Quality by Design

UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO
CENTRO DE CINCIAS DA SADE

DEPARTAMENTO DE CINCIAS FARMACUTICAS
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIAS FARMACUTICAS
APLICAO DE QUALITY BY DESIGN NO ESTUDO DE PRFORMULAO FARMACUTICA DO SULFATO DE

HIDROXICLOROQUINA
LESLIE RAPHAEL DE MOURA FERRAZ
Recife
2014

APLICAO DE QUALITY BY DESIGN NO ESTUDO DE PRFORMULAO FARMACUTICA DO SULFATO DE

HIDROXICLOROQUINA
Dissertao submetida ao Programa de Ps-Graduao

em Cincias Farmacuticas da Universidade Federal de
Pernambuco, como requisito parcial para a obteno do
grau de Mestre em Cincias Farmacuticas.
Orientador: Prof. Dr. Pedro Jos Rolim Neto
Co-orientador: Prof. Dr. Larissa Arajo Rolim
Recife
2014
APLICAO DE QUALITY BY DESIGN NO ESTUDO DE PR-FORMULAO

FARMACUTICA DO SULFATO DE HIDROXICLOROQUINA
Dissertao apresentada ao Programa de PsGraduao em Cincias Farmacuticas da

Universidade Federal de Pernambuco, como
requisito parcial para a obteno do ttulo de
Mestre em Cincias Farmacuticas.
Aprovado em: 17/02/2014.
BANCA EXAMINADORA
___________________________________________
Prof. Dr. Pedro Jos Rolim Neto (Orientador)
Universidade Federal de Pernambuco
_____________________________________________
Prof. Dr. Mnica Felts de La Roca Soares (Examinadora Interna)
________________________________________________________
Prof. Dr. Rosali Maria Ferreira da Silva (Examinadora Externa)

REITOR
Prof. Dr. Ansio Brasileiro de Freitas Dourado
VICE-REITOR
Prof. Dr. Silvio Romero de Barros Marques
PRO-REITOR PARA ASSUNTOS DE PESQUISA E PS-GRADUAO
Prof. Dr. Francisco de Souza Ramos
DIRETOR DO CENTRO DE CINCIAS DA SADE
Prof. Dr. Nicodemos Teles de Pontes Filho
VICE-DIRETOR DO CENTRO DE CINCIAS DA SADE
Prof. Dr. Vnia Pinheiro Ramos
COORDENADOR DO PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIAS
FARMACUTICAS
Prof. Dr. Almir Gonalves Wanderley
VICE-COORDENADOR DO PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIAS
FARMACUTICAS
Prof. Dr. Ana Cristina Lima Leite
queles que, mesmo depois de tudo, nunca deixaram de acreditar em mim.
AGRADECIMENTOS
A Deus que, de alguma forma, arquitetou muito bem a trajetria da minha vida e me
fez um ser humano mais forte, confiante e merecedor de crdito. Obrigado por me mostrar o
caminho e as pessoas certas.
Ao meu orientador Prof. Dr. Pedro Rolim, por me formar no s como profissional,
mas como pessoa tambm. Sou bastante grato por tudo e fico extremamente satisfeito em
admitir que o seu estilo de ensinar , de fato, vlido e proveitoso. Sua integridade,
comprometimento e profissionalismo servem de inspirao. A prova disso que quando
algum pergunta: -Quem o teu orientador?, eu, cheio de orgulho, respondo: -Prof. Pedro
Rolim.
A minha co-orientadora Prof. Dr. Larissa Rolim, que elevou o sentido da palavra
orientao ao mais alto nvel possvel. Aprendi contigo o que no se aprende em aulas e
livros. Aprendi o essencial. Muitssimo obrigado por se importar, por estar sempre por perto
(mesmo que no fisicamente), por passar uma mo na minha cabea e com a outra me dar
uma tapa da realidade. Voc , sem sombra de dvidas, o exemplo de profissional que um
dia almejo ser.
A minha irm Lilian Raffaelle por sempre ter sido minha f numero 1. Por se dar por
completo sem esperar nada em troca. Por ser transparente, concisa e incentivadora. Por ter
comprado uma batalha por mim, por virar s costas aos outros s com o intuito de me ajudar.
Te amo.
quela parcela da minha famlia que ainda posso chamar de famlia. Mainha, por
tentar. Por viver tentando. Por ter sempre acreditado em mim. Por ter sido uma batalhadora
desde que eu me entendo por gente. Por ter me criado e me formado filho, homem e cidado.
Eu devo tudo a voc e, por isso, tudo que eu fao pra voc. Tia Zilda e Padrinho por
terem se tornado meus pai e me quando os meus prprios se demonstraram despreparados
para s-lo. Aos meu primos, em especial Edilton Jr., Elviva Hatagami, Bruno Beltro,
Janana e Anglica Ferraz e Fabola Teixeira, pela torcida e fraternidade.
A Arthur Perrier, por ser um reflexo do que eu quero/preciso ser. Por se tornar um
alicerce. Por ser dedicado e saber o que dizer e quando. Por ser meu cmplice e melhor
amigo.
A Loki, por todo o trabalho que me d.
Aos meus amigos, eternos incentivadores, em especial Adryelle Lins, Jorge

Eustquio, Gustavo Siqueira, Victor Sales, Tobias Neto, Renan Rubens, Messias Victor,
Marcondes Bezerra, Matheus ngelos, James Almeida e a todos os meus Farmaloucos.
Ao Laboratrio de Tecnologia dos Medicamentos, minha segunda casa, pela
oportunidade de realizar esse trabalho e por me proporcionar um ambiente de trabalho
confortvel, digno e cheio de harmonia.
minha equipe de trabalho, em especial Fabiana Licia que me ensinou o b-a-b
do que ser um pesquisador, minha eterna Mestra; e a Ricardo Maia-Jr., meu incansvel
aluno de iniciao cientfica, por ser to prestativo e aguentar meus dias de co.
Salvana Costa, que se tornou uma parceira. Obrigado por se preocupar, por ser to
pura em um meio to desgastante e competitivo, pelos almoos e caronas, pela ajuda no
supino, pela certeza que eu tenho de que, durante o expediente do trabalho, eu tenho risadas
garantidas. sempre com muita satisfao que eu cito: COSTA et al., 2013). Cybelly
Marques por conversar comigo por 2 minutos e me entender, conseguindo tirar de mim
mesmo o que eu no queria dizer pra ningum. Por todo o apoio e fora, obrigado.
A famlia no sentido mais denotativo da palavra LTM: Lariza Darlene, Jos
Loureno, Cristvo Rodrigues, Danilo Fontes, Pablo Ataide, Graziella Marques, Rosali
Silva, Keyla Emanuelle, Isabela Amariz, Caio Csar, Magaly Lyra, Dbora Dolores,
Talita Atanzio, Tarcyla Andrade e aos professores Jos Lamartine, Mnica Felts e
Miracy Muniz e suas alunas Amanda Quintas e Camila Melo.
Fundao de Amparo Cincia e Tecnologia de Pernambuco (FACEPE) que,
atravs do programa institucional de bolsas de Ps-graduao, possibilitou a realizao do
meu trabalho.
Ao Programa de Ps-Graduao em Cincias Farmacuticas, em especial a Nerilin
Trajano, por resolver minha vida em 1 minuto e meio; e ao Programa de Ps-Graduao em
Inovao Teraputica, em especial a Paulo Germano.
bibliotecria Mnica Ucha, pela pacincia e auxlio concedidos no ato da
deposio legal da dissertao.
Ao Departamento de Fsica, Departamento de Engenharia Qumica e ao CETENE pela
parceria indispensvel para a realizao deste trabalho.
E, finalmente, a todos os demais que contriburam direta ou indiretamente para a
realizao deste trabalho.
A todos vocs, o meu sincero muito obrigado!
RESUMO
Desenvolvido inicialmente como agente antimalrico, o sulfato de hidroxicloroquina (HCQ)
frequentemente utilizado como frmaco antirreumtico de ao lenta no tratamento de
desordens de tecido conectivo. Apesar de ser bastante conhecido na prtica clnica, muito
pouco sabido sobre as propriedades fsico-qumicas do sulfato de HCQ no mbito da
tecnologia farmacutica. O objetivo do presente estudo foi realizar estudo de pr-formulao
com o sulfato de HCQ utilizando o conceito de Quality by Desing (QbD), como etapa
limitante para o desenvolvimento de formas farmacuticas. A caracterizao da matria-prima
foi realizada atravs de diferentes tcnicas analticas, a fim de gerar robusta carta de
identidade do frmaco. Devido ausncia de monografia especfica no compndio oficial
brasileiro, foram desenvolvidos/otimizados dois mtodos para doseamento do frmaco: o
primeiro, utilizando espectroscopia por absoro na regio do ultravioleta, seguido de
validao e, o segundo, utilizando a cromatografia lquida de alta eficincia. Para evidenciar o
comportamento trmico do sulfato de HCQ frente a uma mistura dos excipientes, foram
utilizadas as tcnicas de anlise trmica e clculos dos parmetros cinticos. A
compatibilidade do frmaco-excipiente foi avaliada atravs de calorimetria exploratria
diferencial, seguida de anlises complementares. A etapa inicial de caracterizao do sulfato
de HCQ forneceu especificaes fsico-qumicas compondo robusta carta de identidade do
frmaco, essencial para o desenvolvimento do trabalho. Os mtodos analticos demonstraramse satisfatrios para todos os critrios preconizados pelas normativas, sendo mais simples
rpidos e prticos para a rotina laboratorial. Atravs da obteno de cinticas de degradao
dinmica e isotrmica, a matria-prima mostrou um prazo de validade estimado de 622 dias,
enquanto que a mistura de excipientes avaliada, evidenciou uma interao positiva dos
excipientes, sendo observada pelo prolongamento do prazo de validade, estimado em 790
dias. Foi observada incompatibilidade entre o frmaco e o glicolato sdico e a lactose. O
presente trabalho apresentou informaes relevantes sobre a natureza fsico-qumica do
frmaco sulfato de HCQ e forneceu subsdios para desenvolvimento de formas farmacuticas
que o utilizem como insumo farmacutico ativo. Os resultados foram utilizados na
padronizao de parmetros de qualidade para o setor de produo e controle de qualidade de
medicamentos.
Palavras-chave: Hidroxicloroquina. Doenas Reumticas. Termogravimetria. Varredura
Diferencial de Calorimetria.
ABSTRACT
Developed originally as an antimalarial agent, the hydroxychloroquine (HCQ) sulfate is often
used as a slow-acting anti-rheumatic drug in treating of disorders of connective tissue.
Although it is well known in clinical practice, very little is known about the physicochemical
properties of HCQ sulfate within the pharmaceutical technology. Therefore, the aim of this
work was to perform a pre-formulation study with HCQ sulfate using the concept of Quality
by Desing (QbD) on the development of dosage forms. The characterization of the raw
material took place by means of different techniques, to generate robust identity card of the
drug. Due to the absence of specific monograph on Brazilian official compendium, were
developed/optimized two methods for quantification of the drug: the first, using absorption
spectroscopy in the ultraviolet region with further validation, and the second, using high
performance liquid chromatography efficiency. The drug-excipient compatibility was
evaluated by differential scanning calorimetry, followed by additional analyzes. To
demonstrate the thermal behavior of HCQ sulfate front of a mixture of excipients, thermal
analysis techniques and calculation of the kinetic parameters were used. The initial step in the
characterization of HCQ sulfate provided physicochemical specifications composing robust
identity card of the drug, essential step for the development of the work. The analytical
methods have shown to be satisfactory for all criteria established by regulations, being more
simple, fast and practical for routine laboratory. By obtaining dynamic and isothermal
degradation kinetics, the raw material showed the estimated validity of 622 days, whereas the
mixture of excipients evaluated, showed a positive interaction of excipients, being observed
by the extension of the validity period, estimated for 790 days. Incompatibility between the
drug and sodium glycollate and lactose was observed. This paper presents relevant
information on the physicochemical nature of the drug hydroxychloroquine sulfate and
provided subsidies for development of dosage forms that use it as an active pharmaceutical
ingredient. The results were used in the standardization of quality parameters for the sector of
production and quality control of drugs.
Keywords: Hydroxychloroquine. Rheumatic Heart Disease. Thermogravimetry. Calorimetry
Differential Scanning.
LISTA DE FIGURAS
Figura 1. Estrutura qumica da hidroxicloroquina base livre com a enumerao dos carbonos.
.................................................................................................................................................. 31
Figura 2. Acometimento da artrite reumatoide sobre a articulao das mos .......................... 35
Figura 3. Fluxograma do algoritmo para o tratamento da artrite reumatoide (MOTA et al.,
2011). ........................................................................................................................................ 42
Figura 4. Retinografia a cores: Mcula em olho de boi (SILVA & SILVA, 2009). ................ 54
Figura 5. Esquema representativo da metodologia de hidrlise degradativa. .......................... 64
Figura 6. Esquema representativo da metodologia de oxidao degradativa. .......................... 64
Figura 7. Estruturas da hidroxicloroquina, suas impurezas e produtos de degradao (adaptado
de Saini & Bansal, 2013). ......................................................................................................... 67
Figura 8. Provvel rota degradativa do sulfato de hidroxicloroquina. ..................................... 67
Figura 9. Curvas tpicas dos principais mtodos termogravimtricos: (a) isotrmico; (b) Quase
isotrmico e (c) dinmico. ........................................................................................................ 69
Figura 10. Stios de formao de diasteroismeros do sulfato de hidroxicloroquina............... 72
Figura 11. rvore decisria para execuo do estudo de pr-formulao do sulfato de
hidroxicloroquina. .................................................................................................................... 80
Figura 12. Fluxograma para execuo do estudo de compatibilidade. ..................................... 94
Figura 13. (a) Espectro de absoro na regio do infravermelho e (b) Espectro de absoro na
regio do ultravioleta do sulfato de hidroxicloroquina ........................................................... 101
Figura 14. Espectro de Raman do sulfato de HCQ................................................................. 102

Figura 15. Espectro de massa da HCQ e estrutura qumica da hidroxicloroquina base livre
com enumerao de ................................................................................................................ 104
Figura 16. Comportamento higroscpico do frmaco sulfato de hidroxicloroquina em
diferentes condies de umidade relativa do ar. ..................................................................... 106
Figura 17. a) Capilares utilizados no fusimetro; b) Curva DSC do sulfato de
hidroxicloroquina. .................................................................................................................. 108
Figura 18. Difratograma de raios-X do sulfato de hidroxicloroquina .................................... 109
Figura 19. Micrografias de varredura do sulfato de hidroxicloroquina com aumentos de 300 e
750 vezes. ............................................................................................................................... 109
Figura 20. Curva TG/DTG do sulfato de hidroxicloroquina. ................................................. 110
Figura 21. Curva TG/DTG do sulfato de hidroxicloroquina ( = 40 /min) .......................... 111
Figura 22. a) Repartio granulomtrica; (b) tamanho mdio de partcula do sulfato de
hidroxicloroquina. .................................................................................................................. 115
Figura 23. Grficos de superfcie-resposta correlacionando o fator de cauda do pico resposta
da HCQ ao fluxo e composio da fase mvel bem como a temperatura da coluna
cromatogrfica. ....................................................................................................................... 118
Figura 24. Espectro de absoro na regio do ultravioleta do sulfato de hidroxicloroquina. 120
Figura 25. Grfico de Paretto ................................................................................................. 123
Figura 26. Varreduras espectrofotomtricas da HCQ isolada, contaminada com excipientes e
da forma farmacutica comprimido Plaquinol. ................................................................... 124
Figura 27. a) Grfico de regresso linear do parmetro linearidade, valor de r2 e equao da

reta b) Respectivo grfico de disperso .................................................................................. 126
Figura 28. Comparao entre o sulfato de hidroxicloroquina e o seu resduo aps ser
submetido condio isotermal na temperatura de 300C: a) Espectro de infravermelho e b)
Difrao de raios-X. ............................................................................................................... 130
Figura 29. DSC-fotovisual do sulfato de hidroxicloroquina. ................................................. 131
Figura 30. Pirograma do sulfato de HCQ (temperatura de 300C) ........................................ 131
Figura 31. Curvas TG do sulfato de hidroxicloroquina obtidas a partir de razes de
aquecimento crescentes (2,5, 5, 10, 20 e 40C/min) e associao com o grfico de Ozawa. 134
Figura 32. Plotagem do grfico G(x) vs. Tempo Reduzido (min) para uma reao de 1 ordem
e os valores de energia de ativao (Ea) e fator de frequncia (A). ....................................... 135
Figura 33. Curvas isotrmicas do sulfato de hidroxicloroquina em diferentes temperaturas
mantidas constantes em atmosfera de nitrognio (100 mL.min-1).......................................... 137
Figura 34. Grfico de Arrhenius (ln t vs. 1.K-1) para a decomposio trmica do sulfato de
hidroxicloroquina matria-prima. ........................................................................................... 138
Figura 35. Curva DSC, TG e DTG do sulfato de hidroxicloroquina (=10C.min-1) ............ 140
Figura 36. DSC-fotovisual do comprimido Plaquinol base do sulfato de hidroxicloroquina.
................................................................................................................................................ 141
Figura 37. Plotagem do grfico G(x) vs. Tempo Reduzido (min) para uma reao de 1 ordem
e os valores de energia de ativao (Ea) e fator de frequncia (A). ....................................... 142
Figura 38. Curvas isotrmicas do sulfato de hidroxicloroquina na forma farmacutica
comprimido em diferentes temperaturas mantidas constantes em atmosfera de nitrognio (100
mL.min-1). .............................................................................................................................. 143
Figura 39. Grfico de Arrhenius (ln t vs. 1.K-1) para a decomposio trmica do sulfato de
hidroxicloroquina na forma farmacutica............................................................................... 144
Figura 40. Espectros de infravermelho do sulfato de hidroxicloroquina e excipientes isolados
e das misturas binrias do frmaco com a lactose e o glicolato de amido sdico. ................. 149
Figura 41. Difratogramas do sulfato de hidroxicloroquina e excipientes isolados e das
misturas binrias do frmaco com a lactose e o glicolato de amido sdico. .......................... 151
LISTA DE TABELAS
Tabela 1. Reviso sistemtica de evidncia da eficcia do sulfato de hidroxicloroquina no
tratamento da artrite reumatoide e lpus eritematoso (adaptado de Olsen, 2013). .................. 33
Tabela 2. Diagnstico diferencial das artrites (adaptado de MOTA et al., 2011). ................... 37
Tabela 3. Novos critrios classificatrios para artrite reumatoide (adaptado de MOTA et al.,
2011; ALEHATA et al., 2010). ................................................................................................ 39
Tabela 4. Limites dos produtos de degradao expressos de acordo com a porcentagem de
frmaco. .................................................................................................................................... 65
Tabela 5. Organizao do planejamento fatorial 22 .................................................................. 89
Tabela 6. Correlao entre as bandas, tipos de vibrao da ligao e seus respectivos grupos
funcionais, obtido do espectrograma de infravermelho do sulfato de hidroxicloroquina. ..... 100
Tabela 7. Deslocamentos qumicos de
13
C e 1H para o sulfato de HCQ dissolvido em gua
deuterada (D2O) ...................................................................................................................... 102

Tabela 8. Fragmentos da hidroxicloroquina base livre obtidos atravs de +ESI-MS2. .......... 104
Tabela 9. Solubilidade do sulfato de hidroxicloroquina em diferentes solventes e pHs. ...... 105
Tabela 10. Resultados experimentais dos solventes onde o sulfato de hidroxicloroquina se
apresentou pouco solvel........................................................................................................ 112
Tabela 11. Porcentagem de sulfato de hidroxicloroquina dissolvida em solues aquosas em
diferentes pHs........................................................................................................................ 112
Tabela 12. Eficincia de dissoluo para o sulfato de HCQ nos tempos 5 e 30 minutos. ...... 113
Tabela 13. Parmetros avaliados pelo ensaio de adsoro de nitrognio na determinao de

superfcie especfica e tamanho de poro do sulfato de hidroxicloroquina. ............................ 116
Tabela 14. Matriz do planejamento fatorial 33 ....................................................................... 117
Tabela 15. Comparao entre os resultados obtidos das anlises realizadas com as diferentes
formas de preparao de amostra e tratamento estatstico presumindo diferentes varincias 121
Tabela 16. Matriz do planejamento fatorial 22 ....................................................................... 122
Tabela 17. Influncia dos fatores e da interao entre eles .................................................... 122
Tabela 18. Resultados obtidos para as anlises do parmetro seletividade ............................ 125
Tabela 19. Resultados obtidos para as anlises do parmetro preciso e tratamento estatstico
atravs de coeficiente de varincia e ANOVA one-way e ANOVA two-way........................ 126
Tabela 20. Resultados obtidos para as anlises do parmetro exatido e tratamento estatstico
teste t-Student presumindo varincias equivalentes. .............................................................. 127
Tabela 21. Resultados obtidos para as anlises do parmetro robustez e tratamento estatstico
atravs de ANOVA One-Way ................................................................................................ 127
Tabela 22. Resultados obtidos para o teor de HCQ na matria-prima e comprimidos e a
tratamento estatstico teste t-Student ...................................................................................... 128
Tabela 23. Produtos de degradao trmica do sulfato de hidroxicloroquina obtidos atravs de
pirlise-CG/MS. ..................................................................................................................... 132
Tabela 24. Valores dos r2 obtidos para a regresso linear de cada ordem de reao (0, 1 e 2)
para cada etapa degradativa e seus respectivos valores dos parmetros cinticos. ................ 135
Tabela 25. Rampa de aquecimento utilizada para obteno temperaturas isotermais
constantes. .............................................................................................................................. 136
Tabela 26. Determinao da ordem de reao da cintica de degradao do sulfato de

hidroxicloroquina sobre condies isotermais ....................................................................... 137
Tabela 27. Valores dos r2 obtidos para a regresso linear de cada ordem de reao (0, 1, 2, 3, 4
e 5) para o segundo evento de degradao e seus respectivos valores dos parmetros cinticos.
................................................................................................................................................ 142
Tabela 28. Temperatura inicial (Tonset), temperatura do pico (Tpico) e temperatura final (Tendset)
do evento de fuso, variao da entalpia (H), Temperatura de degradao (Tdeg) e perda de
Massa do sulfato de HCQ e das MB. ..................................................................................... 145
Tabela 29. Resultados obtidos para os clculos dos parmetros cinticos do sulfato de
hidroxicloroquina isolado e das misturas binrias entre o frmaco e o glicolato de amido
sdico a lactose. ...................................................................................................................... 148
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

A
Fator de Frequncia (Fator de Arrhenius)
AIDS
Sndrome da Imunodeficincia Adquirida (do ingls Adquired acquired

immunodeficiency syndrome)
ACPA
Anticorpos Antiprotenas e Peptdeos Citrulinados
AINE
Anti-inflamatrios no esteroidais
Anti-CCP
Anticorpos Antipeptdeos Citrulinados Cclicos (anti-CCP)
ANVISA
Agncia Nacional da Vigilncia Sanitria
AR
Artrite Reumatoide
ATR
Reflectncia Total Atenuada
BDCQ
Bisdesetilcloroquina
CG
Cromatografia Gasosa
CLAE
Cromatografia Liquida de Alta Eficincia
CP
Consulta pblica
CQ
Cloroquina
DATAAN
(+)-di-O-acetil-L-tartrico
DCQ
Desetilcloroquina
DHCQ
Desetilhidroxicloroquina
DMCD
Drogas Modificadoras do Curso da Doena
DSC
Calorimetria Diferencial Exploratria
DoE
Design of Experiments
DTA
Anlise Trmica Diferencial
DTG
Termogravimetria Diferencial
DR-X
Difrao de Raios-X
Ea
Energia de Ativao
ED
Eficincia de dissoluo
EE
Estudo de Estabilidade
EM
Espectro de Massa
EUA
Estados Unidos da Amrica
FDA
United States Food and Drugs Administration
FR
Fator Reumatoide
GAS
Glicolato de amido sdico
GC
Glicocorticoides
G6FD
Glicose-6-fostato Desidrogenase
HCQ
Hidroxicloroquina
HIV
Vrus da Imunodeficincia Humana (do
ingls
Human
Immunodeficiency
Vrus)
HPMC
Hidroxipropilmetilcelulose
ICH
Internation Conference on Harmonization
IFA
Insumos Farmacuticos Ativos
IgG
Imunoglobulina G
IgM
Imunoglobulina M
IL-6
Interleucina-6
IMP
Impurezas
IUPAC
The International Union of Pure and Applied Chemistry
IV
Infravermelho
IV-TF
Espectroscopia de absoro na regio do Infravermelho com transformada de

Fourier
LA
Lactose
LC-PDA
Cromatografia Liquida acoplada a Detector de Arranjo Diodo
LD
Limite de deteco
LDL
Lipoprotenas de Baixa-Densidade
LE
Lpus eritematoso
LED
Lpus eritematoso discoide
LES
Lpus eritematoso sistmico
LQ
Limite de quantificao
LTM
Laboratrio de Tecnologia dos Medicamentos
MB
Mistura Binria
MS
Espectrometria de massas (do ingls Mass Spectrum)
MEV
Microscopia eletrnica de varredura
MIE
Mtodos indicativos de estabilidade
MTX
Metotrexato
Ordem de Reao
NCQMC
Ncleo de Controle de Qualidade de Medicamentos e Correlatos
PCR
Protena C Reativa
PD
Produtos de degradao
PEG
Polietilenoglicol
pH
Potencial Hidrogeninico
PVP
Polivinilpirrolidona
QbD
Quality by Design
rac-HCQ
mistura racmica de Hidrocicloroquina
RDC
Resoluo Diretoria Colegiada
RE
Resoluo Especfica
RMN 13C
1
Ressonncia Magntica Nuclear de Carbono 13
RMN H
Ressonncia Magntica Nuclear de Hidrognio
RNA
cido Ribonucleico (do ingls Ribonucleic Acid)
R-HCQ
Enantomro R da Hidroxicloroquina
R-CQ
Enantimero R da Cloroquina
S-HCQ
Enantiomro S da Hidroxicloroquina
S-CQ
Enantimero S da Cloroquina
SL
Sulfalazina
SS
Sndrome de Sjgren
TG
Termogravimetria
TOF
Time of Flying
USP
United States Pharmacopeia
UV
Ultravioleta
UV-Vis
Ultravioleta Visvel
VHS
Velocidade de Hemossedimentao.
ZDV
Zidovudina
LISTA DE SMBOLOS
mg
Miligrama
mg/mL
Miligrama por mililitro
mg/dia
Miligrama por dia
Porcentagem
Grama
g/L
Grama por Litro
Graus Celsius
Nmero
constante de degradao de frmacos
T0
Temperatura inicial
Temperatura analisada
Tempo
Kt
Determinao da estabilidade
concentrao
Constante de Velocidade Cintica
ln C
logartmo neperiano da concentrao
1/C
Inverso da concentrao
nm
Nanmetro
cm
Centmetro
mW
MiliWatts
rotao especfica
m/z
massa/carga
mm
Milimetro
metro
U%
Porcentagem de gua adsorvida
Os
Peso do pesa-filtro contendo a amostra aps da dessecao
Pu
Peso do pesa-filtro contendo a amostra antes da dessecao
Pa
Peso da amostra
mL
Mililitro
Micrmetro
mL/hora
Mililitro por hora
dAP
Densidades aparente
dCP
Densidade compactao
IH
ndice de Hausner
IC
ndice de Carr
Molar
w/m2/hora
Watts por metro quadradro por hora
g.mL-1
Micrograma por mililitro
Pg
Pgina
min
Minutos
p/p
Relao concentrao Peso - peso
Ti
temperatura inicial de fuso
ppm
Partes por Milho
g/mol
Gramas por mol
m/z
Massa/carga
Hz
Hertz
rotao especfica
ASC
rea sob a curva do tempo
ATG
a rea total do grfico
Quantidade residual de frmaco
Co
Quantidade inicial
Constante de velocidade cntica
KJ/mol-1
Kilo Joules por mol
J.g-1
Joules por grama
Angstrom
cm/g
Centimetros cbicos por grama
m/g
Metros quadrados por grama

-1
C.min
Graus Celsius por minuto
ml.min-1
Mililitro por minuto
MHz
Megahertz
eV
Eletronvolt
kV
Kilovolt
SUMRIO
1 INTRODUO ..................................................................................................................... 25
2 OBJETIVOS .......................................................................................................................... 28
3 REVISO BIBLIOGRFICA .............................................................................................. 31
3.1 Sulfato de hidroxicloroquina .......................................................................................... 31
3.2 Quality by design ............................................................................................................ 74
4 MATERIAL E MTODOS ................................................................................................... 77
4.1 CARACTERIZAO FSICO-QUMICA DO FRMACO ANTIRREUMTICO
SULFATO DE HIDROXICLOROQUINA ATRAVS DE APLICAO DE QUALITY
BY DESIGN NOS ESTUDOS DE PR-FORMULAO .................................................. 77
4.1.3 Caracterizao a nvel molecular ......................................................................... 7880
4.1.4 Caracterizao a nvel de partculas ........................................................................ 78
4.1.5 Caracterizao a nvel de aglomerado de partculas ................................................ 83
4.1.5 Caracterizao a nvel de teor de gua ................................................................ 7984
4.1.6 Determinao de higroscopicidade .......................................................................... 81
4.1.7 Desenvolvimento e otimizao de mtodo analtico para doseamento do frmaco
........................................................................................................................................ 815
4.2 QUALITY BY DESIGN NO DESENVOLVIMENTO E VALIDAO DE MTODO
ANALTICO POR ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORO NA REGIO DO
ULTRAVIOLETA-VISVEL PARA DOSEAMENTO DO FRMACO
ANTIRREUMTICO SULFATO DE HIDROXICLOROQUINA .................................... 87
4.2.1 Princpio do mtodo ................................................................................................ 88
4.2.2 Preparo da soluo-amostra ..................................................................................... 89
4.2.3 Preparo da curva de calibrao ................................................................................ 89
4.2.4 Especificidade/Seletividade ..................................................................................... 90
4.2.5 Robustez .................................................................................................................. 91
4.2.6 Linearidade .............................................................................................................. 91
4.2.7 Limite de deteco (LD) e Limite de quantificao (LQ) ....................................... 91
4.2.8 Preciso .................................................................................................................... 92
4.2.7 Exatido ................................................................................................................... 92
4.2.8 Aplicao do mtodo ............................................................................................... 92
4.3 ESTUDO DE COMPATIBILIDADE FRMACO-EXCIPIENTE DO SULFATO DE
HIDROXICLOROQUINA ATRAVS DE TCNICAS TERMOANALTICAS ............. 93
4.4 AVALIAO DA INFLUNCIA EXERCIDA POR UMA MISTURA DE
EXCIPIENTES SOBRE O SULFATO DE HIDROXICLOROQUINA EM UMA FORMA
FARMACUTICA SLIDA COMPRIMIDO ATRAVS DE ESTUDO DA CINTICA
DE DEGRADAO TRMICA ......................................................................................... 95
5 RESULTADOS E DISCUSSO ...................................................................................... 99

