ANEXO - REGULAMENTO TCNICO PARA PRODUO E CONTROLE DE QUALIDADE DA VACINA CONTRA A BRUCELOSE E ANTGENOS PARA DIAGNSTICO DA BRUCELOSE 1.

PRODUO E CONTROLE DE QUALIDADE DA VACINA 1.1. Toda partida de vacina contra Brucelose e de antgeno para diagnstico da Brucelose dever ser submetida ao controle previsto no presente regulamento. 1.2. A vacina, utilizada para o controle da brucelose bovina e bubalina obtida a partir de culturas de referncia certificadas de Brucella abortus B19, cultivadas em tanques de fermentao ou garrafas tipo Roux, padronizada conforme normas estabelecidas pelo MAPA, comercializada na forma viva, liofilizada, acompanhada do respectivo diluente e de uso veterinrio exclusivo. 1.3. Outras cepas podero ser utilizadas para a fabricao de vacinas contra a brucelose, desde que aprovadas pelo MAPA. As respectivas especificaes devem ser objeto de regulamentao prpria. 1.4 SEMENTES 1.4.1 SEMENTE DE REFERNCIA CERTIFICADA (SRC) Cultura de Brucella abortus B19 proveniente de uma coleo de culturas, reconhecida pelo MAPA, acompanhada de certificado, adequadamente caracterizada, de composio uniforme, comprovada segurana e eficcia na administrao parenteral a bezerras em idade apropriada, mantida na forma liofilizada e refrigerada entre 2C e 8C. 1.4.2 SEMENTE DE RESERVA (SR) Cultura lisa de Brucella abortus B19 obtida a partir da reativao e repique em meio slido de uma SRC, de composio uniforme, mantida na forma liofilizada e refrigerada entre 2C e 8C ou em suspenso congelada a uma temperatura igual ou inferior a - 30C. 1.4.3 SEMENTE DE TRABALHO (ST) Cultura lisa de Brucella abortus B19 obtida a partir da reativao e repique de uma SR. 1.4.4 INCULO Cultura lisa de Brucella abortus B19 obtida a partir da reativao e repique de uma ST. 1.5 PRODUO E CONTROLE A produo e o controle das partidas de vacina devem ser conduzidos conforme o relatrio tcnico do registro do produto, obedecidas as determinaes deste regulamento, sendo todas as suas etapas registradas de forma a permitir a rastreabilidade das informaes. O controle da vacina deve ser realizado segundo ensaios provenientes de referncias normalizadas. Eventuais adaptaes, modificaes ou substituies devem ser devidamente validadas e aprovadas pelo MAPA. 1.6 CONTROLE DO PRODUTO FINAL As partidas da vacina, constitudas por frao liofilizada e respectivo diluente, devidamente aprovadas no controle de qualidade dos estabelecimentos fabricantes sero acondicionadas em embalagens comerciais e submetidas ao controle oficial. Os ensaios sero realizados de acordo com o MANUAL DE PROCEDIMENTOS E TCNICAS DE CONTROLE DE QUALIDADE DE VACINAS CONTRA A BRUCELOSE E ANTGENOS PARA DIAGNSTICO DA BRUCELOSE DO MAPA. 1.6.1 PUREZA 1.6.1.1 PESQUISA DE CONTAMINANTES VIVEIS A vacina deve estar livre de contaminao e apresentar apenas o crescimento de Brucella abortus, constatado por semeadura em meios de cultura apropriados para a avaliao da presena de contaminantes bacterianos (aerbicos e anaerbicos) e fngicos e por microscopia. A partida deve ser considerada satisfatria para pureza se, por observao macro e microscpica no houver crescimento atpico.

