/ou procedimentos.
Equipamentos de segurana (barreiras primrias)
No so requeridos equipamentos de conteno para animais no nvel 1

de biossegurana.
Instalaes (barreiras secundrias)
A O biotrio deve ser projetado e construdo visando a facilitar a limpeza, desinfeco e manuteno.
B Pias para higiene das mos devem estar disponveis em diversas reas do biotrio.
C No caso de existncia de janelas que se abram, estas devem
estar protegidas contra a penetrao de insetos.
D A exausto de ar deve ser descarregada para o exterior do
prdio, sem recircular por outros ambientes.
Nvel de biossegurana 2
Prticas padres
Todas as recomendaes do nvel de biossegurana 1.

Prticas especiais
Todas as recomendaes do nvel de biossegurana 1, acrescidas de:

A Quando agente(s) patognico(s) estiver (em) sendo usado(s)
nas salas de animais, deve-se assegurar que todas as providncias
requeridas e necessidades especiais de entrada sejam efetivadas
ou estejam disponveis, tais como vacinao e EPI.
B Um aviso com smbolo universal de biossegurana deve ser
afixado no acesso da rea de risco e na porta da sala de animais.
O aviso de risco deve identificar o agente patognico em uso,
nome e telefone dos supervisores ou outros responsveis e indicar os EPI requeridos para entrada na sala.
C As pessoas devem receber imunizao apropriada quando
uma vacina estiver disponvel.
D Avaliaes sorolgicas peridicas das pessoas, considerando

o agente de risco, uma medida que deve ser adotada quando
tcnicas para tal estiverem disponveis.
E Um manual de biossegurana deve ser elaborado e adotado.
Todos devem ser informados de riscos especiais e so instrudos a
ler e seguir as instrues de prticas e procedimentos.
F Todos devem receber treinamento apropriado em riscos associados com o trabalho e aprender sobre as precaues para prevenir exposies aos riscos. Devem receber, anualmente, reforo
de treinamento ou treino adicional quando houver mudanas de
procedimentos tcnicos e operacionais.
G Preocupao adicional deve ser observada com materiais e
utenslios contaminados (agulhas, seringas, lminas, pipetas, tubos capilares). Agulhas e seringas ou outros utenslios
perfurocortantes so restritos s reas de animais para uso somente quando no h alternativas, como inoculaes parenterais, coleta de sangue ou aspirao de fluidos de animais e de frascos.
Tubos plsticos devem ser usados em substituio aos de vidro,
quando possvel.
H Agulhas descartveis nunca devem ser dobradas, cortadas,
quebradas, reencapadas ou removidas de seringas descartveis ou
outra forma de manipulao, com as mos, depois de descartadas. Preferencialmente, elas devem ser cuidadosamente colocadas
em um recipiente resistente a perfuraes usado para materiais
descartveis. Utenslios no descartveis so obrigatoriamente colocados em recipientes de paredes espessas para transporte rea
de descontaminao.
I Frasco de vidro quebrado no deve ser manuseado diretamente com as mos, e sim removido mecanicamente atravs de
vassoura e p de lixo ou pinas. Recipiente para agulhas, peas

de equipamentos e cacos de vidro devem ser descontaminados
antes de descartados.
J Culturas, tecidos animal e fluidos corpreos so colocados
em recipiente que previna vazamento durante a coleta, o manuseio, o processamento, o estocagem, o transporte ou o envio.
K Gaiolas so apropriadamente descontaminadas, preferencialmente por autoclave, antes da limpeza e lavagem.
L Equipamentos e superfcies de trabalho devem ser
descontaminados com desinfetante apropriado em uma rotina bsica aps o trmino do trabalho com materiais infecciosos e especialmente aps o derrame, gotejamento ou outra forma de contaminao com esse material.
M Equipamentos contaminados devem ser descontaminados
de acordo com as recomendaes antes de serem enviados ou
disponibilizados para reparo ou manuteno ou transportados para
fora das instalaes.
N Derramamentos ou acidentes que resultem em exposio ao
material infeccioso so imediatamente relatados ao coordenador
do laboratrio. Acompanhamento mdico providenciado e os
registros devem ser mantidos.
O Animais que no estejam envolvidos no trabalho em andamento no so permitidos no biotrio.
A Cabine de Segurana Biolgica (CSB) e EPI (ex.: proteo

respiratria, mscaras faciais) so usados sempre que procedimentos
com alto potencial de formao de aerossis so conduzidos. Isso in-
cluiu necropsia, coleta de tecidos ou fluidos de animais, inoculao

intranasal e manipulaes com alta concentrao ou grande volume de
material infeccioso.
B Apropriada proteo facial e respiratria usada por todas as
pessoas que entrem nas salas de primatas no-humanos.
C Aventais, jalecos ou uniformes so usados nas reas de animais.
Essas roupas de proteo so retiradas antes de sair dessas reas.
D Especial cuidado deve ser tomado para evitar a contaminao da
pele com materiais infecciosos. O uso de aventais com manga comprida
e luvas obrigatrio quando manusear animais infectados e quando o
contato de material infectado com a pele for inevitvel.

A Se houver ralos, esses devem possuir tampas e serem sifonados
de forma a conter sempre um volume de gua e/ou soluo
desinfetante.
B recomendado, porm no exigido, que a direo do fluxo
de ar seja para o interior da sala de animais.
C Autoclave, que pode ser usada para descontaminao de
resduos e outros materiais do biotrio, deve estar alocada nessa
instalao.
D A exausto das CSBs ou de outros equipamentos de conteno descarregada diretamente para fora da edificao.
E Deve haver um sistema de gerador de energia eltrica para
atender as reas crticas da edificao.
Nvel de Biossegurana 3
Prticas padres

Prticas especiais

A proibido o acesso de pessoas com maior propenso a riscos,
incluindo-se crianas, mulheres grvidas e pessoas que so imunodeficientes
ou esto imunosuprimidas. O coordenador tem a responsabilidade final
para definir cada circunstncia e determinar quem pode entrar ou trabalhar no biotrio.
B Todos os resduos oriundos das salas de animais so descontaminados,
preferencialmente por autoclave, antes de disponibilizados como lixo ou
enviados para reprocessamento.
C Todas as carcaas de animais so incineradas. Animais mortos so
transportados da sala de animais para o incinerador em recipientes hermticos e prova de vazamentos.
D O trabalho sempre realizado por pelo menos duas pessoas. No
permitido acessar sozinho as reas de animais.

A EPI so usados para todas as atividades que envolvam manipulaes de material infeccioso ou animais infectados.
B Uniformes de frente fechada ou de frente slida so usados
pelas pessoas para entrar nas salas de animais. Vestimentas com
botes na parte anterior so inadequadas ou imprprias. As
vestimentas devem ser acondicionadas em recipientes antes de

encaminhadas para descontaminao.
C As luvas so removidas assepticamente e autoclavadas como
outros resduos das salas de animais antes de descartados.
D Apropriadas protees de olhos, face e respiratria so
usadas por todos que entram nas salas de primatas no-humanos.
E Deve-se fazer uso, quando indicado, de calados, sapatilhas
ou outra proteo dos calados. A desinfeco desses obrigatria na sada da rea de experimentao.
F Conteno fsica e equipamentos apropriados para cada espcie animal so usados para todos os procedimentos e manipulaes de material infeccioso e animais infectados.
G O risco de infeco por aerossis, provenientes dos animais
ou do material usado na forrao das gaiolas, pode ser reduzido
ou mesmo eliminado se os animais so alojados em gaiolas com
filtro (mini-isoladores), sendo a abertura das gaiolas em local de
ventilao fechada (CSB).

A O biotrio construdo obrigatoriamente separado de outras reas abertas e que no tenham restrio de trnsito de pessoas.
B Uma antecmara com portas intertravadas um requerimento
bsico antes da rea de animais.
C Separao fsica das salas de animais dos corredores de acesso ou
de outras reas de trabalho deve ser por dupla porta intertravada.
D As superfcies das paredes internas, dos pisos e dos tetos devem

ser resistentes gua e ao calor moderado para facilitar a limpeza.
E As tubulaes e os dutos so selados ou possveis de serem selados
para facilitar a fumigao ou descontaminao.
F As pias devem ter torneiras de acionamento por pedal, com o
cotovelo ou automtica e devem ser alocadas prximas da porta de
sada.
G O processo usado para descontaminao de efluentes com risco
biolgico deve ser validado fsica e biologicamente pelo uso constante
de registro de temperatura atravs de sensor, em conjunto com um
indicador microbiolgico com uma definida suscetibilidade ao calor.
H Efluentes de banho podem ser descarregados no sistema sanitrio
sem tratamento.
I Se um sistema de vcuo usado, cada ponto de servio deve ter
sifo com lquido desinfetante e filtros Hepa.
J Visores ou janelas nas salas de animais no podem ser de abrir e so
seladas.
K Autoclave para descontaminao de resduos obrigatria no biotrio
e deve ser de dupla porta, de forma a retirar os materiais e resduos
diretamente da rea aps a descontaminao.
L O sistema de ventilao e exausto de ar sem recirculao. O
insuflamento e a exausto so balanceados de forma a ter um
direcionamento de ar para o interior das salas de animais.
M O sistema central de exausto em instalaes com trabalhos em
CSB classe III tratado por passagem atravs de filtro Hepa antes de
descarreg-lo no exterior do prdio. Os filtros Hepa so localizados o
mais prximo possvel do ambiente, de modo a minimizar a extenso do
risco potencial de contaminao do duto.
N Deve haver um sistema de gerador de energia eltrica para atender

a todo o sistema da edificao.
Nvel de Biossegurana 4
Prticas padres

Prticas especiais

A Somente pessoas envolvidas nos programas ou que do
suporte tcnico so autorizadas a entrar nas instalaes ou em uma
determinada sala de animais.
B O acesso ao biotrio limitado por segurana e portas
trancadas. O acesso controlado pelo supervisor do biotrio,
pela chefia da biossegurana ou por outra pessoa responsvel
pela segurana fsica do prdio.
C Antes de permitir o acesso s reas de experimentao, as
pessoas so advertidas dos riscos em potencial e instrudas sobre
como devem se proteger. Elas devem concordar e se comprometer a seguir todos os procedimentos de entrada e sada.
D Um protocolo para situaes de emergncia deve ser estabelecido.
E Avaliao sorolgica peridica do pessoal, considerando o
agente de risco, uma medida que deve ser adotada quando
tcnicas para tal estiverem disponveis.
F Entrada e sada de pessoal do biotrio deve ser feita somente
atravs de troca de roupas e banho. Pessoal toma banho a cada
vez que sai do biotrio.
G As roupas so removidas em rea prpria e depositadas em

recipiente apropriado e especfico. A paramentao completa
inclui roupas de baixo, cala, camisa ou jaleco, calados e luvas.
Quando da sada, a paramentao retirada no interior da rea
prpria antes de entrar no boxe de banho. Roupas usadas so
autoclavadas antes de lavadas.
H Suprimentos e materiais que so trazidos para o interior da
instalao so introduzidos por autoclave de dupla porta, cmara
de fumigao ou antecmara.
I Deve ser estabelecido procedimento para relato de acidentes
no biotrio e exposies a agentes patognicos.
J necessrio existir, nas instalaes, uma rea de quarentena,
isolamento e cuidados mdicos para pessoa com suspeita ou com
conhecida enfermidade associada ao trabalho.
K Materiais e animais no relatados no experimento no so
permitidos nas instalaes.

A Animais infectados com agentes classificados no risco 4 so
alojados em gabinetes de mxima conteno em rea especial em
que todas as pessoas so requeridas a usar roupa com presso
positiva e sistema de suporte de oxignio.
B Trabalhos com vrus que requerem nvel 4 de biossegurana e
nos quais uma vacina de alta efetividade existente podem ser
feitos com conteno parcial e sem a roupa de ventilao de
presso positiva se as instalaes so descontaminadas regularmente, se no h outro experimento em andamento que exija o
nvel 4 de biossegurana, tanto de barreiras primrias como das

secundrias, e se todos os procedimentos padres e especiais so
efetivamente postos em prtica.

A O biotrio localizado em um prdio separado ou em zona
claramente demarcada e isolada.
B Paredes, pisos e tetos das instalaes so construdos de
modo a no terem superfcies que acumulem sujidades e facilitem
a limpeza dessas superfcies. O acabamento dessas superfcies
deve resistente a lquidos e substncias qumicas, de modo a
permitir a limpeza e descontaminao.
C Acessrios internos, como luminrias, dutos de ar e tubulaes, so instalados de forma a minimizar superfcies horizontais
que acumulem poeira.
D Se h uma central de vcuo, essa no pode servir outras
reas fora dessa instalao. O sistema de vcuo possui filtro Hepa
instalado o mais prximo de cada ponto de uso ou vlvula de
servio. Filtros so instalados de forma a permitir, no local, sua
descontaminao e substituio.
E Outros sistemas de lquidos ou gases so protegidos para
evitar o refluxo.
F Portas externas do biotrio so de fechamento automtico e
estanque.
G Todas as janelas so prova de impacto e seladas.
H Autoclave de dupla porta disponibilizada para
descontaminao de materiais que saem do biotrio. A porta da
autoclave que se abre para o exterior das reas de animais

controlada por sistema automtico, de forma que somente se abra
aps o ciclo de esterilizao ter sido realizado.
I Efluentes oriundos de pias, CSB e autoclave so
descontaminados por calor antes de descarregados no sistema
sanitrio.
J O sistema de ar condicionado exclusivo e sem circulao
de ar. O insuflamento e a exausto so balanceados para assegurar o direcionamento do fluxo de ar da rea de maior risco. O
diferencial de presso entre reas adjacentes monitorado e deve
possuir alarme que indique falha de funcionamento do sistema.
K rea para troca de roupa deve ser providenciada para que as
pessoas que entrem nessa rea usem uma roupa de presso positiva, ventilada e que possua suporte de respirao artificial.
L A entrada nessa rea feita por antecmara com diferencial
de presso, com portas com fechamento estanque.
M Um chuveiro qumico instalado para descontaminao da
superfcie da roupa antes da sada da rea.
N A exausto de ar oriunda dessas reas filtrada por dois
jogos de filtros Hepa instalados em srie. Duplicao das unidades de filtrao e exausto providenciada.
3.5. Modelo animal
A pesquisa cientfica necessria para que o ciclo do conhecimento se

complete e se renove. Tem o objetivo de proteger o homem e os animais de
danos causados por substncias e produtos indesejveis ou efeitos colaterais de
medicamentos e, ainda, entender e pesquisar a cura de doenas. Diversas
espcies de animais so utilizadas na pesquisa biolgica e mdica, entre estas,
sapos, rs, peixes, aves, roedores, coelhos, ces, gatos, primatas no-humanos e animais de fazenda.
A utilizao de animais com objetivos cientficos uma prtica comum,
sendo absolutamente necessrio o estabelecimento de uma cultura de cuidados, conscincia e responsabilidades dirigida melhoria da descoberta cientfica e ao bem-estar. Esses conhecimentos so de fundamental importncia tanto
para o estabelecimento de colnias de animais de laboratrio como para a sua
utilizao na experimentao (Tabela 2).
Modelo animal Animal utilizado em pesquisa biomdica.
O conhecimento da Biologia (anatomia, fisiologia, gentica e aspectos
etolgicos) e do manejo da espcie animal possibilita a padronizao e a
harmonizao dos ensaios, aumentando a confiabilidade dos resultados, garantindo, simultaneamente, o bem-estar dos animais e a alta qualidade dos dados.
Tabela 2 Classificao taxonmica de algumas espcies de animais de
laboratrio
Ordem
Famlia
Camundongo
Rato
Rodentia
Gnero
Espcie
Mus
M. musculus
Rattus
R. novergicus
Hamster
Cricetidae
Mesocricetus
M. auratus
Cobaia
Cavidae
Cavia
C. porcellus
Leporidae
Oryctolagus
O. cuniculis
Macaca
Macaca mulatta
Macaca
Macaca fascicularis
Saimiri
Saimiri sciureus
Aotus
Aotus trivirgatus
Coelho
Lagomorfa
Macaco Rhesus
Macaco Cynomolgus
Primate
Macaco Esquilo
Macaco da noite
Aotidae
Manejo e caractersticas gerais dos animais de laboratrio
Uma criao de animais de laboratrio deve ser iniciada com animais

comprovadamente puros, de pedigree e criteriosamente selecionados pelos
valores genticos e sanitrios. Os mtodos de acasalamento empregados devem ser de acordo com o comportamento social dos animais e as condutas
relacionadas com a reproduo e o cuidado com os filhos.
Para se instituir o manejo adequado, importante considerar tambm as
instalaes, o conforto fsico e proporcionar um estado adequado de nutrio
aos animais. Este conjunto proporciona a preveno de fatores predisponentes
s doenas e possibilita a adoo de mtodos de controle.
As instalaes devem ser planejadas de maneira a permitir a realizao
de procedimentos de higienizao, desinfeco e outros que sejam necessrios, bem como respeitar os aspectos etolgicos. A construo deve permitir o
controle da iluminao e ventilao e a manuteno de temperatura adequada,
ser de material resistente e de fcil higienizao.
Etolgico Estudo do comportamento animal em seu
habitat. Constitui conjunto de comportamentos resultantes
da evoluo da espcie.
As gaiolas devem ser slidas e seguras, apropriadas para a espcie
alojada, livres de superfcies perfurantes ou cortantes, fceis de serem lavadas,
construdas de modo a prevenir fugas ou a entrada de animais estranhos.
Outro aspecto importante do manejo o conforto fsico para os animais, assim como para os profissionais de criao ou experimentao. Os
animais alojados devem ser mantidos em ambiente seco, limpo, livre de rudo
excessivo, com trocas de ar fresco e filtrado, com intensidade luminosa e ciclos
de claro e escurido controlados, dentro da faixa de temperatura e umidade
relativa adequada a cada espcie. No caso dos roedores, as trocas de cama
(material absorvente) podem variar de uma a trs vezes por semana, depen-
dendo da necessidade, o que evita o acmulo excessivo da amnia em decorrncia da decomposio bacteriana de fezes e urina. Este gs pode provocar
irritao do trato respiratrio daqueles animais e mesmo dos trabalhadores.
Os animais de laboratrio possuem caractersticas particulares e prprias
de cada espcie. Por esse motivo, no devem ser alojadas espcies diferentes
em uma mesma sala de criao ou experimentao. Da mesma forma, os profissionais, sempre que possvel, devero trabalhar exclusivamente em uma nica
rea predeterminada. Proceder rotineiramente inspeo dos animais e de seus
alojamentos, detectando precocemente alteraes que necessitem interveno,
favorece o bem-estar e o estado sanitrio.
As barreiras sanitrias e o acasalamento controlado tm sido as medidas
utilizadas pelos bioteristas para obter as linhagens da espcie animal com padro sanitrio e gentico recomendado para pesquisa. O padro sanitrio dos
animais se classifica em trs grupos distintos: animais gnotobiticos, que possuem microbiota associada definida e devem ser criados em ambiente com barreiras sanitrias absolutas; animais livres de germes patognicos especficos ( specific
pathogen free SPF), que no apresentam microbiota capaz de determinar
doena, ou seja, albergam somente microrganismos no patognicos; e animais
denominados de convencionais, que possuem microbiota indefinida por serem
mantidos em ambiente desprovido de barreiras sanitrias rigorosas.
Quanto ao padro gentico, so classificados em dois grandes grupos:
no-consanguneos e consanguneos. Os animais no-consanguneos,
heterozigotos ou outbred so aqueles que apresentam constituio gentica
variada, em estado de heterozigose, o que deve ser conhecido e mantido.
Para o acasalamento monogmico de roedores e poucas espcies de
primatas, mantm-se um macho para uma fmea, na gaiola, em carter permanente. Tem a vantagem da fcil identificao dos filhotes e a manuteno de
registro fidedigno, elevada porcentagem de cios frteis ps-partos, de filhotes
desmamados (no caso dos roedores), maior controle das enfermidades, boa
seleo dos reprodutores e, no caso de roedores, amplamente utilizado em

colnias de fundao de animais consanguneos onde se empregam acasalamento
entre irmos. As desvantagens so o aumento de mo-de-obra e a necessidade de grande nmero de machos reprodutores, de espaos maiores e de
mais pessoal.
O acasalamento poligmico um mtodo que compreende um macho
para um grupo de duas ou mais fmeas. Esse mtodo mais utilizado em
colnias de animais de produo de roedores e na grande maioria das espcies
primatas com esta caracterstica reprodutiva. A vantagem consiste em ter o
maior nmero de animais produzidos em menos espao. Tem como desvantagem a dificuldade para registro dos animais e a identificao da fmea e do
macho no frtil.
Caractersticas gerais dos roedores e coelhos
Camundongo Foi introduzido como animal de laboratrio pelo fato
de ser pequeno, muito prolfero, ter curto perodo de gestao, fcil

domesticao e manuteno. Por todas essas caractersticas, tornou-se o mamfero mais utilizado na experimentao biolgica. Quando as fmeas se agrupam em grande quantidade em ausncia de macho, se produz o perodo de
anestro,14 entrando novamente em atividade trs a quatro dias depois de
introduzir o macho. O bioterista se utiliza deste conhecimento para obter
vrias gestaes no mesmo perodo. Outro fenmeno de interesse na reproduo deste roedor consiste na absoro do embrio, que ocorre com maior
frequncia nas fmeas consanguneas, e est relacionado com a presena de
feromnio.15 O camundongo adulto deve ser manipulado individualmente
pela base da cauda, com polegar e indicador ou pina anatmica, mas o peso
Fase de repouso do ciclo estral (cio).
So substncias qumicas captadas por animais de uma mesma espcie (intraespecfica), que permitem
o reconhecimento mtuo e sexual dos indivduos.
14
15
do animal deve ser apoiado na mo do profissional ou outra superfcie, to

rpido quanto possvel. Para conteno de camundongos, coloca-se o animal
sobre uma superfcie, segurando sua pele da regio entre as orelhas na parte
dorsal da cabea, com os dedos polegar e indicador.
O emprego de acasalamento rotacional (mtodo Poiley) em roedores e
lagomorfos visa a manter estes animais heterozigotos, evitando-se o acasalamento
de parentes prximos e assegurando que a gerao seguinte descenda de um
maior nmero de pais, ao contrrio do que ocorreria se fossem acasalados ao
acaso. Ao empregar esse sistema, a colnia se desenvolve em vrios grupos de
igual nmero, de modo que a quantidade de fmeas e machos em todos os
grupos sempre igual. O nmero de grupos de uma colnia est diretamente
relacionado ao seu tamanho (nmero de reprodutores). Quanto menor a
colnia, maior o nmero de grupos.
Animais consanguneos, homozigotos ou inbred so obtidos pelo
acasalamento entre irmos e/ou pais e filhos durante vinte ou mais geraes
consecutivas. Utilizando esse tipo de acasalamento em colnias de roedores,
consegue-se obter um ndice de homozigose de 99%, o que torna os animais
o mais possvel idnticos. O aparecimento desses animais ocorreu no comeo
do sculo XX, com os estudos do geneticista americano Clarence C. Little
sobre herana na cor da pelagem de camundongos. Aps o surgimento da
linhagem de camundongo denominada DBA, pesquisas em cncer geraram
outras linhagens. Com o surgimento das inmeras linhagens, alguns pesquisadores reconheceram o potencial dos hbridos F1 (produto do acasalamento
entre duas linhagens consanguneas), j que esses animais so geneticamente
homogneos e heterozigotos para aqueles pares de genes em que as linhagens
parentais diferem entre si.
Nas linhagens consanguneas, para que a homozigose seja mantida
nas geraes seguintes, os reprodutores devem ser acasalados indefinidamente, entre irmos ou pais e filhos, e essa a razo para que as colnias das
linhagens consanguneas tenham maior chance de fixao de mutaes. Os

