CicloCelular:Introduo

RodrigoMartins
ICB_LaNCE_HU
rodrigomartins@ufrj.br

Clulassogeradasapartirdeclulaseanica
maneiradesefazernovaclulaaDIVISOde
umaclulaprexistente

Debactriasamamferosmulticelulares

Ciclossucessivosdeduplicao

Quandonapresenadeestmulosadequadosas
clulaspodemsemultiplicar atravsde
repetidosciclosdeproliferaoediviso
celular,queemfunodessanaturezacclica,
esseciclodevidadasclulasproliferantesfoi
denominadoCICLOCELULAR

>ProliferaoCelularvs.CrescimentoCelular
>Nemtodasasclulasprecisamcrescerparasedividir

DivisoCelularemBlastmeros

Roteiro

FasesdoCicloCelular
RelevnciadaPesquisasobreCicloCelular
Histrico
OsArtistasdoEspetculo:CiclinaseCDKs
MtodosdeEstudodoCicloCelular

Copiaresegregar/dividirmaterialgenmicodemodoperfeito!

Fases doCiclo Celular

>Mitose pode ocorrer sem citocinese >Formao declula

commuitos ncleos
>Embries deDrosophila

Particularidades do Ciclo Celular durante a Organognse/

Desenvolvimento de Organismos Multicelulares

Mitose
G0
G1

(ps-mittica)
Nascimento

Ciclo Celular est Acoplado a

G2

Mecanismos de Diferenciao Celular

**divises simtricas vs. assimtricas

Sntese de DNA (S)

Diviso Meitica Gera Clulas Germinativas Haplides

Relevncia doEstudo doCiclo Celular

BiologiadoDesenvolvimento

wt

Sox2

Microftalmia
Fantesetal.NatureGenet.33:4612,2003
Olenaetal.GenesandDev.20:118702,2006

A Retina de Vertebrados

Coordenao entre Proliferao, Sada do Ciclo e

Diferenciao Crucial para Formao da Retina

Mitose

Desenvolvimento
Proliferao
SadadoCicloCelular
EspecificaodoTipoCelular
MorteCelular

Fase S

Migrao
Sinaptognese

Particular Importncia do Controle de Ciclo Celular

para o Desenvolvimento da Retina

SadaPrecocedoCiclo

FunctionalRetina
Retinoblastoma

SadaTardiadoCiclo

ImportnciaClnicadoEstudodoCiclo:
BiologiadoCncer
Sadadeumestadoquiescenteparaumestadodeproliferaocelular
ativaumprrequisitoparaformaodediversostumores

Necessidade de Controle Inequvoco do Estado Ps-mittico

ClulasTroncoeTerapiasCelulares
ClulasMultipotentescomcapacidade
degerardiferentestiposcelulares/tecidos/rgos

Teratomas

PrmioNobel
O Nobel em Fisiologia ou Medicina de 2001 foi dado a pesquisadores
que fizeram descobertas sobre os mecanismos moleculares do ciclo
celular (protenas cdk e ciclina e seus mecanismos de ao).

LelandHartwell

TimHunt

PaulNurse

Evans,R.,Rosenthal,E.T.,Youngblom,J.,Distel,D.&Hunt,T.Cyclin:aproteinspecifiedbymaternalmRNAinseaurchineggs thatisdestroyed
ateachcleavagedivision.Cell33,389396(1983)
Nurse,P.etal.GeneticcontrolofthecelldivisioncycleinthefissionyeastSchizosaccharomycespombe.Mol.Gen.Genet.146,167178(1976).
Hartwell,L.H.,Culotti,J.,Pringle,J.R.&Reid,B.J.Geneticcontrolofthecelldivisioncycleinyeast.Science183,4651(1974).
Hartwell,H.L.,Culotti,J.&Reid,B.Geneticcontrolofthecelldivisioncycleinyeast.IDetectionofmutants.PNAS66,352359(1970).

