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Farmacopeia Brasileira PDF
Farmacopeia Brasileira PDF
Farmacopeia
Brasileira
Volume 1
5 edio
Braslia
2010
Copyright 2010 Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria / Fundao Oswaldo Cruz
Todos os direitos reservados. permitida a reproduo parcial ou total desta obra, desde que citada a fonte.
5 edio
Diretor-Presidente
Dirceu Raposo de Mello Editora Fiocruz
Brasil. Farmacopeia Brasileira, volume 2 / Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Braslia: Anvisa, 2010.
546p., 1v/il.
1. Substncias farmacuticas qumicas, vegetais e biolgicas. 2. Medicamentos e correlatos. 3. Especificaes e mtodos
de anlise. I Ttulo.
RESOLUO DA DIRETORIA COLEGIADA - RDC N. 49, DE 23 DE NOVEMBRO DE 2010
A Diretoria Colegiada da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, no uso da atribuio que lhe confere o inciso IV do
art. 11 do Regulamento aprovado pelo Decreto n. 3.029, de 16 de abril de 1999, e tendo em vista o disposto no inciso
II e 1 e 3 do art. 54 do Regimento Interno aprovado nos termos do Anexo I da Portaria N 354 da ANVISA, de 11 de
agosto de 2006, republicada no DOU de 21 de agosto de 2006, e ainda o que consta do art. 7 inciso XIX da Lei n. 9.782,
de 26 de janeiro de 1999, em reunio realizada em 11 de novembro de 2010, adota a seguinte Resoluo da Diretoria
Colegiada e eu, Diretor-Presidente, determino a sua publicao:
Art. 1 Fica aprovada a Farmacopeia Brasileira, 5 edio, constituda de Volume 1 Mtodos Gerais e textos e Volume
2 Monografias.
Art. 2 Os insumos farmacuticos, os medicamentos e outros produtos sujeitos vigilncia sanitria devem atender s
normas e especificaes estabelecidas na Farmacopeia Brasileira.
Pargrafo nico. Na ausncia de monografia oficial de matria-prima, formas farmacuticas, correlatos e mtodos gerais
na quinta edio da Farmacopeia Brasileira, para o controle de insumos e produtos farmacuticos admitir-se- a adoo
de monografia oficial, em sua ltima edio, de cdigos farmacuticos estrangeiros, na forma disposta em normas
especficas.
Art. 3 vedada a impresso, distribuio, reproduo ou venda da Farmacopeia Brasileira, 5 edio sem a prvia e
expressa anuncia da ANVISA.
Pargrafo nico. Sem prejuzo do disposto no caput desse artigo, a ANVISA disponibilizar gratuitamente em seu
endereo eletrnico cpia da quinta edio e de suas atualizaes.
Art. 4 Fica autorizada a Fundao Oswaldo Cruz, por meio da Editora Fiocruz, para a comercializao dos exemplares
da quinta edio da Farmacopeia Brasileira
Art. 5 Ficam revogadas todas as monografias e mtodos gerais das edies anteriores da Farmacopeia Brasileira.
Art. 6 Esta Resoluo entrar em vigor noventa (90) dias aps a sua publicao.
Volume 1
1 PREFCIO_______________________________________________________________________________ 7
2 HISTRICO______________________________________________________________________________ 13
3 FARMACOPEIA BRASILEIRA______________________________________________________________ 21
4 GENERALIDADES________________________________________________________________________ 39
5 MTODOS GERAIS_______________________________________________________________________ 59
5.1 Mtodos gerais aplicados a medicamentos_______________________________________________________ 59
5.2 Mtodos fsicos e fsico-qumicos_ ____________________________________________________________ 81
5.3 Mtodos qumicos__________________________________________________________________________ 162
5.4 Mtodos de farmacognosia___________________________________________________________________ 192
5.5 Mtodos biolgicos, ensaios biolgicos e microbiolgicos__________________________________________ 207
5.6 Mtodos imunoqumicos_ ___________________________________________________________________ 278
5.7 Mtodos fsicos aplicados a materiais cirrgicos e hospitalares_______________________________________ 279
6 RECIPIENTES PARA MEDICAMENTOS E CORRELATOS_______________________________________ 285
6.1 Recipientes de vidro _ ______________________________________________________________________ 285
6.2 Recipientes plsticos________________________________________________________________________ 288
7 PREPARAO DE PRODUTOS ESTREIS____________________________________________________ 321
7.1 Esterilizao e garantia de esterilidade__________________________________________________________ 321
7.2 Indicadores biolgicos_ _____________________________________________________________________ 326
7.3 Processo assptico_ ________________________________________________________________________ 329
7.4 Salas limpas e ambientes controlados associados_ ________________________________________________ 330
7.5 Procedimentos de liberao_ _________________________________________________________________ 336
8 PROCEDIMENTOS ESTATSTICOS APLICVEIS AOS ENSAIOS BIOLGICOS____________________ 338
8.1 Glossrio de smbolos_______________________________________________________________________ 338
8.2 Fundamentos______________________________________________________________________________ 339
8.3 Valores atpicos____________________________________________________________________________ 340
8.4 Ensaios diretos_ ___________________________________________________________________________ 341
8.5 Ensaios indiretos quantitativos________________________________________________________________ 341
8.6 Mdias mveis_ ___________________________________________________________________________ 346
8.7 Ensaios indiretos tudo ou nada______________________________________________________________ 347
8.8 Combinao de estimativas de potncia_________________________________________________________ 347
8.9 Tabelas estatsticas_________________________________________________________________________ 349
8.10 Exemplos de clculos estatsticos aplicados em ensaios biolgicos_ __________________________________ 359
9 RADIOFRMACOS_______________________________________________________________________ 373
10 EQUIVALNCIA FARMACUTICA E BIOEQUIVALNCIA DE MEDICAMENTOS__________________ 387
11 GUA PARA USO FARMACUTICO_________________________________________________________ 391
12 SUBSTNCIAS QUMICAS DE REFERNCIA_ _______________________________________________ 399
13 SUBSTNCIAS CORANTES________________________________________________________________ 401
14 REAGENTES_____________________________________________________________________________ 413
14.1 Indicadores e solues indicadoras_____________________________________________________________ 413
14.2 Reagentes e solues reagentes_ ______________________________________________________________ 421
14.3 Solues volumtricas_ _____________________________________________________________________ 501
14.4 Tampes_ ________________________________________________________________________________ 506
ANEXO A - TABELA PERIDICA DOS ELEMENTOS QUMICOS - NOMES, SMBOLOS
E MASSAS ATMICAS_________________________________________________________________________ 511
ANEXO B - UNIDADES DO SISTEMA INTERNACIONAL (SI) USADAS NA FARMACOPEIA E AS
EQUIVALNCIAS COM OUTRAS UNIDADES_ ____________________________________________________ 517
ANEXO C SOLVENTES PARA CROMATOGRAFIA________________________________________________ 523
ANEXO D ALCOOMETRIA____________________________________________________________________ 525
Volume 2
Monografias
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 7
a
1
1 PREFCIO
Prefaciar uma obra da magnitude de uma farmacopeia A produo cientfica emanada da quinta edio elevou
nacional no tarefa fcil. Ao apresentar um trabalho, em a FB 5 a um grau de destaque tcnico-cientfico com
que se teve envolvimento em todo o processo construtivo, reconhecimento por congneres internacionais.
deve se cuidar para emitir uma opinio com a maior
iseno possvel. Nada disso teria sido realizado, no fosse a estrutura
construda pela Comisso Permanente de Reviso da
Entretanto, um enorme orgulho poder externar, em nome Farmacopeia Brasileira, responsvel pela quarta edio, que
de uma Comisso e de diversos Comits, as impresses tem o mrito de ter estabelecido a dinmica necessria para
finais de uma obra de cunho tcnico e cientfico, a ser se elaborar um documento de tamanha responsabilidade
instrumento para aes de sade pblica que se destinam a e, principalmente, ter consolidado a mentalidade da real
proteger a populao de seu pas por meio da preveno do importncia desse compndio para uma sociedade em
risco sanitrio. No se deve negligenciar a fora poltica que constante evoluo.
a Farmacopeia Brasileira, 5 edio (FB 5) traz para o Pas.
Dessa forma, pode a CFB e seus Comits, em consonncia
Convocados que fomos, pela Agncia Nacional de com a Anvisa, trazer sociedade brasileira um novo cdigo
Vigilncia Sanitria (Anvisa), para presidir os trabalhos que totalmente revitalizado, apresentado em dois volumes
iriam dar forma quinta edio da Farmacopeia Brasileira, divididos em Mtodos Gerais e Monografias. Esto
no titubeamos um minuto sequer por conhecermos o includos cento e setenta e seis mtodos gerais e quinhentas
nvel de competncia, compromisso e responsabilidade e noventa e nove monografias, das quais duzentas e setenta
dos integrantes da Comisso da Farmacopeia Brasileira e sete de insumos farmacuticos, duzentas e dez de
(CFB). Na sequncia, a CFB indicou os coordenadores dos especialidades, cinquenta e sete de plantas medicinais, seis
Comits Tcnicos Temticos (CTT) e esses formaram suas de correlatos, trinta de produtos biolgicos e dezenove de
equipes utilizando o mesmo critrio. hemocomponentes e hemoderivados.
Temos, agora, uma obra que um marco divisor dessa e das No captulo de Generalidades (4), foi realizada a atualizao
futuras edies, bem como nas relaes profissionais entre das definies e a incluso de inmeras outras, atendendo
o corpo tcnico-cientfico, o administrativo e a sociedade. s especificidades de cada Comit.
As edies anteriores da Farmacopeia Brasileira no foram, Em Procedimentos tcnicos aplicados a medicamentos (5.1)
at ento, revogadas e, portanto, legalmente estavam em destacam-se a completa reviso do mtodo de uniformidade
vigor. Alm do prejuzo cientfico, pela defasagem dos de doses unitrias (5.1.6), agora harmonizado com
mtodos descritos, traziam certo entrave para as aes novos mtodos publicados pelas principais farmacopeias
sanitrias que so baseadas nas descries farmacopeicas internacionais. Outro destaque a incluso do teste de
quer para a rea de registro, quer para a rea de controle de gotejamento (5.1.8), de grande importncia para os estudos
qualidade, bem como para a fiscalizao. de equivalncia farmacutica das formas farmacuticas
lquidas de uso oral.
Por determinao superior, a CFB realizou rduo trabalho
de reviso das mil setecentas e vinte e sete monografias Em Mtodos fsicos e fsico-qumicos (5.2), foi realizada
inseridas nas quatro edies anteriores e props excluses, uma reviso completa dos Mtodos de espectrometria
reavaliaes textuais, reavaliaes metodolgicas, atmica (5.2.13), bem como dos mtodos de cromatografia
atualizaes para procedimentos mais seguros, incluses (5.2.17) que foram reescritos e se encontram bem mais
de novos textos, dentre outros. completos. Foi includo texto sobre mtodos de eletroforese
capilar (5.2.22.1) e inmeros outros que passaram ou por
Deu-se incio a projetos financiados pela Anvisa com reviso completa ou por modificao de texto.
participao de conceituadas Instituies de Ensino e
Pesquisa em uma forma pioneira de trabalho que envolveu Para os Mtodos qumicos (5.3), foi realizada reviso
duas centenas de profissionais da rea da sade, dentre eles completa dos ensaios limite, com nfase para a eliminao
uma boa parte do meio acadmico, fornecendo ao pas mo do uso de cido sulfdrico e a incluso da espectrometria
de obra qualificada para atendimento ao setor farmacutico atmica no Ensaio limite para metais pesados (5.3.2.3).
brasileiro. Incluiu-se o Ensaio iodomtrico de antibiticos (5.3.3.10),
cujo procedimento era, anteriormente, descrito em cada
O envolvimento com a Academia, como era de se esperar, monografia passando, agora, a contar com um mtodo
levou produo de uma centena de informaes tcnicas e geral prprio.
cientficas por meio de publicaes de artigos, apresentao
de trabalhos em congressos, discusses em mesas Os Mtodos de farmacognosia (5.4) foram revistos e
redondas, palestras em eventos nacionais e internacionais, ampliados, com destaque para os Mtodos de preparao
elaborao de teses de doutorado, dissertaes de mestrado e anlise de extratos vegetais (5.4.3), com o acrscimo de
e monografias de concluso de cursos de especializao. seis novos mtodos gerais.
1 8 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Os Mtodos biolgicos, ensaios biolgicos e Todos os anexos foram revisados e foi includo o Anexo C,
microbiolgicos (5.5) so apresentados com a incluso que trata de solventes comumente empregados em anlises
de uma srie de Mtodos biolgicos (5.5.1), tais como os cromatogrficas.
doseamentos de fatores da coagulao sangunea humana,
totalizando dezesseis novos mtodos. Realizou-se o No podemos ter a ingenuidade de pensar uma farmacopeia
trabalho de reorganizao; reviso e ampliao dos ensaios sem equvocos. Apesar de todos os textos terem sido
biolgicos (5.5.2) e microbiolgicos (5.5.3). submetidos a consulta pblica e a uma reviso criteriosa,
caso ainda tenha sido includa alguma informao
Em Recipientes para medicamentos e correlatos (6), bem inadequada, que possa levar dificuldade compreenso
como em Mtodos de preparao de produtos estreis (7), final, haver na Coordenao da Farmacopeia Brasileira
foram realizadas reviso completa com reorganizao e um procedimento para sanar a dvida e providenciar a
ampliao de textos para medicamentos e correlatos. substituio, se for o caso, com rapidez. Novos textos ou
correes estaro disponibilizadas no meio eletrnico da
Novos exemplos de ensaios foram inseridos e, aqueles farmacopeia, novidade da presente edio.
constantes da quarta edio da Farmacopeia Brasileira
foram revisados em Procedimentos estatsticos aplicveis No estaramos entregando a FB 5 no fosse a dedicao
aos ensaios biolgicos (8). extrema de todos os membros da CFB, dos CTT, da
COFAR e de todos os colaboradores. Sem o conhecimento
Trs novos captulos foram includos: Equivalncia tcnico-cientfico dessas pessoas e sem a conduo firme
Farmacutica e Bioequivalncia (10); gua para uso da Diretora Maria Ceclia Brito Martins, nosso caminho
farmacutico (11) e Substncias qumicas de referncia teria sido ainda mais tortuoso.
(12). A incluso de novos captulos foi iniciativa dos
referidos Comits e traz luz informaes de literatura Apesar de insistir nos agradecimentos, entendemos que
aliada s experincias profissionais de seus respectivos essas pessoas, por se identificarem com os problemas
membros. O captulo de Substncias corantes (13) foi sanitrios do Pas, participaram de todo esse processo
revisto e ampliado. imbudos em um esprito cvico j que so, em sua maioria,
voluntrios.
Trabalho especial foi a consolidao do captulo de
Reagentes (14). Nesse captulo foram congregados todos Reiteramos que todo o processo que culminou com a
os indicadores, solues indicadoras, reagentes, solues publicao da FB 5 se perder se no for implementada
reagentes, solues volumtricas e tampes descritos nas uma real poltica de Estado que nos garanta a continuidade
monografias do volume 2 da FB 5. Com isso, eliminou-se dos trabalhos da Comisso da Farmacopeia Brasileira e dos
a descrio do reagente na prpria monografia dando uma CTT responsveis pelos demais produtos: Farmacopeia
leitura mais dinmica por meio da utilizao do captulo Homeoptica, Formulrio Nacional, Denominaes
especfico. So descritos, atualmente, mil e cinquenta e um Comuns Brasileiras, Substncias Qumicas de Referncia
ttulos que representam um acrscimo acima de cem por e Formulrio Fitoterpico.
cento em relao edio anterior.
Aprovando esta 3 edio da Farmacopeia, com a expedio Acresce, ainda, que a par dessa relao e dos subsdios,
do Decreto 78.840/76, referendado pelo Ministro da tomou-se por legtimo, tambm, um levantamento dos
Sade, o Exmo. Sr. Presidente da Repblica contemplou medicamentos de maior representatividade no receiturio
o Ministrio da Sade e a classe mdica e farmacutica e consumo nacionais.
do pas, com mais esse importante instrumento farmaco Tem-se, pois, que esse elenco e, mais, as monografias
tcnico e normativo de grande alcance, na sequncia revistas, remanescentes da 2 edio, constituem, no
de outras medidas de operacionalizao que vm sendo todo, o acervo monogrfico da 3 edio da Farmacopeia
implantadas nesse destacado Setor da vida nacional. Brasileira.
Ao submeter os originais desta 3 edio aprovao do Por certo restaro outras monografias a acrescentar,
Presidente Ernesto Geisel, o Ministro no s a obteve, como tanto como algumas existentes, ou persistentes, talvez
pde, e era de seu empenho, comemorar o cinquentenrio possam estar suscetveis de supresso. Esta evidncia s
1 12 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
fala em favor da prpria Farmacopeia, dinmica como a apresentao. O rpido avano da tecnologia e a crescente
teraputica, e pendente de atualizaes mais frequentes, complexidade das substncias medicinais determinam a
como soe ser a prpria Farmacologia. necessidade de frequentes revises da Farmacopeia. Para
facilitar estas revises e possibilitar introduo de novas
Tendo em conta que a 2 edio da Farmacopeia monografias e mtodos de anlise necessrios, a Comisso
Brasileira encontra-se esgotada, e que muitas monografias adotou esta nova forma de apresentao.
constantes da mesma, no revistas, representam ainda
fonte bibliogrfica de mrito e com fora legal, decidiu a O presente volume constitui a Parte I da Farmacopeia e
Comisso que o 1 Suplemento da 3 edio representar, compreende as generalidades, e os mtodos gerais de
no todo e exclusivamente, o constante daquele acervo, a se anlise. A Parte II ser constituda de monografias de
publicar em sequncia imediata a desta nova edio. matrias-primas e especialidades farmacuticas, publicadas
em fascculos. Um ndice indicar o ttulo das monografias,
Crticas, correes e reparos, que se espera, todos sero seus nmeros de referncia e a data para sua entrada em
compreensivelmente aceitos. E roga-se, desde agora, vigor.
que sejam feitos de modo claro e objetivo, para maior
facilidade das edies que se sucedero. Todos eles, A Farmacopeia Brasileira em sua 4 edio tem vigncia
quando construtivos, representaro valioso subsdio para em todo o Territrio Nacional. A nomenclatura, os mtodos
o aprimoramento da Farmacopeia Brasileira, tanto quanto de identificao e anlise e todos os demais dados nela
este trabalho pretende ser, no confronto natural com a contidos prevalecem sobre quaisquer outros assinalados
edio anterior. em cdigos farmacuticos diversos. Nos casos omissos,
podem ser utilizados a Farmacopeia Internacional, a
Farmacopeia Europia e outros cdigos farmacuticos em
PREFCIO DA Farmacopeia BRASILEIRA,
suas ltimas edies.*
4 EDIO
As monografias da Farmacopeia Brasileira 4 edio
Dando cumprimento s disposies do Decreto Federal
estabelecem parmetros que o produto dever satisfazer
n 78.840, de 25/11/1976, a nova edio da Farmacopeia
a qualquer tempo durante seu perodo de uso e no para
Brasileira vem ao encontro dos desejos da comunidade
serem interpretados somente como especificaes para
tcnico-cientfica brasileira, manifestamente interessada
liberao por parte do fabricante.
na reviso da edio anterior.
A no incluso de um frmaco ou adjuvante de fabricao
A Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
na 4 edio da Farmacopeia Brasileira no dispensa estas
Brasileira, constituda pela Portaria n 151/82 do Exmo.
substncias de anlise segundo outros cdigos oficiais; assim
Ministro da Sade, s pde realizar seu trabalho graas
como a presena de impureza no descrita especificamente
ao apoio decisivo da Secretaria Nacional de Vigilncia
na Farmacopeia no significa que a substncia pode ser
Sanitria - SNVS - do Ministrio da Sade. Acordos
usada pelo simples fato de a Farmacopeia no a especificar.
e convnios celebrados entre a SNVS, a Central de
Nestes casos, a deciso deve ser tomada com base no bom
Medicamentos - CEME - do Ministrio da Previdncia
senso tcnico e nas boas prticas de fabricao.
e Assistncia Social - MPAS - e o Conselho Nacional
de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq A Farmacopeia obra para profissionais devidamente
-, asseguraram Comisso recursos financeiros qualificados e treinados. Por este motivo, no fornece
indispensveis, incluindo bolsas de estudos para execuo explicaes didticas, apresentando as monografias com
dos trabalhos. redao clara, sucinta e desprovidas de mincias julgadas
desnecessrias pela Comisso.
A elaborao das monografias foi confiada a profissionais
com efetiva experincia no assunto; estas monografias A Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
foram revisadas por outros profissionais do mesmo campo Brasileira torna pblicos seus agradecimentos a todos
de atividade. Apesar disto, eventuais imperfeies, erros ou aqueles que colaboraram no preparo desta edio e, em
omisses so de responsabilidade exclusiva da Comisso especial, ao Conselho Federal de Farmcia pelo apoio que
Permanente de Reviso da Farmacopeia Brasileira, a quem possibilitou a publicao oficial da F. Bras. IV.
coube a aprovao do texto final.
* Normas Nacionais extrafarmacopicas devero obter
A 4 Edio da Farmacopeia Brasileira marca o incio de previamente aprovao da Comisso Permanente de
nova era. Trata-se de edio na qual se adota novo sistema de Reviso da Farmacopeia Brasileira do Conselho Nacional
de Sade.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 13
2 HISTRICO
BREVE ATUALIZAO HISTRICA DA A terceira edio da Farmacopeia Brasileira esperou
2
FARMACOPEIA BRASILEIRA, 5 EDIO dezessete anos para ser publicada por meio do Decreto N
78.840 de vinte e cinco de novembro de 1976 e refora a
A quase centenria Farmacopeia Brasileira ilustra um edio anterior ampliando e modernizando o seu contedo.
ciclo de grande importncia para o pas. Partindo de sua
primeira edio, fruto de laborioso trabalho de um nico Da mesma forma que as anteriores, a quarta edio da
farmacutico, atravessou oito dcadas buscando seu Farmacopeia Brasileira foi elaborada a partir de iniciativa
espao, de fato e de direito, como instrumento fundamental de abnegados profissionais da sade. Os trabalhos foram
de apoio s polticas nacionais de sade emanadas de iniciados 1982 com a criao da Comisso de Reviso da
governos com projetos srios de proteo ao cidado Farmacopeia Brasileira (CPRFB) nomeada pelo Diretor da
brasileiro. Secretaria Nacional de Vigilncia Sanitria, Dr. Antnio
Carlos Zanini.
Tivessem sido respeitadas as determinaes dos decretos
e resolues que indicavam reviso a cada quinqunio Somente em 1988 foi possvel o lanamento da Parte I da
estar-se-ia publicando a sua dcima stima edio o que quarta edio, contendo mtodos gerais, e deu-se incio a
infelizmente no est ocorrendo, certamente por problemas elaborao da Parte II contendo as monografias de frmacos
ocorridos mas sem nenhum demrito ao passado, visto que e especialidades. A entrega do primeiro fascculo se deu
o nosso objetivo sempre olhar para frente. em 1996. A dedicao, persistncia e incansvel trabalho
do Dr. Celso F. Bittencourt, ento Presidente da CPRFB,
Inicia-se o sculo XX, as boticas so os principais locais contriburam para a criao e manuteno da infraestrutura
da prtica sanitria e o pas experimenta a convivncia com necessria ao desenvolvimento dos fascculos da quarta
a sua jovem repblica. Rodolpho Albino Dias da Silva se edio at a sua concluso reforando as bases para o
entrega a um trabalho hercleo de repassar para um livro prosseguimento dos trabalhos at o presente. A participao
toda uma vida de pesquisa sobre as drogas vegetais e do meio acadmico, por meio de universidades pblicas,
animais, descrio de produtos qumicos e de preparaes foi e continua a ser, intensa e imprescindvel.
oficinais. Nasce, assim, a primeira edio da Farmacopeia
Brasileira, oficializada pelo governo federal por meio do Com a criao da Anvisa, em 1999, a reviso permanente
decreto N 17.509 de quatro de novembro de 1926, porm da Farmacopeia Brasileira passa a ser de responsabilidade
obrigatria a partir de quinze de agosto de 1929. administrativa, tcnica e cientfica da agncia. O slido
apoio da Diretoria Colegiada, desde ento, especialmente
Uma grande guerra assola o planeta nos anos quarenta e por seu primeiro Diretor Presidente Dr. Gonzalo Vecina
em seguida uma grande mudana mundial se faz sentir em Neto, levou a Comisso Permanente de Reviso da
todos os pases desenvolvidos ou em desenvolvimento, e Farmacopeia Brasileira a atingir a maturidade de seus
a nossa primeira edio j no mais cumpre o seu papel. trabalhos.
As boticas so substitudas, gradativamente, por farmcias
que no mais realizam a arte da manipulao magistral e Foram construdas metodologias de trabalho baseadas
decretado o incio de um fim do enorme servio prestado nas mais modernas e atualizadas referncias mundiais em
pelo profissional de farmcia populao. O pas invadido consonncia com publicaes de cdigos farmacuticos
por indstrias multinacionais que, aos poucos, conseguem realizados por congneres de farmacopeias internacionais
eliminar todas as pequenas empresas brasileiras do ramo. de grande respeitabilidade na esfera farmacutica mundial.
Paralelamente, tem-se incio ao acesso de medicamentos Por meio de contratos e convnios conseguiu-se financiar
modernos que exigem controle de qualidade diferenciado estudos laboratoriais e pode-se, assim, serem lanados os
devido produo em grande escala e quantidade de fascculos 2 (2000); 3 (2002); 4 (2003); 5 (2004) e 6 (2005)
frmacos sintetizados e originrios de diversas fontes. esse ltimo j na gesto do Diretor-Presidente Dr. Dirceu
A Farmacopeia no escapou do movimento modernista Raposo de Mello, completando assim, a quarta edio da
impresso pelo Presidente Juscelino Kubitschek que, em Farmacopeia Brasileira.
1959 assina o Decreto N 45.502 aprovando a segunda
edio da Farmacopeia Brasileira. Nesse nterim foram ainda publicados, o fascculo 1
da Farmacopeia Homeoptica Brasileira 2 edio, e
J em outra realidade, aquela edio se apresenta voltada o Formulrio Nacional. Foram certificados 67 lotes
para os insumos e especialidades farmacuticas buscando de substncias qumicas de referncia da Farmacopeia
padres nacionais de qualidade dos bens de sade a serem Brasileira e monitorados outros 58 lotes.
disponibilizados sociedade. As formulaes oficinais
foram, ento, enviadas para uma publicao futura que O fato de uma nova edio da Farmacopeia Brasileira,
se pretendia publicar como Formulrio Nacional o que no revogar edies anteriores sempre foi um entrave
somente ocorreu nos anos oitenta. para as aes reguladoras de vigilncia sanitria. Decidiu-
se, portanto, trabalhar a quinta edio de forma a realizar
14 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
um levantamento exaustivo de todos os textos publicados Como Presidente da Comisso da Farmacopeia Brasileira
nas quatro edies, avaliar necessidades de permanncia, resta-nos o espao para externar os sinceros agradecimentos
de substituio de textos e procedimentos com ou sem a todos que ajudaram a construir esta obra e ter a certeza
avaliao laboratorial, e de excluso de monografias que continuaremos a trabalhar de forma parceira para
2 obsoletas.
Durante o longo perodo de 1.851 a 1.929 foi obrigatrio o Em 4 de novembro de 1.926, pelo Decreto n 17.509,
Codex francs, para a confeco dos preparados oficinais, assinado pelo Presidente da Repblica, Dr. Arthur da Silva
at que estivesse organizado o Cdigo Farmacutico Bernardes, e pelo Ministro do Interior e Justia, Dr. Affonso
Brasileiro. Assim determinaram todos os regulamentos Penna Junior, nos termos do artigo 252 do Decreto n.
sanitrios, entre les os dos Decretos n 169 de 1.890; n
1.172, de 1.892; n 1.647, de 1.894; n 2.449, de 1.897,
cuja tabela de livros foi reduzida ao Codex francs e
16.300, de 31 de dezembro de 1923, foi aprovada e adotada
como Cdigo Farmacutico Brasileiro a Farmacopeia
Brasileira, elaborada pelo Farmacutico Rodolpho Albino
2
aos Formulrios de Dorvault, Bouchardat, Chernoviz e Dias da Silva, com as emendas da comisso revisora. O
Langaard; n 2.458 de 1.897; 5.156 de 1.904; 14.189 e Cdigo entraria em vigor 60 dias depois da publicao da
14.354, de 1.920 (D. N. S. P.); 15.003, de 1.921 e 16.300, primeira edio oficial, ficando sua execuo a cargo do
de 31-12-1923. Departamento Nacional de Sade Pblica, por intermdio
da Inspetoria de Fiscalizao do Exerccio da Medicina.
No entanto, o desejo de possurem os farmacuticos Executou a obra, mediante concorrncia publica, a
brasileiros seu Cdigo Nacional foi manifestado em muitas Companhia Editra Nacional, de So Paulo, que terminou
oportunidades pelos rgos cientficos de classe. Vrias sua publicao em 1.929. Ficou obrigatria a Farmacopeia
comisses foram nomeadas para sua elaborao, sem a partir de 15 de agsto de 1.929.
resultado.
Afinal, tinha o Brasil sua Farmacopeia, obra de um
Foram vos os esforos de Ezequiel Corra dos Santos, s homem, obra que era, no julgamento de eminentes
de Silva Costa, de Corra Dutra, Oliveira Fausto, Almeida farmaclogos do mundo, um dos mais adiantados e
Rego, Eugnio Marques de Hollanda, Eduardo Julio atualizados cdigos farmacuticos do seu tempo.
Janvrot e outros.
Rodolpho Albino, natural do Estado do Rio de Janeiro,
Smente em 1.887, atendendo s solicitaes dos centros nascido na cidade de Cantagalo, faleceu prematuramente
cientficos nacionais, o Govrno Imperial procurou resolver no Rio de Janeiro, aos 42 anos de idade, a 7 de outubro de
o problema, instituindo uma comisso, da qual faziam 1931.
parte, entre outros, Ezequiel Corra dos Santos Filho,
Agostinho Jos de Souza Lima e Marques de Hollanda. Todos os cdigos farmacuticos so revistos
peridicamente; e assim, a fim de coligir, coordenar e
Dessa comisso, porm, nada de prtico resultou, de sorte estudar sugestes, de modo a proporcionar facilidades para
que, passados dez anos, em 1.897, o Ministro do Interior uma futura reviso, em 1.932, por proposta feita em uma
e Justia, Amaro Cavalcanti, nomeou outra comisso com das sesses da Associao Brasileira de Farmacuticos, foi
a mesma finalidade e da qual faziam parte os professres nomeada uma comisso para tal fim, cabendo a presidncia
Agostinho de Souza Lima, Csar Diogo e Orlando Rangel. ao Prof. Joo Vicente de Souza Martins, que elaborou uni
Fracassou tambm a nova tentativa. regimento interno, criando vrias seces. Esta comisso
trabalhou at 1.938, quando o presidente da Associao
O Brasil, porm, que sempre tem sabido ombrear com as
Brasileira de Farmacuticos, Prof. Virglio Lucas, dirigiu
demais naes civilizadas em todos os ramos das cincias,
ao Ministro da Educao e Sade o pedido de nomeao
das artes, etc., no podia continuar a ser regido, quanto ao
de uma comisso oficial para proceder reviso do nosso
exerccio da Farmcia, por um cdigo estrangeiro, que,
Cdigo, visto j haver matria bastante a estudar e deliberar.
embora timo para o seu pas, no satisfazia em absoluto
s novas necessidades. Por isso, embora reconhecendo Essa Comisso, nomeada pela Portaria n 1.21-A, de 23
o arrjo de tal iniciativa, resolvemos arcar com a rdua de junho de 1.938, pelo Ministro Gustavo Capanema, foi
tarefa e alta responsabilidade de redigir o nosso futuro constituda pelos sete membros seguintes: Profs. Renato
cdigo farmacutico, fiados em que o nosso grande amor Guimares de Souza Lopes, Oswaldo de Almeida Costa,
profisso vencesse todos os bices, transpusesse todos Virglio Lucas e Abel Elias de Oliveira; Farms. Antnio
os obstculos. (*) O Farmacutico, na ocasio ainda de Caetano de Azevedo Coutinho e Oswaldo de Lazzarini
nome pouco conhecido, Rodolpho Albino Dias da Silva, Peckolt e mdico Sebastio Duarte de Barros. Pela portaria
em 1.924, aps mais de dez anos de paciente trabalho, pde n 141, de 22 de abril de 1.939, foi a comisso acrescida de
apresentar seu projeto de Farmacopeia Brasileira ao Dr. mais dois membros, o Prof. Artidnio Pamplona e o Farm.
Carlos Chagas, Diretor Geral do Departamento Nacional Jos Eduardo Alves Filho.
de Sade Pblica. Para julgar sse trabalho, nomeou o
Dr. Chagas uma comisso, constituda pelos Professres Essa Comisso, a despeito das dificuldades encontradas,
Doutores Antnio Pacheco Leo, Renato de Souza Lopes realizou alguma coisa de til, propondo excluses de
e Artidnio Pamplona, e Farmacuticos Alfredo da Silva drogas obsoletas e incluses de outras de maior intersse,
Moreira, Jos Malhado Filho e Isaac Werneck da Silva conforme o relatrio apresentado pelo Farm. Oswaldo
Santos. Peckolt ao Terceiro Congresso Brasileiro de Farmcia,
reunido em Belo Horizonte, de 14 a 21 de abril de 1.939.
Aps exame minucioso da obra, essa Comisso resolveu
aceit-la, solicitando do Govrno a sua oficializao, como O Decreto n 810, de 1 de julho de 1.942, que aprovou
Cdigo Nacional Farmacutico, com a supresso, porm, o Regimento do Servio Nacional de Fiscalizao da
de certos artigos por ela considerados de uso assaz restrito Medicina, imprimindo nova feio a sse rgo, considerou
para serem oficializados, os quais vm enumerados no adstritas ao mesmo, sob a presidncia do respectivo
prefcio da primeira edio. diretor, a Comisso de Biofarmcia e a de Reviso da
16 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Farmacopeia; passou ento esta a ser constituda de um presidente, Dr. Roberval Cordeiro de Farias, pelo Dr.
professor da Faculdade Nacional de Farmcia ou de Vasco Barcelos e depois pelo Dr. Benoni Laurindo Ribas,
outra a ela equiparada, um mdico clnico, um biologista que o haviam sucedido tambm na Diretoria do Servio;
lotado no Instituto Oswaldo Cruz, um qumico, um tcnico outrossim, nos impedimentos ocasionais dos respectivos
O Regimento Interno baixado com o Decreto n 21.339, de Quando se reuniu, na cidade de So Paulo, o V Congresso
20 de junho de 1.946, e modificado pelo Decreto n 29.828, Brasileiro de Farmcia, conjuntamente com o III Congresso
de 30 de julho de 1.951, tendo por finalidade a organizao Farmacutico e Bioqumico Pan-Americano, de 1 a 8 de
e a competncia dos diversos rgos de sade pblica, no dezembro de 1954, a contribuio paulista se concretizou
alterou substancialmente as disposies que haviam sido num ante-projeto da Farmacopeia, apresentado quele
estabelecidas anteriormente, continuando a Comisso a certmen, sendo dados novos rumos aos trabalhos.
funcionar regularmente.
O Congresso, ratificando moo aprovada no III Congresso
A Portaria n 147, de 6 de novembro de 1.951, aprovando as Brasileiro de Farmcia, realizado em Belo-Horizonte de 14
Instrues sugeridas pelo Servio Nacional de Fiscalizao a 21 de abril de 1.939, e o voto expresso no II Congresso
da Medicina, de acrdo com o Regimento citado, e Farmacutico e Bioqumico Pan-Americano, levado a
modificando a orientao at ento seguida, determinou a efeito em Lima de 1 a 8 de dezembro de 1.951, recomendou
nomeao, para a Comisso de Reviso da Farmacopeia a organizao de um Formulrio Nacional, como unidade
e suas subcomisses, de cientistas de todo o pas, complementar, do qual passariam a constar as drogas e os
especializados nas matrias em estudo e incumbindo-a de medicamentos de emprgo usual que no constassem da
reeditar decenalmente a Farmacopeia; transformou ainda o Farmacopeia.
primitivo rgo em Comisso Executiva, coordenadora e
principal responsvel por todos os trabalhos. Dos debates realizados resultou a deliberao de exame em
conjunto, pelas comisses do Rio e de So Paulo, de todo o
Assim foram confirmados na qualidade de membros da material de estudo at ento reunido, de modo a possibilitar
Comisso Executiva os antigos componentes da Comisso o trmino da reviso em curto prazo.
Revisora, ocorrendo posteriormente a substituio do
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 17
Tanto assim que a 13 de Junho de 1962, mediante Portaria de muita pertinncia ressaltar o significativo fato de
n 82 do Departamento Nacional de Sade; uma primeira que a colaborao profissional para relatar: monografias
comisso foi constituda para os trabalhos de reviso, representou um movimento de sentido nacional, acorrendo
para ela nomeados os Drs. Fernando Luz Filho, Lauro adeses de todos os quadrantes do Pas.
O vocbulo Farmacopeia provm da aglutinao de composta uma Farmacopeia brasileira..., situao esta
dois termos gregos, a saber, = medicamento que iria perdurar at 1926, quando o Decreto no 17.509 de
ou veneno, e = fabricante e fabricao. As 04/11/1926 aprovou a primeira Farmacopeia Brasileira,
Farmacopeias constituem cdigos farmacuticos oficiais de autoria de Rodolpho Albino Dias da Silva, tornada
ou oficialmente adotados, nos quais se estabelecem a
identificao, os padres de qualidade e os mtodos de
anlise dos frmacos em uso. Existentes desde o sculo
obrigatria a partir de 15 de agosto de 1929.
3 FARMACOPEIA BRASILEIRA
PRESIDENTES DAS EDIES ANTERIORES DA FARMACOPEIA BRASILEIRA
RODOLPHO ALBINO DIAS DA SILVA 1 edio
LUIZ SALGADO LIMA FILHO 2 edio
FERNANDO AYRES CUNHA 3 edio
JOO GILVAN ROCHA
CELSO FIGUEIREDO BITTENCOURT
4 edio Parte I
4 edio Parte II 3
COMISSO DA FARMACOPEIA BRASILEIRA - CFB
PRESIDENTE
GERSON ANTNIO PIANETTI
VICE-PRESIDENTE
MIRACY MUNIZ DE ALBUQUERQUE
MEMBROS
ROSANGELA ANDRADE
Linde Gases Ltda.
SILAS GOUVEIA
Fundao Ezequiel Dias - FUNED
3
ROSANGELA BOLZAN SILSIA DE SOUZA AMORIM
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
3 Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP
4 GENERALIDADES
TTULO considerada fortemente alcalina quando se cora de azul
por uma gota de timolftaleina SI (pH 9,3 a 10.5) ou de
O ttulo completo desta obra Farmacopeia da Repblica vermelho por uma gota de fenolftaleina SI (pH 10,0 a 13,0).
Federativa do Brasil, 5 edio. Pode ser denominada
Farmacopeia Brasileira, 5 edio ou FB 5.
Adesivo
Banho a vapor significa exposio ao vapor fluente ou Normalmente so preenchidas com contedos lquidos ou
outra forma de calor, correspondendo em temperatura do semisslidos, mas podem ser preenchidas tambm com ps
vapor fluente. e outros slidos secos. Abreviatura: cap. mole
4
e quantitativa de princpio(s) ativo(s), e que tenham Normalmente so preenchidas com contedos lquidos ou
comparvel biodisponibilidade, quando estudados sob um semisslidos, mas podem ser preenchidas tambm com ps
mesmo desenho experimental. e outros slidos secos. Vide definio geral de liberao
retardada. Abreviatura: cap. mole lib. ret.
Cpsula
Cilindro de gs
a forma farmacutica slida em que o princpio ativo e os
excipientes esto contidos em um invlucro solvel duro o recipiente metlico, perfeitamente fechado, de paredes
ou mole, de formatos e tamanhos variados, usualmente, resistentes, destinado a conter gs sob presso, obturado
contendo uma dose nica do princpio ativo. Normalmente por vlvula regulvel, capaz de manter a sada do gs em
formada de gelatina, mas pode, tambm, ser de amido ou vazo determinada.
de outras substncias. Abreviatura: cap.
a cpsula que consiste de duas sees cilndricas pr- a preparao farmacutica lquida destinada aplicao
fabricadas (corpo e tampa) que se encaixam e cujas sobre a mucosa ocular. Abreviatura: col.
extremidades so arredondadas. tipicamente preenchida
com princpios ativos e excipientes na forma slida. Complexo protrombnico humano total liofilizado
Normalmente formada de gelatina, mas pode tambm ser
de outras substncias. Abreviatura: cap. dura uma frao de protenas plasmticas que contm
obrigatoriamente os Fatores II, VII, IX e X da coagulao
Cpsula dura de liberao prolongada humana.
o comprimido contendo, em adio aos ingredientes o comprimido que possui uma ou mais camadas finas
ativos, substncias cidas e carbonatos ou bicarbonatos, os de revestimento, normalmente polimricas, destinadas
quais liberam dixido de carbono quando o comprimido a modificar a velocidade ou extenso da liberao dos
dissolvido em gua. destinado a ser dissolvido ou princpios ativos, apresentando uma liberao retardada
disperso em gua antes da administrao. Abreviatura: do princpio ativo. Veja definio de liberao retardada.
comp. efer. Abreviatura: comp. rev. lib. ret.
o comprimido formulado para que possa ser mastigado, o comprimido em que excipientes usados no so
produzindo um sabor residual agradvel na cavidade oral. destinados, especificamente, a modificar a liberao do
Abreviatura: comp. mast. princpio ativo nos fluidos digestivos. Abreviatura: comp.
sem rev.
Comprimido orodispersvel
4
Controle de qualidade
o comprimido que desintegra ou dissolve, rapidamente,
quando colocado sobre a lngua. Abreviatura: comp. orodis. o conjunto de medidas destinadas a garantir, a qualquer
momento, a produo de lotes de medicamentos e demais
produtos, que satisfaam s normas de identidade,
Comprimido para colutrio
atividade, teor, pureza, eficcia e inocuidade.
o comprimido que deve ser dissolvido em gua para a
preparao do colutrio, que um lquido destinado ao Corantes
enxgue bucal de ao sobre as gengivas e as mucosas da
boca e da garganta. No deve ser deglutido. Abreviatura: So substncias adicionais aos medicamentos, produtos
comp. colu. dietticos, cosmticos, perfumes, produtos de higiene e
similares, saneantes domissanitrios e similares, com o
efeito de lhes conferir cor e, em determinados tipos de
Comprimido para soluo
cosmticos, transferi-la para a superfcie cutnea e anexos
o comprimido destinado a ser dissolvido na gua antes da pele. Para seu uso observar a legislao Federal e as
da administrao. A soluo produzida pode ser levemente resolues editadas pela Anvisa.
leitosa devido aos excipientes utilizados na fabricao dos
comprimidos. Abreviatura: comp. sol.
Correlato
Comprimido para suspenso
Produto para a sade, tal como equipamento, aparelho,
o comprimido que quando em contato com um material, artigo ou sistema de uso ou aplicao mdica,
lquido, rapidamente produz uma disperso homognea odontolgica ou laboratorial, destinado preveno,
(suspenso). destinado a ser disperso antes da diagnstico, tratamento, reabilitao ou anticoncepo
administrao. Abreviatura: comp. susp. e que no utiliza meio farmacolgico, imunolgico ou
metablico para realizar a sua principal funo em seres
humanos podendo, entretanto, ser auxiliado em suas
Comprimido revestido
funes por tais meios.
o comprimido que possui uma ou mais camadas finas
de revestimento, normalmente, polimricas, destinadas a Cosmticos
proteger o frmaco do ar ou umidade; para frmacos com
odor e sabor desagradveis; para melhorar a aparncia dos So produtos para uso externo; destinados proteo, ou ao
comprimidos, ou para alguma outra propriedade que no embelezamento das diferentes partes do corpo, tais como
seja a de alterar a velocidade ou extenso da liberao do ps faciais; talcos; cremes de beleza; creme para as mos
princpio ativo. Abreviatura: comp. rev. e similares; mscaras faciais; loes de beleza; solues
leitosas; cremosas e adstringentes; loes para as mos;
bases de maquilagem e leos cosmticos; ruges; blushes;
Comprimido revestido de liberao prolongada
batons; lpis labiais; preparados antisolares; bronzeadores
o comprimido que possui uma ou mais camadas finas e simulatrios; rimeis; sombras; delineadores; tinturas
de revestimento, normalmente polimricas, destinadas capilares; agentes clareadores de cabelos; preparados para
a modificar a velocidade ou extenso da liberao dos ondular e para alisar cabelos; fixadores de cabelos; laqus;
princpios ativos. Veja a definio de liberao prolongada brilhantinas e similares; loes capilares; depilatrios e
Abreviatura: comp. rev. lib. prol. epilatrios; preparados para unhas e outros.
42 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Creme Drgeas
a forma farmacutica semisslida que consiste de So comprimidos revestidos com camadas constitudas por
uma emulso, formada por uma fase lipoflica e uma misturas de substncias diversas, como resinas, naturais
fase hidroflica. Contm um ou mais princpios ativos ou sintticas, gomas, gelatinas, materiais inativos e
dissolvidos ou dispersos em uma base apropriada e insolveis, aucares, plastificantes, poliis, ceras , corantes
utilizada, normalmente, para aplicao externa na pele ou autorizados e, s vezes, aromatizantes e princpios ativos.
nas membranas mucosas. Abreviatura: drag.
So constitudos pelas fraes insolveis a frio contendo a preparao farmacutica, lquida, lmpida, hidroalco-
principalmente os Fatores I (140 a 250 mg ) e VIII (70 a lica, de sabor adocicado, agradvel, apresentando teor al-
120 UI) da coagulao humana por unidade de coleta de colico na faixa de 20% a 50%.
sangue humano. Outros fatores da coagulao tambm
so encontrados em menores concentraes junto ao Os elixires so preparados por dissoluo simples e devem
crioprecipitado como o Fator de Von Willebrand (40 a ser envasados em frascos de cor mbar e mantidos em lu-
Embalagem primria
Densidade de massa e densidade relativa
a que est em contato direto com seu contedo durante
Densidade de massa (r) de uma substncia a razo de sua
todo o tempo. Considera-se material de embalagem
massa por seu volume a 20 oC.
primria: ampola, bisnaga, envelope, estojo, flaconete,
20
A densidade relativa usualmente adotada ( d 20 ) definida frasco de vidro ou de plstico, frasco-ampola, cartucho,
como a relao entre a massa de uma substncia ao ar lata, pote, saco de papel e outros.
a 20 oC e a massa de igual volume de gua na mesma
No deve haver qualquer interao entre o material de
temperatura.
embalagem primria e o seu contedo capaz de alterar
a concentrao, a qualidade ou a pureza do material
Desinfetantes acondicionado.
So produtos destinados a destruir, indiscriminada ou
seletivamente, micro-organismos, quando aplicados em Embalagem secundria
objetos inanimados ou ambientes.
a que possibilita total proteo do material de
acondicionamento nas condies usuais de transporte,
Detergentes armazenagem e distribuio. Considera-se embalagem
secundria: caixas de papelo, cartuchos de cartolina,
So produtos destinados a dissolver gorduras; higiene de
madeira ou material plstico ou estojo de cartolina e outros.
recipientes e vasilhas e a aplicaes de uso domstico.
Emplasto
Doadores de sangue
a forma farmacutica semisslida para aplicao externa.
So indivduos saudveis e cuidadosamente selecionados
Consiste de uma base adesiva contendo um ou mais
que, aps exames mdicos, testes sanguneos laboratoriais
princpios ativos distribudos em uma camada uniforme
e estudo de sua histria mdica, estejam ausentes de
num suporte apropriado feito de material sinttico ou
agentes infecciosos transmissveis podem ser aceitos e
natural. Destinada a manter o princpio ativo em contato
utilizados para coleta de seu sangue total ou das suas
com a pele atuando como protetor ou como agente
fraes celulares ou plasmticas para fins profilticos,
queratoltico. Abreviatura: emp.
curativos ou de fracionamento.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 43
Emulso Extrato
Emulso gotas
dissoluo do extrato seco correspondente, em que,
exceto quando indicado de maneira diferente, uma parte
do extrato, em massa ou volume corresponde a uma parte,
4
a emulso destinada administrao na forma de gotas.
em massa, da droga, seca utilizada na sua preparao. Se
Abreviatura: emu. go.
necessrio, os extratos fludos podem ser padronizados em
termos de concentrao do solvente; teor de constituintes,
Emulso injetvel ou de resduo seco. Se necessrio podem ser adicionados
conservantes inibidores do crescimento microbiano.
a emulso estril. Abreviatura: emu. inj.
Devem apresentar teor de princpios ativos e resduos
secos prescritos nas respectivas monografias. Abreviatura:
Emulso para infuso ext. flu.
Faixa de fuso de uma substncia o intervalo de o gel que consiste, usualmente, de parafina lquida com
temperatura compreendido entre o incio (no qual a polietileno ou leos gordurosos com slica coloidal ou
substncia comea a fluidificar-se) e o trmino da fuso sabes de alumnio ou zinco.
(que evidenciado pelo desaparecimento da fase slida).
Gel lipoflico
Frmaco
o gel resultante da preparao obtida pela incorporao
Veja Insumo farmacutico ativo. de agentes gelificantes tragacanta, amido, derivados de
celulose, polmeros carboxivinlicos e silicatos duplos de
magnsio e alumnio gua, glicerol ou propilenoglicol.
Farmacopeico
Glbulo
4
A expresso farmacopeico substitui as expresses: oficial e
oficinal, utilizadas em edies anteriores, equivalendo-se a a forma farmacutica slida que se apresenta sob a forma
essas expresses para todos os efeitos. de pequenas esferas constitudas de sacarose ou de mistura
de sacarose e lactose. So impregnadas pela potncia
Fator VII da coagulao sangunea humana, liofilizado desejada e com lcool acima de 70%.
4
Imunoglobulina humana contra o ttano
Granulado revestido de liberao retardada
uma preparao estril; lquida, ou liofilizada contendo
o granulado que possui uma ou mais camadas finas imunoglobulinas, principalmente a imunoglobulina G.
de revestimento, normalmente polimricas, destinadas obtida a partir do plasma contendo anticorpos especficos
a modificar a velocidade ou extenso da liberao dos contra a toxina do Clostridium tetani.
princpios ativos, apresentando uma liberao retardada do
princpio ativo. Vide definio geral de liberao retardada. Imunoglobulina humana normal
Abreviatura: granu. rev. lib. ret.
uma preparao estril; lquida, ou liofilizada contendo
principalmente IgG. Outras protenas, tambm, podem
Imunoglobulina humana contra a hepatite A
estar presentes.
uma preparao estril; lquida, ou liofilizada contendo
imunoglobulinas, principalmente a imunoglobulina G. Imunoglobulina humana normal para administrao por
via intravenosa
Imunoglobulina humana contra a hepatite B
uma preparao estril; lquida, ou liofilizada contendo
uma preparao estril; lquida, ou liofilizada contendo imunoglobulinas, principalmente a imunoglobulina G
imunoglobulinas, imunoglobulina humana contra a (IgG). Podem estar presentes outras protenas. Contm
hepatite B principalmente a imunoglobulina G. anticorpos IgG de indivduos normais.
uma preparao estril; lquida, ou liofilizada contendo uma preparao caracterizada de micro-organismo
imunoglobulinas, principalmente a imunoglobulina G. especfico que possui resistncia definida e estvel a um
determinado processo de esterilizao.
Imunoglobulina humana contra a raiva
ndice de refrao
uma preparao estril; lquida, ou liofilizada contendo
imunoglobulinas, principalmente a imunoglobulina G. O ndice de refrao (n) de uma substncia a relao entre
a velocidade da luz no vcuo e sua velocidade no interior
da substncia.
Imunoglobulina humana contra a rubola
Para fins prticos mede-se a refrao com referncia ao ar e
uma preparao estril; lquida, ou liofilizada contendo substncia e no com referncia ao vcuo e substncia.
imunoglobulinas, principalmente a imunoglobulina G.
Pode-se definir o ndice de refrao como a relao entre
Imunoglobulina humana contra a varicela o seno do ngulo de incidncia e o seno do ngulo de
refrao, isto , n = sen i / sen r.
uma preparao estril; lquida, ou liofilizada contendo
imunoglobulinas, principalmente a imunoglobulina G. Injetvel
4 lpides, e protenas.
Isoladores
Insulina humana isfana suspenso So equipamentos que empregam tecnologia usada para
dupla proposta, de proteger o produto da contaminao
Insulina humana isfana suspenso uma suspenso estril do ambiente e pessoas durante envase e fechamento e de
de cristais de insulina humana zinco e sulfato protamina proteger pessoas de produtos txicos ou deletrios que so
na gua tamponada para a injeo, combinados de uma produzidos.
maneira tal que a fase slida da suspenso composta por
cristais de insulina humana, protamina, e zinco.
Liberao convencional
Insulina humana isfana suspenso e injeo insulina o tipo de liberao de formas farmacuticas que no
humana so modificadas intencionalmente por um desenho de
formulao especial e/ou mtodo de fabricao.
Insulina humana isfana suspenso e insulina humana
injeo uma suspenso estril tamponada de insulina
humana, complexada com sulfato de protamina, em uma
Liberao paramtrica
soluo de insulina humana.
definida como a liberao de carga ou lotes de
Insulina humana zinco suspenso produtos submetidos esterilizao terminal, por meio
do cumprimento de parmetros crticos do processo de
uma suspenso estril de insulina humana em gua esterilizao, sem a necessidade de realizao do teste de
tamponada para a injeo, modificada pela adio de um sal esterilidade.
de zinco adequado de modo que a fase slida da suspenso
constituda por uma mistura de insulina cristalina e
Liberao prolongada
amorfa em uma razo de cerca de 7 partes de cristais e de 3
partes de material amorfo. o tipo de liberao modificada de formas farmacuticas
que possibilita pelo menos uma reduo na frequncia de
Insulina humana zinco suspenso estendida dose quando comparada com o medicamento apresentado
na forma de liberao convencional. obtida por meio
uma suspenso estril de insulina humana em gua de um desenho de formulao especial e/ou mtodo de
tamponada para a injeo, modificada pela adio de um fabricao.
sal de zinco adequado de modo a que a fase slida da
suspenso predominantemente cristalina.
Liberao retardada
de seu uso de modo a obter uma soluo injetvel. O extratos e ps vegetais, radiofrmacos, entre outros. A
plasma humano utilizado deve satisfazer s exigncias da expresso relacionada mais usada : Substncia Qumica
monografia Plasma humano para fracionamento. de Referncia Farmacopeica.
o grau de garantia que o processo em questo esterilizauma a pomada contendo grande quantidade de slidos
populao de itens, sendo expresso como a probabilidade em disperso (pelo menos 25%). Devero atender as
de um item no estril naquela populao. especificaes estabelecidas para pomadas.
o nome da substncia farmacopeica, de acordo com a a forma farmacutica slida que contm um ou mais
nomenclatura preconizada pela Unio Internacional de princpios ativos, usualmente, em uma base adocicada e
Qumica Pura e Aplicada (IUPAC). com sabor. utilizada para dissoluo, ou desintegrao
lenta na boca. Pode ser preparada por modelagem, ou por
4
compresso. Abreviatura: pas.
Nmero do lote
a forma farmacutica slida, de dose nica, contendo a parte liquida remanescente de uma unidade de sangue
um ou mais princpios ativos dispersos ou dissolvidos em total obtida aps centrifugao e separao de suas
uma base adequada que tem vrios formatos, usualmente, fraes celulares que dever ser totalmente congelado at
ovide. Fundem na temperatura do corpo. 4 horas aps coleta do sangue total que lhe deu origem,
assegurando a manuteno da integridade e concentraes
dos fatores lbeis da coagulao.
Padres de referncia da Farmacopeia Brasileira
De acordo com definio da OMS, padres de referncia Plasma humano para fracionamento
farmacopeicos (PRef) so produtos de uniformidade
reconhecida, destinados ao uso em ensaios onde uma ou a parte lquida remanescente do sangue total aps
mais de suas propriedades ser(o) comparada(s) com separao das fraes celulares sanguneas mediante o uso
a(s) da substncia em exame. Possuem um grau de pureza de sistemas fechados apropriados de coleta ou centrifugao,
adequado ao uso ao qual se destinam. que contem os fatores lbeis da coagulao. Contm
soluo anticoagulante, conservadora e preservadora,
O PRef estabelecido e distribudo por autoridades sendo armazenado a uma temperatura de 30 C ou inferior.
farmacopeicas, cujo valor atribudo a uma ou mais de suas Destina-se preparao de hemoderivados de acordo com
propriedades aceito sem necessitar comparao com as Boas Prticas de Fabricao de Medicamentos.
outro padro, destinado ao uso em ensaios especficos
descritos nas monografias farmacopeicas. Incluem
substncias qumicas de referncia, produtos biolgicos,
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 49
a forma farmacutica slida contendo um ou mais o p estril destinado adio subsequente de lquido
princpios ativos secos e com tamanho de partcula para formar uma soluo. Abreviatura: p sol. inj.
reduzido, com ou sem excipientes.
P para soluo para infuso
P aerossol
o p estril destinado reconstituio para formar uma
o p embalado sob presso contendo um gs propelente soluo para uso por infuso. Essa soluo , normalmente,
e ingredientes terapeuticamente ativos que so liberados isotnica com o sangue e utilizada principalmente para
aps a ativao de um sistema apropriado de vlvulas. administrao em grande volume. Abreviatura: p sol. inf.
Abreviatura: p aer.
P para suspenso
P efervescente
o p destinado a ser reconstitudo para formar uma
o p contendo, em adio aos ingredientes ativos, suspenso. Abreviatura: p sus.
substncias cidas e carbonatos ou bicarbonatos, os quais
liberam dixido de carbono quando o p dissolvido em
gua. destinado a ser dissolvido ou disperso em gua
P para suspenso injetvel 4
antes da administrao. Abreviatura: p efev. o p estril destinado adio subsequente de lquido
para formar uma suspenso. Abreviatura: p sus. inj.
P liofilizado para soluo injetvel
P para suspenso injetvel de liberao prolongada
o p estril destinado adio subsequente de lquido
para formar uma soluo. Preparado por liofilizao, um o p estril destinado adio subsequente de lquido
processo que envolve a remoo de gua dos produtos para formar uma suspenso. Veja definio de liberao
pelo congelamento a presses extremamente baixas. prolongada. Abreviatura: p sus. inj. lib.prol.
Abreviatura: p liof. sol. inj.
Pomada
P liofilizado para suspenso injetvel
a forma farmacutica semisslida, para aplicao na
o p estril destinado adio subsequente de pele ou em membranas mucosas, que consiste da soluo
lquido para formar uma suspenso. Preparado por ou disperso de um ou mais princpios ativos em baixas
liofilizao, um processo que envolve a remoo propores em uma base adequada usualmente no aquosa.
de gua dos produtos pelo congelamento a presses Abreviatura: pom.
extremamente baixas. Abreviatura: p liof. sus. inj.
Prazo de validade
P liofilizado para suspenso injetvel de liberao
prolongada o tempo durante o qual o produto poder ser usado,
caracterizado como perodo de vida til e fundamentada
o p estril destinado adio subsequente de lquido nos estudos de estabilidade especficos. Abreviatura: val.
para formar uma suspenso. Preparado por liofilizao,
um processo que envolve a remoo de gua dos produtos O prazo de validade dever ser indicado nas embalagens
pelo congelamento a presses extremamente baixas. Veja primrias e secundrias. Quando indicar ms e ano,
definio geral de liberao prolongada. Abreviatura: p. entende-se como vencimento do prazo o ltimo dia desse
liof. sus. inj. lib. prol. ms. As condies especificadas, pelo fabricante, de
armazenamento e transporte devem ser mantidas.
P para colutrio
Preparao tpica semisslida
o p que deve ser dissolvido em gua antes do uso para
o preparo do colutrio, que um lquido destinado ao a preparao prevista para aplicao na pele ou em
enxgue bucal para agir sobre as gengivas e as mucosas da certas mucosas para ao local ou penetrao percutnea
boca e da garganta. No deve ser deglutido. Abreviatura: de medicamentos, ou ainda por sua ao emoliente ou
p colu. protetora.
P para soluo
Processo assptico
o p destinado a ser reconstitudo para formar uma
soluo. Abreviatura: p sol. aquele projetado de forma a prevenir a contaminao
dos componentes estreis por micro-organismos viveis ou
ainda na fase intermediria da produo.
50 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
o produto para uso externo; antissptico ou no; destinado aquele que protege seu contedo de perdas e
ao asseio ou desinfeco corporal, compreendendo contaminao por slidos estranhos, nas condies usuais
o sabonete, xampu, dentifrcio, enxaguatrio bucal, de manipulao, armazenagem, distribuio e transporte.
antiperspirante, desodorante, produto para barbear e aps o
barbear, estptico e outros. Abreviatura: pro. hig. Recipiente hermtico
4 processo de fabricao.
Recipiente para dose nica
Pureza
o recipiente hermtico que contm determinada
Grau em que um frmaco, matria-prima contm outros quantidade do medicamento destinada a ser administrada
materiais estranhos. de uma s vez e que depois de aberto, no poder ser
fechado com garantia de esterilidade.
Raticida
Recipiente para doses mltiplas
a preparao destinada ao combate a ratos, camundongos
e outros roedores, em domiclios, embarcaes, recintos o recipiente hermtico que possibilita a retirada de pores
e lugares de uso pblico, contendo substncias ativas, sucessivas de seu contedo, sem modificar a concentrao,
isoladas ou em associao, que no ofeream risco vida a pureza e a esterilidade da poro remanescente.
ou sade do homem e dos animais teis de sangue quente,
quando aplicados em conformidade com as recomendaes Recipiente perfeitamente fechado
contidas em sua apresentao.
aquele que protege seu contedo de perdas e de
Reaes qumicas de identificao contaminao por slidos, lquidos e vapores estranhos,
eflorescncia, deliquescencia, ou evaporao nas condies
So reaes usadas no auxlio da caracterizao de uma usuais de manipulao, armazenagem, distribuio, e
substncia. Embora especficas, s sero suficientes transporte.
para estabelecer ou confirmar a identidade da substncia
quando consideradas em conjunto com outros testes e Recipiente translcido
especificaes constantes na monografia.
aquele que possibilita a visualizao parcial do contedo,
A no ser que a monografia especifique diferentemente, abrangendo todas as cores exceto o mbar.
as reaes qumicas so feitas em tubos de ensaio de
aproximadamente 15 mm de dimetro interno. Utilizam-
se 5 mL do lquido ou soluo a examinar, adicionando- Recipiente transparente
se trs gotas de reagente ou de cada reagente. O exame
aquele que possibilita a visualizao total do contedo,
do contedo do tubo de ensaio deve ser feito sobre toda a
abrangendo todas as cores exceto o mbar.
camada lquida, observando de cima para baixo, no sentido
do eixo longitudinal dos tubos, aps cinco minutos de
repouso. Registro
Usualmente, apresentada na monografia a ordem de a inscrio, em livro prprio aps o despacho concessivo
preferncia dos testes de identificao. Quando no do dirigente do rgo do Ministrio da Sade, sob nmero de
constar a ordem, todos os testes de identificao devem ser ordem, dos produtos, com a indicao do nome, fabricante,
realizados. da procedncia, finalidade e dos outros elementos que os
caracterizem.
Reagentes
Resistncia hidroltica ou alcalinidade
So substncias utilizadas em testes, reaes, ensaios
e doseamentos farmacopeicos, quer como tais ou em o ensaio que quantifica a intensidade da reao qumica
solues. entre a gua e os elementos alcalinos existentes no vidro,
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 51
especialmente sdio e potssio. Essa resistncia determina armazenamento, fracionamento e administrao do sangue
a classificao do tipo de vidro. humano ou de seus derivados. So atxicos, estreis,
apirognicos e descartveis, podendo ser fabricados a
partir de um ou vrios polmeros, e conforme os casos,
Rtulo
de certos aditivos e so validados pelos seus respectivos
a identificao impressa ou litografada, bem como mtodos analticos.
os dizeres pintados ou gravados a fogo, a presso ou
autoadesiva, aplicados diretamente sobre recipientes; Soluo forma farmacutica
invlucros; envoltrios; cartuchos; ou qualquer outro
protetor de embalagem, externo ou interno, no podendo a forma farmacutica lquida; lmpida e homognea, que
ser removido ou alterado durante o uso do produto e contm um ou mais princpios ativos dissolvidos em um
durante seu transporte, ou seu armazenamento. solvente adequado ou numa mistura de solventes miscveis.
Abreviatura: sol.
A confeco dos rtulos dever obedecer s normas
vigentes do rgo federal de Vigilncia Sanitria.
Soluo colorimtrica
Sala limpa
4
a soluo utilizada na preparao de padres
Sala na qual a concentrao de partculas em suspenso colorimtricos para fins de comparao. So designadas
no ar controlada. construda e utilizada de maneira a por SC.
minimizar a introduo, gerao e reteno de partculas
dentro da sala, na qual os outros parmetros relevantes
Soluo de albumina humana
como, por exemplo, temperatura, umidade e presso, so
controlados conforme necessrio. Soluo de albumina humana uma soluo protica,
estril e apirognica obtida do plasma humano que est de
Saneante domissanitrio acordo com as exigncias da monografia Plasma Humano
para Fracionamento.
a substncia ou preparao destinada higienizao;
desinfeco ou desinfestao domiciliar; de ambientes
Soluo molal
coletivos, particulares ou pblicos, em lugares de uso
comum e no tratamento da gua. a soluo que contm um mol do soluto por kilograma
de solvente.
Sangue humano
Soluo molar
um tecido vivo, circulante, conjuntivo, de natureza celular,
plasmtica e ou protica, que se encontra contido dentro a soluo que contm uma molcula-grama do soluto em
do aparelho cardiovascular, desempenhando mltiplas e 1000 mL da soluo. Os mltiplos e submltiplos da soluo
complexas funes que assegurem ao organismo humano a molar, tambm, so designados por nmeros inteiros ou
manuteno da vida. fraes decimais como: 2 M; M; 0,5 M; 0,1 M; etc.
Os soros hiperimunes so preparaes contendo estabelecida por comparao com uma SQR
imunoglobulinas purificadas, de origem animal, que Farmacopeica, por meio de ensaios farmacopeicos,
neutralizam especificamente toxinas bacterianas, bactrias, ou devidamente validados, e registrados pelo prprio
vrus ou componentes txicos do veneno de uma ou mais laboratrio que ir utiliz-la. Nessa situao, devero ser
espcies de animais peonhentos. mantidos os registros analticos e realizados controles
4 Substncia adjuvante
peridicos, empregando-se uma SQR Farmacopeica.
Substncias insaponificveis
a substncia com finalidade especfica adicionada s
preparaes injetveis. Essa substncia deve ser selecionada Substncias insaponificveis so aquelas remanescentes
tendo em vista o aumento da estabilidade do produto; no reao de saponificao, no volteis a 100 - 105 C e que
interferncia na eficcia teraputica nem no doseamento do foram carreadas no processo de extrao da substncia a
principio ativo; tampouco causar toxicidade na quantidade ensaiar.
administrada ao paciente. A substncia adjuvante pode
ser solubilizante; antioxidante; agente quelante; tampo; Supositrio
agente antibacteriano; agente antifngico; agente anti-
espumante e outros, quando especificado na monografia a forma farmacutica slida de vrios tamanhos e
individual. Abreviatura: subs. adj. formatos adaptados para introduo no orifcio retal,
vaginal ou uretral do corpo humano, contendo um ou
A presena de substncia adjuvante deve ser, claramente, mais princpios ativos dissolvidos numa base adequada.
indicada nos rtulos das embalagens primrias e Eles, usualmente, se fundem, derretem ou dissolvem na
secundrias, em que o produto entregue para o consumo. temperatura do corpo Abreviatura: supo.
Se no houver contra indicao expressa, o ar dos
recipientes pode ser substitudo por dixido de carbono ou
nitrognio. No permitida a adio de substncia corante. Suspenso
Esto relacionados a seguir os limites mximos para alguns a forma farmacutica lquida que contm partculas
adjuvantes, a menos que a monografia especifique de outra slidas dispersas em um veculo lquido, no qual as
forma: partculas no so solveis. Abreviatura: sus.
Vacinas
Suspenso injetvel
Produtos biolgicos que contem uma ou mais substncias
a suspenso estril. Abreviatura: sus. inj. antignicas que, quando inoculadas, so capazes de induzir
imunidade especfica ativa e proteger contra doena
Suspenso injetvel de liberao prolongada causada pelo agente infeccioso que originou o antgeno.
4
a suspenso administrada na forma de lquido finamente
dividido por um jato de ar ou vapor. Abreviatura: sus. spray. Valor Fo
Xarope
Tintura
a forma farmacutica aquosa caracterizada pela alta
a preparao alcolica ou hidroalcolica resultante da viscosidade, que apresenta no menos que 45% (p/p) de
extrao de drogas vegetais ou animais ou da diluio dos sacarose ou outros acares na sua composio. Os xaropes
respectivos extratos. classificada em simples e composta, geralmente contm agentes flavorizantes. Abreviatura: xpe.
conforme preparada com uma ou mais matrias-primas.
Abreviatura: tin.
54 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Quando no se destina ao consumo imediato, deve ser Temperatura ambiente Temperatura, normalmente,
adicionado de conservadores antimicrobianos autorizados. encontrada em um ambiente de trabalho, entre 15 C e 30 C.
4
Estrutura das monografias Interpretao da preciso dos dados numricos e limites
de tolerncia
As monografias de matrias-primas so identificadas por
suas denominaes comuns Brasileiras (DCB), grafadas A preciso desejada nos testes; reaes e ensaios
em caixa alta e centralizadas. Alm disso, so includos, farmacopeicos indicada pelo nmero de decimais que
tambm: se apresenta no texto. Por exemplo, o valor numrico 20
indica valores no menores que 19,5 e no maiores que
sempre que possvel, a denominao em latim proposta 20,5; o valor numrico 2,0 indica valores no menores que
pelo INN International Non-proprietary Names 1,95 e no maiores que 2,05; o valor numrico 0,20 indica
Nomes genricos internacionais da Organizao valores no menores que 0,195 e no maior que 0,205.
Mundial da Sade;
a frmula estrutural da substncia; Os limites de tolerncia, expressos, numericamente,
frmula molecular seguida da massa molar; por um valor mximo e mnimo, indicam a pureza de
uma substncia farmacopeica. Esses valores podem ser
Denominao Comum Brasileira e seu respectivo expressos em porcentagem ou nmeros absolutos.
nmero;
nome qumico, segundo a ACS American Chemical A faixa da variao deve ser estritamente observada, no
Society; sendo tolerados valores fora dos limites mximo e mnimo.
registro CAS Chemical Abstracts Service;
texto da monografia. Material de embalagem primria e secundria
As monografias das preparaes farmacuticas so Compreende-se por material de embalagem o recipiente;
identificadas pelo nome da matria-prima correspondente, envoltrio; invlucro ou qualquer outra forma de proteo;
seguido do nome da forma farmacutica. removvel ou no; usado para envasar; proteger; manter;
cobrir ou empacotar, especificamente ou no, matrias-
Expresso de concentraes primas; reagentes e medicamentos.
As concentraes em porcentagem so expressas como Material de embalagem primria o que est em contato
segue. direto com seu contedo durante todo o tempo. Considera-
se material de embalagem primria: ampola; bisnaga;
Por cento p/p (peso em peso) ou % p/p Expressa o nmero envelope; estojo; flaconete; frasco de vidro ou de plstico;
de g de um componente em 100 g de mistura. frasco-ampola; cartucho; lata; pote; saco de papel e outros.
Por cento p/v (peso em volume) ou % p/v Expressa o Embalagem secundria a que se destina total proteo
nmero de g de um componente em 100 mL de soluo. do material de acondicionamento nas condies usuais
de transporte, armazenagem e distribuio. Considera-
Por cento v/v (volume em volume) ou % v/v Expressa o
se embalagem secundria: caixas de papelo; cartuchos
nmero de mL de um componente em 100 mL de soluo.
de cartolina; madeira ou material plstico ou estojo de
Por cento v/p (volume em peso) ou % v/p Expressa o cartolina e outros. No deve haver qualquer interao entre
nmero de mL de um componente em 100 g de mistura. o material de embalagem primria e o seu contedo capaz de
alterar a concentrao; a qualidade; ou a pureza do material
A expresso por cento, usada sem outra atribuio, acondicionado. As condies de acondicionamento so
significa: mistura de slidos e semisslidos, por cento p/p; descritas nas monografias individuais, utilizando-se os
para solues ou suspenses de slidos em lquidos, por termos relacionados a seguir.
cento p/v; para solues de lquidos, por cento v/v; para
solues de gases em lquidos, por cento p/v; para expressar Recipiente bem fechado aquele que protege seu
teor de leos essenciais em drogas vegetais, por cento v/p. contedo de perdas e contaminao por slidos estranhos,
56 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Cilindro de gs o recipiente metlico, perfeitamente Qualquer que seja o mtodo utilizado, o produto final deve
fechado, de paredes resistentes, destinado a conter gs sob corresponder s especificaes includas na Farmacopeia
presso, obturado por vlvula regulvel, capaz de manter a Brasileira, 5 edio.
sada do gs em vazo determinada.
Na fabricao de produtos injetveis; comprimidos;
Todas as solues utilizadas em testes, ensaios e reaes Os recipientes para dose mltipla so frascos de vidro de
so preparadas com gua purificada, a menos que seja paredes resistentes que, depois de cheios com preparaes
indicado de maneira diferente na monografia individual. lquidas ou com slidos para serem dissolvidos ou
suspensos, so selados com tampa de outro material.
A expresso recentemente preparada, referente ao preparo O contedo desses frascos pode ser removido para
de solues utilizadas em testes, ensaios e reaes, indica administrao em uma nica ou em vrias doses.
que a soluo deve ser preparada, no mximo, 24 horas
antes da realizao do ensaio.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 57
Os recipientes para perfuso so frascos com mais de 50 preparadas com gua para injetveis, podem ser usadas
mL de capacidade, podendo atingir 1000 mL, selados com em parte ou totalmente ao invs de somente gua para
tampa de outro material ou no, fabricados de vidro ou injetveis, a menos que a monografia especifique de outra
de plstico. Os medicamentos envasados nesses tipos de forma.
recipientes devem ser administrados em uma nica vez,
com a utilizao de equipos estreis, e no podem conter
Veculos no aquosos
agentes bactericidas ou antifngicos. O uso de outros tipos
de adjuvantes deve ser considerado cuidadosamente. Veculos no aquosos utilizados parcial ou totalmente na
obteno de preparaes injetveis podem ser miscveis ou
Solubilidade imiscveis com a gua. Entre os veculos miscveis com a
gua, os mais usados so os polilcoois e os polmeros do
A solubilidade indicada no deve ser tomada no sentido xido de etileno. Entre os imiscveis com a gua, os mais
estrito de constante fsica, porm, complementa e corrobora usados so os leos fixos de origem vegetal e os mono e
com os demais ensaios, podendo ter um valor definitivo diglicerdeos de cidos graxos.
caso a substncia no apresente a solubilidade mnima
exigida, principalmente, no solvente gua. Os leos fixos so inodoros ou quase inodoros e seu odor e
sabor no devem lembrar os de rano. Devem satisfazer s
As indicaes sobre a solubilidade referem-se s
determinaes feitas temperatura de 25 C. A expresso
solvente refere-se gua, a menos que indicado de maneira
exigncias especificadas nas monografias e apresentar as
caractersticas descritas a seguir. 4
diferente na monografia individual. a) teste de resfriamento transferir quantidade de leo
fixo, previamente dessecado a 105 C por duas horas
A expresso partes refere-se dissoluo de 1 g de um e resfriado temperatura ambiente em dessecador
slido no nmero de mililitros do solvente estabelecido no contendo slica-gel, para recipiente de vidro incolor
nmero de partes. cilndrico, com dimetro interno de aproximadamente
25 mm. Fechar o recipiente e mergulhar durante
As solubilidades aproximadas constantes nas monografias quatro horas em gua mantida a 10 C. O lquido
so designadas por termos descritivos cujos significados deve permanecer suficientemente lmpido, para que
esto relacionados na Tabela 1. possa facilmente ser vista uma linha negra de 0,5 mm
de espessura, quando mantida verticalmente atrs do
Tabela 1 - Termos descritivos de solubilidade e seus significados
cilindro e contra fundo branco;
Solvente Termo descritivo b) ndice de saponificao entre 185 e 200 (5.5.29.8);
Muito solvel menos de 1 parte
c) ndice de iodo entre 79 e 128 (5.5.29.10);
Facilmente solvel De 1 a 10 partes
Solvel De 10 a 30 partes d) substncias insaponificveis refluxar em banho-maria
Ligeiramente solvel De 30 a 100 partes 10 mL do leo com 15 mL de hidrxido de sdio (1:16)
Pouco solvel De 100 a 1000 partes e 30 mL de lcool etlico, agitando ocasionalmente
Muito pouco solvel De 1000 a 10 000 partes at que a mistura se torne clara. Transferir a mistura
Praticamente insolvel para cpsula de porcelana, evaporar o lcool etlico em
mais de 10 000 partes
ou insolvel banho-maria e misturar o resduo com 100 mL de gua.
Deve resultar soluo;
Temperatura e) cidos graxos livres os cidos graxos livres em
Todas as temperaturas constantes na FB 5. so expressas na 10 g do leo devem consumir, no mximo, 2 mL de
escala Celsius, e as medidas so feitas a 25 C, exceto para hidrxido de sdio 0,02 M.
medida de densidade e a menos que indicado de maneira Os mono ou diglicerdeos sintticos de cidos graxos
diferente na monografia individual. devem obedecer s seguintes exigncias:
5 MTODOS GERAIS
diferena de peso entre a cpsula cheia e a vazia. Com os
5.1 MTODOS GERAIS valores obtidos, determinar o peso mdio do contedo.
APLICADOS A Pode-se tolerar no mais que duas unidades fora dos limites
especificados na Tabela 1, em relao ao peso mdio do
MEDICAMENTOS contedo, porm, nenhuma poder estar acima ou abaixo
do dobro das porcentagens indicadas.
5
cremes, pomadas e ps para reconstituio). Pesar, individualmente, 20 supositrios ou vulos e
determinar o peso mdio. Pode-se tolerar no mais que
As pesagens so feitas em balanas de sensibilidade
duas unidades fora dos limites especificados na Tabela 1,
adequada.
em relao ao peso mdio, porm, nenhuma poder estar
PROCEDIMENTO PARA PRODUTOS EM DOSE acima ou abaixo do dobro das porcentagens indicadas.
UNITRIA
Para produtos em dose unitria, o teste permite verificar se Ps estreis, ps liofilizados e ps para injetveis
as unidades de um mesmo lote apresentam uniformidade
Realizar o teste com 20 unidades. Remover os lacres
de peso. Para realizar o teste, necessrio determinar,
metlicos, no caso de frascos-ampola. Retirar rtulos que
previamente, o peso mdio de unidades do lote.
possam sofrer danos durante o teste. Secar, se necessrio, a
superfcie externa dos recipientes. Pesar, individualmente,
Comprimidos no revestidos ou revestidos com filme as 20 unidades, com as respectivas tampas. Remover o
contedo e lavar os respectivos recipientes utilizando gua
Pesar, individualmente, 20 comprimidos e determinar o e em seguida etanol. Secar em estufa a 105 C, por 1 hora, ou
peso mdio. Pode-se tolerar no mais que duas unidades em temperaturas inferiores a essa, dependendo da natureza
fora dos limites especificados na Tabela 1, em relao ao do material, at peso constante. Resfriar temperatura
peso mdio, porm, nenhuma poder estar acima ou abaixo ambiente, recolocar a tampa e pesar novamente. A
do dobro das porcentagens indicadas. diferena entre as duas pesagens representa o peso do
contedo. Determinar o peso mdio do contedo das 20
Comprimidos com revestimento aucarado (drgeas) unidades. Pode-se tolerar no mais que duas unidades fora
dos limites especificados na Tabela 1, em relao ao peso
Pesar, individualmente, 20 drgeas e determinar o peso mdio, porm, nenhuma poder estar acima ou abaixo do
mdio. Pode-se tolerar no mais que cinco unidades fora dobro das porcentagens indicadas.
dos limites especificados na Tabela 1, em relao ao peso
mdio, porm, nenhuma poder estar acima ou abaixo do
dobro das porcentagens indicadas. Ps para reconstituio (uso oral)
Tabela 1 Critrios de avaliao da determinao de peso para formas farmacuticas slidas em dose unitria.
5
_______________
(*) Se o peso mdio for de 40 mg ou menos, submeter ao teste de Uniformidade de doses unitrias (5.1.6).
Tabela 2 Critrios de avaliao da determinao de peso para formas farmacuticas em doses mltiplas.
Porcentagem mnima em
Formas farmacuticas em doses mltiplas Peso declarado
relao ao peso declarado
at 60 g 90,0%
Granulados, ps, gis, cremes e pomadas acima de 60 g e at 150 g 92,5%
acima de 150,0 g 95,0%
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 61
5
com pequeno excesso volume, de acordo com as
reunir os contedos e reservar para a determinao da caractersticas do produto, para permitir a administrao
densidade de massa. Lavar os recipientes e as tampas do volume declarado. Os excessos mnimos de volume
com gua e, em seguida, com etanol. Secar em estufa a recomendados na Tabela 1 geralmente so suficientes para
105 C, por uma hora, ou em temperatura compatvel permitir a retirada e a administrao do volume declarado.
com o material do recipiente, at peso constante. Esfriar
temperatura ambiente, recolocar a tampa e outras partes Tabela 1 Excesso de volume recomendado
correspondentes e pesar novamente. A diferena entre as para produtos lquidos injetveis.
duas pesagens representa o peso do contedo. Determinar
os volumes individuais correspondentes (V), em mL, Excesso mnimo de
utilizando a expresso: Volume declarado (mL) volume recomendado
m mveis / mL viscosos / mL
V =
0,5 0,10 0,12
em que
1,0 0,10 0,15
m = peso do contedo, em g; 2,0 0,15 0,25
= densidade de massa do produto, em g/mL, determinada 3,0 0,20 0,35
a 20 C, conforme descrito em Determinao da densidade 4,0 0,25 0,45
de massa e densidade relativa (5.2.5). 5,0 0,30 0,50
10,0 0,50 0,70
A partir dos valores obtidos, calcular o volume mdio 20,0 0,60 0,90
das unidades testadas. O volume mdio no inferior ao 30,0 0,80 1,20
volume declarado e o volume individual de nenhuma das
50,0 ou mais 2% 3%
unidades testadas inferior a 95,0% do volume declarado.
O volume de cada recipiente examinado no inferior ao Podem ser utilizados diferentes tipos de aparelhos, os quais
volume declarado. No caso de recipientes com volume diferem basicamente quanto ao mecanismo empregado para
declarado de 2 mL ou menos, o volume dos contedos exercer a presso. A fora pode ser exercida manualmente
reunidos no inferior soma dos volumes declarados dos ou mecanicamente. medida que a presso aumenta, um
recipientes utilizados no teste. mbolo, uma placa ou um pisto aplica determinada fora
sobre o comprimido, apoiado em base fixa. O aparelho
Para injetveis em recipientes para doses mltiplas calibrado com preciso de 1 N.
rotulados para conter um nmero especfico de doses de um
APARELHAGEM
5.1.3 DETERMINAO DE O aparelho (Figura 1) consiste de um cilindro rotativo,
RESISTNCIA MECNICA EM com 287,0 4,0 mm de dimetro e 38,0 2,0 mm
de profundidade, constitudo de polmero sinttico
COMPRIMIDOS transparente com faces internas polidas de baixa atividade
esttica, o qual gira em torno de seu eixo a uma velocidade
Os testes de resistncia mecnica, tais como dureza e de 25 1 rotaes por minuto. Uma das faces do cilindro
friabilidade, so considerados oficiais dentro do contexto removvel. Os comprimidos so recolhidos a cada volta
legal desta Farmacopeia, constituindo-se em elementos do cilindro por uma projeo curva com raio interno de
teis na avaliao da qualidade integral dos comprimidos. 80,5 5,0 mm que se estende do centro parede externa
Estes testes visam demonstrar a resistncia dos comprimidos do cilindro, e levados a uma altura de 156,0 2,0 mm, de
ruptura provocada por quedas ou frico. onde caem repetidamente.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 63
5
Figura 1 Aparelho para teste de friabilidade (friabilmetro).
A cesta consiste em seis tubos de vidro ou acrlico As partes que constituem a cesta so montadas e mantidas
transparente, abertos em ambos os lados. As dimenses firmemente unidas mediante eixo metlico central, com
dos tubos so: comprimento 77,5 2,5 mm, dimetro dimetro de cerca de 5 mm. A extremidade superior do eixo
interno entre 20,7 mm e 23,0 mm e espessura das paredes central deve ter dispositivo para fixar a cesta ao mecanismo
aproximadamente 2 mm. que produz o movimento vertical do sistema.
Os tubos so mantidos verticalmente, adaptando-se Quando indicado, deve ser adicionado em cada tubo
em cada extremidade da cesta um disco de material da cesta um disco cilndrico de material transparente
transparente adequado, com dimetro entre 88,0 mm e adequado, com densidade relativa entre 1,18 e 1,20,
92,0 mm e espessura entre 5,0 mm e 8,5 mm, possuindo dimetro de 20,70 0,15 mm, e espessura de 9,50 0,15
seis orifcios nos quais so introduzidos os tubos. Os seis mm. Cada disco possui cinco orifcios, cada um com 2 mm
orifcios eqidistam do centro de cada disco, estando de dimetro, sendo um orifcio no eixo do cilindro e os
igualmente espaados. Na face externa do disco inferior outros quatro eqidistantes, dispostos sobre um crculo
encontra-se uma tela de arame (dimetro de 0,635 0,030 de 6 mm de raio relativo ao centro do disco. A superfcie
mm) de ao inoxidvel, com abertura entre 1,8 mm e 2,2 lateral do disco possui quatro mossas eqidistantes, com
mm, presa por meio de trs parafusos. profundidade de 2,6 0,1 mm, em forma de V, as quais,
no lado superior do disco, medem 9,4 0,2 mm de largura,
Para o teste de desintegrao de cpsulas, uma tela de e no lado inferior, 1,6 mm. Todas as superfcies do disco
arame de ao inoxidvel, semelhante quela adaptada ao so lisas. O desenho e montagem da cesta podem variar
disco inferior da cesta, ou outro dispositivo adequado pode desde que as especificaes para os tubos e abertura das
ser adaptado face externa do disco superior para evitar telas sejam mantidas.
que as cpsulas escapem dos tubos durante o teste.
Utilizar seis unidades no teste. Colocar uma unidade 5.1.4.2 TESTE DE DESINTEGRAO
em cada um dos seis tubos da cesta. Acionar o aparelho,
sem adicionar os discos, utilizando cido clordrico 0,1
DE SUPOSITRIOS, VULOS E
M mantido a 37 1 C como lquido de imerso, por 60 COMPRIMIDOS VAGINAIS
minutos ou o tempo especificado na monografia individual.
Cessar o movimento da cesta e observar os comprimidos Este teste permite verificar a maior ou menor capacidade
ou cpsulas. Nenhuma unidade pode apresentar qualquer dessas formas farmacuticas de amolecerem ou se
sinal de desintegrao, rachadura ou amolecimento, que desagregarem em meio lquido, no espao de tempo
possibilite o extravasamento do seu contedo. Colocar prescrito.
um disco em cada tubo e acionar o aparelho, utilizando
soluo tampo fosfato pH 6,8 mantido a 37 1 C como Considera-se desintegrao completa quando o supositrio
lquido de imerso. Decorridos 45 minutos ou o tempo ou vulo apresentar:
especificado na monografia, cessar o movimento da cesta
a) dissoluo completa;
e observar o material em cada um dos tubos. Todos os
comprimidos ou cpsulas devem estar completamente b) separao completa de seus componentes, acumulando-
desintegrados, podendo restar apenas fragmentos de se substncias graxas fundidas na superfcie do lquido,
revestimento insolveis. Se os comprimidos ou cpsulas depositando-se os ps insolveis no fundo do recipiente e
no se desintegrarem devido aderncia aos discos, repetir dissolvendo-se os componentes solveis da amostra, sendo
o teste com seis outras unidades, omitindo os discos. Ao que a distribuio dos componentes ocorre de um ou mais
final do teste, todos os comprimidos ou cpsulas devem dos modos descritos acima;
estar completamente desintegrados. O teste no se aplica
a cpsulas no revestidas que contm preparao de c) amolecimento da amostra que pode ser acompanhado
liberao entrica. pela mudana da sua forma sem que ocorra separao
completa de seus componentes; o amolecimento deve ser
tal que, ao pressionar a amostra amolecida com basto de
Comprimidos sublinguais
vidro, no se perceba existncia de camada mais dura na
Realizar o teste conforme descrito para Comprimidos no sua superfcie;
revestidos, omitindo o uso de discos. Aps 5 minutos,
d) ruptura da cpsula gelatinosa de vulos, permitindo
todos os comprimidos devem estar completamente
liberao de seus componentes;
desintegrados.
66 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
e) ausncia de resduo sobre o disco perfurado ou, quando 10 minutos. Examinar as amostras depois de decorrido
houver, tenha a consistncia de massa mole que no oferea o tempo prescrito na monografia. O teste considerado
resistncia presso de basto de vidro. satisfatrio se todas as amostras se apresentarem
desintegradas. O limite de tempo estabelecido como
critrio geral para a desintegrao de 30 minutos para
APARELHAGEM
supositrios, vulos e comprimidos vaginais com base
A aparelhagem (Figura 1) consiste de cilindro de vidro ou hidrofbica, e de 60 minutos para supositrios com base
plstico, transparente, com paredes de espessura apropriada, hidroflica, a menos que indicado de maneira diferente na
em cujo interior se encontra preso, por trs ganchos de monografia individual.
metal, um dispositivo metlico que consiste de dois discos
perfurados de ao inoxidvel, contendo cada um 39 orifcios Comprimidos vaginais
de 4 mm de dimetro cada. O dimetro de cada disco
tal que permite a sua introduo no cilindro transparente, Utilizar o aparelho descrito em Desintegrao de
ficando os discos afastados de, aproximadamente, 30 cm. A supositrios e vulos, montado conforme Figura 2.
determinao levada a efeito utilizando-se trs aparelhos, Introduzir o cilindro em bquer de dimetro adequado
contendo cada um uma nica amostra. Cada aparelho contendo gua entre 36 C e 37 C que deve cobrir
introduzido no interior de bquer de, pelo menos, 4 litros de uniformemente as perfuraes do disco. Utilizar trs
capacidade, contendo gua temperatura de 36 C a 37 C, aparelhos, colocando em cada um deles um comprimido
a menos que indicado de maneira diferente na monografia vaginal sobre o disco superior. Cobrir o aparelho com
individual. O bquer provido de agitador que opere em uma placa de vidro para assegurar a umidade adequada.
velocidade lenta e dispositivo que permita inverter o cilindro Examinar o estado de cada amostra depois de decorrido
sem retir-lo da gua. o tempo prescrito na monografia. O teste considerado
satisfatrio se todas as amostras se apresentarem
5 desintegradas.
_______________
A, placa de vidro; B, comprimido vaginal;C, superfcie da gua; D, gua;
E, fundo do recipiente.
APARELHAGEM PARA OS MTODOS 1 E 2 mantendo-a nos limites de 4%. A rotao no deve produzir
efeitos indesejveis na hidrodinmica do sistema.
O aparelho de dissoluo consiste de um sistema de trs
componentes, descritos a seguir. As cubas so imersas em banho de gua termostatizado,
de material transparente e tamanho adequado, em que
(1) Recipientes abertos de forma cilndrica e fundo a temperatura seja mantida a 37 C 0,5 C durante a
hemisfrico (cubas), feitos em vidro boro silicato, plstico execuo do teste. O aparelho deve ser isento de qualquer
ou outro material transparente e inerte, aos quais pode fonte de vibrao, inclusive externa, que possa influir na
ser adaptada tampa de material inerte, com aberturas hidrodinmica do sistema. De preferncia, o aparelho deve
adequadas para o agitador, coleta de amostras e insero possibilitar a visualizao das amostras e dos agitadores
de termmetro. As cubas podem apresentar as seguintes durante o teste.
dimenses e capacidades: 185 25 mm de altura e 102 4
mm de dimetro interno para uma capacidade nominal de
um litro; 290 10 mm de altura e 102 4 mm de dimetro Mtodo 1: Cestas
interno para uma capacidade nominal de dois litros; 290 Quando especificado na monografia, utiliza-se como
10 mm de altura e 150 5 mm de dimetro interno para agitador uma haste de ao inoxidvel, em cuja extremidade
uma capacidade nominal de quatro litros. se adapta uma cesta do mesmo material (Figura 1). A tela
(2) Hastes em ao inoxidvel para prover agitao do meio, padro utilizada na confeco da cesta possui dimetro de
que podem apresentar sob duas formas: cestas (Mtodo fio de 0,25 mm e abertura de malha quadrada de 0,40
1) ou ps (Mtodo 2) (Figuras 1 e 2). A haste deve ser 0,04 mm (mesh 40), salvo especificao em contrrio na
centralizada de tal forma que, ao ser acionada, seu eixo monografia individual. A amostra deve ser colocada dentro
de rotao no se afaste mais de 2 mm em relao ao eixo da cesta seca, antes do incio do teste. Durante sua execuo,
vertical do recipiente contendo o meio de dissoluo. uma distncia de 25 2 mm deve ser mantida entre a parte
5
inferior da cesta e o fundo interno do recipiente que contm
(3) Um motor que possibilita ajustar a velocidade de rotao o meio de dissoluo.
da haste quela especificada na monografia individual,
adio de pepsina purificada com atividade de, no mximo, retirar alquota do meio de dissoluo do Estgio tampo
750 000 unidades/ 1000 mL. Para meio de dissoluo com pH 6,8 e determinar a quantidade de frmaco dissolvido,
pH igual ou superior a 6,8, adicionar pancreatina de, no empregando mtodo analtico adequado. O tampo pH 6,8
mximo, 1750 unidades de protease/ 1000 mL. pode ser preparado pela mistura de 3 volumes de HCl 0,1 M
e 1 volume de soluo de fosfato de sdio tribsico 0,20 M,
ajustando, se necessrio, o pH para 6,8 0,05 com HCl 2 M
PROCEDIMENTO PARA FORMAS FARMACUTICAS
ou NaOH 2 M.
DE LIBERAO RETARDADA
O produto cumpre o teste se os resultados atenderem as exigncias descritas na Tabela 1, salvo especificao em contrrio
na monografia individual.
Tabela 1 Critrios de aceitao para o teste de dissoluo de formas farmacuticas de liberao imediata.
N de amostras
Estgios Critrios de aceitao
testadas
Mdia de 12 unidades (E1 + E2) igual ou maior que Q e nenhuma unidade apresenta
E2 06
resultado inferior a Q 15%.
Mdia de 24 unidades (E1 + E2 + E3) igual ou maior do que Q, no mais que duas
E3 12 unidades apresentam resultados inferiores a Q 15% e nenhuma unidade apresenta
resultado inferior a Q 25%.
O termo Q corresponde quantidade dissolvida de inferior a Q 15%, o produto est em conformidade com
frmaco, especificada na monografia individual, expressa o especificado, no sendo necessrio efetuar o Estgio E3.
como porcentagem da quantidade declarada. Os valores
5%, 15% e 25% tambm representam porcentagens da
Estgio E3
5
quantidade declarada.
Caso o critrio para o Estgio E2 ainda no seja atendido,
Em circunstncias especiais, a porcentagem mxima de
repetir o teste com mais 12 unidades. Se a mdia das 24
dissoluo deve ser estabelecida experimentalmente.
unidades testadas (Estgios E1, E2 e E3) maior ou igual a Q,
Nesses casos, assegurar um valor de Q (quantidade
no mximo duas unidades apresentam resultados inferiores
dissolvida em tempo infinito) verificando que duas
a Q 15% e nenhuma unidade apresentar resultado
dosagens consecutivas no diferem entre si mais de 2%
inferior a Q 25%, o produto est em conformidade com
aps 10 minutos.
o especificado. Caso o critrio para o Estgio E3 ainda no
seja atendido, o produto considerado insatisfatrio.
Estgio E1
No Estgio E1 so testadas seis unidades. Se cada unidade, CRITRIOS DE ACEITAO PARA FORMAS
individualmente, apresentar resultado igual ou maior FARMACUTICAS DE LIBERAO PROLONGADA
do que Q + 5%, o produto est em conformidade com o
O produto cumpre o teste se os resultados preencherem as
especificado, no sendo necessrio efetuar o Estgio E2.
exigncias apresentadas na Tabela 2, salvo especificao
em contrrio na monografia individual. Os termos Q1 e Q2
Estgio E2 correspondem quantidade mnima e mxima de frmaco
dissolvido em cada intervalo de tempo especificado na
Caso o critrio para o Estgio E1 no seja atendido, repetir monografia, expressos como porcentagem da quantidade
o teste com mais seis unidades. Se a mdia das doze declarada. No ltimo tempo a especificao pode ser
unidades testadas (Estgios E1 e E2) maior ou igual a Q apresentada apenas com um valor de Q mnimo. Os
e, se nenhuma das unidades testadas apresentar resultado termos L1, L2 e L3 referem-se aos trs possveis estgios de
avaliao da liberao (L).
72 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Tabela 2 - Critrios de aceitao para o teste de dissoluo (liberao) realizado para formas farmacuticas de liberao prolongada.
No de unidades
Estgios Critrios de aceitao
testadas
L1 6 Cada resultado individual se insere no intervalo estabelecido (Q1 e Q2) para cada
determinado tempo e nenhum resultado individual inferior ao Q do ltimo tempo.
L2 6 A mdia de 12 unidades (E1 + E2) se insere no intervalo estabelecido (Q1 e Q2) para
cada determinado tempo e no inferior ao Q do ltimo tempo.
Nenhuma unidade individual apresenta resultado que supera os limites de Q1 e Q2
em 10% da quantidade declarada, para cada determinado tempo, e nenhum resultado
individual fornece valor inferior ao Q do ltimo tempo que supera em 10% a quantidade
declarada.
L3 12 A mdia de 24 unidades (E1 + E2 + E3) se insere no intervalo estabelecido (Q1 e Q2) para
cada determinado tempo e no inferior ao Q do ltimo tempo.
No mais que 2 unidades das 24 testadas apresentam resultados que superam os limites
de Q1 e Q2 em 10% da quantidade declarada, para cada determinado tempo, e no mais
que 2 unidades das 24 testadas apresentam resultados com valor inferior ao Q do ltimo
tempo que superem em 10% a quantidade declarada.
Nenhuma unidade individual apresenta resultado que supera os limites de Q1 e Q2
5
em 20% da quantidade declarada, para cada determinado tempo, e nenhum resultado
individual fornece valor inferior ao Q do ltimo tempo que supera em 20% a quantidade
declarada.
No de unidades
Estgios Critrios de aceitao
testadas
Tabela 4 Critrios de aceitao para o Estgio tampo pH 6,8 do teste de dissoluo (Mtodos
A ou B) realizado para Formas farmacuticas de liberao retardada.
No de unidades
Estgios Critrios de aceitao
testadas
B2 06 Mdia de 12 unidades (B1 + B2) igual ou maior que Q e nenhuma unidade apresenta
resultado inferior a Q 15%.
B3 12 Mdia de 24 unidades (B1 + B2 + B3) igual ou maior do que Q, no mais que duas
unidades apresentam resultados inferiores a Q 15% e nenhuma unidade apresenta
resultado inferior a Q 25%.
Dose e proporo
do frmaco
Forma Farmacutica Tipo Subtipo
25 mg e < 25 mg ou
25% < 25%
Comprimidos no revestidos VP UC
revestidos filme VP UC
outros UC UC
Cpsulas duras VP UC
moles suspenses, emulses ou gis UC UC
solues VP VP
Solues acondicionadas VP VP
em recipientes
para dose nica
Outros UC UC
O mtodo de Uniformidade de Contedo para preparaes O mtodo de Variao de peso pode ser aplicado s
em doses unitrias baseia-se no doseamento do contedo seguintes formas farmacuticas:
individual do componente ativo de um nmero de doses
unitrias para determinar se o contedo individual est 1. solues acondicionadas em recipientes para dose nica
dentro dos limites especificados. O mtodo de Uniformidade e em cpsulas moles;
de Contedo pode ser aplicado em todos os casos.
74 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
2. slidos (incluindo ps, grnulos e slidos estreis) 3. Calcular a quantidade de frmaco por peso mdio
acondicionados em recipientes para dose nica que no utilizando os resultados obtidos pelo procedimento de
contm outras substncias adicionadas, sejam elas ativas doseamento (D) e pelo procedimento especial (E).
ou inativas;
4. Calcular o fator de correo (F) segundo a equao:
3. slidos (incluindo slidos estreis) acondicionados em
recipientes para dose nica, contendo ou no substncias F = D/E
ativas ou inativas adicionadas, que tenham sido preparados em que
a partir de solues homogneas liofilizadas nos recipientes
finais, e sejam rotulados de modo a indicar este modo de D = quantidade do componente ativo por peso mdio
preparao; da forma farmacutica obtida pelo procedimento de
doseamento;
4. cpsulas duras, comprimidos no revestidos ou revestidos E = quantidade do componente ativo por peso mdio da
com filme, contendo 25 mg ou mais da substncia ativa forma farmacutica obtida pelo procedimento especial.
compreendendo 25% ou mais, em peso, da dose unitria Se (100|D E|)/D for superior a 10, no vlido o uso de F.
ou, no caso de cpsulas duras, o contedo da cpsula,
exceto que a uniformidade de outras substncias ativas 1. Se F estiver entre 0,970 e 1,030, no h necessidade de
presentes em menores propores deve ser demonstrada correo.
pelo mtodo de Uniformidade de Contedo.
2. A correo ser aplicada quando o valor de F estiver
O mtodo de Uniformidade de Contedo exigido entre 0,900 e 0,970 e entre 1,030 e 1,100 e deve ser efetuada
para todas as formas farmacuticas que no atendem s calculando-se a quantidade do frmaco em cada unidade,
condies especificadas para aplicao do mtodo de multiplicando-se as quantidades obtidas no procedimento
Variao de peso. especial pelo fator de correo F.
1. Pesar quantidade de unidades do produto suficiente para Calcular o Valor de Aceitao (VA) segundo a equao:
efetuar o doseamento e o procedimento especial do teste
de uniformidade de contedo apresentados na monografia
individual. Reduzir os comprimidos a p fino (ou misturar cujos termos so definidos na Tabela 2.
os contedos das cpsulas, solues, suspenses, emulses,
gis ou slidos em recipientes para dose nica) para obter
mistura homognea. Se no for possvel obter mistura VARIAO DE PESO
homognea desta forma, usar solventes apropriados ou
Para determinar a uniformidade de doses unitrias pelo
outros procedimentos para obter soluo contendo o
mtodo de variao de peso separar, no mnimo, 30 unidades
frmaco. Empregar alquotas apropriadas desta soluo
e proceder conforme descrito para as formas farmacuticas
para os ensaios especificados.
indicadas. A quantidade de frmaco por unidade
2. Analisar, separadamente, pores da amostra, medidas estimada a partir do resultado do doseamento e dos pesos
com preciso, conforme o procedimento indicado para o individuais, assumindo-se distribuio homognea do
doseamento (D) e o procedimento especial indicado para componente ativo. As quantidades individuais estimadas
uniformidade de contedo (E), descritos na monografia (xi) so calculadas segundo a equao:
individual.
xi = pi A/P
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 75
CRITRIOS
5
individuais em porcentagem da quantidade declarada.
Calcular o Valor de Aceitao (VA). Aplicar os critrios a seguir, tanto para Uniformidade
de Contedo como para Variao de peso, a menos que
Cpsulas moles indicado de maneira diferente na monografia individual.
Se X > T, ento M =T
5
exceo das membranas filtrantes, com soluo detergente
microscopia ptica). Para a determinao de partculas
morna e enxaguar com gua at que todo o detergente
no visveis nas preparaes injetveis e nas preparaes
seja removido. Imediatamente antes do uso, enxaguar o
para perfuso utilize de preferncia o mtodo 1. Em
equipamento da parte superior para a inferior, interna e
determinadas preparaes, entretanto, pode ser necessrio
externamente com gua livre de partculas.
realizar ensaios de contagem de partculas por bloqueio da
luz em primeiro lugar e s depois por microscopia ptica Observar para no introduzir bolhas de ar na amostra a
para poder concluir quanto conformidade dos resultados ser analisada, especialmente quando alquotas de amostra
obtidos. esto sendo transferidas para o acessrio de leitura.
A pesquisa das partculas no visveis efetuada aplicando Para verificar a adequabilidade do ambiente, da vidraria
um destes mtodos, ou mesmo os dois, no possvel para e da gua utilizada, efetuar a contagem de partculas
todas as preparaes injetveis. Quando o mtodo 1 no em cinco amostras de 5 mL de gua livre de partculas,
aplicvel, por exemplo no caso das preparaes pouco de acordo com o mtodo descrito nesse captulo. Caso o
lmpidas ou muito viscosas, o ensaio realizado pelo nmero de partculas maiores do que 10 m exceder a 25,
mtodo 2 (caso das emulses, das solues coloidais e das para o volume total de 25 mL, o ambiente no apresenta
preparaes de lipossomas). Do mesmo modo, um ensaio condies para realizar o teste.
de contagem de partculas por microscopia ptica pode
igualmente ser exigido no caso de produtos que formem
bolhas de ar ou de gs quando passam atravs do detector. Procedimento
Se a viscosidade da preparao tal que o exame por um Homogeneizar a amostra por meio de 25 inverses
ou outro dos mtodos impossvel, pode efetuar-se uma consecutivas lentas e suaves do recipiente. Eliminar as
diluio quantitativa com um diluente apropriado de modo bolhas deixando a amostra em repouso por 2 minutos.
a reduzir a viscosidade at o grau considerado suficiente Transferir quatro pores no menores que 5 mL, e
para permitir o ensaio. determinar o nmero de partculas com tamanho igual ou
Os resultados obtidos quando se examina uma unidade maior que 10 e 25 m. Desconsiderar o resultado obtido
ou um grupo de unidades no pode ser extrapolado com a primeira alquota, e calcular o nmero mdio de
com confiabilidade a outras unidades que no foram partculas para a amostra sob exame.
analisadas. Por consequncia, convm estabelecer planos
de amostragem estatisticamente vlidos se quiser tirar Avaliao
concluses vlidas, a partir dos dados recolhidos, para
determinar o grau de contaminao particulado de um Empregar o teste A, teste B ou teste C, assim como, o
grande grupo de unidades. nmero de amostras, conforme indicado na monografia
especfica, da forma farmacutica.
A gua utilizada nos ensaios livre de partculas. gua livre
de partculas pode ser obtida por filtrao em membrana de Teste A - Solues para injetveis em recipientes, com volume
porosidade de 0,22 m. declarado, maior que 100 mL. A amostra cumpre o teste se
o nmero mdio de partculas, com tamanho igual ou maior
78 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
que 10 m, presentes nas unidades testadas no exceda 25 e uma membrana filtrante. O microscpio equipado com
partculas por mL e o nmero de partculas com tamanho um micrmetro ocular calibrado, com um micrmetro de
iguais ou maiores que 25 m no exceda a 3 por mL. objetiva, uma platina de movimentos cruzados capaz de
manter e de atravessar toda a superfcie de filtrao da
Teste B - Solues para injetveis em recipientes, com membrana filtrante, dois iluminadores apropriados que
volume declarado, igual ou menor que 100 mL. A amostra permitem iluminao episcpica e iluminao oblqua,
cumpre o teste se o nmero mdio de partculas, com ajustado para ampliao de 100 10 vezes.
tamanho igual ou maior que 10 m, presentes nas unidades
testadas no exceda 6 000 partculas por recipiente e o O micrometro ocular um retculo circular e compreende
nmero de partculas com tamanho iguais ou maiores que um grande crculo dividido em quadrantes, por linhas
25 m no exceda a 600 partculas por recipiente. cruzadas, crculos de referncia pretos e transparentes de
dimetro de 10 m e de 25 m com um aumento de 100
Teste C - Ps para injetveis em recipientes, com volume e uma escala linear graduada de 10 em 10 m (Figura 1).
declarado, igual ou menor que 100 mL. A amostra
reconstituda com gua ou diluente apropriado livre de O grande crculo denominado campo de viso do
partculas cumpre o teste se o nmero mdio de partculas, retculo. So necessrios dois iluminadores, um iluminador
com tamanho iguais ou maiores que 10 m, presentes episcpico para fundo claro, interno do microscpio, e
nas unidades testadas no exceda 10 000 partculas por um iluminador auxiliar externo regulvel, ajustvel para
recipiente e o nmero de partculas com tamanho igual permitir uma iluminao oblqua refletida segundo um
ou maiores que 25 m no exceda a 1000 partculas por ngulo de 10-20. O dispositivo de filtrao destinado a
recipiente. reter a contaminao particular compreende um suporte de
filtro de vidro ou outro material conveniente, uma fonte de
vcuo e uma membrana filtrante adequada. A membrana
MTODO 2 CONTAGEM DE PARTCULAS POR
filtrante, de dimenses apropriadas, de cor preta ou cinza
5
MICROSCOPIA
escura; coberta ou no com uma grelha e o tamanho dos
poros inferior ou igual a 1,0 m.
Equipamento
descrito neste captulo. Caso o nmero de partculas de 10 viso do retculo e no se sobrepem aos crculos de
m ou maiores exceder a 20, ou se mais de 5 partculas de referncia para fins de comparao. O dimetro interior
25 m ou maiores estiverem presentes , o ambiente no dos crculos de referncia transparentes do retculo
apresenta condies para realizar o teste. utilizado para determinar o tamanho das partculas brancas
ou transparentes enquanto que o tamanho das partculas
escuras determinado com o dimetro exterior dos crculos
Procedimento
de referncia pretos e opacos do retculo. Quando realizar
Homogeneizar a amostra por meio de 25 inverses um ensaio de contagem de partculas ao microscpio no
consecutivas lentas e suaves do recipiente. Se necessrio, procure medir ou enumerar matrias amorfas, semi-lquidas
retire com cuidado o dispositivo de fechamento. Lave as ou morfologicamente indistintas que se assemelham a uma
superfcies exteriores da abertura do frasco com um jato mancha ou zona descorada da membrana filtrante. Estes
de gua isenta de partculas e retire o fechamento evitando materiais podem apresentar um brilho fraco ou nulo e
qualquer contaminao do contedo. assumir aspecto gelatinoso ou a aparncia de uma pelcula.
A interpretao da avaliao pode ser facilitada realizando
No caso das preparaes parenterais de grande volume, um ensaio de contagem das partculas por reteno da luz
efetue o ensaio em unidades separadas. No caso de sobre uma amostra da soluo.
preparaes parenterais de grande volume ou de pequeno
volume igual ou superior a 25 mL, podem ser suficientes
Avaliao
para o ensaio menos de 10 embalagens de acordo com um
plano de amostragem apropriado. Quanto s preparaes Empregar os critrios abaixo, de acordo com o volume das
parenterais de pequeno volume, cujo volume seja inferior amostras ou conforme indicado na monografia especfica,
a 25 mL rena o contedo de 10 unidades ou mais num da forma farmacutica.
recipiente limpo de modo a obter um volume mnimo de
5
25 mL; em casos justificados e autorizados, a soluo Nas preparaes acondicionadas em recipientes de
problema pode ser preparada misturando o contedo de contedo nominal superior a 100 mL, a preparao satisfaz
um nmero apropriado de frascos e completando 25 mL ao ensaio se o nmero mdio de partculas presentes nas
com gua isenta de partculas R ou um solvente apropriado unidades examinadas no for superior a 12 por mililitro
isento de contaminao particular, quando a gua isenta de para as partculas de tamanho superior ou igual a 10 m
partculas R no for apropriada. As preparaes parenterais e no exceder de 2 partculas por mililitro para as de
de pequeno volume cujo volume for superior ou igual a 25 tamanho superior ou igual a 25 m.
mL podem ser examinadas individualmente.
Nas preparaes acondicionadas em recipientes de
No caso dos ps para uso parenteral, reconstitua a contedo nominal igual ou inferior a 100 mL, a preparao
preparao com gua isenta de partculas ou um solvente satisfaz ao ensaio se o nmero mdio de partculas
apropriado isento de contaminao particular, quando a presentes nas unidades examinadas no for superior a 3000
gua isenta de partculas no for apropriada. por recipiente para as partculas de tamanho superior ou
igual a 10 m e a 300 por recipiente para as partculas de
Umedecer o interior do suporte do filtro munido da tamanho superior ou igual a 25 m.
membrana filtrante com alguns mililitros de gua isenta
de partculas. Passe para o filtro a totalidade da amostra
(mistura das tomadas de ensaio ou a unidade em ensaio) 5.1.7.2 PARTCULAS VISVEIS
e aplique o vcuo. Se necessrio, junte, pouco a pouco,
pores da soluo at que o volume total seja filtrado. A contaminao por partculas das preparaes injetveis e
Aps a ltima adio, comece a lavagem das paredes das preparaes injetveis para perfuso constituda por
internas do suporte do filtro utilizando um jato de gua partculas estranhas, no dissolvidas e mveis, alm das
isenta de partculas. Mantenha o vcuo at que a superfcie bolhas de gs, e que se encontram involuntariamente nestas
da membrana filtrante fique isenta de lquido. solues. A finalidade do ensaio fornecer um mtodo
Coloque o filtro numa placa de Petri e seque ao ar deixando simples de avaliao visual da qualidade das solues no
a placa ligeiramente aberta. Quando o filtro estiver seco, que respeita s partculas visveis. Podem utilizar-se outros
coloque a placa de Petri na platina do microscpio, efetue a mtodos validados.
varredura de toda a membrana filtrante sobre a luz refletida
do iluminador e conte o nmero de partculas de tamanho Aparelhagem
superior ou igual a 10 m e o nmero de partculas de
tamanho superior ou igual a 25 m. igualmente possvel O aparelho (Figura 1) composto por um posto de
efetuar contagem parcial e determinar por clculo o nmero observao, compreendendo: um painel preto opaco, de
total de partculas retidas no filtro. Calcule o nmero dimenses apropriadas, colocado em posio vertical,
mdio de partculas presentes na amostra. Para determinar um painel branco antirreflexo de dimenses apropriadas,
o tamanho das partculas com auxlio do retculo circular, colocado em posio vertical ao lado do painel preto, uma
proceda transformao da imagem de cada partcula num rampa de iluminao ajustvel, com uma fonte de luz
crculo e depois compare-a com os crculos de referncia branca protegida e um difusor apropriado (um sistema de
do retculo de 10 m e de 25 m. Assim, as partculas iluminao contendo 2 lmpadas fluorescentes de 13 W, com
mantm a sua posio inicial no interior do campo de comprimento de onda de 525 nm cada uma, apropriado).
80 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
A intensidade da iluminao no ponto de observao Calcular o nmero de gotas por mililitro para cada unidade
mantida entre 2000 e 3750 lux sendo aconselhvel uma testada (Nt) segundo a equao:
intensidade mais elevada para recipientes de vidro corado
(N1 )
ou de plstico. Nt =
mi
em que
5
Procedimento
Q = quantidade de frmaco, em mg/mL, determinada no
Retire eventualmente os rtulos, lave e seque o exterior do doseamento;
recipiente. Agite suavemente e inverta cada recipiente com Nt = nmero de gotas por mililitro calculado para cada
precauo, evitando a formao de bolhas de ar e observe-o unidade testada.
durante cerca de 5 segundos contra o painel branco. Repita
este procedimento, observando o recipiente contra o painel Calcular a porcentagem em relao quantidade declarada,
preto. Anote a presena de qualquer partcula. para cada unidade testada (%Qt ou %qt), empregando uma
das equaes abaixo:
Se uma unidade estiver fora da faixa de 85,0% a 115,0% Devem, tambm, suportar sua carga total sem sofrer tenses
da quantidade declarada, ou se o DPR for maior que 6,0%, inadequadas que possam comprometer sua sensibilidade
ou se ambas as condies forem observadas, testar mais 20 em pesagens sucessivas nessas condies.
unidades.
A balana no deve ser sobrecarregada.
5.2.2 DETERMINAO DO
PONTO OU INTERVALO DE
FUSO
Temperatura ou ponto de fuso de uma substncia
a temperatura corrigida na qual esta se encontra
completamente fundida.
Procedimento
Quando o banho estiver 10 oC abaixo da faixa de fuso, MTODO III - MTODO DA GOTA
introduzir o capilar no banho, de forma que sua parte inferior
esteja bem prxima do meio do bulbo do termmetro. Geralmente aplicado para determinao do ponto de fuso
de substncias graxas de consistncia pastosa.
As temperaturas obtidas so corrigidas mediante adaptao
de termmetro auxiliar ao dispositivo anterior, de forma
Aparelhagem
que seu bulbo encoste no termmetro do banho, na
zona mdia da coluna emergente de mercrio, quando a Deve-se empregar aparelhagem semelhante ao do Mtodo
substncia funde, lendo-se nesta altura a temperatura t I, com as seguintes diferenas:
marcada no termmetro auxiliar.
- termmetro com leitura at 100 oC graduado em 1 oC
O clculo da correo a ser adicionada a cada uma das
temperaturas, que definem o ponto de fuso, efetuado - no utiliza capilar
atravs da expresso
- o lquido de imerso a gua.
0,00015 N(T-t)
Procedimento
em que
Fundir a amostra, agitando at atingir uma temperatura
N = nmero de graus correspondentes coluna emergente,
de 90 a 92 oC e imediatamente deixar a amostra fundida
T = temperatura lida no termmetro padro,
resfriar at uma temperatura de 8 a 10 oC acima do ponto
t = temperatura lida no termmetro auxiliar.
de fuso esperado. Resfriar o bulbo de um termmetro at
O equipamento deve ser calibrado atravs do emprego de 5 oC, secar e, enquanto estiver frio, submergi-lo na amostra
padres de ponto de fuso dentre aqueles reconhecidos fundida at a altura da metade do bulbo, aproximadamente.
internacionalmente ou outros. Retirar imediatamente e mant-lo em posio vertical
at que a superfcie da amostra depositada sobre o bulbo
solidifique, mantendo-o em banho de gua durante
5
MTODO II - MTODO DO CAPILAR ABERTO
aproximadamente 5 minutos a uma temperatura no maior
Geralmente aplicado para substncias que no so que 16 oC. Adaptar o termmetro com a amostra dentro de
facilmente transformadas em p. um tubo de ensaio por meio de uma rolha de borracha ou
cortia, de modo que seu extremo inferior fique cerca de
15 mm acima do fundo do tubo de ensaio. Suspender o
Aparelhagem tubo de ensaio em um banho de gua a uma temperatura
Deve-se empregar aparelho semelhante ao descrito no de 16 oC e elevar a temperatura do banho at 30 oC a uma
Mtodo do Capilar, com as seguintes modificaes: velocidade de 2 oC por minuto e depois a uma velocidade
de 1 oC por minuto, at que a primeira gota se desprenda do
- o banho de aquecimento deve ser a gua; termmetro. A temperatura na qual isto ocorre representa o
ponto de fuso.
- o termmetro deve ser graduado em 0,2 oC, abrangendo
faixa de -10 a 100 oC; e Para cada determinao empregar uma poro recm
fundida da amostra. Se a variao de trs determinaes for
- o tubo capilar. semelhante quele empregado no Mtodo menor que 1 oC, calcular a mdia. Se a variao for maior
do Capilar, deve ser aberto em ambas as extremidades. que 1 oC realizar mais duas determinaes e determinar a
mdia das cinco leituras.
Procedimento
MTODO IV - MTODO DO BLOCO METLICO
Fundir a substncia rapidamente temperatura no superior
AQUECIDO
a 10 oC acima do ponto de fuso completo. Agitar e, se
necessrio, filtrar atravs de filtro de papel seco. De aplicao generalizada na determinao do ponto ou
intervalo de fuso de substncias.
Inserir a substncia fundida na extremidade do capilar at
formar coluna de 8 a 12 mm de altura. Esfriar o capilar
contendo a amostra temperatura de 15 oC, mantendo-a, Aparelhagem
no mnimo, por 16 horas. Prender o tubo capilar no
Consiste de bloco metlico de elevada condutividade
termmetro de forma tal que a coluna de substncia se
trmica, resistente s substncias sob anlise e de superfcie
localize na parte mdia do bulbo de mercrio. Colocar o
plana e polida, como bronze, ao inoxidvel e similares.
sistema em banho de gua a 15 oC, profundidade de 3
cm da superfcie da gua. Aquecer com agitao constante O bloco deve conter cavidade cilndrica interna, paralela
para que a temperatura aumente 2 oC por minuto. sua superfcie superior e a cerca de 3 mm desta, com
dimenses adequadas para acomodar termmetro
A temperatura na qual a substncia comea a ascender no
calibrado.
capilar o ponto de fuso.
84 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
tubo lateral. O aquecimento (a gs, eltrico ou atravs de
O ponto de fuso instantneo da amostra calculado banho) deve ser selecionado de acordo com a natureza da
mediante a seguinte expresso: substncia.
Figura 1 - Aparelho para determinao da faixa de destilao (dimenses em mm). A, balo de destilao; B, condensador; C, adaptador.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 85
5
1000 mL contendo gua ou soluo refrigerante.
Onde:
O tubo interior vedado com rolha de modo a conter
t1 = temperatura corrigida;
haste agitadora e termmetro com divises de 0,2 C. O
t2 = temperatura observada a presso atmosfrica b;
sensor de temperatura do termmetro deve estar fixo a
k = fator de converso (Tabela 1), a menos que esse fator
aproximadamente 15 mm do fundo do tubo. O agitador
no seja considerado;
um basto de vidro adaptado com anel na sua extremidade
b = presso atmosfrica, expressa em quilopascal, durante
inferior (Figura 1).
a destilao.
Densidade relativa de uma substncia a razo de sua picnmetro vazio e da massa de seu contedo com gua,
massa pela massa de igual volume de gua, ambas a 20 C recentemente destilada e fervida, a 20 C.
(d 20) ou por massa de igual volume de gua a 4 C ( d 20):
4
20 Transferir a amostra para o picnmetro. Ajustar a
20
d = 0,998234 d
4
20
20
temperatura para 20 C, remover excesso da substncia,
se necessrio, e pesar. Obter o peso da amostra atravs da
diferena de massa do picnmetro cheio e vazio. Calcular
PROCEDIMENTO
a densidade relativa (d 20) determinando a razo entre a
20
A densidade relativa da substncia pode ser determinada massa da amostra lquida e a massa da gua, ambas a 20
atravs de picnmetro, balana hidrosttica ou densmetro. C. Utilizar a densidade relativa para calcular a densidade
O uso desses dois ltimos condicionado ao tipo de de massa (r).
aparelhagem disponvel.
MTODO DO PICNMETRO
5.2.6 DETERMINAO DO
Utilizar picnmetro limpo e seco, com capacidade de,
NDICE DE REFRAO
no mnimo, 5 mL que tenha sido previamente calibrado.
A calibrao consiste na determinao da massa do ndice de refrao (n) de uma substncia a relao entre a
velocidade da luz no vcuo e sua velocidade na substncia.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 87
Quando um raio de luz monocromtica passa de um meio molculas, diminui (em mdia) o intervalo de tempo que as
transparente para outro de densidade ptica diferente molculas passam umas junto das outras, menos efetivas se
esse refletido ou refratado, exceto quando incide tornam as foras intermoleculares e menor a viscosidade.
perpendicularmente a interface. A relao entre o seno do
ngulo de incidncia (sen i) e o seno do ngulo de refrao A unidade dinmica, Sistema CGS, de viscosidade o poise.
(sen r) constante. Essa relao equivale ao ndice de O Sistema CGS de unidades um sistema de unidades de
refrao (n). medidas fsicas, ou sistema dimensional, de tipologia LMT
(comprimento, massa tempo), cujas unidades-base so o
centmetro para o comprimento, o grama para a massa e o
segundo para o tempo.
5
certos frmacos. igualmente usado para determinar a contudo, demasiado grande para a maioria das aplicaes,
pureza de leos volteis. recorrendo-se da ao centipoise, cP, correspondente a
um centsimo de poise. s vezes conveniente utilizar-
Geralmente determina-se o ndice de refrao em funo se a viscosidade cinemtica, que consiste na relao
da luz de sdio no comprimento de onda 589,3 nm (raia entre a viscosidade dinmica e a densidade. Nesse caso,
D) e a 20 0,5 oC. Da expressar-se o valor do ndice de no sistema CGS, a unidade o stoke. A exemplo do que
20
refrao como n D . ocorre com viscosidade absoluta (medida em poise),
mais conveniente exprimir-se viscosidade cinemtica em
centistokes (100 centistokes = 1 stoke) para caracterizar a
REFRATMETROS
maioria dos lquidos usuais em Farmcia e Qumica.
Os refratmetros utilizados normalmente em anlise
Sistema Internacional de Unidades pascal segundo(Pas)
farmacopeica usam luz branca, mas so calibrados de modo
a fornecer o ndice de refrao em termos de comprimento 1 Pas = 1 kg m1 s1 = 10 P
de onda correspondente ao da luz da raia D de sdio.
Pascal segundo equivale a 10 poise, mas, normalmente,
O refratmetro Abb mede a faixa de valores de ndice mais utilizado milipascal segundo (mPas)
de refrao das substncias farmacuticas. Outros
refratmetros de maior ou igual preciso podem ser Na Tabela 1 est registrada a viscosidade de alguns
empregados. lquidos.
Visto que o ndice de refrao varia significativamente com a Tabela 1 Viscosidade de alguns lquidos.
temperatura, durante a leitura deve-se ajustar e manter a 20 oC.
Viscosidade Viscosidade
A calibrao do aparelho realizada com padro fornecido Viscosidade
Lquido (P)a Unidades Nsm
pelo fabricante. Para controle da temperatura e limpeza do cP = mPa.s
CGS Unidades SI
equipamento deve-se determinar o ndice de refrao da gua 0,0101 (298 K) 0,00101 0,890
gua destilada cujos valores so 1,3330 a 20 C e 1,3325 a Acetona 0,00316 0,000316 0,306
25 C. Etanol 0,01200 0,001200 1,074
Glicerina 14,9 1,49 934
5.2.7 DETERMINAO DA ____________________
VISCOSIDADE a
1 poise (P) = 1 dina. s. cm-2 = 0,1 N s m-2. cP = centi-poise = mPa.s =
mili Pascal vezes Seg.
5
viscosidade do lquido sob ensaio. Assim, empregando-
se viscosmetro de Ostwald ou similar, determinam-se
os tempos de escoamento t1 e t2 de volumes iguais dos
Onde:
lquidos de referncia e amostra, de densidade d1 e d2,
respectivamente. Sendo h2 a viscosidade do lquido de t = tempo de queda da bola (seg).
referncia, a viscosidade absoluta (cP) do, lquido amostra, K = cte especfica da bola (mPcm3), fornecido pelo
pode ser calculada pela equao: fabricante.
dS = densidade da bola (g/cm3).
dL = densidade do lquido (g/cm3).
5
frmula indicada, empregando a constante k fornecida ou maior for a viscosidade maior ser o tempo que a bola
determinada por procedimento similar. levar a percorrer aquele espao. O tipo de esfera a utilizar
escolhido em funo do valor presumvel da viscosidade
do lquido em observao. No caso do sangue so utilizadas
esferas de vidro. Os resultados da viscosidade, dos lquidos
newtonianos so expressos em unidades absolutas padres
internacionais (milipascal. segundo, mPa.s).
VISCOSMETRO BROOKFIELD
VISCOSMETRO DE EFLUXO - MODELO TIPO FORD substncias opticamente ativas e estas no reagirem entre
si, o ngulo de desvio ser a soma algbrica dos ngulos de
Selecionar o orifcio adequado. A diretriz para a seleo do desvio de ambas.
orifcio deve ser a obteno de um tempo de escoamento
do lquido em teste ao redor de 60 segundos. Deve-se ter
um tempo de escoamento entre 20 e 100, segundos, para a Polarmetro
amostra a 25 C. Historicamente, a polarimetria foi realizada utilizando
A amostra deve ser, perfeitamente, homogeneizada. No um instrumento em que o poder rotatrio estimado pela
momento do ensaio, o viscosmetro e o material a ser visualizao da intensidade de campos divididos. Por essa
ensaiado devem estar a 25 0,1 C. Fechar o orifcio com razo, a linha-D da lmpada de sdio no comprimento de
lmina de vidro plana e preencher o copo com amostra onda visvel a 589 nm foi o mais frequentemente utilizado.
at o nvel mais elevado. Verter a amostra, lentamente, O poder rotatrio especfico determinado na linha D
evitando a formao de bolhas. Nivelar a amostra no expresso, na maioria das vezes, pelo smbolo:
copo utilizando placa de vidro plana. Retirar a lmina do
orifcio. A amostra ficar retida dentro do copo. Remova
a placa de vidro plana e acione o cronmetro quando a
amostra comear a escoar pelo orifcio. Quando ocorrer
a primeira interrupo do fluxo de escoamento, parar o O uso de comprimentos de onda mais baixos como os
cronmetro e anotar o tempo transcorrido em segundos. disponveis com as linhas de lmpada de mercrio isolados
Realizar o ensaio, no mnimo, em triplicata. A viscosidade por meio de filtros de transmitncia mxima a cerca de 578,
ser a mdia dos valores obtidos, expressa em mm2/s ou 546, 436, 405 e 365 nm em um polarmetro fotoeltrico
Centistokes, sendo permitido um desvio padro mximo mostraram maior sensibilidade; consequentemente houve
3%. A converso de segundos para mm2/s ou Centistokes uma reduo na concentrao da substncia no ensaio.
5 dada de acordo com o manual do equipamento utilizado. Em geral, o poder rotatrio observado em 436 nm
aproximadamente o dobro e em 365 nm cerca de trs
vezes maior que o em 589 nm.
5.2.8 DETERMINAO
DO PODER ROTATRIO Poder rotatrio e poder rotatrio especifico
ESPECFICO
Muitas substncias farmacuticas so opticamente ativas, Em que [] o poder rotatrio especfico no comprimento
logo desviam a luz plano-polarizada de modo que a luz de onda e na temperatura t, a o poder rotatrio observado
transmitida desviada em um determinado ngulo em em graus (), l o caminho ptico em decmetros e c a
relao incidente. concentrao da substncia em g por 100 mL. Assim, []
100 vezes para uma soluo contendo 1 g em 100 mL
Substncias com a mesma estrutura contendo um ou mais
em uma clula com um caminho ptico de 1,0 decmetro
centros quirais as quais so imagens especulares no
sob condies definidas do comprimento de onda da luz
superponveis uma da outra so denominadas enantimeros.
incidente e da temperatura.
Um dos enantimeros desvia a luz plano-polarizada para
a direita (+) e chamado de dextrgiro, ou d; o antpoda Procedimento
desvia para a esquerda (-) e conhecido como levgiro
ou l. O ngulo desse desvio igual em mdulo para os O poder rotatrio especfico de um frmaco um valor de
enantimeros, porm com sinais opostos. referncia e deve ser calculado a partir do poder rotatrio
observado para a soluo da amostra ou para o lquido
As propriedades fsico-qumicas dos enantimeros como conforme especificado na monografia. As medidas do poder
densidade, ndice de refrao, momento dipolo-dipolo, rotatrio so realizadas a 589 nm a 20 C exceto quando
pontos de ebulio e fuso so idnticas j que o ambiente especificado. Sempre que um polarmetro fotoeltrico
qumico no qual est inserido cada tomo igual para os usado, uma nica medida corrigida pelo branco realizada.
enantimeros. Para um polarmetro visual empregada a mdia de pelo
menos cinco determinaes corrigidas pelo branco. Em
A polarimetria, isso , a medio do poder rotatrio de
ambos os casos, o solvente utilizado para o preparo da
uma substncia com polarmetro um dos mtodos mais
soluo da amostra deve ser utilizado como branco ou o tubo
prtico para distinguir os enantimeros e, portanto, um
vazio no caso de lquidos. A temperatura experimental deve
importante critrio de identificao, caracterizao e de
ser mantida em 0,5 C em relao ao valor especificado.
determinao de pureza enantiomrica dos frmacos.
Usar o mesmo tubo do polarmetro na mesma orientao
O poder rotatrio varia com a temperatura, o comprimento angular para a amostra e o branco. Posicionar o tubo para
de onda da luz incidente, o solvente utilizado, a natureza da que a luz passe por ele na mesma direo cada vez.
substncia e sua concentrao. Se a soluo contiver duas
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 91
porcentagem de cinzas sulfatadas em relao substncia Pesar cerca de 25 g da amostra (dependendo da natureza
sob ensaio, utilizando o seguinte clculo: do material, densidade do p ou grnulo e do dimetro dos
tamises a serem utilizados). Transferir a amostra para o
tamis superior, distribuindo uniformemente o p. Tampar
o conjunto.
em que:
Acionar o aparelho, por cerca de 15 minutos, com vibrao
P1 = Peso do cadinho aps a calcinao e esfriamento (tara
adequada. Aps o trmino deste tempo, utilizando um
do cadinho);
pincel adequado, remover toda a amostra retida na superfcie
P2 = Peso do cadinho com amostra aps a calcinao e
superior de cada malha para um papel impermevel, e
esfriamento em dessecador;
pesar o p. Pesar tambm o p retido no coletor.
P3 = Peso da amostra inicial
100 = Fator de porcentagem. Calcular o percentual retido em cada tamis, utilizando o
seguinte clculo:
5.2.11 DETERMINAO DA
GRANULOMETRIA DOS PS onde:
5
Na descrio dos ps so utilizados os termos abaixo:
frmacos e em testes de carbonizao com cido sulfrico 3 mL de amido SI como indicador. Corrigir o volume de
especificados em diversas monografias. titulante consumido por determinao em branco. Cada
mL de tiossulfato de sdio 0,1 M SV equivale a 24,97 mg
O processo comparativo, salvo especificao em contrrio, de CuSO4.5H2O. Ajustar o volume da soluo adicionando
deve ser executado em tubos de ensaio de vidro transparente quantidade suficiente de mistura de cido clordrico e
e fundo chato, com dimetro da ordem de 16 mm, do tipo gua para obter soluo contendo exatamente 62,4 mg de
empregado em ensaio limite de impurezas. Os tubos devem CuSO4.5H2O por mL de soluo.
ser os mais uniformes possveis.
