UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPIRITO SANTO UFES

PROGRAMA DE POS GRADUAO ENGENHARIA AMBIENTAL PPGEA

BIOTECNOLOGIA AMBIENTAL
Prof. Servio Tulio Cassini

CICLO DO NITROGNIO

disponibilidade biolgica do nitrognio (N) no solo, juntamente com o

fsforo (P), enxofre (S) e potssio (K) tem relao direta com a
produtividade agrcola. Embora, este elemento seja encontrado em
abundncia na atmosfera na forma do gs N 2, constituindo cerca de 80%
do seu volume total, nesta forma quimicamente inerte e no disponvel
para os seres vivos. Geralmente as formas disponveis ou combinadas de nitrognio
para a nutrio dos seres vivos incluem as combinaes amoniacais (NH4+), ntricas
(NO3-) ou orgnicas (R-NH2) que so metabolizadas visando a construo de
biomassa.
Nos solos, o nitrognio combinado , geralmente, o fator limitante para a
produo agrcola. Nesse sentido, torna-se necessrio a adio do nitrognio
combinado no solo para compensar esta limitao. Geralmente isto realizado por
meio de adubaes qumicas ou orgnicas com o objetivo restaurar os nveis de N
disponvel e atender a demanda de N pelas culturas.
Na natureza, o nitrognio apresenta um grande nmero de transformaes
mediadas por microrganismos especficos, visando a adio ou manuteno N
disponvel no solo. Entretanto, algumas transformaes podem promover uma retirada
do N do solo, tais como a volatilizao e lixiviao. Assim, o N-disponvel no solo
depende de um manejo correto e conhecimento das transformaes desse elemento
nos ambientes agrcolas.
As principais transformaes do N podem ser resumidas no seguinte ciclo:

Legenda:
Legenda
1. Mineralizao (Amonificao)
2. Imobilizao (Assimilao)
3. Equilbrio qumico (dependente do pH)
4,5 Nitrificao
6,7 Desnitrificao
8. Fixao
9. Imobilizao (Reduo Assimilativa - Plantas)
10.
Decomposio e complexao
11.
Lixiviao
Mineralizao
e Imobilizao de Nitrognio

O nitrognio o nutriente do solo requerido em maior quantidade pelas plantas,

as quais o assimilam na forma inorgnica, como amnio (NH4+) ou preferencialmente
na forma de nitrato (NO3-). A fonte primria de N do solo a matria orgnica do solo
ou hmus, que apresentam o N na forma de R-NH2 formando complexos orgnicos.
Nesse caso, a mobilizao ou mineralizao do nitrognio orgnico (N-org) constitui
o primeiro e importante passo para a sua disponiblidade para as plantas e
microrganismos do solo.
Geralmente, a mineralizao do nitrognio entendida como a converso do
Nitrognio orgnico (N-org) na sua forma inorgnica (Ni). Como o primeiro produto
dessa transformao no solo o amnio (NH4+), a amonificao entendida como
sinnimo de mineralizao do Norg do solo. Entretanto, o NH4+ sofre uma rpida
oxidao at NO3- realizada pelos microrganismos nitrificantes. Na prtica a avaliao
da mineralizao do Norg de um solo se realiza por meio de medidas tanto de NH4+
como NO3-. Embora exista esta dualidade de interpretao , a mineralizao do N
considerada como a transformao do N orgnico em NH4+, ou seja, a
amonificao.
Amonificao
Cerca de 75 a 95% do nitrognio encontrado nos horizontes superficiais do solo est
na sua forma orgnica (Norg) distribudos entre 3 compartimentos a) biomassa;
b)resduos e c) substncias hmicas. No caso de biomassa e resduos, o nitrognio
encontrado fazendo parte de paredes celulares (quitina, peptidioglicano), proteinas,
aminocios e cidos nucleicos. Nas susbstncias hmicas o nitrognio forma
complexos que somente podem ser fracionados articificialmente por meio de hidrlise
cida, sendo, portanto, de difcil caracterizao. Estes compostos hmicos so
recalcitantes, isto , persistem por longos perodos de tempo na solo. Nesse caso, a
sua resistncia mineralizao tem sido atribuda a duas razes:
1. Compostos nitrogenados formam complexos ou polmeros com os fenis ou
polifenis, resultando em substncias menos susceptveis degradao.
2. Adsoro de substratos e enzimas no lattice de argilas. Sendo as enzimas que
atuam no processo de mineralizao do N, tipicamente com ao extra-celular, este
aprisionamento pode aocasionar uma diminuio das taxas de mineralizao do N
do solo em determinados tipos de solos argilosos.
importante frisar que todo o nitrognio orgnico (Norg) est na forma de N-NHx
(amina, amida, imidas) e por esta razo o primeiro produto de sua mineralizao
sempre o N-amoniacal (NH3 ou NH4+)
Decomposio das Protenas
Uma das principais fontes de nitrognio orgnico no solo so as protenas,
liberadas aps a morte e liberao do contedo celular da biomassa microbiana,
vegetal ou animal. O processo de decomposio realizado em vrias etapas. A
primeira etapa denominada protelise que a degradao enzimtica de protenas
por meio de proteases ou proteinases, que separam a cadeia proteica em peptdios
curtos e logo a seguir atacada por peptidases que liberam os diversos aminocidos:
Proteases
Peptidases
Proteinas ------------------- Peptdios -------------------- aminocidos

As Proteinases so produzidas por muitos fungos e bactrias principalmente

aquelas pertencentes aos gneros Clostridium, Pseudomonas e Bacillus.
As
peptidases so muito mais comuns entre os microrganismos. Assim, muitos meios de
cultivo de microrganismos heterotrficos do solo utilizam peptona, que so peptdios
produzidos a partir hidrlise parcial de uma fonte proteica tais como: carne, leite
(casena), ou soja.
Em uma segunda etapa os aminocidos liberados durante a protelise sofrem
um processo de desaminao para liberao do grupo N-NH2 e liberao de NH3 por
meio de rotas metablicas envolvendo a desaminao direta, desaminao
oxidativa ou descarboxilao com produo de CO2 + NH3.
Decomposio dos cidos Nuclicos
Devido a sua estrutura polimrica de Bases(ATUGC)-aucar(Pentoses)- PO4-,
os cidos nucleicos, RNA e DNA, so importantes fontes de N e tambm de P para os
microrganismos. No aspecto quantitativo considerada a segunda frao em
importncia no solo, logo aps as protenas. So incorporados no solo aps a autlise
celular e seguem uma rpida degradao no solo por meio de enzimas denominadas
genericamente de nucleases (ribonuclease ou deoxi-ribonuclease). Deve-se ressaltar
que, similarmente a todas as enzimas envolvidas no processo de mineralizao do Norg do solo, estas enzimas tem atuao extracelular gerando bases nitrogenadas
(mononucleotdeos e mononucleosdeos ). Os nucleosdeos gerados podem ser
assimilados pelos microrganismos e metabolizadas at a formao seus produtos finais
na forma de uria e CO2, conforme a seguinte seqncia de eventos
Polinucleotdeos (DNA, RNA) (1) mononucleotdeos + nucleosdeos + P(2) uria + CO2 + PO4-

(1) enzimas nucleases (extracelular)

(2) metabolismo oxidativo (intracelular)
Decomposio da Uria
A uria um produto da destruio de bases nitrogenadas liberadas na
decomposio de cidos nucleicos, sendo naturalmente um produto de excreo de
animais superiores. A sua molcula pode ser sintetizada e utilizada na agricultura como
um fertilizante nitrogenado orgnico. A caracterizao da uria como um intermedirio
no metabolismo microbiano, como um produto de excreo de animais e como
fertilizante faz dela um composto chave no ciclo do nitrognio em solos agrcolas.
Aplicada no solo, rapidamente hidrolizada e todo o nitrognio liberado na
forma amoniacal (NH3) em poucos dias conforme a seguinte equao:
urease

CO (NH2)2 + H2O (NH4)2CO3 2 NH3 + CO2 + H20

Os microstios do solo incorporados com uria tendem a apresentar uma

elevao dos valores de pH, devido ao consumo de protons (H+) na produo de
amnio (NH4+). Prximo partcula de uria sendo mineralizada, estes valores de pH
podem se momentneamente maiores que 8,0 e algumas vezes 9,0, embora o pH a
uma pequena distncia possa estar prximo neutralidade ou abaixo. Nestas
condies alcalinas, o produto de fato amnia gasosa (NH3), e pode ser assim

volatilizada. Este fato acontece devido ao equilbrio qumico entre amnia (NH3) e
amnio (NH4+) ser dependente do pH do meio, conforme a seguinte equao:
1

NH4+ + OH-

NH3 + H20
2

1. pH < 6
2. pH > 8

ou seja, em meio alcalino a reao tende a equilibrar-se para a esquerda, originando a

forma gasosa de amnia (NH 3) que perdida para a atmosfera por volatilizao.
Estima-se que estas perdas podem atingir valores de at 70% do N aplicado na forma
amoniacal. Desse modo, o nitrognio amoniacal, quando aplicado em solos prximos a
neutralidade ou alcalino, deve ser acompanhada de algumas opes de manejo de
modo a controlar essa excessiva tendencia alcalinidade. Duas opes:
(1) utilizao de uria de grnulos de liberao lenta
Forma comercial que pode Ter a sua solubilidade controlada
(2) utilizao de uma fonte de S juntamente com a uria (SSO4 :: pH)
Aps a liberao de NH3, os valores de pH inicialmente alcalino tende a se reverter,
pois, a oxidao do NH3 pela nitrificao promove a gerao de acidos que atenuam
os nveis de alcalinidade inicial durante a decomposio da uria.
Muitos microrganismos possuem a enzima urease, responsvel pela hidrlise da
uria, sendo por isto uma das enzimas de mais ampla distribuio nos solos. Um
pequeno grupo de bactrias tem sido nomeado como bactrias da uria devido a sua
tolerncia a altos nveis de uria e suas afinidades com este composto, tais como
Bacillus esporulados do solo.
Bactrias ureolticas so facilmente isoladas do esterco ou solo enriquecido com
soluo contendo altas concentraes de uria. Em cultura pura os organismos
mostram-se sensveis acidez, sendo que o seu crescimento ocorre apenas em meio
neutro ou alcalino. Elas so esparsas ou ausentes em reas com pH 4,0 a 5,5. Assim,
a decomposio da uria em ambiente cido, provavelmente pode ser atribuda uma
microbiota no especfica ou a produo de agentes tamponantes do meio.
Mineralizao x Imobilizao do N do solo
A velocidade com que o nitrognio orgnico convertido a amnio e/ou nitrato
denominada taxa de mineralizao a qual, em ambientes que recebem resduos de
culturas ricos em nitrognio, podem variar de de <1,0 a 20,0 mg N/dm 3 solo por dia.
Essa taxa representa a liberao bruta de nitrognio inorgnico (Ni) e no a
quantidade tipicamente encontrada nas avaliaes de N do solo. Na realidade, o que
interessa para o crescimento e desenvolvimento de plantas e microrganismos do solo
o balano do nitrognio inorgnico disponvel (Ni) que pode ser avaliado pela
seguinte expresso:
Ni = N mineralizado ( N imobilizado + N volatilizado + N lixiviado)
ou seja, a quantidade total lquida de Ni produzido por uma quantidade constante de
substrato de Norg resultante de um delicado balano entre as foras de
mineralizao (M) e aquelas responsveis pela remoo do N do solo. Estas foras
4

