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Farmacologia dos Agentes Antibiticos

e Quimioterpicos Antibacterianos
Reviso dos principais mecanismos de
ao dos frmacos e a resposta
bacteriana

Objetivos deste mdulo

Aps o encerramento, os alunos devero estar

capacitados a compreender os mecanismos de ao

dos agentes antibiticos e quimioterpicos
antibacterianos e a importncia da compreenso do
antibiograma.
Declaro que no h nenhum conflito de interesses
entre o curso e fabricantes de produtos demonstrados
em aula.

CRS 2013

Programa do Mdulo
1. Introduo farmacologia dos agentes antibacterianos
2. Classificao dos frmacos antibacterianos
3. Farmacocintica e farmacodinmica dos agentes antibacterianos
4. Mecanismo de ao dos frmacos antibacterianos
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Frmacos que atuam na parede celular

Frmacos que atuam como inibidores das beta-lactamases
Frmacos que atuam na permeabilidade da membrana celular bacteriana
Frmacos que atuam na sntese protica bacteriana
Frmacos que interferem na replicao do DNA bacteriano
Frmacos que atuam na DNA Girase
Frmacos que atuam na sntese do cido tetraidroflico

5. O antibiograma
1. Conceitos bsicos
1. Concentrao inibitria mnima
2. Escolha dos frmacos
3. PK/PD

CRS 2013

1. Introduo farmacologia
dos agentes antibacterianos
1.a) Revisando a estrutura celular
bacteriana

Caractersticas principais
1.

a)
2.

DNA nico e circular

Replicao
a)

4.

Livre e disperso no citoplasma

Configurao gentica
a)

3.

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.

Material gentico

Fisso binria

DNA Extra-cromossnico
a)

Plasmdios

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Capsula
Outer membrane
Periplasm and Cell wall
Cytoplasmic (inner) membrane
Cytoplasm
Ribosome
Reserve food supplies
Chromosome
Mesosome

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Caractersticas principais
5.

Sntese protica
a)
b)

Ausncia de retculo endoplasmtico

Ribossomos livres no citoplasma
a)

6.

Produo de energia
a.
b.

7.

Subunidades 50S e 30S

Cadeia de transporte de eltrons

Ausncia de mitocndrias

Envelope celular
a.

Membrana plasmtica
i.

b.

Membrana lipoprotica regula transporte

Parede celular
i.

Presente
i.

Traz rigidz
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1. Introduo farmacologia
dos agentes antibacterianos
1.b) Revisando a formao da Parede
Celular Bacteriana

PAREDE CELULAR BACTERIANA:

Desenho esquemtico bsico

CRS 2013

PAREDE CELULAR BACTERIANA:

Foto vs desenho esquemtico

CRS 2013

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11

1. Introduo farmacologia
dos agentes antibacterianos
1.c) Revisando a Colorao de Gram e
compreendendo seu princpio

Quem foi
Hans Christian Joachim Gram?

Mdico bacteriologista e farmacologista dinamarqus nascido

Professor em Copenhagen, pioneiro no estudo sobre a reao em que se submetem bactrias, inicialmente,
colorao por violeta-de-genciana e, em seguida, soluo de lugol. Filho de Frederik Terkel Julius Gram
M.D pela Universidade de Copenhague (1878).
Assistente na universidade e mdico residente no Hospital Municipal de Copenhague, o Kommunehospitalet, e
defendeu sua tese de doutorado (1882).
Viajou pela Europa (1883-1885), estudando farmacologia e bacteriologia em Strassburg, Marburg e Berlim.
Habilitou-se em farmacologia na Universidade de Copenhague, sendo Privatdozent (1886-1889).
Tornou-se (1891) lecturer de farmacologia, e depois professor.
Aposentou-se (1900) da farmacologia para se tornar professor ordinrio de patologia e terapia (1900-1923),
quando se aposentou da universidade e passou a estudar histria da medicina.
Publicou os quatro volumes de Klinisk-therapeutiske Forelsninger (1902-1909) e morreu em Copenhagen.
Desenvolveu o mtodo de colorao de bactrias em 1884

CRS 2013

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13

Descrio do Mtodo de Gram

Consiste no tratamento sucessivo de um esfregao bacteriano,

fixado pelo calor, com os reagentes cristal violeta, iodo, etanolacetona e fucsina bsica.
Baseado na capacidade das paredes celulares de bactrias
Gram-positivas de reterem o corante cristal violeta durante um
tratamento com etanol-acetona enquanto que as paredes
celulares de bactrias Gram-negativas no o fazem.
So classificadas de gram-positivas as que retm, a despeito de
tratamento pelo lcool , a colorao adquirida, e de gramnegativas as que no a conservam.

