Aloe Ferox

UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO
CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS
AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA REPRODUTIVA DA RESINA DE Aloe

ferox MILLER EM RATAS WISTAR
HÉLIDA MARIA DE LIMA MARANHÃO
RECIFE-PE
2010
CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE
DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS
HÉLIDA MARIA DE LIMA MARANHÃO
AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA REPRODUTIVA DA RESINA DE Aloe

ferox MILLER EM RATAS WISTAR
Dissertação submetida ao Programa de Pós-

Graduação em Ciências Farmacêuticas do Centro de
Ciências da Saúde da Universidade Federal de
Pernambuco, como requisito parcial para a obtenção
do grau de Mestre em Ciências Farmacêuticas.
Orientador: Prof. Dr. Almir Gonçalves Wanderley

Co-orientador: Prof. Dr. Haroudo Sátiro Xavier
RECIFE
2010
REITOR
Prof. Dr. Amaro Henrique Pessoa Lins
VICE-REITOR
Prof. Dr. Dr. Gilson Edmar Gonçalves e Silva
PRÓ-REITOR PARA ASSUNTOS DE PESQUISA E PÓS-GRADUAÇÃO

Prof. Dr. Anísio Brasileiro de Freitas Dourado
DIRETOR DO CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

Prof. Dr. José Thadeu Pinheiro
VICE-DIRETOR DO CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

Prof. Dr. Márcio Antônio de Andrade Coelho Gueiros
CHEFE DO DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS

Prof. Dr. Dalci José Brondani
VICE-CHEFE DO DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS

Prof. Dr. Antônio Rodolfo de Faria
COORDENADOR DO PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS

FARMACÊUTICAS
Prof. Dr. Pedro José Rolim Neto
VICE-COORDENADORA DO PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM

CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS
Profª. Drª. Beate Saegesser Santos
AGRADECIMENTOS
A Deus, pela presença constante em minha vida e pela conclusão de mais uma etapa, que será
o início de um caminho de muitas vitórias.
Aos meus pais, a minha irmã e a toda minha família, que sempre demonstram provas de amor
e apoio incondicional.
Em especial a Carlos, meu namorado, pelo amor, companhia, dedicação sempre presentes em
todos os momentos e pelo auxílio prestado em etapas de desenvolvimento desse trabalho.
Ao Prof. Dr. Almir Gonçalves Wanderley pela orientação concedida neste trabalho e
conhecimentos transmitidos.
Ao Prof. Dr. Haroudo Sátiro pela contribuição prestada e aprendizado concedido e à Profa.
Dra Miracy Muniz de Albuquerque pelo auxílio no desenvolvimento desse trabalho.
Ao laboratório de Farmacologia e Toxicologia Pré-clínica de produtos bioativos, em especial

à Vanessa, Liliane, Rejane, Zenira, Rafaela, Giovana e Jamilka pelo auxílio e contribuição
nesse trabalho.
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
a.p.: Active principle

Anvisa: Agência Nacional de Vigilância Sanitária
i.p.: Via intraperitoneal
LD50: Dose letal de uma substância capaz de provocar a morte de 50% da população
em estudo.
NOAEL: Nível de efeito adverso não observado
OMS: Organização Mundial de Saúde
p.o.: per oral
RDC: Resolução da Diretoria Colegiada
UV: Ultravioleta
LISTA DE FIGURAS
Figura 1: Exemplar da espécie de Aloe ferox (Fonte: AKA, J. Disponível em: < http://
www.ubcbotanicalgarden.org/ potd/aloe_ferox >. Acessada em 05 de Outubro de 2009)
...................................................................................................................................................15
Figura 2: Folha de Aloe ferox e os extratos dos parênquimas de reserva (gel) e o clorofiliano
(látex) (BERTI , 2008)..............................................................................................................15
Figura 3: Principais derivados hidroxiantracênicos presentes em Aloe ferox (SIMÕES et al.,

2004).........................................................................................................................................16
ARTIGO: Reproductive toxicological study of Aloe ferox Miller resin in female Wistar
rats
Figure 1: Absorption spectrum of hydroxyanthracene derivates at the wavelength range from

200 to 600 nm………………………..……………………..………………………………...38
Figure 2: Maternal food intake (g/day/rat) of Aloe ferox (Af, 0.1, 0.5 and 2.5 g/kg) during
whole pregnancy. The values were expressed as mean ± S.E.M. (n=8/group).c Statistically
different of the glycerin control group (ANOVA, followed by Tukey test, p <
0.05)…………………………………………………………………………………………..39
Figure 3: Maternal body mass gain (g) of Aloe ferox (Af, 0.1, 0.5 and 2.5 g/kg) during whole
pregnancy. The values were expressed as mean ± S.E.M. (n=8/group) (ANOVA, followed by
Tukey test, p < 0.05)…………………………………………….……………………………39
Figure 4: Maternal water intake (mL/ day/ rat) of Aloe ferox (Af, 0.1, 0.5 and 2.5 g/kg) during
whole pregnancy. The values were expressed as mean ± S.E.M. (n=8/group) (ANOVA,
followed by Tukey test, p < 0.05). a Statistically different of the water and glycerin groups;
c
statistically different of the glycerin group..................................................................………40
LISTA DE TABELAS
ARTIGO: Reproductive toxicological study of Aloe ferox Miller resin in female Wistar
rats
Table 1: Reproductive parameters of pregnant Wistar rats treated with Aloe ferox Miller
during the preimplantation period (1st to 6th day).……………..…………….……………...41
during the organogenesis period (7th to 14th day)………………………..………………...42
during whole pregnancy (1st to 21th day)……………….…………………………………...43
Table 4: Offspring behavioral parameters of the female Wistar rats treated with Aloe ferox
Miller during whole pregnancy……………………………………...………………………..44
RESUMO
Aloe ferox Miller, pertencente à família Liliaceae, é originária da Província do Cabo Oriental
na África do Sul. No Brasil, a planta é conhecida como babosa e os maiores produtores
encontram-se no interior de São Paulo (particularmente no município de Jarinu), Santa
Catarina e na região Nordeste. Sendo esta última, a que possui as melhores condições de
plantio. Ela consiste em um arbusto perene arborescente típico de climas secos e quentes,
possui folhas alongadas e pontiagudas, e é constituída em duas partes: gel e látex. A resina de
Aloe ferox é um resíduo sólido obtido pela evaporação do látex que escorre do corte
transversal de suas folhas. Na medicina popular, dentre outras aplicações, a resina da planta é
usada no tratamento da constipação. Os efeitos da administração oral de A. ferox foram
investigados sobre a fertilidade, prenhez e desenvolvimento pós-natal da prole de ratas
Wistar. A aloína presente na resina foi identificada por cromatografia em camada delgada e os
derivados hidroxiantracênicos expressos como aloína foram quantificados por
espectrofotometria. A resina na forma de pó foi dissolvida em glicerina 40% (v/v). O estudo
foi realizado em três períodos, cada um contendo cinco grupos de ratas prenhes (n=8-
9/grupo), totalizando 15 grupos randomicamente formados. Os grupos 1 e 2 (grupos controle)
receberam água destilada e solução de glicerina 40% (v/v), respectivamente, enquanto os
outros foram tratados oralmente com A. ferox nas doses de 0,1, 0,5 e 2,5 g/kg. No primeiro
período, o tratamento foi administrado do 1º ao 6º dia (período de pré-implantação - PP) e o
segundo, do 7º ao 14º dia (período de organogênese - PO). No 20º dia de prenhez, as ratas
foram laparotomizadas para avaliação dos parâmetros reprodutivos. No último período, as
ratas prenhes foram tratadas oralmente com as mesmas doses durante toda a prenhez e os
parâmetros maternos e os da prole foram avaliados. A aloína (Rf 0,35) foi identificada e a
porcentagem dos derivados hidroxiantracênicos expressos como aloína foi 33.5%. Durante o
PP houve diminuição no ganho de massa corporal materna (p < 0,05) em todas as doses.
Reduções também foram observadas em alguns parâmetros maternos (massas da placenta) e
fetais (comprimento e massa relativa) nas doses de 0,5 e 2,5 g/kg quando comparado aos
grupos controle. No PO, a redução no ganho de massa corporal materna foi observada apenas
no tratamento com a maior dose. Entretanto, outros parâmetros como massas dos fetos, da
placenta e dos ovários foram alterados em todas as doses avaliadas. Durante o período integral
da gestação houve aumento apenas na massa corporal e comprimento dos conceptos no 7º e
21º dias de vida pós-natal, na maior dose. Os parâmetros comportamentais da prole não foram
alterados. Dessa forma conclui-se que o uso da glicerina como solvente não interferiu nos
parâmetros reprodutivos analisados no estudo. Embora alguns parâmetros tenham sido
alterados pelo tratamento com A. ferox, o desenvolvimento normal da prole não foi
influenciado por ele. Mas, o tratamento com a maior dose de A. ferox sugere possível
toxicidade materna devido ao provável efeito abortivo obtido com essa dose, mesmo sem
causar morte de ratas prenhes e malformações fetais. Nesse sentido, estudos posteriores
devem ser conduzidos a fim de assegurar o uso dessa planta durante a gestação humana.
Palavras-chave: Aloe ferox Miller, Aloína, Toxicologia; Prenhez, Prole.

