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Manual de Cuidados e
Procedimentos com Animais
de Laboratrio do Biotrio de
Produo e Experimentao da
FCF-IQ/USP
Editores
Silvnia M. P. Neves
Jorge Mancini Filho
Elizabete Wenzel de Menezes
So Paulo
FCF-IQ/USP
2013
Universidade de So Paulo
Reitor: Prof. Dr. Joo Grandino Rodas
Vice-Reitor: Prof. Dr. Hlio Nogueira da Cruz
Instituto de Qumica
Diretor: Prof. Dr. Fernando Reis Ornellas
Vice-diretor: Profa. Dra. Maria Jlia Manso Alves
Autores
Silvnia M. P. Neves
Flavia de Moura Prates Ong
Lvia Duarte Rodrigues
Renata Alves dos Santos
Renata Spalutto Fontes
Roseni de Oliveira Santana
So Paulo
FCF-IQ/USP
2013
aaa
Neves, Silvnia M. P.
Manual de cuidados e procedimentos com animais de laboratrio do
Biotrio de Produo e Experimentao da FCF-IQ/USP / Silvnia M. P. Neves
[et al.]. -- So Paulo : FCF-IQ/USP, 2013.
216 p. il.
Silvnia M. P. Neves
Especialista em Cincias em Animais de Laboratrio. Certification of the Federation of
European Laboratory Animal Science Associations (FELASA) Category C. Zootecnista e
Chefe Tcnica de Servio do Biotrio de Produo e Experimentao da FCF-IQ/USP.
aaa
Apresentao
O manual comea com oportuno captulo sobre a Histria do Biotrio, sobre sua
nas mltiplas gestes da FCF e do IQ, e da prpria USP. Ensina como chegou estrutura
atual, informatizada eficiente, com portal prprio como se v nas estatsticas da produo de
tornam importante a iniciativa de tornar esse Manual num livro de divulgao mais ampla, que
vai alm de um simples manual de procedimentos. Certamente ele ser uma leitura muito til
da Universidade de So Paulo muito mais que um simples manual. Trata-se de uma obra
de inestimvel valor para todos os que criam ou usam animais de laboratrio, tanto por seu
Iniciando com a saga dos autores para conseguir o nvel de qualidade que obtiveram,
algo importante para incentivar tanto os tcnicos bioteristas quanto administradores de Insti-
Seus diversos captulos abordam de forma simples e elegante todas as reas relativas
Por fim, somente a extrema dedicao, o profundo conhecimento e a vivncia dos au-
Aos funcionrios do Biotrio: Eliane J. Santos, Isael P. Araujo, Jos Galeote M. L. de Oliveira,
Jos Roberto da Silva, Maria de Ftima R. Souza, Marcelo Lustosa, Matildes P. Ribeiro,
Ricardo Pinheiro e Wagner Botelho, cuja colaborao foi imprescindvel na elaborao deste
manual.
Aos professores Elizabete Wenzel de Menezes e Jorge Mancini Filho, pelo incentivo e
colaborao na elaborao deste manual.
Aos professores Alicia Kowaltowski, Clia Colli, Mari Cleide Sogayar, Maria Julia Manso
Alves, Nadja S. P. Lardner, Primavera Borelli, Telma M. Kaneko e Terezinha de Jesus A. Pinto,
pelo constante suporte no Biotrio.
s doutoras Sueli Blames Damy e Ubimara Pereira Rodrigues, pelo apoio, estmulo e
colaborao.
Aos pesquisadores, alunos e tcnicos da FCF-IQ/USP, usurios do Biotrio, que nos apoiam
nesta jornada.
Aos mestres doutores Adela Rosenkranze e Jean L. Gunet, sempre presentes e atuantes no
ensino da Cincia em Animais de Laboratrio.
Ao senhor Luciano Leite, pelo excelente suporte na elaborao do portal do Biotrio FCF-IQ/
USP.
Captulo 1
Histrico e Evoluo do Biotrio da FCF-IQ/USP......................................................1
Silvnia M. P. Neves
Captulo2
tica na Experimentao Animal................................................................................9
Flvia de Moura Prates Ong, Silvnia M. P. Neves
Captulo 3
Comportamento e Enriquecimento para Ratos e Camundongos.............................15
Renata Alves dos Santos, Renata Spalutto Fontes
Captulo 4
Seo de Produo de Animais Specified Pathogen Free (SPF)............................43
Renata Spalutto Fontes, Renata Alves dos Santos
Captulo 5
Seo de Higiene e Esterilizao.............................................................................73
Roseni de Oliveira Santana, Lvia Duarte Rodrigues
Captulo 6
Seo de Experimentao........................................................................................91
Flvia de Moura Prates Ong, Lvia Duarte Rodrigues
Captulo 7
Controle Nutricional.................................................................................................155
Silvnia M.P. Neves, Flavia M.P. Ong, Renata Spalutto Fontes
ANEXOS.................................................................................................................161
aaa
Captulo 1
Silvnia M. P. Neves
Histrico
Informatizao
Descrio do Biotrio
Referncias
Gesto
HISTRICO
1
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Por consenso, as direes das duas unidades decidiram unificar as atividades, o espao
e a gesto do Biotrio em 1992, mas somente a partir de 1997 efetivamente passou a existir
uma gesto nica, que recebeu a denominao de Biotrio de Produo e Experimentao
da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da USP.
Nesse perodo, o Biotrio foi contemplado com o Projeto FAPESP (Fundao de Amparo
a Pesquisa do Estado de So Paulo) dentro do Programa de Infraestrutura Implementao
do Biotrio Experimental da FCF-IQ/USP , elaborado pela Comisso de Biotrio sob a
coordenao da professora Maria Ins R. M. Santoro, o que possibilitou a realizao da
reforma do Biotrio. Para essa reforma, foram considerados a limitao do espao existente,
a estrutura fsica do edifcio, os conceitos de layout da poca, bem como a necessidade de
espao para a realizao dos ensaios biolgicos pelos pesquisadores.
2
Histrico e Evoluo do Biotrio da FCF-IQ/USP Captulo 1
3
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
DESCRIO DO BIOTRIO
Seo de
Produo
Seo de Higinene
e Experimentao
Seo de
Experimentao
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Histrico e Evoluo do Biotrio da FCF-IQ/USP Captulo 1
14000
12000
10000
8000
6000
4000
2000
0
2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012
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70
60
50
40
30
20
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2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012
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Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
GESTO
INFORMATIZAO
6
Histrico e Evoluo do Biotrio da FCF-IQ/USP Captulo 1
O portal permite que o usurio utilize uma rea restrita e acesse relatrios individuais
sobre utilizao de animais e sala experimental, emisso de normas e protocolos experimentais,
solicitao de animais por meio de formulrio padronizado, alm de informaes sobre
biologia animal, modelos de animais produzidos no Biotrio FCF-IQ/USP e artigos cientficos
sobre diversos assuntos referentes Cincia em Animais de Laboratrio.
A equipe do Biotrio realiza registros e controles de cada seo por meio do portal,
facilitando o acesso de dados e otimizando a comunicao entre as sees.
Informaes atualizadas;
7
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Este manual foi elaborado pela equipe do Biotrio com o objetivo de registrar
as principais atividades realizadas e compartilhar com outros profissionais e alunos o
conhecimento adquirido ao longo de vrios anos. Esta primeira edio vai facilitar a contnua
atualizao e os ajustes de procedimentos medida que novos modelos e novas tecnologias
so introduzidos.
REFERNCIAS
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The National Academies Press; 2011. 248p [cited 2012 July 16]. Available from: http://oacu.od.nih.
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6. Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana (CTNBio) [citado 19 set. 2012]. Disponvel em:
http://www.ctnbio.gov.br/.
8
Captulo 2
Silvnia M. P. Neves
Introduo Treinamentos
INTRODUO
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Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Com o advento dessa lei, foram criados o Conselho Nacional de Experimentao Ani-
mal (Concea)6, o Sistema de Cadastro das Instituies de Uso Cientfico de Animais (Ciuca)
e as normas para funcionamento das Comisses de ticas em Uso Animal (CEUAS)7,8, cujo
objetivo garantir o atendimento tico e humanitrio do uso de animais para fins cientficos.
10
tica na Experimentao Animal Captulo 2
PRINCPIO DOS 3 Rs
O Quadro 1 resume cada uma dessas trs palavras e sua importncia para a pesquisa
com animais.
Quadro 1. Princpio dos 3 Rs The Principles of Humane Experimental Technique
Replace consiste na substituio do uso de animais por modelos alternativos no sensveis, sempre que possvel, ou por animais
com sistema nervoso menos desenvolvido. Dessa forma, a lei vigente no pas criou uma cmara permanente intitulada Mtodos
Alternativos, para a validao e a divulgao desses mtodos
Alguns exemplos de mtodos de substituio ao uso animal so: modelos computacionais e matemticos, teste in vitro, cultura de
clulas, modelos e simuladores mecnicos, filmes e vdeos interativos para demonstrao em aulas
Reduce consiste na reduo do nmero de animais por experimento, sem prejudicar a qualidade do resultado experimental. Esta
pode ser obtida, por exemplo, com clculos amostrais bem definidos e com a escolha do melhor modelo biolgico a ser utilizado
Para o tratamento estatstico, podem ser considerados testes-pilotos, que muitas vezes, definem com mais preciso o nmero de
animais a serem utilizados
A escolha do modelo adequado para o experimento implicar a reduo do nmero de animais e a melhor qualidade do resultado final
A definio da linhagem tambm um passo importante para a reduo. Quando se utilizam animais isognicos, por exemplo,
retira-se a variabilidade gentica do experimento, diminuindo, assim o seu n. Para isso, devem ser realizados questionamentos
fundamentais para a escolha do melhor modelo, que so:
1- Qual a espcie?
2- Qual a linhagem?
3- Qual o padro sanitrio do modelo escolhido?
Refine Os cientistas propem que as tcnicas e os procedimentos que sero realizados nos animais sejam menos invasivos e o
mais refinados possvel, sendo capazes de reduzir a dor, a angstia e o sofrimento animal. Esse refinamento abrange protocolos
experimentais bem definidos de anestesia, analgesia, assim como a utilizao, sempre que necessrio, de anti-inflamatrios e
antibiticos, no pr e no ps-cirrgico (Captulo 6)
Os mtodos de coleta de sangue e imunizaes tambm devem ser os menos invasivos possveis, onde alguns mtodos requerem
a utilizao de tcnicas anestsicas e treinamentos
O treinamento da equipe envolvida no experimento de suma importncia. Todos devem ter conhecimento das tcnicas e proce-
dimentos que sero realizados nos animais, bem como de manuseio e mtodos de conteno
Outro ponto importante o reconhecimento de comportamentos especficos da espcie ou comportamentos de dor e estresse do
animal. Esse reconhecimento proporcionar ao pesquisador a introduo de mtodos de alvio, caso o animal necessite, e uma
descrio mais precisa no monitoramento dos animais
11
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
TREINAMENTOS
Para a aula prtica com os alunos desse curso, realizado o agendamento prvio no
Biotrio, que apresenta um cronograma de datas disponveis. Esses treinamentos incluem
tcnicas de manuseio e conteno e tcnicas especficas de acordo com os procedimentos
necessrios em cada tipo de experimento. comum o aluno apresentar certo receio ao
manusear os animais, porm isso minimizado ao longo do treinamento11,12.
SEO DE EXPERIMENTAO
12
tica na Experimentao Animal Captulo 2
REFERNCIAS
1. Feij AGS, Braga LMGM, Pitrez PMC. Animais na pesquisa e no ensino: aspectos ticos e tcnicos.
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de animais de experimentao. So Paulo: Universidade Federal de So Paulo (UNIFESP); 2004.
