Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
Aula Ciclo Celular Rodrigo Martins 2011 2 PDF
Aula Ciclo Celular Rodrigo Martins 2011 2 PDF
RodrigoMartins
ICB_LaNCE_HU
rodrigomartins@ufrj.br
Clulassogeradasapartirdeclulaseanica
maneiradesefazernovaclulaaDIVISOde
umaclulaprexistente
Debactriasamamferosmulticelulares
Ciclossucessivosdeduplicao
Quandonapresenadeestmulosadequadosas
clulaspodemsemultiplicar atravsde
repetidosciclosdeproliferaoediviso
celular,queemfunodessanaturezacclica,
esseciclodevidadasclulasproliferantesfoi
denominadoCICLOCELULAR
>ProliferaoCelularvs.CrescimentoCelular
>Nemtodasasclulasprecisamcrescerparasedividir
DivisoCelularemBlastmeros
Roteiro
FasesdoCicloCelular
RelevnciadaPesquisasobreCicloCelular
Histrico
OsArtistasdoEspetculo:CiclinaseCDKs
MtodosdeEstudodoCicloCelular
Copiaresegregar/dividirmaterialgenmicodemodoperfeito!
Mitose
G0
G1
(ps-mittica)
Nascimento
G2
BiologiadoDesenvolvimento
wt
Sox2
Microftalmia
Fantesetal.NatureGenet.33:4612,2003
Olenaetal.GenesandDev.20:118702,2006
A Retina de Vertebrados
Mitose
Desenvolvimento
Proliferao
SadadoCicloCelular
EspecificaodoTipoCelular
MorteCelular
Fase S
Migrao
Sinaptognese
SadaPrecocedoCiclo
FunctionalRetina
Retinoblastoma
SadaTardiadoCiclo
ImportnciaClnicadoEstudodoCiclo:
BiologiadoCncer
Sadadeumestadoquiescenteparaumestadodeproliferaocelular
ativaumprrequisitoparaformaodediversostumores
ClulasTroncoeTerapiasCelulares
ClulasMultipotentescomcapacidade
degerardiferentestiposcelulares/tecidos/rgos
Teratomas
PrmioNobel
O Nobel em Fisiologia ou Medicina de 2001 foi dado a pesquisadores
que fizeram descobertas sobre os mecanismos moleculares do ciclo
celular (protenas cdk e ciclina e seus mecanismos de ao).
LelandHartwell
TimHunt
PaulNurse
Evans,R.,Rosenthal,E.T.,Youngblom,J.,Distel,D.&Hunt,T.Cyclin:aproteinspecifiedbymaternalmRNAinseaurchineggs thatisdestroyed
ateachcleavagedivision.Cell33,389396(1983)
Nurse,P.etal.GeneticcontrolofthecelldivisioncycleinthefissionyeastSchizosaccharomycespombe.Mol.Gen.Genet.146,167178(1976).
Hartwell,L.H.,Culotti,J.,Pringle,J.R.&Reid,B.J.Geneticcontrolofthecelldivisioncycleinyeast.Science183,4651(1974).
Hartwell,H.L.,Culotti,J.&Reid,B.Geneticcontrolofthecelldivisioncycleinyeast.IDetectionofmutants.PNAS66,352359(1970).
Desde2002
www.landesbioscience.com/journals/cc/
Histrico
Omniscellulaecellula
Todaclulaseoriginadeoutraclulasimilarprexistente.
1858
RudolfVirchow,1821 1902
RobertRemak,18151865
NavidadaparaoXX, adivisocelularfoiestudada
emdetalheporembriologistasemicroscopistas
EduardStrasburger(1875),botnico,eWaltherFlemming(1979),queestudavaclulas
animais,soconsideradososdescobridoresdaMITOSE;
Flemmingdescreveuacromatinaeambosdeduziramqueoncleoestariarelacionadocom
hereditariedade;
WaltherFlemming,1843 1905
EduardStrasburger,1844 1912
Embriologistas vs.Geneticistas
Embriologistas Anfbios,Ourio domareoutros invertebrados marinhos
Geneticistas Leveduras
CellCycleClassics
Pesquisasemleveduraslevaramadescobertade
GenesessenciaisparaoCicloCelular
Reproduorpida
Genomarelativamentepequeno(emtornode1%donosso)
Fcilmanipulaogentica
Rpidaidentificaoecaracterizaodemutantesgenticos;
GenesCdc (Celldivisioncycle)
Buscasistemticapormutaesqueinativavamgenes
necessriosparaociclo/divisocelular
Cdc15selvagem
Cdc15mutante
MuitasDescobertassobreaBioqumicadoCiclo
foramfeitasEstudandodeOvcitosAnfbios
1ovcitodeXenopus tem1mmdedimetroeumvolumedecitoplasma100.000
vezesmaiorqueumaclulahumana;
FertilizaodisparaDivisoporClivagem*doovcito;
Totalde4096clulasem7horas(~15minutosdefaseSeM)
FasesG1eG2indetectveis;
Fcildeinjetarsubstnciasnasclulaseobservarefeitosnociclo.
DescobertadoMPF(Maturationpromotionfactor)
Maturao=induodeentradaemmeiose
MPF=complexoproteicoformadopelasptns:
CinaseCdc2(hojetambmchamadadeCdk1)
e
CiclinaB2
AnaturezadoMPF(Maturationpromotionfactor)
ATIVIDADE DO MPF
DEPENDE DE
SNTESE PROTICA
COMPORTAMENTO
CCLICO
DO MPF
IDENTIFICAO
DE CICLINAS
EM OVOS DE
INVERTEBRADO
MARINHO
MPF E CICLINAS
Cdc2=CDK1!!