ABSTRACT
Aloe ferox Miller (Liliaceae) is widespread in the Eastern Cape Province of South Africa. In
Brazil, the plant is popularly known as babosa and the largest producers are in São Paulo
(mainly Jarinu city), Santa Catarina and Northeast region. This region has the best conditions
for planting. It is arborescent perennial shrub that grows in hot and dry climates, it is made of
elongated and pointed leaves and it consists of two parts: gel and latex. Aloe ferox resin is the
solid residue obtained by evaporating latex which drains from the transversally cut leaves. In
folk medicine, among other applications, the resin of the plant is used in the treatment of
constipation. The effects of the oral administration of A. ferox were investigated on fertility,
pregnancy and offspring postnatal development of female Wistar rats. The aloin was
identified by thin layer chromatography and hydroxyanthracene derivates expressed as aloin
were quantified by spectrophotometry. The resin in powder form was dissolved in glycerin
40% (v/v). The study was conducted in three periods, each one containing five groups of
pregnant rats (n = 8-9/group), in total of 15 groups of rats randomly formed. The groups 1 and
2 (control groups) received distilled water and glycerin solution 40% (v/v), respectively,
while the others were treated orally with A. ferox at doses 0.1, 0.5 and 2.5 g/kg. In the first
period, the treatment was administered from 1st to 6th day (preimplantation period- PP) and
the second, from 7th to 14th day (organogenesis period - OP). On day 20th pregnancy, the
rats were laparotomized for evaluation of maternal and fetal parameters. In the last phase, the
pregnant rats were treated orally with the same doses during whole pregnancy and maternal
and offspring parameters were evaluated. The aloin (Rf 0.35) was identified and the
percentage of hydroxyanthracene derivates expressed as aloin was 33.5%. During the PP there
was reduction in the maternal body mass gain (p < 0.05). Reductions were also observed in
some maternal (mass of the placentae) and fetal (length and relative mass) parameters at doses
0.5 and 2.5 g/kg when compared with control groups. In the OP, the reduction in the maternal
body mass gain was observed only at the highest dose. However, other parameters like masses
of fetuses, placentae and ovary were changed at all doses evaluated. The maternal
reproductive parameters during whole pregnancy showed increases only in the pups body
mass and length on days 7th and 21th postnatal life, respectively, at the highest dose. The
offspring behavioral parameters were not changed. Thus, it concludes that the use glycerin as
solvent did not interfere in the reproductive parameters analyzed in study. Although some
parameters have been changed by treatment with A. ferox, the offspring normal development
was not influenced by it. Nevertheless, the treatment with A. ferox at the highest suggests
some maternal toxicity due to possible abortive effect shown in this dose, even without cause
deaths of pregnant rats and fetal malformations. Therefore, further studies should be
conducted to ensure the use of the plant during human gestation.
Keywords: .Aloe ferox Miller, Aloin, Toxicology; Pregnancy, Offspring.

SUMÁRIO
1.0. Introdução 11
2.0. Revisão bibliográfica 13
2.1. Aloe ferox Miller 14
2.1.1. Aspectos botânicos 14
2.1.2. Aspectos fitoquímicos 16
2.1.3. Etnofarmacologia e Estudos farmacológicos 17
2.2. Plantas medicinais e toxicidade 18
2.3. Toxicologia pré-clínica de plantas medicinais 20
2.3.1. Toxicologia do desenvolvimento: teratogênese e toxicologia
da reprodução 20
3.0. Objetivos 23
3.1. Objetivo geral 24
3.2. Objetivo específivos 24
4.0. ARTIGO: Reproductive toxicological study of Aloe ferox Miller
(Liliaceae) resin in female Wistar rats 26
Abstract 26
Introduction 27
Material and Methods 28
Results 31
Discussion 32
Acknowledgements 33
References 33
5.0. Conclusão 45
Referências 47
1. Introdução
11
1.0. Introdução
A utilização de plantas com fins medicinais para o tratamento, a cura e a prevenção de

doenças é uma das mais antigas formas de prática medicinal da humanidade (PINTO, 2002).
A terapêutica moderna, composta por medicamentos com ações seletivas sobre
receptores, enzimas e canais iônicos não seria possível sem a contribuição dos produtos
naturais, notadamente das plantas superiores. Essa informação pode ser facilmente
comprovada quando se analisa o número de substâncias obtidas direta ou indiretamente a
partir de fontes naturais. Atualmente, os produtos naturais são responsáveis por cerca de 40%
dos fármacos disponíveis para o tratamento de várias doenças, além do que há um grande
interesse das indústrias farmacêuticas pelo uso da biodiversidade como fonte de novos
fármacos (CALIXTO, 2003). Assim sendo, a fitoterapia constitui uma forma de terapia
medicinal que vem crescendo nos últimos anos e que movimenta no mercado mundial U$$ 22
bilhões anuais (PINTO, 2002). Em 2006, as vinte maiores empresas de fitoterápicos do Brasil
venderam aproximadamente R$ 460 milhões, valor equivalente a 84,7% do total faturado pelo
segmento (BRASIL, 2007).
Segundo a Organização Mundial de Saúde (OMS), 80% da população mundial faz uso
de terapias alternativas como formas de tratamento e as plantas medicinais são os principais
medicamentos utilizados. Apesar do uso tradicional e do elevado consumo de plantas
medicinais, apenas isso não comprova a sua efetividade nem a ausência de toxicidade, é
necessário conhecer a dose eficaz e aquela que produz toxicidade, portanto, é fundamental o
estudo farmacodinâmico e toxicológico padronizado (AGRA et al., 2007).
A toxicidade de plantas medicinais é um problema sério de saúde pública. Os efeitos
adversos dos fitomedicamentos, as possíveis adulterações e toxicidade, bem como a ação
sinérgica com outras drogas ocorrem comumente. As pesquisas realizadas para avaliação do
uso seguro de plantas medicinais e fitoterápicos no Brasil ainda são incipientes, assim como o
controle da sua comercialização pelos órgãos oficiais (VEIGA-JÚNIOR et al., 2005).
O gênero Aloe é amplamente empregado na medicina tradicional para o tratamento de
diversas doenças, entretanto em revisão de literatura não se detectou a presença de estudos
sobre segurança de uso, particularmente durante o processo reprodutivo da espécie Aloe ferox.
Desta forma, esse estudo procura explorar o efeito da resina dessa espécie durante o período
de gestação em ratas Wistar e o desenvolvimento dos conceptos.
12
2. Revisão Bibliográfica
13
2.0. Revisão Bibliográfica
2.1. Aloe ferox Miller
2.1.1. Aspectos botânicos
Aloe ferox Miller, pertencente à família Liliaceae, é originária da Província do Cabo

Oriental na África do Sul (ZAHN et al., 2007). No Brasil, a planta é popularmente conhecida
como babosa e os seus maiores produtores encontram-se no interior de São Paulo
(particularmente no município de Jarinu), Santa Catarina e na região Nordeste. Sendo esta
última, a que possui as melhores condições de plantio (MAGALHÃES, 2005). Consiste em
um arbusto perene arborescente típico de climas secos e quentes. Possui um único tronco que
pode atingir 2-3 m de altura, sendo caracterizado por possuir folhas secas persistentes nas
porções mais baixas do caule. As folhas largas são verdes no verão ou verde-avermelhadas no
inverno, com espinhos marrom-escuros ao longo das bordas. Apresenta inflorescência
racemosa ereta medindo cerca de 60 cm de altura, com flores que podem ser vermelhas,
alaranjadas ou amarelas como mostrado na figura 1 (PALGRAVE, 1984).
A planta consiste de dois produtos básicos: gel e látex, como mostrado na Figura 2
(BERTI, 2008). O gel de Aloe ferox é a polpa ou a mucilagem da folha, também chamado de
extrato do parênquima de reserva (EPR), consiste de uma substância clara e pouco consistente
obtida da porção interna da folha (TYLER, 1994). O extrato do parênquima clorofiliano
(EPC), também chamado de suco de Aloe, é um látex amarelo de sabor amargo produzido
pelas células excretoras do mesófilo, localizado logo abaixo da epiderme das folhas
(VOGLER; ERNST, 1999).
A resina de Aloe ferox é um resíduo sólido obtido pela evaporação do látex, com ou
sem auxílio do calor, que escorre do corte transversal das folhas (BRUNETON, 1995).
14
Figura 1: Exemplar da espécie de Aloe ferox (Fonte: AKA, J. Disponível em: < http://
www.ubcbotanicalgarden.org/ potd/aloe_ferox > . Acessada em 05 de Outubro de 2009).
Figura 2: Folha de Aloe ferox e os extratos dos parênquimas de reserva (gel) e o clorofiliano (látex)
(BERTI, 2008).
15
2.1.2. Aspectos fitoquímicos
Aloe ferox é composta principalmente por glicoproteínas, polissacarídeos, substâncias

