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A velocidade com que a reao catalisada por uma enzima ir ocorrer depende de
diversos fatores: a concentrao do substrato assim como a da enzima, o pH e a
temperatura do meio. Geralmente um aumento n as concentraes t anto do substrato
como da enzima geram um aumento na velocidade da re ao. No entant o, caso a
concentrao de substrato seja muito elevada em relao de enzima, p ossvel
que as enzimas fiquem saturad as, tendo todos os seus stios ativos ocupados em
determinado instante. A partir deste ponto um aumento n a concentrao de
substrato, sem aumento na con centrao de enzima, no ir au me ntar a velocidade
da reao.
Alm disso, a at ividade enzimtica n ormalmente restringe -se a uma pequena faixa
de pH. Isto se deve ao fato de que as mudanas n o pH geram variaes no estado de
ionizao dos componentes da enzima. Geralmente as enzimas possuem muitos grupos
ionizveis, e f ora do seu pH timo d e atuao a ionizao destes grupos inativa
os stios de ligao com o substrato.
Material
Mtodos
B) Curso temporal:
C) Influncia do pH:
Tab.1
D) Influncia da temperatura:
1 e B1 0 oC
2 e B2 temperatura ambiente
3 e B3 37 oC
4 e B4 68 oC
Ao trmino destes 15 minutos adicionou -se uma alq uota de 1,0 mL de NaOH a cada
um dos tubos utilizando-se a pipeta e um pr-p ipete. Nos tubos brancos tambm foi
adicionado 0,2 mL de enzima aps a adio do NaOH. Realizou -se a homogeneizao
dos tubos no vrtex novamente e foi feita a leitura no espectrofotmetro.
E) Curva de Substrato
Tab.2
Ao trmino destes 15 min utos, adicionou -se 1,0 mL de NaOH a cada um dos tubos com
intervalos de 30 segundo s e tambm adicionou -se 0,2 mL da enzima ao tubo branco
aps ter sido adicionado o NaOH. Em seguida foi realizada a homogeneizao dos
tubos novamente e a leitura dos dados espectrofotomtricos.
F) Influncia do inibidor:
Tab.3
Ao trmino destes 15 min utos, adicionou -se 1,0 mL de NaOH a cada um dos tubos com
intervalos de 30 segundo s e tambm adicionou -se 0,2 mL da enzima ao tubo branco
aps ter sido adicionado o NaOH. Em seguida foi realiz ada a homogeneizao dos
tubos novamente e a leitura dos dados espectrofotomtricos.
Objetivos
Resultados
Tab.4
Influencia do pH
Tab.5
Como y = a x , onde y a absorbncia, a 4,43 x 10-3 e x o n de nmoles de
PNP, pode ser calculado o n de nmoles de PN P presente em cada tubo aps a
paralisao da reao enzimtica:
Influencia da temperatura
Tab.6
Curso temporal
Curva de substrato
Influencia do inibidor
Tab.8
Discusso:
Influencia do pH
Com base nos resultados ob tidos e com a construo do grfico, pode -se concluir
que o tampo de pH ideal para a reao da enzima usada o tampo Tris-HCl de pH
9,5 j que foi onde houve a maior medida de absorbncia, por ter sido onde a maior
q uantidade d e produtos foi gerada comparado aos o utros tampes de pH
diferentes.Pode-se discutir tambm quem o on do tampo utilizado tambm influencia
na reao j qu e a solu o com o t ampo Borato -NaOH de pH 9,5 apresentou uma ab
sorbncia baixa, logo uma baixa form ao de produto.
Influencia da temperatura
A temperatura ideal da enzima usada ( fosfatase alcalina ) de 37C por ter sido
onde houve a maior medid a de absorbncia, indicando que foi quando a maior
quantidade do p roduto PNP foi gerada na reao.Pode -se refletir ento q ue esta
reao catalisada pela enzima atinge sua maior velocidade na temperatura corprea,
demonstrando como a enzima fosfatase alcalina importante para as reaes de
remoo de fosfato no corpo.
Curso temporal
Baseado na absorbncia medida, percebeu -se que quanto maior o tempo de reao
entre PNPP com a enzima fosfatase alcalina, maior a quantidade de produto PNP f
ormado.Sabe-se que ap s determinado tempo de reao, est a no p ossui nenhum
aumento em sua velo cidade, isto , sua velocidade torna -se praticamente
constante. No foi observado tal zona de estagnao, ento podemos concluir q ue a
a velocidade mxima da reao atingida aps 45 minutos.
Curva de substrato
Influencia do inibidor
Com base nos resultados, perceb eu-se que q uanto menor era a quantidade de
inibidor presente no meio, maior era a medida da absorbncia, ou seja, maior era a
quantidade de produto PNP formada a partir da reao de PNPP com a enzima fosfatase
alcalina.
Aps confeccionado o grfico pode-se montar uma funo linear para cada uma das
curvas, no intuito de descobrir a velocidade mxima e o Km de cada curva.
Sabe-se que o inverso da velocidade mxima p ode ser calculado achando o valor de Y
o nde o valor de x = 0 (quan do a reta corta o eixo Y).Dessa forma, t endo como
modelo a funo Y = AX + B , Y = B, logo:
Km = 1/2,98 x 10-6
Km = 3,36 x 105 nMol/L
Vemos ento que tanto a velocidade mxima quanto o Km diminuem com a adio do
inibidor na reao
Concluso:
No caso do pH, observou -se que quanto maior o pH do tampo cid o ,maior a
velocidade da reao, logo mais p roduto f oi formado .No entanto, nem semp re um
tampo de p H alto ir benef iciar a formao de produto.O tampo de pH alt o Borat
o-NaOH no contribui para a reao.
possvel observar tambm que o inibidor exerce uma forte interao na velocidade
da reao.Este diminui a velocidade da reaao por concentrao de substrato usado
na mesma e tambm diminuia a velocidade mxima e o Km da reao. Pode-se concluir
ento que ele um inibidor acompetitivo.
Bibliografia
?
http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq/lista_exerc/cinetica_enzimatica.pd
f
? http://www2.bioqmed.ufrj.br/enzimas/inibidores.htm
? NELSON, D.L.; COX, M.M.;Princpios d a Bioqumica de Lehninger. 5 edio.
Editora Sarvier/ Artmed. So Paulo. 2010.