animais mutantes resultantes desses acasalamentos foram selecionados e
reacasalados com representantes da linhagem parental ou de outras linhagens,
constituindo, assim, as linhagens congnitas.
Os animais transgnicos so aqueles em que o genoma foi modificado
pela introduo de sequncias de DNA de outro organismo. Nos animais
knockout, a modificao gentica introduzida capaz de interromper ou anular
um gene, que deixa de ser expresso.
No anexo 1 so demonstradas a conteno de camundongo (Figs 1, 2
e 3) e a tcnica de eutansia por deslocamento cervical (Fig 4).
Rato Criado atualmente na maioria dos biotrios, semelhante aos
outros animais monogstricos, exceto pelo fato de no possuir vesicular biliar e

de seu pncreas ser difuso. Ratos so dceis e fceis de manusear: uma
compresso firme e suave ao redor da cavidade torcica restringe os seus
movimentos sem trazer sensao de desconforto. A conteno tambm pode
ser feita colocando o polegar e o indicador ao redor da nuca e, com a palma
da mo sobre o dorso, use os dedos para ajudar a manter a posio quando o
animal se movimenta.
To logo a rata coberta, forma-se um tampo na vagina, que expelido nas 24 horas ps-cobertura. Este fato observado tambm em outros
membros da famlia dos roedores. O tampo pode ser notado facilmente entre
as fezes, na forma de um cilindro branco seroso e sua observao indica que
houve cobertura do macho.
Hamster Em condies naturais, o hamster srio uma espcie
sazonal que entra em hibernao durante os perodos de dias curtos com baixa
luminosidade, baixas temperaturas (inferiores a 5C) e escassa disponibilidade
de recursos alimentares e de material para construo de ninho. No biotrio, o
controle ambiental com temperatura constante da ordem de 21 a 22C e 12
horas de claridade por dia evita a manifestao de sazonalidade, inclusive na

esfera reprodutiva. Foi amplamente demonstrado o efeito das condies de
alojamento sobre o crescimento, o peso e a composio corporal de hamsters.
O alojamento em grupo acelera o crescimento e a deposio de gordura,
induzindo obesidade, especialmente nas fmeas, porm sem ocorrncia de
hiperfagia.16
Cobaia So animais sociais, tmidos, dceis e raramente mordem ou
arranham. Assustam-se facilmente, defecam e urinam nos comedouros e derramam sua alimentao pelo piso da gaiola. Gritam de prazer antes de situaes
gratificantes (alimentao) e ficam muito juntos ou em cima uns dos outros
durante o manejo da colnia pelo tcnico. Os animais adultos, frequentemente, mordem as orelhas dos jovens e os machos podem brigar violentamente,
principalmente durante disputas por uma fmea em estro, at que se estabelea
a hierarquia do grupo. Outra caracterstica marcante das cobaias a sua extrema suscetibilidade a estmulos estressantes, principalmente a alteraes ambientais.
Simples modificaes na rao, no comedouro, na gua e no bebedouro
podem levar os animais a recusar o alimento. Alm disso, estmulos como
barulho intenso ou movimentos bruscos os assustam, fazendo com que passem
a correr de um lado para o outro, provocando ferimentos. Ocasionalmente,
durante a conteno para a troca de gaiolas, podemos observar a paralisao
do animal por vrios minutos e at mesmo a morte. Isso implica dizer que o
trabalho com esta espcie deve ser realizado com muito cuidado, principalmente no que se refere s fmeas grvidas ou com filhotes recm-nascidos,
que podem ser pisoteados pelos outros animais do grupo. O mtodo mais
seguro para conter uma cobaia colocar uma mo sob o trax e, com a outra,
apoiar a parte posterior, para suportar o peso do animal, permitindo que ele
fique sentado sobre a palma da mo. Deve-se evitar comprimir o trax pela
sua fragilidade.
16
Alimentao em excesso.
Figura 2 Ordem de alguns animais de laboratrio

camundongos
ratos
hamsters
Rodentia (Roedores)
Coelhos
Lagomorpha
(Lagomorfos)
cobaia
Coelho De uma maneira geral, dcil, podendo morder ou arranhar
em razo da conteno incorreta. Suscetvel ao estresse, assusta-se facilmente.

No se deve manter machos adultos em uma mesma gaiola para evitar brigas
(disputa de territrio). As fmeas tambm no devem ser mantidas na mesma
gaiola porque podem apresentar pseudogestao.17 Para o acasalamento, a
coelha deve ser levada gaiola do macho para facilitar a cobertura, pois, caso
contrrio, o macho fora do seu territrio passar a examinar o novo local,
deixando de fazer a mesma. Uma vez introduzida a fmea na gaiola do macho,
dever ocorrer a cobertura aps alguns minutos. conveniente que o tcnico
assista e constate a cobertura, observando o comportamento do macho (que
se deixa cair de costas emitindo rudos guturais) e/ou, por meio de um simples
exame da vagina, observa-se a presena de lquido seminal. Aps a cobertura,
a fmea deve retornar a sua gaiola de origem. Esses animais so mais sensveis
ao calor do que ao frio. A temperatura recomendvel varia de 17C a 21C
e a umidade relativa, de 40% a 60%. A forma mais segura de conter um
coelho pegando-se com uma das mos a pele do pescoo e com outra as
patas traseiras, segurando-o junto ao corpo. Para grandes trajetos, coloca-se o
animal sobre o antebrao com a cabea dirigida para o corpo, segurando
firmemente as patas traseiras. Nunca se deve levantar um coelho pelas patas ou
pelas orelhas, pois h a propenso a leses de coluna vertebral e fraturas.
17
Gestao psicolgica.
Tabela 3 Parmetros importantes de algumas espcies

Camundongo
Rato
Hamster
Cobaia
Coelho
Peso macho adulto
25-30 g
300-400 g
95-120 g
400-500 g
4-5 kg
Peso fmea adulta
25-30 g
250-300 g
95-120 g
300-400 g
4-5 kg
Peso ao nascer
1-1,5 g
5-6 g
5g
70-100 g
70-80 g
Maturidade sexual do macho
40-50 dias
60-80 dias
60-70 dias
70-80 dias
5-6 meses
Maturidade sexual da fmea
40-50 dias
60-80 dias
60-70 dias
70-80 dias
5-6 meses
Ciclo estral
4-5 dias
4-5 dias
4-5 dias
16 dias
irregular
Gestao
19-21 dias
21-22 dias
16-19 dias
59-72 dias
30-31 dias
Desmame
19-21 dias
21-22 dias
21 dias
15-21 dias
42 dias
Tamanho da ninhada
1-22
8-10
4-12
1-6
6-8
Cobertura ps-parto
imediata
imediata
4 dias
imediata
14-28 dias
Vida reprodutiva do macho
1 ano
1 ano
1 ano
2-3 anos
2-3 anos
Vida reprodutiva da fmea
1 ano
1 ano
1 ano
2-3 anos
2-3anos
Consumo dirio de rao
4-5 g
15-20 g
7-9 g
35 g
100-150 g
Consumo de gua
Ad libitum
Ad libitum
Ad libitum
Ad libitum
Ad libitum
Primatas no-humanos
A distribuio geogrfica silvestre de origem deste modelo est atualmente restrita aos continentes centro sul-americano, africano e asitico. O
Brasil o pas com a maior diversidade desta ordem zoolgica, a mesma
que o homem.
Muitas espcies de primatas18 so utilizadas h muitos anos como modelos para as pesquisa biomdica e farmacutica e, por esta razo, vrias
instituies desenvolvem colnias para sua criao. So reagentes biolgicos
de importncia vital para testes e experimentos que requeiram respostas precisas, anlogas e confiveis, quando nenhum outro animal pode substitu-lo por
sua preciso em resultados compatveis s respostas humanas.
Primatas no-humanos (Filo Chordata subfilo Vertebrata, superclasse Tetrapoda, classe Eutheria,
ordem Primate). Macacos, smios: nome comum a todos os mamferos da ordem dos primatas, com
exceo do homem.
18
A espcie de primata dever ser escolhida criteriosamente conforme a

proposta de sua utilizao, como, por exemplo, modelos reconhecidamente
compatveis para enfermidades tropicais, que so macacos originrios do
neotrpico do Brasil e de outros pases da Amrica do Sul e Amrica
Central (neotropicais) como o macaco-de-cheiro (Saimiri sp.), mico comum
(Callithrix sp.), sagui (Saguinus sp.) e macaco-prego (Cebus sp.). Os primatas
asiticos (Velho Mundo19) so utilizados em vrias investigaes, entretanto,
so animais com alto custo para sua manuteno e com maior dificuldade de
obteno, destacando-se, entre eles, os do gnero Macaca.20
Os primatas no-humanos pertencem ordem mais elevada dos mamferos. A maioria gregria em seu ambiente natural, vivendo em grupos sociais sob a proteo
de um macho alfa. um animal bulioso, inquieto, observador e repetidor de atitudes humanas. Por este motivo, os profissionais que trabalham em biotrios devero ter atitudes conscientes no trato dirio, para que
no transmitam ensinamentos prejudiciais ao comportamento habitual da espcie.
Ressalta-se como caracterstica e diferenciao entre espcies e sua hierarquia na classificao taxonmica a existncia
ou no de cauda (mais prximas ao homem). Em algumas
delas, utilizada como um quinto membro (quando preensil),
um recurso em seus deslocamentos e para sua proteo
contra predadores naturais.
Primatas do Velho Mundo (infraordem Catarrhini) so os macacos originrios do continente africano
e asitico. Possuem a membrana internasal (septo nasal) estreita. Os primatas neotropicais (infraordem
Platyrrhines), ao contrrio, possuem narinas bem separadas. Estes ltimos so de porte menor, sendo
exclusivamente arborcolas (poucos descem ao solo em busca de gua ou alimento), distinguindo-se
tambm das espcies do Velho Mundo pela dentio de 32 ou 36 dentes, por polegar no completamente oponvel e pelas ausncias de calos citicos e de bolsas jugais.
20
Algumas espcies deste gnero so modelos biolgicos para vrias pesquisas, entre elas os macacos
Rhesus (Macaca mulatta) e Cynomolgus (Macaca fascicularis).
19
No planejamento de instalaes para a criao ou experimentao, alm das

medidas de biossegurana e bem-estar, deve-se levar em conta suas caractersticas
fsicas e comportamentais (sociais, reprodutivas, entre outras). Cada espcie tem
caractersticas prprias (algumas possuem hbitos diurnos e outra espcie noturna),
grandes diferenciaes e comportamento peculiares. A complexidade de seus alojamentos visando ao seu bem-estar deve levar em conta sua biologia e a boa utilizao
do espao pelo animal. Conforme demonstrado na Tabela 4, alguns vivem em
grandes grupos familiares hierarquicamente constitudos sistema poligmico (um macho dominante ou alfa acasala com vrias fmeas). Outros vivem em famlias menores
sistema monogmico (um casal e seus filhotes). Umas espcies alimentam-se preferencialmente de vegetais, outras so onvaras21 (deve-se observar, tambm, que as necessidades nutricionais variam conforme a poca do ano e a idade reprodutiva).
Grande parte das criaes de primatas realizada em ambientes com grandes
espaos para os animais gaiolas coletivas, pois se pressupem que maiores reas so
favorveis a seu bem-estar, e melhor tolerncia destes com o trabalhador. Estas gaiolas
so propcias para a convivncia de famlias com indivduos hierarquicamente organizados por eles mesmos, em sistema de poligamia, onde o macho adulto dominante22
convive com seu grupo de fmeas adultas e em idade reprodutiva e seus filhotes (que
devem permanecer com seus pais at atingirem a puberdade).23 Vale ressaltar que
estes ambientes devem possuir locais contguos especficos para permitir o descanso e
a privacidade dos indivduos dos grupos e que se destina tambm como rea de
conteno e captura de todos ou de indivduos isoladamente.
A higienizao das gaiolas coletivas realizada com mquina de lavagem
sob presso de forma a recolher os resduos lquidos e slidos do local, o que
So os que se alimentam tanto de produtos de origem animal como vegetal.
Macho dominante ou alfa: nico lder e reprodutor do grupo social e de sua gaiola ou recinto.
23
Sempre que possvel, os filhotes devem permanecer com seus pais durante os primeiros anos de vida
e que sejam naturalmente desmamados por sua me, para favorecer a aprendizagem social e reprodutiva.
Este perodo muito importante, pois comprovou-se que os animais que passaram por esse aprendizado
demonstram maior sucesso na criao futura de seus prprios filhotes.
21
22
se constitui em risco sade dos trabalhadores pelo carreamento destes aerossis.

Eles devero, portanto, estar corretamente paramentados com os equipamentos de segurana individual.
As mesmas especificidades dos outros modelos anteriormente descritos,
como controle de umidade, ventilao, luminosidade, tratamento de efluentes
e barreiras que impeam a circulao de animais invasores e deletrios, devem
ser atendidas. Destaca-se tambm que a criao deste modelo requer muitas
vezes reas grandes e abertas em ambiente seminatural (locais com vegetao
circundante, com o intuito de propiciar bem-estar visual e trmico), onde so
construdos seus recintos, de forma a propiciar segurana ao meio externo e
comunidade circundante e tambm adotar medidas para impedir que animais
sinantrpicos24 circulem nestes ambientes.
Como nos outros modelos, o manejo25 de primatas em criao e experimentao e o monitoramento de sua sade so de importncia primordial para
evitar a possibilidade de enfermidades previsveis, bem como sua reproduo
seja controlada de forma a no permitir acasalamentos consanguneos estreitos
entre o grupo ou as famlias da colnia.
De acordo com a biologia da espcie de primatas, as gaiolas podem ser
coletivas ou individuais,26 com espao adequado, equipamentos e materiais
necessrios a sua criao ou manuteno em biotrios. Seja qual for a forma e
a necessidade do cativeiro, estabelece-se um programa de interao positiva
So aqueles que se adaptaram a viver junto ao homem e, em alguns casos, podem transmitir agravos
a sua sade e de outros animais, como, por exemplo, roedores domsticos, aves, etc.
25
Manejar significa, em sua forma literal, conduzir com as mos. Na rea animal, um conjunto de
tcnicas corretas, desenvolvidas com o intuito de reproduzir, criar, manter animais de forma segura e
propiciar bem-estar fisiolgico, comportamental e produtivo a estes.
26
Nas gaiolas coletivas, algumas vezes o trabalhador, ao capturar um individuo especfico neste tipo de
recintos de criao, necessita utilizar pus redes de malha em forma de coador para primatas de
pequeno e mdio porte. Recomenda-se que este material seja confeccionado com malhas e bocal
adequados para cada espcie, idade e/ou peso, para a segurana do animal e do trabalhador. Em
gaiolas individuais, a atividade de captura realizada com maior facilidade, pois estas possuem uma de
suas paredes com mobilidade que, quando acionada, conter o animal contra a parede fixa. A partir
deste momento, com o animal fisicamente contido, realiza-se a administrao de imobilizante qumico para
sua retirada deste local com maior segurana.
24
fornecendo brinquedos, ninhos, poleiros e alimentos diversificados, enriquecendo estes ambientes e proporcionando o bem-estar de seus integrantes. 27
Em face da biossegurana, como j foi destacado, todos estes locais
devero atender a requisitos bem definidos, pois so locais de possveis riscos
biolgicos diretos ao trabalhador, o que imperioso para esta espcie animal,
devido exatamente a sua semelhana com o homem, transformando-a em um
maior risco de transmisso de zoonoses, algumas vezes fatais. A conteno de
primatas em cativeiro configura-se como o momento mais delicado do manejo,
estressante para os animais e de grande risco para o trabalhador, devendo ser
executada pelos membros da equipe com maior experincia.
Tabela 4 Caractersticas sociais e reprodutivas de alguns primatas no-humanos
Espcie animal Caracterstica
reprodutiva
Rhesus
(Macaca
mulatta)
Cynomolgus
(Macaca
fascicularis)
Gestao
Alimentao
Vida livre
Em cativeiro
Filhotes por Hbitos

gestao
Poligmico
146 a 180
dias
Onvoros
Rao industrializada e
suplementao de
hortifrutigranjeiro
Diurno
Poligmico
155 a 165
dias
Onvoros
suplementao de
hortifrutigranjeiro
Diurno
Macaco esquilo
(Saimiri sp)
Poligmico
150 a 172
dias
Onvoros
suplementao de
hortifrutigranjeiro
Fornecimento de larvas
Tenebrio molitor*
Diurno
Mico comum
(Calithrix sp)
Monogmico
130 a 145
dias
Onvoros
Hortifrutigranjeiro
Tenebrio molitor
1-3
Diurno
Macaco da noite Monogmico

(Aotus sp)
120 a 130
dias
Onvoros
suplementao de
Hortifrutigranjeiro
Tenebrio molitor
Noturno
*Em alguns biotrios de primatas, so criadas para suplementao nutricional larvas de Tenebrio molitor.
Tcnicas de enriquecimento ambiental: permitem a interao social e/ou o interesse individual proporcionando quebra na rotina do cativeiro, mantendo-os em permanentes atividades fsicas e ldicas com
aqueles ambientes.
27
Macroambiente28 e microambiente
O alojamento e a manuteno das condies ambientais apropriadas so

essenciais para o bem-estar animal. Um ambiente adequado propicia que os
animais cresam, reproduzam-se, mantenham um bom estado de sade, tenham conforto e bem-estar, no podendo ser, portanto, um fator que afete o
resultado das pesquisas. Essas condies refletem nos resultados e na qualidade final das pesquisas.
Microambiente
O microambiente para o animal o ambiente fsico com o qual mantm

contato direto, por exemplo, a gaiola. Proporciona as condies e o espao
suficiente para as necessidades comportamentais, fisiolgicas, manuteno da
temperatura corporal, movimentao e postura normal da espcie animal, alm
de permitir acesso facilitado gua e alimentao slida. Construdo de
forma que no machuque os animais e, em caso de biotrios de criao, deve
tambm ser adequado s necessidades reprodutivas. As gaiolas so construdas
com materiais no txicos, que atendam as necessidades dos animais, mas que
tambm propiciem uma fcil higienizao, desinfeco e/ou esterilizao. Devem ser impermeveis com superfcies sem ngulos fechados, sem cantos vivos
ou bordas que possam acumular sujidades e dejetos.
Dimenses de gaiolas e espao recomendados
A necessidade de espao para um animal complexa e no se pode

considerar somente o seu peso corporal versus a superfcie de rea. As dimenses da gaiola devem levar em considerao as necessidades individuais, situaes particulares e condies fisiolgicas dos animais. Desde que a performance
animal associada sade, reproduo, ao crescimento, ao bem-estar e
28
constitudo pelas condies do ambiente onde esto as gaiolas dos animais.
atividade normal esteja atendida no espao disponvel, pode-se considerar um

alojamento adequado (Tabela 5)
Tabela 5 Dimenses mnimas e altura das gaiolas segundo a espcie animal e
o peso corporal
ANIMAL
Camundongo
Rato
Hamster
Cobaia
Coelho
PESO (g)
REA DE PISO (cm2)
ALTURA (cm)
< 10
38,7
12,7
At 15
51,6
12,7
At 25
77,4
12,7
> 25*
96,8
12,7
< 100
109,7
17,8
At 200
148,4
17,8
At 300
187,1
17,8
At 400
258
17,8
At 500
387
17,8
> 500*
451,5
17,8
< 60
64,5
15,2
At 80
83,9
15,2
At 100
103,2
15,2
> 100*
122,6
15,2
350
387
17,8
> 350
651,5
17,8
< 2.000
1,35
35,6
At 4.000
2,7
35,6
At 5.400
3,6
35,6
150
50,8
1.000-3.000
280
76,2
3.000-10.000
400
76,2
10.000-15.000
560
81,28
15.000-25.000
740
91,44
Primatas no-humanos < 1.000
* Animais maiores requerem mais espao

