Sergiofelipeoliveiramestrado1998 - Estudo Da Estrutura Da Glândula Pineal

r-
SRGIO FELIPE DE OLIVEIRA

"ESTUDO DA ESTRUTURA DA GLNDULA PINEAL
HUMANA EMPREGANDO MTODOS DE MICROSCOPIA
A
DE LUZ, MICROSCOPIA ELETRONICA DE VARREDURA,

MICROSCOPIA DE VARREDURA POR ESPECTROMETRIA
DE RAIO-X E DIFRAO DE RAIO-X"

Dissertao apresentada ao Instituto de Cincias
Biomdicas da Universidade de So Paulo para
obteno do ttulo de Mestre em Cincias

SO PAULO
1998
-

Candidato(a): SRGIO FELIPE DE OLIVEIRA
Ttulo da Dissertao: Estudo da estrutura da glndula pineal

humana empregando mtodos de microscopia
de luz, microscopia eletrnica de varredura,
microscopia de varredura por espectrometria
de raio-x e difrao de raio-x .

A Comisso Julgadora dos trabalhos de
Defesa de Mestrado, em sesso pblica realizada a
............. ./. ............ ./. .................. , considerou o(a) candidato(a):

( ) Aprovado(a) ( ) Reprovado(a)

1) Examinador(a)_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ __
2) Examinador(a)_ _ _ _~-----------
3) Presidente_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ __
-

I

SRGIO FELIPE DE OLIVEIRA

A
"ESTUDO DA ESTRUTURA DA GLANDULA PINEAL

HUMANA EMPREGANDO MTODOS DE MICROSCOPIA
A
DE LUZ, MICROSCOPIA ELETRONICA DE VARREDURA,

MICROSCOPIA DE VARREDURA POR ESPECTROMETRIA
DE RAIO-X E DIFRAO DE RAIO-X"

Dissertao apresentada ao Instituto de Cincias
Biomdicas da Universidade de So Paulo para
obteno do ttulo de Mestre em Cincias

rea de Concentrao:
ANATOMIA FUNCIONAL:
ESTRUTURA E ULTRA-ESTRUTURA
Orientador:
Prof. Dr. ESEM PEREIRA CERQUEIRA

SO PAULO
1998

-

FICHA CATALOGRFICA
Preparada pela Biblioteca do
Instituto de Cincias Biomdicas da Universidade de So Paulo

Oliveira, Srgio Felipe de.
Estudo da estrutura da glndula pineal humana empregando mtodos de
microscopia de luz, eletrnica de varredura, microscopia de varredura por
espectrometria de raio-x e difrao de raio-x I Srgio Felipe de Oliveira.--
So Paulo, 1998.

Dissertao (Mestrado)--Instituto de Cincias Biomdicas da Universidade

de So Paulo. Departamento de Anatomia.
Orientador: Cerqueira, Esem Pereira.

rea de Concentrao: Anatomia.
Linha de pesquisa: Microscopia de glndula pineal humana.

Verso do ttulo para o ingls: A study of human pineal gland structure,
using optic microscopy, scanning eletron microscopy, x-ray spectrometry

'. ,:
. scanning microscopy and x-ray difraction.

I ~ '
-~ '
'
. l ..
Descritores: I. Glndula pineal 2.Concreo calcrea 3.Pinealcito
4.Microscopia eletrnica 5.Difrao de raio-x 6.Biomineralizao
ICB/SBffi.052/98

DEDICATRIA

A Pedro e J osefa, meus bisavs
A Tanncio e Hennnia, Antnio e Rita, meus avs
pela genealogia de minha infncia de sonhos .
Ao meu pai, o Dr. Srgio, que ensinou-me a Medicina

e o gosto pela Universidade .
minha me, Vera, que ensinou-me a vida .... deu-me a luz .
Ao meu irmo Ricardo, amigo, sempre .
minha irm Rita, ouro do meu corao .
Aos meus sobrinhos Renato e Mateus, brilhos de meus olhos .

minha esposa, Mrcia
e a meu filho querido, Pietro,
amores de minha vida
esteios de minh'alma .
Dedico este trabalho .
-

AGRADECIMENTOS
Ao Prof. Dr. Esem Pereira Cerqueira, meu orientador, pela oportunidade que
me deu de estudar a glndula pineal.
Ao Prof. Dr. li Sei Watanabe, pela compreenso e orientao inestimveis no

trajeto deste trabalho .
Ao Prof. Dr. Cludio Ferraz de Carvalho, pelo estmulo ao estudo deste
empolgante tema .
Prof.a. Dra. Irvnia de Santis Prada, pela orientao e estmulo no

desenvolvimento desta pesquisa .
Ao Prof. Celso Ivan Conegero, pela orientao nas tcnicas anatmicas, e
sobretudo pela amizade .
Dra. Marlene Rossi Severino Nobre, pelo apoio e orientao segura nas
minhas posturas de vida .
Ao Sr. Francisco Cndido Xavier, pelo estmulo que me d prtica de uma

Cincia espiritualizada e humana, em prol de uma sociedade justa e fraterna .
Mrcia Fuga, minha esposa, pela datilografia e diagramao deste trabalho, e
sobretudo pelo estmulo e apoio nos momentos dificeis, tomando possvel a
realizao desta tese .
Aos Professores do Departamento de Anatomia do ICB-USP, pela gentileza e
apoio com que sempre fui atendido .
Aos tcnicos do ICB, senhores Boleta, Andrs, Nilson, Adevair, Wilson, e

senhoras Marta e Virgnia, pelo auxlio sempre pronto .
Carla Carvalho, pelo auxlio na secretaria do Depto. de Anatomia .

Biblioteca do ICB-USP, em especial s bibliotecrias Sra. Marily, Sra .
Carminha e Sra. Rita, pela ajuda inestimvel.
CAPES, pela bolsa de estudos .
Aos meus colegas da ps-graduao da Anatomia, Slvia, Juara, Maria Ivone,

Bruno, Renato, Eliane, Tnia, Cntia e ao Allan, da Veterinria, companheiros
de luta na dificil tarefa de fazer Cincia .

SUMRIO
RESUMO
1- INTRODUO ........................................................................................................ 01
Anatomia.................................................................................................................... 02
Aspectos evolutivos e morfofuncionais........................................................................ 05
Aspectos citolgicos e funcionais................................................................................ 11
Mtodos anatmicos de estudo da pineal.................................................................... 29
2 - PROPOSIO.......................................................................................................... 31
3 - MATERIAL E MTODOS....................................................................................... 33
Microscopia de luz...................................................................................................... 3 5
Microscopia eletrnica de varredura ............................................................................ 35
Microanlise e difrao de raio-x ................................................................. : 36
4- RESULTADOS ......................................................................................................... 39
Microscopia de luz...................................................................................................... 40
Microscopia eletrnica de varredura com espectrometria
de :caio-x por disperso de energia (EDS) .................................................................... 44
Difrao de raio-x ....................................................................................................... 46
5 -DISCUSSO............................................................................................................ 92
6 - CONCLUSES ........................................................................................................ 104
7- REFERNCIAS BJBLIOGRFICAS ....................................................................... 107
ABSTRACT

RESUMO

Resumo
Estruturas da glndula pineal humana foram estudadas

empregando os mtodos de microscopia de luz, microscopia
eletrnica de varredura, microscopia de varredura por
espectrometria de raio-x e difrao de raio-x. As peas para
microscopia de luz foram fixadas em soluo de formalina a
10% durante 48h e includas em parafina.
Para a microscopia eletrnica de varredura, as peas foram
fixadas em soluo de Karnovsky modificada, sendo que
parte das peas foram fraturadas em nitrognio lquido
para o exame das caractersticas internas do corpo pnea!.
Os resultados evidenciaram que o corpo pnea! apresenta
formaes calcreas distribudas no interior do tecido
conjuntivo. As formaes calcreas possuem tamanhos e
formas diferentes. As estruturas calcreas apresentam uma
cpsula constituda pelo tecido conjuntivo. Na poro
interna, a estrutura calcrea constituda por uma srie de
!ameias concntricas, com porosidade de aspecto amorfo.
Evidenciou-se pela anlise de difrao de raio-x, a estrutura
cristalina formada pelos tomos de vrios elementos que
compem a formao calcrea.

-
1. INTRODUAO

-

Anatomia
A glndula pineal humana, segundo ERHART, E.B. (1962) e
MACHADO, A.B.M. (1983), est localizada na fissura formada pelo encontro
do cerebelo e dos hemisfrios cerebrais, medindo aproximadamente 8 mm de
extenso. Ocupa a depresso dos colculos superiores e inferior ao esplnio
do corpo caloso, sendo separado deste pela tela coridea do terceiro ventrculo
e pelas veias cerebrais nela contidas, estando envolvido pela camada inferior da
tela, que ento se reflete sobre o tecto. A base da pineal posicionada
anteriormente e fixada por um pednculo dividido anteriormente pela lmina
superior e lmina inferior, separados pelo recesso pineal do terceiro ventrculo
(GRAY'S ANATOMY, 1995); a lmina inferior contm a comissura posterior
e a lmina superior, a comissura habenular, estruturas componentes da parte
no endcrina do epitlamo. Vale ressaltar que a comissura habenular faz parte
do sistema lmbico, assim como todas as outras estruturas no endcrinas do
epitlamo, excetuando a comissura posterior, sendo portanto relacionadas com
a regulao do comportamento emocional. O recesso pineal a rea do terceiro
ventrculo cerebral onde o pednculo da pineal se prende, sendo revestido por

~

clulas ependimrias (BINKLEY, S., 1988). A pineal juntamente com o rgo
subcomissural constitui a parte endcrina do epitlamo, sendo que este,
conjuntamente com o tlamo, hipotlamo e subtlamo constituem o diencfalo .
A base do diencfalo formada por uma camada de clulas ependimrias
recoberta por mesnquima vascular. A combinao destes dois tecidos origina
o plexo coride do terceiro ventrculo, e a parte mais caudal da base do
diencfalo origina o corpo pineal (SANDLER, T. W., 1996).
VOLLRATH, L. (1981) props uma classificao baseada na

forma e arranjo do corpo pineal e suas relaes com o terceiro ventrculo. So
distinguidos os seguintes tipos essenciais: tipo A, quando o corpo pineal est
junto ao terceiro ventrculo; tipo AB quando a pineal alongada; tipo ABC
quando a maior parte da pineal est justaposta ao cerebelo; tipo C quando toda
a pineal est na superfcie do crnio. Caso a pineal possua duas partes, a menor
representada pela correspondente letra do alfabeto grego. A pineal humana
do tipo A .
Quanto inervao, ARENDT, J. (1995) afirma haver evidncias
de que a pineal receba mltiplos sistemas de inervao, seja de origem
exgena, como a inervao simptica perifrica, seja direta atravs do sistema
nervoso central, haja visto a deteco de neurotransmissores como o peptdeo

intestinal vasoativo, arginina-vasopressina, oxitocina, entre outros. Antigamente
pensava-se que as projees do sistema nervoso central iam at o pednculo
sem atingir a pineal, passando para a comissura posterior, mas a presena dos
citados neurotransmissores na glndula evidencia a inervao central .
Constituindo-se no nervo do conrio, nico ou duplo, as fibras nervosas
perifricas vm da regio da tenda do cerebelo e penetram nas faces dorsal ou
dorso lateral da pineal. Estas fibras perifricas simpticas so originadas nas
clulas do gnglio cervical superior e correm subendotelialmente na parede do

seio reto. Esta via parte da retina ocular e pela projeo retino-hipotalmica
atinge o ncleo paraventricular, sendo que este funciona como uma estao
intermediria neste circuito. CIPOLLA NETO, J. (1996) esclarece que o
circuito neuroanatmico responsvel pelo controle do metabolismo da glndula
pineal segue a seguinte seqncia: retina, via retino-hipotalmica, ncleo
supraquiasmtico, ncleo paraventricular hipotalmico, fascculo
prosenceflico mediai, medula espinhal torcica alta, gnglio cervical superior,
nervos cenrios e pineal, segundo estudos feitos em roedores .
O estudo da estrutura do corpo pineal e aspectos morfofuncionais
podem ser melhor esclarecidos a partir da compreenso do desenvolvimento
-

!..
,
filogentico e ontogentico da glndula pineal, assim como de caractersticas
citolgicas .

