Aula 08

Protenas de membrana
Aulas de 11 a 16 de Protenas (Bioqumica I).

Ao fnal desta aula, voc dever ser capaz de:
Reconhecer as diferentes protenas e carboidratos de
membrana de acordo com:
sua funo (transporte, reconhecimento e adeso etc.);
sua insero na bicamada lipdica (unipasso, multipasso,
ancorada, perifrica etc.);
sua organizao em domnios de membrana.
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Pr-requisitos
Biologia Celular I | Protenas de membrana
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Figura 8.2: As protenas esquematizadas em A e
B atravessam a bicamada lipdica. Em A, a cadeia
polipeptdica passa apenas uma vez atravs
da bicamada, enquanto B atravessa 3 vezes a
bicamada.
A estrutura bsica de todas as membranas biolgicas formada por uma bicapa
lipdica; entretanto, so as protenas que conferem individualidade e especifcidade
s membranas celulares.
As funes desempenhadas por cada membrana (transporte, reconhecimento, adeso,
veja Figura 8.1) dependem primariamente de suas protenas constituintes.
As protenas correspondem, em mdia, a cerca de 50% da massa de uma membrana,
podendo chegar a 75%, no caso da membrana mitocondrial interna.
A tcnica da criofratura (veja Aula 3) permitiu, pela primeira vez, observar que as
protenas de membrana se distribuem na bicamada lipdica ora atravessando-a de um
lado ao outro, ora inserindo-se apenas no folheto externo ou interno da bicapa.
Assim, na descrio clssica do modelo do mosaico fuido, as protenas da membrana
so classifcadas em dois grupos: transmembrana, quando atravessam a matriz
lipdica; perifricas, quando se encontram associadas a outras protenas integrais
ou lipdeos da membrana.
INTRODUO
MODOS DE INSERO DE UMA
PROTENA NA MEMBRANA
Decorridos quase 30 anos da proposio do
modelo do mosaico fuido das membranas, sabe-se
hoje que uma protena pode inserir-se na bicapa
lipdica de vrias formas:
1. As protenas transmembrana atravessam
a bicapa lipdica de um lado a outro, expondo parte
de si de cada lado da membrana (Figura 8.2).
Figura 8.1: Principais funes das protenas de membrana.
A transporte; B adeso; C reconhecimento.
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A protena que
transporta glicose
para dentro das
clulas do tipo
multipasso, assim
como a bomba de
sdio/potssio.
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Bicamada
lipdica
Meio
Extracelular
Meio
Intracelular
Algumas protenas atravessam apenas uma vez a bicamada e so
chamadas unipasso (Figura 8.2A), enquanto as que passam muitas vezes
pela bicamada so chamadas multipasso (Figura 8.2B). Muitas vezes, as
protenas multipasso criam em seu interior um ambiente hidroflico que
pode atuar como um poro transmembrana.
2. H protenas que se associam membrana de modo indireto,
ou seja, formam ligaes no covalentes com protenas transmembrana
(Figura 8.3). Estas correspondem s protenas perifricas inicialmente
descritas no modelo do mosaico fuido.
Figura 8.3: As protenas perifricas
ligam-se a protenas inseridas na
bicamada, seja pelo lado intracelular
(a) ou pelo lado extracelular (b).
Figura 8.4: As ncoras que prendem
as protenas pelo lado citoplasmtico
(b) so diferentes daquelas do lado
extracelular (a).
3. Outras protenas de membrana se prendem bicamada apenas
por uma ligao covalente a um dos lipdeos da membrana. Estas so
chamadas de protenas ancoradas (Figura 8.4 A e B).
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J as protenas do tipo 2 se soltam facilmente. Tratamentos brandos,
como o uso de solues que alteram o pH e/ou a fora inica so sufcientes
para romper as foras que as mantm presas membrana (Figura 8.6).
