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UNIVERSIDADE DE SO PAULO

INSTITUTO DE FSICA DE SO CARLOS


CURSO DE CINCIAS FSICAS E BIOMOLECULARES
DISCIPLINA DE BIOLOGIA CELULAR


AULA PRTICA 10: ESFREGAO SANGNEO DE MAMFERO E DIFERENCIAO CELULAR


Introduo
O sangue um tecido conjuntivo lquido que circula pelo sistema cardiovascular dos animais
vertebrados e que tem como funes: o transporte de oxignio, gs carbnico, nutrientes, excretas e
hormnios pelo corpo; regulao do pH, temperatura e presso osmtica; proteo contra doenas.
O sangue total constitudo, em volume, por 55% de uma parte lquida aquosa com substncias
dissolvidas, o plasma, e 45% de elementos figurados, que so clulas e fragmentos celulares. O plasma
formado por 91,5% de gua, 7% de protenas plasmticas (albumina, imunoglobulinas e fibrinognio,
principalmente), e 1,5% de outros solutos, como substncias inorgnicas (como potssio, sdio, ferro,
clcio etc) substncias orgnicas no proticas, resduos resultantes do metabolismo, hormnios e
gases. As clulas do sangue so de 3 tipos: hemcias (eritrcitos ou glbulos vermelhos), leuccitos (ou
glbulos brancos) e plaquetas (ou trombcitos).
Os glbulos vermelhos so as clulas que existem em maior quantidade no sangue e so
responsveis pela colorao deste. No interior das hemcias encontra-se um pigmento avermelhado,
denominado hemoglobina, que realiza o transporte de oxignio.
Os glbulos brancos, ou leuccitos, distinguem-se em cinco variedades, chamadas neutrfilos,
eosinfilos, basfilos, linfcitos e moncitos. Os leuccitos so, ao contrrio dos eritrcitos, nucleados e
constituem a parte celular do sistema imunolgico ou de defesa do organismo contra substncias
estranhas e microrganismos patolgicos (vrus, bactrias, fungos, etc). Tambm participam das reaes
alrgicas, produzindo histamina.
As plaquetas so fundamentais no mecanismo da hemostasia e coagulao do sangue. As
plaquetas no so clulas, mas apenas fragmentos de megacaricitos (clulas especiais nativas da
medula ssea) liberados na circulao.
Os elementos figurados do sangue so todos derivados de um nico tipo de clula-tronco
pluripontencial, encontrada na medula ssea vermelha. O processo de diferenciao e renovao das
clulas sangneas constante e chamado hemopoiese ou hematopoiese.
As clulas do sangue tm afinidades seletivas para as cores de anilina cida, bsica ou neutra.
O ncleo das clulas toma as cores bsicas, como o azul-de-metileno e, portanto denominado
basfilo, corando-se em azul. Os elementos citoplasmticos so corados por corantes cidos, como a
eosina e, portanto so denominados acidfilos, corando-se em prpura. Os corantes neutros ou
policrmicos, que so a mistura de corantes cidos e bsicos, coram, alm dos constituintes acidfilos e
basfilos, tambm outros componentes de reao neutroflica que assumem uma colorao salmo ou
acastanhado. Pertencem a esse grupo os corantes de Romanowsky e seus derivados, dentre eles,
May-Grunwald, Giemsa, Leishman e Wright, que contm azul de metileno, eosina e azures de metileno
(resultantes da oxidao do azul de metileno envelhecido).

Procedimento: preparo e colorao do esfregao
1. Pressione um dos dedos da mo, da base para a ponta, de modo que o fluxo sangneo se
concentre na extremidade.
2. Desinfete a ponta do dedo com lcool 70% e perfure-a com uma lanceta estril.
3. Coloque uma gota pequena de sangue a aproximadamente 1 cm da extremidade de uma
lmina bem limpa e identificada;
4. Pegue uma outra lmina limpa e posicione-a, formando um
ngulo de 45
o
, sobre a lmina com o sangue (veja desenho ao lado);
5. Encoste a lmina superior na gota de sangue, permitindo
que este se espalhe ao longo de toda a borda da lmina;
6. Deslize a lmina superior at o final da outra
ininterruptamente, de forma que a gota se espalhe uniformemente em
uma camada delgada;
7. Seque o esfregao ao ar.
8. Cubra bem a regio do esfregao com o corante de Leishman e deixe por 10 minutos.
9. Coloque dez gotas de gua destilada e aguarde aproximadamente 7 minutos;
10. Escorra o corante e lave a lmina com gua de torneira.
11. Deixe a lmina secar ao ar para a observao ao microscpio;
12. Localize os tipos celulares sangneos no aumento de 100X e esquematize-os a partir do
aumento de 400X. Sobre a bancada h uma prancha com figuras coloridas das clulas sangneas que
pode ajudar na sua identificao no esfregao;
13. Indique, nos esquemas, a colorao apresentada pelas clulas e suas partes/estruturas
internas.

Questes
1) Caracterize, resumidamente, os tipos celulares do sangue de mamfero, indicando sua funo,
aspecto e quantidade no sangue.
2) Alteraes nas contagens das clulas do sangue podem ser detectadas por meio de um
hemograma (avaliao quantitativa e qualitativa de elementos do sangue). O aumento no nmero de
leuccitos acima do normal (leucocitose) e a reduo abaixo de determinado valor (leucopenia) podem
ser indicativos de doenas e processos infecciosos. D exemplos dessas patologias em humanos para
os dois casos.
3) Quais so os tecidos produtores de clulas sanguneas em humanos e como se d o
processo de diferenciao dessas clulas?
4) De um modo geral, discuta como o processo de diferenciao celular influenciou a
complexidade anatomo-fisiolgica dos metazorios superiores (aborde o antagonismo existente entre o
aumento da eficincia das clulas e sua interdependncia).
5) Qual a relao entre o grau de diferenciao de uma clula e sua potencialidade?
6) Que mecanismo coordena a diferenciao celular, ou seja, o conjunto de processos que
transformam uma clula-tronco embrionria indiferenciada em uma clula especializada adulta?

Corante eosina-azul de metileno segundo Leishman
Eosina-azul de metileno segundo Leishman 0,2 g
lcool metlico 100 mL
O corante deve ser dissolvido no lcool e, durante a primeira semana, ser agitado 2 a 3 vezes.
Aps a dissoluo, dever ficar em repouso por um ms antes de ser usado.

Bibliografia
- FONTES, M.A.; CATALN, A.M.C. (coord.). Genoma, Proteoma e universo celular. Apostila
do VII Curso de Vero. Centro de Terapia Celular, Hemocentro de Ribeira Preto. 2007 (acesso on line
em 05/04/2007, http://pegasus.fmrp.usp.br/cursoverao/apostila.pdf).
- JUNQUEIRA, L.C. & CARNEIRO, J. Biologia Celular e Molecular. 7
a
edio. Ed. Guanabara
Koogan, Rio de Janeiro. 2000. 339 pp.
- POLIZELI, M.L.T.M. Manual Prtico de Biologia Celular. Ribeiro Preto: Ed. Holos, 1999.
- TORTORA, G.J. & GRABOWSKI, S.R. Princpios de Anatomia e Fisiologia. 9 edio. Ed.
Guanabara Koogan, Rio de Janeiro. 2002. 1047 pp.