1.6.1.2 PESQUISA DE CONTAMINANTES POR MICROSCOPIA DIRETA Em exames microscpicos da vacina reconstituda, constatando-se a presena de outros microrganismos, ser realizada avaliao de risco que indicar a aprovao ou reprovao da partida. 1.6.2 DISSOCIAO A partida deve ser considerada satisfatria para dissociao quando, por observao micro e macroscpica, no houver mais que 5% de colnias no lisas. Caso contrrio, a partida deve ser considerada insatisfatria e reprovada. 1.6.3 CONTAGEM DE MICRORGANISMOS VIVEIS O nmero de microrganismos viveis no pode ser inferior a 60 x 109 unidades formadoras de colnias (UFC) por dose e nem superior a 120 x 109 UFC por dose na data de liberao e no deve ser inferior a 40 x109 UFC por dose ao fim do prazo de validade. 1.6.3.1 ENSAIO A FRESCO O nmero de microrganismos viveis no pode ser inferior a 60 x 109 UFC por dose e nem superior a 120 x 109 UFC por dose na data de liberao. Caso contrrio, a partida deve ser considerada insatisfatria e reprovada. 1.6.3.2 ENSAIO DE ESTABILIDADE TRMICA Na avaliao de estabilidade trmica, a vacina deve ser mantida a 37 C, por 7 (sete) dias de incubao. O nmero ideal de microorganismos viveis igual ou maior a 40 x 109 UFC por dose. 1.6.4 pH O pH ideal da vacina varia de 6,4 a 7,2. 1.6.5 UMIDADE A umidade residual mxima ideal da vacina de 3%. 1.6.6 DILUENTE 1.6.6.1 Utilizar gua padro injetvel definido pelo MAPA ou soluo salina tamponada estril. 1.6.6.2 O diluente deve estar livre de partculas em suspenso, comprovada por exame visual macroscpico e de contaminao microbiana, comprovada por microscopia e semeadura em meios de cultura apropriados. Caso contrrio, a partida do diluente deve ser considerada insatisfatria e reprovada. 1.6.6.3 O frasco de diluente deve ser transparente e incolor, identificado com seu respectivo nmero de partida, sendo vedada a utilizao de mais de uma partida de diluente para a mesma partida de vacina. 1.6.6.4 Ser permitida a utilizao de uma partida de diluente para mais de uma partida de vacina. 1.6.7 PRESSO NEGATIVA O frasco que contm a vacina deve apresentar presso negativa. 1.6.8 CRITRIOS PARA APROVAO DAS PARTIDAS DA VACINA Para aprovao de uma partida de vacina, todos os testes indicados devem ser realizados. Devem ser obtidos resultados satisfatrios nos testes descritos nos itens 1.6.1, 1.6.2 e 1.6.3.1. Resultados insatisfatrios em pelo menos um destes testes reprovam a partida da vacina. 1.7 PRAZO DE VALIDADE E CONSERVAO 1.7.1 O prazo de validade deve ser de at 24 (vinte e quatro) meses a partir da data de liofilizao, condicionado aprovao pelo MAPA nos testes de contagem de microorganismos viveis, realizados aps o final do prazo pretendido, em amostras de contra-prova de trs partidas colhidas oficialmente. 1.7.2 A vacina deve ser conservada temperatura entre 2C e 8C, protegida da radiao solar direta. 1.8 DISPOSIES GERAIS

Os casos omissos e as dvidas suscitadas na execuo da presente norma sero resolvidos pelo Departamento de Defesa Animal. 2 PRODUO E CONTROLE DE QUALIDADE DE ANTGENOS PARA DIAGNSTICO DA BRUCELOSE. 2.1 DEFINIO Os antgenos para o diagnstico sorolgico da brucelose, causada por espcies lisas da bactria (B. abortus, B. melitensis e B. suis), so preparados a partir de culturas de referncia certificadas de Brucella abortus 1119-3, cultivadas em tanques de fermentao ou garrafas tipo Roux, inativadas e padronizadas conforme normas estabelecidas pelo MAPA, sendo de uso veterinrio exclusivo. Outras cepas podem ser utilizadas para a fabricao de antgenos para diagnstico da brucelose, desde que aprovadas pelo MAPA. 2.2 SEMENTES 2.2.1 SEMENTES DE REFERNCIA CERTIFICADAS (SRC) Culturas de Brucella abortus 1119-3 provenientes de uma coleo de culturas reconhecida nacional e/ou internacionalmente, acompanhada de certificao, adequadamente caracterizada, de composio uniforme, mantida na forma liofilizada e refrigerada entre 2C e 8C. 2.2.2 SEMENTES DE RESERVA (SR) Culturas lisas de Brucella abortus 1119-3 obtidas a partir da reativao e repique em meio slido de uma CRC, de composio uniforme, mantida na forma liofilizada e refrigerada entre 2C e 8C ou congelada em nitrognio lquido, com no mais que 3 (trs) piques. 2.2.3 SEMENTES DE TRABALHO (ST) OU INCULO Cultura lisa de Brucella abortus 1119-3 obtida a partir da reativao e repique de uma CR, por crescimento em meio slido, com no mais que 3 (trs) repiques, mantida sob refrigerao entre 2C e 8C. 2.3 PRODUO E CONTROLE A produo e o controle das partidas de antgenos para diagnsticos devem ser conduzidos conforme relatrio tcnico do registro do produto, obedecidas as determinaes deste regulamento, sendo todas as suas etapas registradas de forma a permitir a rastreabilidade das informaes. O controle dos antgenos para diagnstico deve ser realizado segundo ensaios provenientes de referncias normalizadas. Eventuais adaptaes destas referncias devem ser aprovadas pelo MAPA. 2.4 CONTROLE DO PRODUTO FINAL As partidas de antgenos, devidamente aprovadas no controle de qualidade dos estabelecimentos fabricantes sero acondicionadas em embalagens comerciais e submetidas ao controle oficial. Os ensaios sero realizados de acordo com o MANUAL DE PROCEDIMENTOS E TCNICAS DE CONTROLE DE QUALIDADE DE VACINAS CONTRA A BRUCELOSE E ANTGENOS PARA DIAGNSTICO DA BRUCELOSE DO MAPA. 2.4.1 PUREZA E ESTERILIDADE O antgeno deve estar livre de contaminao comprovada por microscopia, e no apresentar crescimento bacteriano (aerbico e anaerbico) e fngico, aps semeadura em meios de cultura apropriados. Caso contrrio, a partida deve ser considerada insatisfatria e reprovada. 2.4.2 SENSIBILIDADE A sensibilidade do antgeno deve ser testada, por comparao da reao de aglutinao, com um antgeno de referncia, frente a soros ou amostras de leite, conforme o antgeno que estiver sendo avaliado. 2.4.2.1. ANTGENO ACIDIFICADO TAMPONADO A sensibilidade do antgeno deve ser testada por comparao com um antgeno de referncia frente a 20 soros bovinos, sendo 5 (cinco) negativos, 10 (dez)