167p.
13
bbbb
Captulo 3
Introduo
Tipos de enriquecimento ambiental
Comportamento de ratos e camundongos
Enriquecimento social
Comportamento materno
Enriquecimento com contato social
Referncias
INTRODUO
15
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
dever do ser humano promover o bem-estar dos animais, em que, juntos, contribuiro
para o bem-estar de todos2. Segundo a Cincia em Animais de Laboratrio, o bem-estar
dos animais deve ser assegurado tanto na produo como na experimentao, mantendo o
alojamento e as condies ambientais controlados (Captulos 4 e 6).
16
Comportamento e Enriquecimento para Ratos e Camundongos Captulo 3
Quanto s fmeas, tanto de ratos quanto de camundongos, podem ser alojadas juntas
em qualquer idade, mesmo se forem provenientes de gaiolas diferentes ou j utilizadas como
reprodutoras, sem que ocorram incidentes desfavorveis. Em geral, as fmeas s brigam, em
alguns casos, para defender seus filhotes7.
Um comportamento comum nos ratos a postura em p (Figura 1), usada para explorar
o ambiente e lutar (entre ratos jovens, uma forma de brincar)8. Por isso, importante que
as grades das gaiolas sejam altas, para permitir que os ratos observem fora da gaiola, alm
de facilitar a cobertura da fmea pelo macho durante o acasalamento.
A B
17
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Figura 2. Limite auditivo dos animais de laboratrio em relao ao dos humanos. (Fonte: Adaptado de
Heffner13)
Os sons produzidos, como o de cortejo, cuidado materno, agresso e defesa, podem ser
afetados pelo nvel de rudo no ambiente. Os animais podem se adaptar aos rudos contnuos
no ambiente, mas os rudos de longa durao e alta intensidade ou agudos so perturbadores,
causando estresse, alteraes metablicas, reduo da fertilidade, canibalismo e danos ao
aparelho auditivo. Alguns equipamentos utilizados nos biotrios e laboratrios emitem sons
que podem estressar os animais sem que tenhamos conhecimento, como da gua corrente
18
Comportamento e Enriquecimento para Ratos e Camundongos Captulo 3
19
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
redor, mesmo que estes no tenham odor. Como um animal noturno, as vibrissas permitem
orient-lo na escurido. A sensibilidade olfativa e a sensibilidade tctil (vibrissas) constituem
os principais sentidos desses animais, o que lhes possibilita detectar os alimentos, o sexo
oposto e os predadores. O tato tambm exercido pela superfcie plantar das patas2,3. Quando
estressados, os roedores se aproximam das superfcies, sentindo-se mais seguros. Gaiolas
aramadas impedem o contato com piso slido, alterando seus comportamentos normais15.
20
Comportamento e Enriquecimento para Ratos e Camundongos Captulo 3
Tm o hbito de limpeza (grooming), que faz com que a secreo oleosa produzida
pelas glndulas da pele seja distribuda pelo corpo, mantendo a pelagem limpa e com brilho4.
A falta desse hbito indica que o animal est com algum problema15.
21
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Figura 5. Macho reprodutor da linhagem C57BL/6 com falha de pelo no focinho causada pela fmea
dominante na mesma gaiola
22
Comportamento e Enriquecimento para Ratos e Camundongos Captulo 3
Comportamento materno
23
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
O manuseio dos neonatos deve ser rpido, porm com cautela, para evitar que a me
diminua os seus cuidados e deixe de lamb-los. Nos ratos, muitas vezes, a me os carrega
de um lado para outro durante a troca das caixas sujas ou durante a observao da ninhada
(Figura 7). Quando esse comportamento ocorrer, deve ser mantida distncia da gaiola,
reduzindo o rudo. Geralmente, a me adota esse comportamento para tentar encontrar um
espao onde possa colocar o neonato em segurana. Se ocorrer muitas vezes, porm, isso
pode feri-los8.
Diversos fatores, como linhagem, rudos altos no ambiente7, mes mais velhas (mais
24
Comportamento e Enriquecimento para Ratos e Camundongos Captulo 3
de 11 meses de idade)21, manuseio inadequado, troca muito frequente das gaiolas, presena
de tcnico novo, falta de gua ou comida, movimentos indevidos da gaiola, dieta inadequada
e desnutrio das mes lactantes22, podem induzi-las prtica de canibalismo nos filhotes.
25
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
26
Comportamento e Enriquecimento para Ratos e Camundongos Captulo 3
Os testes de preferncia podem ser teis para avaliar os tipos de enriquecimento, pois
permitem aos animais escolher entre vrias opes, alm de prevenir a introduo de itens
prejudiciais ou sem interesse para os animais29,38,39.
27
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Alguns autores, como Van de Weerd, Van Loo e Baumans44, entretanto, afirmam que,
quando o bem-estar dos animais alcanado pelo programa de enriquecimento, estes sofrem
menos estresse, tm mais sade, h poucas perdas durante os experimentos e, assim, reduz-
se o uso de animais. Um exemplo o efeito benfico do material para ninho.
Enriquecimento social
28
Comportamento e Enriquecimento para Ratos e Camundongos Captulo 3
Enriquecimento fsico
Complexidade
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Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
j que eles a utilizam em comportamentos especficos, do que oferecer uma grande rea,
onde no utilizam todo o espao (exceto em atividades locomotoras)34.
A maioria dos roedores tende a dividir a sua rea em locais para alimentao, repouso
e excreo. Essas divises podem ser facilitadas por estruturas dentro da gaiola (exemplo:
abrigos, caixas para ninho, tubos, materiais para fazer ninhos, plataformas etc.)34.
Existem vrios tipos de enriquecimento para animais de laboratrio que podem ser
improvisados (Figuras 8 a 12) ou que so comercializados (Figuras 13 a 17) e permitem
a autoclavao. Caixas de animais escavadores podem ser facilmente enriquecidas com
artefatos adaptados, como tubos de tamanho apropriado e materiais para a construo de
ninho livres de toxinas28 (como o algodo). Ainda h controvrsias quanto ao uso de tubos
feitos de PVC.
30
Comportamento e Enriquecimento para Ratos e Camundongos Captulo 3
Figura 8. A) Rato no tubo de PVC; B) Fmea de rato com filhotes dentro do tubo de PVC
Figura 9. Utilizao de algodo como material para a construo de ninho pelos camundongos
31
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
32
Comportamento e Enriquecimento para Ratos e Camundongos Captulo 3
Figura 11. A) Mscara descartvel amarrada na grade das gaiolas de camundongos; B) Vista sob a
grade
33
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
34
Comportamento e Enriquecimento para Ratos e Camundongos Captulo 3
A B
C D
Figura 13. A) Iglu para camundongos. Disponvel em: http://www.tecniplast.it/; B) Iglu para camundongos.
Disponvel em: http://www.alesco.ind.br/alesco.html; C) Iglu para camundongos com roda. Disponvel
em: http://www.bio-serv.com. D. Iglu para ratos. Disponvel em: http://www.bio-serv.com
35
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Figura 16. Tubos de papelo para ratos e camundongos comercializados. Disponvel em: http://granjarg.
com.br/insumos.php
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Comportamento e Enriquecimento para Ratos e Camundongos Captulo 3
Enriquecimento sensorial
Tem sido sugerido que um rudo de fundo constante durante algumas horas do dia
(por exemplo, uma msica de rdio em volume de 85 dB) oferea alguns benefcios na
criao, diminuindo a excitabilidade dos animais e reduzindo o efeito dos sustos de rudos
repentinos5.
A limpeza das gaiolas rotina nas instalaes para animais; no entanto, a remoo
das marcas olfatrias perturba a hierarquia social dos animais na gaiola, muitas vezes
37
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
possvel realizar a estimulao ttil fornecendo materiais para ninho que possam
servir de abrigo e ofeream oportunidade para escavao34, alm de locais nos quais eles
possam se refugiar da luz, pois so animais noturnos30 e, na maioria das vezes, albinos.
Enriquecimento nutricional
REFERNCIAS
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41
bbb
Captulo 4
INTRODUO
43
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
DESCRIO DA SEO
44
Seo de Produo de Animais Specified Pathogen Free (SPF) Captulo 4
para alojamento das gaiolas abertas e uma bancada para apoio no manuseio dos animais
(Captulo 6) e auxlio nas trocas das gaiolas.
As salas para manuteno de animais em sistema Individually Ventilated Cage (IVC)
dispem de racks ventilados e estao de troca para apoio no manuseio dos animais e nas
trocas das gaiolas.
Todas as salas tm duas portas, sendo uma para acesso de material limpo e esterilizado
e outra que permite o acesso ao corredor para fluxo de material sujo. As portas que do
acesso ao corredor limpo apresentam visores, para facilitar a observao dos funcionrios e
evitar que sejam abertas constantemente.
Essa sala conta com trs autoclaves de barreira (dupla porta), por onde todo o material
esterilizado dever ser introduzido na seo, alm de estantes para estoque de bebedouros
esterilizados, espao para estoque da rao irradiada e para estoque da maravalha
esterilizada por autoclave. Os sacos de rao e de maravalha so dispostos sobre paletes,
para evitar o contato com o cho.
Nessa sala feito o preparo de todo o material que vai ser utilizado nas trocas das
gaiolas (Anexo 9).
Central de registros
45
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Nesse corredor somente permitido o fluxo de material sujo (todo material utilizado nas
salas de criao durante as trocas), o qual deve ser encaminhado para a seo de higiene
e esterilizao. Esse fluxo evita o cruzamento de material limpo com sujo, minimizando
possveis contaminaes. No final desse corredor, h um air-lock onde todo o material sujo
depositado e retirado por um funcionrio da seo de higiene e esterilizao para posterior
limpeza, desinfeco e esterilizao (Captulo 5).
Air-lock
Trata-se de uma antecmara com dupla porta, sendo uma para a seo de produo e
outra para acesso seo de higiene e esterilizao. Essa antecmera mantm uma presso
negativa em relao seo de produo, para evitar a entrada de ar contaminado. Nesse
espao depositado todo o material sujo que sai da seo de produo para posterior higiene
e esterilizao, sendo tambm destinado sada dos funcionrios da seo de produo
aps o trmino das atividades.
Pass-through
Conta com duas portas com intertravamento, permitindo a abertura de uma porta por
vez e evitando a contaminao cruzada entre as sees de produo e experimentao
(Captulo 6).
Os animais destinados experimentao so retirados da seo de produo por esse
acesso.
A Figura 1 apresenta o fluxo de materiais na seo.
46
Seo de Produo de Animais Specified Pathogen Free (SPF) Captulo 4
47
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
ventilado); quantidade de animal por gaiola que dever manter at o final do ensaio; previso
de incio e durao total do ensaio, inclusive a adaptao dos animais.
Aps o recebimento das solicitaes com todas essas informaes, as chefias das
sees de produo e experimentao devem fazer um planejamento do fornecimento dos
animais sujeitos a disponibilidade de espao nas salas experimentais, conforme os dados
das solicitaes e a disponibilidade de reprodutores para realizar os acasalamentos.
TRANSPORTE DE ANIMAIS
Os animais ficam estressados durante o transporte, o que altera sua fisiologia normal.
Os cuidados a seguir devem ser tomados para minimizar esses problemas:
48
Seo de Produo de Animais Specified Pathogen Free (SPF) Captulo 4
49
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Autoclave
Todo material a ser introduzido na seo de produo e que no pode ser esterilizado
por autoclave deve ser descontaminado (Captulo 5).