Aspectos evolutivos e morfofuncionais
ROMER, A.S. & PARSONS, T.S. (1977) descrevem a anatomia
do epitlamo, em vertebrados inferiores. O teto do terceiro ventrculo fino em
sua maior parte e uma estrutura no nervosa. Nele desenvolve-se a parfise,
um saco de paredes finas, presente no embrio e ausente no adulto na maioria

dos casos, cuja funo, do que conhecido, est ligada estocagem de
glicognio, que enviado ao lquido cfalo-raquidiano. Adjacente parfise
est a regio do plexo corideo anterior, situado na parte anterior do teto do
diencfalo. Mais para trs , no teto do diencfalo podem desenvolver-se uma
ou duas estruturas medianas pedunculadas, semelhantes a olhos, os rgos
parietal e pineal. Estas estruturas vo formar o olho mediano. Este parece que
no formado sempre a partir da mesma estrutura, mas pode desenvolver-se
tanto do rgo parietal ( ou rgo parapineal) como do rgo pineal. Ambos
podem estar presentes no mesmo animal e, embora adjacentes, so
imediatamente distinguveis pela fixao de seus pednculos. Encontramos
olhos medianos bem desenvolvidos somente nas lamprias e alguns lagartos;
c

situados sob a pele, eles podem fazer um pouco mais do que detectar a
presena ou ausncia de luz, apresentando uma diminuta crnea, cristalino e
retina. Estes desapareceram na filognese, estando ausentes na maioria dos
peixes, nos modernos anfibios, na maior parte dos rpteis, em todas as aves e
mamferos. Apesar da perda de fimo do olho mediano, o rgo pineal persiste
nos vertebrados superiores como uma estrutura glandular. No entanto, em
alguns vertebrados, como nos tubares e nas rs, a pineal embora no se abra
na superficie, contm clulas e ainda atua como um fotoreceptor. Isso j no

mais ocorre nos mamferos .
KAPPERS, J.A. (1971) estuda aspectos evolutivos do rgo

pineal. Em peixes e anfibios o desenvolvimento e estrutura da pineal , em
princpio, semelhante retina dos olhos, embora com diferenas. Possui clulas
ciliadas, de caractersticas neurosensoriais, fotoreceptoras, outros tipos de
clulas nervosas, tambm sensoriais e tecido conectivo. Em rpteis, lacertdeos
e tartarugas h uma transformao evolutiva do rgo pineal, com decrscimo
da atividade fotoreceptora e neurosensorial, como demonstram experimentos de
eletrofisiologia assim como desorganizao ou desintegrao do tecido
neurosensorial. Em aves, apesar de muitas espcies de pssaros que ainda
apresentam uma rudimentar fimo fotossensria da pineal, os plos

I-

fotoreceptores das clulas principais j esto ausentes. Vale ressaltar, no
entanto, que a pineal de aves exerce um papel nos efeitos da luz no sistema
reprodutor. Vamos ter, na pineal de aves, uma inervao por fibras
noradrenrgicas, semelhana do que vamos observar e em roedores e
mamferos. Em mamferos, o rgo pineal no mostra vestgios dos aspectos
fotossensoriais, embora remanescentes do aparato ciliar possam eventualmente
estar presente, sendo constitudo por clulas especficas, os pinealcitos .
Analisando aspectos morfolgicos da pineal humana, ERHART, E. A. (1962),
esclarece ser a pineal parte integrante do epitlamo. H uma variao

considervel de um indivduo para outro, e afirma-se mesmo, "que no existem
duas pineais iguais". Rica em vasos sangneos, constituda essencialmente
por elementos neuro-ectodrmicos, por clulas da glia e por elementos
parenquimatosos diversos. Ressalta a presena, principalmente em indivduos
adultos, das concrees calcreas denominadas acervuli (areia cerebral) .
CAJAL, S. R. (1995) conclui que o desenvolvimento massivo dos plexos
nervosos da pineal humana, advindos do gnglio cervical superior "indica
inequivocamente que a epfise pura e simplesmente um rgo endcrino". A
glndula pineal hoje aceita como uma glndula endcrina regulatria da maior
importncia, modificando a atividade da adenohipfise, neurohipfise, pncreas
r--

endcrino, paratireide, crtex e medula adrenal e gnadas (DE VRIES, R. A .
C. & KAPPERS, J. A., 1971) .
GREENSTEIN, B. (1994) ressalta que as funes atualmente
estudadas, na qual a pineal est envolvida inclui : efeito antigonadotrfico,
mudanas prprias da puberdade, relgio biolgico, efeitos de ''jet-lag",
escurecimento da pele e variaes orgnicas sazonais. VOLLRATH, L. (1981)
considera que, o fato do crebro ser o maior alvo de atuao das substncias
produzidas pela pineal, deve haver uma ligao vascular direta entre a epfise
e o crebro. Um experimento com injeo de corante ndia ink em ratos,
demonstrou que a nica ligao vascular entre a pineal e o crebro via plexo
coride de ambos os recessos suprapineais e o terceiro ventrculo via veia
cerebral magna. Este fato requer uma reverso de fluxo, o que aparentemente
incomum na regio da veia cerebral magna. Assim, as secrees da pineal
alcanam as clulas alvo via lquido cfalo-raquidiano (SHERIDAN, M. N. et
al., 1969; KNIGHT, B. K. et al., 1973) ou pela circulao sangnea. No
entanto KAPPERS, J.A. (1974) esclarece que o recesso pineal coberto por
uma camada de clulas ependimrias. Entre a camada ependimria do recesso e
o parnquima da face dorsal do rgo existe a pia mter. Evidentemente,
ressalta o autor, produtos do parnquima da pineal no alcanam diretamente o

-:-e
-
, .
lquido cfalo raquidiano que banha o recesso pineal. GARTNER, L.P. &
IITATT, J.L. (1994) sintetiza aspectos estruturais da glndula pineal humana .

I.
O tecido conectivo que recobre o corpo pineal pia-mter, a qual envia
trabculas e septos para dentro do parnquima pineal, subdividindo-o em

I e
lbulos incompletos. Vasos sangneos suprem e drenam elementos do tecido
conectivo do corpo pineal. Os principais elementos celulares so pinealcitos e
clulas da glia. Os espaos intercelulares da pineal contm grnulos
calcificados, material conhecido como areia cerebral ou corpora arenacea,

"cujo significado desconhecido, ressaltam os autores. A pineal tem um rico
suprimento sangneo, sendo que sua irrigao derivada da artria cerebral
posterior, que origina as artrias coroidais mdio posteriores direita e esquerda
e as artrias pineais. Estas ramificaes suprem capilares fenestrados. Os
capilares drenam em numerosas veias que desembocam na veia cerebral interna
ou na veia cerebral magna (YAMAMOTO, I. & KAGEGA WA? N., 1980) .
Quanto inervao, vindo do gnglio cervical superior, fibras nervosas
autonmicas ps ganglionares, adentram a glndula pineal em associao com

artrias que a suprem, ou pelo nervo do conrio, ou ainda, pela leptomeninge
da superficie da pineal. As fibras nervosas terminam nos espaos
perivasculares entre os pinealcitos ou fazem sinapses com estes. Outras fibras

,e

nervosas localizadas no pednculo podem ser originadas do ncleo da
habnula. Os pinealcitos formam o parnquima da pineal; estendendo-se de
cada corpo celular, que podem ter ncleos esfricos, ovais ou lobulados, h um
ou mais processos basofilicos, tortuosos, contendo microtbulos (KNIGHT, B .
K. et al., 1973). Estes processos terminam em botes prximos a capilares, ou
menos freqentemente em clulas ependimrias do recesso pineal. Estes botes
terminais contm retculo endoplasmtico rugoso, mitocndrias e vesculas
eltron densas, que estocam monoaminas e hormnios polipeptdicos, cuja
secreo parece depender de inervao simptica. Estes elementos so
secretados por exocitose, conjuntamente com fragmentos de membranas de
vesculas. Estas membranas exocitadas formariam complexos com o clcio,

cuja deposio concntrica ao redor dos fragmentos destas membranas
formariam as conhecidas concrees calcreas da pineal.
ARMSTRONG, S.M. & REDMAN, J.R. (1993) afirmam ser a
glndula pineal uma das trs reas anatmicas de localizao do sistema
circadiano nos vertebrados; assim sendo, temos a pineal, as retinas oculares e o
ncleo supraquiasmtico. A melatonina o hormnio efetor do ritmo na
organizao temporal do corpo, sendo importante para a manuteno dos
ritmos infradianos, circadianos e ultradianos, esclarecem os autores .

10

ZUBAY, G. L. et al. (1995) acentua que a melatonina, hormnio
produzido pela pineal, cuja estrutura qumica N-Acetil-5-Metoxitriptamina,
tem a funo de regulao dos ritmos circadianos .
No mbito mdico, ROBBINS, S. L. et al. (1994) acentua que as
leses clinicamente significativas de pineal so raras, consistindo quase que
exclusivamente de tumores. LEWY, A. J. (1996), ressalta que a pineal est fora
da barreira hemato-enceflica. Assim, a produo de melatonina pela pineal
humana deprimida por beta bloqueadores e alfa- 2 agonistas. Neurnios ps

ganglionares do gnglio cervical superior, noradrenrgicos, estimulam
receptores beta-1adrenrgicos dos pinealcitos. Isto resulta em sntese e

secreo de melatonina no lquido cfalo-raquidiano e na circulao venosa .
Aspectos citolgicos e funcionais

KAPPERS, J. A. (1971) ressalta que em pinealcitos adultos
botes sinpticos so observados, lembrando o primitivo aparato ciliar .
Pinealcitos no so neurnios verdadeiros, sendo que as caractersticas da
pineal so tpicas de um rgo endcrino. De acordo com o autor a pineal
mostra sinais de funcionamento precocemente na vida pr natal, devido
ependimosecreo no sistema ventricular. As clulas comissurais aparecem a
11
r--

partir de clulas ependimrias constituindo o lobo posterior da pineal. A
produo secretria destas clulas jogada na circulao sangnea e no no
terceiro ventrculo. A camada ependimria prolifera e forma pseudofolculos,
cuja luz no tem comunicao com o ventrculo cerebral. Estes folculos
desaparecem em estgios mais avanados do desenvolvimento embrionrio .
Durante o desenvolvimento embrionrio o corpo pineal invadido

por tecido conjuntivo derivado da pia- mter que forma a cpsula do rgo e
penetra no seu interior formando septos. A estrutura da pineal , pois,
complexa devido existncia de elementos mesodrmicos derivados da pia-
mter e elementos derivados do epndima, ou seja, neuroectodrmicos .
Diversos autores atribuem um envolvimento complexo de todas estas
estruturas, parenquimatosas e de tecido conectivo, na gnese das concrees
calcreas da pineal.
KITAY, J. & ALTSCHULE, M. (1954) apud BINKLEY, S.
(1988) consideram que a ocorrncia de calcificao em pineal humana segue a
seguinte proporo: desprezvel no primeiro ano de vida; cerca de 25% na
segunda dcada, havendo um incremento gradual da terceira para a oitava
dcada de vida. Tambm colocam estes autores que nenhuma relao est

12

1:
estabelecida entre a ocorrncia de calcificao e estgios funcionais da
glndula pineal humana.
ANGERVALL, L. et al. (1958) identificaram como hidroxiapatita
,. a fase mineral presente na glndula pineal, num estudo com difrao de raio-x .
I.