Peridicos Internacionais Especializados

Desde2002
www.landesbioscience.com/journals/cc/

Histrico

Omniscellulaecellula
Todaclulaseoriginadeoutraclulasimilarprexistente.
1858

RudolfVirchow,1821 1902

RobertRemak,18151865

NavidadaparaoXX, adivisocelularfoiestudada
emdetalheporembriologistasemicroscopistas

EduardStrasburger(1875),botnico,eWaltherFlemming(1979),queestudavaclulas
animais,soconsideradososdescobridoresdaMITOSE;

Flemmingdescreveuacromatinaeambosdeduziramqueoncleoestariarelacionadocom
hereditariedade;

WaltherFlemming,1843 1905

EduardStrasburger,1844 1912

 Nas dcadas de1970e1980,novasmetodologias debiologia molecular

permitiram os pesquisadores dasreas debiologia celular,bioqumica e
gentica,deformaconjunta, elucidar os mecanismos moleculares de
controle dociclo celular;

Novamente,oprogresso cientfico foi fruto daspesquisas edescobertas

terem sido feitas em diversos organismos vivos cada umcomsuas
vantagensbiolgicas ou metodolgicas;

Embriologistas vs.Geneticistas
Embriologistas Anfbios,Ourio domareoutros invertebrados marinhos
Geneticistas Leveduras

CellCycleClassics

Pesquisasemleveduraslevaramadescobertade
GenesessenciaisparaoCicloCelular
Reproduorpida
Genomarelativamentepequeno(emtornode1%donosso)
Fcilmanipulaogentica
Rpidaidentificaoecaracterizaodemutantesgenticos;

GenesCdc (Celldivisioncycle)
Buscasistemticapormutaesqueinativavamgenes
necessriosparaociclo/divisocelular

Cdc15selvagem

Cdc15mutante

MuitasDescobertassobreaBioqumicadoCiclo
foramfeitasEstudandodeOvcitosAnfbios
1ovcitodeXenopus tem1mmdedimetroeumvolumedecitoplasma100.000
vezesmaiorqueumaclulahumana;
FertilizaodisparaDivisoporClivagem*doovcito;
Totalde4096clulasem7horas(~15minutosdefaseSeM)
FasesG1eG2indetectveis;
Fcildeinjetarsubstnciasnasclulaseobservarefeitosnociclo.

DescobertadoMPF(Maturationpromotionfactor)
Maturao=induodeentradaemmeiose
MPF=complexoproteicoformadopelasptns:
CinaseCdc2(hojetambmchamadadeCdk1)
e
CiclinaB2

Masui e Markert, 1971 - J. Exp. Zool. 177: 129-146

AnaturezadoMPF(Maturationpromotionfactor)

Gerhart, J.; Wu, M. & Kirschner, M.

J. Cell Biol. 98: 1247-1255, 1984

Newport, J.W. & Kirschner, M.

Cell 37: 731-742, 1984

ATIVIDADE DO MPF
DEPENDE DE
SNTESE PROTICA

COMPORTAMENTO
CCLICO
DO MPF

IDENTIFICAO
DE CICLINAS
EM OVOS DE
INVERTEBRADO
MARINHO

MPF E CICLINAS

Hunt, T.; Luca, F.C. & Ruderman, J.V.

J. Cell Biol. 116: 707-724, 1992

Cdc2=CDK1!!
Alguns dosgenesessenciais para diviso dasleveduras codificavam
exatamente protenas que mediavam aatividade
bioqmica/biolgica doMPF

MPFwasfirstknownforitsfunction,thenasaproteinandfinallyasa
gene.Incontrast,CDC28(S.cerevisiae)orcdc2(S.pombe)wasfirst
describedasagenewithaknownfunctionandonlylaterwasthe
proteinidentified.Cyclinwasfirstdiscoveredasaprotein,thenasa
geneandfinallyitsfunctionwasknownasacomponentofMPF

OsArtistasdoEspetculo:CiclinaseCDKs

Ciclinas Protenascujaexpressovariadeforma
dependentedafasedociclocelular

CDK(cinasesdependentesdeciclina)
1 Protenascinase capazesdetransferirradicaisfosfatoparaseussubstratos(vdeo)
2 CDKssoserinatreoninacinases
3 AtividadedecinasedasCDKdependedeassociaocomasciclinas
4 Eventospstraducionaisdefosforilaoedefosforilaocontribuemparaa
ativaoplenadasCDK

MolculasReguladorasdoCiclosoextremamente
conservadasevolutivamente

Emcamundongos,porexemplo,existemaproximadamente20enzimasCDK,massomente
algumasregulamatransioentreasfasesdociclocelular(ex:CDK1,CDK2,CDK4,CDK6eCDK7

AfosforilaodedezenasdesubstratoscelularesporenzimasCDKsespecficasemestgios
especficosdociclocelularinduzmodificaesfuncionaisdosdiferentessubstratos
Eventoscomoadesmantelamentodamembrananuclear,condensaodacromatina,induo
dareplicaodoDNAemontagemdosfusosmitticosdependemdasfosforilaesmediadas
pordiferentesCDKs
AlteraescclicasnaatividadedasCDKsdependedaassociaodessascinasescomas
ciclinas.AocontrriodasCDK,cujaexpressonovariamuito,aexpressodasciclinasmuda
dependendodafaseciclocelular.
Atransioentreas
fasesdociclocelular
reguladapordiferentes
complexosciclina/CDK

