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31/01/2020 Efeitos do processamento na composição metabólica química, físico-química, enzimática e volátil de pitaya (Hylocereus polyrhizus…

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Food Research International


Volume 127 , janeiro 2020 , 108710

Efeitos do processamento na composição química, físico-


química, enzimática e metabólica volátil de pitaya ( Hylocereus
polyrhizus (FAC Weber) Britton & Rose)
Glauber Batista Moreira Santos a, Ana Paula Dionísio b , Hilton César Rodrigues Magalhães b, Fernando
Antonio Pinto de Abreu b, Sandra Machado Lira c, Ana Carolina Viana de Lima a, Gisele Silvestre da Silva b,
Jhonyson Arruda Carvalho Guedes b, Idila Maria da Silva Araujo b, Adriana Guirado Artur b, Dorasilvia Ferreira
Pontes um, Guilherme Julião Zocolo b
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https://doi.org/10.1016/j.foodres.2019.108710 Obtenha direitos e conteúdo

luzes
• Os efeitos do processamento de polpa de pitaya foram avaliados pela primeira
vez.

• O tipo de processamento pode afetar seus compostos enzimáticos e voláteis.

• Análises quimiométricas foram usadas para comparar todos os tratamentos.

• Toda a análise quimiométrica distinguiu eficientemente os compostos voláteis.

Abstrato
Os efeitos do processamento sobre a composição metabólica química, físico-química,
enzimática e volátil da polpa de pitaya foram avaliados pela primeira vez. Para tanto, foram
avaliados os seguintes tratamentos para obtenção da polpa de pitaya: Tratamento A (AT,
processamento de polpa sem ácido ascórbico), Tratamento B (TB, processamento de frutas

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 1/26
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inteiras com ácido ascórbico) e Controle (processamento de frutas inteiras sem ácido
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ascórbico). Compartilhar
O tratamento empregado naExportação
TB resultou em baixa atividade de polifenol oxidase e
peroxidase e nenhuma alteração química ou físico-química significativa na maioria dos
parâmetros avaliados. Além disso, a TB apresenta altos rendimentos e teor de fibras em
comparação com o AT ou Controle. Para análise metabólica, a Cromatografia Gasosa-
Espectrometria de Massa (GC-MS) foi eficaz para a determinação simultânea de 80
metabólitos voláteis em pitaya.

Resumo gráfico

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Palavras-chave
CG-MS; Metabólitos voláteis; Polifenol oxidase; Peroxidase; Análise quimiométrica

1 . Introdução
Pitahaya, pitaya e fruta do dragão ( Hylocereus spp.) São nomes comuns para um grupo
diversificado de gêneros da família Cactaceae. As três espécies mais comuns de pitaya
comercializadas são as pitaya com pele vermelha e carne branca ( Hylocereus undatus Haw.
Britton & Rose), pele vermelha e carne vermelha ( Hylocereus sp.) E pele vermelha e carne
vermelha forte ( Hylocereus polyrhizus Webb. Britton Rose). Devido à sua cor e sabor atraentes, a
produção mundial está aumentando rapidamente e novas culturas de frutas para áreas secas
estão em desenvolvimento ( Mercado-Silva, 2018 ).

Pitaya é nativa da América Central e do Sul ( Mercado-Silva, 2018 , Ortiz Hernandez e Carrillo-
Salazar, 2012 ) e é cultivada comercialmente em uma ampla variedade de países, incluindo
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 2/26
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México, Guatemala, Estados Unidos (sul da Flórida) e Brasil . O cultivo de Pitaya foi iniciado
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na região Exportação
semiárida do Brasil, como no Ceará ( Nunes et al., 2014 ). Uma
vantagem particular do cultivo de pitayas como uma colheita em regiões secas é o seu
potencial de contribuir para o desenvolvimento agrícola nessas regiões em virtude de sua alta
tolerância ao estresse de seca a longo prazo e solos pobres ( Hua et al., 2018 , Wu et al. , 2019 ).

Nos últimos anos, a pitaya ganhou popularidade, pelo menos em parte, como resultado da
aparência atraente da carne e devido aos potenciais benefícios à saúde dos altos níveis de
betalaína, característicos das variedades de pitaya vermelhas ou roxas ( Rodriguez- Amaya,
2019 , Stintzing e Carle, 2007 , Wybraniec e Mizrahi, 2002 ). A fonte mais comum de betalaína é
a beterraba vermelha ( Beta vulgaris L. ssp. Vulgaris), porém apresenta altos níveis de nitrato (
Belhadj Slimen et al., 2017 , Santamaria, 2006 ) e um cheiro de terra causado por derivados de
geosmina e pirazina ( Lu Edwards, Fellmann, Mattinson e Navazio, 2003) Na busca de novas
plantas contendo betalaína sem essas desvantagens, o pitaya surge como uma alternativa
interessante. Nesse sentido, estudos que descrevem o processamento de pitaya em sucos de
frutas e produtos relacionados foram intensificados nos últimos anos.

No entanto, o processamento de pitaya permanece difícil devido ao seu alto conteúdo de


material mucilaginoso, resultando em baixos rendimentos durante a extração de suco ou
polpa ( Esquivel et al., 2007 , Stintzing e Carle, 2007 ). Para melhorar a extração da polpa, toda a
fruta pode ser processada. Se, por um lado, há um aumento no rendimento, por outro lado, há
um aumento nos níveis de enzimas oxidativas (polifenóis oxidases (PPO) e peroxidases (POD)),
causando alterações indesejáveis na cor e, possivelmente, em seus compostos voláteis e não
voláteis. O uso de acidulantes (como o ácido ascórbico) no processo pode ser necessário para
estabilizar a cor e, consequentemente, devido à sua atividade antioxidante, proteger as
betalaínas, que é um dos compostos mais valiosos da pitaya (Herbach et al., 2006 , Leong et al.,
2018 ). No entanto, o impacto desses diferentes parâmetros de processamento nas
propriedades químicas, físico-químicas, enzimáticas e metabólicas voláteis da polpa de pitaya
permanece inexplorado.