so representadas pela lixiviao, desnitrificao e particularmente a assimilao

oum imobilizao microbiana. Desse modo, embora a produo total de Ni possa ser
grande, nenhum aumento ou algumas vezes at mesmo um decrscimo pode ser
observado em medies do contedo de amnio e nitrato no solo. Em condies
naturais os dois termos da equao se equilibram de modo a manter um fluxo
adequado e constante de Ni no solo. Em solos agrcolas e reas devastadas a
tendncia para um balano (Ni) negativo, ou seja, com favorecimento dos
processos de remoo do nitrognio disponvel e reduo da sua fertilidade, exigindo,
assim, adubaes nitrogenadas para compensar esse deficit.
Considerando a possibilidade de manejo das condies de perdas por
volatilizao e lixiviao, os valores de Ni aps a adio de uma fonte de N no solo
ficam particularmente dependentes da assimilao ou imobilizao do N. Este fato
est relacionado com a qualidade ou relao C:N do resduo adicionado ao solo como
fonte de N. A assimilao ou imobilizao, geralmente, realizada por microbiota
mista, (fungos, bactrias e actinomicetos), que tem uma demanda fixa de
carbono:nitrognio de 10:1, 5:1 e 5:1, respectivamente, e um valor mdio para de C:N=
8:1 e, tambm, um valor mdio de assimilao do carbono disponvel em torno de
35%. Admitindo-se um teor mdio de carbono disponvel em resduos orgnicos, de
aproximadamente 40%, a quantidade de N minimamente necessria para a
biodegradao do resduo pode ser calculada pela expresso:
Demanda N= ((Cdisponvel * Cassimilado) / C:N microbiota mista)*100)
Demanda de N = ((.40 x 0,35 )/8)*100) = 1,75 % N
ou seja, para a decomposio de 100 unidades de matria orgnica so necessrios
1,75 unidades de nitrognio no resduo, para provimento da demanda de N para a
construo de biomassa microbiana. Este o valor que comanda as relaes de
Mineralizao (M) ou Imobilizao (I) do N do solo durante a decomposio de um
resduo.
Um exemplo prtico dessas relaes pode ser deduzida quando se adiciona
materais pobres de N e consequente elevada relao C:N (ex. palhas) em comparao
com materiais mais ricos de N (ex. leguminosas), em relao ao balano de nitrognio
do solo. Neste sentido, foi realizado um exprimento com o objetivo de se estimar estes
ganhos e perdas (Ni) alm de medir o teor mnimo nitrognio do resduo que equilibra
as relaes de mineralizao e imobilizao de nitrognio do solo. Assim, varios
materiais com diferentes contedos de N foram incorporados em um solo, em taxas
equivalentes a 600 mgN/kg, avaliando-se os teores de N-NO3-aps 3 meses e
calculando o Ni em relao ao mesmo solo como referncia.
Resduo
adicionado
Solo Normal
Sangue seco
Trevo
Milho
Graminea
Aveia

Aps 3 meses
[NO3-]
Ni

%N
-10,71
1,71
0,79
0,62
0,45

947
1751
924
511
398
207

-+804
-23
-436
-549
740

Considerando-se que os aspectos de desnitrificao e volatilizao do N foram

minimizados, verifica-se que os resduos com alto conteudo de N favoreceram um
acrscimo de N no solo, enquanto que os resduos de baixo contedo de N, imobilizam
o N do solo. A tendncia ao ponto de equilbrio se verifica com o resduo de Trevo, que
apresenta um valor de 1,71% N, conferindo com os cculos depredio da demanda de
N.
Em resumo:
% N no Resduo
> 1,8
> 1,2 e < 1,8
<1,2

Efeito da sua adio ao solo

Mineralizao do Norg, Ni (+), M>I
Imobilizao temporria, Ni0; M = I,
Imobilizao prolongada, Ni(-), M < I

A experincia sugere que:

1. O nvel crtico de nitrognio expresso em termos de relao C/N (baixa
adequada; elevada, inadequada).
2. Em material natural com aproximadamente 40% de C, o nvel crtico
corresponde a 1,2 a 1,8% N e relao C/N de 20 a 30:1.
3. Relao C/N mais larga imobilizao
4. Relao C/N mais estreita mineralizao
5. Resduos em decomposio tendem naturalmente para o estreitamento da
sua relao C:N de. Entretanto, a adio de uma fonte de N para colocar a
relao C/N do resduo em aproximadamente 30 a 35:1 (1,2 a 1,8% N)
pode ser economicamente vivel.
6. A fertilizao para a comunidade microbiana e no para a cultura.

NITRIFICAO
A nitrificao definida como a formao biolgica de nitrato ou nitrito a partir de
compostos que contenham nitrognio na forma amoniacal (NH4+). A importncia dos
nitrificantes est no fato da produo de nitrato, que a principal fonte de nitrognio
assimilado pelas plantas. Durante a era Napolenica, a demanda de sais de nitrato
para produo de plvora estava aumentando, e com a guerra houve interrupo
quanto ao acesso s fontes naturais e o nitrato passou a ser produzido em pilhas de
solo + calcrio + esterco (ou urina ou esgotos). Estas pilhas quando misturadas e
convenientemente aeradas, entravam em decomposio, sendo o NO 3- extrado com
H2O quente do produto final.
Em 1870, Pasteur postulou que a formao de NO 3- era um processo
microbiolgico e anlogo converso do lcool ao vinagre. Mas a primeira evidncia
experimental de que este era um processo biolgico atribuda a Schloesing e Muntz
(1797) que adicionaram resduos de esgotos a um tubo longo cheio com areia estril e
CaCO3. Durante 20 dias a concentrao de amnio no lquido permaneceu inalterada,
mas aps esse perodo o amnio desapareceu e houve o aparecimento do nitrato. O
aquecimento da coluna ou a adio de antisptico eliminava a transformao, a qual
era reiniciado pela adio de pequenas quantidades de solo de jardim.

Em 1878, Warrington descobriu que a nitrificao era um processo que envolvia

2 grupos de microrganismos, mas o responsvel pelo isolamento do microrganismo
nitrificantes foi S. Winogradsky (1890).
Bactrias nitrificantes e suas reaes bioqumicas
O trabalho pioneiro de Winogradsky estabeleceu que a nitrificao est
tipicamente associada com certas bactrias quimioautotrficas. Elas so aerbias
obrigatrias que derivam seu carbono do CO 2 ou carbonatos e a energia proveniente
da oxidao de NH4+ ou NO2-. As bactrias so classificadas em dois grupos, baseados
se eles oxidam NH4+ a NO2- ou NO2- a NO3-). Os principais grupos de bactrias
nitrificantes so:
BACTRIAS QUIMIOAUTOTRFICAS OXIDANTES DE NITROGNIO
GNERO
ESPCIE
HABITAT
+
Oxidantes do amnio (NH4 ) a nitrito (NO2 )
Nitrosomonas*
N. europeae
Solo, gua, esgoto
Nitrosospira
N. biensis
Solo
Nitrosococcus
N. nitrosus
Mar
N. oceanus
Mar
N. mobilis
Solo
Nitrosovibrio
N. tenuis
Solo
Oxidantes do nitrito (NO2 ) a nitrato (NO3 )
Nitrobacter*
N. winogradskyi
Solo
Nitrospira
N. gracilis
Mar
Nitrococcus
N. mobilis
Mar
* mais comumente encontrada
Na maioria dos habitat as bactrias dos dois grupos so encontradas juntas,
sendo que o NO2- raramente acumula na natureza, sendo clssicamente descritas
como exemplo de interao sinrgica no solo. As bactrias nitrificantes exigem meios
de cultivo com composio definida, utilizando como fonte de carbono o carbonato e
uma fonte de N-amoniacal.
Sendo estes microrganimos tpicamente autotrficos aerbios, podem crescer
em meios minerais, adicionados de amonia ou nitrito apenas. A eficincia bioqumica
nesses organismos convencionalmente expressa pela relao entre nitrognio
inorgnico oxidado (deriva a energia) para carbono CO 2 assimilado. Para a
Nitrosomonas a relao NH4+-N:CO2-C 14 a 70:1 e para a Nitrobacter essa relao
de 76 a 135:1.
A reao tpica em sua primeira etapa :
NH4+ + 1 O2

NO-2 + 2H+ + H2O

Esta reao se processa em vrias etapas e com a formao de vrios produtos

intermdirios, principalmente a hidroxilamina (NH 2OH) que oxidada at HNO2.
Deve-se ressaltar que esta primeira etapa gera um elevado potencial de acidez do
meio, devido a violenta liberao de H+. Assim, quando do cultivo desses
microrganismos, deve-se promover um efeito tampo no meio com a utilizao de
CaCO3 para evitar a morte desses microrganismos nitrificantes por excesso de acidez
do meio.
A segunda etapa na sequncia autotrfica assim visualizada como envolvendo
uma hidratao do nitrito da qual o on hidrognio removido:
7

NO2- + H2O

H2O.NO2

NO3 + 2H

Embora o NO2- raramente se acumula no meio, a possibilidade de sua a

acumulao pode ser devida a um excesso de alcalinidade associada com elevados
teores de amnio. A fertilizao com amnia anidra pode elevar o pH a 9,0 ou 9,5 e a
fonte de nitrognio junto com o alto pH local freqentemente causa acumlo de nitrito.
Mesmo a decomposio de protenas ou uria pode resultar nesse efeito temporrio.
Com o progresso de nitrificao h o desenvolvimento da acidez e alvio do problema.
O acmulo de nitrito pode tambm ser atribuda a sensibilidade da Nitrobacter a sais de
amnio em meio alcalino. Em pH 9,5 e 4 ppm NH 4+-N suprime a reao produtora de
energia do Nitrobacter. Assim o amnio um inibidor seletivo em condies alcalinas,
da segunda etapa da nitrificao.
Fatores ambientais
Acidez
H uma correlao significativa entre produo de NO 3- e o pH. A acidez afeta
no somente a transformao, mas tambm o nmero de nitrificantes. O pH timo para
os isolamentos individuais pode variar de 6,6 a 8,0 ou mais. A taxa de nitrificao nos
solos agrcolas diminui marcadamente em pH abaixo de 6,0 e torna-se negligvel
abaixo de 5,0, embora o nitrato possa ocasionalmente estar presente em solos com pH
4,0 ou menor. Essa presena possivelmente atribuvel a estirpes adaptadas a acidez
ou diferenas qumicas do habitat.
Em pH elevado, NH4+ inibe a transformao de NO2- em NO3-. Esse acmulo de
nitrito parece estar relacionado mais com a sensibilidade da bactria do grupo
Nitrobacter aos sais de amonio em condies alcalinas. Como ocorre um abaixamento
do pH com o processo de nitrificao, os oxidantes do nitrito passam a atuar sobre os
substratos.
Em solos cidos de floresta h produo de grandes quantidades de NO 3-.
Quando sofrem o desmate ou queimada, que resultam em em altas taxas de
mineralizao do que imobilizao. Parece que os nitrificantes heterotrficos e/ou
microstios que fazem a nitrificao nos solos florestais no so cidos sensveis como
nos solos agrcolas.
Devido a sensibilidade do microrganismo acidez, aos ons hidrognio, a
nitrificao em solos cidos usualmente aumentada pela calagem. Freqentemente,
a falha em nitrificar inteiramente uma consequncia da acidez, e a condio pode ser
prontamente aliviada pela calagem.
A produo de nitrato varia de acordo com o material em decomposio. Em
ambiente prximo a neutralidade, nitrato aparece mais rapidamente de sais de amnio
que de compostos nitrogenados orgnicos, enquanto em solos cidos ao contrrio.
Explica-se este fato como um resultado do aumento da alcalinidade durante a
amonificao, o que faz o ambiente prprio aos nitrificadores.
A oxidao de NH3 anidra ou NH4OH similarmente mais rpida que a
nitrificao de sais de amnio. Quando uria hidrolizada, o amnio resultante eleva
os valores de pH. Assim a nitrificao maior, em solos cidos, a partir da uria
que a partir do (NH4)2SO4. Este efeito no esperado em solos com pH prximo ao
timo para os nitrificantes.
Alguns solos cidos, que sofrem calagem, respondem a inoculao com
bactrias nitrificantes bioquimicamente ativas.
O uso de fungicidas em grandes propores pode eliminar completamente as
nitrificadoras e resultar em acmulo de amnio que poder atingir nveis de
8

