Biologia Molecular e Celular II: Transporte atravs da membrana

Princpios do transporte
H diferenas entre a composio dentro e fora da clula; A distribuio de ons dentro e fora da clula controlada por protenas transportadoras e de canal na membrana e, em parte, pelas caractersticas de permeabilidade da prpria bicamada.

As bicamadas so impermeveis a solutos e ons

A taxa de difuso de uma molcula qualquer varia dependendo de seu tamanho e de suas caractersticas de hidrofobicidade... Em geral: quanto menor e + hidrofbico, + rpido se difunde Quanto > o gradiente de [ ], taxa de difuso + rpida Transportadores proteicos so necessrios!!

As protenas de membrana podem ser:

Protenas carreadoras (transportadoras):
Podem mediar o transporte passivo e ativo. Carregam molculas especficas encaixe no stio de ligao e transferncia atravs da membrana por alterao conformacional.

Bombas ativadas por ATP

ATPases que usam a energia da hidrlise de ATP para o transporte de ons e peq. molculas atravs da membrana

Protenas de canal
Formam poros hidroflicos e fazem transporte passivo Se o canal est aberto, molculas de tamanho e carga apropriados podem passar.

Transporte passivo ou ativo?

A direo depende de [soluto] relativas, em grande parte. TRANSPORTE PASSIVO = molculas fluem de regies [ ] para [ ] TRANSPORTE ATIVO = molculas vo contra um gradiente de [ ]

Para molculas carregadas...

A maioria das membranas possui uma diferena no potencial eltrico em cada lado Potencial de membrana Essa diferena de potencial exerce uma fora em qualquer molcula eletricamente carregada... Em geral: o lado citoplasmtico est com potencial negativo em relao ao exterior, H uma tendncia a atrair ctions e impelir nions, mas o soluto tambm tende a mover-se de acordo com seu gradiente de [ ].

Assim:
As foras do gradiente de [ ] + voltagem atravs da membrana geram Gradiente eletroqumico de soluto (fora motriz lquida) Determina a direo do transporte passivo atravs da membrana O transporte ativo move solutos contra seu gradiente eletroqumico

Protenas transportadoras (=carreadoras)

Transportam molculas orgnicas pequenas (acares, aminocidos, nucleotdeos, etc.); Altamente seletivas; Cada membrana tm seu conjunto prprio; Facilitam transportes ativo e passivo;

Carreador de glicose: mudana conformacional da protena carreadora pode mediar o transporte passivo de um soluto como glicose

Transportador de glicose da membrana plasmtica de clulas hepticas de mamferos

Numa conformao, expe stios de ligao p/ glicose no exterior da clula, noutra expe stios no interior... Embora passivo, o transporte seletivo! A direo dada pelo gradiente de [ ] uniportador: transporta um nico tipo de molcula

http://www.uic.edu/classes/bios/bios100/lectures/GLUT1.htm

Lactose permease de E. coli: um simporte de lactose dirigido por H+

Science 1 August 2003: Vol. 301 no. 5633 pp. 610-615 DOI: 10.1126/science.1088196

Transportadores acoplados
Protenas carreadoras nas quais o movimento favorvel do 1o soluto fornece energia para o transporte desfavorvel do 2o soluto. um transporte ativo secundrio. SIMPORTADOR = se as 2 molculas vo para a mesma direo ANTIPORTADOR = se deslocam-se em direes opostas

Bicamada lipdica

UNIPORTE

ANTIPORTE SIMPORTE transporte acoplado

Transporte transcelular de glicose

O transporte ativo
O transporte passivo no suficiente... O transporte ativo se d em 3 formas principais: Transportadores acoplados: ligam o transporte desfavorvel de um soluto ao transporte favorvel de outro soluto; Bombas ativadas por ATP: acoplam o transporte desfavorvel hidrlise de ATP; Bombas movidas luz: unem o transporte desfavorvel a uma entrada de energia luminosa.

Bombas ativadas pelo ATP

Todas so protenas transmembrana com um ou + stios de ligao para o ATP na face citoslica da membrana; ATPases que normalmente no hidrolisam ATP em ADP + Pi a no ser que os ons ou outras molculas sejam transportados simultaneamente. So enquadradas em 4 classes: Bombas de Classe-P, Classe-V, Classe- F e Transportadores ABC

Classes de bombas ativadas pelo ATP

Bombas classe-P subunidades catalticas que ligam ATP + subunidades regulatrias Uma subunidade fosforilada e os ons movem-se atravs dela; Compem a membrana plasmtica de plantas, fungos e bactrias; Podem ser: bombas de Na/K, H+/K e Ca++

Bomba de

+ + Na /K

Bomba de

+ + Na /K

http://www.uic.edu/classes/bios/bios100/lectures/NaKpump.htm

Comparao de concentraes de ons no interior e exterior de uma clula tpica de mamfero.