Estes autores fizeram um estudo difratogrfico comparativo de diversos
processos de calcificao, abrangendo esmalte e cemento dentrio,
calcificaes tumorais intracranianas, calcificaes arteriais e de linfonodos,
alm das concrees calcreas em pineal humana. Observou-se um grau de
cristalinidade menor em pineal e outros tecidos, comparativamente ao esmalte e
cemento dentrios, apesar da mesma composio de hidroxiapatita. O que faz a

diferena nestes casos o arranjo cristalino .
EARLE, K. M. (1965) observou que as concrees calcreas em
pineal so constitudas por agregao de pequenos cristais em forma de agulha,
evidenciando por difrao de raio-x que a constituio destes caracterstico
dos padres de hidroxiapatita .
MABIE, C. T. & WALLACE, B. M. (1974) estudaram as
calcificaes em pineal humana por diversos mtodos, quais sejam, a
microscopia ptica, microscopia eletrnica de varredura e de transmisso,
difrao de raio-x, e anlises qumicas, corroborando os achados que

13
1:

evidenciam a composio de hidroxiapatita das concrees calcreas da pineal,
demonstrando as caractersticas camadas concntricas, observveis tambm
microscopia ptica. O autor demonstra que as concrees podem ser
mononucleadas ou multinucleadas, sendo que em humanos so mais
comumente multinucleadas .
JAP~ J. L. et al. (1976) estudaram calcificaes em superfcie
de glndula pineal de gerbil (Meriones unguiculatus), observando que h
similaridades no processo de calcificao neste animal e na pineal humana,
sugerindo que o gerbil possa ser o modelo experimental ideal para estudos do
fenmeno de calcificao da pineal. Estes autores observam que as incluses

calcreas localizam-se nas pores superficiais da pineal, estando ausentes na
pineal profunda. Estudando a composio orgnica das concrees da pineal de
gerbil, demonstraram a presena de carbohidratos, pela reao PAS-positivo,
assim como a protenas, pela digesto por tripsina. As reaes com alcian blue,
neste trabalho indicaram que a estrutura de carbohidrato um cido
mucopolissacardeo. A presena de lpides na matriz orgnica das concrees
foi demonstrada pelo mtodo de sudan black. JAPHA, J. L. et al. (1976)
ressaltam interessantes resultados que indicam o envolvimento da glndula
pineal no metabolismo de clcio (MENIGOT, M. et ai., 1970) e podendo ter

14
-

~

relao funcional com a glndula paratireide (KISS, J. et al., 1969; REITER,
R. J. et al., 1973) .
MLLER, M. et al., (1979) estudaram calcificaes em tumores
de pineal humana, utilizando tcnicas de microscopia eletrnica e difrao de

I
raio-x, evidenciando que estes tipos de calcificao so de padro amorfo,
diferindo da calcificao normal presente nas calcosferitas de pineal, que
caracterizam-se pelo padro de arranjo cristalino da hidroxiapatita .
BINKLEY, S. (1988) ressalta que a estrutura da pineal humana
caracterizada pela presena de muitas incluses calcreas. Em importante
publicao, este autor acentua aspectos relevantes: quanto ao
desenvolvimento de concrees calcreas, h relatos da presena destas
estruturas j dos 1 a 3 anos de idade, sendo que alta a incidncia em
humanos; as concrees tm um formato curioso de amora e so compostas por

hidroxiapatita e traos de elementos como magnsio e estrncio, comparvel
composio do esmalte dentrio; o grau de calcificao da pineal aumenta com
a idade .
SCHMID, H. A. & RAYKHTSAUM, G. (1995) realizaram
importante trabalho com pineais humanas de homens de idades de 14, 47, 62,
82 anos, procurando relacionar alteraes estruturais das concrees calcreas

15
-

de pineal com o envelhecimento. Utilizaram Microscopia eletrnica de
varredura e espectrometria de raio-x. Baseados em cortes seriados de uma
mesma concreo, com intervalos de 20 micrmetros e utilizando reconstruo
estereolgica, ficou evidenciada a estrutura de lamelas concntricas em forma
de anis. O nmero de lamelas concntricas aumenta com a idade .
Gradualmente, conforme aumenta o nmero de lamelas, estas se tomam mais
estreitas e tendem a sofrer ondulaes que do um aspecto de zig-zag .
Evidenciam-se diversas formas evolutivas, a comear por concrees de
morfologia esfrica, evoluindo at a forma de amora, devido agregao de
unidades, com propores que vo de 30 a 100 micrmetros. Tais resultados
so discutidos no trabalho quanto suas implicaes funcionais, dentre as quais
ressaltamos alguns aspectos discutidos por estes autores .
A estrutura orgnica das concrees da pineal contm ndoles,
proteoglicanas e glicoprotenas (PALLADINI, G. et ai., 1965; LUKASZYK, A .
& REITER, R. J., 1975) assim como carbohidratos e cidos
mucopolissacardeos (JAPHA, J. L. et al., 1976). Este fato, tomado juntamente
com a composio predominante de clcio-hidroxiapatita (ANGERVALL, L. et
ai., 1958; EARLE, K. N.,1965; KRSTIC, R., 1986), aponta para uma relao

16
-

patolgica ou fisiolgica entre a biossntese de melatonina, as etapas
bioqumicas clcio dependentes ( MORTON, D. J. & REITER, R. J., 1991) e o
estroma matricial da glndula pineal. A biomineralizao a manifestao
I.
fisico-qumica da programao gentica do envelhecimento do tecido pineal
humano KLOEDEN, P. E., 1990). Muitos sustentam que a mineralizao
reflete o envelhecimento e alteraes sequelares de processos patolgicos .

SCHMID, H. A. & RA YKHTSAUM, G. (1995), baseados em resultados
experimentais que demonstram alteraes na composio de clcio e fsforo,

dentro de uma mesma concreo, assim como variaes caractersticas
conforme a idade, coloca que estas mudanas representam processos de
remodelao da estrutura mineralgica dentro da mesma calcificao ao longo
da vida. Sustentam estes autores, que a calcificao da pineal uma expresso
da distrofia celular e est primria ou secundariamente associada ao processo
de envelhecimento. O arranjo molecular envolvido com a biomineralizao tem
sido estudado em vrias estruturas (conchas, dentina, ossos). A mineralizao
inicia-se intracelularmente a partir de vesculas de gordura guiada e
influenciada pelo citoesqueleto, assim como, extracelularmente pelas fibras
colgenas. Estas estruturas organizam a fase inorgnica numa geometria

17
I
e
'e
prec1sa- lamelar, colunar ou reticular; no entanto muitos passos destas
construes so ainda desconhecidos (MANN, S., 1993) .

I.I.
Distrofia de clulas da pineal secundrias deposio de clcio
nunca foi diretamente demonstrado. Observao de um incremento das
concrees em vacolos de pinealcios de gerbil sugerem fortemente que

clulas em estado hipersecretrio precedem transformaes distrficas

(JAPHA, L. et al., 1976; LUKASZYK, A. & REITER, R. J., 1975; WELSH,
M. G. & REITER, R. J., 1978 ). A formao das concrees calcreas deve se

dar secundariamente a estados celulares hipersecretrios, considerando-se que
a poro orgnica das concrees contm ndoles. O ncleo inorgnico de
carbonato de clcio e hidroxiapatita semelhante dentina nas propores
cristalinas e nos padres de difrao de raio-x. Considerando as mltiplas
similaridades entre as concrees da pineal e a dentina, ossos, esmalte
(BOCCHI, G. & VALDRE, G., 1993), o autor levado a concluir que as
concrees so um produto fisiolgico e no patolgico. Muitos processos de
biomineralizao , possivelmente, so engendrados por distrofia celular e
produtos de pedaos de membranas, que servem como estrutura para a
cristalizao (WUTHIER, R. E., 1973; BOSKEY, A., 1989). A distrofia
celular, por outro lado, no o nico mecanismo pelo qual os ncleos de

18

1e

minerao so formados. Este processo pode ocorrer pela interao
eletrosttica, estrutural e estereoqumica dada uma interface orgnica-
inorgnica. Como estudado na natureza a biomineralizao lamelar
universalmente observada por deposies episdicas sobre uma matriz

i e
polimrica extracelular (freqentemente fibras colgenas) que servem como
faces hidrofbicas onde protenas cidas so agregadas. A mineralizao ocorre
na interface entre protenas cidas e o ambiente aquoso (MANN, S., 1993). A
deposio seqencial de matria orgnica e inorgnica cria a aparncia de
bandas claras e escuras, lamelas ou crescentes. Devido ao fato da
mineralizao ocorrer por aposio entende-se a sucesso de estgios do
globular para as formas em amora. Assim, corroborando essa progresso,
observa-se um grande nmero de formas globulares em espcime de uma
amostra de um adolescente de catorze anos com uma mnima quantidade de
estratificao e formao ativa de cristais. SCHMID, H. A. &
RA YKHTSAUM, G. (1995) observam que a relao clcio-fsforo menor
nas camadas intermedirias entre o centro e a periferia. Esta mesma relao
mais elevada em posies que se distanciam do centro, da concreo, e isto
pode estar ligado ao fato de que os cristais so construdos dentro de formas
supramoleculares das hlices da fibras colgenas e que o crescimento do cristal

19
I
e

anisotrpico. Esta combinao de formas pode resultar num crescimento em
espiral. Isto corroborado pelos achados dos autores em que os ncleos de
,. cristalizao ocorrem num centro ao mesmo tempo que na periferia, sugerindo
a formao em espiral. Observa-se uma relao maior de clcio-fsforo em

I
idoso em comparao com espcime jovem. Este dado somado ao fato de que
as camadas de uma concreo tomam-se mais estreitas com a idade, sugerem
uma repetitiva aposio com um constante remodelar ou reconstruo de todas
as camadas. A observao de calcificaes precoces em muitas crianas, assim

como pouca calcificao em indivduos velhos como demonstrados por alguns
histologistas, como (HEIDEL, G.,1965; SCHARENBERG, K. & LISS, L.,
1965; WILDI, E. & FRAUCHINGER, E., 1965; TAPP, E. & HUXLEY, M.,
1972; GALLIANI, I. et al., 1989) pode ser explicado pelo fato do clcio
contido nas deposies pode aumentar sem se tomar extensivamente visvel.
SCHMID, H. A. & RA YKHTSAUM, G. (1995) enfatizam que
no h uma correlao positiva entre envelhecimento e depsito de clcio na
pineal (COMMENTZ, J. C. et al., 1986; BOJKOWSKY, C. J. & ARENDT, J.,
1990), nem tampouco a relao inversa entre nveis de calcificao e produo
de melatonina. A teoria do envelhecimento e falncia da pineal est sendo
mudada pela observao de que pinealcitos obtidos de humanos de todas as

20

idades so capazes de sintetizar melatonina em iguais nveis in vitro, quando
apropriado substrato fornecido. Similarmente estudos ps-mortem de pineais
humanas no revelaram mudanas nas enzimas necessrias para a sntese de
melatonina. A mais importante evidncia explicativa para a atenuao da
produo de melatonina relacionada ao envelhecimento, diz respeito a
alteraes ligadas ao avano da idade, em receptores beta adrenrgicos. O
clcio tem importante papel no metabolismo da melatonina, de tal sorte que
distrbios neste sistema poderiam acarretar a deposio clcica. Os autores
hipotizam que o pinealcito poderia chegar a uma exausto (distrofia), de tal

modo que a regulao de clcio poderia se desorganizar, semelhantemente ao
que ocorre no envelhecimento celular. Poderia ento haver uma precipitao
juntamente com steres fosfatos sempre presentes nos pinealcitos,
comprometendo a biossntese de melatonina .
HUMBERT, W. & PVET, P. (1995) estudaram glndula pineal
de ratos envelhecidos, enfocando a localizao intracelular de clcio e a
variao do nmero de pinealcitos. Descrevemos a seguir, alguns aspectos dos
resultados obtidos e tpicos importantes discutidos pelos autores. A glndula
pineal de ratos constituda de clulas parenquimatosas, pinealcitos claros e
escuros e clulas da glia. Os resultados da anlise por microscopia eletrnica

21

de transmisso demonstraram um relativo decrscimo de 12% no nmero de
pinealcitos de ratos envelhecidos ( clulas claras e escuras). Uma anlise
detalhada mostrou um decrscimo de 30% de pinealcitos claros tpicos,
conhecidos por serem pinealcitos funcionais, assim como um aumento de
140% de pinealcitos escuros observados no grupo de ratos velhos (28 meses)
em comparao com o grupo de ratos novos (3 meses). A demonstrao da
presena de clcio feita mor mtodo citoqumico. Assim, os dois tipos de
pinealcitos podem ser distinguidos com base na distribuio e concentrao
de clcio. Pinealcitos claros so caracterizados por poucos precipitados,
localizados principalmente nas mitocndrias, na forma de grnulos

intramitocondriais. Pinealcitos escuros, ao contrrio, so caracterizados por
numerosos precipitados, espalhados pelo citoplasma, assim como em
mitocndrias, retculo endoplasmtico, grnulos de lipofucsina e concentrados
de lipdios. Partculas eletrondensas formam redes (clusters) na matriz
mitocondrial, depsitos intranucleares de clcio, caracterizando sinais de
degenerao dos pinealcitos. A microanlise por raio-x demonstrou que os
precipitados, principalmente presentes nos pinealcitos escuros, contm clcio .
A presena de clcio demonstrada pelo mtodo de potssio-piroantimoniato
(KLEIN, C. et al., 1972) .