fitotoxidade. Uma vez dissipada a contaminao, o solo responde inoculao ou

normalmente contaminado.
A medida que o cido ntrico formado e os valores de pH diminuem, certos
ons como o potssio, fosfato, magnsio, mangans e clcio podem se tornar mais
disponveis.
Aerao
Oxignio um requerimento obrigatrio para todas as espcies aerbias. A
aerao adequada do meio depende de uma serie de fatores. Assim, o teor de
umidade e a estrutura do solo iro afetar a acumulao de nitrato atravs de sua
influncia sobre a aerao. Em solos submergidos para o crescimento de arroz, a
nitrificao ocorre nos centmetros superficiais do solo oxigenado (o oxignio difunde
atravs da fase aquosa e mantm oxigenado o solo).
Umidade
A umidade afeta o regime de aerao do solo, e assim a produo de nitrato. Em
um extremo limita a difuso de O 2, no outro, em condies ridas retardada por
insuficincia de gua. O timo varia consideravelmente com o tipo de solo, podendo-se
tomar como referncia a da capacidade de reteno do solo. Geralmente as
reaes de mineralizao produtoras de NH 4+ (a amonificao) so menos sensveis a
stress de gua e baixa tempertura. Assim h um acmulo de NH 4+ em solos com stress
de gua ou baixas temperaturas.
Temperatura
A estao do ano em que nitrato mais abundante no solo no coincide,
necessariamente, com a mxima atividade microbiana devido a absoro pelas
plantas, imobilizao microbiana e lixiviao, processos que reduzem o nvel de nitrato.
marcadamente afetada pela temperatura sendo baixa em temperatura
menores que 5oC ou maiores que 40-50oC. A temperatura tima varia com a estirpe,
mas situa-se usualmente entre 30 a 35 oC. A interao da temperatura, umidade,
aerao, e, outros fatores marcam um efeito sazonal. em reas temperadas, a
nitrificao maior na primavera e outono que no vero ou inverno.
Matria orgnica
A cultura pode afetar o tamanho e a atividade da microbiota nitrificante. o
exemplo das pastagens onde h maior abundncia de amnio que nitrato. As causas
ainda no esto bem definidas havendo evidncias de que as razes excretam
exudatos que reduzem a taxa de nitrificao. Ex.: corte de reas como rvores e
arbustos e onde o crescimento foi impedido com herbicida provocou uma descarga de
nitrato no solo (vegetao?). Alternativamente isto pode significar que a vegetao foi
capaz de remover o nitrato medida que ele era feito. Por outro lado, o acmulo de
produtos secundrios de plantas no solo, tais como taninos e outros compostos
fenlicos, podem inibir os microrganismos nitrificantes.
Embora os microrganismos nitrificantes apresentem um metabolismo
tipicamente autototrfico, ou seja, crescem em meios minerais sem carbono orgnico,
estes microrganismos apresentam uma dependncia indireta da matria orgnica do
solo, pois, a matria orgnica do solo a nica via de fornecimento de NH4+ para o
solo, por meio da amonificao.
Nitrificao heterotrfica

Vrias bactrias e actinomicetos heterotrficos so capazes de gerar traos de

NO2- quando crescidos em meio contendo NH 4+. algumas bactrias, como estirpes de
Arthrobacter, e fungos, como o Aspergillus flavus, produzem NO3- de NH4+. Os
heterotrficos no derivam energia dessas reaes de oxidao e sua significncia na
natureza no conhecida. A produo de NO 3- nos solos de agricultura pelos
heterotrficos parece no ser significativa, comparado com os nitrificantes autotrficos.
Poluio por Nitrato
O excesso de NO3- pode:
1. Causar o processo de eutroficao de guas, causando excessivo crescimento de
plantas e algas.
2. Metehemoglobinemia infantil ou animal. O NO 3- ingerido transformado em NO 2durante o processo de digesto. Este NO 2- ao chegar na corrente sangunea oxida a
hemoglobina, formando a metehemoglobina, bloqueando o transporte de O 2.
3. Formao de nitrosaminas, compostos carcinognico, mutagnicos e teratognicos,
isto , podem causar cncer, mutaes e anomalias e algumas vezes mortes de
fetos. A sua formao requer a presena de um segunda amina e nitrato, e a reao
de simples condensao. Esta reao pode ser conduzida por reaes
enzimticas de microrganismos ou pelo proceso no enzimtico pela presena de
matria orgnica do solo.
Inibidores da nitrificao
O nitrato geralmente no acumula em solos estveis de campo e florestas. H
numerosas sugestes que o clmax de um ecossistema produz compostos orgnicos,
tais como o tanino, que so txicos ao nitrificantes. Este processo, chamado alelopatia,
parece representar um controle natural de nitrognio. Um argumento alternativo mais
aceito atualmente que a competio por NH 4+ pelas razes de plantas, fungos
micorrzicos e microrganismo imobilizadores de nitrognio mantm a taxa de N
inorgnico baixa.
Para reduzir as perdas de nitrognio, tem sido desenvolvido pesquisas para se
encontrar inibidores qumicos que possam ser aplicados juntos com a amnia ou uria
para reduzir a nitrificao. O composto no poderia ser fitotxico nem poluente do
ambiente. Um dos melhores o 2-cloro-6 (triclorometil) piridina. Tiouria, isotiocianatos,
s-triazinas, etc... (ver tabela de inibidores).
ALGUNS INIBIDORES DE NITRIFICAO PATENTEADOS
COMPOSTO QUMICO
NOME
COMERCIAL
2-Cloro-6(triclorometil)piridina
N-serve
4-Amino-1,2,4-6-triazole-HCl
ATC
2,4-Diamino-6-triclorometil triazine
CL-1580
Dicyandiamide
Dicyan
Thiourea
TU
3-Mercapto-1,2,4-triazole
MT
2-Amino-4-Cloro-6-metilpirimidina
AM
Sulfatiazole
ST

FABRICANTE
Dow Chemical
Ishihada Industries
American Azanamid
Showa Denho
Nitto Rejuso
Nippon
Mitsui Toatsu
Mitsui Toatsu

INIBIO
(% EM 14 DIAS)
82
78
65
53
41
32
31
31

A efetividde dos vrios inibidores governada pelo tipo de solo e temperatura,

pH e umidade de solo, entre outros fatores.
Outras pesquisas so para desenvolver fertilizantes de baixa liberao. Aqui o
objetivo criar material fertilizante que liberar somente pequenas quantidades de
nitrognio inorgnico a um dado tempo, aumentando assim a eficincia do fertilizante
por evitar uma alta produo de NO 3- e sua perda. Um desses exemplos a
10

peletizao da uria com enxofre, porque favorece a gerao de acidez durante a

nitrificao. Evitar o acmulo excessivo de NO 3- uma prtica importante a ser levada
em considerao.
DESNITRIFICAO
A discusso da desnitrificao est intimamente ligada ao destino do NO3- no solo.
Geralmente o NO3- no solo tem 3 destinos:
a) Assimilao refere-se a sua assimilao pelas biomassa de plantas. Este
processo realizado por enzimas denominadas genericamente de redutases, que
convertem o NO3- em NH4+, o qual incorporado em carbono orgnico gerando
aminocidos para a sntese protica.
b) Desassimilao ou volatilizao refere-se ao processo de desnitrificao.
Neste caso os microrganismos heterotrficos utilizam o nitrato como aceptor final de
eltrons e prtons, no processo de respirao anaerbia. As enzimas que realizam
este processo so tambm denominadas redutases. As primeiras transformaes
nesta seqncia de eventos so semelhantes ao processo assimilativo (Nitrato
redutase e nitrito redutase).
c) Lixiviao O nion NO3- tem grande mobilidade no solo, devido a prevalncia de
cargas negativas. Assim, o nitrato presente em horizontes superficiais do solo pode
facilmente ser percolado e acumular em lenis freticos.
O processo de desnitrificao
Consiste na reduo microbiana de nitrito e nitrato com a liberao de nitrognio
molecular e xido nitroso (N 2O). tambm conhecida como desnitrificao enzimtica.
Na desnitrificao o N perdido ou volatilizado para a atmosfera. Ela essencialmente
um mecanismo respiratrio em que o nitrato substitue o oxignio molecular, e por isso
tambm denominada de respirao de nitrato.
NO3- NO2- NO N2O N2
Formas volteis
Perdas de N no solo
Quando o nitrato e carbono orgnico disponvel so adicionados ao solo, o
nitrato aplicado reduzido e h evoluo de N 2, N2O e NO (xido ntrico). Estes
produtos so volteis e perdidos para a atmosfera.
O NO que escapa oxidado por processos no biolgicos pelo O 2 e NO2
(dixido de N).
A demonstrao quantitativa do desprendimento de N 2 no campo no fcil,
desde que o N2 um componente da atmosfera. O desprendimento lento e
usualmente as quantidades de nitrato e carboidratos ou matria orgnica prontamente
uitilizvel no grande.
Quando desejamos estabelecer um balano do nitrognio do solo e seu Ni,
necessrio avaliar a quantidade de N que est sendo adicionado no solo, atravs da
preciptao, das sementes, dos fertilizantes, dos estercos, bem como as quantidades
perdidas por lixiviao, eroso e remoo por plantas. Se no h mudana no total, as
perdas devem igualar os ganhos. Se as perdas excedem os ganhos, o N est sendo
11

perdido por alguma forma no includa nas variveis consideradas para o preparo do
balano. Resultados destas avaliaes mostram que as perdas por volatilizao podem
variar de 25 a 50% do total de Ni aplicado princicpalmente na forma de NO3-. Neste
aspecto a utilizao de fertilizantes amoniacais com controle de pH, tem uma ntida
vantagem em relao aos fertilizantes nticos, pois o NH4+ e mais retido no coloide do
solo e a sua volatilizao somente ocorre em valores de pH mais alcalinos.
Mecanismos de volatilizao de N
So trs as possveis reaes:
1. Perda no biolgica da amnia
2. Decomposio qumica do nitrito
3. Desnitrificao microbiana, com, a liberao de N 2, N2O (xido nitroso) e algumas
vezes NO (xido ntrico)
A primeira, volatilizao de NH3 livre, pode ser aprecivel sob certas condies.
Na maioria dos solos esta perda insignificante abaixo de pH 8,0, e a magnitude varia
diretamente com o aumento da alcalinidade. Temperaturas altas favorecem o processo,
mas as perdas so menores em solos com alta CTC.
Em solos em que o nitrito acumula, em locais com alto pH, o nitrito pode
decompor espontaneamente atravs de uma reao com a matria orgnica. Produz
N2, NO2, e pequenas quantidades de N 2O. Contudo, mesmo na circunstncia em que
nitrito aumente no solo, a gerao microbiana dos gases deve exceder os processos
biolgicos.
Nenhuma volatilizao detectada quando NH 4+ aplicado em reas muito
cidas para a nitrificao porque o nitrito no sintetizado.
O mecanismo mais importante de volatilizao de N a desnitrificao
microbiana. Embora haja poucos dados disponveis, eles surgerem uma peda
considervel.
O produto principal da reduo de nitrato em solos pobremente drenados ou
solos que tornam-se excessivamente midos parece ser gasoso ao invs de NO 2- ou
NH4+. O NO2- reduzido to rpidamente quanto formado.
Microbiologia
O crescimento dos microrganismos envolvidos na desnitrificao no
dependente da reduo do nitrato. Muitas bactrias responsveis so ativas em
protelises, amonificao, e outras transformaes. Consequentemente a presena de
muitos desnitrificantes no indica que h condies adequadas para a desnitrificao.
Assim, a abundncia de organismos sem especificidade por substrato no deve
ser entendida como indicao de que a atividade bioqumica proveniente no habitat
de onde ele for isolado.
Com organismos substrato-especfico, por exemplo, autotrficos nitrificantes,
uma populao densa uma boa evidncia da atividade nitrificante.
Solos arveis contm abundncia de desnitrificantes o que demonstra somente
um potencial para volatilizao rpida do nitrognio.
A capacidade para a verdadeira desnitrificao limitada a certas bactrias. As
espcies ativas so limitadas aos gneros: Pseudomonas, Bacillus, Paracoccus,
embora
Thiobacillus
denitrificans
e
ocasionalmente
Chromobacterium,
Corynebacterium, Hyphomicrobium ou Serratia catalizam a reduo.
GNEROS DE BACTRIAS DESNITRIFICANTES
GNERO
CARACTERSTICAS
Alcaligenes
Comumente isolada de solos
Agrobacterium
Algumas espcies so fitopatognicas
12

Azospirillum
Bacillus
Flavobacterium
Halobacterium
Paracoccus
Propionibacterium
Pseudomonas
Rhizobium
Rhodopseudomonas
Thiobacillus

Fixadores de N2, comumente associado a gramineas

Desnitrificantes termoflicos
Espcies desnitrificantes
Requerem altas concentraes salinas para crescimento
Capaz de crescimento litotrfico e heterotrfico
Denitrificantes com capacidade de fermentar
Comumente isolada do solo
Fixadores de N2 em simbiose com leguminosas
Fotossintticos
Geralmente cresce como quimioautotrficos