Fontes: NRC (2003); Kelly e Hall (1995).
Alimentao
As raes peletizadas so as mais utilizadas para alimentao de

animais de laboratrio, que devem ser palatveis, balanceadas
nutricionalmente e sem contaminantes qumicos e microbiolgicos. Algumas delas so autoclavveis e, por esta razo, tm seus nveis de nutrientes
aumentados, pois durante o processo de esterilizao pelo calor h perdas
de vitaminas, protenas e outros elementos nutricionais. Outro mtodo de
esterilizao de raes para uso em biotrios a irradiao, que no
provoca perdas nutricionais como na autoclavao.
Animais gnotobiticos e SPF, por possurem uma microbiota diferenciada ou ausente, podem ter dificuldades na sntese de vitaminas. As vitaminas do
complexo B e a vitamina K so suplementadas dieta para garantir os nveis
mnimos necessrios nutrio do animal. Primatas no-humanos e cobaias no
sintetizam a vitamina C, que precisa ser disponibilizada de forma artificial em
sua dieta diria. Animais que no tenham acesso luz solar natural precisam
receber tambm um suplemento de vitamina D3.
gua potvel deve estar sempre disponvel e sua anlise quanto qualidade microbiolgica e aos contaminantes qumicos precisa ser efetuada periodicamente. O mtodo de seu tratamento definido em funo do experimento, pois a acidificao ou clorao podem causar alteraes fisiolgicas ou da
microbiota do animal, interferindo em seu bem-estar e nas condies de sade. A filtrao e a esterilizao por autoclave so os mtodos mais empregados em biotrios e os frascos bebedouros devem ser substitudos, pelo menos, uma vez por semana, para minimizar a proliferao de microrganismos.
Forrao das gaiolas
A forrao das gaiolas tem por objetivo manter os animais secos e limpos e
proporcionar um ambiente confortvel. O material mais comumente utilizado para a forrao
das gaiolas a maravalha de madeira. A madeira utilizada para a produo de maravalha
deve ser seca, isenta de contaminantes qumicos, e sua produo e seu armazenamento
devem ser feitos de forma a minimizar o acesso de roedores, insetos e outros animais que
possam contamin-la. As madeiras verdes possuem fortes aromas que podem afetar os
animais e at intoxic-los. A esterilizao por autoclave reduz a concentrao desses aromas
e previne esse problema, principalmente se a madeira j os possui em nveis baixos.
Temperatura
Embora a maioria dos animais de laboratrio tolere a mesma faixa de

temperatura do homem, a temperatura de salas de manuteno em biotrios
deve ser mantida para atender as condies ideais da espcie. Amplas variaes de temperatura so mais prejudiciais que uma temperatura constante prxima a um dos extremos da faixa de tolerncia. Os animais de laboratrio, em
sua maioria homeotrmicos,29 tentam manter a temperatura corporal constante.
A mudana na temperatura ambiental resultar em alteraes compensatrias
que afetaro o padro metablico, a circulao, a atividade e o comportamento. Deve ser lembrado que a temperatura no interior das gaiolas, normalmente,
superior em alguns graus do ambiente externo e varia em funo das
dimenses da gaiola e do nmero de animais alojados.
Ventilao
Os animais esto constantemente perdendo calor, umidade, dixido de

carbono, entre outros produtos metablicos, que iro se acumular no ambiente
caso a sala no possua ventilao adequada. As trocas de ar tm por propsito
suprir o ambiente de oxignio, remover o calor produzido pelos animais,
lmpadas e equipamentos e diluir gases e partculas em suspenso. O ambiente, para a maioria dos animais, requer de 15 a vinte trocas de ar (volume do
Animais homeotrmicos ou de sangue quente. a caracterstica de alguns animais que lhes permite
manter sua temperatura corporal relativamente constante causa de uma alta taxa metablica gerada pela
intensa queima de energia nas clulas.
29
ambiente por hora), visando a eliminar odores e gases e auxiliando a manter a

temperatura e umidade. Se a troca de ar insuficiente, a densidade animal na
sala deve ser reduzida e as gaiolas limpas com maior frequncia. Porm, essa
deve ser uma soluo provisria.
Umidade relativa (UR)
A maioria dos animais de laboratrio compensa o excesso de calor

atravs do aumento do ritmo respiratrio. Contudo, se o ar inspirado possui
alto ndice de umidade, afetar a capacidade de o animal ajustar sua temperatura corporal. A umidade relativa de 55+/-5% recomendada para a grande
maioria dos animais e a tolerncia est na faixa de 30 a 70% UR. A umidade
relativa no interior das gaiolas em torno de 10% maior que no ambiente.
Flutuaes e extremos na UR podem propiciar o aparecimento de doenas,
principalmente respiratrias, bem como alteraes no consumo de rao e
gua. A umidade relativa a maior responsvel pela rapidez de evaporao de
gotculas e sua disperso, e estas gotculas em suspenso influenciam na sobrevivncia de microrganismos.
Luz
A regularidade do fotoperodo30 importante para a manuteno da

normalidade comportamental dos animais (por exemplo, sincronizao do
ciclo circadiano,31 ciclos reprodutivos, efetividade de drogas). Variaes no
fotoperodo (claro/escuro), em funo da durao dos dias ou das estaes
Fotoperodo representa o comprimento de um dia e consiste na durao do perodo de luz de um
determinado ambiente.
31
Ciclo circadiano ou ritmo circadiano. Designa o perodo de aproximadamente 24 horas sobre o qual
se baseia todo o ciclo biolgico dos animais e de qualquer outro ser vivo, que so influenciados pela
luminosidade (fotoperodo ou luz solar).
30
do ano, influenciam o comportamento reprodutivo, o tempo de durao do

parto e os hbitos comportamentais. Animais mantidos em ambiente com
iluminao artificial requerem controle automtico do fotoperodo. E recomendado 12 horas de luz e 12 horas de escurido ou 10 horas de luz e 14
horas de escurido. A luminosidade deve possuir caracterstica mais prxima
possvel da luz natural, propiciar boa visibilidade e ser uniforme. Ressalta-se
que vrias espcies de animais de laboratrio, como os camundongos, ratos,
hamsters e o macaco da noite tm hbitos noturnos.
Rudo
As instalaes devem ser planejadas visando a evitar a propagao de

sons naturais, pois podem causar distrbios por estresse. Sons de alta intensidade ou sbitos so mais prejudiciais que os habituais e rotineiros. De alta
significncia so os rudos ultrassnicos, que os humanos no percebem, porm
so escutados por vrias espcies animais (camundongos e morcegos).
Controle da qualidade animal
Um laboratrio de controle de qualidade animal tem como objetivo

definir padres e garantir a qualidade de animais mantidos e criados em
biotrios. A sade e o bem estar dos animais, assim como a classificao
de seus padres, so obtidos atravs de um programa de monitoramento
de rotina e prticas sanitrias rigorosas. O controle sanitrio e gentico s
ser eficaz caso o biotrio utilize tcnicas de criao e manuteno, mantendo os animais livres de patgenos (vrus, bactrias, fungos e parasitas) e
geneticamente estveis. 32 Os mtodos utilizados para certificar a qualidade
sanitria de uma colnia podem incluir o monitoramento sanitrio de rotina
e a checagem ocasional ou o levantamento microbiolgico.
32
Padro gentico que caracteriza a linhagem.
Monitoramento sanitrio Realizao de testes de anlises laboratoriais: bacteriolgicas, parasitolgicas, virolgicas,

micolgicas e anatomopatolgicas. Estas anlises devem ser
realizadas pelo menos trimestralmente, tendo como principal objetivo evidenciar a presena de agentes patognicos
em determinada colnia.
Checagem ocasional Pode ser realizada apenas quando identificarmos algum achado clnico. So feitos testes
especficos para determinado patgeno de acordo com as
suspeitas clnicas.
Levantamento microbiolgico Testes para a obteno
de informaes referentes prevalncia da infeco entre
os animais. Os resultados refletem o estado sanitrio da
colnia em determinado perodo, ou seja, apenas no momento em que foram realizados.
O monitoramento sanitrio animal deve ser elaborado atravs de um
programa de diagnstico que tem como principais objetivos:
Monitorar as condies de sade dos animais que tenham sido inseri-
dos nas instalaes.

Monitorar possveis surtos epidmicos nas colnias.
Determinar parmetros fisiolgicos e epidemiolgicos de espcies ani-
mais e linhagens especficas.

Diferenciar novas mutaes.
Identificar possveis zoonoses.
Para a implantao deste programa de controle da qualidade, o primeiro

passo selecionar os patgenos (tabela 7 e 8) que sero pesquisados,
levando em considerao fatores como limitaes das instalaes, prevalncia
das doenas, potencial patognico e confiabilidade dos mtodos de diagnsticos aplicados.
O ideal a pesquisa de todos os agentes primrios, porm, algumas

instituies realizam o monitoramento apenas de alguns agentes considerados
relevantes de acordo com suas instalaes e outras pesquisam, alm dos agentes primrios, os agentes oportunistas. Considerveis prejuzos nas pesquisas
podem ser causados por microrganismos oportunistas, sendo estes manifestados apenas em determinadas condies, como estresse animal, uso de linhagens suscetveis, coinfeces, entre outras.
Agentes primrios So parasitas, bactrias, vrus ou fungos que tm um potencial significativo para causar doenas.
Estes patgenos podem acarretar grandes interferncias em
pesquisas. Exemplos de agentes primrios: vrus da hepatite de camundongos, vrus Sendai, coronavrus, vrus Kilham,
vrus da coriomeningite linfoctica, Salmonella sp. e
Citrobacter freundii.
Agentes oportunistas So normalmente bactrias e fungos comuns em animais de laboratrio ou em seres humanos. Possuem baixa probabilidade de causar doenas clnicas, porm elevado potencial de latncia. Exemplos de
agentes oportunistas incluem Klebsiella pneumoniae ,
Pasteurella pneumotropica , Pseudomonas aeruginosa,
Staphylococcus aureus e Streptococcus pneumoniae.
Outra etapa importante para a implantao do controle o clculo da
amostragem que ser submetida avaliao no laboratrio. O tamanho desta
amostragem poder ser calculada utilizando a seguinte frmula:
n= log 0,05/log N
n = nmero de amostras, N = % de animais no infectados na prole e log 0,05 =
95% nvel de confiabilidade dos testes.
Em mdia, as doenas de animais criados em biotrios possuem uma

morbidade mnima em torno de 30 a 35%.
O uso desta frmula impe uma srie de pressupostos:
A populao estudada deve possuir no mnimo cem animais em suas
colnias.
A escolha dos animais que sero submetidos ao monitoramento dever
ser aleatria, sem predileo por sexo ou outros fatores, para que no
influencie o resultado final dentro do grupo.
A percentagem de animais infectados (morbidade) por determinado
microrganismo deve ser conhecida.

A maioria das doenas virais em uma populao fechada trar morbidade de
pelo menos 30 a 35%. Por exemplo, se determinado vrus tem 80% de prevalncia
de infeco em colnias de camundongos, precisaremos de apenas trs animais para
realizar o diagnstico da ocorrncia do vrus na colnia (Tabela 6).
Tabela 6 Tamanho mnimo da amostra para deteco de uma infeco em
determinada colnia com no mnimo cem animais
Incidncia da infeco
populao (%)
90
80
70
60
50
40
30
20
10
* Limite de confiana de 99% (a=0,01).
Amostra
(quantitativo)*
2
3
4
5
7
9
13
21
44
Para minimizar erros diagnsticos, o ideal seria utilizar uma amostragem

em torno de dez a doze animais de cada sala de criao de colnias, tanto de
fundao como de criao, com intervalos trimestrais ou semestrais, dependendo da espcie animal ou do agente etiolgico. Existe a possibilidade de
utilizao dos chamados animais sentinelas: animais imunocompetentes que
devem ser introduzidos na colnia e mantidos para o monitoramento por no
mnimo quatro semanas.
Controle virolgico
Um programa de boas prticas laboratoriais, integrado a um sistema de

garantia de qualidade, deve complementar o uso de metodologias adequadas
para o monitoramento virolgico de colnias. Estas metodologias podem ser
classificadas em:
Metodologias diretas Quando se realiza a pesquisa a partir do
material clnico colhido de produtos antignicos ou de partculas virais

propriamente ditas. Ex.: microscopia eletrnica, imunohistoqumica,
imunoensaioenzimtico para pesquisa de antgenos virais e
imunofluorescncia direta.
Metodologias indiretas So aquelas onde pesquisamos anticorpos
contra determinados vrus. Entre os mtodos de escolha esto os testes

sorolgicos. Existem diversas metodologias para realizao desta pesquisa, dentre elas: testes imunoensaioenzimticos (Elisa enzima linked
immunosorbent assay), testes de imunofluorescncia indireta (IFI indirect
immunofluorescence), testes de inibio da hemaglutinao (IH),
immunoblot33 (Western Blot) e, reao da cadeia da polimerase (PCR
Polymerase Chain Reaction).
Um resultado positivo automaticamente requer um curso de ao para
confirmar a presena do agente atravs de testes confirmatrios, com o aumen33
O termo imuno refere-se natureza da reao de deteco (anticorpo-antgeno) e o termo blot,
ao sistema utilizado para imobilizar o antgeno ( blot, do ingls: impresso, borro).
to da amostragem ou repetio dos testes. importante salientar que o agente

etiolgico pode ter sido introduzido na colnia muito antes dos sinais clnicos
ou da morte de algum animal. Diante deste fato, podemos concluir que a
aplicabilidade da avaliao diagnstica contnua de extrema importncia.
Tabela 7 Principais vrus que afetam animais de laboratrio
Agente etiolgico
Espcie afetada
Sinais clnicos
Vrus Sendai
Famlia Paramyxoviridae
Hamster, camundongos e Acomete o trato

respiratrio.
ratos
Disseminao
rpida. Dispineia e
estertores, perda de
peso, reduo no
tamanho da prole,
gestaes
prolongadas, alta
mortalidade em
recm-nascidos e em
filhotes at o
desmame.
Vrus da Hepatite
de Camundongos
(MHV)
Famlia Coronaviridae
gnero Coronavrus
Camundongos
Transmisso
Perodo de incubao
Observaes
A sua
transmisso
ocorre por
aerossis34 e
por contato
direto.
7 a 14 dias
Parainfluenza I
Na maioria dos casos Via oral-fecal.

assintomtica.
Urina com colorao
amarronzada, manchas
na regio perianal,
ictercia,35 espasmos,
incoordenao e
morte.
Possui grande
capacidade de
disseminao. Podem
surgir sintomas
dependendo da cepa
viral e do estado do
animal (linhagem,
imunossupresso,
estresse, idade etc.).
Duas formas principais
de doena,
dependendo do
tropismo da cepa viral.
Padro respiratrio:
geralmente
assintomtico. Padro
entrico: dissemina-se
alm do intestino para
outros rgos
abdominais (fgado e
ndulos linfticos
abdominais). Diarreia e
alta mortalidade em
animais jovens.
Algumas cepas podem
disseminar para o
crebro.
Aerossis: constitudos por partculas com tamanho menor ou igual a 5 m. A proteo respiratria para as
doenas de transmisso area por aerossol obtida atravs da seleo e do uso dos EPI adequados. Estertores
(estalos ou crepitaes) so pequenos sons de estalidos, borbulhantes ou do tipo chocalho, que se ouvem numa
parte do pulmo. Eles ocorrem quando o ar se move atravs das vias respiratrias repletas de lquido.
35
Ictercia: colorao amarelada nas membranas mucosas e nos olhos, causada por excesso de bilirrubina no sangue.
34
Espcie afetada
Sinais clnicos
Vrus da
Sialodacrioadenite
(SDAV)
Famlia Coronaviridae
gnero Coronavrus
Agente etiolgico
Ratos
O vrus afeta as
Contato
glndulas salivares e
direto e
lacrimais, linfonodos
aerossis.
cervicais, timo e
mucosa do trato
respiratrio. Os sinais
clnicos, quando
presentes, so:
fotofobia, leses
oculares, edemas no
globo ocular,
lacrimejamento alterado
e, em alguns casos,
edema na regio
cervical. Em animais
lactentes,36 pode
ocorrer conjuntivite com
fotofobia e exsudato
ocular. Os sintomas
mais graves so: edema
cervical, espirros,
descarga nasal,
descarga ocular e lcera
de crnea.
Transmisso
Vrus da
Coriomeningite
Linfoctica (LCMV)
Famlia Arenaviridae
gnero arenavrus.
Camundongos,
hamster, coelhos,
cobaias, primatas nohumanos.
Os sinais clnicos variam

de acordo com a cepa
viral, linhagem e idade
dos animais. Quando a
infeco adquirida
ainda no tero ou
poucos dias aps o
nascimento, os animais
sofrem um retardo no
seu crescimento,
desnutrio,
irritabilidade, ascite e
morte. Apesar da forma
mais comum ser
assintomtica, em
hamster observamos
glomerulonefrite
progressiva e reduo
de seu tamanho. Em
humanos, a doena se
manifesta com febre,
mialgia, nuseas,
vmito, fotofobia e
tosse; ocasionalmente
rash cutneo,
linfoadenopatia, otite,
delrio e amnsia.
Perodo de incubao
Observaes
Alta morbidade e
baixa mortalidade.
Possui importncia
significativa por se
tratar de uma
zoonose.
Lactentes: Mamferos jovens, sem desmame. Refere-se aos animais sob proteo que so alimentados
pela me biolgica, me adotiva ou por mamadeira.
36
Agente etiolgico
Espcie afetada
Sinais clnicos
Transmisso
Vrus da
Desidrogenase Lctica
Famlia Togaviridae
Camundongos
A atividade da
enzima desidrogenase
lctica (LDH) no
plasma aumenta 24
horas aps o contato
com o vrus, com
picos de at dez
vezes mais aps 7296 horas,
permanecendo
elevados por toda a
vida do animal.
Embora os
camundongos
eliminem o
vrus pela urina,
saliva, fezes e
leite, os ttulos
virais decaem
aps a primeira
semana da
infeco,
diminuindo
consideravelmente o risco
de transmisso.
Perodo de incubao
Observaes
O diagnstico
pode ser
realizado atravs
da anlise
bioqumica dos
animais, podendo
encontrar elevao
em todas as
enzimas
plasmticas alm
do aumento
considervel da
LDH.
Vrus da
Encefalomielite
Murina (Vrus
Theiler)
Famlia Picornaviridae
gnero Enterovrus.
Camundongos e ratos
Os sinais clnicos
Fecal - oral.
so inaparentes e
presumidamente
causados por cepas
menos virulentas. Os
camundongos
afetados apresentam
paralisia flcida dos
membros. A leso
tpica da doena a
poliomelite no
supurativa com
necrose e
neuronofagia. As
cepas mais virulentas
causam movimentos
em crculos,
vagarosos,
hiperexcitabilidade,
convulses,
tremores, paralisia
flcida nos membros
e alta mortalidade.37
A infeco
normalmente
adquirida em 3 a 6
semanas de idade.
O vrus tem sido
demonstrado nas
fezes por at 53
dias aps infeco,
apresentando uma
taxa de mortalidade
baixa.
Ectromelia vrus
Famlia Poxviridae
Gnero
Orthopoxvirus.
Camundongos
Aproximadamente
A transmisso
dez dias aps a
ocorre atravs
infeco, leses
de fissuras na
caractersticas se
pele.
desenvolvem na
pele, levando a
liberao viral para o
ambiente. Estes
tambm podem ser
eliminados nas
excrees da
orofaringe, do trato
genital e do
intestino. As leses
na doena aguda
incluem necrose do
bao, linfonodos,
timo e fgado.
Supurativa: formao ou acmulo de secreo purulenta. Neuronofagia: neurnios sendo fagocitados

por macrfagos do tecido nervoso. Paralisia flcida: perda do tnus muscular.
37
Agente etiolgico
Espcie afetada
Sinais clnicos
Transmisso
Herpesvirus simiae
Primatas no
humanos.
Na sua grande
maioria, os animais
so assintomticos.
Em alguns casos,
podem causar
leses nas
mucosas,
semelhantes a
lceras aftosas
presentes no dorso
da lngua, lbios
ou face, parecidas
com as causadas
pelo vrus herpes
simplex.No
homem,
conjuntivite ligeira
e descarga nasal.
Tambm podem ser
observadas doenas
neurolgicas nos
casos mais graves.
Contato
direto. Para o
homem,
ocorre atravs
de mordidas,
arranhes,
aerossis ou
manuseio
inadequado
de tecidos
contaminados.
Perodo de incubao
Normalmente, a
doena em
primatas dura, em
mdia, de sete a
14 dias. O vrus
permanece latente
e pode reativar
de forma
espontnea ou
quando os
animais so
submetidos a
condies de
estresse.
Observaes
O vrus enzotico
em Macaco
Rhesus (Macaca
mulatta), Macaco
Cynomolgus
(Macaca
fascicularis), e
outros primatas
no humanos. O
vrus pode ser
isolado de saliva,
sangue, urina,
fezes e rim. Nos
seres humanos,
esta doena tem
sido caracterizada
por uma variedade
de sintomas que
geralmente
ocorrem dentro de
um ms de
exposio. Os
sintomas incluem:
leses vesiculares
localizadas na
pele ou nas
proximidades do
local da
inoculao,
sintomas
neurolgicos,
paralisia
ascendente e, em
ltima instncia,
encefalite. A
morte
normalmente
ocorre de trs a
21 dias aps o
aparecimento dos
sinais clnicos.
Controle bacteriolgico e micoplasma
O conhecimento da microbiota do modelo animal utilizado em pesquisa

importante para definir seu estado sanitrio.
Tabela 8 Principais bactrias e micoplasma que afetam animais de laboratrio
Agente etiolgico
Espcie afetada
Caractersticas
Transmisso
Bacillus piliformis Responsvel

pela doena de Tyzzer.
Afetam uma variedade de

animais, incluindo
camundongos, ratos,
hamsters, coelhos e primatas
no-humanos (Rhesus).
A transmisso ocorre aps

So bacilos gram negativos,
intracelulares. Clulas mononucleares ingesto de esporos pelas
infiltradas e neutrfilos so observados fezes (transmisso fecal-oral).
em reas afetadas, mesmo podendo
no ser observado o bacilo nas leses.
Leses da doena so caracterizadas
por necrose heptica, hepatite, colite
e miocardite. As leses entricas so
mais graves em coelhos e hamsters.
Bacilo associado aos clios

respiratrios (CAR Bacillus)
Causam doena respiratria
crnica.
Ratos, camundongos,
So bacilos gram negativos. A
Atravs de fmites e contato
coelhos, hamsters e cobaias. mortalidade na maioria dos casos est direto.
associada coinfeco com
Mycoplasma e Vrus Sendai. As
leses causadas por esta bactria se
localizam no trato respiratrio superior.
A bactria pode ser visualizada entre
os clios do epitlio respiratrio.
Devido dificuldade em isolar as
bactrias em meios comuns, o ideal
para o diagnstico a pesquisa de
anticorpos atravs de tcnicas de
sorologia ou a pesquisa do bacilo pela
reao em cadeia da polimerase
(PCR).
Corynebacterium kutscheri
Ratos, camundongos,
hamsters e cobaias.
So cocos gram positivos. Em

Contato direto com urina e
roedores, pode causar o surgimento
fezes contaminadas.
de abscessos nos tecidos, atingindo
tmpano e ouvido mdio. Quando sua
forma epizotica, os ratos podem
desenvolver embolia pulmonar. Em
camundongos, a doena pode evoluir
para articulaes, fgado e rim. O
diagnstico se d atravs da observao
direta das bactrias em cultivo dos
abscessos com meios apropriados (ex.:
gar sangue, tripticase soy com 5%
de sangue de carneiro etc.). A
pesquisa de anticorpos atravs de
sorologia indicada devido ao baixo
custo e fcil manuseio. Outra forma
atravs de tcnicas moleculares.
Agente etiolgico
Espcie afetada
Transmisso
Como se trata de uma zoonose, a

contaminao pode ter sido levada
pelo homem aos animais. As formas
clnicas so as dermatites ulcerativas,
abscessos e pododermatites (dermatite
que afeta apenas as patas dos
animais). O diagnstico depende do
isolamento e da identificao
bacteriana em material das leses,
utilizando meios de cultivo seletivos
de forma que outros microrganismos
no interfiram nos resultados.
Staphylococcus aureus
Mycoplasma pulmonis
Caractersticas
Ratos, camundongos,
A transmisso ocorre por
Principal agente responsvel pelas
aerossis e por via
hamsters, coelhos e cobaias. doenas respiratrias crnicas dos
ratos. A infeco assintomtica a
transplacentria.
mais comum. Os sinais clnicos podem
ser: otite mdia e interna, que leva o
animal a movimentar-se em crculos,
rinite com espirros e descarga nasal
mucosanguinolenta e pneumonia com
dispneia e debilidade progressiva.
Pode infectar o trato genital das
fmeas, causando baixa fertilidade e
reduo de peso da prole. O
diagnstico pode ser feito pelo
isolamento atravs de material do trato
respiratrio, sorologia ou tcnicas de
reao em cadeia da polimerase.
Somente a seleo de animais livres
de micoplasma, identificados por
monitoramento contnuo, pode permitir
a obteno de estoques negativos.
Controle parasitolgico
Os animais de laboratrio criados e mantidos nas colnias em condies convencionais so comumente afetados por uma grande variedade de
ectoparasitas e endoparasitas (tabela 9). De um modo geral, estes parasitas
atuam comprometendo a sade e interferindo em trabalhos realizados com os
animais. aconselhvel promover medidas preventivas antiparasitrias e mantlas com as diferentes espcies criadas em biotrios. H a necessidade de
fazer exames peridicos, verificando o aspecto e a sanidade, alm de se
manter os animais sob condies sanitrias controladas. A presena de parasitas na colnia influencia na fisiologia dos animais e na suscetibilidade a
outros agentes infecciosos.
O parasitismo geralmente assintomtico, mas, dependendo da intensidade, produz uma ampla variedade de sinais clnicos. Os ectoparasitas (tabela
10) podem causar prurido, dermatite, perda ou rarefao da pelagem nas
regies afetadas, pelos arrepiados, descamao epidrmica e ulceraes de
pequena ou grande extenso, reduo nos ndices de reproduo e
consequentemente perdas econmicas, alm da interferncia nos resultados de
pesquisa. Os sinais clnicos causados pelos endoparasitas incluem diminuio
da taxa de crescimento, irritao anal, prolapso retal, intussuscepo intestinal,
enterite catarral, granuloma heptico, queda no ganho de peso, acmulos de
gases, distenso abdominal, fezes amolecidas ou aquosas, constipao intestinal, pelos arrepiados, colite, perdas econmicas ligadas diminuio da taxa
de produtividade das colnias e interferir nos resultados.
O tratamento das ectoparasitoses em animais de laboratrio baseia-se na
aplicao de substncias qumicas solveis sob a forma de banhos de imerso,
diretamente sobre a pelagem do animal, misturadas cama pela administrao
subcutnea e na gua dos bebedouros. O tratamento de helmintos pode ser
realizado com o uso de vrias drogas anti-helmnticas, isoladas ou combinadas.
Os anti-helmnticos so administrados por via oral, adicionados rao ou gua.
Exames endoparasitolgicos
O exame endoparasitolgico constitui um valioso recurso para o diagnstico das doenas parasitrias. Os parasitas intestinais so habitualmente
identificados por sua morfologia ao microscpio. Este exame consiste na pesquisa de cistos, trofozotos e oocistos de protozorios, ovos, adultos e larvas
de helmintos.
Cuidados com as amostras de fezes:
As amostras fecais devem ser recentes.
Preferencialmente coletadas diretamente da ampola retal do animal.
Em situaes especiais, fezes frescas podem ser coletadas do fun-
do da gaiola.
Amostras devem ser coletadas em frasco limpo e seco.
Examinar as amostras de fezes macroscopicamente e microscopicamente.
Processar as amostras o mais rpido possvel.
As amostras que demorarem a serem analisadas devem ser colocadas
em conservantes qumicos.
Identificar as amostras com espcie animal, idade, sexo e hora da
coleta.
Para animais que no podem ser retirados da colnia, recorre-se a tcnicas onde a amostra no requer eutansia. A tcnica da fita celofane para
pesquisa de ovos de Syphacia spp. uma delas.
Tcnica da fita celofane adesiva:
Realizar a conteno do animal e, com fita adesiva celofane, fazer uma
impresso na regio perianal.