22
I

O estudo confirma atravs de microanlise por ra10-x, que
potssio substitudo por uma forma de complexo clcio-piroantimoniato
(TANDLER, C. J. et ai., 1970; SIMSON, I. A. V. & SPICER, S. S., 1975;
CHANDLER, J. A., 1977; BOWEN, I. D. & RYDER, T. A., 1978). Assim,
com os resultados microanalticos obtidos, os autores consideraram que os
precipitados encontrados no tecido pineal eram de clcio-antimoniato,
indicando alta probabilidade de localizao intracelular do clcio. Precipitados
de antimoniatos tem sido descritos em pinealcitos escuros, especialmente em
mitocndrias degeneradas, dropletes de lipdios, lipopigmentos, ncleo, e

concrees em crescimento, enquanto so menos freqentes em pinealcitos
claros, onde os precipitados localizam-se nas membranas celulares, como
descrito acima. A presena de concrees em pinealcitos escuros fala a favor
da formao de concrees a partir destes, numa ambincia rica em clcio. A
evidncia que h pouco precipitado de antimoniato em pinealcitos claros em
comparao aos escuros (PIZZARO, M. D. L. et ai., 1989), fala a favor de que
a membrana celular se torna enfraquecida, permitindo uma entrada em larga
monta de clcio na clula. Vesculas ricas em clcio e vacolos derivados de
mitocndrias presentes quase que exclusivamente durante a fase escura
parecem ser stios primrios de mineralizao , enquanto que a localizao

23

citoplasmtica do clcio ocorre somente durante a fase clara. Os autores,
analisando pineal de ratos em ultraestrutura e microanlise, procuram entender
o processo de biognese das concrees. Os autores colocam, na introduo do
trabalho , que as concrees calcreas em mamferos so especialmente
encontradas em gerbil e humanos. Segundo os autores, ainda que a via
intracelular seja o modo clssico de biomineralizao, a rota extracelular
parece ser uma via alternativa. HUMBERT, W. & PVET, P. (1995) referem
que, de acordo com seus resultados, nos estudos em ratos, que material
resultante da degenerao celular e produtos secretrios proteinceos podem
iniciar a formao de concrees pelo fato das mitocndrias e retculo
endoplasmtico estarem sendo considerados stios da regulao de clcio,
devido a grande concentrao de clcio e fsforo presentes na mitocndria
durante a mineralizao (WALZ, B., 1982; SOMLYO, A. P., 1984;
ALBERTS, B. et ai., 1983). Consideram assim, a possibilidade de ser esta
primeira fase da formao de hidroxiapatita. Tambm os autores observaram
vesculas e vacolos originados do retculo endoplasmtico, as quais tm a
mesma capacidade de concentrar clcio e fsforo, evidenciando por
microanlise por raio-x. Afirmam portanto que o retculo endoplasmtico tem
tambm importante funo na gnese das concrees. Igualmente, fibras

24

colgenas podem servir de stios de precipitao de cristais de hidroxiapatita e
portanto iniciadores de mineralizao. WUTHJER, R. E. (1973) em importante
reviso coloca que h duas escolas de pensamento estudando como o processo
de mineralizao induzido durante a calcificao de tecidos. H a viso de
que a mineralizao iniciada por ncleos heterogneos de colgeno,
isoladamente como nos estudos dos autores GLIMCHER, M. J. (1959);
GLIMCHER, M. J. & KRANE, S. M. (1968); NEUMAN, W.F. (1980), ou em
combinao com vrias protenas com as quais o colgeno se associa conforme

estudaram os pesquisadores ANDREWS, A.T. et al. (1967); HAUSCHKA,
P.V. et al. (1975); LINDE, A. et al. (1980); PRICE, P. A. et al. (1976);
TERMINE, J.D. (1981); VEIS, A. et al. (1981). H tambm a viso de que a
mineralizao um processo diretamente mediado por clulas no qual as
mitocndrias e vesculas matriciais servem como stios do processo de
calcificao. Estudaram as mitocndrias nesse processo os pesquisadores
BRIGHTON, C.T. & HUNT, R.M. (1976, 1978); MARTIN, J.H. &
MATTHEWS, J.L. (1970, 1971); SHAPIRO, I.M. & GREENSPAN, J.S .
(1969), e as vesculas matriciais ( ANDERSON, H.C., 1969; BAB, I. et al.,
1979; BERNARD, G.W., 1972; BONUCCI, E., 1971; EISENMAN, D. R. &
GLICK, P.L., 1972; SAYEGH, F.S. et al., 1974) .

25

CIPOLLA NETO, J. (1996) estudando o metabolismo da pineal
em roedores ressalta o envolvimento de influxo intracelular de clcio. O autor
afirma que a ativao dos receptores alfa 1, em ratos, promove um aumento do
,.
clcio intracelular, dependente tanto de um aumento do influxo de clcio,
quanto da liberao de clcio de estoques intracelulares. H dados mostrando
um papel potenciador do complexo clcio-calmodulina na ativao da enzima
adenilatociclase, fato que poderia estar ocorrendo tambm na glndula pineal .
O clcio parece exercer um papel importante nos processos de transcrio e

traduo gnicas e sntese da prpria N-acetiltransferase .
ARENDT, J. (1995) explica que o primeiro passo para a formao
da melatonina o aporte de triptofano da dieta. A absoro de triptofano pelo
crebro dependente dos mecanismos de transporte atravs da barreira
hemato-enceflica. O triptofano transformado em 5-hidroxitriptofano pela
triptofano-5-hidroxilase, uma enzima mitocondrial. Ocorre a descarboxilao
do 5-hidroxitriptofano, originando a serotonina, pela enzima citoplasmtica
aminocido descarboxilase aromtico. Esta enzima largamente distribuda nos
tecidos e essencial para a sntese de neurotransmissores catecolamnicos. A
enzima N-acetil transferase (NAT) promove a N-acetilao da serotonina. A
NAT est presente no citoplasma do penealcito e tambm na retina

26

(arilalquilamina N -acetil transferase ), apresentando propriedades especficas,
distintas de sua atuao em outros tecidos. O passo final a 0-metilao da N-
acetil serotonina, pela hidroxiindol-0-metiltranferase (IDOMT), originando a
melatonina. A variao da serotonina na pineal durante o dia, assim como os

I
nveis de HIOMT demonstram a primeira evidncia da atividade rtmica
metablica da pineal, com incremento da atividade desta enzima no perodo da
noite e supresso durante o dia. Estes fatores fundamentam o conceito de que a
pineal um transdutor fotoneuroendcrino .
YAMADA, N. et al. (1996) estudaram radiologicamente
calcificaes cerebrais atravs de ressonncia nuclear magntica, utilizando
GRE (gradient-recalled echo). O objetivo era promover um modelo para
diferenciao radiolgica entre hematomas e calcificaes cerebrais. Assim,
detectou em 13 pacientes com calcificaes em pineal e plexo coriide (dentre
outros resultados referentes a outras reas cerebrais, em mais ampla casustica),
que estas calcificaes tm caractersticas diamagnticas mais acentuadas que a
gua e o tecido cerebral. Estas caractersticas ligadas a campos magnticos
foram estudadas por SEMM, P. et al. (1980) , no que diz respeito aos efeitos
do campo magntico terrestre e a atividade eltrica de clulas da glndula
pineal . Os pesquisadores concluem que a atividade deprimida pela aplicao

27

de uma fora magntica, e restaurada quando a fora revertida. Observam
tambm que outras estruturas cerebrais (colculos superior e inferior, corpo
caloso e epitlamo) em idnticas condies experimentais, no tiveram reao
I.
~

alguma aplicao de fora magntica, em experincias realizadas em guinea
.
pig. Ressaltam ainda que o sistema nervoso simptico tambm sofre influncias
~
de campos magnticos, assim o efeito na pineal poderia ser indireto. REITER,
R. J. (1991) em interessante estudo sobre o assunto, conclui que campos
magnticos e eltricos alteram o metabolismo de indolamina na pineal, mas
tais alteraes tambm poderiam vir por vias indiretas .
A glndula pineal e seu principal hormnio, a melatonina,
implicado na regulao dos ciclos biolgicos, tem importncia fundamental em
medicina, seja na compreenso do ciclo reprodutivo, na farmacologia e
compreenso da ritmicidade de atuao de medicamentos no organismo, os
ciclos hormonais e as alteraes psiquitricas decorrentes de distrbios dos
ritmos biolgicos, como a insnia e a depresso. Em Interessante estudo de 26
casos de pacientes com sndrome de Down, por ARAI, Y. et al. (1995),
procura-se ligar a presena de calcificaes intracranianas (inclusive pineal e
plexo coriide) com sintoma de envelhecimento. SANDYK, R. (1993) busca
relacionar calcificao da pineal e esquizofrenia crnica. Seus achados sugerem

28

que tanto danos dienceflicos como calcificao da glndula pineal podem estar
relacionados com desorganizao do pensamento na esquizofrenia, assim como
com um prognstico desfavorvel.

Mtodos anatmicos de estudo da Pineal
BINKLEY, S. (1988) ressalta que a pineal pode ser estudada pela
microscopia de luz utilizando tcnicas histolgicas convencionais. Aps
preparo e fixao em formalina, soluo de Boin ou glutaraldeido; em bebio
em parafina, seco com micrtomo ou ultramicrtomo e colorao, por
exemplo, com hematoxilina-eosina. Muitas pineais so pequenas e requerem
algumas mudanas tcnicas no preparo. Tambm, as concrees podem
dificultar os cortes ao micrtomo. Quanto microscopia eletrnica BINKLEY,
S. (1988) ressalta a importncia da varredura na anlise da anatomia da
superficie, estudo da vasculatura e concrees da glndula pineal.
GOLDSTEIN, J. I. et al. (1992) explicam que alm da possibilidade da anlise
tridimensional, com efeitos de contrastes dados por eltrons secundrios ou
retroespalhados, a microscopia eletrnica de varredura pode estar acoplada ao
espectmetro de raio-x por disperso de energia (EDS), possibilitando a

., 29

microanlise quantitativa de elementos minerais, como o caso das concrees
da pineal .
Estes estudos nos induzem necessidade de pesquisas, dada as
possibilidades de aplicao mdica, para uma melhor compreenso do padro

e

I
evolutivo da formao das concrees , o envolvimento celular, localizao das
concrees na pineal, natureza qumico e estrutural e estudo do padro de
cristalinidade do material, na glndula pineal humana .