BY DESIGN NOS ESTUDOS DE PR-FORMULAO .................................................. 99
ULTRAVIOLETA-VISVEL PARA DOSEAMENTO DO FRMACO
ANTIRREUMTICO SULFATO DE HIDROXICLOROQUINA .................................. 120
5.2.1 Preparo da Amostra ............................................................................................... 121
5.2.2 Planejamento fatorial 22 para otimizao do mtodo ............................................ 121
5.2.3 Validao do Mtodo............................................................................................. 123
EXCIPIENTES SOBRE O SULFATO DE HIDROXICLOROQUINA EM UMA FORMA
FARMACUTICA SLIDA COMPRIMIDO ATRAVS DE ESTUDO DA CINTICA
DE DEGRADAO TRMICA ....................................................................................... 128
HIDROXICLOROQUINA ATRAVS DE TCNICAS TERMOANALTICAS ........... 144
6 CONCLUSO E PERSPECTIVAS .................................................................................... 153
REFERNCIAS ..................................................................................................................... 156
ANEXOS ................................................................................................................................ 192
24
INTRODUO
FERRAZ, L. R. M. Aplicao de quality by design e de tcnicas termoanalticas no estudo de pr-formulao para o desenvolvimento de
formas farmacuticas base do frmaco antirreumtico sulfato de hidroxicloroquina, 2014.
25
1 INTRODUO
Para desenvolver um medicamento eficaz e seguro, preciso ter amplo conhecimento
sobre as propriedades fsico-qumicas do frmaco e dos adjuvantes farmacuticos. Durante a
etapa produtiva de produtos farmacuticos, a caracterizao do insumo farmacutico ativo
deve ser o primeiro passo a ser executado. As informaes obtidas por meio desta prtica
devem fornecer os subsdios necessrios para o delineamento racional de medicamentos. Esta
etapa de coleta de dados conhecida como pr-formulao e bastante importante para a
confeco da carta de identidade do frmaco (NERY et al., 2008; SOARES-SOBRINHO et
al., 2010).
A caracterizao etapa essencial do estudo de pr-formulao. Recentemente, ela
vendo sendo associada ao conceito de Quality by Design (QbD) na rea farmacutica, uma
abordagem sistemtica, cientfica e pr-ativa para o desenvolvimento, compreenso e controle
sobre produtos e processos. O QbD foi descrito pela primeira vez por Juran & Godfrei (1998)
e aplicado principalmente na indstria automotiva. A premissa fundamental do QbD o
delineamento da qualidade por meio de uma estratgia de otimizao visando estabelecer
completa compreenso da resposta do sistema de qualidade para determinadas variveis. Na
rea analtica e de pesquisa cientfica o QbD aplica-se, principalmente, no Design of
Experiments (DoE) (BARKER, 2005; YU, 2008; ICH, 2009).
O sulfato de hidroxicloroquina (HCQ), desenvolvido inicialmente como agente
antimalrico, eficaz como droga modificadora do curso da doena em enfermidades
autoimunes, tais como: artrite reumatoide (AR) e lpus eritematoso sistmico.
(MACKENZIE, 1983; OLSEN, SCHLEICH & KARP, 2013).
No tratamento da AR, o sulfato de HCQ geralmente utilizado em associao a outros
dois medicamentos: metotrexato e sulfalazina. Como monoterapia, o sulfato de HCQ
indicado apenas quando em casos precoces da doena ou quando a doena tem baixo ou
nenhum potencial erosivo de articulaes (MORELAND, 2012; ODELL et al., 2002).
Entretanto, nos servios de sade pblico e privado, a terapia associativa traz consigo:
a severidade dos efeitos colaterais e o elevado custo do tratamento com o metotrexato,
considerados como entraves eficcia do tratamento. Neste contexto, a aplicao da
tecnologia farmacutica no desenvolvimento de alternativas teraputicas simples, de custo
reduzido e eficcia comprovada, pode aumentar a adeso do paciente ao tratamento (MOTA
et al., 2012).
26
Ento, afim de propor tratamento alternativo para AR, como a obteno de associaes
em dose fixa, deve ser realizada a elaborao da carta de identidade do frmaco, atravs de
sua caracterizao fsico-qumica e de estudos preditivos de sua estabilidade na forma slida.
Esse fato, aliado ao desenvolvimento de mtodos analticos de quantificao do sulfato de
HCQ, fornecem os subsdios necessrios para o desenvolvimento racional de medicamentos.
Este trabalho tem por objetivo realizar a caracterizao fsico-qumica do sulfato de
hidroxicloroquina, atravs da aplicao do conceito Quality by Design, como etapa de um
estudo de pr-formulao para o desenvolvimento tecnolgico de formas farmacuticas
slidas.
27
OBJETIVOS
FERRAZ, L. R. M. Aplicao de quality by design e tcnicas termoanalticas no estudo de pr-formulao para o desenvolvimento de formas
farmacuticas base do frmaco antirreumtico sulfato de hidroxicloroquina, 2014.
28
2 OBJETIVOS
Os objetivos que norteiam o presente trabalho esto descritos abaixo, classificando-os
em geral e especficos.
2.1 Objetivo geral
Realizar a caracterizao fsico-qumica do sulfato de hidroxicloroquina, atravs da
aplicao do conceito Quality by Design, como etapa de um estudo de pr-formulao para o
desenvolvimento tecnolgico de formas farmacuticas slidas.
2.2 Objetivos especficos
Elaborar robusta carta de identidade do sulfato de hidroxicloroquina atravs de: IV-TF,
RAMAN, UV, RMNC e RMNH, EM, MEV, DR-X, anlise trmica (TG/DTG, DSC, DSCfotovisual), pirlise analtica, polarimetria, determinao de gua e umidade residual,
determinao de ponto de fuso, ensaio de solubilidade semi-quantitativo e quantitativo,
determinao de rea superficial, estudos de dissoluo, definio das propriedades
reolgicas, anlise granulomtrica, determinao do perfil higroscpico;
Otimizar mtodo analtico da Farmacopeia Americana por apresentar-se no reprodutvel
para doseamento do sulfato de HCQ por CLAE-DAD, atravs de aplicao do conceito de
QbD;
Desenvolver, otimizar e validar indito mtodo analtico para doseamento do sulfato de HCQ
por espectroscopia de absoro na regio do UV-Vis;
Evidenciar o comportamento trmico do sulfato de HCQ, com nfase nas faixas de fuso e
degradao, atravs de TG/DTG e DSC;
Evidenciar o principal evento de degradao trmica do sulfato de HCQ atravs de IV-TF,
DR-X e pirlise analtica;
Realizar o estudo da cintica de degradao atravs de modelos no-isotermais e isotermais,
da matria-prima e do comprimido base do sulfato de HCQ;
Realizar estudo de compatibilidade entre o sulfato de HCQ e excipientes comumente
utilizados na obteno de formas farmacuticas slidas, atravs de anlise trmica e tcnicas
complementares: IV-TF, DR-X e estudo da cintica de degradao;
29
Avaliar a influncia exercida por uma mistura de excipientes sobre o sulfato de HCQ
incorporado em uma forma farmacutica, tendo como referncia o Plaquinol.
30
REVISO
BIBLIOGRFICA
31
3 REVISO BIBLIOGRFICA
O embasamento terico, que diz respeito ao sulfato de hidroxicloroquina e as suas
principais indicaes clnicas, est disposto a seguir.
3.1 Sulfato de hidroxicloroquina

Desenvolvido inicialmente como agente antimalrico, o sulfato de hidroxicloroquina
(HCQ) quimicamente (7-cloro-4-[4-[N-etil-N-(2-hidroxietil)-amino]-1-metilbutilamino]quinolina sulfato (figura 1) frequentemente utilizado como frmaco antirreumtico de
ao lenta no tratamento de desordens de tecido conectivo (OLSEN et al., 2013;
McLACHLAN et al, 1993; TETT, 1989).
Figura 1. Estrutura qumica da hidroxicloroquina base livre com a enumerao dos carbonos.
Durante a 2 Guerra Mundial, ocorreu um extenso programa de cooperao para a

pesquisa de antimalricos nos Estados Unidos. Nessa poca, a quinacrina era largamente
utilizada pelo exrcito norte-americano para a profilaxia da malria. Paralelamente, estudos
sugeriram possvel eficcia em condies reumatolgicas da quinacrina e seus derivados. Em
meados da dcada de 50, o sulfato de HCQ mostrou perfil de utilizao mais satisfatrio
devido a menor toxicidade ocular, comparada com a cloroquina. Teve-se a a base das
informaes sobre a utilizao desses compostos como agente teraputico para artrite
reumatoide (AR) e lpus eritematoso sistmico (LES) e discoide (LED) (OLSEN et al., 2013;
32
MORELAND et al., 2012; LEE et al., 2011; ODELL et al., 2002; GASS, 1997; WEINBERG
& DAMICO, 1994).
A semelhana entre essas substncias reside no ncleo farmacforo quinolina. Este
tem histria longa e bem sucedida como agente antimalrico e antituberculose. Seus derivados
tm exibido vrias atividades biolgicas, como: ao antivrus sobre o vrus da
imunodeficincia humana (HIV), antifngica, antibacteriana e leishmanicida. Entre os
compostos oriundos da quinolina, a classe das 4-amino-7-cloro quinolinas continua a ser
frmaco de primeira escolha em doenas como malria. A seleo desse ncleo baseada na
sua excelente eficcia clnica, baixa toxicidade, sntese barata e facilidade de administrao
(KAUR et al., 2010; NAYYAR et al., 2006; RIDLEY, 1998; STREKOWSKI et al., 1991).
A continuidade dos estudos com drogas antimalricas d-se pelo crescente aumento da
resistncia parasitria a medicamentos contendo quinolinas sintticas, como o sulfato de HCQ
(EGAN et al., 2001).
A HCQ um anlogo da cloroquina (CQ) no qual um dos substituintes N-etil da
cloroquina -hidroxilado. Como antimalrico, a HCQ significativamente eficaz contra a
forma eritroctica dos agentes etiolgicos da malria: Plasmodium vivax e Plasmodium
malariae, alm de grande parte das cepas do Plasmodium falciparum. Entretanto,
recentemente vem sendo observada uma certa resistncia ao Plasmodium falciparum
cloroquina-resistente, alm de casos de resistncia contra cepas de Plasmodium vivax. E,
apesar de ser utilizada h muito tempo nesse tipo de teraputica, no se conhece seu exato
mecanismo de ao (SEMENIUK et al., 2008; SHAPIRO & GOLDBERG, 2006).
Recentemente, a HCQ tm sido utilizada como frmaco secundrio no tratamento de
uma variedade de doenas crnicas. Assim, so administrados em conjunto com outros
agentes, resultando em eficcia clnica de doenas como: artrite reumatoide (AR), lpus
eritematoso sistmico (LES), lpus eritematoso discoide (LED), sarcoidose, sndrome de
Sjgren (SS) e doenas de fotossensibilidade (SHAPIRO & GOLDBERG, 2006).
Possui eficcia similar observada com outros frmacos antirreumticos
modificadores da doena, inclusive a prpria CQ. Resultados obtidos demonstraram 60-80%
de melhora em pacientes adultos acometidos com a doena e tratados com HCQ (ADAMS et
al., 1983; MAINLAND & SUTCLIFFE, 1962; HAMILTON & SCOTT, 1962; KERSLEY &
PALIN, 1959).
O tratamento de doenas autoimunes com antimalricos tem sido senso comum por
mais de meio sculo. Muitos estudos de longo prazo evidenciaram melhores resultados em
termos de danos a rgos e de sobrevida global dos pacientes que recebem estes
33
medicamentos. Ao longo das ltimas duas dcadas, mais dados vm sendo acumulados sobre
os efeitos sistmicos do sulfato de HCQ, expandindo os usos potenciais dessa medicao em
diferentes classes teraputicas (OLSEN et al., 2013).
O sulfato de HCQ traz benefcios em longo prazo no tratamento do LES e da AR e
tornou-se um componente padro de terapia para pacientes com estas doenas. A Tabela 1
traz um resumo sistemtico da eficcia do tratamento com sulfato de HCQ sobre as
manifestaes clnicas das principais enfermidades onde o uso de frmaco recomendado.
Tabela 1. Reviso sistemtica de evidncia da eficcia do sulfato de hidroxicloroquina no tratamento da artrite
reumatoide e lpus eritematoso (adaptado de Olsen, 2013).
Enfermidade
Avaliao da eficcia
Tipo de evidncia
Referncia
Artrite
reumatoide
Contagem de inchao das

juntas e dor;
Reviso de literatura
sistemtica;
GAUJOUX-VIALA et al.,
2010
ndices articulares;
Ensaio clnico controlado,

duplo-cego;
PAVELKA et al., 1989
Dor e sensibilidade
articulares;
Ensaio clnico randomizado,

controlado, duplo-cego;
Lpus
eritematoso
sistemtico
NUVER-ZWART et al.,
1989
Ensaio clnico randomizado,

controlado, duplo-cego,
envolvendo retirada da terapia;
THE CANADIAN HCQ

STUDY GROUP, 1991
Falha de rgo;
Estudo de coorte longitudinal;

estudo de caso-controle;
Sobrevivncia;
Anlise de coorte prospectiva;

Anlise de coorte longitudinal;
COSTEDOATCHALUMEAU et al. 2010;

FESSLER et al., 2013
RUIZ-IRASTORZA et
al.,2006;
SHINJO et al., 2010
Incio tardio da doena;
Estudo de caso-controle
aninhado;
JAMES et al., 2007
Manifestaes cutneas;
FRANCS et al., 2012
Prevalncia de nova
doena renal;
SHINJO et al., 2010
Anlise de coorte longitudinal;
PONS-ESTEL et al., 2009
Anlise de coorte
retrospectiva;
KASITANON et al., 2006
Frequncia de crises;
Glomerulonefrite;
Remisso renal completa
para nefropatia
membranosa.
O uso do frmaco em questo seguro durante a gravidez, pois a molcula de HCQ

grande demais para atravessar a barreira placentria. Estudos transversais sugerem que
34
possvel reduzir o risco de anormalidades cardacas fetais em mes com auto anticorpos
contra antgenos que participam dos processos que envolvem a RNA-polimerase (IZMIRLY
et al., 2012; IZMIRLY et al., 2010; LEVY, 2005; COSTEDOAT-CHALUMEAU et al.,
2009).
3.1.1 Aspectos clnicos e teraputicos da artrite reumatoide

Classificada como uma doena autoimune de etiologia desconhecida, a AR acomete
cerca de 0,5-1% da populao mundial adulta, no havendo restrio tnica. Caracteriza-se
por ser doena inflamatria sistmica, crnica e progressiva (LEE & WEINBLATT, 2001;
ALARCN, 1995).
No Brasil, Marques-Neto e colaboradores (1993), em estudo multicntrico,
evidenciaram a prevalncia da enfermidade em at 1% da populao adulta brasileira,
correspondente a 1.300.000 pessoas acometidas (LEE & WEINBLATT, 2001; ALARCN,
1995).
H predomnio no sexo feminino (2 a 3 vezes em relao ao sexo masculino),
ocorrendo, sobretudo, em pacientes entre a quarta e sexta dcada de vida, embora haja registro
em todas as faixas etrias (SILMAN & PEARSON, 2002; LEE & WEINBLATT, 2001).
A doena atinge preferencialmente a membrana sinovial das articulaes, podendo
levar destruio ssea e cartilaginosa. comum o acometimento simtrico das pequenas e
das grandes articulaes, com maior frequncia de envolvimento das mos e dos ps (Figura
2).
Tal dano, muitas vezes irreversvel, acarreta altos custos para o indivduo acometido
pela enfermidade. Alm disso, os portadores da doena encontram-se em idade produtiva de
trabalho, o que pode determinar importante limitao na capacidade funcional e perda de
capacidade laboral. Assim, custos indiretos relacionados a esse contexto devem ser
incorporados s anlises de farmacoeconomia (SMOLEN et al., 2010; VERSTABPEN et al.,
2010; SOKKA, 2003; CHEHATA et al., 2001; LEE & WEINBLATT, 2001; EMERY &
SALMON, 1995).
35
Figura 2. Acometimento da artrite reumatoide sobre a articulao das mos
Fonte: http://www.drbayma.com/394/
Fato interessante evidenciado por Mota e colaboradores (2010) que as caractersticas

demogrficas e clnicas da AR so variveis de acordo com a populao acometida. Assim, h
certa dificuldade na normatizao da conduta clnica brasileira da doena, uma vez que a
maior parte das informaes disponveis provm de consensos realizados pela Europa e
Estados Unidos, sendo poucos os estudos realizados na populao brasileira (MOTA et al.,
2010; SMOLEN et al., 2010; SAAG et al., 2008; LOUZADA-JUNIOR et al., 2007).
A elaborao de um consenso nacional e/ou internacional visa avaliao dos custos e
a alocao de recursos para o diagnstico e tratamento da doena, adaptados realidade do
pas onde se deseja implantar a terapia.
Mota e colaboradores (2011) publicaram o documento nacional mais atualizado no
que tange s recomendaes internacionalmente harmonizadas para o tratamento da AR. O
enfoque no diagnstico da doena leva em considerao o peculiar aspecto da realidade
socioeconmica brasileira. Baseado em uma ampla reviso da literatura e nas opinies de
especialistas membros da Comisso de Artrite Reumatoide da Sociedade Brasileira de
Reumatologia, foi publicado o Consenso da Sociedade Brasileira de Reumatologia 2011 para
o diagnstico e avaliao inicial da artrite reumatoide (MOTA et al., 2011).
36
O diagnstico de AR deve ser estabelecido por meio de achados clnicos e exames

complementares. Nenhum teste isolado, seja laboratorial, de imagem ou histopatolgico,
capaz de confirmar o diagnstico. Logo, se faz necessrio o diagnstico diferencial, uma vez
que diversas doenas podem ser associadas artrite, conforme mostra a tabela 2 (MOTA et
al., 2011; ALEHATA et al., 2010).
Quando a AR se apresenta em sua forma bem definida, com todos os achados tpicos,
o diagnstico de fcil elucidao. J na fase inicial, pode ser difcil, uma vez que alteraes
sorolgicas e radiogrficas caractersticas muitas vezes esto ausentes. Sugere-se que esse
impasse ocorra por se tratar de uma doena sistmica. Sintomas gerais como: febre, astenia,
fadiga, mialgia e perda ponderal podem preceder ou acompanhar o incio das manifestaes
articulares (MOTA et al., 2011; DIXON & SIMMONS, 2005).
Visando facilitar a elucidao do diagnstico da doena, exames laboratoriais podem
ser requisitados. Na fase aguda, os marcadores laboratoriais mais utilizados para avaliao da
atividade da AR so: provas de atividade inflamatria, velocidade de hemossedimentao e
dosagem da protena C reativa. No entanto, tais exames no so especficos, podendo variar
conforme idade e sexo, por exemplo. Em contrapartida, a pesquisa de determinados
anticorpos mostrou-se bastante especfica. Dentre os potenciais marcadores de diagnstico da
AR esto: o fator reumatoide (FR) e diversos anticorpos antiprotenas e peptdeos
citrulinados, incluindo os anticorpos antipeptdeos citrulinados cclicos (anti-CCP) (MOTA et
al., 2009; VISSER, 2005; DEVLIN, 1997).
Pesquisas mostram a existncia do rastreamento gentico como medidas de
diagnstico e prognstico. Inmeros marcadores genticos foram descritos em associao
com a ocorrncia da AR. No entanto, somente a pesquisa dos alelos HLA-DRB1 e dos genes
PTPN22 so bem evidenciadas (KLARESKOG, CATRINA & PAGET, 2009).
Mtodo de imagens tambm so ferramentas que podem ser utilizadas no auxlio do
diagnstico e na manuteno da conduta clnica da AR. Os achados radiogrficos comuns,
ultrassonografias e a ressonncia magntica so mtodos indicados. Estes apresentam
vantagens e desvantagens, como em relao ao custo ou eficcia e, portanto, devem ser
analisados individualmente visando melhor custo-benefcio e relao satisfatria entre
paciente, profissionais de sade e ambiente hospitalar (MOTA et al., 2011).
37
Tabela 2. Diagnstico diferencial das artrites (adaptado de MOTA et al., 2011).
Grupo de doenas
Infeces
Espondiloartrites
Doenas
Virais (dengue, VIH, parvovrus, citalomegalovrus, vrus da
hepatite); bacterianas (N. gonorrhoeae, S. aureus); fngico;
Artrites reaticas (Chlamydia, Salmonella), espondilite anquilosante,
artrite psorisica, artrites enteropticas;
Doenas reumticas
Lpus eritematoso sistmico, polimiosite/dermatomiosite, esclerose
sistmicas
sistmica, sndrome de Sjogren, vasculite sistmicas;
Artrites microcristalinas
Gota, doenas por depsito de cristal de pirofosfato de clcio;
Doenas endcrinas
Hipotireoidismo e hipertireoidismo
Doenas neoplsicas
Outras
Doena neoplsica metasttica, linfoma, sndrome

paraneoplsicas;
Osteoartrite, hemocromatose, angioedema, sarcoidose, doena do
soro.
As manifestaes clnicas da AR podem ser divididas em articulares e extraarticulares. As manifestaes articulares podem ser reversveis em sua fase inicial. Quando h
destruio articular, tais condies so irreversveis. Isso ocorre devido s alteraes causadas
pela sinovite persistente; destruio ssea e cartilaginosa; imobilizao e alteraes
musculares, tendinosas e ligamentares (MOTA et al., 2011; WOOLF, 2003).
As manifestaes extra-articulares mais frequentes incluem: quadros cutneos;
oculares; pleuropulmonares; cardacos; hematolgicos; neurolgicos e osteometablicos.
Essas so mais observadas em pacientes com doena grave e poliarticular, com ndulos
reumatoides e com sorologia positiva para FR e/ou anti-CCP (GOELDNER et al., 2011;
TURESSON et al., 2007).
As principais queixas clnicas so: dor, inchao e limitao dos movimentos das
articulaes acometidas. Ao exame fsico, observa-se presena de dor, aumento de volume
38
das articulaes, derrame intra-articular, calor e, eventualmente, rubor. Nas articulaes

profundas, como nos quadris e ombros, esses achados podem no ser to evidentes. So
caractersticas da artrite as seguintes condies: inflamao da sinvia (sinovite) que pode
acometer qualquer uma das articulaes diartrodiais do corpo , acometimento poliarticular,
artrite em mos e punhos, artrite simtrica, artrite cumulativa ou somativa e rigidez matinal
(MOTA et al., 2011; ALEHATA et al., 2010; WOOLF, 2003).
Em relao ao consenso brasileiro, este se encontra em consonncia com a ltima
atualizao dos critrios de classificao da AR, uma iniciativa da parceria entre o Colgio
Americano de Reumatologia e o Comit Executivo da Liga Europeia Contra o Reumatismo.
O 2010 Rheumatoid Arthritis Classification Criteria traz nova abordagem com especfica
nfase na identificao de pacientes com durao relativamente curta dos sintomas. Estes
poderiam ser beneficiados, por exemplo, com a entrada em ensaios clnicos de novos agentes
promissores que podem cessar o desenvolvimento da doena (MOTA et al., 2011; ALETAHA
et al., 2010).
De fato, a importncia que foi dada aos indivduos precocemente portadores da doena
foi o maior avano do novo consenso. Com isso, foi possvel atingir uma nova parcela de
acometidos, algo que no ocorria no antigo consenso americano/europeu, datado de 1987.
Visando assegurar a possibilidade de obter diagnstico nos estgios iniciais da enfermidade, o
trabalho se baseia em um sistema de pontuao atravs de um escore de soma direta, como
demonstrado pela tabela 3.
As manifestaes so divididas em quatro domnios: acometimento articular,
sorologia, durao dos sintomas e provas de atividade inflamatria. Pontuao maior ou igual
a 6 (seis) classifica o paciente como portador de AR (MOTA et al., 2011; ALEHATA et al.,
2010; ARNETT et al., 1988).
O diagnstico precoce e o incio imediato do tratamento so fundamentais para o
controle da atividade da doena e para prevenir incapacidade funcional e leso articular
irreversvel. O perodo inicial da doena, em especial seus 12 primeiros meses (AR inicial),
considerado uma janela de oportunidade teraputica, ou seja, um momento em que a
interveno farmacolgica rpida e efetiva pode mudar o curso da doena em longo prazo. A
remisso completa, apesar de no ser o objetivo final do tratamento, raramente alcanada
(KLARENBEEK et al., 2010; AZEVEDO, FERRAZ & CICONELLI, 2008).
39
Tabela 3. Novos critrios classificatrios para artrite reumatoide (adaptado de MOTA et al., 2011; ALEHATA et
al., 2010).
Critrios
Pontuao
(escore)
Populao-alvo (quem deve ser testado?)

Paciente com pelo menos uma articulao com sinovite clnica definida
(edema)
Sinovite que no seja melhor explicada por outra doena
Acometimento articular (0-5)
1 grande articulao
2-10 grandes articulaes
1-3 pequenas articulaes (grandes no contadas)
4-10 pequenas articulaes (grandes no contadas)
> Mais de 10 articulaes (pelo menos uma pequena)
Sorologia (0-3)
FR negativo e ACPA* negativo
FR positivo ou ACPA positivo em baixos ttulos
FR positivo ou ACPA positivo em altos ttulos
Durao dos sintomas (0-1)

< 6 semanas
6 semanas
0
1
Provas de atividade inflamatria (0-1)

PCR* e VHS* normal
PCR ou VHS normal
*ACPA = anticorpos antiprotenas e peptdeos citrulinados; PCR = dosagem da protena C reativa; velocidade de
hemossedimentao (VHS).
40
A aplicao de consensos essencial para a avaliao da atividade da doena, para o

estabelecimento do diagnstico e prognstico da mesma e para dar subsdio avaliao da
qualidade de vida e da incapacidade dos pacientes.
Deve-se iniciar o tratamento da AR com a educao do paciente sobre as condies da
enfermidade e com o acompanhamento multidisciplinar de equipe especializada. O
esclarecimento acerca da doena pode fazer com o que o indivduo inicie de imediato a
terapia no medicamentosa. Esta consiste em acompanhamento funcional, prticas de
fisioterapia e terapia ocupacional. Aqui, o objetivo a manuteno do aparelho locomotor e
do sistema cardiorrespiratrio, promovendo: proteo articular, condicionamento muscular e
diminuio da dor. O papel do repouso e do exerccio deve ser enfatizado, reconhecendo-se
que a degenerao articular na AR maior quando o repouso prolongado (ALEHATA et al.,
2010).
Sobre o tratamento medicamentoso, esse varia de acordo com o estgio da doena, sua
atividade e gravidade. Para o controle da dor e do processo inflamatrio articular, o uso de
anti-inflamatrios no esteroidais (AINEs), associado ou no a baixas doses de
glicocorticoides (GC), importante adjuvante teraputica de base. Os AINEs so teis para
diminuir o processo inflamatrio e a dor, principalmente no incio da doena, pois as drogas
modificadoras do curso da doena (DMCD) no tm ao imediata. A HCQ, por exemplo,
quando usada para o tratamento crnico da AR, a dose entre 155 mg e 310 mg
geralmente administrada na forma oral, levando frequentemente de 4 a 6 meses para tornar-se
aparente. Vale salientar que o uso prolongado de GC deve ser acompanhado de
suplementao de clcio e vitamina D. Quanto escolha do AINE, no existem estudos
significativos que demonstrem a diferena de eficcia entre eles. Logo, h necessidade de
individualizar a escolha de acordo com os fatores de risco de cada paciente. (ALEHATA et
al., 2011; ALBERS et al., 2001; MORELAND & ODELL, 2002; CHEHATA et al., 2001;
GOTZSCHE & JOHANSEN, 2004; TETT et al., 1989).
Com a clara definio do diagnstico da doena, as DMCD devem ser indicadas.
Como exemplo destas, tm-se os antimalricos. No tratamento da AR, o sulfato de HCQ
geralmente utilizado em associao a outros dois medicamentos. A tripla-teraputica envolve,
alm deste, metotrexato (MTX) e sulfalazina (SL). Tal regime bastante aceitvel por ser
seguro, bem tolerado e barato, em comparao aos tratamentos mais caros, como o uso de
DMCD biolgicas (MORELAND, 2012; ODELL et al., 2002).
A HCQ, como monoterapia, indicada apenas quando em casos precoces da doena
ou quando a doena tem baixo ou nenhum potencial erosivo de articulaes. Conforme
41
estudos, ela capaz de reduzir os parmetros clnicos e laboratoriais, embora, isoladamente,

no altere a progresso radiogrfica. A SL, pertencente ao grupo dos salicilatos e sulfamidas,
considerada mais efetiva em relao HCQ na reduo da atividade da doena, no
controle da dor e na avaliao clnica global, alm de interferir beneficamente na progresso
radiogrfica. J o MTX, agente imunomodulador, demonstrou-se mais eficaz em reduzir
sinais e sintomas de atividade da AR e melhorar o estado funcional, alm de bloquear a
progresso de leses radiogrficas. Este , portanto, o frmaco de primeira escolha para o
tratamento da AR. Alternativas teraputicas mencionam o uso, menos comum, de
leflunomida, azatioprina e ciclosporina (ALEHATA et al, 2011; BRTOLO et al., 2009;
SHARP et al., 2000; SUAREZ-ALMAZOR et al., 2000a; SUAREZ-ALMAZOR et al., 2000b;
SUAREZ-ALMAZOR et al., 2000c).
Os agentes antimalricos possuem mecanismo de ao no tratamento da AR muito
pouco esclarecido. Provavelmente, so capazes de desencadear ao multifatorial,
envolvendo: atividade anti-inflamatria e interferncia na produo de prostaglandinas. A
essa primeira relaciona-se a estabilizao das membranas lisossomais, inibio de enzimas
lisossmicas e da quimiotaxia e fagocitose de polimorfonucleares. Estudos mostram ainda a
ocorrncia de atividade imunossupressora, atribuda produo do fator reumatoide em
reaes agudas doena. A HCQ, em especial, acumula-se nos glbulos brancos,
estabilizando a membrana lisossmica e inibindo a atividade de vrias enzimas, incluindo a
protease e a colagenase, responsveis pela quebra da cartilagem (WOLFE, 2000; THE HERA
STUDY GROUP, 1995; CLARK et al., 1993).
A Figura 3 ilustra a conduta teraputica que deve ser adotada para o tratamento da AR,
conforme menciona o consenso brasileiro.
Alternativas teraputicas vm sendo citadas na literatura recente. Entretanto, devido ao
alto valor agregado, alguns podem ser inviveis. Deve haver, portanto, acompanhamento
especfico para cada paciente, a depender tambm dos recursos do setor hospitalar. Os sais de
ouro so exemplos desses tratamentos. Os aurotioglicose e aurotiomalato so capazes, tanto
de reduzir os sintomas constitucionais e articulares, quanto de retardar a evoluo radiogrfica
da AR e podem ser usados em monoterapia ou em combinao com outros agentes
(LEHMAN et al., 2005; RAU et al., 2002).
42
Figura 3. Fluxograma do algoritmo para o tratamento da artrite reumatoide (MOTA et al., 2011).
Um dos mais relevantes avanos na terapia da AR foi o desenvolvimento das DMCD

biolgicas. Embora eficazes, possuem segurana em longo prazo ainda no claramente
estabelecida. So indicadas para pacientes que persistem com atividade da doena, apesar do
tratamento com pelo menos dois esquemas de DMCD sintticas. O uso de agentes biolgicos
deve ser feito associado a uma DMCD, preferencialmente MTX (MOTA et al., 2011;
ALEHATA et al., 2011).
Pode haver indicao de tratamento cirrgico em pacientes portadores de AR. Isso
visto em situaes nas quais as medidas clnicas e fisioterpicas no resultaram no controle
dos sintomas e/ou da qualidade de vida do paciente. Sinovectomia e artroplastias de joelhos e
43
quadril so comuns e, indicadas precocemente, apresentam melhores resultados que aqueles

quando as intervenes cirrgicas so indicadas nas fases mais tardias (ALEHATA et al.,
2011; BRTOLO et al., 2009).
3.1.2 Aspectos clnicos e teraputicos do lpus eritematoso sistmico e lpus eritematoso

discoide
O LES uma doena multissistmica inflamatria do tecido conjuntivo. Caracteriza-se
por desregulao do sistema imunolgico com perodos de exacerbao e remisso, tendo o
lpus eritematoso cutneo como principal manifestao clnica (SANTOS et al., 2010;
RIBEIRO et al., 2008).
Leses de pele aparecem em torno de 70% dos pacientes com LES. Esse achado o
segundo mais frequente, sendo preterido apenas pelas manifestaes articulares. O
acometimento cutneo extremamente til para o diagnostico da enfermidade. Em certos
casos, tal leso oferece ajuda no prognostico e na previso de envolvimento de determinados
rgos internos (BECKHAUSER et al., 2008)
Crianas e adolescentes acometidos representam desafio especial para os mdicos. A
doena causa profundo impacto sobre a qualidade de vida e o desenvolvimento psicossocial
desses pacientes. O reconhecimento das condies especiais relacionadas ao crescimento
fsico e emocional de cada indivduo interfere diretamente na escolha da terapia. Essa
complexa interao de fatores influencia, de maneira crucial, o sucesso do tratamento. O
incio na fase infanto-juvenil frequentemente descrito como mais grave, sendo o prognstico
diretamente relacionado idade de incio da doena e a sobrevida relacionada ao
comprometimento sistmico dos rins e sistema nervoso central (APPENZELLER et al.,
2005).
O tratamento do LES deve ser individualizado e dependente da gravidade do
acometimento dos rgos ou sistemas. Em relao utilizao da HCQ, este vem sendo
utilizado h quase 50 anos. O interesse nesta molcula ainda persiste devido relao
risco/benefcio, seu baixo custo e a disponibilidade de mtodo de doseamento sanguneo
(COSTEDOAT-CHALUMEAU et al., 2008).
A comprovao da efetividade do tratamento com HCQ feita devido melhora das
manifestaes cutneas e articulares da doena, alm de outras manifestaes clnicas como:
artrite, serosite, anormalidades hematolgicas e nefrolgicas. No obstante, o risco de crise
44
reincidente de lpus pode duplicar e/ou agravar quando na retirada desse frmaco (PONSESTEL, 2010; KASITANON et al, 2006; ARNAL, 2002;
THE CANADIAN
HYDROXYCHLOROQUINE STUDY GROUP, 1991; DUBOIS, 1978).

Nord e colaboradores (2004) demonstraram a importncia de alertar ao paciente sobre
o risco que existe de se desenvolver cardiotoxicidade em pacientes portadores de LES.
Embora seja algo raro, casos isolados j foram relatados. Isso parece ocorrer dado devido
doena cardaca primria e aterosclerose acelerada, situaes caractersticas da enfermidade.
Portanto, a bipsia endomiocrdica sugerida quando na suspeita desse tipo de toxicidade.
H crescente reconhecimento de que a doena cardiovascular uma das causas de
morbidade e mortalidade prematura na AR e LES, o que levou ao particular interesse no
sulfato de HCQ, que tem um perfil cardiovascular benfico. Essa ideia renovou o interesse
acerca deste medicamento antigo, com estudos sugerindo que todos os pacientes com LES,
incluindo crianas, devem ser tratados com sulfato de HCQ, independentemente de
manifestaes
clnicas
da
doena
(GASPARYAN
et
al.,
2012;
COSTEDOAT-
CHALUMEAU et al., 2010; RUIZ-IRASTORZA et al., 2008; PETRI et al., 1996).