Para a avaliao, utilizar volumes de 10 mL tanto para Soluo base de cloreto frrico
a preparao amostra quanto para a preparao padro,
assegurando altura aproximada de 50 mm para os lquidos Preparar soluo de 25 mL de cido clordrico e 975 mL de
nos tubos. Observar os tubos transversalmente contra fundo gua. Dissolver cerca de 55 g de cloreto frrico (FeCl3.6H2O)
branco, sob luz difusa. importante comparar as solues em aproximadamente 900 mL dessa soluo e completar o
nas mesmas condies, inclusive de temperatura (25 oC). volume para 1000 mL com a mesma soluo. Transferir,
utilizando pipeta, 10 mL dessa soluo para frasco de iodo de
A preparao amostra preparada de modo a apresentar 250 mL, adicionar 15 mL de gua, 3 g de iodeto de potssio
colorao semelhante da preparao de referncia e 5 mL de cido clordrico. Deixar em repouso durante 15
especificada. minutos. Completar o volume da soluo para 100 mL com
gua e titular o iodo liberado com tiossulfato de sdio 0,1 M
PADRES BSICOS SV, juntando 3 mL de amido SI como indicador. Corrigir o
volume de titulante consumido por determinao em branco.
As solues de referncia de cor (SC) so obtidas a partir Cada mL de tiossulfato de sdio 0.1 M SV equivale a 27,03
de trs solues bsicas, a serem preparadas e armazenadas mg de FeCl3.6H2O. Ajustar o volume da soluo adicionando
em frascos hermticos. Dessas - com base na Tabela 1,
contendo indicaes de volumes para a preparao de 20
solues-padro de cor (SC) designadas com as letras
quantidade suficiente de soluo de cido clordrico e
gua para obter soluo contendo exatamente 45,0 mg de
FeCI3.6H2O por mL de soluo.
5
do alfabeto, de A a T - preparar a soluo ou solues
especificadas para a comparao. Transferir os volumes Tabela 1 - Composio das solues-padro de cor (SC).
indicados (deixar a gua por ltimo) e homogeneizar,
diretamente, nos tubos de comparao. Partes de
Soluo Soluo Soluo
gua,
Soluo base de cloreto de cobalto II SC base de base de base de
para
cloreto de cloreto sulfato
Preparar soluo de 25 mL de cido clordrico e 975 completar
cobalto II, frrico, cprico,
mL de gua. Dissolver 65 g de cloreto de cobalto(II) em 10 mL.
em mL em mL em mL
aproximadamente 900 mL dessa soluo e completar o A 0,1 0,4 0,1 4,4
volume para 1000 mL com o mesmo solvente. Transferir,
B 0,3 0,9 0,3 8,5
usando pipeta, 5 mL dessa soluo para frasco de iodo de
C 0,1 0,6 0,1 4,2
250 mL, juntar 5 mL de perxido de hidrognio SR e 15
D 0,3 0,6 0,4 3,7
mL de hidrxido de sdio 5 M. Ferver durante dez minutos,
E 0,4 1,2 0,3 3,1
resfriar e adicionar 2 g de iodeto de potssio e 20 mL de
cido sulfrico 0,26 M. Titular com tiossulfato de sdio 0,1 F 0,3 1,2 0,0 3,5
M SV, juntando 3 mL de amido SI como indicador. Corrigir G 0,5 1,2 0,2 3,1
o volume de titulante consumido por determinao em H 0,2 1,5 0,0 3,3
branco. Cada mL de tiossulfato de sdio 0,1 M SV equivale I 0,4 2,2 0,1 2,3
a 23,79 mg de CoCl2.6H2O. Ajustar o volume da soluo J 0,4 3,5 0,1 1,0
adicionando quantidade suficiente de soluo de cido K 0,5 4,5 0,0 0,0
clordrico e gua para obter soluo contendo exatamente L 0,8 3,8 0,1 0,3
59,5 mg de CoCl2.6H2O por mL de soluo. M 0,1 2,0 0,1 2,8
N 0,0 4,9 0,1 0,0
Soluo base de sulfato cprico O 0,1 4,8 0,1 0,0
P 0,2 0,4 0,1 4,3
Preparar soluo de 25 mL de cido clordrico e 975 mL Q 0,2 0,3 0,1 4,4
de gua. Dissolver 65 g de sulfato cprico (CuSO4.5H2O) R 0,3 0,4 0,2 4,1
em 900 mL dessa soluo e completar o volume para 1000 S 0,2 0,1 0,0 4,7
mL com a mesma soluo. Transferir, usando pipeta, 10 T 0,5 0,5 0,4 3,6
mL dessa soluo para frasco de iodo de 250 mL, juntar
40 mL de gua, 4 mL de cido actico glacial, 3 g de
iodeto de potssio e 5 mL de cido clordrico. Titular o
iodo liberado com tiossulfato de sdio 0,1 M SV, juntando
94 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
de onda especfico de acordo com o elemento analisado em um, adicionar volumes determinados da soluo de
incide sob o vapor atmico contendo tomos livres desse referncia especificada de modo a obter uma srie de
elemento no estado fundamental. A atenuao da radiao solues contendo quantidades crescentes do analito.
proporcional concentrao do analito segundo a lei de Completar o volume de cada balo com gua. Aps calibrar
Lambert-Beer. o espectrmetro com gua, registrar trs vezes as leituras
de cada soluo. Traar a curva analtica para a mdia das
A instrumentao para absoro atmica consiste,
absorvncias das trs leituras para cada soluo versus a
basicamente, de fonte de radiao, atomizador,
respectiva quantidade do analito adicionada soluo.
monocromador, detector e sistema de processamento de
Registrar a quantidade do analito em mdulo na amostra
dados. Como fontes de luz utilizam-se lmpadas de ctodo
por extrapolao da curva analtica no eixo das abcissas.
oco e lmpadas de descarga sem eletrodo que emitem
radiao intensa de mesmo comprimento de onda que a
absorvida pelo elemento a ser determinado. O atomizador 5.2.13.1.1 Espectrometria de absoro atmica
pode ser constitudo de uma chama ou um forno de com chama
grafite. O monocromador responsvel pela separao
do comprimento de onda desejado. A radiao incide no
monocromador por uma fenda estreita; em seguida, O sistema consiste de uma cmara de pr-mistura na qual
separada em seus diferentes comprimentos de onda em o combustvel e o oxidante so misturados e do queimador
uma rede de difrao e, posteriormente, direcionada ao que recebe a mistura combustvel-oxidante. A soluo
detector. O detector, geralmente, um fotomultiplicador, introduzida atravs de um nebulizador pneumtico, no qual
que transforma a energia luminosa em corrente eltrica, a gerado um fino aerossol que conduzido at a chama. A
qual amplificada e, posteriormente, interpretada por um quantidade de energia que pode ser fornecida pela chama
sistema de leitura. para a dissociao e atomizao da amostra proporcional
temperatura. Se uma chama de baixa temperatura
utilizada, a soluo pode no ser convertida em tomos
PROCEDIMENTO neutros. Por outro lado, se uma chama com temperatura
muito elevada for empregada poder ocorrer a formao de
Para operar os espectrmetros de absoro atmica,
grande quantidade de ons que no absorvem radiao da
recomenda-se seguir as instrues do fabricante. As
fonte. Atravs da modificao da proporo de oxidante e
determinaes so feitas por comparao com solues de
combustvel utilizados para cada tipo de chama, possvel
referncia contendo concentraes conhecidas do analito.
alterar significativamente sua temperatura. As chamas mais
As determinaes podem ser efetuadas pelo Mtodo de
popularmente utilizadas so as produzidas por ar-acetileno
calibrao direta (Mtodo I) ou pelo Mtodo de adio
(2100 - 2400 C) e acetileno-xido nitroso (2650 - 2850
padro (Mtodo II). Recomenda-se o Mtodo I, salvo
C). A mistura ar-acetileno utilizada para elementos com
quando especificado.
temperaturas de atomizao inferiores como Na, K, Mg,
Mtodo de calibrao direta (Mtodo I): preparar no Cd, Zn, Cu, Mn, Co, etc. A chama gerada por acetileno-
mnimo quatro solues de referncia do elemento a xido nitroso aplicada a elementos refratrios como Al,
ser determinado utilizando a faixa de concentrao V, Ti, Si, U, entre outros.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 95
5
hidretos volteis.
pelo aumento da temperatura da chama o que resulta na
dissociao desses compostos. Outra possibilidade a
utilizao de um agente supressor ou libertador que 5.2.13.1.3 Espectrometria de absoro atmica
possui maior afinidade pelo oxignio em relao ao analito com gerao de vapor frio
evitando a formao dos xidos. A soluo contendo cloreto
de csio e cloreto de lantnio, Soluo de Schinkel, a
mais comumente empregada. A espectrometria de absoro atmica com gerao de
vapor frio utilizada para a determinao de mercrio. O
Interferncias espectrais: ocorrem por meio da absoro equipamento e os reagentes so os mesmos utilizados no
ou espalhamento da radiao selecionada para o analito. sistema de gerao de hidretos, porm a cela de quartzo
As interferncias espectrais causadas por tomos so no precisa ser aquecida, pois o mercrio reduzido a
pouco comuns e podem ser resolvidas alterando a linha mercrio metlico que voltil a temperatura ambiente.
espectral utilizada. As interferncias causadas por espcies No entanto, vapor dgua pode ser transportado pelo gs de
moleculares so mais graves mas, normalmente, so arraste e interferir na determinao. Para solucionar esse
contornadas atravs da correo de fundo. problema, utiliza-se uma lmpada de infravermelho para
aquecer a cela de quartzo, prevenindo a condensao de
vapor dgua. Nesse caso, normalmente no necessrio
5.2.13.1.2 Espectrometria de absoro atmica efetuar a purga, pois o comprimento de onda utilizado para
com gerao de hidretos a determinao de Hg 253,7 nm no qual rara a absoro
de radiao por gases da atmosfera.
A espectrometria de absoro atmica com gerao de
hidretos uma tcnica utilizada para a determinao 5.2.13.1.4 Espectrometria de absoro atmica
de elementos formadores de hidretos volteis mais
comumente para As, Se, Sb, Bi, Ge, Sn, Pb e Te. O processo
com forno de grafite
constitudo de trs etapas principais: gerao, transporte
e atomizao dos hidretos. O sistema pode ser construdo A espectrometria de absoro atmica com forno de grafite
em batelada ou em fluxo. A gerao dos hidretos consiste uma tcnica abrangente que possui elevada sensibilidade.
da reao do analito, normalmente em meio cido, com um O forno consiste de um tubo de grafite de 3 a 5 cm de
redutor (NaBH4). O transporte dos hidretos do frasco de comprimento e de 3 a 8 mm de dimetro revestido com
reao at a cela de quartzo feito atravs de um gs inerte grafite piroltico. A quantidade de amostra injetada no forno
de arraste tal como argnio ou nitrognio. Para elementos varia de 5 L a 50 L e geralmente introduzida por um
que absorvem em comprimento de onda inferior a 200 nm, sistema automatizado. O forno aquecido eletricamente
antes da etapa de gerao dos hidretos, deve-se efetuar uma atravs da passagem de corrente eltrica de modo
purga para remoo dos gases atmosfricos a fim de evitar longitudinal ou transversal. Fluxos de gases inertes como
que esses gases absorvam a radiao da fonte. A atomizao argnio so mantidos externamente e internamente para
feita em uma cela de quartzo aquecida eletricamente ou evitar a combusto do forno. Alm disso, o fluxo interno
com um queimador tpico de sistemas de atomizao com expulsa o ar atmosfrico do forno e tambm os vapores
chama; a temperatura interna da cela de 850 a 1000 oC. gerados durante as etapas de secagem e pirlise. Um forno
O sinal obtido, normalmente, do tipo transiente; cerca de
96 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Os solventes orgnicos podem ser usados, desde que no
com adequada sensibilidade. Recomenda-se que as curvas interfira na estabilidade da chama.
de pirlise e atomizao sejam feitas sempre que uma
amostra desconhecida for analisada.
INTERFERNCIAS
O processo de atomizao em um forno de grafite
complexo e depende de vrios fatores como o material As interferncias que ocorrem na fotometria de chama so
do forno e da plataforma, a atmosfera dentro do tubo, a muito semelhantes s observadas na Espectrometria de
velocidade de aquecimento, a temperatura e a natureza absoro atmica (5.2.13.1). No entanto, podem ocorrer
das substncias. Para a obteno de melhores resultados interferncias espectrais causadas pela emisso de bandas
recomenda-se o uso da plataforma de LVov no interior do de rotao-vibrao molecular, tais como OH (310-330
tubo e aquecimento transversal. O sinal obtido do tipo nm), NH (em torno de 340 nm), N2+ (em torno de 390 nm),
transiente; so necessrios, no mximo, 12 segundos para C2 (em torno de 450 nm), etc.
a integrao do sinal.
SOLVENTES
INTERFERNCIAS
O solvente deve ser selecionado com cautela. Se houver
Interferncias espectrais: interferncias causadas por diferena significativa de tenso superficial ou viscosidade
sobreposies de linhas entre tomos so pouco comuns. entre amostra e soluo de referncia ocorrero variaes
A atenuao do feixe de radiao por espcies geradas nas taxas de aspirao e nebulizao e, em consequncia,
durante o processo de atomizao decorrentes da matriz diferenas significativas nos sinais produzidos. Assim,
so mais frequentes. Para solucionar tal problema deve-se o solvente empregado no preparo das amostra e das
eliminar eficientemente a matriz. O uso de um modificador referncias deve ser o mais similar possvel.
de matriz e de um corretor de fundo so essenciais para a
confiabilidade dos resultados. PROCEDIMENTO
Formao de substncias volteis: em amostras com O equipamento deve ser operado de acordo com as
elevados teores de halognios (especialmente Cl) existe instrues do fabricante e no comprimento de onda
a possibilidade de formao de substncias volteis do especificado. Ajustar o zero com o solvente. Em seguida,
analito que podero ser perdidas em temperaturas baixas injetar a soluo de referncia mais concentrada e ajustar
ocasionando em erro na anlise. Nesse caso, o uso de a sensibilidade desejada. As determinaes so feitas
um modificador qumico capaz de formar complexos por comparao com solues de referncia contendo
termicamente estveis com o analito minimiza a formao concentraes conhecidas do analito. As determinaes
de substncias volteis. Alm disso, quando o modificador podem ser realizadas pelo Mtodo de calibrao direta
qumico combinado com a plataforma de Lvov, os (Mtodo I) ou pelo Mtodo de adio padro (Mtodo II)
efeitos de interferncia de matriz so bastante reduzidos. conforme descrito em Espectrometria de absoro atmica
importante salientar que um determinado modificador (5.2.13.1).
qumico pode ser muito eficaz para alguns elementos,
porm ineficiente para outros.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 97
5.2.13.2.2 Espectrometria de emisso tica com elementos presentes no plasma emitem radiao ao
plasma indutivamente acoplado mesmo tempo, logo necessrio o uso de um sistema
de deteco multielementar. Os espectrmetros podem
ser simultneos ou sequenciais. Para a espectrometria de
A espectrometria de emisso tica com plasma emisso tica com plasma indutivamente acoplado, tanto
indutivamente acoplado uma tcnica bastante abrangente os espectrmetros sequenciais quanto os simultneos
que possui elevada sensibilidade e com caracterstica so amplamente utilizados. A configurao mais comum
multielementar. De maneira geral, na espectrometria com para espectrmetros sequenciais a Czerny-Turner. J os
plasma indutivamente acoplado, o aerossol da amostra espectrmetros simultneos so encontrados, basicamente,
introduzido em uma fonte de plasma, onde evaporado com as configuraes Echelle e Paschen-Runge.
e dissociado em tomos e ons livres que so excitados.
O plasma consiste de um gs parcialmente ionizado de
elevada temperatura (6000 a 10 000 C), eletricamente INTERFERNCIAS
neutro e com boa condutividade eltrica. Devido A sobreposio das linhas de emisso uma das principais
alta temperatura do plasma gerada uma radiao interferncias para espectrometria de emisso ptica com
policromtica decorrente da emisso de vrios elementos e plasma indutivamente acoplado. Este tipo de interferncia
ons presentes na amostra. Portanto, necessrio o uso de pode ser eliminado com o uso de espectrmetros de alta
um monocromador com elevada capacidade de resoluo resoluo e procedimentos de correo de fundo. Muitas
para separao dos comprimentos de onda caractersticos interferncias espectrais so observadas na faixa de 200 a
para cada elemento. A deteco da radiao gerada por 400 nm, na qual mais de 200 000 linhas de emisso atmica
comprimentos de onda especficos pode ser aplicada para e bandas moleculares so observadas.
anlise qualitativa e as intensidades destes comprimentos
de onda podem ser usadas para anlise quantitativa. As interferncias fsicas so semelhantes aquelas em
5
Espectrometria de absoro atmica com chama
INSTRUMENTAO (5.2.13.1.1).
5
consiste de um cilindro (ou uma srie de cilindros ou placas
instrues do fabricante e com o istopo adequado para
perfuradas) metlico oco submetido a uma diferena de
cada elemento. Ajustar o zero com o solvente injetado no
potencial (normalmente na faixa de 2 a 15 V de corrente
equipamento. As determinaes so feitas por comparao
contnua). Grande parte dos espectrmetros de massas
com solues de referncia, contendo concentraes
com plasma indutivamente acoplado comercializados
conhecidas dos analitos. As determinaes podem ser
atualmente utiliza o quadrupolo como separador de
feitas pelo Mtodo de Calibrao Direta (Mtodo I), pelo
massas. O quadrupolo consiste em quatro barras metlicas
Mtodo de Adio Padro (Mtodo II) ou pelo Mtodo de
cilndricas ou hiperblicas de mesmo comprimento e
Padro Interno (Mtodo III).
dimetro. Pela aplicao combinada de corrente contnua
(cc) e de corrente alternada (ca) aos eletrodos (quadrupolo), Mtodo de Calibrao Direta (Mtodo I). Preparar
somente os ons com uma determinada razo massa/carga ao menos quatro solues de referncia dos analitos,
(m/z) so conduzidos atravs do quadrupolo. Os demais abrangendo a faixa de concentraes recomendada pelo
ons colidem com os eletrodos ou so removidos do interior fabricante do equipamento para os elementos em anlise.
do quadrupolo. Desta forma, os ons so sequencialmente Todos os reagentes empregados no preparo da soluo
separados pelo quadrupolo. Vrios tipos de detectores amostra devem ser igualmente includos, nas mesmas
podem ser utilizados para coletar os ons na sada do concentraes, s solues de referncia. Aps a calibrao
quadrupolo e converter em sinal eltrico, mas os mais do equipamento com solvente, injetar, trs vezes, cada
populares so os de dinodos discretos, copo de Faraday uma das solues de referncia e, aps a estabilizao
(Faraday Cup) e Chaneltron. da leitura, registrar o resultado, lavando o sistema com
o solvente aps cada injeo. Traar a curva analtica,
INTERFERNCIAS plotando a mdia das leituras de cada grupo de trs, com a
respectiva concentrao. Preparar a soluo da substncia
Assim como em outras tcnicas espectromtricas, a a ser determinada conforme indicado na monografia,
espectrometria de massas com plasma indutivamente ajustando sua concentrao para que esta fique dentro
acoplado possui interferncias espectrais e no espectrais. da faixa das concentraes das solues de referncia.
As interferncias espectrais so dependentes da espcie Introduzir a amostra no equipamento, registrar a leitura e
presente e podem ser divididas em quatro tipos principais: lavar o sistema com solvente. Repetir esta sequncia duas
poliatmicas, isobricas, ons de carga dupla e ons vezes e, adotando a mdia de trs medies, determinar a
de xidos refratrios. Este tipo de interferncia pode concentrao do analito pela curva analtica.
ser corrigida pela simulao da composio da matriz,
pela escolha de outro istopo (quando possvel) ou pelo Mtodo de Adio Padro (Mtodo II). Adicionar a cada
uso de cela de reao e/ou coliso. Em alguns casos, as um de, ao menos, quatro bales volumtricos similares,
interferncias espectrais podem ser corrigidas com o uso volumes iguais de soluo da substncia a ser determinada,
de um programa de computador apropriado. preparada conforme indicado na monografia. Juntar a
todos os bales, com exceo de um, volumes medidos da
As interferncias no espectrais podem surgir por vrios soluo de referncia especificada, de modo a obter uma
motivos: deposio sobre os cones da interface, presena de srie de solues contendo quantidades crescentes dos
outro elemento facilmente ionizvel, efeito espao carga, analitos. Diluir convenientemente o volume de cada balo
entre outros. No entanto, a maioria das interferncias no- com gua. Aps calibrar o espectrmetro com gua, como
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 99
indicado acima, registrar trs vezes as leituras de cada Tabela 1 Faixas de comprimento de onda
soluo. de interesse para a espectrofotometria.
5
Injetar a amostra no equipamento, registrar a leitura e
passagem ao estado excitado no de natureza contnua
lavar o sistema com solvente. Repetir esta sequncia duas
realizando-se, geralmente, em etapas chamadas de
vezes e, adotando a mdia de trs medies, determinar a
transies. Na regio do ultravioleta e visvel as transies
concentrao do analito pela curva analtica.
so eletrnicas e ocorrem em pores da molcula
chamadas de cromforos. Estas transies compreendem
promoes de eltrons de orbitais moleculares ocupados,
5.2.14 ESPECTROFOTOMETRIA geralmente, s e p ligantes e no ligantes, para os orbitais
NO ULTRAVIOLETA,VISVEL E de energia imediatamente superiores, antiligantes p* e s*.
espectrofotometria NIR e MIR os espectros podem ser forma que somente a banda de interesse seja detectada e
adquiridos utilizando o modo transmisso e reflexo. Esta medida. Os monocromadores, geralmente, possuem uma
ltima subdivide-se em reflexo difusa e reflexo total rede de difrao, enquanto que os filtros podem ser de
atenuada. H ainda a possibilidade da combinao dos interferncia ou de absoro. Os fotmetros ou colormetros
modos de transmisso e reflexo, chamada de transreflexo. so instrumentos mais simples que utilizam um filtro para
seleo do comprimento de onda e so utilizados, geralmente,
Transmisso: a medida da diminuio da intensidade da na regio do visvel. Os espectrofotmetros, por sua vez,
radiao em determinados comprimentos de onda quando utilizam monocromadores para seleo do comprimento de
a radiao passa atravs da amostra. A amostra disposta onda e so utilizados nas regies do UV/VIS.
no feixe ptico entre a fonte e o detector. A transmisso (T)
pode ser calculada pela frmula abaixo: O compartimentos utilizados para receber a amostra so
denominados de cubetas que devem apresentar janelas que
I
T= sejam transparentes na regio espectral de interesse. Para a
I0 regio do UV so necessrias cubetas de quartzo enquanto
que, para a regio do VIS, pode-se empregar cubetas de
I0 = intensidade da radiao incidente
vidro ou acrlico.
I = intensidade da radiao transmitida.
Os principais tipos de detectores so os fototubos, os
Os espectros em transmisso podem ser convertidos para
arranjos de fotodiodos e os dispositivos de transferncia
absorvncia:
de carga. Os fototubos so os detectores mais simples e
sua resposta est baseada no efeito fotoeltrico. O detector
de arranjo de diodos permite que todos os comprimentos
de onda possam ser monitorados simultaneamente. Os
dispositivos de transferncia de carga tm sido empregados
Clulas de transmisso, acessrios para reflexo difusa e sdio. Disperses da amostra so preparadas triturando-se
reflexo total atenuada so os acessrios mais comuns para cerca de 5 mg da substncia em uma gota de leo mineral
a aquisio dos espectros. de grau espectroscpico. A pasta obtida espalhada entre
duas janelas de brometo de potssio ou cloreto de sdio.
A espectrofotometria no infravermelho prximo (NIR) Para o preparo das pastilhas cerca de 1 mg da amostra
uma tcnica que permite a obteno de espectros na regio triturada com aproximadamente 300 mg de brometo de
compreendida entre 13300 a 4000 cm-1 (750 a 2500 nm). potssio de grau espectroscpico.
Os espectrofotmetros na regio do NIR so constitudos
de fonte de radiao apropriada, monocromador ou Para amostras slidas em p opacas a transmisso da
interfermetro e detector. Cubetas convencionais, fibras radiao infravermelha, o espectro pode ser, tambm,
pticas, clulas de transmisso e acessrios para reflexo adquirido mediante a utilizao de acessrio para
difusa so os acessrios mais comuns para aquisio dos reflexo difusa. Neste acessrio a radiao infravermelha
espectros. incide diretamente na amostra em p. Parte da radiao
absorvida e em seguida refletida de forma difusa em
direo ao detector. Neste caso a amostra na forma de p
IDENTIFICAO POR ESPECTROFOTOMETRIA
misturada com brometo de potssio, aproximadamente,
A identificao de diversas substncias farmacuticas 5% (p/p) e disposta no acessrio de reflexo difusa.
pode ser feita utilizando as regies ultravioleta, visvel,
Por fim, o espectro de amostras slidas em p e pastosas,
infravermelho mdio e infravermelho prximo. De maneira
pode ser obtido utilizando acessrio para reflexo total
geral, a espectrofotometria nas regies UV/VIS requer
atenuada. A amostra na forma de p disposta sob o cristal
solues com concentrao na ordem de 10 mg mL-1 da
de alto ndice de refrao onde entra em contato com a
substncia enquanto que para o MIR e NIR so necessrias
radiao infravermelha no exigindo preparo prvio da
concentraes na ordem de 100 mg mL-1. Apesar de mais
amostra.
5
sensvel os espectros obtidos nas regies do UV/VIS
apresentam menor especificidade quando comparados com
os espectros na regio do MIR. No caso do MIR as medidas UTILIZAO QUANTITATIVA DA ESPECTROFOTO-
realizadas utilizando os modos de reflexo (difusa e total METRIA
atenuada) fornecem informao espectral equivalente
quela obtida pelo modo de transmisso. Quando possvel Espectrofotometria no UV/VIS
deve ser feita a comparao do espectro obtido frente ao
espectro da substncia qumica de referncia. A anlise espectrofotomtrica quantitativa por absoro
tem como princpio a relao direta existente entre a
Ultravioleta (UV) e visvel (VIS) quantidade de luz absorvida e a concentrao da substncia,
tambm conhecida como lei de Beer.
Diversas monografias incluem espectros de absoro no
ultravioleta como prova de identificao. Nestes casos, Quando a concentrao (c) expressa em mol. L-1 e o
haver especificao da extenso da varredura, solvente, caminho ptico (b) em centmetro, a equao torna-se:
concentrao da soluo e espessura da cubeta. Alguns
A=ebc
frmacos requerem o uso de padres de referncia. As
leituras de padro e amostra so efetuadas simultaneamente em que
e em condies idnticas quanto a comprimento de onda,
tamanho de cubeta, etc. A = absorvncia, logaritmo do inverso da transmitncia (A
= - log T)
Para a caracterizao utilizando a espectrofotometria UV/ e = absortividade molar.
VIS, o frmaco dissolvido utilizando solvente apropriado. T = transmitncia
Muitos solventes so apropriados incluindo gua, alcois,
teres e solues cidas e alcalinas diludas. Deve-se Sabendo-se que a transmitncia o quociente entre a
observar para que os solventes no absorvam na regio intensidade da radiao transmitida pela soluo (I0) e a
espectral que est sendo utilizada. intensidade da radiao incidente (I), tem-se:
log10 (I0/I) = A = e b c
Infravermelho mdio (MIR)
A intensidade da absoro da luz ultravioleta por
A espectrofotometria no MIR um ensaio de identificao substncias cromforas , em geral, expressa como
por excelncia sendo capaz de diferenciar substncias com absortividade molar, nas condies de mxima absoro.
diferenas estruturais. Das trs regies do infravermelho Se a massa molar da substncia no for conhecida,
(prximo, mdio e distante) a regio compreendida entre possvel expressar a intensidade de absoro pela equao
4000 a 400 cm-1 (infravermelho mdio) a mais empregada da absortividade especfica A (1%, 1 cm):
para fins de identificao.
A (1%, 1 cm) = A / b c
Os espectros de transmisso de amostras slidas so
obtidos a partir da sua disperso em leo mineral ou em que A(1%, 1 cm) corresponde a absorvncia da soluo
mediante a preparao de pastilhas de haletos de potssio e a 1% (p/v) da substncia quando o caminho ptico 1 cm.
102 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Para evitar possveis desvios na lei de Beer deve-se quando uma amostra contendo analito fora da faixa de
procurar trabalhar com solues diludas (da ordem de trabalho for analisada.
0,01 M), evitando associaes entre as molculas, e com
radiaes monocromticas. A exatido de um mtodo NIR demonstrada pela
correlao dos resultados NIR com os dados da tcnica
de referncia. Alm disso, a exatido pode ser verificada
Espectrofotometria no Infravermelho prximo a partir da proximidade do erro padro de predio (SEP)
com o erro do mtodo de referncia. O erro do mtodo
A quantificao atravs da espectrofotometria no NIR pode
de referncia deve ser conhecido com base nos valores
ser realizada utilizando dados obtidos de um mtodo de
histricos. Diferentes mtodos estatsticos podem ser
referncia ou a partir de um conjunto de calibrao com
utilizados para verificar diferenas estatsticas entre
amostras de composio conhecida. Os espectros podem ser
os resultados obtidos pelo mtodo NIR e o mtodo de
obtidos utilizando os modos de transmisso e reflexo com
referncia.
o auxlio de acessrios adequados. Num primeiro momento
os dados espectrais so tratados atravs de transformaes A preciso de um mtodo NIR expressa a concordncia
matemticas com o objetivo de reduzir fontes de variaes entre uma srie de medidas obtidas sob condies pr-
indesejadas antes da etapa de calibrao. O processo de determinadas. H dois nveis de preciso que podem ser
calibrao consiste na construo de um modelo matemtico considerados: a repetitividade e a preciso intermediria. A
que relaciona a resposta do espectrofotmetro a uma preciso de um mtodo NIR tipicamente expressa como
propriedade da amostra. Existe uma srie de algoritmos coeficiente de variao.
quimiomtricos que podem ser utilizados na calibrao.
Geralmente, estes algoritmos esto disponveis em A robustez do mtodo NIR pode ser verificada atravs
softwares e disponibilizados junto com o espectrofotmetro. de mudanas de parmetros do mtodo como: condies
Os principais algoritmos de calibrao so: regresso linear ambientais, temperatura da amostra, caractersticas da
no pode ser usada diretamente para a determinao da proporcionando maior seletividade de comprimento de
concentrao do analito. Por isso, a determinao feita onda e flexibilidade.
atravs da comparao da intensidade de fluorescncia
obtida para uma soluo amostra com solues padro, Tanto fluormetros como espectrofotmetros de
cujas concentraes so conhecidas. O fundamento fluorescncia permitem emprego de diversas fontes de luz.
da espectrofluorescncia consiste, pois, em excitar a Lmpadas de mercrio ou tungstnio, embora comuns,
substncia com radiao no comprimento de onda de so substitudas com vantagem pela lmpada de arco de
mxima absoro e medir comparativamente a intensidade xennio alta presso, pois esta proporciona, ao contrrio
da luz fluorescente emitida frente a um padro. das demais, espectro contnuo desde o ultravioleta at o
infravermelho. De qualquer forma, a radiao muito
intensa e no deve jamais ser observada com os olhos
DEFINIES desprotegidos, sob risco de leses permanentes.
Intensidade de fluorescncia: Expresso emprica Os monocromadores, por sua vez, dispem de ajuste
da atividade fluorescente, em unidades arbitrrias de largura de fenda. Fendas estreitas propiciam maior
proporcionais resposta do detector. resoluo e menor rudo espectral enquanto fendas largas
asseguram maior intensidade de luz em detrimento destas
Espectro de excitao de fluorescncia: Representao
caractersticas. A largura de fenda a ser adotada funo da
grfica do espectro de ativao, apresentando a intensidade
diferena entre os comprimentos de onda da luz incidente
da radiao emitida por substncia ativada (ordenada) e
e emitida, assim como do nvel de sensibilidade necessrio
o comprimento de onda da radiao incidente excitatria
anlise.
(abcissa).
A cmara de amostra geralmente permite uso de tubos
Espectro de emisso de fluorescncia: Representao
redondos e cubetas quadradas, semelhantes s empregadas
5
grfica da distribuio espectral da radiao emitida por
em espectrofotometria de absoro, salvo pela necessidade
substncia ativada, apresentando a intensidade da radiao
de as quatro paredes verticais serem polidas. Volumes de
emitida como ordenada e o comprimento de onda como
amostra da ordem de 2 a 3 mL so adequados embora alguns
abcissa.
instrumentos possam estar dotados de cubetas pequenas,
com capacidade para 0,1 a 0,3 mL ou ainda de suportes
EQUIPAMENTO para capilares que requerem volumes ainda menores.
A determinao da intensidade de fluorescncia pode ser
efetuada em simples fluormetro de filtro (fluormetro), Calibrao do equipamento
em espectrofotmetros de absoro adaptados ou em
Fluormetros e espectrofluormetros devem ser calibrados
espectrofotmetro de fluorescncia (espectrofluormetro).
com substncias fluorforas, estveis, de modo a assegurar
O fluormetro de filtro compreende fonte de luz, filtro resultados reprodutveis. As variaes so, em geral,
primrio, cmara de amostra, filtro secundrio e sistema de devidas a alteraes na intensidade das lmpadas ou na
deteco. Nos fluormetros deste tipo, o detector encontra- sensibilidade do tubo fotomultiplicador. O fluorforo
se disposto a 90o em relao luz incidente. Tal disposio pode ser a amostra pura da substncia a ser analisada ou
em ngulo reto permite que a luz incidente atravesse a qualquer outra substncia fluorescente de fcil purificao,
soluo da amostra sem interferir com o sinal fluorescente cujos comprimentos de onda de absoro e fluorescncia
captado pelo detector. Tal mecanismo no impede que sejam semelhantes aos da substncia em anlise. Por
parte da luz difusa atinja o detector devido s propriedades exemplo, quinina em cido sulfrico 0,05 M um
difusoras inerentes s solues ou em funo da presena padro adequado para fluorescncia azul. Por outro lado,
de partculas slidas suspensas. Esta disperso residual fluorescena em hidrxido de sdio 0,1 M apropriada para
controlada com emprego de filtros. O filtro primrio fluorescncia verde e rodamina fluorforo de escolha na
seleciona a radiao de comprimento de onda apropriado fluorescncia vermelha. A escala de comprimentos de onda
excitao da amostra enquanto o filtro secundrio seleciona do espectrofotmetro de fluorescncia tambm requer
a radiao fluorescente de comprimento de onda maior, calibrao peridica.
bloqueando o acesso da radiao dispersa ao detector.
PREPARO DAS SOLUES
Em sua maioria, os detectores de fluormetros de filtro so
equipados com vlvulas fotomultiplicadoras, havendo, A escolha do solvente utilizado na preparao de solues
contudo, diferenas entre tipos de equipamentos quanto fluorescentes requer precaues. Natureza, pureza e pH
regio espectral de mxima sensibilidade. Amplificada do solvente so parmetros relevantes na intensidade e
a corrente eltrica gerada no fotomultiplicador, obtm- distribuio espectral da fluorescncia. Em consequncia,
se leitura correspondente em instrumento analgico ou recomendvel ater-se ao volume especificado em mtodos
digital. estabelecidos. Muitas substncias apresentam fluorescncia
em solventes orgnicos, mas so praticamente no
Espectrofotmetros de fluorescncia, por sua vez,
fluorescentes quando dissolvidas em gua. Assim, cabe a
diferenciam-se de fluormetros por no disporem de filtros e
experimentao em diversos solventes para determinar a
sim de monocromadores de prisma ou de grade de difrao,
propriedade fluorescente de uma substncia.
104 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Para fins quantitativos, fundamental que a intensidade Na turbidimetria, tambm conhecida por opacimetria,
da fluorescncia guarde relao linear com a concentrao mede-se a intensidade da luz transmitida no mesmo
da amostra dentro de limites compatveis com a tcnica. sentido de direo da luz incidente. Embora existam
Se a soluo for muito concentrada, parte significativa da turbidmetros, destinados especificamente medida de
luz incidente ser absorvida na periferia da cubeta e menor turbidez, colormetros e espectrofotmetros convencionais
ser a quantidade de radiao a alcanar a regio central. so satisfatrios medida da luz transmitida desde que
Isto significa que a prpria substncia atuar como filtro ajustados para comprimento de onda apropriado.
interno. Todavia, tal fenmeno raro, considerando-se
que a espectrofotometria de fluorescncia uma tcnica de A nefelometria (ou difusimetria), por sua vez, compreende
elevada sensibilidade, permitindo o emprego de solues a medida da intensidade de luz difundida (refletida)
de concentraes da ordem de 10-5 a 10-7 M. pelas partculas em suspenso, em ngulo reto ao feixe
de luz incidente. Mais uma vez, alm de nefelmetros,
Devido aos limites de concentrao usualmente estreitos possvel o emprego de colormetros e espectrofotmetros
nos quais a fluorescncia proporcional concentrao na medida nefelomtrica. Para tanto, cabe modific-los
da substncia, tem-se como regra a obedincia relao de forma a permitir a captao perpendicular ao ngulo
(c-d)/(a-b) = 0,40 a 2,50. Neste caso, a a intensidade de da luz incidente, seja por transferncia da fonte de luz,
fluorescncia da soluo de referncia, b a intensidade seja por alterao de posio do detector. Fluormetros,
do branco correspondente, c a intensidade da soluo- a exemplo de nefelmetros, destinam-se medida de luz
amostra e d a intensidade do branco correspondente. dispersa (posicionamento do detector em ngulo de 90 em
relao luz incidente) sendo, portanto, compatveis com
As determinaes de fluorescncia so sensveis a nefelometria.
presena de partculas slidas nas solues. Tais impurezas
reduzem a intensidade do feixe incidente, produzindo
falsas leituras elevadas devido a reflexes mltiplas na Turbidncia
- gelatina, goma arbica ou amido - ao meio lquido da plstico. Os tamanhos variam conforme a seguir: 20 cm x
suspenso. 20 cm; 10 cm x 20 cm; 10 cm x 10 cm; 5 cm x 10 cm.
O procedimento bsico para o emprego de tcnicas Slica o adsorvente mais amplamente utilizado
turbidimtricas ou nefelomtricas obedece aos princpios na CCD. um adsorvente amorfo, poroso. usado
das tcnicas espectrofotomtricas, compreendendo a tambm na cromatografia em coluna, entretanto a slica
preparao das solues de referncia com suspenses utilizada em CCD mais fina. A slica preparada por
de concentrao conhecida, Na prtica, permissvel espontnea polimerizao e desidratao do cido silcico.
a plotagem contra valores de transmitncia em vez de As substncias so adsorvidas pela slica via ponte de
turbidncia. hidrognio e interao dipolo-dipolo. Uma slica de
condio satisfatria aquela com 11 a 12% de gua
As etapas do procedimento compreendem, em resumo: em peso. Um nvel de 11 a 12% de umidade alcanado
(1) ajustar o instrumento no comprimento de onda quando a slica est em equilbrio com o ar, a uma umidade
especificado na monografia (para colormetros, na falta relativa de 50% e uma temperatura de 20 C.
de especificao, empregar filtro que fornea luz na
faixa azul); (2) preencher a cubeta com a suspenso mais As slicas comerciais possuem tamanhos de poros variveis
concentrada e ajustar a leitura de transmitncia para 100% entre 40 a 150 ngstrons. Os tamanhos de partculas variam
(transmitncia oferece mais linearidade que absorvncia); de 5 a 40 m, com mdia de 10 a 15 m, dependendo do
(3) medir a transmitncia das demais suspenses-padro fabricante.
e traar reta de calibrao (com emprego do mtodo dos
mnimos quadrados) e (4) medir a transmitncia da amostra Reduzindo o tamanho da partcula, aumenta-se a eficincia
5
determinando sua concentrao pela reta de calibrao. da slica. Partculas de tamanho de 5 a 6 m so utilizadas
para preparar CCDAE (Cromatografia em camada delgada
de alta eficincia). Os tamanhos de poros afetam a
Comparao visual seletividade e, portanto, podem ser utilizados para as taxas
de migrao e resoluo dos componentes das amostras.
Medidas de turbidez podem ser executadas por comparao
visual, tcnica pela qual a suspenso de amostra Os tamanhos de poros de slica mais comuns
confrontada com suspenso ou suspenses-padro. Para comercialmente so 40, 60, 80 e 100 ngstrons. Sendo a
tanto, empregar tubos de ensaio idnticos, de fundo plano slica 60 ngstrons, a mais verstil e amplamente utilizada.
com 70 mL de capacidade e cerca de 23 mm de dimetro As slicas so utilizadas para a separao de compostos
interno. Os tubos devem ser comparados horizontalmente lipoflicos como aldedos, cetonas, fenis, cidos graxos,
sobre fundo escuro, com incidncia de luz lateral. aminocidos, alcaloides, terpenides e esteroides, usando
o mecanismo de adsoro.
Celulose - A celulose um polissacardeo altamente hidroflico da fase lquida pelas fibras de papel, que pode
polimerizado por monmeros de celobiose. A presena de ser considerado como fase estacionria, um mecanismo
grande nmero de grupos hidroxila livre permite a ligao de partio pode contribuir significativamente para a
de hidrognio com lquidos de baixo peso molecular separao.
como gua e lcoois. Celulose , portanto, adequada
para a separao de substncias hidroflicas, tais como O cromatograma desenvolvido pela passagem lenta da
carboidratos e aminocidos. fase mvel sobre a camada. O desenvolvimento pode ser
ascendente, no caso de solvente carreado para cima atravs
Poliamida - Em contraste com a celulose, a poliamida de foras capilares, ou descendente, no caso em que o fluxo
uma resina sinttica. Dois tipos de poliamida so do solvente auxiliado por fora da gravidade.
utilizadas: poliamida 6 e poliamida 11. A poliamida 6
vem da aminopolicaprolactama, enquanto a poliamida A forma mais simples da cromatografia em papel a
11 preparada a partir do cido poliaminoundecanico. cromatografia ascendente que utiliza uma tira de papel
Poliamidas so utilizadas para a separao de compostos de comprimento e largura variveis, em funo da cuba
polares que so capazes de interagir com o grupo cromatogrfica a ser utilizada.
amida por ligaes de hidrognio devido sua estrutura Este mtodo muito til para separar substncias
molecular. Dentre elas esto aminocidos e derivados, muito polares, como acares e aminocidos. Possui
benzodiazepnicos, cidos carboxlicos, ciclodextrinas, o inconveniente de se poder aplicar pouca quantidade
cidos graxos, flavonoides, conservantes, praguicidas. de substncia de cada vez. Deve-se procurar trabalhar
Silicato de magnsio - ideal para separao de acares, nas condies mais prximas possveis, de qualidade e
antraquinonas, flavonas, glicosdeos, esteroides, lipdeos, quantidade, entre padro e amostra, usando-se o mesmo
resduos de praguicidas, vitaminas, carbazis, acetato de papel, fase mvel, temperatura, etc.
hidrocortisona.
A posio final de cada mancha designada pelo Rf. Aps Para cromatografia descendente, utilizar cuba com tampa
a revelao da cromatoplaca, mede-se a distncia atingida provida de orifcio central, fechado por rolha de vidro ou
por cada mancha a partir da origem. Essa distncia uma outro mateiral inerte. Na parte superior da cuba, h uma
frao da distncia total percorrida pelo solvente na fase cubeta suspensa, que contm dispositivo para prender o
estacionria. papel (geralmente haste ou basto de vidro). De cada lado
da cubeta h guias de vidro, que sustentam o papel, de
Rf = (distncia atingida pela mancha a partir da origem) / modo a no tocar nas paredes da cuba cromatogrfica. A
(distncia percorrida pelo solvente desde a origem) largura do papel cromatogrfico no pode ser superior da
cubeta suspensa e a altura deve ser aproximadamente igual
5.2.17.2 CROMATOGRAFIA EM PAPEL altura da cmara cromatogrfica.
eluente, deixando que ascenda ou descenda pela superfcie produzir uma largura entre 6 a 10 mm sobre a linha
do papel, apenas por capilaridade. traada com lpis. Dependendo da largura do papel, pode-
se colocar apenas uma alquota do padro ou da amostra,
Quando a tcnica utilizada for a de cromatografia centralizando-se esta aplicao na linha de partida. No
ascendente, traar linha fina com lpis a 3 cm da borda caso da possibilidade de colocar-se mais de uma alquota
inferior do papel; se a cromatografia descendente, traar no ponto de partida, deixa-se 2 cm de distncia das bordas
linha distncia, tal que a mesma fique poucos centmetros laterais e um intervalo entre os pontos de aplicao de 3
abaixo da vareta que prende o papel na cubeta do eluente. cm. Se cada mancha produzida for maior que 6 a 10 mm,
Deve-se marcar tambm a linha de chegada da fase mvel aplicar a amostra em pores, deixando-se evaporar o
(ou frente do solvente), geralmente distando 10 cm do solvente antes de aplicar a poro seguinte.
ponto de partida.
O nvel da fase mvel deve ficar abaixo do ponto de partida
Aplicar as solues na forma de manchas circulares da substncia, devendo, sempre, haver uma boa vedao da
(utilizam-se tubos capilares ou micropipetas), contendo cuba cromatogrfica para que no se perca o vapor desta
de 1 a 20 g da amostra, sendo que cada mancha deve fase. No final da corrida, esperar secar o papel e submet-lo
a algum processo de revelao.
___________
FM: Fase Mvel; PP: Ponto de Partida; LC: Linha de Chegada; dr1 e dr2: distncias percorridas pelas substncias; dm: distncia de migrao da fase mvel
5
veia. A veia da haste substancialmente menor que o suporte slido mais utilizado consiste em terra silicosa
dimetro da coluna e possui, no mnimo, 5 cm a mais em cromatogrfica cujo tamanho de partcula satisfatrio
relao ao efetivo comprimento da coluna. A rolha tem um para a vazo apropriada do eluente. Na cromatografia de
dimetro menor em aproximadamente 1 mm em relao ao partio de fase reversa, a fase adsorvida fixa menos
dimetro interno da coluna. polar do que a fase mvel, e o adsorvente slido, torna-
se apolar por tratamento com um agente silanizante (ex.:
PROCEDIMENTO diclorodimetilsilano; parafinas), para produzir uma areia
cromatogrfica silanizada.
Suporte slido Utilizar areia de slica purificada. Para do pH no qual dever ocorrer a troca inica e da natureza
fase reversa de cromatografia de partio, utilizar areia de dos ons (nions ou ctions) a serem trocados. As resinas
slica cromatogrfica. fortemente cidas e fortemente bsicas so convenientes para
a maioria das aplicaes analticas. Emprega-se, na prtica,
Fase estacionria Utilizar o solvente ou soluo grande excesso (200 - 300%) de resina sobre a quantidade da
especificada na monografia individual. Se for utilizada uma amostra estequiometricamente calculada; a capacidade das
mistura de lquidos na fase estacionria, misturar antes de resinas varia de 2 a 5 mM/g (peso seco).
introduzir o suporte slido.
Tratamento da resina e preparo da coluna - Suspender a
Fase mvel Utilizar o solvente ou soluo especificados resina de troca inica em gua e deixar em repouso por
na monografia individual. Equilibrar com gua, se a fase 24 horas. Introduzi-la em coluna adequada e, tratando-se
estacionria for uma soluo aquosa; se a fase estacionria de resina aninica, convert-la em bsica passando atravs
for um fluido polar orgnico, equilibrar com este fluido. da coluna, soluo de hidrxido de sdio SR, velocidade
de 3 mL/ min., at que o eluato fornea reao negativa
Preparao de uma Coluna Cromatogrfica O tubo
para cloreto. Passar, em seguida, gua isenta de dixido
cromatogrfico mede cerca de 22 mm de dimetro interno
de carbono. Em caso de resina catinica, a converso para
e de 200 a 300 mm de comprimento, sem disco de vidro
a forma cida se d pela passagem de cido clordrico SR
poroso, no qual acoplado um tubo de distribuio,
atravs da coluna, seguida de lavagem com gua isenta de
sem torneira, com cerca de 4 mm de dimetro interno e
dixido de carbono at que o eluato fornea reao neutra.
aproximadamente 50 mm de comprimento. Introduzir um
tampo delgado de l de vidro na base do tubo. Adicionar Desenvolve-se coluna de troca inica de maneira anloga
a quantidade especificada de suporte slido em um descrita para cromatografia de adsoro. Terminada a
bquer (proveta) de 100-250 mL e misturar at produzir operao, regenera-se a resina lavando-a com hidrxido
uma pasta homognea. Transferir a mistura para o tubo de sdio SR (colunas aninicas) ou com cido clordrico
cromatogrfico, tampar, pressionando-o levemente, at
obter uma massa uniforme. Se a quantidade de suporte
slido especificada for mais de 3 g, transferir a mistura para
SR (colunas catinicas) e, em seguida, com gua isenta de
dixido de carbono at que fornea reao neutra. 5
a coluna em pores de aproximadamente 2 g, tampando
cada poro. Se o ensaio ou teste requisitar uma coluna 5.2.17.4 Cromatografia a lquido
multissegmentada, com uma fase estacionria diferente de alta eficincia
para cada segmento, tampar aps a adio de cada
segmento, e adicionar cada segmento seguinte diretamente
A cromatografia a lquido de alta eficincia (CLAE) uma
ao anterior. Se uma soluo do analito for incorporada na
tcnica de separao fundamentada na distribuio dos
fase estacionria, completar a transferncia quantitativa
componentes de uma mistura entre duas fases imiscveis,
para o tubo cromatogrfico atravs da lavagem do bquer
a fase mvel, lquida, e a fase estacionria slida, contida
utilizado para a preparao da mistura de ensaio com uma
em uma coluna cilndrica. As separaes so alcanadas
mistura de aproximadamente 1 g de suporte slido e vrias
por partio, adsoro, troca inica, excluso por tamanho
gotas do solvente utilizado para preparar a soluo de
ou interaes estereoqumicas, dependendo do tipo de fase
ensaio. Introduza um tampo delgado de l de vidro em
estacionria utilizada. A CLAE apresenta vantagens sobre
cima da coluna de enchimento completa. A fase mvel flui
a cromatografia a gs para as anlises de combinaes
atravs de uma coluna adequadamente preenchida como
orgnicas. Amostras no volteis e termolbeis so,
uma corrente moderada ou, se for utilizada a cromatografia
preferencialmente, analisadas por CLAE. A maioria das
de fase reversa, lentamente, gota a gota.
anlises farmacuticas est baseada no mtodo de separao
Transferir a fase mvel para o espao da coluna sobre por partio e devem ocorrer em tempo curto de anlise.
a coluna de preenchimento, e deixe-a fluir atravs da Vrios fatores qumicos e fsico-qumicos influenciam na
coluna sob ao da gravidade. Umedecer a ponta da separao cromatogrfica, os quais dependem da natureza
coluna cromatogrfica com cerca de 1 mL da fase mvel qumica das substncias a serem separadas, da composio
antes de cada mudana de composio da fase mvel e vazo da fase mvel, da composio e rea superficial da
e aps completar a eluio. Se o analito for introduzido fase estacionria.
na coluna como uma soluo da fase mvel, deixe-o
passar completamente pela coluna de preenchimento, APARELHAGEM
ento adicione a fase mvel em vrias pores menores,
permitindo que cada uma seja completamente removida O equipamento utilizado consiste em um reservatrio
antes de adicionar a fase mvel estocada. que contm a fase mvel, uma bomba com a finalidade
de impelir a fase mvel pelo sistema cromatogrfico, um
injetor para introduzir a amostra no sistema, uma coluna
Cromatografia em coluna por troca inica
cromatogrfica, um detector e um dispositivo de captura
Utilizar como fase estacionria resina de troca inica. A de dados, como um software, integrador ou registrador.
troca de ons consiste em intercmbio reversvel de ons Alm de receber e enviar informaes para o detector,
presentes na soluo com ons do polmero resinoso (celulose softwares so utilizados para controlar todo o sistema
modificada ou suporte de slica-gel). A escolha da resina, forte cromatogrfico, proporcionando maior operacionalidade e
ou fraca, aninica ou catinica, depender em grande parte logstica de anlise.
110 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Aps dissolver a amostra na fase mvel ou em outro Os detectores mais frequentemente utilizados em
solvente adequado, a soluo injetada no sistema cromatografia a lquido de alta eficincia so os
cromatogrfico, de forma manual, utilizando seringa espectrofotomtricos (UV/Vis). Os detectores
apropriada, ou por meio de um injetor ou amostrador espectrofotomtricos so utilizados para detectar
automtico. Este consiste em um carrossel ou bandeja, compostos com grupamento cromforo. Tais detectores
capaz de acomodar diversos frascos contendo as amostras. consistem de uma clula de fluxo localizada no trmino
Alguns amostradores automticos podem ser programados da coluna cromatogrfica. A radiao ultravioleta
para injetar diferentes volumes de amostra, diversas atravessa, constantemente, pela clula de fluxo e
quantidades de injees, controlar o intervalo entre recebida no detector. Com o sistema em funcionamento,
injees e outras variveis operacionais. as substncias so eludas da coluna, passam pela clula de
detector e absorvem a radiao, resultando em alteraes
Quando se trabalha a altas presses, uma vlvula de mensurveis no nvel de energia. Esses detectores podem
injeo essencial. Essa apresenta um sistema calibrado,
5
apresentar comprimento de onda fixo, varivel ou mltiplo.
com volume definido, denominado anel de injeo ou ala Detectores de comprimento de onda fixo operam em um
de amostragem, que ser preenchido com a soluo a ser nico valor, tipicamente 254 nm, emitido por uma lmpada
analisada e, posteriormente, transferida coluna. de mercrio de baixa presso. Aqueles com comprimento
de onda varivel contm uma fonte contnua de emisso,
Para a maioria das anlises farmacuticas, a separao
como uma lmpada de deutrio ou xennio de alta presso,
alcanada por partio dos componentes, presentes na
e um monocromador ou um filtro de interferncia, de modo
soluo a ser analisada, entre as fases mvel e estacionria.
a gerar radiao monocromtica a um valor selecionado
Sistemas que consistem de fases estacionrias polares e
pelo operador, podendo, ainda, ser programados para
fases mveis apolares so definidos como cromatografia
alterar o comprimento de onda durante o desenvolvimento
em fase normal, enquanto o oposto, fases mveis
da anlise. Os detectores de comprimento de onda mltiplo
polares e fases estacionrias apolares, so denominados
medem, simultaneamente, a absorvncia em dois ou mais
de cromatografia em fase reversa. A afinidade de uma
comprimentos de onda, sendo denominados de detectores
substncia pela fase estacionria e, consequentemente, seu
de arranjo de diodos (DAD). Nestes, a radiao ultravioleta
tempo de reteno na coluna, controlado pela polaridade
transmitida atravs da clula de fluxo, absorvida pela
da fase mvel.
amostra e ento separada em seus componentes originais,
As fases estacionrias utilizadas em cromatografia em fase que so detectados, individualmente, pelo detector de
reversa consistem, tipicamente, de uma molcula orgnica fotodiodos, registrando dados de absorvncia em toda a
quimicamente ligada s partculas de slica ou outros faixa do espectro do ultravioleta e visvel e, adicionalmente,
suportes, como grafita porosa. O dimetro das partculas os espectros de cada pico registrado no cromatograma.
de, normalmente, 3 m a 10 m. Quanto menores o dimetro
Os detectores de ndice de refrao medem a diferena
da partcula e a pelcula que recobre o suporte, mais rpida
entre o ndice de refrao da fase mvel pura e da fase
e eficiente ser a transferncia das substncias entre as fases
mvel contendo a substncia a ser analisada. So utilizados
estacionrias e mveis. A polaridade da coluna depende
para detectar substncias que no absorvem no ultravioleta
dos grupos funcionais presentes, sendo os mais comuns
ou visvel, entretanto so menos sensveis que os detectores
os grupos apolares octil, octadecil, fenil, cianopropil e
espectrofotomtricos. Os detectores de ndice de refrao
polar, nitrila. A proporo de grupos silanis no ligados
apresentam a desvantagem de serem sensveis a pequenas
ao grupo funcional influencia, significativamente, na
mudanas da composio dos solventes da fase mvel,
eficincia da separao cromatogrfica e no formato do
taxa de fluxo e temperatura.
pico eludo. Comercialmente, esto disponveis colunas
cromatogrficas com diferentes qualidades de fases Os detectores fluorimtricos so utilizados para detectar
estacionrias, inclusive aquelas com pequena proporo de compostos com grupamento fluorforo ou que podem ser
grupos silanis livres, denominadas capeadas. Geralmente, convertidos em derivados fluorescentes, por transformao
colunas de slica em fase reversa apresentam vida til qumica ou adicionando reagentes fluorescentes a grupos
na faixa de pH de 2 a 8, entretanto, colunas contendo funcionais especficos. Se a reao qumica requerida,
grafita porosa ou materiais polimricos, como o estireno- pode-se realiz-la no momento da preparao da amostra
divinilbenzeno, so estveis em uma faixa mais ampla ou, alternativamente, o reagente pode ser introduzido na
de pH. De forma menos comum, podem ser utilizados fase mvel, com a reao ocorrendo antes da deteco.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 111
tempos de reteno. Os termos h, h/2 e Wh/2 correspondem altura, meia altura e largura a meia altura, respectivamente,
e W representa a largura do pico na linha de base, pelo mtodo da triangulao. O sinal relativo ao tempo morto, t0, refere-
se a uma substncia no retida na coluna cromatogrfica.
5
Figura 2 Cromatograma representando a assimetria do pico.
ADEQUABILIDADE DO SISTEMA
mecanismo de interao com a fase estacionria a troca Fase mvel: preparar a fase mvel de acordo com as
inica, onde as colunas utilizadas so constitudas por especificaes recomendadas pelo fabricante da coluna
um grupo funcional carregado, geralmente SO3-, COO-, de troca aninica utilizada. Recomenda-se a utilizao
NH3+, NR3+ ligado a uma matriz polimrica, como slica de fase mvel composta por uma mistura de carbonato
ou copolmero do tipo poliestireno-divinilbenzeno. A e bicarbonato de sdio (Na2CO3/NaHCO3), na faixa de
fase mvel tambm contm espcies inicas ocorrendo, concentrao de 1,0 a 4 mmol/L, dependendo da coluna
desta forma, uma competio entre a distribuio das utilizada. Utilizar a vazo da fase mvel recomendada
espcies presentes na amostra entre a fase mvel e a pelo fabricante do equipamento e de acordo com a coluna
fase estacionria. Para cada on, o processo de troca de troca inica utilizada. Durante as anlises utilizando
caracterizado pelo equilbrio de distribuio entre a fase a deteco por condutividade, regenerar a coluna de
mvel e a fase estacionria. supresso qumica, conforme recomendao do fabricante.
Recomenda-se a utilizao de H2SO4 0,005 mol/L e
Os trocadores utilizados podem ser classificados em fortes, posterior lavagem com gua purificada.
mdios e fracos, dependendo do grupo funcional ligado
matriz polimrica. Os trocadores inicos fortes so aqueles Calibrao: preparar ao menos quatro solues de
que se ionizam completamente em uma ampla faixa de referncia do elemento a ser determinado, abrangendo
pH, como grupo sulfnico e amnio quaternrio. O grau a faixa de concentrao recomendada pelo fabricante
de dissociao dos trocadores inicos fracos e mdios do equipamento para o analito em anlise e injetar,
dependente do pH e, desta forma, a capacidade destes separadamente, cada soluo de referncia no equipamento,
trocadores varia em funo do pH. Pode-se citar como utilizando ala de amostragem adequada. Recomenda-se o
exemplo, o grupo carboxlico e poliamina. uso de ala de amostragem de 20 a 100 L. Registrar os
cromatogramas e integrar os sinais em rea ou em altura
Esta tcnica permite que a condutividade eltrica seja de pico. Aps a calibrao, traar a curva de calibrao.
usada para a deteco e determinao quantitativa dos ons
5
Preparar a soluo da amostra conforme indicado na
em soluo, aps a separao. Geralmente, a cromatografia monografia, ajustando sua concentrao para que esta fique
de ons com coluna de troca aninica e detector por situada dentro da faixa de concentrao das solues de
condutividade pode ser utilizada para a determinao dos referncia. Injetar a amostra no cromatgrafo, registrar a
ons F-, Cl-, Br-, SO42-, PO43-, I-, entre outros. Em virtude leitura e repetir esta sequncia trs vezes, adotando a mdia
da condutividade eltrica ser uma propriedade comum das trs leituras. Determinar a concentrao do elemento
a todas as espcies inicas em soluo, o detector por pela curva de calibrao. Caso seja feita a determinao
condutividade tem a capacidade de monitorar todas as simultnea de vrios nions, podem ser feitas solues de
espcies inicas. O problema que ocorre na utilizao da referncia contendo todos os analitos.
condutividade eltrica para quantificar as espcies inicas
eludas pode ser causado pela alta condutividade dos ons
presentes na fase mvel, principalmente devido ao on 5.2.17.5 CROMATOGRAFIA A GS
sdio, impossibilitando a quantificao de outros ons.
Este problema superado com o uso de um supressor do Cromatografia a gs (CG) uma tcnica de separao
eluente, posicionado aps a coluna de separao, onde cromatogrfica baseada na diferena de distribuio de
ocorre a converso dos ons do eluente em espcies que espcies de uma mistura entre duas fases no miscveis,
contribuam para uma condutncia baixa ou nula. O cido na qual a fase mvel um gs de arraste que se move
carbnico, resultante da troca catinica, fracamente atravs da fase estacionria contida em uma coluna. CG
dissociado, possuindo uma baixa condutividade (sinal de est baseada no mecanismo de adsoro, distribuio de
condutividade da linha base menos significativo). Desta massa ou excluso por tamanho. aplicada a substncias
forma, a sensibilidade, para a determinao de nions, e seus derivados que se volatilizam sob as temperaturas
pode ser aumentada significativamente, em um fator de 10 empregadas, e utilizada para identificao, teste de
vezes ou superior, quando so utilizados supressores. pureza e determinao quantitativa.
Um equipamento de cromatografia de ons consiste, Quando um constituinte vaporizado conduzido pelo gs
basicamente, no mesmo sistema utilizado para CLAE. de arraste para dentro da coluna, ele particionado entre a
Este sistema consiste de uma bomba de alta propulso, fase mvel gasosa e a fase estacionria por um processo de
uma vlvula de injeo com ala de amostragem adequada, distribuio contracorrente dinmico, apresentando uma
coluna de separao (para a separao de nions deve ser reteno maior ou menor devido a fenmenos de soro e
utilizada uma coluna de troca aninica), uma ps-coluna, dessoro sobre a fase estacionria.
caso necessrio, para converso dos ons do eluente em
espcies com menor condutividade e um detector de
condutividade. EQUIPAMENTO
O injetor, a coluna e o detector apresentam temperatura concentrao, por onde as substncias volteis da soluo
controlada. A cromatografia se realiza a temperatura so arrastadas at uma coluna adsorvente, mantida a baixa
constante ou utilizando um programa de temperatura temperatura onde so adsorvidas. As substncias retidas
adequado. Os compostos a serem cromatografados, tanto so ento dessorvidas em uma fase mvel por aquecimento
em soluo como gases, so injetados, entrando em contato rpido da coluna adsorvente.
com o gs de arraste na cmara de injeo. Dependendo
da configurao do equipamento, a mistura a ser analisada Sistema de injeo em espao confinado (headspace)
deve ser injetada diretamente na coluna ou deve ser dinmico inclui uma cmara de aquecimento das amostras,
vaporizada na cmara de injeo e misturada no gs de termostaticamente controlada, na qual se colocam frascos
arraste antes de entrar na coluna. (vials) fechados onde amostras slidas ou lquidas so
colocadas por um perodo de tempo determinado, para
Uma vez na coluna, os constituintes da mistura so permitir que os componentes volteis das amostras atinjam
separados em funo de seus diferentes ndices de reteno o equilbrio entre a fase no gasosa e a fase de vapor.
linear, os quais so dependentes da presso de vapor e Depois de estabelecido o equilbrio, uma quantidade pr-
do grau de interao com a fase estacionria. O ndice determinada do espao confinado do frasco injetada no
de reteno, que define a resoluo, o tempo de reteno cromatgrafo.
e a eficincia da coluna em relao aos componentes da
mistura, tambm temperatura-dependente. O uso de
Fases estacionrias
programas de temperatura para o forno onde est a coluna
apresenta uma vantagem na eficincia de separao dos As fases estacionrias esto contidas em colunas que
compostos que se comportam diferentemente na presso podem ser:
de vapor.
Uma coluna capilar de slica fundida cuja
Os compostos saem separados da coluna, passando por
5
parede est revestida com a fase estacionria;
um detector, que responde a quantidade de cada composto Uma coluna empacotada com partculas inertes
presente. O tipo de detector a ser utilizado depende da impregnadas com a fase estacionria;
natureza dos compostos a serem analisados e especificado
em cada monografia. Os detectores so aquecidos para Uma coluna empacotada com a fase estacionria slida.
evitar a condensao dos compostos eludos. A sada do As colunas capilares, usualmente feitas de slica fundida,
detector dada em funo do tempo de reteno, gerando apresentam um dimetro interno ( ) de 0,10 a 0,53 mm e
um cromatograma, que consiste de uma srie de picos um comprimento de 5 a 60 m. A fase lquida ou estacionria
no eixo do tempo. Cada pico representa um composto que pode estar quimicamente ligada superfcie interna,
da mistura vaporizada, embora alguns picos possam sair um filme de 0,1 a 5,0 m de espessura, embora fases
sobrepostos. O tempo de eluio caracterstico de um estacionrias no polares possam atingir 5 m de espessura.
composto individual e a resposta do instrumento, medido
As colunas empacotadas, de vidro ou metlicas, apresentam
como a rea do pico ou a altura do pico, em funo da
comprimento de 1a 3 m com um dimetro interno ( ) de
quantidade presente.
2 a 4 mm. As fases estacionrias consistem, geralmente,
em polmeros porosos ou suportes slidos impregnados
Injetores com a fase lquida chegando a, aproximadamente, 5%
(p/p). Colunas de alta capacidade, com a fase lquida
Injees diretas de solues o modo usual de injeo, a chegando a, aproximadamente, 20% (p/p), so utilizadas
menos que seja indicado diferentemente na monografia. A para uma ampla faixa de compostos e para determinao
injeo pode se realizar diretamente na cabea da coluna de compostos com baixo peso molecular como a gua.
utilizando uma seringa ou uma vlvula de injeo, ou em A capacidade requerida influencia a escolha do suporte
uma cmara de vaporizao que pode estar equipada com slido.
um divisor de fluxo. A quantidade de amostra que pode
ser injetada em uma coluna capilar sem saturara menor Os suportes para anlise de compostos polares em
quando comparada quantidade que pode ser injetada colunas empacotadas com uma fase estacionria de baixa
em colunas empacotadas. Colunas capilares, portanto, polaridade e baixa capacidade devem ser inertes para evitar
frequentemente so utilizadas com injetores capazes de um excessivo prolongamento dos picos. A reatividade dos
dividir a amostra em duas fraes (modo split), uma menor materiais de suporte pode ser reduzida por silanizao
que entra na coluna e outra maior que descartada. Esses antes do preenchimento com a fase lquida. Geralmente se
injetores podem ser utilizados sem divisor de amostra utiliza terra de diatomceas lavadas com cido e calcinadas.
(modo splitless) para anlises de componentes em menor Os materiais esto disponveis em diversos tamanhos de
quantidade ou em traos. partcula, sendo as partculas mais comumente utilizadas
de 150 a 180 m (80 a 100 mesh) e de 125 a 150 m (100
As injees da fase de vapor podem ser efetuadas por a 120 mesh).
sistema de injeo em espao confinado (headspace)
esttico ou dinmico.
Fases mveis
Sistema de injeo em espao confinado (headspace)
esttico (purge e trap) inclui um dispositivo de O suprimento do gs de arraste pode ser obtido a partir
de um cilindro de alta presso ou por um gerador de gs
116 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
de alta pureza. Em ambos os casos, o gs passa por uma fluxo de referncia do gs de arraste sem analito medido.
vlvula de reduo de presso e o fluxo medido para, Em geral, detectores por condutividade trmica respondem
ento, entrar na cmara de injeo e na coluna. O tempo uniformemente a compostos volteis sem considerar sua
de reteno e a eficincia do pico dependem da qualidade estrutura; entretanto, so considerados menos sensveis
do gs de arraste; o tempo de reteno diretamente que o detector por ionizao de chama.
proporcional ao comprimento da coluna e a resoluo
proporcional raiz quadrada do comprimento da coluna. Detectores por ionizao de chama alcalina, tambm
Para colunas empacotadas, a mdia de fluxo do gs chamado NP ou detector nitrognio-fsforo, contm uma
carreador usualmente expressa em mililitros por minuto, fonte terminica, com um sal metal-lcali ou um elemento
presso atmosfrica e temperatura ambiente. O fluxo de vidro contendo rubdio ou outro metal, que resulta numa
mdio medido na sada do detector, ou com um dispositivo eficiente ionizao de nitrognio orgnico e compostos
mecnico calibrado ou com um tubo de borbulhamento, contendo fsforo. um detector seletivo que apresenta
enquanto a coluna est com temperatura de funcionamento. baixa resposta para hidrocarbonetos.
A velocidade linear do gs de arraste atravs da coluna Detectores por captura de eltrons contm uma fonte
empacotada inversamente proporcional raiz quadrada radioativa de radiao ionizante. Exibem uma resposta
do dimetro interno da coluna para um dado volume de extremamente alta a compostos halogenados e grupo nitro,
fluxo. Fluxos de 60 mL/min em uma coluna de 2 mm de mas pouca resposta a hidrocarbonetos. A sensibilidade
dimetro interno e 15 mL/min em uma coluna de 2 mm aumenta com o nmero e o peso atmico de tomos de
de dimetro interno, proporcionam velocidades lineares halognio.
idnticas e, com isso, tempos de reteno similares. A
menos que especificado na monografia, a mdia de fluxo
para colunas empacotadas de, aproximadamente, 30 a Dispositivos para tratamento de dados
60 mL/min. Para colunas capilares, a velocidade do fluxo
5
Estaes de tratamento de dados conectadas na sada dos
linear usualmente utilizada ao invs da mdia de fluxo.
detectores calculam a rea e a altura dos picos, e apresentam
Isto determinado a partir do comprimento da coluna e
os cromatogramas completos contendo os parmetros da
do tempo de reteno de uma amostra de metano diluda,
corrida e os dados dos picos. Os dados dos cromatogramas
utilizando um detector por ionizao de chama. Operando
podem ser armazenados e reprocessados por integrao
a altas temperaturas, existe presso de vapor suficiente para
eletrnica ou outro tipo de clculo que seja necessrio.
que ocorra uma gradual perda da fase lquida, um processo
Essas estaes de tratamento de dados so utilizadas
chamado sangramento.
tambm para programar as corridas cromatogrficas.
Hlio ou nitrognio so, geralmente, empregados como
gases de arraste para colunas empacotadas, enquanto que PROCEDIMENTO
os gases de arraste utilizados para colunas capilares so
nitrognio, hlio e hidrognio. Colunas empacotadas e capilares devem ser condicionados
antes do uso at que a linha de base esteja estvel. Isso
deve ser realizado operando a uma temperatura acima da
Detectores
especificada pelo mtodo ou por repetidas injees do
Detectores por ionizao de chama so os mais utilizados composto ou da mistura a ser cromatografada. O fabricante
mas, dependendo da finalidade da anlise, outros detectores da coluna geralmente fornece instrues para o adequado
podem ser empregados, incluindo: condutividade trmica, procedimento de condicionamento da coluna. Em caso de
captura de eltrons, nitrognio-fsforo, espectrometria de polisiloxanos metil e fenil substitudos termicamente estveis,
massas, espectrometria no infravermelho com transformada uma sequncia especial aumenta a eficincia e a inatividade:
de Fourier, entre outros. Para anlises quantitativas, os manter a coluna temperatura de 250 C por 1 hora, com
detectores devem apresentar uma ampla variao dinmica fluxo de gs hlio, para remover o oxignio e solvente. Para o
linear: a resposta deve ser diretamente proporcional fluxo de hlio, aquecer at 340 C por 4 horas, e ento reduzir
quantidade de composto presente no detector em uma o aquecimento at temperatura de 250 C, e condicionar com
ampla faixa de concentraes. Detectores por ionizao de fluxo de hlio at a estabilidade da linha de base.
chama apresentam uma ampla faixa linear e so sensveis
Aps o procedimento de condicionamento, equilibrar a
maioria dos compostos. A resposta dos detectores depende
coluna, o injetor e o detector s temperaturas e fluxo dos
da estrutura e da concentrao do composto e da mdia de
gases especificados na monografia at a obteno de uma
fluxo da combusto, do ar e do gs de arraste. A menos que
linha de base estvel. Preparar a(s) soluo(es) amostra
especificado diferentemente na monografia, detectores por
e de referncia como descrito. As solues devem estar
ionizao de chama operam tanto com hlio quanto com
isentas de partculas slidas.
nitrognio como gs de arraste para colunas empacotadas,
e com hlio ou hidrognio para colunas capilares. Muitos frmacos so molculas polares reativas. Nesse
caso, pode ser necessria a converso destes a derivados
Os detectores por condutividade trmica empregam fio de
menos polares e mais volteis, por tratamento dos grupos
metal aquecido localizado na corrente do gs de arraste.
reativos com reagentes apropriados.
Quando um analito entra no detector com o gs de arraste,
a diferena na condutividade trmica da corrente de gs Os ensaios requerem comparao quantitativa de um
de arraste (gs e componentes da amostra) relativo a um cromatograma com outro. A maior fonte de erro a
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 117
5
determinao de compostos volteis presentes em amostras nas condies descritas.
slidas e lquidas. Este mtodo est baseado na anlise de Calcular a equao da reta por regresso linear, utilizando
uma fase de vapor em equilbrio com uma fase slida ou o mtodo dos mnimos quadrados e, a partir dela, obter a
lquida. concentrao da substncia em exame na preparao da
amostra, indicada pelo intercepto da equao.
EQUIPAMENTO
id = il + ir
A corrente de conveco, por sua vez, eliminada pela no Assim, se durante um ensaio em particular todos os
agitao da soluo. parmetros - exceo da concentrao da espcie
eletroativa - forem mantidos constantes, a equao de
Finalmente, o segmento D do polarograma, no qual Ilkovic pode ser escrita como
ocorre reverso da proporcionalidade tenso-corrente,
corresponde reduo de outras espcies eletroativas, id = KC
quando presentes, ou, mais frequentemente, eletrlise do
suporte. em que K representa o conjunto de variveis mantidas
constantes.
em que
id = corrente de difuso, em mA
708 = constante dependente de diversos parmetros, em que P e A correspondem, respectivamente, a padro e
incluindo a unidade adotada para as variveis, dimenso da amostra.
gota de mercrio e instante da medida de id,
n = nmero de eltrons necessrios reduo ou oxidao Uma vez que polargrafos, em sua maioria, so dotados
de uma molcula ou on de substncia eletroativa,
D = coeficiente de difuso, em cm2/s,
C = concentrao de substncia eletroativa, em milimoles/L,
de registradores automticos, mais fcil determinar
graficamente correntes de difuso pela medida da altura da
onda polarogrfica (ver Figura 1). Os valores anotados,
5
m = massa do fluxo de mercrio, em mg/s, em cm, podem ser diretamente aplicados frmula, sem
t = tempo de vida da gota, em s. necessidade de sua converso em unidades de corrente
eltrica:
A constante 708 - englobando constante natural e o valor do
faraday - estabelecida para operao a 25 oC e aplicvel
AP C P
=
polarografia de corrente contnua amostrada, na qual, em vez AA C A
do registro contnuo de corrente, efetua-se apenas a leitura da
corrente ao trmino da vida da gota de mercrio, permitindo em que AP e AA correspondem s alturas das ondas
obteno de polarograma linear. Entretanto, ao empregarem- polarogrficas do padro e da amostra, respectivamente.
se instrumentos dotados de amortecedor de dente de serra
no registrador, considera-se a corrente mdia dos pulsos. A Potencial de meia-onda
corrente de difuso obtida segundo a equao de Ilkovic passa
a ser a mdia para toda a vida da gota de mercrio. Neste caso A medida da altura da onda polarogrfica para fins de
a constante adquire o valor 607. anlise quantitativa deve ser efetuada traando-se linhas
retas rentes aos picos das oscilaes da corrente residual
As variveis compreendidas na equao de Ilkovic e da corrente limite e unindo-se, por meio de terceira reta
devem ser controladas para que a corrente de difuso paralela ao eixo das abcissas, os prolongamentos das duas
seja efetivamente proporcional concentrao de espcie primeiras. A reta vertical traada passando pelo ponto de
eletroativa na amostra analisada. Alguns ons e molculas inflexo da onda polarogrfica, correspondendo metade
orgnicas em soluo aquosa modificam seu coeficiente da distncia entre a corrente residual e a corrente limite (I
de difuso razo de 1 a 2% para cada grau centgrado = l / 2id). A projeo desta reta sobre o eixo das ordenadas
aumentado, tornando necessrio que a clula polarogrfica fornece o chamado potencial de meia-onda, parmetro
tenha sua temperatura controlada com tolerncia de 0,5 empregado para caracterizar substncias eletroativas
o
C Os parmetros m e t, relacionados com dimenso e (aspecto qualitativo da polarografia). O potencial de
velocidade de renovao da gota de mercrio, dependem meia-onda, E1/2, dado em volts versus ECS (eletrodo de
da geometria do capilar, sendo a corrente de difuso referncia), salvo quando houver especificao diferente, e
proporcional raiz quadrada da altura da coluna de seu valor como parmetro de identificao decorre de sua
mercrio. Alturas adequadas - medindo-se da extremidade independncia da concentrao e caractersticas do EMG.
do capilar at o nvel de mercrio no reservatrio - situam- Entretanto, este parmetro varia em funo da composio,
se entre 40 e 80 cm. O dimetro interno do capilar neste pH e temperatura do meio eletroltico. Cabe ressaltar que,
caso de 0,04 mm para comprimentos entre 6 e 15 cm. A para os equipamentos modernos, a medida da altura da onda
altura exata do capilar ajustada para permitir a formao polarogrfica pode ser feita automaticamente empregando
de uma gota a cada 3-5 segundos, com circuito aberto e programas especficos para aquisio e processamento de
capilar imerso no eletrlito sob ensaio. dados.
120 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Mximo polarogrfico
Biftalato de potssio, 0,05M Reduzir o biftalato de (aproximadamente 0.02 M). Decantar a 25C antes de usar.
potssio a p fino e dessecar a 110 oC at peso constante. Proteger de modo a evitar absoro de dixido de carbono.
Dissolver exatamente 10,21g de KHC8H4O4, previamente Carbonato de sdio Dessecar o carbonato de sdio
dessecado a 100 C durante 1 hora, em gua, para perfazer em dessecador com slica gel at peso constante. Pesar
1000 ml. exatamente 2,10 g. Dessecar em estufa de 300 a 500 C at
peso constante. Pesar 2,65 g. Dissolver ambas as amostras
Fosfato equimolar, 0,05M Reduzir o Na2HPO4 e em gua at 1000 ml.
KH2PO4 a p fino e dessecar a 110 oC at peso constante.
Dissolver 3,55g de Na2HPO4 e 3,40g de KH2PO4, em gua, Tais solues devem ser recm-preparadas com gua
para perfazer 1000 ml. isenta de dixido de carbono e empregadas em prazo de
trs meses, tomando-se cautela para evitar o crescimento
Tetraborato de sdio, 0,01M - Dessecar o tetraborato de fungos e bactrias. Se aceita o emprego de conservantes
de sdio em dessecador contendo soluo aquosa de desde que no interfira na medio potenciomtrica do pH.
brometo de sdio at peso constante. Dissolver 3,81g de
Na2B4O710H2O, em gua, para perfazer 1000 ml. Evitar A gua utilizada no preparo das solues deve ser
absoro de dixido de carbono. recentemente destilada, aquecida ebulio por, no mnimo,
15 minutos, resfriada e mantida em recipiente impermevel
Hidrxido de clcio, saturado a 25C Reduzir o hidrxido a dixido de carbono. Preparar, individualmente, as seis
de clcio a p fino e dessecar com slica em dessecador solues-padro e armazen-las em frascos de vidro ou de
at peso constante. Transferir 5 g a balo volumtrico e polietileno adequados. Observar o prazo de validade das
adicionar gua at 1000 ml. Agitar bem e manter em solues, uma vez que o pH sofre alteraes com o passar
temperatura de 25 oC 2oC, para adequada saturao
do tempo.
Tetraoxalato Biftalato
para calibrao do medidor de pH
Tetraborato Hidrxido de
Temperatura Fosfato Carbonato
de potssio de potssio de sdio clcio saturado
(oC) equimolar de sdio
0,05M 0,05M 0,01M a 25C
10 1,67 4,00 6,92 9,33 13,00 10,18
15 1,67 4,00 6,90 9,27 12,81 10,12
20 1,68 4,00 6,88 9,22 12,63 10,07
25 1,68 4,01 6,86 9,18 12,45 10,02
30 1,68 4,01 6,85 9,14 12,30 9,97
35 1,69 4,02 6,84 9,10 12,14 9,93
40 1,70 4,03 6,84 9,07 11,99 -
5
indicadores em diversas faixas de pH esto relacionadas soluo tampo que reage com ons hidrognio.
em Indicadores (14.1)
Na soluo volumtrica, original, conhecida como
Reagente de Karl Fischer, o dixido de enxofre e o iodo
ACIDEZ E ALCALINIDADE: ENSAIOS RPIDOS so dissolvidos em piridina e metanol. A amostra pode
tanto ser titulada diretamente (mtodo direto) quanto por
Uma soluo considerada neutra quando no modifica a
retorno (mtodo indireto).
cor dos papis azul e vermelho de tornassol, ou quando o
papel indicador universal adquire as cores da escala neutra,
ou quando 1 ml da mesma soluo se cora de verde com Aparelhagem
uma gota de azul de bromotimol SI (pH 7,0).
Admite-se o emprego de qualquer equipamento que
considerada cida quando cora em vermelho o papel permita a excluso adequada da umidade atmosfrica e a
azul de tornassol ou 1 ml se cora de amarelo por uma gota determinao do ponto final da titulao. Para substncias
de vermelho de fenol SI (pH 1,0 a 6,6). incolores, possvel detectar-se o ponto de equivalncia
pela mudana de cor do reagente, de amarelo canrio para
considerada fracamente cida quando cora levemente mbar. O inverso observado ao se adotar a titulao por
de vermelho o papel azul de tornassol ou 1 ml se cora de retorno. Todavia, mais frequente e preciso determinar-se
alaranjado por uma gota de vermelho de metila SI (pH 4,0 o final da titulao eletrometricamente. Compreende o uso
a 6,6). de dispositivo eltrico capaz de gerar diferena de potencial
de 200 mV entre dois eletrodos de platina imersos na
considerada fortemente cida quando cora de azul o
soluo a titular. Ao ser atingido o ponto de equivalncia,
papel de vermelho de congo ou 1 ml se cora de vermelho
ligeiro excesso de reagente provoca elevao brusca do
pela adio de uma gota de alaranjado de metila SI (pH
fluxo de corrente entre 50 a 150 A, durante 30 segundos a
1,0 a 4,0).
30 minutos, dependendo da natureza da amostra (o perodo
considerada alcalina quando cora de azul o papel menor quando a substncia solvel no reagente).
vermelho de tornassol ou 1 ml se cora de azul por uma gota
Alguns tituladores automticos possuem mecanismo para
de azul de bromotimol SI (pH 7,6 a 13,0).
fechamento imediato da vlvula que controla a entrada do
considerada fracamente alcalina quando cora de azul o titulante, assim que detecta a mudana de potencial. Os
papel vermelho de tornassol ou 1 ml se cora de rosa por aparelhos comercialmente disponveis possuem um sistema
uma gota de vermelho de cresol SI (PH 7,6 a 8,8). fechado que consiste de uma ou duas buretas automticas,
copo de titulao, agitador magntico e eletrodo especifico.
considerada fortemente alcalina quando se cora de azul O ar no sistema mantido seco, com o uso de dessecantes
por uma gota de timolftalena SI (pH 9,3 a 10,5) ou de adequados.
vermelho por uma gota de fenolftalena SI (pH 10,0 a 13,0).
Reagente de Karl Fischer
5 Padronizao do reagente
em que
Preparao da amostra
em que
Se a amostra for solvel, dissolver quantidade adequada,
T = ttulo do reagente, exatamente pesada, em metanol anidro ou em outro
v = volume, em mL, do reagente adicionado em excesso solvente adequado. Se a amostra for insolvel, pode
aps a incorporao da tomada de ensaio, extrair-se a gua utilizando-se um solvente anidro que pode
v = volume, em mL, de soluo padro de gua, necessrio ser injetado, em quantidade adequada, exatamente pesada,
neutralizao do excesso de reagente, na soluo do analito. Alternativamente, pode utilizar-se
vr = volume, em mL, de reagente por mL de soluo padro tcnica de evaporao, em que a gua liberada coletada
de gua, determinado na padronizao dessa. em um tubo de ar corrente de gs inerte e anidro.
calor para a destilao deve ser, preferivelmente, fornecido quantidade suficiente para cobrir o fundo do balo ou tubos
por aquecedor eltrico dotado de controle por reostato ou capilares de vidro, do tipo empregado para determinao
banho de leo. de ponto de fuso, vedados em uma das extremidades.
Adicionar 200 mL de tolueno, ligar o equipamento e
Limpar o tubo receptor e condensador com mistura aquecer, Moderadamente, durante 15 minutos. Quando o
sulfocrmica, enxaguar com gua e secar em estufa. tolueno comear a ferver, regular o aquecimento para que
Introduzir no balo seco 200 mL de tolueno e destile 2 gotas por segundo. Destilada praticamente toda a
aproximadamente 2 mL de gua e destilar durante 2 horas. gua, acelerar a velocidade de destilao para 4 gotas por
Resfriar e, aps cerca de meia hora, medir o volume de segundo. Concluda a destilao da gua, verter cerca de 10
gua acumulado no tubo graduado. a 15 mL de tolueno pela boca do condensador de refluxo
e prosseguir a destilao por mais 5 minutos. Remover a
PROCEDIMENTO fonte de calor, aguardar o resfriamento do tubo receptor
temperatura ambiente e deslocar eventuais gotculas de gua
Adicionar ao balo quantidade de amostra, exatamente retidas na parede do tubo receptor com o auxlio de arame
pesada, que contenha de 2 a 4 mL de gua. Se a substncia de cobre com extremidade envolta em borracha (ltex). Uma
for de natureza pastosa, embrulh-la em folha de alumnio vez concluda a separao das fases, ler o volume de gua
de modo que a dimenso do pacote seja suficiente somente depositado no tubo receptor (descontando o volume inicial)
para a sua passagem pelo gargalo do frasco. Se a substncia e calcular a porcentagem de gua na tomada de ensaio.
induzir a ebulio, adicionar areia lavada e seca em
Mtodo B. Introduzir no frasco de titulao cerca de Se a amostra for constituda de duas substncias (uma
10 mL de metanol anidro ou do solvente prescrito na delas impureza da outra, por exemplo), o diagrama assume
monografia. Adicionar iodossulfuroso SR at a viragem a forma ilustrada na Figura 2. O segmento AB apresenta
amperomtrica. Introduzir, rapidamente, a tomada de inclinao unitria; o ponto B indica saturao da soluo
ensaio da substncia num estado de diviso conveniente, com relao a um dos componentes da amostra (geralmente
e em seguida um volume de iodossulfuroso SR, suficiente aquele que est presente em maior proporo); o segmento
para obter um excesso de aproximadamente 1 mL. Nesse BC indica a solubilizao do segundo componente e
caso, tambm, pode ser utilizado o volume prescrito o segmento CD a saturao da soluo com este ltimo
na monografia. Deixar em repouso em frasco fechado (inclinao nula).
e ao abrigo da luz durante 1 minuto ou durante o tempo
128 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
APARELHAGEM
ESCOLHA DE SOLVENTE
ELETROFORESE DE FRONTEIRA, OU DIVISO, OU deve ser equipada com uma tampa hermtica, permitindo
LIMITE LIVRE, OU EM MOVIMENTO manter no seu interior uma atmosfera saturada de unidade
e atenuar assim, a evaporao do solvente durante a
Esse mtodo principalmente utilizado na determinao migrao. Utiliza-se um dispositivo de segurana que corte
de mobilidades, sendo as caractersticas experimentais a corrente, quando se retira a tampa da cuba. Se a medida
diretamente mensurveis e reprodutveis. Aplica- de corrente eltrica exceder a 10 W prefervel resfriar o
se, sobretudo, a substncias de massa moleculares suporte;
relativamente elevadas, pouco difusveis. As divises so,
inicialmente, demarcadas por um processo fsico como a um dispositivo de suporte:
refratometria ou a condutimetria. Aps a aplicao de um
campo eltrico definido, durante um tempo determinado, Eletroforese em tiras. Na eletroforese as tiras no suporte, so
obtm-se novas divises e suas respectivas posies so previamente impregnadas com a mesma soluo condutora
observadas. As condies operacionais possibilitam a e cada extremidade mergulhada no compartimento do
determinao das divises e dos constituintes. eletrodo. As tiras ficam bem estendidas, fixadas sobre
um suporte apropriado para evitar a difuso da soluo
condutora como, por exemplo, uma moldura horizontal,
ELETROFORESE EM SUPORTE, OU ELETROFORESE um suporte em V invertido, ou uma superfcie uniforme,
DE ZONA com pontos de contato em intervalos adequados.
Esse mtodo usado apenas para amostras reduzidas. A Eletroforese em gel. Na eletroforese em gel, o dispositivo
natureza do suporte, como papel, gel de agarose, acetato consiste numa placa de vidro, como, por exemplo, uma
de celulose, amido, agarose, metacrilamida ou gel misto, simples lmina de microscpio, na qual se deposita uma
introduz um nmero de fatores adicionais que modificam camada de gel aderente e de espessura uniforme em toda
a mobilidade: a superfcie da lmina. O contato entre o gel e a soluo
na extremidade inferior com uma rolha, at uma altura A porosidade real de um gel definida de modo operacional
igual em todos eles, distncia de cerca de 1 cm do bordo pelas suas propriedades de tamis molecular, isso , a
superior do tubo. Evitar a introduo de bolhas de ar nos resistncia que ele ope migrao das macromolculas.
tubos. Cubra a mistura com uma camada de gua a fim de Existem limites para as concentraes de acrilamida que
impedir o contato com o ar e deixar de repouso. A formao podem ser utilizadas. Em concentraes muito elevadas
do gel requer, geralmente, cerca de 30 minutos e est os gis desfazem-se mais facilmente e tornam-se difceis
completa quando aparece uma delimitao ntida entre o de manipular. Quando o tamanho dos poros de um gel
gel e a camada aquosa. Eliminar a camada aquosa. Encher diminui, a velocidade de migrao de uma protena nesse
o reservatrio inferior com a soluo tampo, prescrita e gel diminui, tambm. Ajustando a porosidade de um
remover as rolhas dos tubos. Encaixar os tubos nas juntas gel, alterando a concentrao em acrilamida, possvel
do reservatrio superior de modo que a sua parte inferior otimizar a resoluo do mtodo para um determinado
mergulhe na soluo tampo do reservatrio inferior e produto proteico. Desse modo, as caractersticas fsicas de
ajuste de forma que o fundo dos tubos esteja imersos na um gel dependem, portanto, do seu teor em acrilamida e
soluo tampo do reservatrio inferior. Delicadamente em bisacrilamida. Alm da composio do gel, o estado
encher os tubos na soluo do reservatrio inferior. Preparar da protena constitui outro fator importante para a sua
as solues problema e padro contendo o corante indicado mobilidade eletrofortica.
prescrito. Encher, cuidadosamente, os tubos com a soluo
tampo indicada. Aplicar as solues, cuja densidade No caso das protenas, a mobilidade eletrofortica depende
foi aumentada, por adio de sacarose, por exemplo, do pK dos grupos com carga eltrica e do tamanho da
superfcie do gel, utilizando um tubo diferente para cada molcula. igualmente afetada pela natureza, concentrao
soluo. Colocar a mesma soluo tampo no reservatrio e pH do tampo, pela temperatura, intensidade do campo
superior. Ligar os eletrodos fonte de corrente e proceder eltrico e pela natureza do suporte.
eletroforese, utilizando a corrente de intensidade ou de
tenso constante e temperatura prescrita na monografia.
Interrompa a corrente quando o indicador corado atingir
o reservatrio inferior. Retirar, imediatamente, os tubos e
ELETROFORESE EM GEL DE POLIACRILAMIDA EM
CONDIES DESNATURANTES 5
proceder extruso do gel. Localizar a posio das bandas O mtodo descrito a ttulo de exemplo aplicvel
nos eletroforetogramas segundo o procedimento indicado. anlise dos polipeptdeos monmeros de massa molecular
compreendida entre 14 000 e 100 000 daltons. possvel
ampliar esse intervalo por diferentes tcnicas (por exemplo,
ELETROFORESE EM GEL DE POLIACRILAMIDA pelos empregos de gis em gradiente ou de sistemas
COM DODECILSULFATO DE SDIO (DSS-EGPA) tampo especiais), mas tais tcnicas no fazem parte
Campo de aplicao. A eletroforese em gel de deste texto. A eletroforese em gel de poliacrilamida em
poliacrilamida utilizada para a caracterizao qualitativa condies desnaturantes usando o dodecilsulfato de sdio
das protenas contidas em preparaes biolgicas, para (DSS-EGPA) a tcnica de eletroforese mais utilizada para
controles de pureza e determinaes quantitativas. avaliar a qualidade farmacutica dos produtos proteicos e
sobretudo o foco deste texto. De modo geral, a eletroforese
Finalidade. A anlise por eletroforese em gel um processo analtica das protenas realizada em gel de poliacrilamida
adaptado identificao e ao controle da homogeneidade em condies que favorecem a dissociao das protenas nas
das protenas contidas em preparaes farmacuticas. suas subunidades polipeptdicas e que limitam o fenmeno
utilizada como rotina para avaliar a massa molecular das de agregao. Utiliza-se frequentemente esse efeito do
subunidades proticas e determinar as subunidades que dodecilsulfato de sdio (DSS) um detergente fortemente
compem as protenas purificadas. No mercado existe uma aninico, para dissociar as protenas antes da sua aplicao
grande variedade de gis e reagentes prontos para serem no gel, em combinao com o calor. Os polipeptdeos
utilizados em vez dos que se descrevem a seguir, desde que desnaturados ligam-se ao DSS, adquirem cargas negativas
os resultados obtidos sejam equivalentes e que possam ser e caracteriza-se por uma relao carga/massa constante
satisfeitas as condies de validade descritas em Validao qualquer que seja o tipo de protena considerada. Sendo
do ensaio. a quantidade de DSS ligada quase sempre proporcional a
massa molecular do polipeptdeo e independente da sua
sequncia, os complexos DSS-polipeptdeo migram nos
Caractersticas dos gis de poliacrilamida
gis de poliacrilamida com mobilidades que so funo do
As propriedades de tamis dos gis de poliacrilamida tamanho do polipeptdeo.
esto relacionadas com a sua estrutura particular que a
A mobilidade eletrofortica dos complexos detergente-
de uma rede tridimensional de fibras e poros resultantes
polipeptdeos resultantes apresenta sempre a mesma
da formao de ligaes cruzadas entre a bisacrilamida
relao funcional com a massa molecular. A migrao dos
bifuncional e as cadeias adjacentes de poliacrilamida. A
complexos DSS , como seria de se prever, em direo ao
polimerizao catalisada por um gerador de radicais livres
anodo velocidade mais elevada para os complexos de
composto de persulfato de amnia (PSA) e N,N,N,N-
baixa massa molecular do que para os de alta. , assim,
tetrametiletilenodiamina (TEMED). O tamanho real dos
possvel determinar a massa molecular de uma protena a
poros de um gel tanto menor quanto mais elevada for a
partir da sua mobilidade relativa, aps comparao com
sua concentrao em acrilamida. Como a concentrao de
solues padro de valor de massa molecular conhecida
acrilamida do gel aumenta, a sua porosidade efetiva diminui.
132 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
e a observao de uma banda nica constitui um critrio do eletrodo. A descontinuidade do sistema tampo conduz
de pureza. Todavia, as modificaes eventuais na a uma concentrao de grande volume das amostras no gel
constituio do polipeptdeo, por exemplo, uma N- ou de concentrao e, portanto, a uma melhoria da resoluo.
uma O-glicosilao, tm um impacto significante no Quando o campo eltrico aplicado, um gradiente de
negligencivel sobre a massa molecular aparente de uma tenso negativo instaura-se atravs da soluo da amostra
protena, no se liga a uma molcula de carboidratos e arrasta as protenas do gel de concentrao para o gel
de forma semelhante a um polipeptdeo. Com efeito, o de empilhamento. Os ons glicinato contidos no tampo
DSS no se liga da mesma maneira aos agrupamentos do eletrodo seguem as protenas no gel de empilhamento.
glicdicos ou aos agrupamentos peptdicos, de modo que a Forma-se, rapidamente, uma zona de diviso mvel cuja
constncia da relao carga/massa deixa de ser verificada. frente constituda pelos ons cloreto de alta mobilidade e a
A massa molecular aparente das protenas que sofreram parte de trs pelos ons glicinato mais lentos. Um gradiente
modificaes ps-translacionais no reflete realmente a de alta tenso localizado instaura-se entre as frentes inicas
massa da cadeia polipeptdica. da cabea e da cauda e leva os complexos DSS-protena
a concentrarem-se numa banda muito estreita que migra
entre as fraes cloreto e glicinato.
Condies redutoras
Em larga escala, independentemente do volume da amostra
A associao das subunidades polipeptdicas e a estrutura
aplicado, o conjunto dos complexos DSS-protena sofre
tridimensional das protenas baseiam-se, muitas vezes,
um efeito de condensao e penetra no gel de separao
na existncia de pontes dissulfeto. Um dos objetivos a
na forma de uma banda estreita, bem definida, de alta
atingir na anlise DSS- EGPA em condies redutoras
densidade proteica. O gel de empilhamento, de poros
romper essa estrutura por reduo das pontes dissulfeto.
largos, no retarda, geralmente, a migrao das protenas,
A desnaturao e a dissociao completas das protenas
mas desempenha, principalmente, o papel de meio
por tratamento com 2-mercaptoetanol ou com ditiotreitol
5
anticonvequitivo. Na interface dos gis de empilhamento
(DTT) provocam um desdobramento da cadeia
e de separao, as protenas so confrontadas com um
polipeptdica seguida de uma complexao com o DSS.
brusco aumento do efeito de retardamento devido ao
Nessas condies, a massa molecular das subunidades
pequeno dimetro dos poros do gel de separao. Quando
polipeptdicas pode ser calculada por regresso linear com
penetram no gel de separao, esse retardamento prossegue
a ajuda de padres de massa molecular apropriada.
devido ao efeito de tamis molecular exercido pela matriz.
Os ons glicinato ultrapassam as protenas cuja migrao
Condies no redutoras prossegue, ento, num meio de pH uniforme constitudo
pela soluo tampo de trometamina (TRIS) e pela glicina.
Para certas anlises, a dissociao completa da protena
O efeito de tamis molecular conduz a uma separao dos
em subunidades peptdicas no desejvel. Na
complexos DSS-polipeptdeo com base na sua respectiva
ausncia de tratamento pelos agentes redutores, como
massa molecular.
o 2-mercaptoetanol ou o DTT, as pontes dissulfeto
covalentes permanecem intactas e a conformao
oligomrica da protena preservada. Os complexos DSS- PREPARAO DE GIS DE POLIACRILAMIDA DSS
oligmero migram mais lentamente que as subunidades VERTICAIS DE TAMPO DESCONTNUO
DSS-peptdicas. Alm disso, as protenas no reduzidas
podem no ser, totalmente, saturadas em DSS e, por Montagem do molde
consequncia, no se ligam ao detergente numa relao de
massa constante. Essa circunstncia torna a determinao Com um detergente suave, limpar as duas placas de
da massa molecular dessas molculas pelo DSS- EGPA vidro (por exemplo de tamanho 10 cm x 8 cm), o pente
mais difcil que a anlise de polipeptdeos totalmente de politetrafluoroetileno, os dois espaadores e o tubo de
desnaturados, pois, para que a comparao seja possvel borracha de silicone (por exemplo, dimetro de 0,6 mm x
necessrio que os padres e as protenas desconhecidas 350 mm), e enxaguar, abundantemente, com gua. Secar
tenham configuraes semelhantes. Entretanto, a obteno todos os elementos com papel toalha ou tecido. Lubrificar
no gel de uma nica banda corada permanece como critrio os espaadores e o tubo com lubrificante que no seja base
de pureza. de silicone. Colocar os espaadores a 2 mm da borda ao
longo dos dois lados curtos e de um dos lados compridos da
placa de vidro. Esse ltimo corresponder ao fundo do gel.
CARACTERSTICAS DA ELETROFORESE DE GEL
Comear a instalar o tubo sobre a placa de vidro utilizando
EM SISTEMA TAMPO DESCONTNUO
um dos espaadores como guia. Atingida a extremidade
O mtodo eletrofortico mais divulgado para a do espaador, dobrar o tubo com precauo para faz-lo
caracterizao das misturas complexas de protenas seguir o lado longo da placa de vidro. Mantenha o tubo
fundamenta-se no emprego de um sistema tampo no seu lugar com um dos dedos, dobre-o de novo para
descontnuo que inclui dois gis contnuos, mas distintos: faz-lo seguir o segundo lado curto da placa, utilizar o
um gel (inferior) de separao ou de resoluo e um espaador como guia. Colocar a segunda placa no lugar,
gel (superior) de concentrao. Esses dois gis so de alinhando-a, perfeitamente, sobre a primeira, e mantenha o
porosidade, pH e fora inica diferentes. Alem disso, os conjunto por presso manual. Colocar duas pinas em cada
diferentes ons mveis so usados nos gis e nos tampes um dos lados curtos do molde e depois, com precauo,
quatro outras pinas no lado longo que constituir a base
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 133
do molde. Verificar se o tubo segue a borda das placas e de gua. Deixar polimerizar o gel em posio vertical,
no se deslocou aps a colocao das pinas. O molde est temperatura ambiente.
pronto e o gel pode ser colocado nele.
Preparao do gel de empilhamento. Quando a
polimerizao terminar (cerca de 30 minutos), esgotar o
Preparao dos gis lcool isobutlico e lavar vrias vezes a superfcie do gel
com gua para eliminar completamente o lcool isobutlico
Para os gis do sistema tampo descontnuo, recomenda-se
e, se necessrio, a acrilamida no polimerizada. Deixar o
colocar primeiro o gel de separao e deix-lo polimerizar
mnimo de lquido na superfcie do gel e, eventualmente,
antes de colocar o gel de concentrao, porque o teor em
absorva a gua residual com a ponta de uma toalha de
acrilamida-bisacrilamida nos dois gis, no tampo e do pH
papel. Num erlenmyer, preparar um volume apropriado
diferente.
de uma soluo de acrilamida de concentrao desejada
Preparao do gel de separao. Num erlenmayer preparar usando os valores registrados na Tabela 2. Misturar os
o volume apropriado de uma soluo de acrilamida de componentes pela ordem indicada.
concentrao desejada, usando os valores indicados na
Antes de juntar a soluo de PSA e de TEMED, filtrar
Tabela 1. Misturar os componentes pela ordem indicada.
se necessrio, por suco por uma membrana de acetato
Antes de adicionar a soluo de persulfato de amnia
de celulose (dimetro dos poros: 0,45 ); mantenha
e a de tetrametiletilenodiamina (TEMED), filtrar, se
sob suco agitando a unidade de filtrao at no mais
necessrio, por suco usando uma membrana de acetato
formar bolhas na soluo. Adicionar as quantidades
de celulose (dimetro dos poros; 0,45 m); mantenha sob
apropriadas de solues de persulfato de amnia e de
suco agitando a unidade de filtrao at no mais formar
TEMED (Tabela 2), agitar e adicionar, imediatamente,
bolhas na soluo. Adicionar as quantidades apropriadas
sobre o gel de separao. Colocar, imediatamente, no
de soluo de PSA e de TEMED (Tabela 1), agitar e
lugar um pente de politetrafluoroetileno limpo na soluo
5
introduzir, imediatamente, no espao que separa as duas
do gel de concentrao, tomando a precauo de evitar a
placas de vidro do molde. Deixar uma altura livre suficiente
formao de bolhas de ar. Adicionar soluo para o gel de
para o gel de concentrao (altura de um dente do pente
concentrao de modo a encher totalmente os interstcios
mais 1 cm). Usando uma pipeta de vidro afilada, recubra,
do pente. Deixar polimerizar o gel em posio vertical,
com precauo, a soluo com lcool isobutlico saturado
temperatura ambiente.
134 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
8% de Acrilamida
gua 2,3 4,6 6,9 9,3 11,5 13,9 18,5 23,2
Soluo de acrilamida(1) 1,3 2,7 4,0 5,3 6,7 8,0 10,7 13,3
Tris 1,5 M pH 8,8 (2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
(DSS) 100 g/L de Dodecil Sulfato de Sdio(3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(PSA) 100 g/L de Persulfato de Amnia(4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(TEMED) Tetrametiletilenodiamina(5) 0,003 0,006 0,009 0,002 0,005 0,008 0,024 0,03
10% de Acrilamida
5 gua
Soluo de acrilamida(1)
Tris 1,5 M pH 8,8 (2)
1,9
1,7
1,3
4,0
3,3
2,5
5,9
5,0
3,8
7,9
6,7
5,0
9,9
8,3
6,3
11,9
10,0
7,5
15,9
13,3
10,0
19,8
16,7
12,5
(DSS) 100 g/L de Dodecil Sulfato de Sdio(3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(PSA) 100 g/L de Persulfato de Amnia(4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(TEMED) Tetrametiletilenodiamina(5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,002 0,016 0,02
12% de Acrilamida
gua 1,6 3,3 4,9 6,6 8,2 9,9 13,2 16,5
Soluo de acrilamida(1) 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 12,0 16,0 20,0
Tris 1,5 M pH 8,8 (2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
(DSS) 100 g/L de Dodecil Sulfato de Sdio(3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(PSA) 100 g/L de Persulfato de Amnia(4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(TEMED) Tetrametiletilenodiamina(5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02
14% de Acrilamida
gua 1,4 2,7 3,9 5,3 6,6 8,0 10,6 13,8
Soluo de acrilamida(1) 2,3 4,6 7,0 9,3 11,6 13,9 18,6 23,2
Tris 1,5 M pH 8,8 (2) 1,2 2,5 3,6 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
(DSS) 100 g/L de Dodecil Sulfato de Sdio(3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(PSA) 100 g/L de Persulfato de Amnia(4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(TEMED) Tetrametiletilenodiamina(5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02
15% de Acrilamida
gua 1,1 2,3 3,4 4,6 5,7 6,9 9,2 11,5
Soluo de acrilamida(1) 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 20,0 25,0
Tris 1,5 M pH 8,8 (2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
(DSS) 100 g/L de Dodecil Sulfato de Sdio(3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(PSA) 100 g/L de Persulfato de Amnia(4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(TEMED) Tetrametiletilenodiamina(5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02
______________
(1) Soluo de acrilamida: acrilamida/bisacrilamida (29:1) a 30% (p/v) SR
(2) Tris 1,5 M pH 8,8: tampo de triscloridrato 1,5 M pH 8,8.
(3) DSS 100 g/L: soluo de dodecilsulfato de sdio a 10% (p/v).
(4) PSA 100 g/L: soluo de persulfato de amnio a 10% (p/v). O persulfato de amnio fornece os radicais livres que induzem a polimerizao da
acrilamida e da bisacrilamida. A soluo de persulfato de amnia decompe-se, lentamente, e renovada toda a semana.
(5) TEMED: N,N,N,N-tetrametiletilenodiamina.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 135
Montagem do gel no aparelho de eletroforese e separao DETECO DAS PROTENAS NOS GIS
eletrofortica
A colorao com azul de Coomassie o mtodo mais
5
Quando a polimerizao terminar (cerca de 30 correntemente utilizado para as protenas, com um nvel de
minutos), retirar o pente com precauo. Lavar os poos deteco da ordem de 1 g a 10 g de protena por banda.
imediatamente com gua ou tampo de eletroforese DSS- A colorao com nitrato de prata o mtodo mais sensvel
EGPA para eliminar a acrilamida eventualmente no para a visualizao das protenas em gis; possibilita a
polimerizada. Se necessrio, endireitar os dentes do gel deteco de bandas com 10 ng a 100 ng de protena. Todas
de empilhamento, com uma agulha hipodrmica, de ponta as etapas da colorao dos gis so realizadas temperatura
partida, anexada a uma seringa, de um dos lados curtos da ambiente; com agitao moderada e com movimento
placa, retirar com precauo o tubo e recolocar as pinas. orbital num equipamento apropriado. necessrio o uso
Proceda do mesmo modo do outro lado curto e depois na de luvas para evitar depositar no gel impresses digitais
base do molde. que tambm ficariam coradas.
Introduzir o gel no aparelho de eletroforese. Introduzir Colorao com azul de Coomassie. Mergulhar o gel
os tampes de eletroforese nos reservatrios superior e durante, pelo menos, uma hora num grande excesso de
inferior. Eliminar as bolhas, eventualmente aprisionadas, azul de Coomassie SR. Eliminar a soluo de colorao.
na base do gel entre as placas de vidro. recomendvel Mergulhar o gel num grande excesso de soluo de
empregar para esse fim uma agulha hipodrmica dobrada descolorao (consiste em uma mistura de 1 volume de
fixada numa seringa. Nunca estabelea tenso eltrica no cido actico glacial e 4 volumes de metanol e 5 volumes
gel sem as amostras porque pode destruir a descontinuidade de gua). Renovar vrias vezes a soluo de descolorao
do sistema tampo. Antes de depositar a amostra, lave at que as bandas proticas apaream, nitidamente, sobre
ou preencha os poos com precauo com tampo de fundo claro. Quanto mais forte for a descolorao do gel,
eletroforese DSS-EGPA. Preparar as solues problema tanto menor quantidades de protenas so detectveis
e padro utilizando o tampo para amostra recomendada por esse mtodo. possvel acelerar a descolorao
e tratar como se especifica na monografia da substncia a incorporando na soluo de descolorao alguns gramas
ser analisada. Aplicar nos poos do gel de concentrao de resina de troca inica ou uma esponja.
o volume apropriado das diferentes solues. Proceda
eletroforese nas condies recomendadas pelo fabricante Nota : as solues cido-alcolicas utilizadas nesse mtodo
do aparelho. Certos fabricantes de aparelhos para DSS- no fixam totalmente as protenas do gel. Pode, portanto,
EGPA fornecem gis de diversas superfcies e espessuras. haver perda de certas protenas de massa molecular baixa
Para obter uma separao tima, pode ser necessrio fazer durante as operaes de colorao e descolorao dos
variar a durao da eletroforese e os parmetros eltricos gis finos. Pode ser conseguida uma fixao permanente
como indicado pelo fabricante. Verificar que a frente de colocando o gel durante 1 hora numa mistura de 1 volume
colorao se desloca no gel de separao, ela atinge a base de cido tricloroactico, 4 volumes de metanol e 5 volumes
do gel, parar a eletroforese. Retirar o molde do aparelho de gua, antes de se mergulhar na azul de Coomassie SR.
e separar as duas placas de vidro. Retirar os espaadores,
Colorao com nitrato de prata. Mergulhar o gel durante 1
separar e rejeitar o gel de empilhamento e proceder,
hora num grande volume de soluo de fixao (consiste em
imediatamente, colorao.
adicionar 0,27 mL de formaldedo em 250 mL de metanol e
136 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
diluir para 500 mL com gua). Eliminar e renovar a soluo obtidas so chamadas mobilidades relativas das protenas
de fixao e deixar incubar durante, pelos menos, 1 hora, ou (em referncia frente de colorao) e, convencionalmente,
durante toda a noite, se assim for mais prtico. Eliminar a representadas por Rf. Construir um grfico usando os
soluo de fixao e colocar o gel num volume em excesso logaritmos da massa molecular relativa (Mr) dos padres
de gua durante 1 hora e, em seguida, mergulhar durante proteicos em funo dos Rf correspondentes. Os grficos
15 minutos em soluo de glutaraldedo a 1% (v/v). Lavar obtidos so ligeiramente sigmides. O clculo das massas
o gel colocando-o por duas vezes num volume excessivo moleculares desconhecidas pode ser calculado por
de gua durante 15 minutos e, em seguida, mergulh-lo regresso linear, ou por interpolao a partir da curva de
durante 15 minutos, ao abrigo da luz, em nitrato de prata variao de log (Mr) em funo do Rf desde que os valores
SR1 recentemente preparado. Lavar o gel colocando-o obtidos para as amostras desconhecidas se situem na parte
por trs vezes num volume excessivo de gua durante 15 linear do grfico.
minutos e, em seguida, mergulh-lo durante cerca de 1
minuto em soluo de desenvolvimento (consiste em diluir
Validao do ensaio
2,5 mL de cido ctrico monoidratado a 2% (p/v) e 0,27
mL de formaldedo em gua a 500 mL) at obter colorao O ensaio s ser vlido se as protenas utilizadas como
satisfatria. Suspenda o desenvolvimento por imerso marcadores de massa molecular distriburem-se em 80%
durante 15 minutos em soluo de cido actico a 10% do comprimento do gel e se, no intervalo de separao
(v/v). Lavar com gua. desejada (por exemplo, o intervalo que cubra o produto e o
seu dmero, ou o produto e as suas impurezas aparentadas)
Secagem dos gis de poliacrilamida DSS corados existir para as bandas proteicas em causa uma relao
linear entre o logaritmo da massa molecular e o valor
O tratamento dos gis ligeiramente diferente conforme do Rf. Exigncias de validao suplementares dizendo
o mtodo de colorao utilizado. No caso da colorao respeito preparao da amostra podem ser especificadas
5
Quando um campo eltrico aplicado ao longo do capilar, (l) do terminal de injeo do capilar at a janela de deteco
um fluxo de eletrlito gerado no interior do mesmo. A do capilar (comprimento efetivo do capilar) definido pela
migrao de diferentes solutos ao longo do capilar em equao:
direo ao detector, independente da presena de carga
inica, indica que alm da mobilidade eletrofortica, est
envolvida uma fora adicional. Caso no houvesse esta fora
adicional, compostos com carga positiva migrariam pelo
capilar enquanto os nions permaneceriam distncia do
onde:
detector e os solutos neutros simplesmente no migrariam.
A fora adicional que direciona todos os solutos atravs l = distncia do terminal de injeo do capilar at a janela
do capilar denominada de fluxo eletrosmtico (FEO) e de deteco do capilar (comprimento efetivo do capilar);
possui papel importante nos diversos tipos de EC. Vep = velocidade eletrofortica;
Veo = velocidade do fluxo eletrosmtico.
O FEO tem sua origem a partir da ionizao dos grupos
silanis na parede interna do capilar, que so transformados A reprodutibilidade na velocidade de migrao dos solutos
em grupos silanoato (Si-O-), em pH acima de trs. Estes est diretamente relacionada manuteno de um valor
grupos com carga negativa atraem os ctions do eletrlito, constante do fluxo eletrosmtico entre diferentes corridas
formando uma camada interna na parede do capilar. A eletroforticas. Para algumas aplicaes especficas,
dupla camada formada prxima superfcie do capilar pode ser necessrio reduzir ou mesmo suprimir o fluxo
essencialmente esttica. A camada mais difusa, prxima eletrosmtico atravs de modificaes na parede do capilar
dupla camada mvel e, sob ao de uma tenso eltrica, ou na concentrao, composio e/ou pH da soluo
migra em direo ao ctodo carreando juntamente a gua de eletroltica.
hidratao. Entre as duas camadas existe um plano de atrito
e o desequilbrio eltrico gerado corresponde diferena Aps introduo da amostra no capilar, cada soluto
de potencial que atravessa as duas camadas, denominada da amostra migra junto ao eletrlito como uma banda
de potencial zeta (z). independente, conforme sua mobilidade intrnseca. Sob
condies ideais o nico fator que pode contribuir para o
A velocidade do fluxo eletrosmtico dependente da alargamento da banda oriundo da difuso molecular do
mobilidade eletrosmtica (eo) que, por sua vez, est soluto ao longo do capilar (difuso longitudinal). Neste
diretamente relacionada densidade de carga da parede caso, a eficincia da banda expressa como nmero de
interna do capilar e s caractersticas do eletrlito. A pratos tericos (N) de acordo com a equao:
velocidade do fluxo eletrosmtico (Veo) pode ser calculada
pela equao:
onde: onde:
A separao entre duas bandas pode ser alcanada pela ou interromper o contato eltrico no capilar durante a
modificao da mobilidade eletrofortica dos solutos, migrao eletrofortica. Os mtodos eletroforticos devem
pelo fluxo eletrosmtico e pelo aumento da eficincia das estabelecer um detalhado procedimento de lavagem do
bandas de cada soluto em anlise. A resoluo pode ser capilar entre cada corrida a fim de permitir tempos de
calculada atravs da equao: migrao reprodutveis dos solutos em anlise.
- sistema computadorizado para registro e integrao dos Temperatura - o principal efeito da temperatura
eletroferogramas. observado na viscosidade e condutividade eltrica do
eletrlito. Alteraes nestas duas propriedades do eletrlito
A monografia de cada substncia deve detalhar o tipo determinam diferenas na velocidade de migrao;
de capilar, as solues eletrolticas, o mtodo de pr-
condicionamento, as condies da amostra e da migrao Capilar - o comprimento e dimetro interno influenciam
eletrofortica. parmetros analticos como tempo de migrao total dos
solutos, eficincia das separaes e capacidade de carga.
A soluo eletroltica deve ser filtrada (filtro de 0,45 m) Sob voltagem constante, o aumento do comprimento total e
para remover partculas e desaerada para evitar a formao efetivo do capilar pode diminuir a corrente eltrica que, por
de bolhas que possam interferir no sistema de deteco
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 139
sua vez, determina o aumento no tempo de migrao dos de seletores quirais ao eletrlito de corrida. Os seletores
analitos. Capilares com menor dimetro interno possuem quirais mais utilizados so as ciclodextrinas. Porm,
melhor capacidade de dissipao do calor gerado pela teres coroa, polissacardeos e protenas tambm podem
corrente eltrica (efeito Joule), permitindo a elevao da ser empregados para esta finalidade. A discriminao
voltagem aplicada e reduo no tempo de anlise. O limite enantiomrica regida por diferentes interaes entre o
de deteco do mtodo tambm pode ser influenciado seletor quiral e cada um dos enantimeros do soluto em
pelo dimetro interno, dependendo do volume de amostra anlise. Assim, a escolha correta do seletor influencia
injetado e do sistema de deteco utilizado. A eficincia diretamente a resoluo enantiomrica obtida para solutos
das separaes tambm pode ser aumentada pela reduo quirais. Durante o desenvolvimento de um mtodo
do dimetro interno do capilar. para separao enantiomrica, recomendvel testar
ciclodextrinas de diferentes tamanhos de cavidade, (a, b,
A adsoro de componentes da amostra na parede g), ciclodextrinas modificadas com grupamentos neutros
interna do capilar pode limitar a eficincia. Por esta (metil, etil, hidroxialquil, etc.), ou com grupamentos
razo, estratgias para evitar estas interaes devem ionizveis (aminometil, carboximetil, sulfobutilter, etc.).
ser consideradas no desenvolvimento de um mtodo de A resoluo de separaes quirais igualmente controlada
separao por eletroforese capilar. Este um fator crtico, pela concentrao do seletor quiral, da composio e
por exemplo, em amostras contendo protenas. Uma destas pH do eletrlito e da temperatura de anlise. Aditivos
estratgias (uso de pH(s) extremos e adsoro de eletrlitos orgnicos como metanol e Ureia podem ser empregados
carregados com carga positiva) requer a modificao da para modificar a resoluo obtida.
composio do eletrlito para prevenir a adsoro das
protenas. Alternativamente, possvel recobrir a parede
interna do capilar com um polmero atravs de ligaes 5.2.22.1.2 Cromatografia Eletrocintica Micelar
covalentes, prevenindo a interao de protenas com a (CEM)
5
superfcie da slica carregada negativamente. Para esta
proposta, capilares com a parede interna previamente
recoberta com polmeros de natureza neutro-hidroflica, PRINCPIO
catinica e aninica so disponveis comercialmente.
Na Cromatografia Eletrocintica Micelar, a separao ocorre
em uma soluo eletroltica que contm um tensoativo a
PARMETROS DA SOLUO ELETROLTICA
uma concentrao acima da concentrao micelar crtica
Natureza do tampo e concentrao - Os eletrlitos (cmc). As molculas do soluto so distribudas entre
para eletroforese capilar devem apresentar capacidade o eletrlito e a fase pseudo-estacionria composta de
tamponante adequada na faixa de pH escolhido e baixa micelas, de acordo com o coeficiente de partio do soluto.
mobilidade a fim de minimizar a gerao de corrente uma tcnica que pode ser usada para separao de solutos
eltrica. Para diminuir a distoro do pico eletrofortico neutros e/ou ionizados, mantendo a eficincia, velocidade
importante combinar a mobilidade do on do eletrlito e adequabilidade instrumental da eletroforese capilar. O
mobilidade do soluto. A escolha do solvente da amostra tensoativo aninico dodecil sulfato de sdio (DSS) um
importante para alcanar uma uniformidade do soluto o qual dos tensoativos mais usados na CEM, apesar de outros
permite o aumento da eficincia de separao e melhora tambm serem utilizados, como, por exemplo, tensoativos
a deteco. Alm disso, um aumento na concentrao do catinicos (sais de cetiltrimetilamnio).
eletrlito em um pH especfico determina a diminuio do
Em pH neutro ou alcalino, um forte fluxo eletro-osmtico
fluxo eletrosmtico e da velocidade do soluto.
gerado movimentando os ons do eletrlito de separao na
pH do eletrlito - O pH do eletrlito pode afetar a separao direo do ctodo. Se DSS for utilizado como tensoativo, a
atravs da modificao da carga do soluto ou de outros migrao eletrofortica da micela aninica ser na direo
aditivos, bem como da alterao do fluxo eletrosmtico. oposta, em direo ao nodo. Como resultado, a velocidade
A mudana no valor do pH do eletrlito acima ou abaixo de migrao micelar total reduzida, em comparao ao
do ponto isoeltrico de protenas e peptdeos influencia a fluxo da soluo eletroltica. No caso de solutos neutros,
separao destes solutos, atravs da modificao da carga uma vez que o analito pode estar distribudo entre a micela e
lquida de carter negativo para positivo. Em geral, um o eletrlito, e no h mobilidade eletrofortica, a velocidade
aumento no pH do eletrlito ocasiona elevao do fluxo de migrao do analito depender somente do coeficiente de
eletrosmtico. partio entre a micela e o eletrlito. No eletroferograma,
os picos correspondentes a cada soluto neutro esto sempre
Solventes orgnicos - Solventes orgnicos como metanol, localizados entre o marcador de fluxo eletrosmtico e o da
acetonitrila entre outros podem ser adicionados ao micela (o tempo decorrido entre estes dois picos chamado
eletrlito aquoso para aumentar a solubilidade do soluto de janela de separao). Para solutos ionizados, a velocidade
e/ou de outros aditivos presentes no eletrlito, ou ainda, de migrao depende do coeficiente de partio do soluto
influenciar o grau de ionizao dos solutos da amostra. A entre a micela e eletrlito e da mobilidade eletrofortica do
adio destes solventes no eletrlito geralmente provoca a soluto na ausncia da micela.
reduo do fluxo eletrosmtico.
Na CEM o mecanismo de solutos neutros e fracamente
Aditivos para separaes quirais - As separaes ionizados essencialmente cromatogrfica. Assim, a
enantiomricas devem ser realizadas atravs da adio migrao do soluto e a resoluo podem ser representadas
140 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
em termos de fator de reteno do soluto (k), tambm no tempo de migrao dos solutos durante a separao
denominada de razo de distribuio de massa (Dm), que eletrofortica. A utilizao de um adequado sistema de
a relao entre nmero de moles do soluto no interior da refrigerao aumenta a reprodutibilidade do tempo de
micela e na fase mvel. Para uma substncia neutra, k pode migrao dos solutos.
ser calculado atravs da seguinte equao:
Capilar - As dimenses do capilar (comprimento e dimetro
interno) contribuem no tempo de anlise e na eficincia das
separaes. Um aumento do comprimento total e efetivo
do capilar pode diminuir a corrente eltrica (sob voltagem
constante), aumenta o tempo de migrao e melhora a
onde
eficincia de separao. O dimentro interno do capilar
tR = tempo de migrao do soluto; controla a dissipao do calor (em um dado eletrlito e
t0 = tempo de migrao de um soluto no retido (determinado corrente eltrica) e consequentemente o alargamento das
pela injeo de um marcador de fluxo eletrosmtico que bandas dos solutos.
no se liga micela, por exemplo, metanol);
tmc = tempo de migrao da micela (determinado pela Parmetros da soluo eletroltica
injeo de um marcador de micela, como Sudan III, o
qual migra continuamente associado micela ao longo da Natureza do tensoativo e concentrao - A natureza
migrao eletrofortica); do tensoativo, de forma anloga fase estacionria
K = coeficiente de partio do soluto; em cromatografia, afeta a resoluo, pois modifica a
VS = volume da fase micelar; seletividade da separao. O log k de uma substncia neutra
VM = volume da fase mvel; aumenta linearmente com a concentrao do tensoativo na
fase mvel. Visto que a resoluo em CEM alcana um
5
Igualmente, a resoluo entre 2 picos adjacentes (Rs) mximo quando k apresenta valor prximo
dada por:
t mc t 0
modificaes na concentrao de tensoativo presente na
fase mvel determinam alteraes na resoluo das bandas.
QUANTIFICAO
onde:
As reas dos picos devem ser divididas pelo tempo de
tR1 e tR2 = tempos de migrao ou distncias da linha de
migrao correspondente para fornecer a rea correta com
base a partir do ponto de injeo at a linha perpendicular
o objetivo de:
do ponto mximo de dois picos adjacentes
- compensar o deslocamento no tempo de migrao entre
corridas, reduzindo assim a variao da resposta;
wh1 e wh2 = largura dos picos meia altura
Proporo sinal : rudo das fases estacionrias quirais para resoluo de frmacos
racmicos.
Os limites de deteco e quantificao correspondem
razo sinal : rudo de 3 e 10, respectivamente. A CLAE considerada uma das tcnicas mais eficientes
para separao, deteco e quantificao de frmacos. O
A proporo sinal : rudo (S/N) calculada usando a uso de fase estacionria quiral (FEQ) adequada torna-se
expresso: um poderoso mtodo para a separao dos enantimeros.
5
Esses fatos dificultam o desenvolvimento do processo
5.2.23 ANLISE automatizado para grande nmero de amostras. Alm
disso, a pureza enantiomrica dos agentes derivatizantes
ENANTIOMRICA importante para evitar falsos resultados. Outra limitao
so as diferentes velocidades e/ou constantes de reao para
os enantimeros j que os estados de transio reacionais
FRMACOS QUIRAIS so diastereoisomricos o que pode resultar em proporo
diferente da composio enantiomrica inicial.
Os enantimeros geralmente exibem diferentes
propriedades farmacolgicas e toxicolgicas devido No mtodo direto, a mistura de enantimeros a ser
aos principais alvos moleculares como protenas, resolvida injetada diretamente no cromatgrafo. Para a
cidos nucleicos e polissacardeos serem quirais. Por separao dos enantimeros pode-se utilizar uma FEQ, ou
exemplo, os enantimeros do ter metlico do levorfanol, um solvente quiral, ou uma fase mvel com aditivo quiral.
o dextrometorfano e o levometorfano, so utilizados A resoluo ocorre devido formao de complexos
diferentemente na teraputica. Enquanto o dextrometorfano diastereoisomricos entre a mistura enantiomrica e o
indicado como antitussgeno, o levometorfano indicado seletor quiral utilizado para a resoluo. O uso de FEQ
como analgsico. hoje o mtodo mais empregado para resoluo por CLAE.
Devido ao reconhecimento da importncia do uso clnico Nas tabelas a seguir (Tabelas 1, 2, 3, 4 e 5) so apresentadas
de frmacos enantiomericamente puros no tratamento as principais classes de fases estacionrias utilizadas para
de diversas doenas, as indstrias farmacuticas so a resoluo de misturas racmicas e alguns exemplos de
incentivadas constantemente a disponibilizar frmacos seletores quirais em cada classe. Consultar o fabricante
resolvidos em quantidades industriais. para a indicao do uso de cada seletor.
Para garantir a segurana e a eficincia dos frmacos Tabela 1 - Fases estacionrias quirais do tipo Pirkle.
disponveis e em desenvolvimento, necessrio resolver
os enantimeros e examinar cada um quanto s atividades Discriminador quiral*
farmacolgicas e toxicolgicas. Aps a identificao (R)-DNB-fenilglicina
do enantimero mais ativo (eutmero) deve-se avaliar o
(S)-DNB-fenilglicina
excesso enantiomrico do eutmero desde a sntese at o
consumo para garantir a qualidade do medicamento. (R)-DNB-leucina
(S)-DNB-leucina
SEPARAO E DETERMINAO ENANTIOMRICA Fosfonato de dimetila de DNB-a-amino-2,2-dimetil-4-
DE FRMACOS pentenila
DNB-tetraidrofenantreno
A separao, ou resoluo, de enantimeros por Naftiletilamida
cromatografia a lquido de alta eficincia (CLAE) comeou
a ser aplicada desde os anos sessenta. Nos anos setenta, ______________
com o aparecimento das colunas de pequenas partculas * A maioria das colunas do tipo Pirkle so disponveis nas duas formas
enantiomricas.
para cromatografia a lquido, iniciou-se o desenvolvimento
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 143
Tabela 2 - Fases estacionrias quirais do tipo protena. O on cloreto e o on amnio so algumas das principais
impurezas encontradas na gua e, tambm, influenciam na
Discriminador quiral sua condutividade. Esses ons externos podem ter impacto
a1-Glicoprotena cida significativo na pureza qumica da gua e comprometer a
sua utilizao em aplicaes farmacuticas.
Albumina srica bovina
Albumina srica humana As condutividades combinadas dos ons intrnsecos
Celobioidrolase I secos e dos ons externos variam em funo do pH e so
a base para as especificaes da condutividade descritas
Pepsina na tabela 3 e empregadas quando realizada a etapa 3 do
Ovomucoid teste. Duas etapas preliminares so includas neste teste.
Se as condies do teste e os limites de condutividade so
Tabela 3 - Fases estacionrias quirais do tipo cavidade ou incluso. atendidos em qualquer uma destas etapas preliminares
(Etapas 1 e 2), a gua satisfaz as exigncias deste teste e
Discriminador quiral no necessria a aplicao da Etapa 3. Somente no caso
da amostra no obedecer s exigncias da Etapa 3, a gua
-Ciclodextrina julgada como no conforme com os requerimentos do teste
b-Ciclodextrina de condutividade.
g-Ciclodextrina
O-(S)-2-Hidroxipropil-b-ciclodextrina INSTRUMENTAO E PARMETROS
O-(R/S) 2-Hidroxipropil-b-ciclodextrina OPERACIONAIS
O-(S)-Naftiletilcarbamoil-b-ciclodextrina A condutividade da gua deve ser medida usando
5
instrumentos calibrados com resoluo de 0,1 /cm. O
Tabela 4 - Fases estacionrias quirais do tipo carboidratos. termmetro deve ter divises de 0,1 C e cobrir a faixa de
23 a 27 C. Os eletrodos devem ser mantidos conforme a
Discriminador quiral recomendao do fabricante do aparelho.
Tris(dimetilfenilcarbamoil)celulose A constante de condutividade da clula um fator
Tris(4-metilbenzoato)celulose usado como multiplicador para os valores da escala do
Tris(fenilcarbamoil)celulose condutivmetro.
Triacetato de celulose Constante da clula: o valor deve ser conhecido em
Tribenzoato de celulose 2%. Geralmente clulas de condutividade apresentam
ter tribenzlico de celulose constante na ordem de 0,1 cm-1, 1 cm-1 e 2 cm-1. A
maioria dos equipamentos apresenta a constante da clula
Tricinamato de celulose
definida. necessrio aferir essa constante com soluo
de KCl de referncia descrita na Tabela 1. Normalmente
Tabela 5 - Fases estacionrias quirais do a verificao realizada utilizando somente uma soluo
tipo antibiticos macrocclicos. de referncia; nesse caso utilizar a soluo de referncia
de menor condutividade. Porm, recomendvel medir
Discriminador quiral periodicamente a condutividade dos demais padres e
Vancomicina observar a concordncia entre a leitura do condutivmetro
e o valor nominal de cada soluo de referncia.
Teicoplanina
Ristocetina Calibrao: conforme instrues do fabricante. A maioria
dos equipamentos de mltiplas escalas possui um nico
ponto calibrao, logo necessrio calibrar sempre que
5.2.24 CONDUTIVIDADE DA usar uma escala diferente. A leitura obtida deve estar entre
+ 0,1 mS/cm do valor nominal da soluo de referncia.
GUA
Para a calibrao do condutivmetro, utilizar as solues de
A condutividade eltrica da gua uma medida do fluxo referncias descritas a seguir.
de eltrons o qual facilitado pela presena de ons.
Soluo A (0,01 M): pesar exatamente 0,7455 g de cloreto
Molculas de gua dissociam-se em ons em funo do
de potssio seco a 105 C durante 2 horas, transferir para
pH e da temperatura resultando em uma determinada
balo volumtrico de 1000 mL e completar o volume com
condutividade. Alguns gases, em especial o dixido de
gua.
carbono, dissolvem-se em gua e interagem para formar
ons que afetam a condutividade e o pH da gua. Esses ons Soluo B (0,005 M): pipetar 50 mL da Soluo A para
e sua condutividade resultante podem ser considerados balo volumtrico de 100 mL e completar com gua.
como intrnsecos gua. A exposio da amostra
atmosfera pode alterar a condutividade/resistividade, Soluo C (0,001 M): pipetar 10 mL da Soluo A para
devido perda ou ganho de gases dissolvidos. balo volumtrico de 100 mL e completar com gua.
144 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Soluo D (0,0005 M): pipetar 5 mL da Soluo A para exigncias para a condutividade. Porm, se o valor medido
balo volumtrico de 100 mL e completar com gua. maior que o da tabela, proceder determinao de acordo
com a Etapa 2.
