GENÔMICA

ESTRUTURAL:

ESTRUTURA DO DNA
PROFA. ALINE MACKERT
 O QUE TODOS
ORGANISMOS TEM EM
COMUM?

ORGANISMO → TECIDO → CÉLULA → DNA

 O QUE OS ORGANISMOS TEM EM
COMUM?

TODOS ELES TEM QUE SINTETIZAR PROTEÍNAS

 GRUPOS DE GENES QUE TODOS PROCARIOTOS E EUCARIOTOS POSSUEM: GENES

DA MAQUINARIA CELULAR BÁSICA: RNAt, RNAr, DNA polimerase,......
O MATERIAL GENÉTICO É
SEMPRE O DNA?
Sim para todos os procariotos e eucariotos, mas para os
retrovírus o material genético é o RNA
HIV
PROCARIONTES
EUCARIONTES
UMA PROPRIEDADE IMPORTANTE DO DNA É
SUA CAPACIDADE DE MUDAR

Não-sinônima Mutações gênicas

Sem sentido
Sem parada
Sinônima
UMA PROPRIEDADE IMPORTANTE DO DNA É
SUA CAPACIDADE DE MUDAR

Mutações cromossômicas
 A VARIAÇÃO É UMA FORÇA IMPORTANTE
NA GERAÇÃO DA ADAPTAÇÃO
Exemplo:

Enzima que elimina uma determinada toxina

Polimorfismo 1 (enzima funciona entre 36-37° C) – Alelo A

Polimorfismo 2 (enzima funciona entre 36-40° C) – Alelo a

Toxina em grande
quantidade Indivíduo AA
MORTE por incapacidade
de eliminação da toxina
Estado
Quadro Indivíduo Aa
inflamatório
febril SOBREVIVÊNCIA
(sistema imune
eliminação da toxina
recrutado)
 A REPRODUÇÃO
GARANTE QUE OS
GENES SEJAM
PERPETUADOS

“Os indivíduos mais

adaptados deixam maior
número de genes nas
gerações subsequentes”
 CRUZAMENTO
Cada novo nascimento constitui
no surgimento de um ser único,
com variação própria

A VARIAÇÃO É IMPORTANTE PARA A

SOBREVIVÊNCIA DAS ESPÉCIES
PARA ENTENDER A VIDA E COMO
ELA SE PERPETUA DE GERAÇÃO
EM GERAÇÃO PRECISAMOS
ESTUDAR O MEIO DE
TRANSMISSÃO DAS
CARACTERÍSTICAS

ESTRUTURA E FUNCIONAMENTO

DNA
MENDEL – 1865 EXISTEM FATORES (GENES)
QUE TRANSMITIAM A INFORMAÇÃO DOS PARENTAIS PARA A
PROLE

Funções do material genético:

 Replicação: estocar a informação e transmitir

 Expressão gênica: controlar o fenótipo

 Mutação: sofrer mudanças para os organismos se

adaptarem a modificações no ambiente – gerando novos
alelos
Evidências sobre a localização do
material genético:
 Já se sabia que o material genético estava dentro da
célula

 Pesquisa com gametas (link entre pais e filhos)

Material genético provavelmente no núcleo –

Gametas difereriam em tamanho – espermatozóide tem
praticamente apenas o núcleo

 Núcleo composto por cromossomos

 Cromossomos = DNA + proteínas
A ESTRUTURA
DO DNA
LEVENE - 1909
Identificou os açúcares ribose e desoxirribose
 RNA – ribose
 DNA – desoxirribose

 Ácido nucleico formado por:

 um açúcar
 uma base nitrogenada (4 tipos)
 um componente contendo fósforo
CHARGAFF - 1950
 DNA em várias espécies continham quantidades iguais das
bases:
adenina e timina
citosina e guanina.