ANIMAIS DE LABORATRIO
A utilizao de animais na pesquisa j era conhecida h mais de 400 anos a.C., quando
cientistas da poca realizavam disseces e necropsias em animais com a finalidade de
constatar semelhanas e diferenas de formao e funcionamento de sistemas6.
50
Seo de Produo de Animais Specified Pathogen Free (SPF) Captulo 4
Ratos o Rattus norvegicus foi o primeiro mamfero a ser domesticado para pesquisa,
e a primeira colnia de criao de ratos foi estabelecida em 1856. Por ser maior que os
camundongos, essa espcie utilizada como modelo em estudos como transplante de
rgos e sseo, diabetes, distrbios psiquitricos, estudos comportamentais, doenas
cardiovasculares e cirurgia. Inteligentes e dceis, so animais de fcil criao, manipulao
e adaptao, sendo agressivos somente na defesa de seus filhotes8.
Rato Camundongo
51
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
52
Seo de Produo de Animais Specified Pathogen Free (SPF) Captulo 4
Pele rosada, leite no estmago, olhos e Pele rosada, leite no estmago, olhos e
1
orelhas fechados orelhas fechados
Pele rosa-claro, olhos e orelhas
Pele rosa-claro, olhos e orelhas fechados.
fechados. Animais black apresentam
2 Animais black apresentam pele rosada,
pele rosada, com tonalidade mais
com tonalidade mais escura no dorso
escura no dorso
As orelhas comeam a se descolar da As orelhas comeam a se descolar da
3
cabea cabea
Metade da orelha descolada da
4 Metade da orelha descolada da cabea
cabea
Animais albinos no apresentam Animais albinos no apresentam
5 colorao e animais black apresentam colorao e animais black apresentam
colorao mais definida colorao mais definida
Os pelos comeam a nascer como uma Os pelos comeam a nascer como uma
6
penugem no dorso penugem no dorso
53
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
A B
Figura 4. A) Neonatos de ratos com um dia de vida: macho direita e fmea esquerda; B) Ratos
recm-desmamados: macho esquerda e fmea direita
54
Seo de Produo de Animais Specified Pathogen Free (SPF) Captulo 4
A B
Figura 5. A) Neonatos de camundongos com um dia de vida: macho esquerda e fmea direita; B)
Camundongos recm-desmamados. : macho esquerda e fmea direita
Macroambiente
Microambiente)
55
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Rato
Camundongo
At 15 51,6 32,25
At 25 77,4 32,25
56
Seo de Produo de Animais Specified Pathogen Free (SPF) Captulo 4
REPRODUO
Status gentico
57
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
a) Colnia de fundao
A colnia de fundao deve ser mantida apenas por meio de acasalamento entre
indivduos no consanguneos. Para garantir a diversidade gentica, utiliza-se um sistema
descrito por Poiley10, que distribui os casais em grupos; assim, os acasalamentos so feitos
entre indivduos de grupos diferentes. Nesse sistema devem ser mantidos no mnimo 25
casais divididos em no mnimo cinco grupos. Para formar os casais, devem-se selecionar um
macho de um grupo e uma fmea de um grupo diferente, sendo que esse casal pertencer a
um novo grupo, conforme descrito na Tabela 613,14. Posteriormente, os novos grupos formados
so acasalados de acordo com o mesmo sistema apresentado na Tabela.
Esses casais devem ser renovados a cada seis a oito meses aps a data de
acasalamento, em razo da idade avanada dos reprodutores, que j no apresentam mais
o mesmo desempenho reprodutivo.
58
Seo de Produo de Animais Specified Pathogen Free (SPF) Captulo 4
b) Colnia de expanso
c) Acasalamento programado
59
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
60
Seo de Produo de Animais Specified Pathogen Free (SPF) Captulo 4
Caractersticas
Camundongo heterognico (outbred) utilizado h dcadas em pesquisas biomdicas,
principalmente em Farmacologia.
Representa populaes naturais, excelente desempenho reprodutivo, com alta fertilidade,
prolificidade e produtividade.
Adquirido em 2001 Taconic,Germantown, (www.taconic.com)15.
Origem: Carworth Farm, 1935.
Cor: albino.
Peso mdio ao desmame (21 dias de idade): 13 g.
Peso mdio do adulto jovem (6 semanas): macho: 30 g; fmea: 25 g.
Peso mdio do adulto (8 semanas): macho: 40 g; fmea: 30 g.
Sistema de acasalamento: Poiley.
Curva de peso (Biotrio FCF-IQ/USP)
Swiss Webster
50
40
30 macho
peso (g)
fmea
20
10
0
3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
idade (semanas)
61
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Caractersticas
Cor: albino.
Wistar Hannover
300
250
peso (gramas)
200
Macho
150
Fmea
100
50
0
21 28 35 42 49 56 63 71
idade (dias)
62
Seo de Produo de Animais Specified Pathogen Free (SPF) Captulo 4
Caractersticas
Modelo heterognico (outbred) utilizado principalmente em pesquisas biomdicas relacionadas
toxicologia e farmacologia. Linhagem suscetvel a tumores de mama.
Adquirido em 2001 Taconic,Germantown, USA.
Origem: Worthington Dawley, 1925. Mantido na Sprague Dawley Farm, USA.
Cor: albino.
Peso mdio ao desmame (21 dias de idade): 55-60 g.
Peso mdio do adulto jovem (8 semanas): macho: 340 g; fmea: 180 g.
Peso mdio do adulto (10 semanas): macho: 500 g; fmea: 280 g.
Sistema de acasalamento: Poiley.
Curva de peso (Biotrio FCF-IQ/USP)
Sprague Dawley
350
300
250
peso (g)
200 Macho
150 Fmea
100
50
0
1 7 14 21 28 35 42 49 56 63
dade (semanas)
63
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Caractersticas
Modelo heterognico (outbred) imunodeficiente. Mutante espontneo, tambm conhecido
com rato Nude.
Adquirido em 2001 Taconic,Germantown, USA.
Origem: desenvolvido por NIH em 1979-1980 por meio de intercruzamento entre linhagens.
Cor: albino e black.
Os homozigotos tornam-se hairless com 3-4 semanas de idade; logo depois, podem
apresentar pelos curtos na cabea e ocasionalmente no resto do corpo.
Peso mdio ao desmame (28 dias de idade): 45-50 g.
Peso mdio do adulto jovem (8 semanas): macho: 230 g; fmea: 140 g.
Peso mdio do adulto (10 semanas): macho: 300 g; fmea: 180 g.
Sistema de acasalamento: rotacional. So acasalados machos homozigotos com fmeas
heterozigotas.
Curva de peso (Biotrio FCF-IQ/USP)
N:NIH
250
200
peso (g)
150 Machos
Fmeas
100
50
0
1 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70
Idade (dias)
64
Seo de Produo de Animais Specified Pathogen Free (SPF) Captulo 4
Caractersticas
Camundongo isognico (inbred) utilizado principalmente em imunologia, produo de
anticorpos monoclonais, farmacologia e toxicologia.
Adquirido em 2001 Taconic,Germantown, USA.
Origem: Bagg et al., 1923.
Cor: albino.
Peso mdio ao desmame (21 dias de idade): 11 g.
Peso mdio do adulto jovem (6 semanas): macho: 21 g; fmea: 17 g.
Peso mdio do adulto (8 semanas): macho: 24 g; fmea: 20 g.
Sistema de acasalamento: acasalamento entre irm e irmo em sistema monogmico
intensivo.
Curva de peso (Biotrio FCF/IQ-USP)
BALB/c
30
25
20
peso (g)
Macho
15
Fmea
10
0
1 7 14 21 28 35 42 49 56 63
idade (dias)
65
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Caractersticas
Camundongo isognico (inbred) usado em imunologia, oncologia e toxicologia. Tambm
amplamente utilizado como background para camundongos transgnicos e mutantes.
Adquirido em 2001 Taconic, Germantown, USA.
Origem: Little, 1921.
Cor: black.
Peso mdio ao desmame (21 dias de idade): 9 g.
Peso mdio do adulto jovem (6 semanas): macho: 19 g; fmea: 17 g.
Peso mdio do adulto (8 semanas): macho: 25 g; fmea: 21 g.
Sistema de acasalamento: acasalamento entre irm e irmo em sistema monogmico
intensivo.
Curva de peso (Biotrio FCF-IQ/USP)
C57BL/6
30
25
20
peso (g)
macho
15
fmea
10
0
3 4 5 6 7 8 9 10
idade (semanas)
66
Seo de Produo de Animais Specified Pathogen Free (SPF) Captulo 4
Caractersticas
Mutante espontneo inbred, deficiente em clulas-T (imunodeficiente).
Backcrossed com BALB/c por nove geraes.
Adquirido em 2001 Taconic,Germantown, USA.
Cor: albino.
Homozigotos: Hairless.
Sistema de acasalamento: acasalamento entre irm e irmo em sistema monogmico
intensivo. So acasalados machos homozigotos com fmeas heterozigotas.
Curva de peso (Biotrio FCF/IQ-USP)
BALB/c Nude
20
15
peso (g)
Macho
10
Fmea
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
idade (semanas)
67
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Caractersticas
Mutante espontneo da linhagem BALB/c mantido como colnia inbred.
Modelo utilizado principalmente em dermatologia e oncologia.
Adquirido em 2002 The Jackson Laboratory (www.criver.com)16.
Origem: London, 1924.
Cor: albino.
Homozigotos: pelagem normal at 10 dias de idade. Tornam-se hairless aps algumas
semanas.
Sistema de acasalamento: acasalamento entre irm e irmo em sistema monogmico
intensivo. So acasalados machos homozigotos com fmeas heterozigotas.
Caractersticas
Camundongo homozigoto para a mutao Ldlrtm1Her que apresenta elevado nvel de
colesterol (de 200-400 mg/dl), que bastante alterado (> 2,000 mg/dl) quando os animais
recebem dieta rica em gordura.
Modelo para pesquisa cardiovascular (hipercolesterolemia), de diabetes e obesidade,
metabolismo (lipdios) e genes homlogos em camundongos/humanos.
Linhagem 129 backcrossed com C57BL/6 por dez geraes.
Adquirido em 2005 Faculdade de Medicina/USP.
Cor: Black.
Sistema de acasalamento: so acasalados entre irmos (inbred), uma vez que o gene de
interesse est em homozigose, mantidos em acasalamento monogmico intensivo.
68
Seo de Produo de Animais Specified Pathogen Free (SPF) Captulo 4
Caractersticas
Camundongo knockout que expressa protena GFP no epitlio olfatrio.
Linhagem FVB/N backcrossed com C57BL/6 por quatro geraes.
Adquirido em 2008 The Jackson Laboratory.
Origem: Peter Mombaerts, Max Plank Institute of Biophysics, The Rockefeller University.
Cor: black, agouti, chinchila, marrom e albino.
Sistema de acasalamento: os filhotes podem nascer com trs variaes diferentes do
gene: homozigotos 17 (sem gene modificado animal de controle), heterozigoto (um alelo
mutante e um normal) e homozigoto GFP (dois alelos mutantes). Como no apresentam
fentipo que possa identific-los, necessrio genotipar os animais logo aps o desmame,
com 3-4 semanas de idade.
So acasalados entre irmos (inbred) apenas os animais heterozigotos, mantidos em
acasalamento monogmico intensivo.
Particularidades da linhagem (Anexo 16).
Caractersticas
Camundongo geneticamente modificado. Modelo para hemofilia A (Fator VIII).