Apesar de ser utilizado como tratamento secundrio em grandes estudos, apenas
50% dos pacientes recebem sulfato de HCQ , estudos sugerem um retardo do dano renal,
alm de reduzir a possibilidade do desenvolvimento de doena renal crnica em pacientes em
estado terminal (PONS-ESTEL et al., 2009; SIS et al., 2008).
Alm disso, o uso de sulfato de HCQ em pacientes com LES associada com a
sobrevivncia global melhorada, reduo da acumulao de danos e menores taxas de
infeco. Outros dados sugerem que o incio da enfermidade pode ser atrasado se a
administrao do frmaco for iniciada em fases pr-clnicas (ALARCN, 2007; FESSLER,
2005; MOLAD, 2002; RUIZ-IRASTORZA, 2009; JAMES, 2007).
Outro fator interessante que o sulfato de HCQ barato, especialmente em
comparao com os tratamentos para LES mais recentes, e est amplamente disponvel,
mesmo em pases em desenvolvimento. Na prtica clnica, a no remisso do LES a
principal razo para considerar a retirada do sulfato de HCQ. Tendo em vista a frequncia de
crises subsequentes aps trmino do tratamento, acredita-se que a continuao da tomada do
frmaco deve ser seriamente considerada como alternativa para a retirada de todos os
tratamentos alternativos para LES. Por outro lado, a interrupo definitiva do sulfato de HCQ
deve ser feita quando o LES permanecer ativo durante longo perodo de tempo
(COSTEDOAT-CHALUMEAU et al., 2009).
45
O LED (ou lpus eritematoso cutneo crnico) uma dermatose crnica autoimune, a
variante clnica mais comum do lpus eritematoso (LE). desencadeado ou agravado pela
exposio radiao ultravioleta, frio e determinados frmacos (FARIAS et al., 2011)
As manifestaes clnicas do LED so mltiplas e variadas. A apresentao
acneiforme rara, com apenas 6 casos descritos na literatura cientfica at agora. Essa forma
costuma ser subdiagnosticada em virtude da semelhana com doena inflamatria acneica
comum. Portanto, o diagnstico diferencial de extrema importncia, obtendo a confirmao
do acometimento do LED atravs de exames histolgicos (FARIAS et al., 2011).
O tratamento frequentemente associado s manifestaes cutneas, logo, a conduta
teraputica tpica essencial. Os responsveis, mdicos e legais, devem advertir o uso de
protetores solares como preveno progresso da doena. J para o acometimento sistmico,
observa-se a utilizao de tetraciclina e hidroxicloroquina. Farias e colaboradores (2011)
demonstraram melhora clnica significativa aps 6 meses de tratamento em pacientes que
recebiam 400 mg de HCQ ao dia. A continuidade do trabalho ainda evidenciou a ausncia de
sinais e sintomas de comprometimento sistmico, resultado obtido aps 12 meses de terapia
(FARIAS et al., 2011).
3.1.3 Aspectos clnicos e teraputicos da sndrome de Sjgren

A Sndrome de Sjgren (SS) uma doena autoimune sistmica. Caracteriza-se por
leso progressiva das glndulas excrinas, acompanhada por diversas manifestaes extra
glandulares. Mais comumente, acomete superfcies mucosas (boca e olhos secos). O
desenvolvimento de linfoma tambm complicao reconhecida (PERI et al., 2012;
SHIBOSKI et al., 2012; SJGREN, 1933).
uma das doenas autoimunes mais comuns nos EUA, com estimativas de 0,5 a 3
milhes de pessoas afetadas, principalmente em mulheres no perodo perimenopausal. E,
embora seja doena crnica, os sintomas de ressecamento das mucosas podem acometer um
indivduo previamente saudvel. A este, d-se a classificao de portador de sndrome de
Sjgren primria (SJGREN, 1933).
A SS pode ser vista como doena primria ou em associao com outras doenas
autoimunes, tais como: AR, LES e esclerose sistmica; onde passa a ser definida como
Sndrome de Sjgren secundria. Tais doenas afetam significativamente na qualidade de vida
dos pacientes (SHIBOSKI et al., 2012; VITALI et al., 2002).
46
O diagnstico da SS tarefa bastante complexa. Vrios critrios de prognstico e

diagnstico no haviam sido validados at 1986, quando, em Copenhagen, foi publicado: The
First International Symposium on Sjgrens Syndrome. Em 2002, aps discusso e avaliao
desses critrios entre especialistas americanos e europeus, uma verso revisada foi
apresentada comunidade internacional de reumatologistas. O Consenso Americano-Europeu
introduzia a necessidade de efetuar diagnstico diferencial, distinguindo a enfermidade
daquelas com manifestaes clnicas e/ou achados laboratoriais semelhantes (VITALI et al.,
2002).
A mais recente reviso, datada de 2012, trouxe novos critrios de classificao para a
SS. Dentre as inovaes e pontos considerados importantes, o American College of
Rheumatology Classication Criteria for Sjgrens Syndrome: A Data-Driven, Expert
Consensus Approach in the Sjgrens International Collaborative Clinical Alliance Cohort,
destaca: a necessidade de incrementar o suporte pesquisa gentica e etiolgica e ensaios
teraputicos para a enfermidade; a clareza, facilidade e alta especificidade da insero dos
pacientes em ensaios clnicos, considerando os efeitos adversos potencialmente graves e
morbidades dos agentes biolgicos; e a nova base de dados utilizada para a construo do
consenso a partir de registro de instrumentos padronizados e testes diagnsticos (SHIBOSKI
et al., 2012).
At o momento, no h nenhum tratamento capaz de modificar a evoluo da SS. A
teraputica baseada na substituio sintomtica (lgrimas e saliva artificiais) ou estimulao
da secreo glandular, usando medicao tpica ou oral. As implicaes extra glandulares e
sistmicas devem ser tratadas com glicocorticoides e agentes imunossupressores,
respectivamente. Estudos demonstram a eficcia da terapia com agentes biolgicos, como o
rituximabe, para o tratamento de portadores da SS primria (RAMOS-CASALS, TZIOUFAS
& FONT, 2007; RAMOS-CASALS & FONT, 2005; TZIOUFAS & MOUTSOPOULOS,
2003).
A terapia sistmica para SS consiste em vrios medicamentos bem conhecidos, tais
como: os corticosteroides, azatioprina, metotrexato, frmacos de origem biolgica
(imunoglobulinas). A teraputica com o sulfato de HCQ tambm associada ao tratamento da
doena. Apesar de agir como imunossupressor, o frmaco no possui mecanismo de ao
totalmente esclarecido (RAMOS-CASALS et al., 2010; KRUIZE et al., 1993).
Tendo em vista que a SS doena autoimune, a utilizao de frmacos capazes de
reduzir os nveis sricos de anticorpos considerado terapeuticamente efetivo, principalmente
as imunoglobulinas IgM e IgG, que respondem infeces agudas e crnicas,
47
respectivamente. Nesse caso, prope-se que a HCQ tenha influncia direta sobre os linfcitos
T, atuantes na cascata metablica que leva a sntese dessas imunoglobulinas. Sugere-se
tambm que o frmaco aja na funo fagocitria dos antgenos pelos macrfagos, uma vez
que, se a funo dos macrfagos est comprometida, a depleo das clulas sadias do
organismo, por sua vez, reduzir, melhorando o quadro clnico do paciente. O estudo ainda
postula que o uso da HCQ diminui a velocidade de sedimentao dos eritrcitos e os nveis
sricos de gamaglobulinas. Tendo em vista que os nveis de sedimentao dos eritrcitos
esto diretamente ligados a vrias doenas, inclusive as de origem reumtica, a reduo da
velocidade de sedimentao indicaria baixa na infeco causada pela doena (RAMOSCASALS et al., 2010; KRUIZE et al., 1993).
No h evidncias clnicas significativas de eficcia e efetividade do tratamento
utilizando o sulfato de HCQ, havendo apenas alguns curtos estudos. Lakhanpal e
colaboradores (1985) relataram melhora subjetiva nas condies de secura dos olhos e boca,
em trs pacientes com durao de 9, 20 e 59 meses, respectivamente. (RAMOS-CASALS et
al., 2010). Corroborando com esses resultados, Fox e claboradores (1988) ainda
demonstraram melhores resultados de exames laboratoriais, em um pequeno estudo aberto,
utilizando 20 pacientes. Entre outros benefcios, a diminuio da IgG total foi bastante
significativa. Apesar de confirmar esses achados laboratoriais, Kruize e colaboradores (1993)
concluram, em um estudo randomizado duplo cego cruzado, que o uso do sulfato de HCQ em
uma dose de 400 mg por dia, tomada ao longo de 12 meses no tem um efeito clnico benfico
em pacientes com sndrome de Sjgren.
O uso do sulfato de HCQ geralmente associado em politerapia e deve ser prescrito
em casos mais graves e de difcil controle, levando em considerao o risco potencial de
desenvolvimento de leso da retina.
3.1.4 Aspectos clnicos de achados teraputicos

Relatos apontam a eficcia da HCQ em doenas diferentes daquelas que apresentam
condies reumticas. Embora alguns desses estudos estejam baseados em estudos de caso
individuais, h uma gama de ensaios clnicos randomizados e controlados por placebo que
comprovam a afirmativa. Alguns desses relatos esto descritos a seguir (OLSEN, 2013).
A primeira informao diz respeito diabetes mellitus. Condies hipoglicemiantes
em pacientes tratados com HCQ e CQ vm sendo observadas h dcadas. Trs pequenos
48
ensaios clnicos, randomizados e controlados, utilizando pacientes desprovidos de outras

complicaes reumticas e recebendo uma dose relativamente alta de sulfato de HCQ (600
mg), reforaram tal situao (QUATRARO et al., 1990).
O impasse talvez seja o real diagnstico dessa reao ao tratamento, distinguindo-a
dos efeitos gerais de uma infeco sistmica, uma vez que tais pacientes, muitas vezes, esto
recebendo terapia antimalrica. A magnitude dessa condio pode ser suficiente para anular a
necessidade de insulina ou causar coma por hipoglicemia (KANG, MIKULS & ODELL,
2009; SHOJANIA KOEHLER & ELIOTT, 1999; WHITE et al., 1987).
Um breve estudo prospectivo com obesos, no diabticos e no portadores de doenas
autoimunes demonstrou a melhoria da sensibilidade insulina, em tratamento usando HCQ
durante 6 semanas. Esses resultados sugerem que h uma reduo no s da incidncia de
diabetes tipo 2 em pacientes que esto sendo tratados com sulfato de HCQ para outras
condies, como tambm da taxa de glicemia sangunea e da resistncia insulina. provvel
que esse efeito da HCQ sobre a glicose esteja relacionada a alteraes do pH intraendossomal, ao essa que resulta na reduo da degradao da insulina no tecido adiposo
humano (OLSEN et al., 2013; MERCER et al., 2012).
Outro achado interessante a capacidade da HCQ de reduzir eventos
tromboemblicos. H mais de duas dcadas, Johnson & Charnley (1979) relataram a utilidade
profiltica do sulfato de HCQ para evitar significativos eventos trombticos em condies
ps-operatrias de artroplastia total do quadril. Uma anlise de coorte prospectiva demonstrou
efeito protetor dos antimalricos no desenvolvimento de trombose, bem como em melhoria
significativa da sobrevivncia. Um estudo mais recente anlise de coorte-base, utilizando
1930 pacientes portadores de LES analisou os fatores que foram associados a um ou mais
eventos trombticos, no qual se evidenciou que o uso de sulfato de HCQ foi
significativamente associado a um risco reduzido de trombose, principalmente em pacientes
jovens (RUIZ-IRASTORZA et al., 2010; KAISER, CLEVELAND & CRISWELL, 2009;
WALLACE, 1987; ERNST, ROSE & LEE, 1984; JOHANSSON, FORSBERG &
JOHNSSON, 1981).
Vrios mecanismos tm sido propostos para os efeitos antitrombticos do sulfato de
HCQ. O mais provvel parece ser a reduo de agregao plaquetria ou ainda, a inibio da
liberao dos alfa-grnulos, estruturas que possuem os fatores que participam da cascata de
coagulao. Porm, esses achados limitam-se a estudos in vitro. No entanto, a concentrao
necessria para que seja possvel observar tal efeito (25 mg/mL) 200 vezes maior do que os
nveis no sangue que so relatados em pacientes tratados, de modo que pode ser explicada a
49
razo deste efeito permanecer apenas especulativo (FRANCS et al., 2012; PROWSE,
PEPPER & DAWES, 1982; JOHANSSON, FORSBERG & JOHNSSON 1981).
A reduo do risco cardiovascular, devido ao efeito geral benfico sobre o perfil
lipdico quando em tratamento com o sulfato de HCQ, j reconhecido h duas dcadas. Petri
e colaboradores (1994), em estudo de coorte longitudinal, mostraram associao significativa
entre o tratamento com sulfato de HCQ, com doses entre 200 a 400 mg por dia, e menores
nveis de colesterol. Resultados semelhantes foram obtidos por Rahman e colaboradores
(1999), destacando ainda a recuperao dos nveis de colesterol quando na descontinuao da
terapia com o sulfato de HCQ. Assim, estudos recentes vm comprovando a reduo de nveis
lipdicos, colesterol total e at mesmo de lipoprotenas de baixa densidade em pacientes
portadores de AR ou LES, os quais recebem tratamento com o frmaco em questo, por
perodos de tempo relativamente diminutos (CAIROLI et al., 2012; MORRIS et al., 2011;
MIRJAFARI, AL-HUSAIN & BRUCE, 2011; ODELL et al., 2001; KAVANAUGH et al.,
1997; MUNRO et al., 1997).
Os mecanismos responsveis pelas alteraes do perfil lipdico com sulfato de HCQ
no esto bem elucidadas. Estudos postulam que isso ocorre devido taxa de depurao
significativamente mais elevada de fraes lipdicas ou at mesmo regulao positiva do
receptor de lipoprotenas de baixa-densidade (LDL) (SACHET et al., 2007).
Pelo fato de ter sido desenvolvido como agente antiparasitrio, uma possvel eficcia
em relao a outros tipos de infeco pode ser prevista. Assim, correto associar o tratamento
de pacientes com doenas autoimunes, utilizando sulfato de HCQ, ao menor risco de
infeces. Isso foi evidenciado em uma anlise de mais de 200 pacientes, portadores de
nefrite lpica, onde o grupo de pacientes em que os antimalricos foram utilizados antes do
diagnstico de nefrite apresentou quadros infecciosos significativamente menores do que
aqueles que no receberam tratamento com um dos frmacos dessa classe teraputica. Alm
disso, dos 20 pacientes que vieram a bito, 19 estavam no grupo que no recebeu o sulfato de
HCQ e, seis destes nove, morreram como resultado de infeces, enquanto que nenhuma
morte por causas infecciosas foi observada no grupo tratado com sulfato de HCQ (OLSEN et
al., 2013; SIS et al., 2008).
Talvez o fator mais surpreendente seja a grande quantidade de literatura publicada
documentando a utilidade de antimalricos, sulfato de HCQ em especial, no tratamento de
infeco pelo vrus da imunodeficincia humana (HIV). H pouco mais de uma dcada, dois
ensaios clnicos controlados demonstraram a eficcia do sulfato de HCQ na infeco pelo
micro-organismo.
50
O primeiro destes, um estudo controlado com placebo, no qual 40 pacientes com

nveis de linfcitos T CD4+ maiores do que 200 clulas/mm3, foram randomizados para
receberem 800 mg/dia de sulfato de HCQ ou placebo, durante 8 semanas. O grupo tratado
mostrou um declnio significativo nos nveis de cido ribonucleico (RNA) viral, enquanto que
este valor foi maior no grupo de tratamento com placebo. A percentagem de clulas T CD4+
permaneceu estvel (SPERBER et al., 1995).
O segundo estudo trazia 72 pacientes, soropositivos para o HIV, os quais foram
randomizados para receber a mesma dosagem do frmaco, mas dessa vez, ao invs do
placebo, estes receberiam 500 mg/dia de zidovudina (ZDV), em um esquema duplo-cego. O
grupo tratado com o antimalrico mostrou uma diminuio significativa do RNA viral
plasmticos, aps 16 semanas de tratamento, mantendo estvel o nvel de clulas T CD4+,
alm de baixos nveis sricos de interleucina-6 (IL-6) e de imunoglobulina G (IgG) aps o
tratamento. O grupo tratado com ZDV tambm obteve um nmero significativamente menor
de cargas virais, entretanto, no houve alteraes de grande magnitude nos nveis sricos de
IL-6 ou de IgG. Uma vez que nveis elevados de IL-6 so geralmente associados a um maior
risco de progresso do HIV, estes resultados com sulfato de HCQ foram encorajadores em
termos de modulaes imunolgicas, uma vez que estas so geralmente favorveis e podem
contribuir para a eficcia global da terapia em, pelo menos, alguns pacientes infectados
(OLSEN, 2013; SPERBER et al., 1997).
Paton & Aboulhab (2005), utilizando uma dose menor de sulfato de HCQ (200
mg/dia), hidroxiureia e didanosina inibidor da transcriptase reversa , atestaram a
significativa reduo da carga viral em cerca da metade dos pacientes, com nveis
indetectveis no final do estudo, permanecendo constante o nvel de linfcitos T CD4+.
A princpio, a ideia de se confeccionar formas farmacuticas contendo um frmaco
relativamente barato para a terapia da sndrome da imunodeficincia adquirida (AIDS) foi
considerada plausvel, visando utiliz-las em pases menos ricos com altas taxas de infeco
pelo HIV. Em contrapartida, a disponibilidade de medicamentos genricos de baixo custo e o
apoio do governo nesse tipo de tratamento reduziu a urgncia e interesse sobre a abordagem.
No entanto, o uso da HCQ adjuvante em associao de dose fixa com determinados frmacos
para o tratamento da AIDS vem sendo bastante discutido (AGUIRRE-CRUZ et al., 2010;
SAVARINO et al., 2001).
O mecanismo dessa ao antimicrobiana parece ser a alcalinizao de vesculas cidas
intracelulares, o que inibiria o crescimento dos micro-organismos. Estudos tambm sugerem
que a reduo na carga viral na infeco pelo HIV ocorre devido perturbao da glicosilao
51
ps-transducional do envolope protico do vrus (protena gp120), resultando na reduo da

capacidade infecciosa de partculas virais recm-produzidas (ROLAIN, COLSON &
RAOULT, 2007; SAVARINO et al., 2001; CHIANG et al., 1996).
O efeito protetor do tratamento utilizando o sulfato de HCQ sobre o risco de tumores
malignos no LES tem sido sugerido por determinados estudos observacionais. A razo para
que haja certa discrepncia de resultados entre esses estudos parece ser o longo prazo de
seguimento duas ou mais dcadas para que seja possvel a observao de possveis efeitos
sobre o desenvolvimento de doenas malignas (SIS et al., 2008; RUIZ-IRASTORZA et al.,
2007).
A incorporao deste antimalrico em regimes de quimioterapia tornou-se inovadora
na rea da oncologia. A abordagem baseia-se na hiptese de que as aes lisossomais,
caracterstica do mecanismo de ao do sulfato de HCQ, possam aumentar a resposta padro
dos agentes quimioterpicos. Entretanto, limitados estudos clnicos sugerem que esta pode ser
uma abordagem til (OLSEN et al., 2013; MANSILLA et al., 2010).
3.1.5 Efeitos adversos do uso da hidroxicloroquina

Os riscos do tratamento com sulfato de HCQ so relativamente baixos. Em geral,
correspondem
intolerncia
gastrintestinal
(nuseas,
vmitos,
dor
abdominal),
hiperpigmentao da pele, branqueamento dos cabelos, cefaleia, tontura. No entanto, continua

a existir um potencial especfico para efeitos adversos mais graves, como a leso de retina
(retinopatia) e neuromiotoxicidade (OLSEN et al., 2013; MARMOR et al., 2011; WOLFE et
al., 2010; TANENBAUM, DENNY & TUFANELLI, 1990).
A identificao de indivduos que correm alto grau de risco para o desenvolvimento
desses problemas seria til, mas poucas anlises preditivas so confiveis. Durante muitos
anos, o peso corporal tem sido defendido como um marcador, mas um estudo recente sugere
que esta varivel, bem como a idade e dosagem diria, no estavam relacionadas com a
toxicidade. A segurana pode ser reduzida em indivduos com deficincia de glicose-6-fostato
desidrogenase (G6FD), logo, o uso de antimalricos deve ser evitado. Essa classe teraputica
funciona como compostos indutores de hemlise em indivduos com deficincia da enzima
G6FD, importante antioxidante dos glbulos vermelhos (OLSEN et al., 2013; MARMOR et
al., 2011; WOLFE et al., 2010).
52
Muitos desses efeitos adversos parecem ocorrer devido ao acrscimo do pH

endossomal, o que altera o processamento de certas protenas e a ligao de componentes
biolgicos aos receptores. Outros estudos postulam diferentes mecanismos, como: fortes
ligaes in vitro frmaco:cidos nuclicos e inibio do clcio de sinalizao em clulas
linfoides (KUZNIK et al., 2011; GOLDMAN et al., 2000).
Os efeitos adversos oculares e cutneos da HCQ so possivelmente reaes
fototxicas. Dos relatos de substncias medicamentosas que causam fototoxicidade, um
nmero significativo deles contm cloro, como a HCQ. Sugere-se que o radical livre cloreto,
formado da quebra da ligao C-Cl, seja um dos responsveis pelos danos, uma vez que esse
se combina com protenas da pele, por exemplo (MOORE & HEMMENS, 1982; MOORE &
TAMAT, 1980, TNNESEN et al., 1988).
Por razes como estas, o uso de antimalricos exige um acompanhamento regular e
superviso mdica.
A toxicidade ocular associada aos agentes antimalricos foi observada pela primeira
vez em 1957. Em 1959, Hobbs & Sorsby reconheceram pela primeira vez a toxicidade
retiniana associada ao uso de hidroxicloroquina (WEINBERG & DAMICO, 1994; HOBBS
& SORSBY, 1959).
Estudos iniciais relataram casos de retinopatia quando no uso de antimalricos para o
tratamento de doenas como AR e LES. Toxicidade retiniana mediada pelo uso crnico de
sulfato de HCQ tem uma baixa incidncia, menor que aquela apresentada pela CQ, alm de
ser menos grave tambm. Isso ocorre devido presena do grupo hidroxil, sendo o frmaco
incapaz de ultrapassar a barreira hematorretidiana, diferente da CQ, o que poderia causar a
opacidade da crnea ou alteraes de motilidade (MAVRIKAKIS et al., 2003;
MAVRIKAKIS et al., 1996).
Trabalhos mostram que a frequncia da retinopatia causada pelo acmulo de HCQ
varia de 0,001 a 40%, mas milhares de pessoas utilizam este medicamento para diversos fins.
Contudo, a toxicidade oftalmolgica deste frmaco uma preocupao sria, pois, mesmo
aps a retirada da medicao, h pouca ou nenhuma recuperao visual, e, por vezes, h
progresso da perda visual (EASTERBROK, 1993; RAINES, BHARGAVA & ROSEN,
1989; ELMAN et al., 1976; HOBBS, EADIE & SOMERVILLE, 1961; HENKIND &
ROTHFIELD, 1963).
Em 2002, a Academia Americana de Oftalmologia publicou recomendaes para o
diagnstico e/ou prognstico da retinopatia induzida por CQ ou HCQ. Fato que melhores
ferramentas de rastreio e novos conhecimentos sobre a prevalncia de toxicidade tm
53
aparecido nos anos seguintes publicao, justificando a necessidade de atualizao. At o

momento, no existe nenhum tratamento definitivo para esta complicao, por isso
necessrio que mdicos e pacientes estejam cientes do risco do uso do medicamento para
minimizar possveis danos txicos (MICHAEL et al., 2011; MARMOR et al., 2002).
O mecanismo que causa toxicidade ocular no bem compreendido. Agentes
antimalricos tm efeitos agudos sobre o metabolismo das clulas da retina, incluindo
fotorreceptores. Entretanto, no claro se estes efeitos metablitos so as causas, em curto
prazo, dos danos lento e crnico, que caracterizam o estado clnico de toxicidade. A HCQ se
liga melanina no epitlio pigmentado da retina e esta ligao acaba por concentr-lo e
contribuir ou prolongar os seus efeitos txicos (MICHAEL et al., 2011).
O quadro clnico da toxicidade mediada pelo acmulo de sulfato de HQC caracterizase classicamente por maculopatia em olho de boi (Figura 4). Essa condio resulta em
defeitos reprodutveis e bilaterais do campo visual, que pode ser detectada pela tela de Amsler
ou perimetria automatizada. Pode haver uma fase muito precoce de perda funcional da viso,
onde a retirada do frmaco permite uma reverso da toxicidade (MICHAEL et al., 2011;
SILVA & SILVA, 2009).
Novos dados demonstraram que o risco de toxicidade aumenta abruptamente para 1%
depois de 5 a 7 anos de uso, ou uma dose cumulativa de 1000 g de sulfato de HCQ, tendo em
vista que a dose individual de, geralmente, 400 mg ou calculada por peso-dependncia. O
risco aumenta ainda mais com o uso continuado da droga. A falha renal ou heptica deve ser
considerada, uma vez que esses rgos so os responsveis pela depurao do frmaco. A
idade, fatores genticos e pacientes portadores de maculopatia devem tambm ser
considerados como fatores de risco determinantes para a descontinuao do tratamento.
desaconselhado o tratamento prolongado em crianas e em portadores de hipersensibilidade s
4-aminoquinolonas (MICHAEL et al., 2011).
Aos pacientes que iro se submeter ao uso de antimalricos, um exame inicial
aconselhado para servir como um ponto de referncia e para descartar maculopatia. Este um
agravamento da retinopatia de carter gentico, o que pode vir a ser uma contraindicao ao
uso desses agentes teraputicos. O protocolo de rastreio anual deve ser iniciado aps 5 (cinco)
anos de exposio continuada ao frmaco. Testes como eletrorretinograma multifocal,
tomografia de coerncia ptica, fundo autofluorescncia, alm de exames habituais como
campos de viso e exames de fundo de olho so altamente preconizados. (MICHAEL et al.,
2011).
54
Figura 4. Retinografia a cores: Mcula em olho de boi (SILVA & SILVA, 2009).
Aconselha-se que os pacientes devam estar cientes do risco de toxicidade e dos

fundamentos para a triagem, visando deteco ou minimizao da incidncia do efeito. Os
medicamentos devem ser interrompidos, se possvel, quando a toxicidade reconhecida ou
fortemente suspeita. Esta uma deciso a ser tomada em conjunto: pacientes e seus mdicos
(MICHAEL et al., 2011).
3.1.6 Aspectos Farmacocinticos

O sulfato de HCQ comercializado e administrado ao paciente como racemato,
mistura equimolar de dois enantimeros: (+)-HCQ e (-)-HCQ. Entretanto, no h informao
disponvel sobre possibilidades de disposio estereosseletiva e atividades farmacolgicas dos
enantimeros isolados (SOLOMONS & FRYHLE, 2005; McLACHLAN et al, 1993).
Apesar deste fato, diversos estudos buscam mensurar a concentrao de cada um dos
enantimeros da HCQ e de seus respectivos metablitos. McLachman e colaboradores (1993)
sugeriram a existncia da atuao de um ou mais processo(s) estereoseletivo(s) no arranjo da
molcula da HCQ em plasma e urina. Tais processos seriam: inverso quiral, absoro,
distribuio e excreo renal. Entretanto, considerando a estabilidade dos grupos vicinais do
centro quiral da molcula, a possibilidade de haver inverso quiral parece ser remota. Os
demais se demonstraram estereosseletivos (BROCKS & MEHVAR, 2003; BROCKS et al.,
1992; McLACHLAN et al., 1993; McLACHLAN et al. 1994; DUCHARME et al., 1994).
As altas concentraes de (-)-R-HCQ no sangue e plasma, comparadas quelas vistas
com o (+)-S-HCQ, corroboram a existncia de processo(s) estereoseletivo(s) na disposio do
55
frmaco em questo. Postula-se que o enantimeros (R) preferencialmente concentrado

pelos compostos celulares do sangue e, uma vez fixado, deixaria o enantimero (S) mais
disponvel para o metabolismo. Entretanto, estudos mostram que este e os demais processos
estereosseletivos apresentam significativa variabilidade entre diferentes indivduos.
(McLACHLAN et al., 1994; McLACHLAN et al., 1993; GUSTAFSSON et al., 1986).
No h informaes disponveis capazes de garantir a eficcia e toxicologia de cada
um dos enantimeros. Tambm no se sabe qual deles o responsvel pela atividade
antiartrtica. Haberkorn e colaboradores (1979) indicaram limitados dados de toxicidade em
ratos, demonstrando que o (+)-R-CQ o ismero mais txico por possuir menor dose letal
que o seu enantimeros (S). O trabalho ainda evidencia que a (+)-S-CQ, que tem a estrutura
muito similar a HCQ, demonstrou atividade antimalrica mais potente que a (-)-R-CQ, em
ratos. Entretanto, a simples semelhana estrutural no permite a extrapolao dos dados
supracitados para o tratamento da artrite reumatoide (BROCKS et al., 1992).
O sulfato
de
HCQ
apresenta absoro
oral
intestinal
variveis
com
biodisponibilidade de aproximadamente 74% e distribui-se pelo organismo apresentando

reteno prolongada nos olhos, fgado, epiderme, pulmes, outras reas ricas em melanina. Na
epiderme, a concentrao do frmaco pode chegar a ser 100 a 200 vezes maior que os nveis
plasmticos. Nos eritrcitos, a concentrao de 2 a 5 vezes maior do que a plasmtica, uma
vez que a HCQ possui substancial capacidade de ligao s protenas plasmticas
(DUCHARME et al., 1994; TANENBAUM, DENNY & TUFFANELLI, 1980).
O metabolismo dos derivados da 4-aminoquinolona complexo e extenso. Depois de
longa administrao, o plasma contm nveis significativos de HCQ e de seus trs principais
metablitos, os quais ainda possuem o centro quiral. Portanto, todos existem em pares de
enantimeros, oito diferentes substncias (IREDALE, FIEGER & WAINE, 1993).
Deve-se esperar o acmulo do frmaco e seus metablitos, quando em dosagens
crnicas. O composto possui longa meia-vida plasmtica, estimada em mais de 40 dias, logo
pode atingir altas concentraes (6.000 a 80.000 vezes maior que o nvel plasmtico). Alm
disso, a meia-vida plasmtica aumenta proporcionalmente ao aumento da dose. Estudos atuais
so capazes de mensurar esse parmetro farmacocintico por CLAE em sangue total
(COSTEDOAT-CHALUMEAU et al., 2006; TETT et al., 1989; TANENBAUM, DENNY &
TUFFANELLI et al., 1980).
A principal via de excreo a renal, com 23 a 25% do composto excretado em sua
forma inalterada, juntamente com os metablitos. Ducharme e colaboradores (1995)
observaram eliminao mais rpida do enantimero (+)-(S)-HCQ comparada com o (-)-(R)FERRAZ, L. R. M. Aplicao de quality by design e tcnicas termoanalticas no estudo de pr-formulao para o desenvolvimento de formas
56
HCQ, provavelmente devido a mais rpida excreo urinria e metabolismo heptico. Esse
resultado foi corroborado por Fieger e colaboradores (1993). O trabalho ainda evidenciou que
os metablitos derivados do enantimeros (S) representaram 80-90% da dose urinria
recuperada e que no foram detectados metablitos no sangue.
Ao contrrio do exposto por Tett e colaboradores (1989), overdoses por
hidroxicloroquina, apesar de raramente relatadas, 7 (sete) casos foram evidenciados em uma
reviso da literatura mdica realizada por Marquardt e colaboradores (2001). Entretanto, ainda
no h harmonizao do tratamento dessa situao.
3.1.7 Aspectos Tecnolgicos