de baixo peso molecular e antraquinonas. Os polissacarídeos mais comuns são os
glucomanan, que são polímeros de manose, e podem estar acetilados. Os polímeros de
galactose e ácido galacturônico também são frequentemente encontrados. Entre as substâncias
de baixo peso molecular têm-se aloesina, β-sitosterol, dietilhexilftalato, vitaminas e
betacaroteno. As antraquinonas aloe-espcíficas estão também presentes e incluem aloe-
emodina, aloína, barbaloína, isobarbaloína (CHOI; CHUN, 2003). Da raiz da planta foi
isolada a antrona denominada aloe-barbendol (KOCH, 1996).
O extrato do parênquima clorofiliano é formado predominantemente por glicosídeos
de antraquinonas, principalmente aloína. A aloína é um C-glicosídeo da antrona aloe-emodina
e consiste na mistura de dois diastereoisômeros: aloína A (também chamada apenas de aloína)
e aloína B (também chamada de barbaloína) como mostrado na figura 3 (HAYNES, 1960;
TYLER, 1994). A aloína foi caracterizada como 10-β-D-Glucopiranosil-1,8-dihidroxi-3-
hidroximetil-9(10-H)-antracenona e apresenta fórmula molecular C21H22O9 (HAY; HAYNES,
1956; CONNER et al., 1989; YUKO et al., 1990).
Aloe-emodina Glicosídeos de aloe-emodina (aloína)
Figura 3: Principais derivados hidroxiantracênicos presentes em Aloe ferox (SIMÕES et al., 2004).
A assimetria molecular apresentada pela aloína explica a resistência que ela oferece à
hidrólise, que é uma etapa importante da quantificação dos derivados hidroxiantracênicos
expressos como aloína. Apenas com a utilização de oxidantes como o cloreto férrico,
perborato e peróxido de sódio, por exemplo, consegue-se separar a aloe-emodina-antrona da
parte osídica (arabinose), devido à quebra da cadeia glucosil do C-heterosídeo (COSTA,
1975). Essa análise quantitativa dá-se por espectrofotometria. Já a cromatografia em camada
16
delgada é empregada na análise qualitativa para verificar a presença de glicosídeos
antracênicos como a aloína (FARMACOPÉIA EUROPÉIA, 1997).
2.1.3. Etnofarmacologia e Estudos farmacológicos
Dados etnofarmacológicos descrevem o uso da resina de Aloe ferox na forma de pó

como estomáquico, emenagogo, anti-helmíntico e laxante (BALBACH, 1986). A resina de
Aloe ferox é obtida na cultura popular deixando-se durante 1 ou 2 dias, as folhas que foram
cortadas pela base, inclinadas umas sobre as outras, com as superfícies seccionadas voltadas
para baixo, sobre dispositivos que as mantenham nessa posição, de modo que o suco escorra
para os recipientes de coleta num nível inferior. Esse sumo é evaporado espontaneamente e
quando bem seco pode ser transformado em pó e dissolvido em água com açúcar, sendo
assim, tomado como laxante (BARRACA, 1999).
O efeito laxativo de Aloe ferox dá-se pela presença de glicosídeos antracênicos
(principalmente aloína), que na flora intestinal são metabolizados à antrona aloe-emodina
(aglicona), que parece agir pelo distúrbio no equilíbrio entre a absorção de água no lúmen
intestinal via um transporte ativo de sódio (ISHII et al., 1990). A aloína inibiu in vitro a
bomba Na+-K+-ATPase presente no cólon dos ratos e aumentou in vivo a permeabilidade
através da mucosa colônica dos mesmos (ISHII et al., 1994). Em experimentos com ratos
verificou-se que laxantes contendo derivados antracênicos podem desenvolver um efeito
carcinogênico na região colo-retal (SUGIE et al., 1994). Entretanto, em ratos F344, o efeito
anti-carcinogênico de Aloe foi observado para esse mesmo tipo de câncer (SHIMPO et al.,
2001; SHIMPO et al., 2006). A atividade antitumoral da aloína isolada e do extrato do
parênquima clorofiliano também foi avaliada in vitro, utilizando células de melanoma de
camundongos. A aloína e o extrato exerceram uma ação tóxica sobre essas células a partir de
concentrações na ordem de 10 µg/mL, alterando a viabilidade celular das mesmas (BERTI et
al., 2008).
A aloe-emodina e a aloína isoladas de Aloe ferox também foram ativas contra as cepas
de Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Klebsiella pnemoniae e Pseudomonas
aeruginosa (KAMBIZI et al., 2004). As antraquinonas e seus derivados também são
conhecidos por suas ações anti-inflamatória, imunoestimulante, anti-oxidante e anti-
protozoário (CHOI; CHUNG, 2003). Um provável mecanismo para as ações anti-inflamatória
e imunoestimulante seria a sua ação anti-oxidante. Espécies reativas de oxigênio medeiam a
17
resposta inflamatória e podem contribuir com a necrose hepática (GRESSNER, 1991). A
análise histológica do fígado de ratos pré-tratados com aloe-emodina mostraram redução da
lesão hepática aguda induzida por tetracloreto de carbono (AROSIO et al., 2000). Desse
modo, a aloe-emodina parece proteger contra a morte do hepatócito e contra a resposta
inflamatória que se inicia logo após a peroxidação lipídica (MALTERUD et al., 1993).
Tem-se observado que as glicoproteínas presentes em Aloe ferox estimulam a
proliferação celular (CHOI et al., 2001). Jia et al. (2008) também demonstraram que os
polissacarídeos presentes nessa planta, principalmente a manose, são capazes de acelerar o
processo de cicatrização de feridas na pele de coelhos e ratos. Isso se daria porque a manose
liga-se a receptores presentes na superfície dos fibroblastos, estimulando-os e promovendo o
rápido crescimento e replicação celular (EAST; ISACKE, 2002). Os polímeros acetilados de
manose também induzem a produção de citocinas que regulam o processo de cicatrização de
feridas (BARBUL, 1990). Em adição, eles também podem exercer efeitos antivirais e
antitumorais in vivo, via ativação de macrófagos, produção de óxido nítrico e ativação dos
linfócitos T citotóxicos (LEE et al., 2001; CHOI; CHUN, 2003).
Em adição a esses compostos, moléculas de baixo peso molecular como a aloesina
inibiu a atividade da tirosinase em humanos, por um mecanismo de inibição não-competitivo,
o que é uma etapa importante na síntese de melanina (JIN et al., 1999). A β-sitosterol mostrou
um efeito angiogênico dose-dependente por melhorar a expressão de proteínas como o fator
de von Willebrand, o fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) e do receptor para
esse VEGF, o Flk-1 (CHOI et al., 2002). O dietilhexilftalato isolado da planta induziu
apoptose celular e demonstrou possuir efeitos anti-leucêmicos e anti-mutagênicos (LEE et al.,
2000).
2.2. Plantas medicinais e toxicidade
A OMS (1998) define planta medicinal como sendo todo e qualquer vegetal que
possui, em um ou mais órgãos, substâncias que podem ser utilizadas com fins terapêuticos ou
que sejam precursoras de fármacos semi-sintéticos (VEIGA-JÚNIOR et al., 2005). No Brasil,
o principal órgão responsável pela regulamentação de plantas medicinais e seus derivados é a
Agência Nacional de Vigilância Sanitária (Anvisa), autarquia do Ministério da Saúde, que
tem como papel proteger e promover a saúde da população, garantindo a segurança sanitária
de produtos e serviços, participando da construção de seu acesso (BRASIL, 1999).
18
A Resolução da Diretoria Colegiada (RDC) da Anvisa de nº 48 de 16 de Março de
2004 define fitoterápico como sendo o medicamento obtido empregando-se exclusivamente
matérias-primas ativas vegetais. É caracterizado pelo conhecimento da eficácia e dos riscos de
seu uso, assim como pela reprodutibilidade e constância de sua qualidade. Esse regulamento
abrange medicamentos cujos princípios ativos são derivados de droga vegetal, ou seja,
produtos de extração da matéria-prima vegetal (extrato, tintura, óleo, cera, exsudato, suco
entre outros). Não sendo objeto de registro ou cadastro a planta medicinal ou as suas partes
após os processos de coleta, estabilização e secagem, podendo ser íntegra, rasurada, triturada
ou pulverizada (BRASIL, 2004). Desse modo, a diferença entre planta medicinal e
fitoterápico reside no processo de elaboração que a planta sofre. Quando a elaboração
privilegia uma formulação específica, é caracterizado como um fitoterápico (MARQUES,
2009).
As plantas medicinais têm se mostrado importantes para a medicina moderna.
Primeiramente, por poder fornecer fármacos que dificilmente seriam obtidos por síntese
química, como os alcalóides de Papaver somniferum e os glicosídeos cardiotônicos de
Digitalis spp. As fontes naturais ainda fornecem compostos que podem ser modificados,
tornando-os mais eficazes ou menos tóxicos. E por último, os produtos naturais podem ser
utilizados como protótipos para obtenção de fármacos com atividades terapêuticas
semelhantes a dos compostos originais (ROBBERS et al., 1996). Porém, essas vantagens não
comprovam a efetividade e nem a ausência de toxicidade dessas plantas, faz-se necessário
estudos que garantam sua eficácia e segurança (TUROLLA, NASCIMENTO, 2006).
Muitas plantas contêm substâncias capazes de exercer ação tóxica sobre organismos
vivos. Essas substâncias seriam formadas com a função de defender a espécie dos seus
predadores. Por isso, muitas delas podem estar acumuladas e serem de elevada toxicidade
como os glicosídeos cianogênicos presentes na mandioca-brava, proteínas tóxicas como a
ricina contidas na mamona, alcalóides como a coniina presentes na cicuta e a estricnina, na
noz-vômica. Cabe ressaltar que enquanto algumas plantas são completamente desconhecidas
quanto ao seu potencial tóxico, outras já são comumente reconhecidas a exemplo das
popularmente conhecidas como comigo-ninguém-pode, coroa-de-cristo, pinhão-de-papagaio,
aroeira brava, mamona e cartucheira (SIMÕES et al., 2004).
A toxicidade de uma substância é definida como sendo a capacidade de causar dano
grave ou morte de um determinado organismo (DRAIZE et al., 1944). Em potencial, toda
substância é capaz de produzir efeitos tóxicos, dependendo apenas de fatores como dose,
19
tempo, modo e freqüência de administração (LOOMIS; HAYES, 1996). A obtenção de dados
toxicológicos em humanos é bastante limitada devido às questões éticas, morais e legais.
Portanto, a maioria desses dados é obtida por meio de testes pré-clínicos que utilizam animais
de laboratório em condições padronizadas (BOELSTERLI, 2003).
2.3. Toxicologia pré-clínica de plantas medicinais
No Brasil, o estudo toxicológico pré-clínico de plantas medicinais é regulamentado

