Cultura de clulas: estudo do funcionamento das clulas vivas isoladamente
esclarecendo de forma direta o efeito e evitando que prejudique ou comprometa o funcionamento de outras clulas. Tratamento com fluorescncia: aps o isolamento da clula de interesse e a colocao desta em uma placa de vidro com uma soluo chamada meio de cultura (tudo que a clula precisa pra sobreviver) levando!a em estufas para controlar as condi"es ambientais. Centrifugao Fracionada# arrebentam!se as membranas das clulas com um basto de vidro colocando!as em um tubo de ensaio que levado ao centrifugadora (clulas sempre em meio aquoso) onde essas organelas so separadas devido $s suas densidades. %&cleos ' mitoc(ndria) lisossomos ' ves*culas de microssomos ' ribossomos e macromolculas. Cromatografia# Consiste em isolar en+imas pequenas molculas e v*rus. Cromatografia de afinidade: ,tili+ada para purificar anticorpos fa+endo estes interagirem com o ant*geno de acordo com a sua afinidade ou no por ele. Cromatografia de filtrao ou excluso# -uando no se sabe a carga eltrica da prote*na separa!se pelo tamanho sendo a matri+ slida com bolinhas de gel com poros de diferentes medidas. .rote*na maior no passa pelo poro / mais r0pida. Cromatografia de troca inica: 1 matri+ slida tem carga eltrica as prote*nas de mesmo sinal sero repelidas e passaro rapidamente j0 as de sinal contr0rio sero atra*das e passaro mais devagar. Membrana Plasmtica Funo: est0 envolvida na captao de sinais e transmisso de respostas. Constitu*da de lip*dios prote*nas e molculas de a&car onde esses componentes se associam formando uma dupla camada lip*dica (anfipticos regio !idrof"lica e !idrof#bica) com prote*nas integrais e perifricas e molculas de a&car na face e2tracelular. 1 bicamada lip*dica assimtrica. 1 propriedade anfip0tica da membrana impede que qualquer subst3ncia a atravesse (permeabilidade seletiva). 4la auto!selante no dei2ando regi"es hidrofbicas em contato coma 0gua. 5ip*dios na membrana# fosfoglicer*deos esfingomielinas e colesterol (regula a fluide+ $uanto mais colesterol menor a fluide% da membrana). Fluide% &mo'imento(: afetada atravs do n&mero de insatura"es () insatura*es ) fluide%) comprimento das caudas dos 0cidos gra2os &) curto ) fluide%) e a concentrao de colesterol. 1s prote"nas nas membranas t6m funo en+im0tica fa+em ligao de clula! clula transportar subst3ncias alm de formarem o glicoc0lice (reconhecimento celular) pode atravessar as membranas estar ligada $ membrana ou interagindo com esta atravs de liga"es fracas (essas <imas so mais f0ceis de ser retirada da membrana). Prote"nas perifricas# esto associadas a componentes de membrana (ligao mais fraca) Prote"nas +ntegrais# prote*nas que atravessam a bicamada lip*dica (podendo variar o n&mero de ve+es da travessia). Transmembranas. 7 que limita o movimento das prote*nas so outras prote*nas as intera"es entre componentes intra e e2tracelulares espessura e comprimento das caudas. ,speciali%a*es da membrana Micro'ilosidades# aumentam a superf*cie de absoro da clula. ,stereoc"lios: absoro e funo sensitiva -nula oclusi'a: estruturas que vedam os espaos entre as clulas no dei2ando a 0gua passar permitindo que o transporte de molculas seja unidirecional. .esmossomos: maior poder de adeso entre clulas. 8o filamentos intermedi0rios com maior resist6ncia a choques mec3nicos. /emidesmossomos: so filamentos intermedi0rios com ligao direta a matri+ e2tracelular. 0un*es comunicantes# estrutura protica que conectam o citoplasma de uma clula a outra formando t&neis facilitando a troca de material. Caderinas# prote*nas que fa+em ligao nos desmossomos Interinas: ligao nos hemidesmossomos. 8e ligam principalmente ao col0geno. Transporte .ifuso simples# por entre os lip*dios a favor do gradiente eletroqu*mico e sem gasto de energia metablica. 42# horm(nios esterides gases. 9ifuso facilitada (prote*na envolvida)# a favor do gradiente eletroqu*mico sem gasto de 1:.. .articipam canais ou carreadores. 42# Canais de %a; Ca<;. Canal# se mant6m fechado e com est*mulo muda de forma apresentando um poro. Carreador (bomba)# *on se liga a prote*na carregando!o para o lado interno. :ransporte ativo# Contra o gradiente eletroqu*mico e com gasto de 1:. e com a participao de bombas. 42# Bomba %a;)=;. ,niporte (canais bomba Ca<;) 8importe (transporte glicose) 1ntiporte (%a;)=;) Co!transporte 1inali%ao# >a+ com que o organismo funcione de forma coordenada. Quinase# en+ima que fosforila ou seja adiciona fsforo. Fosfatase# en+ima que desfosforila. 1s quinases e as fosfatases so fundamentais para o funcionamento da clula. .ara as clulas se comunicarem necess0rio $ presena de um receptor (prote*na) o sinal qu*mico pode ser uma prote*na amino0cido derivados de lip*dios horm(nios esterides aminas gases e horm(nios em geral. 1inali%ao !ormonal# liberado na corrente sangu*nea 1inali%ao par#crina# liberado no espao e2tracelular e captado por clulas vi+inhas. 1inali%ao aut#crina# a mesma clula que liberou recebe os sinais. 1inali%ao por neurotransmissores ou sinali%ao neuronal# 7corre entre os neur(nios. 2 ligao sinal3receptor extremamente espec"fica $uanto maior a diluio maior a afinidade4 1inali%ao !idrof"lica# os receptores se encontram na membrana pois a maior parte dos sinais no entra nas clulas. 1inali%ao !idrof#bica# os sinais atravessam a membrana o receptor no est0 na membrana mas no interior da clula. 8inal ' receptor! mudando sua estrutura aumentando a sua afinidade pelo 9%1. 7 9%1 ento regula a s*ntese de prote*nas espec*ficas. Tipos de receptores: 5eceptores catal"ticos# o receptor funciona como uma en+ima quando o sinal se liga a ele disparando cascatas de sinali+ao. 7s receptores catal*ticos so prote*nas transmembrana que atravessa a membrana duas ve+es (mais conhecida tirosina quinase ' fosforila amino0cidos espec*ficos em res*duos de tirosina e2# receptor de insulina). 5eceptores ligados 6 prote"na 7# receptor atravessa a membrana ? ve+es quando o sinal de liga ao receptor ele muda a forma aumentando sua afinidade pela prote*na @. 1 subunidade A ligada ao @9. libera!o permitindo a entrada de @:. no momento que oB receptor se liga $ prote*na. C0 ento a separao dessa subunidade do resto da prote*na. 1 subunidade quebra o @:. em @9. e volta a se ligar a D e E. 1s prote*nas @ podem ser estimulatrias (ativam) ou inibitrias. 5eceptores associado ao canal inico# quando o sinal se liga o canal se abre e h0 passagem de *ons a favor do gradiente de concentrao sem gasto de energia metablica. Potencial da membrana# diferena eltrica entre as faces Potencial de repouso# aus6ncia de est*mulo com diferena eltrica Potencial de ao# processo que se realimenta .esporali%ao# inverso das cargas 5epolari%ao# volta ao padro /iperpolari%ao# diferena entre cargas acentuada.