Toda e qualquer matria-prima adquirida possui uma gama de fatores intrnsecos,
determinantes do delineamento de formas farmacuticas. A indstria farmacutica deve,
portanto, realizar completo estudo sobre cada insumo utilizado. A essa investigao, d-se o
nome de caracterizao. A caracterizao, etapa fundamental do estudo de pr-formulao,
tem como base a pesquisa da identidade do frmaco e de suas propriedades fsico-qumicas.
Para tal, possvel recorrer a uma srie de tcnicas analticas. Essas so frequentemente
especificadas nas monografias publicadas em compndios oficiais. Entretanto, muitas outras
tcnicas complementares podem ser feitas a fim de gerar completo dossi contendo
informaes robustas sobre o frmaco em questo.
Inicialmente, deve-se garantir a identidade qumica de determinada matria-prima.
Nesse caso, mtodos espectrofotomtricos so bastante utilizados. Os espectrofotmetros de
infravermelho (IV) e Raman oferecem procedimento simples e rpido capaz de identificar
pequenas diferenas estruturais entre as molculas. A seleo do mtodo depende do princpio
da tcnica. A absoro no IV depende da variao do momento de dipolo da molcula e o
espalhamento Raman, da variao da polarizabilidade. Isso resulta em informaes
complementares nos espectros Raman e IV, embora nos casos de baixa simetria molecular
existam bandas nas mesmas posies, variando somente a intensidade. Geralmente, vibraes
simtricas e grupos no polares fornecem as bandas de espalhamento de Raman mais intensas,
enquanto vibraes assimtricas e grupos polares fornecem bandas de absoro mais intensas
no IV (SPONG et al., 2004; STEPHENSON et al., 2001).
A espectroscopia na regio do ultravioleta visvel (UV) uma tcnica utilizada para
identificar molculas dotadas de grupos cromforos em sua estrutura. confivel, rpida, de
57
fcil utilizao, possui baixo custo operacional e bastante simples no que diz respeito
interpretao de seus resultados (GALO & COLOMBO, 2009; SOARES et al., 2008).
A espectrometria de massa tambm pode ser utilizada para garantir a identidade
estrutural. Na tcnica, molculas so bombardeadas com laser de eltrons de alta energia,
convertendo algumas delas em ons, que so acelerados em um campo eltrico. Em seguida,
os ons so separados de acordo com a relao massa-carga no campo eltrico e os ons que
tm particular relao massa-carga so detectados por um dispositivo capaz de contar o
nmero de ons que o atingem. Devido ao princpio do mtodo, a tcnica ainda possibilita a
elucidao da estrutura qumica de produtos de degradao e, por consequncia, de possveis
rotas degradativas (PAVIA, 2001).
A solubilidade da matria-prima em dado solvente, temperatura constante, outro
parmetro caracterstico da substncia. Portanto, pode ser utilizada para identificao e
avaliao de grau de pureza. Este princpio baseia-se na anlise de solubilidade por fases e o
procedimento consiste na adio de pores crescentes de amostra a volumes constantes de
solvente no qual a substncia analisada mostra apenas ligeira solubilidade, visando obteno
de soluo saturada dessa substncia. Aps o equilbrio do sistema, sob agitao prolongada e
temperatura constante, determina-se o contedo total de soluto na soluo sobrenadante e
traa-se o diagrama de solubilidade por fases. Os parmetros de solubilidade so aplicados em
todos os aspectos do delineamento de formas farmacuticas. possvel dividir essa influncia
exercida em trs principais grupos: a previso das propriedades de materiais desconhecidos,
avaliao dos efeitos sobre as propriedades de processamento de materiais e a previso de
interaes e incompatibilidades entre materiais (BRASIL, 2010; HANCOCK, YORK &
ROWE, 1997).
A capacidade de soro de gua, ou higroscopicidade, tambm deve ser considerada.
A umidade um fator que influencia na estabilidade fsico-qumica e microbiolgica dos
materiais slidos. Ela assume papel significativo nas caractersticas reolgicas do produto,
essenciais no desenvolvimento de uma forma farmacutica slida (CHAVES; COSTA;
FREITAS, 2009).
Ainda sobre caractersticas intrnsecas ao frmaco, Semeniuk e colaboradores (2008)
evidenciaram, por tcnicas de cristalografia e difrao de raios-X, a projeo da estrutura
cristalina e interaes intermoleculares do monocristal do sulfato de HCQ. Conforme o
estudo, cada um dos tomos de nitrognio da base livre um doador de prtons nas ligaes
de hidrognio intermoleculares com os tomos de oxignio do nion sulfato. Alm disso, por
se tratar de um sal de sulfato, possvel observar a formao de supermolculas contendo
58
dois ctions e dois nions, a base livre do frmaco e o sulfato, respectivamente. O trabalho
ainda compara a presena do grupo hidroxila, em relao sua ausncia no fosfato de
cloroquina onde foi sugerido que a adio de mais um doador de prton parece no promover
grandes alteraes na conformao da molcula, no entanto aumenta a interao desta com o
receptor transmembranar do parasita (receptor putativo) (KOYAMA, 2012).
A difrao de raios-X uma tcnica cristalogrfica na qual um composto cristalino
fornece um perfil de difrao caracterstico, constituido por picos, equivalentes s cristas em
fase da radiao incidente. possvel identificar a forma cristalina e o grau de cristalinidade
da amostra a partir do padro do difratograma e da rea total sob os picos de difrao
(SANTOS, 2011; SANTOS, 2008; CAO, GUO & PING, 2005)
Sobre a formao do sal, sugere-se que sntese do sal de sulfato deva-se a dois
parmetros: solubilidade e ao ponto de fuso, intrnsecos ao frmaco como base livre. Em
geral, sais de cidos ou bases orgnicas possuem maior solubilidade em gua do que suas
correspondentes formas livres, desde que no seja observado efeito de on-comum. Em
relao HCQ, sua solubilidade em gua foi mensurada atravs de ALOGPS. O resultado
obtido 2,61.10-2 g/L considerado como praticamente insolvel, segundo a Farmacopeia
Brasileira 5 Edio (UNIVERSITY OF ALBERTA, 2013; BRASIL, 2010; SWEETANA &
AKERS, 1996).
Quanto ao ponto de fuso, frmacos destinados forma farmacutica comprimido
devem possuir elevado valor para tal parmetro (superior a 80C, pelo menos). Isso ocorre
porque, geralmente, frmacos com baixo ponto de fuso exibem deformaes plsticas que
podem resultar na aglomerao de partculas e, por consequncia, alterar as propriedades de
fluxo e compressibilidade, impactando negativamente na uniformidade de dose, desintegrao
e taxa de dissoluo. Alm disso, a prpria metodologia de obteno de comprimidos pode
acarretar problemas em relao temperatura, como a fuso do frmaco, devido a energia
aplicada na presso que exercida para efetuar a compresso ou a secura em estufa de um
granulado obtido por via mida. Contudo, o baixo valor do ponto de fuso da base livre do
frmaco (90C), poderia ser um impasse durante o desenvolvimento de obteno de formas
farmacuticas slidas (VERBEECK et al, 2006; GLANZNER & SILVA, 2010;
UNIVERSITY OF ALBERTA, 2013).
Visando determinar o ponto de fuso, outra propriedade fsica inerente ao frmaco, as
tcnicas de anlise trmica so comumente utilizadas. Entre elas, destacam-se: a calorimetria
diferencial exploratria (DSC) e a termogravimetria (TG). O DSC permite a deteco
quantitativa de todos os processos que requerem ou produzem energia. Este mtodo tem
59
grande importncia nos estudos de pr-formulao, uma vez que fornece informaes sobre
possveis interaes entre os diversos componentes de uma formulao. O TG avalia a
variao de massa de uma amostra, resultado de um evento trmico. Essa variao ,
frequentemente, em funo da temperatura ou em funo do tempo, temperatura constante
(SANTOS, 2011; ROLIM, 2010).
Aps identificao inicial da matria-prima, o estudo de pr-formulao passo
conseguinte. No caso de matria-prima slida, faz-se necessrio realizar completo estudo
acerca das caractersticas reolgicas: escoamento e deformao quando submetido tenso.
Nessa fase de investigaes e desenvolvimento de formulaes, as medies reolgicas so
utilizadas para definir diversos parmetros, entre eles: velocidade de escoamento, facilidade
de deslizamento quando na maquinaria de compresso, manuteno da forma farmacutica.
Assim como os fatores intrnsecos supracitados, outras especificidades inerentes matriaprima so determinantes na composio do fenmeno da reologia, pode-se destacar: tamanho
de partcula e de poros, rea superficial e, por consequncia, propriedades de fluxo (WOOD,
2001).
A reduo do tamanho de partcula conduz ao aumento da rea de superfcie especfica
do p, ou seja, da rea de superfcie por unidade de peso. As velocidades de dissoluo, de
absoro do frmaco e a uniformidade de contedo e estabilidade da forma farmacutica so
dependentes do grau de variao do tamanho de partcula, da distribuio de tamanho e das
interaes entre as superfcies slidas (STANIFORTH, 2005).
A rea superficial dos slidos uma das principais caractersticas de ps finos. Esta
definida como a superfcie interna presente no material por unidade de massa (m2.g-1) e pode
apresentar grandes variaes em virtude da forma, tamanho da partcula e porosidade. A rea
superficial especfica inversamente proporcional ao dimetro mdio do poro. Isto , uma
grande superfcie especfica indica a presena de pequenos poros, enquanto pequenos valores
so caractersticos de materiais macroporosos de corpos no porosos (LOWELL & SHIELDS,
1991; SVAROVSKY, 1987).
O tamanho da partcula e a distribuio do tamanho de partculas tm influncia sobre
as propriedades de fluxo de um p. Os fatores que determinam tal fluidez so: tamanho da
partcula, distribuio do tamanho de partcula, morfologia da partcula, teor de umidade e
natureza higroscpica do material. Entretanto, a principal considerao o grau de
aglomerao das partculas. Partculas pequenas aderem-se muito mais fortemente entre si do
que partculas grandes, logo ps finos apresentam uma maior tendncia aglomerao. A
60
fluidez de um p aumenta com o aumento do tamanho da partcula (PORTE, LEO &

PORTE, 2011).
Diversas metodologias podem ser aplicadas para delinear caractersticas intrnsecas s
matrias-primas. Isso ainda mais importante quando se trata de insumos farmacuticos
ativos. Nesse caso, alm dos parmetros citados at ento, importante investigar: o teor de
umidade residual (principalmente em materiais slidos pulverulentos); as caractersticas das
partculas
aglomerados
e,
consequentemente,
suas
propriedades
reolgicas;
compatibilidade do frmaco com os outros componentes da formulao. Essas investigaes

fornecem os subsdios necessrios para a realizao dos passos conseguintes do setor
produtivo: os estudos de pr-formulao e de estabilidade.
O estudo de pr-formulao pode ser definido como a completa investigao das
propriedades fsico-qumicas do insumo farmacutico ativo, isolado ou combinado com os
demais excipientes que compem uma formulao. O objetivo desse estudo fornecer
informaes teis o bastante para obter formas farmacuticas seguras, estveis, eficazes e com
biodisponibilidade adequada. , talvez, a etapa limitante do desenvolvimento de produtos e
requer ateno especial de todo o setor envolvido nesse processo. Portanto, faz-se necessria a
aplicao da filosofia de quality by design, uma vez que, deve-se planejar e eliminao e/ou
reduo de interferncias e de dispndio de recursos (MORETTO & CALIXTO, 2009).
O estudo de estabilidade (EE) etapa fundamental na garantia da segurana e
qualidade de todo e qualquer medicamento. A partir desse estudo, evidncias podem ser
obtidas sobre o comportamento de um medicamento ao longo do tempo, frente influncia de
determinados fatores, tais como: temperatura, umidade, luz e oxignio reativo. Com isso,
pode-se estabelecer o prazo de validade de tal produto, bem como as condies essenciais de
transporte e armazenamento (SEHRAWAT, MAITHANI & SINGH, 2010; ICH, 2003).
Estabilidade pode ser definida como o tempo durante o qual o insumo farmacutico
ativo mantm a sua integridade fsico-qumica, dentro dos limites especificados, desde o
momento do seu fabrico at a sua estocagem e administrao. Outro conceito define
estabilidade como o perodo de tempo em qual a potncia do produto farmacutico est
reduzida a no mais que 10%, desde que os produtos oriundos dessa alterao estejam todos
qualificados e, muitas vezes, quantificados (SILVA et al, 2009; STULZER & SILVA, 2006).
Os EE devem ser realizados em condies similares s condies ambientais mdias
encontradas nos locais onde o medicamento em questo ser comercializado. Essa a
classificao harmonizada adotada por diversos rgos, como o Internation Conference on
Harmonization (ICH) (ICH, 2003).
61
No Brasil, h recente legislao sobre EE. A RDC n 45 de 9 de agosto de 2012 dispe

sobre a realizao de estudos de estabilidade de insumos farmacuticos ativos (IFA). Segundo
ela, o EE deve avaliar todas as caractersticas do IFA que so susceptveis a alteraes durante
toda a sua vida til perodo compreendido desde a fabricao e incorporao forma
farmacutica at a tomada do medicamento que o contm. Portanto, a mencionada resoluo
objetiva prever, determinar ou acompanhar a data de reteste ou prazo de validade de IFAs
(BRASIL, 2012).
Outra publicao referente estabilidade precedeu a RDC n 45. A resoluo
especfica RE 01 de 29 de julho de 2005 que revogou a resoluo RE n 398, de 12 de
novembro de 2004 , no entanto, traz em anexo o Guia para a realizao de estudos de
estabilidade, no contemplando o princpio ativo utilizado na formulao. Isso justifica a
importncia da constante atualizao da Agncia Nacional da Vigilncia Sanitria (ANVISA)
no que tange os EE e a garantia de segurana e eficcia de medicamentos. Recentemente a
ANVISA publicou a consulta pblica CP n 11, de 23 de janeiro de 2012 requisitando a
apresentao de crticas e sugestes relativas proposta de nova RDC que estabelece
parmetros para a notificao, identificao e qualificao de produtos de degradao em
medicamentos com princpios ativos sintticos e semissintticos, classificados como novos,
genricos e similares. Entretanto, at o momento, nada foi efetivado (BRASIL, 2012;
BRASIL, 2005).
Segundo a RDC n 45, A data de reteste ou prazo de validade do IFA devem ser
determinados por estudo de estabilidade de longa durao. Esses devem ser executados bem
com queles descritos pela RE 01/2005. Os EE so classificados em: acelerado, de longa
durao e de acompanhamento (BRASIL, 2012; BRASIL, 2005).
O estudo acelerado projetado para aumentar a velocidade de degradao qumica
e/ou alteraes fsicas no IFA pela utilizao de condies drsticas de armazenamento
(umidade relativa e temperatura), com o propsito de monitorar as reaes de degradao e
elucidar as condies necessrias para a execuo do estudo de longa durao. possvel
estabelecer data de reteste ou prazo de validade provisrio de no mximo 24 (vinte e quatro)
meses com resultados mnimos de seis meses de estudo acelerado ou doze meses de estudo de
longa durao (BRASIL, 2012).
O estudo de longa durao realizado em condies normais de armazenamento, com
o objetivo de confirmar dados obtidos no estudo acelerado. So projetados para verificao
das caractersticas fsicas, qumicas, biolgicas e, quando aplicveis, microbiolgicas de um
IFA. Os resultados so usados para estabelecer ou confirmar a data de reteste ou o prazo de
62
validade, alm de recomendar as condies de armazenamento. Tal estudo deve ser realizado
de acordo com as condies climticas do pas em que se pretende registrar o produto,
considerando que o mundo classificado em quatro grandes zonas. Os testes de controle de
qualidade so realizados normalmente a cada 3 meses no primeiro ano e a cada 6 meses no
segundo, a partir da data de fabricao do lote (BRASIL, 2012; BRASIL, 2005; ICH, 2003;
WHO, 1996).
O estudo de acompanhamento realizado aps concesso do registro ou notificao do
IFA, tendo por objetivo verificar a manuteno das suas caractersticas, conforme os
resultados obtidos nos estudos preliminares. Desta forma, assegura-se que o foi adotado o
controle das alteraes sofridas pela matria-prima, alm de fornecer subsdios para o
estabelecimento de novas datas de reteste (BRASIL, 2012).
Deve ser avaliada, tambm, a presena ou formao qualitativa e quantitativa de
subprodutos e/ou produtos de degradao (PD), utilizando-se metodologia adequada e
validada. Portanto, deve-se recorrer ao uso de: testes de degradao forada, testes
confirmatrios de estabilidade e mtodos indicativos de estabilidade (MIE) (BRASIL, 2012).
Os estudos de degradao forada de frmacos so definidos como testes realizados
em condies superiores quelas utilizadas em estudos de estabilidade acelerada e tm o
objetivo de avaliar a estabilidade intrnseca da molcula e fornecer informaes sobre
mecanismos de degradao e possveis subprodutos dessas reaes (ALSANTE, MARTIN &
BAERTSHI, 2003; KLICK, et al., 2005).
Tais estudos so importantes etapas dos processos de pr-formulao e de
desenvolvimento de mtodos analticos, pois ajudam a avaliar a estabilidade intrnseca de um
IFA por aplicao deliberada de estresse para forar degradao. A degradao da amostra
induzida atravs do aumento da temperatura, do aumento da umidade (quando relevante), da
exposio a condies variadas de pH ou luz UV-visvel intensa (fotoestabilidade) ou pela
adio de outros reagentes (por exemplo, cidos, bases, perxidos). Estudos de degradao
forada so descritos como testes de estresse (SEHAWAT, MAITHANI & SINGH, 2010)
A hidrlise parece ser a reao mais frequentemente observada. Isso ocorre devido a
predominncia da gua como solvente universal. Para a avaliao da instabilidade sob a
condio de hidrlise, deve ser levado em considerao o pH do meio, uma vez que ons
hidrognio e hidroxila podem acelerar ou retardar o processo de degradao. Para realizar o
estudo de estresse em condio de hidrlise cida, utiliza-se principalmente cido clordrico e
para a hidrlise bsica, hidrxido de sdio. H poucos relatos na literatura sobre a hidrlise
realizada em pH neutro. Nessa condio, a taxa de decomposio lenta, o que
63
compreensvel, pois reaes em pH neutro so no-catalticas e, portanto, podem ser

necessrios perodos muito longos sob condies de temperatura extremas, para conseguir
quantidades suficientes de produtos de degradao (SILVA, et al., 2009; SINKO, 2008;
ANSEL, LOYD & POPOVICH, 2007; SINGH & BAKSHI, 2000).
A presena de oxignio, quando ativado por traos de catalisadores, como ons
metlicos, por exemplo, leva auto-oxidao dos constituintes. A degradao oxidativa
bastante evidenciada em esterides, antibiticos, vitaminas, leos e gorduras. A oxidao
envolve a remoo de um tomo eletropositivo, radical ou eltron, ou a adio de um tomo
eletronegativo ou radical. O perxido de hidrognio utilizado para criar as condies de
estresse empregadas para o estudo de oxidao. Esse parece ser muito mais popular para o
propsito que qualquer outro agente oxidante. A concentrao de perxido utilizada varia
entre 1% a 30% (SILVA, et al., 2009; FLORENCE & ATTWOOD, 2003).
Menos frequente, a fotlise deve tambm ser levada em considerao. Estudos de
fotoestabilidade so conduzidos a fim de quantificar a extenso pelas quais as reaes
induzidas pela luz afetam as formulaes dos medicamentos. Em alguns casos, determinar os
mecanismos de fotoreaes dos frmacos e de outros componentes que compunham o produto
avaliado. Para fins de registro de IFAs, no Brasil, deve ser realizado estudo de
fotoestabilidade com o objetivo de demonstrar que a exposio luz no resulta em alteraes
significantes no princpio ativo. Nesse caso, o estudo deve prover de estudos de degradao
forada e testes confirmatrios. A no apresentao de estudo de fotoestabilidade deve vir
acompanhada de justificativa tcnica com evidncia cientfica de que o IFA ativo no sofre
degradao em presena de luz (BRASIL, 2012; PIECHOCK & THOMA, 2007).
Todas as condies de estresse iniciais so realizadas, assumindo que o frmaco seja
instvel, portanto, sujeito a receber condies mais amenas. Dependendo dos resultados
obtidos, aumenta-se ou diminui-se a concentrao das condies de reao utilizada. Para
isso, as condies foradas de degradao utilizadas durante o desenvolvimento do mtodo,
como a concentrao das solues hidrolticas e o tempo de exposio, devem ser
estabelecidas de tal forma que se obtenha um nvel de degradao desejada, em mdia 10 a
20% (SEHRAWAT, MAITHANI & SINGH, 2010; HUYNH-BA, 2009; SILVA, et al., 2009;
BAERTSCHI, 2005; SINGH & BAKSHI, 2000).
As figuras 5 e 6 (ambas adaptadas de SINGH & BAKSHI, 2000) trazem
representaes grficas de condutas que podem ser adotas para realizar estudo de degradao
forada, utilizando hidrlise e oxidao como exemplos de reaes degradativas.
64
Figura 5. Esquema representativo da metodologia de hidrlise degradativa.
Figura 6. Esquema representativo da metodologia de oxidao degradativa.
O ICH e a ANVISA regulamentam que, de acordo com a dose mxima ingeria pelos
pacientes, seja analisado a necessidade de notificao, identificao e qualificao de
produtos de degradao no decorrer dos estudos de estabilidade, de acordo com a tabela 4.
65
Tabela 4. Limites dos produtos de degradao expressos de acordo com a porcentagem de frmaco.
Dose mxima diria Limites

Limites de Notificao
Limites de Identificao
Limites de Qualificao
1g
0,10%
> 1g
0,05%
< 1mg
1,00%
1mg 10mg
0,50%
> 10mg 2g
0,20%
> 2g
0,10%
< 10mg
1,00%
10mg 100mg
0,50%
> 100mg 2g
0,20%
> 2g
0,15%
Muito pouco se conhece sobre a estabilidade e outras informaes do campo da

tecnologia farmacutica acerca do frmaco sulfato de HCQ. Oficialmente, nos compndios
oficiais britnico e americano, no h meno sobre a estabilidade da hidroxicloroquina no
que diz respeito a impurezas e produtos de degradao (BRITISH PHARMACOPOEIA,
2008; USP, 2010, pg. 2592-3). Entretanto, alguns autores evidenciaram a existncia de
substncias correlacionadas a partir de estudos de degradao forada, podendo caracterizlos, qualitativa e quantitativamente, atravs de mtodos indicativos de estabilidade.
Tnnesen e colaboradores (1988) irradiaram solues do frmaco em gua e em
isopropanol, utilizando CLAE preparativo para isolamento de impurezas. As amostras
seguiram, ento, s anlises de RMN e Espectrmetro de Massa (EM) (com ionizao por
isobutano). O isopropanol foi escolhido como o meio de reao para o isolamento dos
produtos de degradao, uma vez que os padres de degradao de hidroxicloroquina nos dois
solventes mostraram-se qualitativamente idnticos e com menor tempo de exposio. Aps
apenas 5 horas de exposio, a amostra irradiada em isopropanol apresentou cromatograma,
evidenciando quatro diferentes impurezas (IMP): IMP-2 (desetil-HCQ), IMP-3 (Ndesidroxietil-HCQ), IMP-4 (dmero de HCQ) e IMP-5 (desamina-HCQ).
Mais tarde, Dongre e colaboradores (2009) realizaram a identificao e caracterizao
de duas impurezas relacionadas sntese do frmaco: a j citada IMP-2 e a IMP-1 (HCQ-Nquaternria). A metodologia utilizada consistia em um enriquecimento das impurezas do
frmaco, submetendo-o a uma soluo de diclorometano a 30C por 48 horas. Em seguida, o
66
solvente foi retirado a partir de destilao vcuo e as impurezas seguiram a um processo de

CLAE semi-preparativo. A identificao e caracterizao das substncias foi possvel apenas
pelo uso de tcnicas hifenizadas, como CLAE-IT-MS seguida de anlise ESI-TOF e RMN
(1H, 13C, DEPT e 2D) do frmaco e das impurezas isoladas.
Mais recentemente, Saini e Gulshan (2013), em um short communication, realizaram o
primeiro estudo de degradao forada propriamente dito. Este era baseado nos guias ICH
Q1A e ICH Q1B, para a realizao dos estudos de degradao forada e de fotoestabilidade,
respectivamente. O trabalho alcanou sucesso no que se propunha: conduzir o estudo de
degradao forada, identificando todos os possveis produtos de degradao oriundos das
diferentes reaes de hidrlise, oxidao, fotlise e calor seco.
Os autores decidiram modificar as condies cromatogrficas de Dongre e
colaboradores (2009) para aumentar a resoluo dos picos, tanto do frmaco quanto das
impurezas. Praticamente todas as condies propostas apresentaram a estabilidade do
frmaco, exceto a soluo alcalina mantida nas condies de fotlise. Esta apresentou 6
produtos de degradao (Figura 7), 4 inditos (I-IV) e 2 semelhantes as estruturas de
impurezas j conhecidas. O interessante que os autores evidenciaram que os produtos de
degradao III-VI permanecem com o grupo cromforo do frmaco intacto, uma vez que eles
mantm o mesmo padro do espectro de absoro UV. O mesmo no acontece com os PD I e
II, que apresentam mudanas no grupo cromforos benzenoides. Assim, foi possvel
caracterizar a maioria dos produtos de degradao, exceto o VI, o qual ofereceu poucos
resultados no espectro de massa; sendo o III uma impureza j conhecida, enquanto os I, II, IV
e V foram novos produtos de degradao elucidados pelos autores.
Para a obteno desses resultados, os autores dispuseram das seguintes tcnicas de
caracterizao: LC-PDA, +ESI-MSn e LC-MS-TOF; sendo possvel elucidar a mais provvel
rota de degradao (Figura 8), bem como as caractersticas de estabilidade intrnseca ao
frmaco.
67
Figura 7. Estruturas da hidroxicloroquina, suas impurezas e produtos de degradao (adaptado de Saini &
Bansal, 2013).
Figura 8. Provvel rota degradativa do sulfato de hidroxicloroquina.
68
Outra forma de avaliar a estabilidade de um frmaco a termodegradao.

Frequentemente capaz de ser mensurada atravs de termogravimetria, tcnica capaz de
avaliar a relao de interdependncia da variao de massa que ocorre na amostra perda ou
ganho em funo do tempo (a dada temperatura constante) ou da temperatura
(CONCEIO, 2004).
Pertecente ao ramo das anlises trmicas, os mtodos trmicos encontram ampla
aplicao tanto no controle de qualidade quanto na pesquisa de produtos farmacuticos, tais
como: polmeros, frmacos, argilas. A termogravimetria essencialmente aplicvel quando se
deseja acompanhar variaes de massa envolvidas em um experimento e este tipo de medida
realizada utilizando-se um equipamento denominado termobalana. Esta consiste na
combinao de uma microbalana eletrnica associada a um forno e um programador linear
de temperatura, permitindo a pesagem contnua de uma amostra em funo da temperatura,
medida que a amostra aquecida ou resfriada (CONCEIO, 2004; SKOOG, HOLLER &
NIEMAN, 2002).
Com o uso de termobalanas e fornos pode-se controlar a atmosfera que circunda a
amostra. Portanto, possvel trabalhar com atmosfera esttica ou dinmica presso
ambiente, sob presso ou a vcuo. Os gases utilizados podem ser inertes (nitrognio, argnio),
oxidantes (oxignio) ou corrosivos (WENDLANT, 1986 e CONCEIO, 2004).
A perda de massa pode ser relacionada com muitos fenmenos, como desidratao,
sublimao, decomposio. Portanto, os resultados obtidos por meio da tcnica podem servir
para diferentes aplicaes, tais como: estudo de decomposio e estabilidade trmica de
frmacos, polmeros, alimentos, materiais explosivos; estudos sobre corroso de metais em
atmosfera controlada, em faixas amplas de temperatura; estudos sobre a velocidade de
evaporao de lquidos e sublimao de slidos; estudos sobre desidratao, higroscopicidade,
absoro, adsoro, desadsoro, determinao do teor de umidade, frao voltil e do teor de
cinzas de vrios materiais; estudo cintico de reaes, inclusive de reaes no estado slido e
descoberta de novos compostos qumicos; determinao da pureza e da estabilidade trmica
de reagentes analticos, inclusive padres primrios e secundrios. (IONASHIRO &
GIOLITO, 2005; CONCEIO, 2004).
Basicamente, a termogravimetria classifica-se em: dinmico, isotrmico e quase
isotrmico (WENDLANDT, 1986), conforme ilustrado pela figura 9.
No mtodo dinmico, a temperatura da amostra varia de maneira predeterminada,
preferencialmente, a uma razo de aquecimento ou resfriamento linear. tambm chamado
69
de convencional, quando se utiliza o termo termogravimetria normalmente refere-se

termogravimetria dinmica (MATOS, MERCURI & BARROS, 2011; WENDLANT, 1986).
Figura 9. Curvas tpicas dos principais mtodos termogravimtricos: (a) isotrmico; (b) Quase isotrmico e (c)
dinmico.
No mtodo isotrmico, a variao de massa da amostra registrada em funo do

tempo, mantendo-se a temperatura constante, sendo geralmente utilizado em trabalhos
cinticos (MATOS, MERCURI & BARROS, 2011; WENDLANT, 1986).
No mtodo quase-isotrmico, a partir do momento em que comea a perda de massa
da amostra, a temperatura mantida constante at que a massa se estabilize novamente, neste
momento recomea-se o aquecimento e este procedimento pode ser repetido em cada etapa da
decomposio (MATOS, MERCURI & BARROS, 2011; WENDLANT, 1986).
No mtodo termogravimtico dinmico (convencional), a temperatura varia de
maneira predeterminada, preferencialmente a uma razo de aquecimento/resfriamento linear
(MATOS, MERCURI & BARROS, 2011; WENDLANT, 1986).
Essas informaes so necessrias quando se pretende estudar cinticas de
degradao. Com base nas medidas termogravimticas, pode-se avaliar a estabilidade trmica
de um frmaco. O estudo da cintica de degradao, fundamental para o estudo de frmacos e
medicamentos, foi demonstrado inicialmente por Garrett & Carper (1955). Apresenta como
objetivos obter, experimentalmente, os dados cinticos e correlacion-los, por equaes
matemticas, alm de propor mecanismos para as reaes de degradao e estabelecer
condies para acelerar ou diminuir a velocidade das reaes (MATOS, MERCURI &
BARROS, 2011; NUDELMAN, 1975).
Segundo este mtodo, os valores da constante (k) de degradao de frmacos so
obtidos plotando-se em um grfico da concentrao em funo do tempo a diferentes
temperaturas, por exemplo. Assim, os logaritmos das velocidades de reaes nas diferentes
temperaturas so plotados por sua vez, em funo das temperaturas absolutas, extrapolando-se
a linha reta resultante at a temperatura ambiente, podendo-se assim determinar a validade do
70
frmaco ou medicamento nas condies de armazenamento normais (MATOS, MERCURI &

BARROS, 2011; NUDELMAN, 1975).
Uma segunda abordagem para avaliao da estabilidade de frmacos e medicamentos
envolve a cintica no-isotrmica, introduzida por Roers em 1963. A energia de ativao, as
velocidades de reao e a previso da estabilidade so obtidas mediante a um nico
experimento programando a variao de temperatura a uma velocidade predeterminada, sendo
a temperatura e tempo relacionados, mediante a equao:
Equao 1. 1/T = 1/T0 +at
Onde T0 a temperatura inicial, T a temperatura analisada, a o recproco da constante
de velocidade de aquecimento e t o tempo. A qualquer tempo durante o experimento, a
equao de Arrhenius para o tempo zero e o tempo t pode ser expressa:
Equao 2. ln Kt = ln K0 Ea/R (1/Tt 1/T0)
Substituindo a equao 01 na Eq. 02, pode-se obter:
Equao 3. Ln Kt = ln K0 Ea/R . at
Uma vez que a temperatura est em funo do tempo, t, a determinao da
estabilidade, Kt, feita diretamente sobre a faixa de temperatura do experimento, porm
existem vrias contestaes sobre a veracidade dos dados na extrapolao para a temperatura
ambiente de constantes calculadas por este modelo cintico (MATOS, MERCURI &
BARROS, 2011).
As velocidades de reao podem classificar-se como de ordem zero, primeira ordem
ou segunda ordem, de acordo com os expoentes que afetam as concentraes dos reagentes. A
ordem de reao uma grandeza experimental, determinada a partir da lei de velocidade da
reao qumica, verificando se a concentrao de amostras retiradas no decorrer do tempo
(NUDELMAN, 1975).
A reao de ordem zero ocorre quando a velocidade de reao independente da
concentrao da substncia ativa. Nesse caso, um grfico de concentrao (C) em funo do
tempo (t) d origem a uma reta, cuja inclinao corresponde constante de velocidade da
reao (k). Quando a velocidade da reao depende da concentrao do reagente, a reao
71
segue cintica de primeira ordem, obtendo-se uma reta com a representao do logartmo
neperiano da concentrao (ln C) em funo do tempo (t). A cintica de segunda ordem
ocorre quando a velocidade de reao depende da concentrao de dois reagentes, ou a
segunda potncia da concentrao de um deles. Para esse tipo de reao, a representao do
inverso da concentrao (1/C) em funo do tempo (t) fornece uma reta (MATOS, MERCURI
& BARROS, 2011; NUDELMAN, 1975).
No h, atualmente, informaes na literatura que abordam o comportamento trmico
e a estabilidade da forma slida do sulfato de HCQ.
O desenvolvimento de mtodos analticos capazes de mensurar a estabilidade de um
frmaco frente s condies de transporte e armazenamento faz-se ainda mais necessrio
quando o frmaco em questo trata-se de uma mistura racmica.
Cerca de 25% dos agentes teraputicos so obtidos por vias sintticas e administrados
ao homem como misturas racmicas. Entretanto, as propriedades farmacocinticas dos
enantimeros podem diferir em razo da enantiosseletividade dos processos de absoro,
distribuio, metabolismo ou excreo do frmaco. Em alguns casos, as diferenas
farmacolgicas entre os enantimeros so claras, o que conduz utilizao clnica de um
nico enantimero. Por exemplo, a D-penicilamina administrado na forma do enantimero
puro para o tratamento da AR, pois seu enantiomorfo, L-penicilamina, provoca efeitos
colaterais inaceitveis, incluindo neurite ptica (IREDALE, FIEGER & WAINE, 1993).
Por ser comercializado na forma racmica, o uso do sulfato de HCQ requer ateno. A
utilizao de misturas racmicas pode contribuir para a toxicidade ou efeitos adversos do
frmaco, particularmente quando estes esto associados com ismeros farmacologicamente
menos ativos ou inativos. Exemplo prtico: a talidomida. Apenas um dos seus enantimeros
capaz de promover sedao. Quando metabolizada, a molcula sofre racemizao in vivo, e
apenas a forma mais txica absorvida, responsvel pelas famigeradas deformaes
congnitas (CARDOSO, 2006; LIMA, FRAGA & BARREIRO, 2001; CALDWELL, 1996;
CALDWELL, 1995).
Sendo a indstria farmacutica principal incentivadora dos estudos dos frmacos
quirais, essa questo passou a ser considerada no planejamento e sntese de novos produtos
farmacuticos. O uso desses frmacos enantiomericamente puros pode ser vantajoso por
possibilitar: reduo na dose administrada, simplificao na relao dose-resposta, reduo na
toxicidade devido ao ismero inativo. Faz-se ento necessrio melhor esclarecimento sobre as
propriedades fsico-qumicas e perfis estereosseletivos cinticos e dinmicos de frmacos
quirais. Por essa razo, frmacos j comercializados como racematos vm sendo resgatados
72
em exaustivos estudos buscando avaliar se h vantagem em se produzir o frmaco em seu

enantimero puro mais efetivo e/ou eficaz (CARDOSO, 2006; CALDWELL, 1995).
Portanto, o desenvolvimento de mtodos analticos capazes de separar ismeros em
concentraes conhecidas, quer seja em preparaes biolgicas ou farmacuticas, tornou-se
requisito essencial no controle de qualidade e farmacocintico (CARDOSO, 2006;
VERLEYSEN & SANDRA, 1998).
Grande parte dos estudos de separao enantiomrica, at ento, tm sido
desenvolvida empregando tcnicas de eletroforese capilar e, mais comumente, a
cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE). Para o sucesso desta ltima, trs
procedimentos podem ser utilizados: derivao quiral, adio de aditivo quiral fase mvel e
emprego da fase estacionria quiral (coluna quiral). (WANG et al., 2012; DONGRE et al.,
2009; TACHIBANA & OHNISHI, 2001; FRIED & WAINER, 1997; TNNESEN et al.,
1988).
A derivao quiral envolve a reao da mistura de enantimeros com um agente
derivatizante
quiral,
enantiomericamente
puro,
para
formar
dois
derivados
diastereoisomricos. Os diastereoismeros podem, ento, ser separados usando CLAE no

modo de eluio fase reversa ou fase normal. No caso do sulfato de HCQ, h trs stios de
formao de diasteroismeros: o nitrognio aromtico, o nitrognio tercirio aliftico e o
grupo hidroxila; como demonstrado na figura 10 (DONGRE et al., 2009; CARDOSO, 2006).
Figura 10. Stios de formao de diasteroismeros do sulfato de hidroxicloroquina.
O uso do (+)-di-O-acetil-L-tartrico (DATAAN) como reagente de derivatizao foi