pela RDC nº 90 de 16 de Março de 2004 que norteia alguns ensaios de toxicidade aguda,
toxicidade de doses repetidas e de longa duração (trinta dias a um ano, a depender da
freqüência de uso do produto) (BRASIL, 2004). Esses ensaios têm por objetivo comprovar a
eficácia e a toxicidade das plantas visando os seus benefícios para o ser humano. Além disso,
traçam o perfil dos efeitos colaterais, relacionando-os às doses e a um possível mecanismo de
ação em várias espécies de animais de experimentação (SIMÕES et al., 2004).
A toxicidade aguda diz respeito aos efeitos tóxicos decorrentes da administração da
substância, em doses única ou múltiplas, por um período de 24 horas, e também seus efeitos
durante 14 dias após a administração (LARINI; OLIVEIRA, 1993). Nesse estudo, as
informações obtidas devem ser usadas em estudos subsequentes de toxicidade prolongada
(LOOMIS; HAYES, 1996).
A toxicidade prolongada analisa e caracteriza todos os efeitos provocados por uma
determinada substância quando administrada diariamente em animais experimentais, em
doses previamente estabelecidas e por longos períodos (LOOMIS; HAYES, 1996). Os
principais parâmetros a serem observados durante o tratamento são as modificações na
atividade motora e comportamental, na cor e textura dos pêlos e na frequência
cardiorespiratória. Ao final dos experimentos, os animais devem ser sacrificados para a coleta
do sangue (análise dos parâmetros bioquímicos e hematológicos) e remoção de órgãos para as
análises macro e microscópica (BARNES; DOURSON, 1988).
2.3.1. Toxicologia do desenvolvimento: teratologia e toxicologia da reprodução
A toxicologia do desenvolvimento engloba a teratologia e a toxicologia da reprodução.

A teratologia estuda as alterações induzidas durante o desenvolvimento, entre a concepção e o
nascimento. Enquanto que a toxicologia da reprodução estuda os efeitos adversos que
20
ocorrem nos sistemas reprodutores masculino e feminino resultantes da exposição aos agentes
químicos (BARROS; DAVINO, 1996).
Os maiores e mais sérios riscos associados à exposição de drogas durante a gestação
consistem na possibilidade de malformações congênitas, retardo no desenvolvimento e
embriofetoletalidade. Os agentes capazes de promover malformações congênitas são
chamados de teratogênicos, enquanto àqueles que produzem retardo no desenvolvimento,
variações na ossificação ou morte do concepto, mas não promovem malformações são
conhecidos como embriofetotóxicos (WEBSTER; FREEMAN, 2001).
Os efeitos deletérios das drogas podem ser promovidos pela ação direta sobre o feto ou
indiretamente, através da ação tóxica sobre o organismo materno (MENEGOLA et al., 1998).
O impacto e a gravidade desses efeitos estão diretamente relacionados com o período da
gestação, a dose ou magnitude da exposição, diferenças entre as espécies, fatores genéticos e
toxicocinéticos como metabolismo, transporte placentário e via de administração
(WEBSTER; FREEMAN, 2001).
Os parâmetros toxicocinéticos são fundamentais para determinar o grau de
embriofetotoxicidade de um xenobiótico. A placenta, por ser uma estrutura responsável pela
troca de substâncias entre mãe e concepto, tem importância vital quando se quer avaliar os
riscos de uma substância. A placenta atua como uma barreira seletiva, é capaz de sintetizar e
metabolizar substâncias, mas pode funcionar como um reservatório de drogas. Alterações na
estrutura e função placentárias promovidas por determinadas substâncias podem produzir
necrose, reduzir o fluxo sanguíneo ou inibir a passagem de nutrientes pela placenta (SILVA et
al., 2009).
De acordo com a sensibilidade aos agentes teratogênicos e embriofetotóxicos, a
gestação pode ser dividida em três fases: a primeira, conhecida como pré-implantação,
compreende o período que vai desde a fecundação até a implantação do blastocisto. Nos seres
humanos, esse período vai até o 17º dia de gestação, enquanto em ratos vai até o 6º dia,
aproximadamente. A segunda fase, a organogênese, na espécie humana vai do 18º ao 40º dia
de gestação e nos ratos, do 7º ao 14º dia. A última fase, conhecida como período fetal, vai até
o término da gestação que nos ratos dura em média do 15º ao 21º dia (ALMEIDA et al.,
2000).
No período de pré-implantação, o embrião é bastante resistente à teratogênese,
encontra-se com células totipotentes em divisão, sem que haja acréscimo citoplasmático
(FRITZ; GIESE, 1990; ALMEIDA et al., 2000). Após a implantação, o embrião inicia o
21
período de organogênese, que é caracterizado por uma intensa proliferação e migração
celular, remodelamento tissular e formação rudimentar das estruturas do corpo. É o período de
maior susceptibilidade à ação de agentes teratogênicos e embriofetotóxicos, no qual o maior
número de malformações pode ser induzido (BRENT et al., 1993). O período fetal tem início
com o fim da organogênese e é caracterizado por diferenciação e crescimento tissular,
maturação fisiológica dos diferentes sistemas e crescimento ponderal do feto (FRITZ; GIESE,
1990). A sensibilidade às malformações anatômicas durante essa fase é baixa, porém a
exposição aos agentes químicos pode produzir morte celular, inibição da diferenciação e da
divisão celular, interferência na formação dos sistemas nervoso, endócrino e imunológico,
promovendo desordens funcionais e de comportamento (AROUX, 1997).
Há várias plantas que tiveram sua toxicidade reprodutiva comprovada através de
estudos em roedores. Das sementes de Momordica charantia L. foram isoladas glicoproteínas
(alfa e beta- momorcharina) com ação abortiva em camundongos e ação inibitória sobre a
multiplicação celular no endométrio e miométrio (CHAN et al., 1985). Ruta graveolens L.,
conhecida como arruda, demonstrou uma atividade antifertilidade para as suas partes aéreas
moídas e seus extratos aquosos (GANDHI et al., 1991). A administração de diferentes
extratos de Jatropha curcas L. em ratas prenhes acarretou reabsorção fetal nas mesmas
(GOONASEKERA et al., 1995). De Peumus boldus Mol., o boldo-do-chile, as ações abortiva
e teratogênica foram evidenciadas para o extrato hidroalcóolico das suas folhas secas e
também para o alcalóide boldina, considerado um dos seus principais componentes
(ALMEIDA et al., 2000).
Avaliar a possível toxicidade reprodutiva da resina de Aloe ferox Miller em ratas
Wistar prenhes e em seus conceptos torna-se relevante, uma vez que a planta é
tradicionalmente usada no tratamento da constipação intestinal (HALLER, 1990;
BRUNETON, 1995). Considerando-se que a constipação é um problema digestivo bastante
freqüente no período gestacional (CAPELHUCNICK et al., 2008) e que muitas gestantes
fazem uso de plantas medicinais como importante forma de terapia (WEIER, BEAL, 2004), o
estudo de segurança de uso dessa planta é um requisito importante para os testes de avaliação
de um provável fitomedicamento.
22
3. Objetivos
23
3.0. Objetivos
3.1. Objetivo Geral
Avaliar a toxicidade reprodutiva pré-clínica da resina de Aloe ferox Miller sobre a