Soluo E (0,0001 M): pipetar 5 mL da Soluo A para
balo volumtrico de 500 mL e completar com gua. Tabela 2 - Valores limites para condutividade de
acordo com a temperatura (somente para valores de
Nota 1: para o preparo das solues acima utilizar condutividade sem compensao de temperatura).
sempre gua isenta de dixido de carbono, ou seja, com
condutividade inferior a 0,10 S.cm-1. Temperatura (C) Condutividade (/cm)
Nota 2: no utilizar compensao de temperatura e manter 0 0,6
as solues de referncia a 25 C durante a leitura. 5 0,8
10 0,9
Tabela 1 - Condutividade das solues
15 1,0
de cloreto de potssio (25C).
20 1,1
25 1,3
Concentrao Condutividade
Soluo 30 1,4
(mol/L) ( /cm)
35 1,5
A 0,01 1412 40 1,7
B 0,005 717,5 45 1,8
C 0,001 146,9 50 1,9
D 0,0005 73,9 55 2,1
E 0,0001 14,9 60 2,2
5 PROCEDIMENTO
65
70
75
2,4
2,5
2,7
O procedimento descrito a seguir estabelecido para 80 2,7
medidas de gua purificada e gua para injetveis. 85 2,7
Alternativamente, a Etapa 1 pode ser realizada (com 90 2,7
modificaes apropriadas de acordo com o item 1 da Etapa 95 2,9
1) usando-se instrumentao do tipo em linha que tenha
100 3,1
sido calibrada apropriadamente, cujas constantes de clula
tenham sido exatamente determinadas e cujas funes de
compensao de temperatura tenham sido desabilitadas. Etapa 2
A adequabilidade de tais instrumentos em linha para
1 Transferir quantidade suficiente de gua (100 mL ou
testes de controle de qualidade tambm dependente
mais) para recipiente apropriado e agitar a amostra. Ajustar
da localizao no sistema de gua. Evidentemente, o
a (25 1) C e agitar a amostra vigorosamente observando
posicionamento do instrumento precisa refletir a qualidade
periodicamente a leitura do condutivmetro. Quando a
da gua que ser usada.
mudana na condutividade devido absoro de dixido
de carbono atmosfrico menor que 0,1 /cm por 5
Etapa 1 minutos, registrar a condutividade.
1 Enxaguar a clula com pelo menos trs pores da 2 Se a condutividade no maior que 2,1 /cm, a gua
amostra. obedece s exigncias para o teste de condutividade. Se a
condutividade maior que 2,1 /cm, proceder conforme
A determinao deve ser realizada em recipiente apropriado a Etapa 3.
ou como determinao em linha. O valor obtido deve ser
inferior a 1,3 S/cm, na temperatura de 25,0 C + 0,1C.
Etapa 3
3 Na Tabela 2, localizar o valor de temperatura mais
prximo e menor que a temperatura na qual a condutividade Realizar este teste no mximo 5 minutos aps a Etapa 2 com
foi medida. O valor de condutividade correspondente a a mesma amostra mantendo a temperatura da amostra a (25
essa temperatura o limite. (No interpolar) 1) C. Adicionar soluo saturada de cloreto de potssio
(0,3 mL para 100 mL de amostra) e determinar o pH com
4 Se o valor de condutividade medido no maior que preciso de 0,1 unidade de acordo com Determinao do
o valor correspondente na Tabela 2, a gua atende s pH (5.2.19). Utilizando a Tabela 3 determinar o valor
limite para a condutividade de acordo com o pH.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 145
5
etanlico das misturas de gua e lcool etlico. simultaneamente a massa do analito. Em certos casos, o
aparelho pode ser associado a um sistema que possibilita
O ttulo alcoomtrico volumtrico de uma mistura de gua
detectar e analisar os produtos volteis.
e lcool expresso pelo nmero de volumes de etanol a
20 C contido em 100 volumes dessa mistura a mesma Calibrao e/ou aferio da termobalana. Transferir uma
temperatura. expresso em % (v/v). quantidade adequada de oxalato de clcio monoidratado
SQR no porta-amostra. A termobalana indicar com
O ttulo alcoomtrico ponderal expresso pela relao
grande preciso e exatido a sua massa. Empregar a razo
entre a massa de etanol contida em uma mistura de gua e
de aquecimento de 10 oC/min e aquecer a amostra at 900
etanol e a massa total dessa. expresso em % (m/m). o
C. Ao finalizar o processo trmico registrar: i) a curva
O lcool etlico contm, no mnimo, 95,1% (v/v) termogravimtrica (TG) marcando a temperatura no eixo
correspondendo a 92,55% (m/m) e, no mximo, 96,9% das abscissas (valores crescentes da esquerda para a direita)
(v/v) correspondendo a 95,16% (m/m) de C2H6O a 20 C. e a massa percentual da amostra no eixo das ordenadas
O lcool etlico absoluto contm, no mnimo, 99,5% (v/v) (valores crescentes de baixo para cima); ii) a curva
correspondendo a 99,18% (m/m) de C2H6O a 20 C. Esses termogravimtrica derivada (DTG), derivada primeira da
valores podem ser observados na tabela alcoomtrica curva TG, que possibilita definir melhor onde se iniciou
(Anexo D). e finalizou a perda de massa. Determine no grfico a
distncia entre os patamares inicial e final da curva massa-
temperatura, distncia que representa a perda de massa da
Determinao do Grau Alcolico ou Ttu- amostra no dado intervalo de temperatura. As perdas de
lo Alcoomtrico massas declaradas do oxalato de clcio monoidratado SQR
O alcometro centesimal se destina determinao do grau so calculadas, estequiometricamente, a partir das trs
alcolico das misturas de gua e lcool indicando somente etapas de perdas de massas devido s sucessivas liberaes
a concentrao do lcool em volume e expresso pela sua de: a) H2O; b) CO; c) CO2. A verificao da escala da
unidade de medida, grau Gay-Lussac (G.L.). temperatura pode ser realizada utilizando a tcnica do
gancho metlico fundvel (In, Pb, Zn, Al, Ag e Au) de
As determinaes do alcometro so exatas somente para a acordo com as indicaes do fabricante.
mistura de gua e lcool a 20 C, na qual o instrumento foi
graduado. Se a temperatura durante o ensaio for inferior ou Procedimento
superior a 20 C torna-se necessrio corrigir a temperatura
do lcool para 20 C. Utilizar o mesmo mtodo descrito para calibrao e/
ou aferio adicionando uma quantidade adequada de
A determinao do grau alcolico das misturas de agua em amostra. As curvas TG e DTG ilustradas na Figura 1
volume realizada pelo alcometro. indicam uma etapa de perda de massa da amostra. Na curva
Para a determinao do grau alcolico das misturas de DTG, observa-se que entre os pontos ab situa-se o patamar
gua e lcool em massa, pode ser utilizado o mtodo da inicial. A perda de massa se inicia no ponto b e finaliza-se
densidade relativa ou verificada a graduao na tabela no ponto c. Entre os pontos cd situa-se o patamar final.
alcoomtricaaps a determinao pelo alcometro. O intervalo bc corresponde ao intervalo reacional. Para
calcular a perda de massa da amostra na curva TG, utiliza-
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 147
se a comparao com a curva DTG para maior preciso na controlado de temperatura. A amostra e o material de
localizao dos pontos b e c. Traar os prolongamentos dos referncia so mantidos a aproximadamente a mesma
patamares inicial e final da curva TG no eixo das ordenadas temperatura durante o experimento. Podem-se determinar
utilizando os pontos b e c. A distncia medida corresponde as variaes de entalpia; as mudanas de calor especfico
perda de massa (Dm) da amostra. As projees dos pontos e a temperatura de eventos endo e exotrmicos. De acordo
b e c no eixo de abscissas correspondem, respectivamente, com o mtodo de medio utilizado, h duas modalidades:
temperatura inicial (Ti) e final (Tf) da perda de massa. o DSC com compensao de potncia e o DSC com fluxo
Registrar o resultado em percentagem da relao m/m. de calor.
5
Calibrao e/ou aferio do apareIho. Calibrar o aparelho
para o eixo de temperatura e de fluxo de calor utilizando
ndio metlico de alta pureza ou qualquer outro material
certificado apropriado de acordo com as indicaes do
fabricante. Para o ajuste da linearidade, utiliza-se uma
combinao de dois metais como o ndio e o zinco para a
aferio do eixo de temperatura.
PROCEDIMENTO
5
de transio vtrea; avaliao de polimorfismo, construo
de diagrama de fases, determinao da pureza (exceto as
substncias amorfas, os polimorfos instveis na faixa da
Substituindo os valores experimentais obtidos para To - Tm,
temperatura experimental, os compostos que fundem
Hf e To na equao 1 possvel calcular a frao molar
com decomposio trmica e as substncias que possuem
das impurezas na amostra.
pureza inferior a 95%).
Massa em g da Diminuio
Osmolalidade real Osmolalidade ideal Coeficiente
soluo de Cloreto de crioscpica (C)
(mosmol/kg) (mosmol/kg) osmtico molal
sdio por kg de gua
3,087 100 105,67 0,9463 0,186
6,260 200 214,20 0,9337 0,372
9,463 300 323,83 0,9264 0,558
12,684 400 434,07 0,9215 0,744
15,916 500 544,66 0,9180 0,930
19,147 600 655,24 0,9157 1,116
22,380 700 765,86 0,9140 1,302
Para avaliar o grau de pureza dos cidos graxos separados 5.2.29.6 DETERMINAO DE GUA
pelo procedimento anterior, transferir, previamente ao
congelamento, 3 mL da soluo de cidos graxos dessecados
Proceder conforme descrito em Mtodo volumtrico
para tubo de ensaio e adicionar 15 mL de etanol. Aquecer a
(5.2.20.1).
soluo at fervura e juntar 15 mL de hidrxido de amnio
6 M. A preparao resultante deve ser lmpida.
5.2.29.7 NDICE DE ACIDEZ
PROCEDIMENTO
O ndice de acidez, IA, expressa, em miligramas, a
Proceder conforme descrito em Determinao da
quantidade necessria de hidrxido de potssio para a
temperatura de congelamento (5.2.4).
neutralizao dos cidos graxos livres em 1 g de amostra.
5 ndice de refrao .
Se for utilizada luz branca para a determinao do n = volume (em mL) de hidrxido de potssio 0,1 M gasto
ndice de refrao, o refratmetro possui um sistema de na titulao
compensao. O aparelho dever fornecer leituras exatas m = massa de amostra em gramas.
at a terceira casa decimal, no mnimo, e possuir um
dispositivo que possibilite operar temperatura prescrita:
5.2.29.8 DETERMINAO DO NDICE DE
o termmetro possibilita a leitura com a aproximao de,
pelo menos, 0,5 C. SAPONIFICAO
Salvo indicao na monografia especfica, utilizar a sob as condies descritas a seguir. Constitui medida
quantidade de amostra indicada na Tabela 1. quantitativa do grau de insaturaes dos cidos graxos,
esterificados e livres, na amostra. O Ii valor encontrado na
Tabela 1 Quantidade de amostra para determinao sugestivo do grau de pureza do material
determinar o ndice de saponificao. ensaiado bem como da presena de adulterantes. A
substituio do Mtodo A pelo Mtodo B deve ser objeto
Quantidade de de uma validao.
Valor esperado de IS
amostra (g)
3 - 10 12 - 15
10 - 40 8 - 12 MTODO A
40 - 60 5-8 Salvo indicao na monografia especfica, utilizar a
60 - 100 3-5 quantidade de amostra indicada na Tabela 1.
100 - 200 2,5 - 3
200 - 300 1-2 Tabela 1 Quantidade de amostra para
300 - 400 0,5 - 1 determinao do ndice de iodo.
Pesar, colocada em balo de 250 mL, a quantidade de ndice esperado Ii Quantidade de amostra
amostra indicada (m), adicionar 25,0 mL de soluo Inferior a 20 1,0
metanlica de hidrxido de potssio 0,5 M e algumas 20 60 0,5 0,25
pedras de ebulio. Adaptar o condensador de refluxo 60 100 0,25 0,15
vertical. Aquecer em banho-maria durante 30 min, salvo Superior a 100 0,15 0,10
em indicao especfica. Acrescentar 1 mL de soluo
de fenolftalena e titular, imediatamente, o excesso de
5
Em recipiente de 250 mL, munido de rolha esmerilhada,
hidrxido de potssio com soluo de cido clordrico 0,5 seco, ou lavado com cido actico glacial, introduzir a
M (mL). Efetuar ensaio em branco nas mesmas condies amostra (m g) e dissolv-la em 15 mL de clorofrmio,
e corrigir o volume do titulante (n2 mL). salvo em indicaes especificadas na respectiva
Calcular o ndice de saponificao (IS), utilizando a monografia. Acrescentar 25,0 mL de soluo de brometo
expresso: de iodo. Tampar o recipiente e conserv-lo sob proteo
da luz durante 30 min, agitando-o, frequentemente. Aps
adio de 10 mL de soluo de iodeto de potssio a 100
g/L e 100 mL de gua, titular com tiossulfato de sdio 0,1
M agitando, energicamente, at que a colorao amarela
5.2.29.9 DETERMINAO DO NDICE DE quase tenha desaparecido. Juntar 5 mL de soluo de
STERES amido e continuar a titulao, adicionando o tiossulfato de
sdio 0,1 M, gota a gota, agitando, at o desaparecimento
O ndice de steres, IE, expressa a quantidade de hidrxido da colorao (n2 mL). O teste em branco deve ser realizado
de potssio, em miligramas, necessria para a saponificao nas mesmas condies e sem a amostra (n1 mL).
dos steres presentes em 1 g de amostra. O IE calculado a
Calcular o ndice de iodo pela expresso:
partir do ndice de saponificao IS e do ndice de acidez IA,
conforme a equao:
IE = IS IA
Em recipiente de 250 mL com rolha esmerilada, previamente min, exatamente, e adicionar 30 mL de gua. Titular com
lavado com cido actico glacial ou seco, introduzir a tiossulfato de sdio 0,01 M, adicionando, lentamente, sem
No caso do ndice de perxido for igual ou superior a 70, e Tabela 1 Quantidade de amostra e
ocorrendo retardo na mudana de cor do indicador amido volume do reagente acetilante.
de 15 a 30 s, agitar, vigorosamente, at o desaparecimento
da colorao amarela. Isso devido tendncia do Volume de
trimetilpentano sobrenadar na fase aquosa e ao tempo Quantidade de reagente (de
necessrio para obter uma mistura adequada entre o IOH esperado
amostra (g) acetilao) em
solvente e o titulante aquoso. mililitros
Para ndices de perxido inferiores a 150, utiliza-se 10 - 100 2,0 5,0
tiossulfato de sdio 0,01 M. Pode adicionar-se mistura uma 100 - 150 1,5 5,0
pequena quantidade (0,5 a 1,0% (m/m)) de emulsificante 150 - 200 1,0 5,0
apropriado, para retardar a separao das fases e diminuir o 200 - 250 0,75 5,0
tempo de liberao do iodo (por exemplo, polissorbato 60). 250 - 300 0,6 ou 1,20 5,0 ou 10
Efetuar um ensaio em branco (v0 mL). Se for consumido, 300 - 350 1,0 10,0
mais de 0,1 mL de tiossulfato de sdio 0,01 M, substituir 350 - 700 0,75 15,0
os reagentes e repetir a titulao. O ndice de perxido 700 - 950 0,5 15,0
calculado pela frmula a seguir.
Aquecer em banho-maria durante 1 h, cuidando para
manter o nvel da gua do banho cerca de 2,5 cm acima do
nvel do lquido contido no balo. Retirar o balo e deix-lo
arrefecer. Adicionar 5 mL de gua atravs da extremidade
em que: superior do condensador. Se a adio da gua originar uma
turvao, acrescentar piridina at o desaparecimento da
5
c = concentrao da soluo de tiossulfato de sdio em
turvao e anotar o volume adicionado. Agitar, aquecer
moles por litro.
novamente o balo em banho de gua durante 10 min.
Tabela 1 - Quantidade de amostra para Retirar o balo e deix-lo arrefecer. Lavar o condensador
determinao do ndice de perxido e as paredes do balo com 5 mL de lcool, previamente
neutralizado em presena de soluo de fenolftalena.
Valor esperado de Ip Quantidade de amostra (g) Titular com soluo alcolica de hidrxido de potssio
0,5 M, em presena de 0,2 mL de soluo de fenolftalena
0 12 2,00 5,00
SI (n1 mL). Realizar um ensaio em branco, nas mesmas
12 20 1,20 2,00 condies (n2 mL).
20 30 0,80 1,20
30 50 0,500 0,800 Calcular o ndice de hidroxila utilizando a expresso:
50 90 0,300 0,500
viragem para verde esmeralda (n1 mL). Realizar um ensaio 5.2.29.14 DETERMINAO DE
em branco nas mesmas condies (n2 mL). SUBSTNCIAS INSAPONIFICVEIS
Calcular o ndice de hidroxila utilizando a expresso:
Substncias insaponificveis so aquelas remanescentes
reao de saponificao, no volteis a 100 - 105 C e que
foram carreadas no processo de extrao da substncia a
ensaiar.
em que
Se a monografia especfica no indicar o procedimento,
IA = ndice de acidez utilizar o Mtodo I. Utilize material de vidro com boca
esmerilhada e desengordurado.
Pela possibilidade de haver presena de gua, determinar o
teor de umidade (y por cento) na amostra segundo o mtodo
especfico. O ndice de hidroxila obtido pela equao: MTODO I
IOH = (ndice encontrado) - 31,1y Adicionar 2,0 - 2,5 g da amostra em balo de 250 mL.
Adicionar 25 mL de hidrxido de potssio etanlico 0,5 M.
Acoplar um condensador de refluxo ao balo e ferver em
5.2.29.13 DETERMINAO DO NDICE banho-maria por 1 hora, sob agitao. Transferir o contedo
DE ACETILA do balo para funil de separao, usando 50 mL de gua e,
enquanto o lquido inda estiver morno, extrair, mediante
agitao vigorosa, com trs quantidades de 50 mL de ter
O ndice de acetila a quantidade de lcali, em mg de isento de perxidos. Lavar o balo com a primeira alquota
hidrxido de potssio, necessria para a neutralizao do
5
de ter. Misturar as solues etreas em funil de separao
cido actico liberado pela hidrlise de 1 g de substncia contendo 20 mL de gua. (Se as solues etreas contm
acetilada. usado para estabelecer o grau de presena de slidos em suspenso, filtrar para o funil de separao
lcoois livres em substncias graxas. calculado com base atravs de um filtro de papel livre de gordura. Lavar o
na diferena entre os ndices de saponificao da substncia filtro com ter livre de perxido). Agitar, cuidadosamente,
acetilada pela tcnica descrita a seguir e da substncia no e descartar a fase aquosa. Lavar a frao orgnica, com
acetilada. duas pores de 20 mL de gua. Em seguida, adicionar
trs quantidades de 20 mL de hidrxido de potssio 0,5 M
PROCEDIMENTO e agitar, vigorosamente, em cada uma das adies. Aps
cada tratamento deve ser realizada lavagem com 20 mL
Transferir 10 g de substncia e 20 mL de anidrido actico de gua. Finalmente, lave com quantidades sucessivas de
para balo Kjeldahl de 200 mL de capacidade. Adaptar 20 mL de gua at que a fase aquosa no mostre reao
o condensador de refluxo. Apoiar o frasco sobre tela de alcalina em presena de fenolftalena. Transferir a frao
amianto em cujo centro tenha sido cortado orifcio de cerca orgnica para um balo previamente tarado, lavando o funil
de 4 cm de dimetro e aquecer sobre chama de bico de gs de separao com ter isento de perxidos. Eliminar o ter
com altura mxima de 25 mm (evitando que a chama alcance e adicionar 3 mL de acetona ao balo. Eliminar o solvente
a base do balo). Manter em ebulio regular durante 2 por completo at constante a temperatura no superior a
horas, resfriar e transferir o contedo do balo para bquer 80 C. Dissolver o contedo do balo em 10 mL de etanol
de 1000 mL contendo 600 mL de gua. Adicionar 0,2 g de recentemente fervido (96%) e previamente neutralizado.
p de pedra pomes e ferver durante 30 minutos. Resfriar Titular com hidrxido de sdio etanlico 0,1 M e soluo
e transferir a mistura para funil de separao, rejeitando a de fenolftalena como indicador. Se o volume de soluo
camada aquosa inferior. Lavar a substncia acetilada com titulante gasto no exceder 0,1 mL, a quantidade de resduos
trs ou mais pores de 50 mL de soluo saturada quente pesados, deve ser tomado como matria insaponificvel.
de cloreto de sdio, at que a soluo de lavagem no mais Calcular a matria insaponificvel como uma porcentagem
fornea reao cida ao papel de tornassol. Adicionar, da substncia a ser examinada. Se o volume de titulante
ainda, 20 mL de gua quente ao funil e agitar, removendo, gasto exceder 0,1 mL, a quantidade de resduos pesados
em seguida, o mais completamente possvel, a fase aquosa. no podem ser tomadas como a matria insaponificvel e
Transferir a substncia para cpsula de porcelana, adicionar do teste deve ser repetido.
1 g de sulfato de sdio pulverizado e filtrar atravs de papel
de filtro pregueado. Determinar o ndice de saponificao
da substncia original, no acetilada, e da substncia MTODO II
acetilada pelo procedimento descrito e calcular o ndice de Num balo de 250 mL, acoplado em sistema de condensao
acetila pela frmula: por refluxo, introduzir a quantidade prescrita (m g) da
amostra. Juntar 50 mL de soluo alcolica de hidrxido
de potssio 2 M e aquecer em banho-maria, durante 1 h
sob agitao. Aps arrefecer a temperatura inferior a 25
em que C, transfirir o contedo do balo para funil de separao.
Adicionar 100 mL de gua. Adicionar 100 mL de ter isento
a = ndice de saponificao da substncia original,
b = ndice de saponificao da substncia acetilada.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 155
5.2.29.15.1 Identificao dos leos vegetais por 5.2.29.15.3 leos estranhos em leos vegetais
cromatografia em camada delgada por cromatografia em camada delgada
Fase fixa: gel de slica octadecilsilanizada (RP-18). Proceder por cromatografia em camada delgada (5.2.17.1),
utilizando placa (kieselguhr G). Impregnar a placa,
Soluo amostra. Salvo indicao em monografia colocando-a numa cmara fechada contendo a quantidade
especfica, dissolver cerca de 20 mg (1 gota) da amostra necessria da mistura de ter etlico e parafina lquida
em 3 mL de diclorometano. (90:10; v/v) de forma a que a superfcie do lquido atinja
Soluo padro. Dissolver cerca de 20 mg (1 gota) de leo cerca de 5 mm da camada de adsorvente. Quando a mistura
de milho em 3 mL de diclorometano. de impregnao tiver percorrido, pelo menos, 12 cm da
camada, retirar a placa da cmara e deixar evaporar o
Procedimento. Aplicar, separadamente, 1 L de cada solvente durante 5 min. Desenvolver na mesma direo da
soluo na placa. Desenvolver duas vezes na distncia de impregnao.
0,5 cm com ter. Em seguida, desenvolver duas vezes a
distncias de 8 cm com mistura de diclorometano, cido Preparao da mistura de cidos graxos. Aquecer sob
actico glacial com acetona (2:4:5). Deixar a placa secar ao refluxo, durante 45 min, 2 g da amostra com 30 mL de
ar e nebulizar com soluo de cido fosfomolbdico a 100 soluo alcolica de hidrxido de potssio 0,5 M. Juntar
g/L em lcool. Aquecer a placa a 120 C durante cerca de 3 50 mL de gua, deixar arrefecer. Transferir para funil de
min. Examinar luz do dia. separao. Agitar trs vezes com 50 mL de ter etlico de
cada vez. Rejeitar as solues etreas. Acidificar a fase
O cromatograma apresenta manchas comparveis s aquosa com cido clordrico e agitar trs vezes com 50 mL
reproduzidas na Figura 1. de ter etlico de cada vez. Rena as solues etreas e lave-
as trs vezes com 10 mL de gua de cada vez. Rejeitar as
guas de lavagem. Adicionar sulfato de sdio anidro frao
156 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
etrea e filtrar. Evaporar o ter em temperatura inferior a 50 mL de metanol anidro e 0,2 mL de soluo de hidrxido
C. Utilizar o resduo para preparar a soluo problema. de potssio a 60 g/L em metanol. Adaptar o condensador e
fazer passar uma corrente de nitrognio com fluxo de cerca
Os cidos graxos podem, tambm, ser obtidos a partir da de 50 mL/min at eliminao do ar. Agitar e aquecer
soluo saponificada resultante da reao de determinao ebulio. Quando a preparao ficar lmpida (normalmente
de insaponificveis. cerca de 10 min depois), aquecer por mais 5 min. Arrefecer
em gua corrente e transfirir para um funil de separao.
Soluo amostra. Dissolver 40 mg da mistura de cidos
Lavar o balo com 5 mL de heptano, adicionar ao contedo
graxos obtidos da amostra em 4 mL de clorofrmio.
do funil de separao e agitar. adicionar 10 mL de soluo
Soluo padro. Dissolver, em 4 mL de clorofrmio, 40 de cloreto de sdio a 200 g/L e agitar vigorosamente.
mg da mistura de cidos graxos obtidos a partir de uma Deixar separar as fases e transfirir a fase orgnica para um
mistura de 19 volumes de leo de milho e 1 volume de balo contendo sulfato de sdio anidro. Deixar em repouso
leo de canola. e filtrar.
Procedimento. Aplicar, separadamente, na placa, 3 L de Soluo padro (a). Preparar 0,50 g de mistura de
cada soluo. Desenvolver o cromatograma com mistura substncias de referncia, conforme prescrito na monografia
de cido actico glacial: gua (90:10 v/v) por percurso especfica. Se a monografia no indicar a soluo padro,
de 8 cm. Secar a placa a 110 C durante 10 min. Deixar utilize uma das que so descritas na Tabela 1. Dissolver
arrefecer. Introduzir a placa, salvo indicao em contrrio, em heptano e diluir a 50,0 mL com o mesmo solvente.
em cuba de cromatografia saturada de vapores de iodo. Observao: Para cromatografia em coluna capilar e razo
Para tal, coloque iodo em cristalizador, de forma baixa, de split recomendado que o componente com cadeia
no fundo da cuba. Aps certo tempo, aparecem manchas longa da mistura em anlise seja adicionado mistura de
castanhas ou amarelas acastanhadas. Retirar a placa da calibrao, quando a anlise quantitativa for realizada por
substncia em anlise, elevar a temperatura da coluna com o cromatograma obtido da Soluo padro (a) e
de 170 a 230 C com rampa de aquecimento de 3 C por informaes registradas nas Tabelas 1, 2, ou 3:
minuto (coluna com macrogol 20 000).
a) medir o tempo de reteno reduzido (tR) de cada pico
- injetor: 250 C; obtido da Soluo padro (a). O tR o tempo de reteno
- detector: 250 C; medido em relao ao pico do solvente e no em relao ao
tempo da injeo. Traar a reta por meio da equao:
Volume de injeo: 1 L;
Log (tR) = f (nmero de carbonos da cadeia equivalente)
Sensibilidade: A altura do pico principal no cromatograma
obtido com a Soluo de padro (a) de 50 a 70% da b) os logaritmos dos tempos de reteno reduzidos
escala total do registrador. dos cidos insaturados so pontos da reta com valores
no inteiros de tomos de carbono denominados de
comprimento equivalente de cadeia. O comprimento
Adequao do sistema quando forem utilizadas as misturas
equivalente de cadeia corresponde ao nmero terico de
de substncias referncia (Tabela 2).
tomos de carbonos de cidos graxos saturados que teriam
Observao. Para cromatografia em coluna capilar e razo o mesmo tR. Por exemplo, o cido linoleico possui tR
de split recomendado que o componente com cadeia como cido graxo teoricamente saturado com 18,8 tomos
longa da mistura em anlise seja adicionado mistura de de carbono. Identificar os picos do cromatograma obtido
calibrao, quando a anlise quantitativa for realizada por com a soluo teste por curva de calibrao e pelo tempo
curva de calibrao. de reteno reduzido. Comprimentos de cadeia esto
registrados na Tabela 4.
- resoluo: no mnimo, de 4 entre os picos de caprilato
de metila e caprato de metila, calculados no cromatograma
5
Anlise quantitativa
obtido com a Soluo padro (a);
- razo sinal/rudo: no mnimo, 5 para o pico referente ao Geralmente, a quantificao realizada usando o mtodo
caprato de metila, observado no cromatograma obtido pela de normalizao, no qual a soma das reas sob os picos
anlise da Soluo padro (b); do cromatograma, com exceo do pico do solvente,
- nmero de pratos tericos: mnimo de 15000, calculado considerada como sendo igual a 100%. Utilizar,
para o pico correspondente ao caproato de metila. preferencialmente, um integrador eletrnico.
Tabela 3 Mistura de substncias para calibrao. durante cerca de 5 min. Adicionar 3 mL de gua destilada
e agitar energicamente, durante cerca de 30 s. Centrifugar
Mistura de substncias Composio (% m/m) durante 15 min a 1500 g. Injetar 1 L da fase orgnica.
Miristato de metila 5 Solues padro e avaliao dos cromatogramas. Na
Palmitato de metila 10 ausncia de indicao especfica na monografia individual,
Estearato de metila 15 proceda conforme descrito em Mtodo A.
Araquidato de metila 20
Oleato de metila 20 Condies cromatogrficas. A cromatografia pode ser
Eicosanoato de metila 10 realizada, utilizando:
Behenato de metila 10
coluna de slica fundida de 30 m de comprimento e 0,25
Lignocerato de metila 10 mm de dimetro interno, recoberta com macrogol 20 000
(espessura da pelcula: 0,25 m);
Tabela 4 - Comprimento equivalente de cadeia gs de arraste: hlio para cromatografia, com fluxo 0,9
(valores calculados a partir de curva de calibrao mL/min;
e anlise com coluna de macrogol 20000). detector de ionizao de chama;
razo de split 1:100
Comprimento de
cido graxo Utilizar a programao de temperatura representada na
cadeia equivalente
cido caproico 6,0 Tabela 1.
cido caprlico 8,0
Tabela 1 - Programao de temperatura para cromatografia.
cido cprico 10,0
cido lurico 12,0
5
Tempo (minutos) Temperatura (C)
cido misrstico 14,0
cido palmtico 16,0 Coluna 0 15 100
cido palmitoleico 16,3 15 36 100 225
cido margrico 17,0 36 61 225
cido esterico 18,0 Injetor 250
cido oleico 18,3 Detector 250
cido linoleico 18,8
cido gama-linolnico 19,0
cido alfa-linolnico 19,2 MTODO C
cido araquidico 0,0 Esse mtodo no se aplica aos leos que contenham
cido eicosanoico 20,2 glicerdeos de cido graxos com grupos epoxi, hidroperoxi,
cido araquidnico 21,2 aldedo, cetona, ciclopropilo e ciclopropenilo, bem como,
cido behnico 22,0 aos leos com grupos polinsaturados conjugados ou com
cido ercico 22,2 grupos acetilnicos por causa da destruio parcial ou total
cido 12-oxoesterico 22,7 desses grupos.
cido ricinolico 23,9
cido 12-hidroxiesterico 23,9 Soluo problema. Em frasco cnico de 25 mL, dissolver
0,10 g da amostra em 2 mL de soluo de hidrxido de
Lignocerato de metila 24,0
sdio a 20 g/L em metanol. Adaptar o frasco ao condensador
cido nervnico 24,2
de refluxo vertical e aquecer durante 30 min. Atravs do
condensador, adicionar 2,0 mL de soluo metanlica
de trifluoreto de boro e aquecer durante 30 min. Atravs
MTODO B
do condensador, adicionar 4 mL de heptano e aquecer
Esse mtodo no se aplica aos leos que contenham durante 5 min. Arrefecer a mistura e adicionar 10,0 mL de
glicerdeos de cido graxos com grupos epoxi, hidroepoxi, soluo saturada de cloreto de sdio. Agitar durante 15 s e
ciclopropilo ou ciclopropenilo, nem aos leos cujo ndice adicionar uma quantidade de soluo saturada de cloreto
de cido seja superior a 2,0. de sdio suficiente para fazer a fase superior chegar ao
colo do frasco recipiente. Retirar alquota de 2 mL da fase
Soluo problema. Introduzir 0,100 g da amostra em tubo superior. Lavar trs vezes com 2 mL de gua de cada vez e
de centrfuga de 10 mL com rolha esmerilhada. Dissolver secar com sulfato de sdio anidro.
com 1 mL de heptano e 1 mL de dimetilcarbonato. Agitar
energicamente, aquecendo a calor brando (50 - 60 oC). Solues padro, condies cromatogrficas e avaliao
Adicionar 1 mL de soluo de sdio a 12 g/L em metanol dos cromatogramas. Na ausncia de indicao na
anidro soluo ainda quente. Agitar energicamente, monografia especfica, proceder conforme descrito em
Mtodo A.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 159
5
Arrefecer at temperatura inferior a 25 C e transferir o da mistura, recentemente preparada, de clorotrimetilsilano:
contedo do balo para um funil de separao, com o auxlio hexametildissilazano : piridina anidra (1:3:9; v/v/v)
de 100 mL de gua. Agitar, com precauo, trs vezes por miligrama de resduo. Agitar, cuidadosamente, at
com 100 mL de ter etlico isento de perxidos. Reunir as dissoluo completa dos esteris. Deixar em repouso em
fraes etreas em outro funil de separao com o auxlio dessecador com pentxido de difsforo durante 30 min.
de 40 mL de gua destilada. Agitar suavemente durante Centrifugar, se necessrio, e utilizar o sobrenadante.
alguns minutos. Deixar separar as fases por decantao e
rejeitar a fase aquosa. Lavar a fase orgnica vrias vezes Soluo padro (a). A nove partes dos esteris separados
com 40 mL de gua (a cada vez) at que a fase aquosa no do leo de canola por cromatografia em camada delgada,
apresente reao alcalina a fenolftalena. Transferir a frao juntar uma parte de colesterol. Adicionar 0,02 mL da
orgnica para um balo, tarado e lavar o funil de separao mistura, recentemente preparada, de clorotrimetilsila
com ter etlico. Evaporar o ter. Adicionar ao resduo 6 no:hexametildissilazano:piridina anidra (1:3:9; v/v/v)
mL de acetona. Eliminar, cuidadosamente, o solvente com por miligrama de resduo. Agitar, cuidadosamente, at
corrente de nitrognio. Secar em estufa a 100 - 105 C at dissoluo completa dos esteris. Deixar em repouso em
massa constante. Dissolver o resduo com volume mnimo dessecador com pentxido de difsforo durante 30 min.
de diclorometano. Centrifugar, se necessrio, e utilizar o sobrenadante.
Soluo amostra (b).Submeter 5,00 g de leo de canola Soluo padro (b). Aos esteris separados do leo
ao mesmo procedimento descrito para a Soluo amostra de girassol por cromatografia em camada delgada,
(a) a partir de Adicionar 50 mL de hidrxido de potssio juntar 0,02 mL da mistura, recentemente preparada,
alcolico 2 M.... de clorotrimetilsilano : hexametildissilazano : piridina
anidra (1:3:9; v/v/v) por miligrama de resduo. Agitar,
Soluo problema (c). Submeter 5,00 g de leo de girassol cuidadosamente, at dissoluo completa dos esteris.
ao mesmo procedimento descrito para a Soluo problema Deixar em repouso em dessecador com pentxido de
(a) a partir de Adicionar 50 mL de hidrxido de potssio difsforo durante 30 min. Centrifugar, se necessrio, e
alcolico 2 M.... utilizar o sobrenadante.
Consiste de um injetor, um equipamento para decompor Branco. Preparar a soluo do branco, ou quaisquer
a amostra, um sistema para separar o dixido de carbono outras solues necessrias para definir a linha de base, ou
formado, um detector e um registrador do sinal eltrico proceder calibrao, segundo as instrues do fabricante.
emitido. O tubo de decomposio deve ser capaz de gerar, Utilizar o branco apropriado para regular o zero do
no mnimo, 0,450 mg/L de carbono orgnico, para uma aparelho.
amostra de 1,071 mg/L de sacarose.
O limite de deteco do equipamento, especificado pelo Soluo padro. Dissolver a sacarose R, previamente
fabricante, igual ou inferior a 0,050 mg de carbono por dessecada em temperatura de 105 C durante 3 h, em gua
litro (0,05 ppm). A conformidade do sistema verificada, COT, de modo a obter uma soluo contendo 1,19 mg
periodicamente, por meio de uma soluo preparada com
uma substncia de difcil oxidao, como por exemplo, a
1,4-benzoquinona. A localizao do aparelho escolhida
de sacarose por litro (0,50 mg de carbono por litro), para
verificar o instrumento. 5
Utilizar soluo, em gua COT, de ftalato cido de
de modo a assegurar que os resultados obtidos sejam
potssio, previamente seco a 105 C durante 4 h, na
representativos da gua utilizada. A leitura deve ser feita
concentrao determinada pelo fabricante do equipamento,
imediatamente aps a coleta da amostra de gua.
para a calibrao do instrumento. Preservar a soluo,
acidificando com H3PO4 concentrado ou H2SO4 concentrado
GUA COT (ACOT) a pH < 2. Para determinar carbono orgnico e inorgnico,
separadamente, preparar, tambm, a soluo padro de
Utilizar gua de alta pureza, que satisfaa s seguintes soluo de bicarbonato de sdio (seco em dessecador, por
especificaes: no mnimo 18 horas) e carbonato de sdio decaidratado
- Condutividade: no mximo 0,1 S.cm1 a 25 C; (seco a 500 600 C por 30 minutos), na proporo do
contedo de carbono de 1:1, em gua COT.
- Carbono orgnico total - no mximo 0,10 mg/L.
A concentrao da soluo padro est calculada para a
Dependendo do tipo de equipamento utilizado os teores em gua purificada, cujo limite de COT de 500 ppb. Para
metais pesados e em cobre podem ser crticos. Observar as outros tipos de gua, fazer a devida adequao.
instrues do fabricante.
Soluo de conformidade do sistema. Dissolver
Utilizar a gua COT como branco; na preparao das 1,4-benzoquinona em gua COT, de modo a obter uma
solues do padro; de soluo de conformidade do soluo a 0,75 mg de 1,4-benzoquinona por litro (0,50 mg
sistema e na limpeza do equipamento. A preparao da de carbono por litro).
soluo padro e da soluo de conformidade do sistema
deve ser concomitante da amostra. Amostra. Coletar a amostra de gua em recipiente limpo;
seco e com tampa, deixando um mnimo de ar. Cuidar para
PREPARAO DO MATERIAL DE VIDRO. no haver qualquer tipo de contaminao. No utilizar
material de plstico. Proceder anlise o mais breve
Lavar, cuidadosamente, o material de vidro por meio de possvel, de modo a minimizar os riscos de deteriorao ou
um processo que elimine a matria orgnica. Deixar o de contaminao da amostra.
material imerso em mistura de partes iguais de soluo
de perxido de hidrognio diludo a 30% e cido ntrico CONFORMIDADE DO SISTEMA
diludo. Enxaguar com gua COT.
Proceder as leituras (L) das solues de gua COT
Caso use uma microseringa para injetar a amostra, essa (LCot), soluo padro (LPa), soluo de conformidade do
deve ser lavada com mistura de soluo de hidrxido de sistema (LCS) e registrar. Calcular a eficcia do sistema em
sdio a 5% com lcool etlico absoluto (1:1), ou em cido percentagem, usando a expresso:
clordrico a 25%. Enxaguar abundantemente com gua
COT.
162 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Amnio, on Bicarbonato
Juntar amostra excesso de hidrxido de sdio M a frio; 1) Tratar a amostra com cido mineral; produz-se
ocorre desprendimento de amnia, de odor caracterstico, e efervescncia com desprendimento de gs incolor que, ao
que muda para azul a cor vermelha do papel de tornassol. reagir com hidrxido de clcio SR, forma imediatamente
A decomposio acelerada pelo aquecimento. precipitado branco.
5
1) A uma soluo amoniacal da amostra adicionar sulfeto de dixido de enxofre, reconhecido por seu odor pungente
sdio SR e acidificar com cido clordrico diludo; forma- caracterstico e por escurecer papel de filtro umedecido
se precipitado amarelo, insolvel em cido clordrico, mas com nitrato de mercrio(I) SR.
solvel em solues alcalinas.
Benzoato Clcio, on
1) Tratar soluo neutra da amostra com cloreto frrico 1) Umedecer a amostra com cido clordrico e lev-la
SR; forma-se precipitado amarelo escuro, solvel em ter zona redutora da chama; aparece cor vermelho-alaranjada
etlico. transitria.
2) Acidular soluo moderadamente concentrada da 2) Dissolver a amostra, juntar duas gotas de vermelho
amostra com cido sulfrico M; forma-se precipitado de de metila SI, neutralizar com hidrxido de amnio 6 M,
cido benzico, facilmente solvel em ter etlico. acrescentar cido clordrico 3 M, gota a gota, at acidular
a soluo e verter oxalato de amnio SR; forma-se
164 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Cobre (II), on
Chumbo, on
1) Tratar a soluo da amostra com ferrocianeto de potssio
1) Tratar soluo da amostra com cido sulfrico M; forma-
SR; forma-se precipitado marrom-avermelhado, insolvel
se precipitado branco, insolvel em cido clordrico 3 M ou
em cidos diludos, mas solvel em hidrxido de amnio.
cido ntrico 2 M, mas solvel em hidrxido de sdio M
aquecido, em acetato de amnio a 10% (p/v) e em excesso 2) Tratar soluo da amostra com cido clordrico e
de cido sulfrico M. limalhas de ferro metlico; deposita-se pelcula vermelha
de cobre metlico.
2) Tratar soluo da amostra, isenta de cidos minerais,
com cromato de potssio SR; forma-se precipitado 3) Tratar soluo da amostra com excesso de hidrxido de
5
amarelo, insolvel em cido actico 6 M, mas solvel em amnio 6 M; forma-se primeiro precipitado azulado e, em
hidrxido de sdio M e em cido ntrico, a quente. seguida, soluo fortemente azulada.
Cianeto ster
Tratar soluo da amostra com sulfato ferroso SR, hidrxido Juntar amostra soluo de cloridrato de hidroxilamina a
de sdio SR e cloreto frrico SR, aquecer at ebulio e 7% (p/v) em metanol e soluo de hidrxido de potssio a
acidular com cido clordrico; produz-se colorao ou 10% (p/v) em etanol, aquecer at ebulio, resfriar, acidular
precipitado azul. Se a quantidade de cianeto presente for com cido clordrico SR e juntar soluo de cloreto frrico
pequena, forma-se soluo coloidal de colorao azul - SI; produz-se cor vermelho-azulada ou vermelha.
esverdeada.
Ferro
Citrato
Tratar a amostra com sulfeto de amnio SR; forma-se
A 15 mL de piridina adicionar alguns miligramas da precipitado preto, que se dissolve em cido clordrico 3 M,
amostra dissolvida ou suspensa em 1 mL de gua, agitar, com desprendimento de gs sulfdrico, caracterizado pelo
juntar 5 mL de anidrido actico mistura, agitar novamente; papel acetato de chumbo.
aparece cor vermelha clara.
Frrico, on
Clorato
1) Tratar soluo cida da amostra com ferrocianeto
1) Tratar soluo da amostra com nitrato de prata SR em de potssio SR; forma-se precipitado azul escuro, que
meio de cido ntrico SR; no se forma precipitado. Verter no dissolve por adio de cido clordrico SR, mas
cido sulfuroso ou soluo recente de nitrito de sdio SR decomposto por hidrxido de sdio 2 M.
a esta mistura; forma-se precipitado branco, insolvel em
cido ntrico SR, mas solvel em hidrxido de amnio 6 M. 2) Tratar a amostra com tiocianato de amnio SR; produz-
se cor vermelha intensa que no desaparece com adio
2) Submeter a amostra ignio; forma-se cloreto, de cidos minerais diludos, mas pode ser extrada com
identificado por ensaios apropriados. ter etlico, passando a colorao vermelha para a camada
etrea.
3) Tratar a amostra seca com cido sulfrico; ocorre
crepitao desprendendo-se gs amarelo esverdeado (para
este ensaio usar quantidade pequena de clorato, devendo- Ferroso, on
se tomar cuidado extremo ao execut-lo, pois o gs que se
forma decompe-se de modo explosivo acima de 45 C - 1) Tratar soluo da amostra com ferricianeto de potssio
utilizar capela). SR; forma-se precipitado azul escuro, insolvel em cido
clordrico 3 M, mas decomposto por hidrxido de sdio M.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 165
2) Tratar soluo da amostra com hidrxido de sdio heptaidratado SR, forma-se precipitado cristalino branco,
M; forma-se precipitado branco-esverdeado, que passa insolvel em hidrxido de amnio 6 M.
rapidamente a verde e, em seguida, quando agitado, a
marrom. Mercrio
5
presena de excesso de hipofosfito.
1) Tratar a amostra com hidrxido de sdio M; o sal
Iodeto decompe-se, dando cor preta.
1) Tratar soluo da amostra com gua de cloro SR, gota 2) Tratar soluo da amostra com cido clordrico SR;
a gota; desprende-se iodo, que muda a cor da soluo de forma-se precipitado branco, que escurece ao ser tratado
amarela para vermelha; agitando-se esta soluo com com hidrxido de amnio 6 M.
clorofrmio, este adquire cor violeta. 3) Tratar soluo da amostra com iodeto de potssio SR;
2) Tratar soluo da amostra acidificada com cido ntrico forma-se precipitado amarelo que, com o tempo, pode
SR, com nitrato de prata SR; forma-se precipitado amarelo passar a verde.
caseoso, insolvel em cido ntrico SR e hidrxido de
amnio 6 M Nitrato
2) Umedecer a amostra com cido clordrico e aquecer na 2) Tratar papel de amido iodetado com soluo da amostra;
zona redutora da chama; esta adquire cor vermelha intensa. o indicador se cora de azul.
2) Tratar soluo acidificada quente da amostra com 2) Tratar soluo da amostra com cido clordrico ou ntrico
permanganato de potssio SR; desaparece a cor. e, em seguida, com acetato de uranila e zinco SR; forma-
se precipitado cristalino amarelo-ouro, aps agitao por
alguns minutos.
Permanganato
Prata, on
Tartarato
1) Tratar soluo da amostra com cido clordrico; forma-
se precipitado caseoso branco, insolvel em cido ntrico 1) Dissolver alguns miligramas da amostra em gua,
SR, mas facilmente solvel em hidrxido de amnio 6 M acidificada com cido actico SR, adicionar uma gota
de soluo de sulfato ferroso a 1% (p/v) e uma gota de
2) Tratar a soluo da amostra com hidrxido de amnio perxido de hidrognio a 3% (p/v); produz-se cor amarela
6 M e pequena quantidade de soluo de formaldedo; por fugaz. Juntar hidrxido de sdio 2 M gota a gota; produz-se
aquecimento, deposita-se espelho de prata metlica na cor azul intensa.
superfcie do recipiente.
2) Acidificar soluo da amostra com cido sulfrico M,
juntar algumas gotas de resorcinol 2% (p/v) e adicionar,
Salicilato cuidadosamente, cido sulfrico, de modo a se formarem
duas camadas; aquecendo em banho-maria, por alguns
1) Tratar a soluo diluda da amostra com cloreto frrico
minutos, na interface aparece anel vermelho.
SR; produz-se cor violeta.
1) Tratar soluo da amostra com cido clordrico; forma-se I - Mistura de 1 volume de formamida e 9 volumes de
precipitado branco, que passa logo a amarelo, e desprende- acetona
se dixido de enxofre, reconhecido pelo odor. II - Mistura de 1 volume de 1 ,2-propanodiol e 9 volumes
de acetona
2) Tratar soluo actica da amostra com cloreto frrico SR; III - Mistura de 1 volume de parafina lquida e 9 volumes
produz-se cor violeta escura que desaparece rapidamente. de ter de petrleo de faixa de ebulio 40 -60 oC.
Xantina Eluentes
Tratar a amostra com duas gotas de soluo concentrada A - Clorofrmio
de perxido de hidrognio concentrado e cinco gotas de B - Mistura de 3 volumes de tolueno e 1 volume de
cido clordrico 2 M, e aquecer at secura em banho-maria; clorofrmio
obtm-se resduo vermelho-amarelado que, tratado com C - Tolueno
hidrxido de amnio 2 M, muda para vermelho-violeta. D - Mistura de 4 volumes de cicloexano e 1 volume de
tolueno
Zinco, on E - Mistura de volumes iguais de cicloexano e ter de
petrleo de faixa de ebulio 40 - 60 oC
1) Tratar soluo da amostra com ferrocianeto de potssio F - Mistura de 2 volumes de cido actico glacial e 3
SR; forma-se precipitado branco, insolvel em cido volumes de gua
clordrico 3 M G - Mistura de 8 volumes de hexano e 2 volumes de
dioxano.
2) Tratar soluo neutra ou alcalina da amostra com sulfeto
de amnio SR; forma-se precipitado branco.
Tabela 1 Limites de impureza cloreto e quantidades correspondentes da matria-prima para se realizar o ensaio
5
considerando a utilizao constante de 1,0 mL da soluo padro que contm 3,546 x 10-4 g de cloreto.
Quantidade de amostra (g) Limite de cloreto (ppm) Quantidade de amostra (g) Limite de cloreto (ppm)
0,10 3546 (= 0,355%) 3,8 93
0,15 2364 (= 0,236%) 4,0 88
0,20 1773 (= 0,180%) 4,2 84
0,25 1418 (= 0,l42%) 4,4 80
0,30 1182 (= 0,120%) 4,6 77
0,35 1013 (= 0,100%) 4,8 74
0,40 886 5,0 71
0,45 788 5,2 68
0,50 709 5,4 65
0,55 645 5,6 63
0,60 591 5,8 61
0,65 545 6,0 59
0,70 506 6,2 57
0,75 473 6,4 55
0,80 443 6,6 53
0,85 417 6,8 52
0,90 394 7,0 50
0,95 373 7,2 49
1,00 354 7,4 48
1,2 295 7,6 46
1,4 253 7,8 45
1,6 221 8,0 44
1,8 197 8,2 43
2,0 177 8,4 42
2,2 161 8,6 41
2,4 148 8,8 40
2,6 136 9,0 39
2,8 126 9,2 38
3,0 118 9,4 37
3,2 111 9,6 37
3,4 104 9,8 36
3,6 98 10,0 35
170 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Sendo fixa a quantidade de cloreto (= 3,546 x 10-4 g) na no estiver perfeitamente lmpida, filtrar atravs de papel
preparao padro, se o limite de cloreto em determinada de filtro isento de sulfato. Transferir o filtrado para tubo
substncia for, por exemplo, 354 ppm, dever-se- utilizar de Nessler. Deve-se empregar uma quantidade de amostra
1 g da substncia para obter-se at a mesma turbidez do que possibilite o uso de volume maior do que 0,2 mL de
padro; se o limite for de 71 ppm de cloreto, devero ser soluo de cido sulfrico padro. Fixando-se o volume de
utilizados 5 g de amostra e assim por diante. soluo padro em 2,5 mL pode calcular-se m (massa em
grama da amostra) pela frmula:
Alternativamente, proceder conforme descrito em
Cromatografia inica (5.2.17.4.1), utilizando cromatgrafo m = 1200,8
equipado com coluna de troca aninica e detector por l
condutividade com supresso qumica.
sendo l o limite de sulfato em ppm na matria-prima.
5.3.2.2. Ensaio limite PARA SULFATOS Preparao padro: transferir o volume de cido sulfrico
padro (H2SO4 0,005 M SV) indicado na monografia,
ou indicado na Tabela 2, ou calculado, para um tubo de
Preparao amostra: transferir a quantidade da amostra Nessler e adicionar um volume de 30 a 40 mL de gua
especificada na monografia, ou indicada na Tabela 2, ou destilada.
calculada, para um tubo de Nessler (capacidade de 50
mL e 22 mm de dimetro interno), adicionando 30 a 40 Procedimento: aos tubos de Nessler contendo a preparao
mL de gua destilada. Caso seja utilizada uma soluo padro e a preparao amostra, adicionar 1 mL de cido
da amostra, transferir o volume da soluo especificado clordrico 3 M e 3 mL de cloreto de brio SR. Completar
na monografia, ou calculado, para o tubo de Nessler e o volume para 50 mL com gua destilada. Homogeneizar.
completar o volume para 30 a 40 mL com gua destilada. Deixar em repouso por cerca de 10 minutos. A turbidez da
5
Se necessrio, neutralizar com cido clordrico SR. Pode- preparao amostra no deve ser superior da padro.
se, eventualmente, utilizar cido actico. Se a preparao
Tabela 2 Limites de impureza sulfato e quantidades correspondentes da matria-prima para se realizar o ensaio
considerando a utilizao constante de 2,5 mL da soluo padro que contm 1,2008 x 10-3 g de sulfato.
Quantidade de amostra (g) Limite de sulfato (ppm) Quantidade de amostra (g) Limite de sulfato (ppm)
0,50 2401 (= 0,240%) 4,6 261
0,55 2183 (= 0,220%) 4,8 250
0,60 2001 (= 0,200%) 5,0 240
0,65 1847 (= 0,185%) 5,2 231
0,70 1715 (= 0,171%) 5,4 222
0,75 1601 (= 0,160%) 5,6 214
0,80 1501 (= 0,150%) 5,8 207
0,85 1412 (= 0,141%) 6,0 200
0,90 1334 (= 0,133%) 6,2 194
0,95 1264 (= 0,126%) 6,4 187
1,00 1200 (= 0,120%) 6,6 182
1,2 1001 (= 0,100%) 6,8 177
1,4 858 7,0 171
1,6 750 7,2 166
1,8 667 7,4 162
2,0 600 7,6 158
2,2 546 7,8 154
2,4 500 8,0 151
2,6 462 8,2 146
2,8 429 8,4 143
3,0 400 8,6 139
3,2 375 8,8 136
3,4 353 9,0 133
3,6 333 9,2 130
3,8 316 9,4 127
4,0 300 9,6 125
4,2 286 9,8 122
4,4 273 10,0 120
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 171
Sendo fixa a quantidade de sulfato (= 1,2008 x 10-3 g), Preparo do reagente de tioacetamida: dissolver 4 g de
se o limite de sulfato em determinada substncia for, por tioacetamida em gua e completar o volume a 100 mL.
exemplo, 500 ppm, devero ser utilizados 2,4 g de amostra Tomar 0,2 mL e adicionar a 1 mL da mistura de hidrxido
para obter-se at a mesma turbidez do padro; se o limite de sdio M, 5 mL de gua e 20 mL de glicerina. Aquecer
for de 151 ppm de sulfato, devero ser utilizados 8 g de em banho-maria por 20 s, resfriar e utilizar imediatamente.
amostra e assim por diante.
2 / (1000l)
A determinao de metais pesados pode ser efetuada por
dois mtodos: ensaio limite por formao de partculas em que
slidas de sulfetos ou determinao por espectrometria l = limite de metais pesados na amostra em porcentagem
atmica. (p/p).
O ensaio limite consiste na formao de partculas slidas Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou
dos sulfetos de metais pesados, em suspenso, e posterior hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador de
5
comparao visual da intensidade da cor nas preparaes faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua
amostra e padro em tubo de Nessler. O ensaio semi para aproximadamente 40 mL e homogeneizar.
quantitativo e possibilita inferir se a amostra passa ou no
no teste, representando o somatrio da concentrao dos Preparao padro: transferir para tubo adequado 2 mL de
elementos contaminantes na amostra. soluo padro de chumbo (10 ppm Pb) e diluir para 25 mL
com gua. Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico
O mtodo por espectrometria atmica possibilita M ou hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador
quantificar cada elemento contaminante na amostra de faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua
e limites diferenciados so estabelecidos para cada para aproximadamente 40 mL e homogeneizar.
elemento de acordo com a sua toxicidade e o tipo de forma
farmacutica. Elementos como As, Cd, Pb e Hg, devido Preparao controle: transferir para um terceiro tubo
elevada toxicidade apresentam limites mais baixos que os volume de soluo da amostra preparada conforme descrito
demais. Devido maior biodisponibilidade de elementos na monografia ou em preparao amostra e adicionar 2 mL
eventualmente presentes em substncias utilizadas na de soluo padro de chumbo (10 ppm Pb). Ajustar o pH
fabricao de produtos parenterais, os limites requeridos so entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou hidrxido de amnio
inferiores aqueles relacionados para utilizao por via oral. 6 M utilizando papel indicador de faixa estreita como
indicador externo. Diluir com gua para aproximadamente
MTODO DO ENSAIO LIMITE 40 mL e homogeneizar.
Tampo acetato pH 3,5: dissolver 25,0 g de acetato de Preparao amostra: transferir para tubo adequado
amnio em 25 mL de gua e adicionar 38 mL de cido soluo da amostra preparada conforme especificado na
clordrico 6 M. Se necessrio, ajustar o pH em 3,5 com monografia e diluir para 25 mL com solvente orgnico
hidrxido de amnio 6 M ou cido clordrico 6 M. Diluir (dioxano ou acetona, contendo, no mnimo, 15% v/v de
para 100 mL com gua e homogeneizar. gua), ou dissolver e diluir com o mesmo solvente para 25
mL a quantidade de amostra, em gramas, especificada na
monografia ou calculada segundo a equao:
172 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
adicionar 2 mL de soluo padro de chumbo (10 ppm
Pb). Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou Preparao controle: transferir para um terceiro tubo
hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador de volume de soluo da amostra preparada conforme
faixa estreita como indicador externo. Diluir com o mesmo descrito na monografia ou em preparao amostra e
solvente empregado para a dissoluo da amostra para adicionar 2 mL de soluo padro de chumbo (10 ppm
aproximadamente 40 mL e homogeneizar. Pb). Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou
hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador de
Procedimento: a cada uma das preparaes adicionar 2 mL faixa estreita como indicador externo. Diluir com o mesmo
de tampo acetato pH 3,5 e 1,2 mL de tioacetamida. Diluir solvente empregado para a dissoluo da amostra para
com gua para 50 mL, homogeneizar e deixar em repouso aproximadamente 40 mL e homogeneizar.
por 2 minutos. Aps 2 minutos, desenvolver-se- colorao
que varia do amarelo ao preto. Observar as preparaes Procedimento: a cada uma das preparaes adicionar 2 mL
de cima para baixo, segundo o eixo vertical do tubo, de tampo acetato pH 3,5 e 1,2 mL de tioacetamida. Diluir
sobre fundo branco. Qualquer colorao desenvolvida na com gua para 50 mL, homogeneizar e deixar em repouso
preparao amostra no mais intensa do que na padro. por 2 minutos. Aps 2 minutos, desenvolver-se- colorao
O teste somente vlido se a intensidade da colorao que varia do amarelo ao preto.Observar as preparaes
desenvolvida na preparao controle for igual ou superior de cima para baixo, segundo o eixo vertical do tubo,
quela na padro. sobre fundo branco. Qualquer colorao desenvolvida
na preparao amostra no mais intensa do que aquela
na padro. O teste somente vlido se a intensidade da
MTODO III
colorao desenvolvida na preparao controle for igual ou
Preparo da amostra: utilizar a quantidade de amostra, em superior quela na padro.
gramas, especificada na monografia ou calculada segundo
a equao: MTODO IV
2 / (1000l) Preparo da amostra: Pesar, exatamente, quantidade de
amostra recomendada na monografia ou calculada segundo
em que
a equao:
l = limite de metais pesados na amostra em porcentagem
2 / (1000l)
(p/p).
em que
Transferir a amostra para cadinho adequado, adicionar
cido sulfrico suficiente para umedecer a substncia l = limite de metais pesados na amostra em porcentagem
e incinerar, cuidadosamente, sob temperatura baixa. (p/p).
Adicionar massa carbonizada 2 mL de cido ntrico e 5
gotas de cido sulfrico. Aquecer, com cuidado, at que Transferir para tubo de digesto de vidro borossilicato
no mais se desprendam vapores brancos. Incinerar em de 100 mL e adicionar cerca de 10 mL de cido ntrico.
mufla a 500 - 600 C at completa combusto do carbono. Proceder digesto em chapa de aquecimento ou bloco
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 173
digestor em temperatura de 120 C, durante 3 horas. conforme descrito em Decomposio por via mida em
Recomenda-se aquecer o sistema lentamente, para evitar sistema fechado ou Mtodo de combusto iniciada por
projeo da amostra. Caso haja evaporao do cido, micro-ondas em sistema pressurizado descritos em Mtodo
adicionar outra alquota de 5 mL. Caso uma preparao de espectrometria atmica.
lmpida no seja obtida, adicionar, aps resfriamento, 2 mL
de perxido de hidrognio a 30% (p/p) e aquecer a 140 C Preparao padro: transferir para tubo adequado 2 mL de
por mais uma hora. Esfriar e diluir, cautelosamente, com soluo padro de chumbo (10 ppm Pb) e diluir para 25 mL
pequeno volume de gua. Transferir, com lavagem, para com gua. Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico
tubo de Nessler de 50 mL, sem ultrapassar 25 mL. M ou hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador
de faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua
Preparao padro: transferir para tubo adequado 2 mL de para aproximadamente 40 mL e homogeneizar.
soluo padro de chumbo (10 ppm Pb) e diluir para 25 mL
com gua. Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico Preparao controle: transferir para um terceiro tubo
M ou hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador volume de soluo da amostra preparada conforme descrito
de faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua na monografia ou em preparao amostra e adicionar 2 mL
para aproximadamente 40 mL e homogeneizar. de soluo padro de chumbo (10 ppm Pb). Ajustar o pH
entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou hidrxido de amnio
Preparao controle: transferir para um terceiro tubo 6 M utilizando papel indicador de faixa estreita como
volume de soluo da amostra preparada conforme descrito indicador externo. Diluir com gua para aproximadamente
na monografia ou em preparao amostra e adicionar 2 mL 40 mL e homogeneizar.
de soluo padro de chumbo (10 ppm Pb). Ajustar o pH
entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou hidrxido de amnio Procedimento: a cada uma das preparaes adicionar 2 mL
6 M utilizando papel indicador de faixa estreita como de tampo acetato pH 3,5 e 1,2 mL de tioacetamida. Diluir
com gua para 50 mL, homogeneizar e deixar em repouso
5
indicador externo. Diluir com gua para aproximadamente
40 mL e homogeneizar. por 2 minutos. Aps 2 minutos, desenvolver-se- colorao
que varia do amarelo ao preto. Observar as preparaes
Procedimento: a cada uma das preparaes adicionar 2 mL de cima para baixo, segundo o eixo vertical do tubo,
de tampo acetato pH 3,5 e 1,2 mL de tioacetamida. Diluir sobre fundo branco. Qualquer colorao desenvolvida
com gua para 50 mL, homogeneizar e deixar em repouso na preparao amostra no mais intensa do que aquela
por 2 minutos. Aps 2 minutos, desenvolver-se- colorao na padro. O teste somente vlido se a intensidade da
que varia do amarelo ao preto. Observar as preparaes colorao desenvolvida na preparao controle igual ou
de cima para baixo, segundo o eixo vertical do tubo, superior quela na padro.
sobre fundo branco. Qualquer colorao desenvolvida na
preparao amostra no mais intensa do que na padro. MTODO DE ESPECTROMETRIA ATMICA
O teste somente vlido se a intensidade da colorao
desenvolvida na preparao controle for igual ou superior Utilizar tcnicas de espectrometria atmica para
quela na padro. determinao de As, Cd, Cr, Cu, Hg, Ir, Mn, Mo, Ni, Os,
Pb, Pd, Pt, Rh, Ru e V, conforme Espectrometria atmica
MTODO V (5.2.13). Entretanto, diferentes procedimentos de preparo
da amostra podem ser aplicados, como demonstrado na
Preparo da amostra: nos casos em que os mtodos anteriores Figura 1.
de preparo de amostra no forem eficientes, proceder
5
Tabela 1 - Limites permitidos de impurezas de metais e no metais.
sendo l o limite de ferro em ppm na matria-prima. ou o volume calculado, conforme descrito na preparao
amostra.
Preparao padro: empregar 10 mL de Soluo padro
de ferro (10 ppm de Fe) ou 1 mL da Soluo padro de Procedimento: concomitantemente, acrescentar aos
ferro (100 ppm Fe), conforme Tabela 1, ou volume tubos contendo as preparaes amostra e padro, 3 mL
calculado, adicionar gua destilada, ou o solvente indicado de tiocianato de potssio M, completar o volume para 50
na monografia, em quantidade suficiente para 40 mL. mL, homogeneizar e deixar em repouso por 5 minutos. A
Adicionar 2 mL de cido ctrico a 20% (p/v). colorao produzida na preparao amostra no deve ser
mais intensa do que na padro.
Procedimento: concomitantemente, acrescentar aos tubos
contendo as preparaes amostra e padro duas gotas
de cido tiogliclico. Homogeneizar, alcalinizar com MTODO III
hidrxido de amnio, completar o volume para 50 mL com Preparao amostra: transferir para um tubo de Nessler
gua destilada e homogeneizar. Deixar em repouso por 5 (capacidade de 50 mL e 22 mm de dimetro interno) a
minutos. A cor rsea produzida na preparao amostra no quantidade de amostra especificada na monografia, ou
deve ser mais intensa do que na padro. calculada, ou o volume da soluo da amostra indicado
na monografia. Diluir para 40 mL com gua destilada.
MTODO II Adicionar 2 mL de cido clordrico M e homogeneizar.
Preparao amostra: dissolver quantidade da amostra Preparao padro: transferir o volume da Soluo padro
especificada na monografia, ou calculada, em solvente de ferro (10 ppm Fe) indicado na monografia, ou volume
adequado, ou utilizar volume da soluo da amostra calculado, para um tubo de Nessler e proceder conforme
conforme especificado na monografia. Adicionar 2 mL de descrito na preparao amostra.
5
cido clordrico 2 M e 0,5 mL de gua de bromo SR. Aps
5 minutos, retirar o excesso de bromo por corrente de ar Procedimento: adicionar aos tubos contendo as preparaes
em capela (CUIDADO! REAGENTE TXICO) e tranferir amostra e padro 50 mg de cristais de peroxidissulfato
para tubo de Nessler (capacidade de 50 mL e 22 mm de de amnio. Acrescentar 3 mL de tiocianato de amnio
dimetro interno). SR, completar o volume para 50 mL com gua destilada
e homogeneizar. A colorao produzida na preparao
Preparao padro: submeter o volume da Soluo padro amostra no deve ser mais intensa do que na padro.
de ferro (2 ppm ou 10 ppm de Fe) indicado na monografia,
Tabela 1 Limites de impureza ferro e quantidade correspondentes da matria-prima para se realizar o ensaio considerando
a utilizao constante de 1,0 mL da soluo padro de ferro de 100 ppm, que contm 10-4 g de ferro, na preparao padro.
Quantidade de amostra (g) Limite de ferro (ppm) Quantidade de amostra (g) Limite de ferro (ppm)
0,100 1000 0,4 250
0,105 950 0,5 200
0,111 900 0,667 150
0,116 850 1 100
0,125 800 1,111 90
0,133 750 1,250 80
0,143 700 1,429 70
0,154 650 1,667 60
0,167 600 2 50
0,182 550 2,5 40
0,200 500 3,333 30
0,222 450 5 20
0,250 400 10 10
0,285 350 20 5
0,333 300
5.3.2.5 Ensaio limite PARA ARSNIO de 10 mL, de acordo com a necessidade do laboratrio)
Preservar o meio ambiente. Acrescentar 1 mL de cido
sulfrico M e completar o volume com gua recm-fervida
MTODO ESPECTROFOTOMTRICO e, posteriormente, resfriada. Homogeneizar. Conservar
a soluo em recipiente de vidro e utilizar em at 3 dias.
O mtodo est baseado na reao entre a arsina (AsH3) Cada mL da soluo obtida contm 1 mg de arsnio.
liberada e dietilditiocarbamato de prata que formam
complexo vermelho; a absoro da radiao pode ser
Mtodo I
medida em espectrofotmetro ou colormetro.
Preparao amostra: transferir para frasco gerador de
Dois mtodos podem ser empregados diferindo, apenas, no
arsina a quantidade de substncia indicada na monografia,
preparo da amostra e do padro. O Mtodo I , em geral,
ou a quantidade calculada.
utilizado para substncias inorgnicas, enquanto o Mtodo
II empregado para substncias orgnicas. Fixando-se o volume da soluo padro de arsnio em 3
mL pode-se calcular m (massa em grama da amostra) pela
O sistema utilizado - Figura 1 - compreende: (a) gerador
frmula:
de arsina; (b) e (d) juntas; (c) unidade esmerilhada; (e)
tubo de absoro. Outro sistema adaptado que tenha
as caractersticas essenciais do apresentado pode,
eventualmente, ser utilizado. sendo l o limite de arsnio em ppm na matria-prima.
halogenados, especialmente, quando aquecer a amostra Nota: antimnio interferente da reao, uma vez que forma
com cido sulfrico e, posteriormente, adicionar perxido estibina (SbH3) fornecendo resultado falsamente positivo
de hidrognio a 26% (v/v). O aquecimento deve ser mais no desenvolvimento de cor com dietilditiocarbamato de
brando impedindo que atinja a temperatura de ebulio da prata SR. Nesses casos, deve-se comparar as preparaes
mistura e carbonizao para evitar a perda de arsnio. em comprimento de onda de 535 e 540 nm, no qual a
interferncia da estibina desprezvel.
Preparao amostra: transferir para o frasco gerador
quantidade da amostra especificada na monografia, ou
calculada. MTODO DE ESPECTROMETRIA DE ABSORO
ATMICA COM GERAO DE HIDRETOS
Fixando-se o volume da soluo padro de arsnio em 3
mL pode-se calcular m (massa em grama da amostra) pela Proceder a preparao amostra conforme descrito no
frmula: item Decomposio por via mida em sistema fechado
Ensaio limite para metais pesados (5.3.2.3) e determinar
por Espectrometria de absoro atmica com gerao
de hidretos (5.2.13.1.2). Proceder de acordo com as
sendo l o limite de arsnio em ppm na matria-prima. especificaes do fabricante empregando comprimento de
Adicionar 5 mL de cido sulfrico e prolas de vidro. onda de 193,7 nm e resoluo do monocromador de (0,5
Se necessrio, empregar maior quantidade do cido para 0,1) nm.
umedecer completamente a substncia cuidando para que
o volume no ultrapasse 10 mL. Proceder a digesto em MTODO DE ESPECTROMETRIA DE EMISSO
capela de preferncia usando placa de aquecimento com TICA COM PLASMA INDUTIVAMENTE ACOPLADO
temperatura no superior a 120 oC por tempo necessrio
Proceder a preparao da amostra conforme descrito no
5
ao incio da digesto. Uma vez iniciada a decomposio
da amostra, adicionar gota a gota, cuidadosamente, item Decomposio por via mida em sistema fechado -
perxido de hidrognio concentrado. Esperar que a reao Ensaio limite para metais pesados (5.3.2.3) e determinar por
se abrande e, ento, aquecer entre adio de cada gota. Espectrometria de emisso ptica com plasma indutivamente
Caso haja excesso de espuma, interromper o aquecimento. acoplado (5.2.13.2.2). Proceder de acordo com as
Assim que diminuir a intensidade da reao, aquecer, especificaes do fabricante. Recomenda-se a utilizao do
cautelosamente, com agitao do frasco para promover comprimento de onda de 188,979 a 189,042 nm.
aquecimento homogneo. necessrio que se mantenham
as condies oxidantes durante toda a digesto. Para tanto, 5.3.2.6 Ensaio limite PARA AMNIA
adicionar pequenas quantidades de perxido de hidrognio
concentrado sempre que a mistura tornar-se marrom
ou escurecer. Destruda a matria orgnica, aumentar Soluo padro de amnia (2,5 ppm NH3): transferir 1 mL
paulatinamente a temperatura de aquecimento permitindo da soluo de cloreto de amnio 0,00741% (p/v) para um
que os vapores de trixido de enxofre sejam desprendidos balo volumtrico de 10 mL. Completar o volume com
e a soluo se torne incolor ou levemente bege. Resfriar, gua destilada.
adicionar, cuidadosamente, 10 mL de gua destilada,
Soluo padro de amnia (1 ppm NH3): diluir 40 mL da
evaporar at o trixido de enxofre seja novamente
soluo padro de amnia (2,5 ppm de NH3) para 100 mL
desprendido e resfriar. Caso necessrio, repetir a operao,
com gua destilada.
removendo traos de perxido de hidrognio. Resfriar
e acrescentar 10 mL de gua destilada. Lavar o frasco e Preparao amostra: dissolver a quantidade indicada
diluir com gua destilada completando o volume para 35 da substncia em anlise em 12 mL de gua destilada,
mL. Proceder como na preparao amostra do Mtodo I alcalinizar, se necessrio, com hidrxido de sdio 2 M.
iniciando por Adicionar 20 mL de cido sulfrico M.... Transferir para balo volumtrico de 15 mL, adicionar
0,3 mL de soluo alcalina de tetraiodomercurato (II)
Preparao padro: transferir para frasco gerador de arsina
de potssio e completar o volume com gua destilada.
3 mL da Soluo padro de arsnio e adicionar 2 mL de
Homogeneizar e deixar em repouso por 5 minutos.
cido sulfrico. Homogeneizar. Acrescentar o mesmo
Transferir para um tubo de Nessler (capacidade de 50 mL e
volume de perxido de hidrognio concentrado empregado
dimetro interno de 22 mm).
para a preparao amostra. Proceder, em seguida, ao
aquecimento da soluo obtida at que se formem vapores. Preparao padro: transferir 10 mL de soluo padro de
Resfriar e adicionar, cuidadosamente, 10 mL de gua amnia (1 ppm de NH3), ou o volume calculado, para balo
destilada. Repetir o procedimento de aquecimento com volumtrico de 15 mL, adicionar 4,0 mL de gua destilada,
mais 10 mL e, aps, resfriar novamente e diluir com gua 0,3 mL de soluo alcalina de tetraiodomercurato (II) de
destilada para completar 35 mL. Proceder como para a potssio e completar o volume. Homogeneizar e deixar em
preparao amostra. repouso por 5 minutos. Transferir para um tubo de Nessler.
Procedimento: proceder conforme descrito no Mtodo I. Procedimento: comparar a cor desenvolvida nas
preparaes. A cor amarela produzida na preparao
amostra no deve ser mais intensa do que na padro.
178 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5.3.2.7 Ensaio limite PARA CLCIO 0,1% (p/v) em clorofrmio. Descartar as fases orgnicas e
adicionar fase aquosa 0,4 mL de butilamina e 0,1 mL de
trietanolamina. Ajustar o pH entre 10,5-11,5 se necessrio.
Soluo padro alcolica de clcio (100 ppm Ca): pesar,
Adicionar 4 mL da soluo de hidroxiquinolina a 0,1% (p/v)
exatamente, 2,5 g de carbonato de clcio e transferir para
em clorofrmio e agitar por 1 minuto. Utilizar a fase inferior
balo volumtrico de 1000 mL com 12 mL de cido actico.
para a comparao. Proceder da mesma maneira com a
Dissolver e completar o volume com gua destilada.
preparao padro. A colorao produzida na preparao
Transferir, imediatamente antes do uso, 10 mL dessa
amostra no deve ser mais intensa do que na padro.
soluo para balo volumtrico de 100 mL e completar o
volume com etanol. Alternativamente, proceder determinao de magnsio por
Espectrometria de absoro atmica com chama (5.2.13.1.1)
Soluo padro de clcio (10 ppm Ca): pesar, exatamente,
empregando chama do tipo ar-acetileno, comprimento
0,624 g de carbonato de clcio e transferir para balo
de onda de 285,2 nm e resoluo do monocromador de
volumtrico de 250 mL com 3 mL de cido actico.
(1,2 0,1) nm; ou Espectrometria de emisso tica com
Dissolver e completar o volume com gua destilada.
plasma indutivamente acoplado (5.2.13.2.2) empregando
Transferir, imediatamente antes do uso, 10 mL dessa
comprimento de onda de 285,213 nm.
soluo para balo volumtrico de 1000 mL e completar o
volume com gua.
5.3.2.9 ENSAIO LIMITE PARA MAGNSIO
Preparao amostra: adicionar 1 mL de oxalato de amnio
SR a um tubo de Nessler (capacidade de 50 mL e 22 mm E METAIS ALCALINOS TERROSOS
de dimetro interno) contendo 0,2 mL da soluo padro
alcolica de clcio (100 ppm Ca). Aguardar 1 minuto, A 200 mL de gua destilada adicionar 0,1 g de cloridrato
adicionar mistura de 1 mL de cido actico diludo e 15 de hidroxilamina, 10 mL de tampo cloreto de amnio pH
Soluo diluente de cido ntrico: transferir 40 mL de cido plasma indutivamente acoplado (5.2.13.2.2). Proceder de
ntrico para balo volumtrico de 1000 mL; completar o acordo com as especificaes do fabricante. Recomenda-se
volume com gua destilada e homogeneizar. a utilizao do comprimento de onda de 396,153 nm.
5
e monocromador ajustado em 518 nm. A fluorescncia da
preparao amostra (I1), descontada da preparao em conforme descrito na preparao amostra.
branco (I3) no deve ser maior do que a da preparao
padro (I2), descontada da preparao em branco (I3). Procedimento: aguardar 10 minutos, transferir 20 mL do
contedo das preparaes amostra e padro para tubos de
Nessler (capacidade de 50 mL e 22 mL de dimetro interno)
MTODO II e comparar a colorao das preparaes. A colorao
produzida na preparao amostra no mais intensa do que
Preparao amostra: transferir quantidade da amostra
na padro.
especificada na monografia, ou calculada, para balo
volumtrico de plstico de 100 mL, adicionar 50 mL de Alternativamente, proceder conforme descrito em
gua destilada e submeter ao ultrassom durante 30 minutos. Cromatografia inica (5.2.17.4.1) utilizando cromatgrafo
Adicionar 4 mL de cido ntrico; completar o volume com equipado com coluna de troca inica para separao
gua destilada e homogeneizar. de nions e detector por condutividade com supresso
qumica.
Preparaes padro: preparar solues contendo 0,01,
0,02 e 0,04 ppm de alumnio, imediatamente antes do uso,
por meio da diluio da Soluo padro de alumnio (1 5.3.2.12 Ensaio limite PARA CHUMBO
ppm Al) com Soluo diluente de cido ntrico em balo
volumtrico de 100 mL.
Soluo padro de chumbo diluda (1 ppm Pb): diluir
Procedimento: determinar as absorvncias das preparaes volume exatamente medido da Soluo padro de chumbo
padro e da preparao amostra por Espectrometria (10 ppm Pb) preparada conforme descrito em Ensaio limite
de absoro atmica com forno de grafite (5.2.13.1.4) para metais pesados (5.3.2.3) com 9 volumes de cido
equipado com lmpada de ctodo oco de alumnio. Ajustar ntrico a 1% (v/v).
o comprimento de onda em 309,3 nm empregando uma
Nota: armazenar todas as solues de reagentes em
resoluo do monocromador de (0,7 0,1) nm. Utilizar a
recipientes de vidro de borossilicato. Enxaguar toda a
Soluo diluente de cido ntrico como branco e proceder
vidraria com soluo de cido ntrico a 20% (v/v) e, em
a calibrao conforme descrito em (5.2.13.1.4) Mtodo
seguida, com gua destilada.
I (Calibrao direta). Determinar a concentrao de Al
na preparao amostra em ppm. Calcular a quantidade Preparao amostra: na ausncia de especificao na
de Al na amostra em ppm, por meio da multiplicao da monografia, preparar a soluo amostra como segue.
concentrao da preparao amostra em ppm por 100/P Proceder cautelosamente, pois algumas substncias podem
no qual P a massa em gramas da substncia utilizada na reagir com violncia quando digeridas com perxido de
preparao amostra. hidrognio. Transferir 1 g da amostra para frasco adequado,
acrescentar 5 mL de cido sulfrico, algumas prolas de
MTODO III vidro e aquecer em placa de aquecimento, em capela, at
evoluo de fumos. Podem ser utilizados outros meios de
Proceder conforme descrito no Mtodo II e efetuar a aquecimento adequados. Se necessrio, adicionar excesso
determinao por Espectrometria de emisso tica com de cido sulfrico para umedecer completamente a amostra
180 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
(v/v) a frio e acrescentar algumas gotas de perxido de
uso, deve-se imergir os eletrodos por alguns segundos em
hidrognio antes de aquecer.
cido ntrico SR ao qual se adicionou 1 mg/mL de cloreto
Preparao padro: utilizar volume especificado, ou frrico e, em seguida, lavar com gua destilada.
calculado da Soluo padro de chumbo diluda (1 ppm
Pb). Submeter ao mesmo tratamento da preparao MTODO I
amostra.
Tcnica - Pesar, exatamente, cerca de 500 mg da
Procedimento: transferir as preparaes amostra e padro sulfonamida ou a quantidade especificada na monografia
para um funil de separao usando 10 mL de gua destilada. para outras aminas aromticas primrias. Transferir para
Acrescentar 6 mL de citrato de amnio SR e 2 mL de erlenmeyer de 250 mL, e adicionar, com agitao, 100
cloridrato de hidroxilamina SR1 (para a determinao de mL de cido clordrico SR para solubilizar a amostra.
chumbo em sais de ferro usar 10 mL de citrato de amnio Em seguida, adicionar cerca de 30 mL de gua e resfriar
SR). Adicionar duas gotas de vermelho de fenol a 0,1% em banho de gelo at aproximadamente 15 C. Titular,
(p/v) em etanol, alcalinizar com hidrxido de amnio at sob agitao constante, com soluo de nitrito de sdio
colorao vermelha e homogeneizar. Resfriar a soluo, se 0,1 M SV previamente padronizada com sulfanilamida
necessrio, e acrescentar 2 mL de cianeto de potssio SR. SQR. Atinge-se o ponto final de titulao quando uma
Extrair, imediatamente, com pores de 5 mL da soluo gota da soluo do erlenmeyer formar, imediatamente,
extratora de ditizona e recolher cada extrato para outro uma colorao azul com uma soluo de amido iodetado
funil de separao at que a soluo de ditizona mantenha SI em placa de toque ou sobre papel de amido iodetado
sua cor verde. Agitar as solues de ditizona combinadas SI umedecido. Para se comprovar o trmino da titulao,
durante 30 segundos com 20 mL de cido ntrico a 1% repetir a prova de toque 2 minutos aps a ltima adio.
(v/v) e descartar a fase orgnica. Adicionar soluo cida, Essa deve continuar positiva.
5 mL da soluo padro de ditizona e 4 mL de cianeto-
amnia SR, e agitar durante 30 segundos. A colorao O peso, em mg, da amostra correspondente a cada mL
violeta produzida na fase orgnica da preparao amostra de nitrito de sdio 0,1 M SV encontra-se descrito na
no mais intensa do que na padro. monografia de cada frmaco.
para as especialidades farmacuticas, ou a quantidade coletor em 100 mL de soluo de cido brico 5% (p/v) em
especificada na monografia para outras aminas aromticas erlenmeyer de 500 mL. Homogeneizar a mistura no balo
primrias. No caso de injetveis ou outras formas lquidas agitando suavemente e destilar at recolher no erlenmeyer
deve pipetar-se quantidade equivalente a 500 mg de cerca de 80% do volume contido no balo. Adicionar
princpio ativo ou a quantidade especificada na monografia. cerca de 3 gotas de mistura de vermelho de metila com
Transferir para erlenmeyer e adicionar 20 mL de cido azul de metileno SI ao erlenmeyer e titular com cido
clordrico SR e 50 mL de gua. Agitar at dissoluo. sulfrico 0,25 M SV. Realizar ensaio em branco e fazer
Resfriar at aproximadamente 15 C mantendo essa as correes necessrias. Cada mL de cido sulfrico 0,25
temperatura no curso da titulao. Acrescentar catalisador M SV equivale a 7,003 mg de nitrognio. Para amostras
adequado quando especificado. Titular, lentamente e com baixo teor de nitrognio, empregar cido sulfrico
sob agitao magntica, com nitrito de sdio 0,1 M SV 0,05 M SV. Nesse caso, cada mL equivale a 1,401 mg de
previamente padronizado com sulfanilamida SQR. nitrognio.
O peso, em mg, da amostra que equivale a cada mL de nitrito Na presena de nitratos ou nitritos
de sdio 0,1 M SV adicionado encontra-se especificado na
monografia de cada frmaco. Transferir quantidade exatamente pesada da amostra
contendo cerca de 150 mg de nitrognio para balo de
Nota: a ponta da bureta deve permanecer pouco acima da Kjeldahl de 500 mL e adicionar 25 mL de cido sulfrico
superfcie da soluo a fim de evitar a oxidao do nitrito contendo 1 g de cido saliclico dissolvido. Misturar
de sdio. Deve-se agitar com cuidado evitando a formao e aguardar durante cerca de 30 minutos agitando com
de um turbilho de ar abaixo da superfcie. Quando a frequncia. Adicionar 5 g de tiossulfato de sdio, misturar
titulao estiver a, aproximadamente, 1 mL do ponto final e, em seguida, adicionar 0,5 g de sulfato cprico. Prosseguir
calculado, acrescentar volumes de 0,1 mL em intervalos conforme indicado no procedimento anterior a partir de
de, no mnimo, 1 minuto. Inclinar o balo cerca de 45o....
5.3.3.2 DETERMINAO DE
Quando o teor de nitrognio na amostra exceder 10%,
adicionar, previamente digesto, 0,5 a 1,0 g de cido
5
NITROGNIO PELO METODO DE benzico para facilitar a decomposio da substncia.
KJELDAHL
5.3.3.2.2 Semimicrodeterminao (mtodo ii)
O mtodo de Kjeldahl descrito na forma de macro e de
semimicrotcnica destina-se determinao de nitrognio Transferir quantidade exatamente pesada da substncia
em substncias relativamente lbeis como amidas e correspondente a 2 - 3 mg de nitrognio para balo
aminas. Compreende duas fases: (1) digesto cataltica da de Kjeldahl compatvel com o aparelho. Adicionar 1
substncia orgnica em cido sulfrico com a decorrente g de sulfato de potssio e 0,1 g de sulfato cprico e, se
converso quantitativa do nitrognio em sulfato de necessrio, lavar os slidos aderentes ao gargalo com
amnio; (2) destilao do digesto alcalinizado e titulao fino jato de gua. Adicionar 7 mL de cido sulfrico e,
volumtrica da amnia liberada no processo. em seguida, 1 mL de perxido de hidrognio a 30% (v/v)
de modo que os lquidos escorram pela parede do balo.
5.3.3.2.1 Macrodeterminao (mtodo I) Aquecer o frasco e manter a digesto at desaparecimento
dos resduos de carbonizao e a preparao azul clara
estiver perfeitamente lmpida. Cuidadosamente, adicionar
Transferir, exatamente, cerca de 1 g de amostra para 70 mL de gua e resfriar. Conectar o balo ao aparelho de
balo de Kjeldahl de 500 mL. Adicionar 10 g de sulfato destilao e, atravs do funil, adicionar 30 mL de soluo
de potssio, 0,5 g de sulfato cprico e 20 mL de cido de hidrxido de sdio 40% (p/v) possibilitando que o lcali
sulfrico. Inclinar o balo cerca de 45o e aquecer, escorra pela parede do balo e forme fase independente sob
lentamente, mantendo a temperatura abaixo do ponto de a soluo cida. Lavar o funil com gua e, imediatamente,
ebulio enquanto houver desenvolvimento de espuma. iniciar destilao. Recolher o destilado em erlenmeyer
Aumentar a temperatura at a ebulio vvida do cido e de 250 mL contendo 15 mL de soluo de cido brico
prosseguir com o aquecimento por 30 minutos at a mistura 5% (p/v), quantidade de gua suficiente para imergir o tubo
ficar lmpida e adquirir cor verde clara. Resfriar, adicionar coletor e 3 gotas de mistura de vermelho de metila com
150 mL de gua, misturar e resfriar novamente. Adicionar, azul de metileno SI. Destilar at que o volume de destilado
cuidadosamente, 100 mL da soluo de hidrxido de atinja 80 a 100 mL; remover o frasco coletor, lavar as
sdio 40% (p/v) possibilitando que o lcali escorra pela paredes com pequena quantidade de gua e titular com
parede do balo e forme fase independente sob a soluo cido sulfrico 0,005 M SV. Realizar ensaio em branco e
cida. Adicionar pequena quantidade de zinco granulado; fazer as correes necessrias. Cada mL de cido sulfrico
imediatamente, conectar o balo ao bulbo de isolamento 0,005 M SV equivale a 0,1401 mg de nitrognio.
previamente fixado ao condensador, e imergir o tubo
182 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
comercialmente sistemas que evitam a ignio manual, com auxlio de gua e aferida a volume conhecido, para
empregando radiao infravermelha ou corrente eltrica, a subsequente identificao ou determinao dos analitos
diminuindo os riscos ao operador. de interesse. A soluo obtida segundo este procedimento
2. Assegurar-se de que os frascos de combusto estejam designada soluo amostra. Para o preparo do branco,
limpos e isentos de traos de solventes orgnicos. proceder da maneira descrita, omitindo a amostra.
Determinao de iodo
Determinao de flor
5 ponto de equivalncia.
Magnsio
prton. Substncias potencialmente cidas so cidas acetato sendo removido na forma de complexo mercrico
somente em presena de base qual possam doar prton e que no se dissocia. O acetato, que uma base relativamente
vice-versa. forte em cido actico, pode ser precisamente titulado com
cido perclrico.
O solvente desempenha, por conseguinte, papel muito
importante na determinao do carter cido / bsico de Para a titulao de substncias que se comportam como
uma substncia, j que a fora do cido ou da base depende cidos (haletos de cidos, anidridos de cidos, cidos
da capacidade do solvente de receber ou doar prtons. carboxlicos, aminocidos, enis, imidas, fenis, pirris e
A gua deveria ser o solvente de escolha, devido fcil sulfas) empregam-se como solventes os de natureza bsica
disponibilidade. Entretanto, o cido mais forte que pode ou aprtica. No doseamento de substncias de acidez
existir em meio aquoso o on hidrnio (H3O+) e a base intermediria comum o uso de dimetilformamida. J
mais forte o on hidrxido (OH-), isso conhecido como no doseamento de cidos fracos empregam-se bases mais
efeito nivelador do solvente. No doseamento de cidos ou fortes como morfolina, etilenodiamina e n-butilamina. Os
bases muito fracos, o titulante deve ser uma base ou cido solventes bsicos selecionados, adequadamente, podem
muito forte, respectivamente, para que a reao cido-base possibilitar a determinao seletiva de mistura de cidos.
ocorra; contudo devido ao efeito nivelador da gua no Duas classes de titulantes podem ser empregadas para
possvel titular tais substncias em meio aquoso. determinao de substncias cidas: os alcxidos de metais
alcalinos e os hidrxidos de alquilamnio quaternrio. O
Utilizando solventes fracamente protoflicos como o cido metxido de sdio o mais empregado dos alcxidos
actico, possvel a titulao de bases muito fracas j que o em mistura de metanol e tolueno ou metanol e benzeno.
on acetnio (CH3COOH2+) um cido muito mais forte do O metxido de ltio em metanol e benzeno utilizado
que o on hidrnio. cidos mais fortes do que o on hidrnio para os compostos que formam precipitado gelatinoso
no podem ser diferenciados em meio aquoso, mas podem nas titulaes com metxido de sdio. O mais utilizado
em cido actico mostrando que a ordem decrescente para
5
entre os hidrxidos o de tetrabutilamnio. Com os
a fora dos cidos perclrico, bromdrico, sulfrico, hidrxidos de amnio quaternrio como os hidrxidos
clordrico e ntrico. Analogamente, a titulao de cidos de tetrabutilamnio e o de trimetilexadecilamnio (em
fracos possvel com o uso de solventes bsicos como a mistura de benzeno e metanol ou lcool isoproplico) h a
n-butilamina. O amideto (CH3CH2CH2CH2NH-) uma vantagem de que o sal do cido titulado , em geral, solvel
base muito mais forte que o hidrxido. no meio de titulao.
Os solventes empregados na titulao em meio no aquoso importante que se protejam os solventes para a titulao
devem satisfazer certas exigncias: (1) no reagir com a de substncias cidas da exposio excessiva atmosfera
substncia nem com o titulante; (2) dissolver a substncia devido interferncia de CO2. Por isso, pode-se empregar
possibilitando, no mnimo, preparo de soluo 0,01 M; atmosfera inerte ou aparelho especial durante a titulao.
(3) dissolver o produto da titulao - se a precipitao for Para determinar a absoro de CO2 deve-se proceder
inevitvel, o precipitado deve ser compacto e cristalino; titulao do branco que no deve consumir mais que
(4) possibilitar, com facilidade, a visualizao do ponto 0,01 mL do metxido de sdio 0,1 M SV por mililitro de
final, seja esse medido com o uso de indicadores ou solvente.
potencimetro; (5) ser de baixo custo e de fcil purificao.
O ponto final do doseamento pode ser determinado
Para a titulao de substncias de carter bsico (aminas, visualmente pela mudana de cor ou potenciometricamente.
heterocclicos nitrogenados, compostos de amnio Geralmente a escolha do mtodo baseia-se no pKa dos
quaternrio, sais alcalinos de cidos orgnicos e inorgnicos analitos em gua. Para bases com o pKa da ordem de 4, a
e alguns sais de aminas) empregam-se solventes de natureza deteco , em geral, por meio de indicadores; para as que
relativamente neutra, ou cida, sendo o cido actico o pKa est entre 1 e 4, a deteco potenciomtrica. Nesse
glacial o mais utilizado. O anidrido actico reserva-se para caso, o eletrodo de vidro / calomelano til. Em cido
bases muito fracas como amidas. A mistura de dioxana com actico, tal eletrodo funciona de acordo com o previsto
cido actico pode ocasionalmente ser utilizada a fim da teoricamente. No caso do eletrodo de calomelano como
reduo da constante dieltrica e consequentemente menor referncia, vantajoso substituir a ponte salina de cloreto
potencial de ionizao dos cidos favorecendo a reao de potssio aquoso por perclorato de ltio 0,1 M em cido
de neutralizao. Como titulante emprega-se, geralmente, actico glacial para titulao em solventes cidos ou por
a soluo de cido perclrico em cido actico. Outros cloreto de potssio em metanol para a titulao em solventes
titulantes teis so cido perclrico em dioxana; cido bsicos. A determinao do ponto final na quantificao de
p-toluenossulfnico (cido tsico) e cido fluorsulfnico cidos cujo pKa em gua em torno de 7 pode ser feita
so geralmente utilizados com solventes aprticos como com o uso de indicador. Para os cidos com pKa entre 7
clorofrmio. e 11 recomenda-se determinao potenciomtrica, ainda
que em certos casos se recorra a indicadores, como violeta
Para o doseamento de sais de cidos halogenados (cloridrato,
azoico ou o-nitroanilina com menor preciso.
bromidrato e iodidrato) deve adicionar-se acetato de
mercrio; esse no se dissocia em soluo de cido actico. Com o uso de solventes orgnicos, deve-se considerar o
O on haleto uma base demasiadamente fraca para reagir alto coeficiente de expanso cbica da maioria desses em
quantitativamente com cido perclrico em cido actico. relao ao da gua. Isso porque h possibilidade de ocorrer
Esse on pode ser substitudo, quantitativamente, pelo on
186 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
variao do teor do titulante em meio no aquoso em funo da temperatura. Deve-se corrigir o volume do titulante,
multiplicando-o pelo fator de correo abaixo:
em que:
Os sistemas mais empregados para a titulao em meio no aquoso esto relacionados na Tabela 1.
5 lcoois
Benzeno
Alaranjado de metila
Clorobenzeno
Clorofrmio
Dioxana
Dissolver quantidade da substncia indicada na monografia Mtodo I - Dissolver quantidade da substncia especificada
em quantidade especificada do solvente, ou mistura de na monografia no solvente ou mistura de solventes
solventes adequados. No caso da titulao de sais de indicados. Adicionar o indicador recomendado ou, se
cidos halogenados, deve-se adicionar 10 mL de acetato for o caso, usar o eletrodo adequado determinao
de mercrio SR. Adicionar o indicador apropriado, ou potenciomtrica. Titular com metxido de sdio 0,1 M
no caso de determinao potenciomtrica, empregar SV previamente padronizada com cido benzoico. Evitar
eletrodo adequado titulando com cido perclrico 0,1 M a absoro de dixido de carbono. Efetuar titulao na
SV em cido actico. Para realizao do ensaio em branco, preparao em branco. Fazer as correes necessrias.
proceder da maneira descrita omitindo a amostra.
Mtodo II - Dissolver quantidade da substncia indicada na
Se t0 for diferente de t corrigir o volume por: monografia no solvente ou mistura de solventes indicados.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 187
5.3.3.8 DETERMINAO DO LCOOL coletar volume de destilado cerca de 2 mL menor que duas
vezes o volume inicial da amostra. Ajustar a temperatura
do destilado quela em que foi medida a amostra e
completar com gua a volume igual a duas vezes o volume
5.3.3.8.1 Mtodo por destilao
inicial da amostra. Misturar e determinar a densidade a 20
0
C. A proporo de C2H5OH, em volume, nesse destilado,
Esse mtodo deve ser usado na determinao de lcool, em avaliada pela densidade, igual metade daquela do
soluo que contenha lcool, a menos que na monografia lquido examinado.
seja especificado outro mtodo. adequado para anlise da
maioria dos extratos fluidos e tinturas.
Tratamentos especiais
Para evitar a ocorrncia de ebulio violenta, adicionar Iodo - Solues contendo iodo livre devem ser tratadas
fragmentos de material insolvel e poroso, tal como antes da destilao com zinco pulverizado ou descoradas
5
carbonato de silcio ou prolas de vidro. com quantidade suficiente de soluo de tiossulfato de
sdio 10% (p/v) seguida da adio de algumas gotas de
Os lquidos que formem demasiada espuma durante a hidrxido de sdio SR.
destilao devem ser tratados previamente com cido
fosfrico, sulfrico ou tnico, at reao fortemente cida Outras substncias volteis - Elixires, tinturas e
ou com ligeiro excesso de soluo de cloreto de clcio, ou preparaes similares que contenham propores
pequena quantidade de parafina ou ainda leo de silicona, apreciveis de substncias volteis, alm de lcool e gua,
antes de iniciar a destilao. tais como: leos volteis, clorofrmio, ter, cnfora etc.,
devem sofrer, antes da destilao, um dos tratamentos a
A velocidade de destilao deve ser tal que permita a seguir.
produo de destilados lmpidos. Destilados turvos devem
ser clarificados por agitao com talco ou com carbonato 1) Lquidos com menos de 50% de lcool - Misturar a
de clcio, precipitados e filtrados. Ajustar a temperatura do amostra de 35 mL, exatamente medidos, com volume igual
filtrado e determinar o teor de lcool pela densidade. de gua, em funil de separao, saturando essa mistura
com cloreto de sdio. Extrair os componentes volteis,
agitando com poro de 25 mL de hexano. Transferir
Mtodo 1 a camada inferior para um segundo funil de separao
Lquidos com menos de 30% de lcool - Transferir para e repetir a extrao com mais duas pores de hexano.
aparelho destilador adequado, por meio de pipeta, amostra Reunir as pores de hexano e tratar com 3 pores de
de, no mnimo, 35 mL do lquido no qual est sendo 10 mL de soluo saturada de cloreto de sdio. Reunir as
determinado o teor de lcool, registrar a temperatura na qual solues salinas e destilar recolhendo volume de destilado
o volume foi medido. Adicionar igual quantidade de gua, correspondente a duas vezes o volume inicial da amostra.
destilar e coletar um volume de destilado que seja cerca 2) Lquidos com mais de 50% de lcool - Medir uma amostra
de 2 mL menor que o volume inicial da amostra. Ajustar e diluir com gua de modo que contenha aproximadamente
a temperatura do destilado quela em que foi medida a 25% de lcool e que seu volume final seja cerca de 35 mL.
amostra e adicionar gua suficiente at obter o volume A seguir proceder como indicado para lquidos com menos
inicial da amostra e homogeneizar. O destilado deve ser de 50% de lcool, prosseguindo a partir de saturando essa
lmpido ou, no mximo, levemente turvo. Determinar a mistura com cloreto de sdio.
densidade do lquido a 20 oC. Com o resultado, avaliar a
porcentagem, em volume, de C2H5OH contido no lquido Na preparao de coldio para destilao, usar gua em
examinado, pela Tabela Alcoomtrica. lugar da soluo saturada de cloreto de sdio, indicada
anteriormente. Se no foi empregado na amostra o
Mtodo 2 tratamento com hexano e o destilado obtido for turvo
(devido presena de leos volteis presentes em pequenas
Lquidos com mais de 30% de lcool - Proceder como propores), ele pode ser clarificado e adequado para a
indicado no mtodo anterior, com a seguinte modificao: determinao da densidade, por agitao com cerca de 1/5
diluir a amostra com volume de gua duas vezes maior e de seu volume de hexano ou por filtrao atravs de fina
camada de talco.
190 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5.3.3.8.2 Mtodo por cromatografia a gs Se o valor obtido estiver fora da faixa dos valores includos
pelas solues padro, repetir o procedimento usando
aquelas que forneam uma faixa que inclua o valor da
Proceder de acordo com as especificaes gerais para
amostra.
Cromatografia a gs (5.2.17.5). Usar aparelho eficiente
para a determinao quantitativa de lcool.
5.3.3.9 ANLISE DE AMINOCIDOS
Soluo padro
A anlise de aminocidos realizada por meio de duas
Para lquidos contendo mais que 10% de lcool, preparar etapas: hidrlise das ligaes peptdicas e avaliao de
duas solues padro de lcool em gua, de maneira que as cada aminocido no hidrolisado resultante.
concentraes sejam, respectivamente, cerca de 5% abaixo
(soluo padro 1) e cerca de 5% acima (soluo padro 2)
da concentrao de lcool esperada na amostra sob anlise. Tcnica para hidrlise de protenas e peptdeos isolados
Determinar a densidade de cada uma das solues padro
1) Transferir quantidade de amostra contendo de 4 a 10
a 20 oC (5.2.5) e obter a concentrao exata de C2H5OH
mg de protena para tubo de ensaio de 20 x 150 mm com
pela Tabela Alcoomtrica. Para lquidos contendo menos
tampa de rosca e disco de politetrafluoretileno previamente
que 10% de lcool, preparar, exatamente, duas solues
lavado com hidrxido de sdio 0,2 M, enxaguado e seco
padro de lcool, de maneira que as concentraes sejam,
em estufa.
respectivamente, cerca de 1% menor e cerca de 1%
maior que a concentrao, esperada, diluindo com gua. 2) Se a amostra for slida, adicionar 5 de cido clordrico
Determinar as densidades das solues do mesmo modo e 5 mL de gua. Se a amostra for lquida, adicionar cido
que as anteriores. clordrico de modo que a concentrao final de cido
5
clordrico seja 6 M.
EQUIPAMENTO
3) Remover o oxignio do tubo por fluxo de nitrognio
Sob condies tpicas, o instrumento contm uma coluna durante 2 - 3 minutos. Fechar em seguida o tubo com disco
de 2 m x 4 mm carregada com macrogol (polietilenoglicol) e tampa rosquevel.
400 a 20% em slica cromatogrfica calcinada. A coluna
4) Colocar o tubo na posio vertical em estufa regulada a
mantida na temperatura de 100 oC; o injetor equipado
110 C 2 C mantendo-o por 22 h.
com filtro para slidos e mantido a 160 oC; como condutor
usa-se gs inerte, como hlio, fluindo com vazo de cerca 5) Remover o tubo da estufa e, ainda na vertical, resfri-lo
de 60 mL por minuto. em gua corrente ou banho de gelo.
2) Adicionar ao meio 40 mL de cido clordrico 6 M e 7) Acoplar o balo a evaporador rotatrio e remover por
algumas prolas de vidro. meio de presso reduzida o bromo residual fazendo os
vapores passar por soluo de hidrxido de sdio M.
3) Conectar condensador de refluxo e iniciar o aquecimento
do balo usando manta eltrica. Manter a suspenso sob 8) Proceder hidrlise como descrito anteriormente.
ebulio constante e suave por 24 h.
5
o volume com o mesmo tampo acima. Este ensaio iodomtrico de antibitico destina-se ao
4) Filtrar a soluo e manter sob refrigerao (4 C) at ser
o doseamento de frmacos antibiticos penicilmicos e de
analisada. seus produtos farmacuticos elaborados, para os quais a
titulao iodomtrica particularmente adequada.
5
que a esterilizao no necessria.
PROCEDIMENTO em que
necessrio realizar, ao mesmo tempo, anlises microscpica a sua textura. Tratando-se de rgo recm-colhido, apenas
e fsico-qumica da amostra. A inspeo microscpica os de consistncia mais firme necessitam de tal tratamento.
indispensvel quando o material estiver rasurado ou em p.
Mtodo de hidratao para materiais secos
Tamanho
Colocar a amostra em soluo de hidratao, preparada
Medidas de comprimento, largura e espessura devem com cinco partes de gua, quatro partes de etanol, uma
coincidir com aquelas citadas nas monografias. Frutos parte de glicerina e cinco gotas de detergente comercial
e sementes pequenos exigem uma amostra igual a dez para cada 200 mL de soluo, em estufa a 60 C, por, no
unidades e posteriores clculos da mdia e do desvio mnimo, 48 horas.
padro.
EXECUO DOS CORTES
Cor
Uma vez amolecidos, proceder preparao dos cortes
Examinar a matria-prima antes de qualquer tratamento, dos rgos vegetais ou suas partes. As seces podem ser
luz do dia ou sob lmpadas de comprimento de onda realizadas com o auxlio de objeto cortante como navalha,
similares aos da luz do dia. A cor da amostra deve ser lmina de barbear ou bisturi, para cortes mo livre. A
comparada com o material de referncia. fim de ser seccionada, incluir a amostra em material
adequado, que permita fixar o fragmento. Seces de
melhor qualidade podem ser obtidas com o emprego de
Superfcie, textura e fratura
micrtomos. H, basicamente, trs tipos de micrtomos:
Examinar a matria-prima antes de qualquer tratamento. os de congelamento, usados para os materiais mais frgeis;
Quando necessrio, utilizar lente de cinco at dez os rotativos, para cortes em srie de material includo
aumentos. Quando indicado na monografia, umedecer com
gua ou reagente especificado para observar caractersticas
da superfcie de fratura. Tocar o material para verificar se
em parafina; e os de guia, para aqueles materiais mais
resistentes, como ramos, partes de caules e de razes. Nesse
ltimo caso, um mtodo relativamente fcil de preparo do
5
macio ou duro, dobrar e partir o material para a obteno material a ser seccionado consiste em sua incluso em
de informaes quanto fragilidade e aparncia da fratura, macrogol solvel em gua ou em historresina.
se fibrosa, lisa, rugosa, granulada, entre outras.
Incluso do material em parafina
Odor
- Ferver a amostra em gua, quando seca, para amolecer e
Antes de verificar o odor do material, certificar-se de retirar o ar;
que no existe risco. Colocar uma pequena amostra na - desidratar a amostra em srie de etanol diludo em gua:
palma da mo ou em recipiente de vidro e inalar devagar 50, 70, 80, 96% e, por ltimo, em etanol absoluto;
e repetidamente. Se o odor for indistinto, pressionar parte - transferir a amostra para mistura de etanol absoluto e
do material entre os dedos e inalar novamente. Quando xileno na proporo 3:1 (v/v) e, a seguir, para 1:1 e 1:3;
a monografia indicar material txico, colocar um pouco
- transferir a amostra para xileno puro;
de material esmagado em gua quente. Primeiramente,
determinar a intensidade do odor: nenhum; fraco; distinto - transferir a amostra para xileno em parafina na proporo
ou forte e, a seguir, a sensao causada pelo odor: 1:1, mantendo-a em estufa;
aromtico; frutoso; mofado ou ranoso. Quando possvel, - transferir a amostra para parafina aquecida, para
importante a comparao do odor com substncia definida, que ocorra a infiltrao, mantendo-a na estufa at que
como, por exemplo, hortel-pimenta deve ter odor similar permanea depositada no fundo do recipiente;
ao mentol e cravo-da-ndia, similar ao eugenol. - emblocar e deixar esfriar em recipiente com gua gelada;
- aparar o bloco para introduo no micrtomo;
Sabor - seccionar o material e colocar em lmina de vidro
Testar o sabor apenas quando exigido na monografia. previamente untada com adesivo de Haupt ou Bissing;
- colocar as lminas sobre placa aquecedora para distender
os cortes;
5.4.1.2 PREPARAO DO MATERIAL - desparafinizar;
PARA ANLISE MICROSCPICA
- aguardar, no mnimo, uma hora antes de corar.
- colocar a amostra em bquer, contendo macrogol a 20% (duas vezes), xileno. Montar em lminas com blsamo do
(p/v); Canad ou resina sinttica.
- marcar o bquer, a partir da superfcie do lquido, - Safranina-Fast Green: colore a lignina de vermelho e a
dividindo-o em cinco partes aproximadamente iguais; celulose de verde. No desparafinizar as lminas. Colocar
- deixar o material em estufa a 65 C por 3 a 4 dias; em soluo aquosa de safranina a 1% (p/v) por 10 a 20
minutos (ou mais). Lavar em gua corrente. Colocar em
- quando a soluo evaporar at 1/5 de seu volume inicial,
gua destilada por 1 minuto. Escorrer a gua da lmina.
transferir a amostra para macrogol puro e fundido onde
Colocar em Fast Green a 0,5% (p/v) em etanol por 10 a
deve permanecer durante 12 a 25 horas, em estufa a 65 C;
40 minutos. Lavar em gua corrente. Colocar em gua
- retirar da estufa, emblocar e deixar esfriar temperatura destilada por 1 minuto. Repetir a operao. Escorrer a gua
ambiente; da lmina. Secar em placa aquecedora por 30 minutos.
- aparar os blocos para introduo no micrtomo; Remover a parafina com xileno em duas trocas de 5
- seccionar o material a seco; minutos. Montar em lminas com blsamo do Canad ou
resina sinttica.
- lavar os cortes com gua e corar.
5
agente acelerador ou catalisador. A mistura e temperatura
sobre protenas, amido, gordura, resinas e matrias corantes.
devem seguir as especificaes, para que haja completa
O hidrato de cloral, tambm, agente diafanizador e,
interao, obtendo-se como produto final um polmero.
embora de ao mais lenta que os hidrxidos alcalinos, tem
Os materiais vegetais devem ser previamente fixados e
a vantagem de no dissolver o oxalato de clcio.
desidratados. Sugere-se que as seces a serem emblocadas
sejam imersas na resina durante uma noite, para que Dependendo da finalidade a que se destina, podem-se
haja completa infiltrao. S aps, substituir a resina de montar os cortes em lminas para observao imediata ou
infiltrao pela mistura de nova poro de resina, agente em lminas ditas permanentes.
endurecedor e agente acelerador. A resina de infiltrao
pode ser reutilizada por duas a quatro vezes, devendo ento Nas preparaes para observao, imediata, depois de
ser descartada. Os cortes so colocados sobre as lminas selecionados e corados, montam-se os cortes em meio
sem adesivo. Corar. adequado, tomando-se o cuidado de evitar a formao de
bolhas de ar. Se o exame for mais prolongado, recomenda-
se revestir os bordos da lamnula de um luto (selo), que
MTODOS DE COLORAO
pode ser esmalte de unhas, blsamo do Canad ou soluo
Os mtodos de colorao podem compreender a aplicao alcolica de goma-laca, para evitar a evaporao do meio
de um s corante (colorao simples) ou de dois ou trs de montagem, todos eles aplicveis com o auxlio de pincel
corantes diferentes (colorao composta). macio e pequeno.
Mtodo de dissociao de tecidos - transferir os fragmentos para uma lmina, cuidando para
que a face abaxial fique disposta para cima;
- Cortar o material em pequenos fragmentos ou em fatias
- adicionar uma gota de hidrato de cloral e uma gota de
com cerca de 300 nm de espessura e colocar em gua;
etanol glicerinado e cobrir com lamnula para impedir a
- retirar todo o ar do material, fervendo e resfriando desidratao. Selar.
rapidamente;
- macerar o material em soluo de Jeffrey. O tempo de Classificao dos estmatos e determinao do ndice
macerao varia com a natureza do material. Geralmente estomtico
as clulas comeam a se separar em cerca de 24 horas.
Se necessrio, pode ser usado basto de vidro de ponta A classificao empregada, didaticamente, para determinao
arredondada para amassar muito levemente o material. dos tipos de estmatos (Figura 1), se baseia na forma e
- Havendo dificuldade na separao das clulas, renovar a disposio das clulas que os rodeiam. Os tipos bsicos so:
soluo maceradora;
1) Anomoctico (clulas irregulares): os estmatos so
- lavar muito bem o material com gua de torneira, para rodeados por um nmero varivel de clulas que no
remover os cidos. Verter a mistura com o tecido macerado diferem, em geral, em nenhuma caracterstica das outras
para um funil contendo papel de filtro; clulas fundamentais da epiderme;
- fechar a abertura inferior do funil e cobrir o macerado
com soluo aquosa de safranina a 1% (p/v), durante tempo 2) Anisoctico (clulas desiguais): os estmatos so
suficiente para boa colorao do material (de 15 minutos a normalmente rodeados por 3 ou 4 clulas subsidirias, sendo
6 horas); uma delas, nitidamente, menor do que as outras;
- abrir a ponta do funil e lavar novamente com gua, at 3) Diactico (clulas transversais): os estmatos so
retirar o excesso de corante; acompanhados por 2 clulas subsidirias, cujas paredes
- desidratar pela adio de solues de etanol a 50%, 70%,
90% e etanol absoluto;
comuns formam um ngulo reto com as clulas-guarda dos
estmatos; 5
retirar com pina o macerado do papel de filtro e colocar em
4) Paractico (clulas paralelas): os estmatos apresentam de
xileno;
cada lado uma ou vrias clulas subsidirias paralelas ao eixo
- montar entre lmina e lamnula, com resina sinttica ou longitudinal do ostolo e s clulas-guarda dos estmatos.
blsamo do Canad;
- manter a lmina em posio horizontal, porm no utilizar
peso sobre a lamnula, pois as clulas maceradas so muito
frgeis.
ANLISE DO P (IDENTIFICAO DE MATRIA- 1 gota de tionina SR amostra seca, deixando repousar por
PRIMA COMERCIALIZADA EM P) 15 minutos, seguida de lavagem em etanol a 20% (v/v). A
mucilagem toma-se violeta-avermelhada (lignina e celulose
- Colocar 1 ou 2 gotas de gua, ou glicerol-etanol (1:1) ou coram-se de azul ou azul-violeta).
hidrato de cloral em uma lmina;
- acrescentar um pouco do p e misturar com um pincel fino Oxalato de clcio. Cristais de oxalato de clcio so
e macio; insolveis em cido actico a 6% (p/v) e solveis em cido
clordrico a 7% (p/v), sem produzir efervescncia.
- cobrir com lamnula e observar ao microscpio;
- outros fluidos podem ser usados com a mesma tcnica; Protenas. Adicionar ninidrina a 0,5% (p/v) em etanol
- corantes ou reaes histoqumicas podem ser utilizados. absoluto, e manter a 37 C por 24 horas. Lavar em etanol
absoluto e em gua destilada, adicionar fucsina descorada
SR e deixar em contato por 10 a 30 minutos. Lavar em
REAES HISTOQUMICAS gua e adicionar bissulfito de sdio a 2% (p/v), deixar em
As reaes podem ser feitas com material fresco seccionado contato por 1 a 2 minutos. Lavar em gua corrente por 10
ou material cortado em micrtomo e includo em parafina ou a 20 minutos, desidratar e montar a lmina. As protenas
macrogol, adicionando-se uma gota dos reativos sobre uma coram-se de vermelho prpura. Realizar esse procedimento
lmina com uma seco da amostra. somente com material fresco.
Amido. Adicionar uma gota de iodo SR. O amido adquire Saponinas. Adicionar uma gota de cido sulfrico. Ocorre
colorao azul ou azul-violeta. uma sequncia de cor amarela, seguida de cor vermelha e,
finalmente, cor violeta ou azul-esverdeada.
Carbonato de clcio. Adicionar cido actico a 6% (p/v)
ou cido clordrico a 7% (p/v). Cristais ou depsitos de Taninos. Adicionar cloreto frrico a 10% (p/v) e uma
5 carbonato de clcio dissolvem-se lentamente, com produo pequena quantidade de carbonato de sdio, deixar em
de efervescncia. contato por 2 a 3 minutos, lavar com gua destilada. Os
taninos coram-se de azul-esverdeado.
Hidroxiantraquinonas. Adicionar uma gota de
hidrxido de potssio a 5% (p/v). As clulas que contm
1,8-diidroxiantraquinonas coram de vermelho. 5.4.2 MTODOS DE ANLISE
Inulina. Adicionar 1 gota de 1-naftol SR e cido sulfrico. DE DROGAS VEGETAIS
Esferocristais de inulina coram-se de roxo-avermelhado e se
dissolvem.
5.4.2.1 AMOSTRAGEM
Lignina. Adicionar 1 gota de floroglucina SR, aquecer
rapidamente a lmina e adicionar uma gota de cido
clordrico a 25% (p/v). A lignina cora-se de vermelho. Os procedimentos de amostragem especificados levam
em considerao trs aspectos: (a) nmero de embalagens
Lipdeos. Adicionar Sudan III SR ou Sudan IV SR por 10 que contm a droga; (b) grau de diviso da droga e (c)
minutos, lavar rapidamente com etanol a 70% (v/v). Lipdios, quantidade de droga disponvel.
cutina e suberina coram-se de laranja-avermelhado.
Tabela 1 Nmero de embalagens a serem amostradas de acordo com o nmero de embalagens existentes.
PROCEDIMENTO
5.4.2.4 DETERMINAO DE CINZAS
TOTAIS Aquecer ao rubro por 10 minutos um cadinho de porcelana,
deixar esfriar em um dessecador e pesar. Colocar
exatamente cerca de 1,0 g da droga no cadinho previamente
As cinzas totais incluem cinzas fisiolgicas e cinzas no- tarado e umedea a droga com cido sulfrico concentrado
fisiolgicas. e carbonize em bico de Bunsen. Umedea novamente com
cido sulfrico concentrado, carbonize e incinere com
PROCEDIMENTO aquecimento gradativo at 800 C. Esfrie, pese novamente,
incinere por mais 15 minutos. Repita esse procedimento
Pesar, exatamente, cerca de 3 g da amostra pulverizada, at que a diferena entre duas pesagens sucessivas no seja
ou a quantidade especificada na monografia, transferir maior que 0,5 mg.
para cadinho (de silcio ou platina) previamente tarado.
Distribuir a amostra uniformemente no cadinho e incinerar
aumentando, gradativamente, a temperatura at, no 5.4.2.7 DETERMINAO DE LEOS
mximo, 600 25 C, at que todo o carvo seja eliminado. VOLTEIS EM DROGAS VEGETAIS
Um gradiente de temperatura (30 minutos a 200 C, 60
minutos a 400 C e 90 minutos a 600 C) pode ser utilizado. O teor de leos volteis em drogas vegetais determinado
Resfriar em dessecador e pesar. Nos casos em que o carvo pelo processo de destilao por arraste de vapor, com auxlio
PROCEDIMENTO
1) balo de fundo redondo de 500 mL a 1000 mL de a torneira e cronometrar o tempo necessrio para encher o
capacidade, de colo curto, provido de uma junta 24/40, volume compreendido entre os traos de referncia inferior
fmea; e superior (3 mL). Abrir a torneira e continuar a destilao
2) condensador, adaptvel ao balo por meio de uma junta por 30 minutos. Desligar o aquecimento, deixar esfriar por
esmerilhada 24/40, macho, construdo em pea nica de 10 minutos e fazer a leitura do volume de xileno no tubo
vidro, compreendendo as partes descritas a seguir, com as graduado.
respectivas medidas:
2.1) tubo vertical (AC) de 210 a 260 mm de comprimento e
13-15 mm de dimetro interno;
2.2) tubo dobrado, com segmentos (CD) e (DE) medindo
145-155 mm de comprimento cada e dimetro interno de
7-8 mm;
2.3) condensador de bolas, tipo Allihn (FG), de 145-155 mm
de comprimento e dimetro interno de 15 mm nas bolas e
8-10 mm nos estreitamentos;
2.4) rolha (junta esmerilhada 14/20) (K) contendo orifcio de
cerca de 1 mm de dimetro, que obtura uma sada lateral (K) Figura 2 Indicao para determinar a velocidade de destilao.
provida de junta esmerilhada 14/20 fmea, na extremidade;
Introduzir no balo a quantidade de droga prescrita na
2.5) tubo (GH) de 30-40 mm de comprimento e 7-8 mm de
monografia e destilar por arraste de vapor, como descrito
dimetro interno, formando as partes (HK) ngulo (GHK)
acima, pelo tempo e na velocidade indicada na monografia.
de 30 a 40;
Terminada a operao, deixar esfriar por 10 minutos e ler
5
2.6) alargamento em forma de pra (J) de 3 mL de capacidade; o volume do leo essencial recolhido no tubo graduado.
2.7) tubo (JL) provido de escala graduada de 100-110 mm; Subtrair da leitura o volume do xileno determinado
de 3 mL de capacidade e subdividida em vigsimos de anteriormente. A diferena representa a quantidade de
mililitro; leo essencial contida na amostra. Calcular o resultado em
2.8) alargamento em forma de bola (L) de aproximadamente mililitros de leo essencial por 100 g da droga.
2 mL de capacidade;
2.9) torneira de 3 vias; 5.4.2.8 DETERMINAO DE LEOS
2.10) tubo de conexo (BM) de 7-8 mm de dimetro, provido FIXOS
de tubo de segurana. O ponto de insero (B) encontra-se a
20-25 mm acima da parte mais alta da escala graduada;
A determinao de leos fixos baseia-se na sua extrao por
3) onte de calor que pode ser aquecedor eltrico ou bico de solvente que, depois de evaporado, deixa como resduo o
gs dotado de regulagem fina da chama; leo cuja quantidade determinada por pesagem.
4) suporte vertical adequado.
Caso a amostra contenha teor elevado de componentes
Antes da utilizao, o aparelho deve ser limpo por hidrossolveis (carboidratos, ureia, cido ltico, entre
lavagens repetidas e sucessivas com acetona, gua, mistura outros), cabe pr-tratamento da amostra a fim de evitar
sulfocrmica e novamente gua. Depois de seco, deve ser interferncia na determinao de matrias graxas. Para tanto,
montado em local protegido de correntes de ar. A escala transferir a tomada de ensaio para funil contendo papel de
graduada deve ser aferida e, se necessrio, estabelecer fator filtro, lavar com gua e secar o resduo em estufa a 105 C
de correo para cada aparelho. durante 2 horas.
5
Erros, tambm, advm da presena de umidade, seja na
essncia ou no o-cresol. O o-cresol empregado deve ser puro
e seco, apresentando ponto de fuso superior a 30 C. Deve ser
conservado em frasco hermtico, por ser higroscpico.
Temperatura (C) 0,0 0,1 0,2 0,3 04 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9
24 45,6 45,7 45,9 46,0 46,1 46,3 46,4 46,5 46,6 46,8
25 46,9 47,0 47,2 47,3 47,4 47,6 47,7 47,8 47,9 48,1
26 48,2 48,3 48,5 48,6 48,7 48,9 49,0 49,1 49,2 49,4
27 49,5 49,6 49,8 49,9 50,0 50,2 50,3 50,4 50,5 50,7
28 50,8 50,9 51,1 51,2 51,3 51,5 51,6 51,7 51,8 52,0
29 52,1 52,2 52,4 52,5 52,6 52,8 52,9 53,0 53,1 53,3
30 53,4 53,5 53,7 53,8 53,9 54,1 54,2 54,3 54,4 54,6
31 54,7 54,8 55,0 55,1 55,2 55,4 55,5 55,6 55,7 55,9
32 56,0 56,1 56,3 56,4 56,5 56,7 56,8 56,9 57,0 57,2
33 57,3 57,4 57,6 57,7 57,8 58,0 58,1 58,2 58,3 58,5
34 58,6 58,7 58,9 59,0 59,1 59,3 59,4 59,5 59,6 59,8
35 59,9 60,0 60,2 60,3 60,4 60,6 60,7 60,8 60,9 61,1
36 61,2 61,3 61,5 61,6 61,7 61,9 62,0 62,1 62,2 62,4
37 62,5 62,6 62,8 62,9 63,0 63,2 63,3 63,4 63,5 63,7
38 63,8 63,9 64,1 64,2 64,4 64,5 64,6 64,8 64,9 65,1
39 65,2 65,4 65,5 65,7 65,8 66,0 66,2 66,3 66,5 56,6
40 66,8 67,0 67,2 67,3 67,5 67,7 67,9 68,1 68,2 68,4
41 68,6 68,8 69,0 69,2 69,4 69,6 69,7 69,9 70,1 70,3
42
43
70,5
72,3
70,7
72,5
70,9
72,7
71,0
72,9
71,2
73,1
71,4
73,3
71,6
73,4
71,8
73,6
71,9
73,8
72,1
74,0 5
44 74,2 74,4 74,6 74,8 75,0 75,2 75,3 75,5 75,7 75,9
45 76,1 76,3 76,5 76,7 76,9 77,1 77,2 77,4 77,6 77,8
46 78,0 78,2 78,4 78,6 78,8 79,0 79,2 79,4 79,6 79,8
47 80,0 80,2 80,4 80,6 80,8 81,1 81,3 81,5 81,7 81,9
48 82,1 82,3 82,5 82,7 82,9 83,2 83,4 83,6 83,8 84,0
49 84,2 84,4 84,6 84,8 85,0 85,3 85,5 85,7 85,9 86,1
50 86,3 86,6 86,8 87,1 87,3 87,6 87,8 88,1 88,3 88,6
51 88,8 89,1 89,3 89,6 89,8 90,1 90,3 90,6 90,8 91,1
52 91,3 91,6 91,8 92,1 92,3 92,6 92,8 93,1 93,3 93,6
53 93,8 94,1 94,3 94,6 94,8 95,1 95,3 95,6 95,8 96,1
54 96,3 96,6 96,9 97,2 97,5 97,8 98,1 98,4 98,7 99,0
55 99,3 99,7 100,0
5.4.2.10 DETERMINAO DO NDICE DE Se a altura da espuma de todos os tubos for inferior a 1 cm,
ESPUMA o ndice de espuma menor do que 100.
Pesar, exatamente, cerca de 2 g da droga e transferir para As propriedades amargas dos materiais vegetais so
cartucho do extrator de Soxhlet, previamente tarado e seco. determinadas pela comparao da concentrao limiar
Introduzir no balo do extrator 0,2 g de hidrxido de sdio de amargor de um extrato com a de uma soluo diluda
e etanol absoluto em quantidade suficiente. Extrair por 5 de cloridrato de quinina. O valor do ndice de amargor
horas, retirar o cartucho com o resduo e sec-lo em estufa expresso em termos de unidades, equivalentes a uma
a 105 C por 30 minutos. Pesar o resduo seco e calcular soluo de cloridrato de quinina a 0,05% (p/v).
o teor de substncias extraveis por etanol por diferena
entre o peso da amostra e o peso do resduo seco. Referir o Para a extrao dos materiais vegetais e para a lavagem
resultado em relao droga seca (Determinao de gua da boca depois de cada degustao, deve-se utilizar gua
em drogas vegetais, 5.4.2.3). potvel como veculo. A dureza da gua raramente tem
influncia significativa sobre o amargor.
5
vegetal seca, finamente, pulverizada. Adicionar 100 mL de material a ser testado com cloridrato de quinina deve ser
gua e pesar para obter o peso total, incluindo o frasco. feita pela mesma pessoa, dentro de um curto espao de
Tampar, agitar bem e deixar descansar por 1 h. Acoplar tempo. A sensao de amargor no percebida por toda
um condensador de refluxo e aquecer por 1 h, resfriar e a superfcie da lngua, mas restrita s partes superior e
pesar. Aps o refluxo, corrija o peso original com solvente lateral da base da lngua. A determinao da concentrao
especificado no ensaio para a droga vegetal. Misturar bem limiar da soluo requer treinamento do analista.
e filtrar, rapidamente, por meio de um filtro seco. Transferir Primeiramente, feita a determinao da concentrao
25 mL do filtrado para uma cpsula de porcelana tarada e limiar do cloridrato de quinina e, em seguida, a do material
evaporar at secura em banho de gua. Secar 105 C por 6 a ser testado. Indivduos insensveis sensao amarga
h, esfriar em dessecador por 30 min e pesar, imediatamente. induzida por uma soluo contendo 0,058 mg de cloridrato
Calcular a porcentagem de materiais extrados em mg/g de de quinina em 10 mL de gua no so indicados para a
material seco. realizao do teste.
Tabela 1 Diluies de cloridrato de quinina para o teste inicial na obteno do ndice de amargor.
1 2 3 4 5 6 7 8 9
SQ (mL) 4,2 4,4 4,6 4,8 5,0 5,2 5,4 5,6 5,8
gua potvel (mL) 5,8 5,6 5,4 5,2 5,0 4,8 4,6 4,4 4,2
Cloridrato de quinina (mg/10 mL) (c) 0,042 0,044 0,046 0,048 0,050 0,052 0,054 0,056 0,058
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 203
Preparar a soluo estoque como especificado na monografia (ST). Utilizar 10 tubos de ensaio para a diluio em srie,
como indicado na Tabela 2 para o segundo teste.
Tabela 2 Diluies da soluo estoque para o segundo teste na obteno do ndice de amargor.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
ST (b) (mL) 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00 10,0
gua potvel (mL) 9,00 8,00 7,00 6,00 5,00 4,00 3,00 2,00 1,00 -
5
a diluio de menor concentrao em que o material ainda sistema em repouso por um perodo especfico de tempo.
provoca sensao de amargor. Aps a primeira srie de Um teste similar feito simultaneamente com soluo de
testes, enxaguar bem a boca com gua, at que o amargor referncia de saponina.
no seja mais percebido e esperar, no mnimo, 10 minutos
antes de fazer a segunda srie de testes.
PROCEDIMENTO
Nessa srie de testes, para maior rapidez, aconselhvel
Para a preparao da suspenso de sangue, colocar citrato
assegurar que a soluo no tubo nmero 5 (contendo
de sdio a 3,65% (p/v) em um frasco com tampa at 1/10 de
5 mL de ST em 10 mL de soluo) provoque sensao
sua capacidade. Agitar para molhar totalmente as paredes do
de amargor. Se percebida, encontrar a concentrao de
frasco e adicionar sangue bovino fresco, com nova agitao.
amargor do material, provando as diluies nos tubos de
O sangue, com citrato de sdio, assim preparado pode ser
nmeros 1 a 4. Se a soluo no tubo de nmero 5 no
armazenado por 8 dias a uma temperatura entre 2 oC e 4 oC.
provocar sensao de amargor, encontrar a concentrao
limiar de amargor nos tubos de nmeros 6 a 10. Em balo volumtrico de 50 mL, diluir, cuidadosamente,
1 mL de sangue com citrato de sdio em quantidade
Todas as solues e a gua devem estar numa temperatura
suficiente de tampo fosfato pH 7,4 para completar 50 mL.
entre 20 C e 25 C.
Essa suspenso de sangue diluda (2%) pode ser utilizada
O ndice de amargor calculado segundo a equao: durante o tempo em que o lquido sobrenadante permanecer
lmpido e incolor, sendo mantida fria.
Tubo 1 2 3 4
Extrato vegetal (mL) 0,10 0,20 0,50 1,00
Tampo fosfato pH 7,4 (mL) 0,90 0,80 0,50
Suspenso de sangue (2%) (mL) 1,00 1,00 1,00 1,00
204 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Logo que os tubos forem preparados, invert-los Se, aps 6 horas, todos os tubos contiverem um lquido
cuidadosamente para misturar, evitando a formao da lmpido e vermelho, preparar uma soluo diluda 10 vezes
espuma. Aps 30 minutos, agitar novamente e deixar e fazer o teste preliminar, como descrito acima.
descansar por 6 horas temperatura ambiente. Examinar
os tubos e anotar em qual diluio ocorreu hemlise total, Se a hemlise total no for observada em nenhum dos
o que ser constatado no lquido, lmpido, vermelho e sem tubos, repetir o teste preliminar, usando um extrato mais
depsito de eritrcitos. concentrado.
Tubos 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
Extrato vegetal (ou
0,40 0,45 0,50 0,55 0,60 0,65 0,70 0,75 0,80 0,85 0,90 0,95 1,00
diluio) (mL)
5
Tampo fosfato (mL) 0,60 0,55 0,50 0,45 0,40 0,35 0,30 0,25 0,20 0,15 0,10 0,05
Suspenso de
1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00
sangue 2% (mL)
Fazer as diluies e avaliaes como no teste preliminar, Conduzir, simultaneamente, no mnimo, trs
observando os resultados aps 24 horas. Calcular a determinaes. Pesar, exatamente, 1 g da droga vegetal
quantidade de material vegetal em gramas, ou proporo pulverizada e colocar em proveta de 25 mL com tampa
em g/mL que produz hemlise total (b). esmerilhada. O comprimento da parte graduada deve ser
de, aproximadamente, 125 mm e o dimetro, interno,
prximo a 16 mm, subdividido em 0,2 mL, marcado de 0 a
Teste para saponinas
25 mL, de forma ascendente. Adicionar 25 mL de gua, ou
Para eliminar o efeito de variaes individuais na resistncia outro agente definido, e agitar a cada 10 minutos, por uma
de suspenso de sangue soluo de saponina, preparar hora. Deixar a mistura repousar por 3 horas, temperatura
uma srie de diluies de saponina da mesma maneira ambiente. Medir o volume, em mililitros, ocupado pelo
descrita anteriormente para o extrato vegetal. Calcular a material vegetal acrescido da mucilagem ou qualquer
quantidade de saponinas (g) que produz hemlise total (a). outro material aderido subtrado do volume inicial da
droga. Calcular o valor mdio obtido a partir das vrias
determinaes individuais realizadas e relacionar a 1 g de
Atividade hemoltica
material vegetal.