primeiramente reportado por Lindner e colaboradores (1991). O trabalho contempla o uso de
DATAAN para a separao dos enantimeros de vrios antagonistas -adrenoceptores,
incluindo propranolol. Ao invs da funo amino, a DATAAN reage preferencialmente com o
grupo hidroxila dos -bloqueadores para formar steres, o que justifica o seu uso para o
73
sulfato de HCQ. Estudos ainda demonstram o uso de outros agentes de derivatizao, como o
S-(+)-1-(1-naftil)-isocianato de etilo e S-(+)-1-(1-fenil)-isocianato de etilo (BROCKS,
PASUTTO & JAMALI, 1992).
Na adio de aditivo quiral segundo mecanismo de separao enantiomrica , um
seletor quiral adicionado fase mvel. Os complexos diastereoisomricos transitrios
formados entre o analito e a fase mvel, acrescida do seletor quiral, tambm podem ser
separados por CLAE no modo de eluio fase reversa ou fase normal (CARDOSO, 2006;
BONATO, JABOR & GAITANI, 2005).
O mtodo que utiliza coluna quiral terceiro e ltimo mtodo aqui apresentado
parece ser o mais aplicado. O procedimento consiste em utilizar um seletor quiral
quimicamente ligado fase estacionria. Mtodos recentes utilizam a 1-glicoprotena cida
como esse agente ligado. Tal sistema capaz de interagir com os dois enantimeros do
analito, formando complexos diastereoisomricos transitrios atravs de ligaes de
hidrognio, interaes -, complexos de incluso e impedimento estrico, ocasionando,
consecutivamente, a enantiosseparao (SINGH, KEDOR-HACKMANN & SANTORO,
2006; CARDOSO, 2006; SNYDER, 1997; MCLACHLAN, TETT & CUTLER, 1992;
IREDALE & WAINER, 1992).
O grande impasse encontrado quando no desenvolvimento de mtodos analticos de
separao enantiomrica reside na obteno dos compostos isolados e com alto grau de
pureza. Substncias qumicas de referncia de frmacos, metablitos e seus respectivos
ismeros so caros ou inexistentes. Portanto, alguns estudos utilizam padres internos. OforiAdjei e colaboradores (1986) incubaram os ismeros (R) e (S) da cloroquina separadamente
com microssomas de fgado humano, in vitro, produzindo enantimeros opticamente puros de
metablitos, subsequentemente utilizados como padro.
No caso da HCQ, a mistura racmica (rac-HCQ) contm dois ismeros: (-)-(R)-HCQ e
(+)-(S)-HCQ. A metabolizao biolgica desse frmaco promove a formao de trs
metablitos ativos principais: desetilcloroquina (DCQ), desetilhidroxicloroquina (DHCQ) e
bisdesetilcloroquina (BDCQ), todos eles, compostos quirais (DUCHARME et al., 1995; WEI
et al., 1995; IREDALE, FIEGER & WAINE, 1993; McCHESNEY, 1983).
Os mtodos descritos para a anlise enantiosseletiva da HCQ e de seus principais
metablitos, utilizando tcnicas por CLAE, apresentam duas etapas de anlise. Os analitos
compreendem: preparaes farmacuticas, urina, plasma e sangue total.
Por se tratar de uma mistura racmica, no observada rotao lquida da luz
polarizada no plano quando um polarmetro utilizado. Este aparelho mede o efeito da luz
74
plano-polarizada sobre compostos opticamente ativos. O princpio da tcnica baseado na

interao do equipamento com um campo eltrico, de modo que o campo eltrico da luz que
emerge do polarmetro est oscilando em apenas um plano (SOLOMONS & FRYHLE, 2005).
3.2 Quality by design
Quality by Design (QbD) foi descrito pela primeira vez por Juran & Godfrei (1998) e
aplicado principalmente na indstria automotiva. A premissa fundamental do QbD o
delineamento da qualidade por meio de uma estratgia de otimizao visando estabelecer
completa compreenso da resposta do sistema de qualidade para determinadas variveis.
Outro objetivo monitorar a continuidade da qualidade, elaborando estratgias de controle
para assegurar cotidianamente essa qualidade.
Recentemente, o United States Food and Drugs Administration (FDA) atentou-se
necessidade de se harmonizar um estado desejado da qualidade. Em 2003, Bruxelas, o
International Conference on Harmonisation (ICH) firmou um acordo que abordava a criao
de um sistema de qualidade farmacutica harmonizada aplicvel em todo o ciclo de vida do
produto enfatizando uma abordagem integrada para a gesto de riscos de qualidade e cincia.
Assim, em 2004, o guia foi lanado consulta pblica (ICH, 2009; ECA, 2005).
Visando o desenvolvimento inteligente da indstria farmacutica, a FDA inicia a
defesa da metodologia do QbD na rea farmacutica publicando, em 2008, o ICH Q8(R1)
Guideline for Industry. Pharmaceutical Development (ICH, 2008).
Dois anos mais tarde, uma reviso publicada. A ICH-Q8(R2) Guideline for
Industry Pharmaceutical Development apresenta a possibilidade de usar o conhecimento
adquirido atravs da aplicao de mtodos cientficos e da gesto de riscos de qualidade para
o desenvolvimento eficaz de um produto e do seu processo de fabricao. Junto a ICHQ8(R2), mais duas publicaes contriburam para o incremento do desenvolvimento racional
e tecnolgico de medicamentos: a ICH-Q9 Quality Risk Management e a ICH-Q10
Pharmaceutical Quality System. A aplicao do conceito de QbD adicionando princpios
cientficos na obteno de novas formulaes proporciona compreenso total das
propriedades das matrias-primas utilizadas e dos produtos acabados (ICH, 2009; ICH, 2008;
ICH, 2005).
As diretrizes contemplam ainda o conceito de Design Space: o estabelecimento de
combinaes e/ou interaes multidimensionais das variveis de um processo e de seus
75
parmetros, visando proporcionar a garantia de qualidade. Este espao virtual de concepo

a gama de parmetros investigados, que se demonstraram viveis e capazes de obter
produtos/mtodos eficazes. A FDA recomenda que o design space deve ser determinado a
partir da combinao de, pelo menos, trs variveis. Para isso, o Design of Experiments (DoE)
deve ser utilizado visando determinar o impacto de vrios fatores e a sua interao. Em
comparao com o mtodo tradicional um-fator-a-um-tempo , o DoE reduz drasticamente
o nmero de execues necessrias para determinar o valor ideal de cada um dos fatores. Isto
feito variando tais valores em paralelo. Esta abordagem determina no apenas os principais
efeitos de cada fator, mas tambm as interaes entre os fatores, o que muitas vezes a chave
para grandes avanos (ICH, 2009; BARKER, 2005).
A aplicao do conceito de QbD bastante abrangente. Ele fornece importantes
diretrizes a respeito da modelagem da influncia das variveis da qualidade, do design de
experimentos e o aprimoramento contnuo de processos enquanto informaes acerca desse
so colhidas (ICH, 2009; BARKER, 2005).
Diversas crticas so feitas a essa aplicabilidade. Muitos julgam difcil a utilizao de
tal conceito em indstrias farmacuticas, h muito, j consolidadas. Isso, talvez, deva-se
falta de informao sobre a real meta do QbD: a qualidade de um produto. Alm disso, ao
contrrio do que se pensa, a implementao de uma equipe especializada em QbD no setor
de baixo custo ou gera feedback significativamente positivo (ICH, 2009; BARKER, 2005).
Fato que merece ateno: a garantia da qualidade no deve ser aplicada apenas ao
produto final, mas tambm ao desenvolvimento e metodologia utilizadas para a confeco
deste. Recentemente, pesquisadores do setor analtico comearam a defender a extenso da
filosofia QbD para o desenvolvimento de mtodos analticos e no apenas para processos de
fabrico (ICH, 2009; BARKER, 2005).
Alguns dos conceitos so mais aplicveis que outros. Entretanto, a tecnologia moderna
e os novos guias publicados pelos compndios oficiais vm criando oportunidades de rever as
estratgias utilizadas para obteno/manuteno dos produtos/processos e para o
aperfeioamento de mtodos analticos. Portanto, a investigao dessas novas abordagens
utilizando QbD de grande valia (McBRIEN, 2010).
76
MATERIAL & MTODOS

77
4 MATERIAL E MTODOS
Os material e mtodos, utilizados durante toda a parte experimental do presente
trabalho, esto descritos a seguir.

BY DESIGN NOS ESTUDOS DE PR-FORMULAO
4.1.1 Material
O sulfato de HCQ foi adquirido da FAGRON do Brasil Farmacutica Ltda., lote
0007HS4RIICX#7 e sintetizado pela indstria Sanofi-Aventis, enquanto o padro analtico
foi adquirido da Sigma-Aldrich, lote #022M4749V.
4.1.2 Aplicao do conceito QbD no estudo de pr-formulao

Visando o delineamento da qualidade por meio de uma estratgia de otimizao,
investigaes foram estabelecidas a fim de fornecer completa compreenso da resposta para
determinadas variveis. Assim, diversas tcnicas analticas foram realizadas e, apesar de
muitas objetivarem os mesmos resultados, a inteno do presente estudo foi avaliar se h
corroborao de resultados quando se utiliza metodologias com diferentes princpios e custos.
Dessa forma, para traar o melhor e mais rentvel roteiro de atividades de execuo do estudo
de pr-formulao, a rvore decisria (Figura 11) foi proposta.
4.1.3 Caracterizao a nvel molecular

A seguir esto expostas todas as tcnicas de caracterizao fsico-qumica que
exploram a molcula a nvel molecular.
4.1.3.1 Ensaio semi-quantitativo de solubilidade
78
O ensaio de solubilidade semi-quantitativo do sulfato de HCQ foi realizado segundo a

Farmacopia Brasileira 5 Edio, onde 1 grama do frmaco foi submetido aos seguintes
solventes: gua e soluo aquosa de tampo fostato em diferentes pHs, clorofrmio, acetona,
lcool etlico, lcool metlico, n-hexano, acetonitrila.
4.1.3.2 Espectrofotometria de absoro na regio do Infravermelho (IV) com transformada de

Fourier e do Ultravioleta (UV) e Espectroscopia Raman por transformada de Fourier.
O espectro de infravermelho por transformada de Fourier foi obtido utilizando o
equipamento PerkinElmer (Spectrum 400) com dispositivo de reflectncia total atenuada
(ATR) com cristal de seleneto de zinco. As amostras a serem analisadas foram transferidas
diretamente para o compartimento do dispositivo de ATR, sendo o resultado obtido da mdia
de 16 varreduras entre 4000 a 650 cm-1 com resoluo de 4 cm-1 (CHAVES et al., 2013).
Para a obteno da varredura de 200 a 500 nm por espectrofotometria na regio UV
utilizou-se espectrofotmetro ultravioleta da marca SHIMADZU UV-2401 PC e cubetas de
quartzo de seo transversal de 1 cm.
O espectro de espalhamento Raman por transformada de Fourier foi obtido em
espectrmetro Bruker, modelo Vertex 70 acoplado ao mdulo RAM II, tendo como fonte de
excitao um laser de Nd:YAG emitindo em 1064 nm, com 150 mW de potncia de sada. A
resoluo espectral foi ajustada em 4 cm-1, e a relao sinal/rudo foi otimizada fazendo-se
100 varreduras na faixa de nmero de onda de 70 cm-1 a 4000 cm-1,com deteco em 180
graus.
4.1.3.3 Espectroscopia de Massa (EM) - MALDI-TOF

Os espectrmetros de massa do sulfato de HCQ foram obtidos em espectrmetro de
massa MALDI-TOF Autoflex III. Foi realizada a aquisio em modo refletido positivo, com
voltagem de acelerao de 19 kV e faixa de deteco massa-carga entre 200 4480. O tempo
de voo foi escolhido como mtodo analisador de massas, realizando o processamento dos
espectros em software FlexAnalysis Verso 3.0 (Bruker Daltonics). Para a elucidao de
fragmentos da molcula, mltiplas ionizaes foram efetuadas no pico majoritrio do
espectrograma de massa obtido.
79
4.1.3.4 Polarimetria
Para determinar a rotao especfica (D) do sulfato de HCQ foi utilizado o
polarmetro Jasco p-200, dotado de lmpada de sdio (589 nm), com auxlio de uma cuba de
100 mm e temperatura ambiente. O ensaio foi realizado em triplicata de solues de
concentrao a 5% (p/v).
4.1.3.5 Ressonncia magntica nuclear (RMN)

Os espectros de ressonncia magntica nuclear unidimensional (RMN-1H e
13
C) e
bidimensionais (COSY e DEPT) foram obtidos em espectrmetro Varian Unity Plus 400
MHz para H e 100 MHz para 13C, solubilizado gua deuterada (D2O).
80
Figura 11. rvore decisria para execuo do estudo de pr-formulao do sulfato de hidroxicloroquina.
FERRAZ, L. R. M. Aplicao de quality by design e tcnicas termoanalticas no estudo de pr-formulao para o desenvolvimento de formas farmacuticas base do frmaco antirreumtico sulfato de
hidroxicloroquina, 2014.
81
4.1.4 Caracterizao a nvel de partculas

exploram a molcula a nvel de partculas.
4.1.4.1 Determinao de higroscopicidade

Para determinar a capacidade de absoro de gua pelo sulfato de HCQ frente
umidade relativa (UR) do ambiente em que se encontram, procedeu-se de acordo com tcnica
descrita por Ferreira e colaboradores (2012).
Amostras de 0,5 g, em triplicata, foram acondicionadas em pesa-filtros e mantidas em
recipiente hermtico para garantir a saturao de UR constante, em temperatura ambiente. Em
seguida, as amostras foram submetidas exposio de diferentes condies de UR: 28, 65 e
95% (5%), utilizando slica gel e solues salinas de ureia e fosfato diclcico,
respectivamente, para a saturao do ambiente. Tais condies foram confirmadas atravs de
um termohigrmetro digital J.Prolab modelo SH 122.
As amostras foram analisadas nos tempos: 0, 4, 6, 8, 10, 12 e 14 dias e a porcentagem
de gua adsorvida (U%) foi calculada em relao ao peso, em gramas, da amostra seca (Ps) e
mida (Pu), atravs da equao 4.
Equao 4. U =
( u- s)
s
x100
4.1.4.2 Calorimetria Exploratria Diferencial (DSC): determinao de pureza e ponto de fuso

A curvas DSC do sulfato de HCQ e das MB foram obtidas utilizando Calormetro
Shimadzu DSC-60 interligado ao software Shimadzu TA-60WS com atmosfera de
nitrognio de 100 mL.min-1 e razo de aquecimento de 10C.min-1, na faixa de temperatura
de 25500C. As amostras foram colocadas em porta-amostra de alumina hermeticamente
fechada com massa de 5 mg ( 0,2) de frmaco e 10 mg ( 0,2) das MB. As determinaes
foram realizadas em triplicata. ndio e zinco foram utilizados para calibrar a escala de
temperatura e a resposta de entalpia.
82
4.1.4.3 Determinao de ponto de fuso por fusimetro

Para determinao do ponto de fuso, foi utilizado equipamento QUIMIS modelo
Q-340S23, srie: 08051053. Em triplicata, aumentou-se gradativamente a temperatura at
observar os processos inicial e final do evento de fuso.
4.1.4.4 Microscopia eletrnica de varredura (MEV)

A amostra foi preparada sobre dupla fita de carbono contida em suporte (stub) de
cobre e metalizada sob vcuo com a deposio de uma fina camada de ouro em equipamento
BAL-TEC modelo SCD 050. As anlises de MEV do sulfato de HCQ foram obtidas por
microscpio eletrnico de varredura da JOEL, modelo JSM-5900, utilizando aumentos de
300 e 750 vezes.
4.1.4.5 Difrao de raios-X (DRX)

A anlise de DRX do sulfato de HCQ foi realizada em difratmetro D5000 da
SIEMENS, equipado com nodo de cobre a uma velocidade de varredura de 1,2.min -1, na
faixa do ngulo 2 de 5 - 45.
4.1.4.6 Termogravimetria (TG)

A fim de evidenciar o comportamento trmico das amostras analisadas, as curvas TG
foram realizadas por meio de termobalana Shimadzu, modelo TGA Q60, em atmosfera de
nitrognio em fluxo de 100 mL.min-1, sendo a massa da amostra cerca de 5 mg ( 0,05) para o
sulfato de HCQ isolado, acondicionadas em cadinho de platina na faixa de temperatura de 25
a 600C na razo de aquecimento de 10C.min-1. Antes dos ensaios, a termobalana foi
verificada com oxalato de zinco.
83
4.1.4.7 Estudo de dissoluo intrnseca

O estudo de dissoluo intrnseca do frmaco foi realizado atravs de adaptaes
metodologia referente ao teor do frmaco contido na forma farmacutica slida, descrita em
monografia especfica na Farmacopeia Americana (USP 36 NF 31, 2013). As alteraes
consistiram em: uso do mtodo otimizado no presente estudo e utilizao de solues aquosas
em diferentes pHs como meio de dissoluo. A ideia foi aplicar o conceito QbD
observao das variaes-respostas e simular a condio do trato gastrointestinal, por meio
de preparao de solues com pHs: 1,2; 6,6; 7,0; 8,0 ( 0,2) (MANADAS,
INA &
VEIGA, 2002); afim de mimetizar condies fisiolgicas. Foi utilizado equipamento

dissolutor Varian, modelo VK 7010 e VK 750 e aparato p, bem como descrito pela
Farmacopeia Americana (USP 36 NF 31, 2013). As anlises foram procedidas com
amostras de 200 mg de sulfato de HCQ, com tamanho de partcula entre 60 e 100 m. Essa
situao satisfaz a condio sink, j que, durante todo o ensaio, a concentrao do meio
permanece em uma faixa de saturao de 10-15%. Nos intervalos de coleta (5, 15, 30, 45 e 60
minutos); alquotas de 5 mL foram retiradas e filtradas (em papel-filtro com tamanho de poro
45 m) para determinao do teor dissolvido segundo o mtodo analtico previamente
otimizado.
4.1.4.8 Ensaio quantitativo de solubilidade

A solubilidade do frmaco foi avaliada em meios aquosos e em diferentes pHs,
baseando-se na mesma premissa descrita no estudo de dissoluo aparente (subitem 2.4.7). A
quantificao foi realizada por meio de mtodo otimizado no presente estudo, por CLAEDAD. Amostra de sulfato de HCQ foi continuadamente depositada em tubos de ensaio at
formao de corpo de fundo persistente e aquecida com o auxlio de um equipamento banhomaria, com agitao e temperatura controladas (60 rpm e 25C). Ao final da anlise, a mistura
foi filtrada em papel-filtro com tamanho de poro 45 m e, a soluo saturada, submetida
determinao de teor.
84
4.1.5 Caracterizao a nvel de aglomerados de partculas

exploram a molcula a nvel de aglomerado de partculas.
4.1.5.1 Descrio, tamanho de partcula e anlise morfolgica

A matria-prima foi visualizada a olho nu, para verificao do aspecto e cor. Para a
determinao da distribuio do tamanho das partculas foi utilizado equipamento Tamizador
Bertel. O ensaio foi realizado em triplicata e seguiu metodologia descrita pelos mtodos
gerais da Farmacopeia Brasileira 5 Edio. Foram utilizados tamises padronizados e
superpostos em ordem decrescente de tamanho de poro (44, 90, 150, 250, 500 e 600 m)
(BRASIL, 2010).
4.1.5.2 rea superficial e tamanho de poros

A rea superficial especfica foi obtida atravs de adsoro fsica de nitrognio sobre o
p da matria-prima, pelo mtodo Brunauer-Emmet-teller (BET). Utilizou-se analisador de
rea superficial ASAP 2440 Micrometrics, munido de software SBET. Foram pesados
aproximadamente 100 mg de sulfato de HCQ, submetidas a degaiseficao por 48 horas a
110C. A anlise se deu com temperatura de atomizao 1660C no fluxo de ar 350 mL/hora.
4.1.5.3 Propriedades de fluxo

A densidade foi determinada atravs de ensaio com 10 g da amostra em compactador
automtico (Tap Density, Varian) provido de proveta normatizada, em triplicata. O volume
inicial ocupado pelo produto foi medido, e posteriormente foram realizadas 10 compactaes
para acomodao do p. Em seguida, foram realizadas 1250 compactaes. A relao entre a
massa das amostras e o volume ocupado pelo p antes e aps a compactao determinou as
densidades aparente (dAP) e de compactao (dCP). A compressibilidade do p foi avaliada
atravs do ndice de Hausner (IH) e o ndice de Carr (IC) de acordo com as seguintes
85
equaes: IH = dCP/dAP e IC (%) = (dCP-dAP)/dCP x 100, respectivamente (ALVES et al.,

2008).
O ngulo de repouso foi medido pelo cone de p formado atravs do escoamento da
matria-prima atravs de um funil de dimenses padronizadas sobre uma superfcie plana
munida de papel milimetrado. O ngulo formado entre o cone e a superfcie foi mensurado
atravs do clculo da tangente. O tempo de escoamento foi determinado pela medida do
tempo necessrio para o escoamento de uma quantidade pr-definida de frmaco atravs do
funil, utilizando-se um cronmetro digital (ALVES et al., 2008; MARSHALL, 2001).
A determinao da distribuio do tamanho das partculas foi verificada utilizando
tamises padronizados e superpostos em ordem decrescente de tamanho de poros (44, 90, 150,
250, 500 e 600 m), montados em uma base com vibrao magntica (Tamizador Bertel ).
mamostra de
sulfato de HCQ (25 g) foi colocada no tamis superior e o conjunto foi
submetido tamisao por 15 min, em triplicata (BRASIL, 2010).
4.1.6 Caracterizao a nvel de teor de gua

exploram a molcula no que tange o teor de gua.
4.1.6.1 Perda por dessecao

A perda por dessecao foi realizada conforme metodologia descrita na monografia
especfica na Farmacopeia Americana (USP 36 NF 31, 2013). Ao fim da anlise realizada
em triplicata determinou-se a porcentagem de perda por dessecao atravs da Equao 5,
onde: Pu peso do pesa-filtro contendo a amostra antes da dessecao; Ps, o peso do pesafiltro contendo a amostra aps da dessecao e Pa, o peso da amostra.
Equao 5.
( u- s)
x100
4.1.6.2 Analisador de umidade eletrnico (termogravimetria)
86
Para analisar a umidade residual da matria-prima foi utilizado Analisador de umidade

eletrnico Sartorius (modelo MA35). Amostras de 0,5 g foram depositadas na balana do
equipamento e submetidas ao aquecimento at que o peso se observasse constante. A anlise
foi realizada em triplicata.
4.1.6.3 Determinao de gua por Karl-Fischer (mtodo volumtrico)

Para determinao de gua pelo mtodo volumtrico, foi utilizado o seguinte
equipamento: Karl Fisher Fab. QUIMIS /Mod.349.2. As anlises foram realizadas em
triplicata, conforme metodologia descrita por Vieira e colaboradores (2013).

O mtodo analtico para quantificao do sulfato de HCQ foi desenvolvido a partir de
adaptaes metodologia descrita em monografia especfica na Farmacopeia Americana
(USP 36 NF 31, 2013) referente quantificao do frmaco. A otimizao foi proposta visto
que o mtodo farmacopeico no se demonstrou reprodutivo, apresentando cromatograma com
pico bastante assimtrico. Sugere-se que o valor indesejvel do fator de cauda (diferente de 1)
se deva coeluio dos ismeros da HCQ presentes na mistura racmica. Alm disso, o
tempo de reteno de mais de 1 hora inviabiliza a utilizao do mtodo na prtica laboratorial.
Para a otimizao do mtodo analtico, foi proposto um planejamento fatorial 33, baseado nos
conceitos do QbD. O Design Space foi criado tendo o fator de cauda como resposta da
qualidade, evidenciando a condio analtica ideal o valor compreendido entre 0,98 e 1,2.
Com isso, foi possvel avaliar o impacto dos fatores e a interao entre eles. Para tal, foram
efetuadas mudanas na concentrao da composio da fase-mvel (90:10; 80:20 e 70:30 de
Fase Mvel USP:Metanol), fluxo (0,8; 1,0 e 1,2 mL) e temperatura do forno (30; 35 e 40C).
Em seguida, o mtodo foi co-validado a partir da obteno dos resultados dos parmetros:
linearidade, repetitividade, preciso intermediria e exatido.
Vale salientar que a Fase Mvel USP constituda de: gua:metanol:acetonitrila
(8:1:1), adicionada de cido fosfrico e de 1-pentanosulfonato de sdio.
87

ULTRAVIOLETA-VISVEL
PARA
DOSEAMENTO
DO
FRMACO
ANTIRREUMTICO SULFATO DE HIDROXICLOROQUINA

Os material e mtodos utilizados para o desenvolvimento e validao do mtodo
analtico de doseamento do sulfato de hidroxicloroquina esto dispostos a seguir.
4.2.1 Matria-prima, reagentes e equipamentos
Para as etapas correspondentes ao desenvolvimento do mtodo e sua validao, foram
utilizadas como matria-prima a HCQ adquirida atravs da FAGRON do Brasil
Farmacutica Ltda., lote 0007HS4RIICX#7 e sintetizado pela indstria Sanofi-Aventis,
enquanto o padro analtico foi adquirido da Sigma-Aldrich, lote # 022M4749V (Pureza
declarada de 99,78% por CLAE-DAD). Para avaliar a influncia exercida por uma mistura de
excipientes sobre o sulfato de HCQ, foi utilizado o medicamento Plaquinol (SanofiAventis). O comprimido foi pulverizado em almofariz e pistilo e o p foi utilizado para a
realizao das anlises.
Os reagentes, todos de grau analtico, foram os seguintes: cido clordrico 0,1M
(Dinmica), gua destilada (pH 7,0 5), hidrxido de sdio 0,1 M (Vetec), perxido de
hidrognio 3% (Dinmica), fosfato de clcio dibsico (Vetec), talco farmacutico (Talmag
Manesita) e amido (Corn Products). Foram utilizados: Espectrofotmetro UV-Vis Cary 300
Conc Varian, cubeta de quartzo de 10 mm de caminho ptico Varian e Espectrofotmetro
Varian Vankel-Cary 50 e Cmara de Fotoestabilidade Nova tica (modelo C242), que
consiste na associao de lmpadas UV e fluorescente com emisso de 30.000 lux e 13,33
w/m2 por hora. Em todos os parmetros foram utilizadas balanas analticas de alta preciso
(Bioprecisa) e vidrarias calibradas.
4.2.2 Desenvolvimento do mtodo por espectrofotometria de absoro na regio do UV-Vis

Toda a concepo do mtodo mtodo por espectrofotometria de absoro na regio do
UV-Vis para doseamento do sulfato de hidroxicloroquina est descrita a seguir.
88
4.2.2.1 Princpio do mtodo

Por no haver monografia especfica em compndios oficiais brasileiros, o mtodo
baseou-se no teste de identificao do frmaco por absoro ultravioleta preconizado pela
United States Pharmacopeia (USP) (USP, 2010, pg. 2592-3). Assim, foram utilizados como
parmetros iniciais a concentrao de leitura da amostra e soluo diluente especificado: 10
g.mL-1 e HCl 0,01M, respectivamente.
Para a preparao da amostra, foi utilizada a metodologia descrita pela Farmacopeia
Americana (USP 36) para o mtodo de doseamento do sulfato de HCQ na forma
farmacutica, por CLAE-DAD. Para alcanar a concentrao de leitura (10 g.mL-1) deviam
ser realizadas duas sucessivas diluies, o que pode ser a origem de erros aleatrios. Para a
anlise da absorbncia foram realizadas varreduras espectrofotomtricas na faixa de 200 a 700
cm-1, em triplicata, das solues amostras.
O preparo da amostra demonstrou-se como o primeiro ponto critico para garantia de
seguridade analtica: a realizao de 2 diluies requer um maior tempo de execuo do
experimento e pode acarretar em maior nmero de erros analticos. No intuito de contornar
esse problema, foi realizada uma comparao estatstica (atravs de teste t-Student) entre as
duas sucessivas diluies (1:20 seguido de 1:5) e apenas uma diluio direta (1:100) para
alcanar a concentrao de leitura (10 g.mL-1).
O restante do processo de otimizao foi proposto para avaliar a real necessidade da
agitao atravs de banho ultrassnico e do uso de HCl 0,01M como soluo diluente,
condies essas preconizadas pela monografia especfica do frmaco na Farmacopeia
Americana (USP 36 NF 31, 2013).
A partir do teste de identificao da Farmacopeia Americana foi realizada uma anlise
comparativa do doseamento nas seguintes condies: com (durante 15 min) e sem agitao
em banho ultrassnico com o intuito de diminuir o tempo experimental do mtodo analtico e
reduzir custos operacionais devido ao uso do equipamento. Em seguida, foi testada a variao
da soluo diluente utilizada (HCl 0,01 M e gua destilada) visto que a utilizao de gua
possibilitaria economia de tempo, de reagentes utilizados e a no produo de resduos
analticos.
Para realizar o menor nmero de experimentos possvel e de maneira simples e
organizada foram aplicados conceitos de QbD e DoE. Com isso, foi proposto um
planejamento fatorial 22 visando avaliar a influncia de uma determinada varivel sobre a
preciso do mtodo. O mtodo apresenta dois fatores principais (agitao e soluo diluente)
89
e, consequentemente, a esses so aplicados dois nveis (com e sem agitao e utilizao de

gua e HCl como soluo diluente, respectivamente). A organizao do planejamento fatorial
est demonstrada na tabela 5.
Tabela 5. Organizao do planejamento fatorial 22
Fatores
Nveis
+
Soluo diluente gua destilada

Sonicao
15 minutos
HCl 0,01M
Ausncia de Agitao
A fim de avaliar a influncia das variveis no experimento, bem como a interao

entre elas, foi selecionada a utilizao do grfico de Pareto como ferramenta. Todos os
resultados foram expressos no intervalo de confiana de 95%.
4.2.2.2 Preparo da soluo-amostra

As amostras de sulfato de HCQ matria-prima foram analiticamente pesadas e
solubilizadas em HCl 0,01M, obtendo-se uma concentrao de 50 g.mL-1(soluo estoque).
A esta segue uma primeira diluio (1:20), e uma segunda (1:5); visando obter a concentrao
final de 10 g.mL-1, em triplicata.
4.2.2.3 Preparo da curva de calibrao

De forma semelhante ao procedimento realizado para preparo da soluo amostra, o
padro analtico foi utilizado para obter a soluo estoque de 50 g.mL-1 e realizar diluies
com HCl 0,01M a fim de obter as seguintes concentraes: 8, 9, 10, 11 e 12 g mL-1. A curva
controle foi preparada a cada dia de anlise e utilizada para o clculo das concentraes.
90
4.2.4 Validao do mtodo analtico desenvolvido

Uma vez desenvolvido o mtodo analtico de quantificao do sulfato de HCQ, foram
avaliados os seguintes parmetros: seletividade, robustez, linearidade, limite de deteco,
limite de quantificao, preciso e exatido. Tais parmetros foram avaliados de acordo com
as normas estabelecidas pelo ICH Q2A e Q2B e pela RE n 899 de 2003 (ANVISA), uma vez
que este trabalho encontra-se classificado como mtodo analtico para determinao
quantitativa. O nvel de confiana dos resultados obtidos foi observado pelos seguintes
tratamentos: coeficiente de variao (CV%) inferior a 5% e anlises estatsticas atravs de
teste t-Student, ANOVA One-Way e Two-Way, quando aplicvel.
4.2.4.1 Especificidade/Seletividade
A seletividade e/ou especificidade de um mtodo garante que a quantificao do
analito de interesse no seja afetada pela presena de metablitos, produtos de degradao,
frmacos coadministrados ou adjuvantes utilizados nas formulaes (CASSIANO et al.,
2009).
Para avaliar a seletividade, foi realizado um estudo preliminar de degradao forada
do frmaco. Para isso, as amostras foram submetidas s seguintes condies de estresse:
hidrlise cida, bsica (HCl 1M e NaOH 1M, respectivamente), oxidao (perxido de
hidrognio 5%) na proporo 3:1 soluo degradativa:amostra e fotlise (45 5C / 15
min). As solues foram mantidas em temperatura ambiente e analisadas aps 72 horas, pelo
mtodo desenvolvido e comparadas a anlise realizada por CLAE-DAD de acordo com a
monografia da Farmacopeia Americana (USP 36 NF 31, 2013).
A especificidade do mtodo foi avaliada quanto contaminao da amostra com
excipientes componentes do medicamento referncia na forma farmacutica slida
(comprimido) Plaquinol, sendo eles: amido, talco e fosfato de clcio dibsico. Todas as
misturas fsicas foram preparadas na proporo 2:1 frmaco:excipiente e as amostras foram
pesadas em relao concentrao de sulfato de HCQ.
91
4.2.4.2 Robustez
Para avaliar o comportamento do mtodo frente a pequenas e deliberadas
modificaes, os seguintes parmetros foram alternados e aplicados ao preparo da amostra
e/ou mtodo analtico: influncia da luminosidade durante o preparo da amostra por meio da
presena e ausncia de luz branca fria (por no mais que 25 minutos); estabilidade da amostra
nos tempos 0, 2 e 4 horas e comprimento de onda de leitura: 341, 342 e 343 nm, mimetizando
a possvel falta de calibrao do equipamento (CASSIANO et al., 2009).
4.2.4.3 Linearidade
A fim de analisar a capacidade do mtodo em demonstrar que os resultados obtidos
so diretamente proporcionais concentrao do analito da amostra foi realizada a regresso
linear de trs curvas autnticas, utilizando ajuste dos dados pelo mtodo dos mnimos
quadrados dos pontos mdios, em cinco concentraes diferentes: 8, 9, 10, 11 e 12 g.mL-1. A
variao mdia do estudo foi realizada com intervalo de 80 a 120% da concentrao mdia de
sulfato de HCQ.
4.2.4.4. Limite de deteco (LD) e Limite de quantificao (LQ)

O LD representa a menor concentrao da substncia em exame que pode ser
detectada com determinado limite de confiabilidade. Corresponde concentrao que produz
um sinal trs vezes maior que o nvel de rudo mdio medido com o branco ou soluo
controle. O LD foi calculado atravs da razo entre o desvio padro dos coeficientes lineares
das trs curvas de calibrao dos ensaios de linearidade e a mdia dos coeficientes angulares
das respectivas curvas multiplicado por 3. Esse mesmo princpio foi utilizado para o clculo
do LQ. Entretanto, foi considerada a razo de 10 vezes a linha de base (LEITE, 1989;
SWARTZ & KRULL, 1998; GREEN, 1996; ICH, 1995b). As duas equaes utilizadas esto
expostas a seguir (BRASIL, 2003).
Equao 6: Limite de Deteco=
3D
a
92
Equao 7: Limite de Quantificao=
10D
a
4.2.4.5 Preciso
Tal parmetro corresponde aos critrios de repetitividade, preciso intermediria e
reprodutibilidade. Neste trabalho, os trs nveis foram avaliados. A repetitividade (preciso
intra-ensaio) corresponde proximidade estatstica entre os resultados de um mesmo grupo de
amostras entre si foi realizada por meio do mesmo analista e mesmo equipamento. A preciso
intermediria (preciso inter-ensaio) corresponde concordncia dos resultados obtidos no
mesmo laboratrio, porm em dias diferentes e realizados por diferentes analistas. J a
reprodutibilidade avalia a concordncia de resultados obtidos em diferentes laboratrios e,
portanto, por diferentes analistas. A repetitividade foi verificada por seis determinaes
autnticas a 100% da concentrao do teste. O mesmo foi utilizado para a preciso
intermediria, porm essa foi realizada em diferentes dias por analistas diferentes. A
reprodutibilidade foi avaliada em dois laboratrios diferentes: o Laboratrio de Tecnologia
dos Medicamentos (LTM) e o Ncleo de Controle de Qualidade de Medicamentos e
Correlatos (NCQMC) ambos da Universidade Federal de Pernambuco (Brasil, 2003; ICH,
1995a; ICH, 1995b).
4.2.4.6 Exatido
A semelhana estatstica dos resultados obtidos em comparao a valores tericos
padro foi analisada a partir de amostras de sulfato de HCQ, matria-prima e padro analtico,
nas concentraes de 50, 100 e 150% da contrao de leitura (10 g.mL-1), em triplicata.
4.2.4.7 Aplicao do mtodo

A metodologia validada foi testada em um lote de sulfato de hidroxicloroquina
matria-prima (FAGRON do Brasil Farmacutica Ltda., lote 0007HS4RIICX #7) e em uma
marca de comprimidos industrializados: o medicamento de referncia (Plaquenol, SanofiAventis Lote 04618), reconhecido pela ANVISA (2013). Os resultados foram comparados, de
maneira semelhante, por meio do ensaio de doseamento atravs de espectrofotometria UV
93
para a matria-prima a da anlise dos comprimidos tambm, ambos descritos na Farmacopeia

Americana USP 36 (USP 36 NF 31, 2013), e constitui-se em uma variao do mtodo para
anlise da matria prima. A fim de avaliar se havia diferena entre as mdias dos teores
obtidos foi realizado tratamento estatstico teste t-Student.