fertilidade, prenhez e desenvolvimento pós-natal da prole de ratas Wistar.
3.2. Objetivos Específicos
• Identificar a aloína presente na resina por cromatografia em camada delgada e

quantificar os derivados hidroxiantracênicos, expressos como aloína, por
espectrofotometria na luz ultravioleta.
• Analisar o efeito do tratamento, por via oral, da resina de Aloe ferox sobre os períodos
de pré-implantação e organogênese da prenhez de ratas Wistar e verificar as
consequências desse tratamento nos conceptos.
• Investigar o efeito da administração subcrônica, por via oral, da resina de Aloe ferox
durante toda a prenhez de ratas Wistar e sobre o desenvolvimento comportamental da
prole.
24
4. Artigo
Artigo submetido ao Journal of Ethnopharmacology
25
Reproductive toxicological study of Aloe ferox Miller (Liliaceae) resin in
female Wistar rats
H. M. L. Maranhãoa, V. R. Leitea, C. F. B. Vasconcelosa, I. M. A. Costab, H. S. Xaviera,
A. G. Wanderleya, b *
a
Department of Pharmaceutical Sciences, Federal University of Pernambuco, Recife, 50740-521, Brazil.
b
Department of Physiology and Pharmacology, Federal University of Pernambuco, Recife, 50760-901, Brazil.
*
Corresponding author. Almir Gonçalves Wanderley, Departamento de Fisiologia e Farmacologia, CCB,
Universidade Federal de Pernambuco, Av. Prof. Moraes Rego, s/n, CEP: 50670-901- Cidade Universitária,
Recife, PE, Brasil - Email address: almirgw@globo.com
_____________________________________________________________________________
Abstract
Ethnopharmacological relevance: Aloe ferox Miller resin in powder form has been used in
folk medicine as stomachic, emmenagogue, anthelmintic and laxative. Aim of the study: To
identify and quantify the aloin present in the resin and evaluate the effects of Aloe ferox on the
fertility, pregnancy and offspring postnatal development of female Wistar rats. Materials and
Methods: The resin in powder form was dissolved in vehicle (glycerin solution 40% - v/v).
The study was conducted in three phases, each one containing 5 groups of pregnant rats (n =
8-9/group), in a total of 15 groups of rats randomly formed. The groups 1 and 2 (control
groups) received distilled water and vehicle, respectively, while the others were treated orally
with A. ferox at doses 0.1, 0.5 and 2.5 g/kg. In the first phase, the treatment was administered
from 1st to 6th day (preimplantation period - PP) and the second, from 7th to 14th day
(organogenesis period - OP). On day 20th pregnancy, the rats were laparotomized for
evaluation of reproductive parameters. In the last phase, the pregnant rats were treated orally
with the same doses during whole pregnancy and maternal and offspring parameters were
evaluated. Results: the aloin (Rf 0.35) was identified and the percentage of
hydroxyanthracene derivates expressed as aloin was 33.5%. During the PP there was
reduction in the maternal body mass gain at all doses, with significance level was set at p <
0.05. Reductions were also observed in some fetal and maternal parameters at doses 0.5 and
2.5 g/kg when compared with both control groups. In the OP, the reduction in the maternal
body mass gain was observed only at the highest. However, other parameters were changed at
all doses evaluated, including the group that received glycerin when compared with water
group. The maternal reproductive parameters during whole pregnancy showed increases only
in the pups body mass and length on days 7th and 21th postnatal life, respectively, at the
highest dose. The presence of a death fetus in this dose suggests a possible toxic effect of this
plant when administered to pregnant rats. Conclusion: The neurological and behavioral
development of offspring was not influenced by changes in maternal and fetal parameters
verified in the treatment with A. ferox. Therefore, further studies should be conducted to
ensure the use of the plant during human gestation.
Keywords: .Aloe ferox Miller, Aloin, Toxicology; Pregnancy, Offspring.
26
1. Introduction
Genus Aloe plant has been traditionally applied for the medicinal practice over
thousands of years in many cultures of the world. There are about 300 Aloe species accepted
and used for various medical, cosmetic and nutraceutical purposes (Ni et al., 2004). Aloe ferox
Miller (Liliaceae) is native from South Africa (Zahn et al., 2007). In Brazil, the plant is
popularly known as babosa and the largest producers are in São Paulo (mainly Jarinu city),
Santa Catarina and Northeast region. This region has the best conditions for planting
(Magalhães, 2005). It consists of arborescent perennial shrub that grows in hot and dry
climates. It is made of elongated and pointed leaves and it is separated in two parts: gel and
latex (Berti, 2008). The gel is leave pulp, appears to be clear and mucilaginous, obtained from
parenchymal tissue of inner leave (Tyler, 1994). Chlorophyll parenchyma extract is bitter
yellow latex, commonly termed aloe juice. It is produced in mesophyll excretory cells located
under leaf epidermis (Vogler; Ernst, 1999). Aloe ferox resin is the solid residue obtained by
evaporating latex which drains from the transversally cut leaves (Bruneton, 1995).
In folk medicine, the resin in powder form is used as stomachic, emmenagogue,
anthelmintic and laxative (Balbach, 1986). Various pharmacological and therapeutic activities
of Aloe have been studied and include anti-arthritic (Newcall et al., 1996), anti-inflammatory,
anti-bacterial, anti-viral, laxative, protection against radiation and immunostimulation effects
(Ni et al., 2004); antidiabetic influence (Beppu et al., 2006) and antitumorigenic actions
(Shimpo et al., 2006).
The components of Aloe ferox are primarily glycoproteins, polysaccharides, low–
molecular-weight substances and anthraquinones. Polysaccharides are largely glucomannans.
Galactose and galactouronic acid polymers are also frequently found. Low-molecular-weight
substances are reported, such as aloesin, sitosterol, diethylhexylphthalate, vitamins and beta-
carotene. In addition to these, aloe-specific anthraquinones are also present and include aloe-
emodin, aloin, barbaloin and isobarbaloin (Choi; Chun, 2003). Chlorophyll parenchyma
extract consist of anthraquinone glycosides, mainly aloin. Aloin was characterized as 10-β-D-
glucopyranosyl-1,8-dihydroxy-3-hydroxymethyl-9(10-H)-anthracenone (Hay; Haynes, 1956;
Conner et al., 1989; Yuko et al., 1990). It is a C-glycoside aloe-emodin that is a mixture of
two diastereoisomers: aloin A (also called only aloin) and aloin B (also called barbaloin)
(Haynes, 1960; Tyler, 1994).
27
Although its use as laxative is widely spread, a reproductive toxicological study of this
plant is necessary because many pregnant women have constipation in the pregnancy
(Capelhucnick et al., 2008) and they use medicinal plants as important form of therapy
(Weier; Beal, 2004). Therefore, this study was conducted to investigate the effects of the oral
administration of Aloe ferox resin in pregnant rats Wistar, during preimplantation and
organogenesis periods, whole pregnancy and their offspring postnatal development.
2. Materials and methods