A atividade hemoltica calculada segundo a equao
extrato, em massa ou volume, corresponde a uma parte, 5.4.3.1.2 Extratos moles (Extracta spissa)
em massa, da droga seca, utilizada na sua preparao. Se
necessrio, os extratos fluidos podem ser padronizados, em
termos de concentrao do solvente, teor de constituintes DEFINIO
ou resduo seco. Se necessrio, podem ser adicionados de
conservantes inibidores do crescimento microbiano. Os extratos moles so preparaes de consistncia pastosa
obtidos por evaporao parcial do solvente utilizado
na sua preparao. So obtidos utilizando-se como
OBTENO
solvente unicamente etanol, gua ou misturas etanol/
Os extratos fluidos podem ser obtidos por percolao, gua na proporo adequada. Apresentam, no mnimo,
macerao ou por dissoluo de extratos secos ou moles 70% de resduo seco (p/p). Os extratos moles podem ser
utilizando como solvente unicamente etanol, gua adicionados de conservantes para inibir o crescimento
ou misturas etanol/gua de proporo adequada. Se microbiano.
necessrio, o extrato obtido pode ser filtrado. Qualquer que
seja o processo de obteno, os extratos fluidos apresentam OBTENO
composio e caractersticas comparveis. A formao de
um ligeiro sedimento durante a armazenagem aceitvel, Os extratos moles so obtidos a partir de extratos fluidos
desde que a composio do extrato no sofra modificaes preparados empregando unicamente etanol, gua ou
significativas. misturas etanol/gua na proporo adequada; aps
evaporao parcial do solvente. Apresentam no mnimo 70
% de resduo seco (p/p).
ENSAIOS DE PUREZA
Determinao do resduo seco (5.4.3.2.2). O resduo seco - nomenclatura botnica da droga que deu origem ao
deve cumprir com o especificado na monografia. extrato;
- nome e quantidade do material inerte utilizado;
EMBALAGEM E ARMAZENAMENTO - se o extrato foi preparado com planta fresca (quando for
o caso);
Em recipientes bem fechados, ao abrigo da luz. - composio do solvente e o teor de etanol em porcentagem
(v/v) no extrato lquido que lhe deu origem;
ROTULAGEM teor de princpios ativos e/ou relao droga/extrato final;
O rtulo deve conter as seguintes informaes: - nome e concentrao de conservantes antimicrobianos
adicionados.
- nomenclatura botnica da droga que deu origem ao
extrato;
5.4.3.1.3 Extratos secos (Extracta sicca)
- se o extrato foi preparado com planta fresca (quando for
o caso);
- composio do solvente e o teor de etanol em porcentagem DEFINIO
(v/v) no solvente utilizado na
- preparao; Extratos secos so preparaes slidas obtidas pela
evaporao do solvente utilizado na sua preparao.
- quando for o caso o teor de etanol em porcentagem (v/v)
Apresentam, no mnimo, 95% de resduo seco, calculados
no produto final;
como percentagem de massa. Os extratos secos podem ser
- teor de princpios ativos e/ou relao droga/extrato final; adicionados de materiais inertes adequados.
- nome e concentrao de conservantes antimicrobianos
adicionados.
206 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5 Em recipientes hermeticamente fechados, ao abrigo da luz. - se o extrato foi preparado com planta fresca (quando for
o caso);
ROTULAGEM - nome do solvente e o teor de etanol em porcentagem (v/v)
no solvente utilizado na preparao;
O rtulo deve conter:
- teor de princpios ativos e/ou relao droga / extrato final.
- nomenclatura botnica da droga que deu origem ao
extrato;
5.4.3.2 MTODOS DE ANLISE DE
- nome e quantidade do material inerte utilizado; EXTRATOS VEGETAIS
- se o extrato foi preparado com planta fresca (quando for
o caso);
- nome do solvente e o teor de etanol em porcentagem (v/v) 5.4.3.2.1 Determinao de metanol e 2-propanol
no solvente utilizado na preparao;
em extratos fluidos
- teor de princpios ativos e/ou relao droga / extrato final.
Proceder destilao do extrato conforme descrito
5.4.3.1.3 Extratos secos (Extracta sicca) em Determinao de etanol (5.3.3.8.1). Examinar o
destilado por Cromatografia a gs (5.2.17.5), utilizando
cromatgrafo provido de detector de ionizao de chama,
DEFINIO coluna cromatogrfica de vidro com 2 m de comprimento
e 2 mm de dimetro interno, empacotada com copolmero
Extratos secos so preparaes slidas obtidas pela de etilvinilbenzeno / divinilbenzeno, partculas de 125 m
evaporao do solvente utilizado na sua preparao. a 150 m, e nitrognio para cromatografia como gs de
Apresentam, no mnimo, 95% de resduo seco, calculados arraste, com fluxo de 30 mL/min. Manter a temperatura da
como percentagem de massa. Os extratos secos podem ser coluna em 130 C, a temperatura do injetor em 200 C e a
adicionados de materiais inertes adequados. temperatura do detector em 220 C.
Os extratos secos padronizados tm o teor de seus Soluo padro interno: soluo de 1-propanol a 2,5%
constituintes ajustado pela adio de materiais inertes (v/v) em gua.
adequados ou pela adio de extratos secos obtidos com a
mesma droga utilizada na preparao. Soluo amostra: adicionar a um volume determinado do
destilado 2 mL da soluo padro interno. Diluir para 50
Quando necessrio, a monografia poder prescrever mL com gua ou etanol a 90% (v/v), ajustando o teor de
realizao de ensaio limite para o solvente utilizado na etanol para 10% (v/v).
preparao.
Soluo padro: preparar 50 mL de soluo contendo 2
mL de soluo padro interno, 10% de etanol (v/v), 0,05%
de 2-propanol (v/v) e 0,05% de metanol anidro (v/v).
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 207
5
MTODO DO PONTO DE EQUIVALNCIA
Pesar, em placa de Petri medindo, aproximadamente, 50
mm em dimetro e 30 mm de altura, 0,50 g de extrato seco Transferir 40 L de cada poo para uma segunda srie
finamente pulverizado. Dessecar em estufa a 100 - 105 C de poos, juntar 20 L da soluo do Fator Xa bovino
por 3 horas. Deixar esfriar em dessecador, sobre pentxido e incubar a 37 C durante 30 segundos. Juntar 40 L de
de fsforo e pesar. Calcular o resduo seco em porcentagem soluo do Substrato cromognico para o Fator Xa a 1
sobre a massa. mmol/L e incubar a 37 C, durante 3 minutos. Parar a
reao diminuindo o pH com um reagente apropriado, tal
como uma soluo de cido actico glacial a 20% (v/v) e
5.5 MTODOS BIOLGICOS, medir a absorvncia a 405 nm (5.2.14). O tempo de reao
geralmente da ordem de 3 minutos a 15 minutos, mas so
ENSAIOS BIOLGICOS E toleradas certas variaes se elas permitirem melhorar a
MICROBIOLGICOS linearidade da curva dose/resposta.
MTODO CINTICO
5.5.1 MTODOS BIOLGICOS Transferir 40 L de cada poo para uma segunda srie de
poos, juntar 20 L da soluo do Fator Xa bovino e incubar
a 37 C durante 30 segundos. Juntar 40 L da soluo
5.5.1.1 DETERMINAO DA HEPARINA do Substrato cromognico para o Fator Xa a 2 mmol/L,
NOS FATORES DA COAGULAO incubar a 37 C e determinar a velocidade de clivagem
do substrato procedendo leitura contnua da variao
de absorvncia a 405 nm (5.2.14) possibilitando, assim,
A heparina determinada sob a forma de um complexo calcular a velocidade inicial de clivagem do substrato. Essa
antitrombina III (AT) via inibio da atividade do Fator velocidade deve ser proporcional concentrao residual
Xa da coagulao. Na mistura reativa mantido um do Fator Xa. Verificar a validade do ensaio e calcular a
excesso de AT para garantir uma concentrao constante atividade da heparina da amostra pelos procedimentos
do complexo heparina-AT. O Fator Xa neutralizado pelo estatsticos aplicveis aos ensaios biolgicos (8).
complexo heparina-AT e o Fator Xa residual hidrolisa um
substrato cromognico peptdico especfico libertando um
cromforo. A quantidade do cromforo inversamente 5.5.1.2 DETERMINAO DO FATOR DE
proporcional atividade da heparina. VON WILLEBRAND HUMANO
Substrato cromognico para o Fator Xa: substrato
cromognico especfico do Fator Xa tal como: o cloridrato Apotncia do Fator de Von Willebrand humano determinada
de N--benzoil-L-isoleucil-L-glutamil-glicil-L-arginina-4- pela comparao, em condies obrigatoriamente
nitro-anilida. Reconstitua de acordo com as instrues do dadas, da sua atividade em colgeno ou como cofator de
fabricante. ristocetina com a mesma atividade, e calibrada utilizando-
se um padro de referncia internacional, em unidades
208 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
internacionais, quando aplicvel. A Unidade Internacional Placas de microtitulao: devem possuir fundo plano,
a atividade de um montante declarado do padro de placas de poliestireno com propriedades de superfcie
referncia internacional para o Fator de Von Willebrand otimizadas para ensaio imunoenzimtico e protena de alta
existente no concentrado de Fator VIII da coagulao do capacidade de ligao.
sangue humano. A equivalncia em unidades internacionais
do padro de referncia internacional indicada pela PROCEDIMENTO
Organizao Mundial de Sade (OMS).
Soluo teste: reconstituir a preparao a ser analisada
DOSEAMENTO DA LIGAO AO COLGENO como indicado no rtulo. Diluir com Tampo para diluio
de modo a preparar uma soluo contendo cerca de 1 UI/
A ligao ao colgeno determinada por tcnica de mL de Fator de Von Willebrand. Preparar duas sries
imunoensaio enzimtico em placas de micro titulao, independentes com pelo menos trs diluies mediante o
revestidas por colgeno. O mtodo baseia-se na ligao uso do Tampo para diluio.
especfica do Fator de Von Willebrand s fibras de colgeno
e da subsequente ligao de um anticorpo policlonal anti- Solues de referncia: reconstituir a preparao de
Fator de Von Willebrand conjugado a uma enzima. Aps referncia como indicado. Diluir com Tampo para
a adio de um substrato cromognico h a formao diluio de modo a preparar uma soluo contendo cerca de
de um produto quantificvel espectrofotometricamente. 1 UI/mL de Fator de Von Willebrand. Preparar duas sries
Em condies apropriadas, h uma relao linear entre independentes com pelo menos trs diluies mediante o
o colgeno, Fator de Von Willebrand e a absorvncia uso do Tampo para diluio.
indicada. Possibilitar que a soluo de colgeno atinja a temperatura
ambiente. Diluir com Diluente de colgeno de modo a obter
5
MATERIAIS uma soluo contendo 30 a 75 mg/mL de colgeno. Misturar,
brandamente, para produzir uma suspenso uniforme das
Colgeno: usar fibrilas de colgeno de eqino nativo, ou fibras do colgeno e em seguida pipetar 0,1 mL e transferir
humanas, tipo I ou III. Para facilitar o manuseio, podem ser para cada poo da microplaca. Cobrir a placa com filme
usadas as solues de colgeno. plstico e incubar a 37 C de um dia para o outro. Esvaziar
os poos da placa revestida com o colgeno por inverso e
Diluente de colgeno: dissolver 50 g de glicose em gua.
drenagem em uma toalha de papel. Adicionar 0,25 mL de
Ajustar o pH em 2,7 a 2,9 com cido clordrico M e diluir
Soluo de lavagem tamponada. Esvaziar os poos da placa
em gua a 1000 mL.
por inverso e drenar em uma toalha de papel, repetindo essa
Tampo de cloreto-fosfato: dissolver 8 g de cloreto de operao trs vezes. Adicionar, a cada poo, 0,25 mL de
sdio, 1,05 g de fosfato de sdio dibsico, diidratado, Reagente de neutralizao, cobrir a placa com filme plstico
0,2 g de fosfato de sdio monobsico diidratado e 0,2 g e incubar a 37 C por 1 hora. Os poos da placa devem ser
de cloreto de potssio em gua. Ajustar o pH em 7,2 com esvaziados por inverso e drenagem em toalha de papel.
hidrxido de sdio M ou cido clordrico M. Diluir a 1000 Adicionar 0,25 mL de Soluo de lavagem tamponada.
mL com gua. Esvaziar os poos da placa por inverso e drenar em uma
toalha de papel. Repetir essa operao trs vezes.
Soluo de lavagem tamponada: soluo de polissorbato
20 a 0,1% (p/v) em Tampo de cloreto-fosfato. Adicionar 0,1 mL de cada uma das Solues teste ou
referncia aos poos. Adicionar 0,1 mL de Tampo para
Reagente de neutralizao: preparar o Tampo de cloreto- diluio a uma srie de poos de modo a obter-se o controle
fosfato contendo polissorbato 20 a 0,1% (p/v) e albumina negativo. Cobrir a placa com filme plstico e incub-la a 37
bovina a 1% (p/v). C por 2 horas. Os poos da placa devem ser esvaziados
por inverso e drenagem em toalha de papel. Adicionar
Tampo para diluio: preparar o Tampo de cloreto-
0,25 mL de Soluo de lavagem tamponada. Esvaziar os
fosfato contendo polissorbato 20 a 0,1% (p/v) e albumina
poos da placa por inverso e drenagem em uma toalha de
bovina a 5% (p/v).
papel, repetindo esta operao por trs vezes.
Conjugao: soro de coelho do anti-Fator de Von Willebrand
Preparar uma diluio adequada de Conjugao com
humano conjugado peroxidase do rbano silvestre, um
Tampo de cloreto-fosfato contendo albumina bovina a
marcador histoqumico. Seguir as recomendaes do
0,5% (p/v) e adicionar 0,1 mL a cada poo. Cobrir a placa
fabricante.
com filme plstico e incubar a 37 C por 2 horas. Esvaziar
Soluo de substrato: dissolver, imediatamente antes de seu os poos da placa por inverso e drenagem em uma toalha
uso, um comprimido de cloridrato de o-fenilenodiamina e de papel. Adicionar 0,25 mL de Soluo de lavagem
um comprimido de perxido de carbamida em 20 mL de tamponada. Esvaziar os poos da placa por inverso e
gua, ou usar um volume adequado de gua oxigenada. drenar em uma toalha de papel. Repetir esta operao trs
Proteger da luz. vezes.
O ensaio vlido se as absorvncias medidas para os Soluo padro: diluir o padro no Tampo de diluio de
controles negativos forem maiores do que 0,05. modo a obter uma soluo contendo 0,015 UI de Fator II
por mililitro. Preparar, pelo menos, mais trs diluies dessa
soluo no Tampo de diluio. Colocar todas as solues
5.5.1.3 DETERMINAO DO FATOR II DA em banho-maria a 37 C, pouco tempo antes do ensaio. As
COAGULAO SANGUINEA HUMANA condies descritas aplicam-se s placas de microtitulao.
Se a determinao realizada em tubos, ajustar os volumes
de modo a manter as propores na mistura. Introduzir
A determinao do Fator II da coagulao humana
25 L das diferentes diluies da Soluo amostra e
realizada aps ativao especfica em Fator IIa. O Fator
da Soluo padro, numa srie de poos da placa de
IIa calculado comparando a sua atividade em um
microtitulao mantida a 37 C. Juntar em cada poo 125
substrato cromognico peptdico especfico com a mesma
L do Tampo de diluio e 25 L de Ativador especfico
atividade do padro internacional ou de uma preparao
do Fator II proveniente do veneno da vbora e incubar
padro calibrada em Unidades Internacionais (UI). A
durante exatamente 2 minutos. Juntar em cada poo 25 L
Unidade Internacional do Fator II corresponde atividade
de Substrato cromognico para o Fator IIa.
de uma dada quantidade do padro internacional, que
constitudo por um concentrado liofilizado do Fator II da Proceder leitura da velocidade de variao da absorvncia
coagulao sangunea. A correspondncia entre a Unidade
Internacional e o Padro Internacional estabelecida pela
Organizao Mundial de Sade.
em 405 nm (5.2.14) e continuar durante trs minutos de
modo obter a velocidade mdia de variao da absorvncia.
Se no for possvel uma leitura contnua, determinar
5
a absorvncia em 405 nm em intervalos consecutivos
O mtodo da determinao cromognica inclui duas etapas
apropriados, por exemplo, de 40 em 40 segundos. Construir
sucessivas: ativao do Fator II por ao do veneno de cobra
o grfico linear dos valores de absoro em funo do
e a clivagem enzimtica de um substrato cromognico
tempo e calcular a velocidade mdia de variao da
pelo Fator IIa que liberta um cromforo quantificvel
absorvncia. A partir dos valores individuais encontrados
por espectrofotometria. Em condies de doseamento
para cada diluio do padro e da amostra, calcular a
apropriados, existe uma relao linear entre a atividade do
atividade da amostra e verificar a validade do doseamento
Fator IIa e a clivagem do substrato cromognico.
pelos mtodos estatsticos habituais (8).
REAGENTES
5.5.1.4 DETERMINAO DO FATOR
Ativador especfico do Fator II proveniente do veneno IX DA COAGULAO SANGUNEA
da vbora (Ecarina): protena obtida a partir do veneno HUMANA
da vbora Echis carinatus, ativa especificamente o Fator
II. Reconstituir a preparao seguindo as instrues do
fabricante. Uma vez reconstituda, conservar a 4 C e Determina-se a atividade da amostra, comparando a
utilizar no espao de 1 ms. quantidade da amostra necessria para reduzir o tempo
de coagulao de uma mistura de prova que contm
Substrato cromognico para o Fator IIa: substrato as substncias, alm do Fator IX, necessrias para a
cromognico especfico do Fator IIa como: cloridrato de coagulao do sangue; com a quantidade de uma preparao
H-D-fenilalanil-L-pipecolil-L-arginina-4-nitroanilida, de referncia, avaliada em unidades internacionais,
4-toluenosulfonil-glicil-prolil-Larginina-4-nitroanilida, necessrias para obter o mesmo efeito.
H-D- ciclohexilglicil--aminobutiril-L-arginina-4-
nitroanilida, D-ciclohexilglicil-L-alanilarginina-4- A Unidade Internacional corresponde atividade de
nitroanilida-diacetato. Reconstituir seguindo as instrues uma determinada quantidade do Padro Internacional
do fabricante. constitudo por um concentrado liofilizado do Fator IX
da coagulao sangunea. A equivalncia em unidades
Tampo de diluio: soluo contendo 0,606% (p/v) internacionais do padro internacional estabelecida pela
de trometamina, cloreto de sdio a 1,753% (p/v), cido Organizao Mundial de Sade.
edtico a 0,279% (p/v) e albumina bovina ou de albumina
humana a 0,1% (p/v). Ajustar, se necessrio, o pH para 8,4 Reconstituir, respectivamente, a amostra e a preparao de
com cido clordrico. referncia de acordo com as indicaes do rtulo e utilize
imediatamente. Quando aplicvel, determinar a quantidade
de heparina presente e neutralize-a juntando sulfato de
protamina (10 g de sulfato de protamina neutralizam
1,0 UI de heparina). Dilua a amostra e a preparao de
210 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
referncia com tampo de imidazol de pH 7,3 de modo a condies apropriadas de doseamento, existe uma relao
obter solues com 0,5 a 2,0 UI por mililitro. Com uma linear entre a velocidade de formao do Fator Xa e a
mistura de citrato de sdio a 3,8% (p/v) e tampo de concentrao do Fator VII. O esquema seguinte resume o
imidazol de pH 7,3 (1:5), preparar uma srie de diluies princpio da determinao:
compreendendo 1/10, 1/20, 1/40 e 1/80. Essas diluies
devero ser preparadas com preciso e so utilizadas
Etapa 1
imediatamente.
Fator Tecidular + Ca2+
Utilizar, por exemplo, tubos de incubao mantidos em a) Fator VII Fator VIIa
banho-maria a 37 C. Introduzir em cada tubo 0,1 mL de
substrato de plasma e 0,1 mL de cada uma das diluies Fator VIIa + Ca2+
da preparao de referncia e da amostra. Juntar em cada + Fator Tecidular/fosfolipdeo
tubo 0,1 mL de uma diluio apropriada de cefalina SR ou b) Fator X Fator Xa
substituto de plaquetas e 0,1 mL de uma suspenso de 0,5 g
de caolim leve em 100 mL de cloreto de sdio a 0,9% (p/v)
Etapa 2
e deixar em repouso durante cerca de 10 min, inclinando os
Fator Xa
tubos regularmente. Juntar a cada tubo 0,1 mL de soluo
a) Substrato cromognico Peptdeo + cromforo
de cloreto de clcio a 0,74% (p/v). Com o auxlio de um
cronmetro, determine o tempo de coagulao, isso , o
intervalo de tempo entre o momento da adio do cloreto As duas etapas utilizam reagentes disponveis no mercado,
de clcio e a primeira indicao da formao de fibrina originrio de diversos fornecedores. Embora a composio
que se observa visualmente ou com aparelhos apropriados. desses reagentes possa variar, ligeiramente, as suas
Calcular a atividade utilizando o procedimento estatstico caractersticas essenciais so descritas nas especificaes
5
aplicveis aos ensaios biolgicos (8). que se seguem.
A Unidade Internacional da atividade do Fator VII A segunda etapa consiste na quantificao do Fator Xa
corresponde atividade de uma dada quantidade do formado na etapa precedente, no meio de um substrato
padro internacional que atualmente constitudo por um cromognico especfico do Fator Xa. Esse substrato
plasma liofilizado. A correspondncia entre a Unidade geralmente um peptdeo curto derivado de 3 a 5 cidos
Internacional e o Padro Internacional estabelecida pela aminados ligados a um grupamento cromforo. A ciso
Organizao Mundial de Sade. desse grupamento e do substrato peptdico promove
um deslocamento da atividade cromofrica para um
O mtodo da determinao cromognica comporta duas comprimento de onda que possibilita a sua quantificao
etapas sucessivas: a ativao do Fator X, sob a ao por espectrofotometria. O substrato geralmente
do Fator VIIa, numa mistura reativa contendo o Fator dissolvido em gua e utilizado numa concentrao final de
Tecidular/fosfolipdeo e o on clcio e a lise enzimtica 0,2 - 2 nmol/L. Pode igualmente compreender os inibidores
de um substrato cromognico pelo Fator Xa que liberta
um cromforo quantificvel por espectrofotometria. Em
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 211
apropriados impedindo o prosseguir da formao do Fator variaes se possibilitarem melhorar a linearidade da curva
Xa (adio de iodeto). dose-resposta. Verifique a validade da titulao e calcule a
atividade da preparao da amostra pelos procedimentos
PROCEDIMENTO estatsticos aplicveis aos ensaios biolgicos (8).
5
conjunto dos constituintes da mistura reativa com exceo Padro Internacional estabelecida pela Organizao
do Fator VII. Mundial de Sade.
Todas as diluies so preparadas em tubos de plstico e O mtodo da determinao cromognica inclui duas etapas:
utilizadas durante a primeira hora. ativao do Fator X sob ao do veneno de cobra, seguida
de clivagem enzimtica de um substrato cromognico
Etapa 1. A cada uma das diluies, obtidas a partir da pelo Fator Xa que liberta um cromforo quantificvel
preparao de referncia e da amostra, adicionar um volume por espectrofotometria. Em condies de doseamento
apropriado do reagente de coagulao pr-aquecido (ou de apropriados, existe uma relao linear entre a atividade do
uma mistura dos seus constituintes separados), misturar Fator Xa e a clivagem do substrato.
e incubar a 37 C em tubos de plstico ou poos de uma
microplaca. A concentrao dos diferentes constituintes
durante a formao do Fator Xa como a especificada REAGENTES
em reagentes. Deixar desenvolver a reao de ativao do
Ativador especfico do Fator X proveniente do veneno
Fator X durante um tempo apropriado; o trmino da reao
da vbora de Russel (VVR): protena obtida a partir do
acontece, de preferncia, antes que a concentrao em
veneno da vbora de Russel (Vipera russelli) que ativa,
Fator Xa tenha atingido o seu nvel mximo, a fim de que a
especificamente, o Fator X. Reconstituir a preparao
curva dose-resposta apresente uma linearidade satisfatria.
seguindo as instrues do fabricante. Uma vez reconstituda,
O tempo de reao igualmente escolhido de modo que
conservar a 4 C e utilizar no espao de 1 ms.
a condio de linearidade da curva de produo do Fator
Xa em funo do tempo seja satisfatria. geralmente Substrato cromognico para o Fator Xa: substrato
da ordem de 2 a 5 minutos, mas so admissveis certas cromognico especfico do Fator Xa tal como: cloridrato
variaes para possibilitarem melhorar a linearidade da de N--benziloxicarbonil-D-arginil-L-glicil-L-arginina-
curva dose-resposta. 4-nitroanilida, cloridrato de Nbenzoil-L-isoleucil-L-
glutamil-glicil-L-arginina-4-nitroanilida, metanosulfonil-
Etapa 2. Parar a reao de ativao por adio de uma
D-leucil-glicil-L-arginina-4-nitroanilida, acetato de
mistura reativa contendo o substrato cromognico. A
metoxicarbonil-D-ciclo-hexilalanil-glicil-L-arginina-
velocidade de lise do substrato, que proporcional
4-nitroanilida. Reconstituir seguindo as instrues do
concentrao do Fator Xa determinada com o auxlio de
fabricante.
um espectrofotmetro pela variao da absorvncia num
comprimento de onda apropriado. Pode determinar-se a Tampo de diluio: soluo contendo trometamina a
absorvncia, continuamente, o que possibilita calcular a 0,37% (p/v), cloreto de sdio a 1,8% (p/v), imidazol a
velocidade inicial de lise do substrato, quer interrompendo 0,21% (p/v), brometo de hexadimetrina a 0,002% (p/v) e
a reao de hidrlise ao fim de um tempo apropriado, albumina bovina, ou de albumina humana a 0,1% (p/v). Se
baixando o pH com um reagente apropriado tal como o necessrio, ajustar para pH 8,4 com cido clordrico.
cido actico a 50% (p/v) ou uma soluo de citrato de sdio
M em pH 3,0. Ajustar o tempo de hidrlise de modo que
a condio de linearidade de formao do cromforo em PROCEDIMENTO
funo do tempo seja satisfatria. Esse tempo geralmente Soluo teste: diluir a amostra no Tampo de diluio de
da ordem dos 3 a 15 minutos, mas so toleradas certas modo a obter uma soluo contendo 0,18 UI do Fator X
212 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
por mililitro. Preparar, pelo menos, mais trs diluies fatores de coagulao compostos de substncias purificadas
dessa soluo no Tampo de diluio. e a clivagem enzimtica de um substrato cromognico
pelo Fator Xa que libera um cromforo quantificvel por
Soluo padro: diluir a preparao padro no Tampo de espectrofotometria. Em condies apropriadas de aferio
diluio de modo a obter uma soluo contendo 0,18 UI h uma relao linear entre a velocidade de formao do
do Fator X por mililitro. Preparar, pelo menos, mais trs Fator Xa e a concentrao do Fator VIII. No esquema
diluies dessa soluo no Tampo de diluio. seguinte resume-se o principio da aferio:
Pouco tempo antes do ensaio, colocar todas as solues em
banho-maria a 37 C. Etapa 1
Fator VIII ativado
As condies descritas aplicam-se s placas de
Fator X Fator Xa
microtitulao. Se a determinao realizada em tubos,
ajustar os volumes de modo a manter a proporo nas Fator IXa, fosfolipdio, Ca2+
misturas.
Etapa 2
Transferir 12,5 L das diferentes diluies da Soluo teste
ou da Soluo padro para uma srie de poos de uma placa Fator Xa
de microtitulao mantida a 37 C. Adicionar em cada poo substrato cromognico peptdeo + cromforo
25 L de VVR. Incubar durante exatamente 90 segundos.
As duas etapas utilizam reagentes que podem ser
Adicionar a cada poo, 150 L Substrato cromognico
obtidos comercialmente. Embora a composio desses
para o Fator Xa, diludo seis vezes no Tampo de diluio.
reagentes possa estar sujeita a alguma variao, suas
Proceder leitura da variao de absorvncia em 405 nm
caractersticas essenciais so descritas nas presentes
(5.2.14) e continuar durante trs minutos de modo a obter
especificaes. Podem ser permitidos desvios em relao a
5
a velocidade mdia de variao da absorvncia. Se no for
tais especificaes desde que seja demonstrado, mediante
possvel uma leitura continua, determinar a absorvncia
o uso do Padro Internacional, que os resultados obtidos
em 405 nm com intervalos consecutivos apropriados, por
no diferem significativamente. As embalagens comerciais
exemplo, de 40 em 40 segundos. Construir o grfico linear
so utilizadas de acordo com as instrues do fabricante;
dos valores de absorvncia em funo do tempo e calcular
importante assegurar que a embalagem escolhida
a velocidade mdia de variao da absorvncia. A partir
adequada.
dos valores individuais encontrados para cada diluio
do padro e da amostra, calcular a atividade da amostra e Os conjuntos usados devem ser devidamente validados,
verificar a validade da aferio pelos mtodos estatsticos podendo ser utilizado nesse caso, a verificao do tempo
habituais (8). de gerao do Fator Xa, a fim de determinar o tempo
necessrio para alcanar 50% de formao mxima de
Fator Xa.
5.5.1.7 DETERMINAO DO FATOR
VIII DA COAGULAO SANGUNEA
REAGENTES
HUMANA, LIOFILIZADO
A mistura reativa de fatores da coagulao corresponde
E realizado pela determinao da atividade biolgica s protenas purificadas, de origem humana, ou bovina,
do Fator VIII como um cofator na ativao do Fator X especificadamente, o Fator X, o Fator IXa e um ativador
pelo Fator IX ativado (IXa) em presena de ons clcio do Fator VIII, geralmente a trombina. Essas protenas so
e de fosfolipdios. A atividade de uma preparao do parcialmente purificadas, preferencialmente, no mnimo
Fator VIII calculada por comparao das quantidades a 50% e no contm impurezas capazes de interferir na
respectivas dessa preparao e do Padro Internacional; ativao do Fator VIII, ou Fator X. A trombina pode estar
ou de uma preparao de referencia aferida em unidades presente sob a forma do seu precursor, a protrombina, desde
internacionais que so necessrias para se obter uma que sua ativao na mistura reativa seja suficientemente
determinada velocidade de formao do Fator Xa num rpida para possibilitar uma ativao completa e quase
meio de reao contendo as diferentes substancias que instantnea do Fator VIII no ensaio. A mistura reativa deve
participam na ativao do Fator X. conter fosfolipdios que podem ser de origem natural (por
exemplo: crebro, medula espinhal bovina e extrato de
A Unidade Internacional da atividade do Fator VIII soja) ou obtida artificialmente, sendo constituda, por cerca
corresponde atividade de uma determinada quantidade de 15 a 31% de fosfatidilserina. A concentrao final em
do Padro Internacional que consiste em um concentrado fosfolipdios durante a etapa de formao do Fator Xa
liofilizado do Fator VIII da coagulao sangunea humana. de, aproximadamente, 10 a 35 mol/L. A mistura reativa
A equivalncia do Padro Internacional com Unidades contm, tambm, ons clcio em quantidade tal que a sua
Internacionais estabelecida pela Organizao Mundial de concentrao final seja de 5 a 15 mmol/L. A etapa final
Sade (OMS). O concentrado de Fator VIII da coagulao de formao do Fator Xa conduzida numa soluo que
sangunea humana aferido em unidades internacionais deve conter, no mnimo, 1 mg/mL de albumina humana,
em relao ao Padro Internacional. O mtodo de aferio ou bovina, convenientemente tamponada (pH 7,3 a 8,0).
colorimtrica consiste em duas etapas sucessivas: a ativao Os diferentes constituintes do meio reativo so geralmente
do Fator X sob a ao do Fator VIII numa mistura reativa de reunidos em duas preparaes separadas, que no devero
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 213
induzir por si s a formao de Fator Xa. Depois da 5 minutos no sendo admissveis certas variaes que
reconstituio essas duas preparaes podem ser reunidas possibilitem melhorar a linearidade da curva dose resposta.
com a condio de que no se formem quantidades de
Fator Xa na ausncia do Fator VIII. O Fator VIII o nico Etapa 2. Interromper a reao de ativao por adio de
fator que limita a formao do Fator Xa na mistura de uma mistura reativa contendo o substrato cromognico.
incubao final. A segunda etapa consiste na quantificao A velocidade de clivagem do substrato, que
do Fator Xa formado na etapa anterior no meio de um proporcional a concentrao do Fator Xa, determinada
substrato cromognico especfico do Fator Xa. Esse num espectrofotmetro, pela variao da absorvncia
substrato geralmente um peptdeo curto derivado de 3 num comprimento de onda apropriado. Determinar a
a 5 aminocidos ligados a um agrupamento cromforo. A absorvncia, continuadamente, de modo a possibilitar o
ciso desse grupamento e do substrato peptdico promove clculo da velocidade inicial de clivagem do substrato, quer
um deslocamento da atividade cromofrica para um interrompendo a reao de hidrolise ao fim de um tempo
comprimento de onda que possibilita a sua quantificao apropriado baixando o pH, com um reagente apropriado
por espectrofotometria. O substrato, geralmente dissolvido tal como o acido actico (50% v/v de C2H4O2) ou tampo
em gua e utilizado numa concentrao final de 0,2 a citrato M pH 3,0. Ajustar o tempo de hidrolise de modo que
2 mmol/L, deve conter os inibidores apropriados ao a condio de linearidade da formao do cromforo em
impedimento da formao adicional do Fator Xa e suprimir funo do tempo seja satisfatria. Esse tempo geralmente
toda a atividade trombnica, o que possibilita melhorar a da ordem dos 3 a 15 minutos, sendo toleradas certas
seletividade do doseamento em presena do Fator Xa. variaes, desde que possibilitam o melhoramento da
linearidade da curva dose resposta. Verificar a validade do
ensaio e calcular a atividade da amostra por procedimentos
PROCEDIMENTO estatsticos aplicados aos ensaios biolgicos (8).
Deve ser reconstitudo todo contedo de uma ampola
da preparao de referencia e da amostra adicionando
a quantidade de gua; usar imediatamente. Adicionar
quantidades de pr-diluentes necessrios para obter
5.5.1.8 DETERMINAO DE FATORES
DA COAGULAO ATIVADOS 5
solues entre 0,5 a 2,0 UI/mL. O pr-diluente constitudo
por plasma proveniente de um doador portador grave da Se a amostra contiver heparina, determine a quantidade
hemofilia A, ou de um reagente preparado artificialmente, existente e neutralize-a juntando sulfato de protamina (10
dando resultados equivalentes aos obtidos com plasma g de sulfato de protamina neutralizam 1 UI de heparina).
hemoflico e com as mesmas preparaes padro e Com o tampo tris-cloreto de sdio pH 7,5, prepare
amostra. As solues pr-diludas devem apresentar boa diluies a 1/10 e 1/100. Coloque uma srie de tubos de
estabilidade para alem do tempo necessrio determinao poliestireno em banho-maria a 37 C. Introduza em cada
(pelo menos 30 minutos) a 20 C, e devem ser utilizadas tubo 0,1 mL de plasma pobre em plaquetas e 0,1 mL de uma
dentro de 15 minutos. Realizar as diluies seguintes da diluio apropriada de cefalina SR ou de uma preparao
preparao padro e da amostra por meio de uma soluo fosfolipdica que atue como substituto de plaquetas. Deixe
tampo isotnica sem agente de quelao, e contendo 1% em repouso durante 60 segundos e junte a cada tubo 0,1
de albumina humana ou bovina; a soluo pode conter, mL de uma das diluies e para o tubo de ensaio em branco
por exemplo, trometamina ou imidazol e de preferncia 0,1 mL da soluo tampo.
tamponada (pH 7,3 a 8,0). Preparar, no mnimo, trs
Junte, imediatamente, a cada tubo 0,1 mL de uma soluo
diluies adicionais independentes, de preferncia em
de cloreto de clcio a 0,37% (p/v), previamente aquecida a
duplicata. As solues devem ser preparadas de modo
37 C, e determine o intervalo de tempo entre a adio da
que a concentrao final em Fator VIII, fora da etapa de
soluo de cloreto de clcio e a formao do cogulo, essa
formao do Fator Xa, seja inferior a 0,03 UI/mL e de
determinao realizada nos 30 minutos que se seguem
preferncia a 0,01 UI/mL. Preparar um padro contendo o
primeira diluio. O ensaio s vlido se o tempo de
conjunto dos constituintes da mistura reativa, com exceo
coagulao do ensaio em branco for de 200 a 350 segundos.
do Fator VIII. Preparar as diluies em tubos plsticos e
usar imediatamente.
5.5.1.9 DETERMINAO DE TTULO DE
Etapa 1. A cada uma das diluies pr-aquecidas, obtidas a
partir da preparao padro e da amostra, juntar um volume HEMAGLUTININAS ANTI-A E ANTI-B
apropriado do reagente de coagulao pr-aquecido (ou de (Mtodo Indireto)
uma mistura dos seus constituintes separados), misturar
e incubar a 37 C em tubos plsticos ou poo de uma Preparar uma diluio seriada em duplicata da preparao
micro-placa. Deixar correr a reao de ativao do Fator a ser examinada em soluo de cloreto de sdio a 0,9%
X durante tempo apropriado; o fim da reao acontece de (p/v). Para cada diluio de uma srie, adicionar volume
preferncia antes que a concentrao em Fator X tenha igual a 5% (v/v) da suspenso de hemcias do grupo A1.
atingido o seu nvel Maximo, a fim de que a curva dose As hemcias devem ser previamente lavadas trs vezes em
resposta apresente uma linearidade satisfatria. O tempo soluo de cloreto de sdio. Para cada diluio da outra
de reao igualmente escolhido de modo que a condio srie adicionar volume igual de 5% (v/v) da suspenso de
de linearidade da curva de produo do Fator Xa em funo hemcias do grupo B. As hemcias devem ser previamente
do tempo seja satisfatria. E geralmente da ordem de 2 a lavadas trs vezes em soluo de cloreto de sdio a
214 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
0,9% (p/v). Incubar as sries de diluio a 37 C por 30 - hibridizao especfica dos iniciadores com a sequncia a
minutos e ento lavar trs vezes com cloreto de sdio a ser amplificada, sob condies adequadas de reao;
0,9% (p/v). Deixar as hemcias em contato com o reagente - alongamento, mediante a ao da DNA polimerase, dos
antiglobulina humano polivalente por 30 minutos. Sem iniciadores ligados a cada uma das duas cadeias simples,
centrifugar, examinar cada suspenso para aglutinao em a uma temperatura adequada (favorvel ao processo de
microscpio. sntese de DNA).
do material a examinar. O mtodo utilizado para tal fim ou pela combinao desses parmetros. A deteco e
deve ser eficaz, ter reprodutibilidade e compatibilidade caracterizao por meio do tamanho pode ser realizada por
com a realizao da amplificao nas condies de reao eletroforese em gel (utilizando placas de gel de agarose,
selecionadas. Pode ser utilizada uma variedade de mtodos ou de gel de poliacrilamida, ou por eletroforese capilar),
fsico-qumicos para extrao e/ou de enriquecimento. ou ainda por cromatografia de coluna (por exemplo, HPLC
High performance liquid chromatography)). A deteco
Possveis aditivos no material em anlise podem interferir e caracterizao mediante a composio da sequncia
no mtodo PCR. Devem ser utilizados os procedimentos pode ser realizada por hibridizao especfica com sondas
descritos no item de Controle Interno, com objetivo de complementares da sequncia alvo ou por fragmentao
verificar a ausncia de fatores de inibio no material a ser do material amplificado mediante uma enzima de restrio
examinado. nos stios especficos da sequncia a ser amplificada. A
caracterizao por meio da modificao qumica pode ser
Quanto aos modelos de RNA, devem ser tomadas
realizada por incorporao de um fluorforo nas sequncias
precaues para que haja ausncia de atividade do tipo
marcadas e posterior excitao e deteco da fluorescena.
ribonuclease.
Podem ser, tambm, utilizadas sondas marcadas que
possibilitam uma deteco posterior radioisotpica ou
Amplificao imunoenzimtica.
A amplificao de uma sequncia alvo pela tcnica de
PCR requer, no mnimo, um par de iniciadores, os quatro AVALIAO E INTERPRETAO DOS RESULTADOS
tipos de desoxinucleotdeos trifosfato (dNTPs), ons de
O resultado de um ensaio s vlido se o(s) controle(s)
magnsio (MgCl2), e uma DNA polimerase termoestvel
positivo(s) (so), inequivocamente positivo e o controle(s)
para sntese do DNA.
negativo(s) (so), inequivocamente negativo(s). Devido
A amplificao da sequncia alvo por PCR conduzida
sob condies cclicas definidas: perfil de temperatura
para desnaturao da dupla-hlice de DNA; anelamento
alta sensibilidade do mtodo PCR e aos riscos inerentes
de contaminao, necessrio confirmar os resultados
positivos realizando o ensaio em duplicata ou, quando
5
e extenso dos iniciadores e tempos de incubao em h possibilidade, com uma nova alquota da amostra. A
temperaturas selecionadas dentro de uma faixa de variao. amostra se considera positiva se ao menos um dos ensaios
repetidos apresentar resultado positivo.
Devem ser considerados os seguintes parmetros:
Todos os reagentes cruciais usados na metodologia posta Este captulo fornecido a ttulo de informao.
em prtica devem ser objeto de controle antes de seu
uso em rotina. A aceitao/rejeio deve ser baseada em A maioria das tcnicas de amplificao de cidos nucleicos
critrios de qualidade pr-definidos. corresponde a ensaios analticos quantitativos destinados
a detectar sua presena. H alguns ensaios quantitativos
Os iniciadores constituem um dos componentes essenciais comercializados ou desenvolvidos internamente pelos
do mtodo PCR exigindo assim, ateno particular quanto prprios laboratrios. Para detectar a contaminao de RNA
a sua concepo; pureza e validao de seu uso no ensaio. do HCV nas misturas de plasma, so adequados os ensaios
Cada novo lote de iniciadores deve ser controlado quanto qualitativos, podendo, inclusive, serem considerados
especificidade; eficcia da amplificao e ausncia de como ensaios limite para controle de impurezas. Nessas
impurezas inibidoras. Os iniciadores podem ser modificados recomendaes esto descritos os mtodos de validao das
(por exemplo, por conjugao com um fluorforo, ou um tcnicas de amplificao dos cidos nucleicos aplicveis
antgeno) de forma a possibilitar a utilizao de um mtodo apenas aos ensaios qualitativos destinados a detectar o
especfico de deteco da sequncia alvo a ser amplificada; RNA do VHC nas misturas de plasma. Por conseguinte,
desde que aquelas modificaes no inibam a preciso e a os dois parmetros de validao considerados os mais
eficcia da amplificao da sequncia alvo. importantes so a especificidade e o limite de deteco. A
robustez , tambm, avaliada. Contudo, esse documento
pode, tambm, ser utilizado como base de validao geral
Controles do ensaio
das tcnicas de amplificao.
negativo para o RNA do HCV, e todos os resultados obtidos de plasma para obter um valor preliminar do limiar de
serem negativos. A Organizao Mundial de Sade (OMS) resposta positiva, ou seja, a maior diluio em que ocorre
dispe de amostras apropriadas de plasmas no reativos. um sinal positivo).
A capacidade da tcnica na deteco de todos os gentipos A distribuio das diluies pode ento ser realizada com
do HCV depender da escolha dos iniciadores, das sondas base nesse valor preliminar pr-calculado (utilizando, por
e dos parmetros operacionais. conveniente que essa exemplo, um fator de diluio de 0,5 log), ou inferior a
capacidade seja demonstrada por meio do uso de uma uma mistura de plasma negativo como matriz de diluio.
coleo de preparaes de referncia caracterizadas. O teor em RNA do HCV que pode ser detectado de 95%
nos ensaios e pode ser calculado utilizando um mtodo
Tem sido sugerido que o padro de distribuio dos estatstico apropriado.
gentipos do HCV no Brasil semelhante ao encontrado
em muitos pases europeus, com a prevalncia dos tipos Esses resultados, tambm, servem para demonstrar a
1 e 3. Observa-se um comportamento epidemiolgico variao interna do ensaio e a variao nos vrios dias do
tpico de uma propagao exponencial nos ltimos anos, mtodo analtico.
provavelmente em decorrncia de transfuses sanguneas.
Nesse contexto, os gentipos 1 e 3 devem ser detectados ROBUSTEZ
em nveis apropriados.
A robustez de um mtodo analtico a medida da sua
LIMITE DE DETECO capacidade de permanecer inaltervel quando sujeito a
pequenas, mas deliberadas, variaes nos parmetros
O limite de deteco de uma tcnica individual a menor operacionais e fornece uma indicao da viabilidade da
quantidade de cido nucleico que pode ser detectada, mas, tcnica nas condies normais de utilizao. A avaliao da
5
no, necessariamente, quantificada, com um valor exato na robustez um dos aspectos a ser considerado durante a fase
amostra. de desenvolvimento. Possibilita estabelecer a viabilidade
da tcnica face s variaes deliberadas nos parmetros
O processo de amplificao utilizado para a deteco do operacionais. Nas tcnicas de amplificao dos cidos
RNA do HCV nas misturas de plasmas fornece, geralmente, nucleicos, pequenas variaes nos parmetros operacionais
resultados qualitativos. O nmero de resultados possveis podem ter uma importncia especial. Contudo, a robustez
limita-se a duas respostas: positivo ou negativo. Embora desaa pode ser demonstrada durante o desenvolvimento
seja recomendada a determinao do limite de deteco, por do mtodo, quando so ensaiadas pequenas variaes
razes prticas, determinado o limiar da resposta positiva na concentrao de reagentes (por exemplo: MgCl2,
para as tcnicas de amplificao do cido nucleico. O limiar iniciadores, ou dNTPs). Para demonstrar a robustez
da resposta positiva o nmero mnimo de sequncias alvo durante a validao, devem examinar-se, no mnimo, vinte
por unidade de volume que pode ser detectado em 95% dos misturas de plasma (escolhidos ao acaso) negativas para
ensaios. Esse limiar da resposta positiva influenciado pela RNA do HCV s quais adicionada uma concentrao,
distribuio dos genomas virais nas amostras individuais tpica final, que corresponde ao limiar da resposta positiva,
ensaiadas e por fatores tais como a eficcia da enzima, que previamente, determinada. Todos os resultados obtidos so
podem levar a diferenas de 95% nos limiares da resposta positivos.
positiva obtidos nas anlises individuais.
Podem surgir problemas com a robustez no caso de mtodos
Para determinar o limiar de resposta positiva, em que se usam, em sua fase inicial, a ultracentrifugao
indispensvel executar a tcnica em dias diferentes com previamente extrao do RNA viral. Por conseguinte para
uma srie de diluies de um reagente de trabalho ou testar a robustez desses mtodos. So ensaiadas, no mnimo,
do vrus da Hepatite C (padro biolgico de referncia), vinte misturas de plasma contendo concentraes variadas
calibrado por comparao com o Padro Internacional do de RNA do HCV, mas isentas de anticorpos especficos do
HCV 96/790 OMS, a fim de avaliar entre os vrios ensaios. HCV. Todos os resultados obtidos so positivos.
So testadas, no mnimo, trs sries de diluies separadas
com um nmero suficiente de replicaes de cada diluio conveniente demonstrar a ausncia de contaminao
de modo a obter um nmero total de 24 resultados por cruzada pela deteco exata de um conjunto de, pelo
diluio e possibilitar, assim, a anlise estatstica dos menos vinte amostras, alternando amostras de misturas
resultados. de plasma negativas e de misturas de plasma negativos s
quais foi adicionada uma alta concentrao do HCV (no
Por exemplo, num laboratrio testa-se trs sries de mnimo, 102 vezes 95% do limiar de resposta positiva, ou,
diluies com oito replicaes para cada diluio em dias no mnimo, 104 UI/mL.
diferentes; quatro sries de diluio com seis replicaes
para cada diluio em dias diferentes, ou seis sries de
diluies com quatro replicaes para cada diluio em GARANTIA DA QUALIDADE
dias diferentes.
Os mtodos de ensaios biolgicos tais como a tcnica
Para que o nmero de diluies utilizadas se mantenha de amplificao dos cidos nucleicos, podem apresentar
igual, indispensvel efetuar um ensaio preliminar (como, problemas especficos que interferem na validao e
por exemplo, diluies logartmicas na amostra da mistura interpretao dos resultados.
218 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Os procedimentos devem ser descritos precisamente na entre a Unidade Internacional e o Padro Internacional
forma de procedimentos operacionais padro (POPs), que estabelecida pela Organizao Mundial de Sade.
devem abranger:
Para a amostra e para o padro preparar com tampo de Soluo citratada. Dissolver 8 g de citrato de sdio, 4,2 g
tris-EDTA ASB de pH 8,4 contendo 15 UI de heparina de cloreto de sdio e 20,5 g de glicose em 750 mL de gua.
por mililitro, duas sries independentes de trs ou quatro Ajustar a pH 6,1 com soluo de cido ctrico a 10% (p/v) e
diluies compreendidas entre 1/75 e 1/200 a partir de 1 UI/ completar 1000 mL com gua.
mL. Aquecer a 37 C durante 1 a 2 minutos 200 L de cada
diluio. Adicionar a cada diluio 200 L de uma soluo Tampo de gelatina-barbital. Juntar 4 volumes de Soluo
de trombina bovina contendo 2 UI/mL em tampo de tris- de gelatina a 1 volume de Soluo me de tampo barbital
EDTA ASB de pH 8,4. Misturar e manter a 37 C durante, e misturar. Se necessrio, ajustar o pH para 7,3 com cido
exatamente, 1 minuto. Adicionar 500 L de um substrato clordrico M ou hidrxido de sdio M e conservar a 4 C.
Preparar, diariamente, uma nova soluo.
220 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Sangue de carneiro estabilizado. Recolher 1 volume de tampo. Determinar a concentrao celular pelo seguinte
sangue de carneiro em 1 volume de Soluo citratada e mtodo: adicionar 0,2 mL da suspenso a 2,8 mL de gua
misturar. Conservar o sangue estabilizado a 4 C durante, e centrifuguar o lisado durante 5 minutos a 1000 g. A
pelo menos, 7 dias e, no mximo, durante 28 dias. O sangue concentrao celular adequada se a absorvncia (5.2.14)
de carneiro ou os eritrcitos de carneiro estabilizados podem do sobrenadante, determinada em 541 nm, for de 0,62
ser obtidos, comercialmente, em diversos fornecedores. 0,01. Corrigir a concentrao celular por adio de Tampo
de gelatina-barbital, de acordo com a frmula:
Hemolisina. Soro anti-hemcia de carneiro, preparada em
coelho. Tais soros podem ser obtidos, comercialmente, em
diversos fornecedores.
5 as clulas, pelo menos trs vezes, com a Tampo gelatina- Preparar as diluies de hemolisina de acordo com a Tabela
barbital e preparar uma suspenso a 5% (v/v) no mesmo 1.
Construir um grfico inscrevendo os valores em abscissas, O ensaio s vlido se, entre 15 e 85% de hemlise, a
e o correspondente volume em mililitros de complemento curva obtida for uma reta cuja inclinao se situe entre 0,15
diludo em ordenadas. e 0,40, de preferncia, entre 0,18 e 0,30.
5 Tampo de gelatina-barbital
Complemento
0,6 mL
0,2 mL
0,8 mL
0,2 mL
Procedimento. Manter a soluo da amostra, a soluo das protenas da amostra. A maior parte das substncias
padro e o lquido de compensao mesma temperatura interferentes reduz a intensidade da colorao obtida,
durante todo o ensaio. Determinar a absorvncia (5.2.14) mas alguns detergentes aumentam-na, ligeiramente. Uma
da soluo amostra e da soluo padro em 280 nm em forte concentrao salina pode provocar a formao de um
cubetas de quartzo, utilizando o tampo especfico como precipitado. Dado que a intensidade da colorao obtida
lquido de compensao. Para a exatido dos resultados, a pode variar segundo a espcie protica considerada, a
resposta linear no intervalo das concentraes proticas protena a dosar e a protena padro so as mesmas. Se
a dosar. for necessrio, separar as substncias interferentes da
protena da amostra, proceder como indicado a seguir
Difuso da luz. A difuso da luz pela amostra pode afetar em substncias interferentes antes de preparar a soluo
a exatido do doseamento das protenas. Se as protenas da amostra. possvel minimizar o efeito das substncias
em soluo formam partculas cujo tamanho da mesma interferentes por diluio, desde que o teor em protena a
ordem de grandeza do comprimento de onda do feixe de dosar se mantenha suficientemente elevado para possibilitar
medida (250 - 300 nm), a difuso do feixe luminoso traduz- uma determinao exata.
se por um aumento da absorvncia aparente da amostra.
Para calcular a contribuio desse efeito de difuso na Utilizar a gua destilada para a preparao de todos os
absorvncia lida em 280 nm, determinar a absorvncia da tampes e reagentes utilizados nesse mtodo.
soluo da amostra em vrios comprimentos de onda (320
nm, 325 nm, 330 nm, 335 nm, 340 nm, 345 nm e 350 nm). Soluo amostra. Dissolver uma quantidade apropriada
Construir um grfico do logartimo da absorvncia lida da amostra no tampo especificado de modo a obter uma
em funo do logaritmo do respectivo comprimento de concentrao compreendida no intervalo abrangido pela
onda e determinar, por anlise de regresso linear, a curva curva de calibrao. O pH de uma soluo preparada com
de calibrao que melhor se ajuste aos diferentes pontos um tampo apropriado est compreendido entre 10,0 e
10,5.
5
inscritos no grfico.
Determinar por extrapolao o logaritmo da absorvncia Solues padro. Dissolver a substncia de referncia
em 280 nm. A absorvncia devido ao efeito de difuso correspondente protena a dosar no tampo especificado.
o antilogaritmo desse valor. Corrigir os valores Tomar amostras dessa soluo e complet-las com o mesmo
observados subtraindo-se a absorvncia total em 280 nm tampo de modo a obter, pelo menos, cinco solues padro
da absorvncia devido ao efeito de difuso para obter o de diferentes concentraes compreendidas entre 5 g/
valor da absorvncia devido protena em soluo. mL e 100 g/mL e uniformemente repartidas no intervalo
possvel realizar uma filtrao usando um filtro de 0,2 escolhido.
que no absorva as protenas, ou uma clarificao por Soluo em branco. Utilizar o mesmo tampo que foi
centrifugao, a fim de que sejam reduzidos os efeitos da utilizado para preparar a Soluo amostra e as Solues
difuso da luz em caso de soluo. padro.
Clculos. Utilizar os valores corrigidos para os clculos. Reagente de sulfato de cobre. Dissolver 100 mg de sulfato
Calcular o teor em protena da soluo da amostra (Cu), de cobre e 0,2 g de tartarato de sdio em gua destilada e
usando a expresso: completar 50 mL com o mesmo diluente. Dissolver 10 g de
A carbonato de sdio anidro em gua destilada e completar
Cu = Cs u 50 mL com o mesmo diluente. Verter, lentamente, a
As soluo de carbonato de sdio na soluo de sulfato de
em que cobre, misturando sempre. Essa soluo utilizada nas 24
horas que se seguem sua preparao.
CS = teor em protena da soluo padro;
Au = valor da absorvncia corrigida da soluo da amostra; Reagente alcalino de cobre. Preparar uma mistura de
AS = valor da absorvncia corrigida da soluo padro. 1 volume de Reagente de sulfato de cobre, 2 volumes
de laurilsulfato de sdio a 5% (p/v) com 1 volume de
hidrxido de sdio a 3,2% (p/v). Conservar essa mistura
MTODO 2
temperatura ambiente. A mistura utilizada nas 2 semanas
Esse mtodo foi concebido com base na propriedade que seguem sua preparao.
que as protenas possuem de reduzir cidos
Reagente fosfomolibdnio e tungstnico diludo. Misturar
fosfomolibdniotungstnico contidos no reagente
5 mL de reagente fosfomolibdnio e tungstnico com 55
fosfomolibdnio e tungstnio; essa reao cromognica e
mL de gua destilada. Conservar o reagente temperatura
traduz-se pela existncia de um pico de absoro em 750 nm.
ambiente em frasco de vidro mbar.
O reagente fosfomolibdnio e tungstnio reagem
Procedimento. A 1 mL de cada Soluo padro, da
primeiramente com os resduos da tirosina da protena. O
Soluo amostra e da Soluo em branco adicionar 1
desenvolvimento da colorao atinge um mximo ao fim
mL do Reagente alcalino de cobre e misturar. Deixar em
de 20 - 30 minutos de incubao temperatura ambiente;
repouso durante 10 minutos. Adicionar 0,5 mL do Reagente
produz-se em seguida uma descolorao progressiva.
fosfomolibdnio e tungstnio diludo, misturar e deixar
Sendo o mtodo sensvel a substncias interferentes, pode
em repouso temperatura ambiente durante 30 minutos.
utilizar-se um tratamento que produza a precipitao
224 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Determinar a absorvncia (5.2.14) das solues em 750 Reagente azul cido 90. Dissolver 0,10 g de azul cido 90
nm, utilizando a soluo em branco para ajuste do zero. em 50 mL de etanol. Adicionar 100 mL de cido fosfrico,
completar 1000 mL com gua destilada e misturar. Filtrar a
Clculos. A relao entre a absorvncia e o teor em protena soluo e conserv-la a temperatura ambiente em frasco de
no linear; entretanto, se o intervalo de concentrao vidro mbar. Produz-se uma lenta precipitao do corante
abrangido pela curva de calibrao for suficientemente durante a armazenagem. O precipitado eliminado por
estreito, a curva obtida ser sensivelmente linear. Construir filtrao antes de se utilizar o reagente.
um grfico da absorvncia das solues padro em funo
do teor em protena dessas solues e determinar a curva de Procedimento. A 0,100 mL de cada Soluo padro, da
calibrao por anlise de regresso linear. A partir da curva Soluo amostra e da Soluo em branco adicionar 5 mL
de calibrao e da absorvncia da soluo da amostra, do Reagente azul cido 90. Homogeneizar a mistura por
determinar o teor em protena da soluo amostra. rotao, evitando a formao de espuma que pode criar
problemas de reprodutibilidade. Determinar a absorvncia
Substncias interferentes. Nesse mtodo adiciona-se (5.2.14) das Solues padro e da Soluo amostra em
desoxicolato de sdio e cido tricloroactico amostra 595 nm, utilizando a Soluo em branco para ajuste do
para precipitar as protenas e separ-las das substncias zero. Evita-se o uso de cubetas de quartzo (slica) j que o
interferentes, antes de dosar. Essa tcnica pode igualmente corante se liga a esse material.
ser utilizada para concentrar as protenas contidas numa
soluo muito diluda. A 1 mL de uma soluo da amostra Clculos. A relao entre a absorvncia e o teor em protena
adicione 0,1 mL de desoxicolato de sdio a 0,15% (p/v). no linear. Entretanto, se o intervalo de concentrao
Agitar com um agitador tipo vortex e deixar em repouso coberto pela curva de calibrao for suficientemente
temperatura ambiente durante 10 minutos. Adicionar estreito, a curva obtida ser sensivelmente linear. Construir
0,1 mL de cido tricloroactico a 72% (p/v). Agitar com um grfico da absorvncia das Solues padro em funo
um agitador tipo vortex e centrifuguar a 3000 g durante do teor em protena dessas solues e determinar a curva
MTODO 3 MTODO 4
Esse mtodo foi baseado na propriedade que as protenas Esse mtodo, tambm, conhecido como mtodo do
possuem de deslocar de 470 nm para 595 nm o mximo cido bicinconnico (BCA), foi elaborado com base na
de absoro do azul cido 90 quando se ligam ao corante. propriedade que as protenas possuem de reduzir o on
O corante azul cido 90 apresenta uma afinidade marcada cprico (Cu2+) a on cuproso (Cu+). O reagente de cido
para os resduos de arginina e de lisina na protena o que bicinconnico serve para detectar os ons cuprosos.
pode provocar variaes da resposta ao doseamento de Existem poucas substncias interferentes. Se existirem
diferentes protenas. A protena utilizada como substncia substncias interferentes, possvel minimizar os seus
de referncia deve, portanto, ser a mesma que a protena efeitos por diluio, desde que o teor em protenas a dosar
a ser dosada. Existem, relativamente, poucas substncias se mantenha suficientemente elevado para possibilitar uma
interferentes, mas prefervel evitar os detergentes e os determinao exata. A tcnica de precipitao das protenas
analitos na amostra a dosar. Amostras muito alcalinas descrita no Mtodo 2 pode ser utilizada para eliminar as
podem provocar interferncias com o reagente cido. substncias interferentes. A intensidade da colorao
obtida pela reao com o reagente pode variar de um tipo
Utilizar a gua destilada para a preparao de todos os de protena para outro e, por isso, a protena a dosar e a
tampes e reagentes a serem usados nesse mtodo. protena de referncia so as mesmas.
Soluo amostra. Dissolver uma quantidade apropriada Utilizar a gua destilada para a preparao de todos os
da amostra no tampo indicado de modo a obter uma tampes e reagentes a serem usados nesse mtodo.
concentrao compreendida no intervalo coberto pela
curva de calibrao. Soluo amostra. Dissolver uma quantidade apropriada
da amostra no tampo indicado de modo a obter uma
Solues padro. Dissolver a substncia de referncia concentrao compreendida no intervalo da concentrao
correspondente protena a dosar no tampo indicado. das Solues padro.
Tomar amostras dessa soluo e completar com o mesmo
tampo de modo a obter pelo menos cinco solues padro Solues padro. Dissolver a substncia de referncia
de concentraes proticas compreendidas entre 0,1 mg/ correspondente protena a dosar no tampo indicado.
mL e 1 mg/mL e uniformemente repartidas no intervalo Tomar amostras dessa soluo e completar com o mesmo
escolhido. tampo de modo a obter pelo menos cinco solues padro
de concentraes compreendidas entre 10 g/mL e 1200
Soluo em branco. Utilizar o mesmo tampo que foi g/mL e uniformemente repartidas no intervalo escolhido.
utilizado para preparar a soluo da amostra e as solues
padro.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 225
Soluo em branco. Utilizar o mesmo tampo que foi Soluo amostra. Dissolver uma quantidade apropriada da
utilizado para preparar a Soluo da amostra e as Solues amostra em soluo de cloreto de sdio a 0,9% (p/v) de
padro. modo a obter uma concentrao compreendida no intervalo
da concentrao das solues padro.
Reagente BCA. Dissolver 10 g de bicinconinato dissdico,
20 g de carbonato de sdio monoidratado, 1,6 g de tartarato Solues padro. Dissolver a substncia de referncia
de sdio, 4 g de hidrxido de sdio e 9,5 g de bicarbonato correspondente protena a dosar em soluo de cloreto
de sdio em gua destilada. Se necessrio, ajustar o pH para de sdio a 0,9% (p/v). Tomar amostras dessa soluo e
11,25 com soluo de hidrxido de sdio ou bicarbonato completar com soluo de cloreto de sdio a 0,9% (p/v)
de sdio. Completar para 1000 mL com gua destilada e de modo a obter pelo menos trs solues padro de
misturar. concentraes compreendidas entre 0,5 mg/mL e 10 mg/
mL e, uniformemente, repartidas no intervalo escolhido.
Reagente de cobre-BCA. Misturar 1 mL de sulfato de cobre
a 4% (p/v) com 50 mL de Reagente BCA. Soluo em branco. Utilizar soluo de cloreto de sdio a
0,9% (p/v).
Procedimento. Misturar 0,1 mL de cada Soluo padro,
da Soluo amostra e da Soluo em branco com 2 mL Reagente de biureto. Dissolver 3,46 g de sulfato de
de Reagente de cobre-BCA. Incubar as solues a 37 C cobre em 10 mL de gua destilada quente e deixe resfriar
durante 30 minutos, tomar nota da hora e deixar resfriar (soluo A). Dissolver 34,6 g de citrato de sdio e 20 g
at temperatura ambiente. Nos 60 minutos a seguir ao de carbonato de sdio anidro em 80 mL de gua destilada
perodo de incubao, determinar a absorvncia (5.2.14) quente e deixar resfriar (soluo B). Misturar as solues
em 562 nm das Solues padro e da Soluo amostra em A e B e completar 200 mL com gua destilada. Esse
cubetas de quartzo, utilizando a Soluo em branco para reagente utilizado dentro dos 6 meses que se seguem
ajuste do zero. Quando a temperatura das solues retornar sua preparao; no utilizado se desenvolver turvao ou
para a temperatura ambiente, a intensidade da colorao
continua a aumentar, progressivamente.
precipitado.
Utilize a gua destilada para a preparao de todos os Esse mtodo foi elaborado com base na quantificao das
tampes e reagentes a usar nesse mtodo. protenas por doseamento do nitrognio. A presena na
5
amostra de outras substncias nitrogenadas pode afetar
Soluo amostra. Dissolver uma quantidade apropriada o resultado do doseamento das protenas. As tcnicas
da amostra em soluo de cloreto de sdio a 0,9% (p/v) utilizadas para dosar o nitrognio conduzem destruio
de modo a obter uma concentrao compreendida no da amostra durante a anlise, mas no se limitam
intervalo da concentrao das Solues padro. Ajustar o determinao das protenas em meio aquoso.
pH da soluo para 8 - 10,5 antes de juntar o Reagente de
ftalaldedo. Tcnica A. Proceder como indicado para o doseamento
do nitrognio aps mineralizao pelo cido sulfrico
Solues padro. Dissolver a substncia de referncia (5.3.3.2) ou utilizar instrumentos disponveis no mercado
correspondente protena a dosear em soluo de cloreto adaptados ao doseamento do nitrognio pelo mtodo de
de sdio a 0,9% (p/v). Tomar amostras dessa soluo e Kjeldahl.
completar com soluo de cloreto de sdio a 0,9% (p/v)
de modo a obter pelo menos cinco solues padro de Tcnica B. Existem no mercado instrumentos adaptados
concentraes compreendidas entre 10 g/mL e 200 g/ para o doseamento do nitrognio. A maior parte deles
mL e uniformemente repartidas no intervalo escolhido. utiliza a pirlise (combusto da amostra em presena
Ajustar o pH das solues para 8-10,5 antes de adicionar o do oxignio a temperaturas prximas de 1000 C), que
Reagente de ftalaldeido. provoca a formao de monxido de nitrognio (NO) e
outros xidos de forma NOx a partir do nitrognio existente
Soluo em branco. Utilizar soluo de cloreto de sdio a na amostra. Certos instrumentos convertem esses xidos
0,9% (p/v). de nitrognio em nitrognio gasoso que quantificado
por condutimetria trmica. Outros misturam o monxido
Tampo de borato. Dissolver 61,83 g de cido brico em de nitrognio (NO) com oznio (O3) para produzir
gua destilada e ajuste o pH para 10,4 com soluo de dixido de nitrognio no estado excitado (NO2) que
hidrxido de potssio. Completar a 1000 mL com gua emite uma radiao luminosa quando do seu decrscimo
destilada e misturar. e quantificado por quimiluminescncia. Um produto de
Soluo me de ftalaldedo. Dissolver 1,20 g de ftalaldedo referncia, relativamente puro, e semelhante, quanto sua
em 1,5 mL de metanol, adicionar 100 mL de Tampo de composio, protena a dosar utilizado para otimizar
borato e misturar. Adicionar 0,6 mL de soluo de ter os parmetros de injeo e de pirlise e para avaliar a
lurico de macrogol 23 a 30% (p/v) e misturar. Conservar reprodutibilidade da anlise.
a soluo temperatura ambiente e utilizar, dentro das 3 Clculos. O teor em protena calcula-se dividindo o teor em
semanas que seguem sua preparao. nitrognio da amostra pelo teor em nitrognio (conhecido)
Reagente de ftalaldedo. A 5 mL da Soluo me de da protena que pode ser determinado quer a partir da
ftalaldedo junte 15 L de 2-mercaptoetanol. Preparar o estrutura qumica da protena, quer por comparao com
reagente 30 minutos, pelo menos, antes de utilizar e dentro uma substncia de referncia apropriada
das 24 horas aps a sua preparao.
sangue coagulado por centrifugao a uma temperatura exemplo, placas descartveis) ou um tubo de ensaio para
de aproximadamente de 4 C. Conservar o soro, em cada soluo:
pequenas pores, a uma temperatura inferior a -70 C.
Imediatamente antes de se iniciar a hemlise por ao do (1) Solues problema. Se necessrio, ajustar a amostra
complemento, diluir para 125 - 200 CH50 por mililitro com a pH 7 adicionando, por exemplo, hidrxido de sdio M.
Tampo de albumina-barbital e, durante o ensaio, manter a Tomar volumes da amostra contendo, respectivamente,
soluo diluda num banho de gelo. 30 e 40 mg de imunoglobulina e completar 900 L com
Tampo de albumina-barbital.
Antgeno da rubola. Antgeno de rubola apropriado para
as titulaes da inibio de hemaglutinao. Ttulo > 256 (2) Soluo padro. Preparar a soluo tal como se
unidades HA. descreve para a Soluo problema a partir de um padro de
referncia para imunoglobulina humana.
5
da diluio recentemente preparada com l volume da fechados a 4 C durante 24 horas.
suspenso de eritrcitos e incubar a 37 C durante 10
minutos. Recolher os eritrcitos tratados com cido tnico Hemlise por ao do complemento. Para a determinao da
por centrifugao (400 - 800 g, durante 10 minutos), rejeitar hemlise adicionar 600 L de Tampo de albumina-barbital
o sobrenadante e lavar os eritrcitos uma vez com Soluo aquecida a 37 C amostra, suspender, cuidadosamente,
salina tamponada de fosfato de pH 7,2. Suspender a 1% os eritrcitos pipetando-os, repetidamente, (pelo menos
(v/v) os eritrcitos tratados com cido tnico na Soluo cinco vezes) e colocar a cubeta no porta-amostra de um
salina tamponada de fosfato de pH 7,2. espectrofotmetro com termostato. Aps 2 minutos, juntar
200 L de Complemento de cobaia diludo para 125 -
Adio dos antgenos aos eritrcitos. Tomar um volume 200 CH50/mL, misturar, cuidadosamente, pipetando a
apropriado (vs) de eritrcitos tratados com cido tnico, mistura duas vezes e inicie imediatamente aps a segunda
junte 0,2 mL de antgeno da rubola por 1,0 mL de pipetagem o registro da absorvncia em 541 nm em funo
eritrcitos e incubar a 37 C durante 30 minutos. Recolher do tempo, utilizando o Tampo de albumina-barbital como
os eritrcitos por centrifugao (400-800 g, durante 10 lquido de compensao. Parar o registro se a curva da
minutos) e rejeitar o sobrenadante, deixando um volume absorvncia em funo do tempo ultrapassar nitidamente o
de 200 L. Juntar um volume de Tampo de albumina- ponto de inflexo.
barbital igual ao volume do sobrenadante rejeitado,
agitar at suspenso dos eritrcitos, recolher esses como Doseamento. Determinar o declive (S) da curva de
acima descritos e repitir a lavagem. Completar o volume hemlise no ponto aproximado da inflexo segmentando a
remanescente obtido de 0,2 mL at trs-quartos de vs , curva na regio de maior declive por intervalos de tempo
obtendo assim o volume inicial (vi). apropriados (por exemplo, t = 1 minuto) e calculando S,
expresso em A por minuto entre os pontos de interseco
Misturar 900 L de Tampo de albumina-barbital com adjacentes. O valor mais elevado de S corresponde a (Sexp).
100 L de vi, que assim reduzido ao volume residual e Determinar, tambm, a absorvncia no incio da curva (As)
determinar a absorvncia inicial em 541 nm (A). Diluir vr por extrapolao da curva, a qual quase sempre linear
por um fator igual a A utilizando Tampo de albumina- e paralela ao eixo do tempo nos primeiros minutos do
barbital. Obtm-se, assim, o volume final ajustado vf = vr registro. Corrigir Sexp de acordo com a frmula:
x A de eritrcitos humanos sensibilizados e um valor para
A de 1,0 0,1 no caso de uma diluio a 1/10. Sexp
S '=
As
Ligao dos anticorpos aos eritrcitos com cido
tnico e cobertos de antgeno. Preparar, em duplicata e, Para cada preparao, calcular a mdia aritmtica dos
sucessivamente, as seguintes solues utilizando para valores de S. Calcular o ndice da funo Fc (IFc) a partir
cada soluo, em separado, uma cubeta semimicro (por da frmula:
S ' S 'c
I Fc = 100
S 's S 'c
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 229
S = mdia aritmtica do declive corrigido para a amostra; (previamente determinado) para que alcance a temperatura
Ss = mdia aritmtica do declive corrigida para o padro; mxima, antes de proceder leitura.
Sc = mdia aritmtica do declive corrigida para o
testemunho do complemento.
Material
Calcular o ndice da funo Fc para a amostra. O valor no
As seringas, agulhas e vidrarias estreis e apirognicas.
inferior ao indicado pelo fabricante do padro.
Os diluentes e solues extratoras ou de lavagem devem,
tambm, ser estreis e apirognicos.
5.5.2 ENSAIOS BIOLGICOS
Procedimento
5
ou condies especiais de administrao, seguir as temperatura de controle necessria para avaliar qualquer
recomendaes estabelecidas na monografia. aumento individual de temperatura subsequente injeo
da amostra.
Condies gerais Preparar o produto a ser testado conforme especificado
Usar coelhos do mesmo sexo, adultos, sadios, na monografia e aquecer a 37 2 C. Para o teste de
preferencialmente da mesma raa, pesando, no mnimo, 1,5 pirognios de materiais de uso hospitalar lavar, com soluo
kg. fisiolgica estril, as superfcies do material que entram em
contato com o produto, local de injeo ou tecido interno
Aps a seleo, manter os animais em gaiolas individuais do paciente. Efetuar os procedimentos assegurando que a
em sala com temperatura uniforme entre 20 e 23 C livre soluo no seja contaminada.
de perturbaes que possam estress-los. A temperatura
selecionada pode variar at 3 C. Injetar pela veia marginal da orelha de trs coelhos no
menos do que 0,5 mL nem mais que 10 mL da soluo
Realizar condicionamento para determinao da por kg de peso corporal ou a quantidade indicada na
temperatura dos animais, pelo menos uma vez, at monografia. A injeo no deve durar mais que 10 minutos,
sete dias antes de iniciar o teste. Os animais devero
a menos que na monografia se especifique tempo diferente.
ser condicionados segundo o mesmo procedimento do
teste apenas sem inoculao do produto. Animais que Registrar a temperatura de cada animal em intervalos de 30
apresentarem elevao de temperatura igual ou superior a minutos durante 3 horas aps a injeo.
0,5 C, em relao temperatura inicial, no devero ser
utilizados no teste.
Interpretao
Quando da realizao do teste, usar apenas animais
com temperatura igual ou inferior a 39,8 oC e que no No considerar os decrscimos de temperatura apresentados
apresentem, de um para o outro, variao superior a 1,0 C. pelos animais durante o teste. O aumento de temperatura
verificado pela diferena entre a maior temperatura
apresentada pelo coelho durante o teste e a sua temperatura
Registro da temperatura
de controle.
Usar termmetro clnico calibrado com preciso de 0,1
C ou qualquer outro dispositivo de registro de temperatura Se nenhum dos trs coelhos apresentar aumento individual
calibrado de igual sensibilidade. da temperatura igual ou superior a 0,5 oC, em relao s
suas respectivas temperaturas controle, o produto cumpre
Introduzir o termmetro no reto do animal em profundidade com os requisitos do teste de pirognios.
aproximada de 6 centmetros. Se for utilizado dispositivo
registrador, que deva permanecer no reto durante o Se algum coelho apresentar aumento da temperatura igual
ou superior a 0,5 oC, repetir o teste utilizando outros cinco
perodo do teste, conter os coelhos de maneira que fiquem
animais.
em postura natural de repouso. Quando se empregar
termmetro clnico, deixar transcorrer o tempo necessrio
230 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
O produto em exame cumpre os requisitos para ausncia de absorvncia medida durante o perodo da reao e valores
pirognios se no mximo trs dos oito coelhos apresentarem de velocidades so determinados para aquelas leituras.
aumentos individuais de temperatura iguais ou superiores
a 0,5 oC, e se a soma dos aumentos individuais de todos os VIDRARIAS E DESCARTVEIS.
coelhos no exceder a 3,3 oC.
Todas as vidrarias devem ser despirogenisadas em
estufa usando um processo validado. Utilize um tempo
5.5.2.2 ENDOTOXINAS BACTERIANAS
e temperatura mnimos de 250 C por 30 minutos. Se
utilizar descartveis plsticos, como ponteiras e pipetas
O teste de endotoxina bacteriana usado para detectar usem somente os certificados que indicam ser livres de
ou quantificar endotoxinas de bactrias gram negativas endotoxinas para no haver interferncia no teste.
presentes em amostras para qual o teste preconizado.
Utiliza-se o extrato aquoso dos amebcitos circulantes
PREPARAO DA ENDOTOXINA PADRO DE
do Limulus polyphemus ou do Tachypleus tridentatus
REFERNCIA E DO PADRO DE ENDOTOXINA
preparado e caracterizado como reagente LAL.
O padro de endotoxina de referencia tem uma potncia
H duas tcnicas com sensibilidade diferente para este
definida de 10.000 UE (unidades de endotoxina) por frasco.
teste:
Reconstitua o frasco com 5 mL de agua grau reagente LAL
1. MTODO DE COAGULAO EM GEL: baseado na (livre de pirognio) e agite em vrtex intermitentemente por
formao de cogulo ou gel (mtodo semi-quantitativo) 30 minutos. Use esta soluo concentrada (conservada em
refrigerador por no mais que 14 dias) para fazer diluies
2. MTODOS FOTOMTRICOS quantitativos que seriadas. Agite vigorosamente antes do uso por pelo menos
incluem: 3 minutos e proceda s diluies seriadas, agitando no
ser determinado. Ela se aplica para injees ou solues de Teste para confirmao de sensibilidade do LAL
administrao parenteral na forma reconstituda ou diluda
para administrao, quantidade de frmaco por peso, se o Confirmar a sensibilidade declarada do LAL usando no
volume da forma da dosagem for varivel. mnimo 01 frasco de reagente LAL e preparar uma srie de
diluies de endotoxina usando o padro de Endotoxina de
A frmula para o clculo da MDV a seguinte: referncia (RSE) ou o padro de Endotoxina (CSE), com
razo geomtrica igual a 2 para obter as concentraes de
0,25 , 0,5 , e 2 s, onde a sensibilidade declarada
do LAL em UE/mL. Executar o teste com as quatro
concentraes do padro de endotoxina em quadruplicata
em que:
e incluir controles negativos. A mdia geomtrica da
= a sensibilidade rotulada do reagente de LAL concentrao do ponto final cujo clculo e interpretao
encontram-se a seguir deve ser maior ou igual a 0,5 e
Observao: frmula usada para quando o limite de menor ou igual a 2 . A confirmao da sensibilidade do
endotoxina do frmaco especificado na monografia estiver LAL deve ser realizada para cada novo lote de LAL.
em volume (UE/mL)
Clculo e interpretao. O ponto final de gelificao
Quando limite de endotoxina do frmaco especificado na o ultimo teste da serie decrescente de concentrao
monografia estiver em peso (UE/mg) ou em unidade do de endotoxina padro que formou gel. Calcule a media
frmaco ativo (UE/unidades) o MDV calculado pela geomtrica logartmica dos pontos finais de gelificao e o
seguinte frmula: antilog da mdia pela frmula:
5
em que: em que
= a sensibilidade rotulada do reagente de LAL Ee - a soma dos log das concentraes do ponto final da
srie de diluies utilizada
O MDV obtido o fator de diluio limite para que o teste
f - o numero de replicatas.
seja validado.
A sensibilidade do reagente LAL em UE/mL calculada
ESTABELECIMENTO DO LIMITE DE ENDOTOXINA pela frmula acima e no deve ser menor que 0,5 e maior
que 2 .
A frmula para estabelecer limite de endotoxina para
drogas parenterais :
Testes de interferncias no mtodo coagulao em gel
(Inibio/Potencializao)
Interferncias podem ser eliminadas por um tratamento a sensibilidade do LAL multiplicado pelo menor fator de
adequado como filtrao, neutralizao, dilise ou diluio da amostra.
aquecimento.
Se todas as diluies da amostra apresentarem reaes
positivas, a concentrao de endotoxina expressa como
COAGULAO EM GEL - TESTE LIMITE igual ou maior que multiplicado pelo mais alto fator de
diluio da amostra.
Este teste usado quando a monografia contm
requerimentos para limite de endotoxina. A amostra encontra os requerimentos do teste se a
concentrao de endotoxina for menor do que o limite
Procedimento. Realize os testes em duplicatas com as
individual especificado na monografia.
solues A, B, C, D como se segue. Prepare soluo de
amostra diluda sem adio de endotoxina (soluo A);
com adio de endotoxina (controle positivo do produto) TCNICAS FOTOMTRICAS
a 2 (soluo B); gua grau reagente LAL com adio de
endotoxina a 2 (soluo C) e gua grau reagente LAL Os mtodos fotomtricos quantitativos incluem:
sem adio de endotoxina (soluo D - controle negativo). A. Mtodo cintico turbidimtrico: baseado no
A diluio da soluo A e B no deve ultrapassar o MDV. desenvolvimento de turbidez aps quebra de um substrato
Interpretao. O teste somente ser valido se as rplicas endgeno.
dos controles positivos das solues B e C formarem gel, B. Mtodo cintico cromognico: baseado no
e a rplicas dos controles negativos das solues A e C no desenvolvimento de cor aps quebra de um complexo
formarem gel. Resultados contrrios, no sero vlidos e peptdeo sinttico cromgeno.
devero ser repetidos.
5
C. Mtodo cromognico limite (endpoint).
Ensaio do teste pela coagulao em gel D. mtodo turbidimtrico limite (endpoint).
Misture um volume (ex. 100 L) de LAL com igual volume
das solues acima, amostra, padres, e controle negativo Tcnica turbidimtrica
do teste em tubos de ensaio 10 x 75mm, em duplicatas.
Incubar os tubos por 1 hora a 37 C 1 C, evitando Esta tcnica baseia-se na medida de aumento de turbidez, e
vibraes. Aps este perodo retire os tubos um a um, dependendo do principio empregado, pode ser classificado
virando a 180 graus e verificando a integridade do gel; se o em 2 tipos:
gel permanecer firme aps a inverso dos tubos considere
A. Limite Turbidimtrico: baseado na relao entre a
o resultado como positivo, e se no houver formao de
concentrao de endotoxina e a turbidez (absorvncia ou
gel ou o mesmo no se apresentar firme considere como
transmisso) da reao
negativo.
B. Cintico Turbidimtrico: mtodo baseado no tempo de
O teste somente ser vlido se as seguintes condies
reao (onset time) necessrio para a mistura de a reao
forem obedecidas:
atingir uma absorvncia pr-determinada ou na relao de
Se ambas as rplicas do controle negativo (D) apresentarem desenvolvimento de turbidez.
reaes negativas;
O teste realizado numa temperatura de incubao
Se ambas as rplicas do controle positivo do produto (B) recomendada de 37 C 1 C.
apresentarem reaes positivas;
Tcnica cromognica
Se a mdia geomtrica da soluo C estiver dentro da faixa
de 0,5 a 2 . Esta tcnica baseada na medida de um cromforo liberado
por um peptdeo cromognico pela reao da endotoxina
Para calcular a concentrao de endotoxina da soluo A,
com o lisado e dependendo do principio empregado pode
calcule a concentrao do ponto final de cada rplica da
ser classificado em dois tipos:
serie de diluies, multiplicando cada fator de diluio do
ponto final pela sensibilidade rotulada do reagente LAL () A. Teste cromognico limite- baseado na relao entre a
concentrao de endotoxina e a quantidade do cromforo
A concentrao de endotoxina na soluo teste a mdia
liberado no final de um perodo de incubao.
geomtrica da concentrao do limite das replicas.
B. Teste cintico cromognico: baseado na medida do
Se o teste realizado na amostra diluda, determine
tempo de reao (onset time) necessrio para a mistura de
a concentrao de endotoxina na soluo original
a reao atingir uma pr-determinada absorvncia ou na
multiplicando o resultado pelo fator de diluio da amostra.
velocidade de desenvolvimento de cor.
Se nenhuma das diluies da amostra teste for positiva,
expresse o resultado da concentrao de endotoxina como O teste realizado numa temperatura de incubao
menor que a sensibilidade do LAL () ou menor do que recomendada de 37 1 C.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 233
Para assegurar a preciso e validade dos testes Siga os procedimentos descritos acima nos itens:
turbidimtricos e cromognicos, testes preparatrios so Preparao para o teste e Testes para fatores interferentes.
realizados para assegurar os critrios para a curva padro
so satisfatrios e a amostra em teste no interfere com o Clculos para tcnicas fotomtricas
teste. Calcule a concentrao de endotoxina para cada replicata
A validao do mtodo requerida quando qualquer da soluo A, usando a curva padro gerada pela srie de
mudana nas condies experimentais realizada e pode controle positivo soluo C.
interferir no teste. O teste somente vlido se os trs requisitos abaixo forem
encontrados:
Critrios para a curva padro
O resultado obtido da soluo D (controle negativo) no
Prepare uma curva padro utilizando trs concentraes de exceda o limite do valor do branco requerido na descrio
endotoxina, usando uma soluo preparada de padro de do lisado empregado;
endotoxina, e realize o teste, no mnimo em triplicata de
cada concentrao, como recomendado pelo fornecedor do O resultado obtido com a srie de controle positivo, soluo
LAL (relao de volume, tempo de incubao, temperatura C, estiver de acordo com os requerimentos para validao
e pH,etc.) definidos nos critrios para curva padro.
Se for desejado uma faixa maior que 2 logs, uma A recuperao de endotoxina, calculada a partir da
concentrao padro dever ser adicionada para aumentar endotoxina encontrada na soluo B aps subtrao da
a faixa da curva padro. concentrao de endotoxina encontrada na soluo A
nenhuma reao com o lisado empregado no limite de TESTE PARA PRODUTOS BIOLGICOS, SOROS E
deteco do reagente. VACINAS
5 Preparao da amostra
meses. Desprezar a soluo quando essa apresentar algum requisitos do teste se a mdia dessas diferenas significar
sinal de deteriorao, tal como mudana de cor. que as respostas obtidas com soluo da amostra no so
maiores do que aquelas da diluio padro. Os resultados
Diluio do padro devem corresponder ao limite de atividade pressora
especificado para esse teste na monografia correspondente.
Diluir a soluo padro de referncia de epinefrina, em
soluo fisiolgica, de modo que a administrao de dose
entre 0,1 mL e 0,5 mL produza aumento de 20 mm a 70 5.5.2.5 HISTAMINA
mm de mercrio na presso arterial.
Submeter a eutansia uma cobaia com peso entre 250 g
Mtodo proposto e 350 g, em jejum de aproximadamente 24 horas. Retirar
aproximadamente 10 cm da poro distal do leo. Lavar
Selecionar rato com peso entre 275 g e 325 g e anestesiar internamente com soluo nutritiva. Selecionar poro com
com anestsico que possibilita a manuteno da presso cerca de dois ou trs centmetros de comprimento e amarrar
arterial constante. (isento de efeito sobre presso arterial). duas linhas finas nas extremidades. Efetuar pequena
Imobilizar o animal e mant-lo aquecido para prevenir inciso na poro central do tecido. Transferi-lo para cuba-
a perda de calor corporal. Cirurgicamente proceder de-rgo-isolado, de 10 mL a 20 mL de capacidade, em
intubao traqueal, se necessrio, e expor a veia femoral temperatura controlada entre 34 C a 36 C sob corrente
ou jugular, preparando-a, para injees intravenosas. de ar ou mistura de 95% de oxignio e 5% de CO2. Fixar
Administrar 200 unidades de heparina por 100 g de peso uma das linhas no fundo da cuba e amarrar a outra na
corporal. Cirurgicamente expor a artria cartida e canular, alavanca destinada a registrar as contraes musculares no
conectando-a ao manmetro ajustado para o registro quimgrafo ou outro sistema de registro adequado. Ajustar
contnuo da presso arterial. a alavanca para o registro das contraes do leo com grau
Mantendo constante o intervalo de tempo estabelecido, No ocorrendo contrao no teste supracitado por efeito
injetar srie de cinco doses na qual se alternem a dose da amostra ensaiada, preparar nova soluo da amostra,
selecionada da diluio padro e dose de igual volume adicionado quantidade de histamina correspondente ao
da substncia sob teste, diluda convenientemente. Aps limite mximo especificado na monografia e observar
cada uma das cinco injees, medir a variao na presso se a contrao produzida proporcional quantidade de
arterial. histamina adicionada. Considerar o teste vlido se essa
resposta for proporcional e se confirmar a reprodutibilidade
Calcular a diferena entre cada resposta da amostra e das contraes induzidas pela sequncia de doses: dose
a mdia das respostas das doses da diluio padro, padro de referncia menor, dose de soluo da substncia
imediatamente anterior e posterior. A amostra cumpre os
236 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
sob teste e dose padro de referncia maior. Caso contrrio, de soluo fisiolgica) para a administrao das solues
realizar o teste para substncias vasodepressoras. padro de referncia e amostra.
Dissolver, em gua para injetvel estril, quantidade Terminar o teste administrando uma dose C do padro para
suficiente e exatamente pesada de dicloridrato de histamina comprovar que a resposta se mantm superior dose B:
para obter soluo contendo o equivalente a 1 mg/mL de caso isto no ocorra, o teste no vlido.
histamina (base livre). Conservar sob refrigerao em
recipiente de vidro mbar dotado de tampa esmerilhada, O animal pode ser usado enquanto permanecer estvel e
ao abrigo da luz, durante um ms. No dia do teste, preparar responder, adequadamente, administrao da soluo
soluo padro de referncia contendo o equivalente a 1 padro de referncia.
g/mL de histamina (base livre), em soluo fisiolgica.
5.5.3 ENSAIOS
Soluo de amostra
MICROBIOLGICOS
Preparar a soluo de amostra conforme a especificao da
monografia respectiva.
5.5.3.1 ENSAIOS MICROBIOLGICOS
Mtodo sugerido PARA PRODUTOS No estreis
Realizar o teste usando um gato com peso mnimo de 2
kg (pesar gato adulto e sadio) (no caso de fmeas, que A contaminao microbiana de um produto pode acarretar
no estejam prenhes) e anestesi-lo por meio de injeo alteraes em suas propriedades fsicas e qumicas e
de cloralose ou barbitrico que possibilite a manuteno ainda caracteriza risco de infeco para o usurio. Assim,
de presso arterial uniforme. Imobilizar o animal e produtos farmacuticos de uso oral e tpico (cpsulas,
proteg-lo para prevenir perda de calor corporal, fazer o comprimidos, suspenses, cremes, adesivos, etc.) que no
monitoramento retal da temperatura para manuteno dos tm como requerimento serem estreis devem estar sujeitos
limites fisiolgicos. ao controle de contaminao microbiana.
Dissecar a veia femoral, ou jugular, preparando-a por A garantia da qualidade e o controle de fabricao previstos
insero de cnula repleta de heparina (1000 unidades/mL nas boas prticas devem garantir que o produto cumpra
as especificaes determinadas, isto , que atendam alm
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 237
de outros parmetros, aos limites aceitveis para micro- Soluo Tampo cloreto de sdio-peptona, pH 7,0
organismos.
Fosfato de potssio monobsico 3,6 g
Para a realizao do teste devem ser considerados os limites Fosfato dissdico diidratado 7,2 g
microbianos, o tipo de contaminao mais provvel nas
Cloreto de sdio 4,3 g
diferentes categorias de produtos e a via de administrao.
Peptona (carne ou casena) 1,0 g
A natureza e a frequncia do teste variam de acordo gua purificada 1000 mL
com o produto. Certas categorias devem ser testadas
rotineiramente quanto contaminao total microbiana, Esterilizar em autoclave usando ciclo validado.
tais como: produtos de origem vegetal, mineral e/ou animal
assim como produtos com elevado teor de gua (solues Tampo Fosfato pH 7,2 Soluo estoque
orais aquosas, cremes, etc). Para as demais categorias
como comprimidos, ps, cpsulas, produtos lquidos no Fosfato de potssio monobsico 34,0 g
aquosos, pomadas e supositrios, a frequncia do teste pode Hidrxido de sdio 4% Adicionar aproximadamente 175 mL
ser estabelecida com base em dados histricos dos testes de
gua purificada 1000 mL
monitoramento microbiolgico tanto o ambiental quanto o
de equipamentos. Outros critrios a serem considerados Dissolver o fosfato de potssio monobsico em 500 mL
seriam a carga microbiana da matria-prima, o processo de gua, acertar o pH para 7,2 0,2 com hidrxido de
de fabricao, a formulao do produto e os resultados sdio 4%. Completar o volume com gua, esterilizar e
de determinao da atividade de gua, quando aplicvel. conservar sob refrigerao. Quando da utilizao diluir a
Resultados de baixa atividade de gua (igual ou inferior soluo estoque com gua na proporo de 1 para 800 (v/v)
a 0,75 medidos 25 C), assim como baixo ou alto pH, e esterilizar.
ausncia de nutrientes e adio de conservantes ajudam a
prevenir a contaminao microbiana. Fluido de lavagem
gar MacConkey
Glicose monoidratada 2,5 g
gua purificada 1000 mL Hidrolisado de pancretico de gelatina 17,0 g
pH 7,3 0,2. Esterilizar em autoclave usando ciclo Peptona (carne ou casena) 3,0 g
validado. Lactose monoidratada 10,0 g
Cloreto de sdio 5,0 g
gar Casena-soja Bile de boi desidratada 1,5 g
Vermelho neutro 30,0 mg
Peptona de casena pancretica 15,0 g
Cristal violeta 1,0 mg
Farinha de soja obtida por digesto papanica 5,0 g
Agar 13,5 g
Cloreto de sdio 5,0 g
gua purificada 1000 mL
Agar 15,0 g
pH 7,1 0,2. Ferver 1 minuto com constante agitao.
gua purificada 1000 mL Esterilizar em autoclave usando ciclo validado.
pH 7,3 0,2. Esterilizar em autoclave usando ciclo
validado.
gar Xilose, Lisina, Desoxicolato
gar Violeta Vermelho Neutro Glicose Xilose 3,5 g
Extrato de levedura 3,0 g L-Lisina 5,0 g
Peptona de gelatina pancretica 7,0 g Lactose monoidratada 7,5 g
Sais Biliares 1,5 g Sacarose 7,5 g
Cloreto de sdio 5,0 g Cloreto de sdio 5,0 g
Glicose monoidratada 10,0 g Extrato de levedura 3,0 g
Agar 15,0 g Vermelho fenol 80,0 mg
Vermelho neutro 30,0 mg Agar 13,5 g
Cristal violeta 2,0 mg
gua purificada 1000 mL
pH 7,4 0,2.. Aquecer at ebulio. No esterilizar em
autoclave.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 239
Dextrose 20,0 g
5
gar Cetrimida Peptonas 10,0 g
gua purificada 1000 mL
Hidrolisado de pancretico de gelatina 20,0 g
pH 5,6 0,2. Esterilizar em autoclave usando ciclo
Cloreto de magnsio 1,4 g validado.
Sulfato dipotssico 10,0 g
Cetrimida 0,3 g
gar Seletivo para Candida segundo Nickerson
Agar 13,6 g
gua purificada 1000 mL Extrato de levedura 1,0 g
Glicerol 10,0 mL Peptona farinha de soja 2,0 g
Ferver 1 minuto com constante agitao. Ajustar o pH Glicina 10,0 g
de forma que seja 7,2 0,2. Esterilizao em autoclave Glicose 10,0 g
usando ciclo validado. Indicador bismuto-sulfito 2,0 g
Agar 15,0 g
Agar Sal Manitol gua purificada 1000 mL
Dissolver 40 g em 1000 mL de gua. pH 6,5 0,2.
Hidrolisado de pancretico de casena 5,0 g
Esterilizar sob vapor fluente.
Peptona pptica de tecido animal 5,0 g
Extrato de carne 1,0 g
Meio Reforado para Clostridium
D-manitol 10,0 g
Cloreto de sdio 75,0 g Extrato de carne 10,0 g
Agar 15,0 g Peptona 10,0 g
Vermelho fenol 25 ,0 mg Extrato de levedura 3,0 g
gua purificada 1000 mL Amido solvel 1,0 g
Ferver 1 minuto com constante agitao. Ajustar o pH de Glicose monoidratado 5,0 g
forma que seja 7,4 0,2. Esterilizar em autoclave usando Cloridrato de cistena 0,5 g
ciclo validado. Cloreto de sdio 5,0 g
Acetato de sdio 3,0 g
gar Batata-dextrose Agar 0,5 g
gua purificada 1000 mL
Infuso de batata 200,0 g
Deixar intumescer o Agar e dissolver aquecendo ebulio,
Dextrose 20,0 g agitando constantemente. Se necessrio ajustar o pH de
240 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
forma que seja 6,8 0,2. Esterilizar em autoclave usando pH 7,0 ou caldo de casena-soja ou um outro diluente
ciclo validado. adequado. Em geral, a proporo de diluente e amostra
de 10:1, mas as caractersticas do produto podem exigir
que seja alterada essa relao. Pode ser adicionado agente
gar Columbia tensoativo como polissorbato 80, na concentrao de 1 g/L,
para facilitar a disperso. Se necessrio, ajustar o pH para
Hidrolisado de pancretico de casena 10,0 g
6,0 a 8,0. Preparar diluies decimais sucessivas com o
Peptona de carne digesto 5,0 g mesmo diluente.
Digesto pancretico de corao 3,0 g
Extrato de levedura 5,0 g Produtos de natureza lipdica
Amido de milho 1,0 g
Mtodo de filtrao por membrana - Dissolver 1 g ou 1
Cloreto de sdio 5,0 g
mL da mistura de amostra em 100 mL de miristato de
Agar, de acordo com o poder gelificante 10,0 - 15,0 g isopropila esterilizado por filtrao em membrana (e seu
gua purificada 1000 mL extrato aquoso deve apresentar pH no inferior a 6,5) e
Deixar intumescer o gar e dissolver aquecendo at aquecido a 40 - 45 C. Pode ser utilizado polissorbato 80
ebulio, agitando constantemente. Se necessrio ajustar o estril ou outro agente tensoativo no inibitrio;
pH de forma que seja 7,3 0,2. Esterilizar em autoclave
Mtodo de contagem em placa Transferir 10 g ou 10
usando ciclo validado. Esfriar para 45 a 50 C e adicionar,
mL da mistura de amostra para frasco contendo no mais
se necessrio, sulfato de gentamicina correspondente a 20
que 5 g de polissorbato 20 ou 80 estril ou outro agente
mg de gentamicina base, verter em placas de Petri.
tensoativo no inibitrio. Aquecer se necessrio, a uma
temperatura entre 40 - 45 C.
Esse teste consiste na contagem da populao de micro- Cremes e pomadas insolveis em miristato de isopropila
organismos que apresentam crescimento visvel, em at 5
dias, em gar casena-soja a 32,5 oC 2,5 oC e em at 7 Transferir 10 g da mistura de amostra para obter uma
dias, em gar Sabouraud-dextrose a 22,5 oC 2,5 oC. diluio a 1:10 em caldo casena-soja contendo 0,1 de
tetradecilsulfato de sdio, aquecido a 40 - 45 C. Agitar at
Mtodos microbiolgicos alternativos, inclusive os mistura homognea.
automatizados, podem ser utilizados desde que sua
equivalncia com o mtodo farmacopeico tenha sido Misturar, cuidadosamente, mantendo sempre a temperatura
devidamente validada. durante o tempo mnimo necessrio para a formao de
uma emulso, em qualquer caso no mais que 30 minutos.
PREPARAO DAS AMOSTRAS Se necessrio, ajustar o pH para 6,5 - 7,5. Preparar diluies
decimais sucessivas com o mesmo diluente acrescido de
0,1% de tetradecilsulfato de sdio.
Produtos hidrossolveis
Transferir 10 mL, ou a quantidade de diluio que Mtodo de superfcie - adicionar em placas de Petri,
represente 1 g ou 1 mL da amostra a ser testada, para duas separadamente, 15 - 20 mL de gar casena soja e gar
membranas e filtrar imediatamente. Se necessrio, diluir a Sabouraud-dextrose e deixar solidificar. Secar as placas.
amostra de forma a obter contagem de colnias entre 10 Adicionar superfcie de cada meio de cultura, 0,1 mL
e 100 UFC. Lavar as membranas pelo menos trs vezes da amostra preparada como descrito em Preparao das
com aproximadamente 100 mL do fluido de lavagem amostras. Incubar as placas contendo gar casena-soja
adequado. Transferir uma das membranas para a superfcie a 32,5 C 2,5 C durante 3-5 dias e as placas contendo
de uma placa contendo gar casena-soja, incubar a 32,5 C gar Sabouraud-dextrose a 22,5 C 2,5 C durante 5 - 7
2,5 C durante 3-5 dias, para determinao do nmero dias para determinao do nmero de micro-organismos
de micro-organismos aerbicos totais. Transferir a outra aerbicos totais e bolores e leveduras, respectivamente.
membrana para a superfcie de uma placa contendo gar Tomar a mdia aritmtica das placas de cada meio e
Sabouraud-dextrose e incubar a 22,5 C 2,5 C durante calcular o nmero de UFC por grama ou mL do produto.
5-7 dias, para a determinao de bolores e leveduras.
Exemplo de clculo:
Calcular o numero de UFC por grama ou mililitro do
produto. Colnias por
Diluio UFC/g, ou mL
placas
Quando analisar dispositivos transdrmicos e produtos
mdicos, filtrar, separadamente, 10% do volume da 1:100 293 2,93 x 104
preparao, conforme procedimento de adequao do 1:100 100 1,00 x 104
produto, e proceder lavagem e incubao conforme 1:1000 41 4,10 x 104
descrito anteriormente. 1:1000 12 1,20 x 104
5
Contagem em placa
usando caldo casena-soja (Diluio A) como diluente. em placa de Agar MacConkey e incubar a 32,5 C 2,5 C
Homogeneizar e incubar a 22,5 C 2,5 C por 2 horas durante 18 a 72 horas.
e no mais que 5 horas (tempo necessrio para reativar a
bactria, mas no o suficiente para estimular a multiplicao Interpretao - O crescimento de colnias vermelhas,
do micro-organismo). geralmente no mucosas, com micromorfologia
caracterstica de bacilo Gram-negativo, indica presena
Teste de ausncia - Homogeneizar a Diluio A e transferir provvel de E.coli que deve ser confirmada por testes de
volume correspondente a 1 g ou 1 mL do produto para o identificao microbiana. O produto cumpre o teste se no
Caldo de Enriquecimento de Enterobactrias segundo for observado crescimento de tais colnias ou se as provas
Mossel (Aeromonas e Pseudomonas tambm podem microbianas forem negativas.
crescer neste meio, bem como outros tipos de bactrias).
Incubar a 32,5 C 2,5 C por 24 a 48 horas. Preparar Salmonella
subcultura em placas contendo gar Violeta Vermelho
Neutro Bile Glicose. Incubar a 32,5 C 2,5 C durante Preparao da amostra e pr-incubao - Preparar a
18 a 24 horas.O produto cumpre o teste se no houver amostra usando a diluio 1:10 de no menos que 10 g,
crescimento de colnias. ou 10 mL do produto a ser examinado, conforme descrito
em Contagem do nmero total de micro-organismos
Teste quantitativo (seleo e subcultura) - Diluir quantidade mesoflicos (5.5.3.1.2). Homogeneizar e incubar 32,5 C
apropriada da Diluio A para o Caldo de Enriquecimento 2,5 C durante 18 a 24 horas.
de Enterobactrias segundo Mossel, de modo a obter
diluies contendo 0,1; 0,01 e 0,001 g (ou 0,1; 0,01 e Seleo e subcultura - Agitar e transferir 0,1 mL do
0,001 mL) do produto a ser testado. Incubar a 32,5 C contedo para 10 mL de Caldo Enriquecimento Salmonella
2,5 C durante 24 a 48 horas. Para cada tubo positivo, Rappaport Vassiliadis. Incubar a 32,5 C 2,5 C durante
realizar subculturas em Agar Violeta Vermelho Neutro Bile
5
18 a 24 horas. Realizar subcultura em placa contendo Agar
Glicose. Incubar a 32,5 C 2,5 C durante 18 a 24 horas. Xilose Lisina Desoxicolato e incubar a 32,5 C 2,5 C
durante 18 a 48 horas.
Interpretao - O crescimento de colnias bem
desenvolvidas de bactrias Gram-negativas, geralmente Interpretao - O crescimento de colnias bem
vermelhas ou avermelhadas, indica contaminao desenvolvidas, vermelhas com ou sem centro negro indica
(resultado positivo). Anotar os resultados positivos e presena provvel de Salmonella que deve ser confirmada
negativos. Determinar o nmero mais provvel de bactrias por testes de identificao microbiana. O produto cumpre o
por grama ou mililitro do produto segundo Tabela 1. teste se no for observado crescimento de tais colnias ou
se as provas microbianas forem negativas.
Tabela 1 Interpretao dos resultados do teste quantitativo
para bactrias gram-negativas bile tolerantes.
Pseudomonas aeruginosa
Resultados para quantidade
de produto de Nmero provvel de Preparao da amostra e pr-incubao - Preparar a
0,01 g, 0,001 g, bactrias por grama, amostra usando a diluio 1:10 de no menos que 1 g do
0,1 g, ou produto a ser examinado, conforme descrito em Contagem
ou 0,01 ou 0,001 ou mililitro do produto
0,1 mL do nmero total de micro-organismos mesoflicos
mL mL
(5.5.3.1.2). Utilizar 10 mL da diluio para 90 mL de Caldo
+ + + Mais de 103
de Casena-soja ou quantidade correspondente a 1 g ou 1
+ + - Menos de 103 e mais de 102
mL. Homogeneizar e incubar 32,5 C 2,5 C durante 18
+ - - Menos de 102 e mais de 10
a 24 horas.
- - - Menos de 10
Quando testar o dispositivo transdrmico, filtrar 50 mL
Escherichia coli de Caldo Casena-soja por membrana estril e transferir a
membrana para 100 mL de Caldo Casena-soja. Incubar a
Preparo da amostra e pr-incubao - Preparar a amostra 32,5 C 2,5 C durante 18 a 24 horas.
usando a diluio 1:10 de no menos que 1 g do produto a
ser examinado conforme descrito em Contagem do nmero Seleo e subcultura - Agitar e transferir uma ala para
total de micro-organismos mesoflicos (5.5.3.1.2). placa contendo Agar Cetrimida. Incubar a 32,5 C 2,5 C
durante 18 72 horas. O crescimento de colnias indica
Utilizar 10 mL da diluio para 90 mL de Caldo de presena provvel de Pseudomonas aeruginosa que deve
Enriquecimento (Caldo Casena-soja), ou quantidade ser confirmada por testes de identificao microbiana. O
correspondente a 1 g ou 1 mL. Homogeneizar e incubar produto cumpre o teste se no for observado crescimento
32,5 C 2,5 C durante 18 a 24 horas. de tais colnias ou se as provas de identificao forem
negativas.
Seleo e subcultura - Agitar e transferir 1 mL da amostra
enriquecida para 100 mL de Caldo MacConkey. Incubar
a 43 C 1 C durante 24 48 horas. Realizar subcultura
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 245
Seleo e subcultura - Agitar e transferir uma ala para Para adequao dos mtodos farmacopeicos aos produtos
placa contendo Agar Sal Manitol. Incubar a 32,5 C 2,5 no estreis deve ser demonstrada a eliminao de
C durante 18 72 horas. qualquer propriedade antimicrobiana antes da verificao
da existncia de contaminao microbiana nos produtos.
Interpretao - O crescimento de colnias amarelas ou
brancas rodeada por uma zona amarela indica presena O protocolo do teste de adequao deve mimetizar o teste
provvel de S. aureus que deve ser confirmada por testes de limite microbiano preparao da amostra, tipo de meio
de identificao microbiana. de cultura e solues tampo, nmero e tipo da soluo
5
de lavagens das membranas bem como as condies
O produto cumpre o teste se no for observado crescimento de incubao. Esse protocolo requer o uso de micro-
de tais colnias ou se as provas de identificao foram organismos para o teste de recuperao microbiana.
negativas.
Durante a adequao, demonstrar que a escolha do mtodo
para estimativa qualitativa e/ou quantitativa dos micro-
Clostridium organismos viveis sensvel, exato e confivel e que
Preparao da amostra e pr-incubao - Preparar a capaz eliminar qualquer interferncia ou inibio durante a
amostra conforme descrito em Contagem do nmero total recuperao dos micro-organismos viveis.
de micro-organismos mesoflicos (5.5.3.1.2). Utilizar duas Revalidar o mtodo de adequao se forem modificadas as
fraes iguais correspondentes a no menos que 1 g ou mL condies de ensaio e/ou ocorrerem alteraes no produto
do produto a ser examinado. Aquecer uma das pores a 80 que possam afet-lo.
C durante 10 minutos e esfriar imediatamente. Inocular 10
mL de cada frao homogeneizada em 2 frascos contendo Com a finalidade de indicao, foram listados os micro-
100 mL de meio Caldo Reforado para Clostridium. organismos disponveis na ATCC. Os mesmos micro-
Incubar em anaerobiose a 32,5 C 2,5 C durante 48 organismos podem, tambm, ser obtidos de outras fontes:
horas. INCQS, CIP, NBRC, NCIMB, NCPF, NCTC, NCYC,
IMI e IP. A correspondncia entre os micro-organismos e
Seleo e subcultura - Transferir uma ala de cada os endereos das entidades que os fornecem encontra-se
frasco para placa contendo Agar Columbia. Incubar em indicada em Micro-organismos empregados em testes e
anaerobiose a 32,5 C 2,5 C durante 48 horas. ensaios (5.5.3.5).
Interpretao - O crescimento de colnias catalase-
negativas, com micromorfologia de bacilo Gram-positivo CONTAGEM DO NMERO TOTAL DE MICRO-
(com ou sem endsporos) indica presena provvel de ORGANISMOS MESOFLICOS
Clostridium. O produto cumpre o teste se no for observado
crescimento de micro-organismo anaerbio ou se o teste de
Manuteno e preparao dos micro-organismos teste
catalase for negativo.
As culturas liofilizadas devem ser reidratadas de acordo com
Candida albicans as instrues de fornecedores e mantidas por transferncias
para meios de cultura recm preparados ou por processo de
Preparao da amostra e pr-incubao - Preparar a congelamento ou de refrigerao por perodo de estocagem
amostra usando a diluio 1:10 de no menos que 1 g, que mantenha as caractersticas originais da cultura.
ou mL do produto a ser examinada conforme descrito
em Contagem do nmero total de micro-organismos Usar suspenses padronizadas dos micro-organismos
mesoflicos (5.5.3.1.2). Utilizar 10 mL da diluio para 90 conforme estabelecido a seguir. Utilizar tcnica de
mL de Caldo Sabouraud Dextrose. Incubar 32,5 C 2,5 manuteno de forma que o inculo no ultrapasse 5
C durante 3 a 5 dias. passagens da cultura original. Realizar subculturas de cada
micro-organismo (bactria e fungo) separadamente como
descrito na Tabela 1.
246 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
32,5 C 2,5 32,5 C 2,5
C, 3 dias C, 3 dias
Cndida albicans gar Sabouraud- gar Casena- gar Sabouraud- gar Casena- gar Sabouraud-
(ATCC 10231) dextrose ou Caldo soja dextrose soja dextrose
Sabouraud
100 UFC 100 UFC 100 UFC 100 UFC
22,5 C 2,5 C
32,5 C 2,5 22,5 C 2,5 32,5 C 2,5 22,5 C 2,5
2-3 dias C, 5 dias C, 5 dias C, 5 dias C, 5 dias
NMP: no
se aplica
Aspergillus gar Sabouraud- gar Casena- gar Sabouraud- gar Casena- Agar Sabouraud-
brasiliensis dextrose ou gar soja dextrose soja dextrose
(ATCC 16404) Batata-dextrose
100 UFC 100 UFC 100 UFC 100 UFC
22,5 C 2,5 C
32,5 C 2,5 22,5 C 2,5 32,5 C 2,5 22,5 C 2,5
5-7 dias, ou at C, 5 dias C, 5 dias C, 5 dias C, 5 dias
esporulao
evidente NMP: no
se aplica
____________
Usar soluo tampo cloreto de sdio-peptona pH - 7,0 ou soluo tampo fosfato pH 7,2 para preparar as suspenses. Ao preparar a suspenso de
esporos de A. brasiliensis, adicionar soluo tampo 0,05% de polissorbato 80. Usar as suspenses dentro de 2 horas ou dentro de 24 horas se mantidas
temperatura de 2- 8 C. Tempos maiores podero ser utilizados desde que validados.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 247
5 Trimetoprima
____________
Timidina
* Tioglicolato pode ser txico para certos micro-organismos, especialmente esporos e staphylococos; tiossulfato pode ser txico para staphylococos.
Utilizar Caldo Neutralizante Dey-Engley ou Neutralizante Universal.
Se a neutralizao no for adequada pode-se admitir que a falha em recuperar o micro-organismo inoculado seja atribuda atividade antimicrobiana do
produto. Esta informao serve para indicar que o produto no susceptvel a contaminao pelos micro-organismos testados, porm pode no inibir
outros no includos na lista, os quais no so representativos e podero ser empregados em substituio queles preconizados.
B) Contagem em placa
Recuperao dos micro-organismos no produto
Mtodo de profundidade - Utilizar placas com 9 cm de
Realizar os testes separadamente para cada micro- dimetro. Adicionar 1 mL da amostra preparada como
organismo teste listado na Tabela 3. Utilizar a amostra descrito em Inoculao dos micro-organismos teste na
conforme preparada em Inoculao dos micro-organismos amostra e adicionar 15 - 20 mL de gar Casena-soja ou
teste na amostra. gar Sabouraud-dextrose mantidos a 45 - 50 C. Para
A) Filtrao por membrana cada micro-organismo testado, utilizar duas placas
para cada meio e cada diluio. Incubar nas condies
Usar membrana filtrante com 0,45 m de dimetro descritas na Tabela 1. Tomar a mdia aritmtica das
de porosidade e eficcia comprovada de reteno. As placas com cada meio de cultura e calcular o nmero
membranas de nitrato de celulose, por exemplo, podem ser de UFC.
utilizadas para solues aquosas, oleosas ou fracamente Mtodo de superfcie - Para cada placa de Petri de
alcolicas e as de acetato de celulose para solues 9 cm, adicionar 15 - 20 mL de gar casena soja ou
fortemente alcolicas. Para cada micro-organismo teste, gar Sabouraud-dextrose e deixar solidificar. Secar as
utilize uma membrana. placas. Adicionar superfcie do meio de cultura 0,1
mL da amostra preparada como descrito em inoculao
Da amostra preparada, conforme descrito em Inoculao
do micro-organismo na amostra. Para cada micro-
dos micro-organismos teste na amostra, transferir 10
organismo testado utilizar duas placas. Realizar a
mL para equipamento de filtrao por membrana e filtrar
contagem e calcular o nmero de UFC.
imediatamente. Lavar a membrana com volume apropriado
de lquido de lavagem. C) Mtodo do Nmero Mais Provvel
Para determinao da contagem de micro-organismo A partir da amostra preparada conforme descrito em
aerbico e contagem de bolores e leveduras, transferir as Inoculao dos micro-organismos teste na amostra (1:10),
membranas para gar Casena-soja e gar Sabouraud- preparar diluies 1:100 e 1:1000. Transferir 1 mL de cada
dextrose, respectivamente. Incubar nas condies descritas diluio para 3 tubos contendo cada um 9 mL de caldo
na Tabela 3 e realizar a contagem das colnias. Casena-soja. Se necessrio adicionar agente inativante.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 249
Condies gerais
P. aeruginosa
Escherichia coli
Caldo MacConkey Promoo de crescimento E. coli
Inibitria S. aureus
Agar MacConkey Crescimento presuntivo E. coli
Salmonella
Caldo Enriquecimento Salmonella, segundo Promoo de crescimento Salmonella enterica ssp sorotipo
Rappaport Vassiliadis typhimurium
5 Pseudomonas aeruginosa
Agar Cetrimida Crescimento presuntivo
ou S. entrica ssp sorotipo abony
P. aeruginosa
Inibitria E. coli
Staphylococcus aureus
Agar Sal Manitol Crescimento presuntivo S. aureus
Inibitria E. coli
Clostridium
Meio Reforado para Clostridium Promoo de crescimento Clostridium sporogenes
Agar Columbia Promoo de crescimento C. sporogenes
Candida albicans
Caldo Sabouraud Promoo de crescimento Candida albicans
Agar Sabouraud-dextrose Crescimento Presuntivo C. albicans
Agar Nickerson Crescimento Presuntivo C. albicans
dos testes microbiolgicos, o nmero e os tipos de micro- Os limites de aceitao esto descritos na Tabela 1 e so
organismos presentes devem ser considerados no contexto interpretados do seguinte modo:
do uso do produto proposto.
- 101 UFC: valor mximo aceitvel = 20
O teste microbiolgico de produtos no estreis e de
matria-prima para uso farmacutico realizado segundo - 102 UFC: valor mximo aceitvel = 200
a metodologia descrita em Ensaios microbiolgicos para
- 103 UFC: valor mximo aceitvel = 2000 e, assim
produtos no estreis (5.5.3.1).
sucessivamente
5
252 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
UFC/g ou mL UFC/g ou mL
Produtos sintticos e biolgicos a
Preparao aquosa para uso oral 102 101 Ausncia de Escherichia coli em 1 g, ou mL
Preparao para uso oral contendo 104 102 Ausncia de Escherichia coli e Staphylococous
matria-prima de origem natural aureus em 1 g, ou mL. Ausncia de Salmonella
em 10 g, ou 10 mL. Limite mximo de 102
bactrias Gram negativa bile tolerante b em 1
g, ou mL.
Drogas vegetais que sero 107 104 Limite mximo de 102 Escherichia coli em 1 g.
submetidas a processos extrativos Limite mximo de 104 bactrias Gram negativa
a quente bile tolerante b em 1 g, ou mL. Ausncia de
Salmonella em 10 g
Drogas vegetais que sero 105 103 Limite mximo de 101 Escherichia coli em 1 g.
submetidas a processos extrativos Limite mximo de 103 bactrias Gram negativa
a frio bile tolerante b em 1 g, ou mL. Ausncia de
Salmonella em 10 g
No devem ser realizados testes sob exposio direta de Esterilizar utilizando processo validado. Se no for utilizar
luz ultravioleta ou em reas sob tratamento com aerossis. imediatamente, estocar em temperatura entre 2 C e 25 C
As condies devem ser adequadas de forma a evitar conforme orientao do fabricante. No utilizar o meio por
contaminao acidental da amostra durante o teste e, um perodo de estocagem superior quele para o qual ele
tambm, no afetar a deteco de possveis contaminantes. foi validado.
Controles ambientais das reas de trabalho devem ser
O Meio lquido de tioglicolato deve ser incubado a 32,5 C
realizados regularmente (controle do ar e de superfcies,
2,5 C sob condies aerbicas.
contagens de partculas, determinao de velocidade e
direo do fluxo de ar, entre outros).
254 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Dissolver todos os componentes em gua purificada, Usando ala de cultivo, transferir o crescimento do micro-
aquecendo brandamente. Resfriar temperatura ambiente organismo especfico para tubo de ensaio contendo gar
e ajustar o pH com hidrxido de sdio M de modo que, inclinado indicado para o seu crescimento. Semear a cultura
sobre a superfcie do gar inclinado, de modo a obter
5
aps a esterilizao, o pH da soluo seja de 7,3 0,2.
Se necessrio, filtrar para clarificao do meio. Distribuir pelcula uniforme de crescimento. Incubar nas condies
em frascos adequados e esterilizar utilizando processo timas de crescimento do micro-organismo teste.
validado. Se no for utilizar imediatamente, estocar em Como sugesto de diluies para o inculo, aps o perodo
temperatura entre 22,5 C 2,5 C, conforme orientao de incubao lavar o crescimento do micro-organismo
do fabricante. No utilizar o meio por um perodo de com 1 mL de soluo estril de cloreto de sdio a 0,9%
estocagem superior quele para o qual ele foi validado. (p/v) ou gua peptonada 0,1% (p/v) estril e transferir
O Caldo de casena soja deve ser incubado a 22,5 C + 2,5 para frasco contendo 99 mL de soluo estril de cloreto
C sob condies aerbicas. de sdio a 0,9% (p/v) ou gua peptonada 0,1% (p/v)
estril - (suspenso estoque). Homogeneizar a suspenso
manualmente ou em agitador de tubos do tipo vrtex.
Meios para penicilinas e cefalosporinas
Preparar diluies em srie (1:100, 1:10000 e 1:1000000)
Nos casos em que os meios de cultura so utilizados para a partir da suspenso estoque utilizando soluo estril de
o teste de esterilidade de penicilinas e cefalosporinas pelo cloreto de sdio a 0,9% (p/v) ou gua peptonada 0,1% (p/v)
mtodo de Inoculao direta, a preparao do Meio fluido de estril como diluente. Incorporar 1 mL de cada diluio
tioglicolato e do Caldo de casena soja deve ser modificada em meio slido adequado para o micro-organismo,
conforme descrito a seguir. Transferir, assepticamente, para previamente fundido e resfriado a aproximadamente 45 C.
os frascos esterilizados contendo cada meio, quantidade de Homogeneizar e incubar.
-lactamase suficiente para inativar o antibitico presente
na amostra. Nmero representativo de frascos contendo Proceder contagem do nmero de colnias que se
meio com -lactamase sem amostra devem ser incubados desenvolveram no meio slido e escolher, a partir dos
durante o perodo do teste (controle negativo). Controles resultados, a diluio a ser utilizada para obter-se, no
positivos, tambm,devem ser includos para verificar se mximo, 100 UFC por frasco de meio de cultura.
toda penicilina ou cefalosporina foi inativada. Proceder
ao teste de validao para bacteriostase e fungistase, Repetir o procedimento para cada micro-organismo
utilizando Staphylococcus aureus (ATCC 6538 / INCQS utilizado.
00039) como micro-organismo teste. A observao de Para o preparo de suspenso fngica, a soluo de cloreto
crescimento microbiano tpico constitui confirmao de de sdio a 0,9% (p/v) estril pode ser substituida por gua
que a concentrao de -lactamase utilizada apropriada. purificada estril.
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, NCIMB 8626, CIP 82.118, NBRC 13275,
INCQS 00230
Clostridium sporogenes* ATCC 19404, NCTC 532, CIP 79.3, INCQS 00352
ou ATCC 11437, NCIMB 14239, CIP 100651, NBRC
5
14293
Alternativo do Clostridium sporogenes ATCC 19404 ,NCTC 532, CIP 79.3, INCQS 00352
tioglicolato ou ATCC 11437, NCIMB 14239, CIP 100651, NBRC
14293
Caldo de casena-soja Bacillus subtilis ATCC 6633, NCIMB 8054, CIP 52.62, NBRC 3134,
INCQS 00001
Bacterides vulgatus (ATCC 8482, NCTC 11154, INCQS Se os meios forem estocados em frascos hermeticamente
00059) pode ser utilizado alternativamente a Clostridium fechados, podero ser usados por 1 ano, desde que sejam
sporogenes, quando no for necessrio o uso de um micro- testados para promoo de crescimento dentro de 3 meses
organismo esporulado. a partir do tempo de uso e que cumpram o requisito para o
indicador de cor.
Uma alternativa a Staphylococcus aureus o Bacillus
subtilis (INCQS 00001, ATCC 6633, CIP 52.62,NBRC
FLUIDOS DE DILUIO E LAVAGEM
3134, NCIMB 8054, NCTC 10400).
Se os meios preparados forem estocados em frascos no Dissolver a peptona de carne em gua purificada, filtrar
hermeticamente fechados, podero ser utilizados por 1 ms, ou centrifugar para clarificao do meio, se necessrio e
desde que sejam testados para promoo de crescimento ajustar o pH em 7,1 0,2. Distribuir em frascos adequados
dentro de 15 dias a partir do tempo de uso e que cumpram e esterilizar utilizando processo validado.
o requisito para o indicador de cor.
256 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Preparao para penicilinas ou cefalosporinas. Para a positivo. Incubar todos os frascos contendo os meios por
realizao do ensaio de esterilidade de penicilinas ou no mais que 5 dias.
cefalosporinas pelo mtodo de filtrao em membrana,
adicionar, assepticamente, ao Fluido I esterilizado, Mtodo de filtrao em membrana. Aps transferncia do
quantidade de -lactamase suficiente para inativar qualquer contedo do(s) frasco (s) a ser(em) testado(s) (conforme
atividade antibitica residual na membrana aps a filtrao especificado na Tabela 3) para o dispositivo de filtrao,
da amostra. adicionar no mais que 100 UFC do micro-organismo teste
ltima alquota do fluido estril utilizado para lavagem
da membrana.
Fluido II
Mtodo de inoculao direta. Aps transferncia do
Para cada litro de Fluido I, adicionar 1 mL de polissorbato contedo do(s) frasco(s) a ser(em) testado(s) (conforme
80 antes da esterilizao. Ajustar o pH em 7,1 0,2. especificado na Tabela 3) para frascos contendo os meios
Distribuir em frascos adequados e esterilizar utilizando de cultura, adicionar no mais que 100 UFC dos micro-
processo validado. organismos testes aos meios.
Usar esse fluido para produtos que contm lecitina ou leo
e para produtos para sade. Interpretao
5
O teste de esterilidade pode, ento, ser conduzido sem
gua purificada q.s.p. 1000 mL necessidade de modificaes.
pH aps esterilizao 6,9 0,2 Se o crescimento de micro-organismos no obtido
Misturar todos os componentes e aquecer, brandamente, na presena da amostra, ou se ele no visivelmente
at dissoluo. Filtrar, se necessrio, e ajustar o pH para comparvel quele obtido nos controles positivos, a
obter, aps a esterilizao, o valor de 6,9 0,2. Distribuir amostra apresenta atividade antimicrobiana que no foi
em frascos adequados e esterilizar utilizando processo satisfatoriamente eliminada, sob as condies do teste.
validado. Nesse caso, devem ser feitas modificaes nas condies
do teste para eliminar a atividade antimicrobiana, tais como
diluio, uso de substncias neutralizantes, aumento do
TESTE DE VALIDAO PARA BACTERIOSTASE E nmero de lavagens no mtodo de filtrao em membrana
FUNGISTASE ou uma combinao delas. O teste de validao deve ser
repetido para verificar se a atividade antimicrobiana foi
Antes de se estabelecer um procedimento para o teste de
eliminada pela modificao proposta.
esterilidade de insumos farmacuticos, medicamentos
ou produtos para sade, deve-se garantir que qualquer
atividade bacteriosttica ou fungisttica inerente ao PROCEDIMENTOS PARA O TESTE
produto no tem influncia adversa sobre a confiabilidade DE ESTERILIDADE
do teste, demonstrando-se que o procedimento utilizado
adequado para o produto sob exame. O teste de esterilidade pode ser realizado utilizando os
mtodos de filtrao em membrana ou de inoculao direta
O teste de validao para bacteriostase e fungistase deve conforme a natureza do produto, exceto quando um dos
ser realizado quando o teste de esterilidade for realizado mtodos for especificado na monografia individual. Em
pela primeira vez para um produto e sempre que houver ambos casos, controles negativos apropriados devem ser
modificaes na formulao do produto e/ou nas condies includos.
experimentais do teste. A validao deve ser feita
previamente ao teste de esterilidade do produto sob exame. Antes de proceder ao teste, efetuar assepsia das superfcies
externas dos frascos e ampolas,
5
Produtos para sade
At 100 10% ou 4 unidades (o que for maior)
Acima de 100 at 500 10 unidades
Acima de 500 2% ou 20 unidades (o que for menor)
Quantidade por recipiente Volume mnimo a ser inoculado em cada meio (mL)
Lquidos (no antibiticos)
menos de 1 mL todo o contedo
de 1 a 40 mL metade do contedo, mas no menos que 1 mL
acima de 40 mL at 100 mL 20mL
acima de 100 mL 10% do contedo do produto, mas no menos que 20 mL
Antibiticos (lquidos) 1 mL
Outras preparaes solveis em gua ou em solvente do contedo total, mas no menos que 0,2 g
tipo miristato de isopropila
Cremes e pomadas insolveis a serem suspensos ou contedo total, mas no menos que 0,2 g
emulsificados
Slidos
menos de 0,05 g todo o contedo
acima de 0,05g at 0,3 g metade do contedo mas no menos que 0,05g
acima de 0,3 g at 5 g 0,15 g
acima de 5 g 0,5 g
Produtos para sade
suturas cirrgicas 3 partes do fio (30 cm de comprimento cada)
esparadrapo cirrgico / gaze / algodo em embalagem 0,1 g por embalagem
mltipla
5
suturas e outros materiais em embalagens individuais todo o material
outros correlatos mdicos todo o material cortado em pedaos, ou desmontado
Utilizar membranas filtrantes com porosidade nominal Transferir pequena quantidade de diluente estril, como
no superior a 0,45 m cuja eficincia em reter micro- o Fluido I, para a membrana e filtrar. O diluente pode
organismos tenha sido estabelecida. Filtros de nitrato conter substncias neutralizantes e ou inativantes, como
de celulose, por exemplo, so utilizados para solues no caso de ntibiticos. Transferir
aquosas, oleosas e fracamente alcolicas e filtros de para a membrana os contedos dos recipientes a serem
acetato de celulose, por exemplo, para solues fortemente testados ou a diluio apropriada (previamente definida
alcolicas. Filtros especialmente adaptados podem ser no Teste de validao para bacteriostase e fungistase) em
requeridos para determinados produtos, como antibiticos. quantidades no inferiores s recomendadas nas Tabelas
2 e 3 e filtrar imediatamente. Se o produto apresentar
Para produtos oncolgicos extremamente agressivos atividade antimicrobiana, lavar a membrana, no mnimo,
substituir a membrana de ster de celulose por difluoreto de trs vezes filtrando, a cada vez, o volume do diluente estril
polivinilideno (PVDF) ou politetrafluoroetileno (PTFE). estabelecido no Teste de validao para bacteriostase e
fungistase. A quantidade de fluido de lavagem utilizada
Os procedimentos descritos a seguir aplicam-se a
no deve ser superior a cinco pores de 200 mL, mesmo
membranas com dimetro de aproximadamente 50 mm. Se
se durante o teste de validao tenha sido demonstrado
filtros com dimetros diferentes so utilizados, os volumes
que tal ciclo de lavagens no elimina completamente a
das diluies e lavagens devem ser ajustados conforme
atividade antimicrobiana. Transferir a membrana inteira
o dimetro da membrana empregada. O dispositivo de
para meios selecionados. Utilizar os mesmos volumes de
filtrao e a membrana so esterilizados por processo
meio empregados no teste de validao. Incubar os meios
adequado. O dispositivo apresenta configurao tal que
por pelo menos 14 dias.
a soluo a ser examinada pode ser introduzida e filtrada
sob condies asspticas. O dispositivo de filtrao deve
possibilitar, ainda, a remoo assptica da membrana para leos e solues oleosas
sua transferncia ao meio de cultura ou ser adequado para
proceder incubao aps adio do meio de cultura ao Utilizar, para cada meio de cultura a quantidade de amostra
prprio dispositivo. O tipo de fluido utilizado na lavagem especificada nas Tabelas 2 e 3. leos e solues oleosas de
da membrana depende da natureza do produto, sendo baixa viscosidade podem ser filtradas sem diluio atravs
especificado na monografia individual, quando for o caso. da membrana seca. leos viscosos devem ser diludos em
solvente estril adequado como, por exemplo, miristato
Controles negativos, ou brancos devem ser includos para de isoproprila, desde que demonstrado no possuir
os fluidos e solventes utilizados, para os quais no se atividade antimicrobiana nas condies do teste. Deixar
deve observar crescimento microbiano. Deve-se verificar, o leo penetrar na membrana, filtrar utilizando vcuo
ainda, se os fluidos utilizados no apresentam atividade gradualmente. Lavar a membrana com, no mnimo, trs
antimicrobiana nas condies do teste. pores do Fluido III. Prosseguir conforme descrito para
Lquidos miscveis em veculos aquosos.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 259
Utilizar, para cada meio de cultura, quantidade de amostra Expelir o contedo de cada seringa diretamente sobre a(s)
especificada nas Tabelas 2 e 3. Pomadas de base oleosa e membrana(s) ou em frascos separados e depois filtrar.
emulses do tipo gua em leo podem ser diludas para 1% Prosseguir conforme descrito para Lquidos miscveis em
em solvente adequado (miristato de isopropila, ou outro) veculos aquosos.
como descrito no item anterior, aquecendo, se necessrio,
a 40 C (em casos excepcionais, aquecer no mximo at Dispositivos estreis
44 C). Filtrar, o mais rapidamente possvel, e prosseguir
conforme descrito em leos e solues oleosas. No caso de Passar assepticamente um volume de Fluido II no inferior
utilizao do miristato de isopropila como diluente, desde a 10% do volume de cada unidade do total de dispositivos
que demonstrado no possuir atividade antimicrobiana a serem testados conforme estabelecido nas Tabelas 2 e
nas condies do teste, esse deve ser esterilizado antes do 3. Recolher o fluido em um recipiente adequado estril e
uso, por filtrao em membrana, e seu extrato aquoso deve proceder conforme indicado para lquidos miscveis em
apresentar pH no inferior a 6,5. veculos aquosos ou solues aquosas de leos e solues
oleosas, conforme o caso. No caso das seringas vazias,
Slidos solveis (no antibiticos) estreis, extrair o diluente estril do recipiente atravs
da agulha estril, se estiver acoplada, ou atravs de uma
Utilizar, para cada meio de cultura, quantidade de amostra agulha estril acoplada para proceder ao ensaio, e expulsar
especificada nas Tabelas 2 e 3. Dissolver o produto em o contedo em um recipiente estril. Proceder como
fluido adequado, como o Fluido I, e prosseguir conforme indicado anteriormente.
descrito para Lquidos miscveis em veculos aquosos.
MTODO DE INOCULAO DIRETA
Slidos para preparaes injetveis (no antibiticos)
Lquidos oleosos
Aerossis estreis
Utilizar meio de cultura contendo agente emulsificante
Para produtos lquidos pressurizados, congelar o contedo apropriado em concentrao que tenha se mostrado adequada
em mistura de etanol e gelo seco a pelo menos -20 C, por na validao, por exemplo, polissorbato 80 a 1% (p/v).
aproximadamente 1 hora. Se possvel, antes da abertura
da embalagem, deixar o propelente escapar e transferir
assepticamente o contedo para frasco adequado estril. Pomadas e cremes
Adicionar 100 mL de Fluido II e homogeneizar suavemente. Preparar diluio da amostra a 10% utilizando um agente
Prosseguir conforme descrito para Lquidos miscveis em emulsificante adequado adicionado a um diluente estril
veculos aquosos ou leos e solues oleosas, conforme como o Fluido I. Transferir a amostra diluda para meios
o caso. de cultura sem emulsificante. Incubar os meios inoculados
260 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
por, no mnimo, 14 dias. Observar os meios durante todo frascos novos dos mesmos meios 14 dias aps o incio da
o perodo de incubao. Agitar, suavemente, os frascos de incubao. Incubar os frascos originais e os frascos novos
meio de cultura contendo leo, diariamente, durante todo por um perodo adicional de no menos que 4 dias. Se, ao
o perodo de incubao. Os frascos contendo Meio lquido final do perodo de incubao, no houver evidncias de
de tioglicolato ou outro meio similar devem ser agitados de crescimento microbiano, a amostra sob exame cumpre com
forma a no prejudicar as condies de anaerobiose. o requisito de esterilidade. Se for evidenciado crescimento
de micro-organismos, a amostra no cumpre com o requisito
de esterilidade, a no ser que se evidencie falha durante a
Slidos
execuo do teste como, por exemplo, contaminao no
Transferir a quantidade de amostra especificada nas Tabelas relacionada com o produto em anlise.