As bactrias desnitrificantes so aerbias, mas o nitrato pode ser usado como

aceptor de eltrons para crescimento na ausncia de O 2.
T. denitrificans
5S + 6KNO3 + 2H2O
3N2 + K2SO4 + 4KHSO4 (I)
5K2S2O3 + 8KNO3 + H2
4N2 + 9K2SO4 + H2SO4 (II)
Quimiodesnitrificao
As nitrito redutases so responsveis no s pela dismutao do NO 2 no solo.
Ela est tambm sujeita a reaes qumicas que levam a produo de N 2 por vias no
enzimticas sob condies de total arejamento. Perdas de N-NO 2- devido a sua
instabilidade e dismutao a outros xidos de N e a N 2 so geralmente denominados
de quimiodesnitrificao.
RNH2 + HNO2 ROH + H2O + N2
HNO2 + NH4+ N2 + 2H2O
3 HNO2 HNO3 + H2O + 2NONO2- + NH4+ NH4NO2 N2 + H2O
Fatores que afetam a desnitrificao
1- Elevada disponibilidade de NO32- Diminuio da disponibilidade de O2 (aerao fraca)
3- Suprimento de matria orgnica
4- umidade do solo; aerao; pH e temperatura.
A taxa de desnitrificao muito menor em solos com pouco carbono que em
solos ricos em matria orgnica. A efetividade dos nutrientes orgnicos em promover a
desnitrificao em solos inundados proporcional a sua disponibilidade.
A aerao afeta a transformao em duas formas aparentemente contratante:
1. Desnitrificao ocorre somente quando o suprimento de O 2 insuficiente
para satisfazer a demanda biolgica,
2. Ao mesmo tempo, O2 requerido para a formao de nitrito e nitrato, os
quais so essenciais para a desnitrificao.
A demonstrao de N2 volatilizado de solos mantidos a tenses normais de O 2
indicam que os poros e interstios no perfil no so inteiramente oxigenados. Assim,
apreciveis perdas podem ser encontradas em solos submersos usados para arroz.
A inibio da desnitrificao pelo O 2 no pode ser atribuda a influncia
detrimental do O2 sobre o crescimento pois as espcies ativas so aerbias. At certo
ponto a supresso da reduo do nitrato pode refletir o uso preferencial do O 2 como
aceptor de eltrons. Por outro lado pode ser o efeito sobre enzimas de reduo ou
mesmo represso sobre a formao das enzimas desnitrificantes.
13

Em solos bem drenados, a volatilizao relacionada com o contedo de

umidade. Desnitrificao aprecivel em altos nveis de umidade e em localidades
com drenagem imprpria. Nenhuma perda ocorre usualmente em solos com menos
que 60% da capacidade de reteno do solo, independente do carboidrato, nitrato ou
pH. Acima de 50% a magnitude da desnitrificao correlacionada diretamente com o
teor de umidade.
Muitas das bactrias desnitrificantes so sensveis acidez (altas concentraes
hidrogeninicas). Assim vrios solos cidos possuem uma microbiota esparsa. Essa
observao ecolgica est de acordo com estudos efetuados em cultura pura.
A acidez governa no somente a taxa de desnitrificao mas tambm a
abundncia relativa dos vrios gases.
altas concentraes de NO3- e pH > 6,0 --> domnio de N2
baixas concentraes de NO3- e pH 6,0 - 6,5 --> domnio de N2O
Em pH baixo, o NO pode aparecer em quantidades significantes.
A desnitrificao marcadamente afetada pela temperatura. A transformao
lenta a 2oC e aumenta com a temperatura. A tima para a reao de 25 oC ou acima.
A desnitrificao ainda rpida a temperaturas elevadas e vai ocorrer at cerca de 60
a 65oC, mas no a 70oC. Assim tem-se uma microbiota termoflica desnitrificante.
O fato d a desnitrificao no ocorrer em temperaturas baixas pode ter
implicao econmica de importncia, em regies onde no h plantas crescendo no
inverno para assimilar o nitrato formado.
Bioqumica da reduo do nitrato
Na oxidao aerbia de carboidrato tem-se:
C6H12O6 + 6O2 6CO2 + 6H2O
No metabolismo aerbio dos heterotrficos o poder redutor do carboidrato,
representado pelo H+, usado para formar H2O com o O2. Na respirao
heterotrfica do nitrato ou desnitrificao, o poder redutor conjugado com estados
oxidados do nitrognio.
2NO-3 + 1OH- N2 + 4H2O + 2OH2NO2- + 6H+
N2 + 2H2O + 2OHN2O + 2H N2 + H2O
2NO N2O N2
2HNO3 2HNO2

? (2NH2OH) 2 NH3
As enzimas responsveis so denominadas nitrato redutase , nitrito redutase,
xido ntrico redutase e xido nitroso redutase. A nitrato redutase apresenta como
cofator o Molibdnio (Mo).

14

Fixao Biolgica do Nitrognio (FBN)

O processo de fixao de nitrognio definido como sendo a converso do
nitrognio molecular (N2) em amnia ( N2 2 NH3). Existem, bsicamente, duas
alternativas para a realizao do processo: a) fixao qumica (industrial) e b) fixao
biolgica do nitrognio (FBN).
A fixao qumica corresponde a reao do nitrognio com hidrognio, sob alta
temperatura e presso, conhecido como processo de Harber-Bosch, desenvolvido no
incio do sculo XX na alemanha, que tem sido a base de produo dos adubos
nitrogenados para a agricultura moderna:
A fixao Biolgica do nitrognio (FBN) corresponde, essencialmente, mesma
reao, porm realizada por microrganismos denominados fixadores de nitrognio ou
diazotrficos:
Nitrogenase (Nase)
N2 + (8H+) + (8e-) + 16 ATP ---------------------------- 2NH3 + H2 + 16ADP +P
Assim, o processo de FBN a reduo do N 2 atmosfrico at N-amoniacal,
disponvel para microrganismos e plantas. Devido alta estabilidade do N2 (NN), esta
reao tem um custo energtico alto, o que restringe este processo a poucos grupos de
microrganismos adaptados condio diazotrfica. Os requerimentos essenciais para
este processo so:
a) Microrganismos procariticos: todo processo de FBN realizado somente por
determinados grupos de bactrias e actinomicetos.
b) Presena de nitrogenase (Nase): A nitrogensase um complexo enzimtico
responsvel pela reduo do N2 at NH3, e somente alguns grupos de
microrganismos procariticos apresentam os determinantes genticos de sua
produo. Tais microrganismos so denominados diazotrficos.
c) Excluso do Oxignio molecular. A reao de fixao do N2 corresponde a uma
reduo. Desse modo a presena de um forte agente oxidante causa a sua inibio.
Entretanto, vrios microrganismos aerbios podem realizar a FBN, desde que
apresente algum mecanismo de proteo da Nase tais como: produo de
leghemoglobina (rizbio-leguminosas), produo de heterocistos (cianobactrias),
proteo respiratria (Azotobacter), produo de mucopolissacardeos (Derxia,
Beijerickia).
d) Fonte de Carbono orgnico: Devido ao alto consumo energtico da reao de
fixao, o processo deve estar ligado a um suprimento contnuo e eficaz de carbono
orgnico, para gerao de ATP e proder redutor correspondente.
Principais Sistemas Fixadores de Nitrognio
Existem na natureza trs grandes sistemas fixadores:
a) Vida livre;
b) Associativo
c) Mutualstico.
a) Vida livre Correspondem aos microrganismos que podem ser encontrados nos
mais diversos ambientes de solos ou mesmo aquticos, no estando
necessariamente associado ou fazendo parte de estruturas mutualsticas. Estes
micorganismos podem ser organotrficos, ou seja dependentes de fonte de carbono
orgnico ou fotossintticos. Podem apresentar tambm um metabolismo
diversificado com relao ao oxignio, representado pelos grupos aerbios
15

(Azotobacter, Beijerinckia, Derxia), Facultativos ( Klebsiella, Bacillus, Azospirillum), e

anaerbios ( Clostridium, Desulfovibrio, Metanobactrias). Entre os microrganismos
fotossintticos de vida livre podemos citar: Cianobactrias (Nostoc), Bactrias
prpuras (Rhodospirillum, Chromatium, Thiocapsa). A contribuio desses
microrganismos, em termos de seu potencial de adio de Ncombinado (N-NH3)
nos ecossistemas pequena, variando de 2,0 a 10,0 kg N h. -1 ano-1
b) Associativo. A superfcie e tecidos de plantas constitui um habitat com fonte de
carbono, umidade onde podem se instalar alguns tipos de microrganismos
diazotrficos. No caso de Grammeas C4, verificou-se que tanto a rizosfera quanto
os tecidos internos de folhas, podem conter microrganismos que alm de promover
a fixao de nitrognio podem secretar hormnios de crescimento vegetal , situao
que confere grande auxilio no crescimento e desenvolvimento da planta. Os
microrganismos de ocorrncia natural nos tecidos das plantas so denominados de
endofticos. Como exemplos podemos citar os gneros Azospirillum, Acetobacter
(Cana-de-aucar), herbaspirillum. A contribuio dos sistemas associativos em
termos de potencial de fixao de nitrognio, ainda est sob estudo, mas,
observaes recentes evidenciam o elevado potencial dessa interao, podendo
adicionar de 20 a 100 kg N h.-1 ano-1
c) Mutualstico. Neste tipo de interao, ocorre uma interdependncia entre plantas e
bactrias, com formao de estruturas especializadas, como por exemplo os
Lquens (Cianobactrias + fungos), ndulo radicular ( rizbio + leguminosa),
actinorriza ( acinomiceto + essencias florestais), lobulos foliares (Azolla +
cianobactria). Os sistemas fixadores mutualsticos apresentam uma alta eficiencia
de fixao devido ao suprimento adequado de carbono orgnico aliado com
mecanismos especficos de proteo ao oxignio, como por exemplo os ndulos
radiculares com produo de leghemoblogina. O potencial deste sistema fixador
alto, podendo atingir de 30 a 200 kg N h. -1 ano-1 dependendo do sistema
considerado.
Estrutura e funcionamento da nitrogenase (Nase)
O complexo enzimtico da nitrogenase consiste de duas fraes (I e II). A frao
II uma protena com ncleo prosttico de Fe, sendo denominada Nitrogenase
redutase. Apresentando uma estrutura dmera (2 subnidades). A frao I contm
Molibdnio (Mo) e denominada molibdoproteina ou dinitrogenase., apresentando
estrutura tetrmera ( 4 sub-unidades). As fraes I e II esto agrupadas de modo a
permitir um contnuo fluxo de eltrons (eo-) da Frao II para I.
O funcionamento do complexo nitrogenase depende de um suprimento contnuo
de eletrons (eo-) de protons (H+) para promover a reduo do N2 at NH3, por meio de
molculas carreadoras denominadas ferrodoxina ou flavodoxinas. Estes eltrons so
captados pela nitrogenase redutase (Frao II) que tem 2 molculas de Mg.ATP
associada. Este complexo da Frao II mais eletrons e ATP liga-se Frao I, a
dinitrogenase contendo Mo, liberando eltrons e ATP. Nos sitios de Molibdnio ocorre a
reduo de NN at NH3. O esquema da Figura 1 ilustra o funcionamento da
nitrogenase nos sistemas diazotrficos.

