Enzimas II: o stio ativo das enzimas

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Enzimas II O stio ativo das enzimas

Objetivos
Na aula passada, voc aprendeu que as enzimas so catalisadores biolgicos. Elas so capazes de aumentar a velocidade de uma reao em muitas ordens de grandeza em condies compatveis com a vida. Nesta aula, voc vai entender que o funcionamento das enzimas deve-se presena de uma regio especfica na enzima capaz de se ligar ao substrato, o stio ativo. Voc vai conhecer tambm como as interaes moleculares esto envolvidas na interao da enzima com seu substrato e como estas interaes podem ser alteradas.

Pr-requisitos
Para acompanhar bem esta aula, voc deve se lembrar de como as protenas se organizam no espao, adquirindo sua estrutura tridimensional. Voc deve saber tambm quais foras garantem a estabilidade desta estrutura e como ela pode ser modificada por diferentes fatores externos.

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O stio ativo
O bom funcionamento das enzimas, ou seja, sua capacidade de diminuir enormemente a energia de ativao de uma reao, depende da sua interao com a molcula de substrato. Esta interao ocorre graas presena, na estrutura das enzimas, de uma poro bastante particular: o stio ativo. Mas o que o stio ativo? O stio ativo uma pequena poro da enzima formada a partir do enovelamento na sua estrutura terciria. Ele apresenta resduos de aminocidos, cujas cadeias laterais so capazes de interagir com o reagente, que passaremos a chamar a partir desse momento de substrato (Figura 21.1). Desta forma, as reaes enzimticas dependem da formao de um complexo entre a enzima e seu substrato. A existncia deste complexo foi proposta pela primeira vez em 1880, por Adolphe Wurtz. Por volta de 1930, em seu tratado intitulado "Enzimas", J. B. S. Haldane sugeriu que interaes fracas entre a enzima e seu substrato seriam responsveis pela distoro desta molcula, levando catlise da reao. Como veremos mais frente, j no incio do sculo XX, Haldane foi capaz de propor corretamente como as enzimas funcionavam.

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Interaes entre as enzimas e seus substratos - especificidade

De que forma as enzimas reconhecem seus substratos e catalisam sua transformao em determinado produto? O substrato se liga ao stio ativo da enzima com grande especificidade. Em 1894, Emil Fisher observou que as enzimas glicolticas distinguiam estereoismeros de acares. Esta observao levou este pesquisador a propor a hiptese da chave e fechadura, na qual a especificidade da enzima (fechadura) por seu substrato (chave) era decorrente da complementaridade geomtrica de suas formas (Figura 21.1).

Figura 21.1: Desenho esquemtico de uma enzima e seu substrato complementar.

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Esta idia pressupe a existncia de interaes moleculares especficas entre as superfcies da enzima e seu substrato, o que uma concepo bastante importante na bioqumica. Entretanto, a hiptese da chave e fechadura no explica exatamente a grande capacidade cataltica das enzimas. Vamos entender isso, observando o esquema mostrado na Figura 21.2. A reao imaginria nela representada a quebra de um cilindro em duas partes. Para que isso ocorra, o cilindro deve ser inicialmente dobrado. Este o estado de transio desta reao!

Figura 21.2: Esquema de uma reao imaginria sem catalisador (a), com um catalisador com stio ativo complementar ao substrato (b) e com catalisador com stio ativo complementar ao estado de transio (c). Ao lado, vemos os diagramas de energia referentes a cada reao.