As protenas podem ser separadas dos folhetos lipdicos da
membrana por meios mais ou menos drsticos, de acordo com seu
modo de insero nesta. As protenas do tipo 1 (transmembrana) podem
ser isoladas da membrana com o uso de detergentes que solubilizam a
bicamada lipdica (Figura 8.5).
As ncoras de membrana podem ser de vrios tipos, especfcos para o lado
citoplasmtico ou para o lado extracelular da membrana. Protenas ligadas
covalentemente a lipdeos podem ser encontradas no folheto citoplasmtico.
Protenas ancoradas via glicosil-fosfatidil-inositol (GPI), s existem na face
da membrana voltada para o meio extracelular. A protena ancorada por
GPI se prende sempre ao fosfolipdeo fosfatidilinositol, tendo como ponte
entre a protena e o fosfolipdeo uma seqncia de acares, que sempre
a mesma, uma etanolamina. interessante como uma mesma estrutura est
presente na ligao de protenas to diferentes membrana.
!
Figura 8.5: As protenas que atravessam
integral-mente a bicamada lipdica
podem ser isoladas pelo tratamento
com detergentes que se ligam aos
lipdeos, separando-os das protenas.
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Finalmente, as do tipo 3 s podem ser removidas pelo uso de
enzimas especfcas da famlia das fosfolipases, que cortam as ncoras,
deixando as protenas livres.
Assim, as protenas tambm podem ser classificadas pela
difculdade de sua extrao da membrana plasmtica. As do tipo 1,
transmembrana, e as do tipo 3, ancoradas, so consideradas protenas
integrais da membrana plasmtica, enquanto as do tipo 2, fceis de
extrair, so consideradas perifricas.
Figura 8.6: Protenas que se ligam por carga a outros componentes da membrana
podem se soltar da mesma, se a fora inica da soluo onde se encontram for
drasticamente alterada.
Protozorios parasitas como o Trypanosoma brucei (agente
da doena do sono) e o Plasmodium (causador da malria)
periodicamente secretam a enzima fosfolipase-c especfica
para fosfatidil inositol. Dessa forma, todas as protenas ancoradas
por GPI na superfcie deles so rapidamente eliminadas e
os protozorios se tornam invisveis para os anticorpos j
produzidos pelo hospedeiro.
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COMO AS PROTENAS ATRAVESSAM
A BICAMADA LIPDICA?
As pores de uma protena de membrana que se voltam para o
citoplasma ou para o meio extracelular so naturalmente hidroflicas.
Entretanto, o segmento da cadeia polipeptdica que atravessa a bicamada
lipdica precisa passar por um ambiente hidrofbico que, a princpio, seria
hostil. Esse segmento composto principalmente por aminocidos cujas
cadeias laterais so hidrofbicas, podendo, portanto, fcar voltadas para
as molculas apolares ( = hidrofbicas) adjacentes. Em contrapartida, os
laos peptdicos da cadeia so normalmente hidroflicos, fcando voltados
para o centro, onde formam pontes de hidrognio uns com os outros. Isso
leva a cadeia polipeptdica a enrolar-se em torno de um eixo imaginrio,
formando uma alfa-hlice (Figura 8.7).
O que so as protenas unipasso?
Se voc estiver se perguntando que tipos de protena tm essa
confgurao, a resposta : principalmente protenas que atuam como
receptores. (Por qu? Veja aula de receptores.) J as protenas multipasso
criam um microambiente hidroflico na membrana atravs da qual
podem passar ( = ser transportadas) molculas especfcas (veja as aulas
de Transporte, 9 a 12).
Figura 8.7: Duas maneiras de representar a alfa-hlice do segmento
transmembrana das protenas.