16

F.ig. 1 Fixao biolgica de Nitrognio pelo sistema nitrogenase: (1) Gerao de

poder redutor (Fonte de Corg e metabolismo oxidativo). (2) Fluxo de protons e
eletrons para as fraes I e II da nitrogenase, respectivamente. (3) Transferncia
de eletrons da Frao II (Ferro-protena reduzida) para frao I (molibdoprotena) com gerao de ATP. (4) Reduo do N2 ao nvel do cofator Mo da
frao I com gero de amonia e hidrognio. (5) Sistema opcional de reciclagem
de protons e eletrons pela enzima hidrogenase, que pode promover um aumento
da eficiencia do sistema de fixao de nitrognio.
Alguns sistemas fixadores de nitrognio apresentam uma eficincia de fixao
mais elevada do que outros. Verificou-se que este fato est ligado presena de um
sistema enzimtico denominado Hidrogenase. Este sistema converte o H2 produzido
na atividade de nitrogenase em protons e eletrons que podem ser reciclados,
economizando-se assim o poder redutor da clula, o que se traduz em aumento de
eficincia. Tais sistemas j foram identificados e as clulas que apresentam
hidrogenase so denominadas Hup+.
Assimilao do Nitrognio fixado
Todo o nitrognio derivado da fixao obtido na forma de amonia que
imediatamente protonada (NH4+) e deve ser assimilada, ou seja, incorporada em
cadeias carbonicas para formao de aminoacidos e translocados para as diversas
partes da planta. H duas rotas de assimilao de NH4+: a) GDH glutamato
deshidorogenase; b) GS-GOGAT Glutamina sintase e glutamina-cetoglutarato amino
transferase. Ambas vias levam a incorporaao do N fixado no grupo amida do
aminoacido glutamato. A via GDH opera quando aconcentrao de NH4+ est acima
de 1,5 mM e a via GS-GOGAT ativada quando esta concentrao mais baixa de 1,5
mM. Uma possvel explicao se fundamenta na energia gasta para esta assimilao,
pois a via GDH opera com o gasto de 1 NADPH2, enquanto a via GS opera com gasto
de 1NADH + 2 ATP/ mol glutamato formado, sendo, dessa maneira, mais onerosa para
a clula. As reaes principais de assimilao esto ilustradas na figura 2 abaixo.

17

ESTUDO DIRIGIDO
1. Esquematizar o ciclo do nitrognio.
2. Discuta os seguintes pontos:
a) - Mineralizao do N
b) - Imobilizao do N
c) - Amonificao
d) - Nitrificao
e) - Assimilao do N pelas plantas e pelos microrganismos
f) - Lixiviao do N
g) - Volatilizao do N
3.
4.
5.
6.
7.
8.

Quais os fatores que afetam a mineralizao do nitrognio?

Quais os mecanismos comuns para a degradao inicial dos aminocidos?
Como ocorre o metabolismo dos cidos nuclicos?
Como se processa a decomposio da Uria?
Quais so os manejos que podem reduzir a perda de amnia, por volatilizao?
Complete o quadro abaixo:
Eficincia de Assimilao de C
Relao C/N
Bactrias
Actnomicetos
Fungos
9. O que a nitrificao?
10.
Qual a importncia da nitrificao?
11.
Como so classificadas as bactrias nitrificantes? como elas atuam?
12.
O que caracterizas as bactrias nitrificantes?
13.
O nitrito no acumulado no solo. Por que?
14.
Quas as condies que podem favorecer o acmulo de nitrito no solo?
15.
Quais so os fatores que podem afetar a nitrificao? como esses fatores
afetam a nitrificao?
16.
Como ocorre a poluio por nitrato? quais as suas consequncias?
17.
Como a nitrificao pode ser inibida?
18.
Em que situaes pode haver acmulo de nitrito no solo?
19.
Por que a nitrificao maior em solos cidos quando se usa uria ao invs de
sulfato de amnia?
20.
O que o processo de desnitrificao?
21.
O que significa respirao de nitrato?
22.
Quais os produtos da desnitrificao?
23.
Quais os mecanismos de volatilizao de nitrognio?
24.
Qual(is) a(s) condio(es) que favorece(m) a desnitrificao?
25.
O que caracteriza as bactrias desnitrificantes?
26.
Quais so as enzimas envolvidas no processo de desnitrificao?
27.
Quais os fatores que afetam a desnitrificao?
28.
Diferenciar a fixao quimica e biolgica do N2
29.
Caracterizar os principais sistemas de fixao de nitrognio.
30.
Enumerar os requerimentos para um sistema fixador de N2
31.
Na siestema nitrogenase onde acontece a reduo de N2? Porque?
32.
Qual a participao do molibdenio (Mo) na nutrio nitrogenada de plantas?
33.
Como o nitrognio fixado assimilado pelos microrganismos e plantas?

18

TRANSFORMAES MICROBIANAS DO FSFORO (P)

Introduo
fsforo (P) um elemento essencial para os seres vivos, desempenhando
vrias funes, tanto estruturais quanto funcionais, fazendo parte de
fosfolpideos de membranas celulares, cidos nucleicos e nucleotdeos,
fosfoprotenas, aucares-fosfato alm de participar de inmeras
coenzimas e no armazenamento e transferncia de energia celular na forma
de ATP, fosfocreatina,fosfoarginina e polimetafosfato (PP)n.
No solo, o P encontrado nas formas orgnica (P-org) geralmente formando
complexos com a matria orgnica do solo e uma frao inorgnica (Pi) representada
principalmente pela frao fosfato (PO 4=). Tendo em vista a sua baixa disponibilidade
nos solos, particularmente nos solos brasileiros, o P um dos componentes essenciais
e mais crticos para a nutrio de plantas e microrganismos logo aps o nitrognio. Ao
contrrio das transformaes do carbono, nitrognio e enxofre, o P no apresenta
aspectos de mudana de estado de oxidao ou formas gasosas na atmosfera. Alm
disto, a quantidade disponvel de P nos solos muito menor do que a demanda para o
crescimento e desenvolvimento das plantas, devido fraca solubilidade das formas
inorgnicas mais encontradas nos solos. Estes fatos, vm realar a necessidade de
estudos visando o manejo desse elemento crtico no solo para a manuteno ou
elevao dos patamares de produo vegetal.
O conjunto das principais transformaes de P ilustrado no seguinte esquema:

Plantas

Animais

Matria

Biomassa-P

1
2

Pi no
disponvel

4
Pi-soluo
(dispo

1,2 Assimilao (Imobilizao)

3 Mineralizao
4 Solubilizao
5 - Adsorso fsica a argilas + Plbil
6 Precipitao e depsitos
7 Decomposio

Pi

As transformaes microbianas do fsforo (P) esto, assim, limitadas a trs

processos:
a) Mineralizao ( Porg Pi)
b) Imobilizao (Pi Porg)
c) Solubilizao (Pi insol. Pi sol.)
O P no solo

19

O contedo total de P no solo, incluindo formas orgnicas (Porg) e inorgnicas

(Pi), varia de 0,01 at mais de 0,5% de P 2O5, equivalentes a 20 a 10.000 Kg/ha na
camada arvel (20 cm) do solo. A maior parte desse fsforo, ou seja 90 a 95%, est na
forma insolvel ou adsorvida (fixada) na frao argila e, portanto, no-disponvel. Esta
situao mais pronunciada em solos cidos de regies tropicais onde o P, juntamente
com o nitrognio, constituem os elementos mais limitantes da produo agrcola.
Assim, a quantidade de fosfato (Pi) na soluo do solo muito baixa na maioria desses
solos, sendo a concentrao mais comum em torno de 1,0 M (0,03 ppm), que
corresponde a um teor crtico abaixo do qual as plantas no absorvem mais fsforo.
Desse modo, torna-se necessrio a suplementao fosfatada, para gerar
concentraes de Pi na soluo do solo variando de 10 a 100 M (0,3 a 3,0 ppm),
constituindo a faixa tima de absoro de P pela maioria das culturas.
As plantas absorvem preferencialmente H 2PO4- e H2PO42-. A predominncia de
uma forma inica depende do pH as soluo. O H 3PO4 um cido poliprtico com trs
constantes de dissociao (pK) de 2,12 , 7,20 , 12,40 . Assim, no pH 6,0 a
disponibilidade do ion H2PO4- de 94% do fosfato e em pH 7,0 61%. O fsforo
fracamente adsorvido fase slida denominado fsforo lbil e est em equilbrio com
o P da soluo, possibilitando a recomposio dos nveis de P da soluo do solo
consumido pelas plantas e microrganismos.
A fonte primria de Pi so rochas contendo formas de apatita Ca3(PO4)2, em solos
levemente cidos ou formas dos minerais estrengita e variscita - Fe(3)PO 4 e AlPO4
respectivamente, em solos mais cidos, que se caracterizam pela sua baixa
solubilidade em solues aquosas com pH acima de 5,5.
A frao orgnica de P encontrada no hmus e materiais orgnicos associados
so originados da decomposio de resduos orgnicos incorporados ao solo. Os
tecidos vegetais geralmente contm 0,05 a 0,5% de P, nas formas de Fitina, Plipideos, acidos nucleicos, aucares fosforilados, coenzimas, ATP. Geralmente o
P-orgnico constitui de 30 a 50% do P total do solo, embora valores extremos de 5% a
95% podem ser encontrados. As formas orgnicas so constiuidas principalmente de
fitatos, acido nucleicos compelxados e fosfolipdeos, sendo a mais predominante delas
a fitina. A fitina uma denominao genrica para os sais de Ca e Mg do hexafosfato
de inositol que podem chegar a compor de 10 a 80% do P orgnico no solo. Os acidos
nucleicos e derivados constituem cerca de 1 a 10% dessa frao orgnica e os
fosfolipdeos com teores menores que 1 a 5%.
Inositol
Hexa P
(Fitina)

OPO3H2 OPO3H2
OPO3H2

H2O3PO
OPO3H2

OPO3H2

O R1

O R2 O

O
O-

CH2

CH2

Lecitina

Geralmente as relaes de C:P encontradas para solos minerais situam-se na

faixa de 100 a 300:1, enquanto que a relao C:P da biomassa varia de 30 a 100:1
como no caso de bactrias e algas, respectivamente.

20

Solubilizao do Pi
A solubilidade das formas de Pi governada principalmente pelos valores de pH
da soluo. Baseado no fato de que as plantas absorvem o P preferencialmente na
forma de H2PO4-, verifica-se que a concentrao mxima desta forma inica
encontrada entre os valores de pH cido situados entre 3 e 6,0. Assim, o mecanismo
essencial da solubilizao do Pi no solo est relacionado com a produo de cidos
pelos microrganismos e pelo exsudato radicular de plantas.
Esta produo de cidos pode ser realizada por meio da respirao onde o CO 2
liberado convertido em H2CO3 e tambm por meio da produo e liberao de cidos
orgnicos no meio. A qualidade do cido orgnico mais importante que a sua
quantidade, sendo os mais eficientes aqueles cidos que tambm apresentam um
efeito quelante com Ca, Mg, Fe, Al, Mn e Zn. Estes cidos com carga residual negativa,
complexam estes ctions liberando o Pi solvel. Essa propriedade quelante mais
observada nos hidroxicidos, aucares cidos, compostos aromticos e substncias
hmicas. Comparando-se o efeito solubilizador de diversos cidos orgnicos, observase que os cidos butrico e oxlico tem maior poder de solubilizao da apatita quando
comparados com o cido glicnico e succnico. Deve-se ressaltar, tambm, a
possiblidade de produo de cidos minerais pelos processos quimioautotrficos no
solo, especialmente pela oxidao da amnia (nitrificantes) e do S, produzindo cidos
ntrico e sulfrico respectivamente, que podem atuar sobre as rochas fosfatadas
aumentado o Pi solvel. Assim, uma mistura de estrco, fosfato de rocha pulverizado,
enxfre e p de terra como inculo, pode efetivamente auxiliar a solubilizao do
fosfato por meio da produo de cidos sulfrico por Tiobacilos e tambm a produo
de cidos orgnicos por fungos.
Os principais microrganismos solubilizadores de P, so aqueles em que se
oberva a produo de cidos liberados para o meio. Alm dos microrganismos
quimioautotrficos j citados, muitos fungos produzem cidos orgnicos que podem
auxiliar na solubilizao de P. Os principais gneros fungos produtores de cidos
orgnicos so Penicillium e Aspergillus. Bactrias tambm podem produzir cidos
orgnicos por fermentao principalmente nos gneros Bacillus, Micrococcus e
Pseudomonas. Dentre estes destaca-se o Baccilus megaterium var phosphaticum que
j foi utilizado como inoculante de sementes, em formulaes comerciais denominadas
Fosfobacterin . Os Actinomicetos no apresentam grande capacidade de solubilizao
de P devido ao fato desses microrganismos serem especialmente susceptveis ao meio
cido, embora algumas cepas de Streptomyces sp. tem capacidade de produo do
cido ltico e cetoglucnico no meio. Os fungos micorrzicos tem um pronunciado
efeito de mobilizao de P do solo. O fator de solubilizao destes fungos pode explicar
grande parte dos efeitos benficos da maior disponibilidade de P para as plantas
micorrizadas. Os possveis mecanismos de mobilizao de P pelas micorrizas em
solos minerais podem ser:
Produo e liberao de cidos orgnicos especficos pelas razes
micorrizadas
Aumento na concentrao de CO2 na rizosfera
Produo de agentes quelantes e complexantes
Maior populao de bactrias solubilizadoras de P na micorrizosfera
Presena de fosfatases (mineralizao do P org)
Abaixamento de concentrao de P na soluo (efeito massa)
O efeito dos microrganismos solubilizadores de P pode ser avaliado em
experimento de plantas crescidas em substrato adubado com formas diversas fontes
21

de P, em condies estril e no estril. Os resultados mostram que a absoro de P

nas plantas crescidas em ambiente esterilizado foi signficamente menor do que
aquelas mesmas plantas crescidas com a condio natural evidenciando, asssim, a
signficativa participao dos microrganismos solubilizadores de P no crescimento de
plantas em condio natural.
Mineralizao do P-orgnico
Sendo o P-orgnico a frao predominante e no-disponvel do P nos diferentes solos,
a existncia de um mecanismo de mineralizao dessa frao contribui decisivamente
para a nutrio fosfatada de plantas e micorganismos. O proceso de mineralizao
realizado por meio da retirada de grupos fosfato de P-org, realizada pelas enzimas
denominadas coletivamente de fosfatases, que catalizam aseguinte reao de
hidrlise:
O

||
||
ROPOH + H20 ROH + OHPOH
|
|
OH
OH
O
||
ROPOH
|
OH

Fosfato
Monost

O
||
ROPOR
|

Fosfato
Dister

OH

Uma mesma fosfatase pode atuar sobre diferentes grupos R monoesterificados.