2.1. Plant material
Aloe ferox resin used in the current study was a commercial preparation produced and
kindly donated by Odaly Soares Laboratory, Ceará, Brazil. Aloe ferox resin is soluble in
alkalis, concentrated acetic acid, absolute alcohol, glycerin and it is partially soluble in water
(Brazilian Pharmacopoeia, 1988). The glycerin was the solvent that showed better solubility
and compatibility with in vivo experiments. In the laboratory, the resin was grinded down in
automatic processor and solubilized in glycerin a.p (Vetec®) 40% (v/v).
2.2. Animals
Pregnant Wistar rats (Rattus norvegicus), aged 3 months and weighing 200 – 240 g,
were obtained from the Department of Physiology and Pharmacology at the Federal
University of Pernambuco (UFPE). They were maintained in standard environmental
conditions (22 ± 2ºC, 12:12h dark/light cycle). Water and industrialized dry food (Labina®,
Purina, Brazil) were available ad libitum. The experimental protocol was approved by the
Animal Experimentation Ethic Committee of UFPE (Process nº 23076.007267/2009-96), in
accordance with the National Institute of Health Guide for the Care and Use of Laboratory
Animals.
2.3. Experiments
2.3.1. Identification of aloin by thin layer chromatography
To 0.25 g of the powdered sample added 20 mL of methanol and 10 µL of this

solution were applied silica gel plates (Merck-Alemanha art. 105554). Developed over a bath
using a mixture of water-methanol-ethyl acetate (13:17:100 v/v). Allowed the plate to dry in
28
air, sprayed with 100 g/L solution of potassium hydroxide in methanol, the retention factor
(Rf) was obtained and the plate was examined in ultraviolet light at 365 nm. It was used an
aloin solution as reference standard (European Pharmacopoeia, 1997).
2.3.2. Quantification of hydroxyanthracene derivates by spectrophotometry
The extractive solution was obtained by heating 0.4 g of powdered sample with
established volume of methanol, water, ferric chloride (600 g/L) and hydrochloric acid (a.p.)
solutions. The heating occurred in a water-bath under a reflux condenser for 4h. Allowed to
cool, transferred the solution to a separating funnel, ether was added, discarded the aqueous
phase and then was obtained an UV absorption spectrum from the organic phase, in alkaline
medium, at the wavelength range from 200 to 600 nm (50 Uv-Vis Spectrophotometer). The
specific absorbance of aloe-emodin, which is obtained by oxidation of aloin, is 512 nm. The
methanol was used as the compensation liquid. The percentage of hydroxyanthracene
derivates expressed as aloin was calculated from the expression (European Pharmacopoeia,
1997):
A x 19.6/ m
A = absorbance at 512 nm
m = mass of the substance examined in grams
2.3.3. Experimental protocol
Observation of the presence of sperm in the vaginal smear was used to establish the
1st day of pregnancy. The study was conducted in three phases, each one containing five
groups of pregnant rats randomly formed (n = 8-9/group), in a total of 15 groups. The groups
1 and 2 (control groups) received distilled water and glycerin solution 40% (v/v) (1 mL, p.o.),
respectively, while the others were treated orally with A. ferox at doses 0.1, 0.5 and 2.5 g/kg
in glycerin 40% (v/v). Aloe ferox doses were based on a previous one-year toxicity study of
Aloe arborescens Miller in rats, which used diets containing until 2.7 g/kg of Aloe (Matsuda
et al., 2008). In the first phase, the treatment was administered from 1st to 6th day
(preimplantation period), the second, from 7th to 14th day (organogenesis period) and the
third, from 1st to 21th day (whole pregnancy). During pregnancy, the rats were evaluated for
survival, altered appearance and any clinical signs of toxicity, such as changes in food and
water intake, piloerection, diarrhea, change of locomotor activity and vaginal bleeding.
29
Parts 1 and 2: in the preimplantation and organogenesis periods, the maternal weight
was recorded on days 1, 7, 14 and 20. On the 20th day of pregnancy, the rats were
anesthetized with Pentobarbital (35 mg/kg i.p.), laparotomized and their uterine horns
removed. The number of implants, resorption, live and death fetuses were then recorded.
Ovaries and placentae were weighed and the corpora lutea were counted. The fetuses were
weighed, measured and observed for any visible abnormalities. From these data, the
implantation index (total number of implantation sites/total number of corpora lutea × 100),
the preimplantation loss rate (number of corpora lutea - number of implantations/number of
corpora lutea × 100) and the postimplantation loss rate (number of implantations - number of
live fetuses/number of implantations × 100) were calculated (Costa-Silva et al., 2007).
Part 3: during whole pregnancy, the maternal body weight was also recorded on days
1, 7, 14 and 21. Pregnant rats were allowed to complete their pregnancy to term. After birth,
macroscopic aspects were observed in order to detect possible fetal malformations and the
following reproductive parameters were analyzed: offspring/dam ratio, days of pregnancy,
pregnancy index (% pregnant rats with all live pups), viability index (number of live pups on
day 4 of postnatal life/number of live offspring born × 100) and lactation index (number of
live pups on day 21 of postnatal life / number of live pups on day 4 of postnatal life × 100).
The pups body weight and length were determined on days 1, 4, 7, 14 and 21 of postnatal life
(Silva et al., 2009).
After birth, one-third offspring from control and treated groups (0.1, 0.5 and 2.5 g/kg)
was analyzed to the following behavioral parameters: postural reflex, eye-opening day, adult
walking day and spontaneous ambulation. The pups postural reflexes were evaluated on 1st
and 7th days of life. The pups were put on plane surface, in supine position, and the righting
reflex was measured in seconds. The eye-opening day was determined by observation of
partial displacement of the palpebral fissure at least one eye. It was considered adult walking
day when pups ambulated without dragging hind feet and without touching belly on the floor.
The spontaneous ambulation was determined on 20th day postnatal life using a square
measuring 30 x 30 cm and divided in nine equal spaces. The pup was put on the central part
and during two minutes was recorded the number of invaded square when it put at least three
feet on this area (Costa-Silva et al., 2006).
2.4. Statistical analysis
30
Values were expressed as mean ± standard error of mean (SEM) or as median. The
differences between treated and control groups were analyzed by variance analysis
(ANOVA), followed, when necessary, by the Tukey test. The implantation index, pre- and
postimplantation loss rates were analyzed using the Kruskal-Wallis test followed by the Dunn
test, when necessary. The pregnancy, viability and lactation indexes were analyzed using
Fisher’s exact test. The significance level was set at p < 0.05. Statistical analyses were
performed with the aid of the computer program GraphPad Prism 5.0.
3. Results
The chromatogram obtained with the solution test showed in the central part a zone of
yellow fluorescence (aloin – Rf 0.35) similar in position to the zone corresponding to aloin in
the chromatogram obtained with the reference solution. The percentage content of
hydroxyanthracene derivates expressed as aloin was 33.5% and its absorption spectrum is
showed in Figure 1.
During the treatment period with A. ferox no deaths of pregnant rats was registered
and any clinical signs of toxicity, such as piloerection, change of locomotor activity and
vaginal bleeding were observed. A mild diarrhea was recorded mainly at dose 2.5 g/kg.
In the preimplantation period, no statistical difference between the groups treated with
glycerin and water was observed. However, significant reductions were found in maternal
body mass gain in this period (at all doses), in the mass and length of the fetuses and absolute
mass of the placenta (at dose 2.5 g/kg) when compared to both control groups. The relative
mass of the fetuses (at dose 0.5 g/kg) and the relative mass of the placenta (at doses 0.5 g/kg
and 2.5 g/kg) showed also significant reductions when compared with glycerin group. At dose
0.5 g/kg, the reduction in length of the fetuses was significant in relation to water group (table
1).
In the organogenesis period, significant reductions were observed in the maternal body
mass gain in this period (at dose 2.5 g/kg) when compared with glycerin group. At dose 0.5
g/kg, there was an increase in the absolute mass of fetuses when compared with water group.
The absolute mass of the placenta (at dose 0.1 g/kg), the relative mass of the placenta (at all
doses including glycerin group) and the relative mass of the ovary (at dose 2.5 g/kg) were
statistically lower than group treated with water (table 2).
31
In both pregnancy studies, no death fetuses or fetuses with external malformations
were observed. No statistically significant differences were found in the reproductive
variables: offspring/dam relationship, ovary absolute mass and number of corpora lutea. There
were also no significant differences in implantation index, pre and postimplantation losses
rates between the groups treated and their respective controls (tables 1 and 2).
The maternal reproductive parameters during whole pregnancy showed increases only
in the pups body mass and length on days 7th and 21th postnatal life, respectively, at the
highest dose when compared with glycerin group. Only one death fetus was found at dose 2.5
g/kg (table 3). There was increase in the food intake at dose 0.5 g/kg when compared with
glycerin group (Figure 2), but no significant difference was found in the maternal body mass
gain in this period (Figure 3). An increase in the water intake was observed at doses 0.5 and
2.5 g/kg when compared with both control groups and at dose 0.1 g/kg, when compared only
glycerin control (Figure 4). After birth of offspring, it was not observed external abnormalities
and their behavioral parameters were not changed when compared with control groups (table
4).
4. Discussion
The aloin (Rf 0.30-0.35) gives yellow fluorescence when examined in UV light at 365
nm (European pharmacopoeia, 1997) and the A. ferox resin contains not less than 18% of
hydroxyanthracene derivates expressed as aloin (European Pharmacopoeia, 1997) and it can
reach until 40% (Costa, 1975). It was responsible for mild diarrhea observed mainly in rats
treated with highest dose and this explains the increase in the water intake.
After oral administration, the aloin is not absorbed in the upper intestine, it is
hydrolyzed in the colon by Eubacterium sp. and then reduced to the active metabolite aloe-
emodin anthrone. It stimulates colonic motility, augmenting propulsion and accelerating
colonic transit, which reduces fluid absorption from the fecal mass (Bradley, 1992; Akao et
al., 1996). It also increases paracellular permeability across the colonic mucosa probably
owing to an inhibition of Na+-K+-ATPase or to an inhibition of chloride channels, which
results in an increase in the water content in the large intestine (Witte, 1993).
The glycerin used as solvent for A. ferox resin is low toxicity and the LD50 for rats is
12.6 g/kg (p.o.). Even taking laxative action (Portantiolo, 2007), it did not cause diarrhea in
the animals treated only with glycerin 40% (v/v) solution and nor affected the reproductive
parameters of pregnant rats.
32
This study showed that the treatment with Aloe ferox can change some maternal and
fetal parameters during the preimplantation and organogenesis periods, but it did not cause
deaths of pregnant rats and fetal malformations. In the preimplantation period, the embryo is a
mass of undifferentiated cells in mitotic division, because of this it is quite resistant to
teratogenesis (Hodgen; Itskovits, 1988; Almeida et al., 2000). The organogenesis period is
characterized by intense cellular proliferation and migration, tissue remodeling and body
structure formation (Brent et al., 1993). The type of malformation depends on the
evolutionary stage of the embryo and the affinity of the teratogenic agent by the embryonic
tissue (Chang et al., 2002). As the pre and postimplantation losses in the treated groups were
not significantly differents from the control groups, it can be assumed that the number of
blastocysts implanted and embryonic development were similar between groups.
The treatment during whole pregnancy did not interfere in the offspring normal
development. The behavioral parameters analyzed in this study were used to verify possible
deleterious actions of A. ferox on behavioral and neurological development of the offspring
(Carlini et al., 1988). The presence of one death fetus suggests a possible abortive effect of A.
ferox at dose 2.5 g/kg. Aloe arborescens was verified that it can stimulate uterine smooth
muscle contraction and can cause abortion in pregnant woman (Belew, 1999). The no
observed adverse effect level (NOAEL) for A. arborescens was estimated to be 109.7
mg/kg/day in females rats (Matsuda et al., 2008), but in this study the NOAEL was lower than
100 mg/kg/day, since adverse effects already appear in this dose.
In conclusion, the parameters changed by treatment with A. ferox did not cause deaths
of pregnant rats, fetal malformations and nor compromised the offspring normal development.
The oral administration of A. ferox could induce some maternal toxicity mainly at the highest
dose due to possible abortive effect shown in this dose. This suggests that further studies
should be conducted to ensure the use of the plant during human gestation.
Acknowledgements
The authors would like to thank Rejane de Souza e Silva and Zenira Cosme Xavier for
technical assistance and to Odaly Soares Laboratory for providing A. ferox resin.
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37
Figure 1: Absorption spectrum of hydroxyanthracene derivates at the wavelength range from 200- 600 nm.
38
25
c Water Control
Food intake g/day/rat