A=T C=G
 WILKINS & FRANKLIN
(TRABALHOS FEITOS POR VOLTA DE 1951)

 Bombardearam DNA
com raio X
 Revelou estrutura
regular repetida de
unidades estruturais
 Obteve também
evidências do
“formato” da molécula
do DNA
WATSON & CRICK - 1953
 Modelo da dupla hélice
 DNA composto por nucleotídeos
 Açúcar desoxirribose
 Grupo fosfato (1 átomo P ligado a 4 átomos O)
 Base nitrogenada

purina

Guanina

Grupo
fosfato
Açúcar (desoxiribose)
 PAREAMENTO
DO DNA

Purinas = adenina e guanina

Pirimidinas = timina e citosina

PIRIMIDINA + PIRIMIDINA: DNA MUITO FINO

PURINA + PURINA: DNA MUITO GROSSO

PURINA + PIRIMIDINA: ESPESSURA

COMPÁTÍVEL COM DADOS DE RAIO-X
 CADEIAS
ANTIPARALELAS
COMPLEMENTARES
 P
5’ A T
4’ 1’ P
3’ 2’

P
G C
P

P T A

A ligação entre a base A ligação entre o grupo fosfato

nitrogenada e a pentose
Esta ligação é feita covalentemente
através de uma ligação N-glicosídica
com a hidroxila ligada ao carbono-1
da pentose.
e a pentose
Esta ligação é feita através de
uma ligação fosfoéster com a
hidroxila ligada ao carbono-5 da
pentose.
 PONTA 3’ DA
PENTOSE DO
PRÓXIMO
NUCLEOTÍDEO

1 4
2 3

GRUPO FOSFATO
DO PRÓXIMO
NUCLEOTÍDEO
REPLICAÇÃO
DO DNA
 Ocorre na fase S do ciclo celular

É necessária para a criação de uma nova célula

CICLO CELULAR

Fases do Ciclo:
 G1: 12 horas
 S: 7 a 8 horas
 G2: 3 a 4 horas
 M: 1 a 2 horas
 Total: 24 horas
 3 hipóteses de replicação

Hipótese 1: Hipótese 2: Hipótese 3:

Semi-conservativo Conservativo Dispersivo
 Culturas de E. coli em meio contendo 15N (pesado)

 DNA contendo 15N tem maior densidade do que o DNA

que contem 14N

 Propriedade de separar moléculas com densidades

diferentes em um gradiente de densidade por
centrifugação
 O EXPERIMENTO: Meselson & Stahl - 1958
Meio Meio Meio
Meio contendo contendo contendo
contendo N14 N14 N14
N15

Leve (N14)

Pesada (N15)

DNA da bactéria que Depois de uma roda no Após segundo ciclo de Após várias
cresceu com N15 meio contendo N14 replicação aparecem duas replicações a banda
aparece com uma aparece uma banda bandas, uma intermediária e intermediária persiste
banda única intermediária uma leve e a banda leve
aumenta

DNA
original
Fita parental Fita nova

N14
N15
ETAPAS DA REPLICAÇÃO
1. Moléculas de DNA parental servem
como molde para a síntese das fitas
filhas.

2. Fitas de DNA parental se

desenrolam e se separam formando
as forquilhas de replicação.

3. Síntese da nova fita.

4. Cada nova molécula de DNA

consiste em um filamento parental e
um filho.
Em eucariotos:
Origens múltiplas
Sítios específicos
COMO OCORRE A REPLICAÇÃO
A fita molde é lida sempre no sentido 3’ para 5’

A fita nova é construída sempre no sentido 5’ para 3’

Como uma fita é 5’-3’ e a outra 3’-5’ o processo de

replicação é diferente em cada fita
COMO OCORRE A REPLICAÇÃO
Mas a bolha de replicação vai para APENAS UMA DIREÇÃO

Fita 3’-5’ o processo é contínuo – fita contínua

Fita 5’-3’ o processo de duplicação

ocorre em partes – esta fita é chamada de descontínua
COMPONENTES
 DNA molde: fita de DNA que fornece a seqüência de
nucleotídeos que especifica a seqüência complementar
 Enzima que cataliza a formação de DNA: DNA polimerase

 Extremidade 3’ livre (3’-OH) é necessária para a adição de um

novo nucleotídeo
 Primer: seqüência iniciadora (RNA)