Por outro lado, substratos diesterificados (2R), como no caso de fosfolpides e acidos
nucleicos, requerem diferentes enzimas para o seu processamento. Fosfatases que
catalizam monoester frequentemente tem um pH timo cido ou alcalino. Devido a
esse fato as fosfatases so divididas em fosfatases cidas e alcalinas. Quando
essas enzimas atuam sobre inositol-hexafosfato (Fitinas), ela denominada
genericamente de Fitase, promovendo a liberao de cada fosfato sequencialmente.
Cerca de 30 a 50% dos isolados de microrganismos do solo apresentam atividade de
Fitase, entre estes incluem os gneros de fungos Aspergillus, Penicillium, Rhizopus e
as bactrias Arthrobacter, Streptomyces, Pseudomonas e Bacillus.
A mineralizao de P-org influencia pelos valores de pH do solo. Por exemplo,
a mineralizao de fitatos em solo cido menos intensa do que em solos neutros a
ligeiramente alcalinos. Uma possvel explicao se baseia no fato da pequena
quantidade acido ftico na soluo de solos cidos onde pode formar complexos com
Fe e Al, tornando-se assim, menos suceptveis ao ataque das enzimas fitases.
A avaliao da atividade de fosfatases pode ser realizada diretamente no solo,
por meio da incorporao de um substrato cromognico, isto que gera cr
caracterstica aps a sua hidrlise. Assim, aps a incorporao de B-nafitilfosfato ou
fenilfosfato, a atividade de remoo dos grupos P dessas moleculas pode ser
monitorado por meio de avaliaes espectrofotomtricas e comparado com curvas
padres previamente delineadas.

22

Imobilizao do P
Similarmente a todos os nutrientes essenciais, para o crescimento e construo
de biomassa celular, necessrio a presena de formas disponveis de Pi no meio.
Estas formas disponveis, so absorvidas e incorporadas em molculas orgnicas
( Pi Porg), onde desempenham as funes na estrutura e funcionamento celular. A
demanda de P pode ser avaliada em termos da relao C/P ou C:N:P conforme tabela
abaixo:
Tabela ___- Relao C:N:P em diversos componentes do
solo
Componente
Algas
Bactrias
Fungos
Solo Matria orgnica
Natural
Agrcola (com fertilizao)

C
100
30
150

N
16
5
15

P
1
1
1

190
120

6
9

1
1

Verifica-se que a relao C:P da maioria dos componentes do situa-se entre 100
a 200:1 sendo, fazendo-se meno do grupo de bactrias em que a relao C:P pode
situar entre 30 a 50:1. O contedo de P geralmente varia de 0,3 a 1,0 e de 5 a 20% em
relao ao carbono e nitrognio, respectivamente. Assim, as taxas de imobilizao de P
vai depender da qualidade do resduo em decomposio e da disponibilidade de
carbono e nitrognio no solo, nas diversas situaes consideradas. Se a concentrao
de P no resduo excede demanda celular pode-se observar um aumento de Pi
disponvel. Por outro lado, se este resduo apresenta concentraes de P abaixo dos
valores usualmente requeridos para a construo de biomassa-P, este deve ser
suprido pelo Pi disponivel da soluo do solo.
Geralmente, o contedo de P, base matria seca, em miclio de fungos de 0,5
a 1,0% e de 1 a 3,0 % em bactrias e actinomicetos. Entretanto, estes valores podem
ser mais variados, visto que, no caso do P, frequentemente, os microrganismos exibem
um consumo de luxo ou podem promover o seu armazenamento em condies de
estresse. Assim,
estes valores encontrados em estudos que utilizam os
microrganismos crescidos em meio de cultivo, podem diferir significativamente
daqueles valores encontrados em condies naturais.
Considerando-se a decomposio de 100 partes de um resduo contendo 40%
de carbono disponvel e uma microbiota mista com relao C:P 50:1 e assimilando
35% do carbono para a construo de biomassa, o clculo da demanda P, pode ser
realizada com os seguinte relao:
Demanda P = ((C disponvel x Carbono Assimilado)/ C:P microbiota ) x100
= ((0.40 x 0,35)/50)x 100 = 0,28 (%)
ou seja, para uma decomposio equilibrada e sem depleo ou remoo de P da
soluo do solo, o resduo deve conter, aproximadamente,entre 0,30% de P (base
matria seca). Resduos contendo acima de 0,30% de P geralmente contribuem para o
aumento do contedo de Pi disponvel no solo. Resultados de estudos da demanda P
com microrganismos em meio de cultivo fungos mostram valores de 0,24 a 0,40 para
Aspergillus (fungo), 0,27 a 0,63 para Streptomyces e 0,16 a 0,36 para culturas mistas
23

de microrganismos do solo. Meios contendo celulose, apresentam valores de 0,35 a

0,45 e solos com suprimento contnuo de glicose mostram que 0,37 partes de P so
necessrios para construo de biomassa para cada 100 partes de aucar adicionado
ao solo. Deve-se notar que estes dados assumem uma C:P da microbiota mista de 50
a 100:1 e que desvios destes valores podem ser observados em funo da
concentrao de P no resduo e do tipo de carbono disponvel assimilado pela
microbiota. Assim, estudos envolvendo aucares simples, devem ser considerados com
100% de carbono disponvel e, porotanto, gerando uma maior demanda de P. Com
base nestes dados, razovel inferir a faixa de 0,2 a 0,3 como valores aceitveis para
a demanda P em condies aerbias. Em condio anaerbia, o metabolismo de
energtico diminuido com consequente reduo de biomassa e, assim, menos
P necessrio para uma mesma quantidade de carbono disponvel.
Em resumo, considerando-se a C:P do resduo em decomposioe as tendncias entre
Mineralizao (M) e Imobilizao (I) do P, temos:
C:P < 200:1 M>I ( predomina a mineralizao com liberao de P para o solo)
CP: > 300:1 M<I ( predomina a Imobilizao temporria do P na biomassa)
Uma dvida: pode ocorrer reao de oxi-reduo com o P do solo?
Geralmente o P no solo encontrado no estado de oxidao de +5 (ortofosfato),
assumindo-se que no h mudanas de seu estado de oxidao no solo. Entretanto, o
P pode existir como Fosfina (PH3) com estado de oxidao de 3. Estudos com Fosfito
(P-3) incorporado ao solo, promove o aumento de PO 4-. Esta converso tem base
microbiolgica, pois, adio de inibidores eliminam e paralisam o aparacimento de
ortofosfato. Alguns fungos, bactrias e actinomicetos podem crescer em meio de
culativo utilizando fosfito como nica fonte de P. Em meios contendo uma mistura de
fosfato e fosfito, o fosfato primeiramente utilizado. Hipofosfito (HPO 2=)a tambm pode
ser oxidado at fosfato. Entretanto, at o momento no h uma explicao ou
fundamentao prtica dessas reaes no contexto da biologia do solo.
Estudo Dirigido:
1.Como os microrganismos do solo atuam nas transformaes do P?
2. Qual a principal forma ionica de P para as plantas? Qual o pH em que esta forma
ionica mais ativa?
3. Porque os compostos de P geralmente tem baixa solubilidade?
4. Como os cidos orgnicos promovem a solubilizao de P?
5. Esquematizar as principais transformaes de P no solo
6. Qual a relao C:P de: Fungos, bactrias, algas e matria orgnaica do solo?
7. Como as micorrizas mobilizam o P do solo?
8. De esemplos de micorganismos solubilizadores de P no solo.
9. Demonstrar demanda de P para a decomposio de um resduo contendo 40%
carbono disponivel, 0,14% P e 35% carbono assimilado e C:P mista de 50:1.
10. O que so fosfatases e como atuam nna dinamica do P do solo?
11. De que modo o pH inflencia a mineralizao do P no solo?
12. Qual a importncia das reaes de oxi-reduo do P no contexto da biologia do
solo?

24

UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPIRITO SANTO - UFES

PG ENGENHARIA AMBIENTAL (PMEA)
BIOTECNOLOGIA AMBIENTAL
TRANSFORMAES MICROBIANAS DO ENXOFRE (S)
INTRODUO
enxofre (S) um elemento essencial para todos os seres vivos pois um
dos componentes dos aminocidos metionina e cistena. Alm disto, participa
do metabolismo celular como componente de cofatores, vitaminas e enzimas.
Muito pouco se conchecia do metabolismo do S, at que o metabolismo
autotrfico de bactrias capazes de sua oxidao fossem descobertas por
Winogradsky (1889) e demais transformaes que permitiram um entendimento da
dinmica do S na biosfera .
Ateno especial tem sido dedicada ao estudo das transformaes do S devido aos
possveis problemas ambientais decorrentes da intensa utilizao de combustveis
fsseis, gerando formas cidas para a atmosfera, as quais tem causado o grande
problemas de chuvas cidas.
A principal forma de S no solo o sulfato (SO 4=) que absorvido e assimilado pelas
plantas diretamente da soluo do solo ou at mesmo da atmosfera. O faixa de S total
dos solos situa-se entre 100 a 500 mg kg-1, sendo que apenas metade desse valor
est disponvel. Cerca de 10 a 15% do S total no solo corresponde a formas
inorgnicas, principalmente sulfatos. O restante 85 a 90% do S total so formas
orgnicas de steres de sulfato (-O-SO3H) e Sulfidril (SH ou S-S).
A relao carbono enxofre C:S da matria orgnica humificada varia de 100 a 200:1
sendo esta variao ligada ao tipo de solo considerado. A biomassa microbiana
apresenta uma relao C:S similar pois a concentrao de S varia de 0,1 a 0,21% base
matria seca total.
O ciclo de transformaes de S no solo, segue, essencialmente as mesmas
transformaes do N, ou seja, a) Mineralizao e Imobilizao b) oxidao c)

So

SO4
1

2. Mineralizao Anaerbia
3. Imobilizao (Assimilao)
4. Imobilizao (Assimilao)
5. Reduodesassimilativa
Reduodesassimilativa
6. Oxidaoquimioautotrfica
Oxidaoquimioautotrfica