2 e 3 ou preparar uma soluo ou suspenso do produto
O teste de esterilidade pode ser considerado invlido se
adicionando volume no superior a 20 mL de diluente
uma ou mais das seguintes condies forem observadas.
estril ao recipiente. Transferir o material assim obtido
para 200 mL de Meio fluido de tioglicolato. Do mesmo a) os dados de monitoramento microbiolgico da rea de
modo, transferir a mesma quantidade do material para realizao do teste demonstram falha;
200 mL de Caldo de casena-soja e misturar. Prosseguir
conforme descrito para Lquidos. b) uma reviso dos procedimentos analticos utilizados
durante o teste revela falha;
Categute e outras suturas cirrgicas c) crescimento microbiano observado nos controles
negativos;
Para cada meio, utilizar a quantidade de amostra especificada
nas Tabelas 2 e 3. Abrir a embalagem assepticamente e d) aps a identificao do micro-organismo(s) isolado(s)
remover trs pores do fio para cada meio de cultura.
5
a partir do teste, o crescimento dessa espcie(s) pode ser
Essas pores devem ser retiradas no incio, no meio e no atribudo, inequivocadamente, a falhas relacionadas ao
final e terem 30 cm de comprimento. Cobrir cada parte do material utilizado e/ou a tcnicas utilizadas na execuo do
fio com volume suficiente dos meios (20 mL a 150 mL). teste de esterilidade.
no menos que a quantidade indicada nas Tabelas 2 e 3, Referncia brasileiros. Outras preparaes adequadas,
diluindo, quando necessrio, para aproximadamente 100 de uso internacional corrente, nas quais a potncia tenha
mL com uma soluo estril adequada, como o Fluido I. sido determinada em relao s preparaes padro da
Organizao Mundial da Sade, possuem valor legal
Ao empregar a tcnica de inoculao direta, utilizar as idntico.
quantidades indicadas nas Tabelas 2 e 3, a menos que
de outra forma autorizada e justificada. Os testes para Recomenda-se que sejam preparados e empregados padres
bactrias e fungos so realizados com uma mesma unidade de trabalho (secundrios); todavia, imprescindvel que a
da amostra sob exame. Quando o volume ou a quantidade potncia tenha sido determinada por nmero adequado de
em um nico recipiente insuficiente para a realizao ensaios comparativos em relao a um padro primrio ou
do teste, os contedos de dois ou mais recipientes so farmacopeico, validados por anlise estatstica apropriada e
utilizados para inocular os diferentes meios. que os dados e resultados sejam arquivados disposio da
fiscalizao competente por prazo idntico ao da validade
dos produtos ensaiados.
APLICAO DO TESTE DE ESTERILIDADE A
PRODUTOS FARMACUTICOS RADIOATIVOS Para o ensaio de lotes de substncias antibiticas para as
quais existam Preparaes Padro nacionais, referendadas
Devido ao rpido decaimento radioativo, no praticvel
por organizaes internacionais, obrigatrio o uso dessas
atrasar a liberao de alguns produtos farmacuticos
preparaes.
radioativos por conta do teste de esterilidade.
5
dos mtodos iniciais estabelecidos na fabricao e nos 6,0) - Dissolver 2,0 g de fosfato de potssio dibsico e 8
procedimentos de validao / certificao. g de fosfato de potssio monobsico em gua purificada
suficiente para perfazer 1000 mL. Esterilizar a soluo por
20 minutos em autoclave a 121 C e, se necessrio, ajustar
5.5.3.3 ENSAIO MICROBIOLGICO DE o pH para 5,9 - 6,1 com cido fosfrico 6 M ou hidrxido
ANTIBITICOS de potssio 10 M.
Soluo 7 (soluo de lcool isoproplico a 80%) - Diluir 5,0 g de cloreto de sdio, 2,5 g de fosfato de potssio
800 mL de lcool isoproplico em gua purificada suficiente dibsico, 2,5 g de dextrose e 20,0 g de gar em gua
para perfazer 1000 mL. purificada suficiente para perfazer 1000 mL. O pH, aps
esterilizao, dever ser 7,3.
Soluo 8 (tampo fosfato de potssio 0,1 M, estril, pH
7,0) - Dissolver 13,6 g de fosfato de potssio dibsico e 4,0 Meio de cultura n 10 - Usar o meio de cultura n 9,
g de fosfato de potssio monobsico em gua purificada adicionando, porm, ao invs de 20,0 g, 12,0 g de gar
suficiente para perfazer 1000 mL. Esterilizar a soluo por e 10,0 mL de polissorbato 80 (esse ltimo adicionado
20 minutos em autoclave a 121 C e, se necessrio, ajustar aps aquecer o meio para dissolver o gar, diluindo
o pH para 6,8 - 7,2 com cido fosfrico 6 M ou hidrxido imediatamente, com gua para perfazer 1000 mL). O pH,
de potssio 10 M. aps esterilizao, dever ser 7,3.
5
de levedura, 1,0 g de dextrose e 15,0 g de gar em gua g de peptona seca, 10,6 g de extrato de carne e 3,0 g de
purificada suficiente para perfazer 1000 mL. O pH, aps cloreto de sdio em gua purificada suficiente para perfazer
esterilizao, dever ser 6,6. 1000 mL. O pH, aps esterilizao, dever ser 7,0.
Meio de cultura n 2 - Dissolver 6,0 g de peptona seca, 3,0 Meio de cultura n 15 - Preparar como o meio de cultura
g de extrato de levedura, 1,5 g de extrato de carne e 15,0 n 14, adicionando, porm, 17,0 g de gar para cada 1000
g de gar em gua purificada suficiente para perfazer 1000 mL de meio.
mL. O pH, aps esterilizao, dever ser 6,6.
Meio de cultura n 16 - Dissolver 15,0 g de casena de
Meio de cultura n 3 - Dissolver 5,0 g de peptona seca, digesto pancretica, 5,0 g de soja de digesto papanica, 5
1,5 g de extrato de levedura, 1,5 g de extrato de carne, g de cloreto de sdio e 15,0 g de gar em gua purificada
2,5 g de cloreto de sdio, 1,0 g de dextrose, 3,68 g de suficiente para perfazer 1000 mL. O pH, aps esterilizao,
fosfato de potssio dibsico e 1,32 g de fosfato de potssio dever ser 7,3.
monobsico, em gua purificada suficiente para perfazer
1000 mL. O pH, aps esterilizao, dever ser 7,0. Meio de cultura n 17 - Dissolver 17,0 g de casena de
digesto pancretica, 3,0 g de peptona de soja, 2,5 g de
Meio de cultura n 4 - Dissolver 6,0 g de peptona seca, 3,0 dextrose. 5,0 g de cloreto de sdio e 2,5 g de fosfato de
g de extrato de levedura, 1,5 g de extrato de carne, 1,0 g potssio dibsico em gua purificada suficiente para
de D-glicose e 15,0 g de gar em gua purificada suficiente perfazer 1000 mL. O pH, aps esterilizao, dever ser 7,3.
para perfazer 1000 mL. O pH, aps esterilizao, dever
ser 6,6. Meio de cultura n 18 - Usar o meio de cultura n 11,
mas, aps aquecer a soluo para dissolver os ingredientes,
Meio de cultura n 5 - Usar o meio de cultura n 2, porm, adicionar 20,0 mL de polissorbato 80. O pH, aps
o pH, aps esterilizao, dever ser 7,8. esterilizao dever ser 8,0.
Meio de cultura n 6 - Dissolver 40,0 g de dextrose e Meio de cultura n 19 - Dissolver 9,4 g de peptona seca,
10,0 g de peptona seca em gua purificada suficiente para 4,7 g de extrato de levedura, 2,4 g de extrato de carne, 15,0
perfazer 1000 mL. O pH, aps esterilizao, dever ser 5,6. g de cloreto de sdio, 10,0 g de dextrose e 23,5 g gar em
gua purificada suficiente para perfazer 1000 mL. O pH,
Meio de cultura n 7 - Usar o meio de cultura n 1, aps esterilizao, dever ser 6,1.
esterilizado e resfriado a 50 C. Preparar soluo aquosa
contendo 10 mg de neomicina por mL e esterilizar por Meio de cultura n 20 - Dissolver 40,0 g de dextrose, 10,0
filtrao em membrana com porosidade de 0,22 m. g de peptona seca, 15,0 g de gar e 0,05 g de clorafenicol
Adicionar, assepticamente, soluo estril de sulfato de (em potncia) em gua purificada suficiente para perfazer
neomicina, para obter concentrao final com potncia de 1000 mL. O pH, aps esterilizao, dever ser 5,6.
100 g de neomicina por mL de meio.
Meio de cultura n 21 - Usar o meio de cultura n 20,
Meio de cultura n 8 - Usar o meio de cultura n 2, porm, esterilizado e resfriado a 50 C. Adicionar, assepticamente,
o pH, aps esterilizao, dever ser ajustado para 5,8 - 6,0. 2,0 mL de soluo estril de cicloeximida para cada 100
mL de gar fundido. Preparar soluo contendo 10,0 mg de
Meio de cultura n 9 - Dissolver 17,0 g de casena de cicloeximida por mL, em gua purificada, e esterilizar, por
digesto pancretica, 3,0 g de soja de digesto papanica, filtrao em membrana com porosidade de 0,22 m.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 263
Meio de cultura n 22 - Dissolver 15,0 g de peptona seca, ser estocadas temperatura de 4 C, respectivamente,
5,0 g de farinha de soja de digesto papanica, 4,0 g de pelos seguintes perodos: 1 semana, 2 semanas, 2 semanas,
cloreto de sdio, 0,2 g de sulfito de sdio, 0,7 g de L-cistina, 2 semanas, 2 semanas, 6 meses, 1 semana, 2 semanas e 2
5,5 g de dextrose e 15,0 g de gar, em gua purificada sufi semanas.
ciente para perfazer 1000 mL. O pH, aps esterilizao,
dever ser 7,0. Micrococcus luteus ATCC 14452. Efetuar como indicado
no Procedimento 1. Empregar, entretanto, no tubo com
meio inclinado e no frasco de Roux, meio de cultura n 7,
PREPARAO DO INCULO incubando o frasco por perodo de 48 horas. A suspenso
pode ser estocada por duas semanas, temperatura no
Micro-organismos recomendados superior a 4 C.
5
Escherichia coli (ATCC 10536) que dever ser adicionada a cada 100 mL de meio, para
Enterococcus hirae (ATCC 10541) obter zonas de inibio adequadas. A suspenso pode ser
Micrococcus luteus (ATCC 10240) estocada, por 6 meses, em temperatura no superior a 4 C.
Microsporum gypseum (ATCC 14683)
Saccharomyces cerevisiae (ATCC 2601) Procedimento 3 - Bacillus cereus.
Micrococcus luteus (ATCC 14452) Efetuar como indicado no Procedimento 1. Entretanto,
Pseudomonas aeruginosa (ATCC 25619) incubar o tubo com o micro-organismo por uma semana.
Mycobacterium smegmatis (ATCC 607) Na padronizao da suspenso, proceder a choque trmico
e padronizar a suspenso como segue: aquecer a suspenso
Com a finalidade de indicao, foram listados os micro- por 30 minutos, a 80 C. Lavar trs vezes a suspenso de
organismos disponveis na ATCC. Os mesmos micro- esporos com 20 a 25 mL de gua estril. Ressuspender
organismos podem, tambm, ser obtidos de outras fontes: os micro-organismos em 50 a 70 mL de gua estril e
INCQS, CIP, NBRC, NCIMB, NCPF, NCTC, NCYC, IMI promover novo choque trmico por 30 minutos a 70 C.
e IP. A correspondncia entre os micro-organismos e os Executar testes em placas para se assegurar da viabilidade
endereos das entidades que os fornecem encontram-se dos esporos e determinar a quantidade dos que devero ser
indicadas em Micro-organismos empregados em testes e adicionados a cada 100 mL de gar, para obter zonas de
ensaios (5.5.3.5). inibio adequadas. A suspenso pode ser estocada, por 6
meses, temperatura no superior a 4 C.
Procedimento 1 - Staphylococcus aureus, Micrococcus
luteus, Kocuria rhizophila, Staphylococcus epidermidis,
Bordetella bronchiseptica, Bacillus subtilis, Klebsiella Procedimento 4 - Microsporum gypseum.
pneumoniae, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa. Incubar o micro-organismo, por 6 a 8 semanas a 25 C, em
Preparao da suspenso - Transferir o micro-organismo frascos de Erlenmeyer de 3 litros, contendo 200 mL de meio
de uma cultura estoque para tubos contendo 10 mL de meio de cultura n 6. Verificar o crescimento por esporulao.
de cultura n 1 inclinado. Incubar o tubo a 32 - 35 C, por Quando a esporulao for 80% ou mais, recolher os condios
24 horas. Aps incubao, lavar o crescimento do micro- da camada micelial com esptula estril ou outro instrumento
organismo com 50 mL de soluo fisiolgica estril. adequado. Os condios estaro na parte superior da camada
flutuante. Manter os condios em 50 mL de soluo
Padronizao da suspenso - Diluir a suspenso preparada, fisiolgica. Determinar, experimentalmente, a quantidade de
com soluo fisiolgica estril, de modo a obter a condios para o ensaio. A suspenso pode ser estocada, por
transmitncia de 25% no comprimento de onda de 580 dois meses, temperatura no superior a 4 C.
nm, empregando espectrofotmetro adequado e tubos de
ensaio com 13 mm de dimetro como cuba de absoro. Procedimento 5 - Enterococcus hirae.
Determinar a quantidade de suspenso a ser adicionada a
cada 100 mL de gar ou caldo nutriente para produzir zonas Transferir o micro-organismo de uma cultura estoque para
de inibio claras e definidas ou relao satisfatria dose- meio n 33 e incubar, por 16 a 18 horas, a 37 C. Determinar,
resposta no mtodo turbidimtrico. As suspenses dos experimentalmente, a quantidade de micro-organismos
micro-organismos submetidos ao procedimento 1 podem
264 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Mtodo 4
Procedimento 7 - Saccharomyces cerevisiae. (ATCC 9763
e ATCC 2601). Proceder conforme o Mtodo 1. Dessecar, porm a amostra a
40 C, sob presso de 0,67 kPa ou menos, durante duas horas.
Seguir o indicado no Procedimento 1. Incubar, porm,
o tubo inclinado com o meio de cultura n 19, a 30 C,
o ltimo por perodo de 48 horas. A suspenso pode ser Mtodo 5
estocada, por 4 semanas, temperatura no superior a 4 C.
Proceder conforme o Mtodo 1. Dessecar, porm a amostra
a 100 C, sob presso de 0,67 kPa ou menos, durante
Procedimento 8 - Mycobacterium smegmatis. quatro horas.
DESSECAO DE SUBSTNCIAS ANTIBITICAS Todo material deve ser adequado para o uso pretendido
e deve ser minuciosamente limpo, aps cada utilizao,
Utilizar para dessecao dos padres, os procedimentos para remover qualquer vestgio de antibitico. O material
indicados a seguir, e recomendados de acordo com as deve permanecer coberto quando no estiver em uso. Toda
informaes descritas nas Tabelas 2 em 5.5.3.3.1 e vidraria utilizada em contato com o micro-organismo deve
5.5.3.3.2. ser esterilizada em estufa, em temperatura entre 200 oC e
220 oC por 2 horas. Na diluio da soluo padro e amostra
Mtodo 1 empregar bales volumtricos, pipetas ou equipamentos
cuidadosamente calibrados.
Transferir quantidade suficiente de padro para pesa-filtro
tarado provido de tampa esmerilhada. Pesar o frasco e
coloc-lo em estufa sob presso reduzida, inclinando a 5.5.3.3.1 Ensaio microbiolgico por difuso em gar
tampa sobre a boca do frasco para assegurar que permanea
aberto durante a dessecao. Dessecar a 60 C, sob presso
de 0,67 kPa ou menos, durante trs horas. Concludo o PROCEDIMENTO
processo, introduzir ar seco na estufa, submetendo-o a
Para cada antibitico relacionado na Tabela 1, verificar
agente dessecante como cido sulfrico ou silica-gel.
o meio de cultura (conforme a relao dos meios de
Repor a tampa e colocar o pesa-filtro em dessecador
cultura), a quantidade de meio a ser usada na camada base
contendo agente dessecante como pentxido de fsforo ou
e na camada inoculada e o micro-organismo de ensaio.
slica-gel. Deixar esfriar temperatura ambiente e pesar,
O volume de inculo a ser adicionado a cada 100 mL de
calculando a perda porcentual de massa do padro.
meio de cultura deve ser determinado experimentalmente.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 265
Entretanto, como referncia inicial, sugere-se quantidade d) concentrao da soluo de trabalho, expressa em peso,
de inculo a ser adicionada por 100 mL de meio. ou Unidades Internacionais por mL de soluo;
Preparar a camada base por meio da adio de quantidade e) prazo de validade da soluo padro de trabalho sob
apropriada de gar fundido nas placas de Petri as quais refrigerao;
devem ser, especialmente selecionadas, ter fundo plano,
possuir dimenses de 20 x 100 mm e tampa de material f) soluo empregada para diluio da soluo de
apropriado. Distribuir o gar uniformemente nas placas, trabalho, por ocasio da preparao da curva padro,
que devem ser colocadas em superfcie nivelada para que conforme Solues;
a camada de meio tenha profundidade uniforme. Colocar a g) faixas de concentrao sugeridas, em peso ou Unidades
tampa de cada placa ao lado dessa; se for utilizada tampa Internacionais por mL, dentro das quais podem ser
no porosa, deix-la levemente entreaberta para evitar o encontradas as concentraes adequadas para a curva
acmulo de umidade condensada a partir da camada de gar padro.
quente. Aps o endurecimento do gar, tampar as placas.
Para preparar a camada inoculada - superfcie, adicionar
o volume de inculo determinado para a quantidade Procedimento para delineamento retas paralelas (3 x 3 ou
apropriada de meio de cultura que tenha sido fundido e 2 x 2)
resfriado entre 46 oC e 48 oC. Agitar o frasco, por rotao,
Empregar, no ensaio, pelo menos seis placas de Petri.
para obter suspenso homognea e adicionar a quantidade
Dispor as solues do padro e amostra, em cada placa,
indicada do meio inoculado em cada placa de Petri, contendo
com 3 concentraes para ensaio 3 x 3 (baixa, mdia
a camada base no inoculada. Espalhar uniformemente a
e alta) ou 2 concentraes para ensaio 2 x 2 (baixa e
camada, tampar as placas e permitir o seu endurecimento
alta). As solues devem ser distribudas de tal forma
sobre superfcie plana. Aps o endurecimento do meio,
que as solues da preparao padro e amostra estejam
5
colocar seis cilindros de ao inoxidvel, com dimetro
alternadas na camada inoculada (concentrao alta e baixa)
externo de 8 mm 0,1 mm, dimetro interno de 6 mm 0,1
para evitar a sobreposio dos halos de inibio.
mm e comprimento de 10 mm 0,1 mm, sobre a superfcie
do gar inoculado, de maneira que formem entre si ngulo
de 60 e com raio de 2,8 cm. Tambm, podem ser utilizados Procedimento para delineamento 5 x 1
cilindros confeccionados em vidro, porcelana ou alumnio
e esterilizados nas condies j descritas. Em lugar dos Para a curva padro, utilizar um total de 12 placas, 3 para
cilindros, podem ser perfurados, no meio, com furador cada uma das solues do padro (P1, P2, P4, P5), exceto para
estril, poos de 5 a 8 mm de dimetro. Podem, ainda, a concentrao mdia da curva (P3) que includa em todas
ser usados discos de papel, confeccionados com papel de as placas. Em cada conjunto de 3 placas, utilizar 3 cilindros
qualidade apropriada ou moldes de ao inoxidvel. Quando para a concentrao mdia (P3) e alternar 3 cilindros para
so usados discos de papel, estes devem ser estreis. a concentrao baixa (P1) e assim sucessivamente com as
demais solues do padro. Dessa maneira, obtm-se 36 halos
de inibio para a concentrao (P3) e 9 halos de inibio para
Preparao da soluo padro de trabalho, da amostra e cada uma das outras quatro concentraes da curva.
da curva padro
Para cada amostra, empregar 3 placas, onde sero
A preparao das amostras dos antibiticos est indicada colocados 3 cilindros para a concentrao mdia do padro
na respectiva monografia. (P3) e 3 com a soluo da amostra preparada na mesma
concentrao do padro (A3).
As concentraes do antibitico utilizadas no ensaio
devem estar em progresso geomtrica; por exemplo, pela Aplicar 0,2 mL das solues nos cilindros ou nos moldes
preparao de sries de diluio na razo 2:1 ou outra de ao inoxidvel por meio de pipeta ou outro instrumento
determinada experimentalmente desde que seja comprovada calibrado. Quando for usado o sistema de poos, o volume
a relao linear entre o logaritmo da concentrao do de lquido aplicado deve ser suficiente para ench-los
antibitico e o dimetro do halo de inibio. completamente.
Na Tabela 2 est indicada para cada antibitico, a Aps realizar os procedimentos adequados para o
preparao da soluo padro de trabalho e da curva delineamento escolhido, incubar as placas na temperatura
padro, compreendendo: indicada, cuja variao no dever exceder 0,5 C,
durante um perodo de 16 a 18 horas. Em seguida, medir
a) condies de dessecao, conforme descrito no item
o dimetro dos halos de inibio empregando dispositivo
Dessecao de substncias antibiticas (5.5.3.3);
adequado para medida, como paqumetro, ou projetor
b) solvente inicial para dissoluo do antibitico, caso ptico que tenha preciso de 0,1 mm ou menos.
seja necessrio, e at qual concentrao usado;
Para alguns micro-organismos, o procedimento pode
c) soluo para diluio at a concentrao de trabalho, ser melhorado se as placas preparadas permanecerem
conforme descrito em Solues; temperatura ambiente por perodo de 30 minutos a 2 horas
antes da incubao, perodo em que ocorre a difuso do
antibitico para o meio.
5
Tabela 1 Ensaio microbiolgico por difuso em gar.
266
5
5
Tabela 2 Preparao da soluo padro de trabalho e da curva padro.
268
e. Prazo de f. Soluo
a. Condio d. Concentrao
c. Soluo para validade da para g. Dose mediana
Antibitico de dessecao b. Solvente inicial da soluo de
diluio (5.5.3.3) soluo sob diluio (g ou U.I./mL)
(5.5.3.3) trabalho (/mL)
refrigerao (5.5.3.3)
Amoxicilina 8 - gua estril 1 mg 7 dias 2 0,05 a 0,2 mg7
Ampicilina 8 - gua estril 0,1 mg 7 dias 2 0,05 a 0,2 mg7
Anfomicina8 1 - 2 0,1 mg 14 dias 2 5 a 20 mg
Anfotericina B 1 - Dimetilsulfxido 1 mg1 Usar no mesmo dia 5 0,5 a 2 m7
Bacitracina 1 - HCl 0,01 M 100 U.I. Usar no mesmo dia 1 1 a 4 U.I.
Benzilpenicilina 8 - 1 1 000 U.I. 4 dias 1 0,2 a 2 U.I.
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e. Prazo de f. Soluo
a. Condio d. Concentrao
c. Soluo para validade da para g. Dose mediana
Antibitico de dessecao b. Solvente inicial da soluo de
diluio (5.5.3.3) soluo sob diluio (g ou U.I./mL)
(5.5.3.3) trabalho (/mL)
refrigerao (5.5.3.3)
Gentamicina 3 - 2 1 mg 30 dias 2 0,5 a 2 mg
Grisoefulvina 8 - Dimetilformamida 1 mg4 90 dias 2 2 a 10 mg
Mitomicina 8 - 1 1 mg 14 dias 1 0,5 a 2 mg
Neomicina 1 - 2 1 mg 14 dias 2 5 a 20 mg (S. aureus)
Neomicina 1 - 2 1 mg 14 dias 2 0,5 a 2 mg (S. epidermidis)
Nistatina 4 - Dimetilformamida 1 000 U.I.2 Usar no mesmo dia 4 10 a 40 U.I.7
Novobiocina 5 10 000 mg por mL em lcool etlico 2 1 mg 5 dias 4 0,2 a 1 mg
Oxacilina 8 - 1 1 mg 3 dias 1 2 a 10 mg
Paromomicina 1 - 2 1 mg 21 dias 2 0,5 a 2 mg
Polimixina B 1 gua estril3 4 10 000 U.I. 14 dias 4 200 a 800 U.I.
Rifampicina 8 - lcool metlico 1 mg 1 dia 1 2 a 10 mg
Sisomicina6 8 - 2 1 mg 14 dias 2 0,05 a 0,2 mg
Vancomicina 1 - gua estril 1 mg 7 dias 2 5 a 20 mg
___________________
1 Diluir alquotas da soluo de trabalho com dimetilsulfxido, para obter concentrao entre 10 e 40 mg por mL conforme os pontos da curva padro.
2 Diluir alquotas da soluo de trabalho com dimetilformamida, para obter concentraes entre 10 e 40 unidades por mL conforme os pontos da curva padro.
3 Adicionar 2 mL de gua estril para cada 5 mg de padro.
4 Diluir alquotas da soluo de trabalho com dimetilformamida, para obter concentraes entre 40 e 200 mg por mL conforme os pontos da curva padro.
5 Quando se empregar eritromicina sob a forma de estolato, hidrolisar a soluo de trabalho, em banho-maria, a 60 C, durante 2 horas.
6 Sisomicina higroscpica, tomar precaues durante a pesagem. O padro de trabalho de permanecer a 20 C, em atmosfera de nitrognio.
7 Preparar concomitantemente as solues do padro e amostra. As diluies da amostra devem conter a mesma quantidade de dimetilformamida que as diluies do padro.
8 A soluo padro de trabalho deve permanecer durante uma noite temperatura ambiente para completa dissoluo.
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269
5
270 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5.5.3.3.2 Ensaio microbiolgico por da amostra (A3). A soluo da amostra deve corresponder
turbidimetria mesma diluio do padro que corresponde concentrao
mdia da curva (P3). Empregar, pelo menos trs tubos para
cada concentrao do padro e da amostra. Dessa forma, pelo
menos dezoito tubos so necessrios no ensaio.
PROCEDIMENTO
Aps realizar os procedimentos adequados para o
Preparao da soluo de trabalho, da amostra e da curva padro delineamento escolhido, inocular o meio de cultura
recomendado com quantidade conhecida de suspenso
A preparao das amostras dos antibiticos est indicada do micro-organismo sensvel ao antibitico, de modo
na respectiva monografia. que, aps incubao de aproximadamente quatro horas,
a turbidez bacteriana no meio seja de fcil medida e
Na Tabela 2, apresentada a seguir, h indicao, para cada
mantenha correlao entre a dose e a resposta da substncia
antibitico, da preparao da soluo padro de trabalho e
em anlise.
da curva padro, compreendendo:
Na Tabela 1 esto descritos os antibiticos a serem
a) condies de dessecao, conforme descrito no item
analisados pelo mtodo turbidimtrico com descrio do
Dessecao de substncias antibiticas (5.5.3.3);
micro-organismo, meio de cultura, volume de inculo
b) solvente inicial para dissoluo do antibitico, caso seja padronizado sugerido como referncia inicial e temperatura
necessrio, e at qual concentrao usado; de incubao para cada caso.
c) soluo para diluio do antibitico at a concentrao
de trabalho, conforme Solues; Incubar em banho-maria, por 3 a 4 horas, tomando a
precauo de assegurar temperatura adequada e uniforme
d) concentrao de soluo de trabalho, expressa em peso
para todos os tubos. O tempo adequado deve ser verificado
5
ou Unidades Internacionais por mL de soluo;
pela observao do crescimento no tubo contendo a
e) prazo de validade da soluo padro de trabalho sob concentrao mdia (P3) utilizada no ensaio. Aps o
refrigerao; perodo de incubao, interromper a mu1tiplicao dos
f) soluo empregada para diluio da soluo de trabalho, na micro-organismos pela adio de 0,5 mL de soluo de
ocasio da preparao da curva padro, conforme Solues; formaldedo a 12 por cento, em cada tubo.
g) faixa de concentrao, em peso ou Unidades
Determinar a absorvncia para cada tubo em
Internacionais por mL, dentro da qual as concentraes
espectrofotmetro, no comprimento de onda de 530
adequadas para a curva padro podem ser encontradas.
nm. Padronizar o aparelho em absorvncia por meio do
Empregar para cada antibitico o micro-organismo e o branco contendo a mesma quantidade de caldo nutriente e
caldo nutritivo relacionados na Tabela 1. Determinar formaldedo, a 12%.
experimentalmente o volume de inculo a ser adicionado
Em ensaios de rotina, quando a linearidade do sistema
a 100 mL de caldo a partir da quantidade sugerida como
foi comprovada por nmero adequado de experimentos
referncia inicial. O meio inoculado deve ser preparado e
usando o ensaio de trs pontos (3 x 3), pode ser empregado
utilizado imediatamente.
ensaio de dois pontos (2 x 2). Ser aceito, igualmente,
o delineamento 5 x 1, adotado oficialmente por outras
Procedimento para delineamento retas paralelas (3 x 3 ou 2 x 2) farmacopeias de uso internacional corrente. Todavia, em
caso de controvrsia ou litgio, deve ser aplicado o ensaio
Distribuir, em tubos idnticos, volume igual de cada uma de trs pontos.
das solues do padro e da amostra. Adicionar para
cada tubo volume igual de caldo nutriente inoculado, por
exemplo, 1 mL de soluo com antibitico e 9 mL do Clculo da potncia
meio (0,1 mL de soluo para gramicidina e tirotricina).
A partir dos resultados, calcular a potncia da amostra e seus
Pelo menos dezoito tubos so usados para ensaio por retas
limites de confiana, por meio de mtodo estatstico padro
paralelas 3 x 3 e doze tubos para ensaio por retas paralelas 2
descrito em Procedimentos estatsticos aplicveis aos ensaios
x 2. O nmero de replicas por concentrao em cada ensaio
biolgicos - ensaios indiretos quantitativos (8.5).
deve ser suficiente para assegurar a preciso estatstica
especificada na monografia, porm deve-se realizar, no
mnimo, trs tubos para cada concentrao do padro Intervalo de confiana (IC)
e da amostra. Pode ser necessrio realizar o ensaio com
A preciso de um ensaio verificada pelo intervalo de
nmero maior de doses do padro e da amostra ou repeti-lo
confiana o qual garante que a verdadeira potncia est
e combinar os resultados para obter a preciso requerida.
dentro dos limites especificados.
As doses usadas devem estar em progresso geomtrica.
Na ausncia do IC na monografia do produto,
Procedimento para delineamento curva 5 x 1 recomendvel limites de confiana superior e inferior de
5% ou menos, em relao potncia calculada, sendo
Para o delineamento 5 x 1, prepare diluies que representem aceitos valores limites de at 10%.
5 concentraes do padro (P1, P2, P3, P4 e P5) e 1 concentrao
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 271
Volume do
Caldo Temperatura de
Antibitico Micro-organismo inculo
nutriente incubao (C)
mL/100 mL
Amicacina Staphylococcus aureus (ATCC 6538p) 3 0,1 37
5
Espectinomicina Escherichia coli (ATCC 10536) 3 0,1 37
e. Prazo de
a. Condio d. Concentrao
c. Soluo para validade da f. Soluo para g. Faixa de
Antibitico de dissecao b. Solvente inicial da soluo de
diluio (5.5.3.3) soluo sob diluio (5.5.3.3) concentrao (/mL)
(5.5.3.3) trabalho (/mL)
refrigerao
Amicacina 8 - gua estril 1 mg 14 dias gua estril 6 a 14 mg
Canamicina 8 - gua estril 1 mg 30 dias gua estril 6 a 14 mg
Candimicina1 6 - Dimetilsulfxido 1 mg Usar no mesmo dia gua estril 0,02 a 0,14 mg3
Capreomicina 5 - gua estril 1 mg 7 dias gua estril 60 a 180 mg
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
MICRO-ORGANISMOS UTILIZADOS
OBJETIVO
- Candida albicans ATCC 10231
Assegurar, a eficcia de conservantes antimicrobianos - Aspergillus niger ATCC 16404
adicionados aos produtos farmacuticos.
- Escherichia coli ATCC 8739
Conservantes antimicrobianos so substncias adicionadas - Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
em formas farmacuticas no estreis com a finalidade - Staphylococcus aureus ATCC 6538
de proteg-las de quaisquer crescimentos microbianos.
Para as formas farmacuticas estreis, acondicionadas Os micro-organismos utilizados no teste no devem ter
em embalagens de doses mltiplas, os conservantes mais que 5 passagens contadas a partir da cultura ATCC
antimicrobianos so adicionados para inibir o crescimento original. Uma passagem definida como a transferncia de
de micro-organismos contaminantes durante o uso repetido uma cultura estabelecida para um meio de cultura estril.
das doses individuais.
No caso de culturas mantidas por tcnicas de congelamento,
A quantidade de conservante utilizada em uma formulao cada ciclo de congelamento; descongelamento e reativao
dever ser a mnima necessria para a proteo do produto considerado uma passagem.
sem prejudicar o paciente ou consumidor.
As culturas liofilizadas recebidas do ATCC devem ser
A eficcia antimicrobiana, seja ela inerente ao produto ou reconstitudas conforme as instrues fornecidas com o
devida adio de conservantes , precisa ser demonstrada para material.
5
produtos tpicos mltipla-dose; produtos orais; oftlmicos;
otolgicos; nasais; fluidos de dilise; irrigao, etc. Recuperar o material em meio de cultura lquido ou slido.
As condies para a preparao da cultura esto registradas
na Tabela 1.
Tempo de
Tempo de incubao
Temperatura
Micro-organismo Meio de cultura incubao para a
de incubao
do inculo recuperao
microbiana
Escherichia coli ATCC 8739 Soybean-Casein Digest Broth / 32,5 C 2,5C 18 24 3 5 dias
Soybean-Casein Digest Agar horas
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 Soybean-Casein Digest Broth / 32,5 C 2,5C 18 24 3 5 dias
Soybean-Casein Digest Agar horas
Staphylococcus aureus ATCC 6538 Soybean-Casein Digest Broth / 32,5 C 2,5C 18 24 3 5 dias
Soybean-Casein Digest Agar horas
Candida albicans ATCC 10231 Sabouraud Dextrose Broth / 22,5 C 2,5C 44 52 3 5 dias
Sabouraud Dextrose Agar horas
Aspergillus niger ATCC 16404 Sabouraud Dextrose Broth / 22,5 C 2,5C 6 10 dias 3 7 dias
Sabouraud Dextrose Agar
Se a recuperao do micro-organismo se der em meio de Essa cultura estoque pode ser utilizada para inocular uma
cultura slido, transferir o crescimento da superfcie para srie de cultura de trabalho.
o meio de cultura de manuteno lquido estril, acrescido
de 10% de glicerol estril.
274 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
MEIOS DE CULTURA UTILIZADOS ou mais embalagens originais para um frasco com tampa,
previamente esterilizado e de tamanho adequado para
Todos os meios de cultura utilizados no teste devem ser conter a quantidade necessria de amostra para a realizao
testados quanto capacidade de crescimento de todas as etapas do teste.
5
em meio lquido (Tabela 1), incubadas e posteriormente Amostrar cada embalagem ou frasco com amostra
centrifugadas. Descartar o sobrenadante e suspender o inoculada em intervalos de 7, 14 e 28 dias.
sedimento com quantidade suficiente de soluo salina
estril para obter uma concentrao de 1 x 108 UFC /mL. Determinar pelo mtodo de plaqueamento, o nmero
de Unidades Formadoras de Colnias (UFCs) de cada
Refrigerar as suspenses se no utiliz-las em um perodo amostra, no tempo inicial e em cada intervalo de tempo
de 2 horas. especificado.
Determinar o nmero de UFCs /mL de cada suspenso por Um agente neutralizante especfico para o(s) preservativo(s)
turbidimetria ou contagem em placa, verificando as condies presentes na formulao do produto, determinado no
de tempo e temperatura de incubao e o tempo de incubao estudo de validao, deve(m) ser incorporado(s) nas placas
para a recuperao microbiana descritas na Tabela 1, com de contagem ou na diluio da amostra preparada para o
o objetivo de confirmar a contagem em UFC inicial. Esses plaqueamento.
valores serviro para calibrar o tamanho do inculo a ser
utilizado nas contaminaes do produto em teste. Calcular a concentrao de cada micro-organismo (UFC/
mL) presente na amostra, comparar com a contagem no
A suspenso de bactrias e leveduras dever ser utilizada tempo inicial e expressar a mudana em termos de redues
em 24 horas. A suspenso de bolores pode ser utilizada em logartmicas.
at 7 dias se mantida sob refrigerao.
5
n de UFCs n de UFCs
inicialmente inicialmente
inoculados inoculados
Nota. O no aumento do n de UFCs inoculados definido como no mais que 0,5 log10 de unidades maiores que o
valor previamente obtido.
276 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Micro-organismo ATCC CIP INCQS NBRC NCIMB NCTC NCPF NCYC IMI IP
Bolores e leveduras
Aspergillus brasiliensis 16404 - - 9455 - - 2275 - 149007 1431.83
Candida albicans 10231 - 40006 1594 - - 3179 1363 - 48.72
Microsporrum gypseum 14683 - 40005 - - - - - -
Saccharomyces cerevisiae 2601 - 40001 - - - - - - -
Saccharomyces cerevisiae 9763 1432.83 40002 - - 10716 - 87 - -
Bactrias
Bacillus atrophaens 9372 - - - - - - - - -
Bacillus cereus var. mycoides 11778 64.52 003 - - 10230 - - - -
Bacillus pumilis 27142 77.25 - - 10692 10327 - - - -
Bacillus subtilis 6633 52.62 001 3134 8054 10400 - - - -
Bacteroides vulgatus 8482 103717 059 - - 11154 - - - -
Bordetella bronchiseptica 4617 53.157 023 - - 8347 - - - -
Clostridium sporogenes 19404 79.3 - - 532 532 - - - -
Clostridium sporogenes 11437 - 060 - - - - - - -
Enterococcus hirae 10541 - 019 - - - - - - -
Escherichia coli 8739 53.126 - 3972 8545 12923 - - - -
Escherichia coli 10536 54.127 031 - 8879 10418 - - - -
Geobacillus stearothermophilus 7953 - - - - - - - - -
Klebsiella pneumoniae 10031 53.153 030 - 9111 7427 - - - -
Kocuria rhizophila 9341 53.65 010 - - 8340 - - - -
Micrococcus luteus 7468 - 009 - - - - - - -
Micrococcus luteus 10240 53.160 011 8166 7743 - - - -
Micrococcus luteus resistente a neomicina 14452 - 012 - 10418 - - - - -
Mycobacterium smegmatis 607 - 021 - - - - - - -
Peudomonas aeruginosa 9027 82.118 - 13275 8626 - - - - -
Peudomonas aeruginosa 25619 - 026 - - - - - - -
Salmonella enterica subsp entrica - 80.39 - 100797 - 6017 - - - -
Staphylococcus aureus 6538p 53.156 013 - 8625 7447 - - - -
Staphylococcus aureus 6538 4.83 039 13276 9518 10788 - - - -
Staplylococcus epidermides 12228 68.21 016 - 8853 - - - - -
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
277
5
278 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
o equilbrio entre os reagentes externo e interno, a rea da
devem ser utilizados de acordo com as instrues do zona circular de precipitao, originada a partir do reagente
fabricante, sendo importante assegurar que eles so externo, diretamente proporcional concentrao
adequados anlise da amostra, especialmente, no que do antgeno aplicado e inversamente proporcional
diz respeito seletividade e sensibilidade. Os requisitos concentrao de anticorpos no gel.
relativos aos conjuntos para imunodoseamento so
fornecidos pela Organizao Mundial de Sade (Srie de Mtodos de Difuso Dupla. Os gradientes de concentrao
Reports Techniques 658,1981). so estabelecidos para dois reagentes. Tanto o antgeno
como o anticorpo difunde a partir de locais separados num
MTODOS EM QUE SO UTLIZADOS ANTGENOS, gel inicialmente neutro sob o ponto de vista imunolgico.
OU ANTICORPOS MARCADOS Os mtodos de imunodifuso dupla so utilizados para
comparar, qualitativamente, vrios antgenos em relao
As tcnicas que utilizam substncias marcadas devem a um anticorpo apropriado ou vice-versa. A comparao
empregar marcadores apropriados, tais como enzimas baseada na presena ou ausncia de interao entre os
e radioistopos. Quando o marcador um radioistopo padres de precipitao. possvel distinguir reaes de
chamamos tcnica de ensaio radioimunolgico. Todas identidade, de no identidade, ou de identidade parcial
as tcnicas realizadas com substncias radioativas devem entre antgenos e anticorpos.
ser feitas em conformidade com a legislao nacional e
internacional para proteo contra o risco de radiaes. Mtodos de Imunoeletroforese. A Imunoeletroforese (IE)
uma tcnica qualitativa de dois mtodos associados:
eletroforese em gel, seguida de imunodifuso. A
MTODOS EM QUE SO UTILIZADOS ANTGENOS, Imunoeletroforese cruzada uma modificao da
OU ANTICORPOS NO MARCADOS Imunoeletroforese (IE), adaptada anlise qualitativa
e quantitativa. Num primeiro tempo realizada uma
Mtodos de Imunoprecipitao. Os mtodos de
eletroforese clssica. Uma faixa do gel que contm
imunoprecipitao incluem as reaes de floculao e
as fraes a analisar, separadas pela eletroforese,
de precipitao. Quando uma soluo de um antgeno
posteriormente recortada e transferida outra placa. Essa
misturada aos anticorpos correspondentes, em condies
nova placa ento sujeita a uma segunda eletroforese
adequadas, os reagentes formam agregados floculantes ou
numa direo perpendicular faixa anterior, mediante o
precipitantes. A relao entre as quantidades dos reagentes
uso de um gel que contm um teor relativamente baixo em
correspondentes ao mais curto tempo de floculao, ou
anticorpos correspondentes ao antgeno. Para uma dada
precipitao mais acentuada chama-se relao tima.
concentrao de anticorpos e espessura do gel, a relao
Essa geralmente obtida em presena de quantidades
entre a rea de cada um dos picos de precipitao e a
equivalentes de antgeno e anticorpo. A imunoprecipitao
quantidade do antgeno correspondente linear.
pode ser avaliada, visualmente, ou pela medio da
disperso da luz. Mtodo Eletroimunolgico ou Emunoeletroforese
Fusiforme. O Ensaio Eletroimunolgico muitas vezes
Mtodos Imunoqumicos Turbidimtricos. Pode obter-se
referido como Emunoeletroforese Fusiforme um mtodo
um aumento da sensibilidade do mtodo mediante o uso
rpido para se dosar os antgenos cuja carga difere do
de partculas revestidas de anticorpos, ou de antgenos
anticorpo e vice-versa. A eletroforese do antgeno a
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 279
ser dosado realizada num gel que deve conter uma Mtodos de validao
concentrao. relativamente, inferior a do anticorpo
correspondente. A substncia a ser analisada e as diluies Para que esses critrios sejam verificados, a validao
do antgeno usado para a calibrao devem ser colocadas inclui os seguintes elementos:
nas diferentes cavidades do gel. Durante a eletroforese
a) o ensaio deve ser efetuado pelo menos em triplicata;
formam-se zonas de precipitao fusiformes que migram
a partir das cavidades. Quando o antgeno j no est em b) o ensaio deve incluir pelo menos trs diluies diferentes
excesso, a linha de precipitao torna-se estacionria. do padro e trs diluies diferentes da amostra com
Para uma dada concentrao de anticorpos, a relao suposta atividade semelhante da preparao padro;
entre a distncia percorrida pela linha de precipitao e a c) a distribuio das amostras deve ser feita ao acaso;
quantidade de antgeno aplicada linear. d) se a amostra est presente no soro, ou se est misturada
com outros constituintes, o padro deve ser preparado do
Contra-imunoeletroforese. um mtodo quantitativo rpido
mesmo modo;
que possibilita estabelecer gradientes de concentrao
de antgenos e anticorpos externos, num campo eltrico e) o ensaio deve incluir uma medida de ligao no
dependente das suas diferentes cargas. As diluies do especfica do reagente marcado;
padro e da amostra devem ser organizadas em uma fila de f) para ensaios radioimunolgicos com deslocamento:
cavidades no gel. Uma quantidade conhecida de reagente a1) deve ser determinada a ligao mxima (deslocamento
correspondente colocada numa fila oposta de cavidades. zero);
O ttulo da substncia a ser dosada pode ser considerado
como a maior diluio em que se observa uma linha de b1) as diluies devem cobrir a gama completa de respostas
precipitao. Existem variantes da imunoeletroforese para os valores mais prximos da ligao no especfica
cruzada e do imunoeletrodoseamento. Outras tcnicas ligao mxima, de preferncia tanto para a amostra como
5
associam a separao do antgeno pelo tamanho molecular para o padro.
e propriedades sorolgicas. A visualizao e caracterizao
das linhas de imunoprecipitao podem ser realizadas por CLCULO ESTATSTICO
coloraes seletivas, ou no seletivas, por fluorescncia,
por marcadores enzimticos, marcadores isotpicos, ou Para anlise dos resultados, as curvas de resposta da amostra
por outras tcnicas apropriadas. As coloraes seletivas e do padro podem ser analisadas pelos procedimentos
so, habitualmente, utilizadas para a caracterizao de estatsticos aplicveis aos ensaios biolgicos (8). O no
substncias no proticas nos precipitados. paralelismo significativo indica que antgeno ou anticorpo
distingue a amostra do padro e implica a invalidao do
Nos gis translcidos, tais como gar ou agarose, a linha de resultado. Nos imunodoseamentos com deslocamento,
precipitao torna-se claramente visvel no gel, desde que os valores de ligao no especfica e do deslocamento
a concentrao de cada um dos reagentes seja apropriada. mximo a uma alta concentrao da amostra ou do padro
no devem ser significativamente diferentes. As diferenas
VALIDAO DO MTODO podero refletir efeitos devido matriz, quer seja por
inibio da ligao ou degradao do marcador.
Critrios de validao.
PROCEDIMENTO
5
8 6 - 4550
9 7 - 5650
PROCEDIMENTO a) fixar uma das pontas da sutura atravs de um grampo de
fixao;
O dimetro das suturas cirrgicas de origem natural,
b) na outra ponta livre, colocar um peso com massa de
acondicionadas sem lquido conservante determinado
acordo com a Tabela 1. Obs. deve-se tomar cuidado para
aps sua permanncia durante 4 horas, no mnimo, em
no distorcer a sutura;
atmosfera com a umidade e temperatura anteriormente
especificadas. As suturas acondicionadas com lquido c) posicionar a sutura no relgio comparador de modo
conservante so submetidas ao teste, imediatamente, aps que passe pelo centro da base circular e, com auxlio da
sua remoo do lquido sem secagem prvia. alavanca, descer o p da haste mvel lentamente at que
toda a carga seja aplicada;
d) medir o dimetro da sutura em trs pontos,
Suturas multifilamentares
aproximadamente a 1/4, 1/2 e 3/4 de seu comprimento
Para a determinao do dimetro de suturas cirrgicas total;
multifilamentares, as medidas devem ser feitas mantendo- e) no caso de suturas tranadas de dimetros superiores ao
as tensionadas com auxlio de um sistema de roldana fixa a nmero cirrgico 3-0, efetuar duas medidas perpendiculares
uma mesa, conforme a Figura 1 e procedendo da seguinte entre si em cada ponto.
forma:
Para determinao do dimetro das suturas monofilamen- Utilizar uma mquina universal de trao equipada com
tares, deve-se proceder da seguinte forma: motor eltrico que aplique taxa de carga constante por
unidade de tempo.
a) efetuar a medida em suturas na forma seca ou com
fluido, imediatamente, aps sua remoo da embalagem A clula de carga utilizada deve ser compatvel com a fora
sem secagem prvia; de trao necessria para a verificao.
b) posicionar a sutura no relgio comparador, entre a base
fixa e a base da trava mvel; Procedimento
c) descer a alavanca lentamente de modo que toda a carga
fique sob a sutura; Fixar a agulha em um dos prendedores do equipamento de
modo que a parte encastoada fique livre e alinhada com
d) medir o dimetro da sutura em trs pontos,
a direo em que se vai aplicar a fora pelo prendedor
aproximadamente a 1/4, 1/2 e 3/4 de seu comprimento total.
mvel. Medir a fora requerida para desencastoar a sutura
da agulha.
Resultado
AGULHA
A finalidade desse ensaio avaliar a fixao dos fios para
suturas em agulhas atraumticas.
5
de aproximadamente 100 mm por 225 mm e 2,4 mm de
submerso completa. espessura, cobertas em ambos os lados por veludo de alta
qualidade, de preferncia preto.
Remover o cesto da gua, deix-lo drenar por 10
segundos na mesma posio horizontal, ento coloc-lo
imediatamente num recipiente tarado e coberto e pesar. SELEO DO ALGODO
Calcular a massa de gua absorvida a partir da massa do
cesto de teste e da massa do algodo hidrfilo. Aps desenrolar o algodo, preparar uma amostra
representativa pela tomada, a partir de um pacote contendo
de 225 g a 450 g, de 32 amostras (cada uma com cerca de 75
5.7.5 DETERMINAO DO mg) bem distribudas ao longo da pea, sendo 16 retiradas
de uma metade longitudinal e o restante da outra metade.
COMPRIMENTO DA FIBRA Evitar as extremidades da pea e tomar particular cuidado,
assegurando que as pores sejam retiradas levando-se em
Para a realizao dos testes de Determinao do conta a espessura da pea. Para evitar a seleo de somente
comprimento da fibra, remover o algodo da sua fibras longas ou fibras curtas, remover todas as fibras de
embalagem original e condicion-lo por, no mnimo, 4 cada amostra e no deixar que as mesmas passem atravs
horas, em atmosfera padro de 65% 2% de umidade dos dedos.
relativa a 21 C 1,1 C.
De pacotes de, no mximo, 112,5 g, pesar 8 amostras e de
Este procedimento aplica-se ao aparelho separador dplex pacotes pesando entre 112,5 g e 225 g, pesar 16 amostras,
de fibra de algodo Suter-Webb. Com alteraes no todas bem distribudas.
procedimento, pode ser aplicado a dois separadores Baer
arranjados um atrs do outro ou aplicado a um Johannsen Misturar as amostras aos pares, indiscriminadamente,
ou outro aparelho semelhante. e combinar cada par puxando e enrolando suavemente
nos dedos. Ento dividir longitudinalmente cada par
combinado em duas partes aproximadamente iguais e
APARELHAGEM utilizar uma parte na mistura posterior (a outra parte pode
O separador consiste em dois bancos de pentes rigidamente ser descartada ou reservada para quaisquer outros testes ou
montados lado a lado sobre uma base comum. Cada banco controles).
de pentes consiste em pelo menos 12 pentes individuais
Repetir o processo descrito no pargrafo anterior com as
espaados por 3,2 mm, um atrs do outro e montados
metades sucessivas das sries bifurcadas at que resulte
de modo encaixado para que, medida que eles sejam
somente uma amostra. Suavemente, dispor em posio
aproximados durante o processo de fracionamento e no
paralela as fibras da amostra final, puxando e enrolando-
mais necessrios, eles possam ser soltos para carem abaixo
as nos dedos. Reter todas as fibras, incluindo, tanto como
do plano de trabalho. Cada pente tem uma srie simples de
dentes precisamente alinhados e bem pontiagudos, de 12 possvel, as embaraadas e as massas de fibras tranadas,
mm de comprimento, consistindo em agulhas de 0,38 mm descartando somente os fragmentos de sementes imaturos
de dimetro. Os dentes so espaados de 62 mm a 25 mm com fibras e material estranho no fibroso tal como
numa extenso de aproximadamente 50 mm. pecolos, folhas e fragmentos de tegumentos.
284 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
A partir da amostra final descrita no pargrafo anterior, fibras isoladas de ambos os lados, frontal e distal, dos
separar longitudinalmente uma amostra de 75 mg 2 mg, bancos de pentes e o redepsito das mesmas no feixe
exatamente pesados. Reter o resduo para qualquer teste principal dos pentes.
necessrio.
Virar o equipamento novamente a 180. Deixar cair pentes
sucessivos, se necessrio, para expor as extremidades das
PROCEDIMENTO fibras mais longas. Pode ser necessrio redepositar algumas
fibras isoladas. Utilizando o frceps, retirar as poucas
Utilizando a grade depressora de fibras, inserir
fibras mais salientes. Desta maneira, continuar a retirar
cuidadosamente a amostra pesada num banco de pentes do
sucessivamente as fibras salientes remanescentes de volta
separador de algodo, de modo que ela se estenda atravs
face frontal do pente proximal. Deixar cair este pente e repetir
dos pentes em ngulos aproximadamente retos.
as sries de operaes da mesma maneira at que todas as
Com o frceps separador, segurar, pelas extremidades fibras tenham sido retiradas. Para no perturbar seriamente a
livres, uma pequena poro das fibras que se estende atravs amostra e portanto viciar o fracionamento em grupos, puxar
dos dentes do pente mais prximo ao operador; suavemente diversas vezes (oito a dez) entre cada par de pentes.
tir-la dos pentes e transferi-la para as pontas dos dentes do
Colocar os puxes sobre os pratos cobertos por veludo
segundo banco, deitando as fibras paralelamente umas s
em paralelo uns aos outros, to retamente como possvel,
outras, linearmente e aproximadamente em ngulos retos
com as extremidades to claramente definidas como
em relao s faces dos pentes, liberando to prximo
possvel e com as partes distais arranjadas em linha reta,
face do pente frontal como possvel. Utilizando a grade
pressionando-as para baixo suavemente com o prato plano
depressora, cuidadosamente pressionar as fibras transferidas
depressor de fibras antes de liberar o puxo do frceps.
para baixo, nos dentes dos pentes. Continuar a operao at
Empregar, no mnimo, 50 e, no mximo, 100 puxes para
que todas as fibras sejam transferidas para o segundo banco
5
fracionar a amostra.
de pentes. Durante esta transferncia das fibras, deixar cair
os pentes do primeiro banco sucessivamente quando e Agrupar todas as fibras que tenham comprimento de 12,5
enquanto todas as fibras salientes forem removidas. mm ou mais e pesar o grupo at dcimos de miligrama.
Da mesma maneira, agrupar todas as fibras que tenham
Virar o equipamento a 180 e transferir as fibras de algodo
comprimento de 6,25 mm ou menos e pesar da mesma
de volta para o primeiro banco de pentes maneira descrita
maneira. Finalmente, agrupar as fibras remanescentes,
no pargrafo anterior.
de comprimentos intermedirios e pesar. A soma dos trs
Tomar muito cuidado ao aplainar as extremidades das pesos no deve diferir do peso inicial da amostra por mais
fibras durante ambas as transferncias, arranjando-as to do que 3 mg. Dividir a massa de cada um dos dois primeiros
proximamente como possvel superfcie frontal do pente grupos pela massa da amostra para obter a porcentagem em
proximal. Tal aplainamento pode envolver a retirada de peso de fibra nas duas faixas de comprimento.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 285
Lavar, no mnimo, seis frascos, escolhidos aleatoriamente, Retirar os frascos e resfri-los, imediatamente, em gua
com gua bidestilada ou deionizada, e sec-los em corrente corrente. Aps resfriamento, decantar a gua do erlenmeyer
de ar limpo e seco. e lavar o vidro modo com 4 pores de 15 mL de gua
bidestilada ou deionizada. Adicionar 5 gotas da soluo
Se necessrio, cortar os frascos e transferir e triturar de 30 a de vermelho de metila e titular, imediatamente, com cido
40 g de vidro utilizando o moinho de bolas ou o almofariz. sulfrico 0,01 M. Se o volume esperado de soluo que
Passar o vidro modo por peneira n 20 e transferir a poro ser utilizada na titulao for inferior a 10 mL, utilizar uma
retida na peneira novamente para o moinho de bolas ou o microbureta.
almofariz. Repetir as operaes de moagens e passagens
dos fragmentos pela peneira at que, pelo menos, 2/3 do Registrar o volume de cido sulfrico utilizado na titulao
material tenha passado pela peneira n 20. Combinar todas e corrigir o valor em relao ao volume do branco.
as pores de vidro modo que passaram pela peneira n
20 e passar por peneira n 40. Triturar a poro retida na
Limites
peneira e repetir a operao.
O valor da alcalinidade mxima para o frasco de vidro tipo
Combinar as pores de vidro modo que passaram pela
I de 1,0 mL de H2SO4 0,01 M para 10 g de vidro modo.
peneira n 40 e transferir para conjunto montado de peneiras
n 40 e n 50. Agitar horizontalmente por 5 minutos. O valor da alcalinidade mxima para o frasco de vidro tipo
Recolher 12,0 g de vidro modo que passou pela peneira III de 8,5 mL de H2SO4 0,01 M para 10 g de vidro modo.
n 40 mas no passou pela peneira n 50 e armazenar em
dessecador at ser utilizada no teste. O valor da alcalinidade mxima para o frasco de vidro tipo
NP de 15 mL de H2SO4 0,01 M para 10 g de vidro modo.
Espalhar a amostra de vidro modo sobre um pedao de
papel acetinado e passar o m, para remover possveis
PROCEDIMENTO DO ENSAIO EM FRASCO DE
fragmentos de ferro que podem ter sido introduzidos
VIDRO INTEIRO
durante o procedimento de moagem.
Lavar frascos, escolhidos aleatoriamente, com gua
Transferir a amostra para erlenmeyer de 250 mL e lavar as
6
bidestilada ou deionizada e sec-los em corrente de ar
partculas de vidro com 6 pores de 30 mL de acetona PA,
limpo e seco. Adicionar volume de gua bidestilada ou
agitando por cerca de 30 segundos a cada procedimento,
deionizada correspondente a 90% da capacidade total do
e decantar cuidadosamente a acetona. Aps a lavagem,
frasco, determinada conforme descrito em Capacidade
a amostra deve estar livre de blocos de p de vidro e a
Volumtrica Total (6.1.3).
superfcie dos gros deve estar praticamente livre da
aderncia de partculas finas. Secar o material por 20 Fechar os frascos com papel alumnio previamente lavado
minutos a 140 C. com gua bidestilada ou deionizada e coloc-los na
autoclave. Submet-los ao seguinte tratamento:
A amostra deve ser testada at 48 horas aps a secagem e
nesse caso, deve ser mantida em dessecador. aquecer a autoclave a 100 C, com a vlvula de escape
aberta, por 10 minutos;
Pesar 10,0 g do vidro modo, transferir para erlenmeyer de
250 mL, previamente preparado com gua bidestilada ou promover o aumento da temperatura da autoclave aps
deionizada em banho a 90 C por, pelo menos, 24 horas ou o fechamento da vlvula de escape, em 1 C/min, at
a 121 C por 1 hora, e adicionar 50 mL de gua bidestilada atingir 121 C + 1 C;
ou deionizada. manter a temperatura de 121 C + 1 C durante 60
minutos;
Como branco, utilizar erlenmeyer de 250 mL, previamente
baixar a temperatura, em 0,5 C/min, at atingir 100
preparado em gua bidestilada ou deionizada em banho a
C, descarregando a presso at atingir a presso
90 C por, pelo menos, 24 horas ou a 121 C por 1 hora, e
atmosfrica;
adicionar 50 mL de gua bidestilada ou deionizada.
abrir a autoclave somente aps atingir a temperatura de
Fechar os frascos erlenmeyer com o uso de bquer 95 C;
invertido ou papel alumnio, previamente lavado com gua transferir os frascos para banho-maria a 80 C.
bidestilada ou deionizada. Adicionar gua fria; tomando o cuidado de evitar a
Coloc-los na autoclave e submet-los ao seguinte contaminao da soluo de extrao, sendo que o
tratamento: tempo de resfriamento no deve exceder 30 minutos.
O valor de alcalinidade mxima no deve exceder os O valor da alcalinidade mxima para o frasco de vidro tipo
valores indicados na Tabela 2. II de 0,2 mL de H2SO4 0,01 M para frascos com mais de
100 mL de capacidade volumtrica.
Tabela 2 Alcalinidade mxima de acordo com o tipo
de vidro e a capacidade volumtrica do frasco.
6.1.2 ARSNIO
Volume mximo de HCl
Capacidade 0,01 M (mL) para 100 mL
volumtrica do de soluo de extrao EQUIPAMENTOS, MATERIAIS E REAGENTES
frasco (mL)
6
Tipos I e II Tipo III
Autoclave com controle de temperatura de 121 C 1,0
<1 2,0 20,0 C, equipada com termmetro, manmetro, vlvula de
De 1 a 2 1,8 17,6 segurana e prateleira para sustentao de, no mnimo,
De 2 a 5 1,3 13,2 12 frascos;
De 5 a 10 1,0 10,2 estufa para secagem com temperatura de 140 C;
De 10 a 20 0,80 8,1
bquer ou papel alumnio;
De 20 a 50 0,60 6,1
De 50 a 100 0,50 4,8 erlenmeyer de 250 mL;
De 100 a 200 0,40 3,8 proveta graduada de 100 mL;
De 200 a 500 0,30 2,9 gua bidestilada ou deionizada, com condutividade
> 500 0,20 2,2 mxima de 0,15 S/cm (ou 6,67 M/cm) a 25 C.
Coloc-los na autoclave e submet-los ao seguinte aquecer a autoclave a 100 C, com a vlvula de escape
tratamento: aberta, por 10 minutos;
promover o aumento da temperatura da autoclave aps
promover o aumento da temperatura da autoclave
o fechamento da vlvula de escape, em 1 C/min, at
aps o fechamento da vlvula de escape, entre 19 a 23
atingir 121 C + 1 C;
minutos, at atingir 121 C + 1 C;
manter na temperatura de 121 C + 1 C durante 60
manter na temperatura de 121 C + 1 C durante 60
minutos;
minutos;
288 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
baixar a temperatura, em 0,5 C/min, at atingir 100 Determinar a temperatura da gua durante a realizao
C, descarregando a presso at atingir a presso do ensaio, assegurar que a temperatura da gua no tenha
atmosfrica; variao acima de 1 C.
abrir a autoclave somente aps atingir a temperatura de
Pesar o frasco cheio e determinar a massa de gua nele
95 C;
contida.
transferir os frascos para banho-maria a 80 C.
Adicionar gua fria, cuidadosamente, para evitar a Calcular o volume do frasco dividindo a massa da gua
contaminao da soluo de extrao, sendo que o pela sua densidade, na temperatura do ensaio, com o uso
tempo de resfriamento no deve exceder 30 minutos. dos dados registrados na Tabela 1 para gua destilada.
testes de extraveis so planejados para caracterizar os garantir que a identidade, a fora, a qualidade e a pureza
componentes extrados e identificar os possveis migrantes. da forma farmacutica sejam mantidas durante o perodo
O grau ou extenso dos testes para extrair substncias de um de validade.
componente depende da finalidade de uso e do grau de risco
de impactar negativamente na eficcia do produto. Nesse
ENSAIOS
captulo esto descritos os testes de extraveis especficos
para resinas de polietileno, polipropileno, poli(tereftalato
de etileno) e poli(tereftalato de etileno glicol). Todos os Polietileno de Alta Densidade
outros plsticos devem ser testados conforme descrito nos
Espectroscopia de Infravermelho. Utilizar o acessrio
Testes Fsico Qumicos de Mtodos de Teste (6.2.1.3). O
de reflexo total atenuada, conforme descrito no item
teste de Capacidade Tamponante deve ser testado para
Infravermelho mdio (5.2.14). O espectro corrigido da
recipientes destinados a embalar um produto lquido.
amostra deve apresentar bandas de maior absoro apenas
Os componentes plsticos utilizados para produtos de alto nos mesmos comprimentos de onda do espectro do padro
risco, tais como aqueles destinados inalao; preparaes de referncia.
parenterais e oftlmicas so testadas utilizando os Testes
Calorimetria Diferencial de Varredura. Proceder
Biolgicos de Mtodos de Teste (6.2.1.3).
como descrito na Anlise Trmica de Mtodos de Testes
Os recipientes plsticos destinados embalagem de (6.2.1.3). O termograma da amostra deve ser parecido
produtos parenterais devem cumprir os requisitos dos com o do padro de referncia, determinado de maneira
Testes Biolgicos e dos Testes Fsico Qumicos. Tambm, semelhante, e a temperatura endotrmica (derretimento) no
so fornecidas normas para os recipientes em polietileno termograma da amostra no deve diferir em mais de 6,0 C
utilizados para embalar formas farmacuticas orais secas, dos padres de referncia.
no destinadas para constituio em soluo.
Metais Pesados e Resduo No Voltil. Preparar extratos
da amostra conforme descrito nos Testes Fsico Qumicos,
6.2.1 recipientes e em Mtodos de Testes (6.2.1.3), com poro de 60 cm2,
sem considerar a espessura, para cada 20,0 mL de Meio de
correlatos plsticos Extrao.
termograma da amostra no deve diferir em mais de 8,0 C de uma forma farmacutica especfica em um recipiente
dos padres de referncia. apropriado em polipropileno, qualquer outro recipiente
em polipropileno que atenda a esses requisitos pode ser
Metais Pesados, e Resduo No Voltil. Preparar extratos utilizado para embalar a mesma forma farmacutica,
da amostra conforme descrito em Preparao da Amostra desde que os programas de estabilidade apropriados sejam
em Testes Fsico Qumicos de Mtodos de Testes, com ampliados para incluir esse recipiente alternativo, a fim de
poro de 60 cm2, sem considerar a espessura, para cada garantir que a identidade, a fora, a qualidade e a pureza
20,0 mL de Meio de Extrao. da forma farmacutica sejam mantidas durante o perodo
de validade.
Metais Pesados. Os recipientes devem cumprir os
requisitos para Metais Pesados de Testes Fsico Qumicos,
em Mtodos de Testes (6.2.1.3). ENSAIOS
6
determinado de forma semelhante; o ponto de derretimento
resinas tm um espectro de absoro de infravermelho da amostra (Tm) no deve diferir dos padres de referncia
particular que permite a diferenciao de outros materiais em mais de 9 C e a temperatura de transio vtrea em
plsticos, como policarbonato; poliestireno; polietileno e mais de 4 C. Para o tereftalato de polietileno glicol,
resinas poli(tereftalato de etileno glicol) (PETG). O PET o termograma da amostra deve ser parecido com o do
e suas resinas de copolmero tm uma densidade entre 1,3 padro de referncia, determinado de forma semelhante; a
e 1,4 g/cm3 e uma viscosidade intrnseca mnima de 0,7 temperatura de transio vtrea da amostra (Tg) no deve
dL/g, que corresponde a um peso molecular mdio de cerca diferir em mais de 6 C dos padres de referncia.
de 23.000 Da.
Extrao de Corantes. Selecionar trs recipientes para
As resinas PETG so polmeros de alto peso molecular o ensaio. Cortar uma parte relativamente plana da parede
preparadas pela condensao do etilenoglicol com lateral de um recipiente e apar-la na medida necessria
dimetil tereftalato, ou cido tereftlico e com 15 a 34% para ajustar a amostra ao suporte do espectrofotmetro.
de 1,4-hexano-dimetanol molar. As resinas PETG so Realizar varredura (5.2.14) para obter o espectro visvel
polmeros transparentes, amorfos, com uma temperatura de 350-700 nm da parede lateral. Com aproximao de 2
de transio vtrea de cerca de 81 C e sem um ponto de nm, determinar o comprimento de onda de absorvncia
fuso cristalina, conforme determinado pela calorimetria mxima. Preencher os dois recipientes restantes com 50%
diferencial de varredura. As resinas PETG tm um espectro de etanol para recipientes PET e 25% de etanol para PETG.
de absoro infravermelho particular que possibilita a Preparar os recipientes com vedaes impermeveis, como
distino entre outros materiais plsticos, inclusive o PET. uma folha de alumnio, e fechar com as tampas. Encher
As resinas PETG tm uma densidade de aproximadamente com o solvente correspondente um recipiente de vidro de
1,27 g/cm3 e uma viscosidade intrnseca mnima de 0,65 mesma capacidade que os recipientes em teste, prepar-lo
dL/g, o que corresponde a um peso molecular mdio de com vedao impermevel, como uma folha de alumnio,
cerca de 16.000 Da. e fechar com uma tampa. Incubar os recipientes em teste
As resinas PET e PETG no contm nenhum plastificante, e o recipiente de vidro a 49 C por 10 dias. Retirar os
apoio de processamento ou antioxidantes. Quando corantes recipientes e aguardar que atinjam a temperatura ambiente.
so utilizados na fabricao de recipientes de PET e de Concomitantemente, determinar as absorvncias (5.2.14)
PETG, esses no devem migrar para o lquido. das solues em teste em clulas de 5 cm no comprimento
de onda de absorvncia mxima, utilizando o solvente
As normas e ensaios fornecidos nessa seo caracterizam correspondente do recipiente de vidro como branco. Para
recipientes de tereftalato de polietileno (PET) e tereftalato ambas as solues em teste, os valores de absorvncia,
de polietileno glicol (PETG) que so usados para embalar assim, obtidos no devem ser inferiores a 0,01.
formas farmacuticas orais lquidas. Considerando
292 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Metais Pesados; Total de Tereftalola e Etilenoglicol. Determinar a absorvncia do extrato de n-Heptano em uma
clula de 1 cm, no comprimento de onda de absorvncia
Meios de extrao. mxima a cerca de 240 nm (5.2.14), utilizando como
gua purificada branco o meio de extrao de n-Heptano. A absorvncia
do extrato no deve exceder 0,150, o que corresponde, no
Etanol a 50%. Diluir 125 mL de etanol em gua para 238 mximo, 1 ppm de tereftaloila do meio.
mL de soluo e homogeneizar.
Etanol a 25%. Diluir 125 mL de Etanol a 50% em gua Etilenoglicol.
para 250 mL de soluo e homogeneizar.
Soluo de cido peridico. Dissolver 125 mg de cido
n-Heptano. peridico em 10 mL de gua.
Procedimento geral. Utilizar um meio de extrao de cido sulfrico diludo. Para 50 mL de gua, adicionar
Etanol a 50% para recipientes de PET e Etanol a 25% para lentamente e em constante agitao, 50 mL de cido
PETG. Para cada meio de extrao, encher um nmero sulfrico e aguardar que atinja a temperatura ambiente.
suficiente de recipientes testes com 90% da sua capacidade
nominal para obter no mnimo 30 mL. Encher um Soluo de bissulfito de sdio. Dissolver 0,1 g de bissulfito
nmero correspondente de recipientes de vidro com gua de sdio em 10 mL de gua. Utilizar essa soluo dentro
purificada, a mesma quantidade de recipientes com Etanol de 7 dias.
a 50%, ou Etanol a 25% e o mesmo nmero de recipientes
de vidro com n-Heptano para ser utilizado como branco Soluo de cromotropato dissdico. Dissolver 100 mg de
dos meios de extrao. Colocar nos recipientes vedaes cromotropato dissdico em 100 mL de cido sulfrico.
impermeveis, como folha de alumnio, e tamp-los. Proteger a soluo da luz e utiliz-la dentro de 7 dias.
Incubar os recipientes testes e os recipientes de vidro
Soluo padro. Dissolver uma quantidade, precisamente
a 49 C por 10 dias. Retirar os recipientes testes com as
pesada, de etilenoglicol em gua e diluir, quantitativamente,
amostras e os brancos do meio de extrao e armazen-
passo a passo, se necessrio, para obter uma soluo com
los em temperatura ambiente. No transferir as amostras
uma concentrao de cerca de 1,0 g/mL.
do meio de extrao para recipientes de armazenamento
alternativos. Soluo teste. Utilizar o extrato em gua purificada.
Metais Pesados. Pipetar 20 mL de gua purificada extrada Procedimento. Transferir 1 mL da Soluo padro para um
superior da soluo obtida a partir da Soluo padro, C abaixo da temperatura mxima de cristalizao a uma
correspondendo, no mximo, 1 ppm de etilenoglicol. taxa de 10 C a 20 C por minuto.
6
amostra no acessrio de refletncia interna mltipla e Se a designao de classe for necessria para plsticos e
colocar o conjunto no feixe de luz do espectrofotmetro de outros polmeros que atendam aos requisitos previstos em
infravermelho. Ajustar a posio da amostra e os espelhos Testes de reatividade biolgica in vitro (6.2.5), realizar o
do equipamento para permitir a transmisso mxima de teste in vivo adequado especificado para Classificao de
luz pelo feixe de referncia no-atenuado. Completar os Plsticos em Testes de reatividade biolgica in vivo (6.2.6).
ajustes do acessrio, atenuar o feixe de referncia para
permitir a escala total de deflexo, durante a varredura da
amostra. Determinar o espectro infravermelho de 3500 a Testes Fsico Qumicos
600 cm-1 para polietileno e polipropileno e de 4000 a 400 Os seguintes testes destinados a determinar as propriedades
cm-1 para PET e PETG. fsicas e qumicas de plsticos e seus extratos, so baseados
na extrao de material plstico, sendo essencial que a
Anlise Trmica quantidade designada do plstico seja utilizada. Alm disso,
a rea de superfcie especificada deve estar disponvel para
Procedimento Geral. Cortar uma seo com peso a extrao na temperatura determinada.
aproximado de 12 mg e coloc-la no compartimento para
a amostra. O contato prximo entre o compartimento e o Parmetros do teste:
termoelemento essencial para a reprodutibilidade dos
resultados. Determinar o termograma sob nitrognio, Meio de Extrao. A menos que direcionado de outra forma
utilizando as condies de aquecimento e resfriamento em um teste especfico a seguir, utilizar gua Purificada
conforme especificadas para o tipo de resina e utilizar um como meio de extrao, mantendo a temperatura a 70 C,
equipamento capaz de realizar as determinaes. durante a extrao para a Preparao da amostra.
Para Polietileno. Determinar o termograma sob nitrognio Branco. Utilizar gua Purificada onde o branco
em temperaturas entre 40 C e 200 C, a uma taxa de especificado nos testes que se seguem.
aquecimento entre 2 C e 10 C por minuto, seguido de Equipamentos. Utilizar banho-maria e Recipientes de
resfriamento para 40 C, a uma taxa entre 2 C e 10 C por extrao, conforme descrito em Testes de reatividade
minuto. biolgica in vivo (6.2.6). Proceder conforme descrito na
Para Polipropileno. Determinar o termograma sob Preparao de equipamentos em Testes de reatividade
nitrognio em temperaturas que variem entre a temperatura biolgica in vivo (6.2.6). Os recipientes e equipamentos
ambiente e 30 C acima do ponto de fuso. Manter a no precisam ser estreis.
temperatura por 10 minutos, em seguida, resfriar para 50 Preparao da Amostra. A partir de uma amostra
homognea de plstico, utilizar uma alquota para cada 20
294 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
mL de meio de extrao, equivalente a 120 cm2 da rea da deve ser mais intensa do que na Preparao padro, ambas
superfcie total (unindo ambos os lados), e subdividida em visualizadas sobre uma superfcie branca (1 ppm no extrato).
faixas de, aproximadamente, 3 mm de largura e prximo
a 5 cm de comprimento. Transferir a amostra subdividida Capacidade Tamponante. Titular, potenciometricamente,
para uma proveta de vidro tipo I, graduada, de 250 mL com as alquotas de 20 mL, previamente coletadas, do Extrato
tampa e adicionar cerca de 150 mL de gua purificada. da Preparao da amostra para um pH 7,0, utilizando cido
Agitar por, aproximadamente, 30 segundos, esvaziar, clordrico 0,010 M ou hidrxido de sdio 0,010 M, conforme
descartar o lquido e repetir uma segunda lavagem. necessrio. Tratar, semelhantemente, uma alquota de 20 mL
do Branco. Se o mesmo titulante for necessrio para ambos
Extrao para Preparao da Amostra. Transferir a os titulados, a diferena entre os dois volumes no deve
Preparao da amostra pronta para um frasco de extrao ser superior a 10 mL; e se o cido for necessrio ou para o
adequado e adicionar a quantidade solicitada de meio de Extrato da Preparao da amostra, ou para o Branco, e o
extrao. Extrair por 24 horas por aquecimento em um lcali para o outro, o total dos dois volumes solicitados no
banho-maria na temperatura especificada para o meio de deve ser superior a 10 mL.
extrao. Resfriar para temperaturas no abaixo de 20 C.
Pipetar 20 mL do extrato preparado para um recipiente
adequado. Utilizar essa parte no teste para Capacidade 6.2.2 TAMPAS DE ELASTMERO
Tamponante. Decantar, imediatamente, o extrato residual
em um recipiente limpo adequado e fech-lo.
Tampas de elastmero so fabricadas em materiais obtidos a
Resduo No Voltil. Transferir, em alquotas adequadas, partir da polimerizao, poli adio ou poli condensao de
50 mL do Extrato de Preparao da amostra para um substncias orgnicas. Os polmeros obtidos so, geralmente
cadinho adequado tarado (preferencialmente um cadinho vulcanizados. As formulaes das tampas contm
de slica fundida que tenha sido limpo com cido) e elastmeros naturais ou sintticos e aditivos inorgnicos
evaporar a parte voltil em um banho a vapor. Evaporar de e orgnicos para auxiliar ou controlar a vulcanizao,
forma semelhante 50 mL do Branco em outro cadinho. Se proporcionar propriedades fsicas e qumicas, colorao, ou
for esperado um resduo oleoso, examinar repetidamente o estabilizar a formulao da tampa.
cadinho durante a evaporao e o processo de secagem e
Para tampas formuladas com substncias de elastmero
reduzir a quantidade de calor, se o leo tender a deslizar pela
naturais ou sintticas, utilizadas para estocagem de longo
parede do cadinho. Secar a 105 C por 1 hora. A diferena
6
prazo. No se aplica tampas fabricadas em elastmero
entre as quantidades obtidas do Extrato para a Preparao
de silicone, mas se aplica tampas tratadas com silicone,
da amostra e o Branco no devem ser superiores a 15 mg.
como dimeticona, e tampas revestidas com outros materiais
Resduo por incinerao (5.2.10). No necessrio lubrificantes, como materiais ligados quimicamente, ou
realizar esse teste quando o resultado do teste de Resduo mecanicamente tampa.
No Voltil no exceder 5 mg. Proceder com a obteno
Os comentrios a seguir referem-se apenas s tampas
dos resduos, a partir do Extrato para a Preparao da
laminadas ou revestidas com materiais destinados a fornecer
amostra e Branco descrito no teste para Resduo No Voltil
ou funcionar como uma barreira base do elastmero, por
acima, utilizando, se necessrio, mais cido sulfrico para
exemplo poli(tetrafluoretileno) (PTFE) ou revestimentos
a mesma quantidade em cada cadinho. A diferena entre as
envernizados. No permitida a utilizao de um material
quantidades obtidas de resduo de ignio a partir do Extrato
com o intuito de transformar uma tampa que no se encontra
para a Preparao da amostra e do Branco no deve ser
dentro das exigncias especficas para uma que esteja em
superior a 5 mg.
conformidade. No entanto, todos os testes fsico-qumicos se
Metais Pesados. Pipetar 20 mL do Extrato da Preparao aplicam frmula base de tais tampas, bem como s tampas
da amostra, filtrado, se necessrio, para um dos dois tubos laminadas ou revestidas. Os testes de funcionalidade devem
de 50 mL para comparao de cor. Ajustar o pH entre 3,0 ser realizados utilizando tampas de elastmero laminadas
e 4,0 com cido actico M ou hidrxido de amnio 6 M, ou revestidas. Os testes biolgicos aplicam-se aos materiais
utilizando um papel indicador de curto intervalo de pH. revestidos ou laminados, bem como frmula base. Os testes
Diluir com gua at cerca de 35 mL e homogeneizar. biolgicos podem ser realizados em tampas ou materiais
revestidos ou laminados e em tampas no laminadas e no
Pipetar 2 mL de Soluo padro de chumbo (10 ppm Pb) revestidas, sendo que os resultados devem ser reportados,
(5.3.2.3), transferir para o segundo tubo para comparao separadamente. A frmula base, utilizada nos testes fsico-
de cor e adicionar 20 mL do Branco. Ajustar o pH entre qumicos, ou biolgicos deve cumprir as especificaes de
3,0 e 4,0 com cido actico M ou hidrxido de amnio 6 uma tampa com barreira de revestimento que deve ser similar
M, utilizando um papel indicador de curto intervalo de pH. ao revestimento da tampa em configurao e tamanho.
Diluir com gua at cerca de 35 mL e homogeneizar. Em
cada tubo, adicionar 1,2 mL de tioacetamida SR e 2 mL de Os testes dessa seo limitam-se s tampas de elastmero
Tampo acetato pH 3,5 (5.3.2.3), diluir com gua at 50 mL dos Tipos I e II, sendo que as do Tipo I so utilizadas para
de soluo e homogeneizar. Qualquer cor produzida dentro preparaes aquosas e as do Tipo II so normalmente
de 10 minutos na preparao que contm o Extrato da destinadas s preparaes no aquosas. Se uma tampa no
Preparao da amostra extrada dos recipientes testes, no atender a todas as exigncias do teste do Tipo I, mas atender
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 295
PROCEDIMENTOS DE TESTES
Procedimento A. Comparao Visual - Utilizar tubos de C para as tampas do Tipo II. A Preparao S considerada
ensaio idnticos, de vidro incolor; transparente e neutro; lmpida se a claridade a mesma do que a da gua quando
com uma base plana e um dimetro interno de 15 a 25
mm. Preencher um tubo com comprimento de 40 mm
com a Preparao S, um tubo de mesmo comprimento
examinada como descrito acima, ou se sua opalescncia
no mais pronunciada do que a Suspenso de Referncia
A (consultar a Tabela 3).
6
com gua e quatro outros tubos de mesmo comprimento
com as Suspenses de Referncia A, B, C e D. Comparar Procedimento B. Comparao Instrumental: Medir a
as preparaes em luz diurna difusa 5 minutos aps a turbidez das Suspenses de Referncia em um turbidmetro
preparao das Suspenses de Referncia, visualizando, calibrado adequado. O branco deve ser testado e os
verticalmente, contra um fundo preto. As condies de resultados corrigidos para o branco. As Suspenses de
luz devem ser tais que a Suspenso de Referncia A possa Referncia A, B, C e D representam 3, 6, 18 e 30 Unidades
ser prontamente distinguida da gua e que a Suspenso de Turbidez Nefelomtricas (UTN) respectivamente.
de Referncia B possa ser prontamente distinguida da Medir a turbidez da Soluo S utilizando o turbidmetro
Suspenso de Referncia A. calibrado.
Limite. A Preparao S no deve ser mais opalescente do Limite. A turbidez da Soluo S no deve ser maior do que
que a Suspenso de Referncia B para as tampas do Tipo I, aquela para a Suspenso de Referncia B (6 UTN) para as
e no mais opalescente do que a Suspenso de Referncia tampas do Tipo I, e no maior do que da Suspenso de
Referncia C (18 UTN) para as tampas do Tipo II (Tabela 3).
Soluo de Azul de Bromotimol. Dissolver 50 mg de azul Procedimento. Proceder como direcionado para o Mtodo
de bromotimol em uma mistura de 4 mL de hidrxido de 1 em Metais Pesados. Usar 10,0 mL da Preparao S, na
sdio a 0,02 M e 20 mL de lcool. Diluir com gua para preparao problema.
100 mL.
Limite. 2 ppm de metais pesados como chumbo.
Procedimento. Adicionar 0,1 mL da soluo de azul de
bromotimol a 20 mL da Preparao S. Zinco Extravel.
Se a preparao ficar amarela, titular com hidrxido de Soluo Teste. Preparar uma Soluo Teste por meio
sdio a 0,01 M at que o ponto final azul seja alcanado. da diluio de 10,0 mL da Preparao S para 100 mL
Se a preparao ficar azul, titular com cido clordrico a com cido clordrico a 0,1 M. Preparar o branco do teste
0,01 M at que o ponto final amarelo seja alcanado. similarmente, utilizando o branco para a Preparao S.
Se a preparao ficar verde, ela neutra e no necessria Soluo Padro de Zinco. Preparar uma soluo (10 ppm
a titulao. de Zn) dissolvendo sulfato de zinco em cido clordrico
0,1 M.
Correo do Branco. Testar 20 mL do branco de modo
similar. Corrigir os resultados obtidos para a Preparao Solues de Referncia. Preparar, no mnimo, 3 Solues
S atravs da subtrao ou adio do volume de titulante de Referncia por meio da diluio da Soluo Padro de
requerido para o branco, como apropriado. Zinco com cido clordrico 0,1 M. As concentraes de
zinco nessas Solues de Referncia so a extenso do
Limite. No mais do que 0,3 mL de hidrxido de sdio a limite esperado da Soluo Teste.
0,01 M produz uma cor azul, ou no mais do que 0,8 mL
de cido clordrico a 0,01 M produz uma cor amarela, ou a Procedimento. Utilizar um espectrmetro de absoro
titulao no necessria. atmica; adequado e equipado com uma fonte de
radiao eletromagntica, adequada e uma chama de
ar acetileno. Um procedimento alternativo como uma
Absorvncia anlise por espectrometria de massa ou espectrometria
de emisso ptica com plasma indutivamente acoplado,
6
Procedimento. Realizar esse teste no espao de tempo
apropriadamente validada pode ser utilizado.
de 5 horas aps desenvolver a Preparao S. Filtrar a
Preparao S atravs de um filtro com poro de 0,45 m, Testar cada uma das Solues Referncia em comprimento
descartando o primeiro mL do filtrado. Medir a absorvncia de onda para Zinco selecionado em 213,9 nm, pelo
do filtrado em comprimentos de onda entre 220 e 360 nm menos 3 vezes. Registrar as leituras estveis. Enxaguar o
em uma clula de 1 cm utilizando o branco em uma clula equipamento com a soluo branco, toda vez para garantir
de correspondncia em um feixe de referncia. Se a diluio que a leitura retorna ao valor inicial do branco. Preparar
do filtrado necessria antes da medida da absorvncia, uma curva de calibrao a partir da mdia das leituras
corrigir os resultados do teste para a diluio. obtidas para cada Soluo de Referncia. Registrar a
absorvncia da Soluo Teste. Determinar a concentrao
Limite. As absorvncias em todos esses comprimentos de
de zinco em ppm da Soluo Teste utilizando a curva de
onda no devem exceder 0,2 para as tampas do Tipo I ou
calibrao.
4,0 para as tampas do Tipo II.
Limite. A Preparao S contm, no mximo, 5 ppm de
Substncias Redutoras zinco extravel.
TESTES FUNCIONAIS
Limite. A fora para perfurao de cada tampa no deve ser Nessa seo esto propostos padres para as propriedades
maior do que 10 N (1 kgf), determinada com uma preciso funcionais de recipientes plsticos e seus componentes
de 0,25 N (25 gf). utilizados para acondicionar medicamentos. Os testes a
seguir so estabelecidos para determinar a permeabilidade
umidade e transmisso de luz dos recipientes plsticos
2 Refere-se a ISO 7864, agulhas hipodrmicas estreis de uso nico com
aplicveis a cada tipo de embalagem.
um dimetro externo de 0,8 mm (calibre 21).
Um recipiente destinado a fornecer proteo luz, ou
apresentado como recipiente resistente luz deve satisfazer
a exigncia de Teste de Transmisso da luz (6.2.3.5), onde
a proteo, ou a resistncia devido s propriedades
300 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
especficas do material de que o recipiente composto, cada recipiente para uma proveta graduada, e determinar
incluindo qualquer revestimento aplicado a ele. Um o volume mdio do recipiente em mL. Calcular a taxa de
recipiente claro e incolor, ou translcido, fabricado como permeabilidade umidade, em mg por dia, por L, Por meio
resistente luz por meio de incluso de composto opaco da frmula:
est isento dos requisitos do item Testes de Transmisso
de luz (6.2.3.5). Da forma como utilizado nesse captulo, o
termo recipiente refere-se ao sistema completo abrangendo
em que
o recipiente em si, o revestimento quando utilizado, o
fechamento no caso de recipientes de unidades mltiplas e V o volume em mL do recipiente, (TF TI) a diferena
as tampas e blister nos casos de recipientes de dose unitria. em mg entre o peso final e inicial de cada recipiente teste;
(CF CI) a diferena em mg entre a mdia final e a mdia
inicial dos pesos dos 2 controles.
6.2.3.1 RECIPIENTES DE MLTIPLAS
UNIDADES PARA CPSULAS E Para recipientes utilizados em medicamentos dispensados
COMPRIMIDOS sob prescrio, os recipientes assim testados so do
tipo recipientes vedados, se no mais do que um dos 10
recipientes testes exceder a 100 mg por dia por L em
Dessecante. Colocar uma quantidade de cloreto de clcio permeabilidade umidade, e nenhum exceder a 200 mg por
anidro (1) de 4 a 8 mesh em um recipiente raso, tendo o dia por L. Para recipientes utilizados para medicamentos
cuidado de excluir qualquer p fino, secar a 110 C durante dispensados sob prescrio, os recipientes so bem
uma hora e resfriar em um dessecador. fechados se no mais do que um dos 10 recipientes testes
Procedimento. Selecionar 12 recipientes de tamanhos e exceder a 2000 mg por dia por L em permeabilidade
tipo uniformes, limpar as superfcies de fechamento com umidade e nenhum exceder a 3000 mg por dia por L.
um pano isento de fibras, fechar e abrir cada recipiente Tabela 1 - Torque aplicvel ao recipiente com tampa tipo rosca.
30 vezes. Tampar firme e uniformemente toda vez que o
recipiente fechado. Tampar os recipientes com tampa Intervalo de aperto
de rosca com movimento de torque que esteja dentro do Dimetro do Fechamentoa sugerido com torque
intervalo especificado na Tabela 1. Adicionar dessecantes (mm) aplicado manualmenteb
a 10 recipientes, designados recipientes testes, preencher (polegadas / libras)
6
cada um at 13 mm do fechamento se o volume for de 8 5
20 mL ou superior, ou preencher cada um at dois teros 10 6
da capacidade se o volume do recipiente for inferior a 20
13 8
mL. Se a parte interna do recipiente possuir mais de 63
15 5-9
mm de profundidade, um funil inerte ou espaador deve
18 7-10
ser colocado no fundo para minimizar o peso total do
recipiente e do dessecante; a camada de dessecante em tal 20 8-12
recipiente no deve ser inferior a 5 cm em profundidade. 22 9-14
Fechar cada um, imediatamente aps a adio do 24 10-18
dessecante, aplicando o torque designado na Tabela 1 no 28 12-21
caso de recipientes com tampa de rosca. Para cada um dos 30 13-23
2 recipientes remanescentes, designados como controles, 33 15-25
adicionar um nmero suficiente de esferas de vidro para 38 17-26
atingir um peso aproximadamente igual aos dos recipientes 43 17-27
testes e fechar aplicando o torque designado na Tabela 1 48 19-30
no caso de recipientes com tampa de rosca. Registrar o 53 21-36
peso dos recipientes, individualmente, assim, preparados 58 23-40
at a aproximao de 0,1 mg se o volume do recipiente 63 25-43
for inferior a 20 mL, ou at a aproximao em mg mais 66 26-45
prximo se o volume do recipiente for de 20 a 200 mL, ou 70 28-50
at a aproximao em centigramas (10 mg) se o volume 83 32-65
for de 200 mL ou superior. Estocar umidade relativa de 86 40-65
(75 3)% e temperatura de 23 C 2 C. Um sistema 89 40-70
saturado de 35 g de cloreto de sdio para cada 100 mL de
100 45-70
gua colocado no fundo do dessecador mantm a umidade
110 45-70
especificada, ou outros mtodos podem ser empregados
120 55-95
para manter essas condies. Aps 336 h 1 h (14 dias),
registrar o peso dos recipientes individualmente da mesma 132 60-95
forma. Preencher, completamente, 5 recipientes vazios do ____________
mesmo tamanho e tipo dos recipientes testes com gua ou a o torque designado para o prximo dimetro de fechamento maior deve
um slido no compressvel, de fluxo livre tal como esferas ser aplicado nos recipientes testes que tenham um dimetro de fechamento
de vidro pequenas bem acomodadas at nvel indicado intermedirio aos dimetros listados.
pela superfcie do fechamento. Transferir o contedo de b utilizar equipamento adequado para medio de torque.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 301
6
penetrao mensurada for inferior a 5 mg por dia, e quando
for observado que os controles alcanam o equilbrio
Para permitir uma avaliao fundamentada em relao em um prazo de 7 dias, a penetrao individual pode ser
adequabilidade da embalagem para um tipo especfico de determinada mais precisamente, utilizando o recipiente
produto, os procedimentos e esquemas de classificao a teste do 7 dia e o recipiente controle como WI e CI,
seguir so apresentados para avaliar as caractersticas de respectivamente, nos clculos. Nesse caso, um intervalo
permeabilidade umidade dos recipientes para unidade adequado de teste para Classe A no deve ser inferior a 28
simples e para dose unitria. Visto que os desempenhos dias a partir do perodo de equilbrio do 7 dia (um total de
do equipamento e do operador podem afetar a penetrao 35 dias).
de umidade em um recipiente formado ou fechado, as
caractersticas de penetrao de umidade do sistema de Mtodo II. Utilizar esse procedimento para embalagens,
embalagem utilizado devem ser determinadas. como cartelas que podem ser perfuradas, que incorporam
um nmero de blisters ou recipientes de dose unitria
Dessecante. Secar as pastilhas dessecantes apropriadas a selados, separadamente. Selar um nmero suficiente de
110 C durante 1 hora antes do uso. Utilizar pastilhas com embalagens, no mnimo, 4 e um total de, no mnimo, 10
peso aproximado de 400 mg cada uma e com dimetro recipientes de dose unitria ou blisters preenchidos com
de, aproximadamente, 8 mm. Se necessrio, devido uma pastilha em cada unidade a ser testada. Selar um
dimenso limitada do recipiente de dose unitria, podem nmero correspondente de embalagens vazias, cada uma
ser utilizadas pastilhas pesando menos do que 400 mg cada contendo o mesmo nmero de recipientes de dose unitria
uma e com dimetro inferior a 8 mm. ou blisters iguais aos utilizados nas embalagens testes,
como controles. Estocar todos os recipientes em umidade
PROCEDIMENTO relativa de (75 3)% e temperatura de 23 C 2 C.
Um sistema saturado de 35 g de cloreto de sdio para cada
Mtodo I. Selar no menos do que 10 recipientes de 100 mL de gua, colocado no fundo do dessecador mantm
dose unitria com uma pastilha cada um, e selar 10 a umidade requerida, ou outros mtodos podem ser
unidades adicionais de recipientes de dose unitria vazios empregados para manter essas condies. Aps 24 horas e
para controle, utilizando dedos de luvas ou uma pina a cada 24 horas subsequentes, remover as embalagens da
almofadada para manipular os recipientes selados. Numerar cmara e deixar que se equilibrem temperatura ambiente
os recipientes e registrar os pesos, individualmente, com durante aproximadamente 45 minutos. Registrar os pesos
a aproximao em mg mais prxima. Pesar os controles das embalagens individuais e retorn-las cmara. Pesar
como uma unidade e dividir o peso total pelo nmero de as embalagens controle como uma unidade e dividir
controles para obter a mdia. Estocar todos os recipientes o peso total pelo nmero de embalagens controle para
obter o peso mdio das embalagens vazias. Se qualquer
302 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
pastilha indicadora virar para a colorao rosa durante o aquosos por meio da medida da perda de peso de gua
procedimento ou se o peso mdio da pastilha exceder a lquida como uma porcentagem de seu contedo. Esse
10% em qualquer uma das embalagens, finalizar o teste teste, tambm, pode ser utilizado para demonstrar uma
e considerar vlidas apenas as primeiras determinaes. comparao funcional e de desempenho. Durante todo
Calcular a taxa mdia de penetrao de umidade, em mg o procedimento, determinar os pesos dos sistemas
por dia para cada recipiente de dose unitria ou blister, em individuais de fechamento dos recipientes (recipiente,
cada embalagem de acordo com a frmula: selagem interna se utilizada, e fechamento) ambos como
pesos de tara e pesos de envase, a uma aproximao de 0,1
mg se a capacidade mxima for inferior a 200 mL; uma
em que aproximao em mg se a capacidade mxima estiver entre
200 e 1000 mL ou uma aproximao em centgramos (10
N o nmero de dias decorridos dentro do perodo do mg) se a capacidade mxima for de 1000 mL ou superior.
teste (comeando aps as 24 horas iniciais de perodo de
equilbrio); Procedimentos para Testes de Recipientes Fechados
X o nmero de unidades seladas separadamente por Comercializados (batoque se aplicvel, selagem interna
embalagem; e tampa). Selecionar 10 recipientes de tipo e tamanho
(WF WI) a diferena em mg entre os pesos iniciais e uniformes e limpar as superfcies de selagem com um pano
finais de cada embalagem teste; isento de fibras. Montar cada recipiente com o batoque, se
(CF CI) a diferena em mg entre os pesos mdios finais aplicvel, e sistema de fechamento. Numerar cada sistema
e iniciais das embalagens controle, sendo essas taxas de fechamento e registrar o peso tarado.
calculadas at dois algarismos significativos. Remover os fechamentos e com o auxlio de uma pipeta,
Limites. Os recipientes de dose unitria individuais, como preencher os recipientes com gua at a capacidade
testados no Mtodo I, so classificados como Classe A mxima. Montar os recipientes com as selagens e aplicar os
se, no mximo, 1 dos 10 recipientes testados exceder 0,5 fechamentos. Se forem utilizadas tampas de rosca, aplicar
mg por dia em taxa de penetrao de umidade e nenhum o torque especificado na Tabela 1 em Recipientes de
exceder 1 mg por dia; so classificados como Classe B se, mltiplas unidades para cpsulas e comprimidos (6.2.3.1)
no mximo, 1 dos 10 recipientes testados exceder 5 mg e estocar os recipientes fechados temperatura de 25 C
por dia e nenhum exceder 10 mg por dia; so classificados 2 C e umidade relativa de (50 2)%. Aps 168 h 1 h
(7 dias), registrar o peso dos recipientes individualmente.
6
como Classe C se, no mximo, 1 dos 10 recipientes
testados exceder 20 mg por dia e nenhum exceder 40 mg Retornar os recipientes ao local de estocagem durante mais
por dia e so classificados como Classe D se os recipientes 168 h 1 h. Aps decorrido o segundo perodo de 168 h
testados no cumprirem nenhum desses requisitos de taxa 1 h, remover os recipientes, registrar os pesos de cada
de penetrao de umidade. sistema de recipiente, individualmente, e calcular a taxa de
penetrao de vapor de gua, em porcentagem de perda de
As embalagens, da forma como so testadas no Mtodo II, peso de gua, para cada recipiente por meio da frmula:
so classificadas como Classe A se nenhuma embalagem
testada exceder 0,5 mg por dia de taxa de penetrao de (W7 - W14) 365 100/(W7-WT)7 = Porcentagem por ano
umidade mdia por blister; so classificadas como Classe Em que
B se nenhuma embalagem testada exceder 5 mg por dia
de taxa de penetrao de umidade em mdia por blister; W7 o peso em mg do recipiente aos 7 dias;
so classificadas como Classe C se nenhuma embalagem W14 o peso em mg do recipiente aos 14 dias;
exceder 20 mg de taxa de umidade em mdia por blister e WT o peso da tara em g;
so classificadas como Classe D se nenhuma embalagem 7 o tempo de teste em dias, aps 7 dias de perodo de
testada cumprir os requisitos de taxa de penetrao de equilbrio. Os recipientes assim testados cumprem os
umidade em mdia por blister acima mencionados. requisitos e so considerados como recipientes firmemente
vedados se a porcentagem de perda de peso de gua exceder
Com o uso do dessecante descrito no Mtodo I e Mtodo 2,5% por ano, no mximo, em 1 dos 10 recipientes testados
II, aps cada 24 horas, os recipientes testes e controles so e no exceder a 5,0%, por ano, em nenhum deles.
pesados; os intervalos de teste adequados para as pesagens
finais, WF e CF, devem ser o seguinte: 24 horas para Os recipientes de dose unitria para lquidos cumprem os
Classe D; 48 horas para Classe C; 7 dias para Classe B e, requisitos de um recipiente firmemente vedado se o peso
no mnimo, 28 dias para Classe A. mdio em perda de peso de gua for inferior ou igual a
2,5% (p/p) por ano e 5% ao final de 2 anos.
6.2.3.3 RECIPIENTES DE DOSE Procedimento para Testes de Recipientes de Doses
MLTIPLA E DE DOSE UNITRIA PARA Mltiplas em Condies de Uso. Selecionar 10 recipientes
LQUIDOS de tipo e tamanho uniformes. Se for utilizada uma selagem
interna, abrir os recipientes, cuidadosamente, e remover
as selagens internas de cada um. Montar cada recipiente
Os padres e os testes apresentados nessa seo so usados com batoque, se aplicvel, e seu sistema de fechamento.
para medir as caractersticas funcionais e de desempenho Numerar cada sistema de fechamento de recipiente e
de recipientes plsticos utilizados para embalar produtos registrar o peso da tara. Abrir e fechar os recipientes 30
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 303
vezes, tendo cuidado para no perder lquido durante esse com um equipamento de registro ou em intervalos de
procedimento. Fechar os recipientes com tampa de rosca aproximadamente 20 nm com um equipamento manual, na
dentro do intervalo de torque apresentado na Tabela 1 amplitude de onda entre 290 a 450 nm.
em Recipientes de mltiplas unidades para cpsulas e
comprimidos (6.2.3.1) e estocar os recipientes selados Limite. A transmisso de luz observada no deve exceder
temperatura de 25 C 2 C e umidade relativa de (50 2)%. aos limites constantes na Tabela 1 para recipientes
Aps 168 h 1 h (7 dias), registrar o peso dos recipientes, destinados ao uso parenteral.
individualmente. Retornar ao local de estocagem durante Tabela 1 - Limites para plsticos classes I-VI.
de mais 168 h 1 h. Aps o segundo perodo de 168 h
1 h, remover os recipientes, registrar os pesos de cada Porcentagem mxima de transmisso de
sistema de recipiente, individualmente, e calcular a taxa de luz em qualquer comprimento de onda
penetrao de vapor de gua, em porcentagem de perda de Tamanho
Nominal entre 290 e 450 nm
peso de gua, para cada recipiente por meio da frmula:
(em mL) Recipientes Recipientes selados
(W7 - W14) 365 100/(W7-WT)7 = Porcentagem por ano termoselados hermeticamente
1 50 25
em que
2 45 20
W7 o peso em mg do recipiente aos 7 dias; 5 40 15
W14 o peso em mg do recipiente aos 14 dias; 10 35 13
WT o peso tarado em g e 7 o tempo de teste em dias, 20 30 12
aps 7 dias de perodo de equilbrio. 50 15 10
Os recipientes assim testados cumprem os requisitos e so Qualquer recipiente, com um tamanho intermedirio dos
considerados como recipientes firmemente vedados se a listados na Tabela 1, apresenta uma transmisso no maior
porcentagem de perda de peso de gua exceder 2,5% por do que o prximo tamanho maior, listado na tabela. Para
ano, no mximo, em 1 dos 10 recipientes testados e no recipientes maiores do que 50 mL, aplicam-se os limites
exceder a 5,0% em nenhum deles. para 50 mL.
hemotoxicidade, toxicidade reprodutiva ou requisitos de aos materiais elastomricos, plsticos e outros polmeros,
teste de biodegradao. quando em contato direto ou indireto com o paciente. A
reatividade biolgica desses materiais pode depender
tanto de suas caractersticas de superfcie, quanto de seus
6.2.4.1 Recipientes PLSTICOS E componentes qumicos extraveis. Os procedimentos de
TAMPAS DE ELASTMEROS teste podem ser realizados com o material, ou um extrato
do material em teste, salvo indicao contrria.
Os recipientes plsticos podem ser constitudos por
polmeros que, por extrao, no apresentam toxicidade Preparao de Extratos
ou no alteram a estabilidade do produto embalado. Os
requisitos de teste de biocompatibilidade de recipientes para Normalmente a avaliao da biocompatibilidade de um
medicamentos so relacionados a Recipientes Plsticos. O correlato inteiro no realista e a utilizao de pores
plstico, ou outras pores polimricas desses produtos so representativas, ou de extratos de materiais selecionados
testados de acordo com os procedimentos estabelecidos em pode ser uma alternativa prtica para a realizao dos ensaios.
Testes de reatividade biolgica in vitro (6.2.5), sendo que Quando pores ou extratos so utilizados, importante
aqueles que no atendem aos requisitos desses testes no considerar que a matria-prima pode sofrer alteraes qumicas
so adequados para um recipiente de medicamentos. Os durante a fabricao; o processamento e a esterilizao de um
materiais que atendem aos requisitos in vitro qualificam- correlato. Ensaios, in vitro, de matria-prima podem servir
se como materiais biocompatveis, sem a necessidade como um importante processo de triagem, mas a avaliao
de outros testes, e podem ser utilizados na fabricao de final da biocompatibilidade do correlato deve ser realizada
um recipiente para medicamentos. Se for solicitada uma com partes do produto, acabado e esterilizado.
designao de classe (classes I-VI) para plsticos ou
outros polmeros, os procedimentos adequados de teste so As extraes podem ser realizadas em vrias temperaturas
realizados conforme apresentado em Testes de reatividade (121, 70, 50, ou 37 C), em vrios intervalos de tempo
biolgica in vivo (6.2.6) e Designao de Classe. (1, 24, ou 72 horas) e em meios de extrao diferentes.
A escolha do meio de extrao para testes in vitro inclui
A biocompatibilidade de um material elastomrico avaliada soluo de cloreto de sdio injetvel a 0,9%, ou meio de
em duas fases, conforme descrito em Procedimentos de cultura de tecidos com ou sem soro. Quando o meio com
Teste Biolgico em Tampas de Elastmero (6.2.2). soro utilizado, a temperatura de extrao no pode exceder
6
37 C. Ao escolher as condies de extrao, selecionar a
Ao contrrio de plsticos ou outros polmeros, um material temperatura, o solvente e as variveis de tempo que melhor
elastomrico que no atende s exigncias da primeira simulem as condies de uso do produto. O desempenho
fase de teste in vitro, pode ser considerado um material dos vrios testes em diversas condies pode ser utilizado
biocompatvel, se for aprovado na segunda fase - in para simular as variaes das condies em uso. Uma
vivo, que consiste no Teste de Injeo Sistmica e o Teste avaliao de biocompatibilidade realizada com o produto,
Intracutneo em Testes de reatividade biolgica in vitro acabado e esterilizado, embora, uma seleo cuidadosa das
(6.2.5). Nenhuma distino de classe ou tipo realizada condies de extrao permita a simulao das condies
entre os materiais elastomricos que atendem aos requisitos de produo e teste da matria-prima.
da primeira fase de teste e aqueles que cumprem o segundo
estgio, qualificando-se como materiais biocompatveis.
Os materiais elastomricos no so classificados nas Teste in vitro
classes de I-VI. Quando testes in vitro so realizados, a amostra
biocompatvel, se as culturas de clulas no apresentarem
6.2.4.2 Correlatos reatividade maior do que a suave (grau 2), conforme
descrito nos Testes de reatividade biolgica in vitro (6.2.5).
Figura 1 - Fluxograma de biocompatibilidade adaptado a partir do FDA Blue Book Memorandum # G95-1.
O objetivo com o fluxograma determinar se os dados fluxograma h exigncia de uma avaliao da toxicidade
disponveis de correlatos anteriormente comercializados de um material exclusivo que no tenha sido utilizado
so suficientes para garantir a segurana do correlato em anteriormente em produtos correlatos. As respostas s
questo. Como indicado no fluxograma, a composio do questes colocadas no fluxograma levam concluso de
material e as tcnicas de fabricao de um produto so que os dados disponveis so suficientes, ou que testes
comparadas com os correlatos j comercializados, que adicionais so necessrios para garantir a segurana
entram em contato direto com o corpo. Alm disso, no
306 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
do produto. As orientaes quanto identificao dos procedimentos apropriados para testes adicionais so fornecidas na
seo Matriz de Seleo de Teste.
Categorizao de Correlatos
Para facilitar a identificao dos procedimentos de testes adequados, os correlatos esto divididos e subdivididos, como
est registrado na Tabela 1 de acordo com a natureza e a extenso do seu contato com o corpo. As principais categorias de
correlatos so de superfcie, comunicao extracorprea e implantveis. Depois, essas classificaes so subcategorizadas
e exemplos de correlatos pertencentes a cada uma das subcategorias (Tabela 1).
Implantveis Tecido ou Osso Correlatos que entram em Exemplos de molde como pinos
contato principalmente ortopdicos, placas, juntas de substituio,
com o osso, o tecido ou prteses de osso, cimentos e dispositivos
com o fluido de tecido. intra-sseos. Exemplos dos ltimos
so marca-passos, dispositivos de
suprimento de medicamentos, sensores
e estimuladores neuromusculares,
tendes de substituio, implantes
mamrios, laringes artificiais, implantes
subperiosteais e grampos de ligao.
Sangue Correlatos em contato Eletrodos de marca passo, fstula
principalmente arteriovenosa artificial, vlvulas
com sangue. cardacas, enxerto de vlvula, cateteres de
administrao interna de medicamentos
e dispositivos de assistncia ventricular.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 307
O nmero da classe indicada aumenta conforme a durao categorias superiores de plsticos ou outros polmeros.
de contato entre o dispositivo e o corpo (risco). Na Embora a designao atribuda defina a classe numrica
categoria de Dispositivos Implantveis, o uso exclusivo da mais baixa de plstico ou outro polmero que pode ser
classe VI obrigatrio. A designao de classes de plstico utilizada no correlato correspondente, o uso de uma classe
baseada nas matrizes de seleo de testes ilustradas nas de plstico numericamente maior opcional. Quando um
Tabelas 1, 2 e 3. correlato pertencer a mais de uma categoria, o plstico, ou
outros polmeros devem satisfazer as exigncias da classe
A atribuio de classe de um plstico ou outro polmero numrica mais alta.
6
a uma subcategoria no se destina a restringir o uso de
Tabela 1 - Matriz de seleo de testes para dispositivos de superfcie.*
(Aguda)
(Subaguda)
Implantao
Intracutnea
Sensibilizao
Citotoxicidade
Biodegradao
Genotoxicidade
Carcinogenicidade
Toxicidade Crnica
Toxicidade Sistmica
Durao do Contato a
Hemocompatibilidade
Toxicidade Subcrnica
ou de Desenvolvimento
Toxicidade Reprodutiva
Irritao ou Reatividade
Pele A X X X
B X X X
C X X X
Mucosa A X X X
Dispositivos
B X X X O O O
de Superfcie
C X X X O X X O O
Superfcies Comprometidas A X X X O
ou No-ntegras B X X X O O O
C X X X O X X O O
________________
a Legenda A: limitada (menos de 24 horas); B: prolongada (de 24 horas a 30 dias); C: permanente (mais de 30 dias).
b Legenda X: Testes de avaliao ISO para considerao; O: testes adicionais que podem ser aplicados.
* Adaptado do FDAs Blue Book Memorandum #G95-1(Tabela 1. Testes de Avaliao Inicial para Considerao e Tabela 2. Testes de Avaliao Complementar para Considerao).
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
309
6
6
Tabela 2 - Matriz de Seleo de Testes para Dispositivos de Comunicao Extracorprea.*
310
(Aguda)
(Subaguda)
Implantao
Intracutnea
Sensibilizao
Citotoxicidade
Biodegradao
Genotoxicidade
Carcinogenicidade
Toxicidade Crnica
Toxicidade Sistmica
Durao do Contato a
Hemocompatibilidade
Toxicidade Subcrnica
ou de Desenvolvimento
Toxicidade Reprodutiva
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Irritao ou Reatividade
Vaso Sanguneo, A X X X X X
Indireto B X X X X O X
C X X O X X X O X X X
Dispositivos de Comunicao com Tecido, A X X X O
Comunicao Osso ou Dentina B X X O O O X X
Extracorprea C X X O O O X X X X
Circulao Sangunea A X X X X O X
B X X X X O X O X
C X X X X X X O X X X
________________
a Legenda A: limitada (menos de 24 horas); B: prolongada (de 24 horas a 30 dias); C: permanente (mais de 30 dias).
b Legenda X: Testes de avaliao ISO para considerao; O: testes adicionais que podem ser aplicados.
* Adaptado do FDAs Blue Book Memorandum #G95-1 (Tabela 1. Testes de Avaliao Inicial para Considerao e Tabela 2. Testes de Avaliao Complementar para Considerao).
Tabela 3 - Matriz de Seleo de Testes para Dispositivos Implantveis.*
Categorias de Correlatos Efeito Biolgico b
(Aguda)
(Subaguda)
Implantao
Intracutnea
Sensibilizao
Citotoxicidade
Biodegradao
Genotoxicidade
Carcinogenicidade
Toxicidade Crnica
Toxicidade Sistmica
Durao do Contato a
Hemocompatibilidade
Toxicidade Subcrnica
ou de Desenvolvimento
Toxicidade Reprodutiva
Irritao ou Reatividade
Tecido ou Osso A X X X O
B X X O O O X X
Dispositivos C X X O O O X X X X
Implantveis Sangue A X X X X X X
B X X X X O X X X
C X X X X X X X X X X
________________
a Legenda A: limitada (menos de 24 horas); B: prolongada (de 24 horas a 30 dias); C: permanente (mais de 30 dias).
b Legenda X: Testes de avaliao ISO para considerao; O: testes adicionais que podem ser aplicados.
* Adaptado do FDAs Blue Book Memorandum #G95-1(Tabela 1. Testes de Avaliao Inicial para Considerao e Tabela 2. Testes de Avaliao Complementar para Considerao).
1Documento da ISO 10993-1:1997 intitulado Biological Evaluation of Medical DevicesPart 1: Evaluation and Testing. [Avaliao Biolgica de Dispositivos Mdicos-Parte 1: Avaliao e Testes].
*Adaptado do FDAs Blue Book Memorandum #G95-1 (Use of International Standard ISO-10993.Biological Evaluation of Medical Devices-Part 1: Evaluation and Testing.) [(Uso das Normas Internacionais da ISO-10993.Avaliao
Biolgica de Dispositivos Mdicos-Parte 1: Avaliao e Testes.)]
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
311
6
312 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
e controle positivo, ou seus extratos, em contato com a e classificada em uma escala de 0 a 4 (Tabela 1). Medir
superfcie solidificada de gar, em duplicata. No utilizar as respostas das culturas celulares da amostra, controle
mais do que trs amostras em cada placa preparada. Incubar negativo e controle positivo. O sistema de ensaio de cultura
todas as culturas a 37 C 1 C, por, no mnimo, 24 horas, de clulas adequado se as respostas observadas forem
em incubadora apropriada. Examinar, visualmente, ou com classificadas como 0 (sem reatividade) para o controle
um microscpio cada cultura ao redor da amostra; controle negativo e no mnimo 3 (moderada) para o controle positivo.
negativo e controle positivo, utilizando colorao adequada, A amostra atende aos requisitos do teste se a resposta no
se necessrio. for superior classificao 2 (suavemente reativa). Repetir o
procedimento, se a adequao do sistema no for confirmada.
Interpretao de Resultados. A reatividade biolgica,
ou seja, m-formao e degenerao celular, descrita
Tabela 1 - Classificao da reatividade para Teste de Difuso em gar e Teste de Contato Direto.
6
de clulas de mamferos conforme Solventes de Extrao.
Preparao da Amostra. Utilizar poro da amostra com Se o tamanho da amostra no puder ser prontamente
superfcie plana no inferior a 100 mm2. medido, pode ser utilizada uma massa de no mnimo 0,1 g
de material elastomrico ou 0,2 g de plstico ou material
Preparao do Controle Positivo. Proceder conforme
polimrico, por mL de meio de extrao. Alternativamente,
descrito em Preparao da Amostra.
para simular condies mais prximas s fisiolgicas,
Preparao do Controle Negativo. Proceder conforme utilizar para a extrao, um meio de cultura de clulas de
descrito em Preparao da Amostra. mamferos, suplementado com soro. Preparar os extratos
por meio do aquecimento a 37 C 1 C por 24 horas, em
Procedimento. Utilizar 2 mL da suspenso de clulas uma incubadora apropriada. Temperaturas superiores podem
preparada conforme descrito em Preparao da Cultura causar a desnaturao das protenas do soro.
Celular, preparar as camadas em placas de 35 mm de
dimetro. Aps a incubao, aspirar o meio das culturas e Preparao do Controle Positivo. Proceder conforme
substitu-lo por 0,8 mL de meio de cultura fresco. Colocar descrito em Preparao da Amostra.
uma nica amostra, controle negativo e controle positivo
Preparao do Controle Negativo. Proceder conforme
em cada uma das duplicatas do meio de cultura. Incubar
descrito em Preparao da Amostra.
todas as culturas 37 C 1 C, por, no mnimo, 24 horas,
em incubadora apropriada. Examinar, visualmente, ou Procedimento. Utilizar 2 mL da suspenso de clulas
com um microscpio cada cultura ao redor da amostra; preparada conforme descrito na Preparao da Cultura
do controle negativo e do controle positivo, utilizando Celular, preparar as monocamadas em placas de 35 mm de
colorao adequada, se necessrio. dimetro. Aps a incubao, aspirar o meio das camadas e
substitu-lo com extrato da amostra; do controle negativo e
Interpretao de Resultados. Proceder conforme a
do controle positivo. Os extratos dos meios suplementados,
interpretao de resultados do Teste de Difuso em gar.
ou no com soro so testados em duplicata, sem diluio
A amostra atende aos requisitos do teste, se a resposta da
(100%). O extrato da soluo de cloreto de sdio injetvel
amostra no for superior classificao 2 (suavemente
diludo com clulas do meio de cultura suplementado
reativa). Repetir o procedimento, se a adequao do
com soro e testado, em duplicata, a uma concentrao
sistema no for confirmada.
de 25%. Incubar todas as culturas a 37 C 1 C por 48
horas, em uma incubadora apropriada. Examinar com
Teste de Eluio um microscpio cada cultura aps 48 horas, utilizando
colorao adequada, se necessrio.
Esse ensaio definido para a avaliao de extratos de
materiais polimricos. O procedimento possibilita a
314 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Interpretao de Resultados. Proceder conforme interpretao de resultados do Teste de Difuso em gar, porm
utilizando a Tabela 2. A amostra atende aos requisitos do teste, se a resposta da amostra no for superior classificao
2 (suavemente reativa). Repetir o procedimento se a adequao do sistema no for confirmada. Para avaliaes de dose-
resposta, repetir o procedimento, utilizando diluies quantitativas do extrato da amostra.
6
0,1 g de elastmero ou 0,2 g de plstico, ou outro material, Classificao de Plsticos. Seis classes de plstico so
para cada mL de fluido de extrao. definidas (Tabela 1), baseadas nas respostas para uma
srie de ensaios in vivo no qual os extratos, materiais e
Trs ensaios so descritos para classificar plsticos e outros vias de administrao so especificados. Esses testes esto,
polmeros, que so aplicveis a materiais e correlatos, diretamente relacionados, com a utilizao final dos artigos
baseando-se em ensaios de reatividade biolgica in vivo. de plstico. Nas preparaes em que os plsticos esto
Teste de Injeo Sistmica e Teste Intracutneo so susceptveis a entrar em contato com os veculos, a escolha
utilizados para materiais elastomricos, especialmente da soluo de extrao representativa. A classificao
para materiais em que o Teste de reatividade biolgica registrada na Tabela 1 resume os testes a serem realizados
in vitro (6.2.5) adequado indicou reatividade biolgica em recipientes para injetveis e em dispositivos mdicos,
significativa. O Teste de Implante usado para verificar caso haja necessidade de classificao.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 315
Com exceo do Teste de Implante, os procedimentos utilizao final, o material deve ser exposto a qualquer
so baseados na utilizao de extratos que, em funo da processo de limpeza ou de esterilizao, os testes devem
resistncia trmica do material, so preparados em uma das ser realizados em uma amostra submetida a tais processos.
trs temperaturas padro: 50, 70 e 121 C. Por essa razo, a
6
Meios de Extrao
designao da classe de um plstico deve ser acompanhada
por uma indicao da temperatura de extrao (por exemplo Soluo de cloreto de sdio injetvel. Ver monografia
IV-121 C, a designao da classe IV, de um plstico correspondente.
extrado a 121 C; I-50 C, a designao da classe I,
de um plstico extrado a 50 C). Os plsticos podem ser Soluo de lcool 1:20 em soluo de cloreto de sdio
classificados nas classes de I a VI, com base nos critrios injetvel.
de resposta registrados na Tabela 1.
Polietilenoglicol 400. Ver monografia correspondente.
Essa classificao no se aplica aos plsticos que so
destinados a serem utilizados como recipientes para leo vegetal. Utilizar leo de gergelim, leo de semente
produtos tpicos ou orais, ou que possam ser utilizados de algodo ou outros leos vegetais apropriados (ver
como parte integrante de uma formulao de medicamento. monografia). Se possvel, obter leos recm-refinados.
As informaes registradas na Tabela 1 no se aplicam aos Utilizar trs animais devidamente preparados e inocular
elastmeros naturais, que so testados somente por meio intracutaneamente em cada animal uma dose de 0,2 mL de
de soluo de cloreto de sdio injetvel e de leos vegetais. leo, em cada um dos 10 stios, e observar os animais por 24,
48 e 72 horas aps a inoculao. Classificar as observaes
O Teste de Injeo Sistmica e o Teste Intracutneo so de cada local, conforme a escala numrica indicada na
elaborados para determinar, respectivamente, as respostas Tabela 2. Em qualquer momento de observao, a resposta
biolgicas sistmicas e as locais; em animais expostos aos mdia nos 3 coelhos (30 stios de inoculao) no deve ser
plsticos e outros polmeros, pela inoculao de dose nica superior a 0,5 para eritema, deve ser inferior a 1,0 para o
de extratos especficos da amostra. O Teste de Implante edema, e em nenhum dos locais pode ocorrer uma reao
elaborado para avaliar a reao do tecido vivo ao plstico tecidual maior que 10 mm de dimetro total. O resduo de
e outros polmeros, por meio da implantao da prpria leo no local da inoculao no deve ser interpretado como
amostra no tecido animal. A preparao adequada e a edema. Quando pressionado suavemente, o edema tecidual
colocao das amostras em condies de assepsia so fica esbranquiado.
importantes na realizao do Teste de Implante.
gua para injetveis. Ver monografia correspondente.
Esses testes so elaborados para aplicao em materiais
nas condies em que so utilizados. Se, antes de sua
316 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
6
extrato ou com extratos distintos. Selecionar e subdividir
tampa de rosca, ou equivalente. A tampa de rosca deve em partes a amostra do tamanho indicado na Tabela
ter revestimento elastomrico apropriado. A superfcie 3. Remover o material particulado de cada amostra
exposta desse revestimento deve ser totalmente protegida subdividida, ou do controle negativo, colocando a amostra
com um disco slido inerte de 50-75 m de espessura. em uma proveta graduada de 100 mL, de vidro de tipo I,
Preparao dos Equipamentos. Limpar completamente limpa e com tampa, e adicionar cerca de 70 mL de gua
toda a vidraria com soluo de limpeza de cido crmico e, para injetveis. Agitar por cerca de 30 segundos e drenar
se necessrio, com cido ntrico quente, seguido de enxgue a gua, repetir essa etapa e secar as peas preparadas para
prolongado com gua. Antes de utilizar na subdiviso da a extrao com leo em uma estufa at 50 C. No limpar
amostra, limpar os equipamentos cortantes por meio de a amostra com pano seco ou molhado ou lavar e enxaguar
um mtodo adequado, como limpezas sucessivas com com solvente orgnico, tensoativo, etc.
acetona e cloreto de metileno. Limpar todos os outros
equipamentos por meio de uma lavagem completa com
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 317
6
Para cada grupo de teste, utilizar apenas os camundongos
50 C, por 72 horas. Possibilitar tempo suficiente para que da mesma origem. gua e alimentos de composio
o lquido do recipiente atinja a temperatura de extrao. conhecidos, comumente utilizados em animais de
Em nenhum momento as condies de extrao devem laboratrio, so permitidos vontade.
causar alteraes fsicas, tais como fuso ou derretimento
das partes de amostra, para no resultar em uma diminuio Procedimento. Antes de retirar a dose de inoculao,
da superfcie disponvel. Uma leve aderncia das partes agitar, vigorosamente cada extrato para assegurar a
pode ser tolerada. Adicionar sempre, individualmente, as distribuio uniforme da matria extrada. As partculas
partes limpas ao meio de extrao. Se os tubos de cultura visveis no devem ser administradas por via intravenosa.
so utilizados para extrao de leo vegetal com autoclave, Em um grupo de teste, inocular em cada um dos cinco
selar adequadamente as tampas de rosca com fita adesiva camundongos a amostra ou o branco, conforme descrito na
sensvel presso. Resfriar at a temperatura ambiente, Tabela 4, diluindo cada g do extrato da amostra preparada
porm, no inferior a 20 C, agitar, vigorosamente, por com polietilenoglicol 400 e o branco correspondente, com
vrios minutos e, imediatamente, decantar cada extrato de 4,1 volumes de soluo de cloreto de sdio injetvel, para
forma assptica, em um recipiente estril e seco. Armazenar obter uma soluo com uma concentrao de cerca de 200
os extratos a uma temperatura entre 20 C e 30 C e no mg de polietilenoglicol por mL.
utilizar para testes aps 24 horas.
Velocidade de
Via de
Extrato ou Branco Dose por kg Inoculao, L
Administrao*
por segundo
Soluo de lcool 1:20 em soluo de cloreto de sdio injetvel 50 mL IV 100
Polietilenoglicol 400 10 g IP
Veculo de medicamentos (quando aplicvel) 50 mL IV 100
50 mL IP
leo vegetal 50 mL IP
________________
* IV = intravenosa (amostra aquosa e branco); IP = intraperitoneal (amostra oleosa e branco).
318 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Observar os animais nos seguintes tempos: imediatamente Examinar os stios de inoculao para evidenciar qualquer
aps a inoculao, aps 4 horas e, no mnimo aps 24, 48 reao tecidual, tais como eritema, edema e necrose. Se
e 72 horas. Se durante o perodo de observao, nenhum necessrio, limpar levemente a pele com lcool diludo
dos animais tratados com o extrato da amostra apresentar para facilitar a leitura dos locais de inoculao. Observar
uma reatividade biolgica significativamente maior que todos os animais 24, 48 e 72 h aps a inoculao.
os tratados com o branco, a amostra satisfaz os requisitos Classificar as observaes em uma escala numrica para o
desse teste. Se dois ou mais camundongos morrerem ou extrato da amostra e para o branco, utilizando a Tabela 2.
apresentarem um comportamento anormal, como convulses Se necessrio, prender novamente o plo durante o perodo
ou prostrao, ou se ocorrer perda de peso corporal superior a de observao. A mdia de pontuao de eritema e edema
2 g em trs ou mais camundongos, a amostra no atende aos para os locais da amostra e do branco so determinadas
requisitos do teste. Se algum animal tratado com a amostra para cada coelho e a cada intervalo de pontuao aps 24,
mostrar somente leves sinais de reatividade biolgica, e se 48 e 72 horas de inoculao. Depois da pontuao referente
apenas um animal apresentar sintomas graves de reatividade a 72 horas, todas as pontuaes de eritema, mais as de
biolgica ou morrer, repetir o teste utilizando grupos de 10 edema so totalizadas, separadamente, para cada amostra
camundongos. No teste de repetio, durante o perodo de e branco. Dividir cada total por 12 (2 animais 3 perodos
observao, todos os 10 animais tratados com a amostra de pontuao 2 categorias de pontuao) para determinar
no devem apresentar nenhuma reatividade biolgica a mdia total para cada amostra versus cada branco
significativa a mais do que os tratados com o branco. correspondente. Os requisitos do teste so cumpridos
se a diferena entre a pontuao mdia da amostra e do
branco for inferior ou igual a 1,0. Se em qualquer perodo
Teste Intracutneo
de observao, a mdia para a reao da amostra
Esse teste foi elaborado para avaliar as respostas locais questionvel por ser maior do que a mdia para a reao
para os extratos dos materiais testados, aps inoculao do branco, repetir o teste utilizando trs coelhos adicionais.
intracutnea nos coelhos. Os requisitos do teste so cumpridos se a diferena entre
a pontuao mdia da amostra e do branco for igual ou
Animal de teste. Selecionar coelhos albinos saudveis, inferior a 1,0.
cujo plo possibilite ser preso rente pele, sendo essa,
fina e livre de irritao ou trauma. Ao lidar com os animais
Teste de Implante
durante os perodos de observao, evitar tocar os locais
6
de inoculao, exceto para diferenciar um edema e um O teste de implante elaborado para avaliao de materiais
resduo de leo. Os coelhos anteriormente utilizados em plsticos e outros polmeros quando entram em contato
testes independentes, como o teste de pirognio (5.5.2.1), direto com tecido vivo. A preparao adequada das tiras
e que repousaram o perodo previsto, podem ser utilizados de implante e a sua implantao devem ser realizadas sob
para esse teste, desde que tenham pele limpa, sem manchas. condies de assepsia. Preparar para implantao 8 tiras
da amostra e 4 tiras de padro . Cada tira deve medir no
Procedimento. Antes de retirar a dose de inoculao, agitar,
mnimo 10 1 mm. As bordas das tiras devem ser o mais
vigorosamente, cada extrato para assegurar a distribuio
suave possvel, para evitar traumas mecnicos adicionais na
uniforme da matria extrada. No dia do teste, prender,
implantao. As tiras de tamanho mnimo especificado so
cuidadosamente, o plo das costas do animal, em ambos
implantadas por meio de uma agulha hipodrmica (calibre
os lados da coluna vertebral, em cima de uma rea de
15 a 19) com ponta intravenosa e um trocarte estril.
teste suficientemente grande. Evitar a irritao e o trauma.
Utilizar uma ou outra agulha pr-esterilizada em que as
Remover o plo solto por meio de vcuo. Se necessrio,
tiras estreis de plstico so inseridas, assepticamente,
antes da inoculao, limpar levemente a pele com lcool
ou inserir cada tira limpa em uma agulha cuja cnula e o
diludo e secar. Mais do que um extrato de um determinado
orifcio central so protegidos com uma tampa adequada e,
material pode ser utilizado por coelho, se for determinado
em seguida, submetidos ao procedimento de esterilizao
que os resultados no sero afetados. Para cada amostra,
apropriado.
utilizar dois animais e inocular via intracutnea, utilizando
um lado do animal para a amostra e o outro para o branco, Animal de teste. Selecionar coelhos adultos saudveis
conforme descrito na Tabela 5. Diluir cada g do extrato da com peso mnimo de 2,5 kg, e que possuam msculos
amostra preparada com polietilenoglicol 400, e o branco paravertebrais suficientemente grandes para possibilitar a
correspondente com 7,4 volumes de soluo de cloreto de implantao das tiras de teste. No utilizar nenhum tecido
sdio injetvel para obter uma soluo com concentrao muscular alm daquele situado na rea paravertebral. Os
de cerca de 120 mg de polietilenoglicol por mL. animais devem ser anestesiados com um agente anestsico
comumente utilizado para um grau de profundidade
Tabela 5 - Teste Intracutneo.
suficiente para impedir movimentos musculares, como
espasmos.
Nmero de
Extrato ou Dose, L
Locais (por Procedimento. Realizar o teste em uma rea limpa. No dia
Branco por stio
animal) do teste ou at 20 horas antes, prender o plo dos animais
Amostra 5 200 em ambos os lados da coluna vertebral. Remover os plos
Branco 5 200 soltos por meio de vcuo. Antes da inoculao, limpar
levemente a pele com lcool diludo e sec-la. Implantar
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 319
quatro tiras da amostra nos msculos paravertebrais, e registrar a largura da cpsula, arredondando para o 0,1
distantes cerca de 2,5 cm uma da outra, em um lado da mm mais prximo, a partir da periferia do espao ocupado
coluna de cada um dos dois coelhos, de 2,5 a 5,0 cm da pelo implante do controle ou da amostra at a periferia da
linha mediana e paralela coluna vertebral. De forma cpsula. Pontuar o encapsulamento, conforme a Tabela 6.
semelhante, implantar duas tiras padro no msculo
Tabela 6 - Avaliao de encapsulamento no Teste de Implante.
oposto de cada animal. Inserir um cateter estril na agulha
para segurar a tira de implante no tecido com a retirada
da agulha. Aps a implantao de uma tira, se ocorrer Largura da Cpsula Pontuao
um sangramento excessivo, colocar um outro pedao Nenhuma 0
em duplicata em outro local. Manter os animais por um at 0,5 mm 1
perodo mnimo de 120 horas, e sacrific-los no final do 0,61,0 mm 2
perodo de observao com uma overdose de um agente 1,12,0 mm 3
anestsico ou de outros agentes adequados. Possibilitar Superior a 2,0 mm 4
transcorrer um tempo suficiente para cortar o tecido, sem
sangramento. Examinar macroscopicamente a rea do
Calcular as diferenas entre a mdia de pontuao para
tecido ao redor da parte central de cada tira de implante.
os stios de amostra e de controle. Os requisitos do teste
Utilizar uma lente de aumento e uma fonte de luz auxiliar.
so cumpridos se a diferena no for superior a 1, ou se a
Observar se h hemorragias, necroses, descoloraes e
diferena para mais que um dos quatro locais de implante,
infeces nos locais de implante da amostra e do controle e
no exceder a 1 em qualquer um dos animais.
registrar as observaes. Se houver encapsulamento, medir
6
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 321
7
estreis submetidos esterilizao terminal alcancem uma detectar quaisquer mudanas.
probabilidade de sobrevivncia microbiana de 106. Com
produtos termoestveis, a abordagem frequente exceder
o tempo crtico necessrio para conseguir a probabilidade 7.1.1 MTODOS DE
de sobrevivncia microbiana de 106 (sobremorte).