O principal objetivo deste estudo foi determinar o impacto do processamento da polpa


(Tratamento A - TA, processamento da polpa sem ácido ascórbico; Tratamento B - TB,
processamento de frutas integrais com ácido ascórbico; e Control, processamento de frutas
integrais sem ácido ascórbico) sobre o composição metabólica química, físico-química,
enzimática e volátil da polpa de pitaya ( Hylocereus polyrhizus(FAC Weber) Britton e Rose). Além
disso, a técnica CG-MS foi combinada com modelos de análise de dados multivariados
(análise de componentes principais (PCA), mínimos quadrados parciais (PLS-DA), importância
da variação na projeção (VIP) e análise de mapa de calor) para melhorar nossa compreender e
determinar a correlação entre o perfil químico e o tratamento empregado. Este trabalho atual
é de grande importância industrial, com potencial para reduzir o custo do processamento de
pitaya (por exemplo, processar toda a fruta e, consequentemente, melhorar o rendimento) e
melhorar sua qualidade volátil, bem como a preservação química.

2 . material e métodos
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 3/26
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2.1 . Matéria-prima
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Pitaya ( Hylocereus polyrhizus (FAC Weber) Britton & Rose) foi fornecida pela Frutacor, localizada
em Vale do Jaguaribe - CE (05 ° 53′26 ″ S; 38 ° 37′19 ″ W). A fruta foi lavada, higienizada e
processada no Laboratório de Processos Agroindustriais da Embrapa Agroindústria Tropical
(Fortaleza-CE).

2.2 . Reagentes
Catecol (1,2-di-hidroxibenzeno), polivinilpirrolidona (PVP) e polivinilpolipirrolidona (PVPP)
foram adquiridos na Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, EUA). Os reagentes fosfato de potássio,
peróxido de hidrogênio e bissulfito de sódio foram obtidos da Vetec Quimica Fina Ltd.
(Duque de Caxias, Brasil). Todos os produtos químicos eram de grau analítico ou superior
(Sigma-Aldrich Canada Ltd., Oakville, Canadá).

2.3 . Processamento de Pitaya


O pitaya foi então submetido a três tipos de tratamentos de polpação usando um finalizador
(ITAMETAL / BONINA 0,25 DF), com uma capacidade média de processamento de 100 kg h- 1
. Para cada tratamento, três lotes de cerca de 100 kg de frutas frescas foram processados, a fim
de obter os parâmetros para calcular o rendimento. Os tratamentos empregados foram os
seguintes: (i) Tratamento A (AT), no qual os frutos foram cortados em quartos e as cascas
foram removidas manualmente antes do processo de polpação (os frutos foram coados através
de uma peneira de 0,8); (ii) Tratamento B (TB), no qual os frutos inteiros foram utilizados
diretamente no processo de polpação, e 500 mg kg −1foi utilizado ácido ascórbico para evitar
processos oxidativos (os frutos foram coados por 0,8 e 2,5 peneiras); e (iii) Tratamento C ou
Controle, o mesmo que na TB, porém sem ácido ascórbico. Em cada processo, três materiais
diferentes foram obtidos (polpa, casca e semente) e utilizados para caracterização. Todos os
materiais foram armazenados a -18 ° C até análise posterior. O rendimento dos processos foi
obtido usando a seguinte equação (Eq. (1) ):

(1)

2.4 . Análise físico-química e química da polpa, casca e semente de pitaya


Após as análises descritas acima, foram avaliadas as análises físicas, físico-químicas e químicas
da polpa, casca e semente de cada material (TA, TB e Controle).

Os teores de umidade, proteína e cinza foram determinados, respectivamente, pelos métodos


AOAC (2005) no. 934,01, 984,13 e 923,03. Os lipídios foram determinados pela análise do
extrato etéreo utilizando um extrator de alta temperatura ANKOM modelo XT15, usando o
método Am 5-04 proposto pela Sociedade Americana de Químicos de Petróleo ( Ankom, 2009 ,
Association of Official Analytical Chemistry, 2005 ). A quantidade total de carboidratos foi
calculada usando a seguinte equação (Eq. (2) ):

(2)

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 4/26
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As frações insolúveis (IDE) e solúveis (SDF) da fibra alimentar foram determinadas de acordo
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com o método AOAC Compartilhar Exportação
991.43 ( AOAC, 2005 ) utilizando um analisador ANKOM Automatic
Nutrient TDF (Ankon Technology Corporation). A fibra alimentar total (TDF) foi calculada
como a soma das frações insolúveis e solúveis. Além disso, os sólidos solúveis (° Brix) foram
avaliados usando um modelo de refratômetro digital (ATAGO Pocket Palm-3). O pH e a acidez
titulável foram avaliados utilizando um potenciômetro de titulação (HI 901 / HI 902, Hanna
Instruments) de acordo com a Association of Official Analytical Chemistry, 2005 , Instituto
Adolfo Lutz, 2008 , respectivamente.

2.5 . Composição de ácidos graxos da semente de pitaya


Para determinar o perfil de ácidos graxos das sementes de pitaya, as amostras de gordura
extraídas anteriormente foram convertidas em ésteres metílicos de ácidos graxos (FAMEs)
usando o procedimento descrito por Hartman e Lago (1973) . Após a extração, os materiais
foram analisados utilizando um cromatógrafo equipado com um detector de ionização de
chama (GC2010; Shimadzu, Kyoto, Japão) e uma coluna capilar de fase estacionária
biscianopropil-polidimetilsiloxano (SP2560, 100 m × 0,25 mm, df 0,20; Supmco®, Bellefonte ,
PA, EUA). A temperatura da coluna foi programada da seguinte forma: temperatura inicial
mantida a 80 ° C, depois aumentada para 11 ° C min -1 a 180 ° C, depois 5 ° C min -1 a 220 ° C e
mantida por 23 min. O hidrogênio foi usado como gás de arraste a uma vazão de 1,5 mL min
-1. A taxa de separação foi de 1:30, com uma temperatura de injetor e detector de 220 ° C. As
FAMEs foram identificadas comparando os tempos de retenção com os de uma mistura
padrão de ácidos graxos injetada anteriormente (código CRM47885; Supelco®, Bellefont PA,
EUA). A contribuição de cada composto para a mistura foi calculada pela área relativa (%) do
seu respectivo pico no cromatograma.