Mat.Organica
9

8
Plantas

H2S
2

Biomassa-S
4

1. Mineralizao Aerbia

7. Oxidaoquimioautotrfica
Oxidaoquimioautotrfica
8, 9. Decomposio

10

Animais

10. Nveistrficos
Nveis trficos
25

Reduo desassimilativa (volatilizao) e d) decomposio. Estas transfromaes

esto resumidas no esquema a seguir:
As plantas assimilam o S preferencialmente na forma de sulfato (SO4 =), porm
algumas delas podem, tambm, assimilar o S diretamente da atmosfera na forma de
SOx. Os animais, por outro lado, satisfazem suas demandas pela ingesto de plantas
e tecidos animais contendo aminocidos sulfatados. Quando incorporados ao solo, as
protenas dos tecidos vegetais e animais so hidrolisados pelos microrganismos nos
diversos aminocidos. O sulfeto e sulfato so acumulados aps o ataque microbiano
dos aminocidos que contm S. Em condies arejadas, o S metabolizado at
sulfato. Sob condies de alagamento ou outras condies anaerbias, ocorre acmulo
de H2S. O acmulo de sulfito conseqncia tanto da reduo de sulfato, como da
mineralizao dos S-orgnico. Entre o sulfeto e o sulfato (seqncia oxidada e
reduzida) tem vrios intermedirios, mas nenhum deles persistem por longos perodos,
e a concentrao na natureza normalmente baixa.
A transformao do S se parece em muitos passos com a do N. Devido serem
constituintes do protoplasma, devem ser assimilados durante a proliferao. O N e o S
esto em vrias combinaes orgnicas no solo, necessitando da decomposio
microbiana para torn-los disponveis. O S inorgnico oxidado como na nitrificao
(amnio-nitrato), e as condies necessrias para a reduo do sulfato so similares
do nitrato. A similaridade no limitada pelas condies ambientais, mas se extende
fisiologia e bioqumica dos organismos responsveis.
O ENXFRE NO SOLO
O S chega ao solo por meio dos resduos de plantas, restos animais, fertilizantes
qumicos e chuva. tambm encontrado como sulfato em vrios minerais primrios.
Ocasionalmente, S adicionado para controle de patgenos de plantas ou para
recuperao de solos alcalinos. A quantidade de compostos de S voltil que retorna
superfcie terrestre varia muito. Por exemplo, 1 Kg nas partes da frica, Austrlia e
Nova Zelndia e mais de 100 Kg/ha/ano em regies industrializadas da Europa e dos
USA.
A maior parte do S do solo est na forma orgnica, chegando a 1/2 a 1/3. A
concentrao de sulfato inorgnico relativamente baixa, sendo menos que 1/10 do
total de S. considerando o S como uma unidade, a taxa C:S de 100:1 na frao
orgnica e a relao N-total:S-orgnico de 10:1 em diferentes solos e em vrios
horizontes de um mesmo lugar. Experimentalmente observa-se valores duas vezes
maior ou menor nas relaes C:S-orgnico ou N:S-orgnico.
A frao orgnica contm dois grupos de compostos caractersticos, os estersulfatos e os aminocidos. Os ester-sulfato so sulfatos orgnicos e possuem ligaes
C - O - S, esses composto possuem de 20-65% do S total. Esses compostos incluem
colina sulfato, compostos aromticos tais como tirosina-O-sulfato e polissacardeos
contendo sulfato, embora a substncia no hmus no seja conhecida.
Os aminocidos, ligados s protenas ou outros polmeros, so a cistina (ou
cistena) e metionina. Cerca de 5 a 35% do S se encontra nessa forma. A identidade de
1/4 a 1/2 das formas de enxofre encontradas no solo no so conhecidas. H
predominncia de sulfato na frao inorgnica quando a aerao adequada, mas
sulfito, S elementar, tiossulfato e tetrationato tm sido observados em pequenas
quantidades.
MINERALIZAO E IMOBILIZAO

26

Um grupo diverso de compostos orgnicos contendo S est presente como

substrato para a microbiota. O S ocorre em protenas de plantas, animais e
microrganismos junto aos aminocidos, cistena e metionina, e na vitamina B, tiamina,
biotina e cido lipico. tambm encontrado em tecidos e produtos de excreo de
animais como sulfato livre, taurina, e algumas vezes como tiossulfato e tiocianato.
Aps a adio de resduos de plantas e animais ao solo o S contido
mineralizado. A poro de produtos inorgnicos utilizado pela microbiota para sntese
de clulas, e o restante liberado para o meio. Aerobicamente, o produto inorgnico
terminal o sulfato por meio de ao de enzimas denominadas sulfatases conforme a
reao:
sulfatases
S orgnico (R-O-SO3-) + O2-------------------- ROH + H + SO4=
Na ausncia de O2, particularmente durante a putrefao de protenas, ocorre a
liberao de H2S e odores desagradveis devido a ao de enzimas desulfidrases nos
aminocidos cisteina e serina. A capacidade para formar H 2S por meio da degradao
parcial de protenas uma propriedade comum em muitos gneros de bactrias.
Assim, podem ser observados a liberao em grandes quantidades de sulftos em
condies anaerbias.
A mineralizao de S em hmus relativamente baixa, e a taxa relativamente
lenta para satisfazer a demanda das plantas. A mineralizao do hmus mais rpida
na presena do que na ausncia de O 2, e o processo favorecido pelo aumento da
temperatura em mudana mesoflica e pela adio de calcrio em stios cidos. A
umidade tem influncia marcante na transformao. A falta de acmulo de quantidades
significantes de aminocidos livres ou outros compostos orgnicos de simples, so
evidncias de que esses produtos so degradados to rapidamente como so gerados.
O S de cistena e cistina convertido quantitativamente em sulfato, quando
esses aminocidos so aplicados em solos bem arejados. A converso rpida devido
a muitos microrganismos atacarem os dois compostos. A decomposio pode seguir
qualquer um dos vrios mecanismos conhecidos. No solo a cistina pode ser formada
pela oxidao de cistena. O S da molcula oxidada a sulfato com cido sulfnicocistena como um possvel intermedirio, uma seqncia de reao que no envolve
H2S.
A imobilizao do S ocorre com a assimilao e incorporao do sulfato
em nucleotdeos, formando compostos como a adenosina fosfosulfato
(PAP) e fosfoadenosina fosfosulfato (PAPS), com liberao e reduo do
grupo sulfato em sulfito (SO3=) e sulftos (S2-) e sua incorparao no
aminoacido serina para formao de cisteina. Estas transformaes esto
esxquematizadas abaixo:
Oxidao de enxofre inorgnico
Os compostos inorgnicos de S que so transformados biologicamente
representa vrios estdios de oxidao de -2 a +6 (Tabela). Nem todas as reaes do
solo so enzimticas, e muitos passos individuais no so biolgicos. Nos solos,
sulfetos, S elementar, e tiosulfato podem ser oxidados vagarosamente por meios
qumicos, mas a oxidao microbiolgica mais rpida quando as condies so

27

favorecidas. Em umidade e temperatura prximas a tima, as mudanas qumicas so

insignificantes comparado com converses microbiolgicas.
Tabela - Estados de oxidao dos principais compostos de Enxofre
Forma
Sulfato
Sulfito
Dixido enxfre
Tiosulfato
Tetrationato
S-Elementar
Bissulfeto
sulfeto
S orgnico

Frmula
SO4-2
SO3-2
SO2
S2O3 2 (SSO3--)
S4O6
So
HSS-2
R-SH

Estado de oxidao
+6
+4
+4
+2 (mdia)
+2 (mdia)
0
-2
-2
-2

Oxidao do S
Os microrganismos do solo capazes de oxidar S inorgnico apresentam uma grande
diversidade metablica, podendo ser tanto autotrfico como heterotrficos em
condies aerbias ou anaerbias. As bactrias usando tais molculas como energia
so membros do gnero Thiobacillus, sendo comumente referidos como tiobacilos.
Estes microrganismos tem um grande impacto ambiental, visto que o principal produto
de oxidao, sulfato (SO4) geralmente causa ACIDIFICAO do solo e lixiviao
desses acidos para cursos dgua (drenagem cida).
Os tiobacilos so microrganismos quimioautotrficos ou quimiorga-notrficos
facultativos utilizando compostos de S mais reduzidos, tais como sulftos, tiossulfatos e
enxofre elementar como fonte de eletrons (energia) e com produo de (H+) + SO 4=
(CIDO SULFRICO).
Um resumo das principais escies de tiobacilos, pH timo de atuo e substatos
energticos e tipo de metabolismo mais utilizado pode ser visualidado na tabela--:
Espcies
de PH timo
Tiobacilos
T. Thiooxidans
2,0 3,5
T. ferroxidans
2,0-3,5
T. thioparus
7,0
T. novellus
7,0
T. denitrificans
7,0

Substratos
energticos
So, S2O3, S4O6
So, S203, Fe2+
So, S2-, S2O3,
S2O3, comp. Org.
So, S2-, S2O3,

Metabolismo
Aerbio
Aerbio
Aerbio
Aerbio
Aerbio
Anaerbio(NO3)

28

Thiobacillus thiooxidans - quimioautotrfico estrito, o qual oxida S elementar e

capaz de crescer em pH 3 (2 a 5).
S + 11/2O2- H2O H2SO4
Thiobacillus thioparus, quimioautotrfico obrigatrio, sensvel acidez pH 5 a 8, com
timo na neutralidade.
5Na2S2O3 + 4O2- H2O 5Na2SO4 + H2SO4 + 4S
Na2S4O6 + Na2CO3 + 1/2O2 2Na2 SO4 + 2S + CO2
Thiobacillus novellus no usa S elementar, mas oxida compostos orgnicos to bem
quanto os sais de S. A espcie comum capaz de viver na ausncia de O 2,.
Na2S2O3 + 2O2 + H2O 2 NaHSO4
Thiobacillus denitrificans, usa nitrato como aceptor final de eltrons em condies
anaerbias.
2 NO3- + S + H2O + CaCO3
CaSO4 + N2
6KNO3 +5S + 2H2O
K2SO4 - 4KHSO4 + 3N2
Thiobacillus ferrooxidans, estritamente aerbio, pH 1,5 a 5, capaz de oxidar sais de
Fe ou S como fonte de energia. Produo de gua mineral cida.
Thiobacillus intermedius - quimioautotrficos facultativo, pH 3 a 7 e capaz de usar
S2O32- como doador de eltrons. O crescimento estimulado pela presena de matria
orgnica.
Thiobacillus thiocyanoxidans - semelhante ao T. thioparus. para crescer em S ou S 2O32-,
carbono e nitrognio devem ser suplementados. Quando crescidos em tiocianatos,
muito encontrado em resduos de esgoto:
N-C-S + 2O2 + 2 H2O
SO42+ + NH4+ + CO2 + 220 kcal
Sulfolobus - Oxidantes do S, termoflicos (60 a 80 oC), pH 2 - 5, regies termais.
O S elementar, sulfato, tiossulfato, tetrationato e tiocianato servem como
fonte de energia de um ou mais membros desse gnero, e CO 2 ou bicarbonato suprem
o C dos quimioautotrficos. Com exceo do Thiobacillus novellus, so todos
aparentemente autotrficos obrigatrios, no derivando energia da oxidao de
carbono orgnico. O pH tambm serve para distinguir as espcies.
Grupo representativos so geralmente aerbios obrigatrios, com exceo do T.
denitrificans, o qual pode utilizar nitrato como aceptor final de eltron. Quando crescido
em condies anaerbias, a bactria converte nitrato para nitrognio gasoso e, ao
mesmo tempo, oxidam tiossulfato ou mesmo outros compostos de S. Variaes
termoflicos e haloflicos de tiobacilos autotrficos so isolados com facilidade, e uma
espcie T. perometabolis, um heterotrfico o qual cresce oxidando tiossulfato para
sulfato.
A abundncia das bactrias quimiautotrficas oxidantes do S pode ser medida
pela tcnica de diluio do solo em meio com sais minerais contendo compostos de S
inorgnico e observando a mudana na acidez. Tais processos, tem mostrado que em
solos minerais usualmente tem se menos do que 100 ou 200 tiobacilos por grama, mas
encontra-se ocasionalmente at 10.000 tiobacilos/g. Em turfas, a populao menor
que 500, e freqentemente 50/g. A populao nunca densa, mesmo que compostos
de S sejam adicionados.
29

