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UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ÁRIDO (UFERSA)

Pro-Reitoria de Pesquisa e Pós-Graduação

360

EFICIÊNCIA DE FUNGICIDAS NO CONTROLE “IN VITRO”

DE Monosporascus cannonballus
Erika Valente de Medeiros
Aluna de mestrado em agronomia da UFERSA, Núcleo de Pós-graduação- Caixa postal 137, 59625-900, Mossoró-
RN e-mail: erika@alunos.esam.br

Rui Sales Júnior

Prof. Adjunto, UFERSA, Caixa Postal 137, 59600-970 – Mossoró/RN. E-mail: jrrui@hotmail.com

Sami Jorge Michereff

Prof. Adjunto, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Departamento de Agronomia-Fitossanidade, CEP
52171-900, Recife, PE.E-mail: sami@ufrpe.br

RESUMO – O colapso do meloeiro causado por Monosporascus cannonballus, é uma síndrome limitante ao
cultivo do meloeiro. A desinfestação do solo por fumigação com brometo de metila antes do plantio é uma prática
comum para manejo da doença, mas tal produto será banido nos próximos dez anos, tornando-se notória a carência
de alternativas que controlem tal fungo. Avaliou-se a eficiência, in vitro, de oito ingredientes ativos (i.a.) em inibir o
crescimento micelial de M. cannonballus. Foram testadas as concentrações 0 (testemunha), 3, 6, 9, 12, 15, 18 e 21
µg.mL-1 de i.a., sendo avaliadas a taxa de crescimento micelial (TCM), percentagem de inibição do crescimento
micelial (ICM) e área abaixo da curva de crescimento micelial (AACCM) que tiveram correlação altamente
significativa entre si para todos os produtos testados. Os i.a. mais eficientes, Fluazinam, Piraclostrobina + Metiram
e Propiconazole foram submetidos a menores concentrações, pois inibiram em 100% o crescimento micelial na
menor concentração testada. As curvas de progresso da ICM, TCM e AACCM, em função das concentrações desses
i.a. foram ajustadas, com coeficientes de determinação variando de 81,76 a 98,31 (ICM e TCM) e 74,65 a 98,31
(AACCM). Dos i.a. testados, os que se apresentaram com maior eficiência foram Fluazinam, na concentração 0,5
µg.mL-1 na qual obteve percentagem de inibição de crescimento micelial de 68,21% seguido de Propiconazole que
obteve, em média, ICM = 56,07%, demonstrando o potencial de utilização dos referidos i.a. no controle de M.
cannonballus.
Palavras-chave: controle químico, colapso do meloeiro, inibição do crescimento micelial

EFFICIENCY OF FUNGICIDES ON Monosporascus cannonbal-

lus “IN VITRO” CONTROL
ABSTRACT – Vine decline of melon caused by Monosporascus cannonballus is a destructive disease on fields
worldwide, mainly in arid and semi-arid regions. Soil desinfestation by fumigation with methyl bromide before
planting is a common treatment for disease management, but this product will be banished in the next ten years, and
it is notorious the lack of alternatives to control this pathogen. The objective of this study was to evaluate the
efficiency of 8 active ingredients (a.i.) to inhibit in vitro mycelial development of M. cannonballus. The following
concentration were used: 0(control), 3, 6, 9, 12, 15, 18 and 21 µg.mL-1. The variables mycelial growth inhibition,
mycelial growth rate and area below mycelial growth curve were evaluated. Variables showed high correlation for
all tested products. The variables were highly correlated among them for all tested a.i. . The more efficient a.i were
Fluazinam, Pyraclostrosbim + Methiram and Propiconazole, as the mycelial growth was 100 per cent inhibited in
the lowest concentration, demonstrating the potential of these a.i. to control M. cannonballus. The progress curves
of ICM, TCM and AACCM , according to i.a. concentrations, were adjusted by polynomial models, with
determination coefficient ranging from 81.76 to 98.31 (ICM and TCM) and from 74.65 to 98.31 (AACCM). Among
the tested i.a., Fluazinam (0.5 µg.mL-1) and Propiconazole were more efficient, showing mycelial growth inhibition
of 68.21% and 56.07%, respectively.
Key-Words: chemical control, vine decline, mycelial growth inhibition.