Contudo, para produtos termossensveis, a abordagem de ESTERILIZAO
sobremorte no pode ser empregada e o desenvolvimento
do ciclo de esterilizao depende do conhecimento da Com um mtodo de esterilizao tem-se por finalidade
carga microbiana do produto. remover, ou destruir todas as formas de vida, animal ou vegetal,
macroscpica ou microscpica, saprfitas ou no, do produto
O valor D, tempo de reduo decimal, o tempo em minutos
considerado, sem garantir a inativao de toxinas e enzimas
necessrio para reduzir a populao microbiana em 90%,
celulares. O procedimento selecionado para atingir o nvel de
ou 1 ciclo logartmico, a uma condio especfica, isso ,
garantia de esterilidade depende do conhecimento da natureza
para uma frao sobrevivente de 1/10. Portanto, onde o
do material a ser esterilizado; do processo de esterilizao a ser
valor D de uma preparao de indicador biolgico de, por
empregado e das alteraes que podem ocorrer no material,
exemplo, esporos de Geobacillus stearothermophilus de
em funo da esterilizao. O conhecimento do tipo, da
1,5 minutos sob os parmetros totais de processo, isto ,
quantidade e da fonte dos contaminantes nos produtos, antes
a 121 C, se for tratado por 12 minutos sob as mesmas
da esterilizao, e a aplicao de mtodos para minimizar tal
condies, pode-se declarar que o incremento de letalidade
contaminao e preveni-la ps-processamento contribuem
de 8 D. A aplicao desse incremento na esterilizao do
para assegurar o xito da esterilizao.
produto depende da carga microbiana inicial. Assumindo
que a carga microbiana do produto apresenta resistncia Nesse captulo esto registrados conceitos e princpios
ao processo de esterilizao igual resistncia do envolvidos no controle de qualidade de produtos que
indicador biolgico e que a carga inicial do produto devem cumprir a exigncia de esterilidade e inclui
de 102 micro-organismos, o incremento de letalidade de descrio dos mtodos de esterilizao e instrues para
2 D reduziria a carga microbiana a 1 (teoricamente 100) processo assptico.
e, consequentemente, 6 D adicionais resultaria em uma
322 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
7
exposio ao calor. Nos processos contnuos, usualmente,
precaues de modo a atingir um nvel de segurana de
h necessidade de um estgio de resfriamento anterior
esterilidade de 106 ou melhor. Combinaes de tempo
ao processo de envase. Em funo do menor tempo de
e temperatura devem ser estabelecidas baseadas em
exposio do material. Com o programa de validao
fatores como natureza do material e sua termolabilidade,
devem-se abranger parmetros como a uniformidade de
penetrabilidade do vapor no produto a ser esterilizado e
temperatura e o tempo de permanncia.
outros parmetros definidos no processo de validao.
Quando for utilizada temperatura de esterilizao diferente O calor seco em temperaturas maiores que 220 C pode
de 121 C, o conceito de F0 deve ser empregado. O F0 ser utilizado para a esterilizao e despirogenizao de
em uma temperatura particular diferente de 121 C, o vidraria. Nesse caso, um desafio com endotoxina bacteriana
tempo em minutos necessrio para fornecer a letalidade deve fazer parte do programa de validao, demonstrando
equivalente quela fornecida a 121 C durante um referido uma reduo de no mnimo 3 ciclos logartmicos de
tempo. F0 uma medida da eficcia esterilizante, isso , endotoxina resistente ao calor, ou seja, testar materiais
o nmero de minutos de esterilizao trmica por vapor inoculados com no mnimo 1000 unidades de endotoxina
determinada temperatura fornecida a um recipiente ou bacteriana. O teste, com lisado de Limulus, pode ser usado
unidade de produto num dado valor Z. para demonstrar que a endotoxina foi inativada a no
mais do que 1/1000 da quantidade original, sendo que o
Para garantir a eficincia do processo de esterilizao, a
remanescente de endotoxina medido para garantir a
distribuio da carga na cmara deve ser feita de maneira
reduo de 3 ciclos logartmicos.
a propiciar o contato do vapor com as regies de mais
difcil acesso. Para materiais esterilizados por calor
mido, aceitvel que se alcance uma probabilidade 7.1.1.1.2 Esterilizao por radiao ionizante
de sobrevivncia microbiana da ordem de 10-6. Para
produtos termoestveis, o tempo necessrio para atingir
As radiaes ionizantes so emisses de alta energia,
a condio anterior pode ser excedido, resultando em
sob a forma de ondas eletromagnticas ou partculas,
sobremorte, o que no se aplica a produtos que possam
que ao se chocarem com os tomos do material irradiado
sofrer alterao em funo da exposio excessiva ao
alteram sua carga eltrica por deslocamento de eltrons,
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 323
transformando os tomos irradiados em ons positivos ou O procedimento para seleo da dose de radiao,
negativos. Quando essas radiaes atravessam as clulas baseado na avaliao da resistncia dos micro-
criam hidrognio livre; radicais hidroxilas e alguns organismos constituintes da carga microbiana do produto
perxidos, que por sua vez podem causar diferentes leses a ser esterilizado, possibilita uma determinao mais
intracelulares. As principais fontes de radiao so: raios representativa da resistncia dessa ao se trabalhar com
alfa; beta; gama e raios X. Os dois tipos de radiao micro-organismos com diferentes suscetibilidades
ionizante em uso so decaimento de radioistopo (radiao radiao. Esse procedimento exige a enumerao da
gama) e radiao por feixe de eltrons. Os produtos so populao microbiana em amostragem representativa de
expostos a uma radiao ionizante na forma de radiao diferentes lotes de produto. Com o conhecimento da carga
gama de uma fonte radioisotpica adequada (por exemplo, microbiana, a dose de radiao estabelecida baseando-se
cobalto 60) ou de um feixe de eltrons energizados por em tabela disponvel na literatura. Um outro mtodo que
meio de um acelerador de eltrons. possibilita o estabelecimento da dose de radiao baseia-se
no emprego de incrementos de doses de radiao at obter-
Alm da possibilidade do processamento a baixas se, no mximo, uma amostra positiva em 100 unidades
temperaturas, o que possibilita a esterilizao de irradiadas. Essa informao prov a base para extrapolao
produtos termossensveis, a esterilizao por radiao dessa dose e obteno da dose de radiao. Avaliaes
ionizante possui vantagens como a baixa reatividade peridicas devem ser feitas para garantir que os valores
qumica e o fato de existirem poucos parmetros a serem estabelecidos continuam sendo efetivos (referncia: ISO
controlados, sendo imprescindvel o controle da dose de 11137-1: 2006 - Sterilization of health care products
radiao absorvida. A dose de radiao estabelecida para - Radiation - Part 1: Requirements for development,
a esterilizao deve garantir o no comprometimento validation and routine control of a sterilization process for
dos materiais a serem esterilizados. Para a radiao medical devices).
gama, a validao do processo inclui o estabelecimento
da compatibilidade do material, o estabelecimento do A eficincia do ciclo de esterilizao deve ser avaliada,
modelo de carregamento do produto e o mapeamento de periodicamente, pela determinao da carga microbiana do
dose no recipiente de esterilizao, identificando as zonas produto, ou pelo emprego de indicador biolgico e pelo
de doses mxima e mnima de radiao, a definio do uso de dosmetros calibrados.
tempo de exposio e a comprovao da aplicao da
dose de esterilizao requerida. Para irradiao por feixe
de eltrons, devem ser controlados, ainda, voltagem, 7.1.1.1.3 Esterilizao por filtrao
corrente, velocidade da esteira transportadora e dimenso
de varredura do feixe de eltrons. Para esse processo de A filtrao empregada para esterilizao de solues
esterilizao, a dose absorvida de referncia de 25 kGy, termossensveis por remoo fsica dos micro-organismos
porm em algumas situaes h necessidade de seleo de contaminantes. O material filtrante no pode liberar fibras
uma dose maior ou menor. A dose escolhida deve oferecer ou materiais extraveis indesejveis para a soluo filtrada,
um nvel de letalidade adequado e reprodutvel quando o o que restringe a natureza do elemento filtrante a vidro,
processo operado rotineiramente dentro das tolerncias
estabelecidas. Procedimentos e precaues devem ser
aplicados para atingir um nvel de garantia de esterilidade
metal, polmeros sintetizados e membranas polimricas.
A montagem de um filtro consiste de uma matriz porosa
inserida em um abrigo impermevel. A eficincia de um
7
de 106 ou melhor. meio, ou substrato filtrante depende do tamanho do poro
do material, da adsoro de micro-organismos sobre ou
Para validar a eficcia dessa esterilizao, especialmente dentro da matriz do filtro e do mecanismo de peneira ou
quando se utilizam doses menores, necessrio determinar excluso. O efeito de excluso por tamanho funo da
a resistncia radiao da carga microbiana do produto. abertura (dimetro) dos poros, e a adsoro depende da
Padres de carregamento de produto especfico e a composio, espessura do elemento filtrante e fluido que
distribuio de doses mnimas e mximas absorvidas devem est sendo filtrado.
ser estabelecidos. As doses absorvidas so normalmente
medidas por meio de dosmetros especficos, como O tamanho dos poros das membranas filtrantes estimado
suporte plstico padronizado que mostra intensificao da por valor nominal que reflete a capacidade da membrana
cor proporcional quantidade de radiao absorvida. A do filtro de reter micro-organismos representados por
abordagem de ciclo fracionado fornece os dados utilizados cepas especficas. A filtrao para fins de esterilizao ,
para determinar o valor D10 do indicador biolgico, normalmente, realizada com membranas de graduao
informao aplicada para extrapolar a quantidade de de tamanho de poro nominal de 0,2 mm, ou menor. Essas
radiao absorvida, para estabelecer uma probabilidade membranas de filtrao esterilizante, classificadas como
adequada de sobrevivncia microbiana. Atualmente, a dose 0,22 mm ou 0,2 mm, dependendo do fabricante, so
se baseia na resistncia radiao da carga microbiana capazes de reter 100% de uma cultura contendo 107 micro-
heterognea natural contida no produto a ser esterilizado. organismos de Brevundimonas diminuta ATCC 19146, por
Os procedimentos de validao podem usar a exposio de cm2 de superfcie de membrana filtrante, sob uma presso
produto inoculado, usando organismos resistentes, como mnima de 30 psi (2,0 bar).
Bacillus pumilus, ou exposio de amostras de produto
acabado da linha de produo dose subletal de processo. O usurio responsvel pela escolha do filtro em funo da
natureza do material a ser filtrado, que atenda necessidade
do processo de esterilizao, devendo, tambm, determinar
324 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
se os parmetros empregados na produo influenciaro o xido de etileno. Entre as desvantagens desse agente
a eficincia da reteno microbiana. Uma vez que a esterilizante esto suas propriedades mutagnicas; a
eficincia do processo de filtrao, tambm, influenciada possibilidade de resduos txicos nos materiais tratados
pela biocarga da soluo a ser filtrada, importante a e sua natureza altamente inflamvel, exceto quando
determinao da qualidade microbiana das solues antes em certas misturas com gases inertes. O processo de
da filtrao, bem como o estabelecimento de parmetros esterilizao geralmente realizado em uma cmara
como presso; taxa de fluxo e caractersticas da unidade pressurizada projetada de forma semelhante autoclave,
filtrante. mas com caractersticas especficas como sistema para
desgaseificao aps a esterilizao e minimizao da
O valor de reduo logartmica, tambm, pode ser utilizado exposio dos operadores ao gs.
para avaliar a capacidade de reteno da membrana
filtrante. Por exemplo, um filtro de 0,2 mm, que pode O programa de qualificao do processo de esterilizao
reter 107 micro-organismos de uma cepa especfica, ter com xido de etileno mais amplo que de outros processos
um valor de reduo logartmica de, no mnimo, 7, sob de esterilizao, visto que alm da temperatura, devem
condies declaradas. ser controlados a umidade; vcuo / presso positiva e a
concentrao de xido de etileno. importante determinar
As membranas filtrantes comercialmente disponveis e demonstrar que todos os parmetros crticos do processo
incluem acetato de celulose, nitrato de celulose, esto adequados no interior da cmara de esterilizao
fluorcarbonato, polmeros acrlicos, polister, durante todo o ciclo. Como os parmetros de esterilizao
policarbonato, cloreto de polivinila, vinil, nylon, polytef aplicados aos produtos a serem processados so crticos,
e ainda, membranas metlicas. Os filtros de membrana, recomendvel o pr-condicionamento da carga para
por serem filmes polimricos, oferecem muitas vantagens minimizar o tempo de exposio temperatura requerida. O
e algumas desvantagens quando comparados aos filtros programa de validao geralmente realizado empregando
de profundidade como porcelana ou material sinterizado. o produto inoculado, ou produto simulado inoculado
Como boa parte da superfcie da membrana um espao com preparaes apropriadas como esporos de Bacillus
vazio ou aberto, a correta montagem e esterilizao do atrophaeus. Os indicadores biolgicos, normalmente,
filtro proporcionam a vantagem de uma alta taxa de so empregados para estabelecer a probabilidade final
fluxo. Uma desvantagem que, devido fragilidade da de sobrevivncia microbiana, usando o conceito de ciclo
membrana, deve-se garantir a ausncia de ruptura durante fracionado, para se projetar um ciclo de esterilizao com
a montagem, esterilizao, ou uso. xido de etileno, e devem ser usados em cargas do produto,
ou produto simulado, com cmara cheia.
O sistema de filtrao deve ser testado antes e aps o
processo de filtrao para garantir a manuteno de sua O indicador biolgico deve ser empregado no
integridade durante o processo de filtrao. Testes tpicos monitoramento de ciclos de rotina, alm do planejamento
de uso incluem o teste do ponto de bolha, o teste de fluxo do ciclo de esterilizao por xido de etileno. Outro aspecto
de ar difusivo, o teste de reteno sob presso e o teste importante do planejamento do processo de esterilizao
de fluxo progressivo. O teste de ponto de bolha consiste
7
a definio do tipo de acondicionamento do material a ser
em teste no destrutivo, cuja denominao decorre da processado e sua distribuio na cmara de esterilizao,
visualizao de bolhas aps a aplicao de uma determinada devido limitada capacidade de difuso do xido de
presso sobre o filtro. Como exemplo, aps a filtrao de etileno em reas mais internas do produto.
cerca de dois litros de gua destilada estril, aplica-se
presso constante de nitrognio, durante 5 minutos para
membranas de ster de celulose de 0,2 mm. Para cada tipo 7.1.2 Validao do
de filtro h um valor limite de presso a ser suportado, sem
que apresente a formao de bolhas, indicando a resistncia processo de esterilizao
do material filtrante. Os testes devem ser correlacionados
com a reteno de micro-organismos. Testes adicionais A validao deve demonstrar de forma documentada que o
realizados pelo fabricante do filtro, como o de desafio processo de esterilizao estabelecido ir, consistentemente,
microbiano, no so normalmente repetidos pelo usurio. fornecer produtos que atendam o nvel de garantia de
esterilidade requerido. Os produtos esterilizados de acordo
7.1.1.2 MTODO QUMICO com o processo validado devem atender as especificaes
pr-determinadas e as caractersticas de qualidade
relacionadas funcionalidade e segurana.
7.1.1.2.1 Gs xido de etileno Uma vez o processo validado, ele dever ser revalidado,
periodicamente, e aps alteraes de produto; equipamentos
A esterilizao por gs pode ser o mtodo de escolha para e processo, que possam comprometer o nvel de garantia de
materiais que no resistem a altas temperaturas como no esterilidade especificado.
processamento por calor seco ou calor mido. O agente Os principais elementos da validao so: Qualificao de
ativo geralmente empregado na esterilizao por gs Instalao; Qualificao de Operao e Qualificao de
Desempenho.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 325
7
da qualificao planejado, realizado e revisado. A
documentao que proporciona suporte qualificao de o nvel de garantia de esterilidade pr-determinado para
instalao inclui descrio das caractersticas fsicas e as cargas definidas de produtos; que o equipamento opera
operacionais do equipamento; seus componentes e servios. consistentemente de acordo com critrios pr-determinados
Desenhos e diagramas de processo e instrumentao e que o produto atende aos requisitos especificados de
devem ser verificados contra a configurao proposta e segurana, qualidade e desempenho.
atualizados, quando necessrio. Sistemas de segurana A qualificao de desempenho compreende avaliaes
aplicveis devem ser avaliados para garantir desempenho; fsicas e microbiolgicas que demonstrem a eficcia e
qualidade e segurana dos equipamentos e operadores. reprodutibilidade do processo de esterilizao, mantendo
A qualificao da instalao necessria para novos as caractersticas especificadas do produto.
equipamentos, ou quando o esterilizador existente Nos estudos fsicos devem ser considerados: critrios como
substitudo ou realocado. A qualificao deve ser refeita carga teste representativa do processo; embalagem idntica
a intervalos de tempo definidos, e ao menos parcialmente ao produto; pr-condicionamento; perfil de temperatura e
quando ocorrerem modificaes que possam alterar a temperatura no ponto de referncia; resposta de indicadores
eficcia do processo de esterilizao, como substituio qumicos; integridade de embalagem; documentao; entre
ou reforma de equipamentos, ou partes, modificaes nos outros. A carga para esterilizao deve ser estabelecida
suprimentos de processo e alterao em fonte radioativa e documentada, levando em considerao parmetros
como configurao, distribuio, orientao, densidade,
7.1.2.2 Qualificao de Operao dimenso, composio do material, uso e tipo de pallets.
O produto ou material com caractersticas similares ao
produto (produto simulado) usado para a qualificao
Na qualificao de operao deve demonstrar-se que o deve ter embalagem idntica ao produto e representar, no
equipamento instalado capaz de realizar o processo de mnimo, o pior caso da carga de rotina de produo, ou
esterilizao especificado dentro dos intervalos definidos. seja, a configurao mais difcil de esterilizar. Critrios
O intervalo de parmetros e os limites de operao devem para reutilizao de carga devem ser definidos, sendo que
ser estabelecidos na definio do processo. Antes da
326 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
ela deve ser equilibrada s condies ambientais ou aeradas para emprego como indicadores biolgicos uma vez
antes do reuso. Com os dados gerados deve demonstrar- que, com exceo da radiao ionizante, esses micro-
se a conformidade com os parmetros fsicos e qumicos organismos so, significativamente, mais resistentes aos
aplicveis. A relao entre as condies de posies de processos de esterilizao do que os micro-organismos
monitoramento durante a qualificao e a rotina deve ser da carga microbiana natural do produto. Um indicador
estabelecida. biolgico pode ser usado na qualificao de desempenho
do equipamento de esterilizao e no desenvolvimento
Na qualificao de desempenho fsico deve demonstrar-se e estabelecimento do processo de esterilizao para
a reprodutibilidade do processo com mnimo de trs ciclos um produto especfico. Os indicadores biolgicos so
consecutivos para verificar o atendimento de todos os usados em processos de obteno de produto estril em
critrios de aceitao. seu recipiente final e na esterilizao de equipamentos;
materiais e componentes de embalagem, empregados no
Na qualificao microbiolgica deve seguir-se requisitos
processo assptico. Os indicadores biolgicos podem,
especficos para cada agente esterilizante. Diferentes
ainda, ser utilizados para monitorar ciclos de esterilizao
mtodos podem ser usados na validao do processo de
em revalidaes peridicas e para avaliar a capacidade do
esterilizao e incluem trs categorias: processo baseado
processo usado na descontaminao de isoladores ou salas
na inativao da carga microbiana natural (biocarga);
limpas.
processo combinado com base na inativao de micro-
organismo referncia e conhecimento da carga microbiana
(biocarga e indicador biolgico) e processo baseado na
inativao de micro-organismo referncia (sobremorte ou 7.2.1 Tipos de indicadores
overkill). Indica-se que o desafio microbiano seja executado biolgicos
nos parmetros mnimos de processo e deve atender o nvel
de garantia de esterilidade para todas as combinaes de
carga, podendo usar o pior caso de produto representante H, pelo menos, trs tipos de indicadores biolgicos, sendo
das famlias. Para cada tipo de carga a ser esterilizada, que cada tipo incorpora uma espcie microbiana com
a reprodutibilidade do processo deve ser demonstrada resistncia conhecida ao processo de esterilizao.
empregando-se, pelo menos, trs ciclos consecutivos. Os Um tipo de indicador biolgico inclui os esporos que
indicadores biolgicos usados devem ser posicionados no so adicionados a um suporte ou carreador (disco, ou
e/ou sobre o produto em localizao definida. tira de papel de filtro, vidro, plstico, ou outro material)
A qualificao de desempenho deve ser repetida quando embalado de forma a manter a integridade e viabilidade
alteraes significativas forem propostas, como mudanas do material inoculado. Os carreadores e embalagens
em desenho e embalagem do produto; configurao primrias no devem conter qualquer tipo de contaminao
ou densidade de carga e equipamento ou processo de qumica, fsica ou microbiolgica que possa comprometer
esterilizao. Os efeitos dessas mudanas nos estgios de o desempenho e estabilidade do indicador biolgico e
validao do processo de esterilizao devem ser avaliados. no podem sofrer alterao em funo do processo de
e tempo de destruio do micro-organismo devem ser suspenses estoque devem conter, predominantemente,
determinados. esporos latentes (no germinativos) mantidos em lquido
no nutritivo. O produto final fornecido pelos fabricantes
Valor Z a elevao de temperatura em graus, necessria (suspenso microbiana, carreador inoculado ou indicador
para reduzir o valor D em 90%, ou produzir a reduo biolgico) no deve conter micro-organismo diferente do
de um ciclo logartmico na curva de resistncia trmica. micro-organismo teste em nmero suficiente que possa
O terceiro tipo o indicador biolgico auto contido, afetar o produto. O sistema para minimizar a presena de
apresentado de tal forma que a embalagem primria micro-organismos diferentes do micro-organismo teste
destinada para incubao aps a esterilizao contenha deve ser validado, monitorado e registrado.
o meio de crescimento requerido para a recuperao do
micro-organismo. Nesse caso, o sistema constitudo pelo
indicador biolgico e o meio de crescimento do micro- 7.2.3 Seleo do Indicador
organismo deve ser resistente ao processo de esterilizao
e deve possibilitar a penetrao do agente esterilizante. Biolgico para o processo
O valor D, tempo de destruio do micro-organismo e o
tempo de sobrevivncia devem ser determinados para o
de esterilizao
sistema e no somente para a tira ou disco de papel que
contm os micro-organismos. Aps a esterilizao, A escolha do indicador biolgico requer conhecimento de
permitido o contato das tiras ou discos, contendo os micro- sua resistncia ao processo de esterilizao especfico para
organismos, com o meio de cultura. garantir que o sistema do indicador biolgico proporciona
desafio maior que o da carga microbiana no produto.
O indicador biolgico auto contido, tambm, pode
consistir de uma suspenso de esporos em um meio de O uso eficiente dos indicadores biolgicos para
cultura contendo indicador de pH que permita visualizar a desenvolvimento do ciclo, processo e validao, ou para
presena ou a ausncia de crescimento aps a incubao. monitoramento do processo de esterilizao de rotina requer
A resistncia do sistema auto contido dependente da conhecimento do material a ser esterilizado incluindo seus
penetrao do agente esterilizante na embalagem, que componentes e material de embalagem. Apenas indicadores
deve ser controlada pelo fabricante por meio do desenho biolgicos reconhecidos e especificados nas monografias
e composio do material que constitui a embalagem, devem ser usados no desenvolvimento ou validao de
ampola ou recipiente. O indicador biolgico auto contido um processo de esterilizao para garantir que o indicador
na forma de ampola pode ser incubado diretamente aps biolgico selecionado propicie um desafio maior ao
a exposio ao processo de esterilizao, nas condies processo de esterilizao do que a carga microbiana no
especificadas. A ausncia ou a presena do crescimento produto.
microbiano determinada visualmente, a partir da
mudana de colorao de um indicador incorporado ao Nos casos do uso de indicadores biolgicos com
meio, ou pela turbidez decorrente do desenvolvimento do caractersticas diferentes daqueles comercialmente
disponveis, pode cultivar-se micro-organismos descritos
7
micro-organismo; ou ainda, pelo exame microscpico do
meio inoculado. O indicador biolgico auto contido deve em literatura cientfica para preparo de indicadores
suportar o transporte e o manuseio durante o uso sem que biolgicos. O usurio deve ser capaz de determinar os
ocorram quebras ou perda do inculo original. Durante valores D e Z para os indicadores domsticos. Quando
ou aps o processo de esterilizao, o material do qual indicador biolgico no comercial for utilizado, a
constitudo o sistema auto contido no deve reter ou liberar populao, pureza e validade devem ser confirmadas
qualquer substncia que possa inibir o crescimento de para garantir a legitimidade dos testes a serem realizados
micro-organismos sobreviventes. A capacidade promotora usando esse indicador.
de crescimento do meio de cultura aps exposio ao Quando a definio do processo de esterilizao
processo de esterilizao deve ser comprovada. baseada na carga microbiana do produto, essa deve ser
quantificada e as resistncias do indicador biolgico e
da carga microbiana devem ser comparadas. O processo
7.2.2 Preparao do de esterilizao deve resultar em nvel de garantia de
Indicador Biolgico esterilidade de no mnimo 10-6.
dos micro-organismos presentes na carga microbiana do inativao microbiana, uma vez que a taxa de inativao de
produto. Ao assumir uma carga microbiana de 106, um endotoxinas bacterinas bem mais lenta que a inativao
processo de sobremorte resultar em uma probabilidade dos esporos de Bacillus atrophaeus. Na prtica, uma
de no esterilidade menor que 10-6. O uso do processo de reduo da ordem de pelo menos trs ciclos logartmicos
sobremorte e sua validao podem minimizar ou evitar do nvel de endotoxina resulta em uma probabilidade de
a necessidade de quantificao e identificao da carga no esterilidade menor que 10-6.
microbiana do produto.
Para monitorar os processos de esterilizao empregando
Para o processo de calor mido, esporos de cepas radiao ionizante, esporos de Bacillus pumilus tm sido
apropriadas de Geobacillus stearothermophilus esto usados apesar de no ser prtica usual. O mtodo de
disponveis comercialmente como indicadores biolgicos. estabelecimento da dose de radiao, mais empregado,
Outros micro-organismos formadores de esporos no usa indicadores biolgicos. Alguns micro-organismos
resistentes ao calor mido como Clostridium sporogenes, na carga microbiana do material a ser esterilizado, podem
Bacillus atrophaeus e Bacillus coagulans, tambm, podem apresentar maior resistncia ao processo de esterilizao
ser utilizados no desenvolvimento e validao de um por radiao em comparao com os esporos de Bacillus
processo de esterilizao por calor mido. pumilus.
Para a validao do processo de esterilizao, por via Para o processo de esterilizao por xido de etileno so
calor seco, podem ser empregados esporos de Bacillus comumente utilizados esporos de subespcies de Bacillus
atrophaeus. Durante a validao podem ser realizados atrophaeus var. niger, quando se emprega xido de etileno
estudos para avaliao da despirogenizao no lugar da 100%, ou diferentes misturas de gases.
7 _______________________
7.2.4.2 Responsabilidade do
7.2.4.1 Responsabilidade do Usurio
Fabricante
proceder ao registro das condies de uso, das verificaes e biolgico. Durante o processo de validao, em vrios
do desempenho do indicador biolgico. locais do produto devem ser inoculados o indicador
biolgico, garantindo o desafio tanto da embalagem quanto
Aps o recebimento de um lote de indicador biolgico, o do produto nela contido, para que se assegure um nvel
usurio deve quantificar a carga de esporos por unidade de garantia de esterilidade de 10-6 para o produto e para
e proceder verificao da morfologia e pureza dos a embalagem. Pode ser necessrio, por meio de estudos
micro-organismos, confirmando, pelo menos, o gnero do laboratoriais, determinar se os componentes do produto
micro-organismo. As informaes referentes ao valor D; so mais difceis de esterilizar do que, por exemplo,
s condies de armazenagem; ao prazo de validade e uma soluo, ou medicamento nele contido. A fase de
estabilidade do indicador biolgico devem ser observadas qualificao de desempenho do produto deve identificar
e registradas. O usurio pode considerar a necessidade de os parmetros mais importantes do processo para
auditar o valor D antes da aceitao do lote de indicador inativao dos micro-organismos nos locais mais difceis
biolgico. Para armazenamento por longo perodo, de esterilizar. A sobrevivncia do indicador biolgico
importante verificar o valor D e a estabilidade da contagem. consequncia da resistncia e tamanho da populao
No caso de armazenamento da suspenso de esporos, por microbiana. Portanto, nem sempre um indicador biolgico
perodo superior a 12 meses, sob condies documentadas, com populao de 106 necessrio para confirmar um
a confirmao da contagem e a comprovao da resistncia nvel de garantia de esterilidade de 10-6. O uso apropriado
dos esporos devem ser realizadas, a menos que o dos indicadores biolgicos para confirmar que os
desempenho de uma cultura anterior tenha sido validado parmetros estabelecidos no processo de esterilizao
aps longo perodo de armazenamento. Os resultados garantem o nvel de segurana de esterilidade desejado.
dos ensaios de resistncia e contagem de esporos devem Na esterilizao por calor mido, o emprego do indicador
estar dentro da faixa de aceitao estabelecida durante a biolgico confirma a letalidade determinada por parmetros
aprovao do lote de suspenso de esporos. fsicos. Indicadores biolgicos com valor D relevante
e populaes substancialmente menores que 106 so
Produtos no comerciais adequados para validar muitos processos de esterilizao
e descontaminao. importante que os usurios estejam
O usurio pode decidir cultivar micro-organismos para capacitados para justificar, cientificamente, a escolha de
desenvolvimento de indicadores biolgicos a serem um indicador biolgico.
empregados no desenvolvimento ou na validao de um
processo de esterilizao. No caso do usurio tornar-se
um produtor, as exigncias de desempenho do indicador 7.3 Processo Assptico
biolgico devem ser satisfeitas. Se um sistema de indicador
biolgico for empregado para o desenvolvimento de
um novo processo de esterilizao ou validao de um Embora a esterilizao terminal de um produto embalado
processo j existente, os mesmos critrios de desempenho seja o procedimento que garanta riscos mnimos de
para produtos comerciais devem ser cumpridos. contaminao microbiana na produo de um lote, existem
7
classes de produtos que no podem ser esterilizados no
seu acondicionamento final e que devem ser preparados
7.2.4.3 Preparao da Suspenso de empregando processo assptico. Esse processo projetado
Esporos de forma a prevenir a contaminao dos componentes
estreis por micro-organismos viveis, ou ainda, na fase
intermediria da produo, quando algum componente
Os registros da identificao das suspenses de esporos deve ser fornecido isento de micro-organismos. Um
devem ser mantidos por produtores comerciais ou no produto definido como processado assepticamente
comerciais e devem incluir informaes sobre a fonte da consiste de componentes que foram esterilizados por
cultura inicial de micro-organismos; a identificao; a um dos processos de esterilizao como, por exemplo, a
rastreabilidade da cultura me de esporos, a frequncia de filtrao, no caso de tratar-se de um lquido. No caso de
subcultura; o meio de cultura utilizado para a esporulao; material de acondicionamento constitudo por vidro, pode
as mudanas ocorridas na preparao do meio; as ser empregado o calor seco e, quando se tratar de material
observaes sobre contaminao da suspenso; os dados de acondicionamento polimrico, como tampas, pode ser
anteriores e posteriores ao choque trmico; os registros do utilizada a autoclavao ou xido de etileno.
uso da suspenso de esporos e a resistncia esterilizao
(particularmente, valores D e Z, onde aplicvel). No processo assptico, o ambiente onde os insumos
so manipulados e a etapa de enchimento assptico
so considerados pontos crticos. As exigncias para
7.2.5 USO DE INDICADOR um projeto adequadamente validado e que mantenha
as condies necessrias para o processo assptico
BIOLGICO PARA VALIDAO abrangem um ambiente livre de micro-organismos viveis,
onde a qualidade do ar seja garantida por equipamentos
Independente do processo de esterilizao a ser empregado, adequados, por pessoal treinado e paramentado de
a populao inicial de micro-organismos, a sua resistncia acordo com as exigncias do ambiente e por operao
ao processo esterilizante e o local de inoculao do produto a ser realizada. O ambiente desejado pode ser obtido
podem influenciar a taxa de inativao do indicador por meio da tecnologia de filtrao do ar que propicia o
330 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
fornecimento do ar com a qualidade microbiana exigida. equipamentos e mtodos para amostragem microbiolgica.
O planejamento da planta deve proporcionar um sistema A aplicao imprpria de amostragem e anlises
de cascata de fluxo de ar com presso positiva maior, das microbiolgicas pode causar variabilidade significativa
reas mais crticas (asspticas) para aquelas de exigncia e potencial para contaminao inadvertida. Um grande
intermediria (reas de preparao) e finalmente, aquelas nmero de produtos estreis fabricado por processamento
de menor exigncia de controle; e ainda, deve permitir assptico, que depende da excluso de micro-organismos da
a troca frequente do ar, alm do emprego de fluxo de linha de processamento e, portanto, a preveno da entrada
ar unidirecional na vizinhana imediata do produto ou dos micro-organismos em recipientes abertos durante o
componentes expostos e o controle da temperatura e envase e a carga microbiana do produto e do ambiente de
umidade (quando aplicvel). As instalaes devem incluir fabricao so fatores importantes relacionados ao nvel de
sistemas de isolamento primrio (prximo ao produto) e garantia de esterilidade destes produtos.
secundrio (onde o processo assptico realizado) por
meio de barreiras fsicas. As superfcies, como paredes e
teto, devem ser lisas possibilitando a sanitizao frequente. 7.4.1 CLASSIFICAO DE
Os vestirios devem ter espao adequado para o pessoal
e armazenamento das vestimentas estreis. O treinamento SALAS LIMPAS E AMBIENTES
do pessoal quanto paramentao, deve abranger o uso CONTROLADOS ASSOCIADOS
correto das vestimentas como, macaces, luvas e outros
itens que propiciem a cobertura da superfcie do corpo.
Todo o processo de sanitizao deve ser documentado. Sala limpa a sala na qual a concentrao de partculas
A certificao e a validao do processo e instalaes em suspenso no ar controlada; construda e utilizada
asspticas so realizadas por meio da confirmao da de maneira a minimizar a introduo, gerao e reteno
eficincia dos sistemas de filtrao; pelos procedimentos de partculas dentro da sala, na qual outros parmetros
de monitoramento microbiolgico do ambiente e relevantes, como, por exemplo, temperatura; umidade e
pela simulao de enchimento assptico do produto, presso, so controlados conforme necessrio.
empregando meio de cultura estril. O monitoramento A classificao de limpeza do ar de salas e zonas limpas,
da instalao assptica deve incluir o exame peridico de por meio da anlise de concentrao de partculas em
filtro ambiental, o monitoramento de rotina de material suspenso no ar, regulada pela norma ABNT NBR
particulado e vivel e o enchimento simulado com meio ISO 14644-1 Salas limpas e ambientes controlados
de cultura estril. associados Parte 1: classificao da limpeza do ar. Esse
documento se aplica a partculas suspensas no ar dentro de
um ambiente controlado, mas no pretende caracterizar a
7.4 SALAS LIMPAS E natureza vivel ou no vivel das partculas.
AMBIENTES CONTROLADOS A aplicao dessa norma tem sido usada por fabricantes
ASSOCIADOS de salas e zonas limpas para orientar a construo, a
Media fill um teste para simulao das operaes aceitvel que, se um menor nmero de partculas estiver
asspticas em que o produto substitudo por um meio de presente na sala limpa ou ambiente controlado, a contagem
cultura e serve para assegurar que os processos utilizados microbiana sob condies operacionais ser menor, desde
so capazes de conduzir a produtos estreis. que no haja mudanas no fluxo de ar, na temperatura e
na umidade. Salas limpas so mantidas sob um estado
H mtodos alternativos para avaliar e controlar o estado de controle operacional com base em dados dinmicos
microbiolgico de salas e zonas limpas, com variedade de (operacionais).
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 331
Tabela 1 - Classes de limpeza do ar para partculas em suspenso, selecionadas para salas e zonas limpas.
ambiental e umidade relativa e o estgio de treinamento Barreiras: dispositivo que restringe o contato entre o
dos funcionrios envolvidos. Em seguida investigao, operador e o campo assptico. Barreiras no podem
as aes adotadas podem incluir o reforo no treinamento ser esterilizadas e nem sempre possuem sistemas de
das pessoas para enfatizar o controle microbiolgico transferncia que permite a passagem de materiais para
do ambiente; a amostragem adicional em frequncia dentro ou fora do sistema sem exposio ao ambiente
aumentada; a desinfeco adicional; os testes adicionais ao redor. H diferentes tipos de barreiras, desde cortinas
de produto; a identificao do contaminante microbiano e de plstico em zonas crticas at barreiras rgidas em
sua possvel fonte e a reavaliao e revalidao dos atuais equipamentos, que podem incorporar elementos como
procedimentos operacionais padronizados, se necessrio. suporte de luvas e porta de transferncia.
Com base na reviso da investigao e nos resultados dos
testes, o significado do nvel microbiolgico excedido e a Sopro/Enchimento/Selagem (Blow/Fill/Seal): esse sistema
aceitabilidade das operaes ou produtos processados sob combina a montagem do recipiente com o envase do produto
aquela condio podem ser definidos. Toda investigao e a selagem em um nico equipamento. Do ponto de vista
e justificativa das aes devem ser documentadas e fazer microbiolgico, a sequncia de formao do recipiente,
parte do sistema de gerenciamento da qualidade. envase do produto estril e a formao e aplicao do selo
so obtidos, assepticamente, em uma operao ininterrupta
Sala e zona limpa so definidas por certificao de acordo com exposio mnima ao ambiente. Esses sistemas
com a norma aplicvel, sendo que os parmetros avaliados existem h muitos anos e as taxas de contaminao so
incluem integridade de filtros, diferenciais de presso menores que 0,1%.
e velocidade, padres e mudanas do ar. Um exemplo
de mtodo para conduzir o teste de desafio de partculas Isoladores: tecnologia usada para dupla proposta, de
para o sistema consiste em aumentar a concentrao de proteger o produto da contaminao do ambiente e de
partculas no ambiente por meio de fumaa no entorno de pessoas durante envase e fechamento e de proteger pessoas
reas de trabalho crticas e visualizar os movimentos do de produtos txicos ou deletrios durante sua produo.
ar. A presena de vrtices e zonas turbulentas podem ser Essa tecnologia baseada no princpio de colocar materiais
visualizados e o padro de fluxo de ar pode ser finamente previamente esterilizados, como recipientes, produtos
ajustado para eliminar ou minimizar efeitos indesejveis. e tampas, em um ambiente estril, que permanecem
Essa avaliao feita sob condies de produo simuladas; estreis durante toda operao, uma vez que pessoas ou
porm, com equipamentos e funcionrios no local. componentes no estreis no esto dentro do isolador.
A barreira do isolador uma barreira absoluta que no
O teste e a otimizao apropriados das caractersticas fsicas permite trocas entre ambientes protegidos e no protegidos.
da sala limpa ou ambiente controlado so essenciais antes Isoladores podem ser fisicamente selados contra a entrada
de concluir a validao do programa de monitoramento de contaminantes externos ou podem ser efetivamente
microbiolgico. A garantia de que o ambiente est operando selados pela aplicao contnua de sobrepresso.
adequadamente e de acordo com suas especificaes dar Manipulao de material por funcionrios realizada por
maior garantia de que a carga microbiana do ambiente ser meio de luvas ou vestimentas completas ou parciais. O
7
apropriada para processamento assptico. Esses testes devem ar que entra no isolador passa atravs de um filtro HEPA
ser repetidos durante a certificao de rotina da sala ou zona ou ULPA e a exausto de ar normalmente passa por um
limpa e sempre que alteraes consideradas significativas filtro HEPA. Vapores de perxido de hidrognio ou cido
forem feitas na operao, tais como mudanas no fluxo peractico normalmente so usados para esterilizao das
de pessoas, processamento, operao, fluxo de material, superfcies ou ambiente interno. A esterilizao do interior
sistemas de manipulao de ar ou layout de equipamentos. dos isoladores e todo contedo so normalmente validados
para um nvel de garantia de esterilidade de 10-6.
os requisitos para o ambiente adjacente podem variar. O treinamento de todos os funcionrios que trabalham
As estratgias de desenho e operao para o ambiente em salas e zonas limpas crtico. Esse treinamento,
onde circulam esses sistemas devem ser desenvolvidas tambm, importante para as pessoas responsveis pelo
pelos produtores usando um critrio lgico e racional e a programa de monitoramento microbiolgico, uma vez
capacidade do sistema de fornecer produtos estreis deve que a contaminao da rea de trabalho pode ocorrer
ser validada de acordo com critrios pr-estabelecidos. inadvertidamente durante a amostragem microbiolgica,
por uso de tcnicas imprprias. Em operaes altamente
Em isoladores, o ar entra atravs dos filtros integrais de automatizadas, o monitoramento pode ser realizado por
qualidade HEPA, ou melhor, e seu interior , tipicamente, pessoas que tm contato mais direto com zonas crticas
esterilizado com um nvel de garantia de esterilidade de dentro da rea de processamento. O monitoramento dos
10-6. Portanto, isoladores que contm ar estril no trocam funcionrios deve ser conduzido antes e depois do trabalho
ar com o ambiente ao redor e so livres de operadores na rea de processamento.
humanos. Entretanto, quando o isolador est em um
ambiente controlado, o potencial de produto contaminado O gerenciamento da instalao deve garantir que todas
reduzido na eventualidade de um vazamento nas luvas as pessoas envolvidas em operaes nas salas e zonas
ou vestimentas. limpas conheam princpios microbiolgicos relevantes,
incluindo princpios bsicos do processamento assptico e
A extenso e escopo do monitoramento microbiolgico a relao dos procedimentos de fabricao e manipulao
ambiental dependem do sistema utilizado. Produtores com fontes potenciais de contaminao do produto.
devem balancear a frequncia da amostragem ambiental Tambm, devem ter conhecimento sobre princpios
que requer interveno humana, com os benefcios bsicos de microbiologia; fisiologia microbiana; limpeza,
acumulados pelos resultados do monitoramento. Uma vez desinfeco e esterilizao; seleo e preparao de meios
que barreiras so desenhadas para reduzir a interveno de cultura; de acordo com o envolvimento dos funcionrios
humana, sistemas de amostragem remotos devem ser no processo. As pessoas envolvidas na identificao
usados em substituio interveno de pessoas. Em microbiana requerem treinamento especializado nos
geral, uma vez que a validao estabeleceu a eficcia da mtodos laboratoriais aplicveis. Treinamento adicional
barreira, a frequncia de amostragem para monitorar o no gerenciamento dos dados ambientais coletados
estado microbiolgico da rea de processamento assptico deve ser fornecido. Conhecimento e compreenso dos
pode ser reduzida quando comparada frequncia de um procedimentos operacionais padro aplicveis so
sistema clssico de processo assptico. crticos, especialmente aqueles relacionados com as
medidas corretivas que so tomadas quando as condies
Sistemas de isoladores requerem frequncia menor
ambientais exigirem. A compreenso das polticas de
de monitoramento microbiolgico. O monitoramento
adeso s exigncias regulatrias e a responsabilidade de
contnuo de partculas totais pode fornecer garantia de
cada indivduo, relativas s Boas Prticas de Fabricao
que o sistema de filtrao de ar dentro do isolador est
devem ser parte integrante do programa de treinamento,
funcionando adequadamente. Mtodos tradicionais para
bem como treinamento sobre como conduzir investigaes
amostragem microbiolgica quantitativa do ar podem no
serem suficientes para testar o ambiente dentro do isolador.
Experincias com isoladores indicam que, sob condies
e analisar dados.
7
e devem ser examinados para esterilidade e promoo de
crescimento. Os meios devem ser capazes de manter o O indicativo de ao em monitoramento microbiolgico
crescimento quando inoculados com menos de 100 UFC. ambiental, quando excedido, requer acompanhamento
A seleo de tempo e temperatura de incubao feita uma imediato e, se necessrio, ao corretiva.
vez que os meios apropriados tenham sido selecionados.
Nveis de alerta se baseiam normalmente em informaes
Tipicamente, temperaturas de incubao nos intervalos de
histricas obtidas de operaes de rotina do processo em
22,5 C 2,5 C e 32,5 C 2,5 C tm sido usadas com
um ambiente controlado especfico.
tempos de incubao de 72 e 48 h, respectivamente.
Em uma instalao nova, esses nveis geralmente se
O programa de controle ambiental deve incluir identificao
baseiam na experincia anterior de instalaes e processos
e avaliao dos locais de amostragem e validao dos
similares; e, em dados obtidos no decorrer de vrias
mtodos de amostragem microbiolgica do ambiente.
semanas. Esses nveis so normalmente re-examinados
para adequao a uma frequncia estabelecida. Tendncias
7.4.6 PLANO E LOCAIS DE a uma deteriorao da qualidade ambiental requerem
ateno para determinar a causa e para instituir um
AMOSTRAGEM plano de ao corretiva, a fim de trazer as condies de
volta aos nveis esperados. Uma investigao deve ser
implementada, e a avaliao do impacto potencial sobre o
Durante a fase inicial de atividades, assim como, na
produto deve ser efetuada.
preparao de uma sala limpa, ou outro ambiente
controlado, locais especficos para amostragem de ar ou de
superfcies devem ser determinados. Deve considerar-se a
proximidade do produto, se o ar e as superfcies existentes
na sala esto em contato com ele ou com superfcies
internas dos sistemas de fechamento dos recipientes.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 335
de desinfeco microbiana. A informao obtida utilizando revalidaes peridicas. O programa de media fill deve
o programa de identificao pode ser til na investigao simular prticas de produo em tempos prolongados e
de fontes de contaminao, especialmente quando os pode ser realizado no final do turno de produo.
limites de ao so excedidos. A identificao de micro-
organismos isolados de reas crticas importante. Meios de cultura ricos podem ser usados, como caldo
casena / soja. Aps o processamento assptico do meio
de cultura, esses devem ser incubados a 22,5 C 2,5
7.4.12 AVALIAO C ou 32,5 C 2,5 C, por no mnimo 14 dias. Se duas
temperaturas forem usadas para a incubao das amostras
OPERACIONAL DO ESTADO de meio de cultura, esses devem ser incubados, no mnimo,
7 dias em cada uma delas. Aps incubao, as amostras
MICROBIOLGICO DE devem ser inspecionadas para crescimento. Isolados
PRODUTOS ENVASADOS devem ser identificados para gnero e, quando possvel,
para espcie a fim de propiciar a investigao das fontes de
ASSEPTICAMENTE contaminao.
importante considerar as limitaes do teste de O processo combinado que usa indicador biolgico e
esterilidade na avaliao dos produtos submetidos biocarga geralmente empregado para produtos que
esterilizao terminal, que tem sensibilidade comprometida podem perder atributos ao usar processo de sobremorte
e estatisticamente limitado devido baixa probabilidade e quando se deseja um processo de esterilizao que
da presena de unidades contaminadas. Portanto, uma demonstre a inativao de altos nmeros de micro-
vez que o processo de esterilizao esteja completamente organismos dos indicadores biolgicos, reconhecidamente
validado e operando, consistentemente, os dados fsicos mais resistentes ao processo de esterilizao. Esse
da esterilizao combinados com outros mtodos, processo requer o conhecimento da carga microbiana do
como por exemplo, indicadores biolgicos, indicadores produto e dados relativos sua resistncia ao processo de
termoqumicos e integradores fsico-qumicos, podem esterilizao. A resistncia relativa do indicador biolgico
fornecer informaes mais exatas que o teste de esterilidade selecionado deve ser estabelecida pela inoculao dos
para a liberao de produtos submetidos esterilizao esporos microbianos no produto. Normalmente so usados
terminal. indicadores biolgicos com 106 esporos e valor D maior que
1 minuto. Ciclos fracionados so usados para determinar a
Quatro processos de esterilizao podem ser qualificados resistncia (valor D) relativa entre produto inoculado com
para a liberao paramtrica: calor mido, calor seco, xido os micro-organismos do indicador biolgico e com aqueles,
de etileno e radiao ionizante. Os produtos submetidos frequentemente, encontrados na carga microbiana. Esse
esterilizao terminal representam a categoria de processo empregado geralmente para desenvolvimento de
menor risco dentre os produtos farmacuticos estreis. ciclos de esterilizao de produtos parenterais empregando
Ao contrrio de produtos estreis obtidos por produo esterilizao terminal e esterilizao de correlatos por
assptica em ambientes controlados, produtos submetidos xido de etileno.
esterilizao terminal apresentam nvel de garantia de
esterilidade mensurvel. O processo de sobremorte usado quando o produto a ser
esterilizado no deleteriamente influenciado pelo agente
Os produtos estreis obtidos por esterilizao terminal esterilizante ou condies do processo de esterilizao.
devem atender a um nvel de garantia de esterilidade de Quando empregar esse processo, importante conhecer a
10-6, ou seja, no mais que uma unidade contaminada em carga microbiana do produto e a prevalncia dos micro-
um milho de unidades produzidas. A aplicao apropriada organismos formadores de esporos. Nesse caso, os dados
dos mtodos usados para desenvolvimento de processo sobre a carga microbiana no necessitam ser minuciosos
terminal requer amplo conhecimento cientfico do mtodo como para os outros dois processos (biocarga e indicador
de esterilizao selecionado, dentro de trs categorias, para biolgico / biocarga). Geralmente os indicadores biolgicos
uso com produto especfico: so resistentes ao processo. A sobremorte demonstrada
pela reduo logartmica dos esporos do indicador
a) processo baseado na carga microbiana (biocarga);
biolgico, calibrado em um processo que possibilita obter
b) processo combinado: indicador biolgico e biocarga; F0 mnimo de 12 minutos.
c) processo de sobremorte.
8 PROCEDIMENTOS ESTATSTICOS
APLICVEIS AOS ENSAIOS BIOLGICOS
Smbolo Definio
a1...z1 doses das preparaes ensaiadas (amostras) A...Z.
a significncia estatstica de um resultado ou medida estimada do grau em que este resultado verdadeiro.
b0 interseo das respostas (y) sobre log doses (x) na linha de regresso.
b, b1 estimativa da inclinao da linha de regresso da resposta (y) em relao ao logaritmo da dose (x).
bl nmero de blocos (animais) em um ensaio cruzado.
c constante utilizada na avaliao dos limites de confiana (Tabela 15).
d nmero de nveis de doses para cada preparao num ensaio balanceado.
f nmero de diferenas nas respostas pareadas entre padro e amostra, nos ensaios realizados pelo
delineamento 5 x 1.
gl graus de liberdade.
h nmero de preparaes em um ensaio, incluindo a preparao padro.
h nmero de amostras ensaiadas.
k nmero de tratamentos diferentes dentro de um ensaio k = dh.
k nmero de logaritmos de potncias nos ensaios realizados pelo delineamento 5 x 1, para uma mesma
amostra.
n nmero de rplicas para cada tratamento.
n nmero de estimativas individuais da potncia.
n graus de liberdade utilizado para estimar a varincia s2M no ensaio 5 x 1
p probabilidade
p1 p2 p3 doses menor, mdia e maior da preparao padro P; em ensaios com somente dois nveis de doses, p2
representa a dose maior.
r coeficiente de correlao de Pearson
s2 estimativa da varincia fornecida pelo quadrado mdio do erro na anlise da varincia. Tambm usado com
uma letra ndice, por exemplo, s2M representa a varincia do log potncia M.
s estimativa do desvio padro, ou seja, a raiz quadrada de s2.
t estatstica de Student (Tabela 3).
t estatstica de Dunnett (Tabela 12).
v varincia para heterogeneidade entre ensaios.
w coeficiente de ponderao.
8 x
x
log dose tambm usado com ndice para indicar uma preparao particular.
mdia dos log dose.
y resposta individual ou resposta individual transformada.
y resposta calculada para substituir um valor perdido.
Smbolo Definio
E soma de quadrados para regresso (Tabela 10).
F razo de duas estimativas de varincias independentes (Tabelas 4 e 5).
FI, FII soma das respostas na fase I ou fase II num ensaio cruzado.
F1...Fn soma das respostas em cada uma das filas 1 a n em delineamento de quadrado latino, ou em cada bloco de
um delineamento em blocos ao acaso.
G1, G2, G3 estatstica utilizada no teste de valores aberrantes.
G total incompleto das respostas em um ensaio com excluso do valor perdido.
I intervalo entre log doses adjacentes, no ensaio de retas paralelas.
K termo de correo utilizado na anlise de varincia K = (y)2/N.
L intervalo de confiana em logaritmos.
LC intervalo de confiana em logaritmos para mdia semiponderada.
LP...LZ contrastes lineares para as preparaes padro e amostra.
M estimativa do log da potncia ou do log da razo de potncia usada com uma letra ndice em um ensaio
mltiplo, para denotar uma preparao particular (M = log R).
Mi, Ms limites de confiana da estimativa do log da potncia.
mdia de vrias estimativas independentes de M.
M
M estimativa do log da potncia da amostra A ou do log da razo de potncias antes de corrigir pela potncia
suposta (M = log R).
Ms, Mi limites superior e inferior da estimativa do log da potncia, antes de corrigir pela potncia suposta.
N nmero total de respostas do ensaio.
NP, NA nmero total de respostas para as preparaes P e A.
P preparao padro.
P soma das respostas para a preparao padro.
P1, P2, P3 soma das respostas para as doses inferior, mdia e superior da preparao padro P. Para ensaio de somente
dois nveis de dosagem, P2 representa as respostas para a dose maior.
Q soma de quadrados para linearidade na mesma direo (Tabela 10).
QM soma de quadrados devido a uma fonte de variao dividido pelo respectivo grau de liberdade.
QP...QZ contraste quadrtico para as preparaes padro e amostra (Tabela 9).
R estimativa da potncia da amostra.
Ri, Rs limites de confiana inferior e superior da estimativa de potncia.
R estimativa da razo de potncias antes da correo pela potncia suposta.
R+ constante especfica para testar valores atpicos (Tabela 2).
SA potncia suposta para a amostra A, quando se preparam as doses.
SQ soma de quadrados devido a uma fonte de variao.
T total incompleto das respostas para um tratamento excluindo o valor perdido.
V = 1/W varincia do logaritmo de potncia individual.
X diferenas nas respostas pareadas entre amostra e padro, divididas pelo coeficiente de regresso (b1), no
delineamento 5 x 1
W
W
2
ponderao estatstica usada na combinao de vrias estimativas independentes do log potncia.
semi-ponderao de cada logaritmo de potncia numa srie de ensaios.
estatstica qui-quadrado (Tabela 18).
8
Nota: as Tabelas de 1 20 se encontram na seo 8.9 TABELAS ESTATSTICAS. As Tabelas de 21 47 se encontram na
seo 8.10 EXEMPLOS DE ENSAIOS ESTATSTICOS.
8 RESULTADOS
Se G1, G2 ou G3 excedem o valor crtico registrado na
Tabela 1 para o valor correspondente de n, existe base
estatstica para a eliminao do valor suspeito.
Expressar os resultados de avaliao biolgica como
estimativa da potncia suposta para uma amostra (R), que Critrio que contempla a amplitude de uma srie K = 2 ou
ser a expresso da verdadeira potncia relativa da amostra mais grupos de igual tamanho
em relao ao padro (). Essa ltima impossvel de ser Os grupos podem receber diferentes tratamentos, porm
calculada com preciso devido variabilidade dos reativos todas as n respostas dentro de cada grupo decorrem do
biolgicos. Tal estimativa da potncia suposta (R) deve mesmo tratamento. Nesse teste, estuda-se a variao dos
ser acompanhada pelos limites de confiana inferior e valores para cada tratamento que obtida pela diferena
superior (Ri, Rs), ou intervalo que abrange a verdadeira entre o maior e menor valor. O valor obtido com maior
potncia relativa da amostra (). Nas monografias esto diferena deve ser dividido pela soma de todas as diferenas
estabelecidas especificaes para a amplitude aceitvel e no deve exceder o valor tabelado de (R+) na Tabela 2
desses intervalos em relao potncia estimada. Essas para k = nmero de doses e n = nmero de rplicas. Se o
especificaes levam em conta a dificuldade dos mtodos valor calculado exceder o valor tabelado, a coluna suspeita
e a necessidade prtica de estimar-se a verdadeira potncia deve ser investigada para detectar o valor discrepante. Se
com determinada preciso. Para alcanar os limites de k for menor ou igual a 10, usar os valores apresentados na
confiana especificados deve, s vezes, realizar-se mais Tabela 2; se maior, multiplicar R+ por (k + 2) e interpolar,
de um ensaio. Para se obter uma estimativa da potncia se necessrio, entre os valores apresentados na Tabela 2a.
com intervalo de confiana reduzido, devem combinar-
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 341
M ' = xP x A (1)
8.5 ENSAIOS INDIRETOS
Calcular a varincia de M como a soma das varincias das QUANTITATIVOS
duas mdias, a partir da equao
1 1 (2)
s 2M ' = s 2x +
Natureza e validade
em que NP NA
Em geral no possvel medir diretamente a dose eficaz.
2
2
Por essa razo, a potncia determinada indiretamente,
x P x P N P + x A x A N A (3) comparando as respostas produzidas em escala quantitativa,
2 2
P P A A
2
sx = por exemplo, peso, por doses conhecidas do padro com
N +N 2
P A
aquelas produzidas por uma ou mais doses de amostra.
NP e NA so nmeros de animais tratados como padro Em um intervalo restrito de doses, as respostas ou sua
e amostra; e representam somatrio dos resultados transformao conveniente (logaritmo, probito, etc.),
P A
calculados para as duas preparaes. Calcular os limites de apresentam re1ao linear com o logaritmo das doses
confiana como: correspondentes. Usar dois ou mais nveis de doses do
8
padro ou, preferencialmente, do padro e da amostra
(4) para determinar a posio e a inc1inao da reta. Proceder
em cada ensaio dessa maneira, pois, dependendo da
sensibilidade dos reativos biolgicos utilizados, pode
Obter o valor apropriado de t na Tabela 3, de acordo com variar tanto a posio quanto a inc1inao da reta.
os graus de liberdade (gl) dados pelo denominador da
equao (3). Cada tratamento consiste de uma dose fixa do padro (p1,
p2, p3, etc.) ou da amostra (a1, a2, a3, etc.) e administrado a
Calcular a potncia relativa da amostra e os limites de um certo nmero (n) de unidades experimentais (animais,
confiana, levando em considerao a potncia suposta da rgos, culturas, tubos etc.). Registrar n respostas, ou seja,
amostra (SA) utilizada para preparar as diluies: uma para cada unidade experimental. Para que os mtodos
apresentados nesse captulo sejam vlidos, devem-se
R = anti log M (5) cumprir as seguintes condies:
em que 1) as unidades experimentais correspondentes a cada
' tratamento devem ser selecionadas ao acaso;
M = M + log S A (6)
2) para cada tratamento, as respostas ou as suas
com limites de confiana transformaes utilizada no clculo (y) constituem amostra
de distribuio normal;
(7)
342 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
8
preparao. Proceder o ensaio em duas fases conforme o
Para simplificar os clculos da anlise estatstica perodo de tempo definido no mtodo. Distribuir os animais
apresentados nesse captulo, necessrio impor as em quatro ou seis grupos e realizar um tratamento em cada
seguintes restries ao delineamento dos ensaios: grupo na primeira fase. Na segunda fase, os animais que
a) testar cada preparao, padro e amostra, com o mesmo receberam uma preparao recebero outra; os animais
nmero de diluies. Apresentam-se frmulas para ensaios que receberam doses menores, nessa etapa recebero as
farmacopeicos, utilizando dois e trs nveis de doses para maiores. Seguir o esquema da Tabela 6.
cada preparao assim como o delineamento 5 x 1;
b) manter constante em cada ensaio a razo de doses Quadrado latino
consecutivas para todos os tratamentos e
Adequado quando a resposta pode ser afetada por duas fontes
c) obter o mesmo nmero de respostas para cada tratamento. de variao, cada qual podendo ter k nveis diferentes. Por
exemplo, se realiza o experimento em k dias diferentes e por
Caso alguma resposta for perdida, essa pode ser
k experimentadores, ou se realiza um ensaio de antibiticos
estimada pelos mtodos apropriados a cada delineamento
por difuso em placa, no qual os tratamentos podem ser
apresentado nesse captulo; se houver perda de um
aplicados num esquema de k k, onde cada tratamento
tratamento, atender ao especificado na seo de Ensaios
s ocorre uma vez em cada fila e em cada coluna. Utilizar
parcialmente balanceados.
somente quando o nmero de colunas, filas e tratamentos
forem iguais.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 343
8
paralelismo, isso pode ser devido utilizao de alguma
Tabelas 8 ou 9. K representa o quadrado da soma de todas
preparao que forneceu linha dose-resposta com uma
as respostas obtidas no ensaio dividido pelo nmero total
inclinao diferente em relao s outras amostras. Nesse
delas:
{
K = ( y ) N
2
} caso, calcular o valor de t para cada preparao A...Z,
usando a equao
-
Calcular o erro residual do ensaio subtraindo as variaes t' = L P L A (9)
controladas no delineamento da variao total nas 2s n
respostas (Tabela 11). Nessa tabela, y2 representa a soma
Cada t calculado deve ser comparado com o valor da
dos quadrados de todas as respostas registradas no ensaio.
Tabela 12, onde g11 = h -1 e g12 igual ao nmero de
Convm assinalar que a soma de quadrados, reduzida,
graus de liberdade associado com s2. Se encontrar valor
correspondente, ao item tratamentos igual ao somatrio
de t significativo para alguma amostra, todos os dados
das somas de quadrados reduzidas (Tabela 10) e que, para
relativos a essa preparao devem ser eliminados do ensaio
o quadrado latino, o nmero de respostas replicadas (n)
e a anlise repetida desde o incio.
igual ao nmero de filas, colunas ou tratamentos (k).
Em ensaios com erro residual muito grande, uma razo F
significativa para o termo preparaes pode indicar que a
suposio de potncia que serviu de base para a preparao
das diluies no foi correta. Isso no condio de
invalidade. Chegando-se a essa concluso, a potncia
344 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
estimada no ensaio pode ser usada como potncia suposta Estabelecida a validade estatstica dos ensaios feitos com
em ensaios posteriores. qualquer delineamento, calcular a potncia e os limites de
confiana pelos mtodos descritos a seguir.
Nos testes de paralelismo e quadrticos podem ocorrer
por acaso valores de F muito baixos, menores que 1. Se
isso acontecer, repetidamente, pode ser indicao de que 8.5.4 ESTIMATIVA DA
no se cumpriram as condies supostas, o que deve ser
investigado mais profundamente. POTNCIA E LIMITES DE
CONFIANA
Delineamento 5 x 1
( y -y )
2
No caso do delineamento duplo cruzado, obtm-se dois M'AS = CMA ts C
1 1
quadrados mdios correspondentes aos erros I e II, que + + P A (13)
M'A I b NP NA E-s 2 t 2
8
se denominam s2I e s2II. Dividir o quadrado mdio de cada
fonte de variao pelo s2 apropriado para se obter a razo F.
em que
Para as fontes Paralelismo, Fases X Preparaes, Fases X
Regresso, utiliza-se s2I. Para as outras fontes, utiliza-se C = E/(E - s2t2) (14)
s2II.
Obter E da Tabela 10. O s2 o erro residual da Tabela
Calcular a significncia da fonte utilizando as Tabelas 4 11 dividido por seus graus de liberdade e t se encontra na
e 5. Se F calculado for maior que o valor tabelado, para Tabela 3 de acordo com os graus de liberdade de s2.
os graus de liberdade da fonte ensaiada (g11) e do s2
correspondente (g12), a fonte de variao considerada Para ensaios balanceados de 2 e 3 doses por preparao, a
significativa para o nvel de significncia utilizado ( = frmula para os limites da equao 13 pode simplificar-se:
0,05 ou = 0,01).
M'AS = CM
Para que o ensaio seja vlido, a regresso deve ser
significativa e o paralelismo e as trs interaes no
( C-1) ( CM'2A +c'I2 ) (15)
M'A I A
2) alternativamente, um grupo, casualmente, menor pode de potncia relativa a partir dos dados remanescentes.
ser recomposto ao tamanho original, quando o nmero Essa potncia pode ser tomada como potncia suposta
de respostas perdidas no for maior que um em qualquer para selecionar doses de amostra para outro ensaio, com
tratamento ou 5% no total do ensaio. Nesse caso, calcular o objetivo de se obterem respostas similares ao padro e,
a substituio do valor perdido. Perde-se um grau desse modo, aumentar a preciso do resultado. A equao
de liberdade na varincia do erro s2 para cada valor que se emprega para calcular a potncia :
substitudo:
y A-y P I
a) se o delineamento totalmente ao acaso, substituir o M'A = (28)
valor perdido pela mdia das respostas restantes do grupo b 2
incompleto;
Essa frmula similar frmula 12, porm, subtrai-se
b) se o delineamento de blocos ao acaso, substituir o a metade do intervalo log dose quando se omitirem as
valor perdido aplicando a frmula respostas da dose menor e adiciona-se o mesmo intervalo
quando se desprezar a dose maior.
(26)
As respostas mdias y A e y P so obtidas da mesma
frmula que nos ensaios totalmente balanceados (frmula
em que B o total incompleto das respostas no bloco 10), porm deve-se introduzir modificao no clculo da
que contm o valor perdido, T o total incompleto das inclinao (b) de acordo com o delineamento do ensaio.
respostas no tratamento que contm o valor perdido, G a
soma total das respostas obtidas no ensaio. Como se definiu Para ensaios mltiplos, que, obrigatoriamente, teriam
anteriormente, n o nmero de blocos e k o nmero de duas doses de cada preparao, os contrastes lineares
tratamentos ou doses; ( L P ... L Z ) devem se formar excluindo L A (como as
respostas para a1, ou a2 foram eliminadas, no possvel
c) se o ensaio estiver baseado em delineamento de quadrado formar um contraste L A ). Calcular a inclinao a partir
latino, o valor perdido (y) se obtm pela equao da mdia dos valores de L dividida por In:
(27)
+ ... + L Z
b = LP (29)
In(h-1)
em que Be C so as somas das respostas nas filas e
colunas, respectivamente, que contm o valor perdido. Para ensaio simples com uma amostra:
Nesse caso, k = n.
b= L P (30)
Se houver perda de mais do que um valor, substituir, In
temporariamente, pela mdia do tratamento respectivo,
todos os lugares vazios, exceto um. Substituir esse lugar Para ensaios mltiplos com trs doses de cada preparao,
com o valor y, calculado pela equao 27. Substituir obter L A e os demais contrastes da Tabela 9. A equao
um por um os valores que haviam sido colocados, para a inclinao :
temporariamente, pela mdia at se obter conjunto estvel 2 ( L P + ... + L Z ) + L A
b= (31)
de valores para todas as respostas perdidas. In ( 4h-3)
Se o nmero de valores substitudos for pequeno em relao Se existir uma amostra nica, a equao se reduz a:
ao nmero total de observaes no ensaio (menor que 5%),
8
2L P + L A (32)
a aproximao decorrente das substituies descritas e da b=
reduo dos graus de liberdade, equivalente ao nmero 5In
de valores substitudos, geralmente satisfatria. Porm,
a anlise deve ser interpretada com cuidado, sobretudo
se existe predominncia de valores perdidos em um
8.6 MDIAS MVEIS
tratamento ou bloco particular. O mesmo vlido para o
caso de valores perdidos nos planejamentos cruzados. No caso particular do ensaio biolgico da heparina, o
intervalo entre a dose que possibilita a coagulao e aquela
que a inibe to pequeno que a curva dose-resposta no
Ensaios parcialmente balanceados
pode ser determinada explicitamente. Para interpolar o
Se a potncia presumida das amostras (usada para calcular logaritmo da dose correspondente a 50% da coagulao,
as doses do ensaio) for muito diferente da verdadeira tanto para o padro quanto para a amostra, utilizam-se as
potncia, possvel que a dose maior fornea resposta mdias mveis.
mxima ou que a dose menor fornea resposta muito baixa
Clculo da potncia
ou nula. Essas respostas estaro fora da zona linear da
curva log doserresposta e os testes de validade indicaro Transformar em logaritmo os volumes da preparao
curvatura e/ou desvio de paralelismo significativo. padro usados em 5 ou 6 tubos que constituem a srie, de
modo que 2 ou 3 tubos apresentem graus de coagulao
Nesse caso, as respostas dose maior ou menor da
amostra podem ser desprezadas, calculando-se um valor
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 347
iguais ou menores que 0,5 e 2 ou 3 tubos tenham graus probabilidade (logito ou probito). Para cada valor de y,
iguais ou maiores que 0,5. deve-se obter um valor de coeficiente de ponderao (w)
na Tabela 17.
Confeccionar tabela correlacionando os tubos numerados,
consecutivamente, com o grau de coagulao observado. As frmulas das somas de quadrados para os testes de
validade so as mesmas utilizadas nos ensaios indiretos
Denominar x os logaritmos dos volumes utilizados e y os quantitativos (Tabela 10), tomando n = 1, com exceo do
graus de coagulao correspondentes. Calcular as mdias termo erro (s2), que tem graus de liberdade iguais a infinito,
emparelhadas xi e yi dos tubos 1, 2 e 3; dos tubos 2, 3 e 4 e e se calcula como:
dos tubos 3, 4 e 5, e quando a srie consistir de 6 tubos, dos
tubos 4, 5 e 6, respectivamente. Se para um desses pares de k
mdias o grau de coagulao mdio yi exatamente 0,50, s2 = (35)
o correspondente xi a mediana do logaritmo do volume n w
da preparao padro xp. Caso isso no ocorra, interpolar em que k = nmero de tratamentos, n = nmero de animais
o xp a partir dos valores emparelhados de yi, xi e yi+1, xi+1 utilizados em cada tratamento.
que ocorram, imediatamente abaixo e acima do grau 0,50,
como: Calcular a potncia e os limites de confiana usando
as frmulas 12 e 25. Esse mtodo aproximado til
xp = xi + ( yi 0,5 )( xi +1 xi ) ( yi yi +1 ) (33) quando o ensaio delineado de modo que as respostas
em porcentagem correspondentes s doses menores e
A partir dos dados emparelhados obtidos nos tubos da maiores estejam uniformemente espaadas ao redor de
amostra, calcular do mesmo modo a mediana do logaritmo 50%. Se uma das doses testadas fornecer respostas zero
do volume xA. O logaritmo da potncia da amostra : ou 100%, essas podem ser desprezadas. Nesse caso, obter
a estimativa de potncia pelos mtodos descritos na seo
M A = x P x A + log S A (34) Ensaios parcialmente balanceados.
4t 2 em que
W= (36) L2
L2 V=1/W= (42)
Para cada ensaio, calcular o produto WM e dividir seu 4t 2
somatrio pelo somatrio de todas as ponderaes a fim
e v a varincia da heterogeneidade entre ensaios e se
de se obter o logaritmo da potncia media ponderada (M),
calcula pela equao:
conforme a equao 37:
(43)
(37)
O erro padro da potncia mdia ( sM ) a raiz quadrada Quando v varia de tal maneira que v calculado nmero
da recproca da ponderao total: negativo, pode-se calcular v aproximado, omitindo-se o
termo aps o sinal negativo na equao 43.
(38) ( )
Para calcular a mdia semiponderada M , substituir
na equao 31 os valores de W e W pelos respectivos
valores de W e W:
Calcular os limites de confiana aproximados ( = 0,05),
a partir do antilogaritmo dos valores obtidos por meio da
frmula 39: (44)
Mts M (39)
Pode-se considerar esse valor de M prximo ao centro de
um intervalo de confiana de tamanho aproximado Lc, que
Obtm-se o valor de t na Tabela 3, com graus de liberdade a raiz quadrada de:
equivalentes soma dos graus de liberdade da varincia do
erro dos ensaios individuais. (45)
b) as estimativas individuais da potncia formarem No caso especial do ensaio de heparina, todos os logaritmos
um conjunto homogneo de acordo com o teste de de potncia (M) tm a mesma ponderao e o intervalo de
homogeneidade realizado, aplicando a estatstica 2 confiana de logaritmo da estimativa da potncia M se
Essa calculada elevando-se ao quadrado a diferena determina como segue:
entre cada valor de M em re1ao mdia ponderada
Clculo da varincia do erro com n - 1 graus de liberdade:
M , multiplicando-se esse quadrado pela ponderao
correspondente (W) e somando-se os valores para todos (46)
os ensaios:
Se o valor de for maior que o da Tabela 18, considera-se Calcular os limites de confiana:
que as potncias so heterogneas, ou seja, que a disperso
dos valores individuais de M maior que a esperada, de
M s =M+1 2L (48)
acordo com os respectivos limites de confiana. Nesse M i =M-1 2L (49)
caso, no aplicar as frmulas 37 e 39, averiguar a origem
dessa heterogeneidade e, caso se considerar adequado, R s =antilogM s (50)
calcular M usando semiponderaes W:
R i =antilogM i (51)
W'=1 (V+v) (41)
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 349
n 3 4 5 6 7
G1 0,976 0,846 0,729 0,644 0,586
n 8 9 10 11 12 13
G2 0,780 0,725 0,678 0,638 0,605 0,578
n 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
G3 0,602 0,579 0,559 0,542 0,527 0,514 0,502 0,491 0,481 0,472 0,464
Valor crtico de R+ para intervalo de n observaes cada um, ao nvel de significncia = 0,05
k
2 3 4 5 6 7 8 9 10
2 0,962 0,862 0,803 0,764 0,736 0,717 0,702 0,691 0,682
3 0,813 0,667 0,601 0,563 0,539 0,521 0,507 0,498 0,489
4 0,681 0,538 0,479 0,446 0,425 0,410 0,398 0,389 0,382
5 0,581 0,451 0,398 0,369 0,351 0,338 0,328 0,320 0,314
6 0,508 0,389 0,342 0,316 0,300 0,288 0,280 0,273 0,267
7 0,451 0,342 0,300 0,278 0,263 0,253 0,245 0,239 0,234
8 0,407 0,305 0,267 0,248 0,234 0,225 0,218 0,213 0,208
9 0,369 0,276 0,241 0,224 0,211 0,203 0,197 0,192 0,188
10 0,339 0,253 0,220 0,204 0,193 0,185 0,179 0,174 0,172
Valor crtico de (k + 2) R+ para intervalo de n observaes cada um, ao nvel de significncia = 0,05
k
2 3 4 5 6 7 8 9 10
10 4,06 3,04 2,65 2,44 2,30 2,21 2,14 2,09 2,05
12 4,06 3,03 2,63 2,42 2,29 2,20 2,13 2,07 2,04
15 4,06 3,02 2,62 2,41 2,28 2,18 2,12 2,06 2,02
20
50
4,13
4,26
3,03
3,11
2,62
2,67
2,41
2,44
2,28
2,29
2,18
2,19
2,11
2,11
2,05
2,06
2,01
2,01
8
350 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 ,05 ,02 ,01 ,001
gl
1 0,158 0,325 0,510 0,727 1,000 1,376 1,963 3,078 6,314 12,706 31,821 63,657 636,619
2 0,142 0,289 0,445 0,617 0,816 1,061 1,386 1,886 2,920 4,303 6,965 9,925 31,598
3 0,137 0,277 0,424 0,584 0,765 0,978 1,250 1,638 2,353 3,182 4,541 5,541 12,924
4 0,134 0,271 0,414 0,569 0,741 0,941 1,190 1,533 2,132 2,776 3,747 4,604 8,610
5 0,132 0,267 0,408 0,559 0,727 0,920 1,156 1,476 2,015 2,571 3,365 4,032 6,869
6 0,131 0,265 0,404 0,553 0,718 0,906 1,134 1,440 1,943 2,447 3,143 3,707 5,959
7 0,130 0,263 0,402 0,549 0,711 0,896 1,119 1,415 1,895 2,365 2,365 3,499 5,408
8 0,130 0,262 0,399 0,546 0,706 0,889 1,108 1,397 1,860 2,306 2,896 3,355 5,041
9 0,129 0,261 0,398 0,543 0,703 0,883 1,100 1,383 1,833 2,262 2,821 3,250 4,781
10 0,129 0,260 0,397 0,542 0,700 0,879 1,093 1,372 1,812 2,228 2,764 3,169 4,587
11 0,129 0,260 0,396 0,540 0,697 0,876 1,088 1,363 1,796 2,201 2,718 3,106 4,437
12 0,128 0,259 0,395 0,539 0,695 0,873 1,083 1,356 1,782 2,179 2,681 3,055 4,318
13 0,128 0,259 0,394 0,538 0,694 0,870 1,079 1,350 1,771 2,160 2,650 3,012 4,221
14 0,128 0,258 0,393 0,537 0,692 0,868 1,076 1,345 1,761 2,145 2,624 2,977 4,140
15 0,128 0,258 0,393 0,536 0,691 0,866 1,074 1,341 1,753 2,131 2,602 2,947 4,073
16 0,128 0,258 0,392 0,535 0,690 0,865 1,071 1,337 1,746 2,120 2,583 2,921 4,015
17 0,128 0,257 0,392 0,534 0,689 0,863 1,069 1,333 1,740 2,110 2,567 2,898 3,965
18 0,127 0,257 0,392 0,534 0,688 0,862 1,067 1,330 1,734 2,101 2,552 2,878 3,922
19 0,127 0,257 0,391 0,533 0,688 0,861 1,066 1,328 1,729 2,093 2,539 2,861 3,883
20 0,127 0,257 0,391 0,533 0,687 0,860 1,064 1,325 1,725 2,086 2,528 2,845 3,850
21 0,127 0,257 0,391 0,532 0,686 0,859 1,063 1,323 1,721 2,080 2,518 2,831 3,819
22 0,127 0,256 0,390 0,532 0,686 0,858 1,061 1,321 1,717 2,074 2,508 2,819 3,792
23 0,127 0,256 0,390 0,532 0,685 0,858 1,060 1,319 1,714 2,069 2,500 2,807 3,767
24 0,127 0,256 0,390 0,531 0,685 0,857 1,059 1,318 1,711 2,064 2,492 2,797 3,745
25 0,127 0,256 0,390 0,531 0,684 0,856 1,058 1,316 1,708 2,060 2,485 2,787 3,726
26 0,127 0,256 0,390 0,531 0,684 0,856 1,058 1,315 1,706 2,056 2,479 2,779 3,707
27 0,127 0,256 0,389 0,531 0,684 0,855 1,057 1,314 1,703 2,052 2,473 2,771 2,690
8 28
29
0,127
0,127
0,256
0,256
0,389
0,389
0,530
0,530
0,683
0,683
0,855
0,854
1,056
1,055
1,311
1,310
1,699
1,697
2,045
2,042
2,462
2,457
2,756
2,750
3,674
3,659
30 0,127 0,255 0,389 0,530 0,683 0,854 1,055 1,310 1,697 2,042 2,457 2,750 3,646
40 0,126 0,254 0,388 0,529 0,681 0,851 1,050 1,303 1,684 2,021 2,423 2,704 3,551
60 0,126 0,254 0,387 0,527 0,679 0,848 1,046 1,296 1,671 2,000 2,390 2,660 3,460
120 0,126 0,253 0,386 0,526 0,677 0,845 1,041 1,289 1,658 1,980 2,358 2,617 3,373
0,126 0,256 0,385 0,524 0,674 0,842 1,036 1,282 1,645 1,960 2,326 2,576 3,291
8 27
28
7,68
7,64
5,49
5,45
4,60
4,57
4,11
4,07
3,78
3,75
3,56
3,53
3,26
3,23
2,93
2,90
2,56
2,52
2,10
2,06
29 7,60 5,42 4,54 4,04 3,73 3,50 3,20 2,87 2,49 2,03
30 7,56 5,39 4,51 4,02 3,70 3,47 3,17 2,84 2,47 2,01
40 7,31 5,18 4,31 3,83 3,51 3,29 2,99 2,66 2,29 1,80
60 7,08 4,98 4,13 3,65 3,34 3,12 2,82 2,50 2,12 1,60
120 6,85 4,79 3,95 3,48 3,17 2,96 2,66 2,34 1,95 1,38
6,64 4,60 3,78 3,32 3,02 2,80 2,51 2,18 1,79 1,00
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 353
a2 1 a1 2
2 a1 1 a2
a1 a2 2 1
1 2 a2 a1
8
Constraste linear P3 P1 = LP A3 A1 = LA Z3 Z1 = LZ
Contraste quadrtico P1 2P2 + P3 = QP A1 2A2 + A3 = QA Z1 2Z2 + Z3 = QZ
354 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Preparaes h1 P 2 + A 2 + K + Z2 P 2 + A 2 + K + Z2
K K
2n 3n
Regresso 1
Paralelismo h1 (L 2
P + L2A + K + L2Z
E
) (
L2P + L2A + K + L2Z
E
)
2n 2n
Quadrtico 1 -
Diferena de Quadrticos h1 - (Q 2
P + Q 2A + K + Q 2Z
Q
)
6n
TOTAL N-1 y2 K y2 K y2 K
* Obitida subtraindo, da soma de quadrados reduzida total, todas as outras somas de quadrados reduzidas calculadas para o delineamento correspondente.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 355
8
Dose maior (soma de respostas) P2II A2II -
Total PII AII PII + AII = FII
Por preparao (soma de respostas) P A y
Contraste linear
FASE I P2I P1I = LPI A2I A1I = LAI LPI + LAI = LI
FASE II P2II P1II = LPII A2II A1II = LAII LPII + LAII = LII
TOTAL P2 + P1 = LP A2 + A1 = LA LP + LA = L
356 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Graus de
Fonte de variao Soma de quadrados reduzida
liberdade (gl)
Fases X Regresso 1
Preparaes 1 P2 + A2
K
2n
Regresso 1 (L P + L A )2
=E
N
Fases 1
TOTAL N-1 y2 K
8 K = (y)2/N
N = nmero total de respostas
n = nmero total de rplicas por dose includas as duas fases
bl = nmero de blocos (animais)
B = soma das duas repostas para cada bloco (animal)
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 357
% 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
0 - 2,67 2,95 3,12 3,25 3,36 3,45 3,52 3,59 3,66
10 3,72 3,77 3,82 3,87 3,92 3,96 4,01 4,05 4,08 4,12
20 4,16 4,19 4,23 4,26 4,29 4,33 4,36 4,39 4,42 4,45
30 4,48 4,50 4,53 4,56 4,59 4,61 4,64 4,67 4,69 4,72
40 4,75 4,77 4,80 4,82 4,85 4,87 4,90 4,92 4,95 4,97
50 5,00 5,03 5,05 5,08 5,10 5,13 5,15 5,18 5,20 5,23
60 5,25 5,28 5,31 5,33 5,36 5,39 5,41 5,44 5,47 5,50
70 5,52 5,55 5,58 5,61 5,64 5,67 5,71 5,74 5,77 5,81
80 5,84 5,88 5,92 5,95 5,99 6,04 6,08 6,13 6,18 6,23
90 6,28 6,34 6,41 6,48 6,55 6,64 6,75 6,88 7,05 7,33
% 0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9
97 6,88 6,90 6,91 6,93 6,94 6,96 6,98 7,00 7,01 7,03
98 7,05 7,07 7,10 7,12 7,14 7,17 7,20 7,23 7,26 7,29
99 7,33 7,37 7,41 7,46 7,51 7,58 7,65 7,75 7,88 8,09
Probitos 0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9
1 0,001 0,001 0,001 0,002 0,002 0,003 0,005 0,006 0,008 0,011
2 0,015 0,019 0,025 0,031 0,040 0,050 0,062 0,076 0,092 0,110
3 0,131 0,154 0,180 0,208 0,238 0,269 0,302 0,336 0,370 0,405
8
4 0,439 0,471 0,503 0,532 0,558 0,581 0,601 0,616 0,627 0,634
5 0,637 0,634 0,627 0,616 0,601 0,581 0,558 0,532 0,503 0,471
6 0,439 0,405 0,370 0,336 0,302 0,269 0,238 0,208 0,180 0,154
7 0,131 0,110 0,092 0,076 0,062 0,050 0,040 0,031 0,025 0,019
8 0,015 0,011 0,008 0,006 0,005 0,003 0,002 0,002 0,001 0,001
gl 2 gl 2
1 3,84 9 16,92
2 5,99 10 18,31
3 7,81 11 19,67
4 9,49 12 21,03
5 11,07 13 22,36
6 12,59 14 23,69
7 14,07 15 25,00
8 15,51 20 31,41
25 37,65
358 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Padro Amostra
P1 P2 P3 P4 P5 A B C
y11 y21 y31 y41 y51 A31 B31 ...
y12 y22 y32 y42 y52 A32 B32 ...
y13 y23 y33 y43 y53 A33 B33 ...
y14 y24 y34 y44 y54 A34 B34 ...
Respostas y15 y25 y35 y45 y55 A35 B35 ...
y16 y26 y36 y46 y56 A36 B36 ...
y17 y27 y37 y47 y57 A37 B37 ...
y18 y28 y38 y48 y58 A38 B38 ...
y19 y29 y39 y49 y59 A39 B39 ...
Total y1. y2. y3. y4. y5. A3. B3.
ynz: n a concentrao (P1 a P5) e z a resposta (de 1 a 9)
Anz: n a concentrao mediana (P3) e z a resposta (de 1 a 9)
Tabela 20 - Tabela de Anlise de varincia para o modelo de regresso linear simples delineamento 5 x 1.
y = b0 + b1x
b0 =y - b1 x
Fonte de
gl Soma de quadrados Quadrado mdio F calculado
variao
SQres
Erro residual N-2 SQres = y2 b1xy b0y QMres = -2 ---
8
N
(x-x) 2
= Sxx = desvio padro da varivel (x)
N-1
Padro P Amostra A
Dose letal Log dose letal Dose letal Log dose letal
mL/kg xp mL/kg xA
27,57 1,4404 34,02 1,5317
25,97 1,4145 21,90 1,3404
27,74 1,4431 28,33 1,4523
30,94 1,4905 24,87 1,3957
28,31
27,29
22,13
1,4519
1,4360
1,3450
27,56
24,73
21,67
1,4403
1,3932
1,3359
8
23,63 1,3735 21,30 1,3284
21,39 1,3302 29,10 1,4639
22,13 1,3450 25,54 1,4072
20,97 1,3216
29,23 1,4658
23,78 1,3762
21,40 1,3304
x 19,5641 14,0890
x 1,3974 1,4089
x2 27,3829 19,8879
s2 0,003331 0,004211
N 14 10
360 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Padro P Amostra A
Dose menor P1 = 78,40 A1 = 79,10
Dose mdia P2 = 93,82 A2 = 111,10
Dose maior P3 = 115,20 A3 = 128,10
Preparao P = 287,42 A = 318,60
Contraste linear LP = 36,80 LA = 49,00
Contraste quadrtico QP = 5,96 QA = 15,60
Resultados obtidos com as frmulas da Tabela 9.
Soma de Quadrado
Fonte de variao gl F
quadrados mdio
Preparaes 1 20,26 20,26
Regresso 1 230,05 230,05 79,05 <0,01
Paralelismo 1 4,65 4,65 1,60 >0,05
Quadrtico 1 0,97 0,97 0,33 >0,05
8 Diferena de quadrados
Tratamentos
1
5
4,84
260,77
4,84
52,15
1,66 >0,05
N = 48
n=8
y = 287,42 = 11,97
P
24
K = (y)2/N = 7 651,25
y2 = 8 031,21
C = 8/3, da Tabela 15
Ms = 0,2679
Mi = 0,0381
Total = 8 031,21 7 651,25 = 379,95
Clculo da estimativa de potncia e limites de confiana Ensaio de antibitico usando placas de Petri
t = 2,02 com 41 gl da Tabela 3 Doses equivalentes da amostra foram preparadas com base
na potncia suposta SA = 1 650 UI/mg.
8
Os dimetros dos halos de inibio encontram-se na
Tabela 25.
Padro P Amostra A
Dose menor P1 = 105,5 A1 = 106,0
Dose mdia P2 = 133,1 A2 = 133,5
Dose maior P3 = 159,2 A3 = 159,1
Preparao P = 397,8 A = 398,6
Contraste linear LP = 53,7 LA = 53,1
Contraste quadrtico QP = -1,5 QA = -1,9
n=7
Validade do ensaio
Colunas Total
Filas
1 2 3 4 Filas
1 38 43 35 40 F1 = 156
2 38 30 44 38 F2 = 150
3 39 45 37 40 F3 = 161
4 45 38 45 37 F4 = 165
Total Coluna C1 = 160 C2 = 156 C3 = 161 C4 = 155
Total das doses P1 = 142 P2 = 166 A1 = 150 A2 = 174
8
Tabela 30 - Exemplo 4: totais e contrastes.
Padro Amostra
Dose menor P1 = 142 A1 = 150
Dose maior P2 = 166 A2 = 174
Preparao P = 308 A = 324
Contraste linear LP = 24 LA = 24
364 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
N =16
n =4
K = (y)2/N = 6322/16 = 24 964
SA = 10 log SA = l
M = 0,0323 + 1 = 1,0323
c = 1, da Tabela 15
2 2 2 2
Colunas = 160 + 156 + 161 + 155 24964 = 6,5
4
Total= 25220 - 24964 = 256,0
Ms = 0,1402
Erro= 256,0 - 160,0 - 31,5 - 6,5 = 58,0
Mi = -0,0324
A analise no apresentou diferenas significativas (p >
0,05) entre filas e entre colunas.
Logaritmo dos limites de confiana da potncia
I = log 0,25 - log 0,20 = 0,0969 As doses utilizadas do padro foram p1 = 60 mUI/mL e p2
= 120 mUI/mL. Foram preparadas doses equivalentes da
t = 2,45 com 6 gl da Tabela 3 amostra, a1 = 60 mUI/mI e a2 = 120 mUI/mL a partir da
potncia suposta SA = 27,4 UI/mL.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 365
Os camundongos foram injetados com 0,1 mL da soluo respectiva para cada 10 g de peso mdio, de acordo com a
Tabela 6.
Tabela 32 - Exemplo 5: concentrao de glicose sangunea (mg/100 mL), quarenta minutos aps injeo.
N = 96
n = 24
b1 = 48
K = (y2/N = 4 484,02/96 = 209 440,17
y2 = 237 201,30
c = 1 da Tabela 15
Ms = 0,0064+1,4377 = 1,4441
Fase paralelismo = Mi = -0,0896+1,4377 = 1,3481
=
Limites de confiana da potncia
Fase preparaes =
Rs = anti log 1,4441 = 27,80 UI/mL
= Ri = anti log 1,3481 = 22,29 UI/mL
Erro I = 14 789,73 173,88 41,61 28,60 = 14 545,64
Exemplo 6: mdias mveis
Erro II = 27 761,13 14 789,73 183,15 10 057,32
57,35 0,19 = 2 673,39
Ensaio de heparina pelo mtodo de inibio da coagulao
de plasma ovino citratado
Validade do ensaio
As doses utilizadas do padro, em mL, foram: = p1 = 0,78;
O ensaio cumpre as condies de validade: p2 = 0,76; p3 = 0,74; p4 = 0,72; p5 = 0,70 e p6 = 0,68. Doses
equivalentes (a) da amostra foram preparadas a partir da
a) regresso significativa, F calculado 165,52 maior que o potncia suposta SA = 140,6 UI/mg.
valor crtico da Tabela 5, para = 0,01, g11 = 1 e g12 = 44;
Padro P Amostra A
Tubo Log dose Mdias Mdias grau log dose Mdias Mdias grau
(mL 10) log dose coagulao (mL 10) log dose coagulao
xP xiP yiP xA xiA yiA
1 0,8921 - - 0,8921 - -
2 0,8808 0,8807 0,167 0,8808 0,8807 0,333
3 0,8692 0,8491 0,417 0,8692 0,8691 0,667
4 0,8572 0,8572 0,750 0,8573 0,8572 0,917
5 0,8450 0,8450 0,917 0,8451 0,8450 1,000
6 - - - 0,8325 - -
8
0,15 UI/mL; 0,30 UI/mL; 0,60 UI/mL; 1,20 UI/mL; 2,40
Ensaio de antibitico usando placas de Petri - Doseamento UI/mL
microbiolgico de Benzilpenicilina benzatina p para
injetvel. Doses equivalentes da amostra foram preparadas com base
na potncia suposta
SA de 600.000 UI/frasco
368 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
P1 P3 P2 P3 P4 P3 P5 P3
13,87 19,88 16,24 19,54 23,47 19,21 27,41 19,32
12,95 20,60 16,35 19,85 23,04 18,97 27,62 19,61
13,08 20,43 16,88 19,86 23,19 19,39 26,67 19,72
12,86 19,85 15,34 18,49 23,04 19,68 27,50 19,65
Dimetro dos
halos de inibio 13,24 20,07 15,98 19,06 22,65 19,14 27,41 19,27
13,08 20,06 15,50 19,20 23,01 19,65 26,53 20,04
12,88 19,75 16,26 19,96 23,99 19,81 27,30 19,25
13,39 20,30 16,70 19,70 23,85 19,72 27,49 19,53
13,31 20,30 16,70 19,95 23,82 19,55 27,27 19,90
Mdia 13,184 20,138 16,217 19,512 23,340 19,458 27,244 19,588
P1 P2 P3 P4 P5
x1 = - 0,82391 x2 = - 0,52288 x3 = - 0,22185 x4 = 0,079181 x5 = 0,380211
13,406 16,402 19,674 23,686 27,496
12,486 16,512 19,674 23,256 27,706
Dimetro dos 12,616 17,042 19,674 23,406 26,756
halos de inibio 12,396 15,502 19,674 23,256 27,586
12,776 16,142 19,674 22,866 27,496
12,616 15,662 19,674 23,226 26,616
12,416 16,422 19,674 24,206 27,386
12,926 16,862 19,674 24,066 27,576
12,846 16,862 19,674 24,036 27,356
(yi)2 13106,59 21729,12 31352,37 44945,7 60503,21
x = concentrao do antibitico em logaritmo
Totais
N = 45
x = -9,983205
8 y = 896,936
y2 = 19.076,73
(yi2)/9 = 19.070,78 xy = -100,374
(x x )(y y ) = 98,61069
(x x )2 = 8,155715 (y y )2 = 1.199,081
( x x) 2 ( y y ) 2
= 0,4305 = 5,2203
N 1 N 1
b0 = 22,61426 b1 = 12,09086
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 369
A1 P3 A2 P3 A3 P3
19,66 19,78 19,57 18,73 18,69 18,57
19,49 19,45 18,91 19,12 19,04 18,89
19,94 19,50 19,02 19,70 19,28 19,12
19,38 19,68 19,41 19,55 19,38 19,14
19,88 19,90 19,32 19,38 19,22 19,40
19,88 19,91 19,55 19,74 19,22 19,10
19,74 19,45 19,41 19,33 20,03 19,45
19,15 19,04 19,47 19,68 19,33 19,45
19,45 19,32 19,48 19,46 19,45 19,45
yi = 31.176,96
2
yi = 30.986,56
2
yi = 30.324,74
2
yi = 30.516,6
2
yi = 30.150,85
2
yi = 29.780,40
2
X1 X2 X3 X4
- 0,0099256 0,0694789 0,0099256 - 0,0198511
0,0033085 - 0,0173697 0,0124069 - 0,0256410
0,0363937 - 0,0562448 0,0132341 0,0330852
- 0,0248139 - 0,0115798 0,0198511 - 0,0281224
- 0,0016543 - 0,0049628 - 0,0148883 0,0066170
- 0,0024814 - 0,0157155 0,0099256 0,0016543
8
0,0239868 0,0066170 0,0479735 - 0,0281224
0,0090984 - 0,0173697 - 0,0099256 0,0645161
0,0107527 0,0016543 0,0000000 - 0,0264682
Tx = 0,044665 Tx = - 0,04549 Tx = 0,088503 Tx = - 0,02233
Tx2/9 = 0,000222 Tx2/9 = 0,00023 Tx2/9 = 0,00087 Tx2/9 = 0,0000554
X2 = 0,024058 (Tx 2/9) = 0,001377
t = 2,042 k = 9 f=9 n = 32
s = 0,02662
Tabela 42 - Exemplo 7: logaritmo da razo de potncia e limites de confiana para as amostras A1, A2, A3 e A4.
A1 A2 A3 A4
Logaritmo da razo
0,004963 - 0,00505 0,009833 - 0,00248
de potncia (log)
MAS e MAI 0,02308 - 0,01316 0,01307 0,01564 0,01564 0,02795 0,01564 - 0,02060
Clculo da estimativa de potncia e limites de confiana Logaritmo dos limites de confiana da potncia
para amostra A1:
MAs (A1) = 0,02308 + log 600.000 = 5,80123
Utilizando as frmula 17 e 20 a 25 MAi (A1) = -0,01316 + log 600.000 = 5,76499
M(A1) = X1/9 = 0,004963
Limites de confiana da potncia
M = M + log 600.000 = 5,78311
R = antilog 5,78311 = 606.895,97 UI/frasco Rs = antilog 5,80123 = 632.746,9 UI/frasco
Ri = antilog 5,76499 = 582.091,5 UI/frasco
Mas (A1) + L = 0,004963 + 0,01812 = 0,02308
MAi (A1) - L = 0,004963 - 0,01812 = -0,01316
A1 A2 A3 A4
Desvio padro (s) 0,269 0,232 0,356 0,229
Mdia 19,62 19,35 19,24 19,26
Coeficiente de variao (CV) 1,37 1,20 1,85 1,19
Padro P Amostra A
p1 p2 a1 a2
Nmero de camundongos injetados (n) 30 28 28 24
Nmero de camundongos em convulso 9 17 11 18
Porcentagem de respostas (%) 30,0 60,7 39,3 75,0
Validade do ensaio
Padro P Amostra A
p1 p2 a1 a2
Probito (Tabela 16)
Ponderao w (Tabela 17)
P1 = 4,48
0,576
P2 = 5,27
0,619
A1 = 4,73
0,540
A2 = 5,67
0,540 8
Preparao P = 9,75 A = 10,4 y = 20,15
Contraste linear LP = 0,79 LA = 0,94 L = 1,73
Soma de
Fonte de variao gl Quadrado mdio F p
quadrados
Preparao 1 0,1056 0,1056 1,71 > 0,05
Regresso 1 0,7482 0,7482 12,15 < 0,01
Paralelismo 1 0,0056 0,0056 0,09 > 0,05
Erro Infinito s2 = 0,0616
Rs = 77,73 UI/mL
Ri = 36,22 UI/ mL
8
t2 4,1209 4,1209 4,2025
gl 34 33 27
Mi = 1,3700
(Tabela 18) = 5,9
Rs = 26,5
Como 2 calculado menor que o valor crtico, no se tem
elementos para suspeitar de heterogeneidade. Ri = 23,5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 373
9 RADIOFRMACOS
9
a partcula emitida portadora de carga positiva ou
negativa o ncleo sofre mudana de nmero atmico e, Meia-vida fsica: tempo necessrio para metade de uma
consequentemente, o nmero de eltrons na eletrosfera populao de tomos de um radionucldeo decair para
do tomo que lhe corresponde, determinando mudana outra forma nuclear. A meia-vida relacionada constante
nas propriedades qumicas do tomo. A radioatividade de decaimento () pela equao:
decai em razo exponencial, que caracterstica para cada
radionucldeo. A atividade em qualquer tempo pode ser
calculada pela exresso
devidos formao de espcies excitadas, que podem Verifica-se que, por exemplo, para soluo de pertecnetato
degradar outras molculas, por exemplo, as dos solventes de sdio (99mTc) com a concentrao radioativa de 37 MBq
ou conservantes. (1 mCi) por mL, a concentrao do pertecnetato pode ser
to baixa quanto 3 x 10-10 g mL-1.
Tambm, deve ser considerada a susceptibilidade oxidao
e reduo de pequena quantidade de espcies qumicas O comportamento de massas to pequenas em solues
presentes. A excluso inicial de todos os traos de agentes muito diludas pode requerer a adio de carreador inerte
de oxidao e reduo nem sempre suficiente, porque para limitar a adsoro superfcie do recipiente assim
tais agentes podem formar-se continuamente por efeitos da como facilitar as reaes qumicas de preparao de
radiao. Durante o armazenamento, recipientes e solues radiofrmacos.
podem escurecer devido radioatividade emitida. Tal fato
no indica, necessariamente, a deteriorao da preparao.
CONTROLE BIOLGICO
Conservantes
Esterilidade
Preparaes radiofarmacuticas injetveis so geralmente
Radiofrmacos injetveis devem ser preparados de
acondicionadas em recipientes multidose. Os conservantes
acordo com as BPF de modo a assegurar a esterilidade,
antimicrobianos podem sofrer decomposio pela
atendendo aos critrios do Teste de esterilidade
influncia da radiao e isso restringe seu uso para
(5.5.3.2.1). Por causa das caractersticas radioativas das
alguns radiofrmacos injetveis. Portanto, a exigncia de
preparaes, no praticvel atrasar a liberao de alguns
que preparaes injetveis contenham um conservante
produtos farmacuticos radioativos por conta do teste
antimicrobiano adequado, em concentrao adequada,
de esterilidade. Em tais casos, os resultados dos testes
no se aplica necessariamente, s preparaes
de esterilidade fornecem apenas evidncia retrospectiva
radiofarmacuticas.
confirmatria para a garantia da esterilidade, que portanto,
As preparaes radiofarmacuticas injetveis com perodo depende dos mtodos iniciais estabelecidos na fabricao
de vida til maior que um dia e que no contenham um e nos procedimentos de validao/certificao. No caso
conservante antimicrobiano devem ser fornecidas em de radiofrmacos preparados em pequenos lotes e para os
frascos de dose nica. Se, contudo, a preparao for quais a execuo do teste de esterilidade apresenta grau
fornecida num recipiente multidose, deve ser utilizada elevado de risco radiolgico, a quantidade de amostra
dentro de 24 horas aps a retirada da primeira dose, de requerida no teste de esterilidade deve ser considerada. Se
forma assptica. a preparao radiofarmacutica esterilizada por filtrao
ou processada assepticamente, a validao do processo
As preparaes radiofarmacuticas injetveis para as quais necessria.
o perodo de vida til maior que um dia e que contenham
conservante antimicrobiano podem ser fornecidas em
Endotoxinas Bacterianas
recipientes multidose. Aps a retirada da primeira dose,
de forma assptica, o recipiente deve ser armazenado Quando especificado, uma monografia individual para uma
em temperatura na faixa de 2 C a 8 C e os contedos preparao radiofarmacutica requer conformidade com o
utilizados no prazo de 7 dias. teste para endotoxinas bacterianas, descrito em Mtodos
Biolgicos Endotoxinas Bacterianas (5.5.2.2). Na
DILUIO realizao do teste devem-se tomar as precaues necessrias
para limitar a irradiao do pessoal que realiza o teste.
Caso necessrio fazer diluio prefervel utilizar veculos
de mesma composio que os presentes na preparao. O limite de endotoxinas bacterianas indicado nas
Em caso de radiofrmacos injetveis devem ser utilizados monografias dos radiofrmacos. A validao do teste
solues e materiais estreis, livres de partculas e de traos necessria para excluir qualquer interferncia devido
de matria orgnica. natureza do radiofrmaco. Nveis de radioatividade
devem ser padronizados j que alguns tipos de radiao
A quantidade de material radioativo presente na preparao
frequentemente muito pequena para ser medida pelos
mtodos qumicos ou fsicos disponveis.
e radionucldeos, especialmente altos nveis de atividade,
podem interferir com o teste. O pH de algumas preparaes
radiofarmacuticas dever ser ajustado a pH 6,5 - 7,5 para
9
promover resultados timos.
Considerando a frmula
Quando a natureza da preparao radiofarmacutica resultar
em uma interferncia por inibio ou potencializao e no
for possvel eliminar o fator interferente, a conformidade
com o teste para endotoxinas bacterianas deve ser
em que:
especificada. Em alguns casos difcil concluir o teste
Smax = atividade especfica mxima, antes da liberao do lote para uso, quando a meia-vida
W = peso atmico, do radionucldeo na preparao curta. O teste ento se
T1/2 = tempo de meia-vida em horas. constitui um controle da qualidade da produo.
376 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
somente verdadeira no tempo de referncia especificado. medida em condies geomtricas idnticas e em intervalos
A atividade em outros tempos pode ser calculada a partir que correspondem usualmente metade da meia-vida
da equao exponencial ou pela tabela de decaimento ou, e pelo tempo correspondente a aproximadamente trs
ainda, pode ser obtida graficamente da curva estabelecida meias-vidas. O funcionamento correto do equipamento
para cada radionucldeo. Todas as determinaes de verificado por meio do uso de uma fonte permanente e
atividade devem ser acompanhadas de declarao da data as variaes da contagem so corrigidas, se necessrio,
e, se necessrio, da hora em que as medidas foram feitas. A conforme descrito em Medida da radioatividade. Traa-se
medida da atividade de amostra em soluo calculada em uma curva lanando-se o tempo no eixo das abscissas e no
relao ao seu volume original e expressa por unidade de eixo das ordenadas, o logaritmo do nmero de contagens
volume - concentrao radioativa. por unidade de tempo, ou a corrente eltrica, conforme
o tipo do equipamento usado. A meia-vida calculada a
partir dessa curva deve atender especificao descrita na
Unidades de Radioatividade
respectiva monografia.
No Sistema Internacional (SI) a radioatividade expressa
em becquerel (Bq) que significa uma transformao por Determinao da natureza e da energia da radiao
segundo. A unidade histrica de atividade o curie (Ci)
que equivalente a 3,7 x 1010 Bq. A natureza e a energia da radiao emitida podem
ser determinadas por diversos procedimentos que
Os fatores de converso entre becquerel e curie e seus incluem a elaborao da curva de atenuao e o uso de
submltiplos so assinalados na Tabela 1. espectrometria. A curva de atenuao usada geralmente
para a determinao da energia da radiao beta e a
Tabela 1 - Unidades de radioatividade utilizadas em radiofarmcia
espectrometria usada principalmente para determinao
e as converses entre unidades SI e unidades histricas.
da energia da radiao gama.
Nmero
Unidade A curva de atenuao elaborada para emissores beta
de tomos Unidade SI:
Histrica: puros ou para emissores beta-gama quando no h
transformados becquerel (Bq)
curie (Ci) disponibilidade de espectrmetro de raios gama. Esse
por segundo
mtodo de determinao de energia mxima da radiao
1 1 Bq 27 picocurie (pCi) beta fornece apenas valores aproximados.
1000 1 kilobecquerel (KBq) 27 nanocurie (nCi)
1 x106 1 megabecquerel (MBq) 27 microcurie (mCi) A fonte, montada convenientemente para proporcionar
1 x109 1 gigabecquerel (GBq) 27 millicurie (mCi) condies geomtricas constantes, colocada em frente
37 37 Bq 1 (nCi) janela delgada do contador Geiger-Mller e protegida
37.000 37 KBq 1 (mCi) conforme descrito em Medida do tempo de meia-vida.
3,7 x 107 37 MBq 1 (mCi) A contagem da fonte , ento, medida. Entre a fonte e o
3,7 x 1010 37 GBq 1 Ci contador so colocados pelo menos seis absorvedores de
alumnio, de massa crescente por unidade de rea, at
que a taxa de contagem no seja afetada pela adio de
Identificao de radionucldeos absorvedores adicionais. Os absorvedores so inseridos
de modo tal que as condies geomtricas sejam mantidas
O radionucldeo , geralmente, identificado pela meia- constantes.
vida fsica ou pela natureza e energia de sua radiao ou
radiaes, ou por ambos. Constri-se uma curva colocando em abscissas a massa por
unidade de rea do absorvedor expressa em mg cm-2 e, em
ordenadas, o logaritmo do nmero de contagens por unidade
Medida do tempo de meia-vida de tempo para cada um dos absorvedores utilizados. Curva
A meia-vida medida com auxlio de aparelhos de idntica elaborada utilizando-se o padro. O coeficiente
deteco tais como cmara de ionizao, contador Geiger- de atenuao de massa calculado em relao parte
Mller, contador de cintilaes ou detector semicondutor. mediana, praticamente retilnea, das curvas.
A quantidade de radioatividade, consideradas as condies
experimentais, deve ser suficientemente alta para permitir
O coeficiente de atenuao da massa, expresso em cm2 mg-1,
depende da energia da emisso beta e das propriedades fsicas
9
a deteco durante vrias meias-vidas presumveis, porm e qumicas do absorvedor. Isso possibilita a identificao de
no alta demais, para evitar o fenmeno de perda por emisso beta e o coeficiente calculado, a partir de curvas
coincidncia devida, por exemplo, ao tempo morto do construdas como descrito anteriormente, pela expresso:
equipamento.
2,303
A fonte radioativa preparada de modo a evitar perdas m = (log A1 log A 2 )
m 2 m1
durante sua manipulao. Amostras lquidas devem estar
contidas em frascos ou tubos selados. Produtos slidos em que:
devem ser protegidos por capa de folha adesiva de acetato
de celulose, ou outro material cuja massa por unidade de m1 = massa por unidade de rea, do absorvedor mais leve;
rea seja desprezvel para evitar a atenuao de quantidade m2 = massa por unidade de rea, do absorvedor mais
significativa da radiao em estudo. A mesma fonte pesado (medir m1 e m2 dentro da parte retilnea da curva);
378 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
A1 = taxa de contagem para massa por unidade de rea mL; Se, numa fonte, a impureza radioativa de meia-vida
A2 = taxa de contagem para massa por unidade de rea m2. diferente estiver presente, ela facilmente detectvel pela
identificao de picos caractersticos, cujas amplitudes
O coeficiente de atenuao assim calculado no deve decrescem em taxas diferentes daquelas do radionucldeo
diferir em mais de 10% do coeficiente obtido em condies esperado. A determinao da meia-vida de picos
idnticas com o padro do mesmo radionucldeo. interferentes por medidas repetidas da amostra ajudar na
identificao da impureza. possvel estabelecer a taxa de
A espectrometria gama usada para identificar
decaimento da radioatividade usando espectrometria gama
radionucldeos pela energia e intensidade dos raios X ou
desde que os picos diminuam em amplitude em funo da
gama. Baseia-se na propriedade que certas substncias
meia-vida.
(cintiladores) tm de emitirem luz quando interagem com
radiao eletromagntica. O nmero de ftons produzido Informaes sobre as caractersticas fsicas dos
proporcional energia absorvida pelo cintilador. A radionucldeos de relevncia na produo de radiofrmacos
luz transformada em impulsos eltricos de amplitude so fornecidas na Tabela 2.
aproximadamente proporcional energia dissipada pelos
ftons gama.
PUREZA RADIONUCLDICA
Com a anlise dos impulsos de sada por porcentagem
obtem-se, com auxilio do analisador de pulsos, o espectro Para estabelecer a pureza radionucldica da preparao,
de energia da fonte. Nos espectros de cintilao de raios a radioatividade e a identidade de cada radionucldeo
gama h um ou mais picos caractersticos correspondentes presente devem ser conhecidas. O mtodo mais comumente
s energias da radiao gama na fonte. Esses picos so utilizado para examinar a pureza radionucldica o da
acompanhados por outros, mais ou menos largos, devidos a espectrometria gama. No um mtodo totalmente preciso
efeitos secundrios da radiao no cintilador ou ao material porque as impurezas alfa e beta-emissoras geralmente
em torno dele. A forma do espectro varia de acordo com no so detectveis e, quando so empregados detectores
o equipamento utilizado, tornando-se necessrio calibr-lo de iodeto de sdio, os picos devidos s impurezas so
com auxlio de padro do radionucldeo em questo. frequentemente encobertos pelo espectro do radionucldeo
principal.
O espectro de raios gama do radionucldeo que os emite
prprio dele, sendo caracterizado pelo nmero de Na monografia esto estabelecidas as exigncias gerais
raios gama de energia individualizada produzida por para a pureza radionucldica (por exemplo, o espectro de
transformao. Essa propriedade pode ser utilizada para raios gama no deve diferir significativamente daquele da
identificar quais radionucldeos esto presentes na fonte fonte padro) e pode estabelecer limites para impurezas
e as quantidades de cada um deles. Possibilita, tambm, radionucldicas especficas (por exemplo, molibdnio-99
avaliar o grau de impurezas presentes, pela deteco dos em tecncio-99m). Essas exigncias so necessrias
picos estranhos queles esperados. embora elas por si s no sejam suficientes para assegurar
que a pureza radionucldica da preparao seja adequada
O detector preferido para a espectrometria de raios gama para uso humano. O fabricante deve analisar seus produtos,
um detector semicondutor de germnio ativado com ltio. especialmente as preparaes de radionucldeos de meia-
Os detectores de cintilao de iodeto de sdio ativados com vida curta, quanto presena de impurezas de meia-vida
tlio, embora apresentem resoluo menor, tambm, podem longa, aps perodo conveniente de decaimento. Dessa
ser usados. A sada de cada um desses detectores ocorre na maneira, podem ser obtidas informaes sobre a adequao
forma de pulsos eltricos, cuja amplitude proporcional dos processos de fabricao e dos procedimentos de
energia dos raios gama detectados. Aps amplificao, controle.
esses pulsos so analisados em analisador multicanal, que
fornece o espectro de energia gama da fonte. A relao Devido s diferenas nas meias vidas dos diferentes
entre energia gama e o nmero do canal pode ser facilmente radionucldeos presentes na preparao farmacutica, a
estabelecida utilizando-se fontes de raios gama de energia pureza radionucldica muda com o tempo. A especificao
conhecida. O sistema de deteco deve ser calibrado, pois de pureza radionucldica deve ser garantida durante todo
a eficincia do detector funo da energia da radiao o prazo de validade. s vezes difcil realizar esse teste
Na determinao da pureza radioqumica podem ser usados difuso da substncia radioativa para alm das manchas ou
mtodos analticos de separao, tais como mtodos reas identificadas.
cromatogrficos (cromatografia em papel, em camada
delgada, de excluso molecular, cromatografia gasosa ou Medidas de radioatividade podem ser feitas por integrao,
cromatografia a lquido de alta eficincia), eletroforese e utilizando-se equipamento automtico ou contador digital.
extrao por solventes. As propores das reas abaixo dos picos fornecem as
relaes das concentraes radioativas das substncias
Na cromatografia, o volume da amostra a ser utilizado qumicas. Quando as fitas so cortadas em pores,
depende da tcnica adotada. prefervel no diluir as razes das quantidades de radioatividade medidas
a preparao em anlise, mas importante utilizar fornecem as propores das concentraes de espcies
quantidade de radioatividade tal que perdas de contagem qumicas radioativas.
por coincidncia no venham a ocorrer durante a medida
da radioatividade. Como a pureza radioqumica pode mudar com o tempo,
principalmente por causa da decomposio por radiao,
Considerando as massas muito pequenas do material o resultado do teste deve indicar que o produto apresenta
radioativo aplicado aos cromatogramas, o uso de valores especificados durante todo o prazo de validade do
carreadores , s vezes, necessrio e eles podem ser radiofrmaco.
adicionados quando a monografia assim o prescrever.
9
9
Tabela 2 Informaes sobre as caractersticas fsicas dos radionucldeos de relevncia na produo de radiofrmacos.
380
Transies
Meia-vida Tipo de Energia Probabilidade de
Radionucldeo Energia do Fton (MeV) Ftons Emitidos (%) Internamente
fsica Decaimento (MeV) transio (%)
Convertidas (%)
Csio- 137 30,1 a b+ 0,512 94,6 Via 2,6 min 137mBa 85,1 9,5
1,174 5,4 0,662 8 (Ba K Raio-X)
0,032-0,038
Carbono-11 1223,1s b+ 0,960 99,76 0,511 Proveniente de aniquilao
Carbono-14 5730 a b- 0,158 100 - -
Cromio-51 27,7d c.e. 100 0,320 9,83
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Transies
Meia-vida Tipo de Energia Probabilidade de
Radionucldeo Energia do Fton (MeV) Ftons Emitidos (%) Internamente
fsica Decaimento (MeV) transio (%)
Convertidas (%)
Galio-67 78,3h c.e. 100 0,091 3,6 0,3
0,185 23,5 0,4
0,209 2,6 0,02
0,300 16,7 0,06
0,394 4,4 0,01
0,494 0,1
0,704 0,02
0,795 0,06
0,888 0,17
0,008-0,010 43 (Zn Raio-X)
via 9,2 ms 67mZn
0,093 37,6 32,4
0,008-0,010 13 (Zn Raio-X)
Holmio-166 27,3h b-, g 0,191 0,2 0,007 7,6
0,394 1 0,048 2,8
1,773 48 0,049 5,0
1854 51 0,055 2,0
0,080 6,2
1,379 0,9
1,581 0,18
0,12
1,662
ndio-111 2,81 d c.e. 100 0,172 89,6 10,4
0,247 94 6
ndio-113 m 99,5 min t.i. 100 0,392 64,9 35,1
0,024-0,028 24 (em K Raio-X)
Iodo-123 13,2 h c.e. 100 0,159 83,0 16,3
0,347 0,10
0,440 0,35
0,506 0,26
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
0,529 1,05
0,539 0,27
0,027-0,032 ~86 (Te K Raio-X)
381
9
9
Tabela 2 (continuao)
382
Transies
Meia-vida Tipo de Energia Probabilidade de
Radionucldeo Energia do Fton (MeV) Ftons Emitidos (%) Internamente
fsica Decaimento (MeV) transio (%)
Convertidas (%)
Iodo-124 4,1d b-, g, K 1,53 0,511 and Proveniente de aniquilao
2,13 0,605 66
0,644 12
0,730 14
1,320 1,0
1,510 4,2
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
1,695 14
2,09 2,0
2,26 1,5
Iodo-125 60,0d c.e. 100 0,035 7 93
0,027-0,032 138 (Te K Raio-X)
Iodo-131 8,06d b- 0,247 1,8 0,080 2,4 3,8
0,304 0,6 0,284 5,9 0,3
0,334 7,2 0,364 81,9 1,7
0,606 89,7 0,637 7,2
0,806 0,7 0,723 1,8
1,3% de 131I decaem
via 12d 131mXe
100
(Xennio-131m) t.i. (porcentagem relativa 0,164 2 98
desintegrao do 131mXe)
Ferro-59 44,6d b- 0,084 0,1 0,143 0,8
0,132 1,1 0,192 2,8
0,274 45,8 0,335 0,3
0,467 52,7 0,383 0,02
1,566 0,3 1,099 55,8
1,292 43,8
1,482 0,06
Kriptnio-81m 13s g - - 0,193 82
Lutcio-177 6,71d b-, g 0,175 12,3 0,071 0,16
0,384 9,0 0,113 6,3
0,497 78,7 0,208 11,0
0,250 0,2
0,321 0,2
Tabela 2 (continuao)
Transies
Meia-vida Tipo de Energia Probabilidade de
Radionucldeo Energia do Fton (MeV) Ftons Emitidos (%) Internamente
fsica Decaimento (MeV) transio (%)
Convertidas (%)
Molibdnio-99 66,2h b- 0,454 18,3 0,041 1,2 4,8
0,866 1,4 0,141 5,4 0,7
1,232 80 0,181 6,6 1,0
outros 0,3 0,366 1,4
0,412 0,02
0,529 0,05
0,621 0,02
0,740 13,6
0,778 4,7
0,823 0,13
0,961 0,1
1,306 0,01
383
9
9
Tabela 2 (continuao)
384
Transies
Meia-vida Tipo de Energia Probabilidade de
Radionucldeo Energia do Fton (MeV) Ftons Emitidos (%) Internamente
fsica Decaimento (MeV) transio (%)
Convertidas (%)
Rubdio-81 4,7h b+, g, K 0,33 0,253
0,58 0,450
filha 81mKr 1,05 1,10
Samrio-153 47h b -, g 0,26 0,1 0,0058 11,8
0,632 34,1 0,0409 17,2
0,702 44,1 0,0415 31,2
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Transies
Meia-vida Tipo de Energia Probabilidade de
Radionucldeo Energia do Fton (MeV) Ftons Emitidos (%) Internamente
fsica Decaimento (MeV) transio (%)
Convertidas (%)
Tlio-201 73,5h c.e. 100 0,031 0,29 10,1
0,032 0,25 9,6
0,135 2,9 8,9
0,166 0,13 0,2
0,167 8,81 16
Alumnio-113 115d c.e. 100 0,255 21 0,1
0,024-0,028 73 (em K Raio-X)
filha 131mIn
3
Trtio ( H) 12,35a b- 0,0186 100
Tungstnio-188 69,5d b-, 0,3 0,227
0,291
filhas 188m+188Re
Xennio-131m 11,9d t.i. 100 0,164 2 98
0,029-0,035 ~52 (Xe K Raio-X)
Xennio-133 5,25d b- 0,266 0,9 0,080 0,4 0,5
0,346 99,1 0,081 36,6 63,3
0,160 0,05
0,030-0,036 ~46 (Cs K Raio-X)
Xennio-133m 2,26d t.i. 100 0,233 8 92
0,029-0,035 ~59 (Xe K Raio-X)
filha 133Xe
Ytrbio-169 32,0d c.e. 100 0,021 0,21 12,3
0,063 45,16 50,4
0,094 0,78 12,3
0,110 3,82 56,2
0,117 0,04
0,118 1,90 3,2
0,131 11,42 13,5
0,177 17,31 17,7
0,198 26,16 25,7
0,240 0,12
0,261 1,74
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
9
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 387
10 EQUIVALNCIA FARMACUTICA E
BIOEQUIVALNCIA DE MEDICAMENTOS
INTRODUO A Equivalncia Teraputica entre o genrico e o
medicamento de referncia possibilita a Intercambialidade
Nesse captulo so abordados aspectos cientficos e tcnicos entre eles, o que, tambm, conhecido como substituio
relacionados aos ensaios de Equivalncia Farmacutica, genrica no ato da dispensao do medicamento
Dissoluo, Biodisponibilidade e Bioequivalncia pelo farmacutico. Quando dois medicamentos so
aplicveis a medicamentos, com nfase s formas considerados Equivalentes Teraputicos assume-se que
farmacuticas slidas de liberao imediata (FFSLI) de uso ambos vo apresentar a mesma eficcia e segurana ao
oral e suspenses, no contexto da intercambialidade entre serem administrados ao organismo, assim como o mesmo
medicamentos. Medicamentos biolgicos (vacinas, soros, potencial para causar efeitos adversos.
derivados de sangue, etc), biotecnolgicos, radiofrmacos
e fitoterpicos requerem outras consideraes e, portanto, Caso uma indstria farmacutica pretenda registrar
no sero abordados. um novo medicamento similar, deve verificar a
regulamentao tcnica vigente. Para medicamentos
Os atos de registro e ps-registro de medicamentos so da similares j comercializados, a regulamentao tcnica
competncia da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria pertinente apresenta um cronograma de adequao com
(Anvisa). Os aspectos cientficos e tcnicos apresentados base no critrio de risco sanitrio, segundo o qual at o
nesse captulo esto em consonncia com os critrios ano de 2014 todos os medicamentos similares do mercado
adotados internacionalmente e com a regulamentao tero se adequado aos mesmos critrios exigidos para o
tcnica vigente no Brasil sobre os temas relacionados. registro de medicamentos genricos.
Os medicamentos genricos foram implantados no
Brasil em 1999, enquanto que em 2003 publicou-se EQUIVALNCIA FARMACUTICA
regulamentao tcnica especfica para o registro e para a
adequao do registro de medicamentos similares que j A Equivalncia Farmacutica corresponde comprovao
eram comercializados no pas. Os medicamentos similares de que dois medicamentos so equivalentes em relao aos
que estavam no mercado haviam sido registrados segundo resultados dos testes in vitro. Por definio, Equivalentes
normas que permitiam seu registro sanitrio por meio do Farmacuticos so medicamentos que contm o mesmo
conceito de similaridade a um medicamento anteriormente frmaco, isso , mesmo sal ou ster da mesma molcula
registrado, sem a necessidade de apresentao, por ocasio terapeuticamente ativa, mesma forma farmacutica e via
do registro, dos resultados de ensaios in vitro ou in vivo de administrao e so idnticos em relao potncia ou
relacionados comprovao da eficcia e segurana. As concentrao. Devem ser formulados para cumprir com
novas regulamentaes para medicamentos similares as mesmas especificaes atualizadas da Farmacopeia
publicadas em 2003 destinam-se ao estabelecimento da Brasileira e, na ausncia dessas, com as de outros cdigos
isonomia de critrios para registro e renovao de registro autorizados pela legislao vigente ou, ainda, com
de medicamentos no inovadores (genricos e similares), outros padres aplicveis de qualidade; relacionados
tendo como base os preceitos da garantia da qualidade, identidade; dosagem; pureza; potncia; uniformidade
eficcia e segurana. de contedo; tempo de desintegrao e velocidade de
dissoluo, quando for o caso. Entretanto, podem diferir
A Equivalncia Farmacutica e a Bioequivalncia so em caractersticas como forma, mecanismos de liberao,
critrios aplicveis a medicamentos genricos e similares. embalagem, excipientes, prazo de validade e, dentro de
Para o registro de um medicamento genrico, a indstria certos limites, rotulagem.
farmacutica deve solicitar Agncia Nacional de
Vigilncia Sanitria (Anvisa) a indicao do medicamento Os estudos de Equivalncia Farmacutica destinam-se
de referncia para a realizao dos ensaios necessrios ao avaliao da qualidade dos medicamentos por meio
desenvolvimento da formulao, da forma farmacutica e de anlise comparativa entre o medicamento teste e o
do processo de fabricao, estabelecendo as condies para medicamento de referncia e devem ser, necessariamente,
os testes de estabilidade e as especificaes do medicamento realizados por laboratrios autorizados pela Anvisa. Alm
de modo a comprovar sua Equivalncia Farmacutica (in disso, os estudos devem ser realizados em amostras dentro
vitro) e Bioequivalncia (in vivo) com o medicamento de
referncia, condio indispensvel para a comprovao da
Equivalncia Teraputica entre o candidato a genrico e o
do prazo de validade, utilizando-se substncias qumicas
de referncia da Farmacopeia Brasileira, oficializadas por
meio de Resoluo de Diretoria Colegiada da Anvisa ou
10
medicamento de referncia (geralmente o medicamento originrias de outras farmacopeias. No caso de inexistncia
inovador cuja biodisponibilidade conhecida e a eficcia dessas substncias, admite-se o uso de substncias qumicas
clnica e a segurana foram comprovadas por ocasio do de trabalho com identidade, teor e perfil de impurezas
registro sanitrio). devidamente determinados.
388 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
10
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 389
10
fatores fisiopatolgicos associados) e s caractersticas
sofre a influncia dos fatores citados.
do medicamento (frmaco, formulao e processo de
fabricao). No caso dos fatores ligados ao indivduo, sua
influncia deve ser minimizada ao mximo, o que ocorre PERFIL DE DISSOLUO
quando o planejamento do ensaio de biodisponibilidade
bem executado, por meio de critrios de incluso e excluso O perfil de dissoluo pode ser definido como um ensaio
bem definidos, a seleo de um grupo de voluntrios in vitro que permite a construo da curva de porcentagem
de frmaco dissolvido em funo do tempo, empregando-
390 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
se, geralmente, as condies estabelecidas no teste de para as dosagens consideradas so semelhantes ao perfil do
dissoluo descrito na monografia do medicamento inscrita biolote, as formulaes dessas dosagens so proporcionais
na Farmacopeia Brasileira ou, na sua ausncia, em outros e a farmacocintica linear dentro do intervalo entre a
compndios autorizados pela legislao vigente. maior e a menor dosagem) e alteraes ps-registro.
Para realizao do perfil de dissoluo, no caso de No caso de medicamentos que sero submetidos ao estudo
inexistncia de mtodo de dissoluo farmacopeico, a de bioequivalncia, a avaliao do perfil de dissoluo
empresa solicitante do registro deve desenvolver mtodo comparativo em relao ao medicamento de referncia
analtico adequado ao produto avaliado de acordo com os indispensvel para o conhecimento do comportamento
parmetros descritos na legislao vigente. das formulaes. Quando os perfis de dissoluo so
semelhantes, de acordo com os critrios aplicveis, h
A avaliao do perfil de dissoluo aplicvel nos casos uma indicao de que o medicamento teste poder ser
de desenvolvimento de formulaes, controle de qualidade bioequivalente ao medicamento de referncia. Entretanto,
lote-a-lote, iseno do estudo de bioequivalncia para o mtodo de dissoluo deve ser discriminativo, permitindo
menores dosagens (quando o estudo de bioequivalncia detectar alteraes significativas nas formulaes e nos
realizado com a maior dosagem e os perfis de dissoluo processos de fabricao.
10
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 391
11
bacterianas, resultantes de micro-organismos aquticos
392 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
cistos e oocistos de protozorios, como Giardia sp e especificaes da legislao brasileira relativa aos parmetros
Cryptosporidium sp em amostra de 100 mL. fsicos, qumicos, microbiolgicos e radioativos, para um
determinado padro de potabilidade e, portanto, no possui
Para atender a esses limites, as estaes de tratamento monografia especfica nesse compndio.
utilizam processos de desinfeco com substncias qumicas
contendo cloro ou outros oxidantes, empregadas h dcadas, A gua potvel empregada, normalmente, nas etapas iniciais
e consideradas relativamente seguras para os seres humanos. de procedimentos de limpeza e como fonte de obteno de
Entretanto, esses oxidantes podem reagir com o material gua de mais alto grau de pureza. Pode ser utilizada, tambm,
orgnico de origem natural e gerar produtos secundrios na climatizao trmica de alguns aparatos e na sntese de
da desinfeco, como trihalometanos, cloraminas ou ainda ingredientes intermedirios.
deixar resduos dos prprios desinfetantes. Esses produtos
indesejveis requerem ateno especial, por parte dos O controle rigoroso e a manuteno de conformidade dos
legisladores e usurios. parmetros de potabilidade da gua so fundamentais, crticos
e de responsabilidade do usurio do sistema de purificao
As cloraminas, em particular, podem danificar que ser alimentado. O controle deve ser peridico para
irreversivelmente um equipamento de declorao integrante garantir que o sistema de purificao utilizado esteja
de um sistema de purificao, alm de apresentarem risco de apropriado para as condies da fonte de alimentao e
formao e liberao de amnia. que no houve alterao na qualidade da gua fornecida.
No entanto, a maioria das aplicaes requer tratamento
Alm desses dois grupos fundamentais de contaminantes, adicional da gua potvel, seja por destilao, deionizao,
existem os particulados, constitudos por slica, resduos troca inica, osmose reversa, isolados ou acoplados, ou outro
da tubulao ou colides e que, alm de ser um risco processo adequado para produzir a gua purificada, livre da
qualidade da gua purificada, podem provocar entupimentos e interferncia de contaminantes que possam afetar a qualidade
prejudicar gravemente o processo de purificao, por reduzir dos medicamentos produzidos. Outra variante da gua potvel
seu desempenho, ou at mesmo causar danos irreversveis aos a gua reagente, descrita a seguir, com carter informativo,
equipamentos. Podem ser detectados por filtrao, combinada pois no possui monografia especfica.
com gravimetria ou microscopia. Mas em geral no
necessrio identificar o tipo de partcula, apenas remov-la.
gua reagente
Nesse captulo so abordadas algumas consideraes acerca
dos principais sistemas de purificao normalmente utilizados produzida por um ou mais processos, como destilao
na produo da gua para uso farmacutico; suas principais simples, deionizao, filtrao, desclorao ou outro,
aplicaes; monitoramento e manuteno. Abrange, tambm, adequados s caractersticas especficas de seu uso.
os parmetros de pureza estabelecidos para aqueles tipos de Geralmente a gua reagente empregada na limpeza de
gua que no so cobertos pela legislao vigente. materiais e de alguns equipamentos e na fase final da sntese de
ingredientes ativos e de excipientes. Tambm, tem aplicao
no abastecimento de equipamentos, autoclaves, banho-
TIPOS DE GUA maria e em histologia. Devem ser adotadas medidas para
evitar a proliferao microbiana nos pontos de circulao,
Basicamente, h trs tipos de gua para uso farmacutico: a
distribuio e armazenamento. Os principais parmetros que
gua purificada (AP); a gua para injetveis (API) e a gua
caracterizam a gua reagente so: condutividade de 1,0 a 5,0
ultrapurificada (AUP), cujas monografias encontram-se
mS/cm (resistividade > 0,2 MW-cm) e carbono orgnico total
nessa Farmacopeia. Compndios oficiais de outros pases ou
(COT) < 0,20 mg/L.
internacionais especificam, alm desses, outros tipos de gua,
como: acondicionadas em frascos, estreis ou bacteriostticas,
para irrigao ou inalao. Porm, todas possuem gua purificada (AP)
caractersticas de pureza semelhante aos tipos fundamentais
j mencionados. A gua purificada produzida a partir da gua potvel ou da
gua reagente e deve atender s especificaes estabelecidas na
Alm disso importante comentar, tambm, sobre a gua respectiva monografia. No contm qualquer outra substncia
potvel e a gua reagente, que so amplamente utilizadas adicionada. obtida por uma combinao de sistemas de
e tm aplicao direta em instalaes farmacuticas, purificao, em uma sequncia lgica, tais como mltipla
principalmente em procedimentos gerais de limpeza. Assim, destilao; troca inica; osmose reversa; eletrodeionizao;
so considerados os cinco tipos de gua a seguir, em relao ultra filtrao, ou outro processo capaz de atender, com a
s suas caractersticas principais e as sugestes de aplicao. eficincia desejada, aos limites especificados para os diversos
As monografias especficas, quando disponveis, detalham os contaminantes.
parmetros de pureza estabelecidos para cada tipo.
empregada como excipiente na produo de formas
farmacuticas no parenterais e em formulaes magistrais,
gua potvel desde que no haja nenhuma recomendao de pureza
superior no seu uso ou que no necessite ser apirognica.
Como diretriz fundamental, o ponto de partida para qualquer
Tambm, pode ser utilizada na lavagem de material, preparo
processo de purificao de gua para fins farmacuticos a
de solues reagentes, meios de cultura, tampes, diluies
gua potvel. Essa obtida por tratamento da gua retirada de
diversas, microbiologia em geral, anlises clnicas, tcnicas
11
mananciais, por meio de processos adequados para atender s
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 393
por Elisa ou radioimunoensaio, aplicaes diversas na maioria estar em contato direto com a amostra, sempre que for
dos laboratrios, principalmente em anlises qualitativas apropriado.
ou quantitativas menos exigentes (determinaes em
porcentagem). utilizada nos ensaios e determinaes que A gua ultrapurificada caracteriza-se por condutividade de
indiquem o emprego de gua, a no ser que haja especificao 0,055 a 0,1 a mS/cm a 25,0 oC 0,5 oC (resistividade > 18,0
em contrrio quanto ao nvel de pureza requerido, como por MW-cm), COT < 0,05 mg/L (alguns casos < 0,03 mg/L),
exemplo, alguns mtodos analticos instrumentais e anlises endotoxinas < 0,03 UI de endotoxina/mL e contagem total de
que exijam gua apirognica ou de pureza qumica superior. bactrias < 1 UFC/100 mL.