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Se imaginamos uma enzima cujo stio ativo complementar ao substrato, ou seja, se no nosso exemplo o cilindro se ajusta perfeitamente ao stio da enzima, o que vai ocorrer que o cilindro no vai se dobrar, e conseqentemente, no vai se quebrar. O produto da reao no vai ser formado! Esta enzima estabiliza o substrato, impedindo que a reao ocorra. A noo que se tem hoje sobre o funcionamento das enzimas foi inicialmente proposta por Haldene, em 1930, e posteriormente elaborada por Linus Pauling, em 1946. O stio ativo deve ser complementar ao estado de transio e no ao substrato. Assim, quando o substrato se liga enzima, a interao entre as duas molculas favorece a formao do estado de transio. claro que o stio ativo deve tambm ser capaz de interagir com o substrato, ou com parte dele, para que o complexo enzima-substrato se forme. Na verdade, o que ocorre que inicialmente algumas interaes fracas so formadas entre a enzima e o substrato, tornando possvel a ligao destas duas molculas. Uma srie de outras interaes so formadas, favorecendo a distoro da molcula do substrato, e, enfim, a formao do produto. As interaes moleculares envolvidas na ligao enzima-substrato so da mesma natureza daquelas que mantm a ESTRUTURA TRIDIMENSIONAL das protenas, ou seja, pontes de hidrognio, interaes eletrostticas, interaes hidrofbicas e interaes de van der Waals. Este um dos motivos pelos quais as enzimas so to grandes. Os grupos funcionais envolvidos nestas interaes devem estar precisamente localizados para garantir a eficincia do processo cataltico. Algumas vezes, a primeira interao da enzima com seu substrato resulta em uma srie de mudanas na estrutura tridimensional da enzima. Isso se deve, justamente, s vrias interaes formadas durante a ligao do substrato ao stio ativo da enzima, que alteram outras interaes responsveis pela estabilizao da conformao da enzima. As mudanas conformacionais sofridas pela enzima levam acomodao de grupos funcionais especficos em posies apropriadas, facilitando a interao com o substrato. Alm disso, permitem a formao de outras interaes fracas necessrias ao estado de transio e, conseqentemente, favorecem a reao. Este processo conhecido como ajuste induzido e foi proposto por Daniel Koshland, em 1958. Um bom exemplo da ocorrncia do ajuste induzido o caso da HEXOCINASE, enzima que catalisa a converso de glicose em glicose-6-fosfato, o primeiro passo da via de utilizao de glicose pelas clulas. Esta enzima foi cristalizada e teve sua estrutura tridimensional determinada na ausncia e na presena de seu substrato, a glicose.

Para

ESTRUTURA

TRIDIMENSIONAL, retorne s aulas de Protenas, se desejar.

Voc vai aprender mais sobre a HEXOCINASE e sobre seu papel na utilizao de glicose pelas clulas atravs da via glicoltica na disciplina Bioqumica II.

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Fatores que podem interferir nas reaes enzimticas

Como discutimos at agora, a formao do stio ativo e sua interao com a molcula de substrato dependem das interaes que mantm a estrutura tridimensional da enzima. Assim sendo, tente imaginar alguns fatores que poderiam interferir no funcionamento das enzimas, com base nos seus conhecimentos acerca da estrutura de protenas adquiridos nas aulas passadas. Vrios fatores podem afetar a atividade das enzimas em conseqncia da sua capacidade de desnaturar protenas, ou seja, por sua capacidade de produzir distrbios extensos na estrutura tridimensional da enzima. A desnaturao de enzimas pode se dar por aquecimento, variaes de pH, presena de solventes orgnicos, detergentes ou molculas como uria ou guanidina. Todas estas condies levam ao rompimento das interaes no-covalentes entre os resduos de aminocidos, presentes na enzima, responsveis por sua estrutura e pela geometria dos grupos funcionais presentes no stio ativo. Solventes orgnicos, como, por exemplo, o etanol, e detergentes perturbam a estrutura da enzima por favorecerem a exposio das regies apolares, normalmente mantidas no interior da estrutura da protena, ao meio externo. Isso altera dramaticamente a estrutura da enzima e de seu stio ativo, de forma que a atividade cataltica perdida. Outros agentes desnaturantes, como a uria ou a guanidina, so timos formadores de pontes de hidrognio. Como pontes de hidrognio so importantes para manter a ESTRUTURA NATIVA das protenas, estas substncias promovem a sua desnaturao.

ESTRUTURA NATIVA ou estado nativo (N) voc j viu na aula 14.