2.6 . Atividade da cor, polifenol oxidase (PPO) e peroxidase (POD) da polpa de pitaya
Para avaliar a atividade enzimática da polifenol oxidase (PPO) e peroxidase (POD) da polpa de
pitaya (TA, TB e Controle), foi preparado um extrato enzimático de cada material. Para a PPO,
foi utilizado o método descrito por Sojo, Nunez-Delicado, Garcia-Carmona e Sanchez-Ferrer
(1998) , com adaptações. Resumidamente, em um banho de água gelada, 0,1 de polpa foi
homogeneizada por 5 min com 10 mL de tampão KH 2 PO 4 (0,01 mol L -1 , pH 6,0) contendo
4% 0,04 mg g -1 Triton X-100 e 0,02 g de polivinilpolipirrolidona (PVPP). Após centrifugação
(5000 gpor 40 min a 4 ° C), o precipitado foi descartado e o sobrenadante foi incubado em
banho-maria por 10 min (37 ° C). O sobrenadante foi então centrifugado por 20 min (2000 g , 4
° C) e usado como um extrato para a análise da atividade da PPO, usando o método
estabelecido por Robinson (1987) . Neste método, a mistura de reação consistiu em 80 μL de
tampão fosfato de potássio (0,1 mol L -1 , pH 6,0), 100 μL de extrato e 5 μL de substrato de
pirocatecol (0,1 mol L −1 ). Após incubação a 30 ° C por 30 min, a absorbância foi medida a 395
nm. Uma unidade de atividade enzimática (em unidades de atividade, UA) foi definida como
uma variação de 0,001 na absorvância. Os resultados foram expressos em UA / min.mg.P e
calculados considerando o controle como 100%.

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 5/26
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O extrato enzimático para a determinação do POD foi preparado de acordo com o método
descritoDownload Compartilhar
por Wissemann Exportação
e Lee (1980) , com algumas modificações. Em um banho de água
gelada, 0,5 g de polpa foi homogeneizado com 10 mL de KH 2 PO 4 tamp (0,05 mol L -1 , pH
7,0) contendo 1% de polivinilpirrolidona (PVP) durante 3 min. Após centrifugação (10.000 g
por 10 min a 4 ° C), o precipitado foi descartado e o sobrenadante foi considerado a fonte
enzimática. O sobrenadante foi usado como um extrato para a análise da atividade do POD. A
atividade foi determinada de acordo com o método descrito por Matsuno e Uritani (1972) . A
mistura de reação consistiu em 55 μL de KH 2 PO4 tampões (0,05 mol L -1 , pH 7,0), 300 μL do
extrato e 55 μL de 3% de peróxido de hidrogênio. Após incubação a 30 ° C por 5 min, a reação
foi extinta com a adição de bissulfito de sódio a 30%. A absorvância foi então medida a 470 nm
e os resultados foram expressos em UA / min.mg.P. Os resultados foram calculados
considerando o controle como 100%.

As análises de cores foram realizadas medindo a refletância direta do sistema de coordenadas


retangulares (L *, brilho; a *, intensidade de vermelho e verde; eb *, intensidade de amarelo e
azul) aplicando a escala de cores CIELAB utilizando um colorímetro (Chroma -Meter CR-410;
Konica Minolta Sensing Inc., Osaka, Japão). Os resultados também foram expressos como o
diferencial de cor (ΔE), calculado de acordo com a Eq. (3) (CIE, 2004):

(3)

Todos os três tratamentos (TA, TB e Controle) foram analisados.

2.7 . Composição metabólica volátil da polpa de pitaya


A composição metabólica volátil da polpa de pitaya foi determinada para cada tratamento (AT,
TB e Controle). Resumidamente, 1,24 g de NaCl foram adicionados a 4 g de cada material
testado. O método descrito por Fernandes et al., 2019 , Silva et al., 2018foi utilizado, com
algumas modificações. Os compostos voláteis foram então isolados da matriz por
microextração em fase sólida de headspace (HS-SPME) usando fibra DVB / CAR / PDMS 50/30
μm 2 cm (Supelco, Bellefonte, PA, EUA). Antes da análise, a fibra era condicionada de acordo
com a temperatura recomendada pelo fabricante. A análise GC-MS foi realizada usando um
modelo Agilent 7890B equipado com um detector de espectrômetro de massa (modelo 5977A).
A coluna cromatográfica utilizada foi RTX 5 (tamanho de 30 m, diâmetro interno de 0,25 mm,
espessura do filme de 0,25 μm). A temperatura foi programada da seguinte forma: 4 ° C min -1
rampa de 40 ° C a 110 ° C, 16 ° C min -1 a 200 ° C, 10 min 7 ° C min -1a 230 ° C. A temperatura
da interface entre o cromatógrafo e o detector de massa seletiva era de 250 ° C. A ionização foi
realizada usando impacto eletrônico (70 eV), com a fonte de íons mantida a 150 ° C.

Os resultados foram expressos em abundância relativa. A identificação do composto foi


realizada comparando os espectros de massa adquiridos com os espectros da Biblioteca NIST
1.6 (Instituto Nacional de Padrões e Tecnologia, Gaithersburg, Maryland, EUA). A identificação
também foi realizada comparando o índice de retenção linear calculado usando uma série
homóloga de n- alcanos C8-C20 (de acordo com a coluna capilar usada) com os índices de
retenção comparados com as bases de dados on-line (NIST Chemistry Webbook e PubChem).
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 6/26
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2.8 . Análise estatística


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Os dados obtidos das análises de atividade enzimática (PPO e POD), química e físico-química,
incluindo o perfil de ácidos graxos, foram submetidos ao teste de Tukey com nível de
significância de 5% para comparação da média e desvio padrão (DP), utilizando o teste
estatístico programa AgroEstat 1.0.

Os dados das áreas de pico dos compostos voláteis, obtidos por cromatogramas, foram
normalizados pela mediana tratada na escala logarítmica e escalonados de acordo com a escala
de Pareto. A análise quimiométrica usando o Metaboanalyst 3.0 ( www.metaboanalyst.ca ) foi
realizada com base nas matrizes de correlação anormalizadas dos dados normalizados. Para
análise de variância (ANOVA), LSD (teste de menor diferença significativa) de Fisher, análise de
FDR, agrupamento hierárquico e análise de mapa de calor, foi utilizado o programa Minitab
17 ( Xia, Sinelnikov, Han & Wishart, 2015 ).

3 . Resultados e discussão

3.1 . Caracterização do rendimento, química e físico-química da polpa de pitaya


Os diferentes processos para obter polpa de pitaya foram comparados para determinar as
diferenças enzimáticas, químicas e físico-químicas entre os materiais resultantes. Como
esperado, a TB resultou nos maiores rendimentos (65,64%), uma vez que a casca é,
inicialmente, processada juntamente com a polpa, resultando em um aumento na
produtividade em torno de 13%. Esse resultado é de grande significado industrial, pois
poderia reduzir o custo de produção de pitaya, uma vez que esse fruto é de alto valor comercial
no Brasil.

As diferentes composições químicas e físico-químicas resultantes dos diferentes tratamentos


de pitaya são apresentadas na Tabela 1 . A polpa de pitaya produzida pela TB não apresentou
alterações acentuadas na maioria dos seus principais parâmetros químicos e físico-químicos,
exceto o pH e os sólidos solúveis, devido ao seu processo de acidificação e o teor de fibra
alimentar. Nos dois processos, a polpa era composta principalmente de carboidratos (variando
de 8,91% a 9,65%), consistindo principalmente de fibra alimentar (variando de 7,8% a 15,9%).
Os maiores níveis de fibra alimentar resultantes da TB podem ser explicados pelos
processados empregados, uma vez que toda a fruta foi processada. Consequentemente,
algumas fibras de casca foram incorporadas à polpa, melhorando seu valor nutricional.

Tabela 1 . Efeito do processamento nas características químicas e físico-químicas de polpa,


casca e semente de pitaya ( Hylocereus polyrhizus (FAC Weber) Britton & Rose). Tratamento A
(TA): processamento de polpa sem ácido ascórbico e Tratamento B (TB): processamento de
frutas inteiras com ácido ascórbico. SDF: fração solúvel de fibra alimentar; IDF: fração
insolúvel de fibra alimentar; TDF: fibra alimentar total. nd: não detectado. Resultados
expressos em média e desvio padrão; As médias com letras iguais, na mesma linha, não
diferem no nível de 5% de significância para o teste de Tukey.

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 7/26
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Características gerais TA tb

Polpa Descasca Semente Polpa Descasca Semente

pH 4,88 ± 0,02 b 4,40 ± 0,01 5,48 ± 0,03 4,47 ± 0,01 4,34 ± 0,01 4,99 ± 0,01 b
d a cd d

Acidez (% de ácido 0,33 ± 0,03 b 0,41 ± 0,01 0,43 ± 0,05 0,34 ± 0,01 b 0,46 ± 0,05 0,32 ± 0,02 b
málico) ab ab a

Sólidos solúveis (° Brix) 9,97 ± 0,06 a - - 8,87 ± 0,06 b - -

Umidade (%) 89,46 ± 0,06 90,58 ± 77,23 ± 90,04 ± 0,41 89,25 ± 80,89 ± 0,10
b 0,06 a 0,09 d ab 0,49 b c

Cinza (%) 0,39 ± 0,03 b 1,09 ± 0,04 0,15 ± 0,01 0,55 ± 0,04 b 1,05 ± 0,09 0,14 ± 0,01 c
a c a

Proteínas (%) 0,5 ± 0,03 c 0,62 ± 0,01 2,25 ± 0,07 0,51 ± 0,01 c 0,53 ± 0,06 3,51 ± 0,17 a
c b c

Carboidratos (%) 9,65 ± 0,06 c 7,72 ± 0,12 16,8 ± 0,38 8,91 ± 0,06 9,17 ± 0,34 12,91 ± 0,17
e a cd cd b

Valor energético (Kcal / 40,57 ± 0,32 33,33 ± 44,04 ± 37,67 ± 0,21 38,8 ± 1,59 42,73 ± 0,36
100 g) bc 0,51 e 0,50 a cd cd ab

Fibras SDF (%) 5,9 ± 0,52 f 89,1 ± 0,03 11,5 ± 0,21 9,9 ± 0,03 e 90,9 ± 0,06 44,9 ± 0,03 c
b d a

IDF de fibras (%) 1,9 ± 0,01 f 51,7 ± 0,06 25 ± 0,06 c 6 ± 0,03 e 84,4 ± 0,06 11,4 ± 0,05 d
b a

TDF de fibras (%) 7,8 ± 0,53 f 140,8 ± 36,5 ± 0,17 15,9 ± 0,05 e 175,3 ± 56,3 ± 0,06 c
0,03 b d 0,12 a

Ácidos graxos nas sementes (percentagem relativa)

Ácidos graxos TA tb

Mirístico (C14: 0) 0,12 ± 0,00 a 0,12 ± 0,01 a

Palmítico (C16: 0) 14,47 ± 0,08 a 14,13 ± 0,04 a

Palmitoléico (C16: 1) 0,75 ± 0,01 a 0,82 ± 0,01 a

Sapiânico (C16: 1) 0,11 ± 0,02 a 0,11 ± 0,02 a

Esteárico (C18: 0) 5,89 ± 0,01 a 7,08 ± 0,00 a

Oleico (C18: 1 n9) 23,26 ± 0,30 a 26,04 ± 0,10 a

cis- vacílico (C18: 1) 3,96 ± 0,32 a 4,36 ± 0,04 a

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 8/26
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Características gerais TA tb
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Polpa Descasca Semente Polpa Descasca Semente

Linoleico (C18: 2) 45,86 ± 0,12 a 42,02 ± 0,17 a

Araquídico (C20: 0) 1,92 ± 0,08 a 1,99 ± 0,04 a

Linolênico (C18: 3) 0,42 ± 0,00 a 0,44 ± 0,00 a

Beênico (C22: 0) 1,45 ± 0,00 a 1,40 ± 0,00 a

nd 1,81 a 1,49 a

Para proteínas e lipídios, os valores foram inferiores a 0,5%. De acordo com nossos dados,
Abreu et al., 2012 , Sato et al., 2014 também relataram baixos níveis de proteínas e lipídios na
polpa de pitaya. Os resultados obtidos com a casca de pitaya não apresentaram alterações em
nenhum dos parâmetros avaliados, exceto no que se refere à umidade e ao teor de
carboidratos ( Tabela 1 ). A casca obtida pela TB apresentou baixos valores de umidade, o que
explica o uso de toda a pitaya no processo de polpação. O finalizador foi utilizado para
pressionar o material e, consequentemente, remover a polpa aderida à casca. Como resultado,
foi observada uma redução na umidade. Da mesma forma, o teor de fibras na TB foi maior
que no AT, devido ao tipo de processamento empregado (processamento de frutas inteiras).

3.2 . Análise de óleo de semente


Os ácidos graxos (AG) obtidos do óleo de semente após AT e TB foram analisados por CG-FID
(triplicado). Conforme resumido na Tabela 1 , os ácidos graxos saturados predominantes no
óleo de semente de pitaya foram os ácidos palmítico (14,13–14,47%), esteárico (5,89–7,08%),
araquídico (1,92–1,99%) e mirístico (0,12%), representando cerca de 22 % do total de FAs. Até
86% do total de AGs identificados no óleo de semente consistiam em AGs insaturados. Os
ácidos linoléico (42,02-45,86%) e oleico (23,26-26,04%) foram os compostos majoritários
encontrados nas sementes. Na literatura, esses valores foram relatados anteriormente por
Ariffin et al. (2009) e Lim, Tan, Karim, Ariffin e Bakar (2010) . As sementes de pitaya são
excepcionalmente pequenas e são ricas em ácidos graxos essenciais, principalmente ômega-3 e
ácidos graxos ômega- 6 ( Akram & Mushtaq, 2019 ). Além disso, os níveis de ácido linoléico
atribuídos ao óleo de semente de pitaya (500 g kg -1 de óleo) são comparáveis aos de linhaça,
canola e óleo de gergelim. Considerando essa composição de ácidos graxos, os óleos naturais
derivados de pitaya podem ser usados em cosméticos e soluções terapêuticas ( Darmstadt et
al., 2002 , Kamairudin et al., 2014 ). O óleo de semente de pitaya também é considerado uma
fonte de antioxidantes e tocoferóis naturais ( Liaotrakoon, Clercq, Hoed & Dewettinck, 2013 ).

3.3 . Cor e atividade enzimática da polpa de pitaya


The color analysis and enzymatic activity of pitaya pulp were measured for each treatment
(TA, TB and Control) after processing (Table 2).

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 9/26
31/01/2020 Efeitos do processamento na composição metabólica química, físico-química, enzimática e volátil de pitaya (Hylocereus polyrhizus…

Table 2. Download Compartilhar


Effect of processing Exportação
on the relative activity of polyphenol oxidase and peroxidase (in
%), and on the color parameters of pitaya (Hylocereus polyrhizus (F.A.C. Weber) Britton & Rose).

Analysis Control TA TB

Relative enzymatic activity (%)

Polyphenol oxidase (PPO) 100% 47.51% 60.84%

Peroxidase (POD) 100% 58.26% 66.87%

Color parameters

L 30.97 ± 0.23a 28.70 ± 0.04b 27.73 ± 0.02c

a* 18.71 ± 0.37a 23.80 ± 0.03b 21.37 ± 0.09c

b* 8.67 ± 0.35a 4.19 ± 0.00b 3.26 ± 0.06c

ΔE – 7.15 6.84

Treatment A (TA): pulp processing without ascorbic acid, and Treatment B (TB): whole fruit processing with
ascorbic acid, and Control: whole fruit processing without ascorbic acid. Results expressed in mean and
standard deviation; Averages with equal letters, in the same line, do not differ at the level of 5% of
significance for the Tukey test.

The PPO and POD activity was significantly higher in the Control, confirming that in whole
fruit processing, the compounds present in the peel were carried out to the pulp, improving
its enzymatic activity. Consequently, the color was altered (Table 2), confirmed by comparing
the L*, a*, and b* values with those of the other treatments. The pulp and peel is a source of
phenolic compounds, which are substrates of oxidative enzymes and initiate the degradation
during the processes of cutting, fruit pulping and aeration in a finisher (Abreu et al., 2012). For
TA and TB treatment, the PPO activity was reduced by 52.49% and 39.16%, respectively.
Likewise, the POD activity was reduced by 41.74% and 33.13%, respectively. The difference of
color was 7.15 (ΔETControl TA) and 6.84 (ΔETControl TB), considerably higher than the clinically-
acceptable values reported by Rosentritt, Esch, Behr, Leibrock, and Handel (1998).

The results obtained demonstrate that ascorbic acid can reduce the PPO and POD activity,
resulting in the maintenance of the characteristic color of pitaya pulp. Herbach et al., 2006,
Leong et al., 2018 previously reported that ascorbic acid is responsible for a greater stability of
betacyanin degradation. Strack, Vogt, and Schliemann (2003) reports that a slightly acidic pH
stabilizes the betacyanins and inhibits the potential oxidation by PPOs.

3.4. Volatile metabolic composition and chemometrics analysis

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 10/26
31/01/2020 Efeitos do processamento na composição metabólica química, físico-química, enzimática e volátil de pitaya (Hylocereus polyrhizus…

In order to verify the differences between the volatile profiles of the treatments employed to
Download
obtain pitaya pulp, allCompartilhar Exportação
the treatments (TA, TB, and Control) were analyzed using the CG-MS
technique, together with chemometric analysis. For this, the metabolic profiling was
investigated using an untargeted global metabolomics platform. In general, a total of 80
different volatile metabolites were identified in all the treatments (Table 3), which varied
according to the treatment employed. In fact, the compounds identified consisted of alcohols,
aldehydes, ketones, hydrocarbons, ether, esters, and carboxilic acids.

Table 3. Identification of volatile compounds from pitaya (Hylocereus polyrhizus (F.A.C. Weber)
Britton & Rose) obtained by Gas Chromatography coupled to Mass Spectrometry (GC-MS).

tR Compounds CAS1 Identification IR IR Descriptors3


2.1 calculated literature
2.2 2.3

Alcohol Control

3.90 1-Butanol, 3-methyl- 123- MS n.c. – Fruity n.d.


51-3

4.78 1-Pentanol 71-41- MS n.c. – Fusel oil 9.010E+0


0 sweet balm

4.92 2-Penten-1-ol, (Z)- 6261- MS n.c. – Fruity n.d.


22-9

5.64 2,3-Butanediol, [S-(R*,R*)]- 513- MS, IR 800 789 Fruity n.d.


85-9

5.76 2,3-Butanediol 513- MS, IR 807 789 Fruity n.d.


85-9

15.93 3-Hexen-1-ol, (Z)- 928- MS, IR 868 855 Green grass 1.334E+0
96-1

9.76 1-Hexanol 111- MS, IR 881 869 Fruity and 1.070E+09


27-3 alcoholic

15.23 2-Heptanol 543- MS, IR 906 900 Floral sweet 2.230E+0


49-7 and fruity
green

15.12 Cycloheptanol 502- MS, IR 980 986 Odor of n.d.


41-0 others

15.23 1-Heptanol 111- MS, IR 982 971 Pineapple 8.942E+0


70-6

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 11/26
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tR Compounds CAS1 Identification IR IR Descriptors3


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2.1 calculated literature
2.2 2.3

Alcohol Control

15.64 1-Octen-3-ol 3391- MS, IR 989 978 Green land 5.286E+0


86-4

15.93 3-Hexen-1-ol, (Z)- 928- MS, IR 868 855 Green grass 1.334E+0
96-1

16.42 3-Octanol 589- MS, IR 1002 981 Citrus n.d.


98-0 melon

17.98 1-Hexanol, 2-ethyl- 104- MS, IR 1039 1029 Floral 1.282E+0


76-7

18.13 Benzyl alcohol 100- MS, IR 1043 1041 Phthalic n.d.


51-6 balsamic
floral

19.19 trans-(2- 36258- MS, IR 1066 1058 – n.d.


Ethylcyclopentyl)methanol 08-9

19.70 2-Octen-1-ol, (E)- 18409- MS, IR 1077 1069 Vegetable 7.707E+0


17-1 citrus

19.83 1-Octanol 111- MS, IR 1080 1070 Floral n.d.


87-5

19.94 (5-Ethylcyclopent-1- 36431- MS, IR 1082 1073 – n.d.


enyl)methanol 59-1

21.00 1,6-Octadien-3-ol, 3,7- 78-70- MS, IR 1105 1198 Floral n.d.


dimethyl- 6

21.45 Phenylethyl Alcohol 60-12- MS, IR 1118 1114 Floral n.d.


8

23.17 3-Nonen-1-ol, (Z)- 10340- MS, IR 1162 1152 Melon bark 7.206E+0
23-5 green

23.29 3,6-Nonadien-1-ol, (E,Z)- 56805- MS, IR 1165 1175 Nice sweet n.d.
23-3

23.75 2-Nonen-1-ol, (E)- 31502- MS, IR 1176 1171 Melon n.d.


14-4

23.87 1-Nonanol 143- MS, IR 1166 1173 Fat-floral n.d.


08-8 with pink

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 12/26
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tR Compounds CAS1 Identification IR IR Descriptors3


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2.1 calculated literature
2.2 2.3

Alcohol Control

26.61 2,6-Octadien-1-ol, 3,7- 106- MS, IR 1271 1232 'Natural' 6.263E+0


dimethyl-, (Z)- 25-2 sweet lemon

30.24 2-Tridecanol 1653- MS, IR 1511 1510 – 1.586E+0


31-2

31.79 1-Tetradecanol 112- MS, IR 1687 1664 Fruity 2.679E+0


72-1

34.00 2-Hexadecanol 14852- MS NC – – 9.424E+0


31-4

32.03 1,2-Tetradecanediol 21129- MS, IR 1714 1818 – n.d.


09-9

32.05 2-Pentadecanol 1653- MS, IR 1714 1690 – n.d.


34-5

34.09 1-Hexadecanol 36653- MS, IR 1886 1854 Floral n.d.


82-4

Aldehyde

5.89 Hexanal 66-25- MS, IR 804 802 Fruity 1.055E+0


1

8.64 2-Hexenal, (E)- 6728- MS, IR 862 862 – 9.079E+0


26-3

11.51 Heptanal 111- MS, IR 906 901 Fresh green 8.560E+0


71-7

14.34 Benzaldehyde 100- MS, IR 966 970 Cherry 2.019E+0


52-7

18.38 Benzeneacetaldehyde 122- MS, IR 1048 1044 Floral rose 6.750E+0


78-1

19.08 2-Octenal, (E)- 2548- MS, IR 1064 1062 Fresh 2.179E+0


87-0 Cucumber

21.08 Nonanal 124- MS, IR 1107 1102 Citric 1.111E+0


19-6

23.27 2-Nonenal, (E)- 18829- MS, IR 1164 1162 Greasy odor 1.607E+0
56-6

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 13/26
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2.1 calculated literature
2.2 2.3

Alcohol Control

Ketones

3.15 3-Pentanone 96-22- MS NC – Ethereal 2.428E+0


0 acetone

5.52 2-Hexanone 591- MS NC – Fruity n.d.


78-6

10.85 2-Heptanone 110- MS, IR 897 889 Fruity 1.253E+0


43-0

15.98 3-Octanone 106- MS, IR 994 984 Fresh 8.020E+0


68-3 lavender
herbs

15.90 5-Hepten-2-one, 6- 110- MS, IR 994 986 Fruity 4.668E+0


methyl- 93-0

16.09 2-Octanone 111- MS, IR 996 998 Natural 6.665E+0


13-7 aromatic
herbs

20.59 2-Nonanone 821- MS, IR 1095 1090 Green herbs 2.428E+0


55-6

27.45 2-Undecanone 112- MS, IR 1298 1295 Fruity n.d.


12-9

31.93 3-Pentadecanone 18787- MS, IR 1704 1648 – n.d.


66-1

33.80 Cyclododecanone 830- MS, IR 1868 1923 – n.d.


13-7

Hydrocarbon MS, IR

17.64 D-Limonene 5989- MS, IR 1031 1010 Candy 1.012E+0


27-5

17.79 5-Ethyl-1- 36431- MS, IR 1035 1020 – 1.881E+0


Formylcyclopentene 60-4

20.90 Undecane 1120- MS, IR 1107 1100 – 7.415E+0


21-4

24.83 Dodecane 112- MS, IR 1203 1200 Alcano 1.152E+0


40-3

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 14/26
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2.1 calculated literature
2.2 2.3

Alcohol Control

27.39 1-Tridecene 2437- MS, IR 1296 1291 – 1.529E+0


56-1

27.48 6-Tridecene 24949- MS, IR 1300 1307 – 3.058E+0


38-0

27.62 Tridecane 629- MS, IR 1309 1300 – 7.179E+0


50-5

29.05 Tetradecane 629- MS, IR 1405 1400 Soft 8.732E+0


59-4

29.21 Longifolene 475- MS, IR 1417 1416 Woody 1.318E+0


20-7 sweet

31.79 Cyclododecane 294- MS, IR 1687 1521 – n.d.


62-2

30.15 Pentadecane 629- MS, IR 1502 1500 – 3.013E+0


62-9

Ether MS, IR

16.04 Furan, 2-pentyl- 3777- MS, IR 995 996 Fruity 9.307E+0


69-3

Esters

5.03 Isobutyl acetate 116.16 MS NC – Fruity n.d.

8.71 Butanoic acid, 3-methyl-, 108- MS, IR 864 856 Candy 1.446E+0
ethyl ester 64-5

10.29 1-Butanol, 3-methyl-, 123- MS, IR 889 876 Fruity n.d.


acetate 92-2

12.39 Acetic acid, pentyl ester 628- MS, IR 928 928 Fruity n.d.
63-7

12.78 Hexanoic acid, methyl 106- MS, IR 938 936 Fruity 1.632E+0
ester 70-7

16.55 Hexanoic acid, ethyl ester 123- MS, IR 1005 999 Fruity 8.116E+0
66-0

12.77 Hexanoic acid, methyl 142- MS, IR 1005 1013 Sour n.d.
ester 62-1

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 15/26
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tR Compounds CAS1 Identification IR IR Descriptors3


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2.1 calculated literature
2.2 2.3

Alcohol Control

17.22 Acetic acid, hexyl ester 142- MS, IR 1021 1014 Fruity 7.360E+0
92-7

17.69 Heptanoic acid, methyl 106- MS, IR 1032 1021 Sweet fruit 8.410E+0
ester 73-0

21.95 Octanoic acid, methyl 111- MS, IR 1134 1128 Fennel 7.029E+0
ester 11-5

23.99 Benzeneacetic acid, methyl 101- MS, IR 1122 1187 Floral 5.699E+0
ester 41-7

28.89 Hexanoic acid, hexyl ester 6378- MS, IR 1325 1381 Fruity n.d.
65-0

30.40 Dodecanoic acid, methyl 111- MS, IR 1333 1527 Coconuts 1.415E+0
ester 82-0

32.18 Tetradecanoate, methyl 124- MS, IR 1728 1710 Petal 8.734E+0


ester 10-7

Carboxylic acids

24.52 Octanoic acid 124- MS, IR 1195 1191 Rancid oil 4.060E+0
07-2

33.80 Hexadecenoic acid, Z-11- 2416- MS, IR 1868 1915 – n.d.


20-8

33.82 cis-9-Hexadecenoic acid 373- MS, IR 1868 1944 – 1.732E+0


49-9

33.89 Palmitoleic acid 373- MS, IR 1876 1953 – 2.022E+0


49-9

37.44 cis-13-Octadecenoic acid 13126- MS, IR 2064 2175 – n.d.


39-1

Treatment A (TA): pulp processing without ascorbic acid, and Treatment B (TB): whole fruit processing with
ascorbic acid, and control: whole fruit processing without ascorbic acid; n.d: Not detected; n.c.: Not
calculated.

1
Unique registration number in the Chemical Abstracts Service database, a division of the Chemical
American Society.

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 16/26
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2.1
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Identification: was comparison of Exportação
mass spectra to database of NIST 2.0. 2012 (National Institute
of Standards and Technology, Gaithersburg, Md, EUA).

2.2
Index of retention of their respective volatile compounds, calculated from the n-alkane ratio (C8-
C20).

2.3
Retention Index observation in online database (NIST Chemistry Webbook and Pubchem).

3
Reference: The Good Scents Company.

Obenland et al. (2016) evaluated the different varieties of pitaya and identified 34 volatile
compounds, mainly aldehydes, hydrocarbons, alcohols, ketones, esters, and furans. Célis, Gil,
and Pino (2012) reported the presence of 146 volatile compounds in another variety of pitaya
(Hylocereus megalanthus (Haw.) Britton & Rose), of which 121 of the compounds identified (83%)
consisted of terpenes, alcohols, esters, ketones, and other compounds. As shown in Table 3, 55
compounds (including 28 alcohols, 1 aldehydes, 10 ketones, 4 hydrocarbons, 9 esters, and 3
carboxilic acids) were identify in TB, followed by 50 compounds (including 13 alcohols, 8
aldehydes, 6 ketones, 10 hydrocarbons, 1 ether, 9 esters, and 3 carboxilic acids) in TA, and 47
compounds (including 18 alcohols, 7 aldehyde, 5 ketones, 7 hydrocarbons, 1 ether, 4 esters,
and 5 carboxilic acids) in the Control, and 46 compounds (57.5%) (including 14 alcohols, 8
aldehydes, 6 ketones, 10 hydrocarbons, 1 ether, 9 esters, and 3 carboxilic acids) in TA.

The volatile profile composition varied according to the pulp processing employed. As
discussed earlier, the addition of ascorbic acid (TB) decreases the level of PPO and POD
activity. Moreover, this process was useful in order to maintain almost 68% of the volatile
compounds identified in TA (pulp processing without ascorbic acid) (Table 2).

Terpenoids and furanones are formed via the metabolic pathway of carbohydrates. The
lipoxygenase (LOX), hydroperoxide lyase (HPL), and alcohol dehydrogenase (ADH) are the
main enzymes responsible for the formation of secondary alcohols, aldehydes, ketones, acids,
and esters (Schwab, Davidovich-Rikanati, & Lewinsohn, 2008). As observed in the pitaya
composition (Table 1), the levels of carbohydrate in the pulp and the acidification process can
be related to the alcohols observed in TB. Furthermore, the acidification could be related to
the conservation of its glycosylated compounds.

The PCA 3D represented 98% of the total variance (R2X [1] = 64%; R2X [2] = 32.9%; R3X
[3] = 1.1%). The data obtained were initially subjected to a PCA approach using the Pareto scale,
as shown in Fig. 1a. After PCA, PLS-DA (see Fig. 1b) was performed to identify the most similar
treatments and agglomerates. These results confirmed the data obtained from PCA, where the
volatile compounds were differently affected by the process employed.

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 17/26
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Fig. 1. (a) Chemometrics graphs of the main compound analysis of pitaya (Hylocereus polyrhizus
(F.A.C. Weber) Britton & Rose) (PCA – 3D), (b) Partial Least Squares (PLS-DA - Scores), (c) Chart
of Variables of Importance in Projection (VIP - Scores) and (d) Chromatogram of the processes
with the identified VIP compounds. Treatment A (TA): pulp processing without ascorbic acid,
Treatment B (TB): whole fruit processing with ascorbic acid, and Control: whole fruit
processing without ascorbic acid. 1. 1-butanol-3-methyl (tR = 3.90 min), 2. 2-hexanone

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 18/26
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(tR = 5.52 min), 3. hexanal (tR = 5.8 min), 4. 2,3-butanediol (tR = 6.02 min), 5. 1-butanol-3-
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methylacetate Compartilhar
(tR = 10.33 Exportação
min), 6. hexanoic acid, methyl ester (tR =16.66 min), 7. hexanoic acid
ethyl ester (tR = 16.55 min), 8. hexanoic acid methyl ester (tR = 16.66 min), 9. trans-2-
ethylcyclopentyl, methanol (tR = 19.19 min), 10. 1,6-octadien-3-ol, 3,7-dimethyl-, (tR = 21.00 min),
11. undecane (tR = 21.01 min), 12. phenethyl alcohol (tR = 21.48 min), 13. octanoic acid, methyl
ester (tR = 22.06 min), 14. 6-tridecene (tR = 27.55 min), 15. pentadecane (tR = 30.15 min).

In addition to PCA and PLS-DA, the Variable Importance in the Projection (VIP) were
evaluated (see Fig. 1c and d). The variable importance in the projection (VIP) is a weighted sum
of squares of the PLS weight, and a VIP> 1 is generally used as a criterion to identify a
variable’s importance in the model. According to Fig. 1c, hexanal, undecane, and octanoic acid
methyl ester were the volatile compounds with the highest values of discrimination between
treatments, and were found in higher concentrations in the Control. Additionally, 1-hexanol
was observed at higher concentrations in Control and TA, indicating that the degradation
reactions are more intense in these treatments. These results reinforce the chemical
protection of the constituents of pitaya due the ascorbic acid addition.

Due to the large amount of information obtained, as well as to obtain an overview of the
metabolic variations in the different processes, heatmap analysis was performed using the
chemical markers (see Fig. 2). The 3D dendrogram (heatmap) showed that the Control had a
high degree of similarity with TA. Thus, the heatmap demonstrated that the metabolites
hexanal, undecane, octanoic acid methyl ester, hexanoic acid ethyl ester, hexanoic acid methyl
ester, 6-tridecene and pentadecane are found at a higher concentration in the Control.
Moreover, TA presented a moderate intensity of these metabolites. Concerning TB, the
presence of higher intensity metabolites belonging to the alcohols (1-butanol 3-methyl, 2,3-
butanediol phenethyl alcohol, 2,3-butanediol, 1-butanol-3-methylacetate, and trans-2-
ethylcyclopentyl-methanol), a ketone (2-hexanone) and a acid (hexanoic acid methyl ester).
Thus, the chemometric analysis was able to confirm the effectiveness of the addition of
ascorbic acid and its potential for delaying the reactions of degradation of the metabolic
pathways in processes related to the degradation of volatile compounds. These results can be
used by the industry (food, cosmetics, and others) once the effects of processing on the
chemical, physicochemical, enzymatic and volatile metabolic composition of pitaya have been
established. Thus, these results provide information about the possibilities of technological
uses of pitaya in industry processing.

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 19/26
31/01/2020 Efeitos do processamento na composição metabólica química, físico-química, enzimática e volátil de pitaya (Hylocereus polyrhizus…

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Fig. 2. Hierarchical clustering analysis and heatmap representing contents of aroma volatiles
in pitaya (Hylocereus polyrhizus (F.A.C. Weber) Britton & Rose). Treatment A (TA): pulp
processing without ascorbic acid, Treatment B (TB): whole fruit processing with ascorbic acid,
and Control: whole fruit processing without ascorbic acid. Red colour represents high levels
and blue colour represents low levels. The units in the colour scale are standard deviations.

4. Conclusion
Whole fruit processing with the addition of ascorbic acid (Treatment B, TB) resulted in low
polyphenol oxidase and peroxidase activity, no significant chemical or physicochemical
alterations in most parameters, and higher yields and fiber content than Treatment A (TA,
only pulp processing without ascorbic acid) or the control (whole fruit processing without
ascorbic acid). Considering the method used, the GC–MS was confirmed as an efficient
analytical technique for the separation and identification of the volatile compounds in pitaya.
Moreover, chemometric analysis proved to be fundamental for the differentiation between the
processes studied. Our results indicate that TB is a technological process which increases pulp
yield (13%) and conserves and aggregates volatile components. Due to their unique
contribution to the literature, we believe that our findings are of great importance for future
applications in the food industry.

Declaration of Competing Interest


The authors declare that there is no conflict of interest regarding publication of this paper.

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996919305964 20/26
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Acknowledgments
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Authors gratefully acknowledge the financial support received from Empresa Brasileira de
Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA) and the fellowship by Coordenação de Aperfeiçoamento de
Pessoal de Nível Superior - Brazil (CAPES) – Finance Code 001.

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