Pode ser empregada em cromatografia a lquido de alta
eficincia, quando confirmado que o seu emprego no afeta a gua para Injetveis (API)
exatido nem a preciso dos resultados.
gua para Injetveis utilizada como excipiente na preparao
Dependendo da aplicao, pode ser esterilizada, sem de produtos farmacuticos parenterais de pequeno e grande
necessariamente atingir o limite de endotoxinas bacterianas volume, na fabricao de princpios ativos de uso parenteral,
estabelecido para a gua para Injetveis. de produtos estreis, demais produtos que requeiram o
controle de endotoxinas e no so submetidos etapa posterior
Necessita monitoramento de contagem do total de organismos
de remoo, bem como na limpeza e preparao de processos,
aerbicos viveis, na produo e estocagem, visto que
equipamentos e componentes que entram em contato com as
no possui nenhum inibidor de crescimento adicionado.
formas parenterais na produo de frmacos. Essa modalidade
Minimamente, caracterizada por condutividade de 0,1 a
engloba, tambm, a gua esterilizada para injeo, utilizada
1,3 mS/cm a 25,0 C (resistividade > 1,0 MW-cm) e COT
na administrao parenteral e a gua estril para injeo, que
< 0,50 mg/L, endotoxinas < 0,25 UI de endotoxina/mL e
embalada em frasco hermtico e esterilizada por tratamento
contagem total de bactrias < 100 UFC/mL, a no ser que
de calor.
especificado de forma diferente. Todo o sistema de obteno;
armazenamento e distribuio deve ser devidamente validado O processo de purificao de primeira escolha a destilao,
e monitorado quanto aos parmetros de condutividade e em equipamento cujas paredes internas sejam fabricadas em
contagem microbiana. metal apropriado, como o ao inox AISI 316L, vidro neutro
ou quartzo Alternativamente, a API, tambm, pode ser obtida
Ainda que seja especificada uma contagem microbiana
por processo equivalente ou superior destilao para a
mxima de 100 UFC/mL na monografia, cada instalao ou
remoo de contaminantes qumicos e micro-organismos,
instalao produtiva dever estabelecer o seu limite de alerta
desde que seja validado e monitorado quanto aos parmetros
ou de ao, caso as caractersticas especficas de utilizao
estabelecidos. A gua de alimentao deve ser, no mnimo,
sejam mais restritivas, e definir limites apropriados.
potvel e, em geral, necessitar ser pr-tratada para alimentar
os equipamentos. O processo assim especificado em razo
gua ultrapurificada (AUP) da robustez que tais equipamentos apresentam quanto
operao e ao desempenho.
A gua ultrapurificada possui baixa concentrao inica, baixa
carga microbiana e baixo nvel de COT. Essa modalidade de O sistema de obteno, distribuio e armazenamento da
gua requerida em aplicaes mais exigentes, principalmente gua deve ser validado e apropriado, de forma a impedir a
em laboratrios de ensaios, para diluio de substncias contaminao microbiana e a formao de endotoxinas
de referncia, em controle de qualidade e na limpeza final bacterianas. Deve atender aos requisitos estabelecidos na
de equipamentos e utenslios utilizados em processos que monografia especfica. O controle ser mais rigoroso quando a
entrem em contato direto com a amostra que requeira gua aplicao for para injetveis, que no permite a ocorrncia de
com esse nvel de pureza. ideal para mtodos de anlise que contaminao microbiana, nem de endotoxinas. A adio de
exigem mnima interferncia e mxima preciso e exatido. um ou mais agentes antimicrobianos gua purificada estril
A utilizao de gua ultrapurificada em anlises quantitativas origina a gua bacteriosttica estril, que empregada como
de baixos teores de analito essencial para obteno de diluente de algumas preparaes parenterais, embaladas em
resultados analticos precisos. Outros exemplos de aplicao doses individuais.
da gua ultrapurificada so: anlises de resduos, dentre eles
os traos de elementos minerais, endotoxinas, preparaes Outra variedade de gua a gua de hemodilise, que
de calibradores, controles, substncia qumica de referncia, tratada para obter a mxima reduo de contaminantes
espectrometria de absoro atmica em geral, ICP/IOS, ICP/ qumicos e microbiolgicos. Possui regulamento prprio,
MS, espectrometria de massa, procedimentos enzimticos, com especificaes de qualidade e periodicidade especficas
cromatografia a gs, cromatografia a lquido de alta eficincia para o controle, e no abrangida nessa farmacopeia.
(determinao de resduos em ppm ou ppb), mtodos em
A gua para injetveis deve atender aos ensaios fsico
biologia molecular e com cultivo celular etc. Deve ser
qumicos preconizados para a gua purificada, alm dos
utilizada no momento em que produzida, ou no mesmo dia
testes de contagem total de bactrias < 10 UFC/ 100 mL,
da coleta.
esterilidade, particulados e de endotoxinas bacterianas, cujo
O laboratrio deve utilizar o mesmo tipo de gua requerida valor mximo de 0,25 UI de endotoxina/mL.
para a leitura final da anlise na preparao das amostras, na
Alguns parmetros de qualidade e sugestes de aplicaes
obteno da curva padro, de controles, preparo de solues,
so registrados, na Tabela 1, para cada tipo de gua para uso
brancos, lavagem final do material e em toda a vidraria que
farmacutico
11
11
Tabela 1 Tipos de gua para uso farmacutico e parmetros de qualidade.
394
gua Reagente gua potvel tratada por deionizao ou outro Condutividade de 1 a 5,0 mS/cm a 25,0 C 0,5 oC Lavagem de material, abastecimento de equipamentos,
processo. Possui baixa exigncia de pureza. (resistividade > 0,2 MW-cm) autoclaves, banho-maria, histologia, usos diversos.
COT < 0,20 mg/L
gua purificada Nveis variveis de contaminao orgnica e Condutividade de 0,1 a 1,3 mS/cm a 25,0 C Produo de medicamentos e cosmticos em geral,
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
bacteriana. Exige cuidados de forma a evitar a 0,5C (resistividade > 1,0 MW-cm); farmcias, lavagem de material, preparo de solues
contaminao qumica e microbiolgica. COT < 0,50 mg/L; reagentes, meios de cultura, tampes, diluies,
Pode ser obtida por osmose reversa ou por uma Contagem total de bactrias < 100 UFC/mL microbiologia em geral, anlises clnicas, tcnicas
combinao de tcnicas de purificao a partir da Ausncia de Pseudomonas e outros patognicos. por Elisa, radioimunoensaio, aplicaes diversas na
gua potvel ou da reagente. maioria dos laboratrios, principalmente em anlises
qualitativas ou quantitativas menos exigentes (em
%). Em CLAE (em %).
gua para injetveis gua purificada tratada por destilao ou processo Atende aos requisitos qumicos da gua purificada e Como veculo ou solvente de injetveis, fabricao
similar. exige controle de endotoxina, partculas e esterilida- de princpios ativos de uso parenteral, lavagem final
de. Contagem microbiolgica < 10UFC/100 mL. de equipamentos, tubulao e recipientes usados em
Endotoxinas < 0,25 UI de endotoxina/mL; preparaes parenterais. Usada como diluente de
COT < 0,50 mg/L. preparaes parenterais.
gua ultrapurificada Para anlises que exigem mnima interferncia e Condutividade de 0,055 a 0,1 mS/cm a 25,0 oC Dosagem de resduos minerais ou orgnicos,
mxima preciso e exatido. Baixa concentrao 0,5 oC endotoxinas, preparaes de calibradores,
inica, baixa carga microbiana e baixo nvel de (resistividade > 18,0 MW-cm) controles, SQR, espectrometria de absoro
carbono orgnico total. COT < 0,05 mg/L (alguns casos < 0,003 mg/L) atmica, ICP/IOS, ICP/MS, espectrometria de
gua purificada tratada por processo complementar. Contagem total de mesfilos < 1 UFC/100mL(se massa, procedimentos enzimticos, cromatografia
utilizada para fins farmacuticos). a gs, CLAE (ppm ou ppb), biologia molecular e
cultivo celular etc.Eventualmente em preparaes
farmacuticas que requeiram gua de alta pureza
_________
COT = Carbono orgnico total;
UFC/100 mL = Unidades formadoras de colnias; populao microbiolgica vivel
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 395
haver fuga de pequenos fragmentos da resina, facilidade um pr-tratamento, um controle adequado das condies
de crescimento microbiano e por haver baixa remoo de operacionais e procedimentos apropriados de limpeza e
orgnicos. sanitizao, para manter a qualidade da gua conforme o
estabelecido.
Os sistemas de eletrodeionizao contnua combinam
resinas catinicas e aninicas com membranas
semipermeveis e a aplicao de um campo eltrico, Filtrao com carga eletrosttica
promovendo assim a remoo de ons de forma contnua, Esse tipo de filtrao emprega cargas positivas na
isso , sem necessidade de parada para regenerao. superfcie das membranas e destina-se a reduzir os nveis
Em ambos os casos necessrio ter um controle sobre de endotoxinas que possuem natureza eltrica negativa.
a gerao de partculas decorrente das regeneraes Apresentam uma capacidade marginal de remoo
sucessivas, alm de micro-organismos. Isso pode ser de micro-organismos, porm sua maior eficincia
realizado, controlando-se as regeneraes, no caso da devido remoo de endotoxinas. Apresenta uma
deionizao, utilizando-se recirculao da gua e aplicando- limitao importante: quando as cargas esto totalmente
se radiao UV para o controle de micro-organismos na neutralizadas, por saturao pela captura das endotoxinas,
sada, cuja eficcia precisa ser comprovada. a remoo se paralisa. Por essa razo, filtros com carga
eletrosttica so extremamente difceis de validar, dada
essa imprevisibilidade, quanto ao momento em que
Osmose reversa efetivamente no mais retm esses contaminantes.
A osmose reversa uma tecnologia de purificao baseada
em membranas semi permeveis e com propriedades Microfiltrao reteno de micro-organismos
especiais de remoo de ons; micro-organismos e
endotoxinas bacterianas. Remove 90 a 99% da maioria Essa tecnologia utiliza membranas microporosas, com
dos contaminantes. Entretanto, diversos fatores, uma especificao de tamanho de poro de 0,2, ou 0,22
como pH; presso diferencial ao longo da membrana; m. Devem ser validadas quanto reteno, por meio de
temperatura; tipo do polmero da membrana e a prpria um teste bacteriolgico, que determina o valor da reduo
construo dos cartuchos de osmose reversa podem afetar logartmica dos micro-organismos nas membranas. O
significativamente essa separao. modelo usado atualmente emprega uma suspenso de
Brevundimonas diminuta a 107 UFC/cm2 de rea filtrante, e
As membranas de osmose reversa devem ser devidamente testa a esterilidade do filtrado. Ainda que a membrana seja
controladas quanto formao de incrustaes provenientes especificada como 0,2 ou 0,22 m de tamanho de poro,
de sais de clcio, magnsio e outros, e de biofilme, fonte no necessariamente ser esterilizante, se no produzir um
crtica de contaminao microbiana e de endotoxinas. Por filtrado estril por meio desse teste, ou seja, um valor de
isso imprescindvel instalar um sistema de pr-tratamento reduo logartmica igual a 7. Caso a reduo logartmica
antes da osmose reversa, que remova partculas e agentes obtida no seja da ordem de sete, a membrana pode ser
oxidantes, e, em paralelo, deve fazer-se, periodicamente, utilizada para reduzir a flora microbiana, porm no serve
a sanitizao do sistema. Essa prtica ajuda a aumentar para esterilizar.
a vida til das membranas e reduz a frequncia de sua
regenerao. A microfiltrao aplicada, igualmente, na filtrao de
gases, ou ventilao de tanques de armazenamento, para
Existem, tambm, os sistemas de osmose reversa de evitar contaminao da gua neles contida. Nesses casos,
duplo passo, em que a gua purificada pelo primeiro utilizam-se membranas hidrofbicas, para que o filtro opere
estgio alimenta o segundo estgio, incrementando e sem acmulo de gua condensada, a partir da umidade do
complementando a purificao. prprio ar.
11
validada, e, da mesma forma que a osmose reversa, requer a presena de partculas, que se podem depositar na
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 397
superfcie da lmpada, diminuindo a intensidade da Como agentes qumicos, geralmente so usados oxidantes,
radiao, e prejudicar a eficincia do mtodo. Deve-se como os compostos halogenados, perxido de hidrognio,
considerar ainda a profundidade / espessura do leito de oznio ou uma combinao desses. A frequncia da
gua, o fluxo de gua no local da radiao e a potncia e sanitizao determinada pelo histrico dos resultados do
tempo de uso da fonte de radiao. monitoramento e das curvas de tendncia, de forma que o
sistema funcione sem exceder o limite de alerta.
Destilao
Armazenamento
Em instalaes industriais pode haver destiladores simples,
de mltiplos efeitos e os de compresso de vapor, que so As condies de estocagem devem ser adequadas
usados, em geral, para sistemas de produo de grandes qualidade da gua. A gua ultrapurificada no deve ser
volumes. A gua de alimentao para esses equipamentos armazenada por perodo superior a 24 horas.
requer controles diferentes daqueles usados em osmose
reversa. Nesse caso, a concentrao de silicatos crtica, A diretriz fundamental para o armazenamento da gua
como em qualquer sistema de gerao de vapor. Outro purificada, da gua ultrapurificada, ou da gua para
aspecto importante a possibilidade de carreamento de injetveis levar em conta que, quanto maior o grau de
compostos volteis no condensado. Isso especialmente purificao da gua, mais rapidamente ela tende a se
importante no que se refere a impurezas orgnicas, como recontaminar.
trihalometanos e gases dissolvidos na gua, como dixido Sendo assim, a gua deve ser mantida em recirculao
de carbono e amnia. Assim, o controle da gua potvel de constante, por meio de seu sistema de distribuio, sempre
entrada, conforme mencionado sobre a gua de alimentao que aplicvel. As primeiras pores de gua produzida por
para sistemas de purificao, fundamental. um sistema de purificao que tenha ficado inativo por mais
de quatro horas devem ser desprezadas, proporcionalmente
DISTRIBUIO, SANITIZAO, ao volume morto do recipiente. Essas variveis devem ser
ARMAZENAMENTO E VALIDAO validadas, para as condies especficas de cada sistema,
bem como, estabelecidos os parmetros a serem avaliados
na validao.
Distribuio
O reservatrio utilizado para a sua manuteno deve ser
O desenho do sistema de distribuio deve levar em conta
apropriado aos fins a que se destina, composto por material
a recirculao constante da gua purificada e a manuteno
inerte, limpo e no servir de fonte de contaminao ao
da temperatura da gua contida no tanque. Caso necessrio,
contedo. O material de construo deve apresentar
dever contar com um trocador de calor para fornecer gua
caractersticas e rugosidade apropriadas para dificultar a
mais fria aos pontos de uso.
aderncia de resduos, a formao de biofilme e corroso
Tubulaes, vlvulas, instrumentos e outros dispositivos pelos agentes sanitizantes. O ao inoxidvel 316L
devem ter construo e acabamento sanitrio, de forma eletropolido, com rugosidade menor que 0,5 microRA,
a no contriburem para que ocorra a contaminao a escolha mais frequente para atender a essas exigncias.
microbiana e ser sanitizados. O reservatrio deve estar protegido de fontes de luz e calor
imprprios e a geometria deve permitir seu esgotamento
No devem ser utilizados filtros de reteno microbiolgica total pelo fundo, sem volumes mortos.
na sada, ou no retorno dos sistemas de distribuio, pois
so repositrios de micro-organismos retidos e, portanto, Procedimentos adequados devem ser adotados para
uma fonte crtica para a formao de endotoxinas. evitar a contaminao por particulados, orgnicos ou
micro-organismos. Deve possuir um filtro de respiro /
Os pontos de uso devem ser projetados de forma a ventilao para evitar que haja contaminao do volume
evitar volumes mortos e possibilitar que a gua recircule do tanque pela admisso de ar / umidade, contaminados e
totalmente neles quando estiverem fechados. evitar uma recontaminao por essa via.
11
398 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
O plano de validao para um sistema de gua envolve as realizadas devem ser registradas em formulrio prprio,
seguintes etapas: em que conste, pelo menos, o(s) parmetro(s) medido(s),
a data da medio, o valor obtido, a faixa de aceitao
a) conhecer o padro de qualidade da fonte de alimentao; e o responsvel pela leitura. O pessoal que realiza essa
b) estabelecer o padro de qualidade da gua purificada; tarefa deve conhecer o plano de amostragem e os mtodos
c) definir as tecnologias de purificao e sua sequncia, a utilizados, bem como os limites de alerta e de ao
partir da qualidade da gua de entrada; estabelecidos. Caso o usurio terceirize esse controle, deve
garantir que o terceirizado cumpra com os requisitos e
d) selecionar os materiais de construo dos sistemas de
procedimentos definidos.
produo, armazenamento, distribuio e monitoramento
dos pontos de uso; Os dados obtidos so comparados com as especificaes
e) desenvolver os protocolos de qualificao de projeto, tpicas e os limites de alerta e de ao. Esses so
instalao, operao e desempenho; estabelecidos pelo usurio, que conhece tanto o histrico do
f) estabelecer os parmetros crticos, nveis de alerta e de sistema de purificao e distribuio, como as exigncias
ao e a periodicidade de sanitizao e de monitoramento; de qualidade para uma determinada aplicao, e baseado
na validao.
g) estabelecer um plano de manuteno da validao,
que incluir mecanismos para o controle de mudanas Na maioria das aplicaes, o monitoramento da gua de
nos sistemas de gua e proporcionar subsdios para um uso farmacutico se baseia no controle microbiolgico e
programa de manuteno preventiva. nos parmetros que assegurem a manuteno da qualidade
da gua desejada. Em geral, no necessrio identificar os
Os protocolos de qualificao devem estar previamente
micro-organismos presentes, mas sim, proceder contagem
aprovados antes de sua execuo.
total de bactrias, por meio de mtodo adequado para abranger
uma ampla gama de organismos. Amostras contendo agentes
MONITORAMENTO DA QUALIDADE DA GUA sanitizantes devem ser neutralizadas antes de proceder
anlise. Os ensaios microbiolgicos devem ser realizados aps
O processo empregado na produo de gua para uso
curto intervalo de tempo da coleta da amostra, ou essa dever
farmacutico deve ser validado e, sistematicamente, os
ser refrigerada adequadamente e por tempo determinado, para
parmetros estabelecidos na legislao e nas monografias
preservar as caractersticas originais.
especficas de cada tipo de gua devem ser verificados.
O monitoramento fsico-qumico acompanha, principalmente,
O monitoramento da qualidade da gua deve abranger todos
a condutividade e o carbono orgnico total, que tambm
os pontos crticos e representativos do sistema, de acordo
podem ser medidos em linha. Esses ensaios abrangem uma
com o planejamento estabelecido, de forma consistente e
ampla gama de contaminantes inorgnicos. Caso a amostra
contnua.
no seja analisada em seguida coleta, deve ser preservada
Assim, devem ser estabelecidos procedimentos operacionais e armazenada em condies que garantam a sua integridade
e de sanitizao, um programa de monitoramento abrangente, e conservao e por perodo adequado. Dependendo
com manuteno preventiva e um sistema de controle de da aplicao requerida os parmetros crticos a serem
mudanas, que determine criteriosamente se o sistema monitorados podem variar.
necessitar ser revalidado aps qualquer modificao.
O usurio deve definir os limites de alerta e de ao, de
As questes sazonais que podem afetar a qualidade da forma a evitar a utilizao do produto com especificao
gua da fonte de fornecimento devem ser consideradas na de qualidade inferior requerida para uma dada aplicao.
elaborao do plano. A frequncia de coleta das amostras O limite de alerta indica um aviso de desvio da qualidade
definida na validao do sistema, bem como os ensaios e no necessariamente requer uma medida corretiva. Pode
necessrios para garantir a manuteno da qualidade da ser estabelecido com base numa anlise estatstica do
gua requerida. Qualquer alterao no plano original deve histrico de tendncias, utilizando dois desvios-padro,
ser re avaliada. por exemplo, ou cerca de 70% do limite de ao, ou a 50%
da contagem do nmero de unidades viveis, o que for
Os equipamentos e aparatos utilizados nas verificaes menor. O limite de ao indica que o desvio da qualidade
devem ser capazes de fornecer a leitura na faixa requerida excedeu os parmetros tolerveis e requer interrupo da
para a pureza estabelecida. Os equipamentos utilizados atividade para a correo.
devem estar devidamente calibrados. As verificaes
11
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 399
a
12
12 SUBSTNCIAS QUMICAS DE
REFERNCIA
De acordo com definio da OMS, padres de referncia farmacopeicos, cuja produo est sob a coordenao do
farmacopeicos (PRef) so produtos de uniformidade Comit Tcnico Temtico de Material de Referncia (CTT
reconhecida, destinados ao uso em ensaios onde uma ou MR) da Farmacopeia Brasileira, em consonncia com as
mais de suas propriedades ser(o) comparada(s) com diretrizes da Comisso da Farmacopeia Brasileira.
a(s) da substncia em exame. Possuem um grau de pureza
adequado ao uso ao qual se destinam. As SQR-FB so estabelecidas e monitoradas de acordo
com os princpios da OMS, com a colaborao de
O PRef estabelecido e distribudo por autoridades laboratrios pblicos e privados, por meio de estudos
farmacopeicas, cujo valor atribudo a uma ou mais de suas interlaboratoriais que utilizam um protocolo analtico
propriedades aceito sem necessitar comparao com previamente desenvolvido e validado, originando um
outro padro, destinado ao uso em ensaios especficos produto de elevada qualidade, cujo valor atribudo a uma
descritos nas monografias farmacopeicas. Incluem ou mais de suas propriedades fsicas e/ou qumicas no
substncias qumicas de referncia, produtos biolgicos, necessita comparao com outra SQR.
extratos e ps vegetais, radiofrmacos, entre outros. A
expresso relacionada mais usada : Substncia Qumica de Mtodos analticos utilizam, frequentemente, equipamentos
Referncia Farmacopeica. estabelecida e distribuda por sofisticados para facilitar a preciso e rapidez do
autoridades farmacopeicas, e amplamente reconhecida procedimento utilizado, baseando-se em medidas relativas,
como tendo grau de pureza apropriado, dentro de um que necessitam de padres de referncia para obteno dos
contexto especfico e cujo valor, quando utilizado como resultados.
referncia analtica, aceito sem requerer comparao com As SQR-FB so desenvolvidas para auxiliar na execuo
outra substncia qumica. de ensaios descritos nas monografias da FB. Seu grau
de pureza pode variar de acordo com o ensaio ao qual
SUBSTNCIA QUMICA DE REFERNCIA DA se destina. O valor declarado especfico para o ensaio
FARMACOPEIA BRASILEIRA (SQR-FB) descrito na FB.
estabelecida e distribuda pela Direo da Farmacopeia As SQR-FB devem ser armazenadas e manipuladas
Brasileira, seguindo os princpios da OMS, e oficializada adequadamente a fim de se obter resultados confiveis
pela Anvisa, sendo o seu uso obrigatrio em todo territrio quando utilizadas. Devem ser armazenadas nos frascos
nacional. Na ausncia de uma SQR-FB permitido o uso de originais, fechados e em condies de temperatura e
SQR estabelecida por outras farmacopeias reconhecidas, umidade de acordo com as especificaes constantes no
conforme legislao vigente. rtulo e/ou certificado de anlise.
Referncia
Color Referncia
Cor Substncia Cas Sinnimo Denominao em ingls Descrio (IUPAC) Unio Usos, restries e requerimentos
index 21 CFR
Europeia
AMARELO AMARELO 2783-94-0 AMARELO 6 FD&C YELLOW #6 DISODIUM (5E)-6-OXO-5- 15985 741706 E110 Utilizado em alimentos, cosmticos
CREPSCULO INS 110 [(4-SULFONATOPHENYL) e medicamentos em geral. No
HYDRAZINYLIDENE] permitida a utilizao na rea dos
NAPHTHALENE-2-SULFONATE olhos, em suturas cirrgicas e
formas farmacuticas injetveis.
AMARELO AMARELO 15790-07-5 AMARELO 6 LACA FD&C YELLOW #6 ALUMINUM 6-OXIDO-5- 15985:1 741706 E110 Utilizado em alimentos, cosmeticos
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
AMARELO AMARELO DE 8004-92-0 AMARELO 10 D&C YELLOW #10; 2-(2-QUINOLYL)-1,3- 47005 741710 E104 Utilizado em cosmticos e
QUINOLINA QUINOLINE YELLOW INDANDIONE DISULFONIC medicamentos em geral. No
ACID DISODIUM SALT permitida a utilizao na rea dos
olhos, em suturas cirrgicas e
formas farmacuticas injetveis.
AMARELO AMARELO DE 68814-04-0 AMARELO 10 LACA D&C YELLOW #10 ALUMINUM;2-(2-QUINOLYL)- 47005:1 741710 E104 Utilizado em cosmticos e
QUINOLINA, DE ALUMNIO ALUMINUM LAKE; 1,3-INDANDIONE DISULFONIC medicamentos em geral. No
LACA DE QUINOLINE YELLOW ACID DISODIUM SALT permitida a utilizao na rea dos
ALUMNIO ALUMINUM LAKE olhos, em suturas cirrgicas e
formas farmacuticas injetveis.
AMARELO AMARELO DE 92874-95-8 AMARELO 11 D&C YELLOW # 11 2-QUINOLIN-2-YLINDENE- 4700 741711 N/C Utilizado em cosmticos e
QUINOLINA 1,3-DIONE medicamentos de aplicao tpica.
SOLVEL No permitida a utilizao na rea
dos olhos, em suturas cirrgicas e
formas farmacuticas injetveis.
AMARELO AMARELO 6417-85-2 FLUORESCENA; D&C YELLOW # 7; 3,6-DIHYDROXYSPIRO[2- 45350:1 741707 N/C Utilizado em cosmticos e
FLUORESCENA AMARELO 7 FLUORESCEINE BENZOFURAN-3,9- medicamentos de aplicao tpica.
XANTHENE]-1-ONE No permitida a utilizao na rea
dos olhos, em suturas cirrgicas e
formas farmacuticas injetveis.
Tabela 1 (continuao)
Referncia
Color Referncia
Cor Substncia Cas Sinnimo Denominao em ingls Descrio (IUPAC) Unio Usos, restries e requerimentos
index 21 CFR
Europeia
AMARELO CURCUMINA 458-37-7 AMARELO TURMERIC (1E,6E)-1,7-BIS(4-HYDROXY-3- 75300 73615 E100 Permitidas para todos os tipos de
CURCUMINA; OLEORESIN METHOXYPHENYL) HEPTA- produtos, incluindo alimentos
CRCUMA 1,6-DIENE-3,5-DIONE
AMARELO XIDO DE 51274-00-1 XIDO DE FERRO YELLOW IRON OXIDE XIDOS DE FERRO OBTIDOS 77492 731200 E172 Utilizado em medicamentos de
FERRO AMARELO POR SNTESE, INCLUSIVE administrao oral (no excedendo
AMARELO SUAS FORMAS HIDRATADAS dose diria de 5 mg de Fe) e uso
OU COMBINAES DE MAIS tpico No permitido na rea dos
DE UM DESTES XIDOS olhos, em suturas cirrgicas e
formas farmacuticas injetveis.
AMARELO RIBOFLAVINA 83-88-5 VITAMINA B2 RIBOFLAVIN 7,8-DIMETHYL-10-[(2S,3S,4R)- N/C 73450 E101 Permitidas para todos os tipos de
LACTOFLAVINA 2,3,4,5-TETRAHYDROXYPENTYL] produtos, incluindo alimentos
BENZO[G]PTERIDINE-2,4-DIONE
AMARELO TARTRAZINA 1934-21-0 AMARELO DE FD&C YELLOW #5 TRISODIUM (4E)-5-OXO-1- 19140 741705 E102 Utilizado em alimentos, cosmticos
TARTRAZINA; (4-SULFONATOPHENYL) e medicamentos de uso externo
AMARELO 5 -4-[(4-SULFONATOPHENYL) e interno. No permitido na rea
INS 102 HYDRAZINYLIDENE] dos olhos, em suturas cirrgicas e
PYRAZOLE -3-CARBOXYLATE formas farmacuticas injetveis.
AMARELO TARTRAZINA, 12225-21-7 AMARELO DE FD&C YELLOW #5 ALUMINUM; 4-[[3-CARBOXY- 19140:1 741705 E102 Utilizado em alimentos, cosmticos
LACA DE TARTRAZINA LACA ALUMINUM LAKE 5-OXO-1-(4-SULFOPHENYL)- e medicamentos de uso externo
ALUMNIO DE ALUMNIO; 4H-PYRAZOL-4-YL]DIAZENYL] e interno. No permitido em
AMARELO 5 LACA BENZENESULFONATE; suturas cirrgicas e formas
DE ALUMNIO 4-[[3-CARBOXY-5-OXO- farmacuticas injetveis.
INS 103 1-(4-SULFOPHENYL)-4H-
PYRAZOL-4-YL] DIAZENYL]
BENZENESULFONATE
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
403
13
a
13
Tabela 1 (continuao)
404
Referncia
Color Referncia
Cor Substncia Cas Sinnimo Denominao em ingls Descrio (IUPAC) Unio Usos, restries e requerimentos
index 21 CFR
Europeia
AZUL AZUL 3844-45-9 AZUL N. 1 FD&C BLUE #1 DISODIUM 2-[[4-[ETHYL-[(3- 42090 741101 E133 Utilizado em medicamentos de
BRILHANTE INS 133 SULFONATOPHENYL) METHYL] uso externo e interno cosmticos e
AMINO]PHENYL]-[4-[ETHYL- alimentos. No permitido em na rea
[(3-SULFONATOPHENYL) dos olhos, em suturas cirrgicas e
METHYL] AZANIUMYLIDENE] formas farmacuticas injetveis.
CYCLOHEXA-2,5-DIEN-
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
1-YLIDENE] METHYL]
BENZENESULFONATE
AZUL AZUL 68921-42-6 AZUL N.1 LACA DE FD&C BLUE #1 3-[[ETHYL-[4-[[4-[ETHYL-[(3- 42090:2 741101 E133 Utilizado em medicamentos de
BRILHANTE, ALUMNIO ALUMINUM LAKE SULFOPHENYL)METHYL] uso externo e interno cosmticos
LACA DE INS 133 AMINO]PHENYL]-(2- e alimentos. No permitido
ALUMNIO SULFOPHENYL) METHYLIDENE] em suturas cirrgicas e formas
CYCLOHEXA-2,5-DIEN-1- farmacuticas injetveis.
YLIDENE] AZANIUMYL]
METHYL] BENZENESULFONATE
AZUL AZUL DE 860-22-0 AZUL N. 2; FD&C BLUE #2 DISODIUM (2E)-3-OXO-2- 73015 741102 E132 Utilizado em alimentos,
INDIGOTINA INDIGOTINA; (3-OXO-5-SULFONATO-1H- cosmticos e medicamentos de
NDIGO CARMIN; INDOL-2-YLIDENE)-1H- administrao por via oral
INS 132 INDOLE-5-SULFONATE
AZUL AZUL DE 16521-38-3 AZUL N. 2 LACA FD&C BLUE #2 ALUMINUM (2E)-3-OXO-2- 73015 741102 E132 Utilizado em alimentos,
INDIGOTINA, DE ALUMNIO ALUMINUM LAKE (3-OXO-5-SULFO-1H-INDOL- cosmticos e medicamentos de
LACA DE INS 132 2-YLIDENE)-1H-INDOLE- administrao por via oral
ALUMNIO 5-SULFONIC ACID
AZUL AZUL PATENTE, 3536-49-0 AZUL PATENTE V; ACID BLUE 3 ETHANAMINIUM, N-[4- 42051 1356 E131 Permitido para todos os
SAL DE CLCIO ACID BLUE 3; [[4-(DIETHYLAMINO) tipos de produtos.
PHENYL](5-HYDROXY-2,4-
DISULFOPHENYL)METHYLENE]-
2,5-CYCLOHEXADIEN-1-
YLIDENE]-N-ETHYL-, INNER
SALT, CALCIUM SALT (2:1)
Tabela 1 (continuao)
Referncia
Color Referncia
Cor Substncia Cas Sinnimo Denominao em ingls Descrio (IUPAC) Unio Usos, restries e requerimentos
index 21 CFR
Europeia
AZUL AZUL PATENTE, 129-17-9 ACID BLUE 1; ACID BLUE 1 ETHANAMINIUM, N-[4-[[4- 42045 1355 E131 Permitido para todos os
SAL DE SDIO FOOD BLUE 3; (DIETHYLAMINO)PHENYL] tipos de produtos.
CARMINE BLUE; (2,4-DISULFOPHENYL)
AZUL PATENTE VS METHYLENE]-2,5-
CYCLOHEXADIEN-1-
YLIDENE]-N-ETHYL-, INNER
SALT, SODIUM SALT (1:1)
BRANCO CARBONATO 72608-12-9 CARBONATO CALCIUM CARONATE CALCIUM CARBONATE 72220 731070 N/C Utilizado em medicamentos.
DE CLCIO DE CLCIO Permitido para uso geral, no sendo
permitido a utilizao na rea dos
olhos, em suturas cirrgicas e
formas farmacuticas injetveis.
BRANCO DIXIDO DE 13463-67-7 DIXIDO DE TITANIUM DIOXIDE DIOXOTITANIUM 77891 731575 E171 Utilizado em medicamentos,
TITNIO TITNIO Permitido para uso geral incluindo a
rea dos olhos, no sendo permitido
a utilizao em suturas cirrgicas,
formas farmacuticas injetveis.
LARANJA ANNATTO 8015-67-6 LARANJA N. 4 ANNATTO (2E,4E,6E,8E,10E,12E,14E,16Z,18E)- 75120 731030 E160B Utilizado em medicamentos
4,8,13,17-TETRAMETHYLI de uso externo (incluindo rea
COSA-2,4,6,8,10,12,14,16,18- dos olhos) e interno (excluindo
NONAENEDIOIC ACID rea dos olhos). No permitida a
utilizao em suturas cirrgicas e
formas farmacuticas injetveis.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
405
13
a
13
Tabela 1 (continuao)
406
Referncia
Color Referncia
Cor Substncia Cas Sinnimo Denominao em ingls Descrio (IUPAC) Unio Usos, restries e requerimentos
index 21 CFR
Europeia
LARANJA BETA 9000-07-1 LARANJA BETACAROTENE 1,3,3-TRIMETHYL-2- 40800 731095 E160E Utilizado em medicamentos
CAROTENO ALIMENTO 5 [(1E,3E,5E,7E,9E,11E,13E,15E,17E)- de uso externo (incluindo rea
3,7,12,16-TETRAMETHYL-18- dos olhos) e interno (excluindo
(2,6,6-TRIMETHYLCYCLOHEXEN- rea dos olhos). No permitida a
1-YL) utilizao em suturas cirrgicas e
OCTADECA-1,3,5,7,9,11,13,15,17- formas farmacuticas injetveis.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
NONAENYL]CYCLOHEXENE
LARANJA BETA-APO- 4172-46-7 INS 160E ALL-TRANS-BETA- (2E,4E,6E,8E,10E,12E,14E,16E)- 40820 N/C E160E Utilizado em medicamentos
8`CAROTENAL APO-8-CAROTENAL 2,6,11,15- de uso externo (incluindo rea
TETRAMETHYL-17-(2,6,6- dos olhos) e interno (excluindo
TRIMETHYLCYCLOHEXEN-1-YL) rea dos olhos). No permitida a
HEPTADECA-2,4,6,8,10,12,14,16- utilizao em suturas cirrgicas e
OCTAENAL formas farmacuticas injetveis.
LARANJA LARANJA 633-96-5 LARANJA PERSIA D&C ORANGE # 5 SODIUM 4-[(2E)-2-(2- 15510 741255 N/C Utilizado em cosmticos e
SOLAR OXONAPHTHALEN-1- medicamentos de uso externo
YLIDENE) HYDRAZINYL] (incluindo rea dos olhos) no
BENZENESULFONATE excedendo dose diria da droga de
5mg. No permitida a utilizao
em suturas cirrgicas e formas
farmacuticas injetveis.
PRETO XIDO DE 12227-89-3 XIDO DE BLACK IRON OXIDE XIDOS DE FERRO OBTIDOS 77499 731200 E172 Utilizado em medicamentos de uso
FERRO PRETO FERRO PRETO POR SNTESE, INCLUSIVE tpico e de administrao oral (no
SUAS FORMAS HIDRATADAS excedendo dose diria de 5 mg de
OU COMBINAES DE MAIS Fe). No permitida a utilizao na
DE UM DESTES XIDOS rea dos olhos, em suturas cirrgicas
e formas farmacuticas injetveis.
Tabela 1 (continuao)
Referncia
Color Referncia
Cor Substncia Cas Sinnimo Denominao em ingls Descrio (IUPAC) Unio Usos, restries e requerimentos
index 21 CFR
Europeia
VERDE CLOROFILA 1406-65-1 CLOROFILA CHLOROPHYLL MISTURA DE CLOROFILAS 75.810 N/C E140(I) Utilizado em medicamentos.
INS 140I A E B. CLOROFILA A:
C55H72MGN4O5, STER FITLICO
DO COMPLEXO MAGNESIANO
DE [(1,3,5,8-TETRAMETIL-
4-ETIL-2-VINIL-9-OXO-10-
METOXICARBONIL)FORBINIL]-
7-PROPIONATO. CLOROFILA
B: C55H70MGN4O6, STER
FITLICO DO COMPLEXO
MAGNESIANO DE [(1,5,
VERDE CLOROFILINA 48240-36-4 INS 140II CHLOROPHYLLINS MAGNESIUM; 75.810 N/C E140(II) Utilizado em medicamentos.
3-[18-(DIOXIDOMETHYLIDENE)-
8-ETHENYL-13-ETHYL-3,7,12,17-
TET
RAMETHYL-20-(2-OXIDO-
2-OXOETHYL)-2,3-
DIHYDROPORPHYRIN-23-ID-2-
YL]PROPANOATE; HYDRON
VERDE VERDE 4403-90-1 VERDE ALIZARINA D&C GREEN # 5 DISODIUM 5-METHYL- 61570 741205 N/C Utilizado em cosmticos e
BRILHANTE 2-[[4-(4-METHYL-2- medicamentos de uso externo
SULFONATOANILINO)-9,10- (incluindo rea dos olhos).
DIOXOANTHRACEN-1-YL] No permitida a utilizao em
AMINO] BENZENESULFONATE suturas cirrgicas e formas
farmacuticas injetveis.
VERDE VERDE SLIDO 2353-45-9 VERDE FD&C GREEN # 3 DISODIUM 2-[[4-[ETHYL-[(3- 42053 741203 N/C Utilizado em alimentos e
ALIMENTO 3 SULFONATOPHENYL)METHYL] medicamentos de uso externo
AMINO] PHENYL]-[4-[ETHYL- (incluindo rea dos olhos).
[(3SULFONATOPHENYL) No permitida a utilizao em
METHYL] AZANIUMYLIDENE] suturas cirrgicas e formas
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
13
a
13
Tabela 1 (continuao)
408
Referncia
Color Referncia
Cor Substncia Cas Sinnimo Denominao em ingls Descrio (IUPAC) Unio Usos, restries e requerimentos
index 21 CFR
Europeia
VERDE VERDE 128-80-3 VERDE D&C GREEN # 6 1,4-BIS(4-METHYLANILINO) 61565 741206 N/C Utilizado em cosmticos e
SOLVEL ANTRAQUINONA ANTHRACENE-9,10-DIONE medicamentos de uso externo
(incluindo rea dos olhos).
No permitida a utilizao em
suturas cirrgicas e formas
farmacuticas injetveis.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
VERDE VERDE 6358-69-6 VERDE PIRANINA D&C GREEN # 8 TRISODIUM 59040 741208 N/C Utilizado em cosmticos e
SOLVENTE 8-HYDROXYPYRENE- medicamentos de uso externo
1,3,6-TRISULFONATE (incluindo rea dos olhos).
No permitida a utilizao em
suturas cirrgicas e formas
farmacuticas injetveis. No
mais que 0,01% da dose.
VERMELHO AMARANTO 915-67-3 BORDEAU S INS 123 AMARANTH; D&C TRISODIUM (4Z)-3-OXO-4-[(4- 16185 N/C E123 Permitido para todos os
RED 2; ACID RED 27, SULFONATONAPHTHALEN- tipos de produtos.
TRISODIUM SALT 1-YL) HYDRAZINYLIDENE]
NAPHTHALENE-2,7-
DISULFONATE
VERMELHO AMARANTO, 12227-62-2 BORDEAU S LACA AMARANTH ALUMINUM; TRISODIUM 16185:1 N/C E123 Permitido para todos os
LACA DE DE ALUMNIO ALUMINUM LAKE; (4Z)-3-OXO-4-[(4- tipos de produtos.
ALUMNIO PIGMENT RED SULFONATONAPHTHALEN-
193; ACID RED 27 1-YL) HYDRAZINYLIDENE]
ALUMINUM LAKE; NAPHTHALENE-2,7-
FD AND C RED NO. 2 DISULFONATE
ALUMINUM LAKE
VERMELHO AZORRUBINA 3567-69-9 CARMOISINA CARMOISINE DISODIUM (3Z)-4-OXO-3-[(4- 14720 N/C E122 Permitido para todos os
SULFONATONAPHTHALEN-1-YL) tipos de produtos.
HYDRAZINYLIDENE]NAP
HTHALENE-1-SULFONATE
VERMELHO AZORRUBINA, 84041-67-8 CARMOISINA LACA CARMOISINE SAL DISSDICO DO CIDO 14720 N/C E122 Permitido para todos os
LACA DE DE ALUMNIO ALUMINUM LAKE 2-(4-SULFO-1-NAFTILAZO)- tipos de produtos.
ALUMNIO 1-NAFTOL-4-SULFNICO
Tabela 1 (continuao)
Referncia
Color Referncia
Cor Substncia Cas Sinnimo Denominao em ingls Descrio (IUPAC) Unio Usos, restries e requerimentos
index 21 CFR
Europeia
VERMELHO ERITROSINA 16423-68-0 ERITROSINA; FD&C RED #3; DISODIUM 2-(2,4,5,7-TETRAIODO- 45430 741303 E127 Utilizado em alimentos, cosmticos e
VERMELHO N. ERYTHROSINE 3-OXIDO-6-OXOXANTHEN- medicamentos de administrao oral
3; ERITROSINA 9-YL) BENZOATE
SDICA
INS 127
VERMELHO ERITROSINA, 12227-78-0 ERITROSINA LACA FD&C RED #3 DIALUMINUM; 45430 741303 E127 Utilizado em alimentos, cosmticos e
LACA DE DE ALUMNIO; ALUMINUM LAKE 1,3,6,8-TETRAIODO-3- medicamentos de administrao oral
ALUMNIO VERMELHO OXOSPIRO[2-BENZOFURAN-
N. 3 LACA DE 1,9-XANTHENE] -2,7-DIOLATE;
ALUMNIO; 1,3,6
ERITROSINA ,8-TETRAIODO-3-OXOSPIRO[2-
SDICA LACA DE BENZOFURAN-1,9-
ALUMNIO XANTHENE]-2,7-DIOLATE
INS 127
VERMELHO XIDO DE 1309-37-1 XIDO DE FERRO RED IRON OXIDE XIDOS DE FERRO OBTIDOS 77491 73.1200 E172 Utilizado em medicamentos de
FERRO VERMELHO POR SNTESE, INCLUSIVE administrao oral (no excedendo
VERMELHO SUAS FORMAS HIDRATADAS dose diria de 5 mg de Fe) e uso
OU COMBINAES DE MAIS tpico. No permitido na rea
DE UM DESTES XIDOS dos olhos, em suturas cirrgicas e
formas farmacuticas injetveis.
VERMELHO PIGMENTO 74336-37-1 VERMELHO 34 D&C RED # 34 CALCIUM (4Z)-3-OXO-4-[(1- 15880 741334 N/C Utilizado em cosmticos e
VERMELHO 63 SULFONATONAPHTHALEN-2-YL) medicamentos de uso externo.
HYDRAZINYLIDENE]NAPH No permitido na rea dos olhos,
THALENE-2-CARBOXYLATE em suturas cirrgicas e formas
farmacuticas injetveis.
VERMELHO PONCEAU SX 4548-53-2 VERMELHO 4 FD&C RED # 4 DISODIUM (3E)-3- 14700 741304 N/C Utilizado em alimentos, cosmticos
[(2,4-DIMETHYL-5- e medicamentos de uso externo.
SULFONATOPHENYL) No permitido na rea dos olhos,
HYDRAZINYLIDENE] em suturas cirrgicas e formas
-4-OXONAPHTHALENE- farmacuticas injetveis.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
1-SULFONATE
409
13
a
13
Tabela 1 (continuao)
410
Referncia
Color Referncia
Cor Substncia Cas Sinnimo Denominao em ingls Descrio (IUPAC) Unio Usos, restries e requerimentos
index 21 CFR
Europeia
VERMELHO VERMELHO 27 13473-26-2 VERMELHO D&C RED #27 DISODIUM 45410:2 741327 N/C Utilizado em cosmticos
PHLOXINE O 2,4,5,7-TETRABROMO-4,5,6,7- e medicamentos em geral.
TETRACHLOR No permitido na rea dos
O-3-OXOSPIRO[2-BENZOFURAN- olhos, em suturas cirrgicas
1,9-XANTHENE]-3,6-DIOLATE e formas farmacuticas
VERMELHO VERMELHO 30 2379-74-0 VERMELHO 30 D&C RED #30; (2Z)-6-CHLORO-2-(6-CHLORO- 73360 741330 N/C Utilizado em cosmticos
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
VERMELHO VERMELHO 33 3567-66-6 VERMELHO D&C RED #33 DISODIUM (3E)-5-AMINO-4-OXO- 17200 741333 N/C Utilizado em cosmticos e
ESPANICO 3-(PHENYLHYDRAZINYLIDENE) medicamentos de administrao
NAPHTHALENE-2,7- oral e tpico. No permitido na rea
DISULFONATE dos olhos, em suturas cirrgicas e
formas farmacuticas injetveis.
No exceder mais que 0,75 mg da
dose diria da dose quando utilizado
em medicamentos odontolgicos.
VERMELHO VERMELHO 40 25956-17-6 FD&C VERMELHO FD&C RED #40 DISODIUM (5E)-5-[(2- 16035 741340 E129 Utilizado em alimentos,
N. 40; VERMELHO METHOXY-5-METHYL- cosmticos e medicamentos em
ALURA AC 4-SULFONATOPHENYL) geral. No permitido na rea
INS 129 HYDRAZINYLIDENE]- dos olhos, em suturas cirrgicas
6-OXONAPHTHALENE- e formas farmacuticas
2-SULFONATE
VERMELHO VERMELHO 68583-95-9 VERMELHO FD&C RED #40 LACA DE ALUMNIO OU DE 16035:1 741340 E129 Utilizado em alimentos, cosmticos
40, LACA DE 40 LACA DE ALUMINUM LAKE CLCIO E ALUMNIO, EM e medicamentos em geral. No
ALUMNIO ALUMNIO; SUBSTRATO DE SAL DISSDICO permitido em suturas cirrgicas
VERMELHO DO CIDO 6-HIDROXI-5-(2- e formas farmacuticas
ALURA AC LACA METOXI-5-METIL-4-SULFOFENIL)
DE ALUMNIO AZO-2-NAFTALENOSSULFNICO
Tabela 1 (continuao)
Referncia
Color Referncia
Cor Substncia Cas Sinnimo Denominao em ingls Descrio (IUPAC) Unio Usos, restries e requerimentos
index 21 CFR
Europeia
VERMELHO VERMELHO 5281-04-9 VERMELHO 7 D&C RED #7 CALCIUM CALCIUM (4Z)-4-[(4-METHYL- 15850:1 741307 N/C Utilizado em cosmticos e
7, LACA DE LACA DE CLCIO; LAKE; D&C RED # 7 2-SULFONATOPHENYL) medicamentos em geral. O total
CLCIO VERMELHO LTIO HYDRAZINYLIDENE]- de D&C Red n. 6 no deve ser
RUBIM LACA 3-OXONAPHTHALENE- mais que 0,01% em 5mg/ dose
DE CLCIO 2-CARBOXYLATE diria de medicamento
VERMELHO VERMELHO 7659-95-2 VERMELHO DE BEET POWDER (2S)-4-[2-[(2S)-2-CARBOXY-6- N/C N/C E162 Utilizado em alimentos
BETERRABA, BETERRABA; BEETROOT RED HYDROXY-5-[(2S,3R,4S,5S,6R)-
BETANINA BETANINA INS 162 3,4,5-TRIHYDROXY-6-
(HYDROXYMETHYL)OXAN-2-YL]
OXY-2,3-DIHYDROINDOL-1-YL]
ETHENYL]-2,3-D
IHYDROPYRIDINE-2,6-
DICARBOXYLICACID
VERMELHO VERMELHO DE 1390-65-4 CARMIN DE CARMINE 3,5,6,8-TETRAHYDROXY- 75470 731100 E120 Permitido para todos os
COCHONILHA COCHONILHA; 1-METHYL-9,10-DIOXO- tipos de produtos.
CARMIN; NATURAL 7-[3,4,5-TRIHYDROXY-
RED 4 6-(HYDROXYMETHYL)
INS 120 OXAN-2-YL]ANTHRACENE-
2-CARBOXYLIC ACID)
VERMELHO VERMELHO 62342-51-2 VERMELHO 21 D&C RED # 21 2,4,5,7-TETRABROMO- 45380:2 741321 N/C Utilizado em cosmticos
EOSINA 3,6-DIHYDROXYSPIRO e medicamentos em geral.
[2-BENZOFURAN-3,9- No permitido na rea dos
XANTHENE]-1-ONE olhos, em suturas cirrgicas
e formas farmacuticas
VERMELHO VERMELHO 95917-83-2 VERMELHO 22 D&C RED # 22 DISODIUM 45380 741322 N/C Utilizado em cosmticos
EOSINA PURA 2-(2,4,5,7-TETRABROMO-3- e medicamentos em geral.
OXIDO-6-OXOXANTHEN- No permitido na rea dos
9-YL)BENZOATE olhos, em suturas cirrgicas
e formas farmacuticas
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
411
13
a
13
Tabela 1 (concluso)
412
Referncia
Color Referncia
Cor Substncia Cas Sinnimo Denominao em ingls Descrio (IUPAC) Unio Usos, restries e requerimentos
index 21 CFR
Europeia
VERMELHO VERMELHO 70632-40-5 VERMELHO 36 D&C RED # 36 (1Z)-1-[(2-CHLORO- 12085 741336 N/C Utilizado em cosmticos e
PERMANENTE 4-NITROPHENYL) medicamentos de uso externo.
HYDRAZINYLIDENE] No permitido na rea dos olhos,
NAPHTHALEN-2-ONE em suturas cirrgicas e formas
farmacuticas injetveis. No mais
que 1,7 mg/dose diria da droga
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
VERMELHO VERMELHO 2611-82-7 PONCEAU 4R; PONCEAU 4R TRISODIUM (8Z)-7-OXO-8-[(4- 16255 N/C E124 Permitido para todos os
PONCEAU 4R VERMELHO 2 SULFONATONAPHTHALEN-1-YL) tipos de produtos.
INS 124 HYDRAZINYLIDENE]NA
PHTHALENE-1,3-DISULFONATE
VERMELHO VERMELHO 15876-47-8 PONCEAU 4R LACA PONCEAU 4R LACA DE ALUMNIO OU 16255 N/C E124 Permitido para todos os
PONCEAU DE ALUMNIO; ALUMINUM LAKE DE CLCIO E ALUMNIO, tipos de produtos.
4R, LACA DE VERMELHO 2 LACA EM SUBSTRATO DE SAL
ALUMNIO DE ALUMNIO TRISSDICO DO CIDO
1-(4-SULFO-1-NAFTILAZO)-2-
NAFTOL-6,8-DISSULFNICO
VERMELHO VERMELHO 5858-81-1 VERMELHO 6 D&C RED # 6 DISODIUM (4E)-4-[(4-METHYL- 15850 741306 N/C Utilizado em cosmticos e
RUBI 2-SULFONATOPHENYL) medicamentos em geral. O total
HYDRAZINYLIDENE] de D&C Red n. 7 no deve ser
-3-OXONAPHTHALENE- mais que 0,01% em 5mg/ dose
2-CARBOXYLATE diria de medicamento
VERMELHO VERMELHO 85-86-9 VERMELHO 17 D&C RED # 17 (1Z)-1-[(4- 26100 741317 N/C Utilizado em medicamentos de
SCARLET PHENYLDIAZENYLPHENYL) uso externo. No permitido na rea
HYDRAZINYLIDENE] dos olhos, em suturas cirrgicas e
NAPHTHALEN-2-ONE formas farmacuticas injetveis.
VIOLETA VIOLETA 81-48-1 VIOLETA 2 D&C VIOLET # 2 1-HYDROXY-4-(4- 60725 741602 N/C Utilizado em medicamentos de
ALIZARINA METHYLANILINO) uso externo. No permitido na rea
ANTHRACENE-9,10-DIONE dos olhos, em suturas cirrgicas e
formas farmacuticas injetveis.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 413
a
14 REAGENTES
14 Amarelo de alizarina GG SI
Solubilidade Facilmente solvel em gua e pouco solvel
em etanol a 96% (v/v).
Preparao Dissolver 0,1 g em 100 mL de gua. Faixa de pH 2,0 - 3,2
Faixa de pH - 10,0 - 12,0 Mudana de cor - Fornece soluo incolor em meio
fortemente cido e colorao amarela em solues menos
Mudana de cor - Fornece colorao amarelo-plida em cidas.
solues fracamente alcalinas e colorao marrom em
solues fortemente alcalinas.
Amarelo titan (CI 19540)
Amarelo de dimetila (CI 11020) CAS [1829-00-1]
CAS [60-11-7] Frmula e massa molecular C28H19N5Na2O6S4 695,72
Frmula e massa molecular C14H15N3 225,29 Descrio P marrom-amarelado.
Descrio - Cristais amarelos. Solubilidade Facilmente solvel em gua e em etanol.
Solubilidade Insolvel em gua, solvel em etanol,
benzeno, clorofrmio, ter etlico e cidos minerais Amarelo titan SI
diludos. Preparao Dissolver 0,05 g em gua e completar o
volume para 100 mL.
Amarelo de dimetila SI Faixa de pH 12,0 - 13,0
Preparao Dissolver 0,2 g em 100 mL de etanol a 90% (v/v). Mudana de cor Em solues cidas e moderadamente
Faixa de pH 2,8 - 4,6 alcalinas fornece colorao amarela. Em solues
fortemente alcalinas apresenta cor vermelha.
Mudana de cor Fornece colorao vermelha em
solues moderadamente cidas e colorao amarela em Ensaio de sensibilidade Preparar mistura de 10 mL de
solues fracamente cidas e alcalinas. gua, 0,2 mL de soluo padro de magnsio (10 ppm de
Mg) e 10 mL de hidrxido de sdio M. Adicionar 0,1 mL
Ensaio de homogeneidade Preparar soluo a 0,01% (p/v) de amarelo titan SI. Preparar prova em branco de maneira
em cloreto de metileno e aplicar 0,01 mL desta soluo em anloga, porm omitindo o padro de magnsio. Comparar
cromatoplaca de slica-gel G. Usar como eluente o cloreto as duas solues: colorao rosa intensa desenvolve-se em
de metileno. O cromatograma deve mostrar uma nica comparao prova em branco.
mancha.
Ensaio de sensibilidade Preparar soluo de 2 g de
cloreto de amnio em 25 mL de gua isenta de dixido de Amarelo titan, papel
carbono. Esta soluo, adicionada de 0,1 mL de amarelo de Preparao Impregnar papel de filtro comum com
dimetila SI, deve apresentar cor amarela. A colorao passa soluo de amarelo titan SI. Secar ao ar a temperatura
a vermelha pela adio de no mais que 0,1 mL de cido ambiente.
clordrico 0,1 M.
Amido (Amido solvel)
Amarelo de metanila (CI 13065) CAS [9005-84-9]
CAS [587-98-4] Frmula molecular (C6H10O5)x
Frmula e massa molecular - C18H14N3NaO3S 375,38 Descrio P branco ou quase branco.
Descrio P amarelo amarronzado.
Solubilidade Solvel em gua e em etanol. Amido SI
Especificao Soluo de amido solvel a 2% (p/v)
Amarelo de metanila SI em gua quente. A soluo pode apresentar pequena
Preparao Dissolver 0,1 g em 100 mL de metanol. opalescncia.
Mudana de cor Em titulaes desenvolvidas em meio Ensaio de sensibilidade - Misturar 1 mL de amido SI, 20
no aquoso muda a colorao de amarela (meio bsico) mL de gua, aproximadamente 50 mg de iodeto de potssio
para carmim (meio cido). e, finalmente, 0,05 mL de iodo 0,01 M. H desenvolvimento
de cor azul.
Amido iodetado SI Azul de hidroxinaftol
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 415
a
Preparao Impregnar papel de filtro com amido SI, CAS [63451-35-4]
recm-preparado, acrescido de 0,5 g de iodeto de potssio. Frmula e massa molecular C20H11N2Na3O11S3 620,47
14
anidro mostra colorao prpura azulada. A adio de 0,1
para 100 mL. mL de cido perclrico 0,1 M em cido actico altera a
Faixa de pH 9,0 13,0 colorao para verde.
Mudana de cor - Confere colorao azul a solues
fracamente alcalinas e colorao vermelha a solues Cloreto frrico
fracamente alcalinas. CAS [10025-77-1]
Ensaio de sensibilidade - A mistura de 0,25 mL de azul Sinonmia Cloreto de ferro.
do Nilo A SI em 50 mL de cido actico glacial anidro
Frmula e massa molecular FeCl3.6H2 O 270,30
apresenta cor azul. A colorao passa a azul-esverdeada
pela adio de no mais que 0,1 mL de cido perclrico 0,1 Descrio - Massa cristalizada amarelo-laranja, deliquescente.
M em cido actico glacial. Solubilidade - Muito solvel em gua e solvel em etanol
Ensaio de identificao A soluo a 0,0005% (p/v) em e ter etlico. O sal e suas solues, expostas luz, sofrem
etanol a 50% (v/v) apresenta mximo de absoro (5.2.14) reduo parcial.
em 640 nm.
Cloreto frrico SI (aproximadamente 0,4 M)
Calcona Especificao Contm 10,5 g em gua para 100 mL.
CAS [2538-85-4] Conservao Em recipientes bem fechados.
Frmula e massa molecular - C20H13N2NaO5S 416,4 Armazenagem Proteger da luz.
Descrio P pardo-negro com nuances violceas.
Solubilidade - Muito solvel em gua e facilmente solvel Corante BVF
em etanol e acetona. Preparao Dissolver 0,1 g de azul de bromotimol, 0,02
g de vermelho de metila e 0,2 g de fenolftalena em etanol.
Calcona SI Completar com o mesmo solvente para fazer 100 mL.
Filtrar.
Preparao Dissolver 0,1 g em 100 mL de metanol
anidro.
Mudana de cor - Fornece cor vermelho-prpura com Difenilcarbazida
ons clcio em meio alcalino. Em presena de excesso de CAS [140-22-7]
edetato dissdico, a soluo adquire cor azul. Frmula e massa molecular C13H14N4O 242,29
Descrio - P cristalino branco ou quase branco,
Calcona, mistura composta gradualmente torna-se rosa com a exposio ao ar.
Preparao - Misturar uma parte de calcona com 99 partes Solubilidade Muito pouco solvel em gua, solvel em
de sulfato de sdio. acetona e em etanol a 96% (v/v) e em cido actico glacial.
Ensaio de sensibilidade Dissolver 0,2 g de mistura
composta de calcona em 5 mL de gua. Misturar 1 mL da Difenilcarbazida SI
soluo do corante, 50 mL de gua, 10 mL de hidrxido
Preparao Dissolver 1 g de difenilcarbazida em 100 mL
de sdio M e 1 mL de sulfato de magnsio a 1% (p/v). A
de etanol a quente. Armazenar ao abrigo da luz.
soluo formada azul, tornando-se violeta pela adio de
0,1 mL de cloreto de clcio a 0,15% (p/v). A adio de 0,1
mL de edetato dissdico 0,01 M fornece cor azul intensa. Difenilcarbazona
CAS [538-62-5]
Cloreto de metilrosanilnio (CI 42555) Frmula e massa molecular - C13H12N4O 240,27
CAS [548-62-9] Descrio Cristais ou p cristalino laranja-amarelo.
Sinonmia Cristal violeta Solubilidade Praticamente insolvel em gua e facilmente
Frmula e massa molecular - C25H30CIN3 408,00 solvel em etanol a 96% (v/v).
Descrio - P ou cristais verde-escuros.
Solubilidade Solvel em gua e em etanol a 96% (v/v).
Difenilcarbazona SI Ferrona
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 417
a
Preparao Dissolver 0,1 g em 100 mL de etanol. CAS [14634-91-4]
Armazenar ao abrigo da luz. Frmula e massa molecular C36H24FeN6O4S 692,52
Eosina Y SI
adicionar 0,15 mL de tetrxido de smio SR e 0,1 mL de
ferrona SI. Aps a adio de 0,1 mL de sulfato crico
amoniacal 0,1 M SV, a cor passa de vermelho-alaranjado
14
Preparao Dissolver 1 g em 100 mL em gua. para verde plido.
Mudana de cor - A adio de 20 mL de hidrxido de sdio Conservao Em recipientes bem fechados.
a 40% (p/v) sobre 10 mL de eosina Y SI a 1% (p/v) forma
precipitado vermelho.
Magneson
CAS [74-39-5]
ster etilco de tetrabromofenolftalena
Frmula e massa molecular C12H9N3O4 259,22
CAS [1176-74-5]
Descrio P castanho-avermelhado.
Nome qumico ster etlico do cido 2-[(3,5-dibromo-
4-hidroxifenil)(3,5-dibromo-4-oxo-2,5-cicloexadien-1-
ilideno)metil]-benzoico Magneson SI
Sinonmia Bromofenolftalena magenta E Preparao Dissolver 0,2 g em 100 mL em tolueno.
Frmula e massa molecular C22H14Br4O4 661,96 Mudana de cor Em titulaes de meio no aquoso muda
a colorao laranja (meio cido) para azul (meio bsico),
passando pela colorao rosa.
ster etlico de tetrabromofenolftalena SI
Preparao Dissolver 0,1 g de ster etlico de
Magneson, reagente
tetrabromofenolftalena em 90 mL de cido actico glacial
e completar o volume para 100 mL com o mesmo solvente. Preparao Solubilizar 0,1 g de magneson em 100 mL
Preparar imediatamente antes do uso. de hidrxido de sdio a 1% (p/v).
Fenolftalena 1-Naftolbenzena
CAS [77-09-8] CAS [6948-88-5]
Frmula e massa molecular C20H14O4 318,33 Sinonmia Fenilbis(4-hidroxinaftil)metanol.
Descrio P cristalino ou amorfo, branco ou levemente Frmula e massa molecular C27H20O3 392,50
amarelado. Inodoro. Descrio P marrom-avermelhado.
Solubilidade Insolvel em gua e solvel em etanol Solubilidade Insolvel em gua; solvel em benzeno, em
ter etlico e em cido actico glacial.
Fenolftalena SI
Preparao Dissolver 0,1 g em 100 mL de etanol a 80% (v/v). 1-Naftolbenzena SI
Faixa de pH 8,3 - 10,0 Preparao Dissolver 0,2 g de 1naftolbenzena em 100
mL de cido actico glacial.
Mudana de cor Fornece solues incolores em meio
cido e fracamente alcalino. Apresenta colorao violeta Mudana de cor Quando utilizado em titulaes no-
intenso em solues alcalinas mais fortes. aquosas, muda a colorao azul ou verde-azulada (meio
bsico) para laranja (meio neutro) e para verde-escura
Ensaio de sensibilidade A mistura de 0,1 mL de
(meio cido).
fenolftalena SI em 1000 mL em de gua isenta de dixido
de carbono incolor. So necessrios no mais que 0,2 Ensaio de sensibilidade - Adicionar 0,25 mL de soluo
mL de hidrxido de sdio 0,02 M para o aparecimento de de 1naftolbenzena SI a 50 mL de cido actico glacial
colorao rsea. anidro. So necessrios no mais que 0,05 mL de cido
perclrico 0,1 M em cido actico glacial para efetuar a
mudana da colorao amarelo-marrom para verde.
Fenolftalena, papel
Preparao Imergir tiras de papel de filtro comum
em fenolftalena SI por alguns minutos e secar ao ar
temperatura ambiente.
418 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Oxalato de amnio SI
Resazurina
Especificao Contm 4 g de oxalato de amnio em gua
para 100 mL. CAS [550-82-3]
Frmula e massa molecular C12H7NO4 229,19
Prpura de bromocresol Descrio Cristais pequenos vermelho-escuros com
lustre esverdeado.
CAS - [115-40-2]
Solubilidade Insolvel em gua e ter etlico, pouco
Frmula e massa molecular - C21H16Br2O5S 540,24
solvel em etanol e solvel em solues diludas de
Descrio - P cristalino branco para rosa. hidrxidos alcalinos.
Solubilidade - Praticamente insolvel em gua, solvel
em etanol a 96% (v/v) e solues diludas de hidrxidos Resazurina SI
alcalinos.
Preparao Dissolver 0,1 g em 100 mL de hidrxido
de sdio 0,02 M. Esta soluo indicadora deve ser de
Prpura de bromocresol SI preparao recente.
Preparao - Aquecer 0,1 g de prpura de bromocresol Faixa de pH 5,0 - 7,0
com 5 mL de etanol a 90% (v/v) at dissoluo. Adicionar
3,7 mL de hidrxido de sdio 0,05 M e etanol a 20% (v/v)
para completar o volume de 250 mL.
Mudana de cor Fornece colorao rsea em solues
fracamente cidas e colorao violeta em solues
Tornassol SI
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 419
a
Preparao Ferver sob refluxo, durante uma hora, 25 g
fracamente alcalinas. de tornassol, finamente pulverizado, com 100 mL de etanol
a 90% (v/v). Desprezar o etanol e repetir a operao por
Resorcinol duas vezes, utilizando em cada extrao 75 mL de etanol
a 90% (v/v). Tratar o tornassol extrado com 250 mL de
CAS [108-46-3]
gua. Filtrar.
Sinonmia Resorcina.
Faixa de pH 5,0 - 8,0
Frmula e massa molecular C6H6O2 110,11
Mudana de cor Fornece colorao vermelha com os
Descrio Cristais ou p cristalino incolor ou amarelo
14
cidos e azul com os lcalis.
plido; exposto luz e ao ar, adquire colorao rsea.
Solubilidade Solvel em gua e etanol.
Tornassol azul, papel
Preparao Ferver 10 partes de tornassol, finamente
Resorcinol SI pulverizado, com 100 partes de etanol a 96% (v/v), sob
Preparao Dissolver 0,2 g de resorcinol em 100 mL de refluxo, por uma hora. Decantar e desprezar o etanol,
benzeno. Deixar decantar. adicionar ao resduo mistura de 45 partes de etanol e 15
partes de gua. Deixar macerando por dois dias. Decantar
Timolftalena o sobrenadante e impregnar tiras de papel de filtro comum
com o extrato. Secar temperatura ambiente.
CAS [125-20-2]
Ensaio de sensibilidade Mergulhar tira de papel de
Frmula e massa molecular - C28H30O4 430,54
tornassol azul, medindo 10 mm x 60 mm, em 100 mL de
Descrio P branco ou amarelo claro. mistura de 10 mL de cido clordrico 0,02 M e 90 mL de
Solubilidade Praticamente insolvel em gua, solvel em gua. Agitar. O papel adquire cor vermelha ao fim de 45
etanol e em solues de hidrxidos alcalinos. segundos.
14 Verde de bromocresol
CAS [76-60-8]
Solubilidade Pouco solvel em gua, solvel em etanol e
solues diludas de hidrxidos alcalinos.
Frmula e massa molecular - C21H14Br4O5S 698,02
Descrio P branco amarronzado. Vermelho cresol SI
Solubilidade Pouco solvel em gua, solvel em etanol e Preparao - Aquecer 50 mg de vermelho cresol com 2,65 mL
solues diludas de hidrxidos alcalinos. de hidrxido de sdio 0,05 M e 5 mL de etanol a 90%. Aps
dissoluo, adicionar etanol a 20% at completar 250 mL.
Faixa de pH 0,2 - 1,8 e 7,2 - 8,8
Verde de bromocresol SI
Mudana de cor Fornece, colorao vermelha em
Preparao Aquecer 0,1 g do corante com 2,9 mL de
solues fortemente cidas (faixa de pH: 0,2 - 1,8),
hidrxido de sdio 0,05 M e 5 mL de etanol a 90% (v/v).
colorao amarela em solues menos cidas e neutras; em
Aps dissoluo, adicionar etanol a 20% (v/v) at o volume
solues moderadamente alcalinas apresenta cor vermelha
de 250 mL.
(faixa de pH: 7,2 - 8,8).
Faixa de pH 3,6 - 5,2
Ensaio de sensibilidade A mistura de 0,1 mL de vermelho
Mudana de cor Fornece colorao amarela em solues cresol SI e 1000 mL de gua, isenta de dixido de carbono,
moderada-mente cidas e azul em solues fracamente adicionada de 0,15 mL de hidrxido de sdio 0,02 M
cidas e alcalinas. apresenta colorao vermelho prpura. A colorao muda
Ensaio de sensibilidade - A mistura de 0,2 mL de verde para amarela pela adio de no mais que 0,15 mL de cido
de bromocresol SI e 100 mL de gua isenta de dixido de clordrico 0,02 M.
carbono apresenta cor azul. So necessrios no mais que
0,2 mL de cido clordrico 0,02 M para alterar a colorao
Vermelho de Congo (CI 22120)
para amarela.
CAS [573-58-0]
Frmula e massa molecular - C32H22N6Na2O6S2 696,67
Verde de malaquita, oxalato
Descrio P vermelho amarronzado.
CAS [2437-29-8]
Solubilidade Solvel em gua.
Frmula e massa molecular C48H50N4O4.2HC2O4
927,10
Descrio Slido cristalino verde. Vermelho de Congo SI
Solubilidade Muito solvel em gua. Preparao Dissolver 0,25 g de vermelho de Congo em
50 mL de etanol a 90% (v/v) e gua at completar 250 mL.
Faixa de pH 3,0 - 5,0
Verde de malaquita SI
Mudana de cor Apresenta colorao azul em solues
Preparao Dissolver 1 g de oxalato de verde de
moderadamente cidas e colorao vermelha em solues
malaquita em 100 mL de cido actico glacial.
fracamente cidas e alcalinas.
Faixa de pH 0,0-2,0
Ensaio de sensibilidade A mistura de 0,2 mL de vermelho
Mudana de cor Fornece colorao amarela em solues de Congo SI, 100 mL de gua isenta de dixido de carbono
cidas e verde em solues menos cidas e alcalinas. e 0,3 mL de cido clordrico 0,1 M possui colorao azul.
So necessrios no mais que 0,3 mL de hidrxido de sdio
Verde de metila (CI 42590) 0,1 M para alterar a colorao para rsea.
CAS [14855-76-6]
Frmula e massa molecular - C27H35BrClN3 516,94 Vermelho de Congo, papel
Descrio P verde. Normalmente, apresenta-se na Preparao Mergulhar tiras de papel de filtro comum
forma de sal com ZnCl2. em vermelho de Congo SI e deixar secar temperatura
ambiente.
Solubilidade Solvel em gua.
Vermelho de fenol 14.2 REAGENTES E
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 421
a
CAS [143-74-8]
Frmula e massa molecular - C19H14O5S 354,38
SOLUES REAGENTES
Descrio P cristalino vermelho claro ou escuro.
Reagentes so substncias utilizadas, quer como tais, quer
Solubilidade Muito pouco solvel em gua e pouco como constituintes de solues, na realizao dos ensaios
solvel em etanol. farmacopeicos.
14
CAS [105-57-7]
mL de hidrxido de sdio 0,2 M e 5 mL de etanol a 90%
(v/v). Aps dissoluo, adicionar etanol a 20% (v/v) para Frmula e massa molecular C6H14O2 118,17
completar 250 mL. Descrio Lquido incolor, lmpido e voltil.
Faixa de pH 6,8-8,4 Caractersticas fsicas Densidade (20 C): cerca de 0,824.
Mudana de pH Fornece colorao amarela em meio ndice de refrao (20 C): cerca de 1,382. Temperatura de
neutro e vermelha em soluo fracamente alcalina. ebulio: cerca de 103 C.
Ensaio de sensibilidade A mistura de 0,1 mL de vermelho Miscibilidade Miscvel em gua e em etanol.
de fenol SI e 100 mL de gua isenta de dixido de carbono
apresenta cor amarela. So necessrios no mais que 0,1 Acetaldedo
mL de hidrxido de sdio 0,02 M para alterar a colorao CAS [75-07-0]
para violeta-avermelhada.
Sinonmia Etanal.
Frmula e massa molecular C2H4O 44,05
Vermelho de metila (CI 13020)
Descrio Lquido incolor e lmpido.
CAS [493-52-7]
Caractersticas fsicas Densidade (20 C): cerca de 0,788.
Frmula e massa molecular C15H15N3O2 269,30 ndice de refrao (20 C): cerca de 1,332. Temperatura de
Descrio Cristais violetas ou p vermelho escuro. ebulio: cerca de 21 C.
Solubilidade Praticamente insolvel em gua e solvel Miscibilidade Miscvel em gua e em etanol.
em etanol. Segurana Inflamvel!
Acetato de celulose
Acetato de clorexidina a 0,1% (p/v)
CAS [9004-35-7]
Especificao Contm 0,1 g de acetato de clorexidina em
Especificao Celulose parcialmente acetilada, com
100 mL de gua.
graus de acetilao variados.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Descrio Slido amorfo branco.
Segurana Txico.
Categoria Adsorvente em cromatografia em camada
delgada. Categoria Antimicrobiano.
Acetato de indofenol SR
423
a
Categoria Corticosteride. Sinonmia 2,6-Diclorofenolindofenol sdico em tampo
acetato.
Acetato de cortisona, injetvel Preparao Diluir 12 mL da soluo padro de
2,6-diclorofenol-indofenol sdico em 100 mL de gua. A
Descrio Consiste de uma suspenso em meio aquoso
esta soluo juntar 100 mL de tampo acetato pH 7,0.
adequado, com pH entre 5,0 e 7,0.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Especificao Contm, no mnimo, 90,0% (p/p).
Estabilidade Utilizar em no mximo duas semanas.
Conservao Em ampolas de dose nica.
Armazenagem Manter sob refrigerao.
Acetato de desoxicortona
CAS [56-47-3]
Acetato de magnsio 14
CAS [16674-78-5]
Sinonmia Acetato de desoxicorticosterona.
Frmula e massa molecular C4H6MgO4.4H2O 214,45
Frmula e massa molecular C23H32O4 372,50
Descrio Cristais incolores e deliquescentes.
Especificao Contm, no mnimo, 96,0% (p/p),
calculado sobre a substncia dessecada. Solubilidade Facilmente solvel em gua e em etanol.
Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco. Conservao Em recipientes bem fechados.
Inodoro.
Caractersticas fsicas Faixa de fuso: 157 C a 161 C. Acetato de mentila
Rotao ptica: +171 a +179 (determinar em soluo a CAS [2623-23-6]
1,0% (p/v) em dioxana).
Frmula e massa molecular C12H22O2 198,30
Conservao Em recipientes bem fechados.
Descrio Lquido incolor.
Armazenagem Proteger da luz.
Caractersticas fsicas Densidade (20 C): cerca de 0,92.
Categoria Corticosteride. ndice de refrao (20 C): cerca de 1,447. Temperatura de
ebulio: cerca de 228 C.
Acetato de etila Miscibilidade Pouco solvel em gua e miscvel em
CAS [141-78-6] etanol.
Frmula e massa molecular C4H8O2 88,11
Especificao Contm, no mnimo, 99,9% (p/v). Acetato de mercrio
Descrio Lquido lmpido, incolor, voltil, de odor CAS [1600-27-7]
caracterstico. Sinonmia Acetato mercrico.
Caractersticas fsicas Densidade: aproximadamente Frmula e massa molecular C4H6HgO4 318,68
0,90. Temperatura de ebulio: aproximadamente 77 C. Descrio Cristais ou p cristalino branco, ou quase
ndice de refrao (20 C): 1,371 a 1,373. brancos, com fraco odor actico.
Conservao Em recipientes bem fechados. Caracterstica fsica Faixa de fuso: 178 C a 180 C
Armazenagem Proteger do calor. (sobreaquecimento resulta em decomposio).
Segurana Inflamvel. Conservao Em recipientes bem fechados
Armazenagem Proteger da luz.
Acetato de fenilmercrio Segurana Txico.
CAS [62-38-4]
Frmula e massa molecular C8H8HgO2 336,74 Acetato de mercrio SR
Especificao Contm, no mnimo, 98,0% (p/p). Preparao Dissolver 6 g de acetato de mercrio em
Descrio Cristais pequenos ou p cristalino branco ou cido actico glacial a 100mL.
cor creme, brilhante. Conservao Em recipientes fechados.
Caracterstica fsica Faixa de fuso: 149 C a 153 C. Armazenagem Proteger da luz solar direta.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Armazenagem Proteger da luz. Acetato de metila
Segurana Txico. Poluente. CAS [79-20-9]
Frmula e massa molecular C3H6O2 74,07
Descrio Lquido incolor e lmpido.
Caractersticas fsicas Densidade (20 C): cerca de
0,933. ndice de refrao (20 C): cerca de 1,361. Faixa de
ebulio: 56 C a 58 C.
Miscibilidade Solvel em gua e miscvel em etanol.
424 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14 Acetato de potssio SR
Especificao Contm, no mnimo, 98,0% (p/p).
Descrio Cristais incolores ou brancos, ou escamas
Especificao Contm 10 g de acetato de potssio em cristalinas ou grnulos, de odor actico fraco, de sabor
100 mL de gua. metlico adstringente. Eflorescente.
Conservao Em recipientes bem fechados. Caracterstica fsica Temperatura de fuso: 237 C.
Solubilidade Facilmente solvel em gua e solvel em
Acetato de prednisolona etanol.
CAS [52-21-1] Conservao Em recipientes bem fechados.
Frmula e massa molecular C23H30O6 402,49 Segurana Irritante.
Especificao Contm, no mnimo, 96,0% (p/p) calculado
sobre a substncia dessecada. Acetilacetona
Descrio P cristalino branco ou quase branco. Inodoro. CAS [123-54-6]
Amargo. Frmula e massa molecular C5H8O2 100,11
Caractersticas fsicas Temperatura de fuso: Descrio Lquido lmpido, incolor ou amarelado, de
aproximadamente 247 C. Rotao ptica: +112 a +119 odor aromtico.
(determinar em soluo a 1,0% (p/v) em dioxana).
Caractersticas fsicas Temperatura de ebulio:
Conservao Em recipientes bem fechados. aproximadamente 139 C. Densidade: aproximadamente
Categoria Corticosteride. 0,97. ndice de refrao (20 C): 1,4505 a 1,4525.
Miscibilidade Miscvel em acetona e etanol.
Acetato de sdio Conservao Em recipientes bem fechados.
CAS [6131-90-4] Segurana Irritante. Inflamvel.
Frmula e massa molecular C2 H3 NaO2.3H2O 136,08
(se anidro 82,03) Acetona
Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p). CAS [67-64-1]
Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco, Frmula e massa molecular C3H60 58,08
inodoro ou de odor actico fraco. Eflorescente.
Especificao - Contm, no mnimo, 98,0% (p/v).
Conservao Em recipientes bem fechados.
Descrio Lquido lmpido, incolor, voltil, de odor
caracterstico.
Acetato de sdio SR (aproximadamente 0,02 M) Caractersticas fsicas Densidade: 0,790 a 0,793.
Especificao Contm 0,272 g de acetato de sdio tri- ndice de refrao (20 C): 1,358 a 1,360. Temperatura de
hidratado em gua a 100 mL. ebulio: aproximadamente 56 C.
Conservao Em recipientes bem fechados. Conservao Em recipientes hermticos.
Segurana Inflamvel. Irritante e txico.
Acetato de uranila
CAS [6159-44-0] Acetona desidratada
Frmula e massa molecular C4H6O6U.2H2O 424,15. Especificao Acetona, desidratada em sulfato de sdio
Descrio P cristalino amarelo, de odor actico fraco. anidro.
Conservao Em recipientes bem fechados. Conservao Preparar no momento de uso.
Segurana Substncia radioativa.
Acetona tamponada SR
Acetato de uranila e zinco SR Preparao Dissolver 8,15 g de acetato de sdio tri-
Preparao Dissolver 10 g de acetato de uranila em 50 hidratado e 42 g de cloreto de sdio em gua, adicionar
mL de gua quente e 5 mL de cido actico 30% (p/v). 68 mL de cido clordrico 0,1 M e 150 mL de acetona.
Dissolver 30 g de acetato de zinco em 30 mL de gua Completar o volume com gua para 500 mL.
Acetonitrila cido ascrbico
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 425
a
CAS [75-05-8] CAS [50-81-7]
Frmula e massa molecular C2H3N 41,05 Frmula e massa molecular C6H8O6 176,13
Descrio Lquido lmpido e incolor. Odor semelhante Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p).
ao ter. Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco.
Caractersticas fsicas Densidade (20C): cerca de 0,78. Inodoro.
ndice de Refrao (20 C): cerca de 1,344. Caractersticas fsicas Soluo a 5% (p/v) apresenta pH
Miscibilidade Miscvel em gua, acetona e metanol. de 2,2 a 2,5. Temperatura de fuso: aproximadamente 190
Conservao Em recipientes hermticos. C, com decomposio. Rotao ptica especfica: entre
Segurana Txico. Inflamvel!
+20,5 e +21,5, determinar em soluo aquosa a 1% (p/v).
Conservao Em recipientes bem fechados, no
metlicos.
14
cido actico M
Armazenagem Proteger da luz.
Especificao Contm 6 g de cido actico glacial em
gua a 100 mL.
cido benzoico
Conservao Em recipientes hermticos.
CAS [65-85-0]
Informao adicional Ao usar, confirmar o ttulo.
Frmula e massa molecular C7H6O2 122,12
Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p).
cido actico 6 M
Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco, de
Especificao Contm 348 g de cido actico glacial em
odor caracterstico.
gua a 1000 mL.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso:
Conservao Em recipientes bem fechados.
aproximadamente 122 C.
Armazenagem Proteger do calor.
Solubilidade Pouco solvel em gua, solvel em gua
Segurana Corrosivo e inflamvel. fervendo e facilmente solvel em etanol.
Conservao Em recipientes bem fechados.
cido actico diludo
Especificao Contm 12 g de cido actico glacial em cido brico
gua a 100 mL.
CAS [10043-35-3]
Conservao Em recipientes hermticos.
Frmula e massa molecular H3BO3 61,83
Especificao Contm, no mnimo, 99,5% (p/p).
cido actico SR
Descrio Cristais incolores brilhantes ou p fino
Especificao Contm 30 g de cido actico glacial em cristalino branco, untuoso ao tato, de sabor fracamente
gua a 100 mL. Corresponde ao cido actico 5 M. cido e amargo.
Descrio Lquido lmpido, incolor, de odor irritante. Solubilidade Solvel em gua e em etanol, facilmente
Conservao Em recipientes hermticos. solvel em gua fervendo.
Conservao Em recipientes bem fechados.
cido actico glacial
CAS [64-19-7] cido brico, soluo saturada
Frmula e massa molecular C2H4O2 60,05 Preparao Dissolver 5 g em 100 mL de gua.
Especificao Contm, no mnimo, 98,0% (p/p). Conservao Em recipientes bem fechados.
Descrio Lquido lmpido, incolor, voltil, de odor
irritante e caracterstico. Cristalizvel a baixas temperaturas. cido bromdrico
Caractersticas fsicas Densidade: aproximadamente CAS [10035-10-6]
1,05. Temperatura de ebulio: aproximadamente 118 C.
Frmula e massa molecular HBr 80,91
Temperatura de congelamento: aproximadamente 14 C.
Especificao Contm 48,0% (p/v).
Conservao Em recipientes hermticos.
Descrio Lquido incolor ou fracamente amarelo, de
Segurana Corrosivo. Inflamvel. Proteger olhos, pele e
odor forte e irritante. Escurece lentamente pela exposio
mucosas.
ao ar e luz.
Conservao Em recipientes bem fechados.
cido 7-aminodesacetoxicefalospornico
Armazenagem Proteger do ar e da luz.
CAS [22252-43-3]
Segurana Irritante. Corrosivo.
Sinonmia 7-ADCA
Frmula e massa molecular C8H10N2O3S 214,24
426 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14 cido calconcarboxlico
CAS [3737-95-9]
Caractersticas fsicas Densidade: aproximadamente
1,18.
Conservao Em recipientes hermticos, de material
Frmula e massa molecular C21H14N2O7S 438,40
inerte ao reagente.
Descrio P marrom-preto.
Armazenagem Proteger do calor (manter em temperaturas
Solubilidade Pouco solvel em gua, muito pouco menores que 20 C).
solvel em acetona e em etanol, ligeiramente solvel em
Segurana Corrosivo. Evitar contato externo, olhos e
solues diludas de hidrxido de sdio.
pele, inalao e ingesto.
Conservao Em recipientes bem fechados.
cido cloroplatnico
CAS [18497-13-7]
CAS [122-59-8]
Frmula e massa molecular C8H8O3 152,15 14
Descrio Cristais quase brancos.
Sinonmia Cloreto platnico, cloreto de platina, cido
cloroplatnico(IV). Caracterstica fsica Temperatura de fuso: cerca de 98
C.
Frmula e massa molecular H2PtCl6.6H2O 517,90
Solubilidade Ligeiramente solvel em gua e facilmente
Especificao Contm, no mnimo, 37,0% (p/p) de
solvel em etanol e cido actico glacial.
platina.
Descrio Massa cristalina amarelo-amarronzada, muito
deliquescente. cido fluordrico
Caractersticas fsicas Densidade: 2,431. Temperatura CAS [7664-39-3]
de fuso: 60 C. Frmula e massa molecular HF 20,01
Solubilidade Facilmente solvel em gua e solvel em Especificao Contm, no mnimo, 40% (p/p) de HF.
etanol. Descrio Lquido incolor e lmpido.
Conservao Em recipientes fechados. Conservao Em recipientes de polietileno bem fechados.
Armazenagem Proteger da luz.
Segurana Txico. cido frmico
CAS [64-18-6]
cido crmico Sinonmia cido metanoico.
Onde constar, usar trixido de cromo (CrO3). Frmula e massa molecular CH2O2 46,03
Especificao A forma anidra contm, no mnimo, 98,0%
cido 3,5-dinitrobenzoico (p/p). O comercial contm em torno de 90,0% (p/p).
CAS [99-34-3] Descrio Lquido incolor, muito custico, de odor
Frmula e massa molecular C7H4N2O6 212,12 picante.
Descrio Cristais praticamente incolores. Caractersticas fsicas Temperatura de ebulio: 100,5
C. Densidade: aproximadamente 1,22. ndice de refrao
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: em torno de
(20 C): 1,3714. Solidifica a 70 C.
206 C.
Conservao Em recipientes bem fechados.
cido edtico Segurana Custico.
CAS [60-00-4]
Sinonmia cido etilenodiaminotetractico, EDTA. cido fosfomolbdico
Frmula e massa molecular C10H16N2O8 292,24 CAS [51429-74-4]
Especificao Contm, no mnimo, 98,0% (p/p). Sinonmia cido molibdofosfrico.
Descrio Cristais incolores. Frmula molecular Aproximadamente 12MoO3.H3PO4.xH2O.
Caracterstica fsica Decompe-se ao redor de 220 C, Descrio Cristais fracamente amarelados.
podendo descarboxilar a 150 C.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Conservao Em recipientes bem fechados.
cido fosfomolbdico SR
cido fenoldissulfnico SR
Preparao Dissolver 4 g de cido fosfomolbdico em 40
CAS [96-77-5]
mL de gua sob aquecimento. Aps resfriamento adicionar
Frmula e massa molecular C6H6O7S2 254,24 60 mL de cido sulfrico.
Descrio Lquido lmpido a marrom claro.
428 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
cido perclrico SR
cido ntrico
Usar cido perclrico M.
CAS [7697-37-2]
Frmula e massa molecular HNO3 63,01
14
Especificao Contm, no mnimo, 63,0% (p/p). cido perfrmico
Descrio Soluo lmpida, praticamente incolor, de CAS [107-32-4]
odor caracterstico. Sinonmia cido peroxifrmico.
Caracterstica fsica Densidade: 1,384 a 1,416. Frmula e massa molecular CH2O3 62,03
Conservao Em recipientes hermticos, ao abrigo da Preparao Misturar 1 mL de perxido de hidrognio a
luz. 30,0% (v/v), ou 9,0% (p/p), com 90 mL da cido frmico.
Segurana Corrosivo. Conservao Preparar no momento de uso.
Armazenagem Proteger do calor.
cido ntrico fumegante Segurana Irritante. Pode explodir em contato com
metais, seus xidos, substncias redutoras, ou na destilao.
Especificao Contm, no mnimo, 95,0% (p/p).
Descrio Lquido lmpido, levemente amarelado,
fumegante no ar. cido peridico
CAS [10450-60-9]
cido ntrico SR Frmula e massa molecular H5IO6 227,94
Especificao Contm cerca de 12,5% (p/v) de HNO3. Descrio Cristais brancos a incolores.
Caracterstica fsica Densidade: aproximadamente 1,5. Caractersticas fsicas Temperatura de fuso: 122 C.
Decompe entre 130 C e 140 C, formando I2O5, H2O e O2.
Solubilidade Facilmente solvel em gua e solvel em
cido oxlico etanol.
CAS [6153-56-6]
Sinonmia cido etanodioico.
cido pcrico
Frmula e massa molecular C2H2O4.2H2 O 126,07
CAS [88-89-1]
Especificao Contm, no mnimo, 99% (p/p).
Sinonmia 2,4,6-Trinitrofenol.
Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco.
Frmula e massa molecular C6H3N3O7 229,10
Caracterstica fsica Temperatura de fuso:
Especificao Cristais amarelos ou placas umedecidas
aproximadamente 101 C.
com gua.
Segurana Veneno!
Conservao Em recipientes bem fechados, misturado
com igual massa de gua.
cido oxlico SR Armazenagem Em temperatura ambiente.
Especificao Soluo de cido oxlico a 6,3% (p/v). Segurana Explode quando aquecido rapidamente ou
submetido a choque. Para transporte seguro, 10% a 20%
de gua so geralmente adicionados.
cido perclrico
CAS [7601-90-3]
Frmula e massa molecular HClO4 100,46 cido pcrico SR
Especificao Contm, no mnimo, 70,0% (p/p) e, no Preparao Adicionar 0,25 mL de hidrxido de sdio
mximo, 72,0% de HClO4. 10 M em 100 mL de soluo saturada de cido pcrico em
gua.
Descrio Lquido lmpido, incolor, voltil e de odor
picante. Higroscpico.
Caracterstica fsica Densidade: aproximadamente 1,7. cido pcrico SR1
Conservao Decompe-se espontaneamente, podendo Preparao Dissolver o equivalente a 1 g de cido pcrico
explodir especialmente em contato com substncias em 100 mL de gua quente. Resfriar e filtrar, se necessrio.
oxidveis.
Segurana Irritante. Corrosivo!
430 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
cido p-toluenossulfnico
431
a
Preparao Cuidadosamente e com constante CAS [6192-52-5]
resfriamento, adicionar 20 mL de cido sulfrico em 60 Frmula e massa molecular C7H8O3S.H2O 190,21
mL de etanol. Continuar o resfriamento e diluir para 100
Especificao Contm, no mnimo, 87% de C7H8O3S.
mL com etanol. Preparar imediatamente antes do uso.
Descrio Cristais ou p cristalino branco ou quase
branco.
cido sulfrico SR Solubilidade Facilmente solvel em gua e solvel em
etanol.
Especificao Contm cido sulfrico a 10% (p/v) em
gua.
Preparao Adicionar, cuidadosamente, 57 mL de cido
sulfrico em 100 mL de gua, resfriar e diluir para 1000
cido tricloroactico
CAS [76-03-9]
14
mL com gua.
Frmula e massa molecular C2HC13O2 163,39
Conservao Em recipientes bem fechados.
Especificao Contm, no mnimo, 98,0% (p/p).
Descrio Cristais incolores ou massa cristalina,
cido sulfuroso deliquescente, de odor caracterstico fracamente pungente,
CAS [7782-99-2] irritante.
Frmula e massa molecular H2SO3 82,07 Caracterstica fsica Faixa de fuso: 55 a 61 C.
Especificao Contm 5,0 a 6,0% (p/p) de dixido de Conservao Em recipientes hermticos.
enxofre puro. Preparar de acordo com o consumo. Armazenagem Proteger do calor e da umidade.
Descrio Lquido cido, lmpido, incolor, de odor Segurana cido muito corrosivo.
sufocante de dixido de enxofre. Ao ar oxida-se
paulatinamente a cido sulfrico.
cido tricloroactico-cloramina-T SR
Conservao Em recipientes quase cheios, bem fechados,
em local frio. Soluo A Cloramina-T a 3% (p/v).
Soluo B cido tricloroactico a 25% (v/v) em etanol
absoluto.
cido tartrico
Preparao Misturar 10 mL da Soluo A com 40 mL da
CAS [87-69-4] Soluo B.
Sinonmia cido L-(+)-tartrico.
Frmula e massa molecular C4H6O6 150,09
cido trifluoractico
Descrio Cristais ou ps cristalinos brancos.
CAS [76-05-1]
Caractersticas fsicas Faixa de fuso: 168 C a 170 C.
Sinonmia cido trifluoroactico.
Densidade (20 C): 1,756.
Frmula e massa molecular C2HF3O2 114,02
Solubilidade Muito solvel em gua e facilmente solvel
em etanol. Descrio Lquido incolor, voltil, de odor irritante e
caracterstico.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Caractersticas fsicas Temperatura de ebulio: 72,4 C.
Densidade: 1,535.
cido tiogliclico Miscibilidade Miscvel em acetona, benzeno, etanol, ter
CAS [68-11-1] etlico, hexano e tetracloreto de carbono.
Sinonmia cido mercaptoactico. Conservao Em recipientes bem fechados.
Frmula e massa molecular C2H4O2S 92,11 Segurana Corrosivo. Inflamvel. Proteger olhos, pele e
Especificao Contm, no mnimo, 79,0% (p/p). mucosas.
Descrio Lquido incolor ou prximo a incolor, de odor
forte desagradvel.
Caracterstica fsica Densidade: aproximadamente 1,33.
Miscibilidade Miscvel em gua e em etanol.
Conservao Proteger do ar.
Segurana Pode causar graves queimaduras na pele.
Informao adicional Sua decomposio libera gs
sulfdrico.
432 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
Solubilidade Muito solvel na gua e no metanol,
facilmente solvel no etanol. conservao.
Conservao Em recipientes bem fechados. Conservao Proteger do ar (da absoro de CO2).
Segurana Altamente txico e irritante. Causa paralisia
do sistema nervoso central. Pode ser absorvido pela pele gua isenta de amnia
ntegra.
Preparao Transferir 0,1 mL de cido sulfrico
96% (p/p) para 100 mL de gua e destilar empregando
Acrilamida/bisacrilamida (29:1) a 30% (p/v) SR equipamento com paredes isentas de amnia.
Preparao Preparar uma soluo contendo 290 g de
acrilamida e 10 g de metilenobisacrilamida por 1000 mL gua isenta de nitrato
de gua quente. Filtrar.
Preparao Transferir 5 mg de permanganato de potssio
Conservao Em recipientes bem fechados. e 5 mg de hidrxido de brio para 100 mL de gua e destilar
empregando equipamento com paredes isentas de nitrato.
gar
CAS [9002-18-0] gua livre de partculas
Sinonmia gar-agar, gelose. Especificao gua obtida por filtrao em membrana de
Especificao Polissacardeo extrado de Gelidium porosidade de 0,22 m.
cartilagineum (L) Gaillon (Gelidiaceae), Gracilaria
confervoides (L) Greville (Sphaerococcaceae) e algas
Albumina bovina
vermelhas afins (Rhodophyceae).
CAS [9048-46-8]
Descrio P fino, incolor ou ligeiramente amarelado,
seco, hidroflico. Sinonmia Albumina srica de origem bovina.
Conservao Em recipientes hermticos. Descrio P branco ou marrom amarelado claro.
Especificao Contm, no mnimo, 96% de protenas.
Agarose, gel gua (5.2.20.3) Determinar em 0,8 g da amostra. No
mximo, 30%.
CAS [9012-36-6]
Armazenagem Em temperaturas entre 2 C e 8 C.
Especificao Polissacardeo linear, neutro, componente
do gar.
Descrio P branco ou quase branco. Albumina humana
Solubilidade Praticamente insolvel em gua fria e muito Sinonmia Albumina srica humana.
pouco solvel em gua quente. Especificao Contm, no mnimo, 96% de albumina.
Uso Eletroforese.
Albumina Humana, soluo reagente
Agarose-DEAE para cromatografia de troca inica Preparao Diluir a soluo de albumina humana com
Especificao Agarose reticulada contendo agrupamentos 15% a 25% (p/v) em soluo de cloreto de sdio a 0,9%
dietilaminoetilo. Apresenta-se em forma de esferas. (p/v) at uma concentrao de 0,1% (p/v) em protenas.
Ajuste o pH para 3,5-4,5 com cido actico glacial.
gua de bromo SR
lcool isoamlico
Preparao Misturar 3 mL de bromo com 100 mL de
gua at saturao. Agitar antes do uso. Aps decantao, CAS [123-51-3]
usar a soluo sobrenadante lmpida. Sinonmia 3-Metilbutan-1-ol.
Conservao Em recipientes hermticos. Frmula e massa molecular C5H12O 88,15
Armazenagem Conservar com excesso de bromo e ao Descrio Lquido incolor.
abrigo da luz.
Segurana Txico.
Caracterstica fsica Temperatura de ebulio: cerca de
130 C.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
isobutanol. Frmula molecular (C2H4O)n
Frmula e massa molecular C4H10O 74,12 Descrio P branco.
Descrio Lquido incolor e lmpido. Solubilidade Solvel em gua e insolvel em solventes
Caractersticas fsicas Densidade (20 C): cerca de 0,80. orgnicos.
ndice de refrao (15 C): 1,397 a 1,399. Temperatura de
ebulio: cerca de 107 C.
lcool terc-amlico
Conservao Em recipientes bem fechados.
CAS [75-85-4]
Segurana Inflamvel.
Sinonmia 2-Metil-2-butanol.
Frmula e massa molecular C5H12O 88,15
lcool isoproplico Descrio Lquido lmpido e incolor. Voltil.
CAS [67-63-0] Caractersticas fsicas Densidade relativa (20 C): cerca
Sinonmia Isopropanol, 2-propanol. de 0,81. Temperatura de fuso: cerca de -8 C. Temperatura
Frmula e massa molecular C3H8O 60,10 de ebulio: 102 C.
Especificao Contm, no mnimo, 99,0%. Miscibilidade Facilmente miscvel em gua. Miscvel em
etanol e em glicerol.
Descrio Lquido incolor, de odor caracterstico.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Caractersticas fsicas Temperatura de ebulio:
aproximadamente 82 C. Densidade: aproximadamente Armazenagem Proteger da luz.
0,785. Indice de refrao (20 C): 1,376 a 1,378. Segurana Inflamvel.
Miscibilidade Miscvel em gua e com etanol.
Conservao Em recipientes bem fechados. lcool tert-butlico
Segurana Inflamvel. CAS [75-65-0]
Sinonmia 2-Metil-2-propanol.
lcool n-amlico Frmula e massa molecular C4H10O 74,12
CAS [71-41-0] Descrio Lquido incolor e lmpido, ou massa cristalina
Sinonmia 1-Pentanol, pentan-1-ol de odor canforado.
Frmula e massa molecular C5H12O 88,15 Caractersticas fsicas Densidade (25 C): 0,778 a 0,782.
Temperatura de fuso: 25,7 C. Temperatura de ebulio:
Descrio Lquido incolor.
82,5 C a 83,5 C.
Caractersticas fsicas ndice de refrao (20 C):
Miscibilidade Solvel em gua, miscvel com etanol e
cerca de 1,41. Temperatura de ebulio: cerca de 137 C.
ter etlico.
Temperatura de fuso: cerca de -79 C.
Miscibilidade Ligeiramente solvel em gua e miscvel
em etanol. Alumnio, metlico
Conservao Em recipientes bem fechados CAS [7429-90-5]
Segurana Irritante! Elemento e massa atmica Al 26,98
Descrio Metal branco ou quase branco a azulado,
malevel, flexvel. Disponvel em barra, p, tiras ou fios.
lcool n-proplico
CAS [71-23-8]
Sinonmia 1-Propanol, propanol. Aluminon
Frmula e massa molecular C3H8O 60,10 CAS [569-58-4]
Descrio Lquido lmpido, incolor, de fraco odor Frmula e massa molecular C22H23N3O9 473,43
alcolico. Descrio Cristais marrons avermelhados.
Solubilidade Facilmente solvel em gua.
434 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
Anisaldedo
Armazenagem Proteger do ar e da luz.
CAS [123-11-5]
Segurana Custico.
Sinonmia Aldedo ansico e p-metoxibenzaldedo.
Frmula e massa molecular C8H8O2 136,14
Anetol
Descrio Lquido oleoso, incolor e amarelado, de odor
CAS [4180-23-8] aromtico.
Sinonmia trans-Anetol. Caractersticas fsicas Densidade: aproximadamente
Descrio Massa cristalina branca ou quase branca em 1,12. Temperatura de ebulio: aproximadamente 248 C.
temperatura entre 20 C e 21 C, lquido em temperatura Miscibilidade Pouco solvel em gua, miscvel com
acima de 23 C. etanol.
Caractersticas fsicas ndice de refrao (25 C): cerca Conservao Em recipientes bem fechados.
de 1,56. Temperatura de ebulio: cerca de 230 C.
Armazenagem Proteger da luz.
Solubilidade Praticamente insolvel em gua, facilmente
solvel em etanol e solvel em acetato de etila e ter de
petrleo. Anisaldedo, soluo
Preparao Misturar, na ordem, 0,5 mL de anisaldedo,
10 mL de cido actico glacial, 85 mL de metanol e 5 mL
Anidrido actico
de cido sulfrico.
CAS [108-24-7]
Frmula e massa molecular C4H6O3 102,09
Anisaldedo SR
Especificao Contm, no mnimo, 97,0% (p/p).
Preparao A 10 mL de anisaldedo adicionar 90 mL
Descrio Lquido mvel, incolor, odor actico intenso de etanol, misturar, adicionar 10 mL de cido sulfrico e
e irritante. homogeneizar.
Caractersticas fsicas Densidade: aproximadamente
1,075. Faixa de ebulio: 136 a 142 C.
Conservao Em recipientes hermticos. Anisaldedo SR1
Segurana Facilmente combustvel. Irritante forte. Preparao Misturar 25 mL de cido actico glacial com
25 mL de etanol, adicionar 0,5 mL de anisaldedo e 1 mL
de cido sulfrico.
Anidrido actico-piridina SR
Sinonmia Mistura anidrido actico-piridina SR Antitrombina III
Descrio Misturar cautelosamente, e sob refrigerao, CAS [90170-80-2]
25 g (ou 23 mL) de anidrido actico em 50 mL de piridina
anidra. Especificao A antitrombina III purificada a partir do
plasma humano por cromatografia em gelose-heparina e
Conservao Em recipientes hermticos. deve ter atividade especfica de, no mnimo, 6 UI/mg.
Armazenagem Proteger do ar e da luz.
Estabilidade Preparar no momento de uso.
Antitrombina III SR
Segurana Txico.
Preparao Reconstituir a antitrombina III segundo
as indicaes do fabricante e diluir com tampo de tris-
Anidrido ftlico cloreto de sdio de pH 7,5, para obter soluo a 1 UI/mL.
CAS [85-44-9]
Frmula e massa molecular C8H4O3 148,12 Aprotinina
Descrio Flocos brancos ou quase brancos. CAS [9087-70-1]
Caracterstica fsica Faixa de fuso: 130 C a 132 C. Descrio P quase branco.
Solubilidade Pouco solvel em gua e solvel em etanol. Solubilidade Solvel em gua e em solues isotnicas,
Conservao Em recipientes fechados. praticamente insolvel em solventes orgnicos.
436 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14 Asparagina
CAS [5794-13-8]
Azul de tetrazlio
CAS [1871-22-3]
Frmula e massa molecular C4H8N2O3.H2O 150,13
Frmula e massa molecular C40H32N8O2Cl2 727,65
Descrio Cristais incolores, inodoros.
Descrio Cristais amarelos.
Caractersticas fsicas Ismero L: Temperatura de fuso:
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: em torno de
234-235 C. Ismero D: Temperatura de fuso: 215 C.
245 C, com decomposio.
Solubilidade Pouco solvel em gua , praticamente
Solubilidade Pouco solvel em gua, facilmente solvel
insolvel em etanol e em cloreto de metileno.
em clorofrmio, etanol e metanol, insolvel em acetona e
ter etlico.
Azida sdica
CAS [26628-22-8] Blsamo do Canad
Frmula e massa molecular NaN3 65,01 CAS [8007-47-4]
Descrio Cristais ou p cristalino branco ou quase Descrio Lquido oleoso amarelo ou esverdeado,
branco. extrado da Abies balsames L., Pinaceae. Com cheiro
Solubilidade Facilmente solvel em gua e pouco solvel agradvel de pinho. Se exposto ao ar, solidifica-se
em etanol. gradativamente em massa no cristalina.
Caractersticas fsicas Densidade: 0,987 a 0,994. ndice
de refrao: 1,53.
Azul cido 83
Miscibilidade Miscvel em gua, benzeno, clorofrmio
CAS [6104-59-2]
e xileno.
Sinonmia Azul brilhante.
Informao adicional Usado para fixar de lminas para
Frmula e massa molecular C45H44N3NaO7S2 825,99. microscpio.
Descrio P castanho.
Solubilidade Insolvel em gua fria, pouco solvel em
Barbalona
gua fervendo e em etanol, solvel em cido sulfrico e
em cido actico glacial, solvel em solues diludas dos CAS [1415-73-2]
hidrxidos de metais alcalinos. Sinonmia Alona.
Descrio Agulhas amarelas ou p cristalino amarelo a
amarelo-escuro. Escurece com a exposio ao ar e luz.
Azul cido 90
Solubilidade Ligeiramente solvel em gua e em etanol,
CAS [6104-58-1]
solvel em acetona, em amnia e solues hidrxi-
Frmula e massa molecular C47H48N3NaO7S2 854,04. alcalinas.
Descrio P castanho escuro, com reflexos violceos e
partculas com reflexos metlicos.
Barbital
Solubilidade Solvel na gua e no etanol.
CAS [57-44-3]
Frmula e massa molecular C8H12N2O3 184,19
Azul de astra
Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p),
CAS [82864-57-1] calculado em relao substncia dessecada.
Frmula e massa molecular - C47H52CuN14O6S3 1068,75 Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco,
inodoro, de sabor fracamente amargo.
Azul de Coomassie SR Caracterstica fsica Temperatura de fuso:
Preparao Preparar uma soluo de azul cido 83 a aproximadamente 190 C.
0,125% (p/v) em uma mistura de cido actico glacial, Solubilidade Pouco solvel em gua, solvel em gua
metanol e gua (1:4:5) e filtrar. fervendo e em etanol.
Barbital sdico Benzoato de benzila
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 437
a
CAS [144-02-5] CAS [120-51-4]
Frmula e massa molecular C8H11N2NaO3 206,18 Descrio Lquido oleoso, lmpido e incolor. Pelo
Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p), resfriamento, forma cristais incolores.
calculado em relao substncia dessecada. Caractersticas fsicas Temperatura de congelamento:
Descrio Cristais incolores ou p cristalizado branco, cerca de 17 C. Temperatura de ebulio: cerca de 324 C.
inodoro, de sabor amargo e fracamente custico. Miscibilidade Praticamente insolvel em gua e glicerol,
Solubilidade Facilmente solvel em gua e pouco solvel miscvel em etanol, ter etlico e clorofrmio.
em etanol.
Conservao Em recipientes bem fechados. Benzoato de colesterila
CAS [604-32-0]
14
Brio SRA - 1 mg/mL Frmula e massa molecular C34H50O2 490,76
Especificao Contm 1,775 g de cloreto de brio em Descrio Slido branco.
gua a 1000 mL Solubilidade Insolvel em gua.
Conservao Em recipientes bem fechados, inertes (tipo
polietileno).
Benzoato de metila
CAS [93-58-3]
Benzeno
Frmula e massa molecular C8H8O2 136,15
CAS [71-43-2]
Descrio Lquido incolor.
Sinonmia Benzol.
Caractersticas fsicas Densidade (20 C): 1,088.
Frmula e massa molecular C6H6 78,11 Temperatura de ebulio: cerca de 200 C.
Descrio Lquido lmpido, incolor, refrativo, voltil, de
odor caracterstico.
Benzofenona
Caractersticas fsicas Faixa de ebulio: 79 C a 81 C.
Densidade: 0,878 a 0,880. ndice de refrao: 1,5016. CAS [119-61-9]
Miscibilidade Praticamente insolvel em gua e miscvel Frmula e massa molecular C13H10O 182,22
em etanol. Descrio P cristalino branco.
Conservao Em recipientes bem fechados. Caractersticas Temperatura de fuso: em torno de 48
Armazenagem Proteger do calor. C.
Segurana Altamente inflamvel. Cancergeno. Solubilidade Praticamente insolvel em gua, facilmente
solvel em etanol.
Informao adicional Sempre que possvel usar tolueno.
Benzona
Benzenossulfonamida
CAS [119-53-9]
CAS [98-10-2]
Nome qumico 2-Hidroxi-1,2-difeniletanona
Frmula e massa molecular C6H5SO2NH2 157,19
Frmula e massa molecular C14H12O2 212,25
Descrio Cristais brancos ou bege-plidos.
Descrio Cristais ligeiramente amarelos.
Caracterstica fsica Faixa de fuso: 150 C a 153 C.
Solubilidade Muito pouco solvel e gua, facilmente
solvel em acetona, solvel em etanol aquecido
Benzil
CAS [134-81-6]
Bicarbonato de sdio
Nome qumico Difeniletanodiona
CAS [144-55-8]
Frmula e massa molecular C14H10O2 210,23
Sinonmia Carbonato cido de sdio, hidrogenocarbonato
Descrio P cristalino amarelo. de sdio.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: em torno de Frmula e massa molecular NaHCO3 84,01
95 C.
Especificao Contm, no mnimo, 99,0% e, no mximo
Solubilidade Praticamente insolvel em gua e solvel 101,0% (p/p), calculado em base seca.
em etanol, acetato de etila e tolueno.
Descrio P cristalino branco, inodoro, de sabor salgado
e fracamente alcalino. Pelo aquecimento, transforma-se em
carbonato de sdio.
Solubilidade Solvel em gua, praticamente insolvel e
etanol.
438 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
Frmula e massa molecular C8H5KO4 204,22
Frmula e massa molecular C4H5NaO6.H2O 190,08
Especificao Contm, no mnimo, 99,9% e, no mximo,
100,3% (p/p), calculado em relao substncia dessecada Descrio Cristais ou p cristalino branco.
a 120 C durante duas horas. Solubilidade Solvel em gua.
Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco.
Solubilidade Solvel em gua e ligeiramente solvel em Bitartarato de sdio SR
etanol.
Preparao Dissolver 1 g de bitartarato de sdio em gua
Conservao Em recipientes bem fechados. e completar o volume para 10 mL. Preparar a soluo para
uso imediato.
Biftalato de potssio 0,05 M
Preparao Dissolver 10,21 g em gua a 1000 mL Biureto
Conservao Em recipientes bem fechados. CAS [108-19-0]
Frmula e massa molecular C2H5N3O2 103,08
Bissulfato de potssio Descrio Cristais brancos, ou quase brancos.
Higroscpicos.
CAS [7646-93-7]
Caracterstica fsica Faixa de fuso: 188 C a 190 C,
Sinonmia Hidrogenossulfato de potssio; sulfato cido
com decomposio.
de potssio.
Solubilidade Solvel em gua, ligeiramente solvel em
Frmula e massa molecular KHSO4 136,16.
etanol, muito pouco solvel no ter etlico.
Especificao Contm, no mnimo, 98,0% (p/p),
Conservao Em recipiente fechado.
calculado sobre a substncia dessecada.
Descrio Cristais incolores ou massa branca;
higroscpico. Biureto, reagente
Caractersticas fsicas Soluo aquosa com carter Preparao Dissolver 1,5 g de sulfato cprico penta-
fortemente cido. Temperatura de fuso: 197 C. hidratado e 6 g de tartarato de sdio e potssio em 500 mL
Solubilidade Facilmente solvel em gua, resultando em de gua . Adicionar 300 mL de soluo de hidrxido de
uma soluo muito cida. sdio a 10% (p/v) isenta de carbonato, completar 1000 mL
com a mesma soluo e misturar.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Boldina
Bissulfato de sdio
CAS [476-70-0]
CAS [7681-38-1]
Frmula e massa molecular C19H21NO4 327,37
Sinonmia Sulfato cido de sdio, hidrogenossulfato de
sdio, pirossulfato de sdio. Descrio P cristalino branco, ou quase branco.
Frmula e massa molecular NaHSO4 120,06 Caracterstica fsica Temperatura de fuso: cerca de 163 C.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: em torno de Solubilidade Muito pouco solvel em gua, solvel em
315 C. etanol e em solues cidas diludas.
Solubilidade Facilmente solvel em gua, muito solvel Conservao Em recipientes fechados.
em gua fervendo. Decompe em etanol, formando sulfato
de sdio e cido sulfrico livre. Borneol
CAS [507-70-0]
Bissulfito de sdio Frmula e massa molecular C10H18O 154,25
CAS [7631-90-5] Descrio Cristais incolores, sublimam rapidamente.
Sinonmia Hidrogenossulfito de sdio, sulfito cido de Caracterstica fsica Temperatura de fuso: cerca de 208 C.
sdio.
Solubilidade Praticamente insolvel em gua, facilmente
Frmula e massa molecular NaHSO3 104,06 solvel em etanol e em ter de petrleo.
Bromato de potssio
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
CAS [37189-34-7]
de sdio 0,1 M SV. Ao restante da soluo de iodo (980
Especificao Concentrado de enzimas proteolticas mL), adicionar quantidade de bromo equivalente ao iodo
derivadas da Ananas comosus Merr. determinado.
Descrio P amarelado. Conservao Em recipientes de vidro bem fechados.
Armazenagem Proteger da luz.
Bromelina SR
Preparao Solubilizar 1 g de bromelina em 100 mL de Brometo de potssio
uma mistura de tampo fosfato pH 5,5 e soluo de cloreto
CAS [7758-02-3]
de sdio a 0,9% (p/v) (1:9).
Frmula e massa molecular KBr 119,00
Especificao Contm, no mnimo, 98,0% (p/p),
Brometo de dimdio calculado em relao substncia dessecada.
CAS [518-67-2] Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco, de
Frmula e massa molecular C20H18BrN3 380,28 sabor acentuadamente salgado.
Descrio - Cristal vermelho-escuro. Solubilidade Facilmente solvel em gua e em glicerol,
Solubilidade Pouco solvel em gua a 20 C, ligeiramente pouco solvel em etanol.
solvel em gua a 60 C e em etanol. Conservao Em recipientes bem fechados.
14
Segurana Txico. Sinonmia n-Butilamina
Frmula e massa molecular C4H11N 73,14
Bromo 0,2 M em cido actico glacial Descrio Lquido incolor, de odor amoniacal.
Preparao Juntar 15 g de brometo de potssio e 5,5 mL Caracterstica fsica Temperatura de ebulio: em torno
de bromo em cido actico glacial a 1000 mL. Agitar e de 78 C.
deixar em repouso por 24 horas. Titular antes do uso. Miscibilidade Miscvel em gua e etanol.
Conservao Em recipientes hermticos. Informao adicional Destilar e utilizar em, no mximo,
Armazenagem Proteger do calor. 30 dias.
Segurana Txico.
Butilparabeno
Bromo SR CAS [94-26-8]
Preparao Dissolver 30 g de bromo e 30 g de brometo Frmula e massa molecular C11H14O3 194,23
de potssio em quantidade suficiente de gua para fazer Descrio P cristalino branco.
100 mL.
Caracterstica fsica Faixa de fuso: de 68 C a 69 C.
Solubilidade Muito pouco solvel em gua e facilmente
1-Butanol solvel em acetona, ter etlico e clorofrmio.
CAS [71-36-3] Conservao Em recipientes fechados.
Sinonmia lcool butlico normal ou primrio, n-butanol,
lcool n-butlico.
Calciferol
Frmula e massa molecular C4H10O 74,12
CAS [50-14-6]
Descrio Lquido lmpido, incolor, retrativo, de odor
Sinonmia Ergocalciferol, vitamina D2.
caracterstico.
Frmula e massa molecular C28H44O 396,65
Caractersticas fsicas Faixa de ebulio: 117 C a 118
C. Densidade (20 C): 0,810. ndice de refrao (20 C): Especificao Um grama corresponde em atividade anti-
1,3993. raqutica a 40 milhes de Ul.
Conservao Em recipientes bem fechados. Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco.
Segurana Irritante. Inflamvel. Solubilidade Praticamente insolvel em gua, facilmente
solvel em etanol, solvel em leo graxos.
Conservao Em recipientes hermticos, sob gs inerte.
Butanossulfonato de sdio
Armazenagem Proteger do calor e da luz.
CAS [2386-54-1]
Frmula e massa molecular C3H9NaO3S 160,17
Clcio SRA - 400 g/mL
Descrio P cristalino branco ou quase branco.
Especificao Contm 1,001 g de carbonato de clcio em
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: maior que
25 mL de cido clordrico M. Ferver. Completar com gua
300 C.
a 1000 mL.
Solubilidade Solvel em gua.
Conservao Em recipientes bem fechados, inertes (tipo
polietileno).
Butil hidroxianisol
CAS [25013-16-5] Canfeno
Sinonmia BHA. CAS [79-92-5]
Frmula e massa molecular C11H16O2 180,24 Frmula e massa molecular C10H16 136,23
Especificao Mistura de dois ismeros: 2-terc-butil-4-
hidroxianisol e 3-terc-butil-4-hidroxianisol
Cnfora
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Carbonato de amnio SR
441
a
CAS [76-22-2] Especificao Contm 15,8 g de carbonato de amnio em
Frmula e massa molecular C10H16O 152,23 gua a 100 mL.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Armazenagem Proteger da luz e do calor.
Caolim leve
CAS [1332-58-7]
Especificao Silicato de alumnio natural, hidratado, Carbonato de clcio
purificado. Contm um agente de dispersante apropriado. CAS [471-34-1]
14
Descrio P branco, pouco denso, isento de partculas Frmula e massa molecular CaCO3 100,09
granulosas, untuoso ao tato. Especificao Contm, no mnimo, 98,5% (p/p),
Solubilidade Praticamente insolvel na gua e nos cidos calculado em substncia seca.
inorgnicos. Descrio P branco, inodoro e inspido.
Partculas grossas Adicionar 5 g da amostra numa Solubilidade Praticamente insolvel em gua.
proveta com rolha (de 160 mm de comprimento e 35 mm de
Conservao Em recipientes bem fechados.
dimetro interno) e junte 60 mL de soluo de pirofosfato
de sdio a 1% (p/v). Agitar vigorosamente e deixar em
repouso durante 5 minutos. Utilizando uma pipeta, retirar Carbonato de estrncio
50 mL do lquido sobrenadante, a partir de uma posio CAS [1633-05-2]
em torno de 5 cm abaixo da superfcie da preparao. Ao
lquido restante junte 50 mL de gua, agitar, deixar em Frmula e massa molecular SrCO3 147,64
repouso durante 5 minutos e retire 50 mL do lquido nas Descrio P branco, inodoro e sem sabor.
condies prescritas anteriormente. Repetir o processo at Conservao Em recipientes bem fechados.
retirar um total de 400 mL. Transferir a suspenso para uma
cpsula de porcelana, evaporar at secura em banho-maria
e dessecar a 100-105 C at massa constante. A massa do Carbonato de ltio
resduo no superior a 25 mg (0,5%). CAS [554-13-2]
Partculas finas Dispersar 5 g da amostra em 250 mL de Frmula e massa molecular Li2CO3 73,89
gua, agitar vigorosamente durante 2 minutos e transferir, Especificao Contm, no mnimo, 98,5%, calculado em
imediatamente, para uma proveta de vidro (de 50 mm de base seca.
dimetro interno). Utilizando uma pipeta, transferir 20
Descrio P branco, leve, inodoro.
mL do lquido para um vidro de relgio. Evaporar at
secura em banho-maria e dessecar a 100-105 C at massa Solubilidade Ligeiramente solvel em gua e muito
constante (m1). Deixar em repouso a 20 C durante 4 horas pouco solvel em etanol.
a suspenso restante. Retirar 20 mL do lquido, a partir Conservao Em recipientes bem fechados.
de uma posio em torno de 5 cm abaixo da superfcie
da preparao, evitando dispersar o sedimento. Transferir
Carbonato de potssio, anidro
para um vidro de relgio, evaporar at secura em banho-
maria e dessecar a 100-105 C at massa constante (m2). O CAS [584-08-7]
valor de m2 no inferior a 70% do valor de m1. Frmula e massa molecular K2CO3 138,21
Descrio P granular ou grnulos brancos ou quase
Carbonato de amnio brancos. Higroscpico.
CAS [506-87-6] Caracterstica fsica Temperatura de fuso: 891 C.
Frmula e massa molecular (NH4)2CO3 96,09 Solubilidade Muito solvel em gua e praticamente
insolvel em etanol.
Especificao Mistura em propores variveis de
bicarbonato de amnio (NH4HCO3 79,06) e carbamato Conservao Em recipientes bem fechados.
de amnio (H2NCOONH4 78,07). Contm, no mnimo,
30,0% de NH3 (MM 17,3) (p/p). Carbonato de potssio, sesqui-hidratado
Descrio Massas cristalinas brancas, translcidas, de CAS [6381-79-9]
odor amoniacal forte.
Frmula e massa molecular K2CO3.1H2O 165,23
Solubilidade Solvel em gua. Decompe em gua
Descrio Cristais granulares pequenos.
fervente.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Segurana Irritante! Custico!
Armazenagem Proteger da luz e do calor.
442 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
Armazenagem Proteger da umidade.
glicerofosfrico com cidos graxos de cadeia longa, sendo
o grupo fosfato esferificado com etanolamina.
Carbonato de sdio, deca-hidratado
Descrio Substncia amorfa amarelada, de odor e sabor
CAS [6132-02-1] caractersticos.
Frmula e massa molecular Na2CO3.10H2 O 286,09 Categoria Hemosttico local e reagente laboratorial em
Especificao Contm, no mnimo, 36,7% (p/p). testes de funo heptica.
Descrio Cristais transparentes, incolores, eflorescentes,
ou p cristalino branco; inodoro, de sabor alcalino e
Cefalina SR
salgado.
Preparao - Adicionar 20 mL de acetona a uma quantidade
Solubilidade Facilmente solvel em gua, e praticamente
de 0,5 a 1 g de p de crebro de boi, deixar em repouso
insolvel em etanol.
durante 2 horas. Centrifugar durante 2 minutos e decantar
Conservao Em recipientes bem fechados. o lquido sobrenadante. Secar o resduo a presso reduzida.
Juntar 20 mL de clorofrmio ao material seco. Deixar em
repouso durante 2 horas, agitar frequentemente. Depois de
Carbonato de sdio, monoidratado
eliminar o material slido, por filtrao ou centrifugao,
CAS [5968-11-6] evaporar o clorofrmio a presso reduzida. Colocar o
Frmula e massa molecular Na2CO3.H2O 124,00 resduo em suspenso em 5 a 10 mL de soluo de cloreto
Especificao Contm, no mnimo, 83,0% (p/p) de sdio a 0,9 % (p/v). Os solventes utilizados para preparar
Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco; este reagente contm um antioxidante apropriado, tal como
inodoro, de sabor alcalino e salgado. o butil hidroxianisol a 0,002% (p/v).
Solubilidade Facilmente solvel em gua, e praticamente Conservao Utilizar em at 3 meses, aps congelamento
insolvel em etanol. ou liofilizao.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Informao adicional Quando prescrito carbonato de Celulose cromatogrfica
sdio para mistura em p, usar Na2CO3.H2O . CAS [9004-34-6]
Sinonmia Celulose para cromatografia.
Carbonato de sdio SR Descrio P fino, branco, homogneo. Tamanho mdio
Especificao Contm 10,6 g de carbonato de sdio de partculas no menor que 30 m.
anidro em 100 mL de gua. Categoria Suporte para cromatografia.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Chumbo SRA - 100 g/mL
Carvona Especificao Contm 0,16 g de nitrato de chumbo(II)
CAS [2244-16-8] em 5 mL de cido ntrico. Completar com gua a 1000 mL.
Frmula e massa molecular C10H14O 150,24 Conservao Em recipientes bem fechados, inertes (tipo
polietileno).
Descrio Lquido incolor.
Caractersticas fsicas Densidade (20 C): cerca de 0,965.
ndice de refrao (20 C): cerca de 1,500. Temperatura de Cianeto de potssio
ebulio: cerca de 230 C. Poder rotatrio (20 C): cerca CAS [151-50-8]
de +61. Frmula e massa molecular KCN 65,12
Miscibilidade Praticamente insolvel em gua, miscvel Especificao Contm, no mnimo, 96,0% (p/p),
em etanol. calculado sobre a substncia dessecada.
Descrio P cristalino, massas ou grnulos brancos;
deliquescente.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: 634 C.
Conservao Em recipientes hermticos.
Armazenagem Proteger da luz. Cinamato de metila
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 443
a
Estabilidade Decompe-se gradualmente por exposio CAS [103-26-4]
ao ar, dixido de carbono e umidade. Frmula e massa molecular C10H10O2 162,19
Segurana Veneno! Descrio Cristais incolores.
Caractersticas fsicas Faixa de fuso: 34 C a 36 C.
Cianeto de potssio SR Temperatura de ebulio: cerca de 260 C. ndice de
refrao (20 C): cerca de 1,56.
Preparao Dissolver 50 g de cianeto de potssio em
gua destilada, completar o volume para 100 mL. Remover Solubilidade Praticamente insolvel em gua e solvel
o chumbo dessa soluo pela extrao com pores em etanol.
sucessivas de soluo extratora de ditizona. Extrair a
ditizona remanescente na soluo de cianeto agitando
com clorofrmio. Diluir a soluo de cianeto com gua
Cinchonina
14
destilada suficiente para que, cada 100 mL, contenha 10 g CAS [118-10-5]
de cianeto de potssio Frmula e massa molecular C19H22N2O 294,39
Conservao Em recipientes hermticos. Descrio P cristalino branco, ou quase branco.
Segurana Veneno! Caractersticas fsicas Poder rotatrio especfico (20
C): +225 a +230, determinado em uma soluo a 5%
(p/v) em etanol a 96% (v/v). Temperatura de fuso: cerca
Cianeto-amnia SR de 263 C.
Preparao Dissolver 2 g de cianeto de potssio em 15 Conservao Em recipientes fechados.
mL de hidrxido de amnio e diluir para 100 mL com gua
Armazenagem Proteger da exposio luz.
destilada.
1,8-Cineol
Cianoacetato de etila
CAS [470-82-6]
CAS [105-56-6]
Sinonmia Eucaliptol.
Frmula e massa molecular C5H7NO2 113,11
Frmula e massa molecular C10H18O 154,25
Descrio Lquido incolor ou amarelo plido.
Descrio Lquido incolor.
Caractersticas fsicas Densidade (25 C): 1,056. Faixa
de ebulio: 205 C a 209 C, com decomposio. Caractersticas fsicas Densidade (20 C): 0,922 a 0,927.
ndice de refrao (20 C): 1,456 a 1,459.
Miscibilidade Pouco solvel em gua e miscvel em
etanol e ter etlico. Miscibilidade Praticamente insolvel em gua e miscvel
em etanol.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Citral
Cicloexano
CAS [5392-40-5]
CAS [110-82-7]
Frmula e massa molecular C10H16O 152,24
Frmula e massa molecular C6H12 84,16
Descrio Lquido amarelo claro.
Descrio Lquido lmpido, incolor, voltil, de odor
caracterstico (semelhante ao da gasolina). Miscibilidade Praticamente insolvel em gua e miscvel
em etanol e glicerol.
Caractersticas fsicas Temperatura de ebulio:
aproximadamente 80 C. Densidade: aproximadamente
0,78. ndice de refrao (20 C): 1,426 a 1,427. Citrato de amnio SR
Miscibilidade Praticamente insolvel em gua. Miscvel Preparao Dissolver 40 g de cido ctrico em 90 mL de
em solventes orgnicos. gua destilada. Acrescentar duas ou trs gotas de vermelho
Conservao Em recipientes bem fechados. de fenol a 0,1% (p/v) em etanol. Adicionar, cuidadosamente,
Segurana Inflamvel. hidrxido de amnio at que a soluo adquira colorao
avermelhada. Remover qualquer chumbo presente pela
extrao com pores de 20 mL de soluo extratora de
Cinamato de benzila ditizona at que a colorao verde-alaranjada na soluo
CAS [103-41-3] de ditizona seja mantida.
Frmula e massa molecular C16H14O2 238,28
Descrio Cristais incolores ou amarelados. Citrato cprico alcalino SR
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: cerca de 39 C. Preparao Sob aquecimento, dissolver 173 g de citrato
de sdio e 177 g de carbonato de sdio monoidratado
em 700 mL de gua. Filtrar se necessrio para obter uma
soluo lmpida. Em um frasco separado, dissolver 17,3
444 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
Segurana Evitar o contato com materiais orgnicos ou
Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p), outras substncias oxidveis.
calculado sobre a substncia dessecada.
Descrio Cristais ou p cristalino branco, inodoro, de
Cloreto cobaltoso
sabor salgado, refrescante. Deliquescente.
CAS [7791-13-1]
Solubilidade Facilmente solvel em gua e praticamente
insolvel em etanol. Sinonmia Cloreto de cobalto(II).
Conservao Em recipientes bem fechados. Frmula e massa molecular CoCl2.6H2 O 237,93
Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p).
Descrio P cristalino ou cristais vermelho-violceos.
Citronelal
Solubilidade Muito solvel em gua e solvel em etanol.
CAS [106-23-0]
Conservao Em recipientes bem fechados.
Frmula e massa molecular C10H18O 154,25
Descrio Lquido incolor ou amarelo claro.
Caractersticas fsicas Densidade (20 C): 0,848 a 0,856. Cloreto cobaltoso SR
ndice de refrao (20 C): cerca de 1,446. Especificao Contm 6,5 g, adicionados de 70 mL de
Miscibilidade Muito pouco solvel em gua e solvel cido clordrico SR, em gua a 100 mL.
em etanol. Conservao Em recipientes bem fechados.
14
Frmula e massa molecular C27H42ClNO2.H2O 466,09
Conservao Em recipientes hermticos.
Descrio Cristais incolores, ou p fino branco, ou quase
Armazenagem Proteger da umidade. branco.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: cerca de 163 C.
Cloreto de amnio SR Solubilidade Solvel em gua e etanol.
Especificao Contm 10,7 g em gua a 100 mL Conservao Em recipientes fechados.
(aproximadamente 2 M). Armazenagem Proteger da exposio luz.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Cloreto de benzila
Cloreto de amnio-hidrxido de amnio SR CAS [100-44-7]
Preparao Misturar volumes iguais de hidrxido de Sinonmia Clorometilbenzeno
amnio e gua e saturar com cloreto de amnio.
Frmula e massa molecular C7H7Cl 126,58
Descrio Lquido incolor.
Cloreto de brio Caractersticas fsicas Densidade (20 C): 1,100.
CAS [10326-27-9] Temperatura de ebulio: 179 C. Faixa de fuso: -48 C
Frmula e massa molecular BaCl2.2H2 O 244,27. a -43 C.
Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p). Miscibilidade Insolvel em gua. Miscvel em etanol,
Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco. clorofrmio e ter etlico.
Solubilidade Facilmente solvel em gua e pouco solvel Conservao Em recipientes hermticos.
em etanol. Armazenamento Proteger do calor.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Segurana Txico! Cloreto de clcio
CAS [10035-04-8]
Cloreto de brio SR Frmula e massa molecular CaCl2.2H2O 147,02
Especificao Contm 10 g em gua a 100 mL. Especificao Contm, no mnimo, 96,0% (p/p).
Conservao Em recipientes bem fechados. Descrio P cristalino ou grnulos brancos, inodoro, de
sabor salgado e fortemente amargo. Higroscpico.
Solubilidade Facilmente solvel em gua e solvel em
Cloreto de benzalcnio
etanol.
CAS [8001-54-5]
Conservao Em recipientes bem fechados.
Frmula e massa molecular [C6H5CH2 N(CH3 )2R]+ Cl- -
Armazenagem Proteger da umidade.
360,00 (mdia)
Composio qumica Mistura de cloretos de
alquildimetilbenzilamnio, em que R representa alquila, Cloreto de clcio, anidro
a partir de n-C8H17 e homlogos superiores: n-C12H25, CAS [10043-52-4]
n-C14H29, n-C16H33, em maior proporo. Frmula e massa molecular CaCl2 110,99
Especificao Contm, no mnimo, 95,0% em relao Especificao Contm, no mnimo, 98,0%(p/p), calculado
mistura dessecada. Contedo dos homlogos alquilados sobre a substncia dessecada.
presentes, em relao ao total calculado sobre base seca:
Descrio Grnulos brancos e secos. Deliquescentes.
n-C12H25: no mnimo 40,0% (p/p); n-C14H29: no mnimo
10,0% (p/p); a soma dos dois homlogos acima: no mnimo Solubilidade Muito solvel em gua, facilmente solvel
70,0% (p/p). em etanol e em metanol.
Descrio P amorfo ou massa gelatinosa branca ou Conservao Em recipientes hermticos
branco-amarelada, de odor aromtico e de sabor amargo. Armazenagem Proteger da umidade
Categoria Dessecante
446 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
Descrio P branco ou quase branco.
Cloreto de metileno saturado com amnia
Solubilidade Muito solvel em gua, facilmente solvel
em metanol e praticamente solvel em acetona. Preparao Misturar 100 mL de cloreto de metileno
com 30 mL de soluo concentrada de amnia em funil
de separao. Deixar separar as fases e utilizar a camada
Cloreto de estanho(II) SR inferior.