Colocar a fita com face adesiva voltada para a lmina de microscopia
devidamente identificada.
Observar a lmina ao microscpio usando a objetiva de menor
aumento (10x).
Os animais de pequeno porte enviados ao laboratrio so submetidos
ao exame direto da mucosa intestinal. Esta tcnica possibilita um diagnstico
amplo, pois se obtm amostra de todas as pores do intestino.
Exame direto da mucosa intestinal:
Aps eutansia, fazer uma inciso pr-retro-umbilical na linha mediana
do abdome.
Retirar intestinos, delgado e grosso, e colocar em placas de Petri
identificadas.
Adicionar soluo salina (NaCl a 0,85%).
Abrir os intestinos longitudinalmente.
Realizar o exame macroscpio, atravs de observao da placa de Petri
sob um fundo preto, a fim de facilitar a visualizao dos helmintos.

Poro do material que est na placa colocada entre lmina e lamnula
e observada ao microscpio ptico.

Para a pesquisa de oocistos de Eimeria stiedae em coelhos utilizado o
mtodo de exame direto da bile.
Exame direto da bile:
Aps a eutansia, realizar a inciso pr-retro-umbilical no abdome do
coelho.
Retirar a vescula biliar, colocar em placa de Petri e abrir para expor o
seu contedo.
Adicionar soluo salina a 0,85%.
Preparar lmina de microscopia com este contedo.
Observar em microscpio ptico.
Amostras de fezes de roedores, coelhos, ovinos e primatas no-humanos podem tambm ser testadas pelo exame direto, em fezes frescas pela
diluio de pequena poro da matria fecal em soluo fisiolgica e identificao do material ao microscpio. No mtodo de Willis (flutuao), misturada
pequena quantidade de fezes soluo saturada de cloreto de sdio ou
acar. Para complementar o diagnstico parasitolgico em primatas no-humanos, utilizada a tcnica de sedimentao espontnea de Dennis-Stone &
Swanson modificada, onde a amostra fecal diluda em soluo de detergente neutro.
H muitos outros mtodos coproparasitolgicos que podem ser utilizados, permitindo detectar parasitas nas fezes dos animais de laboratrio.
Tabela 9 Principais endoparasitas de animais de laboratrio
Espcies
Hospedeiro
Habitat
Caractersticas
Aspiculuris tetraptera
Camundongos, ratos e
hamsters
Nematdeo
encontrado no ceco
e clon
Os vermes adultos apresentam asa cuticular cervical.

As fmeas medem de 3,0 a 4,0 mm de comprimento
e os machos entre 2,0 a 4,0 mm de comprimento.
Seus ovos so elipsoides com presena de uma massa
de blastmeros visveis. O ciclo de 23 dias, os
ovos so observados nas fezes e necessitam de seis
dias para embrionao.
Syphacia obvelata
hamsters
Ceco e clon
o parasita que promove a oxiurase em

camundongos, normalmente no patognicos. A
infeco de animais de laboratrio ocorre aps a
ingesto de ovos embrionados. Os ovos alongados
apresentam como caracterstica achatamento em um dos
lados, em forma de D, medindo entre 72 a 82 por
25 a 36 micrmetros. A fmea mede 3,4 a 5,8 mm
de comprimento e deposita os ovos no clon ou na
regio perianal. O macho menor e mede 1,1 a 1,5
mm de comprimento e possui trs dilataes, chamadas
mameles, na face ventral tero posterior do corpo.
Os vermes adultos apresentam dilatao cuticular
ceflica. Apresentam um ciclo direto com um perodo
de oito a 15 dias.
Syphacia muris
Ratos
Ceco e clon
As fmeas medem entre 2,8 a 4,0 mm e os machos

entre 1,2 a 1,3 mm de comprimento. Os ovos so
similares aos de Syphacia obvelata.
Passarulus ambiguus
Coelhos
Oxiurdeo do ceco e
clon
Podem ser encontrados em grandes quantidades. Os

machos medem de 4,0 a 5,0 mm em seu
comprimento e as fmeas de 9,0 a 11,0 mm.
Possuem corpo semitransparente o que facilita a
visualizao do bulbo esofgico. O ovo apresenta
parede fina, com achatamento lateral em um dos seus
lados, medindo entre 95 e 103 por 43 micrmetros.
Seu ciclo de vida direto com 55 a 65 dias e a
infeco por ingesto do ovo embrionado.
Paraspidodera uncinata
Cobaias
Parasita do ceco e
clon
As fmeas adultas medem 18,4 a 20,9 mm de

comprimento e os machos, 16,3 a 17,6 mm.
Ascaris lumbricoides
Primatas
Intestino delgado
As fmeas adultas medem entre 30 a 40 cm de

comprimento e os machos, 15 ou 30 cm. Os ovos
frteis medem entre 60 a 45 micrmetros e os ovos
infrteis, mais alongados, entre 80 a 90 micrmetros
de comprimento.
Trichuris trichiura
Primatas
Ceco
Hyminolepis nana
Camundongos, ratos,
hamsters e primatas
Intestino
Os vermes adultos medem entre 3 a 5 cm de

comprimento. Os ovos variam de tamanho entre 50 e
55 micrmetro de comprimento por 22 ou 23
micrmetro de largura.
Essa espcie tambm muito encontrada no homem. O
verme adulto tem comprimento que varia entre 2 e 4 cm e
possui esclex pequeno e globoso com presena de vrios
acleos dispostos em torno do rostro. Os ovos tm formato
oval ou arredondado e medem de 40 a 50 micrmetros de
dimetro. Causa doenas ao homem, podendo ser infectado
pela manipulao dos animais.
Espcies
Hospedeiro
Habitat
Caractersticas
Hyminolepis diminuta
Camundongos, ratos
e hamsters
Intestino delgado
Conhecido como a tnia do rato. O verme adulto

mede entre 10 e 20 cm de comprimento e possui um
esclex pequeno, com quatro ventosas, desprovido de
acleos. Os ovos so esfricos, com casca dupla, e
medem de 70 a 80 micrmetros de dimetro.
Balantidium caviae
Cobaias
Ceco e clon
Protozorio ciliado encontrado comumente em animais

convencionais. Aparentemente no patognicos. A
forma trofozota mede entre 55 a 115 micrmetros de
comprimento por 45 a 73 micrmetros de largura e a
forma cstica, entre 40 a 50 micrmetros de largura.
Duodeno, fgado
e vias biliares
A coccidiose causada por protozorios patognicos

que costumam ter localizao bem especfica no
organismo do hospedeiro. Causam doenas graves em
diversas espcies animais. O gnero Eimeria
caracteriza-se por apresentar no interior dos oocistos
quatro esporocistos, cada um deles com dois
esporozotas.
Eimeria stiedae
Coelhos
Eimeria flavescens,
E.irresidua,
E.neoleporis,
E.intestinalis,
E.magda (So as
mais patognicas)
Eimeria perforans
Intestino delgado
Eimeria media
Intestino grosso
e delgado
Eimeria falciformis
Camundongo
Eimeria caviae
Cobaia
Eimeria nieschulzi e E.
separata
Ratos
Balantidium coli
Primatas
Intestino
Encontrado nas fezes, os trofozotos medem entre 30

e 150 m de comprimento por 25 a 120 m de
largura. Os cistos so ovoides ou esfricos e medem
entre 40 e 60 m de dimetro.
Cyathodinium cunhae
Cobaias
Ceco e clon
Ciliado, no patognico. Sua forma trofozota mede

entre 10 a 36 m por 9 a 24 m. Caracteriza-se
pela forma afunilada.
A nica forma encontrada a trofozota.
Tritricomonas muris
Camundongos, ratos,
cobaias e hamsters
Clon e ceco
Protozorio com uma forma intermediria de

pseudocisto e trofozota. O trofozota mede entre 16
a 26 m de comprimento por 10 a 14 m de largura.
O perodo de desenvolvimento de trs a dez dias.
Spironucleus muris
Ratos, hamsters,
camundongos e vrios
roedores selvagens ao
redor do mundo
hamsters
Intestino delgado
e ceco
Protozorio anteriormente conhecido como Hexamita

muris. Apresenta aspecto piriforme, simetria bilateral,
mede de 7 a 9 m de comprimento por 2 a 3 m de
largura.
um protozorio flagelado causador da giardase. O
trofozota mede entre 7 a 13 m comprimento por 5
a 10 m de largura. O ciclo leva em torno de 5 a
15 dias. G. muris se reproduz por participao binria
ou mltipla.
Giardia muris
Intestino grosso
Intestino
Poro anterior do
intestino delgado
Espcies
Hospedeiro
Habitat
Giardia caviae
Cobaias
Giardia intestinalis
Primatas no-humanos
Entamoeba muris
hamsters
Cecon e clon
Entamoeba caviae
Cobaias
Ceco
Entamoeba cuniculi
Coelhos
Ceco e Clon
Poro anterior do
intestino delgado
Caractersticas
No patognica. A forma trofozota mede entre 8 a
15 m por 6 a 10 m de largura.
Apresenta a forma cstica e trofozota. A forma
trofozota mede 12 a 15 m de comprimento por 6 a
8 m de largura. Os cistos medem 8 a 12 m e 7 a
10 m de comprimento e contm quatro ncleos.
Espcie no patognica. A forma trofozota mede de 8
a 30 m de comprimento e os cistos de 9 a 20 m
de dimetro. Podem conter oito ncleos.
A forma trofozota mede de 10 a 20 m de
comprimento e o cisto de 11 a 17 m de dimetro.
No patognica, o trofozota mede de 12 a 30 m
de comprimento e os cistos de 7 a 21 m de
dimetro.
Exames ectoparasitolgicos
O exame de ectoparasitas consiste na identificao dos artrpodes

ectoparasitas de interesse veterinrio, encontrados na pele dos animais de
laboratrio convencionais. A contaminao dos animais convencionais por
ectoparasitas problema de importncia sanitria e de difcil controle. Algumas
espcies podem atuar como vetores biolgicos de outros agentes infecciosos.
Devido as suas caractersticas anatmicas e alimentares, os caros que mais
frequentemente acometem os animais de laboratrio ficam confinados ao hospedeiro e aderem firmemente pelagem. Os mtodos a serem empregados
consistem em exame de inspeo, com observao macroscpica do animal no
intuito de detectar alguma evidncia relacionada com ectoparasitas.
Procedimentos:
Para o diagnstico dos ectoparasitas em animais de laboratrio, vrias
tcnicas podem ser utilizadas:
Os cadveres dos animais so colocados em decbito ventrais e
expostos iluminao de uma lmpada incandescente, mantendo

uma distncia de aproximadamente 30 cm, para induzir a migrao dos ectoparasitas para o dorso do animal. Aps vinte minutos, com o auxlio de microscpio estereoscpio, toda pelagem
vistoriada. Os ectoparasitas encontrados so removidos do corpo

hospedeiro e imersos entre lmina e lamnula com gota de lquido
de Hoyer (clarificador) para serem identificados ao microscpio
ptico.
Tambm se pode colocar o cadver, logo aps sua morte, no
refrigerador durante trinta minutos e posteriormente temperatura

ambiente por dez minutos ou mais. Os caros abandonam o
corpo do hospedeiro assim que a temperatura comea a cair,
deixam as camadas mais profundas do pelo e migram para as
pontas. Observar o cadver em microscpio estereoscpio.
Em um papel preto, colocar a carcaa do animal. Este papel
ento margeado com fita celofane com o lado colante voltado

para cima, evitando, desta maneira, que os parasitas fujam ao
tentar deixar o corpo do hospedeiro. O papel preto facilita a
observao dos artrpodes pequenos.
Outro mtodo utilizado o da fita adesiva de celofane, colo-
cando a mesma no pelo do animal e retirando-a logo depois.

Colocar em lmina de microscopia devidamente identificada e
levar ao microscpio ptico.
No caso de raspado de pele, este deve ser profundo e a regio
escolhida prxima de uma leso. Os pelos so removidos com

lmina de bisturi, untada com glicerina ou leo lubrificante. O
material do raspado colocado imerso em leo entre lmina e
lamnula e observado em microscpio ptico.
Para a pesquisa de caro do canal auditivo externo, remove-se
com swab o cerume e se examina ao microscpio.

Identificar os espcimes com chaves para classificao e livros de
referncia.
Tabela 10 Principais ectoparasitas de animais de laboratrio

Espcies
Hospedeiro
Habitat
Caractersticas
Chirodiscoides caviae
Cobaia
Pelo
Cheyletiella parasitivorax
Coelho
Pelo e corpo
Demodex aurati
Hamster
Folculos e sistema
pilossebceo
caro que, em infestaes macias, pode ser

encontrado por todo o corpo e pode provocar sinais
clnicos como alopecia e prurido. Fmeas e machos
apresentam o corpo alongado e medem de 300 a
500 m de comprimento.
Forma ovalada e tamanho 350 m de largura por 500
m de comprimento. Coelhos infectados com Cheyletiella
apresentam descamaes aderidas ao pelos.
caro encontrado em colnias convencionais.
Psorergates simples
Camundongo
Folculos e glndulas Os caros e seus detritos acumulam-se nas invaginaes

foliculares e aparecem pequenos ndulos brancos sobre
sebceas
a pele das regies da cabea e do pescoo. Mede de
90 a 150 m. De ocorrncia rara.
Myobia musculi
Camundongo
Pelagem
um caro cujas fmeas medem aproximadamente entre

400 a 500 m e os machos, de 285 a 320 m de
comprimento. O primeiro par de patas curto e
modificado para a aderncia aos pelos. Os ovos so
ovais, com 200 m de comprimento, e ficam aderidos
aos pelos. M. musculinus localiza-se preferencialmente na regio da cabea, d pescoo e da nuca. A
transmisso se d por transferncia direta.
Myocoptes musculinus
Camundongo
Pelo
Psoroptes cuniculi
Coelho
Conduto auditivo
externo
o ectoparasita mais comum em camundongo de

laboratrio. A fmea apresenta o corpo oval-alongado,
medindo cerca de 300 m de comprimento por 130
m de largura e o macho tem o corpo menor e menos
ovalado. O terceiro par de patas do macho e o
terceiro e quarto pares de patas da fmea esto
modificados para aderncia aos pelos. Todos os
estgios ocorrem na pelagem e o ciclo completo de
vida de aproximadamente 14 dias.
um caro que provoca um acmulo de secreo
serosa e de crostas marrons no pavilho auricular. A
fmea arredondada, mede entre 400 a 750 m e
os machos entre 370 a 550 m. Seu ciclo de vida
de 21 dias.
Notoedres muris
Rato
o caro de mais difcil ocorrncia, responsvel pela

sarna auricular em ratos (gnero Rattus). A transmisso
por contato direto.
Radfordia ensifera
Rato
Orelha, focinho,
cauda, genitlia
externa e membros
posteriores
Pelagem
Haemodipsus ventricosis
Coelho
Corpo
Gliricola porcelli
Cobaia
Corpo
Gyropus ovalis
Cobaia
Corpo
Apresenta colorao castanha, comprimento entre 1,2

a 2,5 mm e abdome ovalado. Ciclo de trinta dias.
um vetor para a transmisso da Francisella tularensis
ao homem.
Sua forma delgada, com cabea estreita, e mede
aproximadamente 1,0 a 1,5 mm de comprimento. Em
infestaes macias, pode causar prurido, feridas e
alopecia.
Piolho de ocorrncia rara. Apresenta colorao clara,
cabea mais larga e abdome ovalado, medindo entre
1,0 e 1,2 mm.
Infesta os ratos do gnero Rattus. Apresenta dois

ganchos tarsais, presentes no segundo par de patas.
Espcies
Hospedeiro
Habitat
Caractersticas
Polyplax serrata
Camundongo
Pescoo e dorso
Polyplax spinulosa
Rato
Corpo
Piolho sugador com ciclo de vida de 13 dias.

Tamanho varia de 600 a 1.500 m. Transmite o
agente da eperitrozoonose murina.
Piolho cujos ovos maturam aps seis dias. Possui ciclo
de vida de 13 dias e pode servir como vetor para
hemobartelose murina e Brucella brucei. A transmisso
dos piolhos por contato direto.
Necropsia
A necropsia tem por definio a abertura e inspeo criteriosa de todos

os rgos e tecidos de um animal morto com o objetivo de determinar a causa
de sua morte. Por esta tcnica possvel descrever alteraes macroscpicas
em diferentes circunstncias, como processos patolgicos desencadeados por
agentes infecciosos, parasitrios, qumicos, fsicos e fisiolgicos, assim como
processos neoplsicos e anomalias congnitas. Por esse motivo, amostras oriundas de uma necropsia podem fornecer material para diversos exames complementares, como histopatolgico, parasitolgico, bacteriolgico e at mesmo
para biologia molecular. A necropsia deve ser realizada em sala prpria, devidamente iluminada e ventilada, preferencialmente em uma cabine de segurana
biolgica. Antes de iniciar o procedimento, necessrio observar o histrico
do animal, isto , dados como espcie, linhagem, peso, idade, procedncia,
sintomatologia ou estado clnico. Essas informaes so de suma importncia,
j que auxiliam o diagnstico conclusivo (causa mortis).
O animal colocado em decbito dorsal e a necropsia iniciada com um
exame minucioso da superfcie corporal, avaliando-se o estado geral do cadver e levando-se em conta seu estado nutricional, a presena de sinais externos
e as alteraes cadavricas. No exame externo, so inspecionados: pele,
pelos, unhas, mama, bolsa escrotal, cavidades naturais e mucosas da boca,
pavilho auricular, narinas, olhos, nus e genitais. A abertura do cadver
realizada por uma inciso longitudinal sobre a linha alba, partindo da regio
junto mandbula at a regio anal. A pele ento rebatida, expondo dessa
forma as musculaturas torcica e abdominal. A cavidade torcica aberta e

os rgos so expostos. primordial que sejam observados posio, tamanho, colorao e presena de estruturas estranhas ou anormais. Esta percepo deve existir durante toda a necropsia. Na cavidade abdominal, os rgos so deslocados e seccionados. Com o cadver do animal em decbito
ventral, inspecionado o sistema nervoso central. Todas as alteraes encontradas devem ser registradas.
Os rgos e tecidos que apresentem alguma alterao, assim
como ndulos e massas encontrados, so coletados. Pequenos fragmentos (0,5 cm 2) da leso, juntamente a regio aparentemente saudvel, so suficientes para a anlise histopatolgica. A fixao desse
material deve ser imediatamente aps a coleta e acondicionada em
frasco devidamente identificado. H vrias solues fixadoras, sendo a
formalina tamponada 10% a mais comumente usada, na proporo
de dez partes de soluo para cada parte de tecido a ser fixado.
Controle gentico
Atualmente, milhares de linhagens isognicas de camundongos, com

multiplicidade de finalidade, esto disponveis em biotrios do mundo todo.
O laboratrio de controle gentico animal tem como principal funo aplicar
metodologias que permitam verificar e assegurar a integridade gentica das
colnias. A integridade gentica consiste em manter a continuidade da espcie
ou das linhagens e, no caso de camundongos e ratos isognicos, garantir a
pureza da linhagem e a homogeneidade destes animais. O monitoramento
gentico auxilia na manuteno das linhagens isognicas, as quais possuem
caractersticas essenciais para a reprodutibilidade de dados experimentais dos
pesquisadores. Na maioria dos casos, a contaminao gentica acidental,
tendo como fonte principal de falha o erro humano, podendo ocorrer devido
a cruzamentos inadvertidos ou troca de identificao das linhagens.
O monitoramento gentico pode ser realizado por vrias metodologias,

como a identificao dos genes de pigmentao (visualizao da colorao da
pelagem na prole), polimorfismo bioqumico (identificao das isoenzimas),
anlise osteomtrica (analisa o desenvolvimento da mandbula), anlise de
histocompatibilidade (testado pelo transplante de pele), observao de comportamento (modificao do comportamento), avaliao da prole (nmero de
filhotes nascidos), ocorrncia de patologias (comuns a linhagem) e identificao de mutaes espontneas ou induzidas e possveis contaminaes genticas (marcadores moleculares).
COSTA, M. A. F.; COSTA, M. F. B. Biossegurana de A a Z. Rio de Janeiro: Papel
e Virtual, 2003.
KELLY, S. T.; HALL, A. S. Housing. In: BENNET, B. T.; ABEE, C. R.; HENRICKSON,
R. (Eds.). Nonuman Primates in Biomedical Research: biology and management. San
Diego: Academic Press, 1995.
NRC. National Research Council. Institute of Laboratory Animal Resources, Comission
on Life Sciences. Manual sobre Cuidados e Usos de Animais de Laboratrio. Edio em
portugus pela AAALAC e Cobea. Goinia: National Academy Press, 2003.
TEIXEIRA, P; VALLE, S. Biossegurana: uma abordagem multidisciplinar. Rio de Janeiro: Editora Fiocruz, 1996.
Bibliografia consultada
AMA. American Medical Association. Statement on the Use of Animals in
Biomedical Research: the challenge and response (revised). Chicago: American
Medical Association, 1992.
ANDRADE, A.; PINTO, S. C.; OLIVEIRA, R. S. Animais de Laboratrio: criao e
experimentao. Rio de Janeiro: Editora Fiocruz, 2002.
BARROS, K. C. Mtodos Alternativos para a Substituio dos Modelos Animais na
Experimentao, 2007. Monografia de Curso Tcnico em Biodiagnstico, Rio de Janeiro: EPSJV/Fiocruz.
BENAVIDES, F. J.; GUNET, J-L. Manual de Gentica de Roedores de Laboratrio:
Princpios bsicos y aplicaciones. Madrid: Universidad de Alcal, 2004.
BINSFELD, P. C. Biossegurana em Biotecnologia. Rio de janeiro: Intercincia, 2004.