c Gly Control
20
c
Af 0.1 g/kg
15 Af 0.5 g/kg
Af 2.5 g/kg
10
0
0 7 14 21
Days
Figure 2: Maternal food intake (g/day/rat) of Aloe ferox (Af, 0.1, 0.5 and 2.5 g/kg) during whole
pregnancy. The values were expressed as mean ± S.E.M. (n=8/group).c Statistically different of the
glycerin control group (ANOVA, followed by Tukey test, p < 0.05).
125
Maternal body mass gain (g)
Water Control
100 Gly Control
Af 0.1 g/kg
75 Af 0.5 g/kg
Af 2.5 g/kg
50
25
0
0 7 14 21
Days
Figure 3: Maternal body mass gain (g) of Aloe ferox (Af, 0.1, 0.5 and 2.5 g/kg) during whole
pregnancy. The values were expressed as mean ± S.E.M. (n=8/group) (ANOVA, followed by Tukey
test, p < 0.05).
39
60
a Water Control
Water intake mL/day/rat

a
a Gly Control
a c
40
a
c Af 0.1 g/kg
a
c Af 0.5 g/kg
Af 2.5 g/kg
20
0
0 7 14 21
Days
Figure 4: Maternal water intake (mL/ day/ rat) of Aloe ferox (Af, 0.1, 0.5 and 2.5 g/kg) during whole
pregnancy. The values were expressed as mean ± S.E.M. (n=8/group) (ANOVA, followed by Tukey
test, p < 0.05). a Statistically different of the water and glycerin groups; cstatistically different of the
glycerin group.
40
Table 1: Reproductive parameters of pregnant Wistar rats treated with Aloe ferox Miller during the preimplantation period (1st to 6th day).
Parameters Control (H2O) Control (Gly) 0.1 g/kg 0.5 g/kg 2.5 g/kg
Pregnant rats 09 09 09 09 09
Mass gain in the pregnancy period (g)1 107.1 ± 7.14 90.20 ± 4.34 83.80 ± 7.47 94.58 ± 4.55 87.87 ± 6.77
Mass gain in the preimplantation period (g)1 18.11 ± 0.88 13,79 ± 1,87 3.78 ± 1.54a 2.35 ± 1.66a 3.09 ± 2.05a
Number of live fetuses 81 101 90 98 98
Number of death fetuses 0 0 0 0 0
Offspring/dam relationship1 11.43 ± 0.37 11.22 ± 0.22 10.00 ± 1.24 12.25 ± 0.53 10.89 ± 1.01
Absolute mass of the fetuses (g)1 2.44 ± 0.03 2.47 ± 0.02 2.43 ± 0.06 2.40 ± 0.02 1.98 ± 0.07a
Relative mass of the fetuses (g/100g)1 0.79 ± 0.03 0.82 ± 0.01 0.78 ± 0.02 0.74 ± 0.01c 0.62 ± 0.02a
Length of the fetuses (cm)1 2.91 ± 0.01 2.86 ± 0.02 2.80 ± 0.03 2.72 ± 0.03b 2.48 ± 0.06a
Absolute mass of the placentae (g)1 0.50 ± 0.01 0.49 ± 0.01 0.48 ± 0.01 0.48 ± 0.01 0.43 ± 0.01a
Relative mass of the placentae (g/100g)1 0.160 ± 0.010 0.166 ± 0.003 0.155 ± 0.003 0.147 ± 0.002c 0.136 ± 0.003c
Absolute mass of the ovary (mg)1 42.21 ± 4.24 39.21 ± 2.87 50.99 ± 3.13 42.84 ± 3.46 44.77 ± 5.03
Relative mass of the ovary (mg/100g)1 13.73 ± 1.31 13.08 ± 0.92 16.53 ± 0.98 13.29 ± 0.98 14.48 ± 1.61
Number of implantation 88 109 96 102 102
Number of viable implantations 81 101 90 98 98
Number of resorption 07 08 06 04 04
Number of corpora lutea1 12.25 ± 0.36 13.00 ± 0.47 11.33 ± 1.12 13.25 ± 0.65 11.78 ± 1.10
Implantation index (%)2 100 92.31 100 96.67 100
Preimplantation loss (%)2 0 15.38 0 3.84 0
Postimplantation loss (%)2 7.69 8.33 0 3.57 0
The values were expressed as mean ± S.E.M1 or median2. Statistically different of the a water and glycerin control groups, b water control group and c glycerin control group
(ANOVA, followed by Tukey test, p < 0.05).
41
Table 2: Reproductive parameters of pregnant Wistar rats treated with Aloe ferox Miller during organogenesis period (7th to 14th day).
Mass gain in the pregnancy period (g)1 86.71 ± 5.88 101.90 ± 5.13 96.04 ± 4.14 96.56 ± 7.95 81.70 ± 4.79
Mass gain in the organogenesis period (g)1 20.57 ± 2.15 23.96 ± 1.60 21.62 ± 2.16 18.64 ± 3.26 10.83 ± 2.21c
Offspring/dam relationship1 10.14 ± 0.74 10.78 ± 0.62 11.22 ± 0.40 10.00 ± 1.24 10.50 ± 0.71
Absolute mass of the fetuses (g)1 2.35 ± 0.06 2.48 ± 0.03 2.43 ± 0.02 2.56 ± 0.06b 2.38 ± 0.02
Relative mass of the fetuses (g/100g)1 0.88 ± 0.02 0.82 ± 0.02 0.82 ± 0.01 0.83 ± 0.02 0.83 ± 0.01
Length of the fetuses (cm)1 2.77 ± 0.02 2.88 ± 0.03 2.87 ± 0.02 2.86 ± 0.03 2.86 ± 0.02
Absolute mass of the placentae (g)1 0.46 ± 0.01 0.44 ± 0.01 0.41 ± 0.01b 0.45 ± 0.01 0.43 ± 0.01
Relative mass of the placentae (g/100g)1 0.178 ± 0.01 0.139 ± 0.002b 0.139 ± 0.002b 0.150 ± 0.004b 0.149 ± 0.002b
Absolute mass of the ovary (mg)1 47.15 ± 2.06 41.74 ± 4.44 45.15 ± 3.19 44.87 ± 3.25 41.63 ± 4.62
Relative mass of the ovary (mg/100g)1 17.83 ± 0.95 13.48 ± 1.41 15.22 ± 0.99 15.41 ± 1.07 12.77 ± 1.37b
Number of implantation 74 101 107 100 94
Number of viable implantations 71 97 101 90 84
Number of resorption 03 04 06 10 10
Number of corpora lutea1 12.00 ± 0.76 11.67 ± 0.74 12.56 ± 0.50 12.22 ± 0.59 13.00 ± 1.05
Implantation index (%)2 90 100 100 93,75 96,16
Preimplantation loss (%)2 10 0 0 12,50 7,69
Postimplantation loss (%)2 0 0 0 6.66 4.16
The values were expressed as mean ± S.E.M1 or median2. Statistically different of the b water control group and c glycerin control group (ANOVA, followed by Tukey test, p <
0.05).
42
Table 3: Reproductive parameters of pregnant Wistar rats treated with Aloe ferox Miller during whole pregnancy (1st to 21th day).
Parameters Control (H2O) Control (Gly) Af 0.1 g/kg Af 0.5 g/kg Af 2.5 g/kg
Mass gain in the pregnancy period (g) 92.19 ± 7.34 81.97 ± 3.15 89.60 ± 10.21 93.47 ± 6.29 85.76 ± 9.21
Days of pregnancy (days) 21.63 ± 0.26 21.33 ± 0.33 21.20 ± 0.20 21.33 ± 0.21 21.20 ± 0.20
Offspring/dam relationship 9.11 ± 0.44 8.75 ± 1.05 8.50 ± 1.45 8.87 ± 0.72 7.87 ± 0.95
Pregnancy index (%) 100 100 100 100 87.50
Viability index (%) 100 98.63 98.53 100 100
Lactation index (%) 100 100 100 100 100
Pups body mass 1st day (g) 5.61 ± 0.11 5.73 ± 0.12 5.82 ± 0.10 6.04 ± 0.11 5.93 ± 0.09
Pups body mass 4th day (g) 8.07 ± 0.35 7.94 ± 0.17 7.89 ± 0.18 7.92 ± 0.22 8.73 ± 0.16
Pups body mass 7th day (g) 11.09 ± 0.35 11.44 ± 0.27 10.96 ± 0.34 12.01 ± 0.34 13.23 ± 0.27c
Length of the pups 1st day (cm) 4.58 ± 0.11 4.26 ± 0.06 4.28 ± 0.04 4.31 ± 0.05 4.29 ± 0.05
Length of the pups 4th day (cm) 5.51 ± 0.16 5.27 ± 0.05 5.23 ± 0.03 5.24 ± 0.05 5.46 ± 0.03
Length of the pups 21th day (cm) 9.00 ± 0.06 8.48 ± 0.15 8.77 ± 0.08 8.87 ± 0.09 9.19 ± 0.08c
The values were expressed as mean ± S.E.M. Statistically different of the c glycerin control group (ANOVA, followed by Tukey test, p < 0.05).
43
Table 4: Offspring behavioral parameters of the female Wistar rats treated with A. ferox Miller during whole pregnancy.
n = 25 n = 24 n = 23 n = 24 n = 21
Postural reflexes 1st day (s) 9.87 ± 0.65 9.60 ± 0.82 14.47 ± 2.58 15.70 ± 2.75 10.56 ± 1.34
Postural reflexes 7th day (s) 1.63 ± 0.07 1.70 ± 0.26 1.58 ± 0.21 1.60 ± 0.21 1.68 ± 0.19
Eye-opening Day 15.13 ± 0.23 15.64 ± 0.62 15.29 ± 0.25 15.95 ± 0.13 15.50 ± 0.20
Adult walking Day 14.75 ± 0.25 14.60 ± 0.26 15.25 ± 0.17 15.30 ± 0.15 15.31 ± 0.17
Spontaneous ambulation (number 16.50 ± 0.78 12.60 ± 0.92 13.06 ± 1.47 15.45 ± 1.73 18.75 ± 2.00
of invaded square)
The values were expressed as mean ± S.E.M.
44
5. Conclusão
45
5.0. Conclusão
Os resultados obtidos permitem constatar os seguintes aspectos:
- A identificação da aloína presente na resina de Aloe ferox como também a porcentagem de