Adquirido em 2009 The Jackson Laboratory.
Origem: Haig Kazazian, Jr., University of Pennsylvania.
Cor: agouti.
Sistema de acasalamento: so acasalados entre irmos (inbred) em sistema de
acasalamento monogmico intensivo, uma vez que o gene de interesse est em
homozigose.
69
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Caractersticas
Cor: albino.
Sistema de acasalamento: mantidos acasalamentos entre machos SOD1 ALS positivos e fmeas
SD wild (selvagens).
Controle sanitrio
Controle gentico
70
Seo de Produo de Animais Specified Pathogen Free (SPF) Captulo 4
Controle nutricional
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71
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
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laboratory rat. USA: Elsevier Academic Press; 2006. p.147-64.
72
Captulo 5
Introduo
Sistema de ar condicionado
Autoclaves
Recebimento e processamento de materiais
Sistema de ar condicionado
Caixas (gaiolas)
Mquina de lavar materiais
Bebedouros
Manuteno predial
Tampas e grades
Salas de estoque
Uniformes
Almoxarifado
Resduos
Sala de estoque de rao
Recebimento de material contaminado da seo de
experimentao Continer de estoque de
maravalha
Higienizao de materiais
Descarte de resduos
Esterilizao e desinfeco
Cmara de CO2 para eutansia
Autoclaves e processos de desinfeco
Referncias
Controles
73
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
INTRODUO
A equipe composta de trs auxiliares e uma tcnica que atua como chefe da seo.
Todos so treinados para executar suas funes de acordo com as normas de boas prticas
de laboratrio (BPL)1 e biossegurana2, obedecendo aos documentos de POPs e participando
constantemente de cursos e palestras.
Assim que o tcnico chega ao Biotrio, dirige-se imediatamente aos vestirios, onde
guarda no armrio seus acessrios pessoais, retira sua vestimenta e paramenta-se com
os Equipamentos de Proteo Individual (EPIs): macaco, touca, mscara, luvas e sapato
fechado prova dgua. Realizados esses procedimentos, ele j est pronto para executar
suas atividades (Figura 1).
Alm dos EPIs citados, h a necessidade do uso de outros EPIs durante o manuseio
de autoclaves, mquina de lavar materiais e na raspagem das caixas sujas, como: mscara
protetora facial, luva trmica, culos de proteo, luvas de ltex (Mucambo), avental de PVC,
mscara respiratria contra vapores orgnicos e cidos e protetor auricular (concha ou plug).
74
Seo de Higiene e Esterilizao Captulo 5
Caixas (gaiolas)
75
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
A B
C
D
Figura 2. A) Gaiola de polipropileno; B) Gaiola de rack ventilado; C) Gaiola metablica para ratos. Fonte:
Disponvel em: http://www.instrulab.com.br/produtos/32.jpg; D) Gaiola para coelhos. Fonte: Disponvel
em: http://www.beira-mar.com/mpead.htm
76
Seo de Higiene e Esterilizao Captulo 5
Bebedouros
Tampas e grades
77
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Uniformes
Resduos
Os resduos retirados durante a raspagem das gaiolas, o lixo proveniente das salas de
experimentao, das salas de animais, das sees de produo e de higiene e esterilizao,
bem como as carcaas de animais, so considerados resduos de risco biolgico (Figura 4).
78
Seo de Higiene e Esterilizao Captulo 5
HIGIENIZAO DE MATERIAIS
A seo de higiene e esterilizao dispe de uma mquina especfica para lavar esses
materiais, uma lavadora ultrassnica e quatro tanques de alvenaria (500 L/unidade).
79
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Nesses casos, utiliza-se outro mtodo de higienizao dos materiais, que consiste no
preparo de duas solues nos tanques, sendo uma de detergente e outra de desinfetante
com hipoclorito de sdio (5%)4.
80
Seo de Higiene e Esterilizao Captulo 5
ESTERILIZAO E DESINFECO
A autoclave produz esterilizao mediante calor sob presso (121 oC) ou vapor fluente
(100 oC), sendo este o equipamento mais utilizado na esterilizao de materiais e insumos em
biotrios4 (Anexo 4). um dos mtodos mais seguros e confiveis, pois penetra em materiais
porosos, esterilizando-os6,7.
O Biotrio conta com quatro autoclaves de barreira dupla porta (560 L/unidade) (Figura
6), sendo uma para a seo de experimentao e trs para a seo de produo. A estrutura
de dupla porta no permite a contaminao entre as sees limpa e suja.
81
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
H materiais que no podem ser esterilizados nas autoclaves, por causa do tamanho ou
por no resistirem alta temperatura, como estantes de gaiolas, carrinhos de rao, carrinhos
de bebedouros, sacos de rao. s vezes tambm no possvel fazer a higienizao destes
nos tanques de alvenaria. Nesses casos, a desinfeco realizada na seo de higiene e
esterilizao por asperso com lcool 70% ou soluo de hipoclorito de sdio (1%), sendo
depois fornecidos para as outras sees atravs das antecmaras de dupla porta. Alm de
desinfetar os materiais antes de devolv-los s sees, necessrio que as antecmaras
sejam constantemente descontaminadas (Anexo 17).
82
Seo de Higiene e Esterilizao Captulo 5
Controles
Outro indicador qumico utilizado so as tiras de integradores qumicos para vapor, que
consideram todos os parmetros crticos do processo de esterilizao (tempo, temperatura e
qualidade do vapor) e so colocadas no interior dos pacotes a serem esterilizados.
SISTEMA DE AR CONDICIONADO
83
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
A insuflao do ar realizada pelo teto atravs de dutos ligados ao faincoil, com vazo
e presso adequadas para cada seo e taxa de renovao do ar de 20 trocas/h. O sistema
tem um pr-filtro de entrada que substitudo mensalmente, um filtro-bolsa com eficincia de
filtragem de 85% das partculas, que deve ser substitudo semestralmente, e um filtro HEPA
com filtragem absoluta do ar, que deve ser substitudo com frequncia de no mximo dois
anos e que retm partculas de 3 mcrons, com eficincia de 99,97% para vrus e bactrias.
O sistema que atende a seo de experimentao tem filtragem HEPA tambm na sada do
ar. A exausto feita atravs de dutos nas paredes em dois planos (superior e inferior). A
refrigerao das trs sees feita por dois chillers automatizados.
MANUTENO DE EQUIPAMENTOS
84
Seo de Higiene e Esterilizao Captulo 5
Autoclaves
Sistema de ar condicionado
Manuteno predial
85
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
SALAS DE ESTOQUE
Todo material recebido pela seo verificado quanto quantidade, nmero do lote e
data de validade. Posteriormente, destinado para as respectivas salas.
As salas de estoque devem ser arejadas e secas, para evitar a proliferao de fungos,
entre outras contaminaes. A maravalha pode estar contaminada e conter microrganismos;
por isso, acondicionada separadamente de outros materiais, em continer localizado
externamente ao Biotrio, uma vez que os processos de descontaminao/esterilizao dos
insumos so diferenciados6.
Almoxarifado
86
Seo de Higiene e Esterilizao Captulo 5
DESCARTE DE RESDUOS
O Biotrio produz uma grande quantidade diria de resduos e carcaas, que podem
ou no estar contaminados. Como gerador dos resduos, dever do Biotrio realizar seu
adequado descarte2 (Anexo 2). Assim, qualquer resduo que possa conter contaminao
deve ser embalado e autoclavado antes do descarte7.
87
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
A B
O tcnico deve ter treinamento e preceitos ticos, e o processo deve ocorrer distante
de outros animais6,9. O procedimento de eutansia est descrito no Anexo 6, e seguido pelo
tcnico, para garantir a eficincia do processo.
88
Seo de Higiene e Esterilizao Captulo 5
REFERNCIAS
1. Brasil. Ministrio da Sade. Anvisa. Critrios para a habilitao de laboratrios segundo os princpios
das boas prticas de laboratrio (BPL). Braslia; 2001 [citado 7 mar. 2012]. Disponvel em: http://
www.anvisa.gov.br.
2. Neves SMP, Chaguri LCAG, Fontes RSF, Ong FMP. Biossegurana em biotrios. In: Hirata MH,
Hirata RDC, Mancini, Filho JM. Manual de biossegurana. 2a ed. Barueri: Manole; 2012. p.193-211.
3. Mezadri TJ, Tomz VA, Amaral VLL. Biossegurana em laboratrios de experimentao animal.
In: Mezadri TJ, Tomz VA, Amaral VLL. Animais de laboratrio: cuidados na iniciao experimental.
Florianpolis: Editora da UFSC; 2004. p. 53-68.
4. De Luca RR, Damy SB. Higiene, desinfeco e esterilizao. In: De Lucca RR, Alexandre SR,
Marques T, Souza NL, Merusse JLB, Neves SP. Manual para tcnicos em bioterismo. 2a ed. So
Paulo: Winner Graph; 1996. p. 41-56.
5. USA. Healthcare Infection Control Practices Advisory Committee (hicpac). Centers for Disease
Control (CDC). Guideline for disinfection and sterilization in healthcare facilities. Atlanta; 2008 [2012
March 07]. Available from: http://www.cdc.gov/hicpac.
6. Majerowicz J. Boas prticas em biotrios e biossegurana. Rio de Janeiro: Intercincia; 2008. 175p.
7. Smith MW. Safety and hygiene. In: Poole T. The UFAW handbook on the care and management of
laboratory animals. 7th ed. British: Blackwell Science; 2006. v. 1, p.141-70
8. Brasil. Ministrio do Meio Ambiente. Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA). Resoluo
no358 de 2005 [citado 24 set. 2012]. Disponvel em: http://www.mma.gov.br/port/conama/res/res05/
res35805.pdf.
9. Lapchik VBV, Mattaraia VGM. Finalizao humanitria. In: Lapchik VBV, Mattaraia VGM, Ko GM.
Cuidados e manejo de animais de laboratrio. So Paulo: Atheneu; 2009. p.603-15.
10. Brasil. Conselho Federal de Medicina Veterinria (CFMV). Resoluo no 1000. Braslia, 11 de maio
de 2012 [citado 7 mar. 2012]. Disponvel em: http://www.cfmv.org.br.
89
bbb
Captulo 6
Seo de Experimentao
Introduo
Anestesia e analgesia de animais de
Descrio da seo
laboratrio
Terminologia bsica
Biossegurana na seo de experimentao
Planejamento e cuidados
Padronizao da experimentao animal
Pr-procedimento
Protocolos e procedimentos operacionais
Durante o procedimento
padro
Cuidados ps-procedimento
Equipamentos de Proteo Individual (EPIs)
Medicao pr-anestsica
Equipamentos de Proteo Coletiva (EPCs)
Anestesia
Descarte de materiais biolgicos
Dor
Riscos ocupacionais
Estresse
91
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
INTRODUO
A equipe da seo composta de uma tcnica de nvel mdio, uma tcnica de nvel
superior e uma especialista, que atua como chefe da seo.
92
Seo de Experimentao Captulo 6
A padronizao dos procedimentos de rotina, todo o fluxo de entrada e sada das sees,
as normas de biossegurana e as normas internas relacionadas ao desenvolvimento correto
dos experimentos garantem a qualidade dos trabalhos desenvolvidos e a reprodutibilidade
dos resultados entre experimentos.
Descrio da seo
Sala destinada aos animais que saram da seo de produo e sero entregues aos
pesquisadores. Os animais so retirados da seo de produo para essa sala atravs do
pass-through de passagem, para evitar a contaminao cruzada entre as sees de produo
e experimentao.