CRS 2013

Colorao de Gram:
Princpio da Tcnica

CRS 2013

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Gram 1: Violeta 60
- Cora peptidoglicano e protoplasma

CRS 2013

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Gram 2: Lugol 60
- Agente fixador (complexo corante/iodo)

CRS 2013

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17

Aps formar complexo

CRS 2013

Gram 3: lcool Acetona 10

- Agente descorante

gua Corrente...

CRS 2013

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19

Aps gua corrente

Dissolve estrutura lipdica da membrana externa das Gram-negativas, removendo o complexo cristal violeta-iodo.
Provoca fechamento dos espaos do peptidoglicano por desidratao da parede celular das Gram-negativas,
retendo o complexo e mantendo a colorao por impermeabilidade.

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Gram 4: Safranina 30
- Cora poro lipdica (membrana)

CRS 2013

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21

Ao final...

CRS 2013

22

Ao microscpio:
E. coli + S. aureus

CRS 2013

Ao final...

23

Bactrias velhas, parede agredida, etc.

CRS 2013

24

Ao microscpio:
E. coli + S. aureus

CRS 2013

25

1. Introduo farmacologia
dos agentes antibacterianos
1.d) Formao da Parede Celular
bacteriana

PAREDE CELULAR BACTERIANA:

Desenho esquemtico molecular

Gram-positivas

Gram-negativas

NAM= cido N-Acetil-Murmico

NAG = N-Acetil-Glucosamida

CRS 2013

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27

Parede celular: composio

Estrutura rgida que recobre a membrana citoplasmtica e

confere forma s bactrias.

Constituda por:

cido diaminopimrico (DPA)

cido murmico
cido teicico
aminocidos, carboidratos e lipdeos.
formam substncias polimricas complexas

Peptideoglicano (tambm chamada de mucopeptdeo ou

murena) forma a estrutura rgida da parede.

Protege a clula, mantm a presso osmtica intrabacteriana,
impedindo o rompimento da clula devido entrada de gua
Funciona como suporte de antgenos somticos bacterianos.

CRS 2013

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Formao da parede celular

Ocorre em trs fases principais.

1) Sntese de monmeros de murena a partir de aminocidos e

de unidades de acares;
Intracelular, ocorre no citoplasma

2) Polimerizao dos monmeros de murena em polmeros de

peptidoglicano lineares;
Mediada por lipdios e ocorre na membrana citoplasmtica,

3) Ligao cruzada dos polmeros em redes bidimensionais e

redes tridimensionais
Extracelular, ocorre no espao periplasmtico entre a membrana
citoplasmtica e a camada de murena. (Se a bactria no tivesse
parede celular, no existiria o espao periplasmtico.

CRS 2013

29

1- Formao do monmero de
Murena
2

1.
2.
3.
4.
5.
6.

G-1-P acetilada e conjugada a nucleotdeo de difisfato de uridina (UDP) formando Uridina Difosfato Nacetilglicosamina (UDP-NAG)
Adio de Fosfoenolpiruvato (PEP) pela enol-piruvato-transferase (MurA)
Reduo do produto pela MurB
Formao do Uridina Difosfato N-cido Acetilmurmico (UDP-NAM)
As enzimas MurC, MurD e MurE adicionam sequencialmente os aminocidos L-alanina (A), D-glutamato (dE)
e L-Lisina (K) ao UDP-NAM.
Alanina Racemase converte a L-alanina em D-alaninia, e a D-ala sintetase forma o dipeptdeo d-Ala-d-Ala, que
adicionado ao tripeptdeo A-dE-K pela MurF, resultando em uma molcula de UDP-NAM ligada a cinco
aminocidos (Peptdeo de Park).
CRS 2013

2- Polimerizao dos monmeros de

Murena

1.
2.
3.
4.