derivados hidroxiantracênicos expressos como aloína condizem com os dados da literatura.
- O efeito laxante, observado principalmente no tratamento com a maior dose, deve-se à

presença de glicosídeos antraquinônicos na resina de A. ferox, justificando seu uso na
medicina popular.
- A utilização da solução de glicerina 40% (v/v) como solvente da resina pulverizada de A.

ferox não interferiu nos parâmetros reprodutivos durante os períodos de pré-implantação,
organogênese e toda a prenhez das ratas Wistar como também não comprometeu o
desenvolvimento pós-natal de sua prole.
- A administração oral da resina de A. ferox nas ratas prenhes não evidenciou sinais clínicos
de toxicidade, não ocasionou a sua morte, não interferiu na progressão da prenhez das
mesmas e os parâmetros reprodutivos que foram alterados pelo tratamento, não
comprometeram o desenvolvimento normal da prole.
- A presença de um natimorto, na dose de 2,5 g/kg, sugere um possível efeito tóxico de A.

ferox quando administrado em ratas prenhes. Porém, estudos posteriores são necessários para
garantir o uso dessa planta durante a gestação humana
46
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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO

CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA REPRODUTIVA DA RESINA DE Aloe

HÉLIDA MARIA DE LIMA MARANHÃO

HÉLIDA MARIA DE LIMA MARANHÃO

AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA REPRODUTIVA DA RESINA DE Aloe

Dissertação submetida ao Programa de Pós-

Orientador: Prof. Dr. Almir Gonçalves Wanderley

PRÓ-REITOR PARA ASSUNTOS DE PESQUISA E PÓS-GRADUAÇÃO

DIRETOR DO CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

VICE-DIRETOR DO CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

CHEFE DO DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS

VICE-CHEFE DO DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS

COORDENADOR DO PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS

VICE-COORDENADORA DO PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM

Ao laboratório de Farmacologia e Toxicologia Pré-clínica de produtos bioativos, em especial

a.p.: Active principle

Figura 3: Principais derivados hidroxiantracênicos presentes em Aloe ferox (SIMÕES et al.,

Figure 1: Absorption spectrum of hydroxyanthracene derivates at the wavelength range from

Palavras-chave: Aloe ferox Miller, Aloína, Toxicologia; Prenhez, Prole.

Keywords: .Aloe ferox Miller, Aloin, Toxicology; Pregnancy, Offspring.

A utilização de plantas com fins medicinais para o tratamento, a cura e a prevenção de

2.1. Aloe ferox Miller

2.1.1. Aspectos botânicos

Aloe ferox Miller, pertencente à família Liliaceae, é originária da Província do Cabo

Aloe ferox é composta principalmente por glicoproteínas, polissacarídeos, substâncias

Aloe-emodina Glicosídeos de aloe-emodina (aloína)

2.1.3. Etnofarmacologia e Estudos farmacológicos

Dados etnofarmacológicos descrevem o uso da resina de Aloe ferox na forma de pó

2.2. Plantas medicinais e toxicidade

2.3. Toxicologia pré-clínica de plantas medicinais

No Brasil, o estudo toxicológico pré-clínico de plantas medicinais é regulamentado

2.3.1. Toxicologia do desenvolvimento: teratologia e toxicologia da reprodução

A toxicologia do desenvolvimento engloba a teratologia e a toxicologia da reprodução.

3.1. Objetivo Geral

Avaliar a toxicidade reprodutiva pré-clínica da resina de Aloe ferox Miller sobre a

3.2. Objetivos Específicos

• Identificar a aloína presente na resina por cromatografia em camada delgada e

Keywords: .Aloe ferox Miller, Aloin, Toxicology; Pregnancy, Offspring.

2. Materials and methods

To 0.25 g of the powdered sample added 20 mL of methanol and 10 µL of this

2.3.2. Quantification of hydroxyanthracene derivates by spectrophotometry

2.3.3. Experimental protocol

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Water intake mL/day/rat

Os resultados obtidos permitem constatar os seguintes aspectos:

- A identificação da aloína presente na resina de Aloe ferox como também a porcentagem de

- O efeito laxante, observado principalmente no tratamento com a maior dose, deve-se à

- A utilização da solução de glicerina 40% (v/v) como solvente da resina pulverizada de A.

- A presença de um natimorto, na dose de 2,5 g/kg, sugere um possível efeito tóxico de A.

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