CARDOSO, T. A. O.; NAVARRO M. B. M. A. A Cincia entre Bichos e Grilos:
reflexes e aes da biossegurana na pesquisa com animais. So Paulo, Rio de Janeiro:
Hucitec, Faperj, 2007.
CPNEMB. Capacitao de pessoal de nveis elementar e mdio em biotrios: manual
para tcnicos em animais de laboratrio. Departamento de Biotrios/Biomanguinhos. Rio
de Janeiro: 1994.
DE LUCA, R. R. et al. Manual para Tcnicos em Bioterismo. So Paulo: Winner Graph,
1996.
DINIZ, L. S. M. Primatas em Cativeiro: manejo e problemas veterinrios. Enfoque para
espcies neotropicais. So Paulo: cone, 1997.
FEIJ, A. G. S. Utilizao de Animais na Investigao e Docncia: uma reflexo tica
necessria. Porto Alegre: Edipicurs, 2005.
FELASA. Federation of Laboratory Animal Science Associations. FELASA guidelines
for education of specialists in laboratory animal science (Category D). Laboratory Animals,
v. 33, p. 1-15, 1999.
______. FELASA recommendations on the education and training of persons working
with laboratory animals: Category A and C. Laboratory Animals, v. 29, p. 121131, 1995.
______. FELASA recommendations on the education and training of persons carrying
out experiments (Category B). Laboratory Animals, v. 34, p. 229-235, 2000.
FLECHTMANN, C. H. W. et al.. Sobre trs caros parasitos de animais de laboratrio.
Arquivos da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, v. 4, n. 1, p. 29-34, 1974.
FLYNN, R. Parasites of Laboratory Animals. Ames: Iowa State University Press, 1973.
GILIOLI, R. et al. Parasite survey in mouse and rat colonies of Brazilian laboratory animals
houses kept under different sanitary barrier conditions. Arquivo Brasileiro de Medicina
Veterinria e Zootecnia, v. 52, n. 1, p. 33-37, 2000.
GORDON, J. E. Profilaxia das doenas transmissveis. Relatrio Oficial da Associao
Americana de Sade Pblica. Preparado pela Comisso de Profilaxia de Doenas
Transmissveis. 10. ed. 1965.
GUIMARES, M. A.; MZARO, R. Princpios ticos e prticos do uso de animais de
experimentao. Disponvel em: <http://www.aaalac.org/resources/links.cfm#alternatives>.
Acesso em: 9 set. 2007.
HARKNESS, J. E.; WAGNER, J. E. Biologia e Clnica de Coelhos e Roedores. 3. ed.
So Paulo: Roca, 1993.
HOFFMANN, R. P. Diagnstico de Parasitismo Veterinrio. Porto Alegre: Sulina, 1987.

MAJEROWICZ, J. Biossegurana em Biotrios: Alergia um Risco Sempre Presente.
Revista de Biotecnologia, Cincia e Sade, n. 30, p. 105-108, 2003.
______. Procedimentos de Biossegurana para as Novas Instalaes do Laboratrio de
Experimentao Animal (Laean) de Bio-Manguinhos. Rio de Janeiro: Instituto Oswaldo
Cruz, Instituto de Tecnologia em Imunobiolgicos, 2005.
______. Boas Prticas em Biotrios e Biossegurana. Rio de Janeiro: Intercincia, 2008.
MEZADRI, T. J.; TOMZ, V. A.; AMARAL, V. L. L. Animais de Laboratrio:
cuidados na iniciao experimental. Florianpolis: UFSC, 2004.
MOLINARO, E. M.; MAJEROWICZ, J.; VALLE, S. Biossegurana em Biotrios.
Rio de Janeiro: Intercincia, 2008.
NEVES, D. P. Parasitologia Humana. 9. ed. So Paulo, Rio de Janeiro: Atheneu, 1997.
PAIXO, R. L. Experimentao Animal: razes e emoes para uma tica. Rio de Janeiro: Escola Nacional de Sade Pblica, Fundao Oswaldo Cruz, 2001.
PODOLSKY, M. L; LUKAS, V. S. The Care and Feeding of an IACUC. Florida: CRC
Press, 1999.
REY, L. Parasitologia: parasitos e doenas parasitrias do homem nas Amricas e frica.
3. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2001.
| 223
Captulo 5
Fundamentos em qumica experimental
Mnica Mendes Caminha Murito
Virginia de Lourdes Mendes Finete
1. Qumica: uma cincia essencialmente experimental
A Qumica a cincia que estuda as substncias presentes na natureza,

do que elas so feitas, como se transformam e as diversas aplicaes destas
substncias em nosso dia-a-dia. Embora o estudo da Qumica seja constitudo
de mltiplos conceitos tericos, associados ao conhecimento de uma simbologia
prpria, a essncia desta cincia experimental.
Qumica: do egpcio keme,

que significa terra
Ramos da qumica:
Qumica inorgnica
Qumica orgnica
Fsico-qumica
Qumica analtica
2. Introduo ao laboratrio de Qumica
O laboratrio o local mais importante para o desenvolvimento da

Qumica e ambiente de atuao dos profissionais da sade e de outras reas
afins. no laboratrio que se estabelecem relaes entre o que observado
no campo macroscpico, com os conceitos, teorias e modelos formulados em
nvel microscpico.
Niels Bohr, cientista dinamarqus, criou seu
modelo atmico em 1913, propondo que
os eltrons esto dispostos no tomo em
rbitas circulares, ao redor do ncleo, como
os planetas em torno do sol. A cor no teste de chama a energia que os eltrons do
elemento emitem em forma de luz, ao
retornarem ao seu estado fundamental.
A realizao de qualquer atividade no laboratrio requer o uso da

vestimenta adequada: cala comprida, jaleco fechado de manga comprida,
sapato fechado em couro e culos de proteo, os quais oferecem uma
barreira de proteo mnima contra eventuais respingos ou derramamentos de
substncias qumicas. Tambm imprescindvel reconhecer os diversos materiais, equipamentos, substncias, fontes de consulta bibliogrfica, smbolos de
segurana e apresentar uma postura adequada.
3. Solues
3.1. Propriedades das solues
As substncias qumicas presentes na natureza e utilizadas em nosso

cotidiano encontram-se, geralmente, em forma de solues. As solues podem ser lquidas, slidas ou gasosas.
Fundamentos em qumica experimental | 225
SOLUO
SOLUTO
SOLVENTE
Soro fisiolgico
Cloreto de sdio
gua
Ao
Carbono
Ferro
Ar atmosfrico
Oxignio, gs carbnico e outros gases
Nitrognio
Solues: so misturas homogneas constitudas

por um ou mais solutos dissolvidos em um
solvente.
Solubilidade: a capacidade de uma substncia (soluto) ser dissolvida por um determinado

solvente, a uma dada temperatura.
Fatores que influenciam a solubilidade
As foras intermoleculares dependem das

ligaes qumicas presentes: substncias
formadas por ligaes covalentes podem
ser POLARES ou APOLARES. A gua
(b), por ser uma substncia polar, um
bom solvente para o lcool (a), que
tambm polar; porm, a gua um
solvente ruim para a gasolina (c), que
apolar, formando assim uma mistura
heterognea.
TEMPERATURA
PRESSO
FORAS INTERMOLECULARES
3.2. Concentrao das solues
Concentrao a quantidade de soluto contida em um volume ou em

uma massa de solvente.
Soluo saturada
de CuSO4
sedimento de CuSO4
no-dissolvido
A soluo saturada quando contm a mxima quantidade possvel de soluto dissolvido e insaturada antes
de atingir esse ponto. Tambm possvel obter uma soluo supersaturada aquecendo uma soluo saturada, que
tenha parte do soluto no dissolvido, at que todo ele se
dissolva. Deve-se manter a soluo em repouso e deixar
que ela atinja a temperatura ambiente lentamente.
3.2.1. Concentrao em quantidade de matria
A quantidade de matria uma unidade fundamental do Sistema Internacional de Unidades (SI) que expressa a quantidade em mol de uma substncia. Concentrao em quantidade de matria a quantidade em mol do soluto
por litro de soluo:
Concentrao em quantidade de matria = mol do soluto = mol L-1
L de soluo
Um exemplo da expresso da concentrao em quantidade de matria
a quantidade de sal, NaCl, na gua do mar: cada 1 L contm 27 g de sal.
possvel converter a massa de sal em quantidade de matria: A massa molar do
NaCl a soma das massas do Na e do Cl: 23 + 35,5 = 58,5 g/mol.
Ento se 1 mol de NaCl pesa 58,5 g, quantos mol correspondem a 27 g?
Basta fazer a seguinte regra de trs:
58,5 g NaCl 1 mol
27 g NaCl
x = 0,46 mol
Assim, a concentrao em quantidade de matria do sal NaCl na gua

do mar a 0,46 mol L-1.
3.2.2. Concentrao em massa por volume C
(m/v)
A concentrao em massa por volume expressa a massa do soluto em

gramas, por litro de soluo.
C(m/v) = massa de soluto (g) = g L-1
L
A soluo fisiolgica constitui-se de 9,0 gramas de cloreto de sdio,

NaCl em um litro de gua. A concentrao desta soluo igual a 9,0 g L -1.
Em geral, essa concentrao expressa nos rtulos em termos percentuais. Para
isso, deve-se calcular a massa de NaCl contida em 100 ml de soluo:
1 L = 1.000 mL
9,0 g NaCl 1.000 mL de soluo
x
100 mL de soluo 0,9 g / 100 mL= 0,9 % (m/v)
3.2.3. Concentrao em massa por massa C(m/m) e volume por

volume C(v/v)
Esse tipo de concentrao comumente expresso em forma de composio percentual:

Composio percentual (%): a porcentagem em massa ou volume de
um soluto por massa ou volume de soluo.
% (m/m) = massa de soluto (g) . 100
massa de soluo (g)
% (v/v) = volume de soluto (L) . 100

volume de soluo (L)
possvel observar essa expresso da concentrao em rtulos de muitos produtos utilizados no cotidiano. O vinagre, por exemplo, uma soluo
de cido actico em gua a 3,0 %. Isso significa que uma garrafa de 750 g de
vinagre contm 22,5 g de cido actico:
cido actico no vinagre % (m/m) = 22,5 g . 100 = 3,0 %
750 g
3.3. Preparo de solues
Preparar solues uma das tarefas principais dentro de um laboratrio.

Uma soluo mal preparada ocasiona erros em formulaes e anlises. Para o
preparo de uma soluo, devem ser seguidos os seguintes passos:
Primeiro passo Qualidade da gua
A maioria das solues utilizadas em laboratrio so lquidas e tm a

gua como solvente. importante que a gua apresente um nvel de qualidade
satisfatrio e atenda s especificaes preconizadas pelas farmacopeias. 1
Especificaes USP para guas purificadas
ANLISES/ DETERMINAES
ESPECIFICAO
pH (25C)
Condutividade (25C)
Cloretos
Amnio
Ferro
5,0 - 7,0
</= 1,3 uS/cm
</= 1,0 ppm2
</= 0,3 ppm
Passa teste
Farmacopeias: cdigos onde se estabelecem, dentre outras coisas, os requisitos mnimos de qualidade
para frmacos, insumos, drogas vegetais, medicamentos e produtos na rea da sade. A Farmacopeia
Brasileira o cdigo oficial farmacutico do pas.
2
ppm e ppb: partes por milho e partes por bilho indicam a concentrao em mg/L ou mg/L,
respectivamente.
Clcio
TOC (carbono orgnico total)
Nitratos
Nitritos
Formol
Cloro total
Cloro livre
passa Teste
< 500 ppb
</= 0,2 ppm
</= 0,2 ppm
ausente
< 5,0 ppm
< 5,0 ppm
Fonte: USP 30, NF 25, 2007.

Segundo passo Qualidade dos reagentes
Existem diferentes graus de pureza para um reagente qumico, de acordo com o fim a que se destina. Quanto maior for o grau de pureza, maior ser
o custo do reagente.
Grau de pureza (p) o quociente entre a massa de substncia
pura e a massa total da amostra.
Classificao dos reagentes de acordo com o grau de pureza
Grau de pureza
Classificao do reagente
Tcnico ou comercial
Destinados a fins industriais, no

requerem grau de pureza elevado.
Para anlise (PA)
Substncias de grau de pureza analtico,

destinadas a anlises fsico-qumicas,
com baixos teores de contaminantes.
Substncias Qumicas
Materiais de referncia certificados

utilizados na avaliao da conformidade
dos insumos farmacuticos e dos
medicamentos, como referncia de
controle de qualidade.
de Referncia (SQR)
Grau de pureza
Classificao do reagente
Ultrapuro
Substncias de alto grau de pureza,

destinadas a processos analticos
altamente sensveis, como anlises
cromatogrficas, espectroscpicas, etc.
As monografias de matrias-primas (insumos), constantes nas

farmacopeias, contm os ensaios de pureza e dosagens requeridos para os
reagentes qumicos.
Terceiro passo Qualidade da vidraria
As vidrarias corretas devem ser selecionadas: para o preparo de solues padro ou de concentrao em quantidade de matria, devem ser escolhidas vidrarias de preciso, como a pipeta e o balo volumtricos. J para
solues expressas em composio percentual no h a necessidade de vidrarias to precisas. Podem ser utilizadas, ento, provetas, cilindros graduados e
pipetas graduadas.
Quarto passo Qualidade na tcnica de preparo da soluo
1. Para solues de soluto slido, deve-se pesar o soluto em balana

analtica, verificando antes de tudo se a mesma encontra-se calibrada e
nivelada. O recipiente para pesagem pode ser um bcher, erlenmeyer,
vidro de relgio ou naveta, e deve estar limpo e seco. J para solutos
lquidos, deve-se utilizar a pipeta.
2. Antes de abrir o frasco do reagente, ler o rtulo e verificar a
presena de smbolos de risco, obedecendo s normas de biossegurana.
Deve-se utilizar uma esptula para retirar a poro a ser pesada ou, no
caso de substncias lquidas, transferir pequena poro para outro recipiente e s ento pipetar o lquido. Nunca devemos introduzir outro tipo
de objeto no frasco de reagente, evitando contaminaes. Tambm
importante no manipular diretamente com os dedos o recipiente de
pesagem a fim de evitar que a gordura dos dedos influencie na leitura.
3. Aps a pesagem, o soluto dever ser transferido quantitativamente,
ou seja, totalmente, para a vidraria escolhida: um balo volumtrico ou
cilindro graduado. adequado utilizar um funil e um basto de vidro
para auxiliar nessa transferncia.
4. Em seguida, deve-se avolumar a soluo, adicionando um volume de
solvente at o trao de aferio da vidraria. muito importante elevar ao
nvel dos olhos, observando a posio do menisco, evitando assim o
erro de paralaxe.
MENISCO
Obs: A sigla q.s.p. aparece com

frequncia em solues e formulaes
de produtos e significa quantidade suficiente para, ou seja, para completar
o volume final.
A homogeneizao da soluo deve ser feita apoiando o fundo da

vidraria com a palma de uma das mos e segurando firmemente a tampa com a
outra.
3.3.1. Diluio de solues
Diluio uma tcnica em que se acrescenta solvente

soluo. A quantidade de soluto permanece constante.
A equao geral para diluio a partir de uma soluo concentrada

(soluo estoque) :
C1 .V1 = C2 .V2
3.3.2. Titulao
A titulao uma tcnica utilizada em anlises volumtricas

(ver item 4.1.5.1.3.), para a verificao da concentrao
das solues preparadas em laboratrio.
Para realizar uma titulao, empregase a bureta, que uma vidraria de preciso, e utiliza-se uma soluo padro, de
concentrao conhecida (titulante). A substncia para o preparo da soluo padro
deve ser quimicamente estvel, ter alto grau
de pureza e ser adequada para reagir com
a soluo que se deseja analisar (titulado).
Fator de correo: Multiplicando a concentrao pelo fator de converso, f, obteremos a concentrao
real da soluo. Caso o fator de correo seja maior que 1 10%, deve-se fazer uma diluio e,
atravs de nova titulao, determinar a concentrao.
f = Concentrao obtida
Concentrao desejada
3.3.3. Armazenagem de solues
As solues alcalinas,
Nome:_________________________________ como a de hidrxido de sdio
Concentrao:_____________ Fator:___________
(NaOH), no devem ser
Data de validade: ______/_____/_____
Instrues Especficas de Armazenagem
guardadas em frascos de viTcnico Responsvel
dro, pois os hidrxidos atacam o mesmo e dissolvem a slica com formao de silicatos solveis. O cido
fluordrico, HF, tambm reage com o vidro formando SiF4. Estas solues
devem ser conservadas em frascos de polietileno. Solues que sofrem
decomposio pela exposio luz, como a de nitrato de prata, AgNO 3,
devem ser estocadas em frasco mbar. As demais solues podem ser
armazenadas em frascos de vidro, bem fechados e rotulados.
4. Qumica analtica
A Qumica Analtica o ramo da qumica que estuda a identificao e

quantificao das substncias que compem uma amostra. Atravs das determinaes analticas possvel saber do que a amostra feita e quanto de cada
substncia est presente.
O controle de qualidade das diversas matrias-primas e dos produtos
industrializados que utilizamos, os resduos gerados nesses processos produtivos, as reaes qumicas que acontecem na natureza e as pesquisas envolvendo
a transformao de substncias em novos produtos so reas onde a qumica
analtica est presente.
importante destacar que as metodologias em Qumica analtica encontram-se disponveis nas farmacopeias.
A seguir, temos a descrio das etapas de uma determinao analtica:
1. Planejamento e organizao da anlise
2. Estudo das propriedades da substncia de interesse (analito)
3. Amostragem
4. Preparo da amostra para anlise no laboratrio (amostra laboratorial)
5. Seleo do mtodo de anlise clssico ou instrumental?
6.Tratamento de dados / validao
4.1. Etapas de uma determinao analtica

4.1.1. Planejamento e organizao da anlise
O planejamento a etapa mais importante de qualquer atividade

laboratorial. Atravs dele possvel evitar a falta de insumos e materiais que
comprometeriam o resultado de uma anlise. possvel, tambm, organizar
melhor a execuo do trabalho, evitando situaes de risco para os operadores
e danos aos equipamentos, materiais e instalaes
sempre importante considerar que:
Cada material tem o seu lugar especfico.
A bancada de trabalho deve estar livre de qualquer material que no
faa parte da tarefa.

A roupa de trabalho deve ser compatvel com o tipo de atividade que
est sendo executada.

preciso estar atento aos rudos a sua volta.
Ao terminar a atividade, deve ser feita a limpeza das bancadas.
PLANEJAMENTO
Equipamentos
Vidraria
Solues/Reagentes
EPI/EPC
Instalaes
Pessoal
4.1.2. Estudo das propriedades da substncia de interesse (analito)
Ao analisar uma amostra, importante reconhecer suas propriedades

fsico-qumicas.
Uma propriedade fsico-qumica uma propriedade
mensurvel que descreve qualquer caracterstica qualitativa
ou quantitativa do analito.
Dependendo da complexidade e do tipo de amostra, podem ser preconizadas medidas de uma ou mais propriedades do analito para anlise.
Propriedades qualitativas
Propriedades quantitativas
Identidade qumica
pH
Cor
Viscosidade
Sabor
Densidade
Odor
Condutividade
Textura
Ponto de fuso e ebulio

Absoro e emisso de radiao
4.1.3. Amostragem
A amostragem de uma determinada substncia para anlise no laboratrio deve ser efetuada de maneira a retirar uma poro homognea do todo,
chamada amostra representativa. Para proceder uma amostragem correta,
necessrio seguir trs passos fundamentais:
Identificao do todo
Retirada da amostra representativa
Obteno da amostra laboratorial
Para a obteno de uma amostra representativa a partir de um material heterogneo, necessrio dividir esse material, visualmente, em partes.
Retirando-se pores de cada parte, aleatoriamente, temos a coleta de
uma amostra aleatria. A combinao da amostra aleatria constri a
amostra representativa.
Transporte da amostra
O transporte da amostra representativa deve ser feito em recipientes
apropriados, devidamente fechados e temperatura adequada de forma a
preservar a integridade da amostra durante o seu fluxo.
Deve haver Procedimentos Operacionais Padro (POP) relativos
amostragem e que especifiquem as pessoas designadas a coletar amostras.
Fluxo da amostra no laboratrio
4.1.4. Preparo da amostra para anlise no laboratrio (amostra

laboratorial)
Algumas amostras necessitam de preparo antes de sua anlise. Isso

depender da complexidade da matriz a ser analisada.
As tcnicas para obteno da amostra laboratorial incluem:
Triturao e dissoluo
Decomposio
Extrao (ver item 5.1.)