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NEM TODAS AS PROTENAS ATRAVESSAM A BICAMADA
FORMANDO UMA HLICE
Mais raramente, as cadeias polipeptdicas no se enrolam em
alfa-hlice, mas adquirem uma conformao em fta beta-pregueada,
curvando-se em idas e vindas atravs da bicamada e originando uma
estrutura em canal relativamente rgida chamada beta-barril. As porinas
so protenas que possuem essa conformao e so encontradas na
membrana externa das mitocndrias e de algumas bactrias, sendo
responsveis pela passagem de pequenas molculas nutrientes e ons
(Figura 8.8). Alm de serem relativamente pouco seletivos, esses poros
so muito menos versteis do que as composies possveis com as
protenas em alfa-hlice.
Figura 8.9: (a) Protenas se associam formando um complexo em que todas as
subunidades so iguais. (b) O receptor de acetilcolina um complexo protico em
que as subunidades no so iguais.
AS PROTENAS SE ASSOCIAM EM COMPLEXOS PROTICOS
Alm de criarem um ambiente hidroflico atravs das protenas
multipasso, muitas protenas ainda formam complexos na membrana.
Algumas vezes, todas as protenas componentes do complexo so iguais
(Figura 8.9A). Outros complexos so formados por protenas diferentes
(Figura 8.9B). Esses complexos proticos tambm formam uma rea
hidroflica pela qual podem passar molculas como ons ou acares,
que normalmente so barrados pela bicamada lipdica.
Figura 8.8: (a) conformao em beta-barril. As cadeias de aminocidos formam ftas
relativamente rgidas; (b) porinas, formando canais na membrana de bactrias.
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AS PROTENAS TAMBM SE MOVEM
Assim como os lipdeos, as protenas de membrana tambm so
capazes de girar em torno de seu prprio eixo (rotao) e de deslocar-se
no plano da membrana (difuso lateral). O fip-fop de protenas no
ocorre nunca. A comprovao dos movimentos laterais foi obtida em
1970 por Frye e Edidin em experimentos com heterocrions (uma clula
hbrida com dois ncleos diferentes). Eles fabricaram anticorpos que
reconheciam as protenas da superfcie de clulas de camundongo e
marcaram esses anticorpos com fuorocromo verde. Tambm fabricaram
anticorpos que s reconheciam as protenas da superfcie de clulas
humanas e os marcaram com fuorocromo vermelho. Depois fzeram
um experimento em que fundiam uma clula de camundongo com uma
clula humana. Isso no acontece espontaneamente e difcil conseguir.
Hoje j se conhecem substncias que induzem a fuso de clulas diferentes
e isso usado na produo de anticorpos monoclonais (veja Aula 4). No
tempo de Frye e Edidin, s se podia fazer
fuso entre clulas diferentes com a ajuda
de vrus, e foi o que eles fzeram, obtendo
um heterocrion. Depois incubaram o
heterocrion com os anticorpos, a baixa
temperatura, e olharam no microscpio
de fluorescncia. Ele tinha metade da
membrana fuorescendo em verde e metade
em vermelho, correspondendo s protenas
de membrana que vieram das clulas de
camundongo e humana, respectivamente.
Resolveram colocar o heterocrion j
marcado com os anticorpos na temperatura
fsiolgica por alguns minutos e olharam
de novo: as fluorescncias tinham se
misturado completamente, no sendo mais
possvel distinguir verde e vermelho.
Assim, fcou demonstrado que as
protenas podem se mover no plano da
membrana plasmtica e que a membrana
fuida (Figura 8.10).
Figura 8.10: Esquema do experimento que comprovou
a fuidez da membrana.
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Figura 8.11: Mecanismos de restrio mobilidade lateral das protenas de membrana:
(a) formao de agregados,
(b) associao a elementos do meio extracelular,
(c) associao a elementos do citoesqueleto e
(d) formao de complexos de interao entre as protenas de duas clulas.
( ) A (C)
(D) ( ) B
( ) A (C)
(D) ( ) B
( ) A (C)
(D) ( ) B
( ) A (C)
(D) ( ) B
MECANISMOS DE RESTRIO MOBILIDADE DAS
PROTENAS: BARREIRAS E DOMNIOS
Tem sido observado que muitas protenas no se difundem
livremente no plano da membrana. A membrana plasmtica se divide em
vrias reas, chamadas domnios, entre as quais podem existir barreiras.