HIDROXICLOROQUINA ATRAVS DE TCNICAS TERMOANALTICAS
Os material e mtodos utilizados para a realizao do estudo de compatibilidade do
frmaco sulfato de hidroxicloroquina com excipientes farmacuticos esto dispostos a seguir.
4.3.1 Material
O sulfato de HCQ foi adquirido da FAGRON, sintetizado pela indstria Chongqing,
lote SQK-120502#7 (pureza de 99,18%) Para o preparo das MB, foram utilizados os
seguintes excipientes: celulose microcristalina, talco, polivinilpirrolidona (PVP) K-30,
croscarmelose
sdica,
Starch
(amido
pr-gelatinizado),
estearato
de
magnsio,
polietilenoglicol (PEG) 4000, glicolato de amido sdico (GAS), lactose anidra (LA),
hidroxipropilmetilcelulose (HPMC) e Polyox.
As MB 1:1 (p/p) do sulfato de HCQ com os excipientes foram preparadas utilizando
almofariz e pistilo, triturando a mistura durante 3 minutos cada. As amostras foram
armazenadas em frascos0ampola.
4.3.2 Mtodo de investigao da compatibilidade frmaco:excipientes

O fluxograma apresentado na Figura 12 apresenta o protocolo utilizado para a
realizao do estudo de compatibilidade. priori, foram realizadas anlises da curva DSC do
sulfato de HCQ isolado e desta em MB. Os valores referentes temperatura inicial de fuso
(Ti) foram adotados como indicadores de interao frmaco-excipiente. Posteriormente, aps
a triagem e seleo das misturas, foram utilizadas tcnicas complementares para auxiliar na
interpretao dos resultados, dentre elas: TG, IV-TF, DR-X e avaliao da cintica de
decomposio isotrmica do sulfato de HCQ isolado e em MB.
94
4.3.3 DSC, TG/DTG, IV-TF e DR-X

Todas as anlises foram realizadas conforme metodologias descritas na PARTE
EXPERIMENTAL I.
Figura 12. Fluxograma para execuo do estudo de compatibilidade.
4.3.4 Estudo da cintica de degradao trmica do sulfato de HCQ e das MB

O estudo da cintica de degradao trmica visa a definio do prazo de validade
estimado de um material em sua forma slida.
Para a anlise da cintica de degradao e seus parmetros atravs do mtodo noisotrmico, o mtodo de Ozawa foi aplicado nas MB selecionadas, utilizando o software
apropriado instalado no equipamento TA60 Shimadzu. Os experimentos foram realizados
nas mesmas condies e equipamento utilizados na metodologia descrita na PARTE
95
EXPERIMENTAL I; nas razes de aquecimento: 2,5; 5; 10; 20 e 40C min-1 (SANTOS et al.,
2004; ARAJO et al., 2005; CIDES et al., 2006; SALVIO-NETO & MATOS, 2011).
Os mesmos software e equipamento foram utilizados para a determinao da cintica
de decomposio e seus parmetros atravs de mtodo isotrmico, a equao de Arrhenius foi
aplicada nas amostras do frmaco isolado e das MB selecionadas. Foram obtidas curvas por
meio do aquecimento das amostras at temperaturas de isotermas antecedentes ao principal
evento de degradao do frmaco isolado, definidas atravs do mtodo das tangentes e
mantidas em atmosfera de nitrognio (100 mL.min-1) durante o tempo necessrio para uma
perda de massa de 10 0,5%

EXCIPIENTES SOBRE O SULFATO DE HIDROXICLOROQUINA EM UMA
FORMA FARMACUTICA SLIDA COMPRIMIDO ATRAVS DE ESTUDO DA
CINTICA DE DEGRADAO TRMICA
Os material e mtodos utilizados para avaliar a influncia dos excipientes do
Plaquinol sobre o sulfato de hidroxicloroquina esto dispostos a seguir.
4.4.1 Material
O sulfato de HCQ foi adquirido da FAGRON, sintetizado pela indstria Chongqing,
lote SQK-120502#7 (pureza de 99,18%).
Para avaliar a influncia exercida por uma mistura de excipientes sobre o sulfato de
HCQ, foi utilizado o medicamento Plaquinol (Sanofi-Aventis) como forma farmacutica de
referncia. O comprimido revestido de 400 mg (o equivalente a 310 mg de HCQ base live)
contm: fosfato de clcio dibsico di-hidratado, lactose, amido de milho, estearato de
magnsio, hipromelose, macrogol 400 e dixido de titnio. O comprimido foi pulverizado em
almofariz e pistilo e o p foi utilizado para a realizao das anlises em relao
estequiomtrica do frmaco.
96
4.4.2 DSC, TG/DTG

Todas as anlises foram realizadas conforme metodologia adaptada descrita na
PARTE EXPERIMENTAL I. Tal adaptao corresponde a massa da amostra, calculada com
base na proporo de frmaco contida no p do comprimido (7,28 0,2 mg).
4.4.3 DSC-fotovisual
Os estudos de DSC-fotovisual foram realizados com calormetro modelo DSC-50
Shimadzu, em atmosfera de nitrognio a um fluxo de 100 mL.min-1, a uma razo de
aquecimento de 10C.min-1, at 500C. O DSC foi acoplado a um sistema fotovisual
envolvendo um Microscpio Olympus ligado a uma Cmera Sanyo modelo VCC-D520. As
amostras (2,00 mg) foram colocadas em suporte de amostras em alumnio. Em seguida, a
clula foi selada hermeticamente. A temperatura e razo de aquecimento do equipamento
DSC foram calibrados pela fuso ponto e entalpia dos padres de ndio e zinco (MACDO E
NASCIMENTO, 2001; SILVA et al., 2009).
4.4.4 Pirlise-CG/MS
Os estudos de pirlise foram conduzidos no pirolisador acoplado a um cromatgrafo
gasoso (Shimadzu, GCMS - QP5050A) diretamente ligado a um espectrmetro de massa
usando eltrons como fonte de ionizao. A fragmentao foi realizada pelo impacto
eletrnico com energia de ionizao de 70 eV . O espectrmetro foi operado no modo de
varredura, varrendo uma faixa massa de 50-600 m/z. A temperatura da fonte inica foi de
300C. A coluna capilar de 30 m de comprimento, 0,25 mm dimetro interno e 0,25 mm
tamanho de partcula foi utilizado como fase estacionria fenil:dimetilpolisiloxano (5:95). O
programa de temperatura da coluna foi o aumento da temperatura segmento, com uma taxa de
aquecimento de 15C.min-1 at a temperatura final de 280C. Hlio foi utilizado como gs de
arraste um fluxo de 1,0 mL.min- 1 com razo de diviso de 1:5. A amostra do sulfato de HCQ
no estado slido foi posto em cadinho de platina no pirolisador temperatura de 300C
durante cada experimento.
97
4.4.5 Estudo da cintica de degradao trmica das MB

O prazo de validade do sulfato de HCQ na forma farmacutica slida comprimido foi
estimado atravs do estudo cintico de degradao isotrmico e no-isotrmico conforme
metodologia descrita na PARTE EXPERIMENTAL III, item 4.3.4.
98
RESULTADOS E
DISCUSSO
99
5 RESULTADOS E DISCUSSO
Com base nos resultados obtidos, foi feita uma criteriosa discusso sobre a
consequncia dos achados. Os resultados e a discusso esto descritos a seguir.
BY DESIGN NOS ESTUDOS DE PR-FORMULAO
A seguir, esto descritos os resultados obtidos e a respectiva discusso no que tange
caracterizao fsico-qumica do sulfato de hidroxicloroquina.
5.1.1 Caracterizao a nvel molecular: Identificao qumica

A identidade do sulfato de HCQ pde ser comprovada atravs da corroborao dos
resultados obtidos das diversas metodologias aplicadas. Para isso, foram utilizadas:
espectrofotometria de absoro na regio do IV e do UV e EMMALDI-TOF, alm da anlise
de polarimetria.
Bastante utilizado como ferramenta no controle de qualidade de medicamentos, os
espectrofotmetros de IV e Raman oferecem procedimento simples e rpido capaz de
identificar pequenas diferenas estruturais entre as molculas, exceto quando estas esto
envolvidas com isomeria ptica. Assim, por se tratar de um sal de mistura racmica, a
molcula de sulfato de HCQ pode apresentar distines nas bandas caractersticas do seu
espectro.
A seleo do melhor mtodo depende do princpio da tcnica. A absoro no IV
corresponde variao do momento de dipolo da molcula, enquanto o espalhamento Raman,
variao da polarizabilidade. Dessa forma, os espectros de Raman e IV so complementares,
embora haja casos de baixa simetria molecular existam bandas nas mesmas posies, variando
somente a intensidade. Geralmente, vibraes simtricas e grupos no-polares fornecem as
bandas de espalhamento de Raman mais intensas, enquanto vibraes assimtricas e grupos
polares fornecem bandas de absoro mais intensas no IV (STEPHENSON et al., 2001;
SPONG et al., 2004;).
100
O espectro de absoro na regio do IV do sulfato de HCQ (Figura 13.a) apresenta

picos caractersticos dos seus principais grupos funcionais. Foi possvel observar: a
deformao axial do lcool (OH) e deformaes N-H, tpicas de aminas secundrias e
tercirias; as bandas referentes aos estiramentos das ligaes CH esto na regio
compreendida entre 3100 e 2500 cm-1, estando sobrepostas por uma banda alargada referente
a interaes intermoleculares entre as ligaes de hidrognio; as bandas especficas
relacionadas s deformaes smetrica e assimtrica (S=O, oriundas do sulfato); alm do pico
caracterstico do halognio ligado ao tomo de carbono (C-Cl). No foi possvel distinguir e
especificar as bandas especficas de hidrognios aromticos e da deformao axial da ligao
C-N, devido intensa sobreposio de picos (regio entre 950 1150 cm-1). A tabela 6 mostra
as principais bandas relacionadas aos respectivos tipos de vibrao da ligao, regio esperada
e grupos funcionais. A enumerao correlaciona os valores das bandas e suas respectivas
posies no espectro.
Tabela 6. Correlao entre as bandas, tipos de vibrao da ligao e seus respectivos grupos funcionais, obtido
do espectrograma de infravermelho do sulfato de hidroxicloroquina.
Banda (cm-1)
Tipo de Vibrao da Ligao
Regio Esperada
Grupo Funcional
A 3202
Deformao axial OH
3584 3650 cm-1
lcool
3310 3350 cm-1
Anel heterocclico
B 3028
C 2970
Deformao axial N-H de

heterotomo
Deformao axial C-H de
compostos aromticos
2950 3100 cm-1
Deformao axial do anel

D 1611
(bandas do esqueleto) C=C e

Deformao axial assimtrica
S=O
aromtico
Compostos
1580 1670 cm-1
C=N
E 1365
Esqueleto
aromticos e
alcenos
1177 1386 cm-1
Sulfato
F 1342
Deformao axial simtrica S=O
1177 1386 cm-1
Sulfato
G 822
Deformao axial C-Cl aliftica
550 850 cm-1
Cloro
A varredura espectrofotomtica do sulfato de HCQ (Figura 13.b) mostrou 5 mximos

de absoro nos seguintes comprimentos de onda: 220, 234, 256, 330 e 342 nm. Tais valores
correspondem presena de grupos cromforos presentes na molcula. Esta ltima e maior
101
delas atribuda ao grupo quinolnico (USP 36 NF 31, 2013; ARGUELHO, ANDRADE &
STRADIOTTO, 2002).
Figura 13. (a) Espectro de absoro na regio do infravermelho e (b) Espectro de absoro na regio do
ultravioleta do sulfato de hidroxicloroquina
A interao da molcula de HCQ com o nion sulfato e com as ligaes de hidrognio

intermoleculares foi observada na regio entre 2250 2750 cm-1. O deslocamento e somao
das bandas de amina e hidroxila sugerem que as ligaes supracitadas ocorrem nesses grupos
funcionais ou, pelo menos, prximos a eles (ROLIM, 2012).
O espectro de Raman (Figura 14) foi utilizado a fim de corroborar a afirmao
supracitada. De fato, a alterao nas bandas de amina e hidroxila foi evidenciada, uma vez
que, no espectro Raman, no houve aparecimento de bandas na regio compreendida entre
2250 2750 cm-1.
Os espectros de RMN de
13
C e 1H do sulfato de HCQ possibilitaram a elucidao da
sua estrutura qumica. A partir desses resultados, foi verificada a presena de 19 tomos de
carbono com base no espectro de RMN
13
C (tabela 7). notrio que tal estrutura apresenta
dois anis aromticos, pois existem nove carbonos que apresentavam deslocamentos qumicos
caractersticos dessas estruturas. Com destaque para o deslocamento qumico dos carbonos
10, 7, 4 e 2 (acima de 137 ppm) desblindados por estarem ligados diretamente a tomos de
maior eletronegatividade.
Os resultados obtidos por RMN 13C foram confirmados por RMN 1H (tabela 7), j que,
foram observados cinco deslocamentos qumicos entre 7 e 8 ppm, relativos aos deslocamentos
de hidrognios aromticos, geralmente nesta faixa (CARAMORI & OLIVEIRA, 2009).
102
Figura 14. Espectro de Raman do sulfato de HCQ.
Tabela 7. Deslocamentos qumicos de 13C e 1H para o sulfato de HCQ dissolvido em gua deuterada (D2O)
Tipos de
13
Deslocamento
qumico (ppm)
Tipos de 1H
Deslocamento
Multiplicidade
qumico (ppm)
dos sinais
C19
7.857
C12
18.577
H2
Dubleto
C14
20.056
H5
7.7
Dubleto
C13
31.713
H8
7.18
Dubleto
C15
48.248
H6
7.05
Duplo dubleto
C11
49.495
H3
6.57
Dubleto
C18
52.051
H2
Dubleto
C16
53.670
C17
55.289
11
3.85
Multipleto
C3
98.546
17
3.72
Multipleto
C9
114.392
15-16-18
3.18
Multipleto
C6
118.343
13-14
1.7
Multipleto
C8
123.811
12
1.21
Dubleto
Aromticos
Alifticos
103
C5
126.769
C7
137.310
C4
138.635
C2
142.043
C10
154.59
19
1.17
Tripleto
A anlise dos resultados obtidos atravs dos RMNs encontra-se em consonncia com
aqueles observados por Dongre e colaboradores (2009).
O EM da HCQ (Figura 15) evidencia a ionizao positiva da base livre por ser
composta por trs grupamentos amina facilmente protonados, evidenciando um sinal com
100% de intensidade caracterstico [M + 1]+ = 336,18 m/z, j que a massa molecular do HCQ
335,17 g/mol. A fonte de ionizao utilizada foi o MALDI na frequncia de 100 Hz,
ocorrendo um fragmentao do on parente na fonte, podendo ser observado o perfil de
fragmentao pelos sinais em 318,17 m/z = [M - 16]+, 302,22 m/z = [M - 32]+, 292,16 m/z =
[M - 42]+ 247,10 m/z = [M - 87]+ relativos a fragmentao da HCQ base livre, corroborando
com a estrutura qumica da HCQ, j que demonstrou a ionizao de seus grupamentos polares
mais externos, bem como, dos ligantes das aminas secundrias.
A interpretao do conjunto de dados obtidos at ento conduziu elucidao da
molcula de HCQ base livre (figura 15).
A partir do EM mencionado acima, decidiu-se conhecer os possveis produtos de
degradao atravs de mltipla ionizao do pico majoritrio. A tcnica proporcionou a
elucidao de alguns dos principais fragmentos da molcula do HCQ base livre (Tabela 8).
104
Figura 15. Espectro de massa da HCQ e estrutura qumica da hidroxicloroquina base livre com enumerao de
carbonos.
Tabela 8. Fragmentos da hidroxicloroquina base livre obtidos atravs de mltipla ionizao do

pico majoritrio.
Frmula Estrutural Massa Molecular
C18H28N3O+
302,22
C16H23ClN3+
292,16
Estrutura
105
C14H16ClN2+
247,10
C18H25ClN3+
318,17
Os resultados da anlise de polarimetria confirmaram a natureza da mistura racmica

do material. O resultado para a rotao especfica (D=0,03) evidencia que no h desvio
algum da luz polarizada, comprovando a proporo equimolar dos ismeros da HCQ
(SOLOMONS & FRYHLE, 2005).
Em relao identificao da molcula quanto a sua solubilidade em determinados
solventes, foi observado atravs do ensaio de solubilidade semi-quantitativo que o sulfato de
HCQ apresenta problemas de solubilidade em solventes orgnicos. Em contrapartida,
facilmente solvel em gua e em solues aquosas com pH entre 2,0 e 8,0; como visto na
Tabela 9.
Tabela 9. Solubilidade do sulfato de hidroxicloroquina em diferentes solventes e pHs.
Solventes
Volume Utilizado
Solubilidade
gua
< 1 mL
Facilmente Solvel
Soluo pH 2
< 1 mL
Facilmente Solvel
Soluo pH 6,6
< 1 mL
Facilmente Solvel
Soluo pH 7,0
< 1 mL
Facilmente Solvel
Soluo pH 7,6
< 1 mL
Facilmente Solvel
Soluo pH 8,0
< 1 mL
Facilmente Solvel
Alcool Metlico (metanol)
<1000 mL
Pouco Solvel
lcool Etlico (etanol)
< 1000 mL
Pouco Solvel
lcool Isoproplico
< 1000 mL
Pouco Solvel
Acetona
< 1000 mL
Pouco Solvel
106
Observada a sua alta solubilidade em gua, deve-se analisar condies e pontos

crticos durante a produo de formas farmacuticas contendo HCQ para que o frmaco
mantenha-se ntegro e estvel em locais de elevada umidade.
5.1.2 Caracterizao a nvel de partculas

A umidade um fator que influencia a estabilidade fsico-qumica e microbiolgica
dos materiais slidos. Ela assume papel significativo nas caractersticas reolgicas do produto,
essenciais no desenvolvimento de uma forma farmacutica slida. A umidade de materiais
destinados compresso ou enchimento de invlucros e em concentraes inferiores a 1%
pode afetar o comportamento destes e/ou do produto final (MARSHALL, 2001; CHAVES,
COSTA & FREITAS, 2009).
O comportamento higroscpico do sulfato de HCQ foi evidenciado em relao
porcentagem de gua adsorvida na amostra do frmaco. A figura 16 traz a representao
grfica dessa capacidade de soro/dessoro de gua durante o estudo.
Foi verificado que a adsoro de gua pelas amostras variou em funo das condies
do ambiente e do tempo de exposio.
Figura 16. Comportamento higroscpico do frmaco sulfato de hidroxicloroquina em diferentes condies de
umidade relativa do ar.
107
Na condio de 28% de UR, foi possvel identificar o equilbrio de soro e dessoro

de gua, havendo pontos onde no houve variao da porcentagem de peso. Isso se deve,
principalmente, capacidade da slica em sorver umidade. Tal resultado corrobora o hbito de
se estocar e armazenar a matria-prima em ambiente hermeticamente fechado contendo slica,
como dessecador.
Em altas condies de UR (65% e 100%), houve ganho de peso, traduzindo-se em
gua adsorvida. Os valores mximos observados foram de 1,28 e 1,81% para as condies de
65 e 95% UR, respectivamente. Entretanto, o aumento de peso no foi considerado
significativo uma vez que, mesmo em condies drsticas de UR, a quantidade residual de
umidade no foi superior preconizada pela Farmacopeia Americana USP 36 (<2%).
Vale salientar que os valores de higroscopicidade obtidos no devem ser considerados
absolutos, visto que as amostras foram expostas a condies extremas de UR, sem a proteo
de uma embalagem primria.
No presente estudo, o ponto de fuso foi determinado a fim de avaliar a pureza do
sulfato de HCQ. Para tal, duas diferentes tcnicas foram realizadas: fusimetro e DSC. De
fato, as informaes adquiridas demonstraram-se consonantes, sendo o grau de pureza
calculado pelo DSC, de maior confiabilidade.
priori, a faixa do ponto de fuso foi determinada atravs da utilizao de fusimetro.
Com o auxlio da ocular e de termmetro, pde-se observar o incio do evento endotrmico
em, aproximadamente, 238C. Logo aps ser possvel observar a fuso, ao atingir a
temperatura de cerca de 243C, o material passou a ter colorao negra, sugerindo possvel
degradao conseguinte fuso da matria-prima (figura 17.a). De fato, essa informao pde
ser corroborada por meio dos resultados obtidos da curva DSC do frmaco.
De acordo com o valor de fuso do sulfato de HCQ foi possvel determinar a pureza de
98,85 0,6% (valor de compensao de aproximadamente 8%) para este frmaco com o
auxlio do Software TA-60 verso 1.0 (Shimadzu, Kyoto, Japan). Este valor encontra-se de
acordo com o que preconiza a Farmacopeia Americana que determina uma especificao de
98 a 102% do frmaco dessecado permitindo assim a utilizao desta matria-prima (USP 36
NF 31, 2013).
A curva DSC do sulfato de hidroxicloroquina (figura 17.b) apresentou quatro eventos,
todos de natureza endotrmica. O primeiro, amplo e bastante intenso, observado na faixa de
temperatura entre 242,23-254,90C (DSCpico=244C) correspondendo ao processo de fuso do
frmaco (H= -396,51 J.g-1). O evento de fuso do frmaco incompleto, com a primeira
etapa de degradao sobrepondo o pico de fuso, em uma faixa compreendida entre 261,88FERRAZ, L. R. M. Aplicao de quality by design e tcnicas termoanalticas no estudo de pr-formulao para o desenvolvimento de formas
108
297,55C (H= -185,85 J.g-1), sendo representado por um pico amplo de intensidade
reduzida. Nota-se que os eventos da degradao subsequentes relativos aos dois ltimos
eventos de perda de massa so tambm endotrmicos e evidenciados pela primeira derivada
da curva termogravimtrica. O terceiro e quarto eventos ocorrem nas faixas entre 290,22311,61C e 329,18-341,10C.
Figura 17. a) Capilares utilizados no fusimetro; b) Curva DSC do sulfato de hidroxicloroquina.
a)
b)
A estrutura dos materiais slidos resultado da natureza de suas ligaes qumicas, a

qual define sua distribuio espacial. Um material cristalino, independente do tipo de ligao
encontrada no mesmo, apresenta um agrupamento ordenado de seus tomos, ons ou
molculas, que se repete nas trs dimenses. Para elucidao da estrutura cristalina do sulfato
de HCQ, tcnicas de imagem foram requeridas: DR-X e MEV.
A difrao de raios-X uma tcnica de grande versitilidade e rapidez aplicada a
amostras policristalinas. Ela permite o monitoramento de amostras quando no
desenvolvimento de produtos farmacuticos em laboratrios e o controle de qualidade
industrial, fornecendo informaes importantes sobre tamanho e estrutura dos cristais
(SANTANA, RAMOS & FABRIS, 2008).
O perfil difratomtrico (figura 18) do frmaco revelou a presena de 2 picos de maior
intensidade: 17,18 e 17,24, alm da existncia de diversos picos secundrios de menor
intensidade, evidenciando a natureza cristalina do sulfato de HCQ. Tal comportamento foi
corroborado pelas fotomicrografias obtidas por MEV (figura 19), nas quais evidenciou-se a
existncia de cristais de tamanhos irregulares com formatos predominantemente hexagonais.
109
Figura 18. Difratograma de raios-X do sulfato de hidroxicloroquina
Figura 19. Micrografias de varredura do sulfato de hidroxicloroquina com aumentos de 300 e 750 vezes.
O uso da tcnica do MEV vem se tornando mais frequente por fornecer informaes
detalhadas do estado de cristalizao. Com aumentos de at 300.000 vezes, consiste em
ferramenta importante na deteco de mudanas cristalinas em decorrncia de variaes dos
processos de sntese ou do processamento farmacutico, o que pode vir a formar outras
polimrficas do frmaco (RIBEIRO et al., 2003).
110
Esses resultados tm influncia significativa na solubilidade e permeabilidade

intrnsecas do frmaco e, principalmente, na procura por formas polimrficas. Em associao
a tcnicas analticas como DSC e TG, possvel gerar robusto dossi sobre a caracterizao
cristalina da amostra (SOARES-SORBINHO et al., 2010).
O uso da anlise termogravimtrica foi indispensvel na elucidao da degradao da
HCQ frente temperatura. A TG mede as alteraes da massa da amostra em funo do
tempo ou temperatura. Os processos de dessolvatao ou de decomposio so muitas vezes
acompanhados atravs desta anlise. A comparao dos resultados de TG e DSC, obtidos em
condies semelhantes, pode ser de grande valia para a interpretao dos processos trmicos.
A curva TG do sulfato de HCQ est apresentada na figura 20. Foram observados trs
eventos de perda de massa ao longo da anlise. O primeiro, concomitante ao final do evento
relativo fuso do frmaco, com incio em 254,78C e trmino em 278,01C resulta em uma
perda de massa de 5,56% da massa inicial (DTGpico=269,41C). O segundo, na faixa de
temperatura compreendida entre 288,55-301,16C, apresenta uma clara etapa de perda de
massa de 20,9% (DTGpico=293,62C). O terceiro e ltimo evento, observado entre 335,03378,32C, corresponde a uma perda de massa de 29,23% (DTGpico= 353,86C). Todos os
eventos de perda de massa so mais bem evidenciados com a utilizao da derivada da curva
TG (DTG).
Figura 20. Curva TG/DTG do sulfato de hidroxicloroquina.
Durante a anlise da cintica da reao sob condies no-isotermais, percebeu-se que,

com o aumento da razo de aquecimento, h o aparecimento de um novo evento. A alterao
do comportamento trmico do frmaco vista nas seguintes razes de aquecimento: 20 e 40
C.min-1, sendo mais bem evidenciado por esta ltima, razo pela qual ela foi escolhida para
caracterizar este novo evento (figura 21). O quarto evento tem seu incio em 439,85 C e
111
trmino em 460,57C, resultando em uma perda de massa de 7,53% (DTGpico= 450,83C) da

massa inicial.
Figura 21. Curva TG/DTG do sulfato de hidroxicloroquina ( = 40 /min)
A dissoluo pode ser definida como o processo pelo qual o frmaco liberado de sua
forma farmacutica e se torna disponvel para ser absorvido pelo organismo. A dissoluo do
frmaco nos fluidos gastrointestinais pr-requisito para a absoro, seguida da sua
distribuio pela circulao sistmica. Em parte, a dissoluo depende do meio que o rodeia.
Testes de dissoluo in vitro ferramenta imprescindvel para controle de qualidade em
diferentes estgios de ciclo de vida de um medicamento (AZAMI, ROA & LOBEMBERG,
2007).
Para determinar os meios a serem utilizados nos estudos de dissoluo e para conhecer
a solubilidade intrnseca do sulfato de HCQ em determinados solventes, o ensaio quantitativo
de solubilidade foi realizado.
Corroborando com o ensaio semi-quantitativo de solubilidade, foi observado que, em
gua e nas solues aquosas de diferentes pHs, as partculas apresentaram grande
solubilidade, mostrando que, mesmo em excesso, o material foi solubilizado aps o teste.
Dessa forma, foi decidido quantificar apenas o teor daquelas amostras onde o sulfato de HCQ
demonstrou-se muito pouco solvel. Os resultados esto sumarizados na tabela 10.
Diante da existncia de mtodo descrito por compndios oficiais, o presente estudo
props pequenas alteraes no pH do meio aquoso de dissoluo. Tais alteraes basearam-se
na obteno de solues-tampo capazes de simular as condies do trato gastrointestinal e
utiliz-las como meios de dissoluo (MANADAS, PINA & VEIGA, 2002). Os resultados
112
obtidos foram comparados atravs da eficincia de dissoluo (ED), calculada a partir da

equao 8 (Onde: ASC a rea sob a curva do tempo que se deseje avaliar e ATG, a rea total
do grfico).
Equao 8. ED=
(ASCt)
ATG
x100
Tabela 10. Resultados experimentais dos solventes onde o sulfato de hidroxicloroquina se apresentou pouco
solvel.
Solvente
Concentrao (g.mL-1)
Teor (%)
Acetonitrila
9,38
40,79
Acetona
13,67
59,42
lcool Metlico
4,77
20,74
lcool Etlico
6,22
27,03
lcool Isoproplico
5,49
23,88
Os resultados do estudo de dissoluo confirmaram a tima solubilidade em gua do

sulfato de HCQ, conforme mostrado pela literatura (USP 36 NF 31, 2013) e pelo presente
trabalho. Foi verificado que o pH do meio de dissoluo influenciou consideravelmente a
concentrao de frmaco dissolvida nos primeiros cinco (5) minutos. Entretanto, no intervalo
mdio do ensaio (30 minutos), os valores de todos os mtodos so bastante semelhantes,
mostrando a grande solubilidade do sulfato de HCQ (>85%). Os resultados esto sumarizados
na tabela 11.
Tabela 11. Porcentagem de sulfato de hidroxicloroquina dissolvida em solues aquosas em diferentes pHs
Porcentagem de sulfato de HCQ dissolvida

Tempo (min)
pH 1,2
pH 6,6
pH 7,0
pH 8,0
89,46
17,74
13,20
29,56
15
82,26
86,66
73,08
77,54
30
88,84
90,05
86,29
85,98
45
89,11
90,05
87,26
87,52
60
91,03
90,42
90,51
89,46
113
Devido grande semelhana dos resultados, viu-se a necessidade de avali-los de

maneira diferente, de forma tal que fosse possvel compar-los mais eficientemente. A ED foi
ento selecionada como parmetro de diferenciao. O termo ED foi primeiramente
empregado por Khan & Rhodes (1975), podendo apresentar uma gama de valores dependendo
dos intervalos de tempo escolhidos. Para que o frmaco esteja disponvel para absoro
sistmica necessrio garantir que no haja interao entre ele e os demais componentes de
uma formulao, como os excipientes, por exemplo. A ED consiste na avaliao integral
comparativa da ASC do perfil de dissoluo em relao rea representada pelo tempo total
do ensaio. Dentre as aplicabilidades da ED, pode-se destacar: verificao das caractersticas
intrnsecas do frmaco submetidos a diferentes meios; comparao entre diferentes
formulaes, no caso de estudos de bioequivalncia (MAHLE et al., 2007).
De fato, a ED possibilitou a diferenciao dos resultados (Tabela 12). Viu-se que, em
5 minutos, a ED para o pH 1,2 quase quatro vezes maior que as demais. Tambm foi
observado que em 30 minutos, os valores de ED so bastante semelhantes, confirmando a
hiptese citada acima. Assim, os resultados obtidos fornecem a informao de que o intervalo
crtico de tempo para a dissoluo do frmaco de apenas 5 minutos, valor bastante pequeno,
comprovando a grande solubilidade aquosa do sulfato de HCQ em diferentes pHs e,
principalmente, em meio cido.
Tabela 12. Eficincia de dissoluo para o sulfato de HCQ nos tempos 5 e 30 minutos.
pH ED5min (%) ED30min (%)

1,2
4,43
46,83
6,6
0,96
41,16
7,0
0,77
38,65
8,0
1,66
41,12
5.1.3 Caracterizao a nvel de aglomerados de partculas

O entendimento sobre os ps permite qualificar e quantificar fatores que no podem
ser negligenciados durante o desenvolvimento de formas farmacuticas. Isso exerce influncia
114
na alimentao uniforme das mquinas e nas propriedades fsicas e mecnicas dos

comprimidos (MARSHALL, 2001).
Na avaliao da descrio e anlise macroscpica da matria-prima, essa se
demonstrou como p branco cristalino e inodoro, conforme descrito pelo laudo do fornecedor.
Quanto caracterizao reolgica, foi observado tempo de escoamento de menos de
um (1) segundo, seguido de obteno do resultado do ngulo de repouso, de 6,28. Conforme
descrito em literatura, tais valores indicam que o material possui excelente fluxo (WELLS,
2005)
Quanto avaliao da densidade, foram obtidos os seguintes valores: 0,77 e 0,83
g/mL; para a densidade aparente e a densidade compactada, respectivamente. A partir desses
valores, possvel avaliar o nvel compressibilidade do material por meio do clculo dos
ndices de Carr (IC) e de Hausner (IH). Para o sulfato de HCQ, foram obtidos os seguintes
resultados: 1,08 e 7,22%; para IH e IC, respectivamente. Conforme descrito na literatura, h a
indicao de que a matria-prima tem bom fluxo e no necessita da incorporao de
adjuvantes deslizantes, como o aerosil 0,2%. Vale salientar que valores acima de 20% para o
IC e valores compreendidos entre 1,25 e 1,5 caracterizam fluxo ruim e carncia da adio de
deslizantes. Entretanto, os ndices acima mencionados, muitas vezes, so determinaes
pontuais e nem sempre refletem a facilidade ou velocidade da consolidao das partculas,
fator importante no desenvolvimento de formas farmacuticas slidas, uma vez que est
diretamente relacionado com o preenchimento uniforme das mquinas de compresso. Logo,
faz-se necessria a avaliao do conjunto de todas as caracterizaes fsicas obtidas para
delinear o melhor roteiro de obteno da formulao (FIESE & HAGEN, 2001; WELLS,
2005).
Por meio da distribuio granulomtrica realizada, pde-se observar que matriaprima apresenta prevalncia de suas partculas distribudas no intervalo entre 60 e 100 m
(Figura 22.a). Diante desses resultados, foi realizada avaliao da reteno em relao
passagem das partculas nos intervalos mencionados. Foi observado que o tamanho mdio das
partculas de aproximadamente 77 m (Figura 22.b). Portanto, de acordo com a
Farmacopia Brasileira 5 edio, pode-se classificar a matria-prima utilizada como um p
finssimo, visto que praticamente todas as partculas passam pelo tamis com abertura nominal
de malha de 125 m e de acordo com o grfico de barras da repartio granulomtrica que
simula uma distribuio normal da Curva de Gauss (BRASIL, 2010).
Devido ao pequeno tamanho das partculas e a relativa higroscopicidade, ambos
evidenciados no presente estudo, uma avaliao do conjunto dos resultados obtidos deve ser
115
feita. Essas situaes podem ser etapas limitantes no desenvolvimento de formas

farmacuticas slidas, principalmente comprimidos, uma vez que o material pode obstruir a
mquina compressora ou gerar problemas de uniformidade de contedo.
Figura 22. a) Repartio granulomtrica; (b) tamanho mdio de partcula do sulfato de hidroxicloroquina.
A rea superficial de partculas pode estar relacionada s propriedades fsico-qumicas

e farmacodinmicas de um insumo farmacutico ativo. Ela pode interferir, tanto na liberao
do frmaco da sua forma farmacutica, quanto nas propriedades reolgicas de materiais
pulvurulentos. O mtodo BET, utilizado para o clculo dessa rea superficial, baseia-se na
determinao do volume de nitrognio adsorvido, a diversas presses relativas, na
temperatura do nitrognio lquido (LIMA, 2000).
Os mtodos que utilizam a adsoro fsica de gases so frequentemente utilizados para
determinar a distribuio de poros de acordo com o seu tamanho. Segundo a IUPAC (The
International Union of Pure and Applied Chemistry), classifica-se o tamanho de poros como:
microporo (largura interna menor que 20 ), mesoporo (largura interna entre 20 e 500 ) ou
macroporo (largura interna maior que 500 ) (NERY et al., 2008; LIMA, 2000).
Foi observado que o sulfato de HCQ possui mesoporos por apresentar tamanho de
poro de aproximadamente 226.828 . Esse tamanho de poro adequado para a obteno de
formas farmacuticas slidas, uma vez que encontra-se na mdia de valores que indicariam
incapacidade de solubilizao devido ao pequeno tamanho de poro (microporo) e problemas
de consolidao de partculas devido grande tamanho do poro (macroporo).
Os resultados 0,73 m/g, 0.000264 e 0.000099 cm/g expressam a superfcie especfica
e volume de poros e microporos, respectivamente. Tais valores entram em consonncia com
116
os resultados obtidos na investigao das propriedades reolgicas, sugerindo que no h

necessidade da adio de adjuvantes que promovam o incremento da rea superficial e, por
consequncia, da solubilidade.
Tabela 13. Parmetros avaliados pelo ensaio de adsoro de nitrognio na determinao de superfcie especfica
e tamanho de poro do sulfato de hidroxicloroquina.
Superfcie especfica
2
Volume de
3
Volume de
BET (m /g)
poros (cm /g)
microporos (cm3/g)
0.73 m/g
0.000264 cm/g
0.000099 cm/g
Tamanho de poros ()
226.828
5.1.4 Caracterizao a nvel de teor de gua

A determinao da umidade residual em matrias-primas ensaio de grande relevncia
na produo de medicamentos. O alto teor de gua propicia a proliferao de microorganismos; possibilita a degradao de princpios ativos pelos processos de hidrlise e
influencia a qualidade farmacotcnica dos materiais slidos pulverulentos, podendo afetar, em
especial, suas caractersticas reolgicas e a estabilidade fsico-qumica (GARCIA-AMOEDO
& ALMEIDA-MURADIAN, 2002; BORGES et al., 2005).
Diversos mtodos analticos podem ser empregados na determinao de umidade
residual. O presente estudou destacou as seguintes tcnicas: determinao de perda por
dessecao, mtodo termogravimtrico atravs de TG, analisador de umidade por
infravermelho e determinao de gua pelo mtodo volumtrico (Karl Fischer).
Os resultados obtidos demonstraram-se em consonncia com aqueles preconizados
pela monografia do frmaco presente na Farmacopeia Americana, uma vez que, em todas as
anlises efetuadas, o teor de gua foi menor que 2% (USP 36 NF 31, 2013).