 Nucleotídeos

 Outras enzimas que abrem o DNA (topoisomerase, helicase),

constroem os primers (primase), ligam DNA (ligase), reparam
o DNA (DNA polimerase), removem os primers
(exonucleases)
 Energia

 Proteínas que auxiliam no processo

O APARELHO DE REPLICAÇÃO

(1) Topoisomerase remove as superhélices

(2) Deselicoidização do DNA pela Helicase

(3) Proteínas de ligação ao DNA mantêm os filamentos

desenrolados
O APARELHO DE REPLICAÇÃO
(4) Primase - Ligação do primer de RNA

(5) Formação do primossomo

(primase + helicase + primer + proteínas de ligação ao DNA)

(6) Adição de nucleotídeos na extremidade 3’ pela DNA

polimerase III
O APARELHO DE REPLICAÇÃO

(7) Formação dos fragmentos de Okazaki (fita descontínua)

(8) Remoção dos primers por uma exonuclease

(9) Revisão do pareamento pela DNA polimerase I

(10) União dos fragmentos pela ligase (fita descontínua)

Velocidade: 40/50 nucleotídeos por segundo

Cromossomo tem 250 milhões de nucleotídeos
Formação de várias forquilhas ao mesmo tempo
 DNA polimerase
na fita contínua
Fita contínua

topoisomerase

Fita
descontínua
molde helicase
RNA primase
Primer de RNA
Fita descontínua DNA parental
molde
Proteínas de
ligação ao
DNA

primossomo
Fragmentos
de Okazaki
DNA polimerase
na fita
descontínua
Filamento contínuo ou leading

3 5
’ ’

5 3
’ ’

Filamento descontínuo ou lagging

3 5
’ ’

5 3
’ ’
 Sentido geral da
replicação

Filamento Filamento
contínuo descontínuo
 helicase

Proteínas de ligação
ao DNA primossomo

primase

Enzima DNA polimerase

III – faz a síntese nas
duas cadeias

Enzima DNA polimerase I –

preenche as regiões entre os
fragmentos de Okazaki

DNA ligase
Filamento
contínuo Filamento
descontínuo
PROBLEMA NA REPLICAÇÃO DO DNA
EUCARIOTO

 “ponta” da fita de DNA

 Telômero – seqüência de DNA repetitivo -TG

 Extremidade final da fita lagging

 DNA polimerase não pode se ligar a ponta do

cromossomo

5 3
’ ’
Filamento contínuo Final do cromossomo

Molécula parental

Filamento descontínuo

Molécula filhas

Fragmento de Okazaki
faltando

Molécula da terceira
geração

Molécula se torna cada

vez menor
SOLUÇÃO PARA A REPLICAÇÃO DO DNA
EUCARIOTO

 Telomerase reconhece a sequencia rica em G na ponta 3’

livre
 Telomerase constróia a cadeia a partir de um primer
contido nela (molde de RNA)
Telomerase
Molde de RNA
(primer)

nucleotídeo
 Telômero
• Eucariotos – seqüências curtas de nucleotídeos em repetições
sequenciais

• Humanos – TTAGGG (500 a 3000 repetições)

• Final telômero – região unifilamentar rica em G (125 a 275 bases)

Síndrome de Hutchinson-Gilford
causada por um defeito na enzima
telomerase que copia os telômeros
durante a divisão celular

Foto: crianças de 10 anos

BIBLIOGRAFIA

 GRIFFTHS, A.J.F.; WESSLER, S.R.; LEWONTIN,

R.C.; CARROL, S.B. DNA: Estrutura e Replicação. In:
Introdução à Genética, Capítulo 7. 9° ed. Editora
Guanabara Koogan, 2008.

 PIERCE, BA. Genética - um enfoque conceitual. 1ª

ed. Guanabara Koogan, Rio de Janeiro, 2004.

 Brown, T.A. Genética: Um enfoque molecular. 3ª ed.

Guanabara Koogan, Rio de Janeiro, 1999.