30

'-

-
2. PROPOSIAO

31

-

Proposio:

Em face dos dados encontrados na literatura consultada, propomos analisar:

1. Os aspectos histolgicos do corpo pineal empregando a colorao de
hematoxilina-eosina .
2. Os aspectos tridimensionais do corpo pineal empregando vrios mtodos
em microscopia eletrnica de varredura .
3. Os aspectos obtidos em microscopia de varredura por emisso de raio-x
e difrao de raio-x .

32
-

3. MATERIAL E MTODOS

33
te
' .

MATERIAL E MTODOS

,e O material consiste de 8 pineais de cadveres humanos coletadas
junto ao Servio de Verificao de bito da Faculdade de Medicina da USP .
Este material foi distribudo da seguinte forma: 2 pineais humanas
sem identificao foram utilizadas em microscopia de luz; 2 pineais para
microscopia eletrnica de varredura, sendo que a segunda amostra de cadver
humano com idade de 61 anos, masculino, branco, com causa mortis por
tromboembolismo pulmonar tendo como patologia de base neoplasia de pulmo
(foi utilizado tambm o plexo coriide adjacente a esta glndula, para
microscopia eletrnica de varredura); 2 pineais para EDS, sendo a primeira de
cadver humano com idade de 80 anos, feminino, branco, com causa mortis de
infarto agudo do miocrdio e a segunda com idade de 59 anos, feminino, parda,
com causa mortis por insuficincia respiratria; 2 pineais para difrao de raio-
x, a primeira correspondente a 31 anos, masculino, branco, com causa mortis
de infarto hemorrgico do tronco cerebral, tendo como patologia de base

34

hipertenso arterial sistmica, sendo a segunda amostra de 28 anos, masculino,
sem especificao de cor, com causa mortis de infarto agudo do miocrdio .

1- MICROSCOPIA DE LUZ:
I. Aps a retirada do encfalo 2 glndulas pineais foram coletadas e
fixadas em soluo de formalina a 1Oo/o por perodo de 48 horas. Em seguida

I e
as peas foram lavadas em gua corrente, desidratadas em srie crescente de
lcoois e submetidas a tratamento de rotina para incluso em parafina e

realizao dos cortes histolgicos .
Foram realizados cortes de 07 J.llil que foram corados pelo mtodo
de Hematoxilina-Eosina. As lminas foram observadas em microscpio
Olympus do Departamento de Anatomia do Instituto de Cincias Biomdicas
da Universidade de So Paulo. As lminas selecionadas para documentao
foram fotografadas em fotomicroscpio Zeiss do Departamento de Anatomia
do ICBIUSP .

2 - MICROSCOPIA ELETRNICA DE VARREDURA
Aps a retirada do encfalo, 2 glndulas pineaia foram coletadas e
fixadas em soluo de Karnovsky modificada, durante 24 horas. Aps esta fase

35

o material foi lavado em soluo tampo fosfato de sdio, 0,1 M (ph 7,2)
sendo colocado posteriormente em soluo de cido tnico 2% durante 2 horas
a temperatura ambiente. Em seguida o material foi lavado em soluo tampo
,.
'e
fosfato de sdio 0,1 M ( ph 7,2) e ps fixado em tetrxido de smio durante 2
I
horas a 4 oC. A desidratao foi realizada em srie ascendente de lcoois e a
secagem foi feita em aparelho de ponto crtico Balzers, CPD-030, utilizando
C02 lquido. As peas foram montadas em bases metlicas e cobertas com
ouro em aparelho Iom Sputter Balzer - SCD- 040 e posteriormente analisadas
em microscpio eletrnico de varredura Jeol, JSM- 6100 do ICB-USP. Parte
do material, aps fixao, foi colocado em nitrognio lquido e fraturado para
evidenciao das concrees calcreas. Em seguida foi empregada a mesma
metodologia acima mencionada para observao ao microscpio eletrnico de
Varredura .

3 - MICROANLISE E DIFRAO DE RAIO-X
Para anlise dos cristais 2 glndulas pineais foram digeridas em
soluo de NaOH a 10% durante 24 horas. Em seguida o material foi lavado
em gua destilada durante 72 horas para completa liberao das concrees .

36

-

Aps o isolamento dos cristais, os mesmos passaram por um processo de
secagem temperatura ambiente .
Para o preparo das concrees, para visualizao e microanlise ao
microscpio de varredura por espectroscopia de raio-x, foi providenciado o
polimento do material, realizado por equipe tcnica da Faculdade de Geologia
da USP. A seo polida consistiu de impregnao do material em resina epox
com posterior polimento do mesmo com pastas de diamante em quatro sees .
A primeira com pasta de partculas de diamante com 15 micrmetros de
dimetro. Depois progressivamente com pastas mais finas at partculas de
diamante com 1 micrmetro de dimetro .
As concrees polidas so analisadas em dois aparelhos
acoplados:
a. Microscpio Eletrnico de Varredura por Eltrons Retroespalhados -
Microscpio marca Leica - modelo S 440 do Laboratrio de Tecnologia da
Escola Politcnica da USP - Engenharia de Minas. Para esta anlise as lminas
com cristais polidos so recobertas com finas camadas de carbono, por
evaporao de carbono .
b. Microanlise - Espectrmetro de Raio X por disperso de energia (EDS) .
Este aparelho acoplado ao Microscpio Eletrnico de Varredura por Eltrons
37
---

Retroespalhados permitindo a anlise da composio qumica do material. Para
estudo da cristalinidade do material assim como caracterizao do material, foi
utilizado um Difratmetro de Raio X Marca Phillips MPD 1880 - PW 171 O
com tubo de cobre (gerador de Raio X). O material foi prensado com mbolo
manual para minimizar problemas de orientao preferencial, permitindo com
que os planos dos cristais fiquem aleatrios, utilizando a fidelidade dos
resultados. A amostra, para este procedimento, foi montada sobre uma lmina
de vidro circular com 2,5 em de dimetro e fixada com cola de estrutura amorfa
(no interfere nos resultados da difrao) .

38

4. RESULTADOS

39

RESULTADOS

Os resultados obtidos na presente investigao esto divididos em
trs partes:

1. Microscopia de luz
Na anlise das lminas histolgicas verifica-se a estrutura da

glndula pineal constituda por um parnquima celular associado a trabculas
contendo fibras conjuntivas (Fig. 1) .
Nota-se a distribuio de grnulos de mruor densidade e de
colorao mais intensa que correspondem s concrees calcreas de formas
circulares e em mrula (Fig. 2) .
Observamos que na regio onde essas concrees esto presentes
existe uma menor densidade do componente celular. Pode-se observar
formaes em diversos estgios, com vrios grupos de lamelas concntricas
agrupadas. Em posio satlite, estruturas com ncleo nico rodeado por
formaes puntiformes com tendncia agregao (Fig. 1 e 2) Rodeando as

40

formaes observa-se clulas de ncleo oval e citoplasma com expanses
dendritiformes, que podem corresponder s clulas gliais ou penealcitos (Fig .
1) .
As concrees observadas apresentam-se circunscritas por uma
rede de clulas e fibras que compem um alvolo (Fig. 2) .
Uma intensa agregao de concrees clcicas so observadas no
interior do parnquima circundado pelos feixes de tecido conjuntivo. Em reas
adjacentes, nota-se as concrees isoladas de vrios dimetros (Fig. 3). Em

maior aumento da figura 3 pode-se identificar os agrupamentos de formaes
clcicas constituindo estruturas mais complexas (Fig.4). A Fig.5 revela
estruturas contendo grande quantidade de clulas correspondente ao tecido
mais profundo do corpo pineal. Na parte superficial pode-se notar
essencialmente as concrees clcicas de vrios tamanhos envoltas por fibras
colgenas entremeadas de clulas. A superficie da glndula pineal humana
observada ao microscpio eletrnico de varredura, observa-se uma forma
esfrica revestida por tecido fibroso, contendo trs folhetos (Figs. 6 e 7). Na
superficie do corpo pineal observa-se os relevos de diferentes alturas,
mostrando as elevaes de concrees subjacentes. No tecido conjuntivo
observa-se os trajetos sinuosos de pequenos vasos (Fig.8). A estrutura interna

41

da glndula pineal mostra-se constituda por parnquima celular e tecido
conjuntivo rico em fibras (Fig.9). As concrees calcrias esto localizadas no
parnquima da glndula pineal sendo mais abundante na regio perifrica
(Fig.9). Em maior aumento a Fig.1 O revela as concrees calcrias constitudas
por grupamentos de pequenos grnulos tendo a regio central fundida, como
um corpo slido. A distribuio destes grnulos na superficie das concrees
est arranjada assemelhando-se a pequenas amoras (Fig.1 0). Nas reas
adjacentes a esses grupamentos verifica-se a presena de concrees menores
em grande quantidade (Figs. 9 e 10). A superficie de concreo calcria
revestida por feixes de fibras colgenas (Fig.11 ). Em maior aumento pode-se
notar nitidamente os feixes de fibras colgenas orientados e percorrendo no

interior do sulco entre as projees calcrias arredondadas (Fig.12). Nas reas
adjacentes, observa-se as clulas com as suas expanses citoplasmticas
(Fig.12). Na superfcie da poro calcria, aps a remoo do tecido
conjuntivo, observa-se formaes em aspecto de circunvoluo cerebral (Fig .
13). Na superfcie de fratura por congelao por Nitrognio lquido, houve a
separao de tecido conjuntivo, o que revelou as formaes superficiais
granulares e as pores internas da estrutura calcria (Fig.l4). Ao lado das
estruturas calcrias nota-se os feixes de fibras colgenas e capilares sangneos

42

(Fig.14). As formaes calcrias fraturadas transversal ou obliquamente
mostram as estruturas macias de tecido mineralizado e a cpsula de tecido
conjuntivo envolvendo cada uma das formaes (Fig.15). Nas reas adjacentes
fratura, a formao clcica revela as diferentes elevaes correspondentes s
circunvolues e o tecido conjuntivo adjacente (Fig. 16). Em maior aumento,
da Fig. anterior nota-se nitidamente as superficies da formao calcria e a
camada de tecido conjuntivo da cpsula (Fig.17). Aps a remoo das

concrees calcrias observa-se as cavidades que as alojavam (Fig. 18). Na
superficie interna mostra os contornos superficiais de cada uma das projees
calcrias (Fig. 18). Nas reas adjacentes observa-se as concrees fraturadas e
estruturas conjuntivas (Fig. 18). A figura 19 mostra a superficie interna da
cavidade aps a remoo da concreo, identificando uma lamela calcria
aderida superficie. Nas reas adjacentes nota-se as superficies das concrees
e feixes de fibras colgenas. Em maior aumento revela a superficie interna da
lamela (Fig.20). A superficie interna, em maior aumento, revela nitidamente a
estrutura calcificada a lamela aderida cavidade (Fig.21 ). Aps a digesto a
superficie revela a presena de fibras colgenas espessas (Fig.22). Aps a
fratura da concreo clcica, nota-se a formao interna evidenciando as
lamelas concntricas (Fig.23). Cada uma das projees clcicas de uma

43
--

formao maior, possuem a estrutura lamelar evidenciada nas Figs. 23 e 24. A
Fig. 24 mostra nitidamente a caracterizao das lamelas nas duas superficies de
fratura. Na Fig. 25 observa-se em maior aumento o padro de lamelas
concntricas da poro superficial da projeo clcica. O detalhe do ncleo
interno de cada projeo clcica notada na Fig. 26, como tendo uma lamela
em aspecto tridimensional. Ao microscpio eletrnica de varredura pode-se
detectar a presena de microvilosidades plexo coride (Fig. 27) .