A oxidao de S no restrito ao gnero Thiobacillus, outros microrganismos

fazem essa transformao. Alguns so autotrficos, mas so restritos em solos mornos
devido a regio onde so encontrados que sujeita ao calor geotrmico (Yellowstone),
oxidam o S elementar naturalmente presentes nos ambientes cidos e quentes e
produz cido sulfrico temperaturas de 85 o C.
Bactrias heterotrficas, actinomicetos e fungos, podem, tambm, oxidar
compostos de S inorgnico. Assume-se que nenhuma energia disponvel para o
organismo para tais processos e que as transformaes so dependentes para muitos
processos metablicos. Por exemplo, espcies de Arthobacter, Bacillus,
Flavobacterium e Pseudomonas convertem S elementar ou tiossulfato para sulfato, e
espcies de Streptomyces so capazes de gerar tiossulfato de S elementar. Fungos
filamentosos e leveduras oxidam S em p, e vrias bactrias heterotrficas convertem
tiosulfato para tetrationato na presena de nutrientes orgnicos. Como uma regra,
essas reaes so menores do que o correspondente ao dos tiobacilos. Fungos
filamentosos produzem sulfato de substratos orgnicos tais como cistina, tiouria,
metionina e taurina; os gneros ativos so representatos por Aspergillus, Penicillium e
Microsporum. A alta taxa de formao de sulfato desses fungos ubquos, as muitas
bactrias heterotrficas capazes de oxidar S inorgnico, e os poucos tiobacilos em
muitas reas, sugerem que heterotrficos podem ser mais importantes do que
quimioautotrficos na produo de sulfato de matria orgnica.
Em meio de cultivo, a grande variedade de compostos inorgnicos sulfurosos
so metabolizados por um ou outro microrganismo. O mesmo verdadeiro in vivo;
por exemplo. Solos tratados com S coloidal, tiosulfato, tritionato ou tetrationato forma
sulfato aps uma fase lag inicial, terminando em vrios dias. Essas reaes so
biolgicas e so inibidas por inibidores bacterianos. Sulfetos so prontamente oxidados
no solo atravs desse processo mas no totalmente microbiolgico devido a converso
do sulfato para S elementar por meios qumicos. interessante que tetrationato
aparece antes do sulfato em solos tratados com tiossulfato, esta observao sugere
que tetrationato produto de ocorrncia natural da oxidao de tiossulfato.
A oxidao de S em p produz considervel quantidade de cido sulfrico. A
adio ao solo de S elementar essencialmente equivalente a aplicao de cido
sulfrico, tal como a atividade do tiobacilos. A altas taxas de aplicao, o pH de um solo
neutro pode abaixar para 3 ou 2 em alguns meses. T. thiooxidans usualmente o maior
organismo responsvel, mas T thioparus e T. denitrificans metabolizam o S livre muito
bem. A transformao aumentada pelo decrscimo do tamanho de partcula de
enxofre e o aumento da temperatura atravs da mdia mesoflica afetado pelo pH e
contedo de gua. Tais condies so propostas para explicar a deficincia de S em
algumas culturas, a baixa oxidao para a forma disponvel de sulfato vantajosa
porque grandes quantidades de sulfato adicionado podem ser facilmente perdido por
lixiviao.
Considervel esforos tem sido dado para estabelecer como os tiobacilos
produzem o sulfato. Existe controvrsia a cerca das vias de oxidao. possvel que
vias distintas funcionem em vrias espcies, e certo que os produtos acumulados na
cultura dependem das condies de incubao.
As vias propostas para oxidao do enxofre pelos Tiobacilos so:
A S + SO3 SO4
B S + SO3 -SSO3 - (tiossulfato)
C -SSO3 -O3SSSSO3 - (tetrationato)
S + SO3=
SO3= SO4=
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Uma seqncia a converso do S elementar para sulfito, o qual ento

oxidado para sulfato. A segunda assume que algumas das reaes com sulfito com o S
residual, iniciado para tiossulfato. NO 3 o tiossulfato pode ser ento clivado para sulfito
ou S ou sulfeto, os quais so ento oxidados para sulfato. Na oxidao do sulfeto, o S
elementar pode ser regenerado em culturas microbianas. Outras reaes mais
importantes podem ocorrer.
Os tiobacilos podem ter um profundo significado na agricultura pela formao de
sulfato necessrio para as plantas. Um dos significados a alterao da acidez do
solo, reduzindo a incidncia ou severidade da sarna da batatinha ou o caruncho da
batata doce. Essas condies so causadas por actinomicetos sensveis acidez,
Streptomyces scabies e Streptocyces ipomeae. Essas doenas no so severas em pH
abaixo de 5,0; os patgenos so freqentemente controlados pela adio de S em
quantidades suficientes para levar a reao a um ponto abaixo do limitante. O controle
associado com o cido sulfrico formado por tiobacilos. Tratamento similar tem sido
adaptado para restaurar solos alcalinos. Adicionando-se S livre nesses solos, onde os
tiobacilos esto presentes, o cido sulfrico gerado poderia neutralizar a alcalinidade e
tornar o solo produtivo. A corroso de concreto pode tambm ser resultado da atividade
de Thiobacillus. H2S atmosfrico freqentemente uma fonte do elemento para a
deteriorao do concreto.
A oxidao de enxofre elementar causa uma solubilizao de minerais do
solo. O cido sulfrico formado reage com minerais e outros materiais insolveis,
conduzindo a mobilizao de nutrientes. Ento, a oxidao aumenta a quantidade de
fosfatos solveis de K, Ca, Mn, Al e Mg. Deficincia de Mn pode ser corrigida pela
aplicao de S ou tiossulfato, aumentando a concentrao do ions Mn divalente. A
composio de S coloidal, no solo e nas rocha fosfatada, um meio de solubilizao
de fosfato e compostos desse tipo so recomendados em fazendas para aumentar de
Pdisponvel.
Tiobacilos esto envolvidos na formao de cido sulfrico em solo. A
ocorrncia de solos desse tipo est ligado a sedimentos marinhos e certos pntanos.
Os stios so inicialmente ricos em sulfetos, tipicamente pirita (FeS 2), mas
freqentemente FeS pode ser proeminente. Sob condies drenadas e exposta a O 2,
os sulfatos so oxidados a H 2SO4 e o pH cai drasticamente, usualmente abaixo de 4. A
concentrao de sulfato pode ser excessivamente alta quando a oxidao rpida. Os
quimioautotrficos so freqentemente o agente principal dessa mudana, mas o
processo pode ser totalmente qumico. Espcies individuais de Thiobacillus,
geralmente T. ferrooxidans ou T. thiooxidans, podem tambm participar da oxidao de
Cu, Zn, Pb, Ni, Co, ou sulfetos de Cd, comumente com a liberao do ction. Como
com o sulfeto de Fe, a transformao de outros sulfetos pode envolver reaes
bacteriana ou no, mas o microrganismo caracteristicamente acelera grandemente as
reaes qumicas lentas. Pirita e FeS tem sido propostos como fertilizantes em solos
deficientes em S, o elemento vagarosamente liberado na forma que a planta assimila.
As regies prximas a mineraes de S, so poludos pelo material que
transportado. Em regies onde h depsitos naturais, o pH do solo pode chegar a 4,0
ou at menos (2,0), o solo fica totalmente desprovido de plantas. A comunidade
microbiana baixa, e poucas bactrias e actinomicetos esto presentes. a maior
populao microbiana de fungo.
Reducao de Compostos de S inorganico
Em solos que so deficientes em O 2, como regies alagadas, o nvel de
sulfeto aumenta a concentraes relativamente, freqentemente em excesso de 150
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ppm. Ao mesmo tempo, a concentrao de sulfato diminui, e freqentemente uma zona

distinta de deposio de sulfeto ferroso aparece no perfil. Assim que esse processo
inicia, h um aumento concomitante no nmero de bactrias redutoras de sulfato. A
populao de redutores de sulfato comumente menor que 10 4 e freqentemente <
103/g, mas o nmero pode se tornar maior que vrios milhes/g aps cerca de 2
semanas em solos inundados. Muito do sulfeto que acumula origina da reduo de
sulfato, mas a mineralizao de composto de S orgnico tambm leva formao do
mesmo produto.
A formao de sulfeto pela reduo de sulfato na natureza aumentada
pelo aumento do nvel de gua, adio de matria orgnica e aumento da temperatura.
O processo requer baixo potencial de oxireduo, o que caracterizado pelo habitat
anaerbio, e usualmente pH em torno de 6,0 ou acima. Esta transformao retardada
pela aerao e adio de nitrato, pois ambos mantm o potencial de oxireduo
elevado comparado com os solos normalmente alagados. Sais de ferro e mangans
tambm promovem as condies de oxidao e diminui a produo de sulfeto.
Acmulo de sulfeto pode ser bastante pronunciado em reas salinas ricas em sulfatos,
onde as excrees de plantas podem promover aprecivel reduo do sulfato.
O microrganismo predominante, relacionado com a reduo do sulfato o
Desulfovibrio. Esses microrganismos no formam esporos, so anaerbios obrigatrios
que produzem altas taxas de H 2S a partir de sulfato. a espcie mais encontrada a
Desulfovibrio desulfuricans. Seu pH timo em meio de cultura acima de 5,5, o que
explica a baixa produo de sulfeto em muitos solos cidos. Algumas espcies
conseguem proliferar temperaturas elevadas. Menos comum, mas tambm redutores
de sulfato, so os Desulfotomaculum. Membros desse gnero formam esporos e
podem ser mesfilos ou temfilos.
Desulfovibrio e Desulfotomaculum usam sulfatos e outras formas inorgnicos
de S como aceptor final de eltrons e no o oxignio ou outras formas orgnicas de S.
O doador de eltrons ou fonte de energia para as suas reaes so inmeros
carboidratos, cidos orgnicos e alcois.
Compostos de Enxofre volteis
Esforos para caracterizar o ciclo global e comportamento do S na
atmosfera tem indicado uma atividade da microbiota do solo. Modelos do movimento
do S em uma escala global so designados para quantificar o transporte de
componentes da massa do solo e oceanos para a atmosfera, sua volta (ciclo) e
tambm para identificar as substncias envolvidas.
Os vrios modelos sugerem que mais S volatilizado como resultado da
atividade microbiana do que toda fonte de poluio combinada.
Poluio - SO2
Produto microbiano - H2S
H2S no ar pode ser oxidado a SO2, dessa forma o microrganismo produz
indiretamente maior quantidade de SO2.
Tem sido discutido que a quantidade de H 2S necessrio para o balano do ciclo
global no est presente no ar. Por outro lado; a superfcie da gua - da qual muito do
H2S poderia ser liberado para a atmosfera - so tambm oxidados, ocasionando a
oxidao de H2S antes dele ser volatilizado. Possivelmente dimetil-sulfito (CH 3SCH3)
pode ser o maior produto do metabolismo microbiano na natureza. A cromatografia
gasosa tem mostrado que dimetil-sulfito liberado no solo e decaindo em plantas
perenes, mas tambm outros compostos sulfurosos volteis so liberados (metanotiol
(CH3SH), dimetil dissulfito (CH3SSCH3), metil tioacetato (CH3SCOCH3), etano tiol

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(CHCH2) dietil dissulfito (CH3CH2SSCH2CH3), Carbono dissulfito (CS2), carbonil sufito

(COS)).
No se sabe exatamente qual destes compostos so mais produzidos no solo
embora os melhores candidatos so o dimeti-sulfito (CH3-S-CH3) e H 2S.
Os mesmos metablitos alm de outros tem sido encontrados in vitro em
culturas de microrganismos heterotrficos.
Solos podem tambm remover compostos de S da atmosfera. H 2S reage no solo
por um processo qumico e ento desaparece da fase gasosa. Metanotiol pode
tambm ser removido da atmosfera do solo, e provavelmente tornar-se substrato para
populaes microbianas. A absoro de SO 2 rpida, mas sua remoo do ar no
envolve componentes da microbiota.
Os compostos volteis podem ter um efeito na populao microbiana individual.
Principal interesse no SO 2 na gua. Lquens so marcadamente sensveis a SO 2,
freqentemente inibidos com menos de 0,1 ppm no ar, e tem sido usado como
indicador biolgico da poluio de SO 2. Algas verde-azuladas so mais sensveis que
outras algas, e elas so inibidas por menor nvel de bissulfeto do que microrganismo
heterotrficos.
CICLO DO ENXOFRE (S)
1. Quais os processos envolvidos na transformao do S?
2. Esquematize o ciclo do S.
3. Quais as formas de S encontradas no solo?
4. Quais as formas de S utilizadas pelos microrganismos e pelas plantas?
5. Qual a taxa C:S dominante nos solos?
6. Quais os principais microrganismos envolvidos na oxidao do S inorgnico?
7. que acontece ao pH do solo quando adicionado o S em p?
8. Qual o principal microrganismo relacionado com a reduo do sulfato no solo?
9. Como pode ser explicado a oxidao de S em condies de anaerobiose?
10. Faca uma comparacao entre o ciclo do S e N.

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