Separao de misturas
Triturao e dissoluo
Quando uma amostra slida, necessrio tritur-la e mistur-la para
que a mesma se reduza a um p fino e homogneo. Para a triturao de
amostras, usam-se gral (ou almofariz) e pistilo, feitos em porcelana ou gata.
Aps a triturao, o slido geralmente passa por um processo de dissoluo.
O solvente utilizado depender da natureza qumica do slido a ser dissolvido: para
slidos inicos, a gua e os alcois so os solventes mais utilizados. Para outros
slidos inorgnicos, geralmente so empregados cidos (Tabela 1).
Tabela 1: cidos utilizados para dissoluo de amostras
CIDO
COMPOSIO
(% em massa e
densidade)
CARACTERSTICAS
HCl
37%
1,19g mL-1
No oxidante. Dissoluo de metais, carbonatos, xidos, fosfatos e sulfetos. A composio constante em ebulio a 109C
20% de HCl. Forma cloretos volteis com
As, Sb, Ge e Pb.
HBr
48-65%
1,49g mL-1
Semelhante ao HCl na propriedade de

solvente. A composio constante em ebulio a 124C de 48% de HBr.
H2SO4
95-98%
1,84g mL-1
Bom solvente em sua temperatura de ebulio a 338C. Ataca metais. Desidrata e

oxida compostos orgnicos.
H3PO4
85%%
1,70g mL-1
Dissoluo a quente de xidos refratrios,

insolveis em outros cidos. Torna-se anidro
acima de 150 C. Desidrata a cido
pirofosfrico, H2PO3-O-PO3H2, acima de
200 C e desidrata ainda a cido
metafosfrico, [HPO3]n, acima de 300C.
HF
50%
1,16g mL-1
Dissoluo de silicatos, pela formao de

SiF4 voltil. O excesso de produto removido pela adio de HClO4 ou H2SO4,
com aquecimento. Forma fluoretos volteis
com As, B, Ge, Se, Ta, Nb, Ti e Te. Forma precipitados com Ca. A composio
constante em ebulio a 112C de 38%
de HF.
HClO4
60-72%
1,54-1,67g mL-1
Oxidante poderoso e explosivo, a quente

e concentrado. Dissoluo de matria
orgnica que j tenha sido parcialmente
oxidada por HNO3 a quente e levada
prximo da secura, algumas vezes. A
composio constante em ebulio a 203C
de 72% de HClO4.
HNO3
68%
1,51g mL-1
Oxidante. Dissoluo de metais alcalinos,

xidos bsicos e carbonatos, formando sais,
como o nitrato de amnio. Reage explosivamente com cianetos, carbetos e psmetlicos.
Fonte: Adaptado de Harris, 2001.
Tambm so comumente utilizadas misturas de cidos para a dissoluo

de amostras. Uma das mais utilizadas a chamada gua Rgia, uma mistura
de cido ntrico e cido clordrico concentrados (proporo 1 para 3).
um lquido altamente corrosivo, de colorao amarela, e um dos poucos
solventes que tem a capacidade de dissolver o ouro e a platina, da vem o
nome dessa mistura de cidos: devido propriedade de dissolver os metais

nobres, rgios. A mistura instvel e perde seu poder de solvente rapidamente. Assim, seu uso deve ser imediato aps o preparo.
importante considerar os riscos de acidentes ao se
manipular cidos concentrados, os quais tm alto poder
corrosivo. O uso de luvas adequadas, culos de proteo e capela de segurana essencial para o trabalho
com cidos.
Decomposio
A decomposio aplica-se a amostras de matria orgnica e efetuada,
geralmente, na presena de solventes lquidos, como os cidos ntrico e sulfrico, ou gua oxigenada, utilizando-se a ao das microondas ou digesto,
como no caso da determinao de nitrognio por Kjeldahl (ver item 4.1.5.1.4.).
Separao de misturas
As misturas so formadas pela unio de duas ou mais substncias, as quais no sofrem transformao, ou seja, ao
serem separadas permanecem quimicamente inalteradas.
Ao contrrio da substncia pura, que possui temperaturas ou pontos de
fuso e ebulio constantes e bem definidos, no possvel determinar experimentalmente estas propriedades fsicas em uma mistura, com exceo das
misturas azeotrpicas, que apresentam ponto de ebulio constante, e das
misturas eutticas, onde o ponto de fuso constante.
As misturas so classificadas como homogneas, as quais
apresentam um s aspecto ou fase, e heterogneas, onde
possvel identificar duas ou mais fases.
Para a separao de misturas heterogneas, tm-se principalmente os

seguintes mtodos:
Filtrao: Processo que utiliza um filtro para efetuar a separao. Podemos proceder a filtrao simples, adaptando o filtro de papel dobrado e
ajustado conforme a figura (a) ao funil ou a filtrao a vcuo (b), utilizada para
misturas viscosas.
(a) Filtrao simples
(b) Filtrao a vcuo
Centrifugao: Processo que utiliza uma centrfuga que, por rotao em

alta velocidade, separa misturas slido-lquido, onde o componente slido se
deposita no fundo do recipiente. Muito utilizada para o preparo de amostras
de sangue separa o soro (parte lquida) do plasma (parte slida).
Decantao: Utiliza um funil prprio, o funil de decantao, para a separao de misturas onde um dos componentes possui maior densidade, depositando-se no fundo do recipiente.
Para separao de misturas homogneas, os mtodos mais utilizados

so: cristalizao, destilao simples ou fracionada. Estes mtodos sero estudados em Qumica orgnica (item 5.1.).
4.1.5. Seleo do mtodo de anlise: clssico ou instrumental?
Os mtodos em Qumica analtica so divididos em clssicos e instrumentais. A seleo do mtodo de anlise no depende somente da natureza
qumica da amostra. preciso levar em conta fatores como custo, equipamentos existentes no laboratrio, quantidade de amostra disponvel, demanda de
anlises e pessoal tcnico envolvido.
Nmero de replicatas da amostra: Depende da quantidade de amostra disponvel e da tcnica analtica empregada.
importante trabalhar com replicatas, de forma a obter um
resultado final confivel, pela mdia das determinaes.
4.1.5.1. Mtodos clssicos: gravimetria e volumetria
4.1.5.1.1. Gravimetria
O princpio da anlise gravimtrica ou gravimetria a determinao da
concentrao de um ou mais analitos, de composio qumica definida, em
uma amostra, atravs da pesagem. Antes de ser pesada, a substncia a ser
analisada deve ser separada da amostra e, para isso, podem ser aplicadas
reaes de precipitao ou combusto.
Gravimetria por precipitao
Nesta anlise, adicionado um reagente amostra, capaz de formar
com o analito de interesse um composto insolvel que se deposita (precipita)
no fundo do recipiente. Esse reagente deve ser seletivo, ou seja, especfico
para o elemento ou substncia que se deseja separar.
Etapas da anlise gravimtrica por precipitao
Exemplos de alguns metais determinados por gravimetria

Metal
Reagente
precipitante
Precipitado
formado*
Temperatura de
aquecimento
(C)
Precipitado
final para
pesagem
Interferentes
mais comuns
Ag
HCl/HNO3
AgCl
400
AgCl
Hg
Al
NH4Cl/NH3
Al (OH)3
1.200
Al2O3
Cr, Fe, Ni
Ca
H2C2O4
CaC2O4
1.000
CaO
Metais(exceo
alcalinos) e Mg
Fe
NH4Cl/NH3
Fe (OH)3
850
Fe2O3
Metais
tetravalentes e
Al, Ti, Cr
120
Ni (DMG)2
Pd
Ni
DMG (dimetil- Ni (DMG)2

glioxima) / NH3
O precipitado formado deve ter as seguintes caractersticas:

Composio qumica definida (no sofrer contaminaes).
No ser voltil, higroscpico ou solvel.
Ter aspecto e quantidade adequados para pesagem na balana
analtica.
Ser formado lentamente, com controle de parmetros da reao de
precipitao como: velocidade, temperatura e pH, de forma a obter um

slido com boas condies para filtrao simples ou a vcuo.
Passar por um processo de envelhecimento ou digesto, que con-
siste em uma srie de modificaes estruturais, visando ao seu aperfeioamento.

Ser aquecido a altas temperaturas (geralmente em mufla) para obten-
o do produto final estvel a ser pesado.
Um exemplo da aplicao da gravimetria por precipitao a determinao de clcio em guas minerais. O clcio precipitado como oxalato,
CaC2O4, pela adio de cido oxlico:
Ca2+ + H2C2O4 CaC2O4 + 2 H+
Um cadinho deve ser tarado, at peso constante. O procedimento
consiste em levar o cadinho mufla, temperatura de 1.000 C, por uma
hora. Retira-se o cadinho, com o auxlio de luvas e uma pina, e resfria-se
em dessecador. Pesa-se. Esse procedimento dever ser repetido at que a
massa no apresente variao maior que 1%.
O precipitado de CaC2O4, insolvel, coletado em papel de
filtro, seco, transferido para o cadinho previamente tarado, e aquecido ao
rubro temperatura de 1.000 C, sendo convertido em xido de clcio,
CaO, pela ao do oxignio do ar:
CaC2O4 + 2 H+ + O2 CaO + 2 CO2 + H2O
Aps a calcinao, resfria-se o precipitado, em dessecador, e pesa-se,
at peso constante. Sempre se deve trabalhar com pelo menos uma duplicata
da amostra.
Simulando a anlise de uma amostra de 200 mL de gua, e considerando que a massa do cadinho tarado, at peso constante, de 25,0000 g, o
clculo da concentrao de clcio na amostra seria:
Clculo da massa de CaO:
(massa do cadinho + massa do precipitado) massa do cadinho = massa de CaO
25,1100 - 25,0000 = 0,1100 g
Clculo da massa de Ca2+ na amostra aps aquecimento ao rubro

(calcinao):
1 mol CaO 1 mol Ca2+
56,08 g/mol CaO 40,08 g/mol Ca2+
0,1100 g CaO
m Ca2+
m Ca2+ = 0,0786 g
Massa de clcio em 200 mL de amostra de gua
Para expresso do resultado em termos percentuais, basta calcular a

massa de Ca2+ para 100 mL de gua:
m Ca2+ /100 mL = 0,03931 g 0,03931%
4.1.5.1.2. Determinao do teor de cinzas
As cinzas constituem a frao mineral de amostras e contm, em

geral, clcio, magnsio, ferro, fsforo, chumbo, sdio e outros componentes. O perfil das cinzas comumente considerado como parmetro
geral de qualidade e frequentemente utilizado como critrio na especificao
de amostras diversas.
Para determinar o teor de cinzas, utilizam-se cadinhos previamente
incinerados e tarados, como descrito no exemplo da determinao de
clcio. Pesa-se 3 g da amostra, sempre trabalhando no mnimo em duplicata. Leva-se mufla, temperatura de 600C, at a eliminao completa
do carvo. As cinzas devero ficar brancas ou ligeiramente acinzentadas,
caso contrrio, esfriar, adicionar 0,5 mL de gua, secar e incinerar novamente. Deixa-se esfriar em estufa por vinte minutos, transferindo-se para
um dessecador por mais vinte minutos. Finalmente, os cadinhos contendo
as cinzas devem ser pesados, at a obteno de peso constante. O clculo
do teor de cinzas feito pela equao:
Teor de cinzas (%) = mC .100

mA
Onde:
mC= massa das cinzas (g)
mA = massa da amostra (g)
Cinzas carbonatadas e sulfatadas
Algumas amostras contendo sais de metais alcalinos, que
retm propores variveis de dixido de carbono nas condies da incinerao, devero ser tratadas, inicialmente,
com soluo de carbonato de amnio (cinzas carbonatadas)
ou cido sulfrico diludo (cinzas sulfatadas) e, aps secagem do excesso do reagente, incineradas e pesadas. A
determinao de cinzas insolveis em cido, geralmente
utilizando cido clordrico diludo a 10% (m/m), oferece
uma avaliao do teor de slica existente na amostra.
Cuidados com o uso da balana analtica nas anlises

gravimtricas
O corao da gravimetria a utilizao da balana analtica
para a pesagem de amostras. Qualquer erro nesse procedimento acarretar em um resultado incorreto.
As balanas analticas modernas trabalham com o emprego
de circuitos eletrnicos que permitem medies precisas e,
mesmo que seu aperfeioamento j no exija o uso de uma
sala especial, preciso levar em considerao as interaes
do equipamento com o ambiente.
A primeira coisa a se observar a localizao da balana
analtica: ela deve estar sobre uma bancada fixa, prova de
impactos ou vibraes, e em sala fechada onde no existam
intensas correntes de ar.
O nivelamento da balana deve ser checado pela observao

da bolha de nvel: caso no esteja centralizada, faz-lo pela
regulagem dos ps ajustveis.
As janelas de vidro da balana devem permanecer fechadas
durante a leitura da massa para evitar variaes devido entrada
de correntes de ar.
Nunca se devem pesar amostras fora da temperatura ambiente:
amostras aquecidas devem ser resfriadas no interior do dessecador
e, no caso de amostras resfriadas, deve-se esperar at que a
mesma atinja o equilbrio trmico com o ambiente, evitando
assim erros pela conveco de ar.
Ao manipular o recipiente usado para a pesagem, tomar o
cuidado de no toc-lo diretamente com as mos, sempre
usando uma toalha de papel ou uma gaze. A gordura e as
impresses digitais influenciam na leitura da massa.
A calibrao da balana deve estar dentro do prazo de validade estabelecido pelo fabricante. As balanas eletrnicas modernas possuem a opo de autocalibrao, pela presena de
pesos internos padres de calibrao. Caso a balana necessite
de calibrao, pelo uso de padres de peso externos, essencial que isso seja feito no prprio local onde a balana est
instalada, evitando variaes de condies ambientais, principalmente da acelerao gravitacional.
Antes de anotar o resultado da leitura da massa, deve-se aguardar
a estabilizao do valor que aparece no mostrador digital.
Flutuaes constantes e tendenciosas do valor podem demonstrar a ocorrncia de algum problema na pesagem.
Finalmente, valioso proceder a limpeza da balana aps o seu
uso, mantendo-a livre de substncias contaminantes que possam danific-la, usando um pincel limpo e macio e, se necessrio, aplicando um pano limpo embebido em acetona, sem no
entanto fazer movimentos bruscos que possam deslocar o prato
da balana.
4.1.5.1.3. Volumetria
O princpio da anlise volumtrica ou volumetria a determinao da
concentrao de um ou mais analitos em uma amostra, atravs da medio do
volume, utilizando a tcnica de titulao.
Existem diferentes classificaes para a titulao, de acordo com o tipo
de reao qumica envolvida:
Titulao cido-base (a mais utilizada em laboratrio)
Titulao de oxirreduo (ou redox)
Titulao complexomtrica
Titulao de precipitao
Titulao cido-base: o exemplo do preparo e titulao da soluo

padro de HCl 0,1 mol L-1
O cido clordrico, HCl, P.A. no uma substncia padro. Sua
concentrao funo da massa especfica, igual a 1,19 g mL -1, e sofre
variaes com o tempo. A soluo de HCl na concentrao de 0,1 mol L -1
muito utilizada no laboratrio para reaes qumicas diversas e preparo de
outras solues.
O preparo da soluo 0,1 mol L-1 se d pela diluio do HCl concentrado. Para preparar, por exemplo, 1 L, deve ser feita a seguinte sequncia de
clculos:
Dados: Concentrao do HCl: 37% (m/m); Massa especfica: 1,19 g mL-1; Massa molar: 36,5 g/mol
1 Clculo da massa de HCl em 0,1 mol:
0,1 mol HCl = massa HCl / Massa molar HCl
massa HCl = 0,1 . 36,5 = 3,65 g
2 Correo da massa pela concentrao do HCl:

37 g HCl 100 g soluo
3,65 g HCl
m = 9,86 g
3 Converso da massa em volume:

1,19 g HCl 1 mL
9,86 g HCl v
v = 8,29 mL
Deve-se transferir 8,29 mL de HCl concentrado para balo volumtrico

com capacidade de 1.000 mL, contendo 500 mL de gua (completar o
volume at o trao de aferio). Homogeneizar.
Nunca derramar a gua sobre o cido, sempre o cido
sobre a gua!
Para a titulao da soluo preparada, utiliza-se brax, Na 2B4O7 .
10 H2O, como padro primrio. Transferir de 0,4 a 0,5 g de brax,
pesados exatamente, para erlenmeyer (trabalhar em triplicata), dissolvendo
o padro em 50 mL de gua destilada. Adicionar algumas gotas do indicador metilorange.
A bureta deve ser rinsada pelo menos duas vezes com a soluo de
HCl a ser titulada, antes de ser preenchida totalmente e zerada.
A soluo de HCl adicionada ao padro contido no erlenmeyer, at
que ocorra a viragem de cor do indicador (do amarelo ao laranja). O volume
gasto deve ser anotado, com preciso de 0,02 mL, e os valores devero ser
concordantes, caso contrrio, repetir a titulao com mais alquotas.
Na2B4O7 . 10 H2O + 2 HCl 2 NaCl + 4 H3BO3 + 5 H2O
O erro de titulao deve ser calculado pela realizao do

ensaio em branco, calculando-se o volume real de titulante
gasto: V real de titulante = V gasto de titulante V
ensaio em branco
Clculo Final:
Concentrao =
massa do brax
V de HCl (mL). 0,1907
Obs.: A partir da concentrao obtida, calcular o fator de correo (conforme

item 3.3.2.).
4.1.5.1.4. Determinao de nitrognio total pelo mtodo de Kjeldahl

O mtodo desenvolvido por Kjeldahl, em 1883, vem sendo, desde
ento, adotado por laboratrios em todo o mundo como referncia para a
determinao de nitrognio em amostras diversas.
Embora tenham sido desenvolvidos aparatos instrumentais, incorporando
avanos para a execuo da tcnica originalmente praticada com vidrarias adequadas para destilao, seu princpio foi mantido ao longo de mais de um
sculo.
Aparato original
O princpio do mtodo de Kjeldahl consiste em trs etapas: digesto da

amostra, destilao e titulao.
1. Digesto: O nitrognio presente em uma amostra encontra-se combinado a outros elementos, como carbono e hidrognio. A digesto a
converso de todo o nitrognio orgnico presente na amostra em ons amnio,
NH4+. Isso possvel tratando a amostra em cido sulfrico concentrado, a
altas temperaturas. O processo de digesto da amostra acelerado pela adio
de pequena quantidade de um catalisador, que contm geralmente selnio,
cobre ou titnio em sua composio:
N, C, H
H2SO4
(catalisador)
NH4+ + CO2 + H2O
Para proceder a digesto da amostra, deve-se pesar uma quantidade,

com preciso, entre 0,1 e 0,5 g, transferindo-a quantitativamente para o
balo de Kjeldahl. Adiciona-se 5 ml de H2SO4 e pequena quantidade do
catalisador. Os bales so colocados no digestor e a temperatura ajustada a
50C aps uma hora, aumentar lentamente at aproximadamente 300 C. A
digesto deve ser feita sempre em duplicata e com a realizao do ensaio em
branco. Todo o procedimento deve ser executado no interior da capela e
com o uso dos EPI`s adequados. A digesto termina quando o lquido
contendo a amostra ficar lmpido.
2. Destilao: Aps a obteno dos ons NH4+ realizada a destilao. Adiciona-se uma base forte, 10 mL de NaOH a 50% (m/v), para a
converso desses ons em gs amnia:
NH4+ + OH- NH3 + H2O
O gs NH3 liberado e destilado coletado em frasco contendo 10 mL

de soluo de cido brico, H3BO3, a 2% (m/v) e algumas gotas de indicador misto. Sempre se deve usar o EPI adequado para o procedimento, que
ser realizado de acordo com o aparato disponvel no laboratrio.
3. Titulao: O destilado recolhido em cido brico deve ser titulado,
utilizando soluo padro de cido clordrico 0,1 mol L-1 como soluo titulante,
at a viragem do indicador.
Clculos:
% Nitrognio Total = V. C . f . 0,014 . 100
m
Onde:
V = volume de soluo padro de HCl 0,1 mol L-1 gasto na titulao (mL)
C = concentrao em quantidade de matria do HCl (0,1 mol L-1)
f = fator de correo da soluo padro de HCl 0,1 mol L-1
m = massa da amostra (g)
possvel ainda estimar o valor percentual de protena na
amostra, multiplicando o valor do nitrognio total obtido
por um fator de converso, igual a 6,25: % Protena= %
Nitrognio total . 6,25
Vantagens e limitaes dos mtodos clssicos:

Os mtodos clssicos oferecem uma relativa preciso para
anlise de substncias em amostras, da ordem de mg mL-1,
ao mesmo tempo que necessitam de aparato simples para
sua execuo. Isso traz uma diminuio no custo da anlise,
j que vidrarias, fornos e balanas so materiais/equipamen-
tos bsicos em um laboratrio de Qumica. Porm, so

necessrios maiores volumes de amostra, o que nem sempre est disponvel. Outra desvantagem o maior tempo
de durao das anlises.
A presena de substncias interferentes na amostra outro
ponto crtico. A eliminao destes interferentes implica na
introduo de mais etapas na anlise, o que aumenta ainda
mais o tempo.
Outro problema a produo de resduos txicos em
algumas reaes, bem como o manejo e descarte desses
resduos, o que demanda a substituio da tcnica por uma
outra mais segura.
Erros na manipulao de vidrarias, preparo de solues e
pesagem tm grande impacto no resultado final da anlise.
importante seguir os cuidados recomendados ao optar
por esses mtodos.
Cuidados com a vidraria
Em Qumica analtica, qualquer perda da amostra em anlise crtica. Vimos os cuidados com a pesagem, quase
sempre a etapa inicial de um processo de anlise, e a que
requer maior preciso. Os cuidados com a limpeza do
material utilizado, especialmente a vidraria, tambm so imprescindveis para evitar perdas de amostra, por contaminao com outras substncias.
A limpeza da vidraria deve ser feita inicialmente com gua
corrente, para retirada dos contaminantes mais solveis.
Aps, deve-se mergulhar a vidraria em uma soluo de
detergente neutro, especfico para materiais de laboratrio,
na concentrao e no tempo recomendados pelo fabricante. Com o auxlio de uma escova adequada para cada tipo
de vidraria, proceder a limpeza mecnica, enxaguando em
gua corrente at a remoo completa do detergente. O

enxgue final sempre feito com gua destilada ou
deionizada. Vidrarias de maior preciso no podem ser
levadas estufa para secagem, pois a temperatura afeta a
calibrao das mesmas. J as demais podem ser secas em
estufa, a temperaturas de aproximadamente 60 a 90C.
Sempre se deve guardar as vidrarias limpas e secas.
Calibrao de vidrarias de preciso
Para maior exatido dos resultados em Qumica analtica, a calibrao de
vidrarias volumtricas deve ser feita, a fim de corrigir o volume que realmente
est sendo medido. Utiliza-se a pesagem de volumes de gua, de acordo com
o volume de aferio do material. Para tanto, importante anotar a temperatura, fazendo a correo do valor da massa especfica, convertendo massa em
volume. Isso necessrio, pois geralmente as vidrarias so calibradas temperatura de 20C, bem abaixo de nossa temperatura ambiente. Esse valor, corrigido, dever ser considerado no clculo final para a obteno de resultados de
anlise.
Um exemplo seria o procedimento de calibrao de uma pipeta volumtrica
de 10 mL:
preciso colocar o recipiente para pesagem, de preferncia um pesa-
filtro, na balana analtica, e tar-lo (com a tampa).