2 - Microscopia eletrnica de varredura com espectrometria
de Rx por disperso de energia (EDS) .
A microanlise revelou a presena de clcio, fsforo e oxignio
em quantidade expressiva nas concrees, alm de sdio, magnsio e alumnio
em quantidade residual (tabelas numeradas de 1 a 12). Foi constatado que o
oxignio presente est associado ao clcio e ao fsforo formando xidos, e no
na forma livre. Pode-se constatar uma relao de 2/1 na composio
clcio/fsforo, sendo que estes nveis se mantm na superficie ou no centro das
concrees analisadas. Aspectos morfolgicos podem ser observados: a Fig. 28
mostra diversos padres de concrees uni e multinucleadas. Em maior

44
-

aumento (Fig. 29), focalizamos uma das concrees, a qual apresentou
rachadura que se formou durante a observao. A Fig. 30 mostra uma
aproximao aps teste com aumento da incidncia do feixe de eltrons com o
objetivo de reproduzir novamente o fenmeno da rachadura. Observou-se que o
feixe incidido no reproduziu o fenmeno, apenas petfurando a concreo,

tendo a rachadura possivelmente outra causa a ser discutida. A Fig. 31 mostra
concreo multinucleada com padro pouco definido .
A Fig. 32 mostra o aspecto de acavalamento
de camadas concntricas, na forma de zig-zag, correspondendo
a concreo de uma amostra de pineal de idade senil. As Fig. 33 e 34
apresentam aspecto multinucleado e os padres lamelados visveis nos lbulos .
O contraste das reas claras e escuras em realidade no se apresentam na
intensidade mostrada na figura, pois esta objetiva a microanlise quantitativa;
portanto, o contrate acentuado apresentado um artefacto da tcnica utilizada .
A micrografia Fig. 35 mostra aspecto com inmeros poros correspondentes a
reas ocupadas por material orgnico digerido no preparo da amostra .
Observamos em inmeras micrografias, concrees com as rachaduras, devido
ao artefato de tcnica. A Fig. 36 mostra uma concreo uninucleada com

45

destruio, por artefato de tcnica, do material interior e preservao do
aspecto da superficie, que se apresenta bem delineada .
As tabelas numeradas de 1 a 12 mostram quantitativamente os
elementos constituintes das concrees, sendo que em mdia a relao Ca/P se
comporta de 2/1 tanto em regio central como em regio perifrica. Os
elementos magnsio, aluminio e sdio, e em algumas amostras (tabela 6) traos
de ferro apresentam-se sempre em quantidades residuais. O oxignio presente
em quantidade significativa apresenta-se na forma de xido, como podemos

constatar nas tabelas 1 e 2 .

3 - Difrao de Rx
A anlise mostra picos caractersticos das ondas de Bragg
(grficos 1 e 2), evidenciando a presena de formaes cristalinas .
Comparando com o padro difratogrfico da apatita no grfico conjugado
(linhas verticais), demonstramos que as concrees calcreas so cristais de
apatita. Os picos so pouco intensos e muito largos, indicando que o material
de baixa cristalinidade. No entanto, fatores relacionados ao preparo da amostra,
como a pouca quantidade do material analisado, tamanho do gro e fatores
instrumentais, tambm dificultam os resultados do difratmetro. A pouca

46
-

quantidade da amostra se d pelo fato de termos colocado para a anlise
concrees de pineal com caracteristicas individuais. O procedimento
importante para se verificar o grau de cristalinidade individual das concrees
em pineais humanas .
Os grficos obedecem equao de Bragg, n.L=2d.sen0, onde
"n" representa o nmero de planos, "L" o comprimento de onda, "d" distncia
entre os planos paralelos sucessivos e "O" o ngulo de incidncia e reflexo do

feixe de raio x. Nos grficos, as ordenadas informam a intensidade relativa dos
picos, e as abcissas o ngulo "O". Os picos relacionam-se aos planos
cristalinos caractersticos da amostra analisada. A presena destes picos
confere que o material analisado obedece equao de Bragg e comprova ser
de estrutura cristalina .

47
Fig.l- Microscopia de luz. Aspecto geral da glndula pineal humana mostrando
os grnulos (*)e tecido conjuntivo ( setas). 1OOX Colorao : H-E
48
-
Fig.2- Microscopia de luz. Em maior aumento, revela os grnulos (*) e tecido
conjuntivo circundante. 300X Colorao : H-E
49
Fig.3- Microscopia de luz. Mostra a distribuio de concrees calcreas (*) e
tecido conjuntivo (setas). 150X Colorao: H-E
50
-
Fig.4 -Microscopia de Luz. Mostra em mator aumento, agrupamento de
formaes clcicas. 200X Colorao: H-E
51
'-
...

,.. . . l
Fig.5 - Microscopia de Luz. Mostra agrupamento de concrees clcicas (*) e
tecido conjuntivo contendo as clulas (setas). lOOX Colorao:H-E .
52
Fig.6 - Microscopia eletrnica de Varredura. Observa-se as concrees
clcicas envoltas pela capa de tecido conjuntivo (setas). 440X
53
Fig.7- Microscopia eletrnica de varredura. Mostra uma concreo ca1crea,
em maior aumento, evidenciando os folhetos de tecido conjuntivo envolvente
(setas). 1OOOX
54
-
Fig.8 - Microscopia eletrnica de varredura. Revela a superfcie do corpo
pineal evidenciando os capilares (setas). 390X
55
-
Fig.9 -Microscopia eletrnica de varredura. Aspecto geral da superfcie de
fratura do corpo pineal, mostrando a distribuio das concrees. 1OOX
56
Fig.l O -Microscopia eletrnica de varredura. Mostra as concrees calcreas
maiores (setas maiores) e menores (setas menores) e tecido conjuntivo
adjacente (*). 300X
57
-
Fig.ll - Microscopia eletrnica de varredura. Mostra os detalhes de concrees
revestidas por feixes de fibras colgenas. 800X
58
-
..
-r.. :
Fig.l2 - Microscopia eletrnica de varredura. Em maiOr aumento revela a
superficie de uma concreo calcrea (*)e feixes de fibras colgenas. 1800X
59
-
Fig.l3 - Microscopia eletrnica de varredura. Nota-se as formaes superficiais
de concrees em aspecto de circunvoluo cerebral. 21 OOX
60
Fig.14 - Microscopia eletrnica de varredura. Aspecto geral da superfcie do
corpo pineal, evidenciando as formaes calcreas (seta maior), tecido
conjuntivo(*) e capilares (seta menor). 300X
61
-
Fig.l5 -Microscopia eletrnica de varredura. Mostra o aspecto de uma fratura
do corpo pineal com vrias formaes calcreas (*). A cpsula de cada
formao evidenciada (seta). 390X
62
Fig.l6 - Microscopia eletrnica de varredura. Em maior aumento, nota-se a
superfcie fraturada de uma concreo e tecido conjuntivo adjacente. 3300X
63
-
Fig.l7 - Microscopia eletrnica de varredura. Em maior aumento, revela uma
projeo lateral da concreo (*) e tecido conjuntivo adjacente constituindo a
cpsula (seta). 8000X
64
-
Fig.18 - Microscopia eletrnica de varredura. Mostra o aspecto geral de uma
superficie de fratura, evidenciando as formaes calcreas (*) e as lojas (**).
160X
65
-
Fig.l9 - Microscopia eletrnica de varredura. Evidencia as superficies das
formaes calcreas e o fundo da cavidade revestido por fibras colgenas (*).
600X
66
-
Fig.20 - Microscopia eletrnica de varredura. Mostra em maior aumento o
fundo da cavidade evidenciando espessos feixes de fibras colgenas. 1300X
67
Fig.21 - Microscopia eletrnica de varredura. Mostra em maior aumento, a
estrutura calcificada aderida lamela (*). 4500X
68
-
Fig.22 - Microscopia eletrnica de varredura. Mostra em maior aumento a
disposio de feixes de fibras colgenas do fundo da cavidade (*). 650X
69
Fig.23 - Microscopia eletrnica de varredura. Mostra wna superficie da
concreo clcica evidenciando as estruturas internas. 3900X
70
Fig.24 - Microscopia eletrmca de varredura. Em maior aumento, evidencia as
formaes lamelares (setas). 6900X
71
Fig.25 - Microscopia eletrnica de varredura. Mostra em maior aumento, a
disposio de Iam elas da estrutura calcrea. 10500X
72
Fig.26 - Microscopia eletrnica de varredura. Mostra em maior aumento, os
detalhes do ncleo interno da formao calcrea. 22500X
73
-
Fig.27 - Microscopia eletrnica de varredura. Mostra as vilosidades do plexo
coriide. 1200X
74

11
Fig.28 - Microscopia de varredura por emisso de raio X, mostra concrees
11 calcreas de mltiplas formas .

11
11
"
"
"
"
I
I 75
I
I
,
,
,
-
Fig.29 - Microscopia de varredura por emisso de raio X, aproximao de wna
das concrees demonstrando a agregao de mltiplas unidades de lamelas
concntricas formando lbulos. Observa-se rachadura se formando durante a
observao ao microscpio.
76
l qpao provocada pelo feixe de eltrons~
teupo de exposlcao - ses
condices de operao 20KV e 9.SnA
Fig.30 - Microscopia de varredura por emisso de ra10-x, aproximao
demonstrando o padro de artefato por perfurao causado pelo feixe de
eltrons. As rachaduras tm portanto outra origem, no sendo causada pela
incidncia do feixe eletrnico.
77
Fig.31 - Microscopia de varredura por emisso de raiO X, mostrando
concrees calcreas com lamelas concntricas.
78
Fig.32 - Microscopia de varredura por emisso de raio X, detalhes de uma
concreo calcrea mostrando lamelas concntricas em zig-zag.
79
MICROANLISE
correspondente Fig. 32
TABELA 1 SUPERFCIE (seta)
Elemento Percentual Erro %xido Ca i P

Ca 38.850 .209 54.359 2.1
p 18.453 .141 42.287
Mg .637 .051 1.056
Na 1.396 .098 1.881
o 40.335
Al I K I Cu I F e I Zn I Mo- Desprezvel
TABELA 2a - PARTE ESCURA (*)

Ca 38.683 .2 12 54.359 2.1
p 18.199 .144 41.705
Mg .302 .067 .501
Na 2.443 .111 3.294
o 40.027
Al I K I Cu I F e I Zn I Mo- Desprezvel
TABELA 2b - PARTE CLARA(**)
Elemento Percentual Erro o/o xido Ca i P

Ca 38.700 - 54.199 2.0
p 19.001 .129 42.144
Mg .118 .056
Na 2.170 .095
o 40.152 -
Al .152 .045
K I Cu I Fe I Zn I Mo - Desprezvel
80
Fig.33- Microscopia de varredura por emisso de raio X, mostrando concreo
multilobulada apresentando lamelas concntricas em regies lobulares. As
rachaduras so artefacto de tcnica.
81
MICROANLISE
TABELA 3 - PARTE EXTERNA COM LAMELA (seta)

Ca 38.770 .188 no analisado 2.2
p 17.600 .126
Mg .249 .054
Na .751 .081
o 41.517 .534
A1 .123 .045
A1 I K I Cu I F e I Zn I Mo- Desprezvel
TABELA 4 -PARTE EXTERNA SEM LAMELAS (*)

p 18.086 .124
Mg .257 .051
Na .498 .073
o 40 .841 .523
A1 .115 .042
K I Cu I F e I Zn I Mo - Desprezvel
TABELA 5 - PARTE INTERNA (**)
Elemento Percentual Erro o/o xido CaiP

p 18.283 .121
Mg .239 .047
Na .602 .067
o 39.345 .496
A1 .123 .039
K I Cu I F e I Zn I Mo- Desprezvel
82
Fig.34- Microscopia de varredura por emisso de raio X, mostrando concreo
cujas reas mais claras ou mais escuras indicam diferena de concentrao de
clcio. A intensidade da variao cromtica no corresponde pouco
significativa diferena detectada na anlise qumjca das partes estudadas.
83
MICROANLISE
TABELA 6 - PARTE EXTERNA (seta)
Elemento Percentual Erro o/o xido Ca i P

Ca 40 .287 .196 no analisado 2.2
p 18.047 .129
Mg .199 .052
Na .487 .075
o 39.422 .541
Al .106 .044
TABELA 7 - PARTE TNTERNA (*)
Elemento Percentual Erro % xido Ca i P