 Comoasclulasconseguemvariaraquantidadedas
ciclinas ?
TranscrioGnicaeSntesedeprotenas
vs.
ProteliseControlada
UbiquitinaoeDegradaoproteossomal

CDK1regulaMitoseetemdegradao
mediadapelocomplexoAPC(anaphasepromotingcomplex)

AlmdaExpressodeCiclinas(transcricionalvs.
protelise)aatividadedasCDKstambmregulada
poreventosPSTRADUCIONAIS

RegulaoPstraducionaldaAtivaodeCDK1

Wee1
CAK (MO15, Cdk7/CycH)

Cdc25

Regulao Simplificada da Transio G1-S do Ciclo Celular

G0
(Ps-mittica)

Rb
G1

Protooncogenes(MYC)

Ciclina/CDK

Reguladores Upstream

Ativaodeviasdesinalizaopor
Mitgenos

Rb
Ciclina / CDK
Entrada na
fase S

Rb=Rb,p107oup130

Ciclina D1 CDK4/6
Ciclina D3 CDK2
Ciclina E

Protenas Rb:
Supressores de Tumor que controlam o Ciclo Celular

RBL: Terceiro tipo de cncer

peditrico mais comum

Enucleao:
Perda de viso

Rb1 +/-

Somente ~10% de sobrevivncia

quando ocorre metstase

ProtenasCKI(CDKinhibitor)InibemasCDKs

Regulao Simplificada da Transio G1-S do Ciclo Celular

G0
(Ps-mittica)

Rb
G1

Protooncogenes(MYC)

Ciclina/CDK

Reguladores Upstream

Rb

SupressoresdeTumor(p53/Arf)

CKI

Ciclina / CDK

CKI
Entrada na
fase S

Rb=Rb,p107oup130

Kip
p21
p27
p57

Ink
p15, p16
p18, p19

Ciclina D1 CDK4/6
Ciclina D3 CDK2
Ciclina E

PontosdeChecagemouCheckpoints

necessrioumcontroledequalidadeda
replicaodoDNA

Aperfeionadivisomitoticacrucialpara
queoscromossomosduplicadossejam
corretamentedistribudosparaasclulasfilha

Oambienteestpropcioparaqueaclula
continueseproliferandoeentrenafaseS
novamente?

Mecanismos Moleculares deCheckpoints

regulam diretamente aatividade dasCDKs

TcnicasdeEstudo
Comodeterminaremquefasedociclocelularumaclulaest?
AnlogosdetimidinasoincorporadosaoDNA
nafaseSdoCiclo

Timidina Tritiada 3[H]

Bromodeoxi-Uridina BrdU
Iododeoxi-Uridina - IrdU

Citofluorometria

Uso de mltiplos marcadores de Fase S permite detectar

Re-Entrada no Ciclo Celular

P30p107single
Invivo
BrdU
24h

Invivo

Invitro

intervalo

3[H]timidina

48h

24h

Comparando a Quantidade Total de Clulas Proliferantes

3[H]thymidine

retinas

3[H]thymidine
H3-thymidine

RbRB1

Proportionofprogenitors
dividingatthat
developmentalstage
foreachanimal

3[H]thymidine
H3-thymidine

Kip1

Kip1
p27p27

time (hr)

EstudodaCinticadeProgressonoCicloCelular:
SadadoCicloCelularouAumentodotempodeCiclagem?
(ExitorLengthening?)

Proporodeclulas
proliferantesse
dividindo
Velocidadedeprogresso
nociclocelular

time (hr)

Infeco por Retrovrus Incompetente de Replicao no

Estudo da Proliferao Celular (Expanso Clonal)
E14.5

retina

retinas

10diasdecultura

RetrovrusIncapazdeReplicao

1
1

2
4 3
15
6
7
8
9

Clonede9clulas

ModelosdeEstudomaisModernos
Reprterfluorescentedasdiferentesfasesdociclocelularinvivo

SakaueSawanoetal.,2008Cell.132(3):48798.
Visualizingspatiotemporaldynamicsofmulticellularcellcycleprogression

MaisInformaes
MolecularBiologyofTHECELL Cap17
http://www.hchs.hunter.cuny.edu/wiki/index.
php?title=19th_Century_Science
http://www.nature.com/ncb/journal/v3/n1/fu
ll/ncb0101_e1.html