Alguns dosgenesessenciais para diviso dasleveduras codificavam
exatamente protenas que mediavam aatividade
bioqmica/biolgica doMPF
MPFwasfirstknownforitsfunction,thenasaproteinandfinallyasa
gene.Incontrast,CDC28(S.cerevisiae)orcdc2(S.pombe)wasfirst
describedasagenewithaknownfunctionandonlylaterwasthe
proteinidentified.Cyclinwasfirstdiscoveredasaprotein,thenasa
geneandfinallyitsfunctionwasknownasacomponentofMPF
OsArtistasdoEspetculo:CiclinaseCDKs
Ciclinas Protenascujaexpressovariadeforma
dependentedafasedociclocelular
CDK(cinasesdependentesdeciclina)
1 Protenascinase capazesdetransferirradicaisfosfatoparaseussubstratos(vdeo)
2 CDKssoserinatreoninacinases
3 AtividadedecinasedasCDKdependedeassociaocomasciclinas
4 Eventospstraducionaisdefosforilaoedefosforilaocontribuemparaa
ativaoplenadasCDK
MolculasReguladorasdoCiclosoextremamente
conservadasevolutivamente
Emcamundongos,porexemplo,existemaproximadamente20enzimasCDK,massomente
algumasregulamatransioentreasfasesdociclocelular(ex:CDK1,CDK2,CDK4,CDK6eCDK7
AfosforilaodedezenasdesubstratoscelularesporenzimasCDKsespecficasemestgios
especficosdociclocelularinduzmodificaesfuncionaisdosdiferentessubstratos
Eventoscomoadesmantelamentodamembrananuclear,condensaodacromatina,induo
dareplicaodoDNAemontagemdosfusosmitticosdependemdasfosforilaesmediadas
pordiferentesCDKs
AlteraescclicasnaatividadedasCDKsdependedaassociaodessascinasescomas
ciclinas.AocontrriodasCDK,cujaexpressonovariamuito,aexpressodasciclinasmuda
dependendodafaseciclocelular.
Atransioentreas
fasesdociclocelular
reguladapordiferentes
complexosciclina/CDK
Comoasclulasconseguemvariaraquantidadedas
ciclinas ?
TranscrioGnicaeSntesedeprotenas
vs.
ProteliseControlada
UbiquitinaoeDegradaoproteossomal
CDK1regulaMitoseetemdegradao
mediadapelocomplexoAPC(anaphasepromotingcomplex)
AlmdaExpressodeCiclinas(transcricionalvs.
protelise)aatividadedasCDKstambmregulada
poreventosPSTRADUCIONAIS
RegulaoPstraducionaldaAtivaodeCDK1
Wee1
CAK (MO15, Cdk7/CycH)
Cdc25
G0
(Ps-mittica)
Rb
G1
Protooncogenes(MYC)
Ciclina/CDK
Reguladores Upstream
Ativaodeviasdesinalizaopor
Mitgenos
Rb
Ciclina / CDK
Entrada na
fase S
Rb=Rb,p107oup130
Ciclina D1 CDK4/6
Ciclina D3 CDK2
Ciclina E
Protenas Rb:
Supressores de Tumor que controlam o Ciclo Celular
Enucleao:
Perda de viso
Rb1 +/-
ProtenasCKI(CDKinhibitor)InibemasCDKs
G0
(Ps-mittica)
Rb
G1
Protooncogenes(MYC)
Ciclina/CDK
Reguladores Upstream
Rb
SupressoresdeTumor(p53/Arf)
CKI
Ciclina / CDK
CKI
Entrada na
fase S
Rb=Rb,p107oup130
Kip
p21
p27
p57
Ink
p15, p16
p18, p19
Ciclina D1 CDK4/6
Ciclina D3 CDK2
Ciclina E
PontosdeChecagemouCheckpoints
necessrioumcontroledequalidadeda
replicaodoDNA
Aperfeionadivisomitoticacrucialpara
queoscromossomosduplicadossejam
corretamentedistribudosparaasclulasfilha
Oambienteestpropcioparaqueaclula
continueseproliferandoeentrenafaseS
novamente?
TcnicasdeEstudo
Comodeterminaremquefasedociclocelularumaclulaest?
AnlogosdetimidinasoincorporadosaoDNA
nafaseSdoCiclo
Bromodeoxi-Uridina BrdU
Iododeoxi-Uridina - IrdU
Citofluorometria
P30p107single
Invivo
BrdU
24h
Invivo
Invitro
intervalo
3[H]timidina
48h
24h
3[H]thymidine
retinas
3[H]thymidine
H3-thymidine
RbRB1
Proportionofprogenitors
dividingatthat
developmentalstage
foreachanimal
3[H]thymidine
H3-thymidine
Kip1
Kip1
p27p27
time (hr)
EstudodaCinticadeProgressonoCicloCelular:
SadadoCicloCelularouAumentodotempodeCiclagem?
(ExitorLengthening?)
Proporodeclulas
proliferantesse
dividindo
Velocidadedeprogresso
nociclocelular
time (hr)
retina
retinas
10diasdecultura
RetrovrusIncapazdeReplicao
1
1
2
4 3
15
6
7
8
9
Clonede9clulas
ModelosdeEstudomaisModernos
Reprterfluorescentedasdiferentesfasesdociclocelularinvivo
SakaueSawanoetal.,2008Cell.132(3):48798.
Visualizingspatiotemporaldynamicsofmulticellularcellcycleprogression
MaisInformaes
MolecularBiologyofTHECELL Cap17
http://www.hchs.hunter.cuny.edu/wiki/index.
php?title=19th_Century_Science
http://www.nature.com/ncb/journal/v3/n1/fu
ll/ncb0101_e1.html