O sulfato de HCQ farmacologicamente ativo uma mistura racmica de dois ismeros
pticos que so quantificados sem separao quiral, havendo, ento, a co-eluio destes.
Portanto, o princpio determinante da otimizao do mtodo analtico para determinao de
teor foi o fator de cauda do pico resposta referente ao HCQ. Utilizando o fator de cauda como
117
a varivel dependente, foi realizado um planejamento fatorial 33 (Tabela 14) com os seguintes
fatores: fluxo e composio da fase mvel em combinao com a temperatura da coluna
cromatogrfica, pelo modelo de Box-Behnken.
A partir da anlise dos grficos de superfcie-resposta obtidos pelo software Statistica
verso 8.0 (StatSoft, Tulsa, USA) possvel observar as condies em que a interao entre
os fatores analisados geram picos-resposta do analito que possuem fator de cauda com valor
numrico mais prximo de 1 (indicado pelas cores verdes claro e escuro). O Design Space
est inserido dentro dos valores compreendidos entre 0,98 e 1,2 para valores de fator de
cauda, conforme ilustrados na figura 23 (a,b e c).
Esta ferramenta possibilitou a otimizao do mtodo analtico para determinao de
teor, estabelecendo como condio analtica ideal (realce na tabela 14): a temperatura de
45C, a um fluxo de FM de 0,8 mL/min, em uma proporo de 80:20 Fase Mvel:Metanol
como fase eluente.
Tabela 14. Matriz do planejamento fatorial 33 para otimizao do mtodo analtico de quantificao do sulfato de
hidroxicloroquina.
Fluxo de fase-mvel
Temperatura
Composio de fase-mvel
(mL/min)
(C)
(Fase Mvel USP:Metanol)
1,0
40
90:10
1,0
45
90:10
1,0
35
90:10
1,2
40
90:10
1,2
45
90:10
1,2
35
90:10
0,8
40
90:10
0,8
45
90:10
0,8
35
90:10
10
1,2
45
80:20
11
1,2
40
80:20
12
1,2
35
80:20
13
1,0
35
80:20
14
1,0
40
80:20
Mtodo
118
15
1,0
45
80:20
16
0,8
45
80:20
17
0,8
40
80:20
18
0,8
35
80:20
A partir deste mtodo otimizado foi possvel realizar a anlise de teor do sulfato de
HCQ, demonstrando resultado satisfatrio (99,18%) dentro do intervalo preconizado pela
monografia especfica do frmaco na Farmacopeia Americana e condizente pureza
evidenciada pela curva DSC (USP 36 NF 31, 2013).
Figura 23. Grficos de superfcie-resposta correlacionando o fator de cauda do pico resposta da HCQ ao fluxo e
composio da fase mvel bem como a temperatura da coluna cromatogrfica.
a)
119
b)
c)
120

ULTRAVIOLETA-VISVEL
PARA
DOSEAMENTO
DO
FRMACO
ANTIRREUMTICO SULFATO DE HIDROXICLOROQUINA

A seguir, esto descritos os resultados obtidos e a respectiva discusso no que tange o
mtodo desenvolvido por espectrofotometria de absoro na regio do ultravioleta-visvel
para quantificao do sulfato de hidroxicloroquina.
5.2.1 Desenvolvimento do mtodo

A varredura espectrofotomtica de sulfato de HCQ mostrou 5 mximos de absoro
nos seguintes comprimentos de onda: 220, 234, 256, 330 e 342 nm (figura 24). Tais valores
correspondem presena de grupos cromforos presentes na molcula. Esta ltima e maior
delas atribuda ao grupo quinolnico e, portanto, foi a selecionada como comprimento de
onda para a anlise das amostras (USP 36 NF 31, 2013; ARGUELHO, ANDRADE &
STRADIOTTO, 2002).
Figura 24. Espectro de absoro na regio do ultravioleta do sulfato de hidroxicloroquina.
5.2.2 Otimizao do mtodo

Toda a concepo da otimizao do mtodo est descrita a seguir.
121
5.2.2.1 Preparo da Amostra

A modificao do preparo da amostra que consiste em realizar apenas uma diluio
para alcanar a concentrao de leitura, demonstrou-se satisfatria. O teste t-Student foi
utilizado para evidenciar se houve diferena entre as mdias obtidas. Nesse caso, a hiptese
nula (H0) deve ser aceita, uma vez que o tcal foi menor que o ttab com 95% de intervalo de
confiana e 5 graus de liberdade (tabela 15). Isso implica em dizer que as mdias obtidas so
estatisticamente iguais entre si e que apenas uma diluio pode ser utilizada para o preparo da
amostra.
De fato, houve reduo no tempo gasto para preparar a amostra (de 40 min para 15
min). Tambm foi possvel evitar a insero de novos erros aleatrios oriundos de mais de
uma diluio. Isso pode ser corroborado devido a maior preciso entre as amostras preparadas
a partir de apenas uma diluio.
Tabela 15. Comparao entre os resultados obtidos das anlises realizadas com as diferentes formas de
preparao de amostra e tratamento estatstico presumindo diferentes varincias
Amostras Concentrao
Preparo da
amostra
(g/mL)
Mdia
Desvio
(g/mL)
Padro
Diluio Direta
10,90
10,96
10,94
10,93
0,033
2 Diluies
10,49
10,53
10,57
10,53
0,043
tcal
t(0,95,5)
0,0011 2,1318
5.2.2.2 Planejamento fatorial 22 para otimizao do mtodo

Para os resultados da anlise fatorial da influncia da soluo diluente e agitao em
banho ultrassnico foram obtidos os resultados descritos na tabela 16 e 17.
122
Tabela 16. Matriz do planejamento fatorial 22 do mtodo analtico de quantificao do sulfato de

hidroxicloroquina.
Ensaio
Resultado
1
Mdia Varincia
0,455 0,441 0,455
0,450
6,53.10-5
0,427 0,417 0,421
0,422
2,5.10-5
0,452 0,462 0,472
0,462
1,00.10-4
0,456 0,443 0,442
0,447
6,10.10-5
Tabela 17. Influncia dos fatores: soluo diluente e sonicao e da interao entre eles.
Nveis
Influncia
Soluo diluente -0,450 0,422 -0,462 0,477
0,0185
Sonicao
-0,450 0,462 -0,422 0,477
-0,02183
Interao
-0,462 0,450 -0,422 0,447
0,006833
Os sinais dos resultados da influncia indicam qual nvel exerce maior influncia.
Entretanto, para ser significante, o valor apresentado tem que ser maior que o limite de
significncia, calculado atravs da seguinte equao:
Equao 9: Limite de Significncia=
.2,776
O Grfico de Pareto (figura 25) evidencia os valores dos efeitos estimados,

possibilitando verificar se os mesmos so estatisticamente significativos. Aqui, o efeito to
significativo quanto mais direita da linha tracejada, pois esta corresponde ao limite de
significncia, calculado para o intervalo de confiana de 95%. Segundo o grfico, a utilizao
de gua destilada como soluo diluente o fator que exerce maior influncia sobre a preciso
do mtodo. Outra informao importante obtida do grfico a significativa influncia da
ausncia da sonicao que, como apresentado no grfico, ocorre de forma inversa, uma vez
que corresponde ao nvel negativo do fator. O valor esquerda do limite de significncia
evidencia que no h influncia significativa quando a interao entre os fatores avaliada.
123
Figura 25. Grfico de Paretto
Os resultados obtidos evidenciam as vantagens do mtodo. A no necessidade de

agitao gera economia de energia eltrica e possibilita a rpida preparao da amostra.
Assim, o mtodo torna-se mais rpido e satisfatrio. A alterao da soluo diluente de HCl
0,01M para gua destilada satisfaz alguns dos princpios da qumica verde propostos por
Anastas & Warner (1989) e Machado (2012), tais como: os princpios 1 e 2 (preveno de
resduos e mais segurana inerente quanto acidentes, respectivamente); o princpio 22
(quantificao e minimizao do uso de "utilidades", como gua e eletricidade) e o princpio
24 (monitorizao, registro e minimizao dos resduos). Com isso, evidenciamos que o
mtodo, alm de adequado, se encaixa aos conceitos de sustentabilidade.
5.2.2.3 Validao do Mtodo

A Figura 26 apresenta os espectros sobrepostos do sulfato de HCQ, da amostra de
sulfato de HCQ contaminada com excipientes constituintes da formulao slida e da prpria
forma farmacutica (comprimido Plaquinol). As varreduras evidenciaram apenas os picos
caractersticos de absoro mxima do sulfato de HCQ (220, 234, 256, 330 e 342 nm)
124
confirmando que o mtodo especfico deteco e quantificao do frmaco, mesmo que

este esteja na presena de outros compostos, como excipientes e adjuvantes farmacuticos.
Figura 26. Varreduras espectrofotomtricas da HCQ isolada, contaminada com excipientes e da forma
farmacutica comprimido Plaquinol.
Para determinao da seletividade do mtodo, foi proposta a submisso de amostras a

condies de estresse a fim de demonstrar que os produtos de degradao no interferem no
mtodo. Como previsto, as condies promoveram significativa reduo do teor das amostras
analisadas o que indica que produtos de degradao foram formados e estes, por sua vez, no
influenciam no doseamento do frmaco, j que a absorbncia obtida de cada uma das
amostras praticamente a igual quela terica calculada quando comparada a anlise
realizada por CLAE-DAD de acordo com a monografia da Farmacopeia Americana. Dessa
forma, o mtodo se apresentou sensvel o suficiente para evitar que a presena de estruturas
similares decorrentes da degradao no interfira no doseamento do sulfato de HCQ.
Os resultados dos pontos obtidos das trs curvas autnticas de amostras de sulfato de
HCQ esto evidenciados na figura 27.a). Atravs da anlise de regresso linear pelo mtodo
dos mnimos quadrados foi possvel determinar o valor do coeficiente de correlao
r2=0,99925. Esse valor indica que 99,9% da variao total em torno da mdia explicada pela
regresso, demonstrando que h uma correlao linear entre as duas variveis (absorbncia e
concentrao), uma vez que os parmetros esto dentro dos limites mnimos preconizados
(r20,99) (ICH, 1995b).
125
Tabela 18. Resultados obtidos para as anlises do parmetro seletividade
Concentrao
Condies
inicial da
amostra
Teor
Teor (%)
degradado
(%)
(g.mL-1)
Absorbncia Absorbncia
esperada
obtida
NaOH 1M
10
21,82
78,18
0,085
0,087
HCl 1M
10
34,24
65,76
0,135
0,137
H2O2
10
29,11
70,89
0,114
0,116
Fotlise
10
88,49
11,51
0,353
0,354
O grfico de disperso, mostrado na figura 27.b, demonstra que no houve falta de

ajustes no mtodo e que, portanto, h presena de poucos erros aleatrios, no evidenciando
nenhum erro sistemtico na anlise, podendo ser observado pela distribuio heterocedstica
dos pontos. Outra informao relevante apresentada pelo mesmo grfico que, pelo menos
um dos pontos toca a reta. Isso quer dizer que um dos valores obtidos nas anlises
corresponde fidedignamente aos valores de referncia (NETO, SCARMINIO & BRUNS,
2007).
Os valores dos LD e LQ foram de 0,38 e 1,27 g.mL-1, respectivamente. Tais valores
indicam que o mtodo bastante sensvel no que tange deteco e quantificao do frmaco
sem grandes interferncias do equipamento.
O mtodo mostrou-se preciso nos trs nveis avaliados: repetitividade, preciso
intermediria e reprodutibilidade (Tabela 19). No que tange repetitividade, os resultados
obtidos mostraram-se satisfatrios, apresentando a mdia de 10,94 0,13 g.mL-1 com
coeficiente de varincia de 1,15%, sendo esse valor abaixo do limite mximo preconizado
pela ANVISA (5%) (BRASIL, 2003). Quanto preciso intermediria, foi evidenciado
atravs de tratamento estatstico por ANOVA two-way, que o mtodo demonstrou-se preciso
para as anlises efetuadas por analistas diferentes tanto no mesmo dia quanto em dias
diferentes. Isso se deve ao fato de que os valores de F calculados foram sempre menores que
os F tabelados (crticos). Estes mesmos conceito e tratamento foram utilizados para evidenciar
a preciso do mtodo sobre o parmetro reprodutibilidade.
126
Figura 27. a) Grfico de regresso linear do parmetro linearidade, valor de r 2 e equao da reta b) Respectivo
grfico de disperso
a)
b)
Tabela 19. Resultados obtidos para as anlises do parmetro preciso e tratamento estatstico atravs de
coeficiente de varincia e ANOVA one-way e ANOVA two-way.
Repetitividade
1
Amostra
Mdia (g.mL-1) DP
CV (%)
10,95
10,86
11,10
11,08
10,94 0,13
1,15
10,81 10,86
Preciso Intermediria
Dia 1
Dia 2
ANOVA two-way: Analista
ANOVA two-way: Dia
Analista 1
10,58
10,51
F calculado: 1,29
F calculado: 2,84
Analista 2
10,52
10,42
F tabelado: 18,51
F tabelado: 18,51
Reprodutibilidade
1
Mdia
ANOVA one- way
LTM
10,33 10,58
10,61
10,51
10,28
10,46
10,46
F calculado: 0,38
NCQMC
10,37 10,38
10,54
10,86
10,72
10,28
10,53
F tabelado: 4,96
A exatido do mtodo foi avaliada comparando cada uma das concentraes tericas e
reais, atravs de teste t-Student presumindo varincias equivalentes. Os resultados do
parmetro mencionado esto dispostos na tabela 20.
127
Tabela 20. Resultados obtidos para as anlises do parmetro exatido e tratamento estatstico teste t-Student
presumindo varincias equivalentes.
Resultados
Concentrao
-1
Mdia (g.mL-1) DP
(g.mL )
5,07
4,92
5,05
5,01 0,08
10
9,96
9,94
9,96
9,95 0,01
15
14,98
15,13
15,05
15,05 0,07
Teste t-Student
t calculado (bi-caudal): 0,90
t tabelado (bi-caudal): 4,30
Quanto robustez, o mtodo apresentou considervel resistncia a pequenas e

deliberadas modificaes s condies efetuadas nos ensaios, uma vez que todos os F
calculados foram menores que os F tabelados ao se utilizar ANOVA One-Way como
tratamento estatstico. Os resultados das anlises esto sumarizados na tabela 21.
Tabela 21. Resultados obtidos para as anlises do parmetro robustez e tratamento estatstico atravs de ANOVA
One-Way
Parmetros
Luminosidade
Estabilidade
Comprimento
de Onda
Variveis
Tempo (hora)
Mdia (g.mL-1) DP
ANOVA One-Way
Ausncia de Luz
10,57 0,08
F calculado: 0,13
Presena de Luz
10,58 0,02
F tabelado: 7,70
10,51 0,07
10,55 0,07
10,57 0,06
341 nm
10,44 0,06
342 nm
10,62 0,13
343 nm
10,52 0,08
F calculado: 1,22
F tabelado: 7,70
F calculado: 2,12
F tabelado: 7,70
128
5.2.3 Aplicao do mtodo

Os resultados apresentados na Tabela 22 mostram que, com base nos valores obtidos
no teste t-Student, no h diferenas significativas entre o mtodo proposto e o mtodo oficial
da Farmacopeia Americana, tanto para matrias-primas quanto para a forma farmacutica,
com intervalo de confiana de 95% de significncia. Na avaliao dos teores de HCQ atravs
do mtodo proposto no presente trabalho na matria-prima comercial e comprimidos
industrializados, os valores mdios encontrados foram de 99,38 e 102,24%, respectivamente.
Segundo a Farmacopeia Americana, o sulfato de HCQ deve demonstrar um teor entre
98 a 102% para a matria-prima e entre 93 a 107% para a forma farmacutica. Desta forma,
observou-se que ambos os materiais encontram-se dentro dos limites preconizados.
Tabela 22. Resultados obtidos para o teor de HCQ na matria-prima e comprimidos e a tratamento estatstico
teste t-Student
Amostra
Mtodo proposto
Matria-prima
99,38%
Comprimido
102,24%
Mtodo oficial
tcal
ttab
98,45%
0,0355
4,3027
104,01%
3,3910
4,3027
(USP 36)

EXCIPIENTES SOBRE O SULFATO DE HIDROXICLOROQUINA EM UMA
FORMA FARMACUTICA SLIDA COMPRIMIDO ATRAVS DE ESTUDO DA
CINTICA DE DEGRADAO TRMICA
A avaliao da influncia dos excipientes sobre o sulfato de HCQ foi realizada atravs
das diferenas observadas no comportamento trmico e no estudo cintico de degradao,
comparando a matria-prima com o frmaco em uma forma farmacutica slida.
5.4.1. Estudo da cintica de decomposio do sulfato de hidroxicloroquina matria-prima
Para elucidar os parmetros cinticos, o segundo evento foi considerado o mais
importante. Para a tomada dessa deciso, foram levados em considerao dois fatores: a
integridade estrutural da molcula do princpio ativo e a magnitude da sua degradao. Por se
129
tratar de um frmaco, toda e qualquer alterao na sua estrutura qumica pode vir a causar
problemas no que tange a farmacocintica e a farmacodinmica da substncia em questo
quando essa for administrada. A degradao pode, por ventura, promover a formao de
produtos de degradao e esses, por sua vez, serem txicos. Quanto magnitude da
degradao, considerou-se como significativa uma perda de massa de no mnimo 10%, na
tentativa de transpor a informao preterida pelo ICH quando se refere ao estudo de
degradao forada de frmacos. Dessa forma, aps o segundo evento, mais de 1g (> 20%) da
massa inicial no se trata mais do frmaco ntegro, e sim, produtos volteis ou de degradao
com determinado potencial txico ou outra substncia ora com nenhuma atividade, ora com
aes de potenciao da resposta farmacolgica (ICH, 2003).
A fim de investigar as alteraes moleculares causadas pelas etapas degradativas, a
amostra foi submetida condio isotermal na temperatura de 300C (T onset) por durante 2
horas. Terminada a anlise, o resduo foi levado caracterizao atravs de FT-IR e DR-X
para a observao dos grupos funcionais e do perfil difratomtrico, respectivamente
A partir do espectro de infravermelho do resduo analisado (Figura 28.a), foi possvel
evidenciar que, ao final do segundo evento, deixa de ser possvel visualizar as bandas
referentes s deformaes axiais do grupo hidroxila e da amida pertencente ao anel
heterocclico (3584 3650 cm-1 e 3310 3350 cm-1, respectivamente); bem como a banda
resultante da interao da molcula de HCQ com o nion sulfato e com as ligaes de
hidrognio intermoleculares, que deveria ser observada na regio entre 2250 2750 cm-1. Isso
passa a descaracterizar a molcula, j que esta se trata de uma 4-aminoquinolina. Alm disso,
possvel verificar que as bandas referentes s deformaes axiais simtricas e assimtricas
do sulfato e simtrica do cloro esto ausentes, indicando que as ligaes intermoleculares so
desfeitas e que a molcula perde seu tomo de cloro que est provavelmente relacionado ao
mecanismo de reao do frmaco. A figura 28.b) ainda mostra o total desaparecimento de
picos que caracterizam a cristalinidade da molcula, evidenciando um perfil amorfo e
confirmando o fato de que no resduo no h indcios da integridade do sulfato de HCQ.
Tendo em vista todas as informaes citadas acima, concluiu-se que o segundo evento
est intimamente relacionado com a degradao do sulfato de HCQ, uma vez que possvel
observar os fenmenos mais impactantes no que tange a estabilidade da molcula e
manuteno da sua vida til.
130
Figura 28. Comparao entre o sulfato de hidroxicloroquina e o seu resduo aps ser submetido condio
isotermal na temperatura de 300C: a) Espectro de infravermelho e b) Difrao de raios-X.
A anlise de DSC-fotovisual confirmou os resultados obtidos at ento. A Figura 29.d)

mostra o incio da fuso do frmaco, estando em conformidade com a faixa prevista pelo
presente estudo e com a literatura (USP 36 NF 31, 2013). Atravs da tcnica foi possvel
consolidar a afirmao de que o primeiro evento de degradao do sulfato de HCQ sobrepe o
evento relacionado fuso do mesmo. A figura 29.k) mostra a mudana da colorao do
material, sendo mais bem visualizada pela figura 29.l). A anlise ainda evidenciou o evento de
degradao conseguinte. Na figura 29.o), o material se apresenta com diferente colorao e
aspecto. A colorao negra sugere a degradao do material, confirmada pela curva TG. J a
fluidificao sugere que tal degradao promove a perda da estrutura reticular do frmaco.
Aqui pode tambm ser observada a volatilizao do material degradado, caracterizada pela
presena de bolhas (MACDO & NASCIMENTO, 2001; SILVA et al., 2009b). Vale salientar
que essa a degradao tida como marjoritria, mais importante pela magnitude de perda de
massa e modificao da estrutura do princpio ativo. Esta foi, portanto, o evento escolhido
para o clculo dos parmetros cinticos.
A pirlise tambm foi realizada a fim de corroborar as informaes supracitadas. Para
a anlise da Pirlise-GC-MS, a temperatura de 300C foi escolhida a fim de identificar os
produtos de degradao correspondentes ao principal evento de perda de massa da molcula
do sulfato de HCQ. O pirograma obtido (Figura 30) foi utilizado para identificar a
fragmentao do frmaco decorrente da sua degradao trmica.
131
Figura 29. DSC-fotovisual do sulfato de hidroxicloroquina matria-prima.
a)
b)
c)
d)
e)
f)
g)
h)
i)
j)
k)
l)
m)
n)
o)
p)
q)
r)
Figura 30. Pirograma do sulfato de HCQ (temperatura de 300C)
A partir do EM dos principais produtos da pirlise, pode-se sugerir a presena de picos

caractersticos da molcula e seus fragmentos. A Tabela 23 sumariza tais resultados,
evidenciando: tempo de reteno, relao M/Z, nomenclatura e frmula molecular e
estrutural.
132
Tabela 23. Produtos de degradao trmica do sulfato de hidroxicloroquina obtidos atravs de pirlise-CG/MS.
Tempo
Pico
de
Relao
reteno
m/z
Nomenclatura
Frmula
molecular
Frmula estrutural
(min)
A
6,175
99
12
163
nion Sulfato
2-CloroQuinolina
SO42-
C9H5NCl
6-Cloro-8C
18,4
178
aminoquinolin
C9H7ClN2
a
4-(5-metil-4,5D
20,4
244
dihidropirroli-
C14H13ClN
1-il)-7-
cloroquinolina
3-Cloro-4-tE
21,05
246
butil-6fenilpiridazina
C14H15ClN
2
2-(7cloroquinolinaF
24,9
291
4-il)amino)-5etilamino
C16H22ClN
3
pentanto
A ausncia do pico do on molecular da HCQ base livre no EM (Figura 30) confirma
que o evento de perda de massa observado na curva TG entre 288,55-301,16C, corresponde
principal etapa degradativa do material, e que essa est intimamente relacionada com a
integridade do insumo farmacutico ativo. Logo, pode-se afirmar que, a partir de 301C, no
existe a presena de sulfato de HCQ intacto (OLIVEIRA et al., 2011; MOURA et al., 2010).
133
Alm disso, a alta intensidade relativa dos picos corrobora essa informao, uma vez que esse
fato evidencia que quase a totalidade da amostra encontra-se degradada.
A tcnica se demonstrou elucidativa ao evidenciar que o segundo evento de perda de
massa visto na curva TG do frmaco , de fato, a principal etapa de degradao trmica do
sulfato de HCQ. Alm disso, no que diz respeito identificao dos fragmentos da
decomposio trmica, foi possvel observar que os principais picos de degradao so
provenientes da quebra da HCQ base livre no grupamento quinolina, junto a pontos instveis
da molcula sujeitos quebra, o que fornece relevantes informaes sobre a estabilidade
trmica do insumo farmacutico ativo.
A partir dos parmetros cinticos, possvel sugerir a estabilidade trmica de um
material atravs de estudos cinticos realizados sob condies no-isotrmicas e isotrmicas,
atravs de diversos modelos matemticos isoconversionais integrais e/ou diferenciados.
Os parmetros cinticos: Energia de ativao (Ea), fator de frequncia (A) e a ordem
da reao (n); podem fornecer informaes sobre o mecanismo e a razo de decomposio da
reao, condies de armazenamento e, especialmente, o prazo de validade (SOVIZI, 2010;
TIA, et al., 2010; TIA, et al., 2008).
Para determinar os parmetros cinticos sob condies no-isotermais utilizou-se o
mtodo de Ozawa originado pela aproximao linear em relao ao clculo integral da
equao de Arrhenius. Os dados da cintica em condies no-isotrmicas foram
determinados traando a perda de massa em funo da temperatura de cinco curvas TG em
diferentes razes de aquecimento (2,5; 5; 10; 20 e 40 C.min-1), representado graficamente
pelo plot de Friedman (KOGA, 2013; SOVIZI, 2010).
O mtodo no-isotrmico estabelecido por Ozawa frequentemente utilizado para
determinar os parmetros de Arrhenius em condies dinmicas de razo de aquecimento. A
Ea pode ser determinada a partir de um grfico do logaritmo da razo de aquecimento em
funo do inverso da temperatura, 1/T, desde que f() (frao descomposta de um slido em
funo da temperatura) seja previamente conhecida (ARAUJO, et al., 2005; CIDES, et al.,
2006; FELIX, et al., 2009; SALVIO-NETO & MATOS, 2011; TIA, et al., 2010).
O grfico que representa as curvas TG do sulfato de HCQ isolado em diferentes razes
de aquecimento e o grfico de Ozawa (ln da razo de aquecimento em funo de 1/T) est
representado na Figura 31. Este demonstrou a evidente correlao entre as 5 razes de
aquecimento, quando o segundo evento analisado, uma vez que as retas tm coeficientes
angulares (slopes) praticamente constantes e, portanto, formam retas paralelas, o que implica
134
em dizer que a Ea constante durante todo o curso da reao, como mencionado por (TITA et
al., 2010; KOGA, 2013).
Figura 31. Curvas TG do sulfato de hidroxicloroquina obtidas a partir de razes de aquecimento crescentes (2,5,
5, 10, 20 e 40C/min) e associao com o grfico de Ozawa.
A partir da plotagem do grfico G(x) em funo do Tempo Reduzido (min) (Figura 32)
pde-se escolher o melhor mecanismo de reao para o clculo cintico do segundo evento.
Essa representao grfica promove a formao de uma linha reta e, assim, o melhor modelo
reacional pode ser escolhido atravs de tratamento estatstico de modelo de regresso linear.
Nesse caso, o segundo evento de degradao foi caracterizado como reao de primeira
ordem (n=1) por apresentar r2=0,998; mais significativo que aqueles obtidos para n=0 e n=2.
Os demais parmetros cinticos foram mensurados a partir da escolha do melhor modelo
reacional. A Ea calculada pelo mtodo de Ozawa apresentou um valor de 144,57 KJ/mol-1 e
fator de frequncia (A) de 4,910 x 1012 min-1. O restante dos valores obtidos para os demais
eventos degradativos esto sumarizadas na tabela 24.
135
Figura 32. Plotagem do grfico G(x) vs. Tempo Reduzido (min) para uma reao de 1 ordem e os
valores de energia de ativao (Ea) e fator de frequncia (A).
Tabela 24. Valores dos r2 obtidos para a regresso linear de cada ordem de reao (0, 1 e 2) para cada
etapa degradativa e seus respectivos valores dos parmetros cinticos.
Ordem da
Reao (n)
0
Evento
r2
Ea (KJ.mol-1)
A (min-1)
1 Evento
0,99671
144,57
3,755x10-12
2 Evento
0,99692
144,57
5,021x10-12
3 Evento
0,99389
144,57
6,965x10-12
1 Evento
0,99701
144,57
3,672x10-12
2 Evento
0,99718
144,57
4,910x10-12
3 Evento
0,99395
144,57
6,811x10-12
1 Evento
0,89236
161,74
2,343x10-12
2 Evento
0,95319
161,74
6,424x10-12
3 Evento
0,99804
161,74
4,103x10-13
Definida a ordem de reao como de 1 ordem, pde-se sugerir que a velocidade da

reao de degradao do segundo evento determinada pela concentrao de um de seus
reagentes. Graficamente, os resultados so representados pelo logartmo neperiano da
concentrao (ln C) em funo do tempo (t). possvel eliminar a possibilidade de se tratar
de uma reao de pseudo-primeira ordem uma vez que a cintica de degradao est sendo
avaliada no frmaco em forma slida, no em soluo. Reaes de pseudo-primeira ordem so
136
caratersticas de solues aquosas ou tamponadas contendo frmacos, isso porque a

quantidade dos reagentes que exerce a influncia tamanha (gua ou ins H+) que a sua
concentrao negligencivel (FLORENCE & ATTWOOD, 2011; NUDELMAN, 1975)
O mtodo isotrmico utiliza a mesma razo de aquecimento, porm as temperaturas
so mantidas constantes na regio de interesse (antes do incio do processo de decomposio)
para observar a cintica da reao de decomposio isotrmica no estado slido do material.
Portanto, o tempo de decomposio estimado para um determinado intervalo de perda de
massa, 10% conforme adaptaes s diretrizes do ICH (ALVES et al., 2010; ICH, 2003).
A figura 33 esquematiza os dados obtidos das isotermas utilizadas para determinar a
energia de ativao do sulfato de HCQ sob condies isotermais. Atravs do mtodo das
tangentes as seguintes temperaturas de isoterma foram selecionadas: 230, 232, 235, 237 e
240C; todas elas prvias as degradaes do frmaco (1 evento de degradao). Para
assegurar que no houvesse uma sbita degradao do frmaco e reduzir o tempo do
experimento visando reduo de custos e otimizao do tempo , uma rampa de
aquecimento foi utilizada (Tabela 25). As temperaturas foram mantidas constantes, sob uma
atmosfera controlada de nitrognio (100 mL.min-1), durante o tempo suficiente para uma
perda de massa de pelo menos 10%. Como esperado, quanto maior foi temperatura, mais
curto foi tempo necessrio para a significativa perda de massa.
Tabela 25. Rampa de aquecimento utilizada para obteno temperaturas isotermais constantes.
Razo de Aquecimento () (C.min-1)
Temperatura (C)
Tempo (min)
20
180
Temperatura de Isoterma 20C
Temperaturas de Isoterma
120
137
Figura 33. Curvas isotrmicas do sulfato de hidroxicloroquina em diferentes temperaturas mantidas constantes
em atmosfera de nitrognio (100 mL.min-1).
As mesmas curvas isotermas foram utilizadas para realizar os clculos para