Salas de experimentao
93
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
As salas so identificadas nas portas com os nomes dos pesquisadores, seus ramais
e telefones de emergncias.
Sala de procedimentos
94
Seo de Experimentao Captulo 6
A B
95
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Essa sala conta com uma autoclave de dupla porta para a esterilizao de materiais
provenientes da seo de higiene e esterilizao para a seo de experimentao. So
esterilizados os seguintes materiais nessa sala: gaiolas, grades, maravalha e bebedouros
completos com gua.
Encontram-se tambm nessa sala materiais de limpeza, sacos de lixo hospitalar, sacos
autoclavveis e fichas para identificao de gaiolas.
96
Seo de Experimentao Captulo 6
97
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
terminantemente proibido comer, beber, fumar, utilizar cosmticos, joias e perfumes com odores
fortes no Biotrio
O lixo resultante das salas experimentais (contaminado) previamente autoclavado para posterior
descarte
As carcaas de animais devem ser previamente congeladas antes de serem descartadas e, se estiverem
contaminadas devem ser autoclavados antes de serem transferidas para a lixeira hospitalar (Resoluo
Conama no 358 de 2005)6
Devem ser seguidas todas as regras de segurana referentes ao seu trabalho, comunicando
imediatamente o responsvel caso haja qualquer situao de risco
Todos os procedimentos tcnicos devem ser realizados com o intuito de reduzir ao mximo o perigo
de formao de aerossis e particulados no ambiente
O responsvel pelo Biotrio dever oferecer treinamentos e verificar a capacitao de cada funcionrio
antes de permitir-lhes o manuseio dos animais de laboratrio, alm de assegurar-se da capacitao
da equipe em relao s medidas de segurana
Somente pessoas habilitadas devero manusear os equipamentos, devendo estes ter suas instrues
de uso afixadas em local de fcil visualizao
98
Seo de Experimentao Captulo 6
Classificao Descrio
Baixo risco individual e baixo risco para a comunidade. Trata-se de OGM que
Grupo de contm sequncias de ADN/ARN de organismo doador e receptor que no causem
risco I agravos sade humana e animal e efeitos adversos aos vegetais e ao meio
ambiente
Moderado risco individual e baixo risco para a comunidade. Trata-se de OGM que
Grupo de risco contm sequncias de ADN/ARN de organismo doador ou receptor com moderado
II risco de agravo sade humana e animal, que tenha baixo risco de disseminao
e de causar efeitos adversos aos vegetais e ao meio ambiente
Alto risco individual e risco moderado para a coletividade. Trata-se de OGM que
Grupo de risco contm sequncias de ADN/ARN de organismo doador ou receptor, com alto
III risco de agravo sade humana e animal, que tenha baixo ou moderado risco
de disseminao e de causar efeitos adversos aos vegetais e ao meio ambiente
Alto risco individual e alto risco para a coletividade. Trata-se de OGM que contm
Grupo de sequncias de ADN/ARN de organismo doador ou receptor com alto risco de
Risco IV agravo sade humana e animal, que tenha elevado risco de disseminao e de
causar efeitos adversos aos vegetais e ao meio ambiente
99
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Protocolos
Esse manual descreve como deve ser o comportamento dos usurios em biotrios de
experimentao, como manter silncio nas reas com animais, como utilizar os materiais que
o Biotrio fornece, quais so os horrios de entrega de animais e outros itens especficos etc.
A mesma norma tambm contm recomendaes para os trabalhos com os animais, como
preenchimento correto das fichas de identificao das gaiolas, densidade de animais versus
tamanho da gaiola, dependendo da espcie (Captulo 4), e a promoo do bem-estar animal
com a utilizao de itens de enriquecimento ambiental (Captulo 3).
100
Seo de Experimentao Captulo 6
Protocolo experimental
Foi estabelecido um sistema de numerao para esse documento por seo e por
tipo de procedimento, que contm seus anexos afixados em cada sala e equipamento, para
anotaes dirias de quem realizou o procedimento e a data.
101
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Rotinas e procedimentos
1. Realizar a assepsia das mos (higienizao das mos, com gua e sabo, e lcool
70% no final do procedimento);
2. Colocar os pro-ps (sapatilhas) que envolvem os sapatos;
3. Colocar a touca, que deve cobrir toda a cabea e os cabelos;
4. colocar a mscara de forma que cubra a boca e o nariz;
5. Vestir o avental do prprio Biotrio, o qual deve ser devidamente fechado, inclusive
na parte do pescoo;
6. Colocar as luvas (recomendam-se duas luvas para cada mo)(*);
7. Passar lcool 70% sobre as luvas.
Na sada do Biotrio, deve-se realizar novamente a assepsia das mos, fazendo a
lavagem com sabo e a descontaminao com lcool 70%, aps a retirada do segundo par
de luvas.
(*) Padronizou-se a colocao de duas luvas em cada mo, para que, ao sair do Biotrio experimental, na prpria
sala, o pesquisador, usurios e funcionrios faam a retirada da luva externa e passe lcool 70% na luva de baixo,
podendo assim abrir as portas.
102
Seo de Experimentao Captulo 6
Os EPCs s podem ser manuseados por pessoas habilitadas, devendo ter suas
instrues de uso afixadas em local de fcil visualizao.
103
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
104
Seo de Experimentao Captulo 6
Riscos ocupacionais
Com relao ao ambiente de trabalho, existem alguns odores animais que podem ser
agressivos aos seres humanos. Esses odores so produzidos pela decomposio bacteriana
dos excrementos. Contudo no se devem utilizar produtos que mascarem esses odores, pois
podem ser nocivos para os animais e atrapalhar o comportamento normal da espcie14. Nessa
seo, tais odores so controlados por procedimentos rotineiros de limpeza, com produtos de
baixa toxicidade aos animais, e pela manuteno da ventilao adequada.
Para controlar acidentes, a FCF e IQ contam com uma Comisso Interna de Preveno
de Acidentes (CIPA), que tem funo educativa e de conscientizao quanto aos riscos de
acidentes no trabalho.
Zoonoses
105
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Alergias
Como medidas para reduzir o grau de exposio aos alrgenos, devem ser
providenciados ventilao adequada, mtodos de limpeza que no produzam aerossis,
como varredura mida, e utilizao de EPIs (mscaras, protetores faciais, luvas, entre outros).
Atualmente, existem os sistemas de racks ventilados16, que tambm diminuem a exposio
do trabalhador s substncias alergnicas.
106
Seo de Experimentao Captulo 6
Quanto ao manuseio dos animais, os alunos so orientados para que estes sejam
abordados, manipulados e contidos com cuidado e profundo respeito, devendo ser tomadas
todas as precaues possveis com o intuito de garantir o mnimo de estresse durante a
manipulao17,18.
Nesse perodo, o operador deve manuse-los para que se adaptem ao seu cheiro
e rotina do manuseio e para introduzir o treinamento das tcnicas e procedimentos que
sero realizados. Um exemplo de treinamento de tcnicas o uso da guilhotina. Esse tipo
de equipamento introduzido nas gaiolas dias antes da eutansia, para que os animais se
acostumem com o objeto novo e, no momento da eutansia, no fiquem muito estressados22,23.
Transferncia de gaiolas
107
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Para a transferncia de uma gaiola para outra, bem como para a pesagem dos animais,
os ratos devem ser manuseados de forma gentil e firme, suspendendo o animal com a mo
atrs das patas dianteiras e da cabea, pelo meio do corpo. No recomendvel o manuseio
do animal pela cauda, tendo em vista que o animal pode se tornar mais agressivo e intolerante
a manipulaes futuras23,24 (Figura 7).
108
Seo de Experimentao Captulo 6
109
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
A B
Figura 9. A) Conteno de rato segurando-lhe o pescoo com os dedos indicador e mdio; B) Conteno
de rato envolvendo-lhe o dorso abaixo dos membros anteriores
A B
Figura 10. Conteno manual para ratos puxando-lhe toda a pele do dorso
110
Seo de Experimentao Captulo 6
apreendida com os outros dedos19, 26. importante prender bem a pele solta do pescoo,
para que o animal no consiga virar e morder o operador. Ao girar a mo, o camundongo fica
com sua face ventral virada para cima, e sua cauda ento presa entre o dedo anular e a
ponta do dedo mnimo.
A conteno no deve ser muito apertada, pois pode dificultar a respirao do animal,
os olhos ficam saltados e a frequncia cardaca aumenta. Tambm no pode ser muito
solta, pois podem ocorrer acidentes: por exemplo, o animal pode girar e morder ou arranhar
o operador. Deve-se atentar tambm para a aplicao incorreta de injees. Portanto, a
perfeita conteno reduz o estresse do animal (Figura 11).
Dispositivos artificiais
Figura 12. A) Contensor artificial para camundongo; B) Contensor artificial para rato
111
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Rato
Camundongo
Via oral
Gavagem
Os roedores comem e bebem muitas vezes ao dia. Por esse motivo, dificilmente esto
com o estmago vazio. Como a distenso mxima do estmago no final do perodo escuro
e a quantidade mnima, no final do perodo claro, pequenos volumes devem ser administrados
112
Seo de Experimentao Captulo 6
no incio do perodo claro. O volume indicado de 1 mL de soluo para cada 100 g de peso
corporal. Se a soluo for aquosa, esse volume pode subir para 2 mL para cada 100 g de
animal17.
Administrao subcutnea
A B
Figura 14. A) Inoculao subcutnea na regio da pele do pescoo; B) Inoculao subcutnea na regio
do flanco
113
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Administrao intramuscular
Essa via usada para pequenos volumes, pois o msculo dos ratos e camundongos
de pequeno porte. A substncia injetada no msculo da poro posterior das patas
traseiras, devendo ser direcionada para longe do fmur e nervo citico. Quando o animal
est anestesiado ou manualmente contido, a ponta da agulha inserida atravs da pele e no
msculo. Aspirar brevemente com a seringa antes de injetar a substncia, para certificar-se
de que no retorne sangue, caso a agulha penetre um vaso19,26,28(Figura 15).
A B
Administrao endovenosa
114
Seo de Experimentao Captulo 6
A B
Artria
Veia
Lateral da cauda
Cauda
Administrao intraperitoneal
O animal deve ser contido pelo dorso, como descrito no item Conteno manual.
Com a conteno, o animal posicionado com a sua face ventral voltada para cima.
Normalmente, a injeo aplicada no quadrante posterior do abdome, do lado direito do
animal e do esquerdo do operador. A substncia injetada na cavidade peritoneal entre os
rgos abdomnais.
115
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
B
A
1 2
C
3 4
Figura 17. A) O quadrante inferior esquerdo (3) a melhor rea para aplicar a injeo intraperitoneal; B)
Injeo intraperitoneal em rato; C) Injeo intraperitoneal em camundongo
Administrao intradrmica
Geralmente, essa via no recomendada e deve ser restrita aos casos de absoluta
necessidade.
A pele do animal esticada com o dedo polegar ou indicador, e a agulha inserida logo
abaixo da camada superficial da epiderme. A aplicao da injeo pode ser constatada pela
formao de uma bolha na pele do animal. O volume a ser administrado de 0,05 mL por
local de administrao19,26,28 (Figura 18).
116
Seo de Experimentao Captulo 6
A B
Administrao intracerebral
Administrao intranasal
117
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Coleta de sangue
Existem variadas tcnicas de coleta de sangue, tanto para ratos como para
camundongos. Porm para a melhor escolha da tcnica, deve-se ter conhecimento de alguns
parmetros relacionados aos animais, como espcie, tamanho do animal, tipo de amostra
necessria (soro, plasma, clulas inteiras), qualidade da amostra necessria (esterilidade,
contaminao de fludos, tecidos), quantidade de sangue necessria, frequncia de
amostragem, estado de sade do animal, formao e experincia do operador e efeito da
conteno ou anestesia sobre o parmetro arterial medido27.