A pipeta a ser calibrada deve ser preenchida com gua destilada, at
um pouco acima do trao de aferio. Seca-se a ponta da pipeta, para

remover qualquer excesso de gua, e zera-se, respeitando a posio do
menisco e evitando o erro de paralaxe.
Retira-se ento a tampa do pesa-filtro, transferindo-se o volume de 10
mL de gua para o interior do mesmo, tampando-o em seguida, evitando assim qualquer perda de gua por evaporao.
Anota-se ento a massa de gua obtida e utiliza-se a equao seguinte para converso dessa massa em volume (Tabela 2):
Volume real = m. v
Onde:
m = massa de gua
v = volume de 1 g de gua tabelado
Tabela 2: Massa especfica da gua em diferentes temperaturas

Temperatura (C) Massa especfica da gua (g mL-1)
Volume de 1g de
gua (mL)
10
0,9997026
1,0014
11
0,9996084
1,0015
12
0,9995004
1,0016
13
0,9993801
1,0017
14
0,9992474
1,0018
15
0,9991026
1,0020
16
0,9989460
1,0021
17
0,9987779
1,0023
18
0,9985986
1,0025
19
0,9984082
1,0027
20
0,9982071
1,0029
21
0,9979955
1,0031
22
0,9977735
1,00333
23
0,9975415
1,0035
24
0,9972995
1,0038
25
0,9970479
1,0040
26
0,9967867
1,0043
27
0,9965162
1,0046
28
0,9962365
1,0048
29
0,9959478
1,0051
30
0,9956502
1,0054
Fonte: Harris, 2001.
4.1.5.2. Mtodos instrumentais
A anlise instrumental o estudo dos mtodos que

utilizam equipamentos para analisar os componentes
de uma amostra.
Embora o mtodo instrumental aumente o custo de uma anlise pelo
uso de equipamentos sofisticados, que demandam aparatos eletrnicos
mais complexos, sua utilizao vem sendo cada vez mais difundida nos
laboratrios, j que estes conferem vantagens diante dos mtodos clssicos, como maior preciso s anlises bem como a possibilidade de determinar concentraes cada vez menores de analitos, simultaneamente e em
menor tempo.
A seguir sero apresentados os mtodos instrumentais mais utilizados
nas anlises qumicas realizadas tanto no campo da pesquisa e desenvolvimento, como no controle de qualidade de produtos diversos.
4.1.5.2.1. Potenciometria
A potenciometria utiliza eletrodos (de referncia e indicador) para medio de potenciais eltricos de espcies qumicas em uma amostra, relacionando-os com a sua concentrao. Os potenciais so gerados a partir de reaes
de oxirreduo ou processos de migrao seletiva de ons. Em laboratrio, a
maior aplicao desta tcnica na medio do pH de amostras.
Medio do pH
O pH expresso como a relao logartmica da concentrao de ons
H em uma amostra.
+
pH = - log [H+]
Escala de pH
0
cido
7
Neutro
Bsico
14
Utiliza-se para a medio do pH o

equipamento chamado potencimetro, ligado a um eletrodo on seletivo de vidro
(especfico para ons H+). Ele combinado a um eletrodo de referncia, de prata/
cloreto de prata. A parte do eletrodo sensvel aos ons H+ a fina membrana de
vidro, em formato de bulbo, na parte inferior do eletrodo (por esse motivo, deve-se
manter essa parte do eletrodo sempre
hidratada). Na prtica, a variao de potencial do eletrodo corresponde
concentrao de ons H+ na amostra. Antes de efetuar a leitura, o equipamen-
to deve ser calibrado pelo uso de solues-tampo, de pH conhecido (geralmente nos valores 7,0 e 4,0, consecutivamente). O eletrodo deve ser lavado
com gua destilada a cada troca de soluo e secado delicadamente, com
papel de boa qualidade.
4.1.5.2.2. Fundamentos de espectrofotometria
A espectrofotometria um mtodo instrumental que utiliza a luz para

medir as concentraes de substncias qumicas. Para entendermos como isso
acontece, preciso, em primeiro lugar, compreender o que a luz e como ela
se comporta.
A luz uma onda eletromagntica, constituda por partculas de
energia, chamadas ftons, que se propaga no vcuo a uma velocidade igual
a 3.108 m s-1. A energia da luz proporcional ao seu comprimento de onda
(l) e frequncia (u) dessas ondas. O fsico Max Planck, um dos fundadores
da teoria quntica, determinou essa constante de proporcionalidade, chamada
constante de Planck (h):
E=hu
(a)
(b)
l=c
v
Propagao da luz.:
(a) l maior, menor
frequncia e energia.;
(b) l menor, maior
frequncia e energia.
As intensidades de luz, em funo dos diferentes comprimentos de

onda ou frequncias, do origem ao que chamamos de espectro da luz, ou
espectro eletromagntico.
Observe que a luz que conseguimos enxergar apenas uma pequena

faixa de comprimentos de onda do espectro eletromagntico. Porm, h outras
formas de energia que, embora no possamos ver, esto presentes em nosso
dia a dia, como os raios ultravioleta do sol, o calor dos corpos fornecido pelo
infravermelho, as microondas que utilizamos para aquecer alimentos, e os raios
X, que tm poder de penetrao em nossos corpos suficiente para fornecer
imagens internas. No laboratrio, a radiao ultravioleta uma das mais aplicadas, j que sua grande energia faz com que ela atue como bactericida, sendo
utilizada na esterilizao de materiais.
Mas, afinal, o que ocorre ao incidirmos luz em uma substncia? A
energia dessa luz absorvida pelas molculas que formam a substncia, aumentando a energia das mesmas. O efeito dessa absoro depender do tipo de
radiao incidente:
RADIAO
EFEITO NAS MOLCULAS
Microondas
Rotao
Infravermelho
Vibrao
Ultravioleta/Visvel
Promoo dos eltrons a nveis mais energticos
Raios X
Rompimento de ligaes/Ionizao
Lei de Beer-Lambert
Ao incidirmos luz sobre uma amostra, parte dessa energia absorvida e
a outra transmitida. possvel medir essa absoro de luz por determinados
analitos presentes na amostra e relacion-la concentrao destes, atravs de
uma lei fundamental em qumica analtica: a Lei de Beer-Lambert:
A=ebc
Onde:
A = absorvncia (adimensional)
e = absortividade molar (L mol-1 cm-1)
b = caminho ptico (cm)
c = concentrao do analito na amostra (mol L-1)
Para entendermos como essa lei acontece na prtica, precisamos conhecer o caminho percorrido pela luz, desde a fonte da radiao at a passagem
pela amostra e deteco:
A fonte de luz depender da radiao que se deseja incidir e da tcnica

instrumental:
Visvel lmpada halgena de quartzo (como a dos faris de automveis) ou de tungstnio.
Ultravioleta lmpada de arco deutrio.

Infravermelha laser.
Absoro atmica lmpada de catodo oco e lmpada de descarga
sem eletrodos.
A luz atinge o monocromador (prisma, filtro ou rede de disperso),
que tem a propriedade de selecionar apenas um valor de comprimento de
onda. A radiao torna-se monocromtica (uma s cor).
A radiao monocromtica (P0) incide sobre a amostra e absorvida
por determinados constituintes desta (absorvncia). Ela passa atravs da amostra,
percorrendo o caminho ptico, b.
A radiao no absorvida (P) transmitida (transmitncia) e medida
pelo detector, que tem a capacidade de converter a energia recebida em sinal
eltrico. Esse sinal transformado em um valor de absorvncia, que pode ser
lido na tela do equipamento.
Relao entre absorvncia e transmitncia
A transmitncia a quantidade de luz no absorvida pela amostra dada
pela equao: T = P / P0
O percentual de transmitncia (%T ) = 100 T
A absorvncia dada por: A = log10 P0 / P
Relacionando transmitncia e absorvncia, temos ento:
A = log10 1 / T
A = log10 100 / %T
A = 2 - l o g10 %T
A relao linear entre a concentrao e a absorvncia simples e

direta. Assim correto expressar a Lei de Beer-Lambert usando a absorvncia,
A, como uma medida da absoro da amostra, em vez do %T. importante
destacar que a Lei de Beer-Lambert aplica-se a solues diludas. A relao
linear entre a concentrao e a absorvncia afetada quando a amostra est
muito concentrada, pois as molculas de soluto esto muito prximas e sua
absortividade molar, capacidade de absorver a radiao, afetada por essa
interao.
Espectrofotometria UV/Visvel
Utiliza radiao na faixa do UV/Visvel para determinao de analitos em
uma amostra. Deve-se comparar a amostra a uma referncia negativa, ou ensaio
em branco, que contm todos os reagentes menos a substncia de interesse, e
a padres da substncia que se quer analisar, em concentraes conhecidas.
Esses padres devem ser preparados utilizando reagentes de alta pureza.
A curva de calibrao, ou curva padro, consiste num grfico onde os
valores de diferentes concentraes de padro so colocados, de acordo com
os valores de absorvncia lidos para cada um deles.
Um exemplo da aplicao desta tcnica a determinao da concentrao de protena em amostras pelo mtodo de biureto: ocorre a formao de
um complexo colorido (violeta) pela reao das protenas com o reagente de
biureto ons cobre (II) em meio bsico. A absorvncia de amostras e
padres (concentraes em mg/mL) medida a um l = 555 nm.
Erros em anlises espectrofotomtricas UV/Visvel: como evit-los?

As anlises espectrofotomtricas exigem cuidados que vo desde o
preparo das solues a serem utilizadas at a leitura de absorvncia pelo
detector. As principais fontes de erros instrumentais em espectrofotometria
esto relacionadas seleo do comprimento de onda pelo monocromador,
concentrao da soluo da amostra e posicionamento do compartimento de
amostra. Todos esses fatores causam a disperso da luz, acarretando erros na
deteco e, consequentemente, na leitura dos valores de absorvncia.
No preparo das solues do ensaio em branco, padres e amostras
deve-se evitar a presena de partculas estranhas em suspenso, filtrando as
solues caso seja necessrio. Essas partculas desviam o feixe de luz, prejudicando as leituras de absorvncia.
Uma das principais fontes de erros est na seleo do comprimento de
onda de trabalho. preciso saber o comprimento de onda de absoro
mxima para determinada substncia presente na amostra, de forma a conseguir
a mxima sensibilidade nessa anlise, evitando possveis interferncias.
O monocromador deve ter a capacidade de selecionar o valor de comprimento de onda que se quer trabalhar, sem deixar que ele disperse. Porm,
a largura da fenda para a sada da radiao selecionada deve ser a maior
possvel, possibilitando a chegada de luz ao detector. Quando o detector
recebe pouca luz, isto resulta em uma menor relao sinal-rudo, reduzindo a
preciso da medida da absorvncia. Em geral, os equipamentos dispem de
dois monocromadores em srie, que funcionam como filtros de comprimentos
de onda, impedindo a passagem de radiaes no desejadas para a amostra. A
eficincia seletiva do monocromador tambm pode ser checada, atravs de
padres de calibrao com valores de absorvncia conhecidos, para determinados comprimentos de onda. Esses padres so em geral fornecidos pelo
prprio fabricante do instrumental.
Uma outra fonte de erros est na faixa de leitura da absorvncia. Valores

de absorvncia no devem ser prximos de zero, tampouco acima de 1,0. A
faixa ideal de trabalho, a qual garante a relao linear entre absorvncia e
concentrao, de acordo com a Lei de Beer-Lambert, de 0,1 a 1,0.
Abaixo desta faixa, a absorvncia da amostra se aproxima do ensaio em branco. Acima, a quantidade de luz que chega ao detector muito pequena, j
que h um maior nmero de molculas da amostra absorvendo a radiao. Em
ambas as situaes, de amostras muito diludas ou muito concentradas, h um
aumento na incerteza do valor medido, gerando perda de preciso na anlise.
Tambm se destaca como fonte de erros o posicionamento correto do
compartimento da amostra e a colocao e manipulao da cubeta. Deve-se
tomar o cuidado de no tocar a superfcie da cubeta por onde passa o feixe de
luz, manipulando-a com o auxlio de papel de boa qualidade, que no deixe
resduos. Isso evita marcas de impresses digitais, as quais desviam a luz. Pelo
mesmo motivo, tambm se deve observar o possvel escorrimento de material
pelas paredes externas da cubeta, limpando-as. Ao retirar e recolocar a cubeta,
deve-se evitar movimentos bruscos, que possam vir a mover o suporte de
alguma forma.
Tambm crtico o fechamento do equipamento: caso o compartimento
da amostra no esteja bem fechado, pode ocorrer a entrada de luz de fora do
equipamento, introduzindo disperso da luz. O perfeito fechamento deve
tambm ser feito a fim de evitar a entrada de poeira.
Espectrofotometria de absoro atmica de chama
A espectrofotometria de absoro atmica de chama o mtodo de
anlise mais utilizado para determinao de metais em amostras. O princpio
a absoro de radiao pelo analito, na forma atmica gasosa, obtida pela
introduo da amostra, na forma de aerossol (nebulizao), em uma chama de
ar/acetileno ou acetileno-xido nitroso (temperaturas de 2.200 C e 3.000C,
respectivamente). A absoro atmica uma medida da populao de tomos

do elemento presente na chama e, portanto, da concentrao do mesmo na
amostra, segundo a Lei de Beer-Lambert.
Espectrofotometria de infravermelho
Este tipo de espectrofotometria (tambm chamado espectroscopia de
infravermelho) muito utilizado para a identificao de amostras, especialmente de grupos funcionais orgnicos. A tcnica consiste na incidncia de radiao
infravermelha, que provoca vibraes nas molculas do analito de interesse.
Cada ligao qumica vibra em uma frequncia especfica (nveis vibracionais),
dependendo dos tipos de tomos ligados e geometria da molcula, gerando
um espectro caracterstico da substncia. Na figura ao lado, podemos observar
as regies espectrais caractersticas de alguns grupos funcionais.
4.1.5.2.3. Fotoluminescncia
A fotoluminescncia a radiao eletromagntica emitida quando espcies qumicas que foram previamente excitadas por ftons retornam para nveis
de menor energia (em geral, o estado fundamental), processo que envolve
eltrons de valncia (desativao radiativa). No caso das molculas, a
fotoluminescncia formalmente dividida em fluorescncia e fosforescncia e
as tcnicas analticas que se baseiam respectivamente na medida destes parmetros
so a fluorimetria e a fosforimetria. A intensidade de radiao emitida medida
e relacionada concentrao do analito de interesse na amostra, segundo a Lei
de Beer-Lambert. Experimentalmente, a fosforescncia pode ser isolada da
fluorescncia com o uso de dispositivos seletivos: rejeita-se a luminescncia de
curto tempo de vida (fluorescncia) permitindo a deteco da luminescncia
de longa durao (fosforescncia).
Fatores que afetam a luminescncia
Para que ocorra a luminescncia, uma molcula precisa ter estrutura apropriada e estar em um meio que favorea a desativao radiativa. Embora seja
difcil prever teoricamente se uma molcula exibir luminescncia sem o prvio
conhecimento da diferena de energia relativa entre os estados excitado e
fundamental, possvel, de um modo geral, observar alguns requisitos:
Molculas relativamente rgidas e ricas em eltrons p so potencial-
mente luminescentes.
A fluorescncia um fenmeno luminescente mais comum que a
fosforescncia, sendo observvel temperatura ambiente e diretamente

em solues lquidas, caracterizando um procedimento experimental mais
simples.
A fosforescncia, que um processo com tempo de vida mais longo,
necessita de condies especiais para ser observada. Estruturas moleculares

rgidas naturalmente ou com o uso de algum artifcio experimental so
fundamentais. Assim, o uso de meios slidos ou organizados (micelas,

por exemplo) e a ausncia do contato com o oxignio tm sido de
grande utilidade para permitir a observao da fosforescncia.
A presena de grupos substituintes na molcula tambm fator impor-
tante, pois afeta a intensidade e o tipo de luminescncia. A presena de

grupos hidroxi (-OH), cianeto (-CN) e sulfnico (-SO3H), por
exemplo, tm tendncia a amplificar a fluorescncia. J grupos
cetnicos (-C=O) carboxlicos (-COOH) e halognios (-Cl, -F)
favorecem a fosforescncia.
Outros fatores, tais como temperatura, pH do meio, solvente e
presena de outras espcies, tambm tm profundo efeito nas caractersticas luminescentes, e uma substncia, afetando no somente as
velocidades dos processos luminescentes e dos processos no
radiativos, mas tambm a natureza e a energia relativa do estado
excitado de menor energia.
A luminescncia pode ser
induzida em molculas
naturalmente no luminescentes
atravs de reaes de derivao,
que modificam a estrutura das
molculas e consequentemente
suas propriedades fsicoqumicas, obtendo-se, assim, um
derivado luminescente. Essas
derivaes podem ser feitas com
agentes oxidantes e redutores, derivao com agentes fluorognicos ou
fosfognicos e aps reaes cido-base. Existe tambm a possibilidade da
formao de quelatos com ons de terras raras e derivao da molcula por
meio de reaes fotoqumicas (radiao UV). A figura ao lado mostra (a) a
fluorescncia do antibitico eritromicina, observada em funo da concentrao
do meio cido, e (b) o espectro de excitao/emisso do mesmo antibitico

aps derivao fotoqumica com irradiao UV e aquecimento.
4.1.5.2.4. Cromatografia
O nome cromatografia vem do
grego chroma = cor, e grafein =
grafia. uma tcnica de separao
baseada nas propriedades adsortivas
ou de partio dos componentes de
uma amostra em um sistema
cromatogrfico. Os diferentes componentes so carreados por uma fase
mvel atravs de uma fase estacionria, envolvendo interaes (adsoro
superficial, solubilidade relativa, carga eltrica, hidrofobicidade) entre um ou mais solutos e as duas fases. Os
componentes so detectados, gerando um cromatograma, e quantificados.
Termos importantes em cromatografia:
Fase mvel: o fluido que se move atravs da coluna
cromatogrfica (solvente, no qual a amostra est dissolvida). O solvente e a amostra fluem juntos atravs da fase
estacionria.
Fase estacionria: o material adsorvente, slido ou lquido, que no se move (material pelo qual os componentes
da amostra a serem separados apresentam diferentes graus
de interao) e est empacotado em uma coluna.
Soluto: a substncia em soluo que se deseja separar.
Tipos de cromatografia
Cromatografia gasosa: a
fase mvel geralmente um
gs inerte (hlio, por exemplo). A fase estacionria
um adsorvente ou lquido
distribudo na superfcie de
um suporte poroso inerte
(esquema A).
Cromatografia lquida: a
fase mvel um lquido de
baixa viscosidade que flui
atravs de um leito de fase
estacionria. Se este leito for
um adsorvente slido atravs do qual, a uma alta presso, se faz passar a fase mvel e a amostra, temos a cromatografia lquida de
alta eficincia (CLAE); se a fase estacionria for um slido inico, temos a
cromatografia de troca inica (CTI); se a fase estacionria for um slido poroso fazendo-se a separao em funo do tamanho molecular, temos a
cromatografia de excluso por tamanho (CET) um caso particular deste tipo
de cromatografia a usada, por exemplo, no estudo de polmeros, em que a
fase estacionria um gel, chamando-se por isso cromatografia de permeao
de gel ou GPC (esquema B).
Cromatografia em camada fina: a fase mvel um lquido de baixa
viscosidade que elui atravs da fase estacionria, por capilaridade mais
vulgarmente de baixo para cima. A fase estacionria um slido (slica ou
alumina) depositado em camada fina e uniforme sobre um suporte slido
inerte.
4.1.5.2.5. Anlise de umidade residual pelo mtodo de Karl

Fischer titulao coulomtrica
A titulao pelo mtodo de Karl Fischer a tcnica mais utilizada para a

determinao da umidade residual e aplica-se anlise de frmacos, alimentos,
fluidos biolgicos, derivados do petrleo, matrias-primas, amostras ambientais
e outros produtos diversos.
Algumas vantagens do mtodo coulomtrico so a preciso, com a possibilidade de determinao de quantidades de gua da ordem de 1 mg mL-1, a
necessidade de um pequeno volume de amostra e a reduo no tempo de
anlise.
O princpio desse mtodo baseia-se na reao entre a gua da amostra
e o iodo produzido na clula de titulao, na presena da soluo de Karl
Fischer, que contm dixido de enxofre, (SO2), lcool (ROH) e uma base
(B) em sua composio:
B I2 + B SO2 + B + H2O 2 BH+I- + BSO3
BSO3 + ROH BH+ RSO3O equipamento utilizado
possui uma clula de titulao com
dois eletrodos: um gerador de
iodo, I2, que consumido rapidamente pela reao com a gua
presente na amostra, e um eletrodo de referncia de platina,
que funciona como detector do
ponto final de titulao, de acordo com o esquema a seguir.
A gerao de iodo ocorre pela oxidao do I- presente na soluo de

Karl Fischer a I2 (catodo).
A clula principal contm a soluo de Karl Fischer (anodo), onde
ser injetado um volume conhecido da amostra.
A corrente eltrica entre os dois eletrodos mantida constante pelo
equipamento, at que, quando toda a gua da amostra reage com o I 2 produzido, h um excesso do mesmo no interior da clula de reao, ocasionando
uma queda brusca no potencial eltrico, detectado pelo eletrodo de platina.
4.1.6. Tratamento de dados
Estatstica bsica
Medidas de tendncia central:
Mdia aritmtica a mais comum das medidas de tendncia central.
calculada somando-se as n observaes originais da amostra e dividindo-se por n.
Amplitude (R) o valor que representa o afastamento entre o maior

e o menor valor de um conjunto de observaes.
Medidas de disperso:
Varincia (s 2) A varincia de um conjunto de dados , por definio, a mdia dos quadrados das diferenas dos valores em relao sua
mdia, isto :
Desvio padro (s) O desvio padro indica a disperso dos dados

dentro da amostra, isto , o quanto os dados em geral diferem da mdia.
Quanto menor o desvio padro, mais parecidos so os valores da srie
estatstica.
Propagao de incertezas
Em qumica analtica, estudam-se mtodos envolvendo medio de volume, massa e absorvncia. Os resultados finais destas medies so obtidos
atravs de clculos e possuem associadas as incertezas originais consideradas
para a realizao destes.
Um exemplo seria a leitura de volume em uma proveta, durante uma
anlise volumtrica:
O volume lido est entre 20,6 e 20,7 mL. Assim, devemos
estimar o algarismo aps o 6. Poderia ser: 20,61 ou 20,62
ou ainda 20,63. Portanto, escrevemos a primeira medida
como: 20,62 0,01.
Pelo mesmo raciocnio, o volume final lido seria 22, 64 mL

0,01. Qual o volume gasto na titulao?
22,64 20,62 = 2, 02 mL
Mas qual a incerteza associada a esse resultado final? a
soma das incertezas: 2,02 mL 0,02
4.1.6.1. Validao
A validao de mtodos analticos deve ser feita para demonstrar que

estes so adequados para a finalidade a que se destinam: determinao qualitativa ou quantitativa de analitos em uma amostra.
Para metodologias descritas em farmacopeias ou outros documentos oficiais, a metodologia ser considerada validada. Em caso contrrio, a validao
dever ser realizada atravs do estudo de parmetros, segundo a tabela 3 a
seguir, e de acordo com a categoria do mtodo analtico (Anvisa, 2003).
Tabela 3 Recomendao de parmetros necessrios para validao dos
mtodos analticos e classificao dos mtodos, segundo sua finalidade (USP
30, 2007)
Parmetro
Categoria
Categoria II
de validao
Exatido
Sim
Sim
Preciso
Sim
Especificidade
Limite de deteco
Categoria
Categoria
III
IV
No
Sim
No
Sim
No
Sim
Sim
Sim
Sim
No
No
Sim
No
Limite de quantificao No
Sim
No
No
Linearidade
Sim
Sim
No
No
Faixa
Sim
Sim
No
Quantitativo Qualitativo
*Pode ser exigido dependendo da natureza do ensaio especfico.
Categoria I Quantificao de macrocomponentes em substncias ativas ou

ingredientes ativos em produtos farmacuticos acabados.
Categoria II Determinao de impurezas em substncias ativas ou componentes
de degradao em produtos farmacuticos acabados.
Categoria III Determinao de caractersticas fisico-qumicas em substncias
ativas ou em produtos acabados (ex.: dissoluo, tamanho de partculas, liberao
da droga).
Categoria IV Testes de identificao.
Parmetros para validao de mtodos analticos
Para o estudo dos parmetros de validao, importante sempre utilizar

substncias de referncia oficializadas pela Farmacopeia Brasileira ou, na ausncia destas, por outras autorizadas pela legislao vigente. No caso da inexistncia
dessas substncias, o uso de padres de trabalho aceito, desde que a
identidade e o teor sejam devidamente comprovados.
Descrio dos parmetros de validao segundo a Resoluo Anvisa RE
899 (2003), Inmetro, DOQ-CGCRE-008 (2003) e USP 30 (2007):
I Exatido
a proximidade dos resultados obtidos pelo mtodo em estudo em
relao ao valor verdadeiro. Vrias metodologias para a determinao da
exatido esto disponveis na literatura. No caso de impurezas, podem
ser utilizados dois procedimentos:
Ensaio de recuperao: ensaio onde o analito de interesse
adicionado matriz da amostra.