30

Complexo NAM-pentapeptdeo transferido do UDP para o carreador de peptdeos (Bactoprenol) pela enzima MraY. NAG
adicionada pela MurG.
Aminocidos so adicionados a partir do tRNA.
Complexo BP-Glicano transportado ao espao periplasmtico
Transglucosidases unem monmeros de murena
CRS 2013

31

3- Ligao cruzada

CRS 2013

32

Aceptor
N-acetilglucosamina-muramico-pantapeptdeo

Polimerizao
Transglicosidades
Polmeros de N-acetil-glicosamina-muramico-peptdeo

Transpeptidao
Transpeptidases
Carboxipeptidases
Endopeptidases
PEPTIDOGLICANO

CRS 2013

cido N-acetil murmico + Aminocidos

cido Murmico pentapeptdeo

N-acetil glicosamina

Polmeros de N-acetil-glicosamina-muramico-peptdeo

LEGENDA
N-Acetilglucosamina (NAG)
cido N-Acetilmurmico (NAM)
Aminocidos de cadeia lateral
Transpeptidase
Ligao peptdica

CRS 2013

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Polmeros de N-acetil-glicosamina-muramico-peptdeo

Transpeptidase

Peptidoglicano

LEGENDA
N-Acetilglucosamina (NAG)
cido N-Acetilmurmico (NAM)
Aminocidos de cadeia lateral
Transpeptidase
Ligao peptdica

CRS 2013

34

35

36

1. Introduo farmacologia
dos agentes antibacterianos
1.e) PBP
1.f) Anel betalactmico

1.e) PBPs

37

Penicillin Binding Proteins

1972 Suginaka, Blumberg e Strominger
Receptor de ao dos beta-lactmicos
Situadas na face externa da membrana

citoplasmtica
Atividades enzimticas:
Transpeptidases
Carboxipeptidases
Endopeptidases

CRS 2013

38

Fundamentais na 3 etapa da sntese do

peptidoglicano
Diviso, formao dos septos e alongamento
Novas molculas
Incorporao ao pr-existente

Dividem-se em 7 fraes:
Peso Molecular

As principais so:
1A, 1Bs, 2 e 3 (pequena quantidade)
1C : Adicional e raramente encontrada em E. coli

CRS 2013

39

PBP 1A e 1Bs
Transpeptidase e transglicosidase
Alongamento celular
1Bs:
+ importante na formao do peptidoglicano
Alongamento e diviso
Penicilinas e Cefalosporinas

1A:
Substituta da 1Bs em mutantes carentes
Penicilinas, Cefalosporinas, Amidinopenicilinas,
Aztreonam, Tienamicina e cido Clavulnico

CRS 2013

40

PBP 2
Transpeptidase e Carboxipeptidase
Conformao e formato BGN
Regula formao da cadeia do mucopeptdeo
Participa do alongamento introduo do
peptidoglicano no local adequado

Responsvel pela manuteno da forma

Na sua ausncia ou inibio:
Novos segmentos de mucopeptdeo formao de
septos grandes clulas redondas lise

Amidinopenicilinas, Tienamicina, cido Clavulnico e

Cefotaxima

CRS 2013

41

PBP 3
Carboxipeptidase e Transglicosidase
Responsvel pela formao do

peptidoglicano septo multiplicao

Na sua ausncia ou inibio:
Continuao do crescimento celular formao de
longos filamentos sem diviso septal lise

Penicilinas e Cefalosporinas

CRS 2013

42

1.f) Anel Beta-lactmico

Anel betalactmico

Estrutura anloga

Stio de ao
Transpeptidases

C
N

CRS 2013

C
C

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Programa do Mdulo
1. Introduo farmacologia dos agentes antibacterianos
2. Classificao dos frmacos antibacterianos
3. Farmacocintica e farmacodinmica dos agentes antibacterianos
4. Mecanismo de ao dos frmacos antibacterianos
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Frmacos que atuam na parede celular

Frmacos que atuam como inibidores das beta-lactamases
Frmacos que atuam na permeabilidade da membrana celular bacteriana
Frmacos que atuam na sntese protica bacteriana
Frmacos que interferem na replicao do DNA bacteriano
Frmacos que atuam na DNA Girase
Frmacos que atuam na sntese do cido tetraidroflico

5. O antibiograma
1. Conceitos bsicos
1. Concentrao inibitria mnima
2. Escolha dos frmacos
3. PK/PD

CRS 2013

44

2. Classificao dos
Frmacos Antibacterianos

45

2.1- Por classe

Antibiticos
Quimioterpicos

CRS 2013

46

Agentes Antibiticos
So aqueles obtidos de forma natural, por extrao.
So posteriormente purificados e liofilizados