Do volume de sangue circulante, cerca de 10% do volume total pode ser removido com
segurana a cada duas a quatro semanas; 7,5% desse volume pode ser removido a cada
sete dias; e 1% a cada 24 horas17,20,25, como descrito na Tabela 1.
118
Seo de Experimentao Captulo 6
Retro-orbital
Esse procedimento no recomendvel, uma vez que se pode cegar o animal caso
o operador no esteja bem treinado. Por isso, sua utilizao deve ser muito bem justificada.
O animal deve estar anestesiado e manualmente contido. Apoia-se o animal sobre uma
superfcie lisa e penetra-se com uma pipeta Pasteur ou tubo capilar em um ngulo de 45 no
canto do olho, sob o globo ocular. Gira-se levemente o capilar durante a entrada e espera-se
o sangue escorrer por um tubo.
A B
Figura 20. A) Anestsico oftlmico; B) Coleta de sangue via retro-orbitral (Fonte: Disponvel em: http://
www.theodora.com/rodent_laboratory/blood_collection.html)
119
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Para finalizar o procedimento, utiliza-se uma gaze estril para estancar o sangramento19,20
(Figura 21).
A B
Veia safena
Pode ser utilizado tanto para ratos como para camundongos, perfurando-se a veia
safena com uma agulha. O volume de sangue obtido de pequeno a mdio, e a qualidade
da amostra varivel.
Deve haver uma conteno efetiva do animal, no necessitando da utilizao de
anestsicos.
A veia safena encontrada na superfcie externa da coxa. Para melhor visualizao,
devem-se remover os pelos da regio da coxa do animal.
O camundongo pode ser contido em um tubo de 50 mL, cortando-se a ponta do tubo,
para que o animal respire. O camundongo inserido nesse tubo com a cabea para dentro,
o que favorece o manuseio de suas patas traseiras.
Para visualizar a veia, prende-se a parte logo acima da coxa do animal como se fosse
um garrote ; em seguida, pode-se aplicar um lubrificante para facilitar a coleta. Introduzir a
agulha e coletar as gotas de sangue que surgem19,30 (Figura 22).
120
Seo de Experimentao Captulo 6
Veia da cauda
Essa coleta pode ser realizada tanto em ratos como em camundongos. A qualidade
da amostra varivel, podendo estar contaminada com tecido ou pele, e diminuda
proporcionalmente ao tempo prolongado do sangramento e da ordenha da cauda.
Podem ser utilizadas agulhas de pequeno calibre ou realizar a canulao das veias31.
A B
Veia jugular
Essa via limitada a ratos, sendo o volume obtido de mdio a grande com uma boa
qualidade da amostra.
O animal deve ser primeiramente anestesiado e contido de forma que permanea com
121
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
a cabea para cima. O pelo do pescoo (local da puno) pode ser retirado ou molhado com
lcool 70%.
Com o pescoo distendido, localiza-se a veia jugular e retira-se o sangue com uma
seringa de 1 mL, inserindo a agulha de 1 mm a 3 mm de profundidade19,20.
Puno cardaca
Esse procedimento pode ser realizado tanto em ratos como em camundongos. Obtm-
se uma boa quantidade de sangue, formada por uma mistura de sangue arterial e venoso
(Anexo 21).
Quando uma mancha de sangue aparecer, puxa-se o mbolo devagar; o sangue fluir
sozinho, no sendo necessrio pux-lo com fora22,31 (Figura 24).
A B
Figura 24. A) Puno cardaca em rato; B) Localizao do corao no rato (Fonte: Disponvel em: http://
www.theodora.com/rodent_laboratory/blood_collection.html)
122
Seo de Experimentao Captulo 6
Aorta abdominal
Faz-se uma inciso profunda na axila do animal, na parte lateral do trax, segurando a
pele na parte posterior da inciso com uma pina, para criar uma concha na regio. O sangue
coletado com o auxlio de pipetas19,20.
123
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
COELHOS
Inoculao
A B
C D
Figura 26. A) Conteno manual para transporte de coelho (Fonte: Disponvel em: http://research.
uiowa.edu/animal/print.php?get=rabbit>); B e C) Tcnicas de conteno para procedimentos de coleta
ou inoculao endovenosa (Fontes: http://www.ahwla.org.uk/site/tutorials/BVA/BVA08-Rabbit/Rabbit.
html e http://ehs.uc.edu/lams/data/Rabbits/9004/images/lg/04_27.jpg)
124
Seo de Experimentao Captulo 6
Coleta de sangue
125
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
126
Seo de Experimentao Captulo 6
Terminologia bsica29,37,48
Anestesia geral: o estado anestsico reversvel obtido com agentes inalatrios e/ou
injetveis, que satisfaz as seguintes condies: perda da conscincia (narcose); abolio da
dor (analgesia); relaxamento muscular.
127
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Planejamento e cuidados
O grau das alteraes causadas varia, porm todo agente anestsico gera hipotermia17
e diminuio das atividades cardiovascular (bradicardia) e respiratria (bradipneia). Aps
o procedimento, essas alteraes persistem at a recuperao do animal, e por isso
necessrio o cuidado com o animal imediatamente aps o procedimento e, em alguns casos,
por mais alguns dias depois. O tempo de recuperao do animal varia conforme o agente
utilizado.
Pr-procedimento
128
Seo de Experimentao Captulo 6
ambiente (Captulo 3), mesmo que o animal tenha apenas mudado de uma seo para outra
dentro do mesmo biotrio.
Nos casos em que seja necessria a restrio de alimentos, deve-se considerar que
os roedores realizam a coprofagia (ingesto de fezes). Mesmo adotando-se medidas para
evit-la durante o perodo de restrio, como a utilizao de gaiolas metablicas, o animal
capaz de retirar as fezes diretamente do nus44 (Captulo 3).
129
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Durante o procedimento
Rato (200 g) 5 5
Cuidados ps-procedimento
130
Seo de Experimentao Captulo 6
Os animais devem ser monitorados pelo menos uma vez ao dia, para avaliar a
presena de dor no ps-procedimento36;
Considerar que, aps a cirurgia, o animal diminuir o consumo de gua e rao. Isso
pode ser resolvido facilitando seu acesso alimentao e hidratao, bem como
providenciando analgesia adequada.
Medicao pr-anestsica
131
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
132
Seo de Experimentao Captulo 6
Anestesia
133
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Anestesia injetvel
134
Seo de Experimentao Captulo 6
Rato
0,75 mL (75 mg) cetamina + 0,5 mL (10 mg) xilazina + 0,75 mL gua para injeo
Camundongo
0,5 mL (75 mg) cetamina + 0,25 mL (5 mg) xilazina + 4,25 mL gua para injeo
IP intraperitoneal
135
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Anestesia inalatria
136
Seo de Experimentao Captulo 6
Dor
Acreditava-se no passado que os animais no eram capazes de sentir dor. Hoje, sabe-
se que eles sentem dor, porm difcil reconhecer essa dor e saber o grau de dor que o animal
137
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
138
Seo de Experimentao Captulo 6
Estresse
distresse ocorre quando o animal sofre um estmulo que prejudica seu bem-estar.
Analgesia
No mbito da pesquisa, vantajoso promover o alvio da dor, pois o animal com dor
139
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
sofre alteraes patofisiolgicas que podem influenciar os resultados dos experimentos. Alm
disso, ao promover o alvio da dor trabalha-se de acordo com a legislao e com princpios
ticos e humanitrios35,36.
Colocao de transponder
Cesariana Procedimentos vertebrais
subcutneo
Procedimento ocular na
Procedimento ocular no corneal
crnea
Implante de eletrodos
intracerebrais
Vasectomia
Linfadenectomia superficial
140
Seo de Experimentao Captulo 6
Durao da
Categoria Agente Dosagem Indicao
analgesia
Dor moderada a
Opioides Buprenorfina 0,02-0,5 mg/kg SC/IV/IP 6-12 h
severa
Dor moderada a
Opioides Butorfanol 0,2-2 mg/kg SC/IP 2-4 h
severa
Dor moderada a
Opioides Meperidina 10-20 mg/kg SC/IM 2-3 h
severa
Dor moderada a
Opioides Morfina 2-5 mg/kg SC 2-4 h
severa
Aspirina (cido
100 mg/kg VO 4-8 h Dor leve a moderada
AINES acetilsaliclico)
Acetaminofeno
AINES 1-2 mg/mL na gua Dor leve a moderada
(paracetamol)
141
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Durao da
Categoria Agente Dosagem Indicao
analgesia
Dor moderada a
Opioides Buprenorfina 0,05-2,5 mg/kg SC/IP 6-12 h
severa
Dor moderada a
Opioides Butorfanol 0,2-2 mg/kg SC/IP 2-4 h
severa
Dor moderada a
Opioides Meperidina 10-20 mg/kg SC/IM 2-3 h
severa
Dor moderada a
Opioides Morfina 2-5 mg/kg SC 2-4 h
severa
Dor leve a
AINES Ibuprofeno 7-15 mg/kg VO 4h
moderada
EUTANSIA
O termo eutansia derivado do grego (eu = bom, thanatos = morte) e significa boa
morte, ou seja, uma morte sem sofrimento. Uma boa morte aquela em que o animal no
sente dor nem angstia53,54.
142
Seo de Experimentao Captulo 6
experimentao, seu dever assegurar que estes sejam tratados em todos os momentos
com o mximo de respeito, evitando que tenham uma morte dolorosa e que sejam tomados
por angstia em momentos anteriores morte, antes da perda de conscincia.
143
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Para que ocorra a morte humanitria, sem dor e distresse, o animal dever perder a
conscincia antes de ocorrer a perda da atividade motora (muscular) 32.
Espcie animal
144
Seo de Experimentao Captulo 6
circunstncia. Entre eles esto tambm os mtodos que envolvem um grande risco
ocupacional para o operador (Quadro 16).
Embolia gasosa
Traumatismo craniano
Incinerao in vivo
Hidrato de cloral (para pequenos animais)
Clorofrmio ou ter sulfrico
Descompresso
Afogamento
Exsanguinao (sem sedao prvia)
Imerso em formol ou qualquer outra substncia fixadora
Uso isolado de bloqueadores neuromusculares, sulfato de magnsio ou cloreto de potssio
Qualquer substncia txica que possa causar sofrimento e/ou demandar tempo excessivo para
a morte
Eletrocusso sem insensibilizao ou anestesia prvia
Qualquer outro mtodo considerado sem embasamento cientfico
Fonte: Brasil51.
145
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Mtodos qumicos
Agentes inalantes
Realizar controle dos agentes, pois a maioria considerada perigosa por trazer risco de exploses,
narcose, hipxia, dependncia qumica e efeitos adversos sade pela exposio crnica32
Animais com problemas respiratrios demoram a atingir uma concentrao alveolar suficiente para
a eutansia, devendo-se, nesses casos, utilizar um mtodo no inalatrio32
Neonatos so mais resistentes hipxia do que adultos, demorando mais para morrer.
recomendado, portanto, no utilizar agentes inalatrios como mtodo nico de eutansia32,53
Quando for utilizada cmara de gs, os animais a serem colocados nesta para serem submetidos a
eutansia devem ser da mesma espcie. Deve-se cuidar para no colocar muitos animais de uma
vez s e manter a cmara sempre limpa, para evitar odores estressantes32
importante constatar-se de que o animal est mesmo morto antes de retir-lo da cmara32,50
146
Seo de Experimentao Captulo 6
147
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Agentes no inalantes
Mtodos fsicos
Deslocamento cervical
Nessa tcnica a morte do animal ocorre ao se aplicar presso na base do seu crnio,
deslocando-lhe a coluna e separando o crnio da medula espinhal35,52,55. Aparentemente, se
praticado por pessoa treinada e com habilidade, um mtodo humanitrio. No entanto, h
poucas referncias na literatura que sustentem essa afirmao32.