determinao da ordem de reao utilizando o modelo de Arrhenius. Os dados foram plotados
e esto representados na Tabela 26. A escolha da ordem de reao se baseou no modelo
estatstico de regresso linear, atravs dos valores de coeficiente de correlao, cujo tem
maior significncia quanto mais prximo de 1 (um) ele for. Viu-se que a cintica de
degradao do sulfato de HCQ, quando em condies isotermais, segue ordem de reao 1
(r=0,963), semelhante ao apresentado nas condies no-isotermais. A corroborao dos
resultados fornece uma maior confiabilidade sobre a real aplicao dos mtodos cinticos
sobre o material (PEREIRA, 2013).
Tabela 26. Determinao da ordem de reao da cintica de degradao do sulfato de hidroxicloroquina sobre
condies isotermais
Temperatura (C)
Coeficiente de de Correlao
n=0
n=1
n=2
230
0,991
0,987
0,962
232
0,973
0,982
0,980
235
0,981
0,986
0,987
237
0,900
0,910
0,917
240
0,937
0,951
0,962
Mdia
0,956
0,963
0,962
138
Portanto, baseando-se na equao de Arrhenius obtida por intermdio do respectivo

grfico, pde-se estimar a estabilidade, em dias, do sulfato de HCQ quando mantido sob
temperatura ambiente (25C), resultando em um prazo de validade estimado em,
aproximadamente, 622 dias (20 meses). O valor obtido apesar de menor mostra certa
correlao com o prazo de validade estabelecido pelo estudo de estabilidade convencional.
Figura 34. Grfico de Arrhenius (ln t vs. 1.K-1) para a decomposio trmica do sulfato de hidroxicloroquina
matria-prima.
5.4.2 Estudo do comportamento trmico do comprimido base de sulfato de

hidroxicloroquina
A curva TG do comprimido do sulfato de HCQ est apresentada na figura 35.
Diferente do observado no comportamento trmico da matria-prima, um novo evento foi
evidenciado, com incio em 182,68C e trmino em 189,24C, resultando numa discreta perda
de massa de 1,62% da massa inicial (DTGpico=185,64). Esse comportamento parece ser
caracterstico da lactose e mais bem visualizado a partir da curva DSC. O segundo evento,
concomitante ao final do evento relativo fuso do frmaco caracterstica semelhante ao
139
observado na matria-prima , com incio em 258,17C trmino em 269,93C, resultou em

uma perda de massa de 8,92% da massa inicial (DTGpico=264,28). Foi evidenciado que tal
evento de degradao foi antecipado, havendo um aumento significativo da perda de massa
em relao matria-prima isolada, sugerindo uma possvel interao entre o frmaco e pelo
menos um dos excipientes presentes no comprimido. Os demais eventos demonstraram-se
semelhantes s faixas de temperatura obtidas quando a matria-prima foi analisada. Em
contrapartida, esses evidenciaram uma relativa proteo do frmaco, uma vez que a perda de
massa em ambos os eventos menor. Assim, pode-se sugerir que houve uma interao
frmaco-excipiente positiva. O terceiro evento, na faixa de temperatura compreendida entre
290,09-304,35C, apresentou uma perda de massa de 15,57% (DTGpico=295,40). O quarto,
bem discreto, observado entre 359,15-395,92C, correspondendo a uma perda de massa de
10,49% (DTGpico=373,40).
A curva DSC do comprimido do sulfato de HCQ apresentou o total de 4 picos (Figura
35). Sugere-se que o primeiro evento corresponde a um dos excipientes presentes na forma
farmacutica, uma vez que esta etapa no visualizada na curva DSC da matria-prima
isolada. Tal perfil apresentado de perda de massa seguida de um evento de fuso
caracterstico da lactose (desidratao seguida de sua fuso). Na curva DSC do comprimido,
ele bem definido e de baixa amplitude, na faixa de temperatura: 207,77-213,57C (H=
33,89 J.g-1). O segundo pico, relativo fuso do frmaco, tem amplitude e intensidade
significativamente menores que o pico apresentado pelo frmaco isolado, mas ele observado
praticamente na mesma faixa de temperatura, entre 237,33-252,24C. Em contrapartida, a
fuso do frmaco na curva DSC do comprimido apresenta variao de entalpia bem menor
(H= 57,93 J.g-1) comparada ao frmaco isolado. Fica claro que h certa influncia exercida
pela lactose sobre o sulfato de HCQ (MACEDO et al., 2000). O terceiro evento, de baixa
amplitude, observado entre 248,20-274,90 (H= 11,81 J.g-1) mostra claramente que o material
precisa liberar certa quantidade de energia para, s assim, haver a degradao que antecede a
calcinao do material, no evento 4 evento, compreendido entre 300,86-309,97C (H=
26,87 J.g-1). Todos os eventos vistos no comprimido foram tambm visualizados na matriaprima, no entanto, todos apresentaram menor Ea, o que pode indicar a existncia de interao
frmaco-excipiente.
140
Figura 35. Curva DSC, TG e DTG do sulfato de hidroxicloroquina (=10C.min-1)
O DSC-fotovisual do comprimido Plaquinol (Figura 36) sugeriu a existncia de uma

interao frmaco-excipiente entre o sulfato de HCQ e os excipientes utilizados na forma
farmacutica slida. A perda de massa seguida de fuso da lactose (207,77-213,57C),
bastante discreta, no pde ser evidenciada. No entanto, os eventos de fuso seguido da
degradao do sulfato de HCQ puderam ser visualizados e se mantiveram bastantes
semelhantes ao observado para o frmaco isolado (fig X.g-k), representados pelos primeiros
sinais de fluidificao da amostra seguidos de mudana da colorao branca para amarela. O
evento relativo principal degradao do frmaco, compreendida entre 248,20-274-90C (fig
X.l-q), apresentou-se menor que a faixa observada para o frmaco isolado, caracterizando um
forte indcio de que, pelo menos um dos excipientes da formulao, est exercendo uma
interao negativa sobre o frmaco. Isto pde ser visualizado pela mudana da colorao
amarela para castanho-escuro e, em seguida, negra. Entretanto, atravs da imagem, pde-se
perceber a ausncia de bolhas nesta faixa de temperatura. Este comportamento sugere a
reduo da volatilizao de material e consequente reduo da perda de massa da amostra, o
que pde ser confirmado a partir da curva TG/DTG, visto que o material foi analisado em
proporo estequiomtrica presena de frmaco na formulao. O ltimo evento de perda de
massa no pde ser visualizado na anlise, mas j possvel observar a ocorrncia de bolhas a
partir da Figura X.r), proveniente da degradao compreendida entre 300,86-309,97C,
tambm mostrando-se antecipado em relao ao mesmo evento observado no frmaco
isolado. Em suma, os resultados obtidos a partir desta anlise sugerem uma possvel interao
frmaco-excipiente negativa. Entretanto, a significativa reduo da perda de massa de todos
os eventos apresentados pela curva TG/DTG sugerem o incremento da estabilidade trmica do
141
material, mesmo que estes tenham ocorridos em faixas de temperatura inferiores quelas
observadas no frmaco isolado. Assim, os resultados experimentais obtidos atravs do estudo
cintica da degradao com consequente estimativa do prazo de validade, pde confirmar a
hiptese aqui mencionada.
Figura 36. DSC-fotovisual do comprimido Plaquinol base do sulfato de hidroxicloroquina.
5.4.3 Estudo da cintica de decomposio do sulfato de hidroxicloroquina comprimido base

de sulfato de hidroxicloroquina
Assim como na matria-prima, o grfico que representam as curvas TG do sulfato de
HCQ comprimido em diferentes razes de aquecimento e o grfico de Ozawa demonstrou
evidente correlao entre as 5 razes de aquecimento, evidenciado pelos valores constantes
dos coeficientes angulares. Nesse caso, o terceiro evento foi analisado, uma vez que esse diz
respeito ao segundo evento evidenciado pelas curvas TG da matria-prima que, por sua vez,
corresponde degradao do frmaco mais significativa.
Essas informaes caracterizam mtodo dinmico como uma forma confivel de
obteno do clculo da cintica de degradao e, por consequncia, do prazo de validade
estimado. Isso quer dizer que, apesar da associao do frmaco com os demais adjuvantes
farmacuticos, no houve aparecimento significativo de reaes paralelas, cruzadas e/ou
complexas; capaz de alterar os valores dos slopes das curvas obtidas (TITA et al., 2011;
KOGA, 2013).
A partir da plotagem do grfico G(x) em funo do Tempo Reduzido (min) (Figura 37)
foi possvel definir o terceiro evento de degradao (correspondente degradao do
142
frmaco) como de reao de segunda ordem (n=2) por apresentar r2=0,995; mais significativo
que aqueles obtidos para n entre 0 e 5. A diferena entre as ordens de reao (1 ordem para o
frmaco) reside na natureza da amostra, agora, uma mistura de ps de frmaco e excipientes,
onde a curva TG corresponde ao somatrio dos eventos de cada um dos componentes da
formulao. Logo, notrio que a cintica reacional no depende apenas de um analito. Os
demais parmetros cinticos foram mensurados a partir de escolha de n=2, sendo a Ea=
128,69 KJ/mol-1 e A=2.211 x 1011 min-1. Os demais valores obtidos para as demais etapas
degradativas esto sumarizadas na tabela 27.
Figura 37. Plotagem do grfico G(x) vs. Tempo Reduzido (min) para uma reao de 1 ordem e os
valores de energia de ativao (Ea) e fator de frequncia (A).
Tabela 27. Valores dos r2 obtidos para a regresso linear de cada ordem de reao (0, 1, 2, 3, 4 e 5) para o
segundo evento de degradao e seus respectivos valores dos parmetros cinticos.
Ordem da Reao (n)
r2
Ea (KJ.mol-1)
A (min-1)
0,978
128,69
4.064 x 1010
0,989
128,69
1.157 x 1011
0,995
128,69
2.211 x 1011
0,987
128,69
4.286 x 1011
0,985
128,69
8,320 x 1011
0,989
128,69
1.1624 x 1012
143
A figura 38 sumariza os dados obtidos das isotermas utilizadas para determinar a

energia de ativao do sulfato de HCQ no comprimido sob condies isotermais. Atravs do
mtodo das tangentes as seguintes temperaturas de isoterma foram selecionadas: 246, 248,
250, 252 e 254C; todas elas prvias as degradaes do frmaco (3 evento de degradao). A
rampa de aquecimento utilizada no estudo cintico de degradao da matria-prima foi
repetida com a mesma metodologia e mesmos fins. As temperaturas foram mantidas
constantes, sob uma atmosfera controlada de nitrognio (100 mL.min-1), durante o tempo
suficiente para uma perda de massa de pelo menos 10%.
Como esperado, quanto maior foi temperatura, mais curto foi tempo necessrio para a
significativa perda de massa. A partir da equao de Arrhenius obtida por intermdio do
respectivo grfico (Figura 39), pode-se estimar a estabilidade em dias do HCQ na forma
farmacutica quando mantido sob temperatura ambiente (25C), resultando em um prazo de
validade estimado em, aproximadamente, 790 dias (26 meses). Tal resultado mostra que h
uma significativa proteo do frmaco, sugerindo que os a forma farmacutica, mais
precisamente, os adjuvantes farmacuticos, fornecem maior estabilidade para o insumo
farmacutico ativo, uma vez que requerida mais tempo para que a mesma porcentagem de
frmaco decaia.
Figura 38. Curvas isotrmicas do sulfato de hidroxicloroquina na forma farmacutica comprimido em diferentes
temperaturas mantidas constantes em atmosfera de nitrognio (100 mL.min-1).
144
Figura 39. Grfico de Arrhenius (ln t vs. 1.K-1) para a decomposio trmica do sulfato de hidroxicloroquina na
forma farmacutica.

HIDROXICLOROQUINA ATRAVS DE TCNICAS TERMOANALTICAS
As alteraes dos valores obtidos a partir das curvas DSC correspondentes s MB, tais
como alargamento e deslocamento de evento endotrmico de fuso e entalpia, no apontam
necessariamente a ocorrncia de incompatibilidades, mas demonstram interaes entre os
componentes em funo do aquecimento. A curva DSC da MB entre o sulfato de HCQ e o
polmero PVP elucida bem tal situao. possvel perceber um acentuado alargamento e
reduo do pico de fuso provocado por uma solubilizao parcial do frmaco durante o
aquecimento do polmero, evento descrito anteriormente por Oliveira (2011), Lima (2011) e
Costa (2013) e colaboradores.
Com relao s MB, todas elas apresentaram diminuio significativa da entalpia
envolvida no processo quando comparado entalpia de fuso do sulfato de HCQ isolado.
Entretanto, em apenas duas delas foi observado possvel indcio de interao: GAS e LA.
Todas as demais MB apresentaram variaes na faixa de fuso do sulfato de HCQ isolado de
menos de 2C (Tabela 28). J o GAS e a LA apresentaram os valores de 245,47C e 220,03C,
145
respectivamente; caracterizando possveis indcios de interao frmaco:excipiente. Estes,

portanto, foram objetos de anlises complementares.
Tabela 28. Temperatura inicial (Tonset), temperatura do pico (T pico) e temperatura final (Tendset) do evento de
fuso, variao da entalpia (H), Temperatura de degradao (Tdeg) e perda de Massa do sulfato de HCQ e das
MB.
Tonset
Tendset
Tpico
Tdeg
Perda de
(C)
(C)
(C)
(C)
Massa (%)
242,23
254,90
244,83
185,85
301,12
30,9
Talco
241,91
249,75
246,03
58,21
301,54
16,52
PVP K30
297,92
16,70
Polyox
233,80
247,83
243,02
44,70
300,83
15,92
PEG* 6000
236,99
248,55
243,88
99,73
301,34
10,13
Methocel
239,72
250,05
245,69
62,94
295,32
12,23
Lactose*
210,48
235,53
234,43
26,67
210,65
15,82
Glicolato de amido
sdico*
225,63
244,81
240,09
39,44
292,27
37,14
Estearato de Magnsio
237,56
248,54
244,02
59,13
304,37
18,10
Croscarmelose Sdica
241,08
250,73
246,03
68,22
297,10
30,18
Celulose
Microcristalina
240,35
249,27
244,75
53,99
304,21
32,87
Starch
241,73
250,91
246,39
60,63
317,52
25,39
Sulfato de HCQ
H (J.g-1)
MB
A MB sulfato de HCQ:GAS apresentou comportamento trmico diferente do

observado para o frmaco isolado. A curva TG apontou a presena de apenas 2 eventos
trmicos. O primeiro semelhante ao da curva TG do frmaco isolado, embora mais longo
teve incio em 262,21C e trmino em 287,04C, com perda de massa de 5,33%
(DTGpico=264,82C). Em contrapartida, o segundo evento demonstrou-se bastante diferente ao
sobrepor os dois eventos conseguintes existentes quando o frmaco isolado foi analisado. Na
MB, o segundo evento, compreendido entre 281,67C e 304,13C apresentou uma nica e
clara etapa de perda de massa de 35,84% da massa inicial (DTGpico=292,71). Alm disso, a
amostra apresentou significativa perda de massa (aproximadamente 5,4%), provavelmente
relacionada gua adsorvida e estrutural, na faixa de 35-105C; fenmeno que no foi
146
observado na curva TG do sulfato de HCQ isolado, sugerindo que houve aumento da

higroscopicidade do material e consequente aumento da adsoro de gua.
Quanto curva DSC, h um evento endotrmico entre 121,93 e 176,82C, relativo a
uma desidratao da MB. O evento relacionado fuso do sulfato de HCQ, por exemplo, foi
bastante antecipado, formando um pico mais largo e de menor intensidade, observado entre
233,10-254,10C. O segundo pico corresponde degradao do frmaco conseguinte a sua
fuso, compreendido na faixa de 258,57-274,55C. O terceiro pico, diferente de todos os
outros analisados, seja do frmaco ou da MB, apresentou natureza exotrmica. O pico de
baixa amplitude e pouco intenso, compreendido entre 292,84-306,35C. Sugere-se que essa
inverso da natureza esteja relacionada degradao da interao frmaco:excipiente, o que
aumenta a suspeita de incompatibilidade entre os componentes. Vale salientar que Rodrigues
e colaboradores (2008) j evidenciaram essa possvel interao entre o GAS e um anlogo da
hidroxicloroquina, a primaquina, o que fornece maiores subsdios para confirmar a possvel
incompatibilidade entre os materiais.
A MB do sulfato de HCQ:LA tambm apresentou comportamento trmico diferente
do perfil evidenciado pelo frmaco isolado. Foi observada a antecipao do incio da
degradao do sulfato de HCQ, sugerindo possvel reduo da estabilidade do frmaco. No
DTG, o evento de degradao da amostra evidencia um alargamento bastante pronunciado
que pode ser explicado pela sobreposio de trs eventos presentes nas curvas de TG/DTG
das substncias isoladas: degradao do sulfato de HCQ e a transio cristalina da lactose
seguida de sua fuso. O primeiro evento encontra-se na faixa de 146,80-153,76C
(DTGpico=148,98C), apresentando perda de massa de, aproximadamente, 1,6%, sugerindo
perda de gua de cristalizao. O segundo evento, na faixa de 220,08-231,33C
(DTGpico=225,43C), apresentou perda de massa de 16,18%, referente degradao do
frmaco. O terceiro, por sua vez, entre 285,25-310,85C (DTGpico=295,02C), demonstrou
perda de massa de 16,59%; sendo a etapa que representa a etapa degradativa da lactose
fundida. Estes resultados tambm foram observados em outros tipos de frmacos que
possuem grupo aminas e amida, como a primaquina, anlogo do HCQ (NAVARRO, 2001;
ALVES, 2007; COSTA et al., 2013).
Com relao curva DSA da MB contendo LA, foi observado o aparecimento de um
pico estreito e intenso de natureza endotrmica seguido de um pico de pouca intensidade e de
natureza exotrmica, entre 146,79-161,29C, referente perda de gua de cristalizao,
fenmeno caracterstico do perfil trmico do excipiente (COSTA et al., 2013). O segundo
pico, entre 210,48-235,53C, bastante intenso e largo, corresponde ao evento de fuso do
147
frmaco. Os outros dois eventos, ambos de natureza endotrmica, correspondem degradao

do frmaco. Entretanto, ao antecipar a fuso deste, o pico relativo fuso e conseguinte
degradao do sulfato de HCQ deixou de ser sobreposto. O fato de a MB sulfato de HCQ:LA
ter apresentado, na curva DSC, perfil trmico completamente diferente pode indicar que h
realmente incompatibilidade frmaco:excipiente. Os ltimos dois eventos de perda de massa
esto situados nas faixas de 253,98-284.12C e 287,77-309,10C.
Com exceo da lactose, todos os demais excipientes prolongaram o principal evento
de decomposio trmica do sulfato de HCQ, podendo ser considerados possveis
componentes de formulaes farmacuticas termicamente estveis.
A partir da determinao dos parmetros cinticos pde-se confirmar a hiptese de que
houve interao entre as MB: frmaco-GAS e frmaco-LA. A Ea um dos parmetros de
maior interesse para avaliar a estabilidade de compostos farmacuticos. Segundo Macedo e
colaboradores (2000), possvel traar um perfil comparativo de estabilidade trmica entre o
insumo farmacutico ativo e seus derivados apenas levando em considerao o valor da Ea.
Os resultados evidenciaram a reduo do valor da Ea, mostrando menor estabilidade trmica
do sulfato de HCQ quando este est associado ao GAS sdico e LA.
O prazo de validade das MB na forma slida foi estimado a partir de modelo
isotermal. A metodologia de escolha das temperaturas da isoterma e a utilizao da rampa de
aquecimento foram as mesmas utilizadas para o frmaco isolado, variando apenas as
temperaturas da isoterma propriamente ditas. Assim, as temperaturas de isoterma da MB
sulfato de HCQ-GAS foram: 252, 254, 256, 258 e 260C (uma vez que a temperatura de
degradao foi observada em 264C). J para a MB sulfato de HCQ-LA, as temperaturas
foram: 195, 197, 199, 201 e 203C (temperatura de degradao 210C).
Os resultados demonstraram a considervel reduo do tempo necessrio para que a
amostra perdesse 10% de sua massa inicial em temperatura ambiente, em relao ao prazo de
validade estimado para o frmaco isolado. Apesar da pequena variao vista para a Ea
apresentada pela MB HCQ-GAS, sugere-se que a grande porcentagem de perda de massa seja
o fator responsvel pelo grande decrscimo do prazo de validade (PEREIRA et al., 2013).
148
Tabela 29. Resultados obtidos para os clculos dos parmetros cinticos do sulfato de hidroxicloroquina isolado
e das misturas binrias entre o frmaco e o glicolato de amido sdico a lactose.
Amostra
HCQ
MB HCQGAS
MB HCQLA
Energia de
Fator de
Ativao (Ea)
Frequncia (A)
(KJ.mol-1)
(min-1)
144,57
4,910x1012
622
98,69
1,072x108
446
139,31
6.452x1013
414
Ordem de
Reao (n)
Prazo de Validade
Estimado (dias)
O espectro de IV da MB sulfato de HCQ-LA (Figura 40) mostrou alguns dos mesmos

estiramentos observados no espectro do frmaco isolado. Entretanto, o pico de deformao
axial C-Cl aliftica est ausente no MB o que confirma a incompatibilidade entre o frmaco e
o excipiente, j que o cloro um tomo muito importante para a molcula. possvel
observar a reduo da intensidade dos picos referentes s deformaes axiais dos anis
(bandas do esqueleto) C=C e C=N. Isso pode indicar que h uma alterao da estrutura da
molcula da hidroxicloroquina. O espectro ainda apresenta as deformaes dos grupos
funcionais presentes na lactose, destacando o estiramento axial da ligao O-H em 3300 cm-1,
se apresentando bastante larga e caracterstica (SANTOS et al., 2009).
Em relao ao espectro de IV da MB sulfato de HCQ-GAS (Figura 40), foi possvel
observar a ocorrncia dos mesmos estiramentos caractersticos do frmaco isolado.
Entretanto, pde-se confirmar uma forte interao entre os grupos funcionais das molculas
presentes na mistura. Isso provoca a modificao na densidade eletrnica, alterando as foras
de ligao entre os tomos e provocando uma significativa reduo nas frequncias de
absoro no infravermelho (TIBOLA, 2009).
Vale salientar que em todos os espectros observou-se apenas a sobreposio das
bandas caractersticas do sulfato de HCQ isolado, sendo algumas delas sobrepostas por
bandas referentes aos excipientes. Entretanto, a simples sobreposio no pode ser
considerada uma incompatibilidade, portanto a tcnica de IV-TF no foi seletiva para
evidenciar possveis incompatibilidades entre o frmaco e os excipientes avaliados.
149
Figura 40. Espectros de infravermelho do sulfato de hidroxicloroquina e excipientes isolados e das misturas
binrias do frmaco com a lactose e o glicolato de amido sdico.
150
Os difratogramas obtidos confirmaram a existncia de interao frmaco-excipiente

para o GSA e a LA (Figura 41). O perfil difratomtrico da MB sulfato de HCQ-GSA se
mostrou bastante diferente do apresentado pelos componentes isolados, no sendo possvel
evidenciar nenhum dos picos caractersticos. No caso da MB sulfato de HCQ-LA, os picos
apresentados pela MB foram semelhantes LA isolada e nenhum dos picos caractersticos do
frmaco foi evidenciado, logo, pde-se confirmar a existncia da interao quando uma
mistura fsica entre os materiais obtida. Entretanto, em ambos os casos, foi observado que o
comportamento cristalino do sulfato de HCQ mantido, uma vez que as MB apresentaram
grande intensidade de picos. A partir de todos os resultados obtidos, complementares s
anlises termoanalticas, pde-se concluir que h incompatibilidade frmaco-excipiente entre
o sulfato de HCQ e o GSA e a LA. Logo, durante o desenvolvimento de formas
farmacuticas, devem ser utilizados outros adjuvantes capazes de promover as mesmas
funes exercidas pela GSA e a LA. O GSA, conhecido por Explosol, bastante utilizado
como agente desintegrante, podendo ser facilmente substitudo pela croscarmelose sdica. J
a LA, muito utilizada como diluente, pode ser substituda pelo amido de milho. Vale salientar
que a compatibilidade do sulfato de HCQ com a croscarmelose sdica com o amido foi
confirmada pelo presente estudo (ROWE, SHESKEY & QUINN, 2009).
151
Figura 41. Difratogramas do sulfato de hidroxicloroquina e excipientes isolados e das misturas binrias do
frmaco com a lactose e o glicolato de amido sdico.
152
CONCLUSO E
PERSPECTIVAS
153
6 CONCLUSO E PERSPECTIVAS
Atravs da aplicao do QbD e da elaborao da rvore decisria, foi possvel elaborar
a carta de identidade do sulfato de HCQ, um robusto dossi sobre a natureza fsicoqumica do frmaco. As informaes obtidas no presente estudo so capazes de
fornecer subsdios para o delineamento racional de formas farmacuticas, abrangendo
todo o setor produtivo, desde a identificao e armazenamento da matria-prima ao
controle de qualidade a forma farmacutica;
O trabalho apresentou resultados relevantes e complementares monografia especfica
de compndios oficiais do sulfato de HCQ, principalmente no que diz respeito
otimizao do mtodo analtico de doseamento por CLAE. Uma maior ateno deve
ser dada a estes resultados quando se menciona a ausncia de monografia especfica
do sulfato de HCQ na Farmacopeia Brasileira. Com isso, pode-se possibilitar a
padronizao das condies de estabilidade do frmaco em questo, seja a prpria
matria-prima ou o medicamento que o contm;
O mtodo analtico por espectroscopia de absoro na regio do UV-Vis possui as
vantagens de: utilizar apenas gua como soluo diluente e de preparar a amostra
atravs de diluio direta, deixando-o mais rpido, economicamente mais vivel e
sustentvel, diante dos conceitos da qumica verde. Uma vez otimizado, o mtodo foi
validado de acordo com o preconizado pela RE n 899/03 da ANVISA e pelo ICH e
demonstrou-se: linear, eficaz e seletivo, preciso e exato e robusto para os parmetros
avaliados. Alm disso, a metodologia se mostrou adequada para substituir aquela
oficial recomendada pela USP 36, pois no houve diferenas significativas entre os
resultados obtidos por ambas as tcnicas;
Com base nos resultados obtidos, ser realizada a obteno tecnolgica de uma forma
farmacutica slida base de sulfato de hidroxicloroquina para o tratamento
alternativo da artrite reumatoide, seguido dos controles de qualidade pertinentes;
Aps a obteno tecnolgica da forma farmacutica, ser desenvolvido mtodo
indicativo de estabilidade e estudo de estabilidade acelerada e de longa durao do
sulfato de hidroxicloroquina matria-prima conforme a normativa da RDC 45/2012
e da forma farmacutica obtida conforme a normativa RE 01/2005;
Depois de estabelecidos todos os mtodos e protocolo de estabilidade da forma
farmacutica, sero realizados a elaborao e depsito da patente da nova forma
farmacutica;
154
Os resultados do estudo de compatibilidade de certas misturas binrias foram

analisados usando DSC, TG/DTG, IV e DR-X. Os resultados mostraram a utilidade da
anlise trmica como um mtodo rpido e conveniente para a realizao de uma
triagem de candidatos a excipientes durante os estudos de pr-formulao, pois
permitiu a demonstrao de interaes ou incompatibilidade frmaco-excipiente.
Nestes estudos, a incompatibilidade do sulfato de HCQ com o glicolato de amido
sdico e a lactose foi observada e confirmada por estudos cinticos (isotrmicos e no
isotrmicos). Estes estudos indicaram uma significativa reduo na energia de ativao
da temperatura de decomposio do frmaco quando na mistura binria, o que implica
na reduo da sua estabilidade trmica. As tcnicas complementares ainda
evidenciaram as mudanas dos comportamentos e perfis trmicos, espectrais e
difratomtricos, o que corrobora ainda mais a incompatibilidade entre os excipientes e
o sulfato de HCQ;
O trabalho ainda forneceu informaes relevantes sobre o comportamento trmico do
sulfato de HCQ atravs de diversas tcnicas termoanalticas. Em relao ao seu estudo
cintico, a comparao entre os mtodos isotermais e no-isotermais demonstrou a boa
semelhana entre os valores de energia de ativao obtidos em cada um dos mtodos,
evidenciado a alta estabilidade trmica do frmaco e a aplicabilidade dos mtodos
cinticos. A cintica de decomposio trmica ocorreu a uma velocidade constante e
indicou uma reao de primeira ordem corroborada por diferentes modelos e
confirmada para ambos os modelos cinticos , o que significa que a decomposio
trmica do insumo farmacutico ativo no influenciada por processos simultneos.
Ainda foi possvel avaliar a influncia positiva que os excipientes do Plaquinol
exercem sobre o sulfato de hidroxicloroquina, caracterizada pelo aumento do prazo de
validade estimado (de 622 para 790 dias) e pelas alteraes benficas sobre os
comportamentos trmicos, ora retardando a temperatura de degradao, ora reduzindo
a porcentagem de perda de massa;
Prosseguindo com o estudo da avaliao da influncia exercida por uma mistura de
excipientes sobre o sulfato de hidroxicloroquina em uma forma farmacutica slida
comprimido, ser feita a aquisio dos excipientes utilizados no Plaquinol, seguido
de estudo de compatibilidade do frmaco com tais excipientes.
155
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191
ANEXOS
192
ANEXOS
Certificado de anlise do controle de qualidade FAGRON...............................................193
Certificado de anlise do controle de qualidade Pharmanostra.........................................194
Espectros de RMN 1H, 13C, COSY E DEPT...........................................................................195
Comprovante
de
submisso
DESENVOLVIMENTO
do
artigo
intitulado:
VALIDAO
DE
QUALITY
MTODO
BY
DESIGN
ANALTICO
NO
POR
ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORO NA REGIO DO ULTRAVIOLETAVISVEL PARA DOSEAMENTO DO FRMACO ANTIRREUMTICO SULFATO DE

HIDROXICLOROQUINA (submetido International Journal of Pharmaceutical Sciences
and Research).........................................................................................................................199
Comprovante
de
submisso
FARMACOCINTICOS
do
artigo
intitulado:
TECNOLGICOS
ASPECTOS
DO
CLNICOS,
SULFATO
DE
HIDROXICLOROQUINA (submetido Revista de Cincias Farmacuticas Bsica e

Aplicada).................................................................................................................................200
193
194
195
196
197
198
199
200

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO

CENTRO DE CINCIAS DA SADE

APLICAO DE QUALITY BY DESIGN NO ESTUDO DE PRFORMULAO FARMACUTICA DO SULFATO DE

LESLIE RAPHAEL DE MOURA FERRAZ

UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO

LESLIE RAPHAEL DE MOURA FERRAZ

APLICAO DE QUALITY BY DESIGN NO ESTUDO DE PRFORMULAO FARMACUTICA DO SULFATO DE

Dissertao submetida ao Programa de Ps-Graduao

LESLIE RAPHAEL DE MOURA FERRAZ

APLICAO DE QUALITY BY DESIGN NO ESTUDO DE PR-FORMULAO

Dissertao apresentada ao Programa de PsGraduao em Cincias Farmacuticas da

Aprovado em: 17/02/2014.

UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO

queles que, mesmo depois de tudo, nunca deixaram de acreditar em mim.

Aos meus amigos, eternos incentivadores, em especial Adryelle Lins, Jorge

Figura 14. Espectro de Raman do sulfato de HCQ................................................................. 102

Figura 27. a) Grfico de regresso linear do parmetro linearidade, valor de r2 e equao da

C e 1H para o sulfato de HCQ dissolvido em gua

deuterada (D2O) ...................................................................................................................... 102

Tabela 13. Parmetros avaliados pelo ensaio de adsoro de nitrognio na determinao de

Tabela 26. Determinao da ordem de reao da cintica de degradao do sulfato de

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

Fator de Frequncia (Fator de Arrhenius)

Sndrome da Imunodeficincia Adquirida (do ingls Adquired acquired

Anticorpos Antiprotenas e Peptdeos Citrulinados

Anticorpos Antipeptdeos Citrulinados Cclicos (anti-CCP)

Agncia Nacional da Vigilncia Sanitria

Reflectncia Total Atenuada

Cromatografia Liquida de Alta Eficincia

Drogas Modificadoras do Curso da Doena

Calorimetria Diferencial Exploratria

Anlise Trmica Diferencial

Estados Unidos da Amrica

United States Food and Drugs Administration

Glicolato de amido sdico

Vrus da Imunodeficincia Humana (do

Internation Conference on Harmonization

Insumos Farmacuticos Ativos

The International Union of Pure and Applied Chemistry

Espectroscopia de absoro na regio do Infravermelho com transformada de

Cromatografia Liquida acoplada a Detector de Arranjo Diodo

Lpus eritematoso discoide

Lpus eritematoso sistmico

Laboratrio de Tecnologia dos Medicamentos

Espectrometria de massas (do ingls Mass Spectrum)

Microscopia eletrnica de varredura

Mtodos indicativos de estabilidade

Ncleo de Controle de Qualidade de Medicamentos e Correlatos

mistura racmica de Hidrocicloroquina

Resoluo Diretoria Colegiada

Ressonncia Magntica Nuclear de Carbono 13

Ressonncia Magntica Nuclear de Hidrognio

cido Ribonucleico (do ingls Ribonucleic Acid)

United States Pharmacopeia

Miligrama por mililitro

Miligrama por dia

Grama por Litro

constante de degradao de frmacos

Constante de Velocidade Cintica

logartmo neperiano da concentrao

Porcentagem de gua adsorvida

Peso do pesa-filtro contendo a amostra aps da dessecao

Peso do pesa-filtro contendo a amostra antes da dessecao

Mililitro por hora