Ca 41.156 .190 no anaJjsado 2.2
p 18.426 .125
Mg .152 .050
Na .508 .071
o 39.209 .521
Al .099 .042
84
Fig.35 -Microscopia de varredura por emisso de raio X, detalhe de estrutura
porosa da concreo. Ainda assim, observamos ]ameias concntricas.
85

MICROANLISE

TABELA 8 - PARTE EXTERNA II, AI (seta maior)
Elemento
Ca
Percentual
39.012
Erro
.192
%xido
no analisado
CaiP
2.2
p
Mg
18.024
.217
.129
.055
Na
o
.673
41.345
.079
.553
Al
Fe
.103
.202
.046
.084
Zn
KI
.306
Cu I Mo - Desprezvel
.144

TABELA 9 - PARTE EXTERNA II, AI(*)
Elemento Percentual Erro %xido CaiP
Ca
p
45.956
19.408
.225
.143
no analisado 2.4
Mg
Na
.242
.451
.054
.076
o
Al
33.222
.145
.575
.047
Fe .269
K I Cu I Zn I Mo - Desprezvel
.097

86

TABELA 10 - PARTE EXTERNA II, AI(**)
Elemento Percentual Erro %xido CaiP
Ca
p
41.768
18.783
.196
.129
no analisado 2.2
Mg
Na
.208
.547
.051
.073
o
Al
37.904
.105
.535
.043
Fe .276
K I Cu I Zn I Mo - Desprezvel
.082

TABELA 11 - PARTE INTERNA (seta menor)
Elemento
Ca
Percentual
38.774
Erro
.170
%xido
no analisado
CaiP
2.1
p
Mg
18.575
.146
.115
.046
Na
o
.784
40.919
.070
.484
Al .136 .039
K I Cu I Fe I Zn I Mo - Desprezvel

87
Fig.36 - Microscopia de varredura por emisso de nuo X, detallie de uma
concreo mostrando destruio da parte interna por artefato de tcnica.
88
-

MICROANLISE


-- TABELA 12a - PARTE INTERNA (seta)
-- Elemento Percentual Erro %xido Ca i P
-- Ca
p
37.577
18.528
.178
.122
no analisado 2.0
-- Mg
Na
.196
.718
.052
.077
---
o
AI
Fe
42.581
.085
.208
.509
.043
.075
-- K I Cu I Zn I Mo - Desprezvel
-
-- TABELA 12b- PARTE EXTERNA (*)
-- Elemento Percentual Erro % xido Ca i P

- Ca
p
Mg
38.774
18.575
.146
.170
.115
.046
no analisado 2.1
Na .784 .070
o 40.919 .484
AI .136 .039
K I Cu I F e I Zn I Mo - Desprezvel

--
-
-- 89
--
-
I-
-
!AMostra: ICB- 3991 12-Feb-1998 18:31

12888.---------------------------------------------------------------~
[countsJ
18888
Apatita
8888
6888
4888
2888
16 28 38 48
ICB-3991.SH 158876.RP
Grfico 1- Difrao de raio X. O grfico representa o padro de difrao de
raio X de uma amostra de concrees de uma glndula pineal individualizada.
Os picos pouco delineados e largos sugerem material com baixo cristaJinjdade.
Em linhas verticais, o padro prprio de difrao da apatita na natureza.
90
-
IA111ostra: ICB - 3714 12- Feb-1998 16:35

14466~------------------------------------------------------------~
[countsl
16666
Apatita
6466
3666
1666
466
ICB- 3714 . SM 156876.RP
Grfico 2 - Demonstra picos ainda menos intensos e delineados que o grfico
1, indicando menor cristalin.idade deste material.
91

5. DISCUSSO

92

DISCUSSO

Da estrutura da glndula pineal humana pudemos analisar
aspectos anatmicos do corpo pineal, como as cpsulas conjuntivas envolvendo
as concrees, os alvolos (cavidades no interior das cpsulas) e vasos
sangneos justapostos pia-mter em rea marcada pela presena de
concrees. As cpsulas so compostas por clulas conjuntivas e fibras, como

pudemos observar nas lminas de microscopia ptica, consistindo de mltiplas
camadas conjuntivas concntricas, aderidas superfcie das concrees
observadas microscopia eletrnica de varredura. As lamelas calcreas da
superfcie das concrees deslocadas dos alvolos, se destacam do corpo das
mesmas e permanecem aderidas rede conjuntiva da cavidade alveolar .
Histologicamente observamos aspectos do parnquima, tecido conjuntivo e
concrees calcreas. No que diz respeito ao parnquima no foi possvel a
discriminao dos tipos celulares constituintes, como pinealcitos claros e
escuros, clulas da glia, neurnios e mastcitos, j que a microscopia ptica
no permite uma definio clara destes tipos celulares quando utilizamos a

93

colorao de H.E. (TAPP, E. & HUXLEY, M., 1972). No entanto foi possvel
discriminar regies com predomnio de clulas e fibras conjuntivas daquelas
com predomnio de clulas parenquimatosas. Na microscopia ptica ficou
evidente que as concrees calcreas esto presentes em reas com
predominncia de tecido conjuntivo, estando ausentes em reas
parenquimatosas, observada em pineal profunda. A microscopia de varredura
demonstra que as reas com presena de concrees so regies mais
superficiais, preservando a pineal profunda, onde esto ausentes. Os mtodos
utilizados para estudo da estrutura da pineal favoreceram a observao

predominantemente do tecido conjuntivo e principalmente das concrees
calcreas. A microscopia eletrnica por espectrometria de raio-x por disperso
de energia (EDS) permitiu o estudo da composio das concrees e uma viso
da morfologia interna destas estruturas. Com a difrao de raio-x identificamos
a estrutura do arranjo atmico dos elementos que compe as concrees,
permitindo a verificao do grau de cristalinidade do material. Assim, os dados
do presente trabalho demonstram os aspectos da presena de formaes
calcreas na glndula pineal humana, conforme detectado por
KITAY, J. & ALTSCHULE, M. (1954) e HEIDEL, G. (1965).
A observao de que as formaes clcicas distribuem-se

94

aleatoriamente em toda a extenso da glndula pineal humana numa camada
superficial, estando ausente na regio profunda da glndula, est de acordo com
os resultados de JAPHA, J. L. et al. (1976) .
O mtodo de fratura por congelao em nitrognio lquido,
evidencia que o padro lamelar tem um aspecto tridimensional consistindo de
uma espessura e textura especfica. O arranjo lamelar concntrico ocorre em
cada lbulo da concreo em mrula. O padro lamelar parece ser
estrutura dinmica e est relacionada a idade em humanos (SCHMJD, H. A. &

uma
RAYKHTSAUM, G., 1995), sendo que observamos em cada lbulo um padro

funcional unitrio. Este dado pode nos dar o indicativo da dimenso de uma
unidade funcional do processo de mineralizao na pineal. Os dados do
presente trabalho revelam que a concreo no uma estrutura esttica mas
metabolicamente ativa, havendo a formao em vrios estgios, desde os
menores at os maiores, de acordo com a agregao de lamelas em uma
unidade funcional, e a agregao destas unidades em um macio em forma de
mrula. Este aspecto dinmico-funcional evidenciado por SCHMJD, H. A. &
RAYKHTSAUM, G. (1995), HUMBERT, W. & PVET, P. (1995) e
ressaltados por BINKLEY, S. (1988) .

95

Foi demonstrada uma estrutura lamelar tridimensional, por
aposio de camadas numa formao secundria por depsitos sucessivos de
clcio, fsforo, resduos de magnsio, alumnio, e s vezes ferro, evidenciado
pela microanlise. A justaposio de camadas provoca a formao em zig-zag,
caracterstica da senilidade, conforme pudemos constatar nas imagens por
EDS. Este aspecto foi evidenciado anteriormente por SCHMID, H. A. &
RA YKHTSAUM, G. (1995); no entanto, ao contrrio destes autores, no
encontramos diferena de concentrao na relao clcio/fsforo relativamente

a regio central ou perifrica das concrees em nossa amostragem., embora os
autores supracitados tenham analisado na verdade aspectos do centro e
camadas intermedirias das concrees. As camadas concntricas lamelares
esto presentes em cada lbulo de uma concreo em forma de amora, dando a
idia de que esta seja uma unidade funcional da concreo e a mrula, uma
agregao destas unidades funcionais; a fuso das unidades forma um macio
central, examinadas em nossas amostras. importante observar que o aspecto
circular das lamelas est delineado previamente pela deposio da rede fibrosa
conjuntiva da cpsula, tambm organizada em folhetos concntricos .
Entretanto, o mecanismo do processo de mineralizao ocorre na forma de um
ponto calcificado, sendo que esses pontos calcificados tm a proporo de uma

96

clula. Este dado observado microscopia ptica pode ser mensurado nas
imagens por microscopia eletrnica de varredura e EDS, observando-se que os
ncleos das concrees com cerca de 1O micrmetros de dimetro tem
propores celulares (JUNQUEIRA, L. C. & CARNElRO, J.; 1985). Isto
sugere a co-participao da mineralizao a partir do contedo celular. No
entanto, conforme foi observado em nossos resultados, a estrutura fibrosa
circunjacente s concrees, sugere a participao do tecido conjuntivo no
processo de mineralizao. A localizao mais superficial das concrees na
pineal, pode ser interpretada pela maior proximidade com a pia-mter,

reforando a hiptese do envolvimento do tecido conjuntivo neste processo. A
matriz conjuntiva pode ser a estrutura precipitadora numa regio de alto
metabolismo de clcio, no metabolismo da produo de melatonina, conforme
ressaltam SCHMID, H. A. & RA YKHTSAUM, G. (1995) .
WUTHIER, R. E. (1973) faz meno a duas hipteses sobre os
mecanismos de biomineralizao: a hiptese celular e a conjuntiva. Em nossos
resultados encontramos bases morfolgicas que sustentam tanto a hiptese da
origem celular, como a de origem matricial conjuntiva. Os achados de con-
erees puntiformes, na dimenso celular, assim como a caracterstica do te-
cido conjuntivo estruturado em camadas concntricas envolvendo as formaes

97

calcreas, sugerem que os dois mecanismos devam estar envolvidos na gnese
da concreo, de forma conjugada. Interessante a observao de estrutura
calcrea de aspecto poroso, o que sugere ter havido digesto de material
orgnico, aps preparo da amostra que formava a matriz da concreo. A
digesto por NaOH tambm fragiliza as concrees tomando-as quebradias,
da as rachaduras observadas s micrografias eletrnicas. Estes aspectos vm
reforar a hiptese da formao de um ncleo orgnico antecedendo a gnese
da concreo. Tal matriz foi estudada por PALLADINI, G. et al. (1965),
LUKASZYK, A. & REITER, R. J. (1975) e JAPHA, J. L. et al. (1976) .
Os vasos sangneos presentes em regio de mineralizao, esto
de acordo com a possibilidade de mineralizao ativa, mediante as trocas de

clcio, fsforo e outros elementos. Vale ressaltar as observaes de CIPOLLA
NETO, J. (1996) quanto participao do clcio no metabolismo da
melatonina. O envolvimento do clcio na regulao da fisiologia da glndula
pineal e controle da sntese de melatonina est ligado aos mecanismos
simpticos noradrenrgicos dados pela inervao de fibras simpticas ps-
ganglionares. A estimulao de receptores alfa-adrenrgicos potencializa os
receptores beta-adrenrgicos dos pinealcitos, estimulando a sntese de
melatonina. H evidncias de que a estimulao crnica de beta-receptores