Esse mtodo permite obter amostras sem alterao anatmica de crebro e tecidos.
148
Seo de Experimentao Captulo 6
Para avaliar qual o melhor mtodo de eutansia, deve-se identificar a idade do feto ou
neonato e verificar se os animais sero necessrios ao estudo49 (Quadro 18).
No caso dos fetos at o 15o dia de gestao, ainda no h percepo da dor. A partir
do 15o dia da gestao at o nascimento, porm, ocorre o desenvolvimento neural, havendo
a probabilidade de os sinais de dor serem processados bioqumica e neurofisiologicamente49.
No entanto, evidncias recentes implicam que os fetos nessa fase no so sensveis nem
conscientes, sendo, portanto, incapazes de perceber a dor de fato32.
149
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Fetos
Neonatos
Por exemplo, pode ocorrer de o animal estar em profunda narcose e, ao ser interrompida
a administrao do agente inalatrio de eutansia (por exemplo, em uma eutansia em
cmara de CO2), eventualmente recuperar-se32.
Por isso, deve-se treinar o operador para fazer a constatao da ausncia dos sinais
vitais no animal: avaliar se houve cessao dos batimentos cardacos, se no h reflexo ao
toque do globo ocular e se as mucosas esto arroxeadas, indicando anxia35,53, entre outros.
150
Seo de Experimentao Captulo 6
REFERNCIAS
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Seo de Experimentao Captulo 6
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139.
154
Captulo 7
Controle Nutricional
Silvnia M. P. Neves
Flavia M. P. Ong
Introduo
INTRODUO
O estado nutricional do animal de laboratrio influencia sua capacidade para atingir seu
potencial gentico de crescimento, de longevidade, de reproduo, bem como sua resposta
a patgenos e a outros tipos de estresse ambiental. Uma dieta balanceada, de formulao
conhecida e reprodutvel, garante no s o bem-estar dos animais, mas tambm a qualidade
dos resultados dos experimentos conduzidos com esses animais1.
155
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
156
Controle Nutricional Captulo 7
o que afeta a qualidade dos experimentos. Dessa forma, o Biotrio, em conjunto com o
Laboratrio de Nutrio e Minerais da FCF-USP, realiza a avaliao nutricional das raes
comerciais utilizadas, com o objetivo de definir o padro de identidade e qualidade, por meio
de estudos comparativos das diferentes marcas de raes comerciais (A, B e C), disponveis
para ratos e camundongos, utilizando como controle uma dieta base de casena (P). So
realizadas anlises de composio centesimal (Tabela 1), minerais (Tabela 2) e de vitaminas,
estas ltimas feitas no Instituto Adolfo Lutz e no Instituto de Tecnologia de Alimentos (Ital)
(Tabela 3). Os ensaios biolgicos envolvem a avaliao da qualidade da protena in vivo, pela
determinao do coeficiente de digestibilidade (Tabela 4), que indica a proporo de alimento
ingerido que digerido e absorvido pelo organismo do animal.
Tabela 1. Anlise da composio centesimal (%) de raes comerciais para ratos e camundongos de
diferentes marcas existentes no mercado nacional
NRC (ref.) 20 5 5
Tabela 2. Anlise da composio de minerais (mg/kg) de raes comerciais para ratos e camundongos
de diferentes marcas existentes no mercado nacional
Rao Fe Zn Cu
157
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Tabela 3. Anlise de vitaminas de raes comerciais para ratos e camundongos, esterilizadas pelos
processos de calor mido (autoclave) e irradiao gama
A E B1 B2 B3 B12
Rao
(UI/kg) (UI/kg) (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) (g/kg)
Tabela 4. Avaliao nutricional de diferentes marcas de raes comerciais para ratos e camundongos
Coeficiente de digestibilidade
Rao N Protenas (%)
(%)
A 6 230,61 801,7
B 6 230,57 752,8
C 6 211,20 721,1
P(*) 6 240,5 950,3
(*) Dieta-padro AIN 93G.
158
Controle Nutricional Captulo 7
Um dos pr-requisitos definidos para a compra de rao para o Biotrio que a rao
seja peletizada e balanceada, composta de milho integral modo, farelo de trigo, farelo de
soja, carbonato de clcio, fosfato biclcico, cloreto de sdio, aminocido e premix mineral e
vitamnico. Deve apresentar-se ntegra e manter suas caractersticas organolpticas (odor,
sabor, cor e consistncia). Os nveis de garantia por quilograma do produto esto listados na
Tabela 5.
159
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
REFERNCIAS
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160
Anexos
Anexos
163
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
164
Anexos
Objetivo:
Esse POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que
devem ser aplicadas por todos os funcionrios envolvidos em atividades de rotina executa-
das na seo de higienizao e esterilizao do Biotrio de Experimentao da Faculdade
de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo (BPE
FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se operao da mquina de lavar gaiolas, presente na seo de higienizao e
esterilizao do BPE FCF-IQ/USP.
Siglas:
165
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
166
Anexos
Objetivo:
Esse POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que de-
vem ser aplicadas por todos os funcionrios envolvidos em atividades de rotina executadas
na seo de higiene e esterilizao do Biotrio de Produo e Experimentao da Facul-
dade de Cincias Farmacuticas e Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo (BPE
FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se operao das autoclaves, presentes na seo de higiene e esterilizao do BPE
FCF-IQ/USP.
Siglas:
167
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
password (*****);
2. No visor, selecionar a funo menu;
3. Selecionar a funo partida;
4. Selecionar no visor o ciclo a ser realizado (GUA, TAMPA, CAIXAS ou MARAVALHA)
e confirmar selecionando a seta verde para a direita;
5. Conferir no visor os parmetros do ciclo selecionado e pressionar OK;
6. Selecionar a seta verde para a direita;
7. Selecionar a opo OK;
8. Aguardar a execuo do ciclo de esterilizao.
F1 + 1 Maravalha e roupas
F1 + 2 Caixas, roupas
F1 + 3 gua, luvas
F1 + 4 Tampas
168
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que de-
vem ser aplicadas por todos os funcionrios envolvidos em atividades de rotina executadas
no Biotrio da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da Universi-
dade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se ao descarte de resduos biolgicos gerados pelo BPE FCF/IQ USP.
Siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
169
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
170
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que de-
vem ser aplicadas por todos os funcionrios envolvidos em atividades de rotina executadas
na seo de higiene e esterilizao do Biotrio de Produo e Experimentao da Facul-
dade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo
(BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se aos procedimentos de eutansia de camundongos, ratos e coelhos. Os procedi-
mentos de eutansia so realizados na seo de higiene e esterilizao do BPE FCF-IQ/
USP.
Siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
171
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
172
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que
devem ser aplicadas por todos os funcionrios envolvidos em atividades de rotina executa-
das na seo de higienizao e esterilizao do Biotrio de Produo e Experimentao da
Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da Universidade de So
Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se introduo dos sacos de rao para roedores de laboratrio na seo de
Produo do BPE FCF-IQ/USP.
Siglas:
173
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
174
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que
devem ser aplicadas pelos funcionrios antes de iniciar as atividades de rotina na seo de
produo de ratos e camundongos.
Aplicao:
Aplica-se ao conhecimento dos procedimentos para acesso seo de produo do Biot-
rio de Produo e Experimentao da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto
de Qumica da Universidade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Siglas:
So usadas no texto deste POP as seguintes siglas:
2- Seo de produo
1.1 Banho:
1. Retirar o avental e coloc-lo no cabide da antecmara (fora do vestirio);
2. Retirar os sapatos e guard-los na sapateira (fora do vestirio);
3. Colocar o chinelo que se encontra na sapateira;
4. Ao entrar no vestirio, despir-se e guardar a roupa no armrio;
5. Retirar todos os pertences como: joias, relgios, celular e outros objetos;
6. Tomar o banho com touca e utilizar o sabonete lquido fixado na parede do boxe;
7. No caso das mulheres, retirar toda a maquiagem durante o banho.
8. Sair do outro lado do boxe e utilizar uma toalha limpa e esterilizada.
175
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
176
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que de-
vem ser aplicadas pelos funcionrios envolvidos em atividades de rotina na sala de preparo
de material.
Aplicao:
Aplica-se ao conhecimento dos procedimentos de rotina realizados na sala de preparo de
material na seo de produo do Biotrio de Produo e Experimentao da Faculdade
de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo (BPE
FCF-IQ/USP).
Siglas:
So usadas no texto deste POP as seguintes siglas:
2- Seo de produo
177
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
2. Bebedouros:
a) Abrir a autoclave e retirar o carrinho com bebedouros da autoclave utilizando o
suporte apropriado;
b) Aguardar o resfriamento total;
c) Retirar cada bebedouro do suporte e armazenar na estante para estoque de
bebedouro;
d) Armazenar os bebedouros para ratos (700 mL) e para camundongos (300 mL)
separadamente.
3. Rao:
a) Abrir o saco de rao e coloc-la sobre a peneira;
b) Peneirar a rao;
c) Despejar a rao peneirada no carrinho apropriado;
d) Colocar a tampa e deixar o carrinho na sala de estoque de rao;
e) Anotar na planilha de controle a quantidade de sacos utilizados e o nmero do lote
de fabricao da rao.
178
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que
devem ser aplicadas pelos funcionrios envolvidos em atividades de rotina em salas de
produo de ratos e camundongos.
Aplicao:
Aplica-se ao conhecimento dos procedimentos de rotina na seo de produo do Biotrio
de Produo e Experimentao da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de
Qumica da Universidade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP.
Siglas:
So usadas no texto deste POP as seguintes siglas:
2- Seo de produo
SPF Specified Pathogen Free
179
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
180
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que
devem ser aplicadas pelos funcionrios envolvidos em atividades de rotina em salas de
produo de camundongos mantidos em racks ventilados.
Aplicao:
Aplica-se ao conhecimento dos procedimentos de rotina na seo de produo do Biotrio
de Produo e Experimentao da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de
Qumica da Universidade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Siglas:
So usadas no texto deste POP as seguintes siglas:
2 Seo de produo
181
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
6. Caso algum objeto ou animal seja manuseado fora da rea de trabalho, ser emitido
o indicativo sonoro.
182
Anexos
25. Transportar, pelo corredor de fluxo de material sujo, o carrinho com bebedouros
usados e as gaiolas sujas at o air-lock, de onde sero transferidas para a seo de
higiene e esterilizao por um funcionrio dessa seo;
26. Verificar se as vlvulas das gaiolas esto conectadas corretamente nos difusores da
estante;
27. Observar a saturao dos filtros do rack ventilado pelo indicativo luminoso no painel.
183
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece procedimentos que devem ser
aplicados por todos os funcionrios responsveis por colnias isognicas na seo de
produo do Biotrio de Produo e Experimentao da Faculdade de Cincias Farmacuti-
cas e do Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se manuteno de colnia de ratos e camundongos isognicos, a fim de garantir o
padro gentico.