COMPONENTE Cations Na K
+ 2+ +

CONCENTRAO INTRACELLULAR (mM)

CONCENTRAO EXTRACELLULAR (mM)

5-15 140 0.5 10

-4 -5

145 5 1-2 1-2 4 10 -7.4 (10 M ou pH 7.4) 110

-5

Mg Ca H
+

2+

7 10 -7.2 (10 M ou pH 7.2) 5-15

Anions* Cl
-

ATPase muscular de Ca++ bombeia Ca++ do citosol para o R.Sarcoplasmtico

As bombas classe V transportam H+

Bombas de prtons classe V Presentes em membranas vegetais, leveduras e outros fungos; Em animais esto nas membranas lisossomais

Funcionam na acidificao de organelas; Partculas fluorescentes podem ser usadas para medir com preciso o pH lisossmico;

Gradientes de H+
So utilizados para impelir o transporte de membrana em plantas, fungos e bactrias, pois estes no possuem bombas de Na+/K+
Contam com um gradiente eletroqumico de H+ no lugar de Na+

Criado por bomba de H+ na membrana plasmtica A captura de muitos acares e aminocidos para o interior das clulas bacterianas conseguido por simportadores de H+

As bombas classes F transportam H+

Presentes na membrana plasmtica bacteriana, membrana mitocondrial interna e nas membranas dos tilacides; So ATPases de transporte trabalhando em sentido reverso: ATP sintases! O gradiente de H + sustenta a sntese de ATP

Bombas ativadas pelo ATP :Transportadores ABC (ATP binding cassete)

Transportam aminocidos, peptdeos, accares, ons inorgnicos, polissacardeos e at protenas. Flipam lipdeos; Em E. coli 5% dos genes codificam transportadores ABC para importao e exportao Em eucariotos a maioria exportador. Ex. MDR = transportador ABC que d resistncia a multidrogas

Protenas de canal
CANAIS hidroflicos = forma + simples de permitir que uma molcula hidrossolvel atravesse a membrana; - algumas formam grandes poros, muito permissivos - p.e. porinas (na membrana ext. bacteriana, mitocondrias e cloroplastos); - Junes comunicantes (gap junctions) - Certas toxinas bacterianas. Porm, a maioria das protenas de canal seletiva e de poros estreitosquase todas so canais inicos (Na+, K+, Cl- e Ca+)

Canais inicos
Poros estreitos e altamente seletivos; - No esto continuamente abertos... estados aberto/fechado alternam por mudana conformacional. - Taxa de transporte muito mais rpida que aquela das protenas carreadoras (at mil vezes >), - mas no fazem transporte ativo... - O transporte segue a favor do gradiente eletroqumico. - So seletivos (filtro de seletividade)!

Estrutura do canal de K

Somente o on de tamanho e carga apropriados pode passar Filtro de seletividade.

Mecanismo de seletividade e transporte inico

Modelo para o controle do canal de K+ bacteriano

Canais inicos
H mais de 100 tipos de canais inicos; Diferem quanto 1) seletividade inica 2) condies que influenciam na abertura

O controle da abertura-fechamento pode ser por: voltagem, ligao de ligante ou presso mecnica

Canais inicos
Mecanicamente controlado

Receptor de acetilcolina: um canal inico controlado por ligante (neurotransmissor)

O movimento da gua
A presso osmtica causa o movimento da gua atravs das membranas; As bicamadas lipdicas puras so semi-permeveis gua, que atravessa por osmose parte das membranas celulares tem protenas de canal de gua (aquaporinas) que aumentam a permeabilidade da biomembrana gua Aquaporinas: so seletivas para gua

Estrutura da aquaporina

Modelo estrutural da protena homotetramrica : cada subunidade forma um canal de gua. Um dos monmeros mostrado com a superfcie molecular destacando o poro.

Vista lateral do poro em uma nica subunidade

Expresso de aquaporina por ocitos de r (acima) e controle (abaixo) em soluo hipotnica

Pesquisa funcional com protenas de membrana

Dificuldades Protenas devem estar na membrana! H muitas protenas de membrana diferentes numa dada membrana; Geralmente, esto em baixas concentraes relativas; O que fazer: 1) Extrair, purificar e reincorporar em lipossomas; ou 2) expressar o gene de interesse

Nanodiscos
A developing technology termed nanodiscs exploits discoidal phospholipid bilayers encircled by a stabilizing amphipatic helical membrane scaffold protein to reconstitute membranes with integral proteins. After reconstitution, the membrane nanodisc is soluble, stable, and monodisperse

Figure 1 Model of nanodiscs with incorporated rhodopsin. Blue: membrane scaffold protein; gray: phospholipid bilayer; green: rhodopsin. The model was adapted from Nath et al. (2007a).