13/06/2014

PURIFICAO DE PRODUTOS
BIOTECNOLGICOS

Disciplina: Biotecnologia Farmacutica

Profa.Greiciane G. Paneto

Etapas de um
Processo
de
Purificao

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Etapa do processo

Operaes unitrias

Clarificao

Rompimento de clulas

Tamanho de partculas
Tamanho e densidade de partculas
Tamanho de partculas

Floculao

Hidrofobicidade de partculas

Homegeneizao
Ultra-som
Moagem em moinho de bolas

Cisalhamento
Cisalhamento
Cisalhamento
Hidrlise, solubilizao ou desidratao de
molculas que compem a parede ou a
membrana celular
Solubilidade
Massa molar e raio hidrodinmico de
molculas

Rompimento qumico ou enzimtico

Precipitao

Purificao de baixa resoluo

U Itrafiltrao (membranas)
Extrao em sistemas de duas fases lquidas
Cromatografia de troca-inica
Cromatografia de afinidade (biolgica ou
qumica)
Cromatografia de imunoafinidade

Purificao de alta resoluo

Cromatografia de interao hidrofbica
Cromatografia de excluso molecular
Membranas adsortivas
Cristalizao

Tratamentos finais

Princpio

Filtrao convencional
Centrifugao
Filtrao tangencial (membranas)

Solubilidade, massa molar

Tipo e densidade de carga na superfcie da
biomolcula
Stios especficos da superfcie de uma
protena (adsoro)
Stios especficos da superfcie de uma
protena (adsoro antgeno/anticorpo)
Hidrofobicidade
Massa molar
Massa molar e caractersticas para adsoro
ou stios especficos da superfcie de uma
protena
Solubilidade e caractersticas de equilbrio
lquido-slido

LiofiIizao

Caractersticas de equilbrio lquido-slido

Secagem

Caractersticas de equilbrio lquido-slido

CLARIFICAO
Filtrao: usada quando assepsia no
necessria;
Cetrifugao: sedimentao pela fora da
gravidade.

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Rompimento Celular Microbiano

Rompimento
Celular

Produtos intracelulares tornam o processo de

purificao de biomolculas mais difcil em comparao
com produtos extracelulares devido necessidade do
rompimento

Mtodos para Rompimento: Aplicados aps a

separao e lavagem das clulas.
Clulas animais (possuem apenas membrana),
fcil rompimento com baixa fora de
cisalhamento;

Bactrias, leveduras e outros fungos possuem

paredes rgidas, exigem grande tenses de
cisalhamento para rompimento.

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Forma mais adequada de Rompimento?

Tipo de microrganismo;
Tamanho da clula;
Tolerncia a tenses de cisalhamento;
Necessidade de controle de temperatura;
Gasto de energia.

Parede Celular

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Mtodos de Rompimento Celular

Mecnicos

Homogeneizador de alta presso

Moinho de bolas
Ultrassom

Nomecnicos

Choque osmtico
Congelamento-descongelamento
Aquecimento
Secagem

Qumicos
Enzimticos

lcalis
Solventes
Detergentes
cidos

Lize enzimtica

Mecnico - Homogeneizador a alta

presso

Cavitao
Turbulncia
Cisalhamento

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Mecnico - Homogeneizador a alta

presso
Este tipo de rompimento provoca aumento da
temperatura do meio, por isso necessita de
sistema de refrigerao.
Presses utilizadas podem variar de 5000 a
20000 psi, velocidades de alimentao da
ordem de 180 a 280 m/s e concentraes
celulares de 450 a 750 g/L (massa mida).

Mecnico - Homogeneizador a alta presso

O desempenho pode ser afetado por:

Presso de operao;
Velocidade de alimentao;
Temperatura;
Estado fisiolgico do microrganismo;
Condies de cultivo;
Tipo de clula e sua concentrao.

tamanho das clulas (maior => rompimento mais fcil)

presso (maior => maior eficincia)

nmero de passagens

(mltiplas etapas aumenta o ren-

dimento)

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Mecnico Moinho de Bolas

Consiste na passagem da suspenso celular
por uma cmara de triturao (vertical ou
horizontal) provida de um eixo com discos de
agitao e preenchida com esferas de vidro.
O rompimento ocorre devido fora de
cisalhamento aplicada pelas esferas de vidro
contra a parede celular das clulas.

Mecnico Moinho de Bolas

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Mecnico Ultra-som
O rompimento ocorre quando ondas sonoras
(~20kHz), so convertidas em vibraes em um
meio lquido e causam o fenmeno de
cavitao.
Escala de laboratrio.

Mecnico - Ultrassom

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Rompimentos Mecnicos
Desvantagens:
As elevadas foras de cisalhamento provocadas pelos
rompimentos mecnicos podem destruir organelas
celulares e desnaturar enzimas;
Com o rompimento integral das clulas todo o
contedo intracelular, incluindo cidos nuclicos,
organelas e fragmentos celulares liberado junto com
a molcula-alvo, sendo que o homogeneizado celular
pode conter grande quantidade de contaminantes e
elevada viscosidade.

Produto intracelular mtodos

qumicos de rompimento

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Produto extracelular

Processos cromatogrficos

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(Cromatografia) Filtrao em gel

Cromatografia de afinidade

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Cromatografia de Troca Inica

Eletroforese

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Tratamentos Finais

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