98

elevam os nveis de HIOMT. Os mecanismos pelos quais a estimulao alfa-
adrenrgica potencializa a induo beta-adrenrgica envolve o incremento de
clcio intracelular. H evidncias de que clcio e cAMP provavelmente agem
de forma coordenada na estimulao da NAT. A seco da inervao ou a
ganglionectomia cervical superior abolem a ritmicidade da sntese de
melatonina e o controle de sua produo pela variao de intensidade de luz .
Estes fatores sugerem que as concrees possam funcionar como um estoque
dinmico de clcio, implicado na regulao da produo de melatonina e
aspectos da fisiologia da glndula pineal. Pelo fato das concrees
apresentarem estrutura e composio muito semelhante a ossos e dentes
(ANGERVALL, L. et al., 1958) possvel que estejam sujeitas regulao

hormonal do metabolismo de clcio, tal qual nesses tecidos .
relevante a observao de JAPHA, J. L. et al. (1976) ,
MENIGOT, M. (1970), KISS, J. et al. (1969) e REITER, R. J. et al. (1973) de
que a glndula pineal est envolvida com o metabolismo de clcio,
apresentando relaes funcionais com a glndula paratireide. GREENSTEIN,
B. ( 1994) explica o envolvimento do metabolismo do clcio, a calcitonina e a
vitamina D (l-alfa, 25-diidroxivitamina D3): a vitamina D estimula a
reabsoro de clcio pelos ossos, sendo que esta via metablica dependente

99

da radiao solar. Questionamos se a dinmica metablica das concrees no
sofreria interferncia desta via, de tal forma que teramos alm da j conhecida
interferncia luminosa sobre a pineal, atravs da via retino-hipotalmica
(CIPOLLA NETO, J., 1996), tambm uma suposta regulao da pineal por
incidncia luminosa na epiderme, envolvendo o metabolismo de Vitamina De
clcio. A presena de vasos sangneos prximos s concrees, o contedo de

clcio evidenciado pela microanlise, o aspecto dinmico da morfologia das
concrees, so aspectos encontrados que tomam possvel esta hiptese j
presumida pelos autores citados, merecendo estudos mais aprofundados .
Os nossos resultados demonstram ser cristalina a estrutura das
concrees. A difrao de raio-x demonstrou a caracterstica formao de
cristais de apatita, embora os achados evidenciem baixa cristalinidade do
material. Este resultado est de acordo com os achados de ANGERVALL, L.
et al.(1958), EARLE, K. M. (1965) e MABIE, C. P. & WALLACE, B. M .

(1974) .
Os aspectos morfofuncionais ainda no esto totalmente
elucidados, no entanto os trabalhos que relacionam pineal com propriedades
magnticas, como YAMADA, N. et al. (1996), SEMM, P. et al. (1980) e
REITER, R. J. (1991), nos sugere a hiptese de que as propriedades

100

diamagnticas dos cristais de apatita formam uma camada de regulao por
interferncia na captao magntica regulando a funo dos pinealcitos. A
apatita na natureza possui propriedades diamagnticas; KLEIN, C. &
HURLBUT JR., C. S. (1993) explicam que este tipo de material conhecido
como diamagntico devido propriedade de no ser atrado por magnetos. A
apatita em verdade, repelida por campos magnticos. Esta propriedade se d
devido nuvem de eltrons que os tomos da apatita expem, e no
propriamente pelos spins eletrnicos. Nesta substncia h um nmero

equivalente de spins eletrnicos "up" e "down", provocando o cancelamento
dos efeitos magntico. GOODMAN, E. M. et al. (1995) , propem, atravs de
resultados experimentais, que uma protena ligada ao clcio poderia ser afetada
por campos magnticos. LUBEN, R. A. et al. (1982) desenvolveu modelos
experimentais nesta linha, utilizando clulas sseas e suas respostas aos
hormnios. Estes dados reforam a hiptese de um possvel envolvimento das
concrees da pineal na regulao da interao de campos magnticos .
Em plexo coriide observamos que no h indcios de formaes
calcreas na poro analisada. Em GRAY'S ANATOMY (1995), citada a
formao calcrea em estroma de plexos corides, sendo que a estrutura dos
mesmos se diferencia das concrees pineais por serem (os de plexo coriide)

101

amorfos. Interessante que MLLER, M. et al. (1979) j observaram
concrees amorfas tambm em tumores cerebrais. Possivelmente, as
concrees que se observa justapostas ao plexo coriide em tomografias, como
observado por ARAI, Y. et al. (1995), ou mesmo macroscopicamente em peas
anatmicas, devem ser ou formaes do estroma coriide, onde encontramos
tecido conjuntivo derivado da pia-mter, ou extruses que se formam na pineal
e alcanam o plexo sem interferir na sua estrutura. A face ependimria do plexo
coriide, apesar de envolver passagem de clcio, no contexto do metabolismo
liqurico, no apresenta exteriormente qualquer sinal de formao clcica, ao
contrrio do que se observa na superficie da pineal. Quando se formam

concrees clcicas em plexo coriide, conforme literatura, esta ocorre no
estroma, reforando a participao do tecido conjuntivo. Este aspecto sugere a
no participao de clulas ependimrias no processo de calcificao . Assim,
temos que na pineal, quando situamos proximamente pia-mter, temos
formaes calcreas, estando ausentes na superficie recoberta por epndima, na
base da pineal. Tal fato estaria de acordo com as afirmaes de KAPPERS, J.
A. (1971) sobre a caracterstica de epndimo secreo da pineal embrionria,
onde no se encontram formaes calcreas (BINKLEY, S., 1988). Este fator

102

acentua a hiptese da participao do tecido conjuntivo na formao dos
cristais em pineal e no do tecido ependimrio .
Evidentemente, com este trabalho no pretendemos analisar
todos os aspectos morfofuncionais do corpo pineal. Portanto, outros projetos
sero necessrios para melhor elucidao das estruturas do corpo pineal,
visando relacionar com processos fisiopatolgicos .

103

6. CONCLUSES
104

CONCLUSES

De acordo com os resultados alcanados na presente pesquisa podemos
concluir que:
1. Histologicamente o corpo pineal apresenta uma estrutura contendo

formaes calcreas, clulas e tecido conjuntivo. As formaes calcreas
apresentam diferentes formas e tamanhos, concentrando-se em reas onde se
localiza grande quantidade de tecido conjuntivo .
2. Ao microscpio eletrnico de varredura, as formaes calcreas
revelam nitidamente as caractersticas externas com aspectos de mrula e
internamente uma constituio lamelar .
3. Cada formao calcrea envolta por uma cpsula contendo espessos
feixes de fibras colgenas .
4. A microscopia eletrnica de varredura com espetrmetro de raio-x
revelou nas imagens, a existncia de camadas concntricas, contendo estruturas
porosas e amorfas, e na microanlise a composio predominante de clcio e
fsforo .

105

5. O mtodo por difrao de raio-x evidenciou que as amostras
calcreas da glndula pineal possuem uma estrutura compatvel com fonnaes
cristalinas de apatita .

106

" ,
7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

107

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region. J. Neurosurg 53:205-221, 1980 .

126

e ZUBAY, G. L.; PARSON, W. W.; VANCE, D. E.- Principies ofbiochemistry .
e p.572-573. Ed. Wm. C. Brown Publishers, 1995 .

127

ABSTRACT

128

The structure of human pineal gland was studied by optic
microscopy, scanning eletromicroscopy, spectrometer x-ray scanning eletron
microscopy with energy dispersion (EDS). The tissues to analysis by optic
microscopy were fixed in formalin at 1O% during 48 h and put in par:ffin .
For S.E.M., the tissues were fixed in modified Kamovsky
solution, and a part of the material was fracturated in liquid nitrogen to analysis
of internai characteristic of the pineal body. The results showed that the pineal
body has calcareon concretion distributed in the connective tissue. In the
internai position, the calcareon structure was made of concentrics lamelae with
amorf aspect. The x-ray difractor showed the cristalin structure of the atom
arrangement of the elements that compose the calcarean concretions .

129

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r-

SRGIO FELIPE DE OLIVEIRA

DE LUZ, MICROSCOPIA ELETRONICA DE VARREDURA,

Ttulo da Dissertao: Estudo da estrutura da glndula pineal

Defesa de Mestrado, em sesso pblica realizada a

............. ./. ............ ./. .................. , considerou o(a) candidato(a):

"ESTUDO DA ESTRUTURA DA GLANDULA PINEAL

DE LUZ, MICROSCOPIA ELETRONICA DE VARREDURA,

obteno do ttulo de Mestre em Cincias

A Tanncio e Hennnia, Antnio e Rita, meus avs

pela genealogia de minha infncia de sonhos .

Ao meu pai, o Dr. Srgio, que ensinou-me a Medicina

e a meu filho querido, Pietro,

amores de minha vida

Dedico este trabalho .

me deu de estudar a glndula pineal.

Ao Prof. Dr. li Sei Watanabe, pela compreenso e orientao inestimveis no

Ao Prof. Dr. Cludio Ferraz de Carvalho, pelo estmulo ao estudo deste

Prof.a. Dra. Irvnia de Santis Prada, pela orientao e estmulo no

Ao Prof. Celso Ivan Conegero, pela orientao nas tcnicas anatmicas, e

sobretudo pela amizade .

Ao Sr. Francisco Cndido Xavier, pelo estmulo que me d prtica de uma

Aos tcnicos do ICB, senhores Boleta, Andrs, Nilson, Adevair, Wilson, e

Carla Carvalho, pelo auxlio na secretaria do Depto. de Anatomia .

Carminha e Sra. Rita, pela ajuda inestimvel.

CAPES, pela bolsa de estudos .

Aos meus colegas da ps-graduao da Anatomia, Slvia, Juara, Maria Ivone,

de luta na dificil tarefa de fazer Cincia .

Aspectos evolutivos e morfofuncionais........................................................................ 05

Aspectos citolgicos e funcionais................................................................................ 11

Mtodos anatmicos de estudo da pineal.................................................................... 29

Microscopia eletrnica de varredura ............................................................................ 35

Microanlise e difrao de raio-x ................................................................. : 36

Microscopia eletrnica de varredura com espectrometria

de :caio-x por disperso de energia (EDS) .................................................................... 44

Difrao de raio-x ....................................................................................................... 46

6 - CONCLUSES ........................................................................................................ 104

7- REFERNCIAS BJBLIOGRFICAS ....................................................................... 107

Estruturas da glndula pineal humana foram estudadas

A glndula pineal humana, segundo ERHART, E.B. (1962) e

MACHADO, A.B.M. (1983), est localizada na fissura formada pelo encontro

do cerebelo e dos hemisfrios cerebrais, medindo aproximadamente 8 mm de

extenso. Ocupa a depresso dos colculos superiores e inferior ao esplnio

tela, que ento se reflete sobre o tecto. A base da pineal posicionada

anteriormente e fixada por um pednculo dividido anteriormente pela lmina

superior e lmina inferior, separados pelo recesso pineal do terceiro ventrculo

(GRAY'S ANATOMY, 1995); a lmina inferior contm a comissura posterior

e a lmina superior, a comissura habenular, estruturas componentes da parte

no endcrina do epitlamo. Vale ressaltar que a comissura habenular faz parte

do sistema lmbico, assim como todas as outras estruturas no endcrinas do

epitlamo, excetuando a comissura posterior, sendo portanto relacionadas com

a regulao do comportamento emocional. O recesso pineal a rea do terceiro

ventrculo cerebral onde o pednculo da pineal se prende, sendo revestido por

subcomissural constitui a parte endcrina do epitlamo, sendo que este,

conjuntamente com o tlamo, hipotlamo e subtlamo constituem o diencfalo .

A base do diencfalo formada por uma camada de clulas ependimrias

recoberta por mesnquima vascular. A combinao destes dois tecidos origina

o plexo coride do terceiro ventrculo, e a parte mais caudal da base do

diencfalo origina o corpo pineal (SANDLER, T. W., 1996).

VOLLRATH, L. (1981) props uma classificao baseada na

exgena, como a inervao simptica perifrica, seja direta atravs do sistema

nervoso central, haja visto a deteco de neurotransmissores como o peptdeo

pensava-se que as projees do sistema nervoso central iam at o pednculo