Penicillium notatum
CRS 2013

Penicilina

47

Agentes Quimioterpicos
So aqueles obtidos de forma artificial,

quimicamente.
So posteriormente liofilizados

Vancomicina
CRS 2013

48

2.2. Por ao
Bactericidas
Bacteriostticos

CRS 2013

49

a. Bactericidas
So frmacos que atuam nas bactrias, as

destruindo irreversivelmente, mesmo aps a

queda das doses teraputicas.

cido nalidxico
CRS 2013

50

b. Bacteriostticos
So frmacos que atuam bloqueando a replicao

bacteriana de forma reversvel, sendo que estas

voltam a se replicar aps a queda da CIM.

Eritromicina

Streptomyces erythreus

CRS 2013

51

2.3. Classificao Qumica

Penicilinas e combinaes

Quinolonas

Cefalosporinas

Tetraciclinas

Monobactmicos

Sulfonamidas

Carbapenmicos

Glicopeptdeos

Macroldeos

Aminoglicosdeos
Outros
CRS 2013

52

2.4. Segundo Espectro de Ao

Amplo Espectro
Espectro Reduzido

CRS 2013

53

2.5 Segundo Efeito Causado

Interferem na Sntese da Parede Celular
Interferem na Permeabilidade da membrana

citoplasmtica.
Interferem na Sntese Protica
Interferem na Replicao do DNA
Inibem a Topoisomerase II (DNA girase)

CRS 2013

54

2.6 Segundo PK/PD

Classificao segundo a relao entre

farmacocintica e farmacodinmica:
1. Concentrao-dependentes:
Aumentando a concentrao (Cmax) acima da
concentrao mnima necessria (CIM) para inibir o
crescimento bacteriano (Cmax/MIC) maximiza a
erradicao bacteriana.
Em doses padronizadas os drogas concentraodependentes so: Aminoglicosdeos, Fluoroquinolonas,
Metronidazol e Colistina.

CRS 2013

55

2.6 Segundo PK/PD

Classificao segundo a relao entre

farmacocintica e farmacodinmica:
Tempo-dependentes:

As drogas exibem atividade bactericida quando a

concentrao livre da droga permanece acima da
MIC (f T>MIC) durante determinado tempo.
Beta-lactams (penicillinas, cefalosporinas,
monobactamicos, carbapenemicos);
Lincosaminas (clindamicina);
Macrolideos (eritromicina, clarithromycin);
Azalideos / Ketolideos (azitromicina, telitromicina);
Glicopeptides (vancomicina);
Oxazolidinonas (linezolida)

CRS 2013

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Programa do Mdulo
1. Introduo farmacologia dos agentes antibacterianos
2. Classificao dos frmacos antibacterianos
3. Farmacocintica e farmacodinmica dos agentes antibacterianos
4. Mecanismo de ao dos frmacos antibacterianos
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Frmacos que atuam na parede celular

Frmacos que atuam como inibidores das beta-lactamases
Frmacos que atuam na permeabilidade da membrana celular bacteriana
Frmacos que atuam na sntese protica bacteriana
Frmacos que interferem na replicao do DNA bacteriano
Frmacos que atuam na DNA Girase
Frmacos que atuam na sntese do cido tetraidroflico

5. O antibiograma
1. Conceitos bsicos
1. Concentrao inibitria mnima
2. Escolha dos frmacos
3. PK/PD

CRS 2013

57

Farmacocintica (PK) - Conceito

Farmacocintica: TEMPO

Frmaco administrado
Absoro
Distribuio
Metabolismo
Biotransformao
Eliminao

CRS 2013

58

Farmacocintica (PK) - Fatores

Necessrio compreender:

Fatores fsico-qumicos envolvidos no

transporte dos frmacos atravs das
membranas
Absoro, biodisponibilidade e vias de
administrao
Distribuio nos tecidos
Excreo

CRS 2013

59

PK

CRS 2013

60

Farmacodinmica (PD) - Conceito

Farmacodinmica: AO
Relao entre efeitos farmacolgicos e

a concentrao do frmaco nos tecidos

Plasma, pulmes, etc
A complexidade dos mecanismos de

ao

CRS 2013

61

Relao PK/PD
TEMPO x AO
Perodo de ao teraputica dos

frmacos no organismo
Concentrao Inibitria Mnima (MIC)
Menor concentrao do frmaco capaz de
inibir o crescimento bacteriano