INTRODUÇÃO despontou como o maior produtor da referida

O meloeiro (Cucumis melo L.) é uma das cucurbitácea, detendo aproximadamente 50,28%
principais olerícolas cultivadas mundialmente, da produção mundial enquanto que o Brasil, com
ocupando área de exploração equivalente a 12.500 hectares de área cultivada, foi responsável
1.265.000 milhões de hectares. Em 2005, a China por apenas 0,57% (FAO, 2005).

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MEDEIROS et al
A região Nordeste ocupa lugar de destaque no
cenário nacional, sendo responsável por 93,4%
da produção brasileira de melão. Os maiores
produtores estão concentrados nos estados do Rio
Grande do Norte, Ceará, Pernambuco, Paraíba e
Bahia (NEGREIROS et al., 2003).
Apesar de bem adaptado à região semi -árida,
o meloeiro atualmente apresenta índices de baixa
produtividade, atribuídos a fatores como
ocorrência de enfermidades, manejo de adubação,
dentre outros. Entre os problemas de ordem
fitossanitária, destaca-se uma síndrome complexa
que apresenta diversos agentes causais, atuando
de forma isolada ou em associação com outros
microorganismos fitopatogênicos (SALES JR. et
al., 2002). Diversas denominações são atribuídas
à referida síndrome tais como “vine decline”,
“collapse”, “sudden death”, decaimento de ramas
ou simplesmente colapso ou morte súbita
(GARCÍA-JIMÉNEZ et al., 1994).
O colapso do meloeiro atribuído a
Monosporascus cannonballus Pollack e Uecker é
considerado uma doença de importância agrícola,
tendo em vista dizimar cultivos da referida
cucurbitácea em todo o mundo, principalmente
em regiões áridas e semi -áridas (MARTYN e
MILLER, 1996). Em levantamentos realizados
por García-Jiménez et al. (2000), foi constatado
que a produção de melão na Espanha diminuiu
em torno de 40% em apenas 15 anos,
principalmente devido ao colapso, com a
predominância de patógenos radiculares como
Acremonium cucurbitarcerum Alfaro-García, W.
Gams et J. García-Jiménez e M. cannonballus
(GARCÍA-JIMÉNEZ et al., 2000).
Alcântara et al. (1997), em testes de
patogenicidade executados no vale de Arava
(Israel), determinaram ser M. cannonballus o
agente mais agressivo envolvido na referida
síndrome. No Brasil, o primeiro relato foi
realizado em cultivos comerciais de meloeiro no
Rio Grande do Norte, onde M. cannonballus
apresentou índice de freqüência de 15% em dois
campos de produção comercial no verão de 2002
(SALES JR. et al., 2003 e 2004).
O colapso do meloeiro é caracterizado pelo
declínio das ramas em períodos próximos a
colheita (WAUGH et al., 2003). Isso se deve ao
apodrecimento das raízes da planta, levando a um
desequilíbrio entre sistema radicular e parte
aérea, que no momento de maior demanda de
água sofre estresse resultando, em alguns casos,
em morte da planta.
Diversas medidas de controle vêm sendo
testadas para controlar a enfermidade, entretanto,
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algumas podem causar impacto ambiental, como
é o caso da fumigação com brometo de metila
(COHEN et al., 1999; STANGHELLINI et al.,
2004), motivo pelo qual será proibida a utilização
do referido produto até o ano de 2015
(STANGHELLINI et al., 2004).
Em testes realizados in vitro com diferentes
concentrações de produtos em relação à
patógenos habitantes de solo, houve inibição total
do crescimento de M. cannonballus, com os
ingredientes ativos (i.a.) Captan e Procimidone
na concentração de 500 µgml -1 , Carboxin-thiram
e Tiofanato metílico à 100 µgml-1 (ALVES et al.,
2002 a e b). Tais resultados ampliam as
possibilidades de controle que possam garantir a
manutenção das plantas até o final do ciclo.
Tendo em vista a importância econômica do
colapso do meloeiro aliado ao fato da
inexistência de produtos registrados para o
controle da doença, o presente trabalho objetivou
avaliar a eficiência in vitro de oito ingredientes
ativos no controle de M. cannonballus.
MATERIAL E MÉTODOS
Obtenção de isolado de M. cannonballus
O isolado de M. cannonballus foi obtido a
partir do isolamento de raízes de meloeiro
procedentes de área produtora de melão,
localizada em Mossoró-RN com sintomas de
colapso de ramas. Fragmentos de raízes
previamente desinfestadas com hipoclorito de
sódio (1,5% de cloro ativo), durante 1 min foram
depositados em placas de Petri contendo meio de
cultura batata-dextrose ágar (BDA) acrescido de
500 µg.mL-1 de estreptomicina, as quais foram
mantidas à 27 ºC durante quatro dias.
Posteriormente os pontos de isolamento foram
repicados para cultivos puros, quando foi
realizada a seleção de um isolado de M.
cannonballus, confirmado por microscopia
óptica. Após a seleção, o isolado foi repicado em
culturas puras e incubadas em estufa (B.O.D.) a
27 ºC e fotoperíodo de 12h de alternância de luz.
Efeito de diferentes ingredientes ativos no
controle in vitro do crescimento micelial de M.
cannonballus
O estudo foi realizado com base em dois
experimentos. No primeiro, avaliou-se in vitro a
eficiência de oito ingredientes ativos (i.a.) em
inibir o crescimento micelial de M. cannonballus,
nas concentrações 0 (testemunha), 3, 6, 9, 12, 15,
18 e 21 µg.mL-1 . Os i.a. testados foram:
Difenoconazole (Score®), Fluazinam
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362 Eficiência de fungicidas no controle “in vitro” de ...