Essa restrio interessante por vrios motivos: algumas clulas, como
as do epitlio intestinal, possuem, na superfcie voltada para a luz do
rgo, protenas que garantem a absoro dos nutrientes num s sentido;
outras, como os espermatozides, possuem protenas especfcas na regio
da cabea (que far contato com o vulo) que no esto presentes na
cauda e vice-versa. Os mecanismos bsicos que restringem a mobilidade
das protenas no plano da membrana so:
1. Formao de complexos: vrias protenas se associam formando
complexos. Esses complexos proticos s podem se deslocar como um todo.
Alguns complexos so formados por diferentes protenas, enquanto outros
resultam do agrupamento de protenas semelhantes (Figura 8.11A).
2. Associao ao citoesqueleto ou matriz extracelular: algumas
protenas tm sua mobilidade lateral limitada por estarem associadas a
macromolculas do meio extra ou intracelular como elementos da matriz
extracelular e do citoesqueleto, respectivamente (Figura 8.11B,C).
3. Ligao entre protenas: as protenas de duas clulas adjacentes
podem ligar-se, limitando assim a mobilidade de ambas. A adeso entre
clulas ou entre uma clula e o substrato, por exemplo, formada pela
unio dos complexos proticos das duas clulas vizinhas ou de uma clula
e uma molcula do meio extracelular (veja aula de Junes Celulares)
(Figura 8.11D).
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FORMAO DE BARREIRAS
Alguns domnios so conseqncia da existncia de barreiras.
As barreiras so formadas por arranjos de protenas que impedem a
livre difuso de outras protenas ou lipdeos entre elas. As protenas se
difundem livremente dentro de um determinado domnio; entretanto,
no passam aos domnios vizinhos por no serem capazes de cruzar as
barreiras. As junes entre clulas que formam epitlios (Figura 8.12)
constituem barreiras. As protenas existentes no corpo celular do
espermatozide tambm no so encontradas no fagelo deste pela
existncia de uma barreira que restringe sua mobilidade e divide esses
dois domnios (Figura 8.13).
Figura 8.12: Em clulas epiteliais, as junes ocludentes (tight junctions)
formam barreiras transmembrana que limitam o movimento da protena A,
que fca restrita ao domnio apical, e da protena B, que fca restrita ao
domnio basolateral.
Figura 8.13: A membrana do
espermatozide possui trs
domnios: dois na cabea e
um na cauda.
Protena A
Domnios da cabea
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OS CARBOIDRATOS DE MEMBRANA
Correspondem aos acares. Grande parte dos lipdeos e das
protenas de membrana voltados para o meio extracelular apresenta-se
ligado a carboidratos, formando glicoprotenas ou glicolipdeos. H ainda
um terceiro tipo de carboidratos: so as proteoglicanas, que geralmente
so encontradas na matriz extracelular (sero abordadas em maior detalhe
em Biologia Celular 2), mas algumas se inserem na bicamada lipdica por
parte de sua poro protica ou por meio de uma ncora do tipo GPI.
O conjunto de carboidratos da membrana forma o chamado
glicoclix ou cell-coat. Quanto mais carboidratos contiver uma
membrana, mais espesso ser o glicoclix (Figura 8.14).
Alm de estarem sempre ligados a uma protena ou a um lipdio
na membrana plasmtica, os acares esto sempre voltados para o meio
extracelular (Figura 8.15).
Figura 8.14: Fotomicrografa
da periferia de uma clula cujo
glicoclix foi evidenciado por
uma tcnica especfca.
DE: ALBERTS, Bruce et al. Molecular Biology of the Cell. 4.ed. Nova York: Garland Science Publishing, 2002.
Figura 8.15: Esquema dos compone-
ntes do glicoclix e sua relao com a
bicamada lipdica.