Preparao Aquecer 20 g de estanho com 85 mL de cido
clordrico at que no ocorra mais liberao de hidrognio.
Cloreto de metiltionnio
CAS [7220-79-3]
Cloreto de magnsio Sinonmia Cloreto de metiltionnio tri-hidratado, azul de
CAS [7791-18-6] metileno.
Frmula e massa molecular MgCl2 6H2O 203,30 Frmula e massa molecular C16H18ClN3.3H2O 373,90
Especificao Contm, no mnimo, 98,0 % (p/p). Descrio P cristalino verde-escuro ou bronze. Pode ser
Descrio Cristais incolores, de sabor amargo. encontrado em diferentes forma hidratadas.
Higroscpico. Solubilidade Facilmente solvel em gua e em etanol.
Solubilidade Muito solvel em gua e facilmente solvel
em etanol.
Cloreto de metiltionnio SR
Conservao Em recipientes bem fechados.
Sinonmia Azul de metileno SR
Armazenagem Proteger da umidade.
Preparao Dissolver 23 mg de cloreto de metiltionnio
em quantidade suficiente de gua para fazer 100 mL.
Cloreto de mercrio(II)
CAS [7487-94-7] Cloreto de metiltionnio SR1
Sinonmia Cloreto mercrico. Sinonmia Azul de metileno SR1
Frmula e massa molecular HgCl2 271,50 Preparao Dissolver 125 mg de cloreto de metiltionnio
Especificao Contm, no mnimo, 99,0%(p/p), calculado em 100 mL de etanol e diluir em etanol para fazer 250 mL.
sobre a substncia dessecada.
Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco ou
Cloreto de nquel(II)
quase branco, ou massa cristalizada; inodoro.
CAS [7791-20-0]
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: 277 C
(volatiliza a temperatura de aproximadamente 300 C). Frmula e massa molecular NiCl2.6H2O 237,71
Solubilidade Solvel em gua e em glicerol, facilmente Descrio P cristalino verde, higroscpico.
solvel em etanol.
Conservao Em recipientes bem fechados. Cloreto de nitrobenzola
Armazenagem Proteger da luz. CAS [122-04-3]
Segurana Irritante. Custico. Txico. Poluente. Frmula e massa molecular C7H4ClNO3 185,57
Informao adicional Antdoto: dimercaprol. Descrio Cristais amarelos, de odor pungente.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: em torno de
Cloreto de metileno 73 C.
CAS [75-09-2]
Sinonmia Diclorometano. Cloreto de ouro
Frmula e massa molecular CH2Cl2 84,94 CAS [16961-25-4]
Descrio Lquido lmpido, incolor, voltil, de odor Frmula e massa molecular HAuCl4.3H2O 393,83
semelhante ao do clorofrmio. Descrio Cristais monoclnicos amarelo-avermelhado a
amarelo-dourado. Muito higroscpio e deliquescente.
Conservao Em recipientes bem fechados. Cloreto estanoso
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 447
a
Armazenagem Proteger da luz. CAS [10025-69-1]
Frmula e massa molecular SnCl2.2H2O 225,63
Cloreto de ouro SR Especificao Contm, no mnimo, 97,0% (p/p).
Preparao Dissolver 1 g de cloreto de ouro em 35 mL Descrio Cristais incolores ou quase incolores.
de gua. Solubilidade Muito solvel em gua, facilmente solvel
Conservao Em recipientes bem fechados. em etanol, em cido actico glacial, e em cido clordrico
diludo e concentrado.
Armazenagem Proteger da luz.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Cloreto de paldio
CAS [7647-10-1]
Armazenagem Proteger do ar e do calor.
14
Cloreto estanoso SR
Frmula e massa molecular PdCl2 177,31
Especificao Contm 10 g de cloreto estanoso em cido
Especificao Contm, no mnimo, 59,0% (p/p) em
clordrico a 100 mL.
paldio.
Conservao Preparar no momento de uso.
Descrio P cristalino marrom avermelhado.
Armazenagem Proteger da luz.
Caracterstica fsica Em altas temperaturas decompe-se
em paldio e cloro.
Conservao Em recipientes bem fechados. Cloreto estanoso SR1
Segurana Txico! Nome alternativo Cloreto de estanho(II) SR.
Preparao Aquecer 20 g de estanho com 85 mL de cido
clordrico at que no ocorra mais liberao de hidrognio.
Cloreto de potssio
CAS [7447-40-7]
Frmula e massa molecular KCl 74,55 Cloreto frrico
Especificao Contm, no mnimo, 99,0%(p/p), calculado CAS [10025-77-1]
sobre a substncia dessecada. Sinonmia Cloreto de ferro hexa-hidratado.
Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco, Frmula e massa molecular FeCl3.6H2 O 270,30
inodoro, de sabor salino, fracamente amargo. Especificao Contm, 99,0% (p/p), calculado sobre a
Conservao Em recipientes bem fechados. substncia dessecada.
Descrio Massa cristalizada, amarelo-alaranjada ou
marrom. Deliquescente.
Cloreto de potssio, soluo saturada
Caracterstica fsica Temperatura de fuso:
Especificao Contm 17 g em gua a 50 mL.
aproximadamente 37 C.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Armazenagem Proteger da luz.
Cloreto de sdio
CAS [7647-14-5]
Cloreto frrico SR (aproximadamente 0,4 M)
Frmula e massa molecular NaCI 58,44
Usar cloreto frrico SI.
Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p) calculado
sobre a substncia dessecada.
Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco, Cloreto frrico cido SR
inodoro, de sabor salino. Preparao Dissolver 15 mg de cloreto frrico hexa
Solubilidade Facilmente solvel em gua e praticamente -hidratado em 20 mL de mistura de cido actico glacial e
insolvel em etanol anidro. cido sulfrico (1:1).
Conservao Em recipientes bem fechados.
Informao adicional Sal isento de aditivo. Cloreto frrico metanlico
Preparao Dissolver 1 g de cloreto frrico em 100 mL
de metanol.
Cloreto de sdio a 0,9% (p/v)
Sinonmia Cloreto de sdio aproximadamente 0,15 M,
soluo de cloreto de sdio isotnica, soluo fisiolgica, Cloreto mercrico SR (aproximadamente 0,2 M)
soluo salina. Especificao Contm 5,4 g de cloreto de mercrio(II)
Descrio Contm 9 g de cloreto de sdio em gua a em gua a 100 mL.
1000 mL. Conservao Em recipientes bem fechados.
Conservao Em recipientes fechados. Segurana Txico. Poluente.
448 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Cloridrato de hidroxilamina
Cloridrato de dimetil-p-fenilenodiamina
CAS [5470-11-1]
CAS [536-46-9]
Frmula e massa molecular NH4ClO 69,49
Sinonmia Dicloridrato de N,N-dimetil-p-fenilenodiamina.
Especificao Contm, no mnimo, 96,0% (p/p).
Frmula e massa molecular C8H12N2.2HCl 209,12
Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco.
Descrio P cristalino branco ou quase branco.
Higroscpico. Caracterstica fsica Temperatura de fuso:
aproximadamente 151 C .
Solubilidade Facilmente solvel em gua e solvel em
etanol. Solubilidade Muito solvel em gua e solvel em etanol.
Conservao Em recipientes bem fechados. Conservao Em recipientes bem fechados.
Armazenagem Proteger da umidade.
Cloridrato de o-fenilenodiamina
CAS [615-28-1] Cloridrato de hidroxilamina SR
Sinonmia Dicloridrato de 1,2-benzenodiamina. Preparao Dissolver 5 g em 5 mL de gua quente.
Completar a 100 mL com etanol.
Frmula e massa molecular C6H8N2.2HCl 181,14
Conservao Em recipientes bem fechados.
Descrio P branco ou levemente rosado.
Segurana Inflamvel.
Cloridrato de p-fenilenodiamina
Cloridrato de hidroxilamina SR1
CAS [624-18-0]
Preparao Dissolver 20 g de cloridrato de hidroxilamina
Sinonmia Dicloridrato de 1,4-benzenodiamina.
em gua destilada para obter, aproximadamente, 65 mL.
Formula e massa molecular C6H8N2.2HCl 181,14 Transferir para funil de separao. Acrescentar cinco gotas
Descrio P cristalino branco, torna-se avermelhado em de azul de timol SI e adicionar hidrxido de amnio at que
contato com o ar. a soluo adquira cor amarela. Adicionar 10 mL de soluo
Solubilidade Facilmente solvel em gua, pouco solvel aquosa de dietilditiocarbamato de sdio a 4% (p/v), agitar,
em etanol e ter etlico. e deixar em repouso por 5 minutos. Extrair essa soluo
com sucessivas pores de 10 a 15 mL de clorofrmio at
que uma poro de 5 mL do extrato de clorofrmio no
Cloridrato de fenilidrazina adquira colorao amarela quando agitada com sulfato
CAS [59-88-1] cprico a 12,5% (p/v). Adicionar cido clordrico 3 M at
Frmula e massa molecular C6H8N2.HCl 144,60 obter colorao rosa (se necessrio, adicionar uma ou duas
gotas de azul de timol SI) e diluir pra 100 mL com gua
destilada.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
Difenilborato de aminoetanol SR
gua (5.2.20.1) Determinar em 0,5 g. No mximo 1,0%.
Preparao Dissolver 1 g de difenilborato de aminoetanol
em metanol e completar o volume para 100 mL com o
Dietilftalato mesmo solvente.
CAS [84-66-2]
Frmula e massa molecular C12H14O4 222,24 Difenilcarbazida
Descrio Lquido oleoso incolor e praticamente inodoro. CAS [140-22-7]
Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p). Frmula e massa molecular C13H14N4O 242,28
Caractersticas fsicas densidade 1,118. Temperatura de Descrio P cristalino branco; torna-se rseo pela
ebulio: 295 C. exposio ao ar.
Miscibilidade Miscvel em gua, etanol, ter etlico e Caracterstica fsica Faixa de fuso: 168 C a 171 C.
outros solventes orgnicos.
Solubilidade Muito pouco solvel em gua, solvel em
Conservao Em recipientes bem fechados. acetona, em etanol e cido actico glacial.
Segurana Irritante! Conservao Em recipientes hermticos.
Armazenagem Proteger da luz e do ar.
Difenilamina
CAS [122-39-4] Difenilcarbazida SR
Frmula e massa molecular C12H11N 169,22 Especificao Contm 1 g de difenilcarbazida em etanol
Descrio Cristais brancos ou quase brancos. para 100 mL.
Caractersticas fsicas Temperatura de fuso: cerca de Conservao Em recipientes bem fechados.
55 C. Temperatura de ebulio: 302 C. Perde a cor em Armazenagem Proteger da luz.
presena da luz. Segurana Inflamvel.
Solubilidade Pouco solvel em gua e solvel em etanol.
Forma sal em soluo com cidos fortes.
Conservao Em recipientes bem fechados. Difenilcarbazona
Armazenagem Proteger da luz. CAS [538-62-5]
Frmula e massa molecular C13H12N4O 240,26
Descrio Cristais de cor alaranjado-avermelhada.
Difenilamina SR
Caracterstica fsica Temperatura de fuso:
Preparao Dissolver 1 g de difenilamina em 100 mL de
aproximadamente 157 C, com decomposio.
cido sulfrico.
Solubilidade Praticamente insolvel em gua e facilmente
Conservao Em recipientes bem fechados.
solvel em etanol.
Armazenagem Proteger da exposio luz.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Difenilbenzidina
Difenilcarbazona-azul de bromofenol SR
CAS [531-91-9]
Preparao Em balo volumtrico de 25 mL, dissolver
Sinonmia N,N-Difenilbenzidina. 12 mg de difenilcarbazona e 12,5 mg de azul de bromofenol
Frmula e massa molecular C24H20N2 336,43 em 15 mL de etanol. Completar o volume com etanol.
Descrio P cristalino branco ou levemente cinza. Conservao Acondicionar a soluo em recipiente de
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: cerca de 248 C. vidro mbar temperatura de 4 C a 8 C.
Solubilidade Praticamente insolvel em gua, pouco
solvel em acetona e em etanol. Difenilcarbazona mercrica SR
Conservao Em recipientes fechados. Soluo A Dissolver 0,1 g de difenilcarbazona em etanol
Armazenagem Proteger da exposio luz. e completar o volume para 50 mL com o mesmo solvente.
Soluo B Dissolver 1 g de cloreto de mercrio(II) em etanol
e completar o volume para 50 mL com o mesmo solvente.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
p-Dimetilaminobenzaldedo SR2
453
a
Sinonmia Reagente de Wasicky.
Preparao Misturar volumes iguais das Solues A e B Preparao Dissolver 0,5 g de p-dimetilaminobenzaldedo
no momento do uso. em 8,5 mL de cido sulfrico e adicionar, cuidadosamente,
8,5 mL de gua.
N,N-Diisopropiletilenodiamina
CAS [4013-94-9] 4-Dimetilaminocinamaldedo
Frmula e massa molecular C8H20N2 144,26 CAS [6203-18-5]
Descrio Lquido incolor ou amarelado. Corrosivo, Frmula e massa molecular C11H13NO 175,22
inflamvel e higroscpico.
Caractersticas fsicas Densidade (20 C): cerca de 0,798.
Descrio Cristais alaranjados ou marrom-alaranjados
ou p.
14
ndice de refrao (20 C): cerca de 1,429. Temperatura de Caracterstica fsica Temperatura de fuso: em torno de
ebulio: cerca de 170 C. 138 C.
Solubilidade Solvel em etanol, acetona e benzeno.
Dimetilacetamida
CAS [127-19-5] 2,6-Dimetilanilina
Frmula e massa molecular C4H9NO 87,12 CAS [87-62-7]
Descrio Lquido incolor e lmpido. Sinonmia 2,6-Xilidina.
Caractersticas fsicas Temperatura de ebulio: cerca Frmula e massa molecular C8H11N 121,18
de 165 C. ndice de refrao (20 C): cerca de 1,437.
Descrio Lquido incolor.
Densidade (20 C): cerca de 0,94.
Caracterstica fsica Densidade (20 C): cerca de 0,98
Miscibilidade Miscvel em gua e na maioria dos
solventes orgnicos.
Conservao Em recipientes fechados. N,N-Dimetilanilina
CAS [121-69-7]
p-Dimetilaminobenzaldedo Sinonmia N,N-Dimetilbenzenamina.
CAS [100-10-7] Frmula e massa molecular C8H11N 121,18
Sinonmia 4-Dimetilaminobenzaldedo e Reagente de Descrio Lquido oleoso, lmpido, praticamente incolor,
Ehrlich. escurece durante o armazenamento.
Frmula e massa molecular C9H11NO 149,19 Caracterstica fsica Faixa de destilao: 192 C a 194 C.
Descrio P cristalino, branco a fracamente amarelado. Miscibilidade Praticamente insolvel em gua, facilmente
solvel em etanol e ter etlico.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso:
aproximadamente 74 C.
Solubilidade Solvel em etanol e em solues cidas 1,1-Dimetiletilamina
diludas. CAS [75-64-9]
Conservao Em recipientes bem fechados. Sinonmia terc-Butilamina.
Armazenagem Proteger da luz. Frmula e massa molecular C4H11N 73,14
Descrio Lquido incolor.
p-Dimetilaminobenzaldedo SR Caractersticas fsicas Densidade (20 C): cerca de 0,694.
Preparao Dissolver, sem aquecimento, 0,2 g de ndice de refrao (20 C): cerca de 1,378. Temperatura de
p-dimetilaminobenzaldedo em mistura de 4,5 mL de gua ebulio: cerca de 46 C.
e 5,5 mL de cido clordrico. Preparar no momento de uso.
2,5-Dimetilfenol
p-Dimetilaminobenzaldedo SR1 CAS [95-87-4]
Preparao Dissolver 0,2 g de p-dimetilaminobenzaldedo Sinonmia p-Xilenol.
em 20 mL de etanol e adicionar 0,5 mL de cido clordrico. Frmula e massa molecular C8H10O 122,16
Agitar a soluo com carvo ativado e filtrar. A colorao Descrio Cristais brancos ou quase brancos.
da soluo menos intensa do que uma soluo de iodo a
0,0001 M recentemente preparada. Utilizar imediatamente Caracterstica fsica Temperatura de fuso: em torno de
aps o preparo. 74,5 C.
454 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Dimetilsulfxido
CAS [67-68-5] Dixido de mangans
Sinonmia DMSO. CAS [1313-13-9]
Frmula e massa molecular C2H6OS 78,13 Frmula e massa molecular MnO2 86,94
Descrio Lquido incolor e inodoro. Higroscpico. Descrio P fino preto ou marrom escuro.
Caractersticas fsicas Temperatura de ebulio: Conservao Em recipientes bem fechados.
aproximadamente 189 C. Densidade: aproximadamente Armazenagem Proteger do calor.
1,10. ndice de refrao (20 C): 1,479. Segurana Oxidante enrgico.
Miscibilidade Miscvel em gua e em etanol.
Conservao Em recipientes bem fechados. Dipropilenoglicol
Armazenagem Proteger da umidade e da exposio luz. CAS [25365-71-8]
Segurana Irritante. Sinonmia 1,1-xido-2-propanol
Frmula e massa molecular C6H14O3 134,17
1,3-Dinitrobenzeno Descrio Lquido incolor, praticamente sem odor.
CAS [99-65-0] Caractersticas fsicas Densidade: aproximadamente
Frmula e massa molecular C6H4N2O4 168,11 1,02. Temperatura de ebulio: aproximadamente 230 C.
Descrio Cristais amarelados. Conservao Em recipientes bem fechados.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: em torno de Armazenagem Em locais bem ventilados.
89 C.
Solubilidade Praticamente insolvel em gua e pouco Dissulfeto de carbono
solvel em etanol.
CAS [75-15-0]
Conservao Em recipientes bem fechados.
Frmula e massa molecular CS2 76,14
Descrio Lquido incolor ou amarelado. Inflamvel.
1,3-Dinitrobenzeno SR Caractersticas fsicas Densidade (20 C): cerca de 1,26.
Especificao Contm 1 g de 1,3-dinitrobenzeno em Faixa de ebulio: 46 C a 47 C.
etanol para 100 mL. Miscibilidade Praticamente insolvel em gua e miscvel
Conservao Recipiente bem fechado. em etanol.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Dioxana Segurana Venenoso!
CAS [123-91-1]
Sinonmia 1,4-Dioxana, dixido de etileno, dioxano. Ditiol
Frmula e massa molecular C4H8O2 88,11 CAS [496-74-2]
Descrio Lquido lmpido, incolor, com odor semelhante Sinonmia 1,2-Dimercapto-4-metilbenzeno; tolueno
ao de ter etlico. -3,4-ditiol.
Caractersticas fsicas Temperatura de ebulio: em Frmula e massa molecular C7H8S2 156,27
torno de 101 C. Densidade: em torno de 1,03. ndice de Descrio Cristais brancos ou quase brancos.
refrao (20 C): 1,421 a 1,424.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: 31 C.
Miscibilidade Miscvel em gua e na maioria dos
solventes orgnicos. Solubilidade Solvel em metanol e em solues hidrxi-
alcalinas.
Ditiol SR
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Ditizona SR Emodina
Especificao Contm 0,05 g em 100 mL de tetracloreto CAS [518-82-1]
de carbono. Frmula e massa molecular C15H10O5 270,25
Conservao Em recipientes hermticos. Descrio Agulhas vermelho-alaranjadas.
Armazenagem Proteger do calor. Solubilidade Praticamente insolvel em gua, solvel em
Segurana Veneno! etanol e em solues hidrxi-alcalinas.
14
Armazenagem Proteger da exposio luz e do calor. CAS [64-17-5]
Segurana Irritante. Sinonmia lcool anidro.
Frmula e massa molecular C2H6O 46,07
Estearato de metila Especificao Contm, no mnimo, 99,5% (v/v).
CAS [112-61-8] Descrio - Lquido lmpido, incolor, voltil, de odor
Frmula e massa molecular C19H38O2 298,50 caracterstico. Higroscpico.
Descrio Cristais brancos ou massa cristalina branca ou Caractersticas fsicas Temperatura de ebulio: 78-79
amareloplida. C. Densidade: 0,790 a 0,794. ndice de refrao: (20 C):
1,361.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso:
aproximadamente 38 C. Conservao Em recipientes hermticos.
Solubilidade Solvel em etanol e ter de petrleo. Armazenagem Proteger do calor e da umidade.
Conservao Em recipientes bem fechados. Segurana Txico. Inflamvel.
14
Densidade (20 C): 0,723 a 0,728. apropriado, tal como o veneno de vbora de Russel.
Miscibilidade Muito pouco miscvel em gua e miscvel Armazenagem A preparao liofilizada deve ser
em etanol. armazenada a uma temperatura de -20 C. A preparao
Conservao Em recipientes fechados. congelada deve ser armazenada a uma temperatura inferior
Armazenagem Proteger da luz. a -20 C.
Segurana Inflamvel
14 Fenolftalena
CAS [77-09-8] Ferrocianeto de potssio
Frmula e massa molecular C20H14O4 318,33 CAS [14459-95-1]
Especificao Contm, no mnimo, 97,0% (p/p), Frmula e massa molecular K4Fe(CN)6.3H2O 422,39
calculado sobre a substncia dessecada. Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p),
Descrio P cristalino ou amorfo, branco ou levemente calculado sobre a substncia dessecada.
amarelado. Inodoro. Descrio Cristais transparentes ou p cristalino,
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: amarelo. Eflorescente. Torna-se anidro a 100 C.
aproximadamente 258 C. Solubilidade Facilmente solvel em gua e praticamente
Solubilidade Praticamente insolvel em gua e solvel insolvel em etanol.
em etanol. Conservao Em recipientes bem fechados.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Categoria Indicador cido-base.
Ferrocianeto de potssio SR
Especificao Contm 5,3 g em gua a 100 mL
Fenolftalena a 0,1% (p/v) (aproximadamente 0,125 M).
Especificao Contm 0,1 g em etanol a 80% (v/v) a 100 mL. Conservao Preparar no momento de uso.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Segurana Inflamvel. Fibrinognio
Informao adicional Para preparao de papel indicador. CAS [9001-32-5]
Ver monografia Fibrinognio humano liofilizado.
2-Fenoxietanol
CAS [122-99-6] Floroglucina SR
Frmula e massa molecular C8H10O2 138,17 Preparao Dissolver 1 g de floroglucinol em etanol e
Descrio Lquido incolor, fracamente viscoso, de odor diluir para 100 mL com o mesmo solvente.
aromtico fraco e de sabor ardente. Conservao Em recipientes bem fechados.
Caractersticas fsicas Densidade: aproximadamente Armazenagem Proteger da luz.
1,11. Temperatura de ebulio: aproximadamente 245 C.
ndice de refrao (20 C): 1,534.
Misibilidade Pouco solvel em gua, facilmente solvel Floroglucinol
em etanol. CAS [6099-90-7]
Conservao Em recipientes bem fechados. Frmula e massa molecular C6H6O3.2H2O 162,14
Categoria Conservante. Descrio Cristais ou p cristalino branco, ou amarelo
claro.
Ferricianeto de potssio Solubilidade Pouco solvel em gua e solvel em etanol
e ter etlico.
CAS [13746-66-2]
Frmula e massa molecular K3Fe(CN)6 329,25
Fluido gstrico simulado
Especificao Contm, no mnimo, 99,9% (p/p),
calculado sobre a substncia dessecada. Preparao Dissolver 2 g de cloreto de sdio e 3,2 g de
pepsina purificada em 7 mL de cido clordrico e completar
Descrio Cristais vermelhos.
o volume para 1000 mL com gua. Apresenta pH de cerca
Solubilidade Facilmente solvel em gua. de 1,2.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Armazenagem Proteger da luz.
Fluido gstrico simulado (sem enzima)
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14 Fosfato de codena
Especificao Contm, no mnimo, 99,5% (p/p),
calculado sobre a substncia dessecada.
Descrio Cristais incolores.
CAS [41444-62-6] Solubilidade Solvel em gua e praticamente insolvel
Sinonmia Fosfato de codena hemi-hidratado. em etanol.
Frmula e massa molecular C18H21NO3.H3PO4.1/2H2O Conservao Em recipientes bem fechados.
406,37 Armazenagem Proteger do calor e da umidade.
Descrio P cristalino branco ou quase branco, ou
cristais pequenos e incolores.
Fosfato de sdio dibsico, dodeca-hidratado
Solubilidade Facilmente solvel em gua. Pouco ou
muito pouco solvel em etanol. CAS [10039-32-4]
Conservao Em recipientes bem fechados. Frmula e massa molecular Na2HPO4.12H2O 358,08
Especificao Contm, no mnimo, 98,5% (p/p),
calculado sobre a substncia dessecada.
Fosfato de potssio
Descrio Cristais ou grnulos incolores, transparentes,
CAS [7778-53-2] inodoros, de sabor salino, fracamente alcalino. Eflorescente.
Frmula e massa molecular K3PO4 212,27 Conservao Em recipientes bem fechados.
Sinonmia Fosfato de potssio tribsico. Armazenagem Proteger do calor.
Descrio Cristais ou p cristalino branco, deliquescente.
Solubilidade Solvel em gua e insolvel em etanol.
Fosfato de sdio dibsico dodeca-hidratado SR
Conservao Em recipientes bem fechados.
Especificao Contm 9 g em gua a 100 mL.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Fosfato de potssio monobsico
CAS [7778-77-0]
Fosfato de sdio dibsico, hepta-hidratado
Sinonmia Bifosfato de potssio, di-hidrogenofosfato de
CAS [7782-85-6]
potssio, fosfato cido de potssio, fosfato monopotssico,
fosfato potssico de Sorensen. Frmula e massa molecular Na2HPO4.7H2O 268,07
Frmula e massa molecular KH2PO4 136,09 Descrio P granular ou cristal incolor ou branco.
estvel ao ar. A soluo aquosa alcalina.
Especificao Contm, no mnimo, 98,0%, calculado
sobre a substncia dessecada. Conservao Em recipientes bem fechados.
Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco.
Conservao Em recipientes bem fechados. Fosfato de sdio dibsico hepta-hidratado SR
Especificao Contm 12 g de fosfato de sdio dibsico
hepta-hidratado em 100 mL de gua.
Fosfato de potssio dibsico
Conservao Em recipientes bem fechados.
CAS [7758-11-4]
Sinonmia Fosfato de potssio monocido.
Frmula e massa molecular K2HPO4 174,18 Fosfato de sdio monobsico
Descrio Cristais incolores ou p branco ou quase CAS [7558-80-7]
branco. Muito higroscpico. Sinonmia Di-hidrogeno-ortofosfato de sdio.
Solubilidade Muito solvel em gua, muito pouco solvel Frmula e massa molecular NaH2PO4 119,98
em etanol. Descrio P branco ou quase branco. Higroscpio.
Conservao Em recipientes bem fechados. Conservao Em recipientes hermticos.
Fosfato-prpura de bromocresol SR
461
a
CAS [10049-21-5] Soluo A Dissolver 38 g de fosfato de sdio monobsico
Frmula e massa molcula NaH2PO4.H2O 137,99 e 2 g de fosfato de sdio dibsico anidro em gua e diluir
para 1000 mL com o mesmo solvente. Ajustar o pH, se
Descrio Cristais ou grnulos brancos ou quase brancos,
necessrio, em 5,3 0,1 utilizando hidrxido de sdio 5 M
um pouco deliquescentes.
ou cido fosfrico.
Solubilidade Facilmente solvel em gua e praticamente
Soluo B Dissolver 400 mg de prpura de bromocresol
solvel em etanol. A soluo aquosa cida.
em 30 mL de gua, adicionar 6,3 mL de hidrxido de sdio
Conservao Em recipientes bem fechados. 0,1 M e diluir com gua para 500 mL.
14
Preparao No dia da utilizao, misturar as Solues A
Fosfato de sdio monobsico, di-hidratado e B e clorofrmio (1:1:1) em funil de separao. Agitar e
CAS [13472-35-0] desprezar a fase orgnica. Repetir a extrao com pores
iguais de clorofrmio at que a camada orgnica se
Frmula e massa molcula NaH2PO4.2H2O 156,01 apresente incolor. Utilizar a fase aquosa.
Descrio Cristais incolores ou p branco ou quase
branco.
Fsforo vermelho
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: 60 C.
CAS [7723-14-0]
Solubilidade Muito solvel em gua e muito pouco
solvel em etanol. Descrio P vermelho-escuro.
Conservao Em recipientes fechados. Solubilidade Insolvel em gua e em cidos diludos.
Segurana Inflamvel!
Fosfato de sdio tribsico, dodeca-hidrato
CAS [10101-89-0] Frutose
Sinonmia Fosfato tribsico sdico, fosfato trissdico. CAS [57-48-7]
Frmula e massa molecular Na3PO4.12H2O 380,12 Sinonmia -D-Frutose, levulose.
Descrio Cristais incolores ou brancos. Eflorescente. Frmula e massa molecular C6H12O6 180,16
Caracterstica fsica Funde a 75 C por aquecimento Especificao Contm, no mnimo, 98,0%, calculado
rpido. sobre a substncia dessecada.
Solubilidade Facilmente solvel em gua. Descrio P cristalino branco, inodoro, de forte sabor
Conservao Em recipientes bem fechados. adocidado.
Armazenagem Proteger do calor. Caracterstica fsica Temperatura de fuso com
decomposio: aproximadamente 103 C.
Solubilidade Muito solvel em gua e solvel etanol.
Fosfato de tetrabutilamnio Conservao Em recipientes bem fechados.
CAS [5574-97-0]
Frmula e massa molecular C16H38NO4P 339,46
Frutose a 0,1 % (p/v)
Descrio P branco ou quase branco. Higroscpico.
Especificao Contm 0,1 g em piridina a 100 mL.
Solubilidade Solvel em gua.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Conservao Em recipiente fechados.
Segurana Txico.
Fosfato de tributila
Ftalaldedo
CAS [126-73-8]
CAS [643-79-8]
Frmula e massa molecular C12H27O4P 266,31
Frmula e massa molecular C8H6O2 134,14
Descrio Lquido incolor, ou pouco amarelado, e
Descrio P cristalino amarelo.
inodoro.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: cerca de 55 C.
Miscibilidade Pouco miscvel em gua.
Conservao Em recipientes fechados.
Armazenagem Proteger da exposio luz e do contato
Fosfato equimolar 0,05 M com o ar.
Especificao Contm 3,53 g de fosfato de sdio dibsico
e 3,39 g de fosfato de potssio monobsico em gua para
1000 mL.
Conservao Em recipientes fechados.
462 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Heptanossulfonato de sdio
Guanina
CAS [22767-50-6]
CAS [73-40-5]
Frmula e massa molecular C7H15NaO3S 202,25
Frmula e massa molecular C5H5N5O 151,13
Descrio Massa cristalina branca ou quase branca.
Descrio P branco ou quase branco, amorfo.
Solubilidade Facilmente solvel em gua e solvel em
Solubilidade Praticamente insolvel em gua, pouco metanol.
solvel em etanol. Dissolve em solues hidrxi-alcalinas
diludas. Conservao Em recipientes hermticos.
464 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
Frmula e massa molecular KOH 56,11
Especificao Contm, no mnimo, 85,0% (p/p), Armazenagem Proteger da umidade e do dixido de
calculado como KOH, e, no mximo, 3,5% de K2CO3. carbono.
Descrio Massa branca, dura, seca, de estrutura
cristalina, inodora, muito higroscpica e vida por CO2. Hidrxido de sdio, soluo concentrada SR
Liquefaz - se ao ar. Apresentado nas formas de lentilhas, (aproximadamente 10 M)
cilindros ou escamas. Especificao Contm 20 g de hidrxido de sdio em
Solubilidade Muito solvel em gua e facilmente solvel gua a 50 mL.
em etanol. Conservao Em recipientes bem fechados.
Conservao Em recipientes hermticos, inertes. Armazenagem Proteger do dixido de carbono.
Armazenagem Proteger da umidade e do dixido de Segurana Custico.
carbono.
Segurana Muito custico.
Hidrxido de tetrabutilamnio
CAS [2052-49-5]
Hidrxido de potssio etanlico SR (aproximadamente
0,5 M) Frmula e massa molecular (C4H9)4NOH 259,47
Preparao Dissolver 34,04 g de hidrxido de potssio Descrio Cristais brancos ou quase brancos.
em 20 mL de gua; completar a 1000 mL com etanol Solubilidade Solvel em gua.
(isento de aldedo). Repouso de 24 horas Em recipientes
hermticos. Decantar. Usar o sobrenadante lmpido.
Hidrxido de tetrametilamnio
Conservao Em recipientes hermticos.
CAS [75-59-2]
Armazenagem Proteger da luz.
Frmula e massa molecular C4H13NO 91,15
Descrio uma base mais forte que a amnia e absorve
Hidrxido de potssio etanlico 2 M rapidamente dixido de carbono do ar. Uma preparao em
Preparao Dissolver 6,6 g de hidrxido de potssio em meio aquoso a 25% (p/v), lmpida e incolor.
5 mL de gua, resfriar e completar o volume para 50 mL Caracterstica fsica Temperatura de fuso: 63 C.
com etanol. Decantar por 24 horas e utilizar o sobrenadante Conservao Em recipientes bem fechados.
lmpido.
D--4-hidroxifenilglicina
Hidrxido de sdio
CAS [22818-40-2]
CAS [1310-73-2]
Frmula e massa molecular C8H9NO3 167,16
Sinonmia Soda custica.
Descrio Folhetos brilhantes.
Frmula e massa molecular NaOH 40,00
Caracterstica fsica Faixa de decomposio: entre 220
Especificao Contm, no mnimo, 95,0% (p/p) de lcali C e 247 C.
total, calculado como NaOH, e, no mximo, 3,0% (p/p) de
Na2CO3. Solubilidade Ligeiramente solvel em gua, em etanol,
ter etlico e acetona. Solvel em minerais alcalinos e
Descrio Massa dura, de estrutura cristalina, branca sob cidos.
a forma de pedaos, lentilhas e bastonetes. Deliquescente e
absorve dixido de carbono.
Solubilidade Muito solvel em gua e facilmente solvel
em etanol.
Conservao Em recipientes hermticos.
Armazenagem Proteger da umidade e do dixido de
carbono.
Segurana Custico, corrosivo.
466 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Iodato de potssio
Hipoclorito de sdio
CAS [7758-05-6]
CAS [7681-52-9]
Frmula e massa molecular KIO3 214,00
Frmula e massa molecular NaClO 74,44
Descrio Cristais brancos, inodoros, ou p cristalino.
Descrio Cristais brancos. Normalmente obtido
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: em torno de
na forma penta-hidratada, sendo que sua forma anidra
560 C, com decomposio parcial.
explosiva.
Solubilidade Solvel em gua, insolvel em etanol.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: 18 C (forma
penta-hidratada) Categoria Agente oxidante.
Solubilidade Muito solvel em gua.
Conservao Em recipientes bem fechados. Iodeto de mercrio(II)
Segurana Irritante! CAS [7774-29-0]
Sinonmia Bi-iodeto de mercrio, iodeto de mercrio
vermelho.
Hipoclorito de sdio SR
Frmula e massa molecular HgI2 454,40
Ver monografia hipoclorito de sdio soluo diluda.
Descrio P cristalino, vermelho escarlate, denso,
inodoro e quase inspido.
Hipofosfito de sdio Caracterstica fsica Temperatura de fuso: 259 C.
CAS [10039-56-2] Solubilidade Pouco solvel em gua, ligeiramente solvel
Frmula e massa molecular NaH2PO2 H2O 105,99 em acetona e em etanol, solvel em soluo de iodeto de
potssio em excesso.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
calculado sobre a substncia dessecada.
Descrio Cristais incolores, ou p cristalino branco, Iodeto de sdio
inodoro, de sabor salgado e amargo. Fracamente CAS [7681-82-5]
deliquescente.
Frmula e massa molecular NaI 149,89
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: 680 C.
Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p),
Solubilidade Muito solvel em gua, facilmente solvel calculado em relao substncia dessecada.
em glicerol, solvel em etanol.
Descrio P cristalino branco ou cristais incolores,
Conservao Em recipientes bem fechados. higroscpicos, inodoros.
Armazenagem Proteger da luz e umidade. Solubilidade Muito solvel em gua e facilmente solvel
em etanol.
Iodeto de potssio aproximadamente M Conservao Em recipientes hermticos.
Usar iodeto de potssio SR.
Iodeto de sdio em cido actico
Iodeto de potssio SR Especificao Contm 10 g em cido actico glacial a
50 mL.
Especificao Contm 16,5 g de iodeto de potssio em
gua a 100 mL. Conservao Em recipientes bem fechados.
Conservao Em recipientes opacos bem fechados. Armazenagem Proteger da luz.
Armazenagem Proteger da luz.
Iodeto de tetrabutilamnio
Iodeto de potssio mercrico alcalino SR CAS [311-28-4]
Sinonmia Reagente de Nessler, soluo alcalina de Sinonmia Iodeto de tetra-n-butilamnio.
tetraiodomercurato(II) de potssio, iodeto de potssio- Frmula e massa molecular C16H36IN 369,38
cloreto de mercrio SR. Descrio Cristais ou p cristalino branco ou pouco
Preparao Dissolver 5 g de iodeto de potssio em 5 mL colorido.
de gua, adicionar pouco a pouco soluo de cloreto de Solubilidade Pouco solvel em gua e solvel em etanol.
mercrio(II) a 25% (p/v), controlando-se a adio, para que
o precipitado formado no incio no fique completamente
dissolvido. Deixar esfriar. Em seguida, adicionar soluo ndigo carmim
de hidrxido de potssio a 50% (p/v), diluir com gua CAS [860-22-0]
at completar o volume de 100 mL e adicionar 0,5 mL da Frmula e massa molecular C16H8N2NaO8S2 466,36
soluo de cloreto de mercrio(II) a 25% (p/v). Deixar
decantar e usar o sobrenadante. Descrio Grnulos azuis com brilho de cobre, ou p
azul ou azul-violeta.
Solubilidade Ligeiramente solvel em gua, praticamente
Iodeto de potssio mercrico alcalino SR1 solvel em etanol. Precipita em solues aquosas de cloreto
Nome alternativo Tetraiodomercurato de potssio de sdio.
alcalino SR.
Preparao Dissolver em gua, 11 g de iodeto de potssio ndigo carmim SR
e 15 g de iodeto de mercrio(II) e completar o volume
para 100 mL com o mesmo solvente. Imediatamente antes Preparao Em uma mistura de 10 mL de cido clordrico
do uso, misturar a soluo anterior com igual volume de e 990 mL de cido sulfrico a 20% (p/v), adicionar 0,2 g de
hidrxido de sdio a 25% (p/v). ndigo carmim.
468 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
2-Mercaptoetanol
C): 1,328 a 1,330.
Conservao Em recipientes hermticos. 14
CAS [60-24-2] Segurana Txico. Inflamvel.
Frmula e massa molecular C2H6OS 78,14
Descrio Lquido lmpido e incolor. Metenamina
Caractersticas fsicas Densidade (20 C): cerca de CAS [100-97-0]
1,116. Temperatura de ebulio: cerca de 157 C.
Sinonmia Hexametilenotetramina.
Miscibilidade Miscvel em gua.
Frmula e massa molecular C6H12N4 140,19
Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p), aps
Mercrio dessecao sob pentxido de fsforo durante 4 horas.
CAS [7439-97-6] Descrio P cristalino incolor.
Elemento e massa atmica Hg 200,59 Caractersticas fsicas Sublima sem fundir e com parcial
Especificao Metal lquido, mvel, denso, prateado, de decomposio a aproximadamente 263 C. O pH da
superfcie espelhada. soluo a 0,2 M: 8,4.
Caractersticas fsicas Densidade: aproximadamente Solubilidade Muito solvel em gua.
13,5. Temperatura de ebulio: aproximadamente 357 C. Conservao Em recipientes bem fechados.
Conservao Em recipientes bem fechados. Categoria Antissptico urinrio.
Segurana Veneno! Voltil temperatura ambiente.
Metilcelulose 450
Mercrio SRA 1 mg/mL CAS [9004-67-5]
Especificao Contm 1,080 g de xido de mercrico Especificao Celulose parcialmente O-metilada com
dissolvido no menor volume possvel de cido clordrico 2 viscosidade de 450 mPa/segundo.
M. Completar com gua a 1000 mL. Descrio Grnulo ou p branco, ou branco amarelado,
Conservao Em recipientes bem fechados, inertes (tipo ou branco acinzentado. Higroscpico.
polietileno). Solubilidade Praticamente insolvel em gua quente, em
acetona, etanol absoluto e tolueno.
Metabissulfito sdico
CAS [7681-57-4] 4,4-Metilenobis-N,N-dimetilanilina
Sinonmia Dissulfito de sdio, pirossulfito de sdio. CAS [101-61-1]
Frmula e massa molecular Na2S2O5 190,10 Sinonmia Tetrametildiaminodifenilmetano.
Especificao Contm, no mnimo, 95% (p/p). Contm Frmula e massa molecular C17H22N2 254,37
quantidade de metabissulfito sdico equivalente a, no Descrio Cristais ou folhetos brancos, ou branco-
mnimo, 65,0% e, no mximo, 67,4% de SO2. azulados.
Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco ou Caracterstica fsica Faixa de fuso: 90 C a 91 C.
branco-creme, de odor sulfuroso e de sabor cido e salino.
Solubilidade Praticamente insolvel em gua, pouco
Solubilidade Facilmente solvel em gua e pouco solvel solvel em etanol e solvel em cidos minerais.
em etanol.
Conservao Em recipientes fechados.
Conservao Em recipientes bem fechados, bem cheios.
Armazenagem Proteger do calor excessivo, do ar e da
umidade.
Estabilidade Oxida lentamente a sulfato, por exposio
ao ar e, umidade, com desintegrao dos cristais.
472 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Metxido de potssio
Metilisobutilcetona
CAS [865-33-8]
CAS [108-10-1]
Frmula e massa molecular CH3OK 70,13
Sinonmia 4-Metil-2-pentanona, isopropilacetona.
Uso Preparao extempornea.
Frmula e massa molecular C6H12O 100,16
Descrio Lquido incolor, de odor cetnico e canforado.
Caractersticas fsicas Temperatura de ebulio: em Metxido de sdio
torno de 115 C CAS [124-41-4]
Frmula e massa molecular CH3ONa 54,02
Metilparabeno Descrio P branco fino. Reage violentamente com
a gua com formao de calor. Sensvel ao ar. Pode
CAS [99-76-3]
apresentar-se na forma de: CH3ONa. 2CH3OH, p branco.
Nome qumico ster metlico do cido 4-hidroxibenzoico Em soluo pode ser preparado in situ.
Frmula e massa molecular C8H8O3 152,15 Solubilidade Solvel em etanol e em metanol.
Descrio Cristais brancos, pouco solveis em gua, Conservao Em recipientes hermticos.
facilmente solveis em acetona, em etanol e em ter etlico.
Armazenagem Proteger da umidade.
Solubilidade Muito pouco solvel em gua e facilmente
solvel em etanol e em metanol.
Categoria Conservante. Metoxietanol
CAS [109-86-4]
Sinonmia 2-Metoxietanol, ter etilenoglicol monometil.
4-Metilpentan-2-ol
Frmula e massa molecular C3H8O2 76,09
CAS [108-11-2]
Descrio Lquido incolor e lmpido.
Frmula e massa molecular C6H14O 102,17
Caractersticas fsicas Densidade (20 C): cerca de
Descrio Lquido incolor, lmpido e voltil.
0,9663. ndice de refrao (20 C): cerca de 1,4028.
Caractersticas fsicas Densidade (20 C): cerca de 0,802. Temperatura de ebulio: cerca de 125 C.
ndice de refrao (20 C): cerca de 1,411. Temperatura de
Miscibilidade Miscvel em gua, em acetona e em etanol.
ebulio: cerca de 132 C.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Segurana Venenoso! Usar em ambientes com ventilao
3-Metil-2-pentanona adequada.
CAS [565-61-7]
Frmula e massa molecular C6H12O 100,16
Miristato de metila
Descrio Lquido incolor e inflamvel.
CAS [124-10-7]
Frmula e massa molecular C15H30O2 242,40
Especificao Contm, no mnimo, 98,0% (p/v).
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
Estabilidade Preparar para uso imediato.
Armazenagem Proteger da luz.
1,3-Naftalenodiol
CAS [132-86-5]
2-Naftol
Frmula e massa molecular C10H8O2 160,17
CAS [135-19-3]
Descrio P cristalino, geralmente, violeta-
Sinonmia Betanaftol, b-naftol
amarronzado.
Frmula e massa molecular C10H8O 144,17
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: cerca de 125 C.
Descrio P cristalino branco a levemente rseo, de
Solubilidade Facilmente solvel em gua e em etanol.
odor fenlico fraco.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso:
2,7-Naftalenodiol aproximadamente 122 C
CAS [582-17-2] Solubilidade Muito pouco solvel em gua e muito
Frmula e massa molecular C10H8O2 160,17 solvel em etanol.
Descrio P ou slido cristalino amarelo a quase branco. Conservao Em recipientes bem fechados.
Caractersticas fsicas Faixa de fuso: 187 C e 191 C. Armazenagem Proteger da luz.
Solubilidade Solvel em gua e em etanol.
2-Naftol SR
Naftalenodiol, reagente Sinonmia Betanaftol SR, b-naftol SR.
Preparao Dissolver 20 mg de 1,3-naftalenodiol em 10 Especificao Contm 1 g em 100 mL de hidrxido de
mL de etanol contendo 0,2 mL de cido sulfrico. sdio a 1% (p/v).
Conservao Em recipientes bem fechados.
1-Naftilamina Estabilidade Preparar para uso imediato.
CAS [134-32-7] Armazenagem Proteger da luz.
Sinonmia -Naftilamina.
Frmula e massa molecular C10H9N 143,12 2-Naftol SR1
Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco. Sinonmia Betanaftol SR1, b-naftol SR1
Pela exposio ao ar e luz, torna-se avermelhado. Odor Preparao Dissolver 5 g de 2-naftol, recentemente
desagradvel. recristalizado, em 40 mL de hidrxido de sdio 2 M e
Caracterstica fsica Faixa de fuso: 49 C a 51 C. completar para 100 mL com gua.
Solubilidade Pouco solvel em gua e facilmente solvel Conservao Em recipientes bem fechados.
em etanol. Estabilidade Preparar para uso imediato.
Conservao Em recipientes bem fechados. Armazenagem Proteger da luz.
Armazenagem Proteger da luz e do ar.
Segurana Vapor e p nocivos. Naringina
CAS [10236-47-2]
1-Naftol Frmula e massa molecular C27H32O14 580,54
CAS [90-15-3] Descrio P cristalino branco ou quase branco.
Sinonmia Alfanaftol, -naftol. Caracterstica fsica Temperatura de fuso: cerca de 171 C.
Frmula e massa molecular C10H8O 144,17 Solubilidade Pouco solvel em gua, solvel em metanol
Descrio Cristais incolores, ou brancos ou quase e em dimetilformamida.
brancos; ou p cristalino branco ou quase branco. Escurece
com a exposio luz.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: cerca de 95 C.
Negro de amido 10B Nitrato de amnio
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 475
a
CAS [1064-48-8] CAS [6484-52-2]
Frmula e massa molecular C22H14N6Na2O9S2 616,50 Frmula e massa molecular NH4NO3 80,04
Descrio P castanho escuro a preto. Descrio Cristais incolores, deliquescentes, ou p
Solubilidade Ligeiramente solvel na gua, solvel em branco, de sabor salgado.
etanol. Caractersticas fsicas Temperatura de fuso:
aproximadamente 155 C, decompe-se ao redor de 210
C em gua e xidos de nitrognio.
Negro de amido 10B SR
Solubilidade Muito solvel em gua, facilmente solvel
14
Especificao Soluo de negro de amido 10B a 0,5% em metanol e solvel em etanol.
(p/v) numa mistura de cido actico e metanol (10:90).
Conservao Em recipientes bem fechados.
Ninidrina
Nitrato de amnio SR
CAS [485-47-2]
Especificao Contm 5 g de nitrato de amnio em gua
Sinonmia Ninhidrina. para 100 mL.
Frmula e massa molecular C9H4O3.H2O 178,14
Especificao Contm, no mnimo, 96,0% (p/p).
Nitrato de amnio, soluo saturada
Descrio P cristalino branco a amarelo fracamente
Especificao Contm 20,1 g em 10 mL de gua.
plido.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Solubilidade Solvel em gua e em etanol.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Armazenagem Proteger da luz. Nitrato de brio
CAS [10022-31-8]
Frmula e massa molecular BaN2O6 261,34
Ninidrina etanlica actica SR
Descrio Cristais ou p cristalino.
Preparao Dissolver 1 g de ninidrina em 50 mL de
etanol e adicionar 10 mL de cido actico glacial. Caracterstica fsica Temperatura de fuso:
aproximadamente 590 C.
Solubilidade Facilmente solvel em gua, muito pouco
Ninidrina SR solvel em etanol e em acetona.
Sinonmia Ninhidrina SR. Conservao Em recipientes bem fechados.
Especificao Contm 0,2% (p/v) em mistura de Segurana Veneno!
1-butanol e cido actico 2 M (95:5).
Conservao Em recipientes bem fechados.
Nitrato de cdmio
Armazenagem Proteger da luz.
CAS [10022-68-1]
Segurana Inflamvel.
Frmula e massa molecular Cd(NO3)2.4H2O 308,47
Descrio Cristais incolores. Higroscpicos.
Nitrato crico amoniacal
Solubilidade Muito solvel em gua e solvel em acetona
CAS [16774-21-3] e em etanol.
Frmula e massa molecular (NH4)2[Ce(NO3)6] 548,22
Descrio P cristalino amarelo-alaranjado ou cristais
Nitrato de chumbo
alaranjados transparentes.
CAS [10099-74-8]
Solubilidade Solvel em gua.
Sinonmia Nitrato de chumbo(II).
Frmula e massa molecular Pb(NO3)2 331,21
Nitrato de alumnio, nona-hidratado
Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p).
CAS [7784-27-2]
Descrio Cristais incolores, translcidos ou p cristalino
Frmula e massa molecular Al(NO3)3.9H2O 375,14 branco.
Descrio Cristais deliquescentes. Solubilidade Facilmente solvel em gua.
Solubilidade Muito solveis em gua e etanol, muito Conservao Em recipientes bem fechados.
pouco solveis em acetona.
Segurana Veneno!
Conservao Em recipientes hermeticamente fechados
476 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
Solubilidade Solvel em gua.
Conservao Em recipientes bem fechados. Sinonmia Nitrato mercrico.
Armazenagem Proteger do calor. Frmula e massa molecular HgN2O6.H2O 342,62
Descrio Cristais incolores ou fracamente corados.
Higroscpico.
Nitrato de cobalto(II) SR
Solubilidade Solvel em gua em presena de pequena
Descrio Contm 1,0% (p/v) em metanol.
quantidade de cido ntrico.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Conservao Em recipientes hermticos.
Segurana Inflamvel. Txico.
Armazenagem Proteger da luz e da umidade.
Segurana Veneno!
Nitrato de lantnio
CAS [10277-43-7]
Nitrato de potssio
Frmula e massa molecular LaN3O9.6H2O 433,01
CAS [7757-79-1]
Descrio Cristais incolores, deliquescentes.
Frmula e massa molecular KNO3 101,10
Solubilidade Facilmente solvel em gua.
Especificao Contm, no mnimo, 99,5% (p/p).
Conservao Em recipientes bem fechados.
Descrio Cristais incolores e transparentes, ou p
branco, cristalino ou granular.
Nitrato de lantnio SR Solubilidade Muito solvel em gua.
Especificao Contm 5% (p/v) em gua. Conservao Em recipientes bem fechados.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Nitrato de prata
Nitrato de magnsio CAS [7761-88-8]
CAS [13446-18-9] Frmula e massa molecular AgNO3 169,87
Frmula e massa molecular Mg(NO3)2.6H2O 256,41 Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p).
Descrio Cristais incolores e deliquescentes. Descrio Cristais incolores transparentes, ou p
Solubilidade Muito solvel em gua e facilmente solvel cristalino branco. Inodoro
em etanol. Caracterstica fsica Temperatura de fuso: 212 C.
Conservao Em recipientes bem fechados. Solubilidade Muito solvel em gua e solvel em etanol.
Conservao Em recipientes no metlicos fechados.
Nitrato de mercrio(I) Armazenagem Proteger da luz.
CAS [14836-60-3] Segurana Custico. Veneno!
Sinonmia Nitrato mercuroso.
Frmula e massa molecular Hg2N2O6.2H2O 561,22 Nitrato de prata 0,1 M
Descrio Cristais incolores, normalmente com fraco Especificao Contm 17 g em gua para 1000 mL.
odor de cido ntrico. Conservao Em recipientes bem fechados.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: Armazenagem Proteger da luz.
aproximadamente 70 C, com decomposio.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Nitrato de prata SR
Armazenagem Proteger da luz.
Especificao Contm 4,25 % (p/v) em gua.
Segurana Veneno!
Conservao Em recipientes bem fechados.
Armazenagem Proteger da luz.
Nitrato de mercrio(I) SR
Sinonmia Nitrato mercuroso SR.
Nitrato de prata SR1
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
Conservao Em recipientes hermticos.
Frmula e massa molecular NaNO3 84,99
Armazenagem Proteger da luz.
Descrio Cristais incolores e transparentes ou, grnulo
ou p branco ou quase branco. Deliquescente.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: 308 C. Nitrazepam
Solubilidade Facilmente solvel em gua e pouco solvel CAS [146-22-5]
em etanol. Frmula e massa molecular C15H11N3O3 281,27
Conservao Em recipientes bem fechados. Descrio P cristalino amarelo.
Caracterstica fsica Faixa de fuso: 226 C a 230 C.
Nitrato de sdio SR Solubilidade Praticamente insolvel em gua, e pouco
Especificao Contm 10 g em gua para 100 mL. solvel em etanol.
Estabilidade Preparar imediatamente antes do uso. Conservao Em recipientes fechados.
Armazenagem Proteger da exposio luz.
Nitrato de trio
CAS [13470-07-0] Nitrito de sdio
Frmula e massa molecular ThN4O12.4H2O 552,12 CAS [7632-00-0]
Descrio Cristais ou p cristalino branco, levemente Frmula e massa molecular NaNO2 69,00
deliquescente. Especificao Contm, no mnimo, 97,0% (p/p).
Solubilidade Muito solvel em gua e etanol. Descrio Cristais incolores, ou p granulado branco, ou
Conservao Em recipientes bem fechados. levemente amarelado. Higroscpico.
Armazenagem Proteger da umidade. Caractersticas fsicas Temperatura de fuso: 271C.
Decompe-se acima de 320 C.
Solubilidade Facilmente solvel em gua.
Nitrato de zirconila Conservao Em recipientes bem fechados.
CAS [14985-18-3] Estabilidade Oxida-se ao ar muito lentamente a nitrato.
Sinonmia Nitrato de zircnio.
Frmula molecular aproximadamente, ZrO(NO3)2.xH2O
Nitrito de Sdio SR
Descrio Cristais, ou p branco, ou quase branco.
Especificao Contm 10 g de nitrito de sdio em gua
Conservao Em recipientes bem fechados. para 100 mL.
Conservao Preparar para consumo imediato.
Nitrato de zirconila SR
Preparao Dissolver 0,1 g de nitrato de zirconila em p-Nitroanilina
uma mistura de 60 mL de cido clordrico e 40 mL de gua.
CAS [100-01-6]
Conservao Em recipientes bem fechados.
Frmula e massa molecular C6H6N2O2 138,12
Descrio P cristalino claro.
Nitrato fenilmercrico Caracterstica fsica Faixa de fuso: de 146 C a 148 C.
CAS [55-68-5] Solubilidade Insolvel em gua e solvel em etanol e ter
Sinonmia Nitrato bsico de fenilmercrio e nitrato de etlico. Forma um sal solvel em soluo aquosa com cido
fenilmercrio. mineral forte.
Frmula e massa molecular C6H5HgNO3 339,70 Conservao Em recipientes bem fechados.
Especificao Consiste em mistura de nitrato e hidrxido
de on fenilmercrio (C6H5Hg+). Contm, no mnimo,
478 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
Especificao Contm, no mnimo, 98,0% de
CAS [552-89-6] C8H17NaO3S.
Frmula e massa molecular C7H5NO3 151,12 Descrio Flocos ou ps cristalinos brancos ou quase
Descrio Cristais amarelos, de odor semelhante ao de brancos.
leo de amndoas.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: em torno de
Octilsulfato de sdio
42 C.
CAS [142-31-4]
Solubilidade Pouco solvel em gua e facilmente solvel
em etanol. Frmula e massa molecular C8H17NaO4S 232,27
Descrio Flocos ou p cristalino branco ou quase
branco.
Nitrobenzeno
Solubilidade Facilmente solvel em gua e solvel em
CAS [98-95-3] metanol.
Sinonmia Nitrobenzol.
Frmula e massa molecular C6H5NO2 123,11
Octoxinol 10
Descrio Lquido incolor a amarelo plido, de odor CAS [9002-93-1]
semelhante ao de leo de amndoas.
Frmula e massa molecular (C2H4O)10C14H22O 647,00
Caractersticas fsicas Temperatura de ebulio:
aproximadamente 211C. Densidade: aproximadamente 1,20. Descrio Lquido viscoso, lmpido, amarelo claro.
Miscibilidade Praticamente insolvel em gua e miscvel Miscibilidade Miscvel em gua, em acetona e em etanol.
em etanol. Solvel em tolueno.
Conservao Em recipientes bem fechados. Conservao Em recipiente bem fechado.
Segurana Veneno!
leo de oliva
Nitrometano CAS [8001-25-0]
CAS [75-52-5] Especificao leo fixo obtido do fruto maduro de Olea
europaea L. Oleaceae.
Frmula e massa molecular CH3NO2 61,04
Descrio leo amarelo plido ou amarelo esverdeado.
Descrio Lquido oleoso incolor, de odor caracterstico.
Caracterstica fsica Densidade: 0,910 a 0,915.
Caracterstica fsica Temperatura de ebulio: em torno
de 102 C. Miscibilidade Praticamente insolvel em etanol, miscvel
em clorofrmio, ter etlico e ter de petrleo.
Miscibilidade Pouco miscvel em gua e miscvel em
etanol.
Oxalato de amnio
Nitroprusseto de sdio CAS [6009-70-7]
CAS [13755-38-9] Frmula e massa molecular C2H8N2O4.H2O 142,11
Sinonmia Pentacianonitrosilferrato(III) dissdico Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p).
diidratado, nitroprussiato de sdio, nitroferrocianeto de Descrio Cristais incolores transparentes ou p
sdio. cristalino branco. Inodoro.
Frmula e massa molecular Na2[Fe(CN)5(NO)].2H2O Caracterstica fsica Temperatura de fuso: 212 C.
297,95 Solubilidade Solvel em gua.
Descrio P ou cristais transparentes, vermelhos Conservao Em recipientes bem fechados.
escuros. Segurana Custico. Corrosivo. Veneno!
Solubilidade Facilmente solvel em gua e pouco solvel
em etanol.
Oxalato de amnio SR
Usar oxalato de amnio SI.
Oxalato de potssio
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
magnsio. Fechar imediatamente o recipiente com tampa Solubilidade Solvel em gua, praticamente insolvel em
de polietileno, sob a qual se coloca o papel de prata- etanol. A soluo em gua pode ficar um pouco opalescente
mangans. Agitar a soluo, tomando-se o cuidado para com uma pequena quantidade de cido.
que as partculas de magnsio no entrem em contato com Conservao Em recipiente fechado.
o papel. Manter a proveta a 50 C a 60 C durante 1 hora.
Armazenagem Protegido da luz e em temperatura de 2
Aparece cor cinza no papel reagente.
C a 8C.
Rotulagem Deve expressar a atividade da pepsina.
Parafina lquida
Especificao Mistura purificada de hidrocarbonetos
Peptona
14
saturados lquidos obtidos do petrleo.
Especificao Mistura de produtos de natureza
Descrio Lquido oleoso incolor e transparente.
polipeptdica oriundos de protenas animais (carne,
Caractersticas fsicas Densidade relativa: 0,827 a 0,890. casena). A origem determina as caractersticas fsicas,
Viscosidade: 110 mPa a 230 mPa. composio e processo de produo.
Miscibilidade Praticamente insolvel em gua e pouco Descrio P amarelo claro a marrom. Odor e sabor
solvel em etanol. Miscvel em hidrocarbonetos. caractersticos. Teor mnimo em nitrognio: 12,0% (p/p)
Conservao Em recipientes bem fechados. de casena e 14,2% (p/p) de carne.
Armazenagem Proteger da luz. Conservao Em recipientes bem fechados.
Armazenagem Proteger da umidade.
1-Pentanossulfonato de sdio, monoidratado Rotulagem Deve expressar origem e teor em nitrognio.
CAS [207605-40-1]
Frmula e massa molecular C5H11NaO3S.H2O 192,21 Perclorato de sdio
Descrio Slido cristalino branco ou quase branco. CAS [7791-07-3]
Solubilidade Solvel em gua. Nome qumico Sal sdico monoidratado do cido
Conservao Em recipientes bem fechados. perclrico
Frmula e massa molecular NaClO4.H2O 140,46
Pentxido de fsforo Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p).
CAS [1314-56-3] Descrio Cristais incolores, deliquescentes.
Sinonmia Anidrido fosfrico. Solubilidade Muito solvel em gua, solvel em etanol.
Frmula e massa molecular P2O5 141,94 Conservao Em recipientes bem fechados.
Descrio P branco, amorfo, muito deliquescente.
Caractersticas fsicas Temperatura de fuso: 340 C Periodato de potssio
Temperatura de sublimao: 360 C. CAS [7790-21-8]
Conservao Em recipientes hermticos. Sinonmia Metaperiodato de potssio
Armazenagem Proteger da umidade. Frmula e massa molecular KIO4 230,00
Segurana Irritante. Corrosivo pele, mucosa e olhos. Descrio P branco cristalino ou cristais incolores.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: 582 C.
Pentxido de vandio Segurana Altamente irritante pele, olhos e mucosas.
CAS [1314-62-1]
Frmula e massa molecular V2O5 181,88 Periodato frrico de potssio SR
Especificao Contm, no mnimo, 99,5% (p/p). Preparao Dissolver 1 g de periodato de potssio em
Descrio P fino amarelo a amarelo alaranjado. 5 mL de soluo de hidrxido de potssio 12% (p/v),
recentemente preparada. Adicionar 20 mL de gua e 1,5
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: 690 C.
mL de cloreto frrico SR. Diluir a 50 mL com soluo de
Solubilidade Pouco solvel em gua e solvel em cidos hidrxido de potssio 12% (p/v) recentemente preparada.
minerais fortes e solues hidrxi-alcalinas com formao
de sais.
Conservao Em recipientes bem fechados. Periodato de sdio
CAS [7790-28-5]
Sinonmia Metaperiodato de sdio.
Pepsina purificada
Frmula e massa molecular NaIO4 213,89
Especificao Derivada da mucosa estomacal do porco,
com atividade de 800 a 2500 unidades/mg de protena. Especificao Contm, no mnimo, 99,0% de periodato
de sdio.
Descrio P cristalino ou amorfo, branco ou pouco
amarelo. Higroscpio. Descrio Cristais brancos tetragonais.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso:
aproximadamente 300 C, com decomposio.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Piperazina Poliacrilamida
CAS [110-85-0] CAS [9003-05-8]
Frmula e massa molecular C3H10N2 86,14 Sinonmia Polmero de acrilamida.
Descrio Grumos ou flocos brancos ou quase brancos. Frmula e massa molecular (C3H5NO)n; monmero
Odor amoniacal. 71,08.
Solubilidade Solvel em gua e em etanol, insolvel em Especificao Polmero de vrias formas, solveis e
ter etlico. insolveis em gua, obtidos pelo aquecimento com vrios
catalisadores de polimerizao.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Segurana Altamente txico e irritante. Causa paralisia
do sistema nervoso central. Pode ser absorvido pela pele
ntegra.
Polissorbato 20
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
duas solues e diluir para 100 mL com gua. Solubilidade Muito solvel em gua e em etanol.
Conservao Recipientes bem fechados.
Armazenagem Proteger da exposio luz e do calor.
Reineckato de amnio
Segurana Irritante
CAS [13573-16-5]
Sinonmia Tetratiocianatodiaminocromato de amnio.
Frmula e massa molecular C4H10CrN7S4.H2O 354,45 Rutina
Descrio Cristais vermelho-escuros ou p vermelho CAS [153-18-4]
cristalino. Frmula e massa molecular C27H30O16 610,52
Solubilidade Ligeiramente solvel em gua gelada, Descrio Cristais em forma de agulhas amarelo-plidas.
solvel em gua quente e etanol. Decompe-se lentamente Escurece na presena da luz.
e soluo. Caracterstica fsica Temperatura de fuso: cerca de 210
C, com decomposio.
Reineckato de amnio SR Solubilidade Muito pouco solvel em gua e solvel em
piridina.
Preparao Agitar, constantemente, cerca de 0,5 g de
reineckato de amnio em 20 mL de gua durante uma hora Conservao Em recipientes fechados.
e filtrar. Armazenagem Proteger da exposio luz.
Estabilidade Usar em, no mximo, dois dias.
Sacarose
Resazurina CAS [57-50-1]
CAS [550-82-3] Frmula e massa molecular C12H22O11 342,30
Sinonmia Diazorresorcinol Especificao obtida da Saccharum officinarum
Frmula e massa molecular C12H7NO4 229,18. Linn (Famlia Gramineae), Beta vulgares Linn (Famlia
Chenopodiaceae) e outras fontes.
Descrio Cristais, ou p cristalino vermelho escuro.
Descrio Cristais brancos ou incolores; p cristalino
Conservao Em recipientes bem fechados.
ou massa cristalina ou blocos brancos. Inodoro. Sabor
adocicado. Estvel ao ar. Finamente dividido higroscpico
Resorcinol e absorve at 1 % de umidade. No contm aditivos.
CAS [108-46-3] Caracterstica fsica Decomposio: entre 160 C e 186 C.
Sinonmia Resorcina. Solubilidade Muito solvel em gua, pouco solvel em
Frmula e massa molecular C6H6O2 110,11 etanol e praticamente insolvel em etanol anidro.
Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p). Conservao Em recipientes bem fechados.
Descrio Cristais, ou p cristalino incolor ou amarelo
plido. Exposto luz e ao ar, adquire colorao rsea. Sacarose 0,1% (p/v) em piridina
Caracterstica fsica Faixa de fuso: 109 C a 111 C. Especificao Contm 0,1 g de sacarose em piridina a
Solubilidade Solvel em gua e etanol. 100 mL.
Conservao Em recipientes bem fechados. Conservao Em recipientes bem fechados.
Armazenagem Proteger da luz e do ar. Segurana Txico.
Ristocetina Safranina O
CAS [1404-55-3] CAS [477-73-6]
Sinonmia Ristocetina A. Descrio P vermelho escuro. Consiste de mistura
Frmula e massa molecular C94H108N8O44 2053,89 de cloreto de 3,7-diamino-2,8-dimetil-5-fenilfenaznio
(C20H19ClN4 350,85) e cloreto de 3,7-diamino-2,8-
486 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
Categoria Suporte para cromatografia.
Frmula e massa molecular C7H5NaO3 160,10
Descrio Cristais incolores pequenos ou p cristalino
branco ou flocos brilhantes. Slica-gel GF254
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: 440 C. Sinonmia Gel de slica GF254.
Solubilidade Facilmente solvel em gua e ligeiramente Especificao Contm aproximadamente 13,0% (p/p) de
solvel em etanol. sulfato de clcio hemi-hidratado e aproximadamente 1,5%
(p/p) de indicador de fluorescncia de intensidade mxima
Conservao Em recipientes fechados.
a 254 nm.
Armazenagem Proteger da luz.
Descrio P fino branco de granulometria varivel entre
10 e 40 m, homogneo.
Santonina Caracterstica fsica Ver slica-gel G.
CAS [481-06-1] Conservao Em recipientes bem fechados.
Frmula e massa molecular C15H18O3 246,30 Categoria Suporte para cromatografia.
Descrio Cristais incolores. Se expostos luz, podem
adquirir colorao amarela.
Slica-gel H
Caracterstica fsica Faixa de fuso: 174 C a 176 C.
Sinonmia Gel de slica H.
Solubilidade Muito pouco solvel em gua, facilmente
Descrio P fino branco, de granulometria varivel
solvel em etanol a quente e ligeiramente solvel em
entre 10 e 40 m, homogneo.
etanol.
Caracterstica fsica Ver slica-gel G.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Saponinas
Categoria Suporte para cromatografia.
CAS [8047-15-2]
Descrio P amarelo claro.
Slica-gel HF254
Solubilidade Solvel em gua, e sob agitao, forma
espuma. Sinonmia Gel de slica HF254.
Conservao Em recipientes fechados. Especificao Contm aproximadamente 1,5% (p/v) de
indicador de fluorescncia de intensidade mxima a 254 nm.
Descrio P fino branco de granulometria varivel entre
Slica, dessecada 10 e 40 mm, homogneo.
CAS [7631-86-9] Caracterstica fsica Ver slica-gel G.
Frmula e massa molecular SiO2 60,08 Conservao Em recipientes bem fechados.
Especificao cido silcico coloidal, polimerizado, Categoria Suporte para cromatografia.
previamente desidratado; contm cloreto de cobalto como
indicador.
Descrio Grnulos vtreos, amorfos, de granulometria Slica kieselguhr
varivel, com grnulos impregnados com indicador de Descrio P branco ou amarelo claro.
capacidade de adsoro pela cor azul a rsea. Solubilidade Praticamente insolvel em gua, solues
Conservao Em recipientes hermticos. cidas diludas e solventes orgnicos.
Armazenagem Proteger da umidade.
Categoria Dessecante. Slica kieselguhr G
Especificao Slica kieselghur tratada com cido
Slica-gel G clordrico e calcinada, em que adiciona-se cerca de 15%
(p/p) de sulfato de clcio hemi-hidratado.
CAS [112926-00-8]
Sinonmia Gel de slica G.
Descrio P fino branco acinzentado. Com tamanho
mdio de partculas de 10 m a 40 m.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Substituto de plaquetas
Soluo padro de selnio (100 ppm Se) Preparao A uma quantidade entre 0,5 g e 1 g de
Preparao Dissolver 0,1 g de selnio em cido ntrico, fosfolpidos, adicionar 20 mL de acetona, e agite a mistura,
evaporar at secura, dissolver o resduo em 2 mL de gua e frequentemente, durante 2 horas. Centrifugue durante 2
evaporar at secura. Repetir o procedimento por trs vezes. minutos e elimine o lquido sobrenadante. Seque o resduo
Dissolver o resduo com cido clordrico 2 M e completar o com auxlio de uma trompa de gua, adicione 20 mL
volume para 1000 mL com o mesmo solvente. de clorofrmio e agite durante 2 horas. Filtre a presso
reduzida e suspenda o resduo obtido em 5 mL a 10 mL de
soluo de cloreto de sdio a 0,9% (p/v).
Soluo padro de sdio (200 ppm Na)
Determinao da atividade do Fator IX Prepare uma
Preparao Dissolver 0,509 g de cloreto de sdio em 100 diluio em soluo de cloreto de sdio a 0,9% (p/v),
mL de gua. No momento do uso, diluir 1:10. tal que a diferena entre os tempos de coagulao das
diluies sucessivas da preparao de referncia seja cerca
Soluo padro de sulfato (10 ppm SO4) de 10 segundos.
Preparao Dissolver 0,182 g de sulfato de potssio em Conservao As suspenses diludas podem ser usadas
100 mL de gua. Diluir 1 mL desta soluo em 100 mL de durante as 6 semanas que se seguem preparao, se
gua no momento do uso. conservadas a -30 C.
Substrato de plasma1
Conservao Em tubos plsticos, em pequenas
quantidades, a uma temperatura igual ou inferior a -30 C. 14
Preparao Utilizar equipamento hidrfobo fabricado
em material plstico apropriado ou vidro siliconado para Substrato de plasma deficiente em Fator V
coleta e manipulao do sangue. De um nmero adequado Especificao Utilizar, de preferncia, um plasma
(cinco pelo menos) de carneiros, vivos ou no momento do congenitamente deficiente ou preparado do seguinte
abate, recolha um volume de sangue apropriado de cada modo: separar o plasma do sangue humano que tenha sido
um ( considerado como apropriado um volume de 285 mL colhido em 1:10 do seu volume de uma soluo de oxalato
de sangue colhido sobre 15 mL de soluo anticoagulante). de sdio a 1,34% (p/v). Incubar a 37 C durante 24-36
A coleta feita por meio de uma agulha adaptada a uma horas. O plasma apresenta um tempo de coagulao de 70-
cnula com um comprimento suficiente para atingir o 100 segundos. Se o tempo de coagulao for inferior a 70
fundo do recipiente coletor. Rejeite os primeiros mililitros segundos, incube o plasma de novo durante 12-24 horas.
e colha, unicamente, o sangue que escoar livremente. Conservao: em pequenas quantidades, a temperatura
Misture o sangue com uma quantidade suficiente de igual ou inferior a -20 C.
soluo anticoagulante contendo 8,7 g de citrato de sdio
e 4 mg de aprotinina em 100 mL de gua. para obter uma
proporo final de 19 volumes de sangue para 1 volume Sudan III
de soluo anticoagulante. Durante e imediatamente aps a CAS [85-86-9]
coleta imprima ao recipiente um movimento rotatrio a fim Frmula e massa molecular C22H16N4O 352,40
de que a mistura se faa sem formao de espuma. Logo
Descrio P vermelho-marrom.
que termine a coleta feche o balo e deixe resfriar a 10-
15 C. Depois do resfriamento rena o contedo de todos Conservao Em recipientes bem fechados.
os frascos, exceo daqueles que apresentarem sinais de
evidente hemlise ou coagulao, e mantenha o sangue Sudan III SR
colhido a 10-15 C. O mais cedo possvel e dentro das 4
horas seguintes coleta, centrifugue o sangue colhido a Preparao Dissolver 0,5 g de Sudan III em 100 mL de
1000-2000 g a 10-15 C, durante 30 minutos. Separe o etanol a 80% (v/v), aquecido a 60 C, esfriar e filtrar.
lquido sobrenadante e centrifugue-o a 5000 g, durante
30 minutos. Se necessrio, faa uma centrifugao mais Sudan IV
rpida, por exemplo, a 20 000 g, durante 30 minutos, para
CAS [85-83-6]
clarificar o plasma (no utilize processos de filtrao).
Separe os lquidos sobrenadantes e, imediatamente, Frmula e massa molecular C24H20N4O 380,44
misture, cuidadosamente, e distribua o substrato de plasma Descrio P marrom ou marrom avermelhado.
por pequenos recipientes, que so fechados no fim da Caractersticas fsicas Faixa de fuso: 181 C a 188 C.
operao, em quantidades suficientes que permitam uma Decompe completamente a 260 C.
titulao completa da heparina (por exemplo, 10 mL a
Solubilidade Praticamente insolvel em gua. Pouco
30 mL). Imediatamente congele, rapidamente, a uma
solvel em acetona, etanol e benzeno. Solvel em parafina
temperatura inferior a -70 C (por exemplo, mergulhando
e fenol
os recipientes em nitrognio lquido) e conserve a uma
temperatura inferior a -30 C. O plasma preparado nessas Conservao Em recipientes bem fechados.
condies pode ser utilizado como substrato de plasma
na titulao da heparina se nas condies da titulao se Sudan IV SR
obtiver um tempo de coagulao apropriado ao mtodo de
Preparao Dissolver 2 g de Sudan IV em 100 mL de
deteco utilizado e se obtiverem curvas dose-resposta/
etanol a 92% (v/v), aquecido a 60 C, esfriar, filtrar e
log reprodutveis e com grande inclinao. No momento
adicionar 5 mL de glicerina.
do uso, descongele uma certa quantidade de substrato de
plasma num banho-maria a 37 C, misturando, lentamente,
at liquefao completa. Uma vez liquefeito, o plasma
mantido a 10-20 C e utilizado imediatamente. O
490 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
em gua quente (50 C) e facilmente solvel em gua
Frmula e massa molecular 3CdSO4.8H2O 769,49 fervendo. Praticamente insolvel em etanol.
Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p).
Descrio P cristalino, incolor e inodoro.
Sulfato de ltio
Conservao Em recipientes bem fechados.
CAS [10102-25-7]
Frmula e massa molecular LiSO4.H2O 127,95
Sulfato de clcio, hemi-hidratado Descrio Cristais incolores.
CAS [10034-76-1] Solubilidade Facilmente solvel em gua e praticamente
Frmula e massa molecular CaSO4.1/2H2O 145,14 insolvel em etanol.
Especificao Contm, no mnimo, 98,0 % (p/p),
calculado sobre base seca.
Sulfato de magnsio, hepta-hidratado
Descrio P branco, fino; contm aproximadamente
CAS [10034-99-8]
7,0% de gua.
Frmula e massa molecular MgSO4.7H2O 246,48
Solubilidade Muito pouco solvel em gua, praticamente
insolvel em etanol. Quando misturado com metade de sua Descrio P branco cristalino ou cristais incolores
massa em gua, rapidamente solidificado em uma massa brilhantes, de sabor salino, solvel em gua, muito solvel
porosa e dura. em gua fervente, praticamente insolvel em etanol.
Conservao Em recipientes bem fechados. Conservao Em recipientes bem fechados.
14
Frmula e massa molecular FeSO4.7H2O 278,01
Especificao Contm, no mnimo, 98,0% (p/p) de
Sulfato frrico amoniacal cido SR
FeSO4.7H2O.
Preparao Dissolver 20 g de sulfato frrico amoniacal
Descrio Cristais azulesverdeados; ou grnulos, ou
em 70 mL de gua, adicionar 10 mL de cido sulfrico 0,05
p cristalino verde. Inodoro. Eflorescente. Oxidase pela
M e completar o volume com gua para 100 mL.
umidade e luminosidade a sulfato bsico de ferro(III) de
cor marrom.
Sulfato frrico amoniacal SR Caracterstica fsica A partir da temperatura de 65 C,
Especificao Contm 10 g em gua a 100 mL. transformase em monoidratado.
Conservao Em recipientes bem fechados. Solubilidade Facilmente solvel em gua, muito solvel
em gua fervendo e praticamente insolvel em etanol.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Sulfato frrico amoniacal SR1
Armazenagem Proteger do ar e da umidade.
Preparao Dissolver 30 g de sulfato frrico amoniacal
em 40 mL de cido ntrico e completar o volume de 100 Informao adicional No usar quando tiver cor marrom.
mL com gua.
Conservao Em recipientes bem fechados. Sulfato ferroso SR
Armazenagem Proteger da luz. Especificao Contm 8 g de sulfato ferroso hepta-
hidratado em gua fria, recentemente fervida, a 100 mL.
Preparar no momento de uso.
Sulfato frrico amoniacal SR2
Conservao Em recipientes bem fechados.
Preparao Dissolver 0,2 g de sulfato frrico amoniacal
em 50 mL de gua, adicionar 5 mL de cido ntrico e diluir Armazenagem Proteger da luz, do ar e do calor.
a 100 mL com gua.
Sulfeto de amnio SR
Sulfato frricoferricianeto de potssio SR Preparao Saturar 60 mL de amnia SR com sulfeto de
Preparao Misturar volumes iguais da soluo de hidrognio e juntar 40 mL de amnia SR. Usar soluo de
sulfato frrico a 0,5% (p/v) em cido sulfrico 0,5 M e da preparo recente.
soluo de ferricianeto de potssio a 0,2% (p/v). Conservao Em recipiente pequeno, bem cheio e
Estabilidade Preparar no momento de uso. fechado.
Armazenagem Proteger da luz e do calor.
Estabilidade Diante de precipitao abundante de
Sulfato ferroso acidificado SR
enxofre, desprezar a soluo.
Preparao Dissolver 0,45 g de sulfato ferroso hepta-
hidratado em 50 mL de cido clordrico 0,1 M e completar
o volume para 100 mL com gua livre de dixido de Sulfeto de hidrognio
carbono. CAS [7783-06-4]
Sinonmia cido sulfdrico
Sulfato ferroso amoniacal Frmula e massa molecular H2S 34,08
CAS [7783-85-9] Especificao Produzido pelo tratamento de sulfeto
Frmula e massa molecular Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O ferroso (ou outros sulfetos) com cidos sulfrico ou
392,14 clordrico diludos.
Descrio P cristalino ou cristais verde-azulados plidos. Descrio Gs incolor de odor caracterstico e sabor
Oxida-se lentamente ao ar, tornando-se eflorescente. adocicado; mais denso do que o ar.
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: em torno de Caractersticas fsicas Densidade relativa ao ar: 1,19.
100 C, com decomposio. Temperatura de ignio: 260 C.
Segurana Txico. Veneno. Inflamvel.
494 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14 Sulfeto de sdio
CAS [1313-84-4]
aproximadamente 150 C, com decomposio.
Solubilidade Facilmente solvel em gua e pouco solvel
em etanol.
Frmula e massa molecular Na2S.9H2O 240,18
Conservao Em recipientes hermticos.
Descrio Cristais incolores deliquescentes, que se
amarelam pela exposio ao ar, ou pela ao da luz. Odor Armazenagem Proteger do ar e da luz.
semelhante ao do sulfeto de hidrognio. Estabilidade Escurece lentamente pela exposio ao ar
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: e luz.
aproximadamente 50 C. Categoria Adrenrgico.
Conservao Recipiente bem fechado, no frio.
Armazenagem Proteger do ar, da luz e do calor. Tartarato cprico alcalino SR
Sinonmia Soluo de Fehling
Sulfeto de sdio SR Soluo A Dissolver 34,6 g de sulfato cprico penta-
Especificao Contm 1 g em gua a 10 mL. hidratado em 500 mL de gua.
Estabilidade Preparar para consumo imediato. Soluo B Dissolver 173 g de tartarato de sdio e potssio
e 50 g de hidrxido de sdio em 400 mL de gua e aquecer
at ebulio. Resfriar e completar o volume para 500 mL
Sulfeto de sdio SR1 com gua isenta de dixido de carbono.
Preparao Dissolver, com aquecimento, 12 g de sulfeto Preparao Misturar volumes iguais das Solues A e B
de sdio em 45 mL de mistura de gua e glicerol a 85% imediatamente antes do uso.
(v/v) (10:29). Esfriar e diluir para balo volumtrico de
100 mL com o mesmo solvente. A soluo deve ser incolor.
Preparar para consumo imediato. Tartarato de antimnio e potssio
CAS [28300-74-5]
Sulfito de sdio Sinonmia Sal de antimnio e potssio.
CAS [7757-83-7] Frmula e massa molecular C8H4K2O12Sb2.3H2O
667,85.
Frmula e massa molecular Na2SO3 126,04
Descrio Cristais incolores ou p branco.
Descrio P branco, ou quase branco, inodoro.
Caracterstica fsica Faixa de fuso: 332 C a 335 C.
Solubilidade Facilmente solvel em gua e muito pouco
solvel em etanol. Conservao Recipientes bem fechados.
Conservao Em recipientes bem fechados. Segurana Txico.
14
inodoro, de sabor salgado. Eflorescente ao ar quente. Caractersticas fsicas Densidade (20 C): cerca de 0,76.
ndice de refrao (20 C): cerca de 1,429. Temperatura
Solubilidade Muito solvel em gua e praticamente
de fuso: cerca de -5 C. Temperatura de ebulio: cerca
insolvel em etanol.
de 252 C.
Conservao Em recipientes hermticos.
Conservao Em recipientes fechados.
Armazenagem Proteger do calor.
Tetrafenilborato de sdio
Tartarato de sdio e potssio SR
CAS [143-66-8]
Especificao Contm 20% (p/v).
Frmula e massa molecular NaB(C6H5)4 342,22
Conservao Em recipientes bem fechados.
Descrio P ou cristais brancos ou quase brancos.
Solubilidade Facilmente solvel em gua e em acetona.
Tartarato ferroso SR Conservao Em recipientes bem fechados.
Preparao Dissolver 1 g de sulfato ferroso hepta-
hidratado, 2 g de tartarato de sdio e potssio e 0,1 g de
bissulfito de sdio em gua. Completar o volume para 100 Tetraidroborato de sdio
mL com gua. Preparar no momento do uso. CAS [16940-66-2]
Frmula e massa molecular NaBH4 37,83
Tetraborato sdico Descrio Cristais incolores e higroscpicos.
CAS [1303-96-4] Solubilidade Facilmente solvel em gua, solvel em
etanol absoluto.
Sinonmia Borato sdico, borato de sdio, brax.
Armazenagem Em recipientes bem fechados.
Frmula e massa molecular Na2B4O7.10H2O 381,37
Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p).
Descrio Cristais incolores ou p cristalino branco, 3,3-Tetraidrocloreto de diaminobenzidina
inodoro, de sabor custico. Eflorescente. CAS [7411-49-6]
Solubilidade Solvel em gua, muito solvel em gua Frmula e massa molecular C12H18Cl4N4 360,12
fervendo e facilmente solvel em glicerol. Descrio Cristais brancos ou amarelados,
Conservao Em recipientes bem fechados; efloresce ao ocasionalmente prpura.
ar seco. Caracterstica fsica Temperatura de fuso: cerca de 280
Armazenagem Proteger do ar. C, com decomposio.
Solubilidade Solvel em gua.
Tetracloreto de carbono Conservao Em recipientes bem fechados, sob
refrigerao.
CAS [56-23-5]
Segurana Irritante.
Frmula e massa molecular CCl4 153,82
Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p).
Descrio Lquido incolor, lmpido, denso e de odor 3,3-Tetraidrocloreto de diaminobenzidina SR
caracterstico. Especificao Contm 1 g de 3,3-tetraidrocloreto de
Caractersticas fsicas Faixa de ebulio: 76 C a 77 diaminobenzidina em 200 mL de gua.
C. Densidade: 1,588 a 1,590. ndice de refrao (20 C): Conservao Em recipientes bem fechados, sob
1,4607. refrigerao.
Miscibilidade Praticamente insolvel em gua e miscvel Segurana Irritante.
em etanol.
Conservao Em recipientes hermticos.
Armazenagem Proteger da luz e do calor.
Segurana Veneno (nas formas lquida e gasosa)!
496 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
1,1,3,3-Tetrametilbutilamina Timidina
CAS [107-45-9] CAS [50-89-5]
Frmula e massa molecular C8H19N 129,24 Sinonmia 1-(2-Desoxi--D-ribofuranosil)-5-metiluracila.
Descrio Lquido incolor e lmpido. Frmula e massa molecular C10H14N2O5 242,23
Caractersticas fsicas Densidade (20 C): cerca de 0,805. Descrio Cristais em forma de agulhas, ou p branco.
ndice de refrao (20 C): cerca de 1,424. Temperatura de Solubilidade Solvel em gua, em etanol a quente e em
ebulio: cerca de 140 C. cido actico glacial.
Tetrametiletilenodiamina Timina
CAS [110-18-9] CAS [65-71-4]
Sinonmia N,N,N,N-Tetrametiletilenodiamina, Sinonmia 5-Metil-2,4-(1H,3H)-pirimidinodiona.
TEMED.
Frmula e massa molecular C5H6N2O2 126,11
Frmula e massa molecular C6H16N2. 116,21
Descrio Placas ou cristais em forma de agulhas
Especificao Qualidade apropriada para eletroforese. pequenas.
Descrio Lquido incolor. Solubilidade Pouco solvel em gua fria, solvel em
Caractersticas fsicas Densidade (20 C): gua quente. Dissolve em solues diludas de hidrxi-
aproximadamente 1,418. Temperatura de ebulio: alcalinos.
aproximadamente 121 C.
Miscibilidade Miscvel com a gua, com o etanol e com
Timol
o ter etlico.
CAS [89-83-8]
Sinonmia 5-Metil-2-(1-metiletil)fenol
Tetraoxalato de potssio
Frmula e massa molecular C10H14O 150,22
CAS [6100-20-5]
Descrio Cristais incolores, de odor aromtico.
Frmula e massa molecular C4H3KO8.2H2O 254,20
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: em torno de
Descrio P cristalino branco ou cristais incolores ou 50 C.
brancos.
Solubilidade Muito pouco solvel em gua, muito solvel
Solubilidade Ligeiramente solvel em gua e solvel em em etanol, facilmente solvel em leos essenciais e em
gua fervendo, pouco solvel em etanol. leos graxos, ligeiramente solvel em glicerol. Dissolve
Conservao Em recipientes bem fechados. em solues hidrxi-alcalinas.
14
fraco caracterstico. Oxida em contato com o ar.
Estabilidade Preparar no momento de uso.
Solubilidade Facilmente solvel em gua e em metanol,
pouco solvel em etanol.
Tiocianato de amnio Conservao Em recipientes hermticos.
CAS [1762-95-4] Armazenagem Proteger da luz e do ar.
Sinonmia Sulfocianato de amnio.
Frmula e massa molecular NH4SCN 76,12 Tionina (CI 52000)
Descrio Cristais incolores e deliquescentes. CAS [135-59-1]
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: Frmula e massa molecular C12H10ClN3S 263,75
aproximadamente 149 C.
Descrio Agulhas verde-escuras, com brilho.
Solubilidade Muito solvel em gua e solvel em etanol.
Solubilidade Facilmente solvel em gua quente.
Conservao Em recipientes hermticos.
Armazenagem Proteger da umidade.
Tionina SR
Preparao Adicionar 1 g de tionina a 2,5 g de fenol e
Tiocianato de amnio SR completar o volume de 100 mL com gua.
Especificao Contm 8 g em gua a 100 mL. Conservao Em recipientes fechados.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Tiossulfato de sdio
Tiocianato de mercrio CAS [10102-17-7]
CAS [592-85-5] Sinonmia Hipossulfito de sdio R.
Frmula e massa molecular Hg(SCN)2 316,76 Frmula e massa molecular Na2S2O3.5H2O 248,17
Descrio P cristalino branco ou quase branco. Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p),
Solubilidade Muito solvel em gua, pouco solvel em calculado sobre a substncia dessecada.
etanol, solvel em solues de cloreto de sdio. Descrio Cristais incolores, ou p cristalino branco,
Conservao Em recipientes bem fechados. facilmente eflorescentes, de sabor fracamente amargo.
Armazenagem Proteger da luz. Caractersticas fsicas Temperatura de fuso:
aproximadamente 48 C. Dissolve-se em sua prpria gua
de cristalizao a temperatura aproximadamente 49 C.
Tiocianato de mercrio SR
Solubilidade Muito solvel em gua, praticamente
Preparao Dissolver 0,3 g de tiocianato de mercrio em insolvel em etanol.
etanol. Completar o volume para 100 mL com o mesmo
Conservao Em recipientes bem fechados.
solvente.
Conservao Em recipientes bem fechados.
Estabilidade Limitada em uma semana. Tiossulfato de sdio 0,1 M
Preparao Dissolver 2,5 g de tiossulfato de sdio e
0,02 g de carbonato de sdio em gua isenta de dixido de
Tiocianato de potssio carbono a 100 mL.
CAS [333-20-0] Conservao Em recipientes bem fechados.
Sinonmia Sulfocianato de potssio.
Frmula e massa molecular KSCN 97,18
Especificao Contm, no mnimo, 99,0% (p/p).
Caracterstica fsica Temperatura de fuso:
aproximadamente 173 C.
Solubilidade Muito solvel em gua e em etanol.
498 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Tioureia Torina
CAS [62-56-6] CAS [3688-92-4]
Frmula e massa molecular CH4N2S 76,12 Sinonmia Naftarson.
Descrio Cristais, ou p cristalino branco, ou quase Frmula e massa molecular C16H11AsN2Na2O10S2
branco. 576,30
Caracterstica fsica Faixa de fuso: de 176 C a 178 C. Descrio P vermelho.
Solubilidade Solvel em gua e em etanol. Solubilidade Solvel em gua.
Conservao Em recipientes fechados.
14
Torina SR
Tirosina Preparao Dissolver 0,2 g de torina em gua para 100 mL.
CAS [60-18-4] Conservao Em recipiente fechado.
Frmula e massa molecular C9H11NO3 181,19 Armazenagem Proteger da luz.
Descrio Cristais incolores, ou brancos, ou quase Estabilidade Utilizar em no mximo uma semana aps
brancos, ou p cristalino branco, ou quase branco. a preparao.
Solubilidade Pouco solvel em gua, praticamente
insolvel em acetona e em etanol, solvel em cido Tricina
clordrico diludo e solues hidrxi-alcalinas.
CAS [5704-04-1]
Frmula e massa molecular C6H13NO5 179,17
p-Tolualdedo
Especificao Qualidade apropriada para eletroforese.
CAS [104-87-0]
Caracterstica fsica Temperatura de fuso: cerca de 183 C.
Frmula e massa molecular C8H8O 120,15
Descrio Lquido lmpido, incolor ou amarelado.
1,1,1-Tricloroetano
Caracterstica fsica ndice de refrao (20 C): entre
1,544 e 1,546. CAS [71-55-6]
Frmula e massa molecular C2H3Cl3 133,40
Descrio Lquido no inflamvel.
Tolueno
Caractersticas fsicas Densidade (20 C): cerca de 1,34.
CAS [108-88-3]
Temperatura de ebulio: cerca de 74 C.
Sinonmia Metilbenzeno, toluol.
Miscibilidade Praticamente insolvel em gua, solvel
Frmula e massa molecular C7H8 92,14 em acetona e em metanol.
Descrio Lquido incolor de odor caracterstico.
Caractersticas fsicas Temperatura de ebulio:110 C
Tricloroetileno
a 111 C.Densidade de aproximadamente 0,87. ndice de
refrao (20 C): 1,4967. CAS [79-01-6]
Miscibilidade Muito pouco solvel em gua, miscvel em Sinonmia Tricloroeteno.
etanol. Frmula e massa molecular C2HCl3 131,39
Segurana Txico! Inflamvel! Especificao Contm, no mnimo, 99,5 % (p/p).
Descrio Lquido incolor, odor caracterstico.
p-Toluidina Caractersticas fsicas Densidade (20C): cerca de 1,46.
ndice de refrao (20 C): cerca de 1,477. Temperatura de
CAS [106-49-0]
ebulio: aproximadamente 87 C.
Sinonmia 4-Metilanilina.
Miscibilidade Praticamente insolvel em gua, solvel
Frmula e massa molecular C7H9N 107,15 em acetona e em metanol.
Descrio Cristais ou flocos brancos ou levemente Conservao Em recipientes bem fechados.
amarelados.
Segurana Txico.
Caractersticas fsicas Temperatura de fuso: cerca de 44
C. Densidade (20 C): 1,046.
Solubilidade Facilmente solvel em etanol, metanol, Trietanolamina
acetona e em cidos diludos, e pouco solvel em gua. CAS [102-71-6]
Conservao Em recipientes bem fechados. Sinonmia 2,2,2-nitrilotrietanol
Frmula e massa molecular C6H15NO3 149,19
Descrio Lquido incolor, viscoso, muito higroscpico,
torna-se marrom pela exposio ao ar.
Caracterstica fsica Densidade: aproximadamente 1,13.
Miscibilidade Miscvel com gua, acetona, etanol e
metanol.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Trometamina
Vanilina SR
CAS [77-86-1]
Preparao Dissolver 1 g de vanilina em etanol e
Frmula e massa molecular C4H11NO3 121,14 completar o volume para 100 mL com o mesmo solvente.
Sinonmia Trometamol, tris(hidroximetil)aminometano. Adicionar, cuidadosamente, 2 mL de cido sulfrico e
14.3 SOLUES
Xantidrol
VOLUMTRICAS
CAS [90-46-0]
Frmula e massa molecular C13H10O2 198,22
As solues volumtricas (SV) esto acompanhadas de
14
Especificao Contm, no mnimo, 90% de C13H10O2.
mtodo de padronizao, embora possam existir outros que
Descrio P branco ou amarelo claro. conduzam ao mesmo grau de exatido.
Solubilidade Muito solvel em gua, solvel em etanol e
m cido actico glacial. Os valores obtidos na padronizao so vlidos para todos
Armazenagem Proteger da luz. os usos farmacopeicos.
Zinco, granulado
cido oxlico 0,05 M SV
CAS [7440-66-6]
Especificao Contm 6,45 g de cido oxlico em gua
Elemento e massa atmica Zn 65,38
a 1000 mL.
Descrio Metal lustroso branco-azulado. Estvel ao ar
Padronizao Transferir 15 mL da amostra para
seco. Converte-se em carbonato bsico quando exposto
erlenmeyer de 250 mL. Adicionar 100 mL de gua e 7
umidade.
mL de cido sulfrico. Aquecer a cerca de 70 C e titular
Caractersticas fsicas Tornase malevel entre 100 C com permanganato de potssio 0,02 M SV recentemente
e 150 C. Queima em presena do ar apresentando chama padronizado, adicionando lentamente, com agitao
verde-azulada. constante, at aparecimento de cor rosa plida que persista
Conservao Em recipientes bem fechados. por 15 segundos. A temperatura ao final da titulao no
Armazenagem Proteger da umidade. deve ser inferior a 60 C.
Segurana Txico! Conservao Recipientes de vidro bem fechados.
Armazenagem Proteger da luz.
502 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
Edetato dissdico 0,1 M SV Informao adicional Conferir o ttulo com frequncia.
Preparao Dissolver 37,5 g em 500 mL de gua,
adicionar 100 mL de hidrxido de sdio M e completar
Hidrxido de sdio etanlico 0,1 M SV
para 1000 mL com gua.
Preparao Preparar soluo de hidrxido de sdio a
Padronizao Dissolver 0,12 g de zinco em p (com
50% (p/v) em gua isenta de dixido de carbono. Resfriar
grau de pureza de 99,9%) em 10 mL de cido clordrico M.
temperatura ambiente e deixar sedimentar. Transferir 2
Juntar 0,1 mL de gua de bromo SR. Eliminar o excesso
mL do sobrenadante para balo volumtrico de 250 mL e
de bromo por ebulindo a soluo. Adicionar soluo de
completar o volume com etanol.
hidrxido de sdio a 8,5% (p/v) at reao fracamente cida
ou neutra, e proceder conforme descrito em Titulaes Padronizao Pesar, exatamente, cerca de 0,2 g de cido
complexomtricas (5.3.3.4) para Zinco. Cada mL de benzoico e dissolver em mistura de 10 mL de etanol e 2
edetato dissdico 0,1 M SV equivale a 6,536 mg de zinco. mL de gua. Adicionar duas gotas de fenolftalena SI e
titular com a soluo de hidrxido de sdio etanlico at
Conservao Recipientes bem fechados.
colorao rsea permanente. Cada mL de hidrxido de
sdio 0,1 M SV equivale a 122,120 mg de cido benzoico.
Hidrxido de potssio etanlico 0,5 M SV Conservao Em recipientes bem fechados, inertes (tipo
Nome alternativo Hidrxido de potssio alcolico 0,5 M SV. polietileno).
Preparao Dissolver 3 g de hidrxido de potssio em Armazenagem Proteger da exposio ao dixido de
5 mL de gua e adicionar etanol para 100 mL. Deixar a carbono.
soluo em repouso durante aproximadamente 24 horas. Segurana Custico.
Decantar o lquido lmpido, e transferir para recipientes de
material inerte e protegidos da luz.
Hidrxido de tetrabutilamnio 0,1 M SV
Padronizao Titular 20 mL da soluo com cido
clordrico 0,5 M SV usando 0,5 mL de fenolftalena SI Preparao Dissolver 40 g de iodeto de tetrabutilamnio
como indicador. Cada mL de cido clordrico 0,5 M SV em 900 mL de metanol anidro, em frasco de erlenmeyer
equivale a 28,060 mg de hidrxido de potssio. provido de rolha esmerilhada. Colocar em banho de gelo,
adicionar 20 g de xido de prata pulverizado, tampar o
frasco e agitar vigorosamente por 60 minutos. Retirar
Hidrxido de potssio M SV alguns mL e centrifugar. Verificar presena de iodeto no
Preparao Dissolver 60 g de hidrxido de potssio em lquido sobrenadante. Se o teste positivo, adicionar mais
gua a 1000 mL. Adicionar soluo saturada de hidrxido 2 g de xido de prata e deixar em repouso por 30 minutos,
de brio, recentemente preparada, at que no se forme agitando ocasionalmente. Filtrar atravs de funil de placa
mais precipitado. Agitar e deixar em repouso durante porosa, lavar o erlenmeyer e o funil com trs pores
aproximadamente 12 horas. Decantar o lquido lmpido, ou de 50 mL de tolueno e juntar o tolueno de lavagem ao
filtrar, e transferir para recipientes de material inerte (tipo filtrado. Completar o volume a 1000 mL com a mistura de
polietileno). trs volumes de tolueno anidro e um volume de metanol
anidro. Passar sobre a soluo, por 10 minutos, corrente
Padronizao Usar o mesmo procedimento adotado para
de nitrognio isento de dixido de carbono. Guardar em
o hidrxido de sdio M SV.
recipiente protegido do dixido de carbono e da umidade.
Conservao Em recipientes bem fechados, inertes (tipo Consumir em 60 dias. Determinar a molaridade no dia
polietileno). de uso, dissolvendo cerca de 400 mg de cido benzoico
Segurana Custico. exatamente pesados, em 80 mL de dimetilformamida.
Adicionar a esta soluo trs gotas de soluo de azul
de timol a 1% (p/v) em dimetilformamida e titular com
Hidrxido de sdio M SV
soluo de hidrxido de tetrabutilamnio at colorao
Preparao Preparar soluo de hidrxido de sdio a azul. Proteger a soluo do contato com o ar durante a
50% (p/v) com gua isenta de dixido de carbono. Esfriar titulao. Utilizar bureta provida de tubo de absoro de
temperatura ambiente e deixar sedimentar. Retirar 82 mL dixido de carbono. Efetuar ensaio em branco. Cada mL
do sobrenadante e diluir com gua a 1000 mL. de hidrxido de tetrabutilamnio equivale a 12,212 mg de
Padronizao Pesar exatamente cerca de 5 g de biftalato cido benzico.
de potssio dessecado e dissolver em 75 mL de gua isenta
504 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14 ndigo carmim SV requerido equivalente a 1 mg de NO3. Padronizao Padronizar sempre antes do uso. A 10 mL
de dimetilformamida adicionar 0,05 mL de azul de timol a
0,3% (p/v) em metanol e titular com metxido de ltio 0,1
Iodato de potssio 0,02 M SV
M SV at colorao azul. Imediatamente, adicionar 0,2 g
Especificao Contm 4,28 g de iodato de potssio em de cido benzico, agitar e titular com metxido de ltio
gua a 1000 mL. 0,1 M SV at colorao azul. Evitar a absoro de dixido
Padronizao Diluir 50 mL da soluo para 100 de carbono atmosfrico. O volume de titulante gasto na
mL com gua. A 25 mL desta soluo, adicionar 2 g de segunda titulao representa a quantidade de metxido de
iodeto de potssio e 10 mL de cido sulfrico M. Titular ltio requerido. Cada mL de metxido de ltio 0,1 M SV
com tiossulfato de sdio 0,1 M SV utilizando amido SI, equivale a 12,212 mg de C7H6O2.
adicionado prximo ao ponto final, como indicador. Cada
mL de tiossulfato de sdio 0,1 M SV equivale a 3,566 mg
de KIO3. Metxido de sdio 0,1 M SV
Especificao Contm 5,402 g em soluo tolueno-
metanol a 1000 mL.
Iodato de potssio 0,1 M SV
Preparao Esfriar em banho de gelo 150 mL de metanol,
Preparao Pesar exatamente, 21,4 g de iodato de potssio contido em balo volumtrico de 1000 mL. Adicionar,
previamente dessecado a 110 C, at peso constante, e em pequenas pores, cerca de 2,5 g de sdio metlico
dissolver em gua e completar o volume para 1000 mL recm fragmentado. Aps a dissoluo do metal, adicionar
com o mesmo solvente. No necessria a padronizao, tolueno at completar 1000 mL e misturar. Manter esta
pois este reagente padro primrio. soluo em recipiente ao abrigo do dixido de carbono.
Padronizao Pesar exatamente cerca de 400 mg de
Iodo 0,05 M SV cido benzoico, dissolver em 80 mL de dimetilformamida,
Preparao Dissolver 13 g de iodo em 100 mL de soluo adicionar trs gotas de soluo de azul de timol a 1% (p/v)
de iodeto de potssio a 20% (p/v). Adicionar trs gotas de em dimetilformamida e titular pela soluo de metxido de
cido clordrico e diluir para 1000 mL com gua. sdio at o aparecimento de colorao azul. Cada 12,212
mg de cido benzoico equivale a 1 mL de metxido de
Padronizao Dissolver, exatamente, cerca de 0,15 g de
sdio 0,1 M.
trixido de arsnio em 20 mL de hidrxido de sdio M.
Aquecer se necessrio. Adicionar 40 mL de gua e duas
gotas de alaranjado de metila e cido clordrico at cor Nitrato crico amoniacal 0,01 M SV
rsea. Adicionar 50 mL de carbonato de sdio a 4% (p/v), Preparao A 100 mL de nitrato crico amoniacal 0,1 M
3 mL de amido SI e titular com iodo 0,05 M SV at cor azul SV adicionar, cuidadosamente, com resfriamento, 30 mL
permanente. Cada mL de iodo 0,05 M SV equivale a 4,946 de cido sulfrico e diluir para 1000 mL com gua.
mg de trixido de arsnio.
Conservao Em recipiente de vidro bem fechado e ao
abrigo da luz. Nitrato crico amoniacal 0,1 M SV
Preparao Agitar soluo contendo 56 mL de cido
sulfrico e 54,82 g de nitrato crico amoniacal por 2 minutos
Iodo 0,1 M SV e, cuidadosamente, adicionar cinco pores sucessivas
Preparao Dissolver cerca de 13 g de iodo em 100 mL de 100 mL de gua, agitando aps cada adio. Diluir a
de iodeto de potssio a 3,6% (p/v). Juntar trs gotas de soluo lmpida para 1000 mL com gua. Padronizar 10
cido clordrico e completar com gua a 1000 mL. dias aps o preparo.
Padronizao Pesar exatamente cerca de 150 mg de Padronizao Adicionar a 25 mL da soluo 2 g de iodeto
trixido de arsnio. Dissolver em 20 mL de hidrxido de potssio e 150 mL de gua. Titular imediatamente com
de sdio M, aquecendo se necessrio. Adicionar 40 mL tiossulfato de sdio 0,1 M SV, utilizando amido SI como
de gua, duas gotas de alaranjado de metila S1 e cido indicador. Cada mL de tiossulfato de sdio 0,1 M SV
clordrico diludo at cor rsea. Juntar 50 mL de carbonato equivale a 54,822 mg de (NH4)2[Ce(NO3)6].
de sdio a 4% (p/v) e 3 mL de amido SI. Titular com a Armazenagem Proteger da luz.
soluo de iodo, a partir de bureta, at cor azul permanente.
Nitrato de brio 0,01 M SV
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14
Nitrato de chumbo 0,1 M SV a 1000 mL.
Preparao Transferir, exatamente, cerca de 8,28 g de Padronizao Dissolver 7,5 g de nitrito de sdio em gua
nitrato de chumbo para balo volumtrico de 250 mL, diluir e completar o volume a 1000 mL. Pesar exatamente cerca
em gua e completar o volume com o mesmo solvente. de 500 mg de sulfanilamida previamente dessecada por 3
Homogeneizar. horas a 105 C. Transferir para bquer. Adicionar 20 mL de
cido clordrico e 50 mL de gua. Agitar at dissoluo e
Padronizao Transferir, exatamente, 5 mL de nitrato
esfriar a 15 C. Mantendo a temperatura em torno de 15 C,
de chumbo 0,1 M, para erlenmeyer de 125 mL, adicionar
titular lentamente com soluo de nitrito de sdio usando
50 mL de gua e, sob agitao magntica, acrescentar 5
como indicador externo amido iodetado SI, at viragem:
gotas de alaranjado de xilenol a 0,1% (p/v) em gua e 5 g
Cada 17,220 mg de sulfanilamida equivalem a 1 mL de
de metenamina, at colorao violeta. Titular com edetato
nitrito de sdio 0,1 M.
dissdico 0,05 M SV at colorao amarela. Cada mL de
edetato dissdico 0,05 M SV equivale a 16,560 mg de
Pb(NO3)2. Permanganato de potssio 0,02 M SV
Especificao Contm 3,161 g de permanganato de
Nitrato de mercrio(II) 0,1 M SV potssio em gua a 1000 mL.
Sinonmia Nitrato mercrico 0,1 M SV. Preparao Dissolver cerca de 3,2 g de permanganato de
potssio em 1000 mL de gua, aquecer ebulio por 15
Preparao Dissolver cerca de 35 g de nitrato de
minutos. Deixar em repouso em frasco mbar com tampa
mercrio(II) em 5 mL de cido ntrico e 500 mL de gua.
de vidro, ao abrigo da luz, por dois dias, e filtrar atravs de
Completar com gua a 1000 mL.
funil de vidro sinterizado.
Padronizao A 20 mL desta soluo, adicionar 2 mL
Padronizao Dissolver, exatamente, cerca de 0,2 g de
de cido ntrico SR e 2 mL de sulfato frrico amoniacal
oxalato de sdio, previamente dessecado a 110 C at peso
SR. Resfriar temperatura inferior a 20 C e titular com
constante, em 250 mL de gua. Adicionar 7 mL de cido
tiocianato de amnio 0,1 M at aparecimento permanente
sulfrico, aquecer a cerca de 70 C, e titular lentamente
da colorao marrom. Calcular a molaridade.
com a soluo de permanganato de potssio, com agitao
Conservao Em recipientes bem fechados. constante, at colorao rsea plida, que persista por 15
segundos. A temperatura ao final da titulao no deve ser
Nitrato de prata 0,1 M SV inferior a 60 C. Cada mL de permanganato de potssio
0,02 M SV equivale a 6,700 mg de oxalato de sdio.
Preparao Dissolver cerca de 17,5 g de nitrato de prata
em gua a 1000 mL. Conservao Recipientes de vidro mbar bem fechados,
com tampa de vidro.
Padronizao Pesar exatamente cerca de 100 mg de
cloreto de sdio, dessecado; transferir para bquer de 150 Armazenagem Proteger da luz.
mL e dissolver em 5 mL de gua. Juntar 5 mL de cido Informao adicional Conferir o ttulo com frequncia.
actico SR, 50 mL de metanol e trs gotas de eosina Y SI.
Agitar, de preferncia com agitador magntico, e titular
Sulfato crico 0,05 M SV
com a soluo de nitrato de prata. Calcular a molaridade.
Cada mL de nitrato de prata 0,1 M SV corresponde a 5,844 Especificao Contm 33,22 g de sulfato crico em 1000
mg de cloreto de sdio. mL de gua.
Conservao Recipientes bem fechados. Padronizao Pesar, exatamente, cerca de 0,2 g de oxalato
de sdio, dessecado previamente, e dissolver em 75 mL
Armazenagem Proteger da luz.
de gua. Adicionar, com agitao, 2 mL de cido sulfrico
previamente misturado com 5 mL de gua, homogeneizar.
Nitrato de trio 0,005 M SV Adicionar 10 mL de cido clordrico, e aquecer at cerca
Especificao Contm 2,401 g de nitrato de trio anidro de 75 C. Titular com sulfato crico 0,05 M at cor amarelo
em 1000 mL de gua. claro permanente. Cada 6,700 mg de oxalato de sdio
equivalente a 1 mL de sulfato crico 0,05 M SV.
Padronizao Transferir, exatamente, cerca de 0,05 g
de fluoreto de sdio, previamente dessecado, para balo
volumtrico de 250 mL e completar com gua. Em 20 mL
dessa soluo, adicionar 0,6 mL de alizarina SI e ento,
506 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
14 equivalente a 4,496 mg de trixido de arsnio. iodo liberado com a soluo de tiossulfato de sdio at cor
verde-amarelada. Adicionar 3 mL de amido SI e continuar
a titulao at desaparecimento da cor azul. Calcular a
Sulfato de zinco 0,1 M SV molaridade. Cada mL de tiossulfato de sdio 0,1 M SV
Especificao Contm 16,144 g de sulfato de zinco corresponde a 4,903 mg de dicromato de potssio.
hepta-hidratado em gua a 1000 mL. Conservao Recipientes bem fechados.
Preparao Dissolver 28,8 g de sulfato de zinco em gua Informao adicional Conferir o titulo com frequncia.
e completar o volume a 1000 mL. Pipetar 20 mL da soluo
de edetato dissdico 0,05 M para um erlenmeyer de 250
mL e adicionar, nesta ordem, 20 mL de soluo tampo 14.4 TAMPES
cido actico-acetato de amnio, 100 mL de etanol e 2 mL
de ditizona SR. Titular pela soluo de sulfato de zinco at Certos ensaios farmacopeicos exigem o ajuste ou a
a colorao rosa claro. Calcular a molaridade. manuteno de pH. Para tal, empregam-se solues
denominadas tampes, capazes de suportar variaes na
atividade de ons hidrognio. Os componentes requeridos
Tetrafenilborato de sdio 0,02 M SV
esto descritos no item Reagentes. Os de natureza cristalina
Preparao Dissolver 6,845 g de tetrafenilborato de devem ser previamente dessecados a 110 - 120 C por
sdio em gua a 1000 mL. uma hora; utilizar gua isenta de dixido de carbono. A
Padronizao Pipetar duas pores de 75 mL em dois armazenagem deve ser feita em recipientes hermticos
bqueres. A cada um deles, adicionar 1 mL de cido actico e apropriados. Considerar a estabilidade no preparo das
SR, 25 mL de gua e, lentamente, sob agitao, 25 mL de quantidades para consumo. A seguir, relacionam-se as
biftalato de potssio a 5% (p/v). Deixar em repouso por solues em ordem crescente de valores de pH. Outros
duas horas. Filtrar uma das misturas em cadinho filtrante, tampes com caractersticas particulares so descritos nos
de vidro sinterizado (porosidade 100-160 micrmetros) e textos dos respectivos ensaios.
lavar o precipitado com gua fria. Transferir o precipitado
com 50 mL de gua e agitar intermitentemente por 30
Tampo cido clordrico pH 2,0
minutos. Filtrar e usar o filtrado como soluo saturada
de tetrafenilborato de potssio no seguinte procedimento Preparao Misturar 50 mL de soluo aquosa de cloreto
de padronizao. Filtrar a segunda mistura em cadinho de potssio 0,2 M com 13 mL de soluo aquosa de cido
filtrante, de vidro sinterizado, tarado, e lavar com trs clordrico 0,2 M. Completar o volume para 200 mL com
pores de 5 mL da soluo saturada de tetrafenilborato gua e ajustar o pH se necessrio.
de potssio. Secar o precipitado a 105 C durante uma
hora. Cada g de tetrafenilborato de potssio equivale a Tampo fosfato pH 2,2
955,1 mg de tetrafenilborato de sdio. A partir do peso do
tetrafenilborato de sdio obtido, calcular a molaridade da Preparao Dissolver 1,38 g de fosfato de sdio
soluo. monobsico em 800 mL de gua. Ajustar o pH com cido
fosfrico e diluir para 1000 mL com gua.
Conservao - Recipientes bem fechados.
Estabilidade - Usar solues recentes.
Tampo acetato pH 3,0
Preparao Dissolver 12 g de acetato de sdio em gua,
Tiocianato de amnio 0,1 M SV adicionar 6 mL de cido actico glacial e diluir com gua
Preparao Dissolver cerca de 8 g de tiocianato de para fazer 100 mL. Ajustar o pH se necessrio.
amnio em gua a 1000 mL.
Padronizao Misturar exatamente 30 mL de nitrato de
Tampo acetato pH 3,5
prata 0,1 M com 50 mL de gua, 2 mL de cido ntrico
SR e 2 mL de sulfato frrico amoniacal SR. Titular com a Preparao Dissolver 25 g de acetato de amnio em
soluo de tiocianato de amnio at aparecimento da cor 35 mL de gua, adicionar 38 mL de cido clordrico 7 M,
castanho-avermelhada. Cada mL de nitrato de prata 0,1 M ajustar o pH para 3,5 com cido clordrico SR ou hidrxido
equivalente a 7,612 mg de tiocianato de amnio. de amnio 6 M e completar o volume para 100 mL com
gua.
Conservao Recipientes bem fechados.
Tampo acetato pH 4,0
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
mL de gua. Ajustar o pH para 6,8 com cido clordrico Tampo sulfato cprico
e completar para 250 mL com gua. Imediatamente antes Soluo A Dissolver 15,22 g de fosfato de sdio dibsico
do emprego, adicionar o ditiotreitol, de modo a obter uma anidro em quantidade suficiente de gua. Adicionar 9,75 g
concentrao final de 0,1 M. de cido ctrico monoidratado e diluir para 1000 mL com
gua. Ajustar o pH em 5,2 com auxlio de hidrxido de
Tampo fosfato-salina (PBS) sdio ou cido ctrico.
Preparao Dissolver, com agitao, 24 g de cloreto de Soluo B Dissolver 0,313 g de sulfato cprico penta-
sdio, 0,6 g de cloreto de potssio, 4,3 g de fosfato de sdio hidratado em gua e diluir para 100 mL com o mesmo
dibsico dodeca-hidratado e 0,6 g de fosfato de potssio solvente.
14
monobsico em 4 L de gua. Autoclavar a 121 C, presso Preparao No momento do uso misturar 15 mL da
de 1 atm, por 20 minutos. Estocar a 4 C. Soluo B com 985 mL da Soluo A.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 511
a
ANEXO A - TABELA PERIDICA DOS
ELEMENTOS QUMICOS - NOMES,
SMBOLOS E MASSAS ATMICAS
A Tabela A.1 recomendada pela International Union of Pure and Applied Chemistry IUPAC de 2007. As massas
atmicas se baseiam na massa do 12C = 12.
1
H
2
He
A
1,0079 4,0026
Tabela Peridica dos Elementos Qumicos
3 4 5 6 7 8 9 10
Li Be B C N O F Ne
6,941 9,0122 10,811 12,011 14,007 15,999 18,998 20,180
11 12 13 14 15 16 17 18
Na Mg Al Si P S Cl Ar
22,990 24,305 26,982 28,086 30,974 32,065 35,453 39,948
3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36
K Ca Sc Ti V Cr Mn Fe Co Ni Cu Zn Ga Ge As Se Br Kr
39,098 40,078 44,956 47,867 50,942 51,996 54,938 55,845 58,933 58,693 63,546 65,38 69,723 72,64 74,922 78,96 79,904 83,798
37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54
Rb Sr Y Zr Nb Mo Tc Ru Rh Pd Ag Cd In Sn Sb Te I Xe
85,468 87,62 88,906 91,224 92,906 95,96 - 101,07 102,91 106,42 107,87 112,41 114,82 118,71 121,76 127,60 126,90 131,29
55 56 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86
Cs Ba 57-71 Hf Ta W Re Os Ir Pt Au Hg Tl Pb Bi Po At Rn
132,91 137,33 178,49 180,95 183,84 186,21 190,23 192,22 195,08 196,97 200,59 204,38 207,2 208,98 - - -
57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71
La Ce Pr Nd Pm Sm Eu Gd Tb Dy Ho Er Tm Yb Lu
138,91 140,12 140,91 144,24 - 150,36 151,96 157,25 158,93 162,50 164,93 167,26 168,93 173,05 174,97
8 Oxignio O 15,9994 g/mol 1,33 g/l -218,4 C -182,9 C 1774 Priestley e Scheele
9 Flor F 18,9984032 g/mol 1,58 g/l -219,6 C -188,1 C 1886 Moissan
10 Non Ne 20,1797 g/mol 0,84 g/l -248,7 C -246,1 C 1898 Ramsay e Travers
11 Sdio Na 22,989768 g/mol 0,97 g/cm3 97,8 C 892 C 1807 Davy
12 Magnsio Mg 24,305 g/mol 1,74 g/cm3 648,8 C 1107 C 1755 Black
13 Alumnio Al 26,981539 g/mol 2,70 g/cm3 660,5 C 2467 C 1825 Oersted
14 Silcio Si 28,0855 g/mol 2,33 g/cm3 1410 C 2355 C 1824 Berzelius
15 Fsforo P 30,973762 g/mol 1,82 g/cm3 44 (P4) C 280 (P4) C 1669 Brandt
16 Enxofre S 32,066 g/mol 2,06 g/cm3 113 C 444,7 C Pr-histria Desconhecido
17 Cloro Cl 35,4527 g/mol 2,95 g/l -34,6 C -101 C 1774 Scheele
18 Argnio Ar 39,948 g/mol 1,66 g/l -189,4 C -185,9 C 1894 Ramsay e Rayleigh
19 Potssio K 39,0983 g/mol 0,86 g/cm3 63,7 C 774 C 1807 Davy
20 Clcio Ca 40,078 g/mol 1,54 g/cm3 839 C 1487 C 1808 Davy
21 Escndio Sc 44,95591 g/mol 2,99 g/cm3 1539 C 2832 C 1879 Nilson
22 Titnio Ti 47,88 g/mol 4,51 g/cm3 1660 C 3260 C 1791 Gregor e Klaproth
23 Vandio V 50,9415 g/mol 6,09 g/cm3 1890 C 3380 C 1801 Del Rio
24 Crmio / Cromo Cr 51,9961 g/mol 7,14 g/cm3 1857 C 2482 C 1797 Vauquelin
25 Mangans Mn 54,93805 g/mol 7,44 g/cm3 1244 C 2097 C 1774 Gahn
26 Ferro Fe 55,847 g/mol 7,87 g/cm3 1535 C 2750 C Pr-histria Desconhecido
27 Cobalto Co 58,9332 g/mol 8,89 g/cm3 1495 C 2870 C 1735 Brandt
28 Nquel Ni 58,69 g/mol 8,91 g/cm3 1453 C 2732 C 1751 Cronstedt
29 Cobre Cu 63,546 g/mol 8,92 g/cm3 1083,5 C 2595 C Pr-histria Desconhecido
30 Zinco Zn 65,39 g/mol 7,14 g/cm3 419,6 C 907 C Pr-histria Desconhecido
31 Glio Ga 69,723 g/mol 5,91 g/cm3 29,8 C 2403 C 1875 Lecoq de Boiskaudran
32 Germnio Ge 72,61 g/mol 5,32 g/cm3 937,4 C 2830 C 1886 Winkler
33 Arsnio As 74,92159 g/mol 5,72 g/cm3 613 C 613 (sublimiert) C ca, 1250 Albertus Magnus
34 Selnio Se 78,96 g/mol 4,82 g/cm3 217 C 685 C 1817 Berzelius
Tabela A.2 (continuao)
66 Disprsio Dy 162,5 g/mol 8,56 g/cm3 1409 C 2335 C 1886 Lecoq de Boisbaudran
67 Hlmio Ho 164,93032 g/mol 8,78 g/cm3 1470 C 2720 C 1878 Soret
513
A
a
A
Tabela A.2 (continuao)
514
75 Rnio Re 186,207 g/mol 21,03 g/cm3 3180 C 5627 C 1925 Noddack, Tacke e Berg
76 smio Os 190,2 g/mol 22,61 g/cm3 3045 C 5027 C 1803 Tenant
77 Irdio Ir 192,22 g/mol 22,65 g/cm3 2410 C 4130 C 1803 Tenant e andere
78 Platina Pt 195,08 g/mol 21,45 g/cm3 1772 C 3827 C 1557 Scaliger
79 Ouro Au 196,96654 g/mol 19,32 g/cm3 1064,4 C 2940 C Pr-histria Desconhecido
80 Mercrio Hg 200,59 g/mol 13,55 g/cm3 -38,9 C 356,6 C Pr-histria Desconhecido
81 Tlio Tl 204,3833 g/mol 11,85 g/cm3 303,6 C 1457 C 1861 Crookes
82 Chumbo Pb 207,2 g/mol 11,34 g/cm3 327,5 C 1740 C Pr-histria Desconhecido
83 Bismuto Bi 208,98037 g/mol 9,80 g/cm3 271,4 C 1560 C 1540 Agricola
84 Polnio Po 208,9824 g/mol 9,20 g/cm3 254 C 962 C 1898 Marie e Pierre Curie
85 Astato At 209,9871 g/mol 302 C 337 C 1940 Corson e MacKenzie
86 Radnio Rn 222,0176 g/mol 9,23 g/l -71 C -61,8 C 1900 Dorn
87 Frncio Fr 223,0197 g/mol 27 C 677 C 1939 Perey
88 Rdio Ra 226,0254 g/mol 5,50 g/cm3 700 C 1140 C 1898 Marie e Pierre Curie
89 Actnio Ac 227,0278 g/mol 10,07 g/cm3 1047 C 3197 C 1899 Debierne
90 Trio Th 232,0381 g/mol 11,72 g/cm3 1750 C 4787 C 1829 Berzelius
91 Protactnio Pa 231,0359 g/mol 15,37 g/cm3 1554 C 4030 C 1917 Soddy, Cranston e Hahn
92 Urnio U 238,0289 g/mol 18,97 g/cm3 1132,4 C 3818 C 1789 Klaproth
93 Neptnio Np 237,0482 g/mol 20,48 g/cm3 640 C 3902 C 1940 McMillan e Abelson
94 Plutnio Pu 244,0642 g/mol 19,74 g/cm3 641 C 3327 C 1940 Seaborg
95 Amercio Am 243,0614 g/mol 13,67 g/cm3 994 C 2607 C 1944 Seaborg
96 Crio Cm 247,0703 g/mol 13,51 g/cm3 1340 C 3110 C 1944 Seaborg
Tabela A.2 (concluso)
A
a
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 517
a
ANEXO B - UNIDADES DO SISTEMA
INTERNACIONAL (SI) USADAS NA
FARMACOPEIA E AS EQUIVALNCIAS COM
OUTRAS UNIDADES
O sistema internacional possui sete unidades de base, utilizadas como referncia em todas as medies e relacionadas na
Tabela B.1
B
M exatamente igual a 1 kg.
Corrente eltrica ampere A O ampere a intensidade de uma corrente eltrica constante que,
I, i mantida em dois condutores paralelos, retilneos, de comprimento
infinito, de seo circular desprezvel, e situados distncia de 1
metro entre si, no vcuo, produziria entre estes condutores uma fora
igual a 2 10-7 newton por metro de comprimento.
Intensidade candela cd A candela a intensidade luminosa, numa dada direo de uma fonte
luminosa que emite uma radiao monocromtica de frequncia 540 x 1012
Iv hertz e cuja intensidade energtica nessa direo 1/683 watt por
esterradiano.
Assim, a eficcia luminosa espectral, K, da radiao monocromtica
de frequncia 540 x 1012 Hz exatamente igual a 683 lm/W.
518 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Todas as outras grandezas so descritas como grandezas derivadas e medidas como unidades derivadas. Na Tabela B.2
esto listadas algumas grandezas derivadas.
B
Note que o ndice de refrao e a permeabilidade relativa so exemplos de grandezas adimensionais, para as quais a
unidade do SI o nmero um (1), embora esta unidade no seja escrita.
Algumas unidades derivadas recebem nome especial, sendo esse simplesmente uma forma compacta de expresso de
combinaes de unidades de base que so usadas frequentemente. Ento, por exemplo, o joule, smbolo J, por definio,
igual a m2 kg s-2. Existem atualmente 22 nomes especiais para unidades aprovados para uso no SI, que esto listados na
Tabela B.3.
Expresso em
Nome da unidade Smbolo da
Grandeza derivada termos de outras
derivada unidade
unidades
ngulo plano radiano rad m/m = 1
ngulo slido esterradiano sr m2/m2 = 1
Frequncia Hertz Hz s-1
fora newton N m kg s-2
presso, tenso pascal Pa N/m2 = m-1 kg s-2
energia, trabalho, quantidade de calor Joule J N m = m2 kg s-2
potncia, fluxo de energia Watt W J/s = m2 kg s-3
carga eltrica, quantidade de eletricidade coulomb C sA
diferena de potencial eltrico Volt V W/A = m2 kg s-3 A-1
Capacitncia Farad F C/V = m-2 kg-1 s4 A2
resistncia eltrica Ohm V/A = m2 kg s-3 A-2
condutncia eltrica siemens S A/V = m-2 kg-1 s3 A2
fluxo de induo magntica weber Wb V s = m2 kg s-2 A-1
induo magntica Tesla T Wb/m2 = kg s-2 A-1
Indutncia Henry H Wb/A = m2 kg s-2 A-2
temperatura Celsius grau Celsius o
C K
fluxo luminoso lumen lm cd sr = cd
iluminncia Lux lx lm/m2 = m-2 cd
atividade de um radionucldio becquerel Bq s-1
dose absorvida, energia especfica (comunicada), kerma Gray Gy J/kg = m2 s-2
equivalente de dose, equivalente de dose ambiente sievert Sv J/kg = m2 s-2
atividade cataltica Katal kat s-1 mol
Embora o hertz e o becquerel sejam iguais ao inverso do
segundo, o hertz usado somente para fenmenos cclicos,
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
A unidade de temperatura Celsius o grau Celsius, oC, As grandezas adimensionais, tambm chamadas de
que igual em magnitude ao kelvin, K, a unidade de grandezas de dimenso um, so usualmente definidas
temperatura termodinmica. A grandeza temperatura como a razo entre duas grandezas de mesma natureza
Celsius t relacionada com a temperatura termodinmica (por exemplo, o ndice de refrao a razo entre duas
T pela equao t/oC = T/K 273,15. velocidades, e a permeabilidade relativa a razo entre a
permeabilidade de um meio dieltrico e a do vcuo). Ento
O sievert, tambm, usado para as grandezas: equivalente a unidade de uma grandeza adimensional a razo entre
de dose direcional e equivalente de dose individual. duas unidades idnticas do SI, portanto sempre igual a
um (1). Contudo, ao se expressar os valores de grandezas
Os quatro ltimos nomes especiais das unidades da Tabela
adimensionais, a unidade um (1) no escrita.
B.3 foram adotados especificamente para resguardar
medies relacionadas sade humana.
MLTIPLOS E SUBMLTIPLOS
Para cada grandeza, existe somente uma unidade SI DAS UNIDADES DO SI
(embora possa ser expressa frequentemente de diferentes
modos, pelo uso de nomes especiais). Contudo, a mesma Um conjunto de prefixos foi adotado para uso com as
unidade SI pode ser usada para expressar os valores de unidades do SI, a fim de exprimir os valores de grandezas
diversas grandezas diferentes (por exemplo, a unidade SI que so muito maiores ou muito menores do que a unidade
para a relao J/K pode ser usada para expressar tanto o SI usada sem um prefixo. Os prefixos SI esto listados na
valor da capacidade calorfica como da entropia). Portanto,
importante no usar a unidade sozinha para especificar a
Tabela B.4. Eles podem ser usados com qualquer unidade
de base e com as unidades derivadas com nomes especiais. B
Tabela B.4 - Mltiplos e submltiplos do SI - Prefixos e smbolos.
Quando os prefixos so usados, o nome do prefixo e o da O quilograma, kg, uma exceo, porque embora ele seja
unidade so combinados para formar uma palavra nica e, uma unidade de base o nome j inclui um prefixo, por razes
similarmente, o smbolo do prefixo e o smbolo da unidade histricas. Os mltiplos e os submltiplos do quilograma
so escritos sem espaos, para formar um smbolo nico so escritos combinando-se os prefixos com o grama: logo,
que pode ser elevado a qualquer potncia. Por exemplo, escreve-se miligrama, mg, e no microquilograma, kg.
pode-se escrever: quilmetro, km; microvolt, V;
femtosegundo, fs; 50 V/cm = 50 V(10-2 m)-1 = 5000 V/m.
UNIDADES FORA DO SI
Quando as unidades de base e as unidades derivadas so
O SI o nico sistema de unidades que reconhecido
usadas sem qualquer prefixo, o conjunto de unidades
universalmente, de modo que ele tem uma vantagem
resultante considerado coerente. O uso de um conjunto
distinta quando se estabelece um dilogo internacional.
de unidades coerentes tem vantagens tcnicas. Contudo,
Outras unidades, isso , unidades no SI, so geralmente
o uso dos prefixos conveniente porque ele evita a
definidas em termos de unidades SI. O uso do SI, tambm,
necessidade de empregar fatores de 10n, para exprimir os
simplifica o ensino da cincia. Por todas essas razes
valores de grandezas muito grandes ou muito pequenas.
o emprego das unidades SI recomendado em todos os
Por exemplo, o comprimento de uma ligao qumica
campos da cincia e da tecnologia.
mais convenientemente expresso em nanmetros, nm, do
que em metros, m, e a distncia entre Londres e Paris Embora algumas unidades no SI sejam ainda amplamente
mais convenientemente expressa em quilmetros, km, do usadas, outras, a exemplo do minuto, da hora e do dia, como
que em metros, m. unidades de tempo, sero sempre usadas porque elas esto
arraigadas profundamente na nossa cultura. Outras so
usadas, por razes histricas, para atender s necessidades
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de grupos com interesses especiais, ou porque no existe propsito. Contudo, quando unidades no SI so utilizadas,
alternativa SI conveniente. o fator de converso para o SI deve ser sempre includo.
Algumas unidades no SI esto listadas na Tabela B.5,
Os cientistas devem ter a liberdade para utilizar unidades com o seu fator de converso para o SI.
no SI se eles as considerarem mais adequadas ao seu
B __________________________
O Dicionrio Houaiss da Lngua Portuguesa admite essa palavra grafada sem o smbolo sobre o a.
1
Os smbolos das unidades comeam com letra maiscula da milha nutica apresentado aqui como M; contudo no
quando se trata de nome prprio (por exemplo, ampere, h um acordo geral sobre nenhum smbolo para a milha
A; kelvin, K; hertz, Hz; coulomb, C). Nos outros casos nutica.
eles sempre comeam com letra minscula (por exemplo,
metro, m; segundo, s; mol, mol). O smbolo do litro uma Na Tabela B.6 esto listados outros exemplos de unidades
exceo: a letra maiscula usada para evitar confuso fora do SI e de uso, ainda corrente, mas, que devem ser
entre a letra minscula l e o nmero um (1). O smbolo evitadas. Quando mencionadas num documento convm
indicar sua equivalncia com a unidade SI.
B
colunas de tabelas, ou a denominao dos eixos de grficos, Exemplo: 123 456,789 0
de modo que as entradas na tabela ou a identificao dos Para informaes adicionais, ver o website do BIPM http://
pontos sobre os eixos so simples nmeros. www.bipm.org ou a Publicao completa do SI, 8a edio,
que est disponvel no site http://www.bipm.org/en/si.
Tabela C.1 Solventes para cromatografia e suas propriedades.
C
a
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 525
a
ANEXO D ALCOOMETRIA
Tabela D.1 Tabela Alcoomtrica (20 C)