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Efeito do pH
As enzimas apresentam um pH timo, no qual sua atividade mxima. Em pHs maiores ou menores, sua atividade diminui. Isso ocorre porque as cadeias laterais de alguns aminocidos apresentam grupos protonveis, ou seja, grupos que podem ser protonados ou desprotonados em funo do pH do meio. Estes grupos podem fazer parte do stio ativo, influenciando diretamente a ligao do substrato, ou podem ser importantes para a estabilizao da estrutura da enzima como um todo, indiretamente influenciando no stio ativo. Alm disso, variaes de pH tambm podem causar mudanas de ionizao do substrato, afetando sua ligao enzima. A faixa de pH na qual a enzima funciona melhor pode fornecer pistas sobre que aminocidos esto envolvidos na sua atividade. Mudanas de atividade em pHs prximos a 7.0 devem ser decorrentes da titulao de resduos de His, enquanto mudanas de atividade em pHs mais bsicos (em torno de 9.0) refletem a titulao de Arg e Lis e, em pHs mais cidos (prximo a 3.0), resultam da titulao de Glu ou Asp. Veja na Figura 21.3, o efeito do pH sobre a atividade de duas enzimas: a pepsina e a glicose-6-fosfatase.

Figura 21.3: Efeito do pH sobre a atividade da pepsina (a) e da glicose-6-fosfatase (b).

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Efeito da temperatura
O aumento da temperatura causa um aumento na velocidade das reaes catalisadas por enzimas, assim como ocorre para todas as reaes qumicas. Isso se d devido ao aumento do nmero de molculas que possuem energia cintica suficiente para sobrepor a barreira energtica da reao. Entretanto, as enzimas desnaturam em decorrncia do aquecimento, de forma que sua atividade tende a diminuir quando a temperatura aumenta. A conseqncia destes dois efeitos opostos pode ser vista na Figura 21.4. A Figura mostra o efeito da temperatura sobre a atividade de uma enzima. Voc pode notar que at em determinadas temperaturas, o efeito do aquecimento na velocidade da reao predomina e a atividade enzimtica aumenta com o aumento da temperatura; em seguida, a desnaturao reduz este efeito; chega-se, ento, a um ponto que corresponde temperatura tima; e, em seguida, a desnaturao predomina.

Figura 21.4: Efeito da temperatura na atividade de uma enzima. Neste exemplo hipottico, a atividade da enzima medida enquanto ela mantida por um curto perodo de tempo em uma dada temperatura.

At agora, voc aprendeu como as enzimas funcionam e que fatores podem afetar sua atividade. A prxima aula ser uma aula prtica, na qual vamos avaliar o efeito de diversos fatores como a concentrao de enzima, de substrato, o efeito de um inibidor, os efeitos da temperatura e do pH sobre a atividade de uma enzima, a fosfatase alcalina. A partir dos resultados obtidos nesta aula, vamos explorar um pouco uma rea bastante importante da Enzimologia, o estudo da Cintica Enzimtica. Esta rea visa explicar como as velocidades de uma reao catalisada por uma enzima variam em funo de uma srie de parmetros.
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Resumo
Nesta aula, voc aprendeu o que o stio ativo de uma enzima e como esta poro de sua estrutura capaz de interagir com o substrato. Alm disso, voc descobriu que diversos fatores como a temperatura, o pH e algumas substncias qumicas podem afetar a atividade de uma enzima.

Exerccios
1. O termo ajuste induzido se refere ao fato de que: a) Quando o substrato se liga enzima, a enzima induz uma perda de gua do substrato. b) A ligao do substrato induz uma mudana conformacional na enzima, que leva os grupos catalticos orientao apropriada. c) A ligao enzima-substrato induz um aumento da entropia, catalisando, desta forma, a reao. d) A especificidade da enzima induzida pela ligao enzima-substrato. e) A ligao enzima-substrato induz um movimento ao longo das coordenadas da reao em direo ao estado de transio. 2. A enzima X exibe atividade mxima em pH = 6,9 e apresenta um acentuado decrscimo na sua atividade em pHs abaixo de 6,4. Uma provvel explicao para este comportamento que: a) A reao depende de uma catlise cido-base especfica. b) Um resduo de His da enzima est envolvido na reao. c) Um resduo de Glu est envolvido na reao. d) Esta uma enzima encontrada no suco gstrico. e) A enzima possui um cofator metlico. 3. Um bom anlogo do estado de transio: a) muito instvel para ser isolado. b) Se liga covalentemente enzima. c) Se liga enzima mais fortemente que o substrato. d) Se liga muito fracamente enzima.
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Auto-avaliao
Depois de responder cada uma das questes, tente justificar porque considerou determinada resposta como a verdadeira e porque considerou as outras respostas falsas. Com isso voc pode ter uma idia do quanto est realmente acompanhando os conceitos explorados at agora.

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