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Isso uma conseqncia do seu processo de sntese no retculo
endoplasmtico e no complexo de Golgi (veja aulas correspondentes).
As enzimas que acrescentam os acares a uma protena ou a um lipdio
durante sua sntese se localizam no interior dessas organelas e vo anexando
os carboidratos a protenas ou lipdios que esto inseridos no folheto da
membrana voltado para o lmen, evidentemente. Ao chegar superfcie,
esse folheto estar voltado para o meio extracelular (Figura 8.16).
QUAL A FUNO DOS ACARES NA MEMBRANA?
Na superfcie celular, os acares exercem muitas funes, dentre
as quais podemos destacar a de proteger a bicamada lipdica, conferir
carga negativa superfcie celular como um todo e atuar em processos
de reconhecimento e adeso celular, o que voc vai conhecer com mais
detalhes em outras aulas.
Alm disso, os espaos entre as clulas so freqentemente
preenchidos por acares de tipos especiais como, por exemplo, a
celulose, que forma a parede celular dos vegetais. A celulose, como voc
provavelmente sabe, formada pela polimerizao de molculas de glicose.
O tecido conjuntivo e a cartilagem tambm possuem grandes quantidades
de carboidratos, as proteoglicanas. As proteoglicanas so molculas muito
longas e ramifcadas que atuam como verdadeiras esponjas, ajudando
na reteno de gua por esses tecidos.
Figura 8.16: Correspondncia espacial entre o meio extracelular
e o interior (lmen) das organelas.
Membrana do retculo
Citossol
Membrana plasmtica
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Proteoglicanas diferem de glicoprotenas em algumas caractersticas: as glicoprotenas tm
uma cadeia ramifcada de monossacardeos diferentes ligados a uma protena. J as proteoglicanas
tm longas cadeias lineares de dissacardeos repetidos ligados a uma protena. A relao em massa
entre a cadeia de acares e a cadeia protica tambm diferente: enquanto na glicoprotena
a parte protica muito maior, na proteoglicana, a parte glicdica predomina.
RESUMO
As membranas celulares formam barreiras que confnam molculas e atividades
especfcas a esses compartimentos.
As funes de uma membrana dependem principalmente das protenas que a compem.
Nas membranas podem estar presentes protenas cuja funo seja de
reconhecimento, transporte, adeso, enzimas etc.
As protenas transmembrana atravessam toda a extenso da bicamada lipdica,
geralmente como uma ou mais alfa-hlices ou como uma fta beta-pregueada
em forma de barril.
Outras protenas no atravessam a bicamada, mas formam ligaes covalentes
com lipdeos da membrana. Outras ainda formam ligaes fracas (no covalentes)
com outras protenas da membrana.
A maior parte das protenas e alguns dos lipdeos voltados para o lado externo
da membrana apresentam cadeias de acar ligadas. Esses acares ajudam a
proteger e a lubrifcar a superfcie da clula e esto relacionados a processos de
reconhecimento clula-clula.
Embora muitas protenas possam difundir-se livremente no plano da mesma,
as clulas tm meios de confnar certas protenas a determinados domnios da
membrana, imobilizando-as atravs de ligaes a macromolculas localizadas
dentro ou fora da clula.
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EXERCCIOS
1. Por que a criofratura foi fundamental para se saber como as protenas se inserem
na bicamada lipdica.
2. Defna os seguintes conceitos:
protena transmembrana
protena perifrica
protena ancorada
-hlice proteica e fta -pregueada
protena unipasso
protena multipasso
porinas
complexo proteico
3. Quais os tipos de movimento que as protenas podem fazer na membrana?
4. O que um heterocrion?
5. O que so domnios de membrana?
6. O que so barreiras de membrana?
7. Como os acares se ligam s membranas?
8. O que glicoclix?
9. Diferencie glicoprotenas de proteoglicanas.
10. Por que todos os carboidratos de membrana se localizam na face extracelular
da mesma?

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