Siglas:
So usadas no texto deste POP as seguintes siglas:
2- Seo de produo
184
Anexos
5. Colocar uma ficha de registro para cada gaiola com os dados: linhagem, data de
nascimento, data de desmame, quantidade de animais, sexo e nmero dos pais;
6. Realizar o mesmo procedimento para todos os casais que tiverem filhotes para
desmame.
185
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
186
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece procedimentos que devem ser
aplicados por todos os funcionrios responsveis por colnia heterognica na seo de
produo do Biotrio de Produo e Experimentao da Faculdade de Cincias Farmacuti-
cas e do Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se manuteno de colnia de ratos e camundongos heterognicos, a fim de garan-
tir o padro gentico.
Siglas:
So usadas no texto deste POP as seguintes siglas:
2- Seo de produo
187
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
188
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece procedimentos que devem ser
aplicados por todos os funcionrios responsveis por colnias de ratos que necessitem da
realizao de acasalamentos programados na seo de produo do Biotrio de Produo
e Experimentao da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da
Universidade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se ao sistema de acasalamento programado utilizado na expanso de colnia de ratos
para a entrega programada de lotes de animais com exigncia de peso e data definida.
Siglas:
So usadas no texto deste Pop as seguintes siglas:
2- Seo de produo
189
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
190
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece procedimentos que devem ser
aplicados para a manuteno da colnia de ratos SOD1 na Seo de produo do Biotrio
de Produo e Experimentao da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de
Qumica da Universidade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se colnia de ratos SOD1, modelo geneticamente modificado, com a finalidade de
garantir as caractersticas do modelo animal.
Siglas:
So usadas no texto deste POP as seguintes siglas:
2- Seo de produo
1. Manter a colnia por meio de acasalamentos entre machos ALS positivos com fmeas
SD (dez casais por gerao);
2. Acasalar os animais com dois meses e meio de idade no mximo, pois a partir dos
trs meses de idade pode iniciar o desenvolvimento dos sintomas e apresentar o
fentipo da doena. Nesse momento j no so capazes de se reproduzir em virtude
da paralisia dos membros e da dificuldade de locomoo;
191
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
d) Coletar uma amostra de tecido da orelha com o auxlio de pina e tesoura esterilizadas
e individuais para cada animal. Colocar a amostra no eppendorf correspondente quele
192
Anexos
animal;
e) Armazenar os eppendorfs com as amostras de tecido em gelo seco e envi-los para
o laboratrio onde ser realizada a genotipagem.
3. Recebimento do resultado da genotipagem
a) Selecionar os filhotes de acordo com o gentipo: ALS positivos e negativos, mantendo
a numerao e a origem (nmero dos pais);
b) Separar os filhotes selecionados para reproduo e fornecimento conforme solicitao
dos pesquisadores, mantendo a ateno para no agrupar animais com a mesma
marcao em uma mesma gaiola.
193
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece procedimentos que devem ser
aplicados para a manuteno da colnia de camundongos P2-GFP na seo de produo
do Biotrio de Produo e Experimentao da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do
Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se colnia de camundongos P2-GFP, modelo geneticamente modificado, com a
finalidade de garantir as caractersticas do modelo animal.
Siglas:
So usadas no texto deste POP as seguintes siglas:
2- Seo de produo
3. O desmame dos filhotes deve ser feito pelo nmero dos pais individualmente, e todos
os animais devem ser identificados com o auxlio de um furador de orelha, seguindo
a numerao da ltima gerao;
194
Anexos
b) Coletar uma amostra de tecido da orelha com o auxlio de uma pina e tesoura
esterilizadas e individuais para cada animal;
195
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que devem
ser aplicadas pelos funcionrios envolvidos em atividades de rotina em salas de produo de
ratos e camundongos.
Aplicao:
Aplica-se ao conhecimento dos procedimentos de higienizao de salas de produo, es-
toque, corredores e air-locks do Biotrio de Produo e Experimentao da Faculdade de
Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da USP (BPE FCF-IQ/USP).
Siglas:
So usadas no texto deste POP as seguintes siglas:
2- Seo de produo
196
Anexos
3. Procedimentos de limpeza:
a) Utilizar culos de segurana, alm dos equipamentos de proteo individual
utilizados em reas limpas;
b) Colocar o pano (refil) no rodo de limpeza;
c) Umedecer o pano na soluo de cloreto de benzalcnio a 0,5% sempre que
necessrio;
d) Realizar primeiramente a limpeza do teto com movimento contnuo e em linha
reta;
e) Realizar a limpeza das paredes e portas com movimento contnuo e em linha reta;
f) Realizar a limpeza do piso por meio da varredura mida com a mesma soluo.
197
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que
devem ser aplicadas por todo o pessoal (funcionrios, pesquisadores e alunos) envolvidos
em atividades de rotina dos animais que necessitem ser executadas nas dependncias
da seo de experimentao do Biotrio de Produo e Experimentao da Faculdade
de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo (BPE
FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se ao conhecimento dos procedimentos de rotina do setor de experimentao do
BPE da FCF-IQ/USP.
Siglas:
POP - Procedimento Operacional Padronizado
3- Seo de experimentao
198
Anexos
199
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
3.4.2 Bebedouros:
1. Retir-los da autoclave e coloc-los na estante para bebedouros;
2. Um lado da estante para bebedouros pequenos (300 mL) e o outro para
bebedouros grandes (700 mL a 1 L).
3.4.3 Grades:
1. Coloc-las na estante para grades;
2. Formar pilhas diferentes para grades de ratos e camundongos.
200
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que de-
vem ser aplicadas por todos os funcionrios envolvidos em atividades que necessitem ser
executadas na seo para animais holoxnicos (coelhos).
Aplicao:
Aplica-se manuteno de experimentos com coelhos.
Siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
3- Seo de experimentao
201
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
3.6 Antgeno:
1 Deve ser o mais purificado possvel, contendo apenas os eptopos desejados, para
produzir anticorpos de maior especificidade;
2 Deve estar livre de toxicidade para o animal (lipopolissacardeos e resduos qumicos);
3 Deve ter pH fisiolgico e estar estril;
4 Deve estar nas concentraes adequadas. Para coelhos, a concentrao correta de
50-1.000 ug.
3.7 Adjuvante:
1 O Adjuvante Completo de Freund (ACF), composto de uma emulso de gua em leo
adicionada de Mycobacterium SP, deve ser evitado. Caso seja necessrio, deve ser
utilizado apenas na primeira imunizao, e o Adjuvante Incompleto de Freund (AIF),
nas imunizaes subsequentes.
202
Anexos
3. Para a coleta final em que o coelho ser submetido a eutansia, coloca-se o animal na
caixa de conteno e realiza-se a dilatao do vaso com uma luz infravermelha. Aps
a dilatao, fazer assepsia com lcool 70% e introduzir a agulha no vaso central ou
no vaso marginal; so coletados de 30 mL a 40 mL. Aps a coleta de sangue final, o
animal ser submetido a eutansia, como descrito no item 3.12.
203
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que de-
vem ser aplicadas por todos os funcionrios e pesquisadores envolvidos em atividades de
rotina executadas na seo de experimentao do Biotrio de Produo e Experimentao
da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da Universidade de So
Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se aos procedimentos de anestesia inalatria com isoflurano em camundongos e
ratos realizados na seo de experimentao do BPE FCF/IQ USP.
Siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
3- Seo de experimentao
204
Anexos Captulo 8
205
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
206
Anexos Captulo 8
2. Frequncia cardaca:
a) normal: ratos (250-450 batimentos por minuto) e camundongos (325-780 batimentos
por minuto);
b) sentir suavemente os lados do trax com os dedos ou com o auxlio de um
estetoscpio, para ter uma ideia da frequncia cardaca e de sua regularidade, pois
difcil contar os batimentos cardacos em pequenos roedores.
4. Temperatura corporal:
a) normal: ratos (37 oC) e camundongos (37,5 oC);
b) verificar o parmetro normal de temperatura utilizando termmetro digital com o
sensor posicionado na mucosa retal;
c) manter o animal aquecido durante e aps a aplicao da anestesia, utilizando
plstico-bolha (enrolar suavemente o animal de modo que, aps voltar da anestesia,
consiga se mover), lmpada aquecedora (monitorar constantemente, para evitar
hipertermia e/ou queimaduras) ou bolsa de gua quente (monitorar constantemente,
para evitar hipertermia e/ou queimaduras).
207
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
6. Outros parmetros:
a) Lacrimejamento: observar a reduo da produo de lgrimas em estgios mais
profundos de anestesia cirrgica;
b) Relaxamento muscular: observar a ausncia do tnus muscular da mandbula no
plano cirrgico de anestesia com isoflurano.
3.16 Recuperao da anestesia (o perodo vai variar de acordo com o grau de invasividade
do procedimento realizado e a durao da anestesia):
1. Colocar o animal em uma gaiola individual com papel limpo e sem maravalha (para
prevenir danos por aspirao ou morte);
2. Manter o animal aquecido (usando uma lmpada de infravermelho, bolsa de gua
quente ou plstico-bolha);
3. Monitorar o animal at que fique consciente, sendo capaz de manter a postura corporal
normal e realizar suas funes fisiolgicas normais (beber gua, comer, defecar etc.);
4. Aps procedimentos cirrgicos invasivos, se necessrio repor as perdas hdricas
(conforme item 1.9) e continuar com o protocolo analgsico indicado para o caso
(deve ser iniciado antes da realizao da cirurgia quando a anestesia inalatria);
5. Facilitar o acesso do animal aos pellets de rao e ao bebedouro com gua;
6. Colocar o animal de volta sua gaiola original e retorn-lo sala de animais;
7. Monitorar o animal nos dias subsequentes at quando for necessrio quanto a peso,
temperatura corporal, postura e comportamento indicativo de dor, ingesto de gua e
alimento, lambedura no local cirrgico etc., avaliando a recuperao e determinando
at quando administrar o analgsico de escolha.
3.17 Fluidoterapia:
1. Calcular a quantidade de fluido a ser reposta (aproximadamente 10 mL/kg/hora);
2. Administrar fluidos aquecidos (exemplo: soluo salina estril) por via subcutnea ou
intraperitoneal. Se o animal j estiver totalmente consciente, administrar por via oral;
3. Estimar o grau de desidratao, monitorando o peso do animal antes e aps o
procedimento.
208
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que
devem ser aplicadas por todo o pessoal (funcionrios, pesquisadores e alunos) envolvido
em atividades de coleta de sangue de ratos, via puno cardaca, que necessitem ser
executadas nas dependncias da seo de experimentao do Biotrio de Experimentao
e Produo da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da Universi-
dade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se ao conhecimento dos procedimentos de coleta de sangue via puno cardaca em
ratos da seo de experimentao do BPE da FCF-IQ/USP.
Siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
3- Seo de experimentao
209
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
210
Anexos
1. Identificao do experimento
Pesquisa ( ) Ensino ( )
2. Equipe
_________________________________________________________________________
( ) Rato ( ) Camundongo
3. Procedimentos experimentais
Perodo de restrio_________________________________________________________
211
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
Quantidade de
amostras__________________________________________________________________
212
Anexos
1. Identificao do experimento
2. Equipe
3. Procedimentos experimentais
Frequncia/quantidade de amostras_____________________________________________
213
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
214
Anexos
Aluno(a):
Orientador(a):
Laboratrio/departamento:
Projeto:
E-mail:
215
Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratrio
216
Biotrio de Produo e Experimentao da FCF-IQ/USP
Av. Prof. Lineu Prestes, 822
Cidade Universitria Armando de Salles Oliveira
So Paulo, SP
CEP: 05508-000
Tel.: 011 3091-3832 / 3091-3644
http://www.usp.br/bioterio