fracamente positivos e 5 (cinco) fortemente positivos. Aps a leitura das reaes positivas e negativas, estabelecer um valor de 0,5 (meio) ponto para cada diferena de intensidade de aglutinao de um mesmo soro, tolerando-se um total de at 3 (trs) pontos em 6 (seis) amostras de soros para considerar o antgeno em teste satisfatrio. O antgeno deve ser considerado insatisfatrio e reprovado quando houver pelo menos um soro com diferena entre reao negativa e positiva, ou somatrio de diferenas maior que trs pontos. 2.4.2.2 ANTGENO PARA SOROAGLUTINAO LENTA A sensibilidade do antgeno deve ser testada por comparao da reao de aglutinao, com um antgeno de referncia, frente a 20 soros bovinos, sendo 5 (cinco) negativos, 10 (dez) fracamente positivos e 5 (cinco) fortemente positivos. Atribuir valor de 1 (um) ponto para cada tubo que apresentar uma reao positiva e 0,5 (meio) ponto para cada tubo que apresentar uma reao incompleta. O valor numrico total para cada antgeno determinado pela soma dos valores numricos das amostras dos soros individuais. O antgeno deve ser considerado insatisfatrio e reprovado quando a diferena entre os dois valores for menor que -3 ou maior que 3 pontos e a diferena entre as amostras individuais no for maior que +- 0,5 (meio) ponto. 2.4.2.3. ANTGENO PARA O TESTE DO ANEL DO LEITE A sensibilidade do antgeno deve ser testada, por comparao da reao de aglutinao, com um antgeno de referncia, frente a diluies seriadas de pelo menos 5 (cinco) amostras de leite de ttulos elevados. 2.4.3. CONCENTRAO CELULAR A concentrao celular final do antgeno deve ser avaliada paralelamente a um antgeno de referncia. A concentrao do antgeno em teste deve ser igual do antgeno de referncia. 2.4.3.1. ANTGENO ACIDIFICADO TAMPONADO A concentrao do antgeno de referncia de 8%. 2.4.3.2. ANTGENO PARA SOROAGLUTINAO LENTA A concentrao do antgeno de referncia de 4,5%. 2.4.3.3. ANTGENO PARA O TESTE DO ANEL DO LEITE A concentrao do antgeno de referncia de 4,0%. 2.4.4. pH 2.4.4.1 ANTGENO ACIDIFICADO TAMPONADO O pH do antgeno deve ser de 3,65 + - 0,05 e, quando determinado em uma mistura de partes iguais com soro bovino, o Ph deve ser de 3,80 + -0,05. 2.4.4.2. ANTGENO PARA SOROAGLUTINAO LENTA O pH do antgeno deve estar entre 6,4 e 7,0. 2.4.4.3. ANTGENO PARA O TESTE DO ANEL EM LEITE O pH do antgeno deve estar entre 4,0 e 4,3. 2.4.5. CRITRIOS PARA APROVAO DE PARTIDAS DE ANTGENOS Para aprovao de uma partida de antgeno, todos os testes indicados devem ser realizados. Devem ser obtidos resultados satisfatrios nos testes descritos nos itens 2.4.1, 2.4.2, 2.4.4. Resultados insatisfatrios em pelo menos um destes testes reprovam a partida. 2.5 PRAZO DE VALIDADE E CONSERVAO 2.5.1 O prazo de validade deve ser de at 18 (dezoito) meses a partir da data de envase, condicionado aprovao pelo MAPA nos testes do item 2.4.5, realizados aps o final do prazo pretendido em amostras de contra-prova de trs partidas colhidas oficialmente. 2.5.2 O antgeno deve ser conservado temperatura entre 2C e 8C, protegido da radiao solar direta. 2.6 DISPOSIES GERAIS

Os casos omissos e as dvidas suscitadas na execuo da presente norma sero resolvidos pelo Departamento de Defesa Animal. (*) Republicada por ter sado com incorreo, do original, no D.O.U. n 37, de 25-022004, Seo 1, pgs. de 2 a 3.