CRS 2013

62

Concentrao Inibitria Mnima MIC

Determina-se atravs de tcnicas

laboratoriais
Diluio seriada em caldo
Microdiluio em caldo
Difuso em gar
Correlao entre dimetro do halo e a MIC
Disco-difuso em gar

Tiras graduadas
E Test (BioMerieux)
M.I.C.E. (Oxoid)

CRS 2013

63

MIC Diluio em caldo

CRS 2013

64

MIC Microdiluio em caldo

CRS 2013

65

MIC Microdiluio em caldo

CRS 2013

66

Disco-difuso em gar

CRS 2013

67

Disco-difuso em gar

CRS 2013

68

Disco-difuso em gar

CRS 2013

69

Halo de sensibilidade vs. CIM polmico

CRS 2013

70

Difuso quantitativa em gar

CRS 2013

71

CRS 2013

Interpretando a Relao FC/FD

(PK/PD)

CRS 2013

72

Farmacocintica e
Farmacodinmica PK/PD
PK/PD

Mais de 2600 referncias no Medline

Torna-se impossvel antibioticoterapia de
excelncia sem avaliao da relao PK/PD
PK: Farmacocintica
Relao entre tempo e dose

PD: Farmacodinmica
Relao entre dose e efeito

CRS 2013

73

74

PK/PD
EMEA jan 1999 e jul 2000:

Dose inadequada importante razo para

risco de resistncia
Recomendao de doses baseada em
PK/PD so consideradas ideais

CRS 2013

75

O antibitico no plasma
[ ] srica variando com passar do

tempo
Pico

rea abaixo
da curva (AUC)
Tempo
e concentrao ZERO
CRS 2013

depresso

76

PK/PD
Pico / Queda
AUC / Tempo

>

MIC

Pico

depresso

CRS 2013

77

PK/PD
Parmetros de eficcia:

Concentrao
Pico / MIC

Tempo acima da MIC

Efeitos ps-antibiticos
Efeitos sub-MIC
Efeitos de exposio sub-MIC
Efeitos de resposta celular

CRS 2013

78

Tempo
dependente

Concentrao
do Antibiotico

Concentrao
do Antibiotico

PK/PD e os atbs
Concentrao
-dependente

CIM

CIM

dose

Tempo

dose
CRS 2013

dose

Tempo

dose

79

Santos Filho, L. et al. In: Brazilian Journal of Microbiology (2007) 38:183-193

CRS 2013

80

PK/PD e os atbs
Tempo dependente, pequeno efeito de concentrao e mnimo

efeito persistente:
Beta-Lactmicos

Penicilinas
Cefalosporinas
Carbapenems
Monobactams

Clindamicina
Oxazolidinona
Macroldeos

Tempo > MIC

Otimizar a durao de exposio
droga

CRS 2013

81

S = 8 g/ml
(CLSI)

CRS 2013

82

Tringulos cheios, 2 g a cada 8 h; tringulos abertos, 1 g a cada

4h; crculos cheios, 1 g a cada 6h; crculos abertos, 2 g a cada 12h; e quadrados
cheios, 1 g a cada 12 h.

Adap. by Ross et al. J Antimicrob Chemother. 2006 Nov;58(5):987-93.

CRS 2013

83

PK/PD e os atbs
Tempo dependente, prolongado efeito persistente (AUC):

Glicopeptdeos
Tetraciclinas
Azitromicina
Streptograminas
Fluconazol
AUC / MIC
Otimizar a oferta de droga

CRS 2013

84

Concentrao dependente, prolongado efeito persistente

(AUC):
Aminoglicosdeos
Fluorquinolonas
Daptomicina
Ketoldeos
Anfoterincina B

Pico e AUC / MIC

Otimizar a oferta e concentrao
de droga
Ex: para Fl-Quinolonas [pico]/MIC > 10

CRS 2013

85

Dose dependente:

AMINOGLICOSDEOS*
FLUOROQUINOLONAS*
AZITROMICINA*
METRONIDAZOL*
QUETOLDEOS*
O
TETRACICLINAS
O
ESTREPTOGRAMINAS
O
CLINDAMICINA
O
OXAZOLIDINONAS
O
MACROLDEOS

CRS 2013

86

MIC

CRS 2013