Avaliao da exatido sem a matriz: preparam-se pelo menos
duas amostras do analito, com preciso quantitativa, e os resultados da % de recuperao so calculados.

II Preciso
Avaliao da proximidade dos resultados obtidos em uma srie de
medidas de uma amostragem mltipla de uma mesma amostra. Esta
considerada em trs nveis: repetitividade (preciso intracorrida); preciso intermediria (preciso intercorridas) e reprodutibilidade (preciso
interlaboratrios).
Repetitividade: concordncia entre os resultados dentro de um
curto perodo de tempo com o mesmo analista e a mesma
instrumentao. A repetitividade do mtodo verificada por pelo
menos nove determinaes, dentro do intervalo linear do mtodo, que ser descrito mais adiante.
Preciso intermediria: concordncia entre os resultados do mesmo
laboratrio, mas obtidos em dias diferentes, com analistas diferentes e/

ou equipamentos diferentes. Para a determinao da preciso intermediria, recomenda-se um mnimo de dois dias diferentes com analistas
diferentes.
Reprodutibilidade: concordncia entre os resultados obtidos em labo-
ratrios diferentes, geralmente feitos atravs de estudos colaborativos,

aplicados padronizao de metodologias analticas.
A preciso de um mtodo analtico pode ser expressa como o desvio
padro ou desvio padro relativo (DPR) ou coeficiente de variao, CV%, de
uma srie de medidas, que calculado pela frmula:
DPR = DP
. 100
CMD
Onde:
DPR = desvio padro relativo
DP = desvio padro
CMD = concentrao mdia determinada
O valor mximo aceitvel para o DPR de 5%.
III Especificidade
Capacidade que o mtodo possui de medir exatamente um composto
em presena de outros componentes, tais como impurezas, produtos de
degradao e componentes da matriz.
Testa-se a especificidade de mtodos qualitativos comparando a aplicao do mtodo em amostras contendo o analito de interesse com amostras que no o contm, porm possuem substncias de estrutura qumica
semelhante. O mtodo precisa demonstrar a seletividade para o analito,
mesmo em presena destas substncias.
Para anlises quantitativas, pode-se comparar os resultados obtidos para

amostras contaminadas com impurezas adicionadas em quantidades determinadas com amostras isentas de contaminantes. O resultado final no
deve ser afetado pela presena das substncias adicionadas.
IV Limites de deteco e quantificao
Parmetro de ensaios quantitativos para baixos nveis de compostos em
matrizes de amostras. O limite de deteco a menor concentrao do
analito que pode ser determinada com preciso e rigor aceitveis. Na
prtica, corresponde normalmente ao padro de calibrao de menor
concentrao (excluindo o branco).
V Linearidade
A linearidade do procedimento analtico a sua capacidade de produzir
resultados que sejam diretamente proporcionais concentrao do analito
na amostra, em uma faixa de concentrao. Deve ser construda a curva
padro experimental e devem ser calculados: o coeficiente de correlao, r, que precisa ser no mnimo igual a 0,99; a interseo com o eixo
Y; o coeficiente angular; a soma residual dos mnimos quadrados da
regresso linear; e o desvio padro relativo. Recomenda-se que a
linearidade seja determinada pela anlise de pelo menos cinco concentraes diferentes, com teor de analito contido entre 80% e 120% da
concentrao terica do teste.
VI Faixa
Intervalo a faixa entre os limites de quantificao superior e inferior de
um mtodo analtico. Normalmente, derivado do estudo de linearidade
e depende da aplicao pretendida do mtodo.
O protocolo de validao um documento completo, que contm
todos os parmetros avaliados para a validao de determinado mtodo.
Modelo de Protocolo de Validao

Consideraes gerais:
Objetivo
Laboratrio/Setor responsvel
Especificaes do mtodo
Classificao do mtodo em validao
Parmetros de validao aplicveis ao mtodo
Siglas
Material/Vidraria/Equipamentos (marca, modelo, data da calibrao)
Reagentes (marca, fornecedor, data de validade)
Descrio dos parmetros de validao aplicveis ao mtodo
Testes/Resultados da validao
Estimativa da incerteza dos resultados obtidos atravs do mtodo
Concluso
Folha de aprovao
Assinaturas dos responsveis pela validao
A metodologia analtica dever ser revalidada caso sejam efetuadas mudanas na sntese da substncia ativa, na composio do produto acabado ou
no procedimento analtico.
5. F
undamentos em qumica orgnica
Fundamentos
A qumica orgnica o ramo da qumica que estuda as substncias que

contm tomos de carbono em sua composio. O tomo de carbono, por
ser tetravalente, se une a outros tomos formando quatro ligaes covalentes.
Assim, o carbono tem a capacidade de formar longas cadeias, chamadas cadeias carbnicas.
As substncias orgnicas so classificadas de acordo com o seu grupo

funcional caracterstico.
Funes orgnicas mais importantes
Funo orgnica
Grupo funciona
Exemplo
Hidrocarboneto
C xH y
CH4
Metano
cido carboxlico R-COOH
CH3-COOH
cido etanoico(cido actico)
Aldedo
R-CHO
CH3-CHO
etanal
Amida
R-CONH2
CH3-CONH2
etanamida
Amina
R-NH2
CH3-CH2NH2
etanamina
lcool
R-OH
CH3-CH2OH
Etanol (lcool etlico)
Cetona
R1-CO-R2
CH3-CO-CH3
propanona (acetona)
ster
R1-COOR2
HCOO-C6H5
metanoato de fenila
ter
R1-O-R2
CH3CH2-O-CH2CH3
Etoxietano(ter etlico)
Fenol
o-hidroximetil benzeno(o-cresol ou creolina)
A qumica orgnica experimental envolve reaes de sntese e purificao, caracterizao de grupos funcionais, separao, purificao e estudo das
propriedades das substncias orgnicas.
5.1. Tcnicas de separao e purificao

5.1.1. Extrao
A extrao um mtodo onde se utiliza um solvente, que dissolve o

analito de interesse em uma amostra seletivamente, separando-o da mesma. A
extrao pode ser em fase lquida ou slida, as quais apresentam as seguintes
caractersticas principais, descritas no quadro abaixo:
Extrao lquida
Extrao slida
Solventes orgnicos (ex.: acetona,

hexano, acetato de butila, dixido
de carbono)
Fase slida (ex.: slica-C18,

resinas de troca inica)
Microondas ou aparato prprio para

extrao
Coluna cromatogrfica ou seringa
Aquecimento
No necessita aquecimento
Remoo do solvente aumenta o custo

da anlise
Reduz o uso de solventes orgnicos
5.1.2. Destilao simples
um processo de separao de misturas homogneas slido-lquido

ou lquido-lquido (desde que a diferena das temperaturas de ebulio
entre os componentes seja alta), onde ocorre a vaporizao e condensao
do componente mais voltil. A
tcnica da destilao simples utilizada para obteno de solventes
puros e muito empregada na produo de bebidas destiladas.
5.1.3. Destilao fracionada
uma tcnica utilizada para separar misturas homogneas lquidas, pela

vaporizao e condensao dos componentes da mistura, baseando-se na
diferena de ponto de ebulio entre
esses componentes. As aplicaes da
destilao fracionada so principalmente relacionadas separao dos componentes (fraes) do petrleo.
5.1.4. Cristalizao
A cristalizao um mtodo de separao e purificao de solues

lquidas, ou slido-lquidas, onde so obtidos cristais puros de um dos componentes, o soluto, sendo o mtodo mais adequado para a purificao de
substncias slidas. As etapas principais do processo so:
Nucleao A partir do preparo de uma soluo supersaturada, as
molculas do soluto se unem, formando alguns ncleos microscpicos.

Ao atingirem a estabilidade e determinado tamanho, estes ncleos se
organizam em uma estrutura cristalina. Essa organizao depender de
fatores como a temperatura e a concentrao da soluo supersaturada.
Crescimento dos cristais A partir dos ncleos ocorre o crescimento
dos cristais, a uma velocidade relacionada supersaturao da soluo.

Os cristais tm formas e tamanhos diferentes, dependendo das condies em que se efetua sua obteno, o que se torna um grande desafio
quando se trata de processos industriais de cristalizao.
5.1.5. Determinao do ponto de fuso
O ponto de fuso a temperatura constante na qual uma substncia muda do estado fsico slido para
o lquido. A determinao desta propriedade fundamental para a caracterizao de substncias puras. A tcnica pelo mtodo do tubo de Thiele
consiste em colocar pequena quantidade da substncia slida, previamente
pulverizada, no interior de um tubo
Fonte: Constantino, 2009
capilar, fechado em uma das extremidades. A introduo da substncia deve ser feita empurrando a extremidade
aberta contra o slido, com o auxlio de uma esptula. Para a compactao da
substncia no fundo do capilar, deve-se solt-lo no interior de um tubo de
vidro. O capilar deve ser preso a um termmetro, o mais prximo possvel do
bulbo. O ponto de fuso a temperatura na qual aparece a primeira gota de
lquido e desaparece o restante da parte slida da substncia em anlise.
Resumo do captulo
A qumica uma cincia essencialmente experimental, que se divide em

quatro ramos principais: qumica inorgnica, orgnica, analtica e fsico-qumica.
O laboratrio o local mais importante para o desenvolvimento desta cincia.
Para a realizao de atividades laboratoriais, imprescindvel reconhecer os
diversos materiais, equipamentos, substncias, fontes de consulta bibliogrfica,
smbolos e normas de segurana, e apresentar uma postura adequada.
O preparo de solues uma das tarefas principais dentro de um
laboratrio e engloba: qualidade da gua, dos reagentes, da vidraria e da
tcnica de preparo, bem como o conhecimento das unidades de concentrao
(quantidade de matria, massa por volume, massa por massa e volume por
volume), clculos de diluio e procedimentos de armazenagem.
O ramo da qumica que estuda a identificao e quantificao das substncias que compem uma amostra a qumica analtica. As principais etapas
de uma determinao analtica so: planejamento e organizao da anlise;
estudo das propriedades do analito; amostragem; preparo da amostra laboratorial;
seleo do mtodo de anlise clssicos (gravimetria e volumetria) ou instrumentais (potenciometria, espectrofotometria UV/Visvel, absoro atmica,
infravermelho, fotoluminescncia e cromatografia) e tratamento de dados/
validao. O controle de qualidade das diversas matrias-primas e dos produtos industrializados, os resduos gerados nesses processos produtivos, as reaes qumicas na natureza e as pesquisas envolvendo a transformao de substncias em novos produtos so reas onde a qumica analtica est presente. Os
requisitos de qualidade para diversos produtos na rea da sade so estabelecidos pelas farmacopeias. A Farmacopeia Brasileira o cdigo oficial farmacutico do pas.
A qumica orgnica o ramo da qumica que estuda as substncias que
contm tomos de carbono em sua composio, as quais so classificadas de
acordo com o seu grupo funcional caracterstico. A qumica orgnica experi-
mental envolve reaes de sntese e purificao, caracterizao de grupos

funcionais, separao, purificao e estudo das propriedades fsico-qumicas.
Questes para reflexo
1) Um tcnico de laboratrio preparou uma soluo aquosa de sulfato

de cobre, armazenando-a em um recipiente de vidro, na geladeira.
Algum tempo depois, ele observou a presena de um precipitado de
sulfato de cobre no fundo do recipiente. O tcnico decidiu, ento,
aquecer a soluo, sob agitao, at que o precipitado dissolvesse
completamente. Logo aps, deixou a soluo em repouso sobre a
bancada at que a mesma atingisse a temperatura ambiente. O tcnico
observou que a soluo permaneceu homognea. Explique o que aconteceu antes e depois do aquecimento da soluo.
2) Descreva, com as suas palavras, a sequncia correta a ser seguida
para o preparo de um litro de uma soluo salina (ou soro caseiro) na
concentrao de 0,9% (m/v). Liste os materiais, reagentes, equipamentos, procedimento (tcnica de preparo e armazenagem) e clculos
necessrios. Reflita sobre os cuidados gerais a serem adotados quando
do preparo de solues.
3) Um tcnico recebeu uma amostra de gua deionizada para anlise no
laboratrio. Descreva o procedimento a ser seguido, desde o recebimento dessa amostra at o seu descarte, incluindo as etapas para a
realizao das determinaes analticas, preconizadas pela farmacopeia,
para esse tipo de amostra.
Bibliografia Consultada
ALVES, L. Equipe Brasil Escola. Disponvel em: <http://www.brasilescola.com/quimica/
producao-etanol.htm>. Acesso em: 25 maio 2009.
ANVISA. Guia para validao de mtodos analticos e bioanalticos . Resoluo RE
899, 2003.
______. Critrios para a Habilitao de Laboratrios Segundo os Princpios das Boas Prticas de Laboratrio (BPL). Procedimento GGLAS 02/BPL. Reviso 00. Braslia, 2001.
AQUINO, F. R. N.; NUNES, D. S. S. Cromatografia: princpios bsicos e tcnicas
afins. Rio de Janeiro: Intercincia, 2003
BUYS, B. Inovao: parceria gera tecnologia para otimizar produo em refinarias. Uniemp,
v.3, n. 3, 2007.
CARVALHO, P. R. Boas Prticas Qumicas em Biossegurana. Rio de Janeiro: Intercincia,
1999.
CAULCUTT, R.; BODDY, R. Statistics for Analytical Chemists. New York: Chapman
and Hall, 1983.
CHAVES, M. H. et al. Apostila de Qumica Orgnica Experimental I. UFPI. Centro de
Cincias da Natureza-Departamento de Qumica, 2003.
CIOLLA, R. Fundamentos da Cromatografia a Lquido de Alto Desempenho: HPLC.
So Paulo: Edgard Blcher, 2003.
COLLINS, H. Introduo a Mtodos Cromatogrficos. 7. ed. Campinas: Unicamp,
1997.
CONSTANTINO, L. Tcnicas de Laboratrio. Faculdade de Farmcia da Universidade
de Lisboa (FFUL). Disponvel em: <http://www.ff.ul.pt/paginas/constant/tl/tecnicas/
pfusao.html>. Acesso em: 5 jun. 2009.
ESTATSTICA PARA VALIDAO DE ENSAIOS. Rio de Janeiro: Sociedade Brasileira de Metrologia, 2002.
FARMACOPEIA BRASILEIRA. Parte III. 4. ed. So Paulo: Atheneu, 2000.
FDA. Guidance for Industry analytical procedures and methods validation, chemistry,
manufacturing and controls documentation. USA, 2000.
FINETE, V. L. M. Desenvolvimento de Mtodos Espectrofluorimtricos para a Determinao de Eritromicina e Canamicina e Aplicabilidade na Vacina contra a Febre Amarela,
2005. Dissertao de Mestrado, Rio de Janeiro: Pontifcia Universidade Catlica.
FINETE, V. L. M.; AUCLIO, R. Q.; ARISSAWA, M. Fluorimetric method for the
determination of erythromycin using a photochemical derivatization approach. Journal of
the Brazilian Chemical Society, v. 19, n. 7, p. 1.418-1.422, 2008.
HARRIS, D. C. Anlise Qumica Quantitativa. 5. ed. Rio de Janeiro: LTC, 2001.

HARTWIG, D. R.; SOUZA E. de; MOTA, R. M. Qumica Orgnica. So Paulo:
Scipione, 2000.
INMETRO. Orientaes sobre Validao de Mtodos de Ensaios Qumicos. DOQCGCRE-008, 2003a.
______. Critrios para o Credenciamento de Laboratrio de Ensaio BPL Aplicao
a estudos de campos. NIT-DICLA-034. Reviso 00, 2003b.
MALDANER, O. A. Qumica 1: construo de conceitos fundamentais. 2. ed. Iju:
Uniju, 1997.
MORITA, T.; ASSUMPO, R. M. Manual de Solues, Reagentes e Solventes. So
Paulo: Edgard Blcher, 1995.
RIBANI, M; BOTTOLI, C. B. G.; MELO, L. F.C. Validao em mtodos cromatogrficos
e eletroforticos. Qumica Nova, v. 27, p. 771-780, 2004.
ROMANELLI, L. I.; JUSTI, R. S. Aprendendo Qumica. Iju: Uniju, 1998.
SARDELLA. Qumica. Srio novo Ensino Mdio. Volume nico. So Paulo: tica,
2000.
SCHULMAN, S. G. Fluorescence and Phosphorescence Spectroscopy : physicochemical
principles and practice. New York: Pergamon Press, 1977.
SILVERSTEIN, R. M.; WEBSTER, F. X.; KIEMLE, D. J. Identificao Espectromtrica
de Compostos Orgnicos. 7. ed. Rio de Janeiro: LTC, 2006.
SKOOG, D. Princpios de Anlise Instrumental. 5. ed. Porto Alegre: 2002
SOLOMONS, T. W. G.; FRYHLE, B. C. Qumica Orgnica. V. 1 e 2. 7. ed. Rio de
Janeiro: Livros Tcnicos e Cientficos, 2001.
TITO, M. R.; CANTO, E. L. do. Qumica. Coleo base. Volume nico. 3. ed. So
Paulo: Moderna, 2003.
USP30-NF25. American Pharmacopeia, 2007.
VOGEL, A. Anlise Orgnica Qualitativa. Qumica orgnica. V. 1, 2 e 3. Rio de
Janeiro: Ao Livro Tcnico e Cientfico, 1980.
| 287
Anexos
Anexo 1 | 289
Anexo 1

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Conceitos e Mtodos para a Formao de Tcnicos em Laboratrios de Sade

2 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

FUNDAO OSWALDO CRUZ

Conceitos e Mtodos para a Formao de Tcnicos

Etelcia Moraes Molinaro

4 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Copyright 2009 dos autores

Projeto Grfico e Editorao

Molinaro, Etelcia Moraes

6 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Marcelo Pelajo Machado

Sebastio Enes Reis Couto

8 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Apresentao pelas organizadoras

Captulo 1. Biossegurana e boas prticas laboratoriais

Captulo 2. Conceitos e tcnicas bsicas aplicadas em laboratrio 67

Captulo 4. Animais de laboratrio

Captulo 5. Fundamentos em qumica experimental

10 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

12 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

crolgio de cientista famoso. Cito textual: Joaquim Venncio conseguiu,

Tcnicos em Laboratrios de Sade , reunindo professores de vrias unidades da Fiocruz.

Pesquisador Emrito da Fundao Oswaldo Cruz

14 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

16 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Um sonho quase realizado

As alteraes pelas quais passa o mundo com a globalizao trazem

18 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

sou a divulgar conhecimentos, elaborando cursos, metodologias e tecnologias

Um sonho quase realizado

O pontap inicial deste sonho s foi possvel pelo incondicional apoio

20 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

O laboratrio um ambiente extremamente hostil. Convivem no mesmo

22 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Relativo a, ou prprio dos seres vivos (Dicionrio

No Brasil, a Biossegurana possui duas vertentes:

Biossegurana e boas prticas laboratoriais

presentes nesses ambientes, que se encontra no contexto da

O homem um ser biolgico, logo, um produto da natureza. Mas

24 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

O funcionrio no tem moral. Ele agiu sem tica. Afinal de

o conjunto de valores que orientam o comportamento

Valores so normas, princpios ou padres sociais aceitos ou mantidos

Biossegurana e boas prticas laboratoriais

subjetivo, quanto o de natureza exterior e social. Prescrevem

A Biotica est apoiada em quatro princpios:

26 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

Princpio da no-maleficncia Assegura que sejam minorados ou

Biossegurana e boas prticas laboratoriais

um tratado de deveres e/ou condutas que

Existem inmeros cdigos de Deontologia, sendo esta codificao da

um tratado sobre os direitos profissionais de

28 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

O que so os Comits de tica em Pesquisa?

Biossegurana e boas prticas laboratoriais

2. Legislao Brasileira de Biossegurana

A aprovao da Lei de Biossegurana (lei n. 11.105, de 24 de maro

O legislador, com o objetivo de esclarecer os limites da lei e enfatizar

30 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade

III molculas de ADN/ARN recombinante: as molculas

A Lei de Biossegurana prev que as demais biotecnologias que no

Biossegurana e boas prticas laboratoriais