(Frowncide® 500 SC), Tiofanato Metílico em duas avaliações consecutivas e dti o intervalo
(Cercobin® 700 PM), Piraclostrobina + Metiram entre as avaliações. Os dados originais foram
(Cabrio Top®), Cresoxim-Metílico (Stroby®), transformados em vx+0,5 e submetidos à análise
Chlorothalonil (Daconil®), Trifluozole de correlação de Pearson, ao nível de 5% de
(Trifmine®) e Propiconazole (Tilt®). probabilidade.
Soluções de fungicidas foram diluídas em Os ingredientes ativos que se revelaram
água destilada estéril (ADE), conforme a eficientes na menor concentração utilizada no
concentração final desejada do i.a. em meio de primeiro experimento, foram submetidos à outra
cultura. Alíquotas das soluções fungicidas foram avaliação nas concentrações 0 (testemunha), 0,5;
adicionadas separadamente ao meio de cultura 1; 2; 3; 6; 9; 12; 15; 18; 21 µg.mL-1 .
BDA a 45 ºC. Na testemunha, concentração de 0 O delineamento experimental utilizado foi do
µg.mL-1 de i.a., foi adicionado apenas ADE. tipo inteiramente casualizado, em arranjo fatorial
Depois de homogeneizados os meios contendo as 3 x 10 + 1, sendo 3 i.a. em 10 concentrações mais
diferentes concentrações dos i.a. testados, foram a testemunha, com quatro repetições.
vertidos em placas de Petri de 9 cm de diâmetro. Com base nos resultados obtidos, os dados
Discos de 6 mm de diâmetro de meio contendo foram submetidos análise de variância e com as
micélio de M. cannonballus com 15 dias, foram médias foram selecionadas curvas de regressões,
semeados no centro da superfície do meio. tendo as concentrações dos i.a. como variável
O delineamento experimental utilizado foi do independente. Modelos exponencial, logarítimo,
tipo inteiramente casualizado, distribuídos em quadrático e polimoniais foram testados, tendo
esquema fatorial 8 x 7 + 1, sendo 8 i.a. em 7 sido selecionados com base no coeficiente de
concentrações mais a testemunha, com quatro determinação (R2 ) e no quadrado médio do
repetições. resíduo (QMR).
Os dados para o cálculo das variáveis
analisadas foram obtidos a partir da avaliação RESULTADOS E DISCUSSÃO
diária do diâmetro de crescimento da colônia Os i.a. avaliados induziram níveis de inibição
fúngica, durante sete dias. As variáveis de crescimento micelial (ICM) altamente
analisadas foram taxa de crescimento micelial correlacionados com taxa a de crescimento
(TCM), percentagem da inibição do crescimento micelial (TCM) e área abaixo da curva de
micelial calculado pela fórmula de Abbott: ICM crescimento micelial (AACCM), com
(%) = (T-t)*100/T, onde T é a testemunha e t o coeficientes de determinação, variando de -1,00 a
tratamento e área abaixo da curva de crescimento 0,999473 (Tabela 1).
micelial (AACCM), utilizando a fórmula: As variáveis TCM e AACCM foram
AACCM = ?((yi + yi+1)/2.d ti ), onde y i e y i+1 são positivamente correlacionadas. O aumento da
os valores de crescimento da colônia observados taxa de crescimento micelial acarretou o aumento
Tabela 1. Coeficientes de correlação entre as variáveis inibição do crescimento micelial, taxa de cresci-
mento miscelial e área abaixo da curva de crescimento micelial utilizadas para avaliar o efeito de ingre-
dientes ativos no controle in vitro de Monosporascus cannonballus.
Ingrediente ativo Variável ICM AACCM
Difenoconazole TCM -1,00* 0,975332*
ICM -0,97533*
Fluazinam TCM -1,00* 0,992169*
ICM -0,99217*
Tiofanato metílico TCM -1,00* 0,972277*
ICM -0,97228*
Piraclostrobina + metiram TCM -1,00* 0,999447*
ICM -0,99945*
Cresoxim-metílico TCM -1,00* 0,98022*
ICM -0,98022*
Chlorothalonil TCM -1,00* 0,998747*
ICM -0,99875*
Trifluozole TCM -1,00* 0,996824*
ICM -0,99682*
Propiconazole TCM -1,00* 0,999473*
ICM -0,99947*

ICM = inibição do crescimento micelial, TCM = taxa de crescimento micelial, AACCM = área abaixo da curva de crescimento

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MEDEIROS et al 363

da área abaixo da curva de crescimento micelial e
a diminuição da inibição do crescimento.
Houve interação significativa entre produtos e
concentrações.Os modelos polimoniais melhor se
adequaram em descrever o comportamento das
variáveis ICM, TCM e AACCM em função das
concentrações (Figuras 1, 2 e 3).
baixa eficiência dos referidos i.a. quando
comparados aos percentuais de ICM obtidos dos
outros produtos, utilizado as mesmas
concentrações.
Os i.a. eficientes em inibir o desenvolvimento
micelial de M. cannonballus foram
Difenoconazole, Fluazinam, Piraclostrobina +

2 2
y = 12,0 + 10,0x - 0,31x y = 26,9 + 11.6x + 0,42x
R2 = 0,9 R2 = 0,67

2
y = 0,17 - 0,35x + 0,04x
R2 = 0,93

2
y = 26,9 + 11,6x - 0,42x
R2 = 0,67

2
2 y = 5,21 + 13,5x - 0,40x
y = 18,3 + 7,23x - 0,21x
R2 = 0,90
R2 = 0,73

2
y = -2,0 + 0,8x + 0,02x
R2 = 0,96

2
y = 26,9 + 11,6x - 0,42x
R2 = 0,67

Figura 1. Modelos polimoniais da inibição do crescimento micelial (ICM) de Monosporascus

cannonballus em meio BDA com diferentes concentrações de oito diferentes ingredientes ativos. Dados
transformados em vx+0,5.

Todos os i.a. foram eficientes na inibição do Metiram, Chlorotalonil e Propiconazole. As

crescimento micelial de M. cannonballus, (Figura
1), exceto Tiofanato Metílico e Trifluozole que
resultaram em pequenas percentagens de inibição
do crescimento micelial, com pontos de máxima
inibição de 11,81 e 27,84% na dose máxima
testada, 21 µg.mL-1 , tais percentuais refletem a
menores concentrações que resultaram em
máxima percentagem de inibição do crescimento
micelial foram 16,12; 13,8; 13,8; 14,4; 13,8
µg.mL-1 , respectivamente (Figura 1).
Fluazinam, Piraclostrobina + Metiram e
Propiconazole inibiram totalmente o

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364 Eficiência de fungicidas no controle “in vitro” de ...

2
y = 8,3 – 0,98x + 0,03x
R2 = 0,90 y = 6,9 – 1,1x + 0,04x
2

R2 = 0,67

2 2
y = 9,5 + 0,03x + 0,004x y = 6,9 – 1,1x + 0,04x
R2 = 0,93 R2 = 0,67

2
y = 7,77 - 0,69x + 0,02x 2
y = 9,01 – 1,29x + 0,04x
R2 = 0,74 R2 = 0,90

2
2
y = 6,9 – 1,1x + 0,04x
y = 9, 7 – 0,08x + 0,0002x R2 = 0,67
R2 = 0,96

Figura 2. Modelos polimoniais da taxa do crescimento micelial (TCM) de Monosporascus

cannonballus em meio BDA com diferentes concentrações de oito diferentes ingredientes ativos.Dados
transformados em vx+0,5.
desenvolvimento micelial mesmo na menor dose
testada, 3 µg.mL-1 , até o último dia do
experimento.
Silveira et al. (2003) testando a eficiência de
i.a. para controle de Rhizoctonia spp. obtiveram
resultados promissores para inibição do
crescimento micelial quando testado in vitro. O
Chlorothalonil resultou em inibição de
crescimento micelial de 69% na concentração de
1 µg.mL-1 . No entanto, no presente trabalho que
teve como alvo biológico o M. cannonallus,
também patógeno radicular, a concentração
utilizada foi 3 µg.mL-1 com inibição de 40%, com
crescimento máximo na dose de 16,88 µg.mL-1 .
Esses resultados demonstram a possibilidade de
utilização deste produto para patógenos
radiculares, embora haja a necessidade de ensaios
preliminares a fim de obter as concentrações mais
eficientes em campo para as espécies alvo.
Houve interação significativa entre os i.a.
com as concentrações para a variável taxa de
crescimento micelial. As médias foram
submetidas a regressões, obtendo equações
polimoniais (Figura 2) com coeficientes de
determinação de que variavam de 0,67
(Fluazinam, Piraclostrobina + Metiram e
Propiconazole) até 0,96 (Trifluozole).
Os baixos coeficientes de determinação (0,67)
são explicados pelo fato de que esses produtos
não permitiram o crescimento do fungo até o

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MEDEIROS et al 365

y = 8,3 – 0,98x + 0,03x 2 y = 6,9 – 1,1x + 0,04x2

R2 = 0,90 R2 = 0,67

Cresoxim-metílico Piraclostrobina + metiram

y = 9,5 + 0,03x + 0,004x2 y = 6,9 – 1,1x + 0,04x2

R2 = 0,93 R 2 = 0,67

último dia do ensaio, nas concentrações testadas.

Portanto, tais produtos, foram submetidos a

y = 7,77 - 0,69x + 0,02x2 y = 9,01 – 1,29x + 0,04x2

R2 = 0,74 R2 = 0,90

y = 9,7 – 0,08x + 0,0002x2 y = 6,9 – 1,1x + 0,04x2

R2 = 0,96 R2 = 0,67

Figura 3. Modelos polimoniais da área abaixo da curva de crescimento micelial (AACCM) de

Monosporascus cannonballus em meio BDA com diferentes concentrações de oito diferentes
ingredientes ativos. Dados transformados em vx+0,5.

concentrações menores a fim de se obter uma que o fungo apresentasse uma taxa de
curva de regressão que melhor descrevesse o crescimento diferente de zero.
comportamento da variável em questão. Isso seria Em relação à variável área abaixo da curva de
conseguido com a obtenção de uma concentração crescimento micelial (AACCM), houve interação

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366 Eficiência de fungicidas no controle “in vitro” de ...

-x -x -x
y = 97,02 – 76,76e y = 0,28 + 7,30e y = 0,16 + 8,46e
2 2 2
R = 81,76 R = 81,76 R = 74,65

-x -x -x
y = 94,46 – 95,17e y = 0,52 + 9,05e y = 0,46 + 11,19e
2 2 2
R = 98,31 R = 98,31 R = 98,31

-x -x -x
y = 96,80 – 81,28e y = 0,30 + 7,73e y = 0,22 + 9,60e
2 2 2
R = 86,59 R = 86,59 R = 86,59

Figura 4. Modelos polimoniais da inibição do crescimento micelial (ICM), taxa de crescimento micelial
(TCM) e área abaixo da curva de crescimento micelial (AACCM) de Monosporascus cannonballus em
meio BDA com diferentes concentrações dos ingredientes ativos que se mostraram mais eficientes:
Fluazinam, Piraclostrobina + metiran e Propiconazole. Dados transformados em vx+0,5.

significativa entre os i.a. e as concentrações testados (Figura 4). Os coeficientes de

testadas. As equações polimoniais (Figura 3)
melhor se ajustaram dentre as testadas, pois
permitiram altos coeficientes de determinação
para alguns i.a.. Tal variável explica o
comportamento do crescimento micelial do fungo
durante todo o experimento. As curvas foram
semelhantes às equações da TCM para todos os
produtos, uma vez que essas variáveis
correlacionaram-se positivamente. Baixos
coeficientes de determinação também foram
observados para os produtos Fluazinam,
Piraclostrobina + Metiram e Propiconazole, em
relação à variável AACCM.
Os i.a. Fluazinam, Piraclostrobina + Metiram
e Propiconazole foram testados em concentrações
mais baixas, pois inibiram totalmente o
crescimento na menor concentração testada.
Os modelos polinomiais melhor se ajustaram
em descrever a variação sofrida por ICM, TCM e
AACCM em função das concentrações dos i.a.
determinação variaram de 81,76 a 98,31% (ICM
e TCM) e 74,65 a 98,31% (AACCM).
Dentre os i.a. testados em concentrações
menores, Fluazinam foi mais eficiente, uma vez
que na concentração de 0,5 µg.mL-1 resultou em
percentagem de inibição de crescimento micelial
de 68,21% seguido de Propiconazole, ICM =
56,07%. Este fato corrobora com Cohen et al.
(1999) que, testando a eficiência in vitro de 29
fungicidas obteve o Fluazinam como o
ingrediente ativo mais eficiente na concentração
10µg.mL-1 para inibição do crescimento micelial
de M. cannonballus, esses resultados foram
confirmados em campo.
Nascimento et al. (2005), ao avaliar produtos
de contato em diferentes concentrações, a área
abaixo da curva de progresso da doença de M.
cannonballus, avaliado pela mesma fórmula aqui
descrita, com concentrações 0; 0,1; 1; 10 e
100µg.mL-1 , observou que o Fluazinam foi o i.a.

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MEDEIROS et al
mais eficiente que permitiu o crescimento apenas
na concentração de 0,1µg.mL-1 .
Os i.a. que mais se destacaram em inibir o
crescimento micelial de M. cannonballus foram
Fluazinam e Propiconazole os quais ainda se
encontram em processo de registro para a sua
utilização na cultura de meloeiro, havendo
necessidade de testes preliminares em campo
para corroborar os estudos in vitro .
CONCLUSÕES
Os ingredientes ativos Difenoconazole,
Fluazinam, Piraclostrobina + Metiram, Cresoxim
Metílico, Chlorotalonil e Propiconazole foram
eficientes em inibir o desenvolvimento micelial
de M. cannonballus, quando avaliados in vitro,
exceto Tiofanato Metílico e Trifluozole.
As menores concentrações que permitiram a
inibição total do crescimento de Monosporascus
cannonballus para os ingredientes ativos
Difenoconazole, Fluazinam, Piraclostrobina +
Metiram, Cresoxim metílico, chlorotalonil e
Propiconazole foram 16,12; 13,8; 13,8;
17,2;14,4; 13,8, respectivamente.
Os ingredientes ativos mais eficientes em
inibir o crescimento micelial de M. cannonballus
foram Fluazinam e Propiconazole.
AGRADECIMENTOS
À Coordenadoria de Aperfeiçoamento de
Pessoal de Ensino Superior (CAPES) pelo apoio
financiero e às empresas produtoras das
